JPH0395118A - プロスタグランジン含有脂肪小体製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、プロスタグランジン（以下ＰＣともいう）の
遊離抑制を目的としたＰＣを含有してなる脂肪小体製剤
に関する。

〔従来技術〕

ＰＣは、血管拡張、末梢循環改善、降圧、抗脂肪分解、
ナトリウム利尿など種々多彩な生理作用を有することか
ら、医薬品への適用がなされている。この有用なＰＧＲ
を医薬品として適用する際には、生体内で容易に不活性
物質へ代謝されることと、病巣選択性が問題となる。

そのため、一般にＰＧ［製剤は瀕回投与が必要となり、
患者の苦痛を増すばかりでなく目的以外のＭ織に対する
作用が副作用となる恐れがあり、これら問題点の解決の
手段としてＰＧＩＩを脂肪小体に含有させた製剤が作ら
れている。

〔発明が解決しようとする課題］ しかし、脂肪小体含有製剤においても、製剤としての安
定性が悪く、一旦、脂肪小体に含有させたＰＧＩＩがＴ
！離してくるという問題点がある。

〔本発明の目的〕

本発明の目的は、ＰＣ類を脂肪小体に含有させた製剤に
おいて、ＰＧＩｉの遊離が抑制された脂肪小体製剤を提
供することにある。

〔諜題を解決するための手段］ そこで、本発明者らは、ＰＧｆｉを脂肪小体に含有させ
た製剤において、ＰＣＩＩの脂肪小体からの遊離抑制に
ついて種々検討した結果、膜脂質に正電荷脂質を組み込
むことにより、問題点が解決することを見い出し、本発
明を完戒した。

〔発明のＩ或］ 即ち、本発明の製剤は、薄膜脂質に正電荷脂質が組み込
まれてなることを特徴とするプロスタグランジン含有脂
肪小体製剤である． 本発明において、脂肪小体（リポソーム）は、多重同心
二重層、単一層あるいは多重層の構造をなし、各種蛋白
質その他の生理活性物質をその間隙に取り込む能力を有
するものであり、例えばリン脂質またはある種の別の脂
質および正電荷脂質とから形威された薄膜とＰＣＩＩＩ
を含有する溶液とを接触させ、Ｐ（４をこの脂肪小体の
間隙部に取り込ませることによって調製される。

当該脂肪小体を形或するための脂質としては、リン脂質
、糖脂質、誘導脂質等が挙げられる。リン脂質としては
、生理的に許容され、そして代謝されうる無毒のリン脂
質であればいずれも本発明に用いられる。例えば、ホス
ファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチ
ジン酸、ホスファチジルグリセリン、ホスファチジルエ
タノールアミン、ホスファチジルイノシトール、スフィ
ンゴξエリン、ジセチルホスフェート、リゾホスファチ
ジルコリン（リゾレシチン）、あるいはこれらの混合物
である大豆リン脂質、卵黄リン脂質等が用いられる。

糖脂質としてはセレブロシド、硫脂質（Ｓｕｌｆａｔｉ
ｃ！ｅ）　、ガングリオシド等が例示される．誘導脂質
としてはコール酸、デオキシコール酸等が例示される。

ぞの添加量は１０〜２４０μｍｏｌ程度である。

正電荷脂質としては、正電荷を有する脂質であれば特に
限定されない。例えば、炭素数ｌ２〜２２の飽和または
不飽和脂肪族アミン、塩基性アミノ酸に脂肪酸やコレス
テロール等を結合したもの等が挙げられ、具体的にはオ
レイルアミン、ステアリルアミン等が例示される．その
添加量は２０〜１８０μｎｏ１程度である。正電荷脂質
はリン脂質と混合して用い、その比率（モル比）は、リ
ン脂質；正電荷脂質＝９二２〜１：１８　好ましくは８
：４程度である。

本発明で用いられるＰＧは、アラキドン酸代謝産物また
はそれらの構造類似化合物であればよい。

アラキドン酸代謝産物としては、例えばプロスタグラン
ジン、ブロスタサイクリン、トロンボキサン、ロイコト
リエン等が挙げられる．また、アラキドン酸代謝産物構
造類似化合物としては、例えばアラキドン酸代謝産物を
基本骨格とし構造修飾された６−ケトーＰＧＥ．誘導体
、カルバサイクリン誘導体、ＰＧＤｚ誘導体等が挙げら
れる。ＰＧの添加量としては、１０〜１００μｇ程度が
例示される。

