RU2343901C2

RU2343901C2 - Активированный вспененный материал (варианты)

Info

Publication number: RU2343901C2
Application number: RU2006140873/15A
Authority: RU
Inventors: Томидзо ЯМАМОТО (JP); Томидзо ЯМАМОТО
Original assignee: Томидзо ЯМАМОТО; СИМА Хироки
Priority date: 2005-04-29
Filing date: 2005-05-16
Publication date: 2009-01-20
Also published as: UA84762C2; KR20070088257A; CN1953758A; AU2005330574B2; CA2567807C; WO2006117881A1; NZ548087A; JP5977009B2; JP2012021018A; RU2006140873A; BRPI0510510B8; US20070254034A1; TW200643072A; EP1902718A1; CN100589795C; JP5932194B2; EP1902718A4; AU2005330574A1; KR100871643B1; AU2005330574B8

Abstract

Настоящее изобретение относится к медицине, конкретно к активированному материалу, изготовленному из натурального или синтетического каучука или синтетического полимера, характеризующегося тем, что он содержит соединение циркония и/или соединение германия и имеет структуру с закрытыми порами, причем материал используют так, чтобы он непосредственно или опосредованно контактировал с телом человека при введении фармацевтического агента. Активированный вспененный материал может непосредственно или опосредованно контактировать с телом человека, чтобы помогать кровообращению и способствовать улучшению физического состояния и лечению заболеваний. Кроме того, вспененный материал не проявляет побочных эффектов. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 2 табл., 10 ил.

Description

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к активированному вспененному материалу, изготовленному из натурального или синтетического каучука или синтетического полимера, и к активированному вспененному материалу, способному облегчать кровообращение и способствовать улучшению физического состояния и лечению заболеваний, таких как рак.

Уровень техники

Рак простаты представляет собой типичный рак у мужчин, развивающийся в старости, уровень заболеваемости которым в Японии вырос вследствие старения населения и введения западных норм (вестернизации) образа жизни. Кроме того, тенденция к росту подтвердилась на основании современного анализа крови с использованием опухолевых маркеров (простата-специфический антиген: PSA) и более общего медицинского исследования. Если посмотреть на стандартизованный по возрасту рост заболеваемости (на 100000 человек) раком простаты в Японии, то в 1956 г. он составлял только 3,5 случаев, но в 1990 г. - 8,5, и по приблизительной статистической оценке достигнет 20,3 в 2015 г.

В Северной Америке рост заболеваемости раком простаты поразительно высок и составляет 92,4 в 1990 г., у третьего поколения японцев, живущих в Соединенных Штатах Америки, имеется рост заболеваемости раком простаты, близкий к данному показателю у представителей белой расы в Северной Америке. Из данного факта также следует, что вестернизация образа жизни, включая пищу с избыточным количеством жира, связана с ростом рака простаты в Японии. Так, предсказывают, что 80000-100000 человек в 2015 г. будут нуждаться в лечении рака простаты.

Статистические данные NCl (Национального института рака) за 1998-2002 гг. показывают, что в Соединенных Штатах Америки стандартизованный по возрасту рост заболеваемости (на 100000 человек) различными формами рака всех органов составляет 469,7. Среди данных форм рака рак простаты имеет показатель роста 76,0, занимая первое место, за ним следует рак молочной железы (73,3), рак легких и бронхов (61,0), рак толстой кишки (38,3) и лимфома (21,8), которая занимает 5-е место или выше. Рак простаты характеризуется тем, что его рост индуцирует андроген, тогда как удаление андрогена подавляет рост. В связи с этим с целью подавления роста рака простаты часто проводят удаление яичка посредством хирургического вмешательства или применения антиандрогенной терапии, при которой функцию яичка подавляют с помощью фармацевтического агента. Однако антиандрогенная терапия будет приводить в результате к рецидивам рака простаты через некоторое время, хотя она подавляет его клиническое развитие в течение определенного периода времени (как правило, в течение 1-3 лет). Гормонотерапия в результате дает частоту выживания в течение десяти лет 10% или меньше, когда имеются метастазы в отдаленные органы (часто в кость).

