JP2001055343A - リポソーム - Google Patents
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- JP2001055343A JP2001055343A JP11312378A JP31237899A JP2001055343A JP 2001055343 A JP2001055343 A JP 2001055343A JP 11312378 A JP11312378 A JP 11312378A JP 31237899 A JP31237899 A JP 31237899A JP 2001055343 A JP2001055343 A JP 2001055343A
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- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】能動的ターゲッティング性を有し、かつ血中で
の安定性が確保され、プロテオグリカンの産生を伴うよ
うな疾患、特に腎疾患の診断および／または治療に有効
に用いられるリポソームの提供。 【解決手段】薬物を内封するリポソームであって、その
膜構成成分が、（１）生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる
塩基性化合物、（２）親水性高分子の脂質誘導体、およ
び（３）リポソームを構成する脂質からなり、これらの
構成比が、（３）に対して（１）が１〜２０ｍｏｌ％、
また（１）と（３）の和に対して（２）が０．２〜５ｍ
ｏｌ％であることを特徴とするリポソーム。
の安定性が確保され、プロテオグリカンの産生を伴うよ
うな疾患、特に腎疾患の診断および／または治療に有効
に用いられるリポソームの提供。 【解決手段】薬物を内封するリポソームであって、その
膜構成成分が、（１）生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる
塩基性化合物、（２）親水性高分子の脂質誘導体、およ
び（３）リポソームを構成する脂質からなり、これらの
構成比が、（３）に対して（１）が１〜２０ｍｏｌ％、
また（１）と（３）の和に対して（２）が０．２〜５ｍ
ｏｌ％であることを特徴とするリポソーム。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、能動的ターゲッテ
ィング性を有し、かつ血中での安定性が確保されている
リポソームであって、さらにそれが、病変部の組織およ
び／または臓器において、様々な種類のプロテオグリカ
ンの産生を伴うような疾患、特に腎疾患の診断および／
または治療に用いられるリポソームに関する。
ィング性を有し、かつ血中での安定性が確保されている
リポソームであって、さらにそれが、病変部の組織およ
び／または臓器において、様々な種類のプロテオグリカ
ンの産生を伴うような疾患、特に腎疾患の診断および／
または治療に用いられるリポソームに関する。
【０００２】
【従来の技術】近年、薬物を効率よく目的臓器へ分布さ
せるいわゆるターゲッティング技術に基づくドラッグデ
リバリーシステム（ＤＤＳ）の研究が盛んになってきて
いる。リポソームは内部に薬物を封入させることができ
ることから、このようなＤＤＳとして最も研究されてい
るものの一つである。
せるいわゆるターゲッティング技術に基づくドラッグデ
リバリーシステム（ＤＤＳ）の研究が盛んになってきて
いる。リポソームは内部に薬物を封入させることができ
ることから、このようなＤＤＳとして最も研究されてい
るものの一つである。
【０００３】しかしながら、これらリポソームの実用化
に際しては、克服すべき様々な問題点があり、中でも生
体側の異物認識機構からの回避や、体内動態の制御の困
難さが問題となってきた。すなわち、リポソームが血液
中のオプソニンなどをはじめとした各種血しょう蛋白質
との相互作用により、血液中で凝集を引き起こしたり、
肝臓、脾臓等の細網内皮系組織（ＲＥＳ）で捕捉される
ため、リポソームを標的とする組織や細胞へ選択的に送
達することが困難な状況であった。
に際しては、克服すべき様々な問題点があり、中でも生
体側の異物認識機構からの回避や、体内動態の制御の困
難さが問題となってきた。すなわち、リポソームが血液
中のオプソニンなどをはじめとした各種血しょう蛋白質
との相互作用により、血液中で凝集を引き起こしたり、
肝臓、脾臓等の細網内皮系組織（ＲＥＳ）で捕捉される
ため、リポソームを標的とする組織や細胞へ選択的に送
達することが困難な状況であった。
【０００４】近年、リポソームの表面をポリエチレング
リゴ−ル（ＰＥＧ）等の親水性高分子で被覆することに
より、オプソニンなどをはじめとした各種血しょう蛋白
質などのリポソーム表面への吸着を防止して、リポソー
ムの血中での凝集を防止し、またＲＥＳによる捕捉を回
避することが可能となってきた（USP5013556、USP56769
71）。これらの技術を背景にした目標組織へのタ−ゲテ
ィングについての研究は、腫瘍組織、血管透過性亢進部
位、炎症組織、肝臓、脳、リンパ組織等については多く
見受けられるが、これらはすべてＲＥＳによる捕獲を回
避し、血中安定性を高めた結果引き起こされる、いわゆ
る受動的ターゲッティング性による効果によるものであ
り（Advanced Drug Delivery Reviews 24(1997)337-33
4）、目標とする組織への結合能をもつ、いわゆる能動
的ターゲッティング技術によりターゲッティング機能を
強化したリポソームの開発が望まれていた。
リゴ−ル（ＰＥＧ）等の親水性高分子で被覆することに
より、オプソニンなどをはじめとした各種血しょう蛋白
質などのリポソーム表面への吸着を防止して、リポソー
ムの血中での凝集を防止し、またＲＥＳによる捕捉を回
避することが可能となってきた（USP5013556、USP56769
71）。これらの技術を背景にした目標組織へのタ−ゲテ
ィングについての研究は、腫瘍組織、血管透過性亢進部
位、炎症組織、肝臓、脳、リンパ組織等については多く
見受けられるが、これらはすべてＲＥＳによる捕獲を回
避し、血中安定性を高めた結果引き起こされる、いわゆ
る受動的ターゲッティング性による効果によるものであ
り（Advanced Drug Delivery Reviews 24(1997)337-33
4）、目標とする組織への結合能をもつ、いわゆる能動
的ターゲッティング技術によりターゲッティング機能を
強化したリポソームの開発が望まれていた。
【０００５】能動的ターゲッティング技術に関していえ
ば、リポソーム表面を、抗体、抗体フラグメント、アミ
ノ酸、ペプチド、糖類などのターゲット因子で修飾する
研究がされ、またリポソーム表面をカチオン化する技術
などが研究されてきた。特にカチオン化については、遺
伝子導入技術として、遺伝子などを細胞内へ送達する能
力を持つことに加えて、血管内皮が傷害を受けた部分な
どへの集積性が向上するなどから（特開平 7-89874号公
報）好ましい修飾技術の一つとして挙げられる。しかし
ながら、カチオン化リポソームによっては、血中蛋白を
介した凝集などが中性またはアニオン化リポソームより
強く観察され(Biochimica et Biophysica Acta 1280(19
96)149-154) 、そのままでは生体内において能動的ター
ゲッティング性が十分に引き出されなかった。
ば、リポソーム表面を、抗体、抗体フラグメント、アミ
ノ酸、ペプチド、糖類などのターゲット因子で修飾する
研究がされ、またリポソーム表面をカチオン化する技術
などが研究されてきた。特にカチオン化については、遺
伝子導入技術として、遺伝子などを細胞内へ送達する能
力を持つことに加えて、血管内皮が傷害を受けた部分な
どへの集積性が向上するなどから（特開平 7-89874号公
報）好ましい修飾技術の一つとして挙げられる。しかし
ながら、カチオン化リポソームによっては、血中蛋白を
介した凝集などが中性またはアニオン化リポソームより
強く観察され(Biochimica et Biophysica Acta 1280(19
96)149-154) 、そのままでは生体内において能動的ター
ゲッティング性が十分に引き出されなかった。
【０００６】一方で、細胞表面をアニオン性に保ってい
るプロテオグリカンは、カチオン化リポソームとの相互
作用が期待される成分の一つである。多数の臓器（肝
臓、肺、心臓、膵臓、骨髄、動脈）の線維化病変や、大
腸ガンなどの腫瘍、細胞増殖性腎炎、その他炎症疾患な
どの疾患においては、その組織内で、様々な種類のプロ
テオグリカンの過剰産生が起こることが報告されている
（Acta Pathol Jpn,36(6):827,(1986)、FEBS Lett.,24
4:315,(1988) 、J Rheumatol 18(10):1466,(1991)、J D
ent Res 71(9):1587,(1992)）。この生体内の反応は創
傷治癒の過程で起こる過剰修復反応や、腫瘍などでの過
剰な細胞増殖の結果と考えられ、上記に記されたような
疾患の病巣の病理学的指標にもなっている。
るプロテオグリカンは、カチオン化リポソームとの相互
作用が期待される成分の一つである。多数の臓器（肝
臓、肺、心臓、膵臓、骨髄、動脈）の線維化病変や、大
腸ガンなどの腫瘍、細胞増殖性腎炎、その他炎症疾患な
どの疾患においては、その組織内で、様々な種類のプロ
テオグリカンの過剰産生が起こることが報告されている
（Acta Pathol Jpn,36(6):827,(1986)、FEBS Lett.,24
4:315,(1988) 、J Rheumatol 18(10):1466,(1991)、J D
ent Res 71(9):1587,(1992)）。この生体内の反応は創
傷治癒の過程で起こる過剰修復反応や、腫瘍などでの過
剰な細胞増殖の結果と考えられ、上記に記されたような
疾患の病巣の病理学的指標にもなっている。
【０００７】しかしながら、これらプロテオグリカンを
過剰産生している組織および／または臓器への能動的タ
ーゲッティングを目的とした報告はほとんど報告されて
いない。例えば、特開平 8-27030号公報には、生理的ｐ
Ｈ範囲で陽電荷を帯びる塩基性化合物により表面を修飾
した薬物担体が腎臓の皮質部分に集積することが記載さ
れているが、腎糸球体、なかんずく傷害により炎症を引
き起こした腎糸球体や、それに代表されるプロテオグリ
カンを産生する組織および／または臓器に特異的に集積
するようなターゲッティング技術を開示する報告はなか
った。
過剰産生している組織および／または臓器への能動的タ
ーゲッティングを目的とした報告はほとんど報告されて
いない。例えば、特開平 8-27030号公報には、生理的ｐ
Ｈ範囲で陽電荷を帯びる塩基性化合物により表面を修飾
した薬物担体が腎臓の皮質部分に集積することが記載さ
れているが、腎糸球体、なかんずく傷害により炎症を引
き起こした腎糸球体や、それに代表されるプロテオグリ
カンを産生する組織および／または臓器に特異的に集積
するようなターゲッティング技術を開示する報告はなか
った。
【０００８】病変部において、様々な種類のプロテオグ
リカンの産生が亢進することが報告されている疾患の一
つに糸球体腎炎がある（Clin Exp Immunol 108:69,(199
7)、Kidney International 49: supple 54, s55(1996)
、J Am Soc Nephrol 2:s88(1992)）。この糸球体腎炎
を例にとるだけでも、プロテオグリカンを過剰産生する
組織および／または臓器へ薬物をターゲティングするこ
との重要性は容易に推定される。
リカンの産生が亢進することが報告されている疾患の一
つに糸球体腎炎がある（Clin Exp Immunol 108:69,(199
7)、Kidney International 49: supple 54, s55(1996)
、J Am Soc Nephrol 2:s88(1992)）。この糸球体腎炎
を例にとるだけでも、プロテオグリカンを過剰産生する
組織および／または臓器へ薬物をターゲティングするこ
との重要性は容易に推定される。
【０００９】1996年の日本透析医学会の資料によれば、
腎不全により透析に導入される患者は、約２万７千人と
されており、その約５０％が慢性腎症、約３０％が糖尿
病性腎症によるものとされている。慢性腎症、糖尿病性
腎症ともにその原発性疾患は糸球体腎炎によるものであ
り、糸球体腎炎の有効な治療法が確立されれば、これら
の患者は透析生活を送る必要はなくなる。しかし現在に
至るまで糸球体腎炎の有効な治療法は見いだされていな
い。
腎不全により透析に導入される患者は、約２万７千人と
されており、その約５０％が慢性腎症、約３０％が糖尿
病性腎症によるものとされている。慢性腎症、糖尿病性
腎症ともにその原発性疾患は糸球体腎炎によるものであ
り、糸球体腎炎の有効な治療法が確立されれば、これら
の患者は透析生活を送る必要はなくなる。しかし現在に
至るまで糸球体腎炎の有効な治療法は見いだされていな
い。
【００１０】例えば、ＩｇＡ腎症と呼ばれる糸球体腎炎
は、日本人に最も多く認められる糸球体腎炎であり、患
者は日本だけで推定３０万人近くに数えられ、成人の糸
球体腎炎の４０％前後、小児のそれの３０％近くを占め
ると言われている。最近我が国で行われた２０年間のフ
ォローアップスタディの結果、ＩｇＡ腎症の約４０％、
年間で推定５−６千人（平成７年度）が末期腎不全に至
り透析に導入されることが判明し、ＩｇＡ腎症に対する
特異的治療法の開発がこれまでに増して世界的に急務と
考えられるようになっている。しかし、その治療には、
充分な手段がなく、毎年５千名近い患者が透析に導入さ
れてきた。
は、日本人に最も多く認められる糸球体腎炎であり、患
者は日本だけで推定３０万人近くに数えられ、成人の糸
球体腎炎の４０％前後、小児のそれの３０％近くを占め
ると言われている。最近我が国で行われた２０年間のフ
ォローアップスタディの結果、ＩｇＡ腎症の約４０％、
年間で推定５−６千人（平成７年度）が末期腎不全に至
り透析に導入されることが判明し、ＩｇＡ腎症に対する
特異的治療法の開発がこれまでに増して世界的に急務と
考えられるようになっている。しかし、その治療には、
充分な手段がなく、毎年５千名近い患者が透析に導入さ
れてきた。
【００１１】現在日本において、ネフローゼ症候群や急
速進行性糸球体腎炎に対して積極的に用いられて有効性
が確立しているとされるステロイド療法は、ＩｇＡ腎症
に関しても、１０年間の臨床での有用性評価の結果、進
行性ＩｇＡ腎症の早期に２−３年間継続的に使用するこ
とにより長期的に腎機能を保持し得る可能性が報告され
ている。
速進行性糸球体腎炎に対して積極的に用いられて有効性
が確立しているとされるステロイド療法は、ＩｇＡ腎症
に関しても、１０年間の臨床での有用性評価の結果、進
行性ＩｇＡ腎症の早期に２−３年間継続的に使用するこ
とにより長期的に腎機能を保持し得る可能性が報告され
ている。
【００１２】しかし、一方で、このような慢性疾患に一
定期間にわたって継続的に投与する場合には、副作用が
大きな問題となり、成人においては動脈硬化症、骨粗鬆
症、免疫能低下、小児においては低成長などの問題が回
避不可能である。その結果、患者のＱＯＬ（quality of
life ）が低下するだけでなく、副作用により投与継続
ができないこと、および、特に長期間の投与が不可能で
あること等によりその有効性が十分にあげ得ないことが
問題となっている。
定期間にわたって継続的に投与する場合には、副作用が
大きな問題となり、成人においては動脈硬化症、骨粗鬆
症、免疫能低下、小児においては低成長などの問題が回
避不可能である。その結果、患者のＱＯＬ（quality of
life ）が低下するだけでなく、副作用により投与継続
ができないこと、および、特に長期間の投与が不可能で
あること等によりその有効性が十分にあげ得ないことが
問題となっている。
【００１３】この問題を解決するためには、上述したよ
うな副作用の発現しない投与量で、薬効のみを発現させ
る工夫が必要であり、そのためには傷害され炎症を引き
起こした糸球体に効率よく薬物を送達する工夫が望まれ
る。
うな副作用の発現しない投与量で、薬効のみを発現させ
る工夫が必要であり、そのためには傷害され炎症を引き
起こした糸球体に効率よく薬物を送達する工夫が望まれ
る。
【００１４】同様なことは、病変部の組織および／また
は臓器にプロテオグリカンが過剰に産生されるような、
他の疾患についてもあてはめられ、強い薬効を示しなが
らも、その毒性により使用できない薬物を目的臓器に積
極的にターゲッティングすることによって、副作用を発
現させず、十分な治療効果を得ることが求められてい
る。
は臓器にプロテオグリカンが過剰に産生されるような、
他の疾患についてもあてはめられ、強い薬効を示しなが
らも、その毒性により使用できない薬物を目的臓器に積
極的にターゲッティングすることによって、副作用を発
現させず、十分な治療効果を得ることが求められてい
る。
【００１５】従って、この問題は、傷害され炎症を引き
起こした腎臓糸球体に代表されるような、プロテオグリ
カンの産生を伴う組織および／または臓器に効率的に集
積するようなリポソームに薬物を封入し、薬物をこれら
組織に効率的に送達させ持続的に作用させることにより
解決される。このことは、能動的ターゲッティング性を
有し、かつ血中での安定性が確保されているリポソーム
であって、さらにそれが、様々な種類のプロテオグリカ
ンの産生を伴うような病変部の組織および／または臓器
への集積性を有するリポソームを実現することにより解
決される。
起こした腎臓糸球体に代表されるような、プロテオグリ
カンの産生を伴う組織および／または臓器に効率的に集
積するようなリポソームに薬物を封入し、薬物をこれら
組織に効率的に送達させ持続的に作用させることにより
解決される。このことは、能動的ターゲッティング性を
有し、かつ血中での安定性が確保されているリポソーム
であって、さらにそれが、様々な種類のプロテオグリカ
ンの産生を伴うような病変部の組織および／または臓器
への集積性を有するリポソームを実現することにより解
決される。
【００１６】
【発明が解決しようとする課題】即ち、本発明は、能動
的ターゲッティング性を有し、かつ血中での安定性が確
保されているリポソームであって、さらにそれが、病変
部の組織および／または臓器において、様々な種類のプ
ロテオグリカンの産生を伴うような疾患、特に腎疾患の
診断および／または治療に用いられるリポソームを提供
することを課題とする。
的ターゲッティング性を有し、かつ血中での安定性が確
保されているリポソームであって、さらにそれが、病変
部の組織および／または臓器において、様々な種類のプ
ロテオグリカンの産生を伴うような疾患、特に腎疾患の
診断および／または治療に用いられるリポソームを提供
することを課題とする。
【００１７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、リポソー
ムの体内動態を制御するファクターについて研究を進め
ていく過程において、驚くべきことに、一定範囲の配合
比で、生理的ｐＨ範囲において陽電荷を帯びる塩基性化
合物を組み込み、さらにその表面に、その量を一定の範
囲に制御された親水性高分子を結合させたリポソームに
おいて、その血液中での安定性が確保され、肝臓等にお
ける捕捉も回避され、血中滞留性が向上するにもかかわ
