CN102470130B - 联苯化合物的结晶游离碱形式 - Google Patents

联苯化合物的结晶游离碱形式 Download PDF

Info

Publication number
CN102470130B
CN102470130B CN2010800304581A CN201080030458A CN102470130B CN 102470130 B CN102470130 B CN 102470130B CN 2010800304581 A CN2010800304581 A CN 2010800304581A CN 201080030458 A CN201080030458 A CN 201080030458A CN 102470130 B CN102470130 B CN 102470130B
Authority
CN
China
Prior art keywords
free base
crystalline free
ester
ethyl
crystalline
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN2010800304581A
Other languages
English (en)
Other versions
CN102470130A (zh
Inventor
格雷厄姆·伍拉姆
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Theravance Biopharma R&D IP LLC
Original Assignee
SHIWAN PHARMACEUTICALS Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=42562758&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CN102470130(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by SHIWAN PHARMACEUTICALS Inc filed Critical SHIWAN PHARMACEUTICALS Inc
Publication of CN102470130A publication Critical patent/CN102470130A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN102470130B publication Critical patent/CN102470130B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D211/00—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings
    • C07D211/04—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D211/06—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D211/36—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D211/60—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D211/62—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals attached in position 4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4545—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pipamperone, anabasine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/12—Aerosols; Foams
    • A61K9/124—Aerosols; Foams characterised by the propellant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1617—Organic compounds, e.g. phospholipids, fats
    • A61K9/1623—Sugars or sugar alcohols, e.g. lactose; Derivatives thereof; Homeopathic globules
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/08—Bronchodilators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D211/00—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings
    • C07D211/04—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D211/06—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D211/36—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D211/60—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D211/62—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals attached in position 4
    • C07D211/64—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals attached in position 4 having an aryl radical as the second substituent in position 4
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/13—Crystalline forms, e.g. polymorphs

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Hydrogenated Pyridines (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

本发明提供联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基)哌啶-4-基酯的两种结晶游离碱形式。本发明还提供包含所述结晶游离碱或使用所述结晶游离碱制备的医药组合物；用于制备所述结晶游离碱的方法和中间体；和使用所述结晶游离碱治疗肺病症的方法。

