JPH07324035A - 滑膜細胞増殖抑制剤及び慢性関節リウマチ治療剤 - Google Patents
滑膜細胞増殖抑制剤及び慢性関節リウマチ治療剤Info
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- JPH07324035A JPH07324035A JP11619494A JP11619494A JPH07324035A JP H07324035 A JPH07324035 A JP H07324035A JP 11619494 A JP11619494 A JP 11619494A JP 11619494 A JP11619494 A JP 11619494A JP H07324035 A JPH07324035 A JP H07324035A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 有効かつ安全な滑膜細胞増殖抑制剤及び慢性
関節リウマチの治療剤を提供する。 【構成】 ８−クロロ−ｃＡＭＰ、８−ブロモ−ｃＡＭ
Ｐ、Ｎ6，２’−Ｏ−ジブチリル−ｃＡＭＰ、２−ｎ−
ブチル−８−ブロモ−ｃＡＭＰ、２’−Ｏ−モノブチリ
ル−ｃＡＭＰ、Ｎ6−モノブチリル−２’−デオキシ−
ｃＡＭＰ、２’−Ｏ−モノブチリル−８−ブロモ−ｃＡ
ＭＰ、Ｎ6−ベンジル−ｃＡＭＰ、８−チオメチル−ｃ
ＡＭＰ、Ｒｐ−８−クロロ−ｃＡＭＰＳ、Ｓｐ−８−ブ
ロモ−ｃＡＭＰＳ、Ｎ6，２’−Ｏ−ジブチリル−ｃＡ
ＭＰ、Ｎ6−フェニル−８−ｐ−クロロフェニルチオ−
ｃＡＭＰ等のｃＡＭＰ誘導体からなる滑膜細胞増殖抑制
剤を慢性関節リウマチ治療剤の有効成分とする。
関節リウマチの治療剤を提供する。 【構成】 ８−クロロ−ｃＡＭＰ、８−ブロモ−ｃＡＭ
Ｐ、Ｎ6，２’−Ｏ−ジブチリル−ｃＡＭＰ、２−ｎ−
ブチル−８−ブロモ−ｃＡＭＰ、２’−Ｏ−モノブチリ
ル−ｃＡＭＰ、Ｎ6−モノブチリル−２’−デオキシ−
ｃＡＭＰ、２’−Ｏ−モノブチリル−８−ブロモ−ｃＡ
ＭＰ、Ｎ6−ベンジル−ｃＡＭＰ、８−チオメチル−ｃ
ＡＭＰ、Ｒｐ−８−クロロ−ｃＡＭＰＳ、Ｓｐ−８−ブ
ロモ−ｃＡＭＰＳ、Ｎ6，２’−Ｏ−ジブチリル−ｃＡ
ＭＰ、Ｎ6−フェニル−８−ｐ−クロロフェニルチオ−
ｃＡＭＰ等のｃＡＭＰ誘導体からなる滑膜細胞増殖抑制
剤を慢性関節リウマチ治療剤の有効成分とする。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、滑膜細胞増殖抑制剤及
び慢性関節リウマチ治療剤に関する。
び慢性関節リウマチ治療剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】慢性関節リウマチ（rheumatoid arthrit
is）は関節滑膜を炎症の主座とし、軟骨や骨の破壊を引
き起こす原因不明の慢性疾患である。慢性関節リウマチ
の滑膜組織には、リンパ球浸潤、血管新生と共に滑膜細
胞の増殖を伴う滑膜表層の重層化が認められる。軟骨、
骨に浸潤するパンヌスと呼ばれる肉芽組織では、マクロ
ファージ様のＡ型滑膜細胞と共に線維芽細胞様のＢ型滑
膜細胞の増殖が著明である。Ｂ型滑膜細胞の増殖は炎症
滑膜局所で検出されるインターロイキン１や血小板由来
増殖因子などのモノカインによって引き起こされ、増殖
・活性化した滑膜細胞の産生するサイトカインやメタロ
プロテアーゼ、プロスタグランディンにより軟骨・骨破
壊が引き起こされる。以上の知見から、滑膜細胞の増殖
を阻害できれば、慢性関節リウマチの治療が可能になる
と考えられるが、滑膜細胞の増殖を抑制する物質は殆ど
知られておらず、実用的な使用は行なわれていない。
is）は関節滑膜を炎症の主座とし、軟骨や骨の破壊を引
き起こす原因不明の慢性疾患である。慢性関節リウマチ
