CN110433160A

CN110433160A - 一种治疗肝纤维化的化合物及其应用

Info

Publication number: CN110433160A
Application number: CN201910772270.7A
Authority: CN
Inventors: 卢伟强; 章涵堃; 姜兴武; 陈思; 蒋蓓尔; 刘明耀
Original assignee: Shanghai Bioray Biotechnology Co Ltd; East China Normal University
Current assignee: Shanghai Bioray Biotechnology Co Ltd; East China Normal University
Priority date: 2019-08-21
Filing date: 2019-08-21
Publication date: 2019-11-12

Abstract

本发明属于医药制剂，具体公开了一种治疗肝纤维化的化合物QZ‑1‑121。本发明通过动物实验证实，QZ‑1‑121能够有效减轻胆管结扎诱导的小鼠肝纤维化和四氯化碳诱导的肝纤维化，其功效主要表现在能够减轻纤维化部位炎性细胞的浸润以及胶原蛋白的沉积。本发明在抗肝纤维化方面效果显著，可以明显抑制肝纤维化的发生和发展，可用于制备抗肝纤维化、防治肝硬化的药物。

Description

一种治疗肝纤维化的化合物及其应用

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种治疗肝纤维化的化合物及其应用。

背景技术

肝脏疾病是严重危害人类健康的慢性疾病，据统计我国肝炎患者有近一亿人，而在普通人群中，非酒精性脂肪肝是最常见的慢性肝脏疾病，流行率约为25％-40％，其中约有5％-10％会进展为肝硬化。肝纤维化是肝硬化等多种急慢性肝病进展的关键过程之一，也是肝癌的最主要的风险因素。肝癌是世界范围内死亡率最高的癌症，据国家癌症中心于2017年5月31日发布的《2017年中国肿瘤登记年报》显示：目前我国肝癌患者数量正以惊人的速度不断增长。而肝癌的发病进程一般包括酒精、病毒以及其他致病因素引起急、慢性肝损伤，肝脏在持续损伤及强烈的炎症反应条件下，会导致组织修复过度，使胶原纤维合成和降解的平衡被打破，引起大量的细胞外基质蛋白在肝脏内过度累积，从而引起肝纤维化、肝硬化并最终可能发展为肝癌，这种发病模式是我国肝癌主要发病模式。

肝纤维化是肝炎和非酒精性脂肪肝等多种慢性肝病向肝硬化发展的必经之路，因此早期预防肝纤维化可以减缓多种肝病的进展。大量的动物实验和临床试验已证明，肝纤维化是一个可逆的过程。改善肝纤维化不仅可以阻止肝细胞炎症性坏死，减少肝脏代谢失常，也可以减缓肝硬化和肝癌的进展，从而有效地增加病人的存活时间并改善病人的生活质量。肝纤维化是一个全球性的问题，然而，到目前为止临床上仍没有一个能有效地逆转或阻止肝纤维化的特异性药物。因此，急需开发新型的抗肝纤维化药物来满足临床上的迫切需求。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供用于治疗肝纤维化的化合物。

本发明提供了化合物QZ-1-121在制备抗肝纤维化药物中的应用。

本发明所述的药物为抗肝纤维化药物，命名为QZ-1-121，所述QZ-1-121的分子式为：C₁₇H₂₅N₃O₂S，结构如式(1)所示：

本发明中，所述QZ-1-121通过抑制炎性介质生成或浸润，从而减轻肝脏炎症。

其中，所述炎性介质为TNF-α，TGF-β。

本发明中，所述QZ-1-121通过减少胶原沉积，改善纤维化症状。

本发明中，所述QZ-1-121的用药剂量为每千克个体体重施用10-20mg。

本发明还提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含有效量的如式(1)所示的化合物和药学上可接受的载体；

本发明中，所述药物组合物剂型为口服液剂。

本发明还提供了所述药物组合物在制备抗肝纤维化药物中的应用。

本发明中，将所述QZ-1-121注入动物个体(如灌胃)中，所述QZ-1-121的终浓度为10-20mg/kg。优选地，所述QZ-1-121的终浓度为20mg/kg。

利用本发明所述的抗肝纤维化药物，在治疗上进行施用(给药)时，可提供不同的效果。通常，可将抗肝纤维化药物配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的水性载体介质中形成药物组合物。其中，所述水性载体介质为生理盐水、磷酸盐缓冲液、葡萄糖溶液、蒸馏水、甘油、乙醇及其组合。

其中，所述药物组合物的pH值通常约为5-8；优选地，pH值约为6-8，pH值可随被配制物质的性质以及待治疗的病症而有所变化。

本发明的QZ-1-121可以被制成口服制剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。药物组合物宜在无菌条件下制造。活性成分的给药量是治疗有效量，例如每天约10-20mg/kg。具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素。此外，本发明的QZ-1-121还可与其他治疗剂一起使用。