Для локализованного рака простаты радикальная полная простатэктомия (включающая удаление регионарного лимфатического узла тазовой области) в буквальном смысле обеспечивает радикальное лечение. Кроме хирургического лечения имеется широкий выбор вариантов от гормонотерапии до радиотерапии, включая облучение тяжелыми частицами и непосредственную имплантацию в простату игольчатого радиоактивного материала, и до химиотерапии с использованием противораковых агентов, в зависимости от степеней злокачественности и развития рака простаты и наличия его метастазов.

Любой из способов терапии, тем не менее, дает осложнения и вредные эффекты, при этом отсутствуют (даже немногочисленные) случаи, в которых удается избежать их рецидивов. Таким образом, имеется необходимость в разработке эффективной терапии без вредного воздействия. Кроме того, существует огромная потребность в профилактическом средстве для лечения рака простаты; недавно в Соединенных Штатах Америки были представлены данные о том, что прием витамина Е эффективен в отношении ингибирования возникновения рака простаты в широкомасштабных клинических испытаниях. В самом деле, гистологическое исследование простаты при вскрытии больных, которые умерли от других причин, часто приводит к обнаружению рака простаты, который называют латентным раком. Латентный рак широко распространен и обнаруживается у приблизительно 30% в возрастной группе свыше 50 лет, хотя показатели различны в разных отчетах, которые учитывают формы рака, гистологически демонстрирующие инвазию. Отмечено, что в возрастной группе свыше 80 лет у 60-70 процентов имеется рак простаты. Существует насущная потребность в разработке способа предупреждения перехода латентного рака в клинический рак.

Раскрытие изобретения

В свете вышеописанных проблем целью настоящего изобретения является получение активированного вспененного материала, не обладающего вредным эффектом и способного помогать кровообращению и способствовать улучшению физического состояния и лечению заболеваний, таких как рак.

Настоящее изобретение является результатом серьезных исследований, направленных на решение вышеописанных проблем. В частности, изобретение относится к активированному вспененному материалу, изготовленному из натурального или синтетического каучука или синтетического полимера, характеризующейся тем, что вспененный материал содержит соединение циркония и/или соединение германия и имеет структуру с закрытыми порами, причем материал используют так, чтобы он непосредственно или опосредованно контактировал с телом человека во время введения фармацевтического агента.

Активированный вспененный материал, соответствующий изобретению, используют посредством его непосредственного или опосредованного контакта с телом человека, который более эффективен при дополнительном обеспечении трения между вспененным материалом и телом. Активированный вспененный материал может помогать кровообращению и способствовать улучшению физического состояния и лечению заболеваний, но механизм этого пока не выяснен.

Соединение циркония и соединение германия собирают инфракрасные лучи, например от солнца, в активированный вспененный материал. Затем инфракрасные лучи сталкиваются со стенками множества пор внутри активированного вспененного материала с повторяющимся диффузным отражением и агрегацией, и таким образом излучаются из вспененного материала, причем инфракрасные лучи имеют длины волн 4-25 микрон, которые оказывают благоприятное воздействие на организм человека. Предполагают, что данные инфракрасные лучи резонируют с длинами волн организма человека, активируя молекулу воды и молекулы белков в организме для стимуляции естественных целительных сил, которым изначально обладает человек, посредством эффекта стимулирования обмена веществ. К тому же это, как полагают, способствует излечению заболеваний, таких как рак, гипертензия, диабет, сердечное заболевание, тугоподвижность плечевого сустава, боль в нижней части спины и аллергическое заболевание, а также улучшению физического состояния, например, предупреждению старения или восстановлению волос. Кроме того, активированный вспененный материал можно использовать неоднократно.

Активированный вспененный материал, соответствующий изобретению, можно использовать при введении фармацевтического агента путем его непосредственного или опосредованного контактирования с телом человека с целью повышения эффекта фармацевтического агента. Кроме того, даже для фармацевтического агента, который оказывал бы вредное воздействие в большой дозе, вредный эффект может быть понижен при комбинировании его с указанным применением активированного вспененного материала, поскольку его доза может быть уменьшена.

Неограничивающие примеры фармацевтического агента включают инъекционный агент, агент для наружного нанесения на кожу, агент для слизисто-кожного применения, назальный агент и пероральный агент. Их более конкретные примеры включают, но без ограничения перечисленным, противораковый агент и антибиотик. Фармацевтический агент предпочтительно представляет собой выделенную у человека субстанцию. Термин "выделенное у человека" вещество относится к веществу, которое изначально содержится в организме человека, то есть эндогенному веществу. В этом плане выделенное из организма человека вещество может быть экстрагировано из тела человека или синтезировано искусственным путем.