らず、病変部におけるプロテオグリカンの認識性が飛躍
的に向上する性質を見出した。
ムの体内動態を制御するファクターについて研究を進め
ていく過程において、驚くべきことに、一定範囲の配合
比で、生理的ｐＨ範囲において陽電荷を帯びる塩基性化
合物を組み込み、さらにその表面に、その量を一定の範
囲に制御された親水性高分子を結合させたリポソームに
おいて、その血液中での安定性が確保され、肝臓等にお
ける捕捉も回避され、血中滞留性が向上するにもかかわ
らず、病変部におけるプロテオグリカンの認識性が飛躍
的に向上する性質を見出した。
【００１８】さらに、その主要粒度範囲が９０〜２００
nmである場合には、生体内においてプロテオグリカンが
過剰産生する組織および／または臓器、特に腎糸球体へ
の集積性と選択性ならびに効果の持続性が向上すること
を見出した。ここで、主要粒度範囲とは、レーザー散乱
光によりリポソームの粒径を測定した場合の、散乱強度
分布によりリポソームの粒径を測定した場合の、散乱強
度分布において７０％以上が占める粒度の範囲をいう。
nmである場合には、生体内においてプロテオグリカンが
過剰産生する組織および／または臓器、特に腎糸球体へ
の集積性と選択性ならびに効果の持続性が向上すること
を見出した。ここで、主要粒度範囲とは、レーザー散乱
光によりリポソームの粒径を測定した場合の、散乱強度
分布によりリポソームの粒径を測定した場合の、散乱強
度分布において７０％以上が占める粒度の範囲をいう。
【００１９】本発明者は、上記の新規知見に基づき更に
鋭意研究を重ね、本発明を完成した。即ち、本発明は、
薬物を内封するリポソームであって、その膜構成成分
が、（１）生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる塩基性化合
物、（２）親水性高分子の脂質誘導体、および（３）リ
ポソームを構成する脂質からなり、これらの構成比が、
（３）に対して（１）が１〜２０ｍｏｌ％、また（１）
と（３）の和に対して（２）が０．２〜５ｍｏｌ％であ
ることを特徴とするリポソームを提供する。
鋭意研究を重ね、本発明を完成した。即ち、本発明は、
薬物を内封するリポソームであって、その膜構成成分
が、（１）生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる塩基性化合
物、（２）親水性高分子の脂質誘導体、および（３）リ
ポソームを構成する脂質からなり、これらの構成比が、
（３）に対して（１）が１〜２０ｍｏｌ％、また（１）
と（３）の和に対して（２）が０．２〜５ｍｏｌ％であ
ることを特徴とするリポソームを提供する。
【００２０】さらに好ましくは、その膜構成成分が、
（１）生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる塩基性化合物、
（２）親水性高分子の脂質誘導体、および（３）リポソ
ームを構成する脂質からなり、これらの構成比が、
（３）に対して（１）が５〜１５ｍｏｌ％、また（１）
と（３）の和に対して（２）が０．２〜５ｍｏｌ％であ
ることを特徴とするリポソームである。
（１）生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる塩基性化合物、
（２）親水性高分子の脂質誘導体、および（３）リポソ
ームを構成する脂質からなり、これらの構成比が、
（３）に対して（１）が５〜１５ｍｏｌ％、また（１）
と（３）の和に対して（２）が０．２〜５ｍｏｌ％であ
ることを特徴とするリポソームである。
【００２１】前記、生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる塩
基性化合物が、アミジノ基を有する塩基性化合物、アミ
ノ基を２個以上有する塩基性化合物、ピペリジン環を有
する塩基性化合物、４級アミンを有する塩基性化合物で
あることがこのましく、さらには、下記式１〜４のいず
れかに記載されたものであるのが好ましい。
基性化合物が、アミジノ基を有する塩基性化合物、アミ
ノ基を２個以上有する塩基性化合物、ピペリジン環を有
する塩基性化合物、４級アミンを有する塩基性化合物で
あることがこのましく、さらには、下記式１〜４のいず
れかに記載されたものであるのが好ましい。
【化５】
【００２２】なお、式１の化合物はWO97/42166に、式２
および３の化合物は特開平9-263579号公報に、式４はCh
em.Papers,39(1),125-134(1985) に記載の化合物である
が、これらの公報には、能動的ターゲッティング性を有
し、かつ血中での安定性が確保されているリポソームで
あって、さらにそれが、病変部の組織および／または臓
器において、様々な種類のプロテオグリカンの産生を伴
うような疾患、特に腎疾患の診断および／または治療に
用いられるリポソームについての記載は一切されていな
い。
および３の化合物は特開平9-263579号公報に、式４はCh
em.Papers,39(1),125-134(1985) に記載の化合物である
が、これらの公報には、能動的ターゲッティング性を有
し、かつ血中での安定性が確保されているリポソームで
あって、さらにそれが、病変部の組織および／または臓
器において、様々な種類のプロテオグリカンの産生を伴
うような疾患、特に腎疾患の診断および／または治療に
用いられるリポソームについての記載は一切されていな
い。
【００２３】
【化６】 （式１中、Ａは芳香環を表す。Ｒ1 及びＲ2 は炭素数１
０〜２５のアルキル基またはアルニケル基を表し、Ｒ1
およびＲ2 は同一であっても異なっていてもよい。Ｘ1
およびＸ2 は−Ｏ−、−Ｓ−、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯ
−、−ＣＯＮＨ−または−ＮＨＣＯ−を表し、Ｘ1 およ
びＸ2 は同一であっても異なっていてもよい。ｍは０ま
たは１、ｎは０または１〜６の整数を表す。）
０〜２５のアルキル基またはアルニケル基を表し、Ｒ1
およびＲ2 は同一であっても異なっていてもよい。Ｘ1
およびＸ2 は−Ｏ−、−Ｓ−、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯ
−、−ＣＯＮＨ−または−ＮＨＣＯ−を表し、Ｘ1 およ
びＸ2 は同一であっても異なっていてもよい。ｍは０ま
たは１、ｎは０または１〜６の整数を表す。）
【００２４】
【化７】 （式２中、Ｒ3 は水素または炭素数１〜８のアルキル基
もしくはアルニケル基を表す。Ｒ4 は水素または炭素数
１〜８のアルキル基もしくはアルニケル基を表す。Ｒ5
およびＲ6 は水素または炭素数１〜２５のアルキル基も
しくはアルニケル基を表し（但し、Ｒ5 およびＲ6 が共
に水素である場合を除く。）、Ｒ5 およびＲ6 は同一で
あっても異なっていてもよい。Ｘ3 は−Ｏ−または−Ｓ
−を表す。ｐは０または１、ｑは０または１〜１０の整
数を表す。）
もしくはアルニケル基を表す。Ｒ4 は水素または炭素数
１〜８のアルキル基もしくはアルニケル基を表す。Ｒ5
およびＲ6 は水素または炭素数１〜２５のアルキル基も
しくはアルニケル基を表し（但し、Ｒ5 およびＲ6 が共
に水素である場合を除く。）、Ｒ5 およびＲ6 は同一で
あっても異なっていてもよい。Ｘ3 は−Ｏ−または−Ｓ
−を表す。ｐは０または１、ｑは０または１〜１０の整
数を表す。）
【００２５】
【化８】 （式３中、Ｒ7 およびＲ8 は炭素数１〜８のアルキル基
またはアルニケル基を表し、Ｒ7 およびＲ8 は同一であ
っても異なっていてもよい。Ｒ9 は水素または炭素数１
〜８のアルキル基もしくはアルニケル基を表す。Ｒ10お
よびＲ11は水素または炭素数１〜２５のアルキル基もし
くはアルニケル基を表し（但し、Ｒ10およびＲ11が共に
水素である場合を除く。）、Ｒ10およびＲ11は同一であ
っても異なっていてもよい。Ｘ4 は−Ｏ−または−Ｓ−
を表す。ｒは０または１、ｓは０または１〜１０の整数
を表す。）
またはアルニケル基を表し、Ｒ7 およびＲ8 は同一であ
っても異なっていてもよい。Ｒ9 は水素または炭素数１
〜８のアルキル基もしくはアルニケル基を表す。Ｒ10お
よびＲ11は水素または炭素数１〜２５のアルキル基もし
くはアルニケル基を表し（但し、Ｒ10およびＲ11が共に
水素である場合を除く。）、Ｒ10およびＲ11は同一であ
っても異なっていてもよい。Ｘ4 は−Ｏ−または−Ｓ−
を表す。ｒは０または１、ｓは０または１〜１０の整数
を表す。）
【００２６】
【化９】
【００２７】前記親水性高分子の脂質誘導体がポリエチ
レングリコールの脂質誘導体であるのが好ましく、該ポ
リエチレングリコールの脂質誘導体がポリエチレングリ
コール鎖とジアシルグリセロールを１分子内に含む化合
物であるのがより好ましい。
レングリコールの脂質誘導体であるのが好ましく、該ポ
リエチレングリコールの脂質誘導体がポリエチレングリ
コール鎖とジアシルグリセロールを１分子内に含む化合
物であるのがより好ましい。
【００２８】前記親水性高分子の分子量が１０００〜７
０００であるのが好ましい。
０００であるのが好ましい。
【００２９】前記リポソームに内封されている薬物が、
腎疾患の診断および／または治療を目的とする薬物、も
しくは、病変部の組織および／または臓器にプロテオグ
リカンの過剰産生を伴う疾患の診断および／または治療
を目的とする薬物であるのが好ましい。
腎疾患の診断および／または治療を目的とする薬物、も
しくは、病変部の組織および／または臓器にプロテオグ
リカンの過剰産生を伴う疾患の診断および／または治療
を目的とする薬物であるのが好ましい。
【００３０】前記腎疾患の診断および／または治療を目
的とする薬物が、副腎皮質ステロイドおよび／またはそ
の誘導体であるのが好ましい。
的とする薬物が、副腎皮質ステロイドおよび／またはそ
の誘導体であるのが好ましい。
【００３１】前記リポソームは、その主要粒度範囲が９
０〜２００ｎｍであることが好ましい。
０〜２００ｎｍであることが好ましい。
【００３２】
【発明の実施の形態】以下に本発明を詳細に説明する。
本発明のリポソームの膜構成成分は、生理的ｐＨ範囲で
陽電荷を帯びる塩基性化合物、親水性高分子脂質誘導体
およびリポソームを構成する脂質とからなり、必要に応
じ、安定化剤、酸化防止剤等を用いることも可能であ
る。リポソームを構成する脂質としてはリポソームを形
成できるものであれば特に限定されないが、生体内にお
いて安定なリポソームを提供するという点から、リン脂
質あるいはその誘導体、リン脂質以外の脂質あるいはそ
の誘導体が好適に用いられる。
本発明のリポソームの膜構成成分は、生理的ｐＨ範囲で
陽電荷を帯びる塩基性化合物、親水性高分子脂質誘導体
およびリポソームを構成する脂質とからなり、必要に応
じ、安定化剤、酸化防止剤等を用いることも可能であ
る。リポソームを構成する脂質としてはリポソームを形
成できるものであれば特に限定されないが、生体内にお
いて安定なリポソームを提供するという点から、リン脂
質あるいはその誘導体、リン脂質以外の脂質あるいはそ
の誘導体が好適に用いられる。
【００３３】前記リン脂質は、例えば、リン脂質は、例
えばホスファチジルコリン（レシチン）、ホスファチジ
ルグリセロール、ホスファチジン酸、ホスファチジルエ
アノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジ
ルイノシトール、スフィンゴミエリン、カルジオリビン
等の天然または合成のリン脂質、あるいはこれらを常法
に従って水素添加したものが挙げられる。安定化剤は、
例えば、膜流動性を低下させるコレステロール等のステ
ロール；グリセロール、シュクロース等の糖類が挙げら
れる。酸化防止剤は、例えば、トコフェロール同族体、
即ち、ビタミンＥが挙げられる。トコフェロールには
α、β、γおよびδの４個が異性体で存在するが、本発
明にはいずれも用いることができる。
えばホスファチジルコリン（レシチン）、ホスファチジ
ルグリセロール、ホスファチジン酸、ホスファチジルエ
アノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジ
ルイノシトール、スフィンゴミエリン、カルジオリビン
等の天然または合成のリン脂質、あるいはこれらを常法
に従って水素添加したものが挙げられる。安定化剤は、
例えば、膜流動性を低下させるコレステロール等のステ
ロール；グリセロール、シュクロース等の糖類が挙げら
れる。酸化防止剤は、例えば、トコフェロール同族体、
即ち、ビタミンＥが挙げられる。トコフェロールには
α、β、γおよびδの４個が異性体で存在するが、本発
明にはいずれも用いることができる。
【００３４】本発明のリポソームは、膜構成成分として
生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる塩基性化合物（以下、
塩基性化合物と言うことがある）および親水性高分子脂
質誘導体を含有する。生理的ｐＨ範囲とは、生体の状態
によって異なるので限定できないが、例えば７．０〜
７．５の範囲である。
生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる塩基性化合物（以下、
塩基性化合物と言うことがある）および親水性高分子脂
質誘導体を含有する。生理的ｐＨ範囲とは、生体の状態
によって異なるので限定できないが、例えば７．０〜
７．５の範囲である。
【００３５】リポソーム表面を生理的ｐＨ範囲で陽電荷
を帯びる塩基性化合物は、リポソームの構造安定を損な
うものでなければ特に限定されるものではないが、例え
ば、脂肪族第一級アミノ基、脂肪族第二級アミノ基、脂
肪族第三級アミノ基、脂肪族第四級アミノ基；アミジノ
基；グアニジノ基；芳香族第一級アミノ基、芳香族第二
級アミノ基、芳香族第三級アミノ基、芳香族第四級アミ
ノ基を有し、これらの基を直接あるいは、適度なスペー
サーを介して、長鎖脂肪族アルコール、ステロール、ポ
リオキシプロピレンアルキル、またはグリセリン脂肪酸
エステル等の疎水性化合物と結合させた脂質誘導体が挙
げられる。疎水性化合物と結合していると、生理的ｐＨ
範囲で陽電荷を帯びる部分がリポソームの表面に位置し
やすい。これらのうちで、アミジノ基を有する塩基性化
合物、アミノ基を２個以上有する塩基性化合物、ピペリ
ジン環を有する塩基性化合物、４級アミンを有する塩基
性化合物が相互作用の強さにおいて好適である。
を帯びる塩基性化合物は、リポソームの構造安定を損な
うものでなければ特に限定されるものではないが、例え
ば、脂肪族第一級アミノ基、脂肪族第二級アミノ基、脂
肪族第三級アミノ基、脂肪族第四級アミノ基；アミジノ
基；グアニジノ基；芳香族第一級アミノ基、芳香族第二
級アミノ基、芳香族第三級アミノ基、芳香族第四級アミ
ノ基を有し、これらの基を直接あるいは、適度なスペー
サーを介して、長鎖脂肪族アルコール、ステロール、ポ
リオキシプロピレンアルキル、またはグリセリン脂肪酸
エステル等の疎水性化合物と結合させた脂質誘導体が挙
げられる。疎水性化合物と結合していると、生理的ｐＨ
範囲で陽電荷を帯びる部分がリポソームの表面に位置し
やすい。これらのうちで、アミジノ基を有する塩基性化
合物、アミノ基を２個以上有する塩基性化合物、ピペリ
ジン環を有する塩基性化合物、４級アミンを有する塩基
性化合物が相互作用の強さにおいて好適である。
【００３６】なお、これらの塩基性化合物がリン酸基の
ような生理的ｐＨ範囲で負に荷電する置換基を介して疎
水性化合物と結合させられている場合（例えば、ジアシ
ルグリセロフォスファチジルコリン、ジアシルグリセロ
フォスファチジルエタノールアミン、およびアミド結合
を介して中性もしくは陰性の置換基がエタノールアミン
置換基に結合しているようなジアシルグリセロフォスフ
ァチジルエタノールアミンの誘導体など）は、この負電
荷の影響で生理的ｐＨ範囲では中性あるいは陰性に荷電
するため、生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる塩基性化合
物には含まれないことは言うまでもない。
ような生理的ｐＨ範囲で負に荷電する置換基を介して疎
水性化合物と結合させられている場合（例えば、ジアシ
ルグリセロフォスファチジルコリン、ジアシルグリセロ
フォスファチジルエタノールアミン、およびアミド結合
を介して中性もしくは陰性の置換基がエタノールアミン
置換基に結合しているようなジアシルグリセロフォスフ
ァチジルエタノールアミンの誘導体など）は、この負電
荷の影響で生理的ｐＨ範囲では中性あるいは陰性に荷電
するため、生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる塩基性化合
物には含まれないことは言うまでもない。
【００３７】これらの塩基性化合物は、単独で用いても
よく、２以上を併用してもよい。上記化合物の具体例と
しては、 DOTMA（特許第61161246号公報）、 DOTAP（特
許第5508626 号公報）、 Transfectam（特許第2292246
号公報）、TMAG（特許第 4108391号公報）、DOSPA 、Tf
xTM-50、 DODAC、 DC-CHOL、 DMRIE等公知の化合物が挙
げられる。より好適なものとして、塩基性化合物が上記
式１〜４のいずれかに記載されたものが挙げられる。
よく、２以上を併用してもよい。上記化合物の具体例と
しては、 DOTMA（特許第61161246号公報）、 DOTAP（特
許第5508626 号公報）、 Transfectam（特許第2292246
号公報）、TMAG（特許第 4108391号公報）、DOSPA 、Tf
xTM-50、 DODAC、 DC-CHOL、 DMRIE等公知の化合物が挙
げられる。より好適なものとして、塩基性化合物が上記
式１〜４のいずれかに記載されたものが挙げられる。
【００３８】生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる塩基性化
合物の配合量は、該塩基性化合物および親水性高分子を
除く、他の膜構成成分、すなわち、リポソームを構成す
る脂質に対して、１〜２０ｍｏｌ％であるのが好まし
い。１ｍｏｌ％未満であるとプロテオグリカンを産生す
る組織および／または臓器への集積性が劣る場合があ
り、２０ｍｏｌ％を越えるとリポソームの生体内での物
理的安定性を損なう場合がある。
合物の配合量は、該塩基性化合物および親水性高分子を
除く、他の膜構成成分、すなわち、リポソームを構成す
る脂質に対して、１〜２０ｍｏｌ％であるのが好まし
い。１ｍｏｌ％未満であるとプロテオグリカンを産生す
る組織および／または臓器への集積性が劣る場合があ
り、２０ｍｏｌ％を越えるとリポソームの生体内での物
理的安定性を損なう場合がある。
【００３９】さらには、生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯び
る塩基性化合物の配合量は、該塩基性化合物および親水
性高分子を除く、他の膜構成成分、すなわち、リポソー
ムを構成する脂質に対して、５〜１５ｍｏｌ％であるの
が、より好ましい。この範囲においては、プロテオグリ
カンのなかでも特にコンドロイチン硫酸プロテオグリカ
ンに対する選択性に優れ、コンドロイチン硫酸プロテオ
グリカンを産生する組織および／または臓器への集積性
に特に優れる。
る塩基性化合物の配合量は、該塩基性化合物および親水
性高分子を除く、他の膜構成成分、すなわち、リポソー
ムを構成する脂質に対して、５〜１５ｍｏｌ％であるの
