JPH0321525B2

JPH0321525B2 -

Info

Publication number: JPH0321525B2
Application number: JP56105689A
Authority: JP
Inventors: Masahiro Takada; Teruaki Yuzuriha; Koichi Katayama; Junzo Sunamoto
Original assignee: Eisai Co Ltd
Current assignee: Eisai Co Ltd
Priority date: 1981-07-08
Filing date: 1981-07-08
Publication date: 1991-03-22
Also published as: KR880002036B1; JPS588010A; ES8401526A1; EP0069399A3; CA1197463A; DE3273949D1; EP0069399B1; PH17553A; ES513789A0; KR840000241A; EP0069399A2

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は血液中から目標臓器へのユビデカレノ
ンの移行を速やかならしめるユビデカレノン含有
リポソームに関する。ユビデカレノン、別名コエンザイムQ₁₀は心機
能の改善に有効な医薬品として近年臨床上広く利
用されるに至つたものである。しかしながら、この物質を静脈内投与あるいは
経口投与した場合における血液中から目標臓器へ
の移行速度についてはまだ改善されるべき余地が
残されている。すなわち、当該物質は前記のごと
く心機能の改善を目的とする医薬品であるから目
標臓器への初期移行速度、および移行量が大きい
ことが望まれる。しかしながら、当該物質を従来
技術に基づいて製剤化して投与した場合、血液中
からの消失速度はかなり小さくなり、従つて目標
臓器への移行速度および移行量も小さくなる。そもそも当該物質は、48〜52℃の融点を有する
常温で固体状の脂溶性物質であるから、静脈内投
与に便ならしめるために界面活性剤、例えば
HCO（ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油）を使用
するごとき従来技術によつて当該物質を可溶化し
なければならない。しかしながら、かくのごとく
可溶化して投与した場合には、後記実験例におい
て示されるごとくユビデカレノンの血液中からの
消失速度は小さく、またユビデカレノンの目標臓
器である心臓、脾臓、肝臓、特に心臓への初期移
行速度も小さい。かかる事情にかんがみ、本発明者は血液中から
所定の目標臓器への移行を上昇せしめる上で有効
なユビデカレノン含有組成物について種々検討し
その結果ユビデカレノンをリポソーム中に含有せ
しめることによつて所期の解決手段が提供される
ことを知り、本発明を完成するに至つた。すなわち、後記実験例において示されるごとく
投与後における血液中からの消失速度および所定
時間内における臓器移行量を求めると、本発明リ
ポソームを投与した場合には、従来技術に係る可
溶化液の投与の場合に比較して、血液中からの消
失速度がいちぢるしく大きく、また肺、腎を除く
諸臓器において高い移行量を示した。なお、一般にリポソーム自体は公知のものであ
り、その製法についても常法のものがある。しか
し、リポソーム技術をユビデカレノンに応用し、
ユビデカレノン含有リポソームを収得し、それに
よつてユビデカレノンにおける前記の基本的問題
を解決し、ユビデカレノンの利用価値をいちぢる
しく高めることに成功したのは、本発明において
初めてなされたものでる。以下に本発明を詳細に
説明する。本発明リポソームにおいてユビデカレノンは、
リポソームを構成する膜の中に含まれる。リポソ
ーム膜を構成する基本物質はリン脂質およびステ
ロールであり、ユビデカレノンはこれらと共存し
て、膜の中に均一に分散している。本発明におい
て使用されるリン脂質としては、例えばホスフア
チヂルコリン、ホスフアチヂルエタノールアミ
ン、ホスフアチヂルセリン、スフインゴミエリ
ン、ジセチルリン酸、ステアリルアミン、ホスフ
アチヂルグリセロール、ホスフアチヂン酸、ホス
フアチヂルイノシトール、およびこれらの混合物
をあげることができるが、特にこれらに限定され
ない。ステロールとしてはコレステロールがもつ
とも好ましい。ユビデカレノン、リン脂質、ステロールの組成
比については、ユビデカレノン１モル比に対して
リン脂質は10モル比以上、ステロールは１モル比
以上あれば十分であり、例えばユビデカレノン１
モル比に対して、リン脂質として卵黄ホスフアチ
ヂルコリンを使用する場合には10〜30モル比また
ステロールとしてコレステロールを使用する場合
には１〜10モル比が好ましい使用範囲である。ユビデカレノン１モル比に対するリン脂質とコ
レステロールの好ましいモル組成比の例を示せば
以下１〜７のごとくである。