Description

联苯化合物的结晶游离碱形式
技术领域
本发明涉及联苯化合物的新颖结晶形式，预期其可用于治疗肺病症。本发明还涉及包含所述结晶化合物或自所述化合物制备的医药组合物、用于制备所述结晶化合物的方法和中间体和使用所述化合物治疗肺病症的方法。
背景技术
颁予马门(Mammen)等人的美国专利公开案第2005/0203133号揭示预期用于治疗肺病症(例如慢性阻塞性肺病(COPD)和哮喘)的新颖联苯化合物。具体来说，化合物联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基)哌啶-4-基酯在本申请案中具体阐述为具有毒蕈碱受体拮抗剂或抗胆碱能活性。
联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基)哌啶-4-基酯的化学结构由式I表示：
Figure BPA00001496793800011
使用市售自动命名软件(AutoNom software)(MDL，圣莱昂纳多(San Leandro)，加利福尼亚(California))命名式I化合物。
可用于治疗肺或呼吸病症的治疗剂有利地通过吸入直接投与呼吸道中。就这点来说，已研发出数种类型的医药吸入装置以供通过吸入投与治疗剂，包括干粉吸入器(DPI)、定量式吸入器(MDI)和雾化罐吸入器。当制备用于所述装置中的医药组合物和调配物时，高度期望治疗剂具有既非吸湿性也非潮解性晶形且其具有相对高熔点，由此允许所述物质被微粉化而不显着分解。尽管式I化合物的结晶游离碱形式已在颁予埃克斯特(Axt)等人的美国专利公开案第2007/0112027号中报告为形式I和形式II，但本发明的结晶游离碱形式具有不同且尤其有用的性质，包括较高熔点。
发明内容
本发明的一个方面涉及联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基)哌啶-4-基酯的结晶游离碱形式，其特征在于粉末x射线衍射图案在6.6±0.1、13.1±0.1、18.6±0.1、19.7±0.1和20.2±0.1的2θ值处包含衍射峰。
本发明的另一方面涉及联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基)哌啶-4-基酯的结晶游离碱，其命名为形式III，其特征在于粉末x射线衍射图案在6.6±0.1、13.1±0.1、18.6±0.1、19.7±0.1和20.2±0.1的2θ值处包含衍射峰；且特征进一步在于在选自以下的2θ值处具有另外五个或五个以上衍射峰：8.8±0.1、10.1±0.1、11.4±0.1、11.6±0.1、14.8±0.1、15.2±0.1、16.1±0.1、16.4±0.1、16.9±0.1、17.5±0.1、18.2±0.1、19.3±0.1、19.9±0.1、20.8±0.1、21.1±0.1、21.7±0.1和22.3±0.1。
本发明的又一方面涉及联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基)哌啶-4-基酯的结晶游离碱，其命名为形式IV，其特征在于粉末x射线衍射图案在6.6±0.1、13.1±0.1、18.6±0.1、19.7±0.1和20.2±0.1的2θ值处包含衍射峰；且特征进一步在于在选自以下的2θ值处具有另外五个或五个以上衍射峰：10.6±0.1、15.0±0.1、16.0±0.1、17.3±0.1、17.7±0.1、20.9±0.1、21.4±0.1、22.6±0.1、24.6±0.1和27.8±0.1。
本发明的另一方面涉及包含本发明结晶游离碱和医药上可接受的载剂的医药组合物。本发明的再一方面涉及包含本发明结晶游离碱与一种或一种以上治疗剂组合的医药组合物。因此，在一个实施例中，本发明涉及包含以下的医药组合物：(a)医药上可接受的载剂和治疗有效量的本发明结晶游离碱；和(b)治疗有效量的选自以下的药剂：类固醇消炎剂，例如皮质类固醇；β2肾上腺素能受体激动剂；磷酸二酯酶-4抑制剂；或其组合；其中结晶游离碱和药剂一起或分开调配。当所述药剂分开调配时，可包括医药上可接受的载剂。通常，本发明结晶游离碱和所述药剂将以治疗有效量存在。
本发明的另一方面涉及医药组合物，其包含含有本发明结晶游离碱的水性等渗盐水溶液，其中所述溶液的pH在约4到6范围内。在一特定实施例中，用柠檬酸盐缓冲液将水性雾化罐调配物缓冲到约5的pH。
在一个实施例中，本发明涉及药物递送装置，其包含含有医药组合物的干粉吸入器，所述医药组合物包含医药上可接受的载剂和本发明结晶游离碱。
式I化合物具有毒蕈碱受体拮抗剂活性。因此，预期式I化合物的结晶游离碱具有相同活性，并且因此发现可用于治疗肺病症(例如哮喘和慢性阻塞性肺病)。因此，本发明的另一方面涉及治疗肺病症的方法，其包含向患者投与治疗有效量的本发明结晶游离碱。本发明的又一方面涉及引起患者支气管扩张的方法，其包含向所述患者投与可引起支气管扩张的量的本发明结晶游离碱。在一个实施例中，通过吸入投与化合物。本发明还提供治疗慢性阻塞性肺病或哮喘的方法，其包含向患者投与治疗有效量的本发明结晶游离碱。本发明的另一方面涉及在哺乳动物中拮抗毒蕈碱受体的方法，其包含向哺乳动物投与治疗有效量的本发明结晶游离碱。
本发明还涉及用于制备式I化合物的结晶游离碱形式的方法。本发明还提供纯化式I化合物的方法，其包含形成联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基)哌啶-4-基酯的结晶游离碱。本发明进一步涉及通过本文所述方法制备的产物。
本发明还涉及呈微粉化形式的式I化合物的结晶游离碱；和包含医药上可接受的载剂和本发明微粉化结晶游离碱的医药组合物。
本发明还涉及式I化合物的结晶游离碱形式，其用于疗法中或用作药剂。另外，本发明涉及本发明结晶游离碱的用途，其用于制造药剂、尤其用于制造用于在哺乳动物中治疗肺病症或拮抗毒蕈碱受体的药剂。
附图说明
参照附图来阐明本发明的各个方面。
图1显示联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基)哌啶-4-基酯(式I化合物)的结晶游离碱的形式III的粉末x射线衍射(PXRD)图案。形式III的其它特征展现于图4(其显示差示扫描量热法(DSC)热分析图)和图6(其显示热重分析(TGA)迹线)中。
图2显示式I化合物的结晶游离碱的形式IV的PXRD图案。图3显示形式III和形式IV的PXRD图案的重叠。形式IV的其它特征展现于图5(其显示DSC热分析图)和图7(其显示TGA迹线)中。
具体实施方式
本发明提供联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基)哌啶-4-基酯(式I)的结晶游离碱形式。令人感到惊奇的是，发现本发明的结晶游离碱形式即使在暴露于大气水分时也不具有潮解性。另外，本发明的结晶游离碱形式具有可接受程度的吸湿性和可接受的熔点。例如，结晶游离碱形式III的熔点为约125℃且结晶游离碱形式IV的熔点为约119℃。
在其它用途中，本发明的结晶游离碱形式可用于制备预期可用于治疗肺病症的医药组合物。因此，本发明的一个方面涉及包含医药上可接受的载剂和治疗有效量的本发明结晶游离碱的医药组合物。
定义
当描述本发明化合物、组合物、方法和工艺时，除非另有说明，否则下述术语具有以下含义。另外，除非所用上下文明确表示其它含义，否则如本文所用单数形式“一(a，an)”和“所述(the)”包括相应的复数形式。术语“包含(comprising)”、“包括(including)”和“具有(having)”打算为包括性，并且意指除所列举要素外可存在其它要素。除非另有说明，否则本文所用所有表示成份数量、性质(例如，分子量)、反应条件等的数字在所有情况下均应理解为受术语“约”修饰。因此，本文所述数字是可根据本发明拟寻求获得的期望性质而变化的近似值。最低限度地且并非试图将等效教义的应用限制于权利要求书的范围，至少应根据所报告有效数字且通过运用一般舍入技术来诠释每一数字。
形式III和形式IV二者均为无水游离碱晶体多晶形。在提及“本发明结晶游离碱”时，应理解，所述术语包括形式III和形式IV。
如本文所用短语“具有式”或“具有结构”并不打算加以限制且是以与通常使用术语“包含”相同的方式来使用。
术语“医药上可接受”是指在用于本发明时并非为生物学或其它方面不可接受的材料。例如，术语“医药上可接受的载剂”是指可纳入组合物中并投与患者而不会造成不可接受生物学效应或以不可接受方式与所述组合物的其它组份相互作用的材料。所述医药上可接受的材料通常符合毒理学和制造测试所要求的标准，且包含那些由美国食品与药品管理局(U.S.Food and Drug Administration)确定为适宜非活性成份的材料。
术语“治疗有效量”意指在向有需要患者投与时足以实现治疗的量，即，获得期望治疗效果所需药物的量。例如，用于治疗肺病症的治疗有效量是(例如)减少、抑制、消除或防止哮喘或慢性阻塞性肺病(“COPD”)的症状或治疗哮喘或COPD潜在病因所需化合物的量。在一个实施例中，治疗有效量的是引起支气管扩张所需的量。另一方面，术语“有效量”意指足以获得期望结果的量，所述期望结果可能不一定是治疗结果。例如，当研究包含毒蕈碱受体的系统时，“有效量”可为拮抗所述受体所需量。
如本文所用术语“治疗(treating或treatment)”意指患者(例如哺乳动物(尤其为人类))的疾病或医学病况(例如COPD)的治疗(treating或treatment)，其包括：(a)防止所述疾病或医学病况发生，即，患者的预防性治疗；(b)改善所述疾病或医学病况，例如，通过消除患者的所述疾病或医学病况或使其消退；(c)抑制所述疾病或医学病况，例如，通过减缓或阻止患者的所述疾病或医学病状的发展；或(d)减轻患者的所述疾病或医学病况的症状。例如，术语“治疗COPD”包括防止COPD发生、改善COPD、抑制COPD和减轻COPD的症状。术语“患者”打算包括那些需要治疗或防止疾病或者目前正在接受具体疾病或医学病况的疾病防止或治疗的哺乳动物，例如人类。术语“患者”还包括其中评估本发明化合物的测试个体或用于分析的测试个体，例如，动物模型。
合成
本发明的结晶游离碱可从可容易获得的起始材料按照下文和各实例中所述来合成。尽管可存在若干种可用于制造每一结晶游离碱形式的方法，然而应注意，结晶内容物以及晶体习惯(大小和形状)可部分基于制备方法以及溶剂组成而所有变化。
应了解，尽管给出具体工艺条件(即，结晶温度、时间、反应物的摩尔比、溶剂、压力等)，但除非另有说明，否则也可使用其它工艺条件。在一些情况下，在室温下实施反应或结晶且不实施实际温度测量。应理解，室温可视为意指在实验室环境中属于通常与环境温度有关的范围内的温度且通常可在约25℃到约50℃范围内。在其它情况下，在室温下实施反应或结晶且实际上测量并记录温度。所有重量、体积和等效物均是相对于起始材料联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基)哌啶-4-基酯(或盐形式)。
通常，在适宜惰性稀释剂或溶剂系统中实施结晶，所述惰性稀释剂或溶剂系统的实例包括(但不限于)甲醇、乙醇、异丙醇、异丁醇、乙酸乙酯、乙腈、二氯甲烷、甲基第三丁基醚和其类似物和其混合物。在任何上述结晶完成后，可通过例如沉淀、浓缩、离心和类似方法的任何常规方式从反应混合物分离所述结晶化合物。
本发明中采用的联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基)哌啶-4-基酯以及其盐(例如二磷酸盐)可容易地从市售起始材料和试剂使用实例中所述程序或使用以下中所述程序制备：颁予马门等人的美国专利公开案第2005/0203133和颁予埃克斯特等人的美国专利公开案第2007/0112027号。
在本发明方法中所述的摩尔比可通过所属领域技术人员可利用的各种方法来容易地测定。例如，可通过1H NMR容易地测定所述摩尔比。或者，可使用元素分析和HPLC方法来测定摩尔比。
形式III
联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基-哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基)哌啶-4-基酯的形式III结晶游离碱可从酯或酯的二磷酸盐制得。
在一个实施例中，形式III结晶游离碱是通过使联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]-甲基氨基}乙基)哌啶-4-基酯与乙腈接触而制得。通常，酯的毫克数与乙腈的总毫升数的比率是约100∶1，其中在两个步骤中添加乙腈。通常，在0℃至40℃温度范围内重复循环的同时实施此反应。然后通过真空过滤分离固体并进行干燥。
在另一实施例中，形式III结晶游离碱是使用形式III结晶游离碱的晶种和酯的二磷酸盐而制得。此方法包括：a)形成结晶游离碱形式III的晶种；b)将联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基)哌啶-4-基酯的二磷酸盐溶解于乙酸异丙酯和水中以形成溶液；c)和向所述溶液中添加所述晶种。更具体来说，在20±3℃和氮气下将酯的二磷酸盐(1wt)在乙酸异丙酯(17.5体积)和水(10体积)中制成浆液。将悬浮液升温到53±3℃并添加10M NaOH(0.5体积)。将混合物在所述温度下搅拌短时间，然后分离各层并移除基本水层。向有机层中添加水(5体积)并搅拌。分离各层并移除水层。添加乙酸异丙酯(17.5体积)并通过常压蒸馏收集约10体积馏出物。再利用乙酸异丙酯(10体积)重复此步骤。在第二次蒸馏后，将澄清溶液的温度降低到53±3℃，然后用结晶游离碱形式III(0.005wt；0.5wt％)存于乙酸异丙酯(0.08体积)中的悬浮液引晶。将所得悬浮液于53±3℃下搅拌至少2小时，然后以0.19℃/min的近似冷却速率冷却到10±3℃。将悬浮液于10±3℃下搅拌至少2小时且然后通过过滤收集。用乙酸异丙酯(2x 3体积)洗涤所得滤饼且然后干燥产物以产生形式III结晶游离碱。
形式IV
在一个实施例中，形式IV结晶游离碱是使用形式III结晶游离碱的晶种制得。此方法包括：a)形成结晶游离碱形式III的晶种；b)将结晶游离碱形式III溶解于乙腈中以形成溶液；c)和向所述溶液中添加所述晶种。通常，晶种与酯的重量比在约2∶250范围内。通常，结晶游离碱形式III的克数与乙腈的总毫升数的比率在约2∶10到3∶30范围内，其中2.5∶16是一个范围。通常以若干等份添加乙腈。通常，在0℃至40℃温度范围内重复循环的同时实施此反应。然后通过真空过滤分离固体并进行干燥。
结晶性质
如在粉末x射线衍射领域中所熟知，粉末x射线衍射(PXRD)谱的相对峰高度取决于与试样制备和仪器几何学有关的许多因素，而峰位置对实验细节相对不敏感。如实例5中所述获得结晶游离碱形式III和形式IV的PXRD图案。因此，在一个实施例中，本发明结晶化合物的特征在于PXRD图案具有某些峰位置。
本发明的每一结晶游离碱形式均呈现不同PXRD图案，但具有某些共有峰。因此，在一个实施例中，本发明涉及联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基)哌啶-4-基酯的结晶游离碱形式，其特征在于粉末x射线衍射图案在选自6.6±0.1、13.1±0.1、18.6±0.1、19.7±0.1和20.2±0.1的2θ值处包含衍射峰。
在一个实施例中，结晶游离碱形式III的特征在于粉末x射线衍射图案在6.6±0.1、13.1±0.1、18.6±0.1、19.7±0.1和20.2±0.1的2θ值处包含衍射峰；且特征进一步在于在选自以下的2θ值处具有另外五个或五个以上衍射峰：8.8±0.1、10.1±0.1、11.4±0.1、11.6±0.1、14.8±0.1、15.2±0.1、16.1±0.1、16.4±0.1、16.9±0.1、17.5±0.1、18.2±0.1、19.3±0.1、19.9±0.1、20.8±0.1、21.1±0.1、21.7±0.1和22.3±0.1。在另一实施例中，结晶游离碱形式III的特征在于粉末x射线衍射在选自以下的2θ值处包含衍射峰：6.6±0.1、11.4±0.1、13.1±0.1、16.1±0.1、17.5±0.1、18.2±0.1、18.6±0.1、19.3±0.1、19.7±0.1、19.9±0.1、20.2±0.1、20.8±0.1、21.1±0.1、21.7±0.1和22.3±0.1。在又一实施例中，结晶游离碱形式III的特征在于各峰位置实质上是与图1中所示峰位置一致的PXRD图案。