が、より好ましい。この範囲においては、プロテオグリ
カンのなかでも特にコンドロイチン硫酸プロテオグリカ
ンに対する選択性に優れ、コンドロイチン硫酸プロテオ
グリカンを産生する組織および／または臓器への集積性
に特に優れる。
【００４０】本発明のリポソームは、表面が生理的ｐＨ
範囲で陽電荷を帯びており、それによってプロテオグリ
カンを産生する組織および／または臓器への集積性が発
現する。また、本発明のリポソームは、親水性高分子に
より修飾されており、それによって血中での安定性並び
にＲＥＳ回避効果をもたらす。
範囲で陽電荷を帯びており、それによってプロテオグリ
カンを産生する組織および／または臓器への集積性が発
現する。また、本発明のリポソームは、親水性高分子に
より修飾されており、それによって血中での安定性並び
にＲＥＳ回避効果をもたらす。
【００４１】リポソーム表面を親水性高分子により修飾
するには、様々な方式が挙げられ特に限定されないが、
該親水性高分子を長鎖脂肪族アルコール、ステロール、
ポリオキシプロピレンアルキル、またはグリセリン脂肪
酸エステル、リン脂質等の疎水性化合物と結合させて、
該疎水性化合物の部分をリポソーム膜へ挿入する方式が
好ましい。
するには、様々な方式が挙げられ特に限定されないが、
該親水性高分子を長鎖脂肪族アルコール、ステロール、
ポリオキシプロピレンアルキル、またはグリセリン脂肪
酸エステル、リン脂質等の疎水性化合物と結合させて、
該疎水性化合物の部分をリポソーム膜へ挿入する方式が
好ましい。
【００４２】親水性高分子の脂質誘導体は、リポソーム
の構造安定を損なうものでなければ特に限定されず、例
えば、ポリエチレングリコール、デキストラン、プルラ
ン、フィコール、ポリビニルアルコール、スチレン−無
水マレイン酸交互共重合体、ジビニルエーテル−無水マ
レイン酸交互共重合体、合成ポリアミノ酸、アミロー
ス、アミロペクチン、キトサン、マンナン、シクロデキ
ストリン、ペクチン、カラギーナン等の脂質誘導体が挙
げられるが、中でもポリエチレングリコールおよびポリ
エチレングリコールの脂質誘導体が好ましい。
の構造安定を損なうものでなければ特に限定されず、例
えば、ポリエチレングリコール、デキストラン、プルラ
ン、フィコール、ポリビニルアルコール、スチレン−無
水マレイン酸交互共重合体、ジビニルエーテル−無水マ
レイン酸交互共重合体、合成ポリアミノ酸、アミロー
ス、アミロペクチン、キトサン、マンナン、シクロデキ
ストリン、ペクチン、カラギーナン等の脂質誘導体が挙
げられるが、中でもポリエチレングリコールおよびポリ
エチレングリコールの脂質誘導体が好ましい。
【００４３】ポリエチレングリコールの脂質誘導体は、
特に限定されないが、ポリエチレングリコール鎖とジア
シルグリセロールを１分子内に有する化合物であるのが
好ましい。親水性高分子の分子量は、１０００〜７００
０であるのが好ましい。特に分子量１０００〜７０００
のポリエチレングリコールおよびポリエチレングリコー
ルの脂質誘導体は、血中滞留性を向上させる効果が顕著
であり、好ましい。
特に限定されないが、ポリエチレングリコール鎖とジア
シルグリセロールを１分子内に有する化合物であるのが
好ましい。親水性高分子の分子量は、１０００〜７００
０であるのが好ましい。特に分子量１０００〜７０００
のポリエチレングリコールおよびポリエチレングリコー
ルの脂質誘導体は、血中滞留性を向上させる効果が顕著
であり、好ましい。
【００４４】親水性高分子脂質誘導体の配合量は、その
分子量や添加方法にもよるが、生理的ｐＨ範囲で陽電荷
を帯びる塩基性化合物およびリポソームを構成する脂質
の和に対して、０．２〜５ｍｏｌ％であるのが好まし
い。この範囲であるとプロテオグリカンを産生している
組織および／または臓器への集積性が優れる。
分子量や添加方法にもよるが、生理的ｐＨ範囲で陽電荷
を帯びる塩基性化合物およびリポソームを構成する脂質
の和に対して、０．２〜５ｍｏｌ％であるのが好まし
い。この範囲であるとプロテオグリカンを産生している
組織および／または臓器への集積性が優れる。
【００４５】その理由は、以下の通りである。親水性高
分子脂質誘導体の配合量が上記範囲であると、血漿蛋白
とリポソームとの相互作用がリポソーム表面の親水性高
分子により阻害されるため、血中での安定性に優れる。
一方、親水性高分子脂質誘導体の配合量が上記範囲であ
ると、リポソームとある種の生体高分子成分との結合は
阻害されない。プロテオグリカンの構成成分であるコン
ドロイチン硫酸やデルマタン硫酸などは、糸状のアニオ
ン性生体高分子成分であるガラクトサミノグリカン（Ｇ
ＡＧ）であるが、本発明の所定量の親水性高分子脂質誘
導体の配合量では、このような糸状のアニオン性生体高
分子とリポソームとの結合は阻害されない。本発明のリ
ポソームは、このようなＧＡＧを持つプロテオグリカン
を産生する組織および／または臓器を選択的に認識す
る。
分子脂質誘導体の配合量が上記範囲であると、血漿蛋白
とリポソームとの相互作用がリポソーム表面の親水性高
分子により阻害されるため、血中での安定性に優れる。
一方、親水性高分子脂質誘導体の配合量が上記範囲であ
ると、リポソームとある種の生体高分子成分との結合は
阻害されない。プロテオグリカンの構成成分であるコン
ドロイチン硫酸やデルマタン硫酸などは、糸状のアニオ
ン性生体高分子成分であるガラクトサミノグリカン（Ｇ
ＡＧ）であるが、本発明の所定量の親水性高分子脂質誘
導体の配合量では、このような糸状のアニオン性生体高
分子とリポソームとの結合は阻害されない。本発明のリ
ポソームは、このようなＧＡＧを持つプロテオグリカン
を産生する組織および／または臓器を選択的に認識す
る。
【００４６】このような親水性高分子による修飾によ
り、リポソームの血中濃度がある程度の時間維持される
という効果は、従来より知られている。一方親水性高分
子脂質誘導体は、リポソームの表面を親水性にして臓器
への集積性を損なう面がある。しかし、親水性高分子で
修飾してもリポソーム表面の特性が損なわれないこと、
また、一定の濃度範囲の親水性高分子で修飾することに
より逆にその特性を高めることができるということは全
く知られていなかった。
り、リポソームの血中濃度がある程度の時間維持される
という効果は、従来より知られている。一方親水性高分
子脂質誘導体は、リポソームの表面を親水性にして臓器
への集積性を損なう面がある。しかし、親水性高分子で
修飾してもリポソーム表面の特性が損なわれないこと、
また、一定の濃度範囲の親水性高分子で修飾することに
より逆にその特性を高めることができるということは全
く知られていなかった。
【００４７】例えば、その他の脂質と生理的ｐＨ範囲で
陽電荷を帯びる塩基性化合物と親水性高分子脂質誘導体
を２０：１：１の範囲で配合したリポソームが、Bioche
mistry,37:12875,(1998)に開示されている。この報告で
は、それ自体がアニオンである親水性高分子と塩基性化
合物とをそれぞれ約５モル％配合した場合にカチオン化
リポソームの細胞への結合が、親水性高分子により阻害
されることが述べられているが、本発明の配合比におい
て、血中安定性に優れ、かつプロテオグリカンとの相互
作用を介して細胞と結合するリポソームが作成可能であ
ることは全く述べられていない。また、Biochimica et
Biophysica Acta,1326:236,(1997) には、カチオン性で
はないリポソームと細胞との相互作用が１〜５モル％の
親水性高分子脂質誘導体の配合で阻害されることが報告
されている。しかし試験例１に示すように、カチオン化
リポソームの細胞との相互作用は、中性、またはアニオ
ン性リポソームのそれとは全く異るものであり、また、
カチオン化リポソームの細胞との結合性の強さは生理的
ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる塩基性化合物の配合比が増え
るに従って増加する（試験例３、４）ため、このような
点について検討されていない本報告は、カチオン化リポ
ソームと細胞との相互作用に最適な親水性高分子の配合
比については全く参考にならないものである。
陽電荷を帯びる塩基性化合物と親水性高分子脂質誘導体
を２０：１：１の範囲で配合したリポソームが、Bioche
mistry,37:12875,(1998)に開示されている。この報告で
は、それ自体がアニオンである親水性高分子と塩基性化
合物とをそれぞれ約５モル％配合した場合にカチオン化
リポソームの細胞への結合が、親水性高分子により阻害
されることが述べられているが、本発明の配合比におい
て、血中安定性に優れ、かつプロテオグリカンとの相互
作用を介して細胞と結合するリポソームが作成可能であ
ることは全く述べられていない。また、Biochimica et
Biophysica Acta,1326:236,(1997) には、カチオン性で
はないリポソームと細胞との相互作用が１〜５モル％の
親水性高分子脂質誘導体の配合で阻害されることが報告
されている。しかし試験例１に示すように、カチオン化
リポソームの細胞との相互作用は、中性、またはアニオ
ン性リポソームのそれとは全く異るものであり、また、
カチオン化リポソームの細胞との結合性の強さは生理的
ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる塩基性化合物の配合比が増え
るに従って増加する（試験例３、４）ため、このような
点について検討されていない本報告は、カチオン化リポ
ソームと細胞との相互作用に最適な親水性高分子の配合
比については全く参考にならないものである。
【００４８】WO96/10391には親水性高分子脂質誘導体と
して、ＰＥＧセラミドを配合したカチオン化リポソーム
が開示されている。この中で生理的ｐＨ範囲で陽電荷を
帯びる塩基性化合物を他の脂質に対して約１７．５モル
％（全脂質の約１５モル％）以上を含むリポソームの場
合には１０モル％以上のＰＥＧセラミドの配合により血
中の安定性が維持されることと、５モル％のＰＥＧセラ
ミドの配合では、細胞との相互作用が維持（保持）され
ることが開示されている。しかしながら、本発明の配合
比（その他の脂質に対して、１〜２０モル％、好ましく
は５〜１５モル％の塩基性化合物と０．２〜５モル％の
親水性高分子誘導体の配合）において、血中の安定性が
維持され、プロテオグリカンを介した細胞との相互作用
が最適化されたリポソームが作製できることはなんら開
示されていない。WO98/51285には、生理的ｐＨ範囲で陽
電荷を帯びる塩基性化合物と、ＰＥＧとジラウロイルフ
ォスファチジルエタノールアミンの結合体を含むリポソ
ーム、あるいは、塩基性化合物と、ＰＥＧ誘導体のほか
に、その他の脂質として、ジフタノイルフォスファチジ
ルエタノールアミンを含むリポソームが開示されてい
る。このリポソームにおいては、塩基性化合物は他の脂
質に対して５０％含まれるものが開示されているが、本
発明の範囲の配合比のものはなんら開示されていない。
して、ＰＥＧセラミドを配合したカチオン化リポソーム
が開示されている。この中で生理的ｐＨ範囲で陽電荷を
帯びる塩基性化合物を他の脂質に対して約１７．５モル
％（全脂質の約１５モル％）以上を含むリポソームの場
合には１０モル％以上のＰＥＧセラミドの配合により血
中の安定性が維持されることと、５モル％のＰＥＧセラ
ミドの配合では、細胞との相互作用が維持（保持）され
ることが開示されている。しかしながら、本発明の配合
比（その他の脂質に対して、１〜２０モル％、好ましく
は５〜１５モル％の塩基性化合物と０．２〜５モル％の
親水性高分子誘導体の配合）において、血中の安定性が
維持され、プロテオグリカンを介した細胞との相互作用
が最適化されたリポソームが作製できることはなんら開
示されていない。WO98/51285には、生理的ｐＨ範囲で陽
電荷を帯びる塩基性化合物と、ＰＥＧとジラウロイルフ
ォスファチジルエタノールアミンの結合体を含むリポソ
ーム、あるいは、塩基性化合物と、ＰＥＧ誘導体のほか
に、その他の脂質として、ジフタノイルフォスファチジ
ルエタノールアミンを含むリポソームが開示されてい
る。このリポソームにおいては、塩基性化合物は他の脂
質に対して５０％含まれるものが開示されているが、本
発明の範囲の配合比のものはなんら開示されていない。
【００４９】本発明においては、生理的ｐＨ範囲で陽電
荷を帯びる塩基性化合物と親水性高分子脂質誘導体の配
合比が決定的に重要である。特に従来リポソームの血液
中での安定性に関しては、血漿たんぱく質との相互作用
とそれを介したＲＥＳ系への取り込みが重要視されてき
たが、カチオン化リポソームにおいては、これに加え
て、細胞表面のプロテオグリカンの構成成分であるＧＡ
Ｇなどの糸状のアニオン性生体高分子成分との相互作用
が重要である。
荷を帯びる塩基性化合物と親水性高分子脂質誘導体の配
合比が決定的に重要である。特に従来リポソームの血液
中での安定性に関しては、血漿たんぱく質との相互作用
とそれを介したＲＥＳ系への取り込みが重要視されてき
たが、カチオン化リポソームにおいては、これに加え
て、細胞表面のプロテオグリカンの構成成分であるＧＡ
Ｇなどの糸状のアニオン性生体高分子成分との相互作用
が重要である。
【００５０】糸球体腎炎においては、糸球体のメサンギ
ウム細胞が、増殖性変化を起こし、病変の進展の原因と
なる。試験例１には、その他の脂質に対して、８．７ｍ
ｏｌ％の塩基性化合物（３，５−ジペンタデシロキシベ
ンズアミジン塩酸塩）を含むリポソームのメサンギウム
細胞との結合性が、塩基性化合物を含まないリポソーム
と比較して、示されている。塩基性化合物の存在下での
みリポソームはメサンギウム細胞と結合する。また、試
験例２に示すようにこの結合は細胞表面のプロテオグリ
カンに結合しているＧＡＧを切断すると失われ、この結
合が、プロテオグリカンのＧＡＧを介するものであるこ
とが示されている。さらに、試験例１には、その結合性
が、親水性高分子の添加量とともに減少し、親水性高分
子の配合量は５ｍｏｌ％を越えないことが望ましいこと
が示されている。
ウム細胞が、増殖性変化を起こし、病変の進展の原因と
なる。試験例１には、その他の脂質に対して、８．７ｍ
ｏｌ％の塩基性化合物（３，５−ジペンタデシロキシベ
ンズアミジン塩酸塩）を含むリポソームのメサンギウム
細胞との結合性が、塩基性化合物を含まないリポソーム
と比較して、示されている。塩基性化合物の存在下での
みリポソームはメサンギウム細胞と結合する。また、試
験例２に示すようにこの結合は細胞表面のプロテオグリ
カンに結合しているＧＡＧを切断すると失われ、この結
合が、プロテオグリカンのＧＡＧを介するものであるこ
とが示されている。さらに、試験例１には、その結合性
が、親水性高分子の添加量とともに減少し、親水性高分
子の配合量は５ｍｏｌ％を越えないことが望ましいこと
が示されている。
【００５１】一方で、試験例４には、親水性高分子が５
モル％以下の場合、他の脂質に対して２０モル％を越え
る量の生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる塩基性化合物を
配合すると、血液中での凝集を十分には抑制できないこ
とが示されている、すなわち、塩基性化合物の配合比は
その他の脂質に対して２０ｍｏｌ％以下とすることが好
ましい。
モル％以下の場合、他の脂質に対して２０モル％を越え
る量の生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる塩基性化合物を
配合すると、血液中での凝集を十分には抑制できないこ
とが示されている、すなわち、塩基性化合物の配合比は
その他の脂質に対して２０ｍｏｌ％以下とすることが好
ましい。
【００５２】プロテオグリカンのある種のものは、血管
の表面を覆っている内皮細胞にも存在している。従っ
て、このような内皮細胞との相互作用が強い場合には、
血液中のリポソームはこの内皮細胞との相互作用により
物理的安定性が損なわれ、病変部への効率的な送達が阻
害される可能性がある。従って、目的とするリポソーム
は病変部のプロテオグリカンとは結合できるが、血管内
皮細胞のプロテオグリカンとは相互作用しないことがよ
り望ましい。驚くべきことに、このようなリポソーム
は、試験例３、４に基づく本発明者等の研究により、塩
基性化合物の配合比をその他の脂質に対して、１モル％
以上、２０モル％以下、好ましくは５モル％以上、１５
モル％以下とした場合に実現されることが明らかとなっ
た。
の表面を覆っている内皮細胞にも存在している。従っ
て、このような内皮細胞との相互作用が強い場合には、
血液中のリポソームはこの内皮細胞との相互作用により
物理的安定性が損なわれ、病変部への効率的な送達が阻
害される可能性がある。従って、目的とするリポソーム
は病変部のプロテオグリカンとは結合できるが、血管内
皮細胞のプロテオグリカンとは相互作用しないことがよ
り望ましい。驚くべきことに、このようなリポソーム
は、試験例３、４に基づく本発明者等の研究により、塩
基性化合物の配合比をその他の脂質に対して、１モル％
以上、２０モル％以下、好ましくは５モル％以上、１５
モル％以下とした場合に実現されることが明らかとなっ
た。
【００５３】以上のように、血中での安定性を確保しな
がら、プロテオグリカンを産生する病変部の組織及び／
または臓器と結合できるリポソームは、きわめて限定さ
れた範囲におけるカチオン化脂質と親水性高分子の配合
比により初めて実現されるものであり、本発明のリポソ
ームは、既知のリポソームとは構成、目的ともはっきり
と異なるものである。本発明においては、親水性高分子
脂質誘導体以外の表面修飾剤を併用することもできる。
親水性高分子以外の表面修飾剤は、例えば、グルクロン
酸、シアル酸等の水溶性多糖類などが挙げられる。
がら、プロテオグリカンを産生する病変部の組織及び／
または臓器と結合できるリポソームは、きわめて限定さ
れた範囲におけるカチオン化脂質と親水性高分子の配合
比により初めて実現されるものであり、本発明のリポソ
ームは、既知のリポソームとは構成、目的ともはっきり
と異なるものである。本発明においては、親水性高分子
脂質誘導体以外の表面修飾剤を併用することもできる。
親水性高分子以外の表面修飾剤は、例えば、グルクロン
酸、シアル酸等の水溶性多糖類などが挙げられる。
【００５４】リポソームが内封する薬物は、腎疾患及
び、病変部の組織および／または臓器においてプロテオ
グリカンを過剰産生するその他の疾患の診断および／ま
たは治療の目的に応じて、薬学的に許容し得る薬理的活
性物質、生理的活性物質および／または診断用物質を用
いることができる。リポソームが内封する薬物の性質は
特に限定されないが、電気的に中性またはアニオン性で
あると、リポソームの表面が生理的ｐＨ範囲で陽電荷を
帯びる置換基で修飾されているため、高い封入率を得る
ことができるので好ましい。
び、病変部の組織および／または臓器においてプロテオ
グリカンを過剰産生するその他の疾患の診断および／ま
たは治療の目的に応じて、薬学的に許容し得る薬理的活
性物質、生理的活性物質および／または診断用物質を用
いることができる。リポソームが内封する薬物の性質は
特に限定されないが、電気的に中性またはアニオン性で
あると、リポソームの表面が生理的ｐＨ範囲で陽電荷を
帯びる置換基で修飾されているため、高い封入率を得る
ことができるので好ましい。
【００５５】リポソームが内封する薬物の種類として
は、リポソームの形成を損なうものでなければ特に限定
