SU697054A3 - Способ получени -гомостероидов или их 1,2-дегидропроизводных - Google Patents

Description

4435, Соt&etotrichum, например С. о pisi АТСС 12520, Peeeicu&aria,например Р, fiEamentosa IFO 6675, Streptomyces , например S. fradiae ATCC 10745, Cunning hame6 a, например, Cun. bainieri ATCC 9244 f Gun. verticeEEata ATCC 8983, Cun, eRegans ATCC 9245 и Cun. echinuEata ATCC 8984, Pycnosporium, например Русп. sp. ATC 12231. Пример 1, 500 мл стерильног питательного раствора, солержаадего 5,0% сахарного крахмала, 0,5% Corn steep Slguon, 0,2% нитрата нат ри  NaNO-j, 0,1% дигидрофосфата кали  KHjPO, 0,05% хлорида кали  KCg, 0,05% сульфата магни  MgSO, 0, сульфата железа РеЗО,засевают двухнедельной культурой, выросшей на скошенном агаре, и п ть дней встр хг вают при Полученной ггодгото В1 тельной культурой засевают подготовительный ферментер с 15 л стерильной среды, содержащей 5,0% сахарного крахмала, О ,.25% Corn steep liquor, 0,1% НаНОз, 0,5% КН.2РО4 и выдерживают 72 ч при перемешивани:и ( 220 об/мин) и аэрации {15 л/мин), при 29°С. 900 мл полученной подготовительной культуры перевод т в 20-л главный ферментер, содержащий 14,1 л той же среды что и подготовительный ферментер, выдерживают в течение суток при перемешивании и аэрации при 29с, смешивают с профильтрованным в стерильных услови х раствором 3 г 17с -окси-21-ацетокси-D-roMO-4-прегнен-З ,20-диона в 150 диметилформамида и ферментируют 40 ч. Затем полученную смесь фильтруют и мицелий экстрагируют метилиз бутилкетоном. Экстракты объедин ют и концентрируют в вакууме, остаток хроматографируют на силикагеле, пол ченный сырец перекристаллизовывают из смеси ацетон-гексан и получают 1 Ifr I 17 jiC -диокси 21-ацетокси--0-гомо -4-прегнен-3,20-дион а Пример 2. Питательную сред состо щую из 0,15% Corn steep liguo 0,5% пептона и 0,5% глюкозы в дистиллированной воде (рН 7f3), затрав ливают Arbhrobacter simpfiex ATCC 69 выдерживают сутки при 28-°С, прибавл ют раствор 25 мг D-гомогидрокорти зона в 1МЛ 80%-ного водного этанола , инкубируют 48-72 ч, отдел ют мицелий от субстрата, промывают водой и промывные воды и субстрат экстрагируют метиленхлоридом. Переработка экстрактов дает В-гомо-11р, ., 21-триоксипрегна-1, 4--диен-3, 20 -дион(D-гомопреднизолон). Аналогичным образом можно получа lip, llaoC, 21-.триокси-0-гомопрегиа-1 ,4-дивн-3,20-дион (D-гомопреднизолон ) , т.пл. 250С (разл.) бс/.-фтор-О-гомогидрокортизон, т.пл. 233-235°С бо(,-фтор-П-гомопреднизолон, т.пл. 261-2б4°С боС-хлор-11,17а, 2 1-триокси-В-гомопрегн-4-ен-З , 11 i, , триокси-6о(.-метил-0-гомо прегн 4-ен-3,20-дион Пример 3. Микроорганизм С, Eunata NRRL 2380 выращивают и пересевают , как в примере 1, 900 мл предварительной культуры перевод т в 50 л испытательного ферментера, содержащего 30 л стерильной среды из 1% Corn steep Biguor, 1% соевой и 0,005% соевого масла. После выращивани  предварительной культуры в течение 12 ч при 29с, аэрации (30 л/мин) и перемешивании (220 об/мин) смешивс1Ют ее с профильтрованным в стерильных услови х раствором б г бot-фтop-D-гoмo Reich- stein-S-ацетата в 200 мл метилцеллозольва и ферментируют дальше в тех же услови х. Через 68 ч ферментацию прекращают (контактное врем  52 ч). Культуральную жидкость фильтруют и фильтрат и отфильтрованный мицелий экстрагируют метилизобутилкетоном . Экстракты очищают и концентрируют в вакууме. Остаток хроматографируют на силикагеле. Головной погон после элюировани  содержит непревращенный и омыленный исходный материал. Из средней фракции получают бс1-фтрР.-11Э, 1 Is-d., 21-триокси-0 гомо-4 прегна-3 ,20-дион, который перекристаллизовывают из уксусного эфира. Выход 1,85 г. Т.пл. 235-236с, 237 -14300. В аналогичных услови х при использовании С. Eunata NRRL 2178, Cun. bainieri ATCC 9244 или Cun. e Eegans ATCC 9245 вместо С. Eunata NRRL 2380 выдел ют только И|3-оксисоединени . Пример 4. В услови х примера 1 Р. fiKartientosa f. sp. sasakii ATCC 13289 выращивают и пересевают. 900 мл предварительной культуры перевод т в стекл нный ферментер, содержащий 14 л стерильной среды из 6% жидкого сахарного крахмала (3% глюкозы), 1% Corn stsep Eiguor, 0,2% NaNOj, 0,1% KH2PO4,- 0,2% KgHPO , 0,05% MgS04,0,002% FeS04 и 0,05% KCE.После вьгращивани  предварительной культуры в течение 12 ч при 29°С, аэрации (30 л/мин) и перемешивании (220 об/мин) смешивают ее с профильтрованным в С1ерильных услови х раствором 3 г бс(.-метил-17ао(, 21 диокси-П-гомо-4-прегна-3,2О-дион-21-а15етата в 100 мл диметилформаМИДа и ферментируют дальше в таких же услови х.

Через 17 ч ферментации (контактное врем  52 ч) культуральную жидкость фильтруют. Мицелий и культураную жидкость экстрагируют метилизобутилкетоном . Экстракты объедин ют и концентрируют в вакууме. Остаток промывают гексаном и хроматографируют на силикагеле. При градиентном про влении смесью метиленхлорид-аце тон (lil) из исходной фракции получают 870 мг омыленного сырь .

После перекристаллизации из смеси этиловый эфир - уксусный эмир средние фракции составл ют 133 мг 6о(.метил-1 ip, 17ар, 21-триокси-В-гомо-4-прегна-З ,20-диона, Т.пл. 218219с . 242 15100.

После перекристаллизации из смеси гексан-изопропиловый эфир след ,1цие фракции составл ют 660 мг бс(,-метил-11 р, llaf, 21-триокси-П-гомо-4-прегна-З ,20-диона. Т.пл. 184- 18б°С. 242 15000. Вместо Р. fiEamentosc f. sp. sasakii ATCC 13289 можно использовать штамм P. fxiEa- mentosa IFO 6675,

Claims (1)

1. Физер Л,, Физер М. Стероиды. М., Мир, 1964, с. 683.