CN117752656B - 一种治疗脑胶质瘤的联合用药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗脑胶质瘤的联合用药物组合物，所述联合用药物组合物包含JJH201601和替莫唑胺，本发明首次发现JJH201601和替莫唑胺两者联合对脑胶质瘤的治疗具有协同增效的作用，本发明为脑胶质瘤的治疗提供了有效的药物联用策略，在脑胶质瘤治疗药物的开发这一技术领域具有广阔的应用前景。

Description

一种治疗脑胶质瘤的联合用药物组合物

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体地，涉及一种治疗脑胶质瘤的联合用药物组合物。

背景技术

原发性脑恶性肿瘤已成为儿童和青壮年第一致死肿瘤，治疗手段有限，患者预后不良。其中，恶性胶质瘤作为最常见的原发性脑恶性肿瘤，源自神经上皮，经过标准的手术、放疗及化疗之后，几乎100%复发。研究发现，随着影像学技术的不断提升，高度恶性胶质瘤的检出率不断升高。对于目前胶质瘤治疗来说，替莫唑胺（Temozolomide，TMZ）是一线化疗的唯一推荐用药。然而，肿瘤耐药的存在，导致许多患者化疗后很快复发或者进展，限制了治疗效果，成为脑胶质瘤临床治疗的瓶颈，需要尽快突破。

JJH201601为多西他赛的衍生物，分子式为C₅₂H₆₀N₂O₁₆，分子量为969.04。本发明的发明人团队前期研究结果证实JJH201601作用机制与多西他赛及紫杉醇相同，均通过促进小管聚合成稳定的微管并抑制其聚解，从而使小管的数量显著减少，并可破坏微管网状结构，但不改变着丝点数量。该类药物为细胞周期特异性药物，能将细胞阻断于M期。对增殖细胞作用大于非增殖细胞，一般不抑制DNA、RNA和蛋白质的合成。JJH201601能够与乳腺癌和胰腺癌细胞的微管蛋白结合，产生促进微管蛋白聚合并抑制微管解聚的作用，影响肿瘤细胞的有丝分裂，使细胞周期停滞在G2M期，从而诱导细胞凋亡，抑制细胞增殖。基于药理药效、药代动力学以及毒理等方面的初步研究，在不同类型肿瘤模型（肺癌、肝癌、胰腺癌小鼠移植瘤模型）中，JJH201601显示出了优于多西他赛的抗肿瘤活性。目前尚无任何将JJH201601用于脑肿瘤治疗，特别是脑胶质瘤的研究报道。

本申请所述的JJH201601是申请人在多西他赛的结构基础上，进行结构优化和药效筛选得到的一种新型紫杉烷衍生物，其已在申请号为CN201810185012.4

的专利中公开并获得授权，其具体结构式如式I所示：

式I。

发明内容

本发明的目的在于提供一种治疗脑胶质瘤的联合用药物组合物，为脑胶质瘤的治疗提供有效的药物联用策略，所述联合用药物组合物包含JJH201601和替莫唑胺，本发明首次发现JJH201601和替莫唑胺两者联合对脑胶质瘤的治疗具有协同增效的作用。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

本发明的第一方面提供了一种用于治疗脑胶质瘤的联合用药物组合物。

进一步，所述药物组合物包含JJH201601和替莫唑胺。

进一步，所述药物组合物还包含药学上可接受的载体和/或辅料。

进一步，所述药物组合物为单一的复方制剂或两种单独的单方制剂的组合。

进一步，所述复方制剂为包含JJH201601和替莫唑胺的复方制剂；

进一步，所述单方制剂的组合为包含JJH201601的单方制剂和包含替莫唑胺的单方制剂的组合。

进一步，所述药物组合物中JJH201601和替莫唑胺的浓度比例为( 0.001 μM –0.0015 μM )：( 1 μM - 27 μM )。

在本发明中，所述JJH201601是一种多西他赛衍生物，分子式为C₅₂H₆₀N₂O₁₆，分子量为969.04，JJH201601能够与乳腺癌和胰腺癌细胞的微管蛋白结合，产生促进微管蛋白聚合并抑制微管解聚的作用，影响肿瘤细胞的有丝分裂，使细胞周期停滞在G2M期，从而诱导细胞凋亡，抑制细胞增殖。基于药理药效、药代动力学以及毒理等方面的初步研究，在不同类型肿瘤模型（肺癌、肝癌、胰腺癌小鼠移植瘤模型）中，JJH201601显示出了优于多西他赛的抗肿瘤活性。目前尚无任何将JJH201601用于脑肿瘤治疗，特别是脑胶质瘤的研究报道。