されない。例えば、プレドニゾロン、メチルプレドニゾ
ロン、デキサメタゾン等の副腎皮質ステロイド；アスピ
リン、インドメタシン、イブプロフェン、メフェナム
酸、フェニルブタゾン等の非ステロイド抗炎症剤；ヘパ
リン、低分子ヘパリン等のメザンギウム細胞増殖阻害
剤；シクロスポリンなどの免疫抑制剤；カプトプリルな
どのアンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ、angiotensin
converting enzyme ）阻害剤；メチルグアニジンなどの
ＡＧＥ（advanced glycation endoproduct）阻害剤；バ
イグリカン、デコリン等のTGF-β拮抗薬；ＰＫＣ（prot
ein kinase C）阻害剤；PGE1、PGI2等のプロスタグラン
ジン製剤；パパベリン系薬、ニコチン酸系薬、トコフェ
ロール系薬、Ｃａ拮抗薬等の末梢血管拡張薬；フォスホ
ジエステラーゼ阻害剤；チクロピジン、アスピリン等の
抗血栓薬；ワーファリン、ヘパリン、抗トロンビン剤等
の抗凝固剤；ウロキナーゼなどの血栓溶解薬；ケミカル
メディエーター遊離抑制剤；抗生物質；抗酸化剤；酵素
剤；脂質取込抑制剤；ホルモン剤；ビタミンＣ；ビタミ
ンＥ；ＳＯＤ等のラジカルスキャベンジャー；メサンギ
ウム細胞の増殖抑制作用を有するアンチセンスオリゴヌ
クレオチド；制癌剤；デコイあるいは遺伝子；Ｘ線造影
剤；放射性同位元素標識核医学診断剤；ＭＲＩ造影剤な
どが挙げられる。中でも、副腎皮質ステロイドおよび／
またはその誘導体および／または他の成分も含む合剤等
は、効果が強く、一方、全身性副作用も非常に大きいた
め、従来は継続的または長期的な本発明においては、副
作用を最小限に抑制することができるので好適に用いら
れる。
は、リポソームの形成を損なうものでなければ特に限定
されない。例えば、プレドニゾロン、メチルプレドニゾ
ロン、デキサメタゾン等の副腎皮質ステロイド；アスピ
リン、インドメタシン、イブプロフェン、メフェナム
酸、フェニルブタゾン等の非ステロイド抗炎症剤；ヘパ
リン、低分子ヘパリン等のメザンギウム細胞増殖阻害
剤；シクロスポリンなどの免疫抑制剤；カプトプリルな
どのアンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ、angiotensin
converting enzyme ）阻害剤；メチルグアニジンなどの
ＡＧＥ（advanced glycation endoproduct）阻害剤；バ
イグリカン、デコリン等のTGF-β拮抗薬；ＰＫＣ（prot
ein kinase C）阻害剤；PGE1、PGI2等のプロスタグラン
ジン製剤；パパベリン系薬、ニコチン酸系薬、トコフェ
ロール系薬、Ｃａ拮抗薬等の末梢血管拡張薬；フォスホ
ジエステラーゼ阻害剤；チクロピジン、アスピリン等の
抗血栓薬；ワーファリン、ヘパリン、抗トロンビン剤等
の抗凝固剤；ウロキナーゼなどの血栓溶解薬；ケミカル
メディエーター遊離抑制剤；抗生物質；抗酸化剤；酵素
剤；脂質取込抑制剤；ホルモン剤；ビタミンＣ；ビタミ
ンＥ；ＳＯＤ等のラジカルスキャベンジャー；メサンギ
ウム細胞の増殖抑制作用を有するアンチセンスオリゴヌ
クレオチド；制癌剤；デコイあるいは遺伝子；Ｘ線造影
剤；放射性同位元素標識核医学診断剤；ＭＲＩ造影剤な
どが挙げられる。中でも、副腎皮質ステロイドおよび／
またはその誘導体および／または他の成分も含む合剤等
は、効果が強く、一方、全身性副作用も非常に大きいた
め、従来は継続的または長期的な本発明においては、副
作用を最小限に抑制することができるので好適に用いら
れる。
【００５６】また、対象となる病変部の組織及び／また
は臓器にプロテオグリカンが過剰に産生される疾患とし
ては、糸球体に炎症が生じている腎疾患の他に、肝臓、
肺、心臓、膵臓、骨髄、動脈などの臓器が線維化する疾
患、大腸ガンなどの腫瘍、炎症疾患等が挙げられる。ま
た、上記腎疾患は、例えば、原発性糸球体腎炎として
は、微小変化型、巣状糸球体硬化症、ＩｇＡ腎症、メサ
ンギウム増殖性腎炎、膜性腎炎、膜性増殖性糸球体腎炎
Ｉ型、II型及び III型、管内性増殖性糸球体腎炎、半月
体形成性糸球体腎炎（＝管外性増殖性糸球体腎炎）が、
続発性糸球体腎炎としては、ループス腎炎、グットパス
チャー症候群、糖尿病性腎症、全身性血管炎、血栓性微
小血管炎、糸球体内血栓、良性腎硬化症、悪性腎硬化
症、進行性全身性硬化症（強皮症）、感染症に伴う糸球
体障害、薬剤性腎障害が挙げられる。
は臓器にプロテオグリカンが過剰に産生される疾患とし
ては、糸球体に炎症が生じている腎疾患の他に、肝臓、
肺、心臓、膵臓、骨髄、動脈などの臓器が線維化する疾
患、大腸ガンなどの腫瘍、炎症疾患等が挙げられる。ま
た、上記腎疾患は、例えば、原発性糸球体腎炎として
は、微小変化型、巣状糸球体硬化症、ＩｇＡ腎症、メサ
ンギウム増殖性腎炎、膜性腎炎、膜性増殖性糸球体腎炎
Ｉ型、II型及び III型、管内性増殖性糸球体腎炎、半月
体形成性糸球体腎炎（＝管外性増殖性糸球体腎炎）が、
続発性糸球体腎炎としては、ループス腎炎、グットパス
チャー症候群、糖尿病性腎症、全身性血管炎、血栓性微
小血管炎、糸球体内血栓、良性腎硬化症、悪性腎硬化
症、進行性全身性硬化症（強皮症）、感染症に伴う糸球
体障害、薬剤性腎障害が挙げられる。
【００５７】本発明のリポソームに最適な大きさは、主
要粒度範囲が９０〜２００ｎｍである。この範囲である
と、後の試験例８に示すようにリポソームは、血管から
傷害されて炎症を引き起こした腎糸球体をはじめとする
プロテオグリカンを産生する組織および／または臓器へ
移行しやすい。主要粒度範囲が９０ｎｍ未満であると正
常な組織および／または臓器へも移行し易くなり、２０
０ｎｍを越えると傷害された組織へ到達しづらくなる。
一方平均粒径は、同じく光散乱法により測定される全粒
子径の平均値であるが、この値は主要粒度範囲の範囲内
の値であり、その範囲も当然９０〜２００ｎｍであるの
が好ましい。
要粒度範囲が９０〜２００ｎｍである。この範囲である
と、後の試験例８に示すようにリポソームは、血管から
傷害されて炎症を引き起こした腎糸球体をはじめとする
プロテオグリカンを産生する組織および／または臓器へ
移行しやすい。主要粒度範囲が９０ｎｍ未満であると正
常な組織および／または臓器へも移行し易くなり、２０
０ｎｍを越えると傷害された組織へ到達しづらくなる。
一方平均粒径は、同じく光散乱法により測定される全粒
子径の平均値であるが、この値は主要粒度範囲の範囲内
の値であり、その範囲も当然９０〜２００ｎｍであるの
が好ましい。
【００５８】本発明のリポソームは、常法によって容易
に得ることができる。その一例を以下に示す。生理的ｐ
Ｈ範囲で陽電荷を帯びる塩基性化合物およびリン脂質、
安定化剤、酸化防止剤等の他の膜構成成分を、フラスコ
内のクロロホルム等の有機溶媒中で混合し、有機溶媒を
留去した後、真空乾燥することによりフラスコ内壁に薄
膜を形成させる。次に前記フラスコ内に薬物を加え、激
しくかくはんすることにより、リポソーム分散液を得
る。得られたリポソーム分散液を遠心分離し、上清をデ
カンテーションして封入されなかった薬物を除去する。
更に、親水性高分子脂質誘導体溶液を加えて加温するこ
とにより、本発明のリポソームが得られる。なお、親水
性高分子脂質誘導体溶液を膜構成成分の混合時に加える
ことによっても、本発明のリポソームが得られる。親水
性高分子脂質誘導体溶液の添加方法は、いずれでも特に
問題はないが、膜構成成分の混合時に添加する方法では
リポソーム内部にも親水性高分子が入ることとなり、実
質的な表面修飾率の低下と内封容積の低下を招く場合が
ある。また、上記の各構成成分を混合し、高圧吐出型乳
化機により高圧吐出させることにより本発明のリポソー
ムを得ることもできる。
に得ることができる。その一例を以下に示す。生理的ｐ
Ｈ範囲で陽電荷を帯びる塩基性化合物およびリン脂質、
安定化剤、酸化防止剤等の他の膜構成成分を、フラスコ
内のクロロホルム等の有機溶媒中で混合し、有機溶媒を
留去した後、真空乾燥することによりフラスコ内壁に薄
膜を形成させる。次に前記フラスコ内に薬物を加え、激
しくかくはんすることにより、リポソーム分散液を得
る。得られたリポソーム分散液を遠心分離し、上清をデ
カンテーションして封入されなかった薬物を除去する。
更に、親水性高分子脂質誘導体溶液を加えて加温するこ
とにより、本発明のリポソームが得られる。なお、親水
性高分子脂質誘導体溶液を膜構成成分の混合時に加える
ことによっても、本発明のリポソームが得られる。親水
性高分子脂質誘導体溶液の添加方法は、いずれでも特に
問題はないが、膜構成成分の混合時に添加する方法では
リポソーム内部にも親水性高分子が入ることとなり、実
質的な表面修飾率の低下と内封容積の低下を招く場合が
ある。また、上記の各構成成分を混合し、高圧吐出型乳
化機により高圧吐出させることにより本発明のリポソー
ムを得ることもできる。
【００５９】本発明のリポソームは、プロテオグリカン
を産生する組織および／または臓器、特に傷害されて炎
症を起こした腎糸球体に特異的に集積する。本発明のリ
ポソームの正常な組織および／または臓器への集積量に
対する傷害された組織および／または臓器への集積量の
割合は、投与後ある一定時間経過した時点で比較した場
合、約２〜１０倍である。従って、本発明のリポソーム
を用いれば、薬物を傷害されたプロテオグリカン過剰産
生組織および／または臓器、特に傷害された腎糸球体に
効率的に送達し、薬物を持続的に作用させることができ
る。また、薬物として副作用の大きい薬物を用いた場合
でも、その副作用を最小限に抑えることができるので、
例えば、副腎皮質ステロイドおよび／またはその誘導体
を用いた場合は、ＩｇＡ腎症等の糸球体腎炎に対して、
好適に用いることができる。
を産生する組織および／または臓器、特に傷害されて炎
症を起こした腎糸球体に特異的に集積する。本発明のリ
ポソームの正常な組織および／または臓器への集積量に
対する傷害された組織および／または臓器への集積量の
割合は、投与後ある一定時間経過した時点で比較した場
合、約２〜１０倍である。従って、本発明のリポソーム
を用いれば、薬物を傷害されたプロテオグリカン過剰産
生組織および／または臓器、特に傷害された腎糸球体に
効率的に送達し、薬物を持続的に作用させることができ
る。また、薬物として副作用の大きい薬物を用いた場合
でも、その副作用を最小限に抑えることができるので、
例えば、副腎皮質ステロイドおよび／またはその誘導体
を用いた場合は、ＩｇＡ腎症等の糸球体腎炎に対して、
好適に用いることができる。
【００６０】
【実施例】以下に実施例を示して本発明を具体的に説明
するが、本発明はこれらに限られるものではない。 １．各種リポソームの調製 （調製例１）３，５−ジペンタデシロキシベンズアミジ
ン塩酸塩およびポリエチレングリコール−ホスファチジ
ルエタノールアミン誘導体（PEG-PE）を膜構成成分とし
て含有するリポソームの調製 下記３種類の膜構成成分をそれぞれクロロホルム溶液と
して、容積５０ｍｌのナス型フラスコに加え、混合し
た。 ・フォスファチジルコリン（濃度１００ｍＭ）：３．０
ｍＬ ・コレステロール（濃度１００ｍＭ）：２．５４ｍＬ ・下記式で表される３，５−ジペンタデシロキシベンズ
アミジン塩酸塩（１００ｍＭ）：４．６ｍＬ
するが、本発明はこれらに限られるものではない。 １．各種リポソームの調製 （調製例１）３，５−ジペンタデシロキシベンズアミジ
ン塩酸塩およびポリエチレングリコール−ホスファチジ
ルエタノールアミン誘導体（PEG-PE）を膜構成成分とし
て含有するリポソームの調製 下記３種類の膜構成成分をそれぞれクロロホルム溶液と
して、容積５０ｍｌのナス型フラスコに加え、混合し
た。 ・フォスファチジルコリン（濃度１００ｍＭ）：３．０
ｍＬ ・コレステロール（濃度１００ｍＭ）：２．５４ｍＬ ・下記式で表される３，５−ジペンタデシロキシベンズ
アミジン塩酸塩（１００ｍＭ）：４．６ｍＬ
【００６１】
【化１０】 クロロホルムを留去した後、一晩真空乾燥することによ
りフラスコ内壁に脂質薄膜を形成した。次いで、１５０
ｍＭ塩化ナトリウム溶液１０ｍＬをフラスコ内に加え、
バス型ソニケーターで処理することにより、リポソーム
（ＭＬＶ）分散液を得た。これを孔径０．４μｍのポリ
カーボネートフィルムを用いて圧送し、次いで０．１μ
ｍのポリカーボネートフィルムを用いて圧送することに
よって整粒を行った。このリポソーム分散液に、下記式
で示されるポリエチレングリコール−ホスファチジルエ
タノールアミン誘導体を生理食塩水にて溶解した溶液
（濃度0.0125、0.025 、0.05、0.1 、0.2 、および0.4W
/V％）を等容量加えた後６０℃で３０分加温することに
よって、表面が親水性高分子脂質誘導体にて修飾されて
いる標記のリポソーム分散液を得た。
りフラスコ内壁に脂質薄膜を形成した。次いで、１５０
ｍＭ塩化ナトリウム溶液１０ｍＬをフラスコ内に加え、
バス型ソニケーターで処理することにより、リポソーム
（ＭＬＶ）分散液を得た。これを孔径０．４μｍのポリ
カーボネートフィルムを用いて圧送し、次いで０．１μ
ｍのポリカーボネートフィルムを用いて圧送することに
よって整粒を行った。このリポソーム分散液に、下記式
で示されるポリエチレングリコール−ホスファチジルエ
タノールアミン誘導体を生理食塩水にて溶解した溶液
（濃度0.0125、0.025 、0.05、0.1 、0.2 、および0.4W
/V％）を等容量加えた後６０℃で３０分加温することに
よって、表面が親水性高分子脂質誘導体にて修飾されて
いる標記のリポソーム分散液を得た。
【００６２】
【化１１】 得られたリポソーム１００μＬをとり、１５０ｍＭ塩化
ナトリウム水溶液３ｍＬに分散させ、Malvern 社製粒度
分布計Zetamaster-Sにて粒子径を測定したところ、平均
粒子径は１２７．１〜１３２．５ｎｍ、主要粒度範囲は
９０〜２００ｎｍであった。また、フォスファチジルコ
リン含量をコリンオキシダーゼ法にて、コレステロール
含量をコレステロールオキシダーゼ・フェノール法に
て、さらに３，５−ジペンタデシロキシベンズアミジン
塩酸塩含量を液体クロマトグラフ法にて測定したとこ
ろ、３，５−ジペンタデシロキシベンズアミジン塩酸塩
含量は他の脂質に対して８．７ｍｏｌ％であった。ま
た、得られたリポソーム分散液を 100,000ｇで超遠心
し、上清をデカンテーションにて分離した。この上清に
ついてピクリン酸試液発色法にてポリエチレングリコー
ル−ホスファチジルエタノールアミン誘導体（PEG-PE）
含量を求め、添加量からこの値を差し引くことによりPE
G-PE誘導体の修飾率を求めた。得られたリポソームのPE
G-PE誘導体修飾率はそれぞれ０．１１、０．２３、０．
４５、０．９１、１．８及び３．８ｍｏｌ％であった。
ナトリウム水溶液３ｍＬに分散させ、Malvern 社製粒度
分布計Zetamaster-Sにて粒子径を測定したところ、平均
粒子径は１２７．１〜１３２．５ｎｍ、主要粒度範囲は
９０〜２００ｎｍであった。また、フォスファチジルコ
リン含量をコリンオキシダーゼ法にて、コレステロール
含量をコレステロールオキシダーゼ・フェノール法に
て、さらに３，５−ジペンタデシロキシベンズアミジン
塩酸塩含量を液体クロマトグラフ法にて測定したとこ
ろ、３，５−ジペンタデシロキシベンズアミジン塩酸塩
含量は他の脂質に対して８．７ｍｏｌ％であった。ま
た、得られたリポソーム分散液を 100,000ｇで超遠心
し、上清をデカンテーションにて分離した。この上清に
ついてピクリン酸試液発色法にてポリエチレングリコー
ル−ホスファチジルエタノールアミン誘導体（PEG-PE）
含量を求め、添加量からこの値を差し引くことによりPE
G-PE誘導体の修飾率を求めた。得られたリポソームのPE
G-PE誘導体修飾率はそれぞれ０．１１、０．２３、０．
４５、０．９１、１．８及び３．８ｍｏｌ％であった。
【００６３】（調製例２）Ｎ，Ｎ−ジオクタデシル−２
−（ピペリジン−４−イル−オキシ）アセトアミドおよ
びポリエチレングリコール−ホスファチジルエタノール
アミン誘導体を膜構成成分として含有するリポソームの
調製 下記３種類の膜構成成分をそれぞれクロロホルム溶液と
して、容積５０ｍｌのナス型フラスコに加え、混合し
た。 ・フォスファチジルコリン（濃度１００ｍＭ）：３．０
ｍＬ ・コレステロール（濃度１００ｍＭ）：２．５４ｍＬ ・下記式で表されるＮ，Ｎ−ジオクタデシル−２−（ピ
ペリジン−４−イル−オキシ）アセトアミド（１０ｍ
Ｍ）：４．６ｍＬ
−（ピペリジン−４−イル−オキシ）アセトアミドおよ
びポリエチレングリコール−ホスファチジルエタノール
アミン誘導体を膜構成成分として含有するリポソームの
調製 下記３種類の膜構成成分をそれぞれクロロホルム溶液と
して、容積５０ｍｌのナス型フラスコに加え、混合し
た。 ・フォスファチジルコリン（濃度１００ｍＭ）：３．０
ｍＬ ・コレステロール（濃度１００ｍＭ）：２．５４ｍＬ ・下記式で表されるＮ，Ｎ−ジオクタデシル−２−（ピ
ペリジン−４−イル−オキシ）アセトアミド（１０ｍ
Ｍ）：４．６ｍＬ
【００６４】
【化１２】 以下、調製例１と同様の方法により、表記のリポソーム
分散液を得た。得られたリポソームを調製例１と同様に
測定したところ、平均粒子径は１１２．４〜１２７．８
ｎｍ、主要粒度範囲は９０〜２００ｎｍ、Ｎ，Ｎ−ジオ
クタデシル−２−（ピペリジン−４−イル−オキシ）ア
セトアミド含量は他の脂質に対して８．７ｍｏｌ％、PE
G-PE誘導体修飾率はそれぞれ０．１１、０．２３、０．
４５、０．９１、１．８及び３．８ｍｏｌ％であった。
分散液を得た。得られたリポソームを調製例１と同様に
測定したところ、平均粒子径は１１２．４〜１２７．８
ｎｍ、主要粒度範囲は９０〜２００ｎｍ、Ｎ，Ｎ−ジオ
クタデシル−２−（ピペリジン−４−イル−オキシ）ア
セトアミド含量は他の脂質に対して８．７ｍｏｌ％、PE
G-PE誘導体修飾率はそれぞれ０．１１、０．２３、０．
４５、０．９１、１．８及び３．８ｍｏｌ％であった。
【００６５】（調製例３）Ｎ’−ペンタデシルジエチレ
ントリアミンおよびポリエチレングリコール−ホスファ
チジルエタノールアミン誘導体を膜構成成分として含有
するリポソームの調製 下記３種類の膜構成成分をそれぞれクロロホルム溶液と
して、容積５０ｍｌのナス型フラスコに加え、混合し
た。 ・フォスファチジルコリン（濃度１００ｍＭ）：３．０
ｍＬ ・コレステロール（濃度１００ｍＭ）：２．５４ｍＬ ・下記式で表されるＮ’−ペンタデシルジエチレントリ
アミン（１０ｍＭ）：４．６ｍＬ
ントリアミンおよびポリエチレングリコール−ホスファ
チジルエタノールアミン誘導体を膜構成成分として含有
するリポソームの調製 下記３種類の膜構成成分をそれぞれクロロホルム溶液と
して、容積５０ｍｌのナス型フラスコに加え、混合し
た。 ・フォスファチジルコリン（濃度１００ｍＭ）：３．０
ｍＬ ・コレステロール（濃度１００ｍＭ）：２．５４ｍＬ ・下記式で表されるＮ’−ペンタデシルジエチレントリ
アミン（１０ｍＭ）：４．６ｍＬ
【００６６】
【化１３】 以下、調製例１と同様の方法により、表記のリポソーム
分散液を得た。得られたリポソームを調製例１と同様に
測定したところ、平均粒子径は１１１．７〜１２５．８
ｎｍ、主要粒度範囲は９０〜２００ｎｍ、Ｎ’−ペンタ
デシルジエチレントリアミン含量は他の脂質に対して
８．７ｍｏｌ％、PEG-PE誘導体修飾率はそれぞれ０．１
１、０．２３、０．４５、０．９１、１．８及び３．８
ｍｏｌ％であった。