Среди выделенных у человека (эндогенных) субстанций предпочтительно используют вещество, имеющее минимальный возможный вредный эффект, поскольку она не проявляет неблагоприятных эффектов при использовании в нормальной дозе. Примеры субстанций включают бутират натрия (далее обозначен SB) и натрий-масляный сложный эфир, которые присутствуют в кишке человека. Данные субстанции являются ингибиторами гистондезацетилазы (сокращенно HDACI или Hdi, далее - HDACI), дезактивирующей хроматин, и активируют хроматин для получения экспрессии гена-супрессора опухоли, который обеспечивает остановку клеточного цикла (цикла деления, жизненного цикла клетки от завершения деления клетки до следующего деления клетки) раковой клетки, т.е. действуют как противоопухолевые агенты. SB и производное натрий-масляного сложного эфира, которые были синтезированы, также используют, если они менее токсичны. Комбинация образца любой из данных субстанций и применения активированного вспененного материала может подавлять функцию онкогена и повышать их эффект супрессии рака.

Кроме того, эндогенные вещества из организма человека могут представлять собой различные ядерные факторы транскрипции (активатор и супрессор ДНК) и вещества, ремоделирующее хроматин, которое действует совместно с HDACI. Таким образом, они могут быть любой субстанцией, действующей на промоторный участок ДНК гена-супрессора опухоли так, чтобы активировать ген-супрессор. Данные вещества также можно комбинировать с применением активированного вспененного материала с целью супрессии функции онкогена для повышения его эффектов подавления рака.

Поры, находящиеся во вспененном материале, предпочтительно сформированы в количестве 20-30 пор/мм². Соответственно, возможно содержание множества закрытых пор с высокой густотой для генерации инфракрасных лучей, оказывающих благоприятное воздействие на организм человека.

Активированный вспененный материал может иметь форму маленького переносного треугольного предмета, форму покрывала, такого как коврик для подстилки, или коврик для покрывания, либо такого, как часть или весь, например, предмет одежды, но может также быть выполнен в любой другой форме, обеспечивающей возможность непосредственного или опосредованного контактирования вспененного материала с телом человека. Если требуется вызвать такой эффект, как лечение заболеваний, локально сконцентрированных на участке тела человека, активированная пена может быть выполнена в форме листа, имеющего толщину от приблизительно 8 мм до 5 см. Формирование пены в виде листа, имеющего толщину от приблизительно 0,3 до 5 мм, также облегчает изготовление из нее одежды.

Каучуковый компонент может представлять собой натуральный каучук или синтетический каучук. Неограничивающие примеры синтетического каучука включают каучуковые полимеры, такие как хлоропреновый каучук (CR), бутадиен-стирольный каучук (ЗРВ), бутадиен-акрилонитрильный каучук(МВВ), акрилонитрильный каучук (NRP), бутадиеновый каучук (BR) и изопреновый каучук (IR) или смесь нескольких их видов.

Неограничивающие примеры синтетического полимерного компонента включают винилхлоридный полимер (PVC), полипропилен (РР) и полиэтилен (РЕ).

В качестве пенообразующего вещества можно использовать хорошо известное пенообразующее вещество, но предпочтительно Celogen OTI (фирмы Uniroyal, США) или Unicell (фирмы Dongjn, Южная Корея).

Активированный вспененный материал может содержать соединение циркония и/или соединение германия. Для лечения рака предпочтительно, когда содержатся и соединение циркония, и соединение германия, поскольку это усиливает эффект, способствующий излечению рака.

В качестве соединения циркония предпочтительно использование комплексного соединение циркония. Примеры комплексного соединения циркония включают комплекс циркония и фтора или ему подобный; их конкретные примеры включают, но без ограничения перечисленным, гексафторцирконат калия (K₂ZrF₆) и октафторцирконат калия (K₂ZrF₈). Содержание соединения циркония составляет предпочтительно 10-80 частей по массе на 100 частей по массе каучукового компонента. Если содержание соединения меньше указанного нижнего предела, демонстрируемый эффект является очень слабым, а если превышение верхнего предела нежелательно с экономической точки зрения, поскольку далее уже отсутствует значимая разница в производимом эффекте.