在本发明中，所述替莫唑胺（Temozolomide，TMZ），是一种临床一线孤儿药，抗瘤谱广、活性高，口服吸收好，替莫唑胺可迅速透过血脑屏障，在脑脊液的药物浓度是血浆浓度的30%，且在肿瘤细胞中的浓度远高于正常细胞中的浓度，故能够在杀死肿瘤细胞的同时，最大限度的保护正常组织。

在一些实施方案中，本发明所述的药学上可接受的载体和/或辅料包括但不限于：稀释剂、粘合剂、表面活性剂、致湿剂、吸附载体、润滑剂、填充剂、崩解剂。

在具体实施方案中，所述稀释剂包括但不限于：乳糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、淀粉、水等。

在具体实施方案中，所述粘合剂包括但不限于：淀粉、预胶化淀粉、糊精、麦芽糖糊精、蔗糖、阿拉伯胶、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙烯醇、聚乙二醇、聚乙烯比咯烷酮、海藻酸及海藻酸盐、黄原胶、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素等。

在具体实施方案中，所述表面活性剂包括但不限于：聚氧化乙烯山梨聚糖脂肪酸酯、十二烷基硫酸钠、硬脂酸单甘油酯、十六烷醇等。

在具体实施方案中，所述致湿剂包括但不限于：甘油、淀粉等。

在具体实施方案中，所述吸附载体包括但不限于：淀粉、乳糖、斑脱土、硅胶、高岭土、皂粘土等。

在具体实施方案中，所述润滑剂包括但不限于：硬脂酸锌、单硬脂酸甘油酯、聚乙二醇、滑石粉、硬脂酸钙和镁、聚乙二醇、硼酸粉末、氢化植物油、硬脂富马酸钠、聚氧乙烯单硬脂酸酯、单月桂蔗糖酸酯、月桂醇硫酸钠、月桂醇硫酸镁、十二烷基硫酸镁等。

在具体实施方案中，所述填充剂包括但不限于：甘露醇、木糖醇、山梨醇、麦芽糖、赤藓糖、微晶纤维素、聚合糖、偶合糖、葡萄糖、乳糖、蔗糖、糊精、淀粉、海藻酸钠、海带多糖粉末、琼脂粉末、碳酸钙、碳酸氢钠等。

在具体实施方案中，所述崩解剂包括但不限于：交联乙烯吡咯烷酮、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基甲基、交联羧甲基纤维素钠、大豆多糖等。

在一些实施方案中，本发明所述的药物组合物还可包含稳定剂、缓冲剂、杀菌剂、等渗剂、pH控制剂、表面活性剂和螯合剂等添加剂。

在一些实施方案中，本发明所述的药物组合物还可与其他能够用于治疗和/或预防和/或辅助治疗和/或辅助预防脑胶质瘤的治疗性化合物联合使用，所述其他治疗性化合物可以与本发明所述药物组合物中的主要活性成分同时给药，甚至在同一组合物中同时给药。还可以以单独的组合物或与主要活性成分不同的剂量形式单独给予其它治疗性化合物。主要成分的部分剂量可以与其它治疗性化合物同时给药，而其它剂量可以单独给药。在治疗过程中，可以根据症状的严重程度、复发的频率和治疗方案的生理应答，调整本发明所述药物组合物的给药剂量。

在一些实施方案中，所述复方制剂是指具有两种或两种以上活性药物成分制成的制剂，例如本发明中联合用药物组合物为复方制剂时，可代表其同时包含JJH201601和替莫唑胺。

在一些实施方案中，所述单方制剂是指具有单一活性药物成分制成的制剂，例如本发明中联合用药物组合物为单方制剂组合时，可代表其为分别包含JJH201601的单方制剂、包含替莫唑胺的单方制剂的组合。

在一些实施方案中，所述单方制剂的组合中两种单方制剂的施用方式包括：同时施用、依次施用。当所述单方制剂的组合中两种单方制剂的施用方式为依次施用时，施用方式包括：先施用包含JJH201601的单方制剂、再施用包含替莫唑胺的单方制剂；先施用包含替莫唑胺的单方制剂、再施用包含JJH201601的单方制剂。

在本发明中，所述治疗是指为了阻止和降低疾病的发生或发展，使疾病病程的发展或加重得以抑制、遏制、减轻、改善、减缓、停止、延迟或反转，所描述的保持和/或用药时的疾病的、紊乱的或病理学状态的各种指标包括减轻或减少症状或并发症，或治愈或消除疾病、紊乱或状况，在本发明的具体实施方案中，所述疾病优选为脑胶质瘤。

