JPH04187634A

JPH04187634A - リポソーム製剤

Info

Publication number: JPH04187634A
Application number: JP31738590A
Authority: JP
Inventors: Eiji Hayakawa; 栄治早川; Toshihito Hosokawa; 細川　俊仁; Yasuki Katou; 泰己加藤; Kunio Ito; 邦雄伊藤
Original assignee: Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd
Current assignee: KH Neochem Co Ltd
Priority date: 1990-11-21
Filing date: 1990-11-21
Publication date: 1992-07-06

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】産業上の利用分野本発明は、マイトマイシンＣを封入してなる温度感受性
リポソーム製剤に関する。本発明のリポソームは、特に
癌治療を目的とする温熱療法との併用に利用される。

従来の技術腫瘍部位を加温することにより癌を治療する療法は、物
理工学、電気化学工学の分野の進歩にともなう加温装置
の発達によりその効果が期待されている。また、温熱療
法と化学療法との併用による薬効増強も期待され、プレ
オマインン、アトリアマイノン、マイトマイシンＣなど
の制癌剤が高温との併用により増強効果を示すことが知
られてし）る二癌と化学療法８．１４７　　（１９８１
）二。

一方、リポソームは、生理活性物質の薬物送達ンステム
として注目されているキャリアーの−ってあり、マイト
マイシンＣのリポソーム化についても知ちれている〔Ｊ
、　Ｐｈａｒｍ、　Ｐｈａｒｍａｃａｌ、、　３７゜４
６１（１９８５）　〕。しかし、該方法においては、マ
イトマイシンＣの内包率が０．１％ときわめて低いもの
である。このリポソームに温熱療法の温度において内包
薬物を放出する機能を付加したものが温度感受性リポソ
ームであり、温熱療法と温度感受性リポソームとを組合
わせた報告〔例えば、（：ａｎｃｅｒＴｒｅａｔｍｅｎ
ｔ　Ｒｅｐｏｒｔｓ、７１．１０５３（１９Ｂ？）　：
　Ｂｉｏｃｈｅｍ。

Ｂｉｏｐｈｙｓ、＾ｃｔａ、　　９７８　、１８５（１
９８９）　）もあるが、マイトマイシンＣについては知
られていない。

発明が解決しようとする課題マイトマイシンＣは強し）抗ＩＩ！瘍活性と広い抗腫瘍
スペクトルを有し、現在癌の化学療法剤として臨床的に
広く用５）ちれて′ハる。しがしながら、例えば骨髄毒
性等の副作用を有するため、より毒性のＵ！減が求めろ
れている。

他方、温度感受性リポソームは、加温時に脂質二分子膜
が液晶状態となり、膜の流動性が大きくなるため、内部
に封入した薬物が放出される機能性リポソームであり、
少なし）薬物投与量で腫１８部位に高濃度の薬物を送達
し、治療効果を高めるために有用であり、かつ、副作用
の軽減が期待される。

本発明は、生体内に投与されたマイトマイシンＣを封入
したリポソームが、温熱療法による加温組織内で、封入
マイトマイシンＣを効率よく放出させることを目的とし
た、高い内包率でマイトマイシンＣを封入したリポソー
ム製剤を提供することにある。

諜頌を角ｑ決するた狛の手段本発明は、マイトマイシンＣを封入した温度感受性リポ
ソーム製剤に関する。すなわち、本発明により、膜の相
転移温度が４０〜４５℃であるリポソームにマイトマイ
シンＣを封入したリポソーム製剤が提供される。

本発明のリポソーム製剤において、リポソーム膜組成は
温熱療法の温度でｔｂ転移を引き起こすように、膜の相
転移温度が、４０−４５℃、好ましくは４０〜４３℃と
なる脂質成分て構成される。

この膜の主構成成分としては、飽和脂肪酸アンル基を有
する各種リン脂質（以下、単に「飽和リン脂質」と省略
することがある）が単独あるいは組み合わせて用いられ
る。例えば、グリセロリン脂質の２個のアンル基が炭素
数１０以上、好ましくは１２〜１８の飽和脂肪酸のアン
ル基である、ホスファチジルコリン、ホスファチジルグ
リセロール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスフ
ァチジルセリン、ホスファチジルコリントール、ホスフ
ァチジン酸、水素添加リン脂質等の天然または合成のリ
ン脂質の中から、１種または２種以上の混合物があげち
れる。