在一个实施例中，结晶游离碱形式IV的特征在于粉末x射线衍射图案在6.6±0.1、13.1±0.1、18.6±0.1、19.7±0.1和20.2±0.1的2θ值处包含衍射峰；且特征进一步在于在选自以下的2θ值处具有另外五个或五个以上衍射峰：10.6±0.1、15.0±0.1、16.0±0.1、17.3±0.1、17.7±0.1、20.9±0.1、21.4±0.1、22.6±0.1、24.6±0.1和27.8±0.1。在另一实施例中，结晶游离碱形式IV的特征在于粉末x射线衍射图案在选自以下的2θ值处包含衍射峰：6.6±0.1、13.1±0.1、15.0±0.1、17.3±0.1、17.7±0.1、18.6±0.1、19.7±0.1、20.2±0.1、20.9±0.1、21.4±0.1和22.6±0.1。在又一实施例中，结晶游离碱形式IV的特征在于各峰位置实质上是与图2中所示峰位置一致的PXRD图案。
在又一实施例中，本发明结晶游离碱的特征在于差示扫描量热法(DSC)热分析图。如实例6中所述获得DSC热分析图。本文中报告的熔点是基于DSC分析期间记录的熔融起点来估算。因此，在一个实施例中，本发明结晶化合物的特征在于其DSC温度记录图。在一个实施例中，结晶游离碱形式III的特征在于DSC温度记录图显示吸热热流的起点在约123℃处且熔点为约125℃，如图4中所见。在另一实施例中，结晶游离碱形式IV的特征在于DSC温度记录图显示吸热热流的一个起点在约66℃处，吸热热流的第二起点在约119℃处，且熔点为约119℃，如图5中所见。
如实例6中所述对本发明的结晶游离碱形式执行热重分析(TGA)。因此，在一个实施例中，结晶游离碱的特征在于其TGA迹线。在一个实施例中，结晶游离碱形式III的特征在于图6中绘示的TGA迹线。在另一实施例中，结晶游离碱形式IV的特征在于图7中绘示的TGA迹线。
如实例7中所述对本发明的结晶游离碱形式执行重量蒸气吸附(GVS)评定。已证实本发明的结晶游离碱形式具有可逆吸附/解吸特征与可接受程度的吸湿性。例如，结晶游离碱形式III显示于25℃下介于0与90％相对湿度之间具有＜2％wt/wt的可逆吸水性。另外，已发现结晶游离碱形式III在暴露于高温和湿度时稳定。
在下文实例中进一步阐释本发明结晶游离碱形式的这些性质。
效用
式I化合物具有毒蕈碱受体拮抗剂活性，且因此，预期式I化合物的结晶游离碱形式可用于治疗由毒蕈碱受体调介的医学病况，即通过用毒蕈碱受体拮抗剂治疗得以改善的医学病况。所述医学病况包括(例如)肺病症或疾病，包括那些与可逆气道阻塞相关者，例如慢性阻塞性肺疾病(例如慢性和喘息性支气管炎和气肿)、哮喘、肺纤维化、过敏性鼻炎、鼻漏和类似病况。可用毒蕈碱受体拮抗剂治疗的其它医学病况是生殖泌尿道病症，例如膀胱过动症或逼尿肌过度活动和其症状；胃肠道病症，例如肠易激综合征、憩室病、失弛缓症、胃肠运动过度病症和腹泻；心律不齐，例如窦性心动过缓；帕金森氏病(Parkinson’s disease)；认知障碍，例如阿兹海默氏症(Alzheimer’s disease)；痛经；和类似病况。
因此，在一个实施例中，本发明涉及用于治疗肺病症的方法，所述方法包含向患者投与治疗有效量的联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基)哌啶-4-基酯的结晶游离碱。本发明结晶游离碱在用于治疗肺病症时通常将通过吸入以每天多个剂量、每日单一剂量或每周单一剂量投与。一般来说，治疗肺病的剂量将在约10μg/天到200μg/天范围内。
当通过吸入投与时，本发明结晶游离碱通常将具有引起支气管扩张的效应。因此，在另一实施例中，本发明涉及在患者中引起支气管扩张的方法，所述方法包含向患者投与可引起支气管扩张的量的联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基)哌啶-4-基酯的结晶游离碱。通常，引起支气管扩张的治疗有效剂量在约10μg/天至200μg/天范围内。
在一个实施例中，本发明涉及治疗慢性阻塞性肺病或哮喘的方法，所述方法包含向患者投与治疗有效量的联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基)哌啶-4-基酯的结晶游离碱。本发明结晶游离碱在用于治疗COPD或哮喘时通常将通过吸入以每天多个剂量或每日单一剂量投与。一般来说，治疗COPD或哮喘的剂量将在约10μg/天到200μg/天范围内。如本文所用COPD包括慢性阻塞性支气管炎和肺气肿(例如，参见伯纳斯(Barnes)，慢性阻塞性肺病(Chronic Obstructive PulmonaryDisease)，新英格兰医学期刊(New England Journal of Medicine)343：269-78(2000))。
本发明结晶游离碱在用于治疗肺病症时任选地与其它治疗剂组合投与。因此，在一特定实施例中，本发明的医药组合物和方法进一步包含治疗有效量的β2-肾上腺素受体激动剂、皮质类固醇、非类固醇消炎剂或其组合。
在另一实施例中，本发明结晶游离碱用于拮抗生物系统和哺乳动物(具体来说，例如小鼠、大鼠、豚鼠、兔、狗、猪、人类等)中的毒蕈碱受体。在此实施例中，向哺乳动物投与治疗有效量的本发明结晶游离碱。如果需要，随后可使用常规程序和设备测定拮抗毒蕈碱受体的效应。
本发明结晶游离碱的性质和效用(例如毒蕈碱受体拮抗活性)可使用所属领域技术人员熟知的各种活体外和活体内分析来展示。例如，代表性分析进一步详细阐述于下列实例中且包括(举例说明但非加以限制)测量hM1、hM2、hM3、hM4和hM5毒蕈碱受体结合的分析(例如，如分析1中所述)。测定本发明结晶游离碱的毒蕈碱受体拮抗活性的可用功能分析包括(举例说明但非加以限制)测量以下的分析：配体调介的细胞内环腺苷单磷酸(cAMP)的变化、配体调介的腺苷酸环化酶(其合成cAMP)的活性变化、在通过受体催化交换鸟苷5’-O-(γ-硫基)三磷酸([35S]GTPγS)与GDP来将[35S]GTPγS纳入隔离膜中配体调介的变化、配体调介的细胞内游离钙离子的变化(例如，用来自分子装置(Molecular Devices)公司的荧光联合成像板读数器或FLIPR测量)和类似情况。实例性分析阐述于分析2中。预期在上文所列任一分析或类似性质的分析中结晶游离碱均可拮抗或降低毒蕈碱受体的活化，并且通常以约0.1-100纳摩尔的浓度用于这些研究中。因此，上述分析可用于测定本发明结晶游离碱的治疗效用，例如支气管扩张活性。
本发明结晶游离碱的其它性质和效用可使用所属领域的技术人员熟知的多种活体外和活体内分析来展示。例如，可在例如艾因托芬(Einthoven)模型的动物模型中测量结晶游离碱的活体内效能。简单来说，在经麻醉动物(艾因托芬模型)中评估结晶游离碱的支气管扩张活性，其中使用换气压力作为气道阻力的替代量度。例如，参见艾因托芬(1892)Pfugers Arch.51：367-445；和默罕默德(Mohammed)等人(2000)肺脏药理学与治疗学(Pulm Pharmacol Ther.)13(6)：287-92，以及阐述大鼠艾因托芬模型的分析3。另一可用活体内分析是大鼠止涎分析(例如，如分析4中所述)。
医药组合物和调配物
本发明的结晶游离碱通常是以医药组合物或调配物的形式投与患者。所述医药组合物可通过任何可接受的投与途径投与患者，包括(但不限于)吸入、经口、经鼻、局部(包括经皮)和非经肠投与模式。然而，所属领域技术人员应了解，本发明的结晶游离碱一旦调配，其即可不再呈结晶型，即，结晶游离碱可溶解于适宜载剂中。
因此，在一个实施例中，本发明涉及包含医药上可接受的载剂或赋形剂和联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基)哌啶-4-基酯的结晶游离碱的医药组合物。如果需要，那么所述医药组合物可含有其它治疗剂和/或调配剂。
本发明的医药组合物通常含有治疗有效量的作为活性药剂的联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基)哌啶-4-基酯的结晶游离碱。通常，所述医药组合物应包含约0.01重量％到约95重量％的活性药剂；包括约0.01重量％到约30重量％；例如约0.01重量％到约10重量％的活性药剂。
任何常规载剂或赋形剂均可用于本发明的医药组合物中。具体载剂或赋形剂，或载剂或赋形剂的组合的选择将取决于正用于治疗特定患者的投与模式或医学病况的类型或疾病状态。就这点来说，用于特定投与模式的适宜医药组合物的制备同样在熟悉制药技术者的范围内。另外，用于所述组合物的成份可购自(例如)西格玛(Sigma)，邮政信箱(P.O.Box)14508，圣路易斯(St.Louis)，MO 63178。出于进一步阐释的目的，常规调配技术阐述于雷鸣登(Remington)：药物科学与实践(The Science and Practice ofPharmacy)，第20版，利平科特威廉姆斯与怀特公司(Lippincott Williams & White)，巴尔的摩(Baltimore)，马里兰(Maryland)(2000)；和H.C.安塞尔(H.C.Ansel)等人，医药剂型与药物递送系统(Pharmaceutical Dosage Forms and Drug DeliverySystems)，第7版，利平科特威廉姆斯与怀特公司，巴尔的摩，马里兰(1999)中。
可用作医药上可接受的载剂的材料的代表性实例包括(但不限于)下述物质：糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素和其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；粉状黄芪胶；麦芽；明胶；滑石粉；赋形剂，例如可可油和栓剂蜡；油，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇，例如丙二醇；多元醇，例如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；酯，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；海藻酸；无致热源的水；等渗盐水；林格氏溶液(Ringer’s solution)；乙醇；磷酸盐缓冲溶液；压缩的推进剂气体，例如氯氟碳化合物和氢氟碳化合物；和其它用于医药组合物中的无毒相容性物质。
本发明医药组合物通常是通过将结晶游离碱与医药上可接受的载剂和一种或一种以上任选成份彻底和充分地混合或掺合来制备。必要或需要时，之后可使用常规程序和设备将所得均匀掺合的混合物制成片剂、胶囊、丸剂等或装填到药罐、药筒、分配器等之中。
在一个实施例中，本发明医药组合物适用于吸入投与。适用于吸入投与的医药组合物通常可呈气溶胶或粉末形式。所述组合物一般是使用众所周知的递送装置来投与，例如雾化吸入器、定量式吸入器(MDI)、干粉吸入器(DPI)或类似递送装置。
在本发明的一具体实施例中，使用雾化吸入器通过吸入来投与包含活性药剂的医药组合物。所述雾化器装置通常产生高速空气流，其使包含活性药剂的医药组合物以雾气形式被喷雾输送到患者的呼吸道中。因此，当经调配用于雾化吸入器中时，通常将结晶游离碱活性药剂溶解于适宜载剂中以形成溶液。适宜雾化器装置包括Respimat
Figure BPA00001496793800111
SoftMistTM吸入器(德国勃林格殷格翰制药公司(Boehringer Ingelheim))、AERx
Figure BPA00001496793800112
肺部递送系统(阿拉迪姆公司(Aradigm Corp.))和百瑞LC普乐士可重复使用雾化器(PARILC Plus Reusable Nebulizer)(德国百瑞有限责任公司(Pari GmbH))。
可用于雾化吸入器中的代表性医药组合物包含等渗水性溶液，其包含约0.05μg/ml到约10mg/mL的本发明结晶游离碱。在一个实施例中，水性雾化器调配物等渗。在一个实施例中，所述溶液的pH值为约4-6。在一特定实施例中，用柠檬酸盐缓冲液将水性雾化器调配物缓冲到约5的pH值。在另一特定实施例中，水性调配物含有约0.1mg/mL到约1.0mg/mL的联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基)哌啶-4-基酯的游离碱等效物。
在本发明的另一具体实施例中，包含治疗药剂的医药组合物是使用DPI通过吸入来投与。所述DPI通常以自由流动性粉剂形式投与活性药剂，所述粉剂在吸气期间分散于患者的气流中。为获得自由流动性粉剂，通常将结晶游离碱活性药剂与适宜赋形剂一起调配，例如乳糖、淀粉、甘露醇、右旋糖、聚乳酸、聚交酯-共-乙交酯和其组合。微粉化是将晶体大小减小到适于经肺递送的大小的普通方法。通常，将结晶游离碱活性药剂微粉化并与适宜载剂组合形成可吸入大小的微粉化颗粒的悬浮液，其中“微粉化颗粒”或“微粉化形式”意指至少约90％颗粒具有小于约10μm的直径。还可使用其它减小粒径的方法，例如，精细研磨、短切、磨碎、研磨、筛选、研制、粉碎等，只要可获得期望粒径即可。
用于DPI中的代表性医药组合物包含粒径介于约1μm与约100μm之间的干燥乳糖和本发明结晶游离碱的微粉化颗粒。所述干粉调配物可(例如)通过将乳糖与结晶游离碱活性药剂组合且然后干掺合各组份来制造。或者，如果需要，可在不使用赋形剂的情况下调配结晶游离碱活性药剂。然后，通常将医药组合物装填到干粉分配器中，或装填到吸入药筒或胶囊中以供与干粉递送装置一起使用。
DPI递送装置的实例包括碟式吸入器(Diskhaler)(葛兰素史克(GlaxoSmithKline)，三角研究园(Research Triangle Park)，NC；例如，参见颁予纽厄尔(Newell)等人的美国专利第5,035,237号)；迪斯科斯(Diskus)(葛兰素史克；例如，参见颁予戴维斯(Davies)等人的美国专利第6,378,519号)；涡轮吸入器(Turbuhaler)(阿斯利康(AstraZeneca)，威耳明顿(Wilmington)，DE；例如，参见颁予维特林(Wetterlin)的美国专利第4,524,769号)；旋转吸入器(Rotahaler)(葛兰素史克；例如，参见颁予霍尔沃思(Hallworth)等人的美国专利第4,353,365号)和便利型吸入器(Handihaler)(勃林格殷格翰(Boehringer Ingelheim))。适宜DPI装置的其它实例阐述于颁予卡斯帕(Casper)等人的美国专利第5,415,162号、颁予埃文斯(Evans)等人的美国专利第5,239,993号和颁予阿姆斯壮(Armstrong)等人的美国专利第5,715,810号和其中引用的参考文献中。上述专利的揭示内容的全文以引用方式并入本文中。
在本发明的又一具体实施例中，使用MDI通过吸入投与包含结晶游离碱活性药剂的医药组合物，所述MDI通常使用压缩的推进剂气体排放出测定量的活性药剂。因此，使用MDI投与的医药组合物通常包含结晶游离碱活性药剂存于液化推进剂中的溶液或悬浮液。可采用任何适宜液化推进剂，包括氯氟烃类(例如CCl3F)和氢氟烷类(HFA)(例如1，1，1，2-四氟乙烷(HFA 134a)和1，1，1，2，3，3，3-七氟-正-丙烷(HFA 227))。由于顾虑氯氟烃类会影响臭氧层，因此一般含有HFA的调配物是优选的。HFA调配物的其它任选组份包括共溶剂(例如乙醇或戊烷)和表面活性剂(例如山梨醇三油酸酯、油酸、卵磷脂和甘油)。例如，参见颁予普若沃(Purewal)等人的美国专利第5,225,183号、EP 0717987 A2(明尼苏达矿业和制造公司(Minnesota Mining and ManufacturingCompany))和WO 92/22286(明尼苏达矿业和制造公司)，所述案件的揭示内容全文以引用方式并入本文中。
用于定量式吸入器的代表性医药组合物包含约0.01重量％到5重量％的本发明的结晶游离碱化合物；约0重量％到20重量％的乙醇；和约0重量％到5重量％的表面活性剂；其余部分为HFA推进剂。