分散液を得た。得られたリポソームを調製例１と同様に
測定したところ、平均粒子径は１１１．７〜１２５．８
ｎｍ、主要粒度範囲は９０〜２００ｎｍ、Ｎ’−ペンタ
デシルジエチレントリアミン含量は他の脂質に対して
８．７ｍｏｌ％、PEG-PE誘導体修飾率はそれぞれ０．１
１、０．２３、０．４５、０．９１、１．８及び３．８
ｍｏｌ％であった。
【００６７】（調製例４）グルカミンパルミテートおよ
びポリエチレングリコール−ホスファチジルエタノール
アミン誘導体を膜構成成分として含有するリポソームの
調製 下記３種類の膜構成成分をそれぞれクロロホルム溶液と
して、容積５０ｍｌのナス型フラスコに加え、混合し
た。 ・フォスファチジルコリン（濃度１００ｍＭ）：３．０
ｍＬ ・コレステロール（濃度１００ｍＭ）：２．５４ｍＬ ・下記式で表されるグルカミンパルミテート（１０ｍ
Ｍ）：４．６ｍＬ
びポリエチレングリコール−ホスファチジルエタノール
アミン誘導体を膜構成成分として含有するリポソームの
調製 下記３種類の膜構成成分をそれぞれクロロホルム溶液と
して、容積５０ｍｌのナス型フラスコに加え、混合し
た。 ・フォスファチジルコリン（濃度１００ｍＭ）：３．０
ｍＬ ・コレステロール（濃度１００ｍＭ）：２．５４ｍＬ ・下記式で表されるグルカミンパルミテート（１０ｍ
Ｍ）：４．６ｍＬ
【００６８】
【化１４】 以下、調製例１と同様の方法により、表記のリポソーム
分散液を得た。得られたリポソームを調製例１と同様に
測定したところ、平均粒子径は１１２．５〜１２４．５
ｎｍ、主要粒度範囲は９０〜２００ｎｍ、グルカミンパ
ルミテート含量は他の脂質に対して８．７ｍｏｌ％、PE
G-PE誘導体修飾率はそれぞれ０．１１、０．２３、０．
４５、０．９１、１．８及び３．８ｍｏｌ％であった。
分散液を得た。得られたリポソームを調製例１と同様に
測定したところ、平均粒子径は１１２．５〜１２４．５
ｎｍ、主要粒度範囲は９０〜２００ｎｍ、グルカミンパ
ルミテート含量は他の脂質に対して８．７ｍｏｌ％、PE
G-PE誘導体修飾率はそれぞれ０．１１、０．２３、０．
４５、０．９１、１．８及び３．８ｍｏｌ％であった。
【００６９】（調製例５）１、２−ジパルミトイル−３
−トリメチルアンモニウムプロパンおよびポリエチレン
グリコール−ホスファチジルエタノールアミン誘導体を
膜構成成分として含有するリポソームの調製 下記３種類の膜構成成分をそれぞれクロロホルム溶液と
して、容積５０ｍｌのナス型フラスコに加え、混合し
た。 ・フォスファチジルコリン（濃度１００ｍＭ）：３．０
ｍＬ ・コレステロール（濃度１００ｍＭ）：２．５４ｍＬ ・下記式で表される１，２−ジパルミトイル−３−トリ
メチルアンモニウムプロパン（１０ｍＭ）：４．６ｍＬ
−トリメチルアンモニウムプロパンおよびポリエチレン
グリコール−ホスファチジルエタノールアミン誘導体を
膜構成成分として含有するリポソームの調製 下記３種類の膜構成成分をそれぞれクロロホルム溶液と
して、容積５０ｍｌのナス型フラスコに加え、混合し
た。 ・フォスファチジルコリン（濃度１００ｍＭ）：３．０
ｍＬ ・コレステロール（濃度１００ｍＭ）：２．５４ｍＬ ・下記式で表される１，２−ジパルミトイル−３−トリ
メチルアンモニウムプロパン（１０ｍＭ）：４．６ｍＬ
【００７０】
【化１５】 以下、調製例１と同様の方法により、表記のリポソーム
分散液を得た。得られたリポソームを調製例１と同様に
測定したところ、平均粒子径は１１３．４〜１３０．１
ｎｍ、主要粒度範囲は９０〜２００ｎｍ、１、２−ジパ
ルミトイル−３−トリメチルアンモニウムプロパン含量
は他の脂質に対して８．７ｍｏｌ％、PEG-PE誘導体修飾
率はそれぞれ０．１１、０．２３、０．４５、０．９
１、１．８及び３．８ｍｏｌ％であった。
分散液を得た。得られたリポソームを調製例１と同様に
測定したところ、平均粒子径は１１３．４〜１３０．１
ｎｍ、主要粒度範囲は９０〜２００ｎｍ、１、２−ジパ
ルミトイル−３−トリメチルアンモニウムプロパン含量
は他の脂質に対して８．７ｍｏｌ％、PEG-PE誘導体修飾
率はそれぞれ０．１１、０．２３、０．４５、０．９
１、１．８及び３．８ｍｏｌ％であった。
【００７１】（調製例６）１，２−ジパルミトイル−３
−ジメチルアンモニウムプロパンおよびポリエチレング
リコール−ホスファチジルエタノールアミン誘導体を膜
構成成分として含有するリポソームの調製 下記３種類の膜構成成分をそれぞれクロロホルム溶液と
して、容積５０ｍｌのナス型フラスコに加え、混合し
た。 ・フォスファチジルコリン（濃度１００ｍＭ）：３．０
ｍＬ ・コレステロール（濃度１００ｍＭ）：２．５４ｍＬ ・下記式で表される１、２−ジパルミトイル−３−ジメ
チルアンモニウムプロパン（１０ｍＭ）：４．６ｍＬ
−ジメチルアンモニウムプロパンおよびポリエチレング
リコール−ホスファチジルエタノールアミン誘導体を膜
構成成分として含有するリポソームの調製 下記３種類の膜構成成分をそれぞれクロロホルム溶液と
して、容積５０ｍｌのナス型フラスコに加え、混合し
た。 ・フォスファチジルコリン（濃度１００ｍＭ）：３．０
ｍＬ ・コレステロール（濃度１００ｍＭ）：２．５４ｍＬ ・下記式で表される１、２−ジパルミトイル−３−ジメ
チルアンモニウムプロパン（１０ｍＭ）：４．６ｍＬ
【００７２】
【化１６】 以下、調製例１と同様の方法により、表記のリポソーム
分散液を得た。得られたリポソームを調製例１と同様に
測定したところ、平均粒子径は１１３．４〜１３０．１
ｎｍ、主要粒度範囲は９０〜２００ｎｍ、１，２−ジパ
ルミトイル−３−ジメチルアンモニウムプロパン含量は
他の脂質に対して８．７ｍｏｌ％、PEG-PE誘導体修飾率
はそれぞれ０．１１、０．２３、０．４５、０．９１、
１．８及び３．８ｍｏｌ％であった。
分散液を得た。得られたリポソームを調製例１と同様に
測定したところ、平均粒子径は１１３．４〜１３０．１
ｎｍ、主要粒度範囲は９０〜２００ｎｍ、１，２−ジパ
ルミトイル−３−ジメチルアンモニウムプロパン含量は
他の脂質に対して８．７ｍｏｌ％、PEG-PE誘導体修飾率
はそれぞれ０．１１、０．２３、０．４５、０．９１、
１．８及び３．８ｍｏｌ％であった。
【００７３】（調製例７）中性リポソーム製剤の調製 下記の２種類の膜構成成分をそれぞれクロロホルム溶液
として、容積５０ｍｌのナス型フラスコに加え、混合し
た。 ・フォスファチジルコリン（濃度１００ｍＭ）：３．４
８ｍＬ ・コレステロール（濃度１００ｍＭ）：２．５４ｍＬ 以下、調製例１と同様の方法により、表記のリポソーム
分散液を得た。得られたリポソームを調製例１と同様に
測定したところ、平均粒子径は１１１．４〜１２６．５
ｎｍ、主要粒度範囲は９０〜２００ｎｍ、PEG-PE誘導体
修飾率はそれぞれ０．１１、０．２３、０．４５、０．
９１、１．８及び３．８ｍｏｌ％であった。
として、容積５０ｍｌのナス型フラスコに加え、混合し
た。 ・フォスファチジルコリン（濃度１００ｍＭ）：３．４
８ｍＬ ・コレステロール（濃度１００ｍＭ）：２．５４ｍＬ 以下、調製例１と同様の方法により、表記のリポソーム
分散液を得た。得られたリポソームを調製例１と同様に
測定したところ、平均粒子径は１１１．４〜１２６．５
ｎｍ、主要粒度範囲は９０〜２００ｎｍ、PEG-PE誘導体
修飾率はそれぞれ０．１１、０．２３、０．４５、０．
９１、１．８及び３．８ｍｏｌ％であった。
【００７４】（調製例８）３，５−ジペンタデシロキシ
ベンズアミジン塩酸塩およびポリエチレングリコール−
ホスファチジルエタノールアミン誘導体を膜構成成分と
して含有するリポソームの調製 下記３種類の膜構成成分をそれぞれクロロホルム溶液と
して、容積５０ｍｌのナス型フラスコに加え、混合し
た。 ・フォスファチジルコリン（濃度１００ｍＭ）：３．１
２ｍＬ ・コレステロール（濃度１００ｍＭ）：２．６６ｍＬ ・３，５−ジペンタデシロキシベンズアミジン塩酸塩
（１０ｍＭ）：２．３ｍＬ 以下、調製例１と同様の方法により、表記のリポソーム
分散液を得た。得られたリポソームを調製例１と同様に
測定したところ、平均粒子径は１２４．５〜１３２．４
ｎｍ、主要粒度範囲は９０〜２００ｎｍ、３，５−ジペ
ンタデシロキシベンズアミジン塩酸塩含量は他の脂質に
対して４．２ｍｏｌ％、PEG-PE誘導体修飾率はそれぞれ
０．１１、０．２３、０．４５、０．９１、１．８及び
３．８ｍｏｌ％であった。
ベンズアミジン塩酸塩およびポリエチレングリコール−
ホスファチジルエタノールアミン誘導体を膜構成成分と
して含有するリポソームの調製 下記３種類の膜構成成分をそれぞれクロロホルム溶液と
して、容積５０ｍｌのナス型フラスコに加え、混合し
た。 ・フォスファチジルコリン（濃度１００ｍＭ）：３．１
２ｍＬ ・コレステロール（濃度１００ｍＭ）：２．６６ｍＬ ・３，５−ジペンタデシロキシベンズアミジン塩酸塩
（１０ｍＭ）：２．３ｍＬ 以下、調製例１と同様の方法により、表記のリポソーム
分散液を得た。得られたリポソームを調製例１と同様に
測定したところ、平均粒子径は１２４．５〜１３２．４
ｎｍ、主要粒度範囲は９０〜２００ｎｍ、３，５−ジペ
ンタデシロキシベンズアミジン塩酸塩含量は他の脂質に
対して４．２ｍｏｌ％、PEG-PE誘導体修飾率はそれぞれ
０．１１、０．２３、０．４５、０．９１、１．８及び
３．８ｍｏｌ％であった。
【００７５】（調製例９）３，５−ジペンタデシロキシ
ベンズアミジン塩酸塩およびポリエチレングリコール−
ホスファチジルエタノールアミン誘導体を膜構成成分と
して含有するリポソームの調製 下記３種類の膜構成成分をそれぞれクロロホルム溶液と
して、容積５０ｍｌのナス型フラスコに加え、混合し
た。 ・フォスファチジルコリン（濃度１００ｍＭ）：２．７
６ｍＬ ・コレステロール（濃度１００ｍＭ）：２．３６ｍＬ ・３，５−ジペンタデシロキシベンズアミジン塩酸塩
（１００ｍＭ）：８．６３ｍＬ 以下、調製例１と同様の方法により、表記のリポソーム
分散液を得た。得られたリポソームを調製例１と同様に
測定したところ、平均粒子径は１１３．３〜１２３．２
ｎｍ、主要粒度範囲は９０〜２００ｎｍ、３，５−ジペ
ンタデシロキシベンズアミジン塩酸塩含量は他の脂質に
対して１７．６ｍｏｌ％、PEG-PE誘導体修飾率はそれぞ
れ０．１１、０．２３、０．４５、０．９１、１．８及
び３．８ｍｏｌ％であった。
ベンズアミジン塩酸塩およびポリエチレングリコール−
ホスファチジルエタノールアミン誘導体を膜構成成分と
して含有するリポソームの調製 下記３種類の膜構成成分をそれぞれクロロホルム溶液と
して、容積５０ｍｌのナス型フラスコに加え、混合し
た。 ・フォスファチジルコリン（濃度１００ｍＭ）：２．７
６ｍＬ ・コレステロール（濃度１００ｍＭ）：２．３６ｍＬ ・３，５−ジペンタデシロキシベンズアミジン塩酸塩
（１００ｍＭ）：８．６３ｍＬ 以下、調製例１と同様の方法により、表記のリポソーム
分散液を得た。得られたリポソームを調製例１と同様に
測定したところ、平均粒子径は１１３．３〜１２３．２
ｎｍ、主要粒度範囲は９０〜２００ｎｍ、３，５−ジペ
ンタデシロキシベンズアミジン塩酸塩含量は他の脂質に
対して１７．６ｍｏｌ％、PEG-PE誘導体修飾率はそれぞ
れ０．１１、０．２３、０．４５、０．９１、１．８及
び３．８ｍｏｌ％であった。
【００７６】（調製例１０）３，５−ジペンタデシロキ
シベンズアミジン塩酸塩およびポリエチレングリコール
−ホスファチジルエタノールアミン誘導体を膜構成成分
として含有するリポソームの調製 下記３種類の膜構成成分をそれぞれクロロホルム溶液と
して、容積５０ｍｌのナス型フラスコに加え、混合し
た。 ・フォスファチジルコリン（濃度１００ｍＭ）：２．２
８ｍＬ ・コレステロール（濃度１００ｍＭ）：１．９４ｍＬ ・３，５−ジペンタデシロキシベンズアミジン塩酸塩
（１００ｍＭ）：１．７３ｍＬ 以下、調製例１と同様の方法により、表記のリポソーム
分散液を得た。得られたリポソームを調製例１と同様に
測定したところ、平均粒子径は１２５．３〜１３３．３
ｎｍ、主要粒度範囲は９０〜２００ｎｍ、３，５−ジペ
ンタデシロキシベンズアミジン塩酸塩含量は他の脂質に
対して４２．９ｍｏｌ％、PEG-PE誘導体修飾率はそれぞ
れ０．１１、０．２３、０．９１、１．８及び３．８ｍ
ｏｌ％であった。
シベンズアミジン塩酸塩およびポリエチレングリコール
−ホスファチジルエタノールアミン誘導体を膜構成成分
として含有するリポソームの調製 下記３種類の膜構成成分をそれぞれクロロホルム溶液と
して、容積５０ｍｌのナス型フラスコに加え、混合し
た。 ・フォスファチジルコリン（濃度１００ｍＭ）：２．２
８ｍＬ ・コレステロール（濃度１００ｍＭ）：１．９４ｍＬ ・３，５−ジペンタデシロキシベンズアミジン塩酸塩
（１００ｍＭ）：１．７３ｍＬ 以下、調製例１と同様の方法により、表記のリポソーム
分散液を得た。得られたリポソームを調製例１と同様に
測定したところ、平均粒子径は１２５．３〜１３３．３
ｎｍ、主要粒度範囲は９０〜２００ｎｍ、３，５−ジペ
ンタデシロキシベンズアミジン塩酸塩含量は他の脂質に
対して４２．９ｍｏｌ％、PEG-PE誘導体修飾率はそれぞ
れ０．１１、０．２３、０．９１、１．８及び３．８ｍ
ｏｌ％であった。
【００７７】（調製例１１）１，２−ジパルミトイル−
３−トリメチルアンモニウムプロパンおよびポリエチレ
ングリコール−ホスファチジルエタノールアミン誘導体
を膜構成成分として含有するリポソームの調製 下記３種類の膜構成成分をそれぞれクロロホルム溶液と
して、容積０．１５０ｍｌのナス型フラスコに加え、混
合した。 ・フォスファチジルコリン（濃度１００ｍＭ）：３．２
４ｍＬ ・コレステロール（濃度１００ｍＭ）：２．７５ｍＬ ・１，２−ジパルミトイル−３−トリメチルアンモニウ
ムプロパン（１０ｍＭ）：０．２９ｍＬ 以下、調製例１と同様の方法により、表記のリポソーム
分散液を得た。得られたリポソームを調製例１と同様に
測定したところ、平均粒子径は１１５．４〜１２６．３
ｎｍ、主要粒度範囲は９０〜２００ｎｍ、１，２−ジパ
ルミトイル−３−ジメチルアンモニウムプロパン含量は
他の脂質に対して０．５ｍｏｌ％、PEG-PE誘導体修飾率
はそれぞれ０．１１、０．２３、０．９１、１．８及び
３．８ｍｏｌ％であった。
３−トリメチルアンモニウムプロパンおよびポリエチレ
ングリコール−ホスファチジルエタノールアミン誘導体
を膜構成成分として含有するリポソームの調製 下記３種類の膜構成成分をそれぞれクロロホルム溶液と
して、容積０．１５０ｍｌのナス型フラスコに加え、混
合した。 ・フォスファチジルコリン（濃度１００ｍＭ）：３．２
４ｍＬ ・コレステロール（濃度１００ｍＭ）：２．７５ｍＬ ・１，２−ジパルミトイル−３−トリメチルアンモニウ
ムプロパン（１０ｍＭ）：０．２９ｍＬ 以下、調製例１と同様の方法により、表記のリポソーム
分散液を得た。得られたリポソームを調製例１と同様に
測定したところ、平均粒子径は１１５．４〜１２６．３
ｎｍ、主要粒度範囲は９０〜２００ｎｍ、１，２−ジパ
ルミトイル−３−ジメチルアンモニウムプロパン含量は
他の脂質に対して０．５ｍｏｌ％、PEG-PE誘導体修飾率
はそれぞれ０．１１、０．２３、０．９１、１．８及び
３．８ｍｏｌ％であった。
【００７８】（調製例１２）１，２−ジパルミトイル−
３−トリメチルアンモニウムプロパンおよびポリエチレ
ングリコール−ホスファチジルエタノールアミン誘導体
を膜構成成分として含有するリポソームの調製 下記３種類の膜構成成分をそれぞれクロロホルム溶液と
して、容積０．１５０ｍｌのナス型フラスコに加え、混
合した。 ・フォスファチジルコリン（濃度１００ｍＭ）：３．０
６ｍＬ ・コレステロール（濃度１００ｍＭ）：２．６６ｍＬ ・１，２−ジパルミトイル−３−トリメチルアンモニウ
ムプロパン（１０ｍＭ）：２．８８ｍＬ 以下、調製例１と同様の方法により、表記のリポソーム
分散液を得た。得られたリポソームを調製例１と同様に
測定したところ、平均粒子径は１１４．５〜１２８．１
ｎｍ、主要粒度範囲は９０〜２００ｎｍ、１，２−ジパ
ルミトイル−３−ジメチルアンモニウムプロパン含量は
他の脂質に対して５．３ｍｏｌ％、PEG-PE誘導体修飾率
はそれぞれ０．１１、０．２３、０．９１、１．８及び
３．８ｍｏｌ％であった。
３−トリメチルアンモニウムプロパンおよびポリエチレ
ングリコール−ホスファチジルエタノールアミン誘導体
を膜構成成分として含有するリポソームの調製 下記３種類の膜構成成分をそれぞれクロロホルム溶液と
して、容積０．１５０ｍｌのナス型フラスコに加え、混
合した。 ・フォスファチジルコリン（濃度１００ｍＭ）：３．０
６ｍＬ ・コレステロール（濃度１００ｍＭ）：２．６６ｍＬ ・１，２−ジパルミトイル−３−トリメチルアンモニウ
ムプロパン（１０ｍＭ）：２．８８ｍＬ 以下、調製例１と同様の方法により、表記のリポソーム
分散液を得た。得られたリポソームを調製例１と同様に
測定したところ、平均粒子径は１１４．５〜１２８．１
ｎｍ、主要粒度範囲は９０〜２００ｎｍ、１，２−ジパ
ルミトイル−３−ジメチルアンモニウムプロパン含量は
他の脂質に対して５．３ｍｏｌ％、PEG-PE誘導体修飾率
はそれぞれ０．１１、０．２３、０．９１、１．８及び
３．８ｍｏｌ％であった。
【００７９】（調製例１３）Ｎ’，Ｎ”−ジペンタデシ
ルトリエチルテトラミンおよびポリエチレングリコール
−ホスファチジルエタノールアミン誘導体を膜構成成分
として含有するリポソームの調製 下記３種類の膜構成成分をそれぞれクロロホルム溶液と
して、容積０．１５０ｍｌのナス型フラスコに加え、混
合した。 ・フォスファチジルコリン（濃度１００ｍＭ）：３．２
４ｍＬ ・コレステロール（濃度１００ｍＭ）：２．７５ｍＬ ・下記式で表されるＮ’，Ｎ”−ジペンタデシルトリエ
チルテトラミン（１０ｍＭ）：０．２９ｍＬ
ルトリエチルテトラミンおよびポリエチレングリコール
−ホスファチジルエタノールアミン誘導体を膜構成成分
として含有するリポソームの調製 下記３種類の膜構成成分をそれぞれクロロホルム溶液と
して、容積０．１５０ｍｌのナス型フラスコに加え、混
合した。 ・フォスファチジルコリン（濃度１００ｍＭ）：３．２
４ｍＬ ・コレステロール（濃度１００ｍＭ）：２．７５ｍＬ ・下記式で表されるＮ’，Ｎ”−ジペンタデシルトリエ
チルテトラミン（１０ｍＭ）：０．２９ｍＬ
【００８０】
【化１７】 以下、調製例１と同様の方法により、表記のリポソーム
分散液を得た。得られたリポソームを調製例１と同様に
測定したところ、平均粒子径は１１１．４〜１２３．１
ｎｍ、主要粒度範囲は９０〜２００ｎｍ、Ｎ’，Ｎ”−
ジペンタデシルトリエチルテトラミン含量は他の脂質に
対して０．５ｍｏｌ％、PEG-PE誘導体修飾率はそれぞれ
０．１１、０．２３、０．９１、１．８及び３．８ｍｏ
ｌ％であった。
分散液を得た。得られたリポソームを調製例１と同様に
測定したところ、平均粒子径は１１１．４〜１２３．１
ｎｍ、主要粒度範囲は９０〜２００ｎｍ、Ｎ’，Ｎ”−
ジペンタデシルトリエチルテトラミン含量は他の脂質に
対して０．５ｍｏｌ％、PEG-PE誘導体修飾率はそれぞれ
０．１１、０．２３、０．９１、１．８及び３．８ｍｏ
ｌ％であった。
【００８１】（調製例１４）Ｎ’，Ｎ”−ジペンタデシ
ルトリエチルテトラミンおよびポリエチレングリコール
−ホスファチジルエタノールアミン誘導体を膜構成成分
として含有するリポソームの調製 下記３種類の膜構成成分をそれぞれクロロホルム溶液と
して、容積０．１５０ｍｌのナス型フラスコに加え、混
合した。 ・フォスファチジルコリン（濃度１００ｍＭ）：３．０