本発明のリポソーム製剤は、上述したような膜構成成分
とマイトマイシンＣ溶液を用いて調製される。本発明：
こおいては、温熱療法温度でのターゲティング効果をよ
り高くあげるために、リポソームの形態；まラージ・ユ
ニラメラ・べ／クル（ＬＵＶ）であることが好ましい。

Ｌ　Ｕ　Ｖの作成法には、逆相蒸発法（リバース・フェ
イズ・エバポレーション・ベンクル法：　ＲＥＶ法）　
　ＣＰｒｏｃ。

Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ｌｌ５Ａ、　７５
．４１９４（１９７８））が適用し得る。

ＲＥＶ法によるリポソーム調製方法の一例を以下に示す
。飽和リン脂質を有機溶媒に溶解した液（油相）にマイ
トマイシンＣ溶液（水相）を加え、Ｗ１０エマルション
ヲ調製する。マイトマイシンＣの濃度は０．０２５〜２
，５■／−１好ましくは０．５〜２．０■／１ｎ！であ
り、飽和リン脂質は、マイトマイシン０１重量部に対し
、１０〜５００重量部、好ましくは１５〜５０重量部用
いられる。次に、有機溶媒を留去し、ゲルを形成させ、
さろに有機溶媒を留去することにより、リポソーム製剤
が得ちれる。有機溶媒としては、たとえばンエチルエー
テル、クロロホルムなどが用いろれる。これら有機溶媒
は混合して用いる二ともてきる。

このようにして得ちれるリポソーム製剤は、場合によっ
て１ｉこのまま使用できるが、一般にはリポソーム内に
封入されな’ｉ）ａ離の薬物を除去することが好ましい
。除去方法としては、ゲル濾過法、透析法、遠心分離法
、イオン交換樹脂法（Ｊ、　ＰｈａｒｍＳｃｉ、、　７
５．８３８（１９８６）　：等が適用される。例えば、
ＲＥＶ法によって調製したマイトマイシンＣを封入した
温度感受性リポソームにカチオン交換樹脂であるＤＯＷ
Ｅｘ　５０Ｗ−Ｘ２　（ダウ・ケミカル社、１００〜２
００メツシユ、Ｈ型）を加え、ポルテックスミキサーを
用いて激しく振とう攪拌し、遊離のマイトマイシンＣを
吸着除去する。

リポソームの内殻および外側の水溶液には、緩衝液を構
成する物質、等張化剤、防腐剤、抗酸化剤などを加える
こともできる。

以下の実施例および実験例ｊこより本発明の態様を具体
的に説胡する。

実施例１゜５０ｍｇのジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰ
ＰＣ）を試験管内でクロロホルムとジエチルエーテルの
１２の混合溶液２５祿に溶解した。

一方、水ｊこマイトマイシンＣを溶解し、この液の浸透
圧が生理食塩水の浸透圧出等しくなるようにマンニトー
ルを溶解して、２ｍｇ／雁のマイトマイシンＣを含有し
たマンニトール水溶液を調製した。

この水溶液０７５ｍ１を、上記の飽和リン脂質の溶解液
に加えて、ポルテックスミキサーを用いて激しく振とう
攪拌した後、バス型超音波振とう機で５間振とうし、Ｗ
／○エマルションを作成した。

このようにして得たエマルンヨンを試験管濃縮機にかけ
て、３５℃、減圧下で有機溶媒を除去しＬＵＶを得た。

次いて、得られたＬＵＶに５０ｍｇ（ＩＩ）ＤＯＷＥＸ
　　５０Ｗ−Ｘ２を加え、ポルテックスミキサーを用い
て激しく振とう攪拌した後、ＤＯＷＥＸ　　５０Ｗ−Ｘ
２を濾過して除いた。この時のリポソームのマイトマイ
シンＣ封入率（＊１）は２９．９％であった。戸液０．
３−にマンニトールで浸透圧を生理食塩水と等しくした
リン酸緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ８，８）０．３ｄを加え
、リポソーム懸濁液Ｊ液のｐＨを６〜８に調整した。　
リポソーム膜の相転移温度（＊２Ｎ−！約４０℃であり
、リポソーム粒子径は動的光散乱法により、はぼ２００
ｎｍであった。