所述组合物通常是通过将经冷淬或加压的氢氟烷添加到含有结晶游离碱活性药剂、乙醇(如果存在)和表面活性剂(如果存在)的适宜容器中来制备。将结晶游离碱活性药剂微粉化并然后与推进剂合并来制备悬浮液。然后，将调配物装填到气溶胶罐中，所述罐形成定量式吸入器装置的一部分。尤其经研发与HFA推进剂一起使用的定量式吸入器装置的实例阐述于颁予马雷茨基(Marecki)的美国专利第6,006,745号和颁予阿什赫斯特(Ashurst)等人的美国专利第6,143,277中。或者，可通过喷雾干燥活性药剂微粉化颗粒上的表面活性剂涂层来制备悬浮液调配物。例如，参见WO 99/53901(葛兰素集团有限公司(Glaxo Group Ltd.))和WO 00/61108(葛兰素集团有限公司)。上述专利和公开案的揭示内容的全文以引用方式并入本文中。
关于制备可吸入颗粒的方法和适于吸入投药的调配物和装置的额外实例，参见颁予高(Gao)等人的美国专利第6,268,533号、颁予舒法特(Trofast)的美国专利第5,983,956号、颁予布里纳(Briggner)的美国专利第5,874,063号和颁予亚库波夫(Jakupovic)的美国专利第6,221,398号和WO 99/55319(葛兰素集团有限公司)和WO 00/30614(阿斯利康AB)；所述案件的揭示内容全文以引用方式并入本文中。
在另一实施例中，本发明医药组合物适用于经口投与。用于经口投与的适宜医药组合物可呈胶囊、片剂、药丸、菱形片剂、扁囊剂、糖衣药丸、粉剂、颗粒形式；或作为存于水性或非水性液体中的溶液或悬浮液；或作为水包油或油包水液体乳液；或作为酏剂或糖浆；和类似形式；各自均含有预定量的本发明结晶游离碱作为活性成份。医药组合物可包装成单位剂型。
当待以固体剂型(即作为胶囊、片剂、丸剂和其类似物)经口投与时，本发明医药组合物通常可包含作为活性成份的本发明结晶游离碱和一种或一种以上医药上可接受的载剂，例如柠檬酸钠或磷酸二钙。任选地或另一选择为，所述固体剂型还可包含：填充剂或增量剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和/或硅酸；结合剂，例如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯胶；保湿剂，例如甘油；崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和/或碳酸钠；溶液阻滞剂，例如石蜡；吸收促进剂，例如四级铵化合物；润湿剂，例如鲸蜡醇和/或甘油单硬脂酸酯；吸收剂，例如高岭土和/或膨润土；润滑剂，例如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠和/或其混合物；着色剂；和缓冲剂。
离型剂、润湿剂、涂布剂、甜味剂、矫味剂和加香剂、防腐剂和抗氧化剂也可存在于本发明医药组合物中。医药上可接受的抗氧化剂的实例包括：水溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸、盐酸半胱胺酸、硫酸氢钠、偏亚硫酸氢钠、亚硫酸钠和其类似物；油溶性抗氧化剂，例如棕榈酸抗坏血酯、丁基化羟基苯甲醚(BHA)、丁基化羟基甲苯(BHT)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚和其类似物；和金属螯合剂，例如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸和其类似物。用于片剂、胶囊、丸剂和其类似物的涂布剂包括用于肠溶包衣者，例如纤维素乙酸酞酸酯(CAP)、聚酞酸乙酸乙烯酯(PVAP)、羟丙基甲基纤维素酞酸酯、甲基丙烯酸-甲基丙烯酸酯共聚物、乙酸均苯三甲酸纤维素(CAT)、羧甲基乙基纤维素(CMEC)、羟丙基甲基纤维素乙酸琥珀酸酯(HPMCAS)和其类似物。
如果需要，也可以不同比例使用(例如)羟丙基甲基纤维素或其它聚合体基质、脂质体和/或微球体来调配本发明医药组合物以提供活性成份的缓慢或受控释放。
此外，本发明医药组合物可任选地含有遮光剂且可经调配以便其任选地以延迟方式仅(或优先)在胃肠道的某一部分中释放活性成份。可使用的包埋组合物实例包括聚合物质和蜡。如果适当，则结晶游离碱活性成份也可呈含有一种或一种以上上述赋形剂的微胶囊形式。
适用于经口投与的液体剂型包括(举例说明)医药上可接受的乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。所述液体剂型通常包含活性成份和惰性稀释剂，例如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄基酯、丙二醇、1，3-丁二醇、油类(尤其棉籽油、花生油、玉米油、胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢呋喃醇、聚乙二醇和山梨醇的脂肪酸酯和其混合物。除所述活性成份外，悬浮液可含有悬浮剂，例如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇和山梨糖醇酐酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄蓍胶和其混合物。
本发明的结晶游离碱还可使用已知的经皮递送系统和赋形剂经皮投与。例如，可将结晶游离碱与渗透促进剂(例如，丙二醇、聚乙二醇单月桂酸酯、氮杂环烷-2-酮和其类似物)混合并纳入到贴片或类似递送系统中。如果需要，包括胶凝剂、乳化剂和缓冲剂在内的额外赋形剂可用于所述经皮组合物中。
本发明结晶游离碱也可与其它治疗剂共投与。此组合疗法包括使用与这些次要药剂中的一种或一种以上组合的结晶游离碱，其一起调配(例如，在单一调配物中包装在一起)或分开调配(例如，包装为单独单位剂型)。将多种药剂在同一调配物中调配在一起或在单独单位剂型中调配的方法已为业内所熟知。术语“单位剂型”是指适于给予患者的物理离散单位，即每一单位含有经计算以单独或与一个或一个以上额外单位组合产生期望治疗效果的预定量的本发明化合物。例如，所述单位剂型可为胶囊、片剂、丸剂和其类似物。
额外治疗剂可选自其它支气管扩张药(例如，PDE3抑制剂、腺苷2b调节剂和β2肾上腺素能受体激动剂)；消炎剂(例如，类固醇消炎剂，例如皮质类固醇；非类固醇消炎剂(NSAID)和PDE4抑制剂)；其它毒蕈碱受体拮抗剂(即，抗胆碱药剂)；抗感染剂(例如，革兰氏(Gram)阳性和革兰氏阴性抗生素或抗病毒剂)；抗组胺药；蛋白酶抑制剂；和传入阻断剂(例如，D2激动剂和神经激肽调节剂)。
本发明的一个特定实施例涉及包含以下的组合物：(a)医药上可接受的载剂和治疗有效量的本发明结晶游离碱；和(b)医药上可接受的载剂和治疗有效量的选自以下的药剂：类固醇消炎剂，例如皮质类固醇；β2肾上腺素能受体激动剂；磷酸二酯酶-4抑制剂；或其组合；其中结晶游离碱和药剂一起或分开调配。在另一实施例中，(b)是医药上可接受的载剂和治疗有效量的β2肾上腺素能受体激动剂和类固醇消炎剂。次要药剂可以医药上可接受的盐或溶剂合物形式且(如果适当)以光学纯立体异构体形式使用。
可与本发明结晶游离碱组合使用的代表性β2肾上腺素能受体激动剂包括(但不限于)沙美特罗(salmeterol)、舒喘灵(salbutamol)、福莫特罗(formoterol)、沙甲胺醇(salmefamol)、非诺特罗(fenoterol)、特布他林(terbutaline)、沙丁胺醇(albuterol)、异他林(isoetharine)、奥西那林(metaproterenol)、比托特罗(bitolterol)、吡布特罗(pirbuterol)、左旋沙丁胺醇(levalbuterol)和其类似物或其医药上可接受的盐。其它可使用的β2肾上腺素能受体激动剂包括(但不限于)3-(4-{[6-({(2R)-2-羟基-2-[4-羟基-3-(羟基甲基)-苯基]乙基}氨基)-己基]氧基}丁基)苯磺酰胺和3-(-3-{[7-({(2R)-2-羟基-2-[4-羟基-3-(羟基甲基)苯基]乙基}-氨基)庚基]氧基}-丙基)苯磺酰胺和阐述于中WO02/066422的相关化合物(葛兰素集团有限公司)；3-[3-(4-{[6-([(2R)-2-羟基-2-[4-羟基-3-(羟基甲基)苯基]乙基}氨基)己基]氧基}丁基)-苯基]咪唑烷-2，4-二酮和阐述于WO02/070490中的相关化合物(葛兰素集团有限公司)；3-(4-{[6-({(2R)-2-[3-(甲酰基氨基)-4-羟基苯基]-2-羟基乙基}氨基)己基]氧基}丁基)-苯磺酰胺、3-(4-{[6-({(2S)-2-[3-(甲酰基氨基)-4-羟基苯基]-2-羟基乙基}氨基)己基]氧基}丁基)-苯磺酰胺、3-(4-{[6-({(2R/S)-2-[3-(甲酰基氨基)-4-羟基苯基]-2-羟基乙基}氨基)己基]氧基}丁基)-苯磺酰胺、N-(叔丁基)-3-(4-{[6-({(2R)-2-[3-(甲酰基氨基)-4-羟基苯基]-2-羟基乙基}氨基)己基]-氧基}丁基)苯磺酰胺、N-(叔丁基)-3-(4-{[6-({(2S)-2-[3-(甲酰基氨基)-4-羟基苯基]-2-羟基乙基}氨基)-己基]氧基}丁基)-苯磺酰胺、N-(叔丁基)-3-(4-{[6-({(2R/S)-2-[3-(甲酰基氨基)-4-羟基苯基]-2-羟基乙基}氨基)己基]-氧基}丁基)苯磺酰胺和阐述于WO 02/076933中的相关化合物(葛兰素集团有限公司)；4-{(1R)-2-[(6-{2-[(2，6-二氯苄基)氧基]乙氧基}己基)氨基]-1-羟基乙基}-2-(羟基甲基)苯酚和阐述于WO 03/024439中的相关化合物(葛兰素集团有限公司)；N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰胺基-4-羟基苯基)乙胺和阐述于颁予莫兰(Moran)等人的美国专利第6,576,793号中的相关化合物；N-{2-[4-(3-苯基-4-甲氧基苯基)氨基苯基]乙基}-((R)-2-羟基-2-(8-羟基-2(1H)-喹啉酮-5-基)乙胺和阐述于颁予莫兰等人的美国专利第6,653,323号中的相关化合物；和其医药上可接受的盐。在一特定实施例中，β2肾上腺素受体激动剂是N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰胺基-4-羟基苯基)乙胺的结晶单盐酸盐。β2-肾上腺素受体激动剂在采用时可以治疗有效量存于医药组合物中。通常，β2-肾上腺素受体激动剂可以足以提供每剂量约0.05μg到500μg的量存在。上述专利和公开案的揭示内容的全文以引用方式并入本文中。
可与本发明结晶游离碱组合使用的代表性类固醇消炎剂包括(但不限于)甲基泼尼松龙(methyl prednisolone)、泼尼松龙(prednisolone)、地塞米松(dexamethasone)、丙酸氟替卡松(fluticasone propionate)、6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代雄甾-1，4-二烯-17β-甲硫羟酸S-氟甲基酯、6α，9α-二氟-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-17α-丙酰氧基-雄甾-1，4-二烯-17β-甲硫羟酸S-(2-氧代-四氢呋喃-3S-基)酯、倍氯米松(beclomethasone)酯(例如，17-丙酸酯或17，21-二丙酸酯)、布地奈德(budesonide)、氟尼缩松(flunisolide)、莫米松(mometasone)酯(例如，呋喃甲酸酯)、曲安奈德(triamcinolone acetonide)、罗氟奈德(rofleponide)、环索奈德(ciclesonide)、丙酸布替可特(butixocort propionate)、RPR-106541、ST-126和其类似物或其医药上可接受的盐。类固醇消炎剂在采用时可以治疗有效量存于组合物中。通常，类固醇消炎剂可以足以提供每剂量约0.05μg到500μg的量存在。
实例性组合是共投与的本发明结晶游离碱与β2肾上腺素能受体激动剂和作为类固醇消炎剂的丙酸氟替卡松。另一实例性组合是共投与的本发明结晶游离碱与作为β2-肾上腺素受体激动剂的N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰胺基-4-羟基苯基)乙胺的结晶单盐酸盐和作为类固醇消炎剂的6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代雄甾-1，4-二烯-17β-甲硫羟酸S-氟甲基酯。如上所述，所述药剂可一起或分开调配。
其它适宜组合包括(例如)其它消炎剂，例如NSAID(例如色甘酸钠、奈多罗米钠(nedocromil sodium)和磷酸二酯酶(PDE)抑制剂(例如，茶碱、PDE4抑制剂和PDE3/PDE4混合抑制剂))；白三烯拮抗剂(例如，孟鲁司特(monteleukast)；白三烯合成抑制剂；iNOS抑制剂；蛋白酶抑制剂，例如类胰蛋白酶和弹性蛋白酶抑制剂；β-2整联蛋白拮抗剂和腺苷受体激动剂或拮抗剂(例如，腺苷2a激动剂)；细胞因子拮抗剂(例如，趋化因子拮抗剂，例如白细胞介素抗体(αIL抗体)，尤其αIL-4疗法、αIL-13疗法或其组合)；或细胞因子合成抑制剂。
可与本发明结晶游离碱组合使用的代表性磷酸二酯酶-4(PDE4)抑制剂或PDE3/PDE4混合抑制剂包括(但不限于)顺-4-氰基-4-(3-环戊基氧基-4-甲氧基苯基)环己烷-1-甲酸、2-甲氧羰基-4-氰基-4-(3-环丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)环己烷-1-酮；顺-[4-氰基-4-(3-环丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)环己烷-1-醇]；顺-4-氰基-4-[3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苯基]环己烷-1-甲酸和其类似物或其医药上可接受的盐。其它代表性PDE4或PDE4/PDE3混合抑制剂包括AWD-12-281(艾尔鲍(elbion))；NCS-613(INSERM)；D-4418(螺旋藻科学(Chiroscience)和先灵葆雅(Schering-Plough))；CI-1018或PD-168787(辉瑞(Pfizer))；阐述于WO99/16766(日本协和发酵(Kyowa Hakko))中的苯并间二氧杂环戊烯化合物；K-34(日本协和发酵)；V-1294A(纳普(Napp))；罗氟司特(roflumilast)(德国百克顿(Byk-Gulden))；阐述于WO99/47505(德国百克顿)中的酞嗪酮化合物；普马芬群(Pumafentrine)(德国百克顿，现为德国阿尔塔纳(Altana))；阿罗茶碱(arofylline)(西班牙艾美罗医药(Almirall-Prodesfarma))；VM554/UM565(英国沃那里斯(Vernalis))；T-440(日本田边制药(Tanabe Seiyaku))；和T2585(日本田边制药)。
可与本发明结晶游离碱组合使用的代表性毒蕈碱拮抗剂(即抗胆碱能药剂)包括(但不限于)阿托品(atropine)、硫酸阿托品、氧阿托品、硝甲阿托品、氢溴酸后马托品(homatropine hydrobromide)、氢溴酸莨菪碱(d，l)(hyoscyamine(d，l)hydrobromide)、氢溴酸东莨菪碱(scopolamine hydrobromide)、异丙托溴铵(ipratropium bromide)、氧托溴铵(oxitropium bromide)、噻托溴铵(tiotropium bromide)、溴甲胺太林(methantheline)、溴丙胺太林(propantheline bromide)、甲溴辛托品(anisotropine methylbromide)、克利溴铵(clidinium bromide)、格隆溴铵(copyrrolate)(甘罗溴铵(Robinul))、异丙碘铵(isopropamide iodide)、溴美喷酯(mepenzolate bromide)、曲地氯铵(tridihexethylchloride)(埃博霉素(Pathilone))、甲硫己环铵(hexocyclium methylsulfate)、盐酸环戊通(cyclopentolate hydrochloride)、托吡卡胺(tropicamide)、盐酸苯海索(trihexyphenidyl hydrochloride)、哌仑西平(pirenzepine)、替仑西平(telenzepine)、AF-DX 116和美索曲明(methoctramine)和其类似物或其医药上可接受的盐；或对于列举为盐的所述化合物来说，为其替代医药上可接受的盐。