脂肪小体の製造の概略は、次の通りである。即ち、適当
な脂質および正電荷脂質を含有する溶液（脂質を変威し
ない溶媒、例えばクロロホルム等の溶液）から溶媒を留
去して脂質の薄膜を作り、この薄膜にＰＧを含有する溶
液を加えて激しく振とうし、好ましくは超音波処理を行
ない、脂質を均一分散させて脂質薄膜懸濁液を調製する
。ここで、ＰＣを含有する溶液に使用される溶媒として
は、脂肪小体を変戒、分解せず、かつ生理的に許容され
るものであればよく、例えば水（好ましくはｐＨ６〜８
の緩衝液、生理食塩水等）、エタノール等が挙げられる
。

なお、脂質薄膜の調製に際し、トコフエロール（ビタξ
ンＥ）、コレステロール、ホスファチジン酸、ジセチル
ホスフエート、パルミチン酸等の脂肪酸を安定化剤とし
て添加してもよい。

また、本発明製剤はアルブミン、デキストラン、ビニル
重合体、非イオン性界面活性剤、ゼラチン、ヒドロキシ
エチル澱粉から選ばれた高分子物質を安定化剤として配
合してもよい。

当該高分子物質安定化剤は、薬物と共にリポソーム内の
空隙に取りこまれていてもよいし、また薬物を取りこん
だリポソーム製剤に添加配合（即ち、リポソーム外に添
加・配合）してもよい。もちろんリポソームの内外とも
に配合してもよいことはいうまでもない．当該安定化剤
の添加量は脂質１重量部に対して０．５〜１０重量部、
好ましくは１〜５重量部である． 本発明においては、超音波処理を施すことが好ましく、
例えば粒子径を３μ以下に調整し、その超音波処理の条
件としては、Ｏ′Ｃ〜７０゜Ｃ、好ましくは３５℃〜４
５゜Ｃで、１〜６０分間程度行えばよい。

上記の処理により直径が約０．０２〜１μの範囲のＰＧ
を含む粒子を提供でき、要すればさらに分子ふるい処理
および爽雑物または遊離物を除去するためのゲル濾過処
理を行なうこともできる。

かくして得られたＰＧ含有脂肪小体製剤は脂質１重量部
あたり０．１重量部以上のＰＣを含有しており、しかも
その粒子径は均一であり、極めて微少であることから医
療用製剤として好ましい。

尚、ＰＣの脂肪小体中への取り込み率は、調製されたリ
ポソームをエタノールで溶解し、液体クロマトグラフィ
−（ゲル透過クロマトグラフィー）分析を行なって得ら
れた値を示す。

ＰＣを取り込んだ脂肪小体、は沈澱物として回収するこ
とができる。例えば、脂肪小体を含有する媒体を超遠心
処理し、脂肪小体を沈澱として回収することができる。

このものは次いで要すれば生理的に許容される水溶液で
洗浄し、ペレット状、懸濁状製剤として調整する。製剤
化は医薬品の製法において広く公知の方法に準ずる。ま
た本製剤は、液状製剤を凍結させた後、減圧下で乾燥さ
せ、凍結乾燥製剤としても提供される。

本則は、一般的に経口薬又は注射薬として使用され、そ
の投与量は戒人の場合、ＰＧとして１〜５０μｇ，０．
０２　〜ｌｎｇ／ｌｋｇ／１回の量において投与される
．使用時は、生理的に許容される水溶液によって溶解ま
たは希釈して用いられるのが一般的であるが、製剤上の
工夫によって錠剤化、カプセル化、腸液性カプセル化し
てもよい。

〔実施例〕

実施例ｌ 市販卵黄由来フォスファチジルコリン（以下、ＥＰＣと
もいう）６０■およびオレイルアミン１１■を５ｍのク
ロロホルムに溶解し、これにプロスタグランジンＥ，３
０μｇをエタノール１００　μｌに溶解したものを加え
、２５一容の梨型フラスコに入れ、ロータリーエバボレ
ーターで溶媒を留去した．Ｏ．１Ｍリン酸を含む生理食
塩水（ＰＢＳともいう；ｐＨ５．０）ｌｍを加え、振盪
、超音波照射、遠心分離後、上清を０．２μｍのボリカ
ーボネートメンブレンフィルターで濾過した。

実施例２ 市販卵黄由来フォスファチジルコリン７５■およびオレ
イルアξン（ＯＡｍともいう）５５■をｌＯｔｎｌのク
ロロホルムに溶解し、これにプロスタグランジンＴｚ　
　１００ｕｇを工９　／　−ル２００　／７　Ｎに溶解
したものを加え、２５戚容の梨型フラスコに入れ、ａ一
タリーエバポレーターで溶媒を留去した。０．１Ｍリン
酸を含む生理食塩水（ｐＨ５．　０　）２　ｍｌを加え
、振盪、超音波照射、遠心分離後、上清を０．　２μｍ
のポリヵーボネートメンブレンフィルターで濾過した。