本发明对诱导的肝纤维化动物模型进行了体重监测，并检测了Ⅰ型胶原(collaI)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)，以及组织中羟脯胺酸的含量，实验结果显示，所述QZ-1-121能减轻纤维化部位炎性细胞的浸润以及胶原蛋白的沉积，从而改善纤维化症状。

本发明还提出了QZ-1-121或药物组合物在制备抑制和/或治疗肝纤维化过程中生成的炎性介质的药物中的应用。

其中，所述所述炎性介质为TNF-α，TGF-β。

其中，所述药物用于治疗肝病，所述肝病是指与肝纤维化有关的疾病；所述肝病为慢性肝炎、非酒精性脂肪肝、肝硬化或肝癌及由于肝损伤引起的疾病。

其中，所述药物能够治疗炎性相关疾病，包括免疫调节类疾病、炎性神经痛、神经性炎症和神经退行性疾病。

所述免疫调节类疾病包括免疫缺陷病、自身免疫病和过敏反应等。

本发明还提出了QZ-1-121或药物组合物在制备减少和/或治疗肝纤维化过程中沉积的胶原蛋白的药物中的应用。

其中，所述QZ-1-121或药物组合物用于降低血清中ALT、AST以及总胆红素的表达量。

本发明的有益效果包括：本发明提供了QZ-1-121或药物组合物在制备抗肝纤维化药物中的应用。QZ-1-121或药物组合物能够明显抑制肝纤维化。本发明将QZ-1-121作为新的抗肝纤维化药物或者其辅助成分进行开发，抗肝纤维化效果明显，性质稳定，将为肝纤维化治疗提供了一种新的途径和手段。

附图说明

图1为本发明实施例1H&E染色的对照组与给予QZ-1-121动物肝脏组织病理图；

图2为本发明实施例1的天狼星红染色的对照组与给予QZ-1-121动物肝脏组织病理图；

图3为本发明实施例1小鼠血清中肝功能指标，包括谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)以及总胆红素(T-BIL)；

图4为本发明实施例1QZ-1-121减少小鼠肝纤维化相关标志物的量；

图5为本发明实施例1QZ-1-121减少小鼠肝脏内羟脯氨酸的量；

图6为本发明实施例2H&E染色的对照组与给予QZ-1-121动物肝脏组织病理图；

图7为本发明实施例2的天狼星红染色的对照组与给予QZ-1-121动物肝脏组织病理图；

图8为本发明实施例2小鼠血清中肝功能指标，包括谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)以及总胆红素(T-BIL)；

图9为本发明实施例2QZ-1-121减少小鼠肝纤维化相关标志物的量；

图10为本发明实施例2QZ-1-121减少小鼠肝脏内羟脯氨酸的量。

具体实施方式

结合以下具体实施例，对本发明作进一步的详细说明，本发明的保护内容不局限于以下实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求书为保护范围。实施本发明的过程、条件、试剂、实验方法等，除以下专门提及的内容之外，均为本领域的普遍知识和公知常识，本发明没有特别限制内容。

实施例1QZ-1-121减轻四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化

取10-12周龄雄性Balb/c小鼠40只，随机分成4组(每组10只，但实验过程中小鼠有个别死亡)，分别为对照组，造模组，造模+QZ-1-12110mg/kg治疗组，造模+QZ-1-12120mg/kg治疗组。实验小鼠每周两次按照0.5μL/g的剂量腹腔注射CCl₄(先将CCl₄按照1：4溶于橄榄油，然后每克体重注射2.5μL溶液)作为造模组，对照组只注射橄榄油。诱导两周后开始使用药物治疗，给小鼠每天口服不同剂量的QZ-1-121(10mg/kg和20mg/kg)，并同时每周注射两次CCl₄溶液，持续四周。期间每周检测体重变化。药物治疗四周后处死小鼠，取血液检测血清中肝功能相关的生化指标，同时固定肝脏，进行组织形态学染色、胶原染色以及免疫组化染色，评价小鼠肝纤维化程度以及药物治疗效果。

结果显示：在经过化合物QZ-1-121治疗后，小鼠的肝脏肿大有一定的缓解。同时，在测量了各组小鼠血清中与肝功能相关的指标后，包括谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)以及总胆红素(T-BIL)，结果表明化合物QZ-1-121对四氯化碳诱导的小鼠肝损伤有所缓解。H&E染色结果表明，在四氯化碳诱导后，四氯化碳诱导的小鼠肝细胞水肿性死亡数量显著增多，同时细胞核染色较深的淋巴细胞大量浸润到肝细胞之间，而QZ-1-121治疗后可以显著减少肝脏淋巴细胞的浸润，并能减少肝细胞的水肿性坏死。天狼星红染色结果表明化合物QZ-1-121能剂量依赖的减少胶原在肝脏内的沉积，造模对照组天狼星红染色阳性区域为16.0％，10mg/kg剂量治疗后，天狼星红阳性区域为5.0％，已经有显著差异，在20mg/kg的剂量下，天狼星红阳性面积仅为3.0％，抗纤维化作用十分显著。另外，免疫组化结果表明，四氯化碳诱导后，肝脏内α-SMA的表达量显著上升，QZ-1-121减轻四氯化碳和胆管结扎诱导的小鼠肝纤维化效果十分显著。羟化脯氨酸也是肝纤维化的一个重要指标，从测试结果中发现，QZ-1-121治疗小鼠后，能显著降低肝脏内羟脯氨酸的量。以上结果说明QZ-1-121能够剂量依赖性地缓解四氯化碳诱导的肝纤维化，可以降低大多数肝纤维化指标以及减轻肝脏内的炎症。