可与本发明结晶游离碱组合使用的代表性抗组胺剂(即H1-拮抗剂)包括(但不限于)乙醇胺，例如马来酸卡比沙明(carbinoxamine maleate)、富马酸氯马斯汀(clemastinefumarate)、盐酸苯海拉明(diphenylhydramine hydrochloride)和茶苯海明(dimenhydrinate)；乙二胺，例如马来酸吡拉明(pyrilamine amleate)、盐酸曲吡那敏(tripelennamine hydrochloride)和柠檬酸曲吡那敏；烷基胺，例如氯苯那敏(chlorpheniramine)和阿伐斯汀(acrivastine)；哌嗪，例如盐酸羟嗪、双羟萘酸羟嗪、盐酸赛克力嗪(cyclizine hydrochloride)、乳酸赛克力嗪(cyclizine lactate)、盐酸美克洛嗪(meclizine hydrochloride)和盐酸西替利嗪(cetirizine hydrochloride)；哌啶，例如阿司咪唑(astemizole)、盐酸左卡巴斯汀(levocabastine hydrochloride)、氯雷他定(loratadine)或其去乙氧羰基类似物、特非那定(terfenadine)和盐酸非索非那定(fexofenadine hydrochloride)；盐酸氮卓斯丁(azelastine hydrochloride)；和其类似物或其医药上可接受的盐；或对于列举为盐的所述化合物来说，为其替代医药上可接受的盐。
除非另有说明，否则与本发明结晶游离碱组合投与的其它治疗剂的实例性适宜剂量在约0.05μg/天到100mg/天范围内。
下列调配物阐释本发明的代表性医药组合物以及实例性制备方法。一种或一种以上次要药剂可任选地与本发明结晶游离碱(主要活性药剂)一起调配。或者，次要药剂可分开调配并与主要活性药剂同时或依序共投与。例如，在一个实施例中，单一干粉调配物可制造为同时包括本发明结晶游离碱与一种或一种以上次要药剂。在另一实施例中，一种调配物制造为含有本发明结晶游离碱且单独调配物制造为含有次要药剂。所述干粉调配物随后可包装于单独泡罩包装中并利用DPI装置投与。
通过吸入投与的实例性干粉调配物
将0.2mg本发明结晶游离碱微粉化且然后使其与25mg乳糖一起掺和。然后将经掺和的混合物装填到明胶吸入药筒中。所述药筒的内容物是使用粉末吸入器投与。
通过干粉吸入器投与的实例性干粉调配物
制备本发明微粉化结晶游离碱(活性药剂)与乳糖的体积调配物比率为1∶200的干粉。将粉末包装于能够每剂量递送约10μg到100μg活性药剂的干粉吸入装置中。
通过定量式吸入器投与的实例性调配物
通过将10g结晶游离碱(作为平均尺寸小于10μm的微粉化颗粒)分散于由0.2g卵磷脂溶解于200mL脱矿质水形成的溶液中来制备含5重量％本发明结晶游离碱(活性药剂)和0.1wt％卵磷脂的悬浮液。喷雾干燥悬浮液，并且将所得材料微粉化成平均直径小于1.5μm的颗粒。将所述颗粒装填到具有经压缩1，1，1，2-四氟乙烷的药筒中。
或者，通过将5g呈平均尺寸小于10μm的微粉化颗粒形式的结晶游离碱分散于通过将0.5g海藻糖和0.5g卵磷脂溶解于100mL脱矿质水中所形成的胶质溶液中来制备含有5wt％本发明结晶游离碱、0.5wt％卵磷脂和0.5wt％海藻糖的悬浮液。喷雾干燥悬浮液，并且将所得材料微粉化成平均直径小于1.5μm的颗粒。将颗粒装填到含有加压1，1，1，2-四氟乙烷的药罐中。
通过雾化罐投与的实例性水性气溶胶调配物
通过将0.5mg本发明结晶游离碱(活性药剂)溶解于1mL经柠檬酸酸化的0.9％氯化钠溶液中来制备医药组合物。将所述混合物搅拌并实施超声处理直到活性药剂溶解。通过缓慢添加NaOH将溶液的pH调节到3到8范围内的值(通常约5)。
用于经口投与的实例性硬明胶胶囊调配物
将下列成份彻底掺和并随后装填到硬明胶胶囊中：250mg本发明结晶游离碱、200mg乳糖(喷雾干燥)和10mg硬脂酸镁，每个胶囊总共460mg组合物。
用于经口投与的实例性悬浮液调配物
将下列成份混合以形成每10mL悬浮液含有100mg活性成份的悬浮液。
Figure BPA00001496793800191
实例性可注射调配
将下列成份掺和并使用0.5N HCl或0.5N NaOH将pH调节到4±0.5。
Figure BPA00001496793800192
实例
提供下列制备和实例来阐释本发明的具体实施例。然而，除非明确说明，否则所述具体实施例并不打算以任何方式限制本发明范围。除非另有说明，否则下列缩写具有下列含义，且本文所用且未定义的任何其它缩写都具有其标准含义：
Figure BPA00001496793800201
本文所用但未定义的任何其它缩写都具有其公认的标准含义。除非另有注明，否则试剂、起始材料和溶剂都购自商业供应商(例如西格玛-奥德里奇(Sigma-Aldrich)、弗卢卡(Fluka)等)，并且未经进一步纯化即使用。
制备1
联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基)哌 啶-4-基酯
将联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基)哌啶-4-基酯的二磷酸盐(16g)溶解于水(100mL)与EtOAc(200mL)的两相混合物中。经5分钟的时段添加NaOH(2N，75mL)。然后将混合物搅拌30分钟。分离各相且用EtOAc(200mL)萃取水相。浓缩合并的有机相。添加DCM(100mL)，并将混合物蒸发至干燥。将固体在炉中干燥约48小时以产生标题化合物(9.6g)。
实例1
联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基)哌 啶-4-基酯的结晶游离碱(形式III)
将联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基)哌啶-4-基酯(102.4mg)溶解于MeCN(500μL)中。将溶液于室温下搅拌80分钟并形成白色固体沉淀。将混合物放置于振荡器区(block)中以热循环(在1小时区中0℃到40℃)48小时。观察到白色致密静止固体。添加MeCN(500μL)以使浆液流动。然后将混合物放置回振荡器区中并保持2小时。通过使用烧结漏斗的真空过滤分离固体，随后在40℃和完全真空下将其放置于活塞式干燥器中达15.5小时，从而产生76.85mg标题结晶化合物。
实例2
联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基甲基氨基}乙基)哌 啶-4-基酯的结晶游离碱(形式III)
在室温和氮下将联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基-哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基)哌啶-4-基酯的二磷酸盐(C35H43N5O4·2H3PO4；MW 793.75；632.9g)在乙酸异丙基酯(11.08L)和水(6.33L)中制成浆液。将悬浮液升温到53±3℃并向搅拌混合物中添加10M NaOH(317mL)，同时维持混合物的温度高于50℃。在53±3℃下将混合物搅拌约5分钟，之后使各层沉降。然后分离各层并移除水层。向有机层中添加水(3.16L)，同时维持混合物的温度高于50℃。在53±3℃下将混合物搅拌5分钟，之后使各层沉降。分离各层并移除水层。添加乙酸异丙基酯(6.33L)且然后通过常压蒸馏收集约10体积的馏出物。利用额外乙酸异丙基酯(3.2L)重复此步骤。在第二次蒸馏后，将澄清溶液的温度降低到53±3℃，然后用联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基)哌啶-4-基酯结晶游离碱(形式III；3.2g)存于乙酸异丙基酯(51mL)中的悬浮液引晶。将所得悬浮液于53±3℃下搅拌2小时，然后经4小时冷冻到10±3℃。将悬浮液于10±3℃下搅拌至少2小时且然后通过过滤收集固体。用乙酸异丙基酯(2x1.9L)洗涤所得滤饼且将产物于50℃下在真空中干燥，从而产生标题结晶化合物(C35H43N5O4；MW 597.76；382.5g，80.3％产率)。
实例3
联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基) 哌啶-4-基酯的结晶游离碱(形式III)的重结晶
在20±3℃和氮下将联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基)哌啶-4-基酯的结晶游离碱(形式III；C35H43N5O4；MW 597.76；372.5g)在甲苯(5.6L)中制成浆液。将悬浮液升温到82±3℃，且保持在此温度下直至观察到完全溶解为止。然后将溶液澄清到结晶器容器中，之后用甲苯(373μL)冲洗。在结晶器容器中观察到固体，且将容器重新加热到82±3℃以实施溶解，然后冷却到58±3℃并用存于甲苯(8μL)中的预先经超声波处理(约1分钟)的结晶游离碱(形式III；1.9g)引晶。使所得悬浮液于58±3℃下静置至少4小时，然后经2小时冷却到20±3℃(近似冷却速率为0.33℃/min)。将悬浮液于20±3℃下搅拌至少1小时，然后通过过滤收集固体。用甲苯(2x1.2L)洗涤所得滤饼且将产物于52±3℃下在真空中干燥，从而产生标题结晶化合物(345.3g，92.7％产率)。
实例4
联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-剂甲基)苯甲酰基甲基氨基}乙基)哌 啶-4-基酯的结晶游离碱(形式IV)
将联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基)哌啶-4-基酯(如制备1中所述制备；2.5g)溶解于MeCN(10mL)中以产生粘性油状浅黄色物质。添加额外MeCN(5mL)以稀释所述物质。将溶液用结晶游离碱(20mg；形式III，如实例1中所述制备)引晶并于室温下搅拌90分钟。观察到大量白色沉淀(小晶体)。在偏振光显微镜下分析浆液且发现具有双折射性。
添加额外MeCN(3mL)并将浆液放置于梅兹西恩10(Metz Syn10)区中以在800rpm下热循环(在1小时区中0℃到40℃)过夜。梅兹西恩10是静态的10位置平行反应站。通过交叉磁力搅拌棒搅动溶液/浆液。振荡器区是设备中通过外部优莱博(Julabo)浴槽加热和冷却的单独件。在0℃下移除所述物质。观察到浆液沉降析出，在白色沉淀上留下浅黄色溶液。搅拌浆液并将其放置回振荡器区中以热循环。
于40℃下移除所述物质，且在室温下以高搅动速率搅拌80分钟。再次分析浆液且发现其具有双折射性。通过使用烧结漏斗的真空过滤分离滤饼。在过滤之前，使用MeCN(3mL)以润湿滤纸并用MeCN洗涤滤饼。将所述饼在真空下脱液40分钟，从而产生2.3g流动白色粉末。于40℃下将所述物质放置于活塞式干燥器中达65小时，从而产生2.2g白色粉末状标题结晶化合物(99.6％纯度)。
大多数产物的拉曼(Raman)光谱与形式III起始材料一致。然而，记录到三个位移：
形式III    产物
878cm-1    881cm-1
775cm-1    772cm-1
485cm-1    488cm-1
然后通过粉末x射线衍射、差示扫描量热法和热重分析分析所述产物。测得产物是与形式III起始材料不同的游离碱结晶，且命名为形式IV。
实例5
粉末x射线衍射
在配备有埃克斯塞雷瑞特(XCelerator)检测器的PANalytical X′Pert Pro粉末衍射仪上采集结晶游离碱形式III(来自实例1)和IV(来自实例4)的粉末x射线衍射(PXRD)图案。采集条件为：辐射：Cu Kα；发生器电压：40kV；发生器电流：45mA；起始角度：2.0° 2θ；终止角度：40.0° 2θ；步长：0.0167° 2θ。时间/步为31.750秒通过将数毫克试样放置于硅晶片(零背景)板上从而形成粉末薄层来准备试样。
下文概述特征峰位置和所计算d间距，仅报告具有大于14％相对强度的所述峰。使用高分(Highscore)软件根据原始数据计算这些值。峰位置的实验误差为约±0.1° 2θ。相对峰强度将因优选定向而变化。
Figure BPA00001496793800231
Figure BPA00001496793800241
结晶游离碱形式III的代表性PXRD图案示于图1中。结晶游离碱形式IV的代表性PXRD图案示于图2中。
实例6
热分析
使用TA仪器(Instruments)热量计获得结晶游离碱形式III(来自实例1)和IV(来自实例4)的差示扫描量热法(DSC)热分析图。将试样称量到铝盘中，将盘盖置于顶部并轻微折曲而不密封所述盘。使用10℃/min的加热速率进行实验。
结晶游离碱形式III的代表性DSC温度记录图示于图4中。DSC温度记录图展示，形式III的特征在于DSC温度记录图显示吸热热流的起点在约123.1℃处(焓为67.7J/g)。
结晶游离碱形式IV的代表性DSC温度记录图示于图5中。DSC温度记录图展示，形式IV的特征在于DSC温度记录图显示较小吸热和主要吸热，即吸热热流的较小第一起点出现在65.6℃处(焓为0.8J/g)，且吸热热流的主要第二起点出现在118.8℃处(焓为66.8J/g)。
使用TA仪器Q500仪器获得热重分析(TGA)数据。将试样在开放铝盘中以10℃/min的加热速率加热到200℃。
结晶游离碱形式III的代表性TGA迹线示于图6中，并且表示在试样降解之前观察到可忽略的重量损失。结晶游离碱形式IV的代表性TGA迹线示于图7中，并且表示在试样熔融之前观察到约0.3％重量损失，此与残余溶剂的损失一致。
实例7
重量蒸气吸附评定
于25℃下使用产生完全吸附等温线的表面测量系统(Surface Measurements System)DVS-1仪器使用水蒸汽灌注来执行重量蒸气吸附(GVS)研究。将约7mg的试样量放置于清洁干燥的配衡试样筛盘中并使用内部平衡来称重。目标相对湿度(RH)范围为30％到90％，随后为90％到0％和0％到30％，步长为10％。使用0.02dm/dt渐近线设定来自动确定平衡点。
于25℃下对结晶游离碱形式III的试样实施的GVS研究展示，所述物质在范围0％RH到90％RH内具有低的吸收水分的倾向。试样显示，于25℃下介于0与90％RH之间的可逆水吸收＜2％w/w。此GVS迹线展示，形式III在暴露于宽湿度范围时具有可接受的重量增加。
实例8
微粉化
使用APTM 4”微粉化器微粉化结晶游离碱形式III的试样并通过激光衍射测定粒径。
为进行参考，输入结晶游离碱形式III的粒径为X10＝5.58μm，X50＝18.2μm，且X90＝49.7μm。微粉化产生可吸入大小范围内的颗粒。微粉化导致结晶度降低但保留预微粉化材料的基本特征。在40℃/20％相对湿度、40℃/75％相对湿度(未封盖)和50℃/环境湿度下存储3个月后，未观察到PXRD变化。
结晶游离碱形式III的DSC温度记录图显示在微粉化之前和之后，在125℃下突然熔融。在87℃下在微粉化材料中存在另一较小热事件，可能是由于结晶引起的。在40℃/20％RH、40℃/裸75％RH和50℃/环境湿度下存储3个月后，微粉化材料显示在125℃下突然熔融，且无非晶形内容物的证据。
实例9
乳糖相容性
结晶游离碱形式III的两种调配物评估为关于在40℃/20％相对湿度(RH)、40℃/75％RH(未封盖)和50℃/环境湿度下稳定3个月。0.08wt/wt％(10μg DPI剂量)和2wt/wt％(250μg DPI剂量)调配物制备为仅与乳糖或与乳糖和1wt/wt％硬脂酸镁的掺合物。发现所有调配物的稳定性都可接受。
实例10
pH溶解性和稳定性
结晶游离碱形式III显示在高达pH 7的介质中具有良好溶解性(大于约2mg/mL)。在8.9的中性pH下于水中的溶解性为0.66mg/mL。于模拟肺液中的溶解性为0.46mg/mL，在4小时与24小时溶解性测量之间未观察到变化。
结晶游离碱形式III溶液在pH 4和pH 6缓冲液中于50℃下或暴露于光中可稳定高达7天。所述溶液于室温下在水和盐水中稳定7天，免受光影响。
分析1
放射性配体结合分析
从表达hM1、hM2、hM3和hM4毒蕈碱受体亚型的细胞制备膜