の滑膜組織には、リンパ球浸潤、血管新生と共に滑膜細
胞の増殖を伴う滑膜表層の重層化が認められる。軟骨、
骨に浸潤するパンヌスと呼ばれる肉芽組織では、マクロ
ファージ様のＡ型滑膜細胞と共に線維芽細胞様のＢ型滑
膜細胞の増殖が著明である。Ｂ型滑膜細胞の増殖は炎症
滑膜局所で検出されるインターロイキン１や血小板由来
増殖因子などのモノカインによって引き起こされ、増殖
・活性化した滑膜細胞の産生するサイトカインやメタロ
プロテアーゼ、プロスタグランディンにより軟骨・骨破
壊が引き起こされる。以上の知見から、滑膜細胞の増殖
を阻害できれば、慢性関節リウマチの治療が可能になる
と考えられるが、滑膜細胞の増殖を抑制する物質は殆ど
知られておらず、実用的な使用は行なわれていない。
【０００３】ところで、サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭ
Ｐ）は、細胞内に情報を伝達するセカンドメッセンジャ
ーとして、ｃＡＭＰ依存性蛋白質リン酸化酵素（Ａキナ
ーゼ）を活性化することにより、心臓における心拍数の
増大及び収縮力の増強、脂肪細胞における脂肪分解の促
進、膵臓Ｂ細胞におけるインスリン分泌の促進、胃壁細
胞における胃酸分泌の促進、肝臓におけるグリコーゲン
分解の促進、甲状腺や副腎皮質におけるホルモン分泌の
促進など様々な生理応答を引き起こす。Ａキナーゼは、
さらに細胞増殖にも関与していることが知られている。
近年、Ａキナーゼの２種類の調節サブユニットR1及びRI
Iの同定が行なわれ、このサブユニットのバランスによ
り細胞の分化と増殖へのベクトルが決定され、一部の腫
瘍細胞ではR1サブユニットの優位により増殖が亢進して
いることが明らかになった。(ProcNatl Acad Sci 88:20
11-2015,1991)。さらに、種々の細胞膜透過型のｃＡＭ
Ｐアナログが合成されるなかで、8-Cl-cAMPはRIIサブユ
ニットに対する親和性が高く、キナーゼ活性化作用が弱
く、腫瘍治療としての開発も行なわれている(Life Scie
nces 48:1123-1132,1991)。しかし、このようなｃＡＭ
Ｐ誘導体が慢性関節リウマチ滑膜細胞に対してどのよう
な作用を有するかについては知られていない。
Ｐ）は、細胞内に情報を伝達するセカンドメッセンジャ
ーとして、ｃＡＭＰ依存性蛋白質リン酸化酵素（Ａキナ
ーゼ）を活性化することにより、心臓における心拍数の
増大及び収縮力の増強、脂肪細胞における脂肪分解の促
進、膵臓Ｂ細胞におけるインスリン分泌の促進、胃壁細
胞における胃酸分泌の促進、肝臓におけるグリコーゲン
分解の促進、甲状腺や副腎皮質におけるホルモン分泌の
促進など様々な生理応答を引き起こす。Ａキナーゼは、
さらに細胞増殖にも関与していることが知られている。
近年、Ａキナーゼの２種類の調節サブユニットR1及びRI
Iの同定が行なわれ、このサブユニットのバランスによ
り細胞の分化と増殖へのベクトルが決定され、一部の腫
瘍細胞ではR1サブユニットの優位により増殖が亢進して
いることが明らかになった。(ProcNatl Acad Sci 88:20
11-2015,1991)。さらに、種々の細胞膜透過型のｃＡＭ
Ｐアナログが合成されるなかで、8-Cl-cAMPはRIIサブユ
ニットに対する親和性が高く、キナーゼ活性化作用が弱
く、腫瘍治療としての開発も行なわれている(Life Scie
nces 48:1123-1132,1991)。しかし、このようなｃＡＭ
Ｐ誘導体が慢性関節リウマチ滑膜細胞に対してどのよう
な作用を有するかについては知られていない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】上記のように、現状で