В качестве соединения германия предпочтительно использование минерала германия или комплексного соединения германия. Неограничивающие примеры минерала германия включают аргиродит (Ag₈GeS₉) и реньерит ((Cu,Zn)₁₁Fe₄(Ge,As)₂S₁₆). Неограничивающие примеры комплексного соединения германия включают комплекс германия и дикарбоновой кислоты или амина. Содержание соединения германия составляет предпочтительно 5-10 частей по массе на 100 частей по массе каучукового компонента. Если содержание соединения меньше указанного нижнего предела, демонстрируемый эффект является очень слабым, а если превышение верхнего предела, то это нежелательно с экономической точки зрения, поскольку далее уже отсутствует значимая разница в производимом эффекте.

В дополнение к вышеописанным компонентам предпочтительно, когда активированный вспененный материал содержит углерод. Содержание углерода повышает силу действия активированного вспененного материала и дает возможность собрать больше инфракрасных лучей, например от солнца. Неограничивающие примеры углерода включают сажу, которую используют в гранулированной форме.

Преимущества изобретения

В соответствии с изобретением, совместно с введением фармацевтического агента можно использовать активированный вспененный материал посредством его непосредственного или опосредованного контактирования с телом человека с целью повышения эффективности фармацевтического агента. Кроме того, даже для фармацевтического агента, который оказывал бы вредное воздействие в большой дозе, данный вредный эффект может быть понижен дополнительным использованием активированного вспененного материала, поскольку его доза может быть уменьшена.

Краткое описание чертежей

На фиг.1 представлен вид продольного сечения активированного вспененного материала согласно вариантам осуществления настоящего изобретения.

На фиг.2 представлен график, показывающий изменение кровотока (мл/мин/100 г).

На фиг.3 представлен график, показывающий изменение объема крови.

На фиг.4 представлен график, показывающий изменение вязкости крови.

На фиг.5 представлен график, показывающий изменение контактного давления поверхности тела (гПа).

На фиг.6 представлена пара электронных микрофотографий клеток: (а) экспериментальная группа, (b) контрольная группа.

На фиг.7 представлен результат анализа с использованием микрочипов кДНК в живых клетках Du145 (клетка рака простаты человека).

На фиг.8 представлены таблицы с графиками, показывающие изменения во времени числа живых клеток Du145 (клеток рака простаты человека); (+) показывает экспериментальную группу с использованием активированного вспененного материала, соответствующего изобретению, и (-) - контрольную группу.

На фиг.9 представлены таблицы с графиками, показывающие изменения во времени числа живых клеток LNCap (клеток рака простаты человека); (+) показывает экспериментальную группу с использованием активированного вспененного материала, соответствующего изобретению, и (-) - контрольную группу.

На фиг.10 представлены таблицы с графиками, показывающие изменения во времени числа живых клеток РС3 (клеток рака простаты человека); (+) показывает экспериментальную группу, использующую активированный вспененный материал, соответствующий изобретению, и (-) - контрольную группу.

Условные обозначения:

1 - вспененный лист

2 - покрывающий лист

Осуществление изобретения

Варианты осуществления изобретения будут описаны ниже на основе чертежей. На фиг.1 представлен вид продольного сечения активированного вспененного материала, предложенного в варианте осуществления настоящего изобретения. Как показано на фиг.1, активированный вспененный материал, предложенный в варианте осуществления настоящего изобретения, представляет собой слоистый материал, состоящий из каучукового покрывающего листа 2, ламинированного на лист вспененного каучука 1 с обеих сторон. Хотя вариант осуществления относится к каучуковому листу 1, с обеих сторон которого расположен покрывающий лист 2, но каучуковый лист 1 может быть покрыт листом 2 только с одной из сторон или представлять собой только вспененный лист 1, не ламинированный покрывающим листом 2.