使稳定表达经克隆人类hM1、hM2、hM3和hM4毒蕈碱受体亚型的CHO细胞系分别在有补加10％FBS和250μg/mL遗传霉素(Geneticin)的哈莫斯(HAM′s)F-12组成的培养基中生长至几乎汇合。在5％CO2下于37℃培育器中使细胞生长，并用存于dPBS中的2mM EDTA提取出细胞。通过以650x g离心5分钟来收集细胞，并将细胞沉淀冷冻存储在-80℃下或立即制备膜。对于膜的制备，使细胞沉淀再悬浮于溶胞缓冲液中，并用保利通(Polytron)PT-2100组织破碎器匀浆(凯恩迈特格(Kinematica)AG；20秒x 2次破裂)。在4℃下以40,000x g将粗制膜离心15分钟。然后用再悬浮缓冲液使膜沉淀再悬浮，并用保利通组织破碎器再次匀浆。通过劳瑞，O.(Lowry，O.)等人，生物化学期刊(Journal of Biochemistry)，193：265(1951)中所述的方法来测定膜悬浮液的蛋白质浓度。以多个等份将所有膜在-80℃下冷冻存储或立即使用。直接从铂金埃尔默(PerkinElmer)公司购得多个等份的已制备hM5受体膜，并将其存储在-80℃下直至使用。
对毒蕈碱受体亚型hM1、hM2、hM3、hM4和hM5的放射性配体结合分析
放射性配体结合分析是在96孔微量滴定板中以1000μL的总分析体积来执行。使稳定表达hM1、hM2、hM3、hM4或hM5毒蕈碱亚型的CHO细胞膜在分析缓冲液中稀释到以下具体目标蛋白质浓度(μg/孔)：10μg hM1、10-15μg hM2、10-20μg hM3、10-20μg hM4和10-12μg hM5。在分析板添加前，使用保利通组织破碎器对膜实施短暂匀浆(10秒)。测定放射性配体KD值的饱和结合研究是以0.001nM到20nM范围的浓度使用L-[N-甲基-3H]氯化甲基东莨菪碱([3H]-NMS)(TRK666，84.0Ci/mmol，安法玛西亚生物制药公司(Amersham Pharmacia Biotech)，白金汉郡(Buckinghamshire)，英格兰)来执行。测定测试化合物Ki值的置换分析是以1nM的[3H]-NMS和11种不同测试化合物浓度来执行。首先将测试化合物以40μM的浓度溶解于稀释缓冲液中，且然后用稀释缓冲液将其连续稀释5x至400fM至4μM的最终浓度。向分析板中添加的顺序和体积如下所述：825μL具有0.1％BSA的分析缓冲液、25μL放射性配体、100μL经稀释测试化合物和50μL膜。将分析板在37℃下培育6小时。通过经在0.3％聚乙烯亚胺(PEI)中预处理的GF/B玻璃纤维过滤板(铂金埃尔默公司，韦尔斯利(Wellesley)，MA)快速过滤来终止结合反应。用洗涤缓冲液(10mM HEPES)将滤板冲洗三次以移除未结合的放射活性。然后使板风干，并将50μL微森特(Microscint)-20液态闪烁流体(铂金埃尔默公司，韦尔斯利，MA)添加到各孔中。然后在铂金埃尔默拓普康(TopCount)液体闪烁计数器(铂金埃尔默公司，韦尔斯利，MA)中对板实施计数。结合数据是通过非线性回归分析使用格拉夫派得普锐斯(GraphPad Prism)软件包(格拉夫派得(GraphPad)软件公司，加利福尼亚州圣地亚哥(San Diego，CA))以单一位点竞争模式来分析。使用程-普鲁萨福(Cheng-Prusoff)方程(程Y(Cheng Y)；普鲁萨福(PrusoffW.H.)，生化药理学(Biochemical Pharmacology)，22(23)：3099-108(1973))从所观测到的放射性配体的IC50值和KD值来计算测试化合物的Ki值。使Ki值转化成pKi值以测定几何平均和95％置信区间。然后，将这些汇总统计值转化回Ki值用于数据报告。
在此分析中，较低Ki值表示测试化合物对所测试受体具有较高结合亲和力。已发现，在此分析或类似分析中测试时式I化合物与M3毒蕈碱受体亚型的Ki值小于约5nM。
分析2
毒蕈碱受体的功能性效能分析
对cAMP积累的激动剂调介抑制的阻断
在此分析中，通过在表达hM2受体的CHO-K1细胞中测量测试化合物阻断福司柯林(forskolin)调介cAMP积累的氧代震颤素抑制的能力来测定测试化合物的功能性效能。
cAMP分析是根据制造商说明书使用具有125I-cAMP的闪光板腺苷酸环化酶活化分析系统(NEN SMP004B，铂金埃尔默生命科学公司(PerkinElmer Life Sciences Inc.)，波士顿(Boston)，MA)以放射性免疫分析模式来执行。
用dPBS将细胞冲洗一次并用胰蛋白酶-EDTA溶液(0.05％胰蛋白酶/0.53mMEDTA)将细胞提取出来，如分析1中所述。通过以650x g离心5分钟将已分离细胞在50mL dPBS中洗涤两次。然后使细胞沉淀再悬浮于10mL dPBS中，并用Coulter Z1双颗粒计数器(贝克曼库尔特(Beckman Coulter)，富勒顿(Fullerton)，CA)对细胞实施计数。再次以650x g将细胞离心5分钟，并以1.6x 106-2.8x 106个细胞/mL的分析浓度使细胞再悬浮于刺激缓冲液中。
首先以400μM的浓度使测试化合物溶解于稀释缓冲液(补加有1mg/mL BSA(0.1％)的dPBS)中，然后用稀释缓冲液连续稀释到介于100μM到0.1nM之间的最终摩尔浓度。以类似方式稀释氧代震颤素。
为测量AC活性的氧代震颤素抑制，将25μL福司柯林(以25μm最后浓度稀释于dPBS中)、25μL经稀释氧代震颤素和50μL细胞添加到激动剂分析孔中。为测量测试化合物阻断氧代震颤素抑制AC活性的能力，将25μL福司柯林和氧代震颤素(分别以25μM和5μM的最终浓度稀释于dPBS中)、25μL经稀释测试化合物和50μL细胞添加到其余分析孔中。
在37℃下将反应物培育10分钟，并通过添加100μL冰冷检测缓冲液使其停止。将板密封，在室温下培育过夜，并在第二天早利用在铂金埃尔默拓普康液体闪烁计数器(铂金埃尔默公司，韦尔斯利，MA)计数。根据制造商的使用者手册中所述基于在试样和cAMP标准物中所观测到的计数来计算所产生cAMP的量(pmol/孔)。通过非线性回归分析使用格拉夫派得普锐斯软件包(格拉夫派得软件公司，加利福尼亚州圣地亚哥)以非线性回归单一位点竞争方程来分析数据。使用程-普鲁萨福方程来计算Ki，其中分别使用氧代震颤素浓度-反应曲线的EC50和氧代震颤素分析浓度来作为KD和[L]。使Ki值转化成pKi值以测定几何平均和95％置信区间。然后，将汇总统计值转化回Ki值以用于数据报告。
在此分析中，较低Ki值表示测试化合物对所测试受体具有较高功能性活性。已发现，式I化合物在此分析或类似分析中测试时在表达hM2受体的CHO-K1细胞中阻断福司柯林调介cAMP积累的氧代震颤素抑制的Ki值小于约5nM。
对激动剂调介的[35S]GTPγS结合的阻断
在第二功能性分析中，可通过在表达hM2受体的CHO-K1细胞中测量化合物阻断氧代震颤素刺激[35S]GTPγS结合的能力来测定测试化合物的功能性效能。
在使用时，使冷冻膜解冻，然后以5-10μg蛋白质/孔的最终目标组织浓度将其稀释于分析缓冲液中。使用保利通PT-2100组织破碎器将膜短暂匀浆，然后添加到分析板中。
在各实验中测定激动剂氧代震颤素刺激[35S]GTPγS结合的EC90值(达成90％最大反应的有效浓度)。
为测定测试化合物抑制氧代震颤素刺激[35S]GTPγS结合的能力，将以下材料添加到96孔板的各孔中：25μL含有[35S]GTPγS(0.4nM)的分析缓冲液、25μL氧代震颤素(EC90)和GDP(3μM)、25μL经稀释测试化合物和25μL表达hM2受体的CHO细胞膜。然后将分析板在37℃下培育60分钟。经用1％BSA预处理的GF/B过滤器使用铂金埃尔默96孔采集器来过滤分析板。用冰冷洗涤缓冲液将板冲洗3x 3秒，然后风干或真空干燥。将微森特-20闪烁液体(50μL)添加到各孔中，并将各板密封并利用顶端显示计数器(铂金埃尔默)计数放射性活性。通过非线性回归分析使用格拉夫派得普锐斯软件包(格拉夫派得软件公司，加利福尼亚州圣地亚哥)以非线性回归单一位点竞争方程来分析数据。使用程-普鲁萨福方程来计算Ki，其中分别使用测试化合物的浓度-反应曲线的IC50值和分析中氧代震颤素的浓度作为KD和[L](配体浓度)。
在此分析中，较低Ki值表示测试化合物对所测试受体具有较高功能性活性。已发现，式I化合物在此分析或类似分析中测试时在表达hM2受体的CHO-K1细胞中阻断氧代震颤素刺激[35S]GTPγS结合的Ki值小于约5nM。
通过FLIPR分析对激动剂调介钙释放的阻断
与Gq蛋白偶合的毒蕈碱受体亚型(M1、M3和M5受体)在激动剂与受体结合后激活磷脂酶C(PLC)路径。因此，激活的PLC将磷脂酰肌醇二磷酸(PIP2)水解成二酰甘油(DAG)和磷脂酰基-1，4，5-三磷酸盐(IP3)，其又引起从细胞内存储点(即内质网和肌质网)释放钙。FLIPR(分子装置公司(Molecular Devices，Inc.)，加利福尼亚州森尼韦尔(Sunnyvale，CA))分析通过使用在结合游离钙时可发出荧光的钙敏染料(Fluo-4AM，分子探针(Molecular Probes))来表现此细胞内钙增加。此荧光事件是通过FLIPR实时测量，其检测来自克隆有人类M1与M3和黑猩猩M5受体的细胞单层的荧光的变化。可通过测量拮抗剂抑制激动剂调介细胞内钙增加的能力来测定拮抗剂效能。
对于FLIPR钙刺激分析，在实施分析之前一晚将稳定表达hM1、hM3和cM5受体的CHO细胞引晶到96孔FLIPR板中。通过细胞洗涤器(Cellwash)(MTX实验室系统(MTXLabsystems)公司)使用FLIPR缓冲液(10mM HEPES，pH 7.4，2mM氯化钙，2.5mM丙磺舒(probenecid)，存于不含钙和镁的HBSS中)将引晶的细胞洗涤两次以移除生长培养基并保留50μL/孔的FLIPR缓冲液。然后，在37℃、5％二氧化碳下将细胞与50μL/孔的4μM FLUO-4AM(制成2X溶液)一起培育40分钟。在染料培育期之后，用FLIPR缓冲液将细胞洗涤两次，并保留50μL/孔的最终体积。
为测定拮抗剂效能，首先测定氧代震颤素对细胞内Ca2+释放的剂量依赖性刺激，从而稍后可在EC90浓度下根据氧代震颤素刺激来测量拮抗剂效能。首先，将细胞与化合物稀释缓冲液一起培育20分钟，然后添加激动剂，此是通过FLIPR来执行。根据下文FLIPR测量和数据归纳部分中所详述的方法，结合公式ECF＝((F/100-F)^1/H)*EC50来获得氧代震颤素的EC90值。在刺激板中制备3x ECF浓度的氧代震颤素，从而将EC90浓度的氧代震颤素添加到拮抗剂抑制分析板的各孔中。
用于FLIPR的参数是：0.4秒的暴露时间长度、0.5瓦特的激光强度、488nm的激发波长和550nm的发射波长。在添加激动剂之前，通过测量荧光在10秒中的变化来确定基线。在激动剂刺激之后，在1.5分钟内FLIPR每0.5秒到1秒连续测量荧光变化以捕获最大荧光变化。
荧光变化表示为各孔的最大荧光减去基线荧光。通过非线性回归用格拉夫派得普锐斯(格拉夫派得软件公司，加利福尼亚州圣地亚哥)使用S形剂量-反应的内建模型根据药物浓度的对数来分析原始数据。根据程-普鲁萨福方程(程和普鲁萨福，1973)通过普锐斯来测定拮抗剂Ki值，其中使用氧代震颤素EC50值作为KD并使用氧代震颤素EC90作为配体浓度。
在此分析中，较低Ki值表示测试化合物对所测试受体具有较高功能性活性。已发现，式I化合物在此分析或类似分析中测试时在稳定表达hM3受体的CHO细胞中阻断激动剂调介钙释放的Ki值小于约5nM。
分析3
大鼠艾因托芬分析
使用此活体内分析来评定表现毒蕈碱受体拮抗活性的测试化合物的支气管保护效应。将所有测试化合物均稀释于无菌水中并通过吸入途径(IH)给予。使大鼠(斯普拉-道来氏(Sprague-Dawley)，雄性，250-350g)暴露于从LC星式(Star)雾化器组产生并通过气体混合物(5％ CO2/95％大气)喷出的气溶胶中。经10分钟时间段在能够容纳6只大鼠的扇形投药室中雾化各测试化合物溶液。在吸入化合物后的预定时间点执行艾因托芬分析。
在开始实施肺评估前30分钟，用仲丁硫巴比妥(inactin)(仲丁硫巴比妥钠(thiobutabarbital)，120mg/kg IP)来麻醉动物。将填充有盐水的聚乙烯导管(PE-50)插入颈静脉中并使用其来输注MCh。随后剖开气管并插入14G针头以供在肺评估期间给大鼠换气。在手术完成后，使用活塞式呼吸器给大鼠换气，将所述活塞呼吸器设置为每搏输出量为1ml/100g体重但不超过2.5ml体积，并且速率为90搏/分钟。
测量每次呼吸时产生的压力变化。经至少2.5分钟收集基线值，随后以非累积方式使用2倍递增的支气管收缩性MCh(5、10、20、40和80μg/ml)激发大鼠。经2.5分钟以2mL/kg/min的速率用注射泵输注MCh。在研究完成后将动物无痛致死。
将所治疗动物的换气压力(cm H2O)变化表示为相对于对照动物对MCh反应的抑制％。在此分析中，较高抑制％值表示测试化合物具有支气管保护效应。预期在此分析中以100μg/ml剂量测试时式I化合物表现大于35％的抑制，可能大于70％的抑制，并且甚至更可能大于90％的抑制。
1.5hr ID50测定
在大鼠艾因托芬分析中于投用后1.5hr对标准物蕈碱拮抗剂实施评估。经测定，所测试5种标准物的效能(ID50s)大小顺序为：异丙托铵(4.4μg/ml)＞噻托溴铵(6μg/ml)＞去甲基噻托溴铵(12μg/ml)＞格隆溴铵(15μg/ml)＞LAS-34237(24μg/ml)。在投用后1.5hr以类似方式测定测试化合物的效能。
6hr和24hr ID50测定
也在大鼠艾因托芬分析中在投用后24hr和/或6hr对标准物噻托溴铵和异丙托铵实施评估。在投用后6hr异丙托铵(10和30μg/ml)的效能是其投用后1.5hr的约1/3。在此时间点(6hr)所观察到的活性降低与临床上其作用持续时间相对较短一致。噻托溴铵显示较迟开始发挥效应，其在投用后6hr达到支气管保护的峰值。其在6hr和24hr的效能值之间无显著差异，并且都为其1.5hr效能的约2倍。以类似方式测定测试化合物的作用起点以及6hr和24hr的效能值。
分析4
大鼠止涎分析
如分析3中所述对大鼠(斯普拉-道来氏，雄性，250-350g)进行投药，麻醉和插入导管。在预定时间点和手术后，将动物背侧朝下放置，使其头部向下倾斜20°。将预先称重的纱布垫插入动物口腔中并投与毒蕈碱激动剂毛果芸香碱(PILO)(3mg/kg，静脉内)。通过测定投与PILO之前和之后纱布垫的重量以比重测定方式来测量投与PILO后10分钟期间所产生的唾液。止涎效应表示为相对于对照动物对唾液分泌的抑制％。
1hr、6hr和24hr ID50测定
实施大鼠止涎分析以评价全身暴露量并计算测试化合物的肺选择性指数(LSI)。在此模型中与投用后1hr、6hr和24hr对标准物噻托溴铵实施评估。已发现，在投用后6hr噻托溴铵抑制毛果芸香碱诱导唾液分泌的效能最强。此发现与在艾因托芬分析中观察到的峰值效应一致。
此模型是瑞车德(Rechter)，“通过拮抗毛果芸香碱诱导的唾液分泌来估算小鼠中的抗胆碱能药物效应(Estimation of anticholinergic drug effects in mice by antagonismagainst pilocarpine-induced salivation)”，药理学与毒理学杂志(Acta Pharmacol Toxicol)24：243-254(1996)中所述程序的修改形式。计算在各预处理时间媒剂处理动物中的平均唾液重量，并使用其来计算在对应预处理时间每种剂量对唾液分泌的抑制％。
预期在此分析中测试的本发明实例性化合物表现小于100μg/ml(在第24小时测量)的ID50值，其中预期某些化合物表现小于30μg/ml的ID50值，某些化合物表现小于20μg/ml的ID50值，并且某些表现小于15μg/ml的ID50值。
使用止涎ID50与支气管保护ED50的比来计算测试化合物的表观肺选择性指数。通常，优选化合物的表观肺选择性指数大于约5。
尽管已参考本发明的特定方面或实施例来描述本发明，但所属领域技术人员应理解，在不偏离本发明的真实精神和范围的情况下可进行各种改变或可取代等效内容。此外，根据适用专利法和条例所允许的程度，本文中所引用的所有出版物、专利和专利申请案都是全文以引用方式并入本文中，其并入程度如同各文件都单独地以引用方式并入本文中一般。