实施例2QZ-1-121减轻胆管结扎诱导的小鼠肝纤维化症状

选取8-10周龄Balb/c小鼠，手术前饥饿6小时。使用阿弗丁麻醉小鼠，每只小鼠腹腔注射阿弗丁300μL。待小鼠麻醉后在腹部开口找到胆管，造模组使用5号线结扎胆管，为避免结扎线脱落，结扎两次；对照组只打开腹腔，分离胆管，并不结扎。结扎完成后将小鼠内脏恢复原样，然后加入含双抗的生理盐水润洗内脏器官。最后缝合伤口。并将小鼠放置37℃恒温台待其麻醉恢复。术后三天内每天更换垫料，并用碘酒消毒伤口，避免伤口感染。手术后第三天开始给予不同剂量的QZ-1-121(口服，10mg/kg和20mg/kg两个剂量)处理，每天给药持续两周，两周以后处死小鼠取材。检测小鼠血液指标，以及肝纤维化指标，评价药物效果。

结果显示：胆管结扎组的小鼠肝脏明显肿大，重量增加，而给药处理组的小鼠肝脏明显小于对照组，差异极显著。同时，肝重指数也有一定的降低，说明QZ-1-121能在一定程度上保护肝脏免受损伤。同时本发明发现使用QZ-1-121治疗后，血清中ALT与AST，以及T-BIL的量均有所降低。说明化合物QZ-1-121治疗后对肝功能有一定的保护作用。H&E染色结果表明胆管结扎后肝脏中炎症相关的淋巴细胞浸润明显增多，而使用QZ-1-121治疗后，能显著减轻肝脏中炎症相关的淋巴细胞的浸润。而且肝脏切片中正常形态的肝实质细胞比胆管结扎组明显增多，水肿性死亡的细胞数量显著降低。而从对小鼠肝脏切片胶原染色的结果来看，QZ-1-121的抗纤维化作用更为明显，QZ-1-121治疗组的小鼠肝脏内的胶原沉积量显著减少，对照组的胶原染色面积为9.1％，而10mg/kg治疗组的小鼠肝脏切片胶原染色阳性面积为3.7％，20mg/kg治疗组的胶原染色阳性面积仅为1.8％，几乎接近正常水平。从统计学分析来看，QZ-1-121无论是在10mg/kg剂量，还是20mg/kg剂量作用下，抗纤维化效果十分显著。从免疫组化的结果可知，在胆管结扎诱导的小鼠肝纤维化模型中，α-SMA的总体表达量也有显著降低。另外，对肝脏中羟脯氨酸的含量进行测定，结果表明，化合物QZ-1-121处理小鼠后，能明显减少肝脏组织中羟脯氨酸的含量。进一步说明了QZ-1-121能抑制胆管结扎诱导的肝纤维化。

本发明保护内容不局限于以上实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求书为保护范围。

Claims

1.化合物QZ-1-121在制备抗肝纤维化药物中的应用，其特征在于，所述QZ-1-121的分子式为：C₁₇H₂₅N₃O₂S，其结构如式(1)所示：

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述QZ-1-121通过抑制炎性介质生成或浸润，从而减轻肝脏炎症；或，所述QZ-1-121通过减少胶原沉积，改善纤维化症状。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述炎性介质为TNF-α，TGF-β。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述QZ-1-121的用药剂量为每千克个体体重施用10-20mg。

5.一种药物组合物，其特征在于，其含有活性成分QZ-1-121及药学上可接受的载体，其中，所述QZ-1-121的结构如式(1)所示：

6.化合物QZ-1-121或如权利要求5所述的组合物在制备抑制和/或治疗肝纤维化过程中生成的炎性介质的药物中的应用，其特征在于，所述QZ-1-121的结构如式(1)所示：

7.QZ-1-121或如权利要求5所述的组合物在制备减少和/或治疗肝纤维化过程中沉积的胶原蛋白的药物中的应用，其特征在于，所述QZ-1-121的结构如式(1)所示：

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述药物用于降低血清中ALT、AST以及总胆红素的表达量。

9.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述药物用于治疗肝病，所述肝病是指与肝纤维化有关的疾病。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述肝病为慢性肝炎、非酒精性脂肪肝、肝硬化或肝癌及由于肝损伤引起的疾病。

11.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述药物能够治疗炎性相关疾病，包括免疫调节类疾病、炎性神经痛、神经性炎症和神经退行性疾病。