６ｍＬ ・コレステロール（濃度１００ｍＭ）：２．６６ｍＬ ・Ｎ’，Ｎ”−ジペンタデシルトリエチルテトラミン
（１０ｍＭ）：２．８８ｍＬ 以下、調製例１と同様の方法により、表記のリポソーム
分散液を得た。得られたリポソームを調製例１と同様に
測定したところ、平均粒子径は１２２．５〜１３０．５
ｎｍ、主要粒度範囲は９０〜２００ｎｍ、Ｎ’，Ｎ”−
ジペンタデシルトリエチルテトラミン含量は他の脂質に
対して５．３ｍｏｌ％、ＰＥＧ修飾率はそれぞれ０．１
１、０．２３、０．９１、１．８及び３．８ｍｏｌ％で
あった。
ルトリエチルテトラミンおよびポリエチレングリコール
−ホスファチジルエタノールアミン誘導体を膜構成成分
として含有するリポソームの調製 下記３種類の膜構成成分をそれぞれクロロホルム溶液と
して、容積０．１５０ｍｌのナス型フラスコに加え、混
合した。 ・フォスファチジルコリン（濃度１００ｍＭ）：３．０
６ｍＬ ・コレステロール（濃度１００ｍＭ）：２．６６ｍＬ ・Ｎ’，Ｎ”−ジペンタデシルトリエチルテトラミン
（１０ｍＭ）：２．８８ｍＬ 以下、調製例１と同様の方法により、表記のリポソーム
分散液を得た。得られたリポソームを調製例１と同様に
測定したところ、平均粒子径は１２２．５〜１３０．５
ｎｍ、主要粒度範囲は９０〜２００ｎｍ、Ｎ’，Ｎ”−
ジペンタデシルトリエチルテトラミン含量は他の脂質に
対して５．３ｍｏｌ％、ＰＥＧ修飾率はそれぞれ０．１
１、０．２３、０．９１、１．８及び３．８ｍｏｌ％で
あった。
【００８２】（調製例１５）３，５−ジペンタデシロキ
シベンズアミジンおよびポリエチレングリコール−ホス
ファチジルエタノールアミン誘導体を膜構成成分として
含有し、かつリン酸プレドニゾロンナトリウムを内封す
るリポソームの調製 下記４種類の膜構成成分をそれぞれクロロホルム溶液と
して、容積０．１５０ｍｌのナス型フラスコに加え、混
合した。 ・フォスファチジルコリン（濃度１００ｍＭ）：４．２
ｍＬ ・コレステロール（濃度１００ｍＭ）：１．２０ｍＬ ・３，５−ジペンタデシロキシベンズアミジン塩酸塩
（１０ｍＭ）：５．７５ｍＬ ・ポリエチレングリコール−ホスファチジルエタノール
アミン誘導体（1 ｍＭ）：１２ｍＬ クロロホルムを留去した後、一晩真空乾燥することによ
りフラスコ内壁に脂質薄膜を形成した。次いで、１４０
ｍＭリン酸プレドニゾロンナトリウム・１０ｍＭ塩化ナ
トリウム水溶液10ｍＬをフラスコ内に加え、バス型ソニ
ケーターで処理することにより、リポソーム（ＭＬＶ）
分散液を得た。これを孔径０．４μｍのポリカーボネー
トフィルムを用いて圧送し、次いで０．１μｍのポリカ
ーボネートフィルムを用いて圧送することによって整粒
を行い、標記のリポソーム分散液を得た。得られたリポ
ソームを調製例１と同様に測定したところ、平均粒子径
は１３３．１ｎｍ、主要粒度範囲は９０〜２００ｎｍで
あった。
シベンズアミジンおよびポリエチレングリコール−ホス
ファチジルエタノールアミン誘導体を膜構成成分として
含有し、かつリン酸プレドニゾロンナトリウムを内封す
るリポソームの調製 下記４種類の膜構成成分をそれぞれクロロホルム溶液と
して、容積０．１５０ｍｌのナス型フラスコに加え、混
合した。 ・フォスファチジルコリン（濃度１００ｍＭ）：４．２
ｍＬ ・コレステロール（濃度１００ｍＭ）：１．２０ｍＬ ・３，５−ジペンタデシロキシベンズアミジン塩酸塩
（１０ｍＭ）：５．７５ｍＬ ・ポリエチレングリコール−ホスファチジルエタノール
アミン誘導体（1 ｍＭ）：１２ｍＬ クロロホルムを留去した後、一晩真空乾燥することによ
りフラスコ内壁に脂質薄膜を形成した。次いで、１４０
ｍＭリン酸プレドニゾロンナトリウム・１０ｍＭ塩化ナ
トリウム水溶液10ｍＬをフラスコ内に加え、バス型ソニ
ケーターで処理することにより、リポソーム（ＭＬＶ）
分散液を得た。これを孔径０．４μｍのポリカーボネー
トフィルムを用いて圧送し、次いで０．１μｍのポリカ
ーボネートフィルムを用いて圧送することによって整粒
を行い、標記のリポソーム分散液を得た。得られたリポ
ソームを調製例１と同様に測定したところ、平均粒子径
は１３３．１ｎｍ、主要粒度範囲は９０〜２００ｎｍで
あった。
【００８３】（比較例１）調整例１５における１４０ｍ
Ｍリン酸プレドニゾロンナトリウム・１０ｍＭ塩化ナト
リウム水溶液の代わりに生理食塩水を用いた他は調整例
１５と同様に操作して作製したリポソーム。平均粒子径
は１０３．４ｎｍ、主要粒度範囲は９０〜２００ｎｍで
あった。
Ｍリン酸プレドニゾロンナトリウム・１０ｍＭ塩化ナト
リウム水溶液の代わりに生理食塩水を用いた他は調整例
１５と同様に操作して作製したリポソーム。平均粒子径
は１０３．４ｎｍ、主要粒度範囲は９０〜２００ｎｍで
あった。
【００８４】（調製例１６）平均粒子径が２００ｎｍ超
となるリポソームの調製 整粒を孔径０．４μｍのポリカーボネートフィルムのみ
を用い、孔径０．１μｍのポリカーボネートフィルムを
用いなかった以外は調製例１と同様の方法により、標記
のリポソーム液を得た。得られたリポソームを調製例１
と同様に粒子径を測定したところ、平均粒子径は２７３
ｎｍ、主要粒度範囲は１８０〜３５０ｎｍであった。
となるリポソームの調製 整粒を孔径０．４μｍのポリカーボネートフィルムのみ
を用い、孔径０．１μｍのポリカーボネートフィルムを
用いなかった以外は調製例１と同様の方法により、標記
のリポソーム液を得た。得られたリポソームを調製例１
と同様に粒子径を測定したところ、平均粒子径は２７３
ｎｍ、主要粒度範囲は１８０〜３５０ｎｍであった。
【００８５】（調製例１７）平均粒子径が９０ｎｍ未満
となるリポソームの調製 整粒を孔径０．４μｍのポリカーボネートフィルム、孔
径０．１μｍのポリカーボネートフィルムを用いた後、
さらに孔径０．０５μｍのポリカーボネートフィルムを
用いて行った以外は調製例１と同様の方法により、標記
のリポソーム液を得た。得られたリポソームを調製例１
と同様に粒子径を測定したところ、平均粒子径は７９．
６ｎｍ、主要粒度範囲は４０〜９０ｎｍであった。
となるリポソームの調製 整粒を孔径０．４μｍのポリカーボネートフィルム、孔
径０．１μｍのポリカーボネートフィルムを用いた後、
さらに孔径０．０５μｍのポリカーボネートフィルムを
用いて行った以外は調製例１と同様の方法により、標記
のリポソーム液を得た。得られたリポソームを調製例１
と同様に粒子径を測定したところ、平均粒子径は７９．
６ｎｍ、主要粒度範囲は４０〜９０ｎｍであった。
【００８６】２．各種リポソームの性能の試験例 得られた各種リポソームの性能を試験した。 （試験例１）プロテオグリカン産生細胞との親和性
（１） この試験の目的は、生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる塩
基化合物による表面修飾がプロテオグリカン産生細胞と
の接着・取り込み性に及ぼす影響、さらにそれに際して
親水性高分子脂質誘導体が及ぼす影響を知ることであ
る。 ＜方法＞ラットメサンギウム細胞を１２穴マイクロプレ
ートにて培養し、細胞数として４×１０4 個／穴程度ま
で増殖させた。これに調製例１および調製例７に準じて
調製されたローダミン−ＰＥにてリポソーム膜を標識し
たローダミン標識リポソームを脂質量として５０μｇ添
加した。３７℃で２４時間インキュベートし、その後生
理食塩水にて２回洗浄した。０．１％ＳＤＳ溶液を加え
て溶解し、蛍光強度を測定することにより細胞に接着・
取り込まれたリポソーム量を算出した。
（１） この試験の目的は、生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる塩
基化合物による表面修飾がプロテオグリカン産生細胞と
の接着・取り込み性に及ぼす影響、さらにそれに際して
親水性高分子脂質誘導体が及ぼす影響を知ることであ
る。 ＜方法＞ラットメサンギウム細胞を１２穴マイクロプレ
ートにて培養し、細胞数として４×１０4 個／穴程度ま
で増殖させた。これに調製例１および調製例７に準じて
調製されたローダミン−ＰＥにてリポソーム膜を標識し
たローダミン標識リポソームを脂質量として５０μｇ添
加した。３７℃で２４時間インキュベートし、その後生
理食塩水にて２回洗浄した。０．１％ＳＤＳ溶液を加え
て溶解し、蛍光強度を測定することにより細胞に接着・
取り込まれたリポソーム量を算出した。
【００８７】＜結果＞結果を図１に示した。表面を生理
的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる塩基化合物によって修飾さ
れたリポソームをポリエチレングリコール−ホスファチ
ジルエタノールアミン誘導体にて様々な濃度にて修飾し
た際、ポリエチレングリコール−ホスファチジルエタノ
ールアミン誘導体の修飾がない場合は実験中に凝集を起
こした。また高濃度修飾では細胞への接着・取り込み量
が低下した。また、表面を生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯
びる塩基性化合物を持たないリポソームではいずれにお
いても細胞への接着・取り込みは起こらなかった。即
ち、安定にプロテオグリカン産生細胞への接着・取り込
み性を確保するためには、表面を生理的ｐＨ範囲で陽電
荷を帯びる塩基化合物によって修飾されていることが必
要であり、さらに安定的に取り込まれるためには親水性
高分子脂質誘導体の修飾量は５ｍｏｌ％以下であること
が必要である。
的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる塩基化合物によって修飾さ
れたリポソームをポリエチレングリコール−ホスファチ
ジルエタノールアミン誘導体にて様々な濃度にて修飾し
た際、ポリエチレングリコール−ホスファチジルエタノ
ールアミン誘導体の修飾がない場合は実験中に凝集を起
こした。また高濃度修飾では細胞への接着・取り込み量
が低下した。また、表面を生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯
びる塩基性化合物を持たないリポソームではいずれにお
いても細胞への接着・取り込みは起こらなかった。即
ち、安定にプロテオグリカン産生細胞への接着・取り込
み性を確保するためには、表面を生理的ｐＨ範囲で陽電
荷を帯びる塩基化合物によって修飾されていることが必
要であり、さらに安定的に取り込まれるためには親水性
高分子脂質誘導体の修飾量は５ｍｏｌ％以下であること
が必要である。
【００８８】（試験例２）プロテオグリカン産生細胞と
の親和性（２） この試験の目的は、表面を生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯
びる塩基性化合物によって表面修飾されたリポソーム
の、プロテオグリカン産生細胞との接着性におけるプロ
テオグリカンの重要性を知ることである。 ＜方法＞ラットメサンギウム細胞を１２穴マイクロプレ
ートにて培養し、細胞数として４×１０4 個／穴程度ま
で増殖させた。その後、コンドロイチナーゼＡＢＣで酵
素処理し、細胞表面のプロテオグリカンを除いた。これ
に調製例１に準じて調製されたローダミン−ＰＥにてリ
ポソーム膜を標識したローダミン標識リポソームでポリ
エチレングリコール−ホスファチジルエタノールアミン
誘導体修飾率が０．４５ｍｏｌ％のものを脂質量として
５０μｇ添加した。３７℃で３時間インキュベートし、
その後生理食塩水にて２回洗浄した。０．１％ＳＤＳ溶
液を加えて溶解し、蛍光強度を測定することにより細胞
に接着・取り込まれたリポソーム量を算出した。
の親和性（２） この試験の目的は、表面を生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯
びる塩基性化合物によって表面修飾されたリポソーム
の、プロテオグリカン産生細胞との接着性におけるプロ
テオグリカンの重要性を知ることである。 ＜方法＞ラットメサンギウム細胞を１２穴マイクロプレ
ートにて培養し、細胞数として４×１０4 個／穴程度ま
で増殖させた。その後、コンドロイチナーゼＡＢＣで酵
素処理し、細胞表面のプロテオグリカンを除いた。これ
に調製例１に準じて調製されたローダミン−ＰＥにてリ
ポソーム膜を標識したローダミン標識リポソームでポリ
エチレングリコール−ホスファチジルエタノールアミン
誘導体修飾率が０．４５ｍｏｌ％のものを脂質量として
５０μｇ添加した。３７℃で３時間インキュベートし、
その後生理食塩水にて２回洗浄した。０．１％ＳＤＳ溶
液を加えて溶解し、蛍光強度を測定することにより細胞
に接着・取り込まれたリポソーム量を算出した。
【００８９】＜結果＞結果を図２に示した。表面がプロ
テオグリカンに覆われている状態の細胞には、表面を生
理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる塩基性化合物によって表
面修飾されたリポソームは接着するが、コンドロイチナ
ーゼＡＢＣによってプロテオグリカンからコンドロイチ
ン硫酸を切り離した場合には処理された細胞への接着性
は著しく低下した。即ち、表面を生理的ｐＨ範囲で陽電
荷を帯びる塩基性化合物によって表面修飾されたリポソ
ームはをその分子中のコンドロイチン硫酸などのＧＡＧ
を介して細胞表面のプロテオグリカンと結合することに
より、接着している。
テオグリカンに覆われている状態の細胞には、表面を生
理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる塩基性化合物によって表
面修飾されたリポソームは接着するが、コンドロイチナ
ーゼＡＢＣによってプロテオグリカンからコンドロイチ
ン硫酸を切り離した場合には処理された細胞への接着性
は著しく低下した。即ち、表面を生理的ｐＨ範囲で陽電
荷を帯びる塩基性化合物によって表面修飾されたリポソ
ームはをその分子中のコンドロイチン硫酸などのＧＡＧ
を介して細胞表面のプロテオグリカンと結合することに
より、接着している。
【００９０】（試験例３）プロテオグリカン産生細胞と
の親和性（３） この試験の目的は、表面を生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯
びる塩基性化合物の含量が、プロテオグリカン産生細胞
との親和性に及ぼす影響を知ることである。 ＜方法＞ラットメサンギウム細胞を１２穴マイクロプレ
ートにて培養し、細胞数として４×１０4 個／穴程度ま
で増殖させた。これに調製例８、調製例１、調製例９お
よび調製例１０、調製例１１〜調製例１４に準じて調製
されたローダミン−ＰＥにてリポソーム膜を標識したロ
ーダミン標識リポソームを脂質量として５０μｇ添加し
た。３７℃で２４時間インキュベートし、その後生理食
塩水にて２回洗浄した。０．１％ＳＤＳ溶液を加えて溶
解し、蛍光強度を測定することにより細胞に接着・取り
込まれたリポソーム量を算出した。同様に、ヒト血管内
皮細胞を１２穴マイクロプレートにて培養し、細胞数と
して４×１０4 個／穴程度まで増殖させ、これに調製例
８、調製例１、調製例９および調製例１０、調製例１１
〜調製例１４に準じて調製されたローダミン−ＰＥにて
リポソーム膜を標識したローダミン標識リポソームを脂
質量として５０μｇ添加した。その後はラットメサンギ
ウム細胞の場合と同様に操作し、細胞に接着・取り込ま
れたリポソーム量を算出した。
の親和性（３） この試験の目的は、表面を生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯
びる塩基性化合物の含量が、プロテオグリカン産生細胞
との親和性に及ぼす影響を知ることである。 ＜方法＞ラットメサンギウム細胞を１２穴マイクロプレ
ートにて培養し、細胞数として４×１０4 個／穴程度ま
で増殖させた。これに調製例８、調製例１、調製例９お
よび調製例１０、調製例１１〜調製例１４に準じて調製
されたローダミン−ＰＥにてリポソーム膜を標識したロ
ーダミン標識リポソームを脂質量として５０μｇ添加し
た。３７℃で２４時間インキュベートし、その後生理食
塩水にて２回洗浄した。０．１％ＳＤＳ溶液を加えて溶
解し、蛍光強度を測定することにより細胞に接着・取り
込まれたリポソーム量を算出した。同様に、ヒト血管内
皮細胞を１２穴マイクロプレートにて培養し、細胞数と
して４×１０4 個／穴程度まで増殖させ、これに調製例
８、調製例１、調製例９および調製例１０、調製例１１
〜調製例１４に準じて調製されたローダミン−ＰＥにて
リポソーム膜を標識したローダミン標識リポソームを脂
質量として５０μｇ添加した。その後はラットメサンギ
ウム細胞の場合と同様に操作し、細胞に接着・取り込ま
れたリポソーム量を算出した。
【００９１】＜結果＞結果を図３〜図６に示した。細胞
表面の生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる塩基性化合物含
量によって、細胞への接着性が異なる。塩基性化合物含
量が０．５ｍｏｌ％以下であると、ラットメサンギウム
細胞やヒト血管内皮細胞への接着が全く起こらないが、
１ｍｏｌ％以上となると、コンドロイチン硫酸プロテオ
グリカンを多く産生するラットメサンギウム細胞への接
着性が向上する（図３および図５）。また、塩基性化合
物含量を上げていくとラットメサンギウム細胞への接着
性が高まっていく。しかし、２０ｍｏｌ％以上となる
と、ヘパラン硫酸プロテオグリカンを多く産生するヒト
血管内皮細胞への接着も増加する（図４および図６）。
また、メサンギウム細胞への接着性は塩基性化合物の種
類によってその強さが異なり、概ね５ｍｏｌ％以上では
どの膜材でも接着性が確保されるが１〜５ｍｏｌ％の範
囲でも膜材によってはメサンギウム細胞への接着性を示
した。即ち、カチオン化膜材含量は１ｍｏｌ％以上でプ
ロテオグリカン産生細胞との接着性を有する。好ましく
は５ｍｏｌ％以上である。また５〜１５ｍｏｌ％の場合
には、血管内皮細胞との結合がなく、病変部位における
標的細胞の産生するプロテオグリカンに限定した接着性
を示すリポソームを作製できることから、特に好まし
い。
表面の生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる塩基性化合物含
量によって、細胞への接着性が異なる。塩基性化合物含
量が０．５ｍｏｌ％以下であると、ラットメサンギウム
細胞やヒト血管内皮細胞への接着が全く起こらないが、
１ｍｏｌ％以上となると、コンドロイチン硫酸プロテオ
グリカンを多く産生するラットメサンギウム細胞への接
着性が向上する（図３および図５）。また、塩基性化合
物含量を上げていくとラットメサンギウム細胞への接着
性が高まっていく。しかし、２０ｍｏｌ％以上となる
と、ヘパラン硫酸プロテオグリカンを多く産生するヒト
血管内皮細胞への接着も増加する（図４および図６）。
また、メサンギウム細胞への接着性は塩基性化合物の種
類によってその強さが異なり、概ね５ｍｏｌ％以上では
どの膜材でも接着性が確保されるが１〜５ｍｏｌ％の範
囲でも膜材によってはメサンギウム細胞への接着性を示
した。即ち、カチオン化膜材含量は１ｍｏｌ％以上でプ
ロテオグリカン産生細胞との接着性を有する。好ましく
は５ｍｏｌ％以上である。また５〜１５ｍｏｌ％の場合
には、血管内皮細胞との結合がなく、病変部位における
標的細胞の産生するプロテオグリカンに限定した接着性
を示すリポソームを作製できることから、特に好まし
い。
【００９２】（試験例４）各種リポソームと血清中安定
性 この試験の目的は、リポソーム表面の生理的ｐＨ範囲で