Claims (18)

1.一种联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基)哌啶-4-基酯的结晶游离碱，其特征在于在粉末x射线衍射图案中，所述峰位置实质上与图1中所示图案的峰位置一致。
2.根据权利要求1所述的结晶游离碱，其中所述粉末x射线衍射在6.6±0.1、13.1±0.1、18.6±0.1、19.7±0.1和20.2±0.1的2θ值处包含衍射峰且在选自以下的2θ值处具有另外五个或五个以上衍射峰：8.8±0.1、10.1±0.1、11.4±0.1、11.6±0.1、14.8±0.1、15.2±0.1、16.1±0.1、16.4±0.1、16.9±0.1、17.5±0.1、18.2±0.1、19.3±0.1、19.9±0.1、20.8±0.1、21.1±0.1、21.7±0.1和22.3±0.1。
3.根据权利要求2所述的结晶游离碱，其中所述粉末x射线衍射图案在选自以下的2θ值处包含衍射峰：6.6±0.1、11.4±0.1、13.1±0.1、16.1±0.1、17.5±0.1、18.2±0.1、18.6±0.1、19.3±0.1、19.7±0.1、19.9±0.1、20.2±0.1、20.8±0.1、21.1±0.1、21.7±0.1和22.3±0.1。
4.根据权利要求1所述的结晶游离碱，其特征进一步在于差示扫描量热法热分析图显示125℃的熔点。
5.根据权利要求1所述的结晶游离碱，其特征进一步在于差示扫描量热法热分析图实质上与图4中所示者一致。
6.一种联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基)哌啶-4-基酯的结晶游离碱，其特征在于在粉末x射线衍射图案中，所述峰位置实质上与图2中所示图案的峰位置一致。
7.根据权利要求6所述的结晶游离碱，其中所述粉末x射线衍射在6.6±0.1、13.1±0.1、18.6±0.1、19.7±0.1和20.2±0.1的2θ值处包含衍射峰且在选自以下的2θ值处具有另外五个或五个以上衍射峰：10.6±0.1、15.0±0.1、16.0±0.1、17.3±0.1、17.7±0.1、20.9±0.1、21.4±0.1、22.6±0.1、24.6±0.1和27.8±0.1。
8.根据权利要求7所述的结晶游离碱，其中所述粉末x射线衍射图案在选自以下的2θ值处包含衍射峰：6.6±0.1、13.1±0.1、15.0±0.1、17.3±0.1、17.7±0.1、18.6±0.1、19.7±0.1、20.2±0.1、20.9±0.1、21.4±0.1和22.6±0.1。
9.根据权利要求6所述的结晶游离碱，其特征进一步在于差示扫描量热法热分析图显示119℃的熔点。
10.根据权利要求6所述的结晶游离碱，其特征进一步在于差示扫描量热法热分析图实质上与图5中所示者一致。
11.根据权利要求1到10中任一权利要求所述的结晶游离碱，其呈微粉化形式。
12.一种医药组合物，其包含医药上可接受的载剂和根据权利要求1到11中任一权利要求所述的结晶游离碱。
13.根据权利要求12所述的组合物，其进一步包含选自以下的药剂：β2肾上腺素能受体激动剂、类固醇消炎剂、磷酸二酯酶-4抑制剂和其组合；其中所述结晶形式和所述药剂是一起或分开调配。
14.根据权利要求13所述的组合物，其包含β2肾上腺素能受体激动剂和类固醇消炎剂。
15.一种制备根据权利要求1所述的结晶游离碱的方法，其包含使联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基)哌啶-4-基酯与由乙腈组成的溶剂接触，其中所述酯的毫克数与乙腈的总毫升数的比率是100∶1，且在两个步骤中添加所述乙腈。
16.一种制备根据权利要求6所述的结晶游离碱的方法，其包含a)使联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基)哌啶-4-基酯与由乙腈组成的溶剂接触形成根据权利要求1所述的结晶游离碱的晶种，其中所述酯的毫克数与乙腈的总毫升数的比率是100∶1，且在两个步骤中添加所述乙腈；b)将根据权利要求1所述的结晶游离碱溶解于乙腈中以形成溶液；c)和向所述溶液中添加所述晶种。
17.一种纯化联苯-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨甲酰基哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲基氨基}乙基)哌啶-4-基酯的方法，其包含根据权利要求15或16所述的方法形成结晶游离碱。
18.一种根据权利要求1到11中任一权利要求所述的结晶游离碱的用途，其用于制造用于治疗慢性阻塞性肺病或哮喘或用于引起支气管扩张的药剂。
CN2010800304581A 2009-07-15 2010-07-14 联苯化合物的结晶游离碱形式 Active CN102470130B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US22580309P 2009-07-15 2009-07-15
US61/225,803 2009-07-15
PCT/US2010/041903 WO2011008809A1 (en) 2009-07-15 2010-07-14 Crystalline freebase forms of a biphenyl compound