実験例 下記の第１表に示す４種類のリポソームを調製し、それ
ぞれについて中性溶媒中での安定性を調べた。

（以下余白） 第１表 リポソーム　脂質組成　　　　　電荷　　型Ａ　Ｕ　Ｉ
　　　　ＲＰＣ二〇Ａｍ　＝１０　：　Ｏ　　　中性　
　ＳＵＶＡ　Ｕ　２　　　　ＥＰＣ：ＯＡｍ　＝１０　
：　Ｏ　　　中性　　ＭＬＶ　ｌａｒｇｅＡ　Ｕ　３　
　　ＥＰＣ：ＯＡ＋ｍ　＝９　：　２　　　正電荷　Ｓ
ＵＶＡ０４　　　ＥＰＣ：ＯＡＩ１＝８　：　４　　　
正電荷　Ｓ［ＪＶ尚、Ｓ　Ｕ　Ｖ　（ｓｍａｌｌ　ｕｎ
ｉｌａｍｅｌｌａｒ　ｖｅｓｃｉｃｌｅ）は小さな単ラ
メラ小胞を、Ｍ　Ｌ　Ｖ　（ｎｕｌｔｉｌａｎｅｌｌａ
ｒ　ｖｅｓｃｉｃｌｅ）は多重ラメラ小胞を、Ｍ　Ｌ　
Ｖ　ｌａｒｇｅは粒径の大きな多重ラメラ小胞をそれぞ
れ表わす。

チウム　　ＰＧＥ　　　Ａ　ボソームのｐｃＥ＋（約５
ｒ＃ｇ）をエタノール０．　５　ｍｉに溶解し、これに
トリチウム標識ＰＣ；Ｅ，　　（２５μＣｉ／０．２５
ｄ　　７０％エタノーノレ水？容液）を〆昆合した。

２５ｄ容の梨型フラスコにＲＰＣのクロロホルム溶液お
よび上記のＰＧＥ，のエタノール溶液を量り取り（第２
表参照）、ロータリーエバボレーターで溶媒を除去して
脂質薄膜を調製した。

第２表 リポソーム　ＥＰＣ ＯＡｍ　　　　　ＰＧＥ． ＡＵＩ　　　　０．３７５ａｆｆｌ−１５μｉ（１００
μｍｏｌ）　　　　　　　　　　（１００　　μｇ）Ａ
　Ｕ　２　　　　　０．３７５戚　　　　　　　　　　
　　　ｌ５μｌ（１００ｕｍｏｌ）　　　　　　　　　
　（１００　　．１７　ｇ）ＡＵ３　　　　　０．３３
８ｊｄ　　　　　０．１３２ｄ　　　　ｌ５μｌ（　９
０μｍｏｌ）　　　（２０μｍｏｌ）　　　（１００　
　ｔｔ　ｇ）Ａ　Ｕ　４　　　　　０．３００ｄ　　　
　　０．２６４　　ｄ　　　　ｌ５μｉ（　８０μｍｏ
ｌ）　　　（４０／／１１０１）　　　（１００　　ｔ
ｌ　Ｅ）これに再度クロロホルムを加えて溶解し、ロー
タリーエバボレーターで溶媒を除去して脂質薄膜とした
。このクロロホルムによる溶解・薄膜化操作を３回繰り
返した。内壁に脂質薄膜を形威したフラスコをデシケー
ターに入れ真空ボンブで１時間吸引した．次にフラスコ
にｐ　Ｂ’ｋ　（１）ｌ｛５．　０　）を０．６ｄ入れ
、ボルテクス・ミキサーで撹拌して脂質懸濁液（ＭＬＶ
）を調製した． ＡＵ２以外はソニケーションによってＳＵｖ化した。脂
質懸濁液（ＭＬＶ）の入った梨型フラスコをソニケータ
ーにより２０分間ソニケーションした． ソニケーションによって分散した液をＰＢＳ　（ｐＨ５
．０）で２−に希釈し、１５０００　ｒ　ｐ　ｍで３０
分間遠心して上清を採取した。これを０．２２μフィル
ターで濾過した． ＡＵ２はＰＢＳ（ｐ｝１５．０）で２−に希釈してその
まま用いた． ゛′　　での　　　普 ＰＢＳ　（ｐ｝１７．４）　、５％ＩＳＡ　（ヒト血清
アルブミン）　／ＰＢＳ（ｐＨ７．　４　”）またはラ
ット血漿０．４５一にリポソーム化ＰＧＥ，０．０５−
を加えよく混合した．チューブのキャップを閉めて、こ
れを３７゜Ｃの恒温水槽に浸し、インキエベーションし
た。