Вспененный лист 1 представляет собой вспененный материал, который в основном состоит из каучука или синтетического полимера, содержит соединение циркония и/или соединение германия и углерод, и имеет структуру закрытых пор. Закрытая пора формируется при вспенивании с помощью пенообразующего вещества. Поперечный срез вспененного листа 1 показывает большое количество образовавшихся мелких пор. Толщина вспененного листа 1 составляет приблизительно 1 см, но ограничение этим не предусматривается. Покрывающие листы 2 зафиксированы приклеиванием обеих сторон вспененного листа 1, но фиксацию можно осуществить другим пригодным способом. Кроме того, материал покрывающего листа 2 представляет собой каучуковую пластину, в основном состоящую из хлоропренового каучука (CR), который не является пористым, но может принимать форму, содержащую поры. К тому же материал покрывающего листа 2 не ограничен хлоропреновым каучуком и может быть другим синтетическим каучуком или синтетическим полимером, таким как хлорсульфнированный полиэтилен.

Пример

Отдельные аспекты изобретения детально описывают ниже, основываясь на Примере. Однако не предусматривается, чтобы данное изобретение было ограничено нижеприведенным Примером, и считают очевидным, что Пример допускает различные модификации и варианты, также входящие в объем изобретения.

Сначала изготавливают вспененный лист 1. В качестве основы используют каучук или синтетический полимер, а смешивание осуществляют в соответствии с составом, приведенным в табл.1, с последующим перемешиванием с помощью барабана. Способ смешивания материалов не ограничен каким-либо образом, и можно использовать любой приемлемый способ смешивания, который применяют для каучука и синтетического полимерного соединения. Затем полученный в результате перемешанный материал формуют в экструдере с получением листа. Полученный лист вулканизируют и расширяют с помощью нагретого воздуха (процесс вулканизации). Процесс вулканизации осуществляют в две стадии, первичную и вторичную. Двухстадийная вулканизация приводит к однородному формированию пор по всему вспененному листу. Вышеописанный процесс приводит в результате к получению вспененного листа 1.

Затем с обеих сторон вспененного листа 1 приклеивают покрывающий лист 2, используя клей на основе каучука или синтетического полимера. Затем к стороне, представляющей переднюю сторону пластины, подводят высокое напряжение. Подводку напряжения проводят в условиях тока 10000-800000 А, напряжения 200-3300 В и продолжительности 0,1-0,3 с. В данном случае более сильный ток является более предпочтительным. Активированная пена генерирует электромагнитные волны, такие как инфракрасные лучи. Считают, что высокое напряжение подают к одной стороне активированного вспененного материала для того, чтобы направить электромагнитную волну так, чтобы показать направление к стороне поверхности, к которой приложено напряжение, хотя механизм этого неясен. Соответственно, контакт поверхности с телом человека дает возможность сфокусированного излучения электромагнитных волн в области контакта, усиливая таким образом эффект излечения заболевания или подобный ему. Вышеописанный способ дает возможность завершить получение активированного вспененного материала.

Таблица 1
		Пример 1	Пример 2	Пример 3	Пример 4	Пример 5	Пример 6
Натуральный каучук		100
Хлоропреновый каучук			100			100
Хлорсульфонированный полиэтилен				100
PVC (винилхлоридный полимер)					100
NRP (акрилонитрильный каучук)							100
Жидкий нитрильный каучук							6
Комплексное соединение циркония		10	20	7	80		30
Циркон			2	20		30
Комплексное соединение германия			10	10
Стабилизатор					3
Оксид цинка		5	5	5		5	5
Оксид марганца		3	3	3		3
Celogen OTI		10	10	10	10	10
Стеариновая кислота							3
DOP (пластификатор)					25		30
Сажа		25	20	20		20
Технологическое масло		30	30	5		30
Сера		3					3
Ускоритель вулканизации DM		2					3
Оксид кремния		12			12		20
Условия вулканизации
Первичные	130°С × 10 мин		132°С × 10 мин	120°С × 10 мин	160°С × 10 мин	100°С × 10 мин	130°С × 10 мин
Вторичные	160°С × 10 мин		160°С × 10 мин	150°С × 10 мин	100°С × 10 мин	160°С × 10 мин	160°С × 10 мин
Примерная удельная масса	0,16		0,21	0,35	0,24	0,22	0,2
Твердость (единица: частей в пересчете на массу)	7		8	10	10	9	9

В вышеприведенном Примере Celogen OTI представляет собой п,п'-оксибис(бензолсульфонил)гидразин (фирма Uniroyal, США), который является пенообразующим агентом. "Циркон", как правило, означает цирконий, присутствующий в форме силиката (ZrSiO₄). Термин "Ускоритель вулканизации DM" относится к дибензотиазолдисульфиту. Твердость определяют, используя измеритель твердости каучука (типа С).