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN102470130A CN102470130A (zh) 2012-05-23
CN102470130B true CN102470130B (zh) 2013-09-04

Family

ID=42562758

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2010800304581A Active CN102470130B (zh) 2009-07-15 2010-07-14 联苯化合物的结晶游离碱形式

Country Status (21)

Country Link
US (11) US8541451B2 (zh)
EP (2) EP2987490B1 (zh)
JP (4) JP5651174B2 (zh)
KR (1) KR101742252B1 (zh)
CN (1) CN102470130B (zh)
AU (1) AU2010273514B2 (zh)
BR (1) BR112012000890A2 (zh)
CA (2) CA2989129C (zh)
DK (1) DK2453894T3 (zh)
ES (2) ES2639642T3 (zh)
HK (2) HK1168050A1 (zh)
HR (1) HRP20151344T1 (zh)
HU (1) HUE026414T2 (zh)
IL (1) IL216995A (zh)
MX (1) MX2012000682A (zh)
PL (2) PL2987490T3 (zh)
PT (1) PT2453894E (zh)
SG (2) SG178036A1 (zh)
SI (1) SI2453894T1 (zh)
SM (1) SMT201600019B (zh)
WO (1) WO2011008809A1 (zh)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI341836B (en) 2004-03-11 2011-05-11 Theravance Inc Biphenyl compounds useful as muscarinic receptor antagonists
PL2987490T3 (pl) 2009-07-15 2017-12-29 Theravance Biopharma R&D Ip, Llc Postacie krystaliczne wolnej zasady związku bifenylowego
JP5959117B2 (ja) 2010-07-13 2016-08-02 セラヴァンス バイオファーマ アール＆ディー アイピー， エルエルシー ビフェニル−２−イルカルバミン酸を調製するためのプロセス
CN111253394A (zh) * 2013-02-21 2020-06-09 辉瑞大药厂 选择性cdk4/6抑制剂的固态形式
WO2015070366A1 (en) 2013-11-12 2015-05-21 Merck Sharp & Dohme Corp. Aryl linked imidazole and triazole derivatives and methods of use thereof for improving the pharmacokinetics of a drug
CN112694434B (zh) * 2020-12-29 2023-06-16 浙江和泽医药科技股份有限公司 一种雷芬那辛新中间体及其活性亲电砌块和雷芬那辛的新制备方法
WO2023104920A1 (en) 2021-12-09 2023-06-15 Medichem, S.A. Crystalline acetone solvate of revefenacin
CN114276290B (zh) * 2021-12-24 2024-05-28 浙江和泽医药科技股份有限公司 一种雷芬那辛无水晶型及其制备方法
CN117263849A (zh) * 2023-09-19 2023-12-22 山东京卫制药有限公司 一种雷芬那辛三水合物晶型及其制备方法
CN117263848A (zh) * 2023-09-19 2023-12-22 山东京卫制药有限公司 一种雷芬那辛的吸入喷雾剂
CN117180235A (zh) * 2023-09-19 2023-12-08 山东京卫制药有限公司 一种无定型雷芬那辛吸入制剂

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1930125A (zh) * 2004-03-11 2007-03-14 施万制药 适用作毒蕈碱性受体拮抗剂的联苯基化合物
CN101163677A (zh) * 2005-03-10 2008-04-16 施万制药 联苯化合物的晶型

Family Cites Families (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2425983C3 (de) 1973-06-12 1978-09-14 Toyama Chemical Co. Ltd., Tokio Sulfonsäuresalze von Acylcholinen, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese enthaltende pharmazeutische Zusammensetzung
BR8007911A (pt) 1979-12-06 1981-06-16 Glaxo Group Ltd Inalador aperfeicoado
DE3274065D1 (de) 1981-07-08 1986-12-11 Draco Ab Powder inhalator
BR8603576A (pt) 1985-07-30 1987-03-04 Glaxo Group Ltd Dispositivos para administrar medicamentos a pacientes
US5225183A (en) 1988-12-06 1993-07-06 Riker Laboratories, Inc. Medicinal aerosol formulations
SK280968B6 (sk) 1990-03-02 2000-10-09 Glaxo Group Limited Balenie medikamentu na použite v inhalačnom prístroji
US6006745A (en) 1990-12-21 1999-12-28 Minnesota Mining And Manufacturing Company Device for delivering an aerosol
US5874063A (en) 1991-04-11 1999-02-23 Astra Aktiebolag Pharmaceutical formulation
AU2178392A (en) 1991-06-12 1993-01-12 Minnesota Mining And Manufacturing Company Albuterol sulfate suspension aerosol formulations
US5337740A (en) 1991-08-01 1994-08-16 New England Pharmaceuticals, Inc. Inhalation devices
JP3908269B2 (ja) 1991-12-18 2007-04-25 スリーエム カンパニー 懸濁エアゾール製剤
US5239993A (en) 1992-08-26 1993-08-31 Glaxo Inc. Dosage inhalator providing optimized compound inhalation trajectory
US5415162A (en) 1994-01-18 1995-05-16 Glaxo Inc. Multi-dose dry powder inhalation device
WO1995021820A1 (fr) 1994-02-10 1995-08-17 Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. Nouveau derive du carbamate et composition correspondante
US5983956A (en) 1994-10-03 1999-11-16 Astra Aktiebolag Formulation for inhalation
US5637820A (en) * 1995-01-06 1997-06-10 Wittman; Kenneth L. Stringed instrument with on-board tuner
SE9501384D0 (sv) 1995-04-13 1995-04-13 Astra Ab Process for the preparation of respirable particles
JPH11509434A (ja) 1995-04-14 1999-08-24 グラクソ、ウェルカム、インコーポレーテッド サルメテロール用計量投与用吸入器
US6040344A (en) 1996-11-11 2000-03-21 Sepracor Inc. Formoterol process
WO1999016766A1 (fr) 1997-10-01 1999-04-08 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Derives de benzodioxole
ES2224628T3 (es) 1998-03-14 2005-03-01 Altana Pharma Ag Inhibidores de pde iii/iv a base de ftalazinonas.
BR9909736A (pt) 1998-04-18 2000-12-19 Glaxo Group Ltd Formulação farmacêutica de aerossol, processo para preparação de uma formulação farmacêutica de aerossol, partìculas de princìpios ativos farmacêuticos, e, cartucho
GB9808802D0 (en) 1998-04-24 1998-06-24 Glaxo Group Ltd Pharmaceutical formulations
SE9804000D0 (sv) 1998-11-23 1998-11-23 Astra Ab New composition of matter
US6693202B1 (en) 1999-02-16 2004-02-17 Theravance, Inc. Muscarinic receptor antagonists
ES2193069T3 (es) 1999-04-14 2003-11-01 Glaxo Group Ltd Formulacion farmaceutica en aerosol.
UA73965C2 (en) 1999-12-08 2005-10-17 Theravance Inc b2 ADRENERGIC RECEPTOR ANTAGONISTS
GB0103630D0 (en) 2001-02-14 2001-03-28 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
ES2288543T3 (es) 2001-03-08 2008-01-16 Glaxo Group Limited Agonistas de beta-adrenorreceptores.
ATE381537T1 (de) 2001-03-22 2008-01-15 Glaxo Group Ltd Formanilid-derivative als beta2-adrenorezeptor- agonisten
US20030018019A1 (en) 2001-06-23 2003-01-23 Boehringer Ingelheim Pharma Kg Pharmaceutical compositions based on anticholinergics, corticosteroids and betamimetics
EP1425001B1 (en) 2001-09-14 2008-12-17 Glaxo Group Limited Phenethanolamine derivatives for treatment of respiratory diseases
WO2003042160A1 (en) 2001-11-13 2003-05-22 Theravance, Inc. Aryl aniline beta-2 adrenergic receptor agonists
PE20050973A1 (es) 2003-10-29 2005-11-19 Theravance Inc Sales de acido naftalen-1,5-disulfonico de un compuesto de 4-amino-1-(piridilmetil)piperidina como antagonistas de receptores muscarinicos
TW200540154A (en) 2004-06-10 2005-12-16 Theravance Inc Crystalline form of a substituted pyrrolidine compound
WO2006099166A1 (en) 2005-03-10 2006-09-21 Theravance, Inc. Crystalline forms of a biphenyl compound
US7465870B1 (en) * 2008-03-11 2008-12-16 Homan Randy W Illuminated heart-shaped guitar with strobe lights and a modified bridge
PL2987490T3 (pl) 2009-07-15 2017-12-29 Theravance Biopharma R&D Ip, Llc Postacie krystaliczne wolnej zasady związku bifenylowego
JP5959117B2 (ja) 2010-07-13 2016-08-02 セラヴァンス バイオファーマ アール＆ディー アイピー， エルエルシー ビフェニル−２−イルカルバミン酸を調製するためのプロセス

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1930125A (zh) * 2004-03-11 2007-03-14 施万制药 适用作毒蕈碱性受体拮抗剂的联苯基化合物
CN101163677A (zh) * 2005-03-10 2008-04-16 施万制药 联苯化合物的晶型

Also Published As

Publication number Publication date
CN102470130A (zh) 2012-05-23
SI2453894T1 (sl) 2016-02-29
CA2765621A1 (en) 2011-01-20
PL2987490T3 (pl) 2017-12-29
US11008289B2 (en) 2021-05-18
US11649209B2 (en) 2023-05-16
US10550081B2 (en) 2020-02-04
CA2989129A1 (en) 2011-01-20
JP5651174B2 (ja) 2015-01-07
JP2017171692A (ja) 2017-09-28
MX2012000682A (es) 2012-02-28
CA2765621C (en) 2018-02-13
WO2011008809A1 (en) 2011-01-20
EP2453894B1 (en) 2015-11-04
JP6338505B2 (ja) 2018-06-06
HUE026414T2 (hu) 2016-05-30
JP2016026214A (ja) 2016-02-12
US8541451B2 (en) 2013-09-24
CA2989129C (en) 2021-03-09
ES2639642T3 (es) 2017-10-27
JP2012533550A (ja) 2012-12-27
EP2987490B1 (en) 2017-06-14
US11691948B2 (en) 2023-07-04
US20220009890A1 (en) 2022-01-13
US20110015163A1 (en) 2011-01-20
SG10201407913UA (en) 2015-01-29
US20180186740A1 (en) 2018-07-05
HK1219415A1 (zh) 2017-04-07
JP2015003929A (ja) 2015-01-08
HK1168050A1 (zh) 2012-12-21
AU2010273514A1 (en) 2012-01-19
US9415041B2 (en) 2016-08-16
AU2010273514B2 (en) 2015-01-22
US11858898B2 (en) 2024-01-02
US20220306580A1 (en) 2022-09-29
ES2557553T3 (es) 2016-01-27
BR112012000890A2 (pt) 2017-10-31
US20190248743A1 (en) 2019-08-15
US20170081283A1 (en) 2017-03-23
US9765028B2 (en) 2017-09-19
IL216995A0 (en) 2012-02-29
US20160143897A1 (en) 2016-05-26
US8921396B2 (en) 2014-12-30
US9226896B2 (en) 2016-01-05
KR101742252B1 (ko) 2017-05-31
SG178036A1 (en) 2012-03-29
EP2453894A1 (en) 2012-05-23
US20230303492A1 (en) 2023-09-28
SMT201600019B (it) 2016-02-25
US20150164796A1 (en) 2015-06-18
IL216995A (en) 2017-10-31
US10100013B2 (en) 2018-10-16
US20200308116A1 (en) 2020-10-01
EP2987490A1 (en) 2016-02-24
PT2453894E (pt) 2016-02-02
HRP20151344T1 (hr) 2016-01-01
DK2453894T3 (en) 2016-01-25
PL2453894T3 (pl) 2016-04-29
KR20130027004A (ko) 2013-03-14
US20130338191A1 (en) 2013-12-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102470130B (zh) 联苯化合物的结晶游离碱形式
CN101006077B (zh) 晶体形式的联苯化合物
CN101163677B (zh) 联苯化合物的晶型
CN101796026B (zh) 可用作毒蕈碱受体拮抗剂的含胍化合物

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
ASS Succession or assignment of patent right

Owner name: SCHWAN BIOPHARMA RESEARCH + DEVELOPMENT IP CO., LT

Free format text: FORMER OWNER: SCHWAN PHARMACY

Effective date: 20140902

C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20140902

Address after: American California

Patentee after: THERAVANCE BIOPHARMA R.D IP, LLC

Address before: American California

Patentee before: Shiwan Pharmaceuticals Inc.