JPH0347126A - 制癌剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野］ 本発明は制癌剤に関する。更に詳しくは、ビタミンＤ誘
導体及び酪酸またはその塩を有効成分として含有する分
化誘導作用に基づく制癌剤に関する。

［従来技術］ 成る種のビタミンＤ誘導体、例えば、９．ｌ〇−セココ
レスタ−５，７，１０（１９）−トリエン−１，３，２
５−１−リオール［すなわち、ｌ　ａ　＊２５−ジごド
ロコレカルシフェロール、以下、１ａ＝　２５−　（Ｏ
Ｈ）ｓＤｓと略記する］は癌細胞の分化誘導作用（以下
、単に「分化誘導作用」と言う）を有することが知られ
ている［田中洋予ら。

Ｂ　ｉｏｃｈｅｍ、　Ｂ　１ｏｐｈｙｓ、　Ｃｈｅｍ、
　Ｃｏｍｍｕｎ、　、第１１７巻。

第８６頁（１９８３年）　ＨＤ　、Ｍ、Ｐ　ｒｏｖｖｅ
ｄｉｎｉら。

Ｂｏｎｅ、第７巻、第２３頁（１９８６年）ｉＤ、Ｊ。

Ｍ　ａｎｇｅ　ｌ　５ｄｏｒ　ｆら、　Ｊ　、Ｃｅ１ｌ
　Ｂｉｏｌ、、第９８巻。

第３９１頁（１９８４年）　；　ｌ）、Ｍ、ＭｃＣａｒ
ｔｂｙら。

Ｌｅｕｋｅｍｉａ　Ｒｅｓ、、第７巻、第５ａ（１９８
３年）：穂積本男、高久史麿編集「癌細胞の分化誘導と
制癌」、第２３６〜２４２頁、ソフトサイエンス社。

東京（１９８５年）参照］。

また、ｌα、２５−　（ＯＨ）２Ｄ３がマウスの骨髄性
白血病に対し延命効果を示すことも知られている［Ｙ、
）（ｏｎｍａら、　Ｐｒｏｃ、ＮａＬｌ、Ａｃａｄ、Ｓ
ｃｉ。

ＵＳＡ、第８０巻、第２０１頁（１９８３年）参照】。

一方、酪酸も分化誘導作用を示すことが知られている［
　Ｓ　、Ｔ　、Ｃｏｌｌｉｎｓら、　Ｐ　ｒｏｅ、　Ｎ
　ａｔｌ、Ａ　ｃａｄ。

Ｓｃｉ、ＵＳＡ、第７５巻、第２４５８頁（１９７８年
）　　；　Ａ、Ｌｅｄｅｒら、　Ｃｅ１ｌ、第５巻、第
３１９頁（１９７５年）；穂積本男、医学のあゆみ、第
１２８巻、第９７４頁（１９８４年）：森陽−ら。

日本癌学会総会記事、第４３回、第２４６頁、演題８６
２．　　（１９８４）；Ｐ、Ａ、ＭｃＣｕｅら、Ｊ。

Ｃｅ１１．Ｂ　ｉｏｌ、、第９８巻、第６０２頁（１９
８４）ｉＫ、Ｎ、Ｐｒａｓａｄ、　Ｐ、に、５ｉｎｈａ
、　Ａ　ｒｅｖｉｅｗ　ＩｎｖｉＬｒＯ，第１２巻、第
１２５頁（１９７６）　；Ｆ、Ｈ。

Ｓ　ｃｈｎｅｉｄｅｒ、　Ｂ　ｉｏｃｈｅｍ　Ｐ　ｈａ
ｒｍａｃｏｌ、第２５巻。

第２３０９頁（１９７６）　；　Ｙ、Ｋｉｍｈｉ、　Ｐ
ｒｏｃ。

Ｎ　ａｔｌ、Ａ　ｃａｄ、　Ｓ　ｃｉ、Ｕ　Ｓ　Ａ　、
第７３巻、第４６２頁（１９７６）　　ＨＤ、Ｌ、Ｄｅ
ｘｔｅｒら、　　ＣａｎｃｅｒＲａｓ、、第３９巻、第
１０２０頁（１９７９）；Ｅ　、　Ｈｕｂｅｒｍａｎら
、　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、、第３９巻、第２６１８頁
（１９７９）参照］。