在本发明中，所述预防是指在未被临床标准认定的疾病前，各种用于防止疾病发生或发展的手段或措施，包括医学、物理或化学的方法，以阻止和降低疾病各种症状的发生或发展，在本发明的具体实施方案中，所述疾病优选为脑胶质瘤。

本发明的第二方面提供了一种药物制剂。

进一步，所述药物制剂包含本发明第一方面所述的药物组合物。

进一步，所述药物制剂的剂型包括注射给药剂型、呼吸道给药剂型、腔道给药剂型、粘膜给药剂型、皮肤给药剂型。

在一些实施方案中，本发明所述药物制剂的剂型是通过常规方法制备得到的有利于给药的剂型，包括但不限于：非经胃肠道给药剂型、经肠胃道给药剂型，具体实例包括但不限于：水溶液注射剂、粉针剂、丸剂、散剂、片剂、贴剂、栓剂、乳剂、霜剂、凝胶剂、颗粒剂、胶囊剂、气雾剂、喷雾剂、粉雾剂、缓释剂和控释剂等。

在一些实施方案中，所述药物制剂中包含药用辅料，所述药用辅料既可以是各种制剂中常规使用的，包括但不限于：等渗剂、缓冲液、矫味剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、崩解剂和润滑剂等；也可以是为了与所述物质相适应而选择使用的，包括但不限于：乳化剂、增溶剂、抑菌剂、止痛剂和抗氧剂等，这类辅料能有效提高组合物所含活性成分的稳定性和溶解性或改变所述活性成分的释放速率和吸收速率等，从而改善各种活性成分在生物体内的代谢，进而增强组合物的给药效果。此外，还可以为实现特定的给药目的或方式，如：缓释给药、控释给药和脉冲给药等，而使用的辅料，包括但不限于：明胶、白蛋白、壳聚糖、聚醚和聚酯类高分子材料（例如：聚乙二醇、聚氨酯、聚碳酸酯及其共聚物等）。所述有利于给药的主要表现有：提高治疗效果、提高生物利用度、降低毒副作用和提高患者顺应性等。

本发明的第三方面提供了一种体外非治疗目的地抑制脑胶质瘤细胞生长、促进脑胶质瘤细胞凋亡的方法。

进一步，所述方法包括如下步骤：采用本发明第一方面所述的药物组合物或本发明第二方面所述的药物制剂体外处理脑胶质瘤细胞。

在本发明的具体实施方案中，本发明通过实验首次发现所述JJH201601和替莫唑胺两者联合对脑胶质瘤的治疗能够产生协同增效的作用，显著抑制脑胶质瘤细胞的生长。因此，所述联合用药物组合物能够作为一种以非治疗目的地抑制脑胶质瘤细胞生长、增殖的抑制剂，以用于科研领域，例如更深入地研究脑胶质瘤细胞生长和代谢机制或行为、筛选治疗脑胶质瘤的潜在药物等。

在本发明的具体实施方案中，本发明通过联合用药CI指数进一步验证了所述替莫唑胺和JJH201601联合的协同增效作用。所述联合用药CI（combinationindex，CI）指数是一种评价药物联合作用的方法，该方法基于药物的量效曲线，通过计算联合用药时的实际效应与理论效应的比值（具体计算方法为本领域技术人员公知的利用CalcuSyn软件计算联合用药指数CI的计算方法），来判断联合用药是否具有协同效应、加性效应或拮抗效应。CI值小于1表示具有协同效应，等于1表示具有加性效应，大于1表示具有拮抗效应。

本发明的第四方面提供了如下任一方面应用，所述应用包括：

(1) JJH201601和替莫唑胺联合在制备用于治疗和/或预防脑胶质瘤的药物组合物中的应用；

(2) JJH201601和替莫唑胺联合在制备用于治疗和/或预防脑胶质瘤的药物制剂中的应用；

(3) JJH201601在制备用于提高替莫唑胺治疗脑胶质瘤的治疗效果的药物中的应用；

(4) 本发明第一方面所述的药物组合物或本发明第二方面所述的药物制剂在制备用于体外抑制脑胶质瘤细胞生长、促进脑胶质瘤细胞凋亡的试剂中的应用。

进一步，所述药物组合物中JJH201601和替莫唑胺的浓度比例为( 0.001 μM –0.0015 μM )：( 1 μM - 27 μM )。

在本发明中，本发明通过实验验证发现所述JJH201601和替莫唑胺的浓度比例为( 0.001 μM – 0.0015 μM )：( 1 μM - 27 μM )时，两者联合用药能够显著抑制LN229细胞系和U87-MG细胞系的生长，产生协同增效的作用，更具体地，所述浓度比例为( 0.001 μM(U87-MG) – 0.0015 μM (LN229) )：( 1 μM (LN229) - 27 μM (U87-MG))，在优选的实施方案中，所述JJH201601和替莫唑胺的浓度分别为0.0015 μM和1 μM。