Тест 1

Затем активированный вспененный материал используют для проведения теста с целью определения его воздействия на контактное давление поверхности тела и кровоток у человека. Сначала описывают способ измерения контактного давления поверхности тела и кровотока.

Субъект тестирования

В качестве субъекта используют одну женщину в возрасте между пятьюдесятью и шестьюдесятью годами.

Методика тестирования

Тест проводят с использованием инструмента для измерения кровотока и контактного давления поверхности тела (AMI3037-2 фирмы AMI Technology). Датчик контактного давления поверхности тела/кровотока присоединяют к верхней части бедра для измерения в условиях комнатной температуры 23°С и влажности 55% RH (относительная влажность) при следующих двух условиях. В условии 1 активированный вспененный материал помещают на стул, на котором затем сидит субъект в состоянии покоя в течение 30 минут с последующим измерением кровотока, объема крови, вязкости крови и контактного давления поверхности тела в течение 10 минут. В контрольном условии 2 субъект сидит в течение 30 минут на стуле, на котором отсутствует активированный вспененный материал, с последующим измерением кровотока и т.п. в течение 10 минут. Результаты представлены в табл.2 и на фиг.2-5. В табл.2 показаны средние величины измерений кровотока и т.п. в течение 10 минут. На фиг.2-5 представлены изменения со временем кровотока и т.п. в течение 10 минут. В данном случае термин "кровоток" относится к потоку крови/100 г ткани тела человека/минуту, и его определяют по количеству света, отражаемого красными клетками в капиллярах. Термин "объем крови" относится к объему крови на площадь поперечного среза 100 г ткани тела человека, и произведение объема крови и вязкости крови становится почти равным кровотоку.

Результаты теста

Таблица 2
	Кровоток (мл/мин 100 г)	Объем крови	Вязкость крови	Контактное давление поверхности тела (гПа)
Условие 1	1,882	172,12	0,406	40,47
Условие 2	1,232	150,53	0,272	42,74

Как показано в табл.2 и на фиг.2-5 выше, применение активированного вспененного материала улучшает циркуляцию крови и снижает контактное давление поверхности тела.

Тест 2

Субъект тестирования

Используют культуры клеточных линий рака простаты, выделенных у человека, Du145, PC3 и LNCap. LNCap представляют собой клетку гормонозависимого рака простаты, а Du145 и PC3 являются клетками гормононезависимого рака простаты.

Методика тестирования

На чашки для культивирования диаметром 10 см, в каждую из которых вносят 15 мл среды, высевают 10⁵ клеток на чашку, все из которых являются клетками рака простаты (Du145, LNCap и PC3), для культивирования в при 37°С и 5% CO₂ в течение 7-10 суток (предпочтительный период времени), а затем начинают проведение теста. В данном случае клетки рака простаты одного вида следует высевать на одну чашку для культивирования. Кроме того, активированный вспененный материал не используют во время подготовительного периода.

После начала теста культивирование в экспериментальной группе осуществляют, помещая каждую чашку для культивирования в положение, при котором она с верхней и нижней сторон соприкасается с активированным вспененным материалом. В контрольной группе культивирование осуществляют в отсутствие активированного вспененного материала. Среду для культивирования заменяют в среднем каждые трое суток, и клетки каждого вида субкультивируют на новой чашке до того, как клетки становятся конфлюэнтными. Данные по субкультурам различны для вышеуказанных видов клеток, но одинаковы между контрольными и экспериментальными группами каждого вида.

День, непосредственно предшествующий началу теста, обозначают как день 0, и собирают клетки на 1, 2 и 3 неделе после начала теста. Клетки на 3 неделе культивирования фиксируют и затем проводят электронно-микроскопическое исследование (а).

Кроме того, на 3 неделе культивирования из клеток экстрагируют мРНК (информационную рибонуклеиновую кислоту). Экстрагированную мРНК гибридизуют с микрочипом человеческой кДНК 1,2К (Clontech) с последующим анализом результатов с использованием программы GeneSpider (программы для поиска генов: Silicon Genetics, Redwood, CA, США). Экспрессию гена, ответственного за апоптоз, определяют с помощью кластерного анализа ANOVA (b).