［発明が解決しようとする課題］ まず、ｌ　ｕ　、　２５−　（ＯＨ）　！Ｄ３ノ分化ｔ
ｉ［ｆ’Ｆ用発現には、通常のビタミン様作用の発現量
に比しより高用量を必要としている。また、ｌα、２５
−（ＯＨ）ｚＤｓの用量をいくら上げても、ある一定以
上の効果は発揮できず、用量を上げると血中カルシウム
の上昇により、種々の副作用を発現するため、臨床上の
使用も限定されている［Ｆｒａｐｔｏｎら、　Ｃａｎｃ
ｅｒ　Ｒｅｓ、ｌ第４３巻、第４４４３頁（１９８３年
）；田中洋予ら、　Ｂ　ｉｏｃｈａｍ、　Ｐ　ｈａｒｍ
ａｃｏ　ｌ　、投稿中（１９８８年）参照１゜また、ｌ
α、２５　　（ＯＨ）！Ｄ３の分化誘導作用は血液癌に
限られているため、発症頻度の高い胃、肺、肝、食道、
子宮、乳房などにおける各種の癌に応用できないという
欠点もある。

一方、酪酸は血液癌細胞に限らず、広く各種の癌に作用
するが、ある一定量を超えて作用させても所望の分化誘
導作用を示さず、効果が飽和してしまい、臨床試験にお
いても十分な効果は得られていない［Ｃ、Ａ　ｕｇｅｎ
ｏｎ　ａｎｄ　Ｃ、Ｌ　、　Ｌ　ａｂｏｉｓｓｅ。

Ｃａｎｃｅｒ　　Ｒｅｓ、　、第４４巻、第３９６１頁
（１９８４年）　；　Ｋ　、Ｎ　、Ｐ　ｒａｓａｄ　ａ
ｎｄ　Ｐ　、Ｋ　、Ｓ　ｈｉｎｈａ。

ｌ　ｎＶｉｔｒｏ、第１２巻、第１２５頁（１９７６年
）参照】。

また、酪酸塩を小児の骨髄性出血症病患者に非経口投与
した場合に僅かに効果があったという報告もある［　Ａ
　、　Ｎ　ｏｖｏｇｒｏｄｓｋｙら、　Ｃａｎｃｅｒ、
第５１巻、第９頁（１９８３）参照］。

従って、１α、２５−　（ＯＨ）！Ｄ３の場合には、よ
り広い癌における有効性と作用の増強が要求され、また
酪酸の場合にも効果の飽和を超えた強い効果が、医薬品
としての適性を得るために必要である。

［課題を解決するための手段］ このような観点から、本発明者らは鋭意努力を重ねた結
果、酪酸とビタミンＤ誘導体とを含有する組成物は、ビ
タミンＤ誘導体あるいは酪酸をそれぞれ単一に投与した
場合に比し、ビタミンＤ誘導体と酪酸の分化誘導作用を
著しく増強することを見い出し、その知見に基づき本発
明を完成するに至っｔ；。