此外，本发明还提供了一种用于治疗脑胶质瘤的方法，所述方法包括如下步骤：给有需要的受试者施用治疗有效量的本发明第一方面所述的药物组合物或本发明第二方面所述的药物制剂。

在本发明中，所述有效量是指有效产生理想预防、缓解或治疗效果的化合物的量。根据化合物、症状及其严重程度、被治疗哺乳动物的年龄等因素的不同，达到有效量的本发明所述的药物组合物或药物制剂的量也会随之变化，但可由本领域普通技术人员根据其所掌握的本领域的知识结合本发明公开的内容惯常地确定具体用量。

在一些实施方案中，可采用注射给药、局部给药或口服给药的给药方式向受试者施用所述药物组合物或药物制剂。例如，该方法可以包括向受试者施用药物组合物或药物制剂一天三次、一天一次、每两天一次等。在一些实施例中，注射给药可以包括皮下注射、肌内注射、静脉内注射等。在一些实施例中，注射给药可以包括将药物组合物直接注射到病灶或靠近病灶的区域中，在一些实施例中，局部给药可以包括直肠给药、鼻腔给药、耳部给药、髓内给药、关节内给药、胸膜内给药等，或其任何组合。在一些实施例中，可以经由不同给药方式的组合向受试者施用所述药物组合物或药物制剂。

在一些实施方案中，所述受试者为动物，优选为哺乳动物（人类和非人类动物），所述哺乳动物包括但不限于：人、非人灵长类动物（特别是高等灵长类动物，例如猕猴、食蟹猴、短尾猴、熊猴、平顶猴、金丝猴和树鼩）、绵羊、狗、啮齿类动物（例如小鼠或大鼠）、豚鼠、山羊、猪、猫、兔、牛、任何家畜或宠物等，在优选的实施方案中，所述受试者为人。

相对于现有技术，本发明具有的优点和有益效果如下：

本发明首次发现多西他赛衍生物JJH201601和替莫唑胺两者联合使用对人初发性胶质瘤细胞系的增殖发挥了协同抑制作用，即两者联合具有显著的协同增效作用，该联合用药物组合物对肿瘤细胞的抑制效果显著优于单一的JJH201601或替莫唑胺，本发明为脑胶质瘤的治疗提供了有效的药物联用策略，在脑胶质瘤治疗药物的开发这一技术领域具有广阔的应用前景。

附图说明

图1：LN-229细胞联合用药细胞活力检测结果图；

图2：原代胶质瘤细胞联合用药细胞活力检测结果图；

图3：U87-MG细胞联合用药细胞活力检测结果图；

图4：克隆形成实验方法检测替莫唑胺和JJH201601联合使用对胶质瘤生长细胞的影响结果图。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明，具体实施例仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。本领域的普通技术人员可以理解为：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照厂商所建议的条件实施检测。

实施例1 CCK8实验方法检测JJH201601与替莫唑胺联合使用对脑胶质瘤细胞生长的影响

1、实验材料

替莫唑胺（MCE，NSC 362856），JJH201601（江苏吉贝尔药业股份有限公司，批号：191104），CCK8试剂盒（LABLEAD，AF2020-20T）。

2、实验方法

U87-MG、LN-229细胞系以5000个细胞/孔的密度和人原代胶质母细胞瘤细胞（glioma-zzg01，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.45632，保藏日期为2023年07月25日）以10000个细胞/孔的密度接种于96孔板中培养，置于37℃、5% CO₂培养箱中预培养24小时后，将细胞分为4组加药：

（1）单独使用替莫唑胺组，根据细胞系IC10值替莫唑胺的剂量为1 μM（LN-229和原代胶质瘤细胞）和27 μM（U87-MG）；

（2）单独使用JJH201601组，根据细胞系IC10值JJH201601的剂量为0.0015 μM（LN-229和原代胶质瘤细胞）和0.001 μM（U87-MG）；