は慢性関節リウマチの実用的な治療方法は知られておら
ず、有効な治療薬が望まれている。本発明は、かかる観
点からなされたものであり、有効かつ安全な滑膜細胞増
殖抑制剤及び慢性関節リウマチの治療剤を提供すること
を課題とする。
は慢性関節リウマチの実用的な治療方法は知られておら
ず、有効な治療薬が望まれている。本発明は、かかる観
点からなされたものであり、有効かつ安全な滑膜細胞増
殖抑制剤及び慢性関節リウマチの治療剤を提供すること
を課題とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者は、上記課題を
解決するために鋭意研究を行なった結果、ｃＡＭＰ誘導
体が滑膜細胞の増殖を抑制する作用を有する事を見いだ
し、本発明に至った。
解決するために鋭意研究を行なった結果、ｃＡＭＰ誘導
体が滑膜細胞の増殖を抑制する作用を有する事を見いだ
し、本発明に至った。
【０００６】すなわち本発明は、ｃＡＭＰ誘導体から選
ばれる１種または２種以上からなる滑膜細胞増殖抑制
剤、及びこの滑膜細胞増殖抑制剤を有効成分として含有
する慢性関節リウマチ治療剤である。
ばれる１種または２種以上からなる滑膜細胞増殖抑制
剤、及びこの滑膜細胞増殖抑制剤を有効成分として含有
する慢性関節リウマチ治療剤である。
【０００７】以下、本発明を詳細に説明する。
【０００８】＜１＞滑膜細胞増殖抑制剤 本発明の滑膜細胞増殖抑制剤は、ｃＡＭＰ誘導体からな
り、単独でも任意の２種以上の混合物でもよい。本発明
に用いられるｃＡＭＰ誘導体は、軟骨や骨の破壊を引き
起こす要因となる滑膜細胞の増殖を抑制する効果を有す
る。このようなｃＡＭＰ誘導体としては、ｃＡＭＰの８
位がハロゲン化あるいはチオエステル化されたもの、
２’位の水酸基及び／又はＮ6位がアシル化またはアル
キル化されたもの等が挙げられる。具体的には、例え
ば、下記式で表される８−クロロ−ｃＡＭＰ（化１：以
下、「8-Cl-cAMP」という）、８−ブロモ−ｃＡＭＰ
（化２：以下、「8-Br-cAMP」という）、Ｎ6，２’−Ｏ
−ジブチリル−ｃＡＭＰ（化３：以下、「Dibutyryl-cA
MP」という）、２−ｎ−ブチル−８−ブロモ−ｃＡＭＰ
（化４）、２’−Ｏ−モノブチリル−ｃＡＭＰ（化
５）、Ｎ6−モノブチリル−２’−デオキシ−ｃＡＭＰ
（化６）、２’−Ｏ−モノブチリル−８−ブロモ−ｃＡ
ＭＰ（化７）、Ｎ6−ベンジル−ｃＡＭＰ（化８）、８
−チオメチル−ｃＡＭＰ（化９）、Ｒｐ−８−クロロ−
ｃＡＭＰＳ（化１０）、Ｓｐ−８−ブロモ−ｃＡＭＰＳ
（化１１）、Ｎ6−フェニル−８−ｐ−クロロフェニル
チオ−ｃＡＭＰ（化１２）等が挙げられる。これらの中
では、8-Br-cAMP及び8-Cl-cAMPは低濃度で作用し、特に
8-Br-cAMPはヒト滑膜細胞に特異的に増殖を抑制する点
で好ましい。また、ｃＡＭＰ誘導体の薬理学上許容され
る塩、例えば、Ｎａ塩、アンモニウム塩等も同様に本発
明に使用することができる。
り、単独でも任意の２種以上の混合物でもよい。本発明
に用いられるｃＡＭＰ誘導体は、軟骨や骨の破壊を引き
起こす要因となる滑膜細胞の増殖を抑制する効果を有す
る。このようなｃＡＭＰ誘導体としては、ｃＡＭＰの８
位がハロゲン化あるいはチオエステル化されたもの、
２’位の水酸基及び／又はＮ6位がアシル化またはアル
キル化されたもの等が挙げられる。具体的には、例え
ば、下記式で表される８−クロロ−ｃＡＭＰ（化１：以
下、「8-Cl-cAMP」という）、８−ブロモ−ｃＡＭＰ
（化２：以下、「8-Br-cAMP」という）、Ｎ6，２’−Ｏ
−ジブチリル−ｃＡＭＰ（化３：以下、「Dibutyryl-cA
MP」という）、２−ｎ−ブチル−８−ブロモ−ｃＡＭＰ
（化４）、２’−Ｏ−モノブチリル−ｃＡＭＰ（化