かくして、本発明によれば、ビタミンＤ誘導体及び酪酸
またはその塩を有効成分として含有することを特徴とす
る制癌剤が提供される。

本発明の制癌剤において用いられるビタミンＤ誘導体に
は、ビタミンＤ活性を有するか、あるいは分化誘導作用
を有する全てのビタミンＤ誘導体が包含される。そのよ
うなビタミンＤ誘導体としては、例えば、１α、２５−
ジヒドロキシコレカルシフェロール、２４．２５−ジヒ
ドロキシコレカルシフェロール、ｌα−ヒドロキシコレ
カルシフェロール、１α、２５−ジヒドロキシ−２６゜
２７−へキサフルオロコレカルシフェロール、２５−ヒ
ドロキシコレカルシフェロール、ｌα、２５−ジヒドロ
キシ−２６，２７−シメチルコレカルシフエロール、ｌ
α−ジヒドロキシ−２６，２７−シメチルコレカルシフ
エロール、２５−ヒドロキシ−２６，２７−シメチルコ
レカルシフエロール、１α、２５−ジヒドロキシ−２４
，２４−ジフルオロ−２６，２７−シメチルコレカルシ
７エロール、２５−ヒドロキシ−２４，２４−ジフルオ
ロ−２６，２７−シメチルコレカルシフエロール、ｌα
、２５−ジヒドロキシ−２６，２７−ジニチルコレカル
シフエロール、２５−ヒドロキシ−２６，２７−シメチ
ルコレカルシフエロール、２５−ヒドロキシ−２６，２
７−ヘキサフルオロカルシフェロール、２５−ヒドロキ
シ−２８−１−リフルオロカルシフェロール、２５−ヒ
ドロキシ−２６，２７−へキサフルオロエビカルシフェ
ロール、ｌａ、２５−ジヒドロキシ−２４−ジフルオロ
ホモコレカルシフェロール ヒドロキシコレカルシフェロール− ラクトン、ｌａ．２５−ジヒドロキシ−２２−オキサコ
レカルシフェロール、ｌａ−ヒドロキシ−２２−オキサ
コレカルシフェロールあるいはこれらに相当スるエルゴ
カルシフェロールなどが挙げられる。

その投与量は成人に対し一般に１日０．００３μｇ〜１
００００μｇ１好ましくは０．３μｇ〜５０００μｇの
範囲内である。

また、酪酸は、酪酸あるいは酪酸ナトリウム、酪酸カリ
ウムの如きアルカリ、アルカリ土類金属などの製薬学的
に許容しうる塩として配合することもできる。その投与
量は酪酸として、成人に対し一般に１日１ｇ〜５　０　
０　ｇ１好ましくは５〜１００ｇの範囲内である。

更に、本発明の制癌剤にお・いては、酪酸１重量部に対
して、一般にビタミンＤ誘導体１０−’重量部〜１０−
’Ｉｔ量部、特に５ＸｌＯ−’重量部〜１０−”重量部
の割合で使用することが好ましい。

本発明の制癌剤は、ビタミンＤ誘導体と酪酸またはその
塩を、経口投与用固体製剤または非経口および経口投与
用液体製剤として調製することができる。

経口投与用固体製剤は例えば粉末剤、顆粒剤、錠剤、火
剤、カプセル剤などの形態であることができ、これらを
製造するための医薬用固体担体として、例えば乳糖、澱
粉、蔗糖、マンニット、ソルビット、デキストリン、セ
ルロース、炭酸カルシウムなどが挙げられ、必要に応じ
てさらに、適当な滑沢剤、結合剤などの補助剤を添加す
ることができる。

非経口および経口投与用液体製剤は、例えばエリキシル
剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、アルコール溶液剤、油
性溶液剤などの形態で使用することができ、これらを製
造するための医薬用液体担体としては、例えば水、エタ
ノール、グリセリン、プロピレングリコール、植物油、
油状エステルなどの溶媒が挙げられ、さらに必要に応じ
て、適当な湿潤剤、懸濁剤、甘味料、香料、保存剤など
の補助剤を添加することができる。

［発明の効果１ 本発明のビタミンＤ誘導体と酪酸またはその塩を含有す
る制癌剤は、種々の癌に対し強力な分化誘導作用を発揮
する。従って、ビタミンＤ誘導体と酪酸を含有する本発
明の制癌剤は臨床での使用が期待される。

［実施例］ 次に、実施例により、本発明に従うビタミンＤ誘導体と
酪酸の同成分を含有する製剤の製造方法を、また、試験
例によりビタミンＤ誘導体が酪酸の分化誘導作用を増強
することを具体的に説明する。

実施例１ 中鎖脂肪酸のトリグリセライドエステル（ＭＣＴ）１ｋ
ｇにビタミンＤ誘導体１０ｍｇおよび酪酸１ｇを溶解し
、一方下記剤皮成分を加温溶解し、１カプセル中にビタ
ミンＤ誘導体がｌμｇ含まれるように常法により軟カプ
セル製造機を用いて軟カプセルを製造した。