Результаты теста

В экспериментальной группе отмечено, что пролиферация каждого вида клеток рака простаты имеет следующие характеристики.

(а) На 3 неделе с помощью электронной микроскопии наблюдают морфологические различия внешнего вида клеток в экспериментальной и контрольной группах. В частности, каждая раковая клетка, имеющая контакт с активированной пеной в течение 3 недель, имеет больше цитоплазматических вакуолей, меньше видимых внутренних структур митохондрий и менее четкую ядерную оболочку (см. фиг.6(а)) по сравнению в контрольной группой (см. фиг.6(b)). Таким образом показано, что апоптоз происходит в тех клетках, в которых используют активированный вспененный материал.

Термин "апоптоз" относится к генетически запрограммированной гибели клеток, т.е. суициду клеток. Термин "раковая клетка" означает клетку, которая продолжает пролиферацию, поскольку нарушена система апоптоза.

(b) Результаты для DU145 представлены на фиг.7 в качестве репрезентативного примера результатов микроанализа кДНК на 3 неделе. Черный цвет показывает повышенную экспрессию мРНК относительно контрольной группы, т.е. на активацию гена; решетчатая штриховка показывает пониженную экспрессию мРНК относительно контрольной группы, т.е. на пониженную функцию гена, и серый цвет показывает неизмененную экспрессию мРНК относительно контрольной группы.

Для DU145 в экспериментальной группе показана повышающая регуляция в FasL (в 2,3 раза), Fas (в 1,4 раза), TRADD (в 1,4 раза), CASP1, 4 и 10 (в 1,7, 1,2 и 1,7 раза) и DFF40 (в 1,7 раза) по сравнению с контрольной группой. Для РСЗ в экспериментальной группе показана повышающая регуляция в CD40 (в 1,4 раза) и TNF (в 1,4 раза) по сравнению с контрольной группой. Для LNCap в экспериментальной группе показана повышающая регуляция в Fas (в 1,6 раза), CASP8 (в 1,3 раза) и CASP3 (в 1,3 раза) по сравнению с контрольной группой. FasL, Fas, TRADD, CASP1, 4 и 10, DFF40, CD40 и TNF образуют группу генов, которые запускают цикл апоптоза. Данные результаты показывают, что использование активированной пены способствует развитию апоптоза в экспериментальной группе по сравнению с этим процессом в контрольной группе.

Вывод

На основании результатов вышеописанного теста можно сказать следующее. Активированная пена запускает цикл апоптоза и способствует эффекту ослабления функции раковых клеток.

Тест 3

Активированный вспененный материал и SB в качестве HDACI используют в отношении раковых клеток человека для проведения теста на супрессию пролиферации раковых клеток. Данный тест используют, чтобы специально показать новый в своей основе способ лечения или предупреждения рака простаты и сделать предположение о том, что он может быть в принципе эффективным в отношении рака простаты. Теперь HDACI описывают в деталях. Ацетилирование лизина в гистоне посредством HAT (гистонацетилтрансферазы) активирует ядерный хроматин. Активация хроматина приводит к связыванию ядерного фактора транскрипции совместно с активатором с промоторным участком ДНК, приводя к экспрессии структурного гена. Кроме того, HDAC (гистондезацетилаза) вызывает дезацетилирование лизина для новой инактивации хроматина.

HDACI в виде SB, предупреждает дезацетилирование HDAC, чтобы элиминировать инактивацию хроматина. Таким образом, HDACI активирует ген-супрессор опухоли и подобные ему, функции которых снижаются в плане активности подавления пролиферации раковых клеток.

Субъекты тестирования

Методика тестирования

Каждый вид клеток рака простаты (Du145, LNCap или PC3) культивируют в концентрации 10³ клеток/100 мкл в 96-луночном планшете. В экспериментальной группе в планшет добавляют 6 мкл 0, 1, 2 или 3 мМ SB и планшет помещают так, что он с верхней и нижней сторон соприкасается с активированной пеной. SB-содержащую среду для культивирования заменяют в среднем каждые двое суток. В контрольной группе культуру ведут без использования активированной пены, при этом добавляют 6 мкл 0, 1, 2 или 3 мМ SB. 0 мМ SB состоит из такого же количества (6 мкл) PBS (забуференного фосфатом солевого раствора). Вышеописанный тест проводят в четырех повторениях для каждой концентрации.