５）、Ｎ6−モノブチリル−２’−デオキシ−ｃＡＭＰ
（化６）、２’−Ｏ−モノブチリル−８−ブロモ−ｃＡ
ＭＰ（化７）、Ｎ6−ベンジル−ｃＡＭＰ（化８）、８
−チオメチル−ｃＡＭＰ（化９）、Ｒｐ−８−クロロ−
ｃＡＭＰＳ（化１０）、Ｓｐ−８−ブロモ−ｃＡＭＰＳ
（化１１）、Ｎ6−フェニル−８−ｐ−クロロフェニル
チオ−ｃＡＭＰ（化１２）等が挙げられる。これらの中
では、8-Br-cAMP及び8-Cl-cAMPは低濃度で作用し、特に
8-Br-cAMPはヒト滑膜細胞に特異的に増殖を抑制する点
で好ましい。また、ｃＡＭＰ誘導体の薬理学上許容され
る塩、例えば、Ｎａ塩、アンモニウム塩等も同様に本発
明に使用することができる。
【０００９】
【化１】
【００１０】
【化２】
【００１１】
【化３】
【００１２】
【化４】
【００１３】
【化５】
【００１４】
【化６】
【００１５】
【化７】
【００１６】
【化８】
【００１７】
【化９】
【００１８】
【化１０】
【００１９】
【化１１】
【００２０】
【化１２】
【００２１】ｃＡＭＰ誘導体は、ｃＡＭＰを基に化学合
成が可能であり、また、8-Br-cAMP、8-Cl-cAMP、Dibuty
ryl-cAMP、８−クロロ−ｃＡＭＰ（8-Cl-cAMP）、８−
ブロモ−ｃＡＭＰ（8-Br-cAMP）、Ｎ6，２’−Ｏ−ジブ
チリル−ｃＡＭＰ（Dibutyryl-cAMP）、２’−Ｏ−モノ
ブチリル−ｃＡＭＰ、Ｎ6−モノブチリル−２’−デオ
キシ−ｃＡＭＰ、２’−Ｏ−モノブチリル−８−ブロモ
−ｃＡＭＰ、Ｎ6，２’−Ｏ−ジブチリル−ｃＡＭＰ等
は市販されており（例えばシグマ社）、それらを使用し
てもよい。
成が可能であり、また、8-Br-cAMP、8-Cl-cAMP、Dibuty
ryl-cAMP、８−クロロ−ｃＡＭＰ（8-Cl-cAMP）、８−
ブロモ−ｃＡＭＰ（8-Br-cAMP）、Ｎ6，２’−Ｏ−ジブ
チリル−ｃＡＭＰ（Dibutyryl-cAMP）、２’−Ｏ−モノ
ブチリル−ｃＡＭＰ、Ｎ6−モノブチリル−２’−デオ
キシ−ｃＡＭＰ、２’−Ｏ−モノブチリル−８−ブロモ
−ｃＡＭＰ、Ｎ6，２’−Ｏ−ジブチリル−ｃＡＭＰ等
は市販されており（例えばシグマ社）、それらを使用し
てもよい。
【００２２】＜２＞慢性関節リウマチ治療剤 本発明の慢性関節リウマチ治療剤は、上記滑膜細胞増殖
抑制剤を有効成分として含有し、ｃＡＭＰ誘導体の持つ
滑膜細胞増殖抑制作用に基づいて慢性関節リウマチを治
療する効果を奏するものである。本発明の治療剤は、滑
膜細胞増殖抑制剤以外に、薬剤学的に許容される担体を
基剤として用いてもよい。担体としては、具体的には、
結晶性セルロース、ゼラチン、乳糖、澱粉、植物性及び
動物性脂肪及び油、ガム、ポリアルキレングリコール等
が挙げられる。この場合、製剤全量に対するｃＡＭＰ誘
導体の配合料は特に限定されないが、通常１０-4〜１０
-7重量％が好ましい。
抑制剤を有効成分として含有し、ｃＡＭＰ誘導体の持つ
滑膜細胞増殖抑制作用に基づいて慢性関節リウマチを治
療する効果を奏するものである。本発明の治療剤は、滑
膜細胞増殖抑制剤以外に、薬剤学的に許容される担体を
基剤として用いてもよい。担体としては、具体的には、
結晶性セルロース、ゼラチン、乳糖、澱粉、植物性及び
動物性脂肪及び油、ガム、ポリアルキレングリコール等
が挙げられる。この場合、製剤全量に対するｃＡＭＰ誘
導体の配合料は特に限定されないが、通常１０-4〜１０
-7重量％が好ましい。
【００２３】また、本発明の治療剤は、経口、経腸また
は経静脈及び関節腔内注入のような局所投与による製剤
のいずれの製剤にも適用できる。具体的剤型としては、
錠剤、カプセル剤、細粒剤、シロップ剤、坐薬、軟膏
剤、注射剤等が挙げられる。
は経静脈及び関節腔内注入のような局所投与による製剤