カプセル内容物 ｌａ．２５（○Ｈ　）ｚＤ　ｓ　　　　　０．００１重
量部酪酸　　　　　　　　　　　　　０．１重量部天然
ビタミンＥ　　　　　　　　Ｏ．５重量部Ｂ　Ｉ　Ｔ　
　　　　　　　　　　　　０．５重量部ＭＣＴ　　　　
　　　　　　　　１００重量部カプセル剤皮 ゼラチン　　　　　　　　　　　７０重量部濃グリセリ
ン　　　　　　　　２１重量部酸化チタン　　　　　　
　　　　４重量部実施例２ エタノール４０ｇにポリビニルピロリドン２５ｇを溶解
した後、ビタミンＤ誘導体１　０ｍｇおよび酪酸１ｇを
溶解し、乳糖と結晶セルロースの混合物と練り合わせ、
乾燥後カルボキンセルロースカルシウムおよびステアリ
ン酸マグネシウムを添加し、常法に従って１錠重量１　
００ｍｇになるよう裸錠を製し、更にエアースプレー装
置を用いてフィルム被覆した。

裸錠 ｌα、　２５−（ＯＨ）、Ｄ、　　　　　０．００１重
量部酪酸　　　　　　　　　　　　　０．１重量部ポリ
ビニルピロリドン　　　　　　２．５重量部乳糖　　　
　　　　　　　　　　５７．０重量部結晶セルロース　
　　　　　　　４２．０重量部カルボキシセルロースカ
ルシウム５．０重量部ステアリン酸マグネシウム　　　
　１．０重量部フィルム層 ヒドロキシプロピルメチルセルロース ３．０重量部 マクロゴール６０００　　　　　　０．５重量部酸化チ
タン　　　　　　　　　　　１．０重量部タルク　　　
　　　　　　　　　　　１．５重量部試験例１：酪酸の
分化誘導作用 （検体） 検体ｌ：酪酸ナトリウム濃度が２ｍＭのＤＲＰＭ　Ｉ　
−１，６４０培地 検体２：酪酸ナトリウム濃度が４ｍＭのＤＲＰＭｌ−１
６４０培地 対照検体：ＤＲＰＭｌ−１６４０培地 （試験方法） ヒトの結腸腺癌細胞ＨＴ−２９はＳ　１ｏａｎ−Ｋ　ｅ
ｔｔｅｒｉｎｇ癌研究所にニーヨーク）のＪ、Ｆｏｇｈ
博士から提供を受け、１４８から１６５代のものを使用
した。この細胞を、熱で不活性化した仔牛血清（ギプコ
社製）を１０％添加したＲＰＭＩ−１６４０（以下、Ｒ
，ＰＭＩ−１０培地と略称する）で培養し実験に供した
。

培養は５％炭炭酸ガスインキュベーター用用３７℃にて
行ない、３日ごとに培地を交換し、７日目と１００日目
粘液産生細胞および形態をＡ　ｎｇｅｒＯｎらの方法［
Ｃａｎｃｅｒ　Ｒａｓ、　、第４４巻、第３９６１頁（
１９８４年）〕により観察した。

（結果） 第１表に酪酸ナトリウムの分化誘導作用を濃度を変えて
観察した結果を示す。

第１表　酪酸ナトリウムのヒト結腸癌細胞における分化
誘導作用 本粘液性の増強、扁平化、大型化など分化誘導作用を示
す形態変化を言う（十二起こした。

−二起こさなかった）。

括弧内の数字は例数を示す。

２ｍＭの酪酸ナトリウムは粘液産生コロニーを４４％発
現させ、形態変化させ、分化誘導作用を示した。しかし
、この作用は酪酸ナトリウムの濃度を５ｍＭに上げても
３９％と上昇せず、作用が飽和することがわかった。こ
のことは酪酸の投与量をいくらあげても、ヒトにおいて
、ある一定以上の効果を示さないことを示唆するもので
あり、その臨床効果を限定する原因の一つと考えられる
［　Ａ　、　Ｎ　ｏｖｏｇｒｏｄｓｋｙら、　Ｃａｎｃ
ｅｒ、第５１巻、第９頁（１９８３年）参照］。