＊１　マイトマイシンＣのリポソーム封入率の測定法リポソーム内に封入されてし）るマイトマイシンＣ含量
は、ＤＯＷＥＸ　　５０Ｗ−Ｘ２処理前および処理後の
リポソーム懸濁液それぞれ０２−に５％トリトンＸ−１
００を０．２ｍｌ加えた後、高速液体クロマトグラフィ
ー（ＨＰＬＣ）により測定した。マイトマイシンＣのリ
ポソーム封入率は以下の式より算出した。

＊２　リポソーム膜の相転移温度は、リポソーム懸濁液
１０ρを銀カプセルに測りとり、対照に蒸留水１０城を
用し１て、示差熱分析〔ディファレンンヤル・スキャニ
ング・カロリメトリー（ＤＳＣ）；セイコー〕で測定（
昇温速度；２℃／分）した。

実施例２゜３５ｍｇのＤＰＰＣと１５ｍｇのンパルミトイルホスフ
ァチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）を用い、実施例１と
同様の操作を行いマイトマイシンＣを封入したリポソー
ムを調製した。この時のリポソームのマイトマイシンＣ
の封入率は３６．９％であり、リポソーム膜の相転移温
度は約４２℃であった。また、リポソーム粒子径はほぼ
２００ｎｍであった。

実施例３゜７００ｍｇのＤＰＰＣと３００■のＤＰＰＧを５００−
のナス型フラスコ内でクロロホルムとジエチルエーテル
の１＝２の混合溶液９０艷に溶解した。

一方、水にマイトマイシンＣを溶解し、この液の浸透圧
が生理食塩水の浸透圧と等しくなるようにマンニトール
を溶解して、２ｍｇ／ｍｆのマイトマイシンＣ含有７ン
ニトール水溶液を調製した。この水溶液３０ｍ１を、上
記の飽和リン脂質の溶解液に加えて、バス型超音波振と
う機で５分間振とうし、Ｗ１０エマルンヨンを作成した
。このようにして得タエマルンヨンをロータリーエバポ
レーターにかけて、３５℃、減圧下で有機溶媒を除去し
ＬＵＶを得た。次′、）で、得られたＬＵＶに２４ｇの
ＤＯＷＥＸ　　５０Ｗ−Ｘ２を加え、ポルテックスミキ
サーを用□ハて激しく振とう攪拌した後、ＤＩ］ＷＥＸ
５０Ｗ−Ｘ２を濾過して除いた。この時のリポソームの
マイトマイシンＣの封入率は３７３％であった。戸液２
５ｄにマンニトールで浸透圧を生理食塩水と等しくした
リン酸緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ８，８）２５−を加え、
リポソーム懸濁液のｐＨを６〜８に調整した。リポソー
ム膜の相転移温度は約４０℃であり、リポソーム粒子径
はほぼ４００ｎｍであった。

実験例実施例１および２で得られたマイトマイシンＣ耐大温度
感受性リポソームを用いて温度依存薬物放出試験を行っ
た。すなわち、リポソーム腎濁液０．６−をマンニット
で浸透圧を生理食塩水と等しくしたＩＪ　ン酸緩衝液（
１０ｍＭ、ｐＨ７，４）３．９−に分散した。これを０
．４−ずつ分注し、３４℃、３６℃、３８℃、４０℃、
４２℃、４４℃でそれぞれ４分間インキユベーンヨンし
マイトマイシンＣの封入率を測定することにより放出量
を算出した。

結果を第１表に示す。

第　　　１　　　表マイトマイシンＣ放出量（％）温度（ｔ）　　３４　　３６　　３８　　４０　　４２
　　４４実施例１　１，３　１６．０　２５．４　６７
．８　７４．２　７４．８実施例２　１１．４　１０．
３　１７．８１７．６　７５．７　８３．５第１表に示
されるように、マイトマイシンＣ封入温度感受性リポソ
ームは生理的温度である３７℃においては、封入された
マイトマイシンＣのリポソームからの漏出が抑えられ、
温熱療法の４０〜４２℃において優れたマイトマイシン
Ｃの放出を示した。

発明の効果本発明により、癌治療を目的とする温熱療法との併用に
有用であるマイトマイシンＣを封入した温度感受性リポ
ソーム製剤が提供される。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）膜の相転移温度が４０〜４５℃であるリポソーム
にマイトマイシンＣを封入したリポソーム製剤。
（２）リポソーム膜の主構成成分が、飽和脂肪酸のアシ
ル基を有するリン脂質である請求項（１）記載のリポソ
ーム製剤。