のいずれの製剤にも適用できる。具体的剤型としては、
錠剤、カプセル剤、細粒剤、シロップ剤、坐薬、軟膏
剤、注射剤等が挙げられる。
【００２４】さらに、本発明の慢性関節リウマチ治療剤
は、ｃＡＭＰ誘導体以外の成分であって製剤に混和でき
るもの、例えばデンプン、マンニトール、乳糖などの賦
形剤、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロ
キシプロピルセルロース等の結合剤、結晶セルロース、
カルボキシメチルセルロースカルシウム等の滑沢剤、軽
質無水ケイ酸等の流動性向上剤等を適宜組み合わせて含
んでいてもよい。
は、ｃＡＭＰ誘導体以外の成分であって製剤に混和でき
るもの、例えばデンプン、マンニトール、乳糖などの賦
形剤、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロ
キシプロピルセルロース等の結合剤、結晶セルロース、
カルボキシメチルセルロースカルシウム等の滑沢剤、軽
質無水ケイ酸等の流動性向上剤等を適宜組み合わせて含
んでいてもよい。
【００２５】本発明の治療剤の投与量は特に限定されな
いが、通常はｃＡＭＰ誘導体の量として、成人一日当た
り０．１２５〜２５μｇ以上であり、好ましくは１〜５
μｇである。この範囲で使用することにより、所期の効
果が期待でき、上記範囲の量を一日１〜３回に分けて投
与するのが好ましい。また、関節腔内注入剤は、水性懸
濁注射液として用い、投与間隔は２〜４週間とするのが
好ましい。
いが、通常はｃＡＭＰ誘導体の量として、成人一日当た
り０．１２５〜２５μｇ以上であり、好ましくは１〜５
μｇである。この範囲で使用することにより、所期の効
果が期待でき、上記範囲の量を一日１〜３回に分けて投
与するのが好ましい。また、関節腔内注入剤は、水性懸
濁注射液として用い、投与間隔は２〜４週間とするのが
好ましい。
【００２６】
【実施例】以下に本発明の実施例を説明する。
【００２７】
【製造例１】 錠剤 （組成） ８−Ｂｒ−ｃＡＭＰ １０μｇ 乳糖 １４０ｇ 結晶セルロース ２５ｇ トウモロコシ澱粉 ２５ｇ ３％ヒドロキシプロピルセルロース水溶液 １００ｍＬ ステアリン酸マグネシウム ２ｇ
【００２８】（製法）ｃＡＭＰ誘導体に、乳糖、結晶セ
ルロース及びトウモロコシ澱粉を６０メッシュのふるい
で篩過し、均一に混合した後、練合機に投入し、３％ヒ
ドロキシプロピルセルロース水溶液を注加して練合す
る。ついで、１６メッシュのふるいで造粒し、50度で送
風乾燥する。乾燥後、１６メッシュのふるいを通して整
粒を行ない、ステアリン酸マグネシウムを混合し、打錠
機で重量約２００ｍｇの錠剤にする。
ルロース及びトウモロコシ澱粉を６０メッシュのふるい
で篩過し、均一に混合した後、練合機に投入し、３％ヒ
ドロキシプロピルセルロース水溶液を注加して練合す
る。ついで、１６メッシュのふるいで造粒し、50度で送
風乾燥する。乾燥後、１６メッシュのふるいを通して整
粒を行ない、ステアリン酸マグネシウムを混合し、打錠
機で重量約２００ｍｇの錠剤にする。
【００２９】
【製造例２】 カプセル剤 （組成） ８−Ｃｌ−ｃＡＭＰ ５μｇ 乳糖 １４８ｇ コーンスターチ ５０ｇ ステアリン酸マグネシウム １.５ｇ
【００３０】（製法）上記成分を細かく粉末にし、均一
な混合物になるように十分撹拌した後、これを０．２ｇ
づつゼラチンカプセルに充填し、カプセル剤とする。
な混合物になるように十分撹拌した後、これを０．２ｇ
づつゼラチンカプセルに充填し、カプセル剤とする。
【００３１】
【製造例３】 水性懸濁液 （組成） Ｒｐ−８−ブロモ−ｃＡＭＰＳ １μｇカルホ゛キシメチルセルロースナトリウム ３５ｍｇ ポリソルベート８０ ２５ｍｇ ベンジルアルコール ７０ｍｇ 注射用精製水 （全体として） １００ｍＬ