試験例２　：　ｌ、２５−　（ＯＨ）、Ｄ、と酪酸の分
化誘導作用 （検体） 検体１：ＲＰＭＩ培地のみ 検体２：エタノールを０．１％含むＲＰＭＩ培地検体３
：酪酸ナトリウム濃度が５ｍＭのＲＰＭＩ培地 検体４：ｌＯ−’Ｍの１，２　ｓ　−（ＯＨ）２Ｄ３と
０゜１％のエタノールを含むＲＰＭＩ培地 検体５：５ｍＭ濃度の酪酸ナトリウムと１０−’Ｍの１
．２５−　（ＯＨ）！Ｄｌと０．１％のエタノールを含
むＲＰＭＩ培地 （試験方法） ＨＴ−２９ヒト結腸癌細胞をＲＰＭＩ−１０培地にて、
５％炭酸ガスインキュベーターを用い８日間行なった。

３日ごとに培地を交換した。各種検体を含む培地に交換
した後、試験例１と同様の方法で粘性コロニーおよび形
態変化を測定観察した。

（結果） その結果を第２表に示す。

第２表　ｌα、２５−（ＯＨ）ＩＤ　ｓによる酪酸ナト
リウムのヒト結腸癌細胞における分化誘導増強作用 第２表に示すように、ｌ　ａ　、　２５　　（ＯＨ）ｔ
Ｄｓは１０−’Ｍの濃度において単独で粘液産生コロニ
ーを形成せず、また、分化誘導作用に基づく形態変化（
雇いシャーレ壁への粘着性の獲得、扁平化など）も起こ
さなかった。

一方、酪酸ナトリウムは２ｍＭで、３８．４％の粘液産
生コロニーを誘導し、形態変化を起こし、試験例１に一
致する結果を示した。

しかし、１０−’Ｍのｌα、２５　　　（ＯＨ）ｚＤｓ
を２ｍＭの酪酸ナトリウムと併用すると、粘液産生コロ
ニーは８４．３％に到するとともに形態変化を起こし著
明な併用効果を認めた。

こした。十二起こした。−二起こさなかった）。

括弧内の数字は例数を示す。

（検体） 検体ｌ：コレカルシ７エロール 検体２：ｌα−ヒドロキシコレカルシフェロール検体３
：２５−ジヒドロキシコレカルシフェロール 検体４：２４．２５−ジヒドロキシコレカルシフェロー
ル 検体５：１α、２５−　（ＯＨ）ｚＤｓ検体６：２６．
２６，２６．２７．２７．２７−ヘキサフルオロ−１α
、　２５−（ＯＨ）ＩＤ　ｓ検体７：２６，２７−シメ
チルーｌα、２５−（ＯＨ）！　Ｄｓ 検体８：２６，２７−ジニチルーｌα、２５−（０Ｈ）
２Ｄ３ 検体９：２６．２７−ジプロビルー１α、２５−（ＯＨ
）ｚＤｉ 検体１０：２６−ホモ−１α、２５−（ＯＨ）ｚＤｘ（
試験方法） 試験例２と同様にして行なった。

（結果） 粘液産生コロニー形成能を第１図に示す。

第１図に示したように、ｌ　ａ、２５−（ＯＨ）ｚＤｓ
は１０−’Ｍの濃度で作用が飽和することが判った。

検体６の２６．２６．２６．２７．２７．２７−ヘキサ
フルオロ−１α、２５−（ＯＨ）ＩＤ　３は、ビタミン
Ｄ様活性においては、ｌα、　２５−（ＯＨ）ｔＤｓの
ｌ（ｌ程度の活性を示すに過ぎないが［田中洋子ら、　
Ａｒｃｈ、Ｂ　ｉｏｃｈｅｍ、Ｂ　１ｏｐｈｙｓ、、第
２２９巻９＠３４８頁（１９８４年）参照］、分化誘導
増強作用においては１００倍以上の活性を示している。