陽電荷を帯びる塩基性化合物の含量が、血清中でのリポ
ソームの安定性に及ぼす影響を知ることである。 ＜方法＞ラット血清１００μＬに、調製例８、調製例
１、調製例９及び調製例１０で得られたリポソームを生
理食塩水にて総脂質として１０ｍＭに希釈した分散液１
００μＬを加えて混合し、３７℃１時間加温した。冷却
後生理食塩水２ｍＬを加えて希釈し、吸光度４５０ｎｍ
にて濁度を測定した。 ＜結果＞結果を図７に示した。生理的ｐＨ範囲で陽電荷
を帯びる塩基性化合物含量によって、血清中におけるリ
ポソームの凝集性が異なる。塩基性化合物が１５ｍｏｌ
％以下の場合には血清中での凝集性は全く問題ない。１
５〜２０ｍｏｌ％の場合には、 PEG−PE誘導体−PE修飾
率が０．５ｍｏｌ％以上の場合には凝集が防止される。
また塩基性化合物が２０ｍｏｌ％以上となると２ｍｏｌ
％の PEG−PE誘導体−PEを加えても凝集し、安定性が損
なわれる。即ち、血液中でリポソームの凝集を防止し、
安定性を確保するためには、塩基性化合物含量を２０ｍ
ｏｌ％以下とすることが最適である。
性 この試験の目的は、リポソーム表面の生理的ｐＨ範囲で
陽電荷を帯びる塩基性化合物の含量が、血清中でのリポ
ソームの安定性に及ぼす影響を知ることである。 ＜方法＞ラット血清１００μＬに、調製例８、調製例
１、調製例９及び調製例１０で得られたリポソームを生
理食塩水にて総脂質として１０ｍＭに希釈した分散液１
００μＬを加えて混合し、３７℃１時間加温した。冷却
後生理食塩水２ｍＬを加えて希釈し、吸光度４５０ｎｍ
にて濁度を測定した。 ＜結果＞結果を図７に示した。生理的ｐＨ範囲で陽電荷
を帯びる塩基性化合物含量によって、血清中におけるリ
ポソームの凝集性が異なる。塩基性化合物が１５ｍｏｌ
％以下の場合には血清中での凝集性は全く問題ない。１
５〜２０ｍｏｌ％の場合には、 PEG−PE誘導体−PE修飾
率が０．５ｍｏｌ％以上の場合には凝集が防止される。
また塩基性化合物が２０ｍｏｌ％以上となると２ｍｏｌ
％の PEG−PE誘導体−PEを加えても凝集し、安定性が損
なわれる。即ち、血液中でリポソームの凝集を防止し、
安定性を確保するためには、塩基性化合物含量を２０ｍ
ｏｌ％以下とすることが最適である。
【００９３】（試験例５）各種リポソームのプロテオグ
リカンとの親和性 この試験の目的は、表面を生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯
びる塩基性化合物によって修飾されたリポソームとプロ
テオグリカンとの接着に際して親水性高分子脂質誘導体
が及ぼす影響を知ることである。 ＜方法＞コンドロイチン硫酸Ｃを生理食塩水に溶解し、
０．１ｍｇ／ｍＬとなるよう調製した。この溶液０．５
ｍＬに、調製例１で得られた各リポソームを生理食塩水
にて総脂質濃度１０ｍＭに希釈したもの０．５ｍＬを加
えて、３７℃で１時間加温した。冷却後、吸光度５５０
ｎｍにて濁度を測定し、濁度とリポソームのポリエチレ
ングリコール−ホスファチジルエタノールアミン誘導体
修飾率の相関から、コンドロイチン硫酸Ｃの接着に及ぼ
すポリエチレングリコール−ホスファチジルエタノール
アミン誘導体修飾率の影響を検討した。 ＜結果＞結果を図８に示した。ポリエチレングリコール
−ホスファチジルエタノールアミン誘導体にて様々な濃
度にて修飾した際、修飾濃度が低いほどプロテオグリカ
ンの接着量が多かった。また、プロテオグリカンと接着
できるのは、修飾量が５ｍｏｌ％以下の場合であった。
即ち、親水性高分子脂質誘導体にてリポソーム表面を修
飾することにより、表面を生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯
びる塩基性化合物によって修飾されたリポソームのプロ
テオグリカンとの接着性を制御でき、それには５ｍｏｌ
％以下が最適である。
リカンとの親和性 この試験の目的は、表面を生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯
びる塩基性化合物によって修飾されたリポソームとプロ
テオグリカンとの接着に際して親水性高分子脂質誘導体
が及ぼす影響を知ることである。 ＜方法＞コンドロイチン硫酸Ｃを生理食塩水に溶解し、
０．１ｍｇ／ｍＬとなるよう調製した。この溶液０．５
ｍＬに、調製例１で得られた各リポソームを生理食塩水
にて総脂質濃度１０ｍＭに希釈したもの０．５ｍＬを加
えて、３７℃で１時間加温した。冷却後、吸光度５５０
ｎｍにて濁度を測定し、濁度とリポソームのポリエチレ
ングリコール−ホスファチジルエタノールアミン誘導体
修飾率の相関から、コンドロイチン硫酸Ｃの接着に及ぼ
すポリエチレングリコール−ホスファチジルエタノール
アミン誘導体修飾率の影響を検討した。 ＜結果＞結果を図８に示した。ポリエチレングリコール
−ホスファチジルエタノールアミン誘導体にて様々な濃
度にて修飾した際、修飾濃度が低いほどプロテオグリカ
ンの接着量が多かった。また、プロテオグリカンと接着
できるのは、修飾量が５ｍｏｌ％以下の場合であった。
即ち、親水性高分子脂質誘導体にてリポソーム表面を修
飾することにより、表面を生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯
びる塩基性化合物によって修飾されたリポソームのプロ
テオグリカンとの接着性を制御でき、それには５ｍｏｌ
％以下が最適である。
【００９４】（試験例６）親水性高分子脂質誘導体修飾
による血中での安定化 この試験の目的は、ポリエチレングリコール−ホスファ
チジルエタノールアミン誘導体による修飾が血液中での
リポソームの安定性に及ぼす影響を知ることである。 ＜方法＞クエン酸採血されたヒト血液を３５００回転で
１５分遠心し、ヒト血漿を得た。このヒト血漿１．９５
ｍＬに、調製例４で得られたリポソーム０．０５ｍＬを
加えて混合し、３７℃１時間加温した。冷却後、吸光度
５５０ｎｍにて濁度を測定し、凝集したリポソームのポ
リエチレングリコール−ホスファチジルエタノールアミ
ン誘導体修飾率を算出した。 ＜結果＞結果を図９に示した。ポリエチレングリコール
−ホスファチジルエタノールアミン誘導体にて様々な濃
度にて修飾した際、低濃度の修飾範囲では凝集を起こ
し、その修飾範囲は０．２ｍｏｌ％以下であった。即
ち、血液中でリポソームの凝集を防止し、安定性を確保
するためには、親水性高分子脂質誘導体の修飾率を０．
２ｍｏｌ％以上とすることが最適である。
による血中での安定化 この試験の目的は、ポリエチレングリコール−ホスファ
チジルエタノールアミン誘導体による修飾が血液中での
リポソームの安定性に及ぼす影響を知ることである。 ＜方法＞クエン酸採血されたヒト血液を３５００回転で
１５分遠心し、ヒト血漿を得た。このヒト血漿１．９５
ｍＬに、調製例４で得られたリポソーム０．０５ｍＬを
加えて混合し、３７℃１時間加温した。冷却後、吸光度
５５０ｎｍにて濁度を測定し、凝集したリポソームのポ
リエチレングリコール−ホスファチジルエタノールアミ
ン誘導体修飾率を算出した。 ＜結果＞結果を図９に示した。ポリエチレングリコール
−ホスファチジルエタノールアミン誘導体にて様々な濃
度にて修飾した際、低濃度の修飾範囲では凝集を起こ
し、その修飾範囲は０．２ｍｏｌ％以下であった。即
ち、血液中でリポソームの凝集を防止し、安定性を確保
するためには、親水性高分子脂質誘導体の修飾率を０．
２ｍｏｌ％以上とすることが最適である。
【００９５】（試験例７）腎臓への集積性の検討（１） この試験の目的は、生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる塩
基化合物による表面修飾が傷害された腎臓に代表される
プロテオグリカン産生組織への集積性に及ぼす影響を知
ることである。 ＜方法＞ＣＤ（ＳＤ）雄性ラットの尾静脈より抗Ｔｈｙ
−１抗体溶液を静注することにより、抗Ｔｈｙ−１抗体
腎炎ラットを作成した。抗Ｔｈｙ−１抗体投与後５日目
に調製例１及び調製例７に準じて調製されたローダミン
−ＰＥにてリポソーム膜を標識したローダミン標識リポ
ソームでポリエチレングリコール−ホスファチジルエタ
ノールアミン誘導体修飾率が０．４５ｍｏｌ％のもの５
００μｌを尾静脈より静注した。２４時間後にラットの
腎臓を摘出した。摘出した腎臓の未固定凍結切片を作成
し、蛍光顕微鏡にてその分布状況を観察した。比較のた
めに、正常なＣＤ（ＳＤ）雄性ラットについて上記と同
様の方法で腎臓へのリポソームの分布状況を観察した。 ＜結果＞図１０および図１１に示した。図１０および図
１１は、約４００倍の蛍光顕微鏡写真をもとに作製した
模式図である。図１０は調製例１、図１１は調製例７に
準じたリポソームを用いた場合である。生理的ｐＨ範囲
で陽電荷を帯びる塩基性化合物であるアミジノ基を有す
る化合物（３，５−ジペンタデシロキシベンズアミジン
塩酸塩）を用いて調製したリポソーム（調製例１）と用
いずに調製したリポソーム（調製例７）では、前者が炎
症を起こした腎臓、特に糸球体へ特異的に集積している
ことが確認された。（図１０中、白色に見えるのがロー
ダミン標識リポソームである）。また図示してはいない
が、調製例１のリポソームは正常な腎臓には集積しない
ことが確認された。即ち表面が生理的ｐＨ範囲で陽電荷
を帯びる塩基性化合物により修飾されたリポソームは、
傷害された腎臓特に傷害されて炎症を引き起こした糸球
体に代表されるプロテオグリカンを過剰に産生する組織
および／または臓器への集積性に優れている。
基化合物による表面修飾が傷害された腎臓に代表される
プロテオグリカン産生組織への集積性に及ぼす影響を知
ることである。 ＜方法＞ＣＤ（ＳＤ）雄性ラットの尾静脈より抗Ｔｈｙ
−１抗体溶液を静注することにより、抗Ｔｈｙ−１抗体
腎炎ラットを作成した。抗Ｔｈｙ−１抗体投与後５日目
に調製例１及び調製例７に準じて調製されたローダミン
−ＰＥにてリポソーム膜を標識したローダミン標識リポ
ソームでポリエチレングリコール−ホスファチジルエタ
ノールアミン誘導体修飾率が０．４５ｍｏｌ％のもの５
００μｌを尾静脈より静注した。２４時間後にラットの
腎臓を摘出した。摘出した腎臓の未固定凍結切片を作成
し、蛍光顕微鏡にてその分布状況を観察した。比較のた
めに、正常なＣＤ（ＳＤ）雄性ラットについて上記と同
様の方法で腎臓へのリポソームの分布状況を観察した。 ＜結果＞図１０および図１１に示した。図１０および図
１１は、約４００倍の蛍光顕微鏡写真をもとに作製した
模式図である。図１０は調製例１、図１１は調製例７に
準じたリポソームを用いた場合である。生理的ｐＨ範囲
で陽電荷を帯びる塩基性化合物であるアミジノ基を有す
る化合物（３，５−ジペンタデシロキシベンズアミジン
塩酸塩）を用いて調製したリポソーム（調製例１）と用
いずに調製したリポソーム（調製例７）では、前者が炎
症を起こした腎臓、特に糸球体へ特異的に集積している
ことが確認された。（図１０中、白色に見えるのがロー
ダミン標識リポソームである）。また図示してはいない
が、調製例１のリポソームは正常な腎臓には集積しない
ことが確認された。即ち表面が生理的ｐＨ範囲で陽電荷
を帯びる塩基性化合物により修飾されたリポソームは、
傷害された腎臓特に傷害されて炎症を引き起こした糸球
体に代表されるプロテオグリカンを過剰に産生する組織
および／または臓器への集積性に優れている。
【００９６】（試験例８）腎臓への集積性の検討（２） この試験の目的は、リポソームの平均粒子径が、傷害さ
れた腎臓に代表されるプロテオグリカン産生組織への集
積性に及ぼす影響を知ることである。 ＜方法＞ＣＤ（ＳＤ）雄性ラットの尾静脈より抗Ｔｈｙ
−１抗体溶液を静注することにより、抗Ｔｈｙ−１抗体
腎炎ラットを作成した。抗Ｔｈｙ−１抗体投与後５日目
に、調製例１、調製例１６及び調製例１７に準じて調製
されたローダミン−ＰＥにてリポソーム膜を標識したロ
ーダミン標識リポソームでポリエチレングリコール−ホ
スファチジルエタノールアミン誘導体修飾率が０．４５
ｍｏｌ％のもの５００μｌをそれぞれ尾静脈より静注し
た。２４時間後にラットの腎臓を摘出した。摘出した腎
臓からローダミン−ＰＥを抽出し、蛍光強度を測定する
ことにより腎臓へのリポソームの分布量を算出した。比
較のために、正常なＣＤ（ＳＤ）雄ラットについて上記
と同様の方法で腎臓へのリポソームの分布量を算出し
た。 ＜結果＞図１２に示すとおりであった。平均粒子径が１
２２．２ｎｍ、主要粒度範囲が９０〜２００ｎｍである
リポソーム（調製例１）は、病態腎（傷害された腎臓）
への集積性に優れることが確認された。平均粒子径が２
７３ｎｍ、主要粒度範囲が１８０〜３５０ｎｍであるリ
ポソーム（調製例１６）は、病態腎への集積量が調製例
の２／３以下と少なく、正常腎への集積量が調製例１と
同程度であり、また、平均粒子径が７９．６ｎｍ主要粒
度範囲が４０〜９０ｎｍであるリポソーム（調製例１
７）は、病態腎への集積量が調製例１の約２／３と少な
く、正常腎への集積量が調製例１の２倍程度と多いこと
が確認された。即ち、正常な組織および／または臓器へ
の集積を抑え、かつ、病態腎に代表されるプロテオグリ
カン過剰産生組織および／または臓器への選択的に集積
させるためには、主要粒度範囲および平均粒径が９０〜
２００ｎｍとなるように制御することが最適である。
れた腎臓に代表されるプロテオグリカン産生組織への集
積性に及ぼす影響を知ることである。 ＜方法＞ＣＤ（ＳＤ）雄性ラットの尾静脈より抗Ｔｈｙ
−１抗体溶液を静注することにより、抗Ｔｈｙ−１抗体
腎炎ラットを作成した。抗Ｔｈｙ−１抗体投与後５日目
に、調製例１、調製例１６及び調製例１７に準じて調製
されたローダミン−ＰＥにてリポソーム膜を標識したロ
ーダミン標識リポソームでポリエチレングリコール−ホ
スファチジルエタノールアミン誘導体修飾率が０．４５
ｍｏｌ％のもの５００μｌをそれぞれ尾静脈より静注し
た。２４時間後にラットの腎臓を摘出した。摘出した腎
臓からローダミン−ＰＥを抽出し、蛍光強度を測定する
ことにより腎臓へのリポソームの分布量を算出した。比
較のために、正常なＣＤ（ＳＤ）雄ラットについて上記
と同様の方法で腎臓へのリポソームの分布量を算出し
た。 ＜結果＞図１２に示すとおりであった。平均粒子径が１
２２．２ｎｍ、主要粒度範囲が９０〜２００ｎｍである
リポソーム（調製例１）は、病態腎（傷害された腎臓）
への集積性に優れることが確認された。平均粒子径が２
７３ｎｍ、主要粒度範囲が１８０〜３５０ｎｍであるリ
ポソーム（調製例１６）は、病態腎への集積量が調製例
の２／３以下と少なく、正常腎への集積量が調製例１と
同程度であり、また、平均粒子径が７９．６ｎｍ主要粒
度範囲が４０〜９０ｎｍであるリポソーム（調製例１
７）は、病態腎への集積量が調製例１の約２／３と少な
く、正常腎への集積量が調製例１の２倍程度と多いこと
が確認された。即ち、正常な組織および／または臓器へ
の集積を抑え、かつ、病態腎に代表されるプロテオグリ
カン過剰産生組織および／または臓器への選択的に集積
させるためには、主要粒度範囲および平均粒径が９０〜
２００ｎｍとなるように制御することが最適である。
【００９７】（試験例９）腎臓への集積性の測定（３） この試験の目的は、表面が生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯
びる塩基性化合物により修飾されているリポソームにつ
いて、塩基性化合物の種類が傷害された腎臓に代表され
るプロテオグリカンを過剰に産生する組織および／また
は臓器への集積性に及ぼす影響を知ることである。 ＜方法＞ＣＤ（ＳＤ）雄性ラットの尾静脈より抗Ｔｈｙ
−１抗体溶液を静注することにより、抗Ｔｈｙ−１抗体
腎炎ラットを作成した。抗Ｔｈｙ−１抗体投与後５日目
に、調製例１、調製例２および調製例３に準じて調製さ
れたローダミン−ＰＥにてリポソーム膜を標識したロー
ダミン標識リポソームでポリエチレングリコール−ホス
ファチジルエタノールアミン誘導体修飾率が０．４５ｍ
ｏｌ％のリポソーム５００μｌをそれぞれ尾静脈より静
注した。２４時間後にラットの腎臓を摘出した。摘出し
た腎臓からローダミン−ＰＥを抽出し、蛍光強度を測定
することにより腎臓へのリポソームの分布量を算出し
た。比較のために、正常なＣＤ（ＳＤ）雄性ラットにつ
いて上記と同様の方法で腎臓へのリポソーム分布量を算
出した。 ＜結果＞図１３に示した。いずれの塩基化合物を有する
リポソームでも、正常腎に比べて病態腎への集積性が向
上し、表面が生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる塩基性化
合物により修飾されていることが、病態腎への積極的な
ターゲッティングに重要であることが確認された。ま
た、塩基性化合物によってその集積性にも差があり、
３，５−ジペンタデシロキシベンズアミジン塩酸塩（調
製例１）またはＮ，Ｎ−ジオクタデシル−２−（ピペリ
ジン−４−イル−オキシ）アセトアミド（調製例２）を
用いた場合に特に優れた集積性を示すことが確認され
た。
びる塩基性化合物により修飾されているリポソームにつ
いて、塩基性化合物の種類が傷害された腎臓に代表され
るプロテオグリカンを過剰に産生する組織および／また
は臓器への集積性に及ぼす影響を知ることである。 ＜方法＞ＣＤ（ＳＤ）雄性ラットの尾静脈より抗Ｔｈｙ
−１抗体溶液を静注することにより、抗Ｔｈｙ−１抗体
腎炎ラットを作成した。抗Ｔｈｙ−１抗体投与後５日目
に、調製例１、調製例２および調製例３に準じて調製さ
れたローダミン−ＰＥにてリポソーム膜を標識したロー
ダミン標識リポソームでポリエチレングリコール−ホス
ファチジルエタノールアミン誘導体修飾率が０．４５ｍ
ｏｌ％のリポソーム５００μｌをそれぞれ尾静脈より静
注した。２４時間後にラットの腎臓を摘出した。摘出し
た腎臓からローダミン−ＰＥを抽出し、蛍光強度を測定
することにより腎臓へのリポソームの分布量を算出し
た。比較のために、正常なＣＤ（ＳＤ）雄性ラットにつ
いて上記と同様の方法で腎臓へのリポソーム分布量を算
出した。 ＜結果＞図１３に示した。いずれの塩基化合物を有する
リポソームでも、正常腎に比べて病態腎への集積性が向
上し、表面が生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる塩基性化
合物により修飾されていることが、病態腎への積極的な
ターゲッティングに重要であることが確認された。ま
た、塩基性化合物によってその集積性にも差があり、
３，５−ジペンタデシロキシベンズアミジン塩酸塩（調
製例１）またはＮ，Ｎ−ジオクタデシル−２−（ピペリ
ジン−４−イル−オキシ）アセトアミド（調製例２）を
用いた場合に特に優れた集積性を示すことが確認され
た。
【００９８】（試験例１０）薬物を封入した本発明リポ
ソームの薬理学的効果 この試験の目的は、上記試験例１〜試験例９で確認され
た本発明のリポソームにおいて、実際に薬理学的効果が
どの程度発揮されるかを知ることである。 ＜方法＞ＣＤ（ＳＤ）雄性ラットの尾静脈より抗Ｔｈｙ
−１抗体溶液を静注することにより、抗Ｔｈｙ−１抗体
腎炎ラットを作成した。抗Ｔｈｙ−１抗体投与後５日目
に、調製例１５で得られたリポソーム分散液（リン酸プ
レドニゾロンナトリウムとして１ｍｇ）を静注した。抗
Ｔｈｙ−１抗体投与後１０日目に採尿し、総蛋白量を測
定した。比較のために、比較例１（薬物を内封しないリ
ポソーム分散液）、あるいは、生理食塩水を上記と同様
の方法で投与し、抗Ｔｈｙ−１抗体投与後１０日目に採
尿し、総蛋白量を測定した。また、リポソーム化されて
いないリン酸プレドニゾロンナトリウム溶液（リン酸プ