【００３２】（製法）上記成分を半量の注射用精製水に
撹拌しながら加え、十分撹拌した後、残りの半量の注射
用精製水を加えて再び懸濁する。約１時間撹拌後、１ｍ
Ｌの容量に充填し、関節注入用の水性懸濁液とする。
撹拌しながら加え、十分撹拌した後、残りの半量の注射
用精製水を加えて再び懸濁する。約１時間撹拌後、１ｍ
Ｌの容量に充填し、関節注入用の水性懸濁液とする。
【００３３】＜本発明の滑膜細胞増殖抑制剤の評価＞慢
性関節リウマチ患者５人（ＲＡ患者１〜５）及び変形関
節症患者１人（ＯＡ患者）について膝関節置換術時に得
られた生検滑膜より付着滑膜細胞を調製し、この細胞を
用いて本発明の滑膜細胞増殖抑制剤の評価を行なった。
性関節リウマチ患者５人（ＲＡ患者１〜５）及び変形関
節症患者１人（ＯＡ患者）について膝関節置換術時に得
られた生検滑膜より付着滑膜細胞を調製し、この細胞を
用いて本発明の滑膜細胞増殖抑制剤の評価を行なった。
【００３４】（１）使用した細胞 滑膜細胞は次のようにして調製した。ＴＫＲ（Total kn
ee replacement）手術によって得た患者の膝関節滑膜の
脂肪部を除去し、組織を細切し、組織分解酵素ディスパ
ーゾル（Dispersol：collagenase/DNase,ＩＢＬ社）
で、３７℃２時間酵素処理を行なって滑膜組織を分散し
た。分差した組織をメッシュ（#50 mesh）に通して単一
細胞に単離したのちＲＰＭＩ1640培地で洗浄した。得ら
れた細胞懸濁液をフィコール（ナカライ社）を用いた濃
度勾配に重層、遠心分離することにより単核球画分を
得、これを再び洗浄した後、２０％ウシ胎児血清、100
μｇ／ｍＬペニシリン、100Ｕ／ｍＬストレプトンマイ
シン、及び１００μＭ Ｌ−グルタミンを含むＲＰＭＩ
１６４０培地に４×１０5／ｍＬになるように懸濁し
た。一方、コントロールとしてはヒト線維芽細胞のＷＩ
３８細胞、ヒト前骨髄性白血病細胞のＨＬ−６０、ウサ
ギ滑膜細胞のＨｉｇ８２細胞を用いた。
ee replacement）手術によって得た患者の膝関節滑膜の
脂肪部を除去し、組織を細切し、組織分解酵素ディスパ
ーゾル（Dispersol：collagenase/DNase,ＩＢＬ社）
で、３７℃２時間酵素処理を行なって滑膜組織を分散し
た。分差した組織をメッシュ（#50 mesh）に通して単一
細胞に単離したのちＲＰＭＩ1640培地で洗浄した。得ら
れた細胞懸濁液をフィコール（ナカライ社）を用いた濃
度勾配に重層、遠心分離することにより単核球画分を
得、これを再び洗浄した後、２０％ウシ胎児血清、100
μｇ／ｍＬペニシリン、100Ｕ／ｍＬストレプトンマイ
シン、及び１００μＭ Ｌ−グルタミンを含むＲＰＭＩ
１６４０培地に４×１０5／ｍＬになるように懸濁し
た。一方、コントロールとしてはヒト線維芽細胞のＷＩ
３８細胞、ヒト前骨髄性白血病細胞のＨＬ−６０、ウサ
ギ滑膜細胞のＨｉｇ８２細胞を用いた。
【００３５】（２）滑膜細胞に対するｃＡＭＰ誘導体の
影響 数代継代した滑膜細胞を無血清培地（１％ＩＴＳ（コラ
ボレイティブ社製）添加ＲＰＭＩ１６４０培地）に２．
５×１０4／ｍＬになるように懸濁し、９６ウエルプレ
ートに100μＬづつ播種した。４８時間後に２０％ＦＣ
Ｓ含有培地に交換して同時に１０-6〜１０-3Ｍの種々の
濃度の8-Cl-cAMP、8-Br-cAMP、あるいはDibutyryl-cAMP
を添加した。
影響 数代継代した滑膜細胞を無血清培地（１％ＩＴＳ（コラ
ボレイティブ社製）添加ＲＰＭＩ１６４０培地）に２．
５×１０4／ｍＬになるように懸濁し、９６ウエルプレ
ートに100μＬづつ播種した。４８時間後に２０％ＦＣ
Ｓ含有培地に交換して同時に１０-6〜１０-3Ｍの種々の