（3）替莫唑胺和JJH201601联合使用组，根据细胞系IC10值替莫唑胺的剂量为1 μM，JJH201601的剂量为0.0015 μM（LN-229和原代胶质瘤细胞）；替莫唑胺的剂量为27 μM，JJH201601的剂量为0.001 μM（U87-MG）；

（4）对照组，不使用替莫唑胺和JJH201601，即为不加药的DMEM培养基组（含0.1%DMSO）。

继续置于37℃、5% CO₂培养箱中培养。药物作用72小时后，用CCK8试剂检测细胞活力。吸尽孔板中细胞培养液，再向每孔中加入100 μL DMEM培养液（含10 vol%胎牛血清、1vol%的青链霉素）和10 μL CCK8溶液，将孔板再次放入培养箱内孵育1小时，利用酶标仪测定450 nm处的吸光度。细胞存活率＝[(As-Ab)/(Ac-Ab)]×100%，其中，As：实验孔，Ac：对照孔，Ab：空白孔，利用CalcuSyn软件计算联合用药指数CI。

3、实验结果

细胞活力的检测结果如图1-图3所示，结果显示，单独使用替莫唑胺和JJH201601均能在一定程度上抑制胶质瘤细胞的增殖，将替莫唑胺和JJH201601联合使用对胶质瘤细胞系和原代细胞生长的抑制作用均显著增强，取得了协同增效的效果。

本实施例进一步通过联合用药CI指数验证替莫唑胺和JJH201601联合的协同增效作用的结果如表1所示，结果显示，LN229细胞系（CI=0.512）和原代胶质瘤细胞（CI=0.181）的JJH201601和替莫唑胺的CI＜1，表明了二者联合具有协同作用。

表1 LN229和原代胶质瘤细胞联合用药CI指数

实施例2 克隆形成实验方法检测替莫唑胺和JJH201601联合使用对胶质瘤生长细胞的影响

1、实验材料

替莫唑胺（MCE，NSC 362856），JJH201601（江苏吉贝尔药业股份有限公司，批号：191104），结晶紫溶液，4%多聚甲醛。

2、实验方法

LN-229细胞以500个细胞/孔的密度接种于6孔板中培养，将细胞分为4组：

（1）单独使用替莫唑胺组，替莫唑胺的剂量为1 μM；

（2）单独使用JJH201601组，JJH201601的剂量为0.0015 μM；

（3）替莫唑胺和JJH201601联合使用组，替莫唑胺的剂量为1 μM，JJH201601的剂量为0.0015 μM；

（4）对照组为不加药的DMEM培养基组（含0.1% DMSO）。

各组培养基每48小时更换一次，培养14天后固定细胞并染色，拍照并拍摄克隆数目。

3、实验结果

结果如图4所示，结果显示，单独使用替莫唑胺和JJH201601均能在一定程度上抑制胶质瘤细胞的克隆形成能力，将1 μM替莫唑胺和0.0015 μM JJH201601联合使用显著增强了抑制LN-229细胞生长的克隆形成能力，进一步证明了替莫唑胺和JJH201601两者联合具有协同增效的作用。

Claims (11)

1.一种用于治疗脑胶质瘤的联合用药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的活性成分由JJH201601和替莫唑胺组成。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包含药学上可接受的载体和/或辅料。

3.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物中JJH201601和替莫唑胺的浓度比例为( 0.001 μM – 0.0015 μM )：( 1 μM - 27 μM )。

4.一种药物制剂，其特征在于，所述药物制剂包含权利要求1-3中任一项所述的药物组合物。

5.根据权利要求4所述的药物制剂，其特征在于，所述药物制剂的剂型包括注射给药剂型、腔道给药剂型或皮肤给药剂型。

6.根据权利要求5所述的药物制剂，其特征在于，所述腔道给药剂型包括呼吸道给药剂型。

7.JJH201601和替莫唑胺联合在制备用于治疗脑胶质瘤的药物组合物中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述药物组合物中JJH201601和替莫唑胺的浓度比例为( 0.001 μM – 0.0015 μM )：( 1 μM - 27 μM )。

9.JJH201601和替莫唑胺联合在制备用于治疗脑胶质瘤的药物制剂中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述药物制剂中JJH201601和替莫唑胺的浓度比例为( 0.001 μM – 0.0015 μM )：( 1 μM - 27 μM )。

11.权利要求1-3中任一项所述的药物组合物或权利要求4-6中任一项所述的药物制剂在制备用于体外抑制脑胶质瘤细胞生长和/或促进脑胶质瘤细胞凋亡的试剂中的应用。