На 2, 5 и 8 день культивирования определяют оптическую плотность (O.D.) живых клеток при длине волны 450 нм, используя Набор для пролиферации клеток (Cell Proliferation Kit) II (ХТТ фирмы Roche, Manheim, Germany) (из которой вычитают чистое значение (650)).

В Наборе для пролиферации клеток II (ХТТ) ХТТ является субстратом для дегидрогеназы и под действием дегидрогеназы восстанавливается до формазана, давая возможность определить формазановый краситель, генерируемый стандартной смесью ХТТ и активностью митохондриальной дегидрогеназы, что используют для количественной оценки уровня выживаемости клеток. Таким образом количество формазана соответствует числу живых клеток.

Результаты теста

Активированный вспененный материал в существенной мере подавляет пролиферацию каждого вида клеток рака простаты человека независимо от наличия у них гормонозависимости в присутствии даже низкой концентрации (1 мМ) SB по сравнению с присутствием высокой концентрации (3 мМ) SB в отсутствие активированной пены (см. фиг.8-10). Таким образом активированная пена при действии в сочетании с SB очевидным образом подавляет пролиферацию клеток рака простаты человека.

Выводы

На основании результатов вышеописанного теста можно сказать следующее. Как показано на фиг.8-10, активированный вспененный материал может быть использован одновременно с HDACI, чтобы способствовать подавляющему эффекту HDACI в отношении пролиферации клеток рака простаты человека. В принципе считают, что данный способ представляет собой эффективный способ терапии любого вида рака. Кроме того, SB является субстанцией, которая присутствует в кишке в организме человека и не вызывает аллергических реакций. Так, показано, что его концентрация 1 мМ, эффективная в данном тесте, имеет чрезвычайно низкую токсичность в отношении живого организма и не проявляет вредных эффектов, таких как аллергия.

К тому же избыток HDAC взаимодействует с фактором ремоделирования хроматина и т.п. при метилировании цитозина и подавлении пролиферации раковых клеток.

Активированный вспененный материал, соответствующий изобретению, может быть использован совместно с введением фармацевтического агента путем непосредственного или опосредованного контактирования с телом человека с целью повышения эффекта фармацевтического агента. Кроме того, даже для фармацевтического агента, который оказывал бы вредное воздействие в большой дозе, данный вредный эффект может быть понижен одновременным использованием активированного вспененного материала, поскольку его доза может быть уменьшена.

Claims

1. Активированный вспененный материал, предназначенный для непосредственного или опосредованного контакта с телом человека, которому введен фармацевтический агент, причем вспененный материал получен из натурального или синтетического каучука или синтетического полимера, имеет структуру с закрытыми порами и содержит соединение циркония и/или соединение германия.

2. Активированный вспененный материал по п.1, в котором фармацевтический агент представляет собой противораковое средство.

3. Активированный вспененный материал по п.2, в котором фармацевтический агент представляет собой эндогенное антиканцерогенное вещество.

4. Активированный вспененный материал по п.3, в котором эндогенное антиканцерогенное вещество представляет собой ингибитор гистондезацетилазы (HDACI).

5. Активированный вспененный материал по любому из пп.1-4, который содержит от 20 до 30 пор на мм².

6. Активированный вспененный материал, предназначенный для непосредственного или опосредованного контакта с телом человека, которому введен фармацевтический агент, причем вспененный материал получен из натурального или синтетического каучука или синтетического полимера, имеет структуру с закрытыми порами и содержит соединение циркония и/или соединение германия и углерод.

7. Активированный вспененный материал по п.6, в котором фармацевтический агент представляет собой противораковое средство.

8. Активированный вспененный материал по п.7, в котором фармацевтический агент представляет собой эндогенное антиканцерогенное вещество.

9. Активированный вспененный материал по п.8, в котором эндогенное антиканцерогенное вещество представляет собой ингибитор гистондезацетилазы (HDACI).

10. Активированный вспененный материал по любому из пп.6-9, который содержит от 20 до 30 пор на мм².