濃度の8-Cl-cAMP、8-Br-cAMP、あるいはDibutyryl-cAMP
を添加した。
【００３６】４８時間後に１μＣｉ／ウエルの［3Ｈ］
−サイミジン（比活性 ７０ Ｃｉ／ｍＭ）を加え、１
６時間後に細胞に取り込まれた3Ｈの放射活性を液体シ
ンチレーションカウンターで測定した。なお、培養液中
に浮遊細胞は殆ど認められず、トリパンブルー染色によ
っても細胞が死滅していないことが確認された。また、
ＥＬＩＳＡ（Enzyme-Immunosorbent assay）で測定した
プロテアーゼインヒビターの産生には変化は認められな
った。
−サイミジン（比活性 ７０ Ｃｉ／ｍＭ）を加え、１
６時間後に細胞に取り込まれた3Ｈの放射活性を液体シ
ンチレーションカウンターで測定した。なお、培養液中
に浮遊細胞は殆ど認められず、トリパンブルー染色によ
っても細胞が死滅していないことが確認された。また、
ＥＬＩＳＡ（Enzyme-Immunosorbent assay）で測定した
プロテアーゼインヒビターの産生には変化は認められな
った。
【００３７】図１に、ＲＡ患者５について、各種濃度の
ｃＡＭＰ誘導体を添加した時の滑膜細胞のサイミジンの
取り込みの用量依存的変化を示す（無添加の時を100％
とする）。表１に、種々の細胞における［3Ｈ］−サイ
ミジン取り込みが５０％になる５０％増殖阻害濃度（Ｉ
Ｃ50）を示す。
ｃＡＭＰ誘導体を添加した時の滑膜細胞のサイミジンの
取り込みの用量依存的変化を示す（無添加の時を100％
とする）。表１に、種々の細胞における［3Ｈ］−サイ
ミジン取り込みが５０％になる５０％増殖阻害濃度（Ｉ
Ｃ50）を示す。
【００３８】
【表１】
【００３９】以上の結果から8-Cl-cAMP、8-Br-cAMP及び
Dibutyryl-cAMPは、ヒト滑膜細胞の増殖に対して抑制作
用があることが明らかになった。また、8-Cl-cAMP及び8
-Br-cAMPは低濃度で作用を示した。
Dibutyryl-cAMPは、ヒト滑膜細胞の増殖に対して抑制作
用があることが明らかになった。また、8-Cl-cAMP及び8
-Br-cAMPは低濃度で作用を示した。
【００４０】
【発明の効果】本発明の滑膜細胞増殖抑制剤は、滑膜細
胞に増殖抑制効果を有するので、これを含有する慢性関
節リウマチ治療剤は、慢性関節リウマチの治療に有効で
あると期待される。
胞に増殖抑制効果を有するので、これを含有する慢性関
節リウマチ治療剤は、慢性関節リウマチの治療に有効で
あると期待される。
【図１】ｃＡＭＰ誘導体による用量依存的な滑膜細胞の
増殖抑制を示す図。
増殖抑制を示す図。
フロントページの続き (72)発明者 安本 隆志 神奈川県川崎市川崎区中島２−２−16− 302 (72)発明者 森澤 義富 神奈川県横浜市神奈川区羽沢町1150
Claims (3)
- 【請求項１】 ｃＡＭＰ誘導体から選ばれる１種または
２種以上からなる滑膜細胞増殖抑制剤。 - 【請求項２】 前記ｃＡＭＰ誘導体は、８−クロロ−ｃ
ＡＭＰ、８−ブロモ−ｃＡＭＰ、Ｎ6，２’−Ｏ−ジブ
チリル−ｃＡＭＰ、２−ｎ−ブチル−８−ブロモ−ｃＡ
ＭＰ、２’−Ｏ−モノブチリル−ｃＡＭＰ、Ｎ6−モノ
ブチリル−２’−デオキシ−ｃＡＭＰ、２’−Ｏ−モノ
ブチリル−８−ブロモ−ｃＡＭＰ、Ｎ 6−ベンジル−ｃ
ＡＭＰ、８−チオメチル−ｃＡＭＰ、Ｒｐ−８−クロロ
−ｃＡＭＰＳ、Ｓｐ−８−ブロモ−ｃＡＭＰＳ、Ｎ6，
２’−Ｏ−ジブチリル−ｃＡＭＰ、Ｎ6−フェニル−８
−ｐ−クロロフェニルチオ−ｃＡＭＰから選ばれること
を特徴とする請求項１記載の滑膜細胞増殖抑制剤。 - 【請求項３】 請求項１または２記載の滑膜細胞増殖抑
制剤を有効成分として含有する慢性関節リウマチ治療
剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11619494A JPH07324035A (ja) | 1994-05-30 | 1994-05-30 | 滑膜細胞増殖抑制剤及び慢性関節リウマチ治療剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11619494A JPH07324035A (ja) | 1994-05-30 | 1994-05-30 | 滑膜細胞増殖抑制剤及び慢性関節リウマチ治療剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07324035A true JPH07324035A (ja) | 1995-12-12 |
Family
ID=14681170
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11619494A Pending JPH07324035A (ja) | 1994-05-30 | 1994-05-30 | 滑膜細胞増殖抑制剤及び慢性関節リウマチ治療剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07324035A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6294522B1 (en) * | 1999-12-03 | 2001-09-25 | Cv Therapeutics, Inc. | N6 heterocyclic 8-modified adenosine derivatives |
| WO2005089800A1 (ja) * | 2004-03-17 | 2005-09-29 | Locomogene, Inc. | hsHRD3を含む医薬組成物 |
| JP2005532360A (ja) * | 2002-06-07 | 2005-10-27 | キリックス・ベー・ヴェー | ｃＡＭＰによって直接活性化される交換タンパク質（Ｅｐａｃ）の活性をモジュレートするための新規な化合物 |
| JP2013514349A (ja) * | 2009-12-18 | 2013-04-25 | フリースランドカンピナ・ネーデルランド・ホールディング・ビー．ブイ． | 共加工された錠用賦形剤混合物、その調製及び使用 |
-
1994
- 1994-05-30 JP JP11619494A patent/JPH07324035A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6294522B1 (en) * | 1999-12-03 | 2001-09-25 | Cv Therapeutics, Inc. | N6 heterocyclic 8-modified adenosine derivatives |
| JP2005532360A (ja) * | 2002-06-07 | 2005-10-27 | キリックス・ベー・ヴェー | ｃＡＭＰによって直接活性化される交換タンパク質（Ｅｐａｃ）の活性をモジュレートするための新規な化合物 |
| WO2005089800A1 (ja) * | 2004-03-17 | 2005-09-29 | Locomogene, Inc. | hsHRD3を含む医薬組成物 |
| JP2013514349A (ja) * | 2009-12-18 | 2013-04-25 | フリースランドカンピナ・ネーデルランド・ホールディング・ビー．ブイ． | 共加工された錠用賦形剤混合物、その調製及び使用 |
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