一定時間インキエベーションした後にセファクリルＳ〜
４００を用いてゲル濾過し、放射活性、リン脂質濃度お
よび２ＢＯｎ＋ｗでの吸光度を測定した。

放氾五企曵皿定 サンプリングした液１００μｔに液体シンチレータ−１
０ｍ１を加え、良く撹拌した後、放射活性を測定した。

１ン　　ＰＣ　の リン脂質測定用試薬（酵素剤）（デンカ生研社製）を用
いて測定した． 第３表 リポソーム　　　　　　ＰＨ 各リポソームの平均粒子径を第４表に示した。

第４表 リポソーム　　平均粒子径（ｎｍ） た。

（実験結果） 生ヱヱニ憲立性状 各リポソームのｐＨは第３表のとおりであった。

尚、オレイルアξンを含むリポソーム（ＡＵ４）のｐＨ
が高かったので、ＩＮの塩酸を加えて調整した。

（以下余白） リポソーム５０ｕｌｌとＰＢＳ　（ｐｉ｛７．４｝　９
５０μｌを混合し、３７゜Ｃで１０分間インキユベーシ
ョンした後、混合液５００ｌｌｆをＰＢＳ（ｐＨ５．０
）で平衡化したＰＤ−１０カラムでゲル濾過した。

対照として、リポソームをＰＢＳ（ｐｉ｛５．０）でイ
ンキエベーションしたものを同様にゲル濾過した．各リ
ポソームについてのゲル濾過プロフィールを第１図に示
した。

ＭＬ■（ＡＵ２）はｐｌ｛５．０でもボイド画分にＰＧ
已．の放射活性が現れなかったが、これは粒子径が大き
く、カラムに目詰まりしたためと考えられる。その他の
リポソームではｐＨ５．０でインキユベーションした場
合、ＰＧＥ，の放射活性は殆どボイド画分に現れており
、ＰＧＥ，　とリポソームの挙動が一敗していることを
示している。

一方、ｐＨ７．４でインキユベーションした場合には、
リポソームＡＵＩ、ＡＵ２でＰＧＥ，の放射活性の大半
がボイド百分から消失し、低分子画分に移動した。この
ことはＰ　Ｇ　Ｅ　＋がリポソームから遊離したことを
示している。リポソームＡＵ３、ＡＵ４ではＰＧＥ，の
放射活性の約半分は低分子画分に移動したが、残りの放
射活性はボイド画分に止まっていた． 以上の結果から、ｐｌ１７．４でのリポソームからのＰ
ＧＥ，の遊離を防ぐためには、リポソームの多重層化は
効果がなく、リポソームの膜脂質に正電荷脂質を加える
ことが有効であることが分かる。

ヱ土工まヱ曵髪覧 次に、５％ＩＳＡ存在下での挙動をリポソームＡＵＩお
よびＡＵ４について調べた。リポソーム０．０５一を５
％ＨＳＡを含むＰ　Ｂ　Ｓ　（ｐＨ５．　０および７．
４）０．９５ａ＋ｆｆｉと混合し、３７゜Ｃで１０分間
インキユベーションした後、ＰＢＳ（ｐＨ５．０）で平
衡化したセフアクリルＳ−４００カラムでゲル濾過した
。ゲル濾過プロフィールを第２図に示した。

ρＩ｛５．０でインキヱベーションしたリポソームＡＵ
１の溶出パターンは、フラクシジン９と１４にピークを
持つ二峰性を示した。フラクション９がＨＳＡと吸着し
たＰＧＥ，，フラクションｌ４がフリーのＰＧＥ．と考
えられる。ｐＨ７．４でインキユベーシッンしたリポソ
ームＡＵＩではフラクション１４のピークがなかった。

正電荷の脂質（オレイルアミン）を含むリポソームＡＵ
４では、リポソームＡＬＩ１のどでクと比べてフラクシ
ョン９での立ち上がり急峻ではなく、フラクシヲン９以
前にＰＧＥ，の一部が溶出されている．この現象はｐＨ
５．０および７．４の両方で認められた。

以上の結果から、アルブミンが存在する場合でも、正電
荷脂質をリポソーム膜に組み込むことは、リポソームか
らのＰＧＥ．の遊離を防ぐための効果があると考えられ
る。

（発明の効果〕 本発明によれば、脂肪小体からのＰＧの遊離を抑えるこ
とができる。特にｐＨ中性付近で十分な効果がある。

従って、本発明によれば安定性に優れたＰＧ含有脂肪小
体を製剤として提供することができる。

【図面の簡単な説明】

第１図はリポソームＡＵＩ〜ＡＵ４におけるゲル濾過の
プロフィールで、ｐＨ７．４におけるＰＣ；Ｅ，の遊離
を示す図であり、第２図はリポソームＡＵ１およびＡＵ
４におけるゲル濾過のプロフィールで、アルブミン存在
下でのＰＧＥ．の遊離を示す図である。 第２図 ＡＵ４

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 薄膜脂質に正電荷脂質が組み込まれてなることを特徴と
   するプロスタグランジン含有脂肪小体製剤。