レドニゾロンナトリウムとして１ｍｇ）を抗Ｔｈｙ−１
抗体投与後５日目に１回のみ、あるいは、該溶液を抗Ｔ
ｈｙ−１抗体投与後５日目から５回（１回／日で５日
間）投与し、抗Ｔｈｙ−１抗体投与後１０日目に採尿
し、総蛋白量を測定した。無処置の正常ラットからも採
尿し、総蛋白量を測定した。 ＜結果＞結果を図１４に示した。図１４中の記号は、
：リン酸プレドニゾロンナトリウム溶液１回投与群、
：リン酸プレドニゾロンナトリウム溶液５回投与群、
：薬物を含有しないリポソーム分散液投与群（比較例
１）、：生理食塩水投与群、である。本発明の実施例
のリポソームである調製例１５のリポソームを投与した
場合は、尿中への蛋白排泄を抑制する効果が顕著に見ら
れた。その効果は本発明のリポソームの含有する量のリ
ン酸プレドニゾロンナトリウムを５日間連続、すなわち
総投与量として５倍量のリン酸プレドニゾロンナトリウ
ムをリポソーム化せずに投与した場合と比べても、優れ
ていた。また、薬物を内封しないリポソームを投与した
場合や、本発明のリポソームの含有する量と同量のリン
酸プレドニゾロンナトリウムをリポソーム化せずに１回
だけ投与した場合には、生理食塩水を投与した場合と比
べて尿中蛋白排泄量がほとんど変わらず、効果は見られ
なかった。即ち、本発明のリポソームは、１回のみの投
与で、リポソーム化されていない薬物を連続投与した場
合と同程度以上の薬理効果を発揮し得るものである。従
って、本発明のリポソームを用いると、薬物の有効性を
確保し、かつ、薬物の総投与量を低減できることが確認
された。
ソームの薬理学的効果 この試験の目的は、上記試験例１〜試験例９で確認され
た本発明のリポソームにおいて、実際に薬理学的効果が
どの程度発揮されるかを知ることである。 ＜方法＞ＣＤ（ＳＤ）雄性ラットの尾静脈より抗Ｔｈｙ
−１抗体溶液を静注することにより、抗Ｔｈｙ−１抗体
腎炎ラットを作成した。抗Ｔｈｙ−１抗体投与後５日目
に、調製例１５で得られたリポソーム分散液（リン酸プ
レドニゾロンナトリウムとして１ｍｇ）を静注した。抗
Ｔｈｙ−１抗体投与後１０日目に採尿し、総蛋白量を測
定した。比較のために、比較例１（薬物を内封しないリ
ポソーム分散液）、あるいは、生理食塩水を上記と同様
の方法で投与し、抗Ｔｈｙ−１抗体投与後１０日目に採
尿し、総蛋白量を測定した。また、リポソーム化されて
いないリン酸プレドニゾロンナトリウム溶液（リン酸プ
レドニゾロンナトリウムとして１ｍｇ）を抗Ｔｈｙ−１
抗体投与後５日目に１回のみ、あるいは、該溶液を抗Ｔ
ｈｙ−１抗体投与後５日目から５回（１回／日で５日
間）投与し、抗Ｔｈｙ−１抗体投与後１０日目に採尿
し、総蛋白量を測定した。無処置の正常ラットからも採
尿し、総蛋白量を測定した。 ＜結果＞結果を図１４に示した。図１４中の記号は、
：リン酸プレドニゾロンナトリウム溶液１回投与群、
：リン酸プレドニゾロンナトリウム溶液５回投与群、
：薬物を含有しないリポソーム分散液投与群（比較例
１）、：生理食塩水投与群、である。本発明の実施例
のリポソームである調製例１５のリポソームを投与した
場合は、尿中への蛋白排泄を抑制する効果が顕著に見ら
れた。その効果は本発明のリポソームの含有する量のリ
ン酸プレドニゾロンナトリウムを５日間連続、すなわち
総投与量として５倍量のリン酸プレドニゾロンナトリウ
ムをリポソーム化せずに投与した場合と比べても、優れ
ていた。また、薬物を内封しないリポソームを投与した
場合や、本発明のリポソームの含有する量と同量のリン
酸プレドニゾロンナトリウムをリポソーム化せずに１回
だけ投与した場合には、生理食塩水を投与した場合と比
べて尿中蛋白排泄量がほとんど変わらず、効果は見られ
なかった。即ち、本発明のリポソームは、１回のみの投
与で、リポソーム化されていない薬物を連続投与した場
合と同程度以上の薬理効果を発揮し得るものである。従
って、本発明のリポソームを用いると、薬物の有効性を
確保し、かつ、薬物の総投与量を低減できることが確認
された。
【００９９】（試験例１１）急性毒性 この試験の目的は、本発明のリポソームの毒性が、従来
のものの毒性と比較してどの程度であるかを知ることで
ある。そのために、薬物を内封していないこと以外は本
発明のリポソーム、および、従来のリポソーム（同様
に、薬物は内封していない）のそれぞれについて、ラッ
トに対する致死毒性試験を行った。 ＜被験液の調製＞ （１）３，５−ジペンタデシロキシベンズアミジン塩酸
塩及びポリエチレングリコール−ホスファチジルエタノ
ールアミン誘導体を含有する本発明のリポソーム分散液 調製例１でポリエチレングリコール−ホスファチジルエ
タノールアミン誘導体修飾率が０．４５ｍｏｌ％である
本発明のリポソームを限外ろ過膜を用いて濃縮し、さら
に必要に応じて生理食塩水で希釈して被験液とした。 （２）従来のリポソーム分散液 調製例７でポリエチレングリコール−ホスファチジルエ
タノールアミン誘導体修飾率が０．４５ｍｏｌ％である
本発明のリポソームを限外ろ過膜を用いて濃縮し、さら
に必要に応じて生理食塩水で希釈して被験液とした。 ＜方法＞検疫した５週齢のマウスを１群５匹に区分し、
尾静脈より上記の被験液を１００ｍＬ／ｋｇ投与した。
一方、溶媒対照群は、生理食塩水を１００ｍＬ／ｋｇ投
与した。被験液投与後、７日間にわたって少なくとも１
日１回、注意深く一般状態を観察して毒性徴候、死亡状
況を記録した。また、７日後に剖検し、各臓器を摘出し
た。各臓器について病理切片を作成し観察を行った。 ＜結果＞薬物を内封していないこと以外は本発明と同様
のリポソーム（（１）のリポソーム分散液）について
は、従来のリポソーム（（２）のリポソーム分散液）と
同様に、観察期間中、死亡例を認めなかった。また、７
日後の各臓器の病理観察においては、問題となるような
病理所見は認められなかった。即ち、本発明のリポソー
ムは、極めて毒性が低く、安全性の高いものであること
が確認された。
のものの毒性と比較してどの程度であるかを知ることで
ある。そのために、薬物を内封していないこと以外は本
発明のリポソーム、および、従来のリポソーム（同様
に、薬物は内封していない）のそれぞれについて、ラッ
トに対する致死毒性試験を行った。 ＜被験液の調製＞ （１）３，５−ジペンタデシロキシベンズアミジン塩酸
塩及びポリエチレングリコール−ホスファチジルエタノ
ールアミン誘導体を含有する本発明のリポソーム分散液 調製例１でポリエチレングリコール−ホスファチジルエ
タノールアミン誘導体修飾率が０．４５ｍｏｌ％である
本発明のリポソームを限外ろ過膜を用いて濃縮し、さら
に必要に応じて生理食塩水で希釈して被験液とした。 （２）従来のリポソーム分散液 調製例７でポリエチレングリコール−ホスファチジルエ
タノールアミン誘導体修飾率が０．４５ｍｏｌ％である
本発明のリポソームを限外ろ過膜を用いて濃縮し、さら
に必要に応じて生理食塩水で希釈して被験液とした。 ＜方法＞検疫した５週齢のマウスを１群５匹に区分し、
尾静脈より上記の被験液を１００ｍＬ／ｋｇ投与した。
一方、溶媒対照群は、生理食塩水を１００ｍＬ／ｋｇ投
与した。被験液投与後、７日間にわたって少なくとも１
日１回、注意深く一般状態を観察して毒性徴候、死亡状
況を記録した。また、７日後に剖検し、各臓器を摘出し
た。各臓器について病理切片を作成し観察を行った。 ＜結果＞薬物を内封していないこと以外は本発明と同様
のリポソーム（（１）のリポソーム分散液）について
は、従来のリポソーム（（２）のリポソーム分散液）と
同様に、観察期間中、死亡例を認めなかった。また、７
日後の各臓器の病理観察においては、問題となるような
病理所見は認められなかった。即ち、本発明のリポソー
ムは、極めて毒性が低く、安全性の高いものであること
が確認された。
【０１００】
【発明の効果】以上、詳細に説明したように、本発明の
リポソームは、従来のリポソームと比較して、傷害され
た腎臓、特に傷害により炎症を起こした糸球体に代表さ
れるプロテオグリカンを過剰に産生する組織および／ま
たは臓器へのターゲッティング性が高く、また、安全性
も高い。従って、本発明のリポソームは、糸球体腎炎な
どの様に、病変部の組織および／または臓器においてプ
ロテオグリカンの過剰産生を伴う疾患の診断及び治療と
いう目的に対して非常に効果的である。
リポソームは、従来のリポソームと比較して、傷害され
た腎臓、特に傷害により炎症を起こした糸球体に代表さ
れるプロテオグリカンを過剰に産生する組織および／ま
たは臓器へのターゲッティング性が高く、また、安全性
も高い。従って、本発明のリポソームは、糸球体腎炎な
どの様に、病変部の組織および／または臓器においてプ
ロテオグリカンの過剰産生を伴う疾患の診断及び治療と
いう目的に対して非常に効果的である。
【図１】 生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる塩基性化合
物および親水性高分子脂質誘導体によって修飾されたリ
ポソームにおけるプロテオグリカン産生細胞であるラッ
トメサンギウム細胞との親和性の関係を表した図であ
る。
物および親水性高分子脂質誘導体によって修飾されたリ
ポソームにおけるプロテオグリカン産生細胞であるラッ
トメサンギウム細胞との親和性の関係を表した図であ
る。
【図２】 生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる塩基性化合
物および親水性高分子脂質誘導体によって修飾されたリ
ポソームとプロテオグリカン産生細胞であるラットメサ
ンギウムとの親和性におけるプロテオグリカンの関与を
表した図である。
物および親水性高分子脂質誘導体によって修飾されたリ
ポソームとプロテオグリカン産生細胞であるラットメサ
ンギウムとの親和性におけるプロテオグリカンの関与を
表した図である。
【図３】 リポソーム構成脂質中の生理的ｐＨ範囲で陽
電荷を帯びる塩基性化合物含量とラットメサンギウム細
胞との親和性の関係を表した図である。
電荷を帯びる塩基性化合物含量とラットメサンギウム細
胞との親和性の関係を表した図である。
【図４】 リポソーム構成脂質中の生理的ｐＨ範囲で陽
電荷を帯びる塩基性化合物含量とヒト血管内皮細胞との
親和性の関係を表した図である。
電荷を帯びる塩基性化合物含量とヒト血管内皮細胞との
親和性の関係を表した図である。
【図５】 リポソーム構成脂質中の生理的ｐＨ範囲で陽
電荷を帯びる塩基性化合物含量とラットメサンギウム細
胞との親和性の関係を表した図である。
電荷を帯びる塩基性化合物含量とラットメサンギウム細
胞との親和性の関係を表した図である。
【図６】 リポソーム構成脂質中の生理的ｐＨ範囲で陽
電荷を帯びる塩基性化合物含量とヒト血管内皮細胞との
親和性の関係を表した図である。
電荷を帯びる塩基性化合物含量とヒト血管内皮細胞との
親和性の関係を表した図である。
【図７】 リポソーム構成脂質中の生理的ｐＨ範囲で陽
電荷を帯びる塩基性化合物の含量と血清中でのリポソー
ムの安定性の関係を表した図である。
電荷を帯びる塩基性化合物の含量と血清中でのリポソー
ムの安定性の関係を表した図である。
【図８】 生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる塩基性化合
物によって修飾されたリポソームにおける親水性高分子
脂質誘導体修飾とプロテオグリカンとの親和性の関係を
表した図である。
物によって修飾されたリポソームにおける親水性高分子
脂質誘導体修飾とプロテオグリカンとの親和性の関係を
表した図である。
【図９】 生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる塩基性化合
物によって修飾されたリポソームにおける親水性高分子
脂質誘導体修飾量と血漿中安定性の関係を表した図であ
る。
物によって修飾されたリポソームにおける親水性高分子
脂質誘導体修飾量と血漿中安定性の関係を表した図であ
る。
【図１０】 生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる塩基性化
合物によって修飾されたリポソームが傷害された腎臓へ
集積することを示す模式図である。
合物によって修飾されたリポソームが傷害された腎臓へ
集積することを示す模式図である。
【図１１】 表面が中性のリポソームが傷害された腎臓
へ集積しないことを示す模式図である。
へ集積しないことを示す模式図である。
【図１２】 リポソームの平均粒径と傷害された腎臓へ
の集積性の関係を表した図である。
の集積性の関係を表した図である。
【図１３】 リポソームの表面修飾に用いられる塩基性
化合物の種類と傷害された腎臓への集積性の関係性を表
した図である。
化合物の種類と傷害された腎臓への集積性の関係性を表
した図である。
【図１４】 本発明のリポソームの薬理学的効果を表し
た図である。
た図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 47/24 Ａ６１Ｋ 47/24 49/00 49/00 Ｚ Ａ６１Ｐ 13/12 Ａ６１Ｐ 13/12 (72)発明者 内山 英樹 神奈川県足柄上郡中井町井ノ口1500番地 テルモ株式会社内 (72)発明者 木村 順治 神奈川県足柄上郡中井町井ノ口1500番地 テルモ株式会社内 (72)発明者 粕川 博明 神奈川県足柄上郡中井町井ノ口1500番地 テルモ株式会社内 Ｆターム(参考） 4C076 AA19 AA95 CC04 CC17 DD46 DD49 DD60 DD63 DD70 EE23 FF31 FF68 4C084 AA19 MA05 MA24 NA03 NA13 ZA811 ZA812 ZB152 4C085 HH11 JJ05 KA27 KB45 KB56 KB74 LL11 4C086 AA01 AA02 DA08 MA02 MA03 MA05 MA24 NA13 ZA81 ZB15
Claims (15)
- 【請求項１】薬物を内封するリポソームであって、その
膜構成成分が、（１）生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる
塩基性化合物、（２）親水性高分子の脂質誘導体、およ
び（３）リポソームを構成する脂質からなり、これらの
構成比が、（３）に対して（１）が１〜２０ｍｏｌ％、
また（１）と（３）の和に対して（２）が０．２〜５ｍ
ｏｌ％であることを特徴とするリポソーム。 - 【請求項２】薬物を内封するリポソームであって、その
膜構成成分が、（１）生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる
塩基性化合物、（２）親水性高分子の脂質誘導体、およ
び（３）リポソームを構成する脂質からなり、これらの
構成比が、（３）に対して（１）が５〜１５ｍｏｌ％、
また（１）と（３）の和に対して（２）が０．２〜５ｍ
ｏｌ％であることを特徴とするリポソーム。 - 【請求項３】生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる塩基性化
合物が、アミジノ基を有する塩基性化合物、アミノ基を
２個以上有する塩基性化合物、ピペリジン環を有する塩
基性化合物、４級アミンを有する塩基性化合物のいずれ
かである請求項１または２に記載のリポソーム。 - 【請求項４】生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる塩基性化
合物が下記式１〜４のいずれかに記載されたものである
請求項３に記載のリポソーム。 【化１】 （式１中、Ａは芳香環を表す。Ｒ1 及びＲ2 は炭素数１
０〜２５のアルキル基またはアルニケル基を表し、Ｒ1
およびＲ2 は同一であっても異なっていてもよい。Ｘ1
およびＸ2 は−Ｏ−、−Ｓ−、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯ
−、−ＣＯＮＨ−または−ＮＨＣＯ−を表し、Ｘ1 およ
びＸ2 は同一であっても異なっていてもよい。ｍは０ま
たは１、ｎは０または１〜６の整数を表す。） 【化２】 （式２中、Ｒ3 は水素または炭素数１〜８のアルキル基
もしくはアルニケル基を表す。Ｒ4 は水素または炭素数
１〜８のアルキル基もしくはアルニケル基を表す。Ｒ5
およびＲ6 は水素または炭素数１〜２５のアルキル基も
しくはアルニケル基を表し（但し、Ｒ5 およびＲ6 が共
に水素である場合を除く。）、Ｒ5 およびＲ6 は同一で
あっても異なっていてもよい。Ｘ3 は−Ｏ−または−Ｓ
−を表す。ｐは０または１、ｑは０または１〜１０の整
数を表す。） 【化３】 （式３中、Ｒ7 およびＲ8 は炭素数１〜８のアルキル基
またはアルニケル基を表し、Ｒ7 およびＲ8 は同一であ
っても異なっていてもよい。Ｒ9 は水素または炭素数１
〜８のアルキル基もしくはアルニケル基を表す。Ｒ10お
よびＲ11は水素または炭素数１〜２５のアルキル基もし
くはアルニケル基を表し（但し、Ｒ10およびＲ11が共に
水素である場合を除く。）、Ｒ10およびＲ11は同一であ
っても異なっていてもよい。Ｘ4 は−Ｏ−または−Ｓ−
を表す。ｒは０または１、ｓは０または１〜１０の整数
を表す。） 【化４】 - 【請求項５】親水性高分子の脂質誘導体がポリエチレン
グリコールの脂質誘導体である請求項１〜４のいずれか
に記載のリポソーム。 - 【請求項６】前記ポリエチレングリコールの脂質誘導体
が、ポリエチレングリコール鎖とジアシルグリセロール
を１分子内に含む化合物である請求項５記載のリポソー
ム。 - 【請求項７】親水性高分子の脂質誘導体の分子量が１０
００〜７０００である請求項１〜６のいずれかに記載の
リポソーム。 - 【請求項８】前記リポソームに内封されている薬物が、
腎疾患の診断および／または治療を目的とする薬物であ
る請求項１〜７のいずれかに記載のリポソーム。 - 【請求項９】前記腎疾患の診断および／または治療を目
的とする薬物が、副腎皮質ステロイドおよび／またはそ
の誘導体である請求項８に記載のリポソーム。 - 【請求項１０】前記リポソームに内封されている薬物
が、病変部の組織および／または臓器においてプロテオ
グリカンの産生を伴う疾患の、診断および／または治療
を目的とする薬物である請求項１〜９のいずれかに記載
のリポソーム。 - 【請求項１１】前記リポソームの主要粒度範囲が９０〜
２００ｎｍである請求項１〜１０のいずれかに記載のリ
ポソーム。 - 【請求項１２】前記リポソームを構成する脂質がリン脂
質あるいはリン脂質の水素添加物である請求項１〜１１
のいずれかに記載のリポソーム。 - 【請求項１３】安定化剤あるいは酸化防止剤をさらに含
む請求項１〜１２のいずれかに記載のリポソーム。 - 【請求項１４】（１）生理的ｐＨ範囲で陽電荷を帯びる
塩基性化合物、（２）親水性高分子の脂質誘導体、およ
び（３）リポソームを構成する脂質からなり、これらの
構成比が、（３）に対して（１）が５〜１５ｍｏｌ％、
また（１）と（３）の和に対して（２）が０．２〜５ｍ
ｏｌ％、かつ、主要粒度範囲が９０〜２００ｎｍのリポ
ソームの炎症腎治療薬としての利用。 - 【請求項１５】炎症腎の治療用薬剤の製造のための、請
求項１または２のリポソームの使用。
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| JP31237899A JP4827277B2 (ja) | 1998-11-02 | 1999-11-02 | リポソーム |
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