また、ｌ　、ｙ、２５−　（ＯＨ）ＩＤ３のアルキル誘
導体は、明らかに天然型ビタミンＤ、よりビタミンＤ様
活性が低いにもかかわらず［Ｖ　、Ｋ　、Ｏｓｔｒｅｍ
ら、　　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、　　
ＵＳＡ、　　第８４巻、第２６１Ｏ頁、（１９８７年）
、［Ｖ、Ｋ。

Ｏｓｔｒｅｍら、　Ｊ　、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、第２
６２巻、第１４１６４頁（１９８７年）；池用信夫ら、
　Ｃｈｅｎａ。

Ｐ　ｈａｒｍ、　Ｂ　ｕ目、、第３５巻、８４３６２頁
（１９８７年）参照］、検体７は、検体５の５倍の分化
誘導増強作用を示す。検体８および検体ｌＯは、検体２
．３．５の天然型ビタミンＤ、より高い分化誘導増強作
用を示す。

検体９は、ビタミンＤ様活性が殆ど無いにもかかわらず
、天然型ビタミンＤ３（検体５）の１／ｌＯ程度の分化
誘導増強作用を示す。

これら誘導体の分化誘導増強作用を示す形態変化は粘液
産生コロニー形成の結果と同様であった。

以上の結果よりビタミンＤ、誘導体と酪酸の結腸癌細胞
における分化誘導作用は、重篤な高カルシウム症を引き
起こすことなく発現されることが判った。

（検体） 検体１：１０−’Ｍの１．２５−　（ＯＨ）！Ｄ３と０
．１％のエタノールを含むＲＰＭＩ培地 対照検体ｌ：酪酸ナトリウム濃度が２ｍＭのＲＰ旧培地 （試験方法） ＨＴ−２９ヒト結腸癌細胞を検体１１対照検体ｌをＲＰ
ＭＩ−１０培地にて、５％炭酸ガスインキュベーターを
用い７日間行なった。次いで通常のＲＰＭＩ−１０培地
に交換した後、第１日目〜第７日まで試験例１と同様の
方法で、粘性コロニー及び形態変化を測定観察した。

（結果） 種々の分化誘導作用は可逆的である［Ｃ，Ｆｒ１ｅｎｄ
ら、　　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、　　
ＵＳＡ、　第７３巻、第３７８頁（１９７３年）　；　
Ｃ，Ｔａｒｅｌｌａら。

Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　、第４２巻、第４４５頁（１
９８２年）参照１ので、ビタミンＤ３誘導体と酪酸の分
化誘導作用の消失効果を検討した。

その結果を第２図に示す。

検体ｌは、粘液産生コロニー形成に基づく分化誘導作用
において、対照検体ｌよりも作用の消失が明らかに遅い
。即ち、ビタミンＤ、誘導体と酪酸の併用による分化誘
導作用は効果の持続という点でも優れている。

また、分化誘導増強作用を示す形態変化も粘液産生コロ
ニー形成の結果と同様であった。

試験例５：ラットにおける急性毒性試験ウィスター系雄
性ラット（６週齢）を１群ｌＯ匹とし３群用意した。こ
れに酪＃２ｇ／ｋｇ、１ａ、２５−　（ＯＨ）＊ＶＤｓ
４０μｇ／ｋｇをそれぞれ単独であるいは両薬物を併用
して同時に経口投与した。

いずれの群にも死亡例は全く認められなかった。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ビタミンＤ誘導体と酪酸の粘液産生コロニー
形成に基づく分化誘導作用を示すグラフであり、第２図
は、ビタミンＤ３誘導体と酪酸の分化誘導作用の持続効
果を示すグラフである。 第２図 誘発剤を含まない培地における分化したＨＴ−２９＋ｄ
Ｈ胞の可逆性 言 　　３ 　５ 日　数　（ＲＰＭＩ−１０倍地中）

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）ビタミンＤ誘導体及び酪酸またはその塩を有効成
   分として含有することを特徴とする制癌剤。