【表】本発明リポソームは、電子顕微鏡的には0.1〜
5.0μ程度の粒径をもつ球体である。凍結乾燥物は
凝集して外観上はブロツク状を呈しているが、水
または塩類溶液に投入するとよく分散し、均質な
溶液を与える。次に本発明リポソームは、リポソームの製造に
関する従来技術を準用して製造することができ
る。例えば、リポソームの膜構成成分とユビデカ
レノンをナスフラスコにとり、クロロホルムを加
えて一旦溶解し、次に溶媒溜去し、生成膜をガラ
スビーズおよび適当な緩衝液等を加えて剥離し、
超音波処理後セフアデツクスあるいはセフアロー
ズカラムに通して、リポソーム分劃を集め溶媒除
去すればよい。溶媒除去には例えば凍結乾燥処理
を適用することができる。凍結乾燥処理は2.0Torr以下で３時間以上おこ
なえば、所定の目的が達成され、リポソームを粉
末状にとり出すことができるが、本発明はこの条
件に限定されるものではない。望ましい条件とし
ては、後記実施例に示されるごとく、例えば
0.3Torrで５時間凍結乾燥処理する方法が選ばれ
る。本発明リポソームの効果を以下に記載する実験
例をもつて説明する。実験例１試料実施例１記載においてCoQ₁₀の代わりに¹⁴C−
CoQ₁₀を使用した点を除いて実施例１記載と同様
の方法によつて調節したリポソームを検体試料と
した。また¹⁴C−CoQ₁₀と４倍量のHCO−60を加
えて超音波処理して可溶化し、生理食塩液を加え
て0.6mg／mlに調整したものを対照試料とした。方法動物実験雄性モルモツト（体重300〜350ｇ）の左大腿部
静脈に検体試料0.6mg¹⁴C−CoQ₁₀／Kgを注入した。
また同じ投与量の対照試料を、同様の方法で投与
した。その後は、モルモツトを飼育ケージに放置
し、所定時間経過ごとに、耳静脈から採血した。
採取した血液中の¹⁴C−CoQ₁₀濃度を以下に記載
する方法で測定した。血液中放射能の測定耳静脈より20μまたは50μの血液を採取し
0.75mlのSoluene350／イソプロピルアルコール
（１／１）で可溶化し、数滴の過酸化水素水を加
え脱色後、instagel／0.5N HCl（９／１）５mlを
加え、液体シンチレーシヨン・カウンターを用い
放射能を測定した。結果検体試料または対照試料を投与した場合の¹⁴C
−CoQ₁₀の血液中放射能濃度の経時変化を示すグ
ラフを図１に示した。図１の説明〇印線は、検体試料を投与した場合のもの（２
例の平均値）、●印線は、対照試料を投与した場
合のもの（３例の平均値と標準偏差値）をそれぞ
れ示す。図１に示すように、検体試料中の¹⁴C−CoQ₁₀
の血中からの消失は、投与後１時間で折れ曲がる
２本の直線で示され、その消失半減期は第１相目
が11.5分、第２相目が15.6時間であつた。また、
対照試料中の¹⁴C−CoQ₁₀の血中からの消失は、
一本の直線で示され、その消失半減期は20.1時間
であつた。このことから検体試料中の¹⁴C−
CoQ₁₀の血中からの消失は、対照試料中の¹⁴C−
CoQ₁₀の消失より極めて速やかであることが見い
だされる。実験例２試料実験例１試料の項の記載と同じ検体試料および
対照試料を用いた。方法動物実験雄性モルモツト（体重300ｇ〜350ｇ）の左大腿
部静脈に、前記試料をそれぞれ0.6mg／Kg注入し
た。その後は、飼育ケージに放置し、投与後30分
および24時間後に断頭と殺し、各臓器を摘出し
た。なお、脳および心臓への血液の汚染を除去す
る目的で、生理食塩水を左心室から頚静脈にかけ
て環流し、脱血後、脳および心臓を摘出した。組織内放射能の測定臓器約100mgを0.5mlのSoluene350に加え、50
℃、２時間のインキユベートで組織を溶解後６ml
のinstagel／0.5N HCl（９／１）を加え、液体シ
ンチレーシヨン・カウンターを用い放射能を測定
した。結果検体試料中の¹⁴C−CoQ₁₀および対照試料中の
¹⁴C−CoQ₁₀をそれぞれ静脈内に注入後30分24時
間における主要臓器中の放射能濃度をCoQ₁₀換算
量で表わし両者の臓器移行性を比較したのが図２
ないし図４である。図２ないし図４の説明斜線入りのカラムは、検体試料を投与した
場合のもの（２例の平均値）、白抜きのカラム
は、対照試料を投与した場合のもの（３例の平
均値と標準偏差値、ただし脳、心の投与後30分の
場合は２例の平均値）をそれぞれ示す。¹⁴C−
CoQ₁₀の組織への分布では対照試料に比べ検体試
料では速やかに濃度が高くなり、かつ持続性を示
し、対照試料投与の場合とは異なつた分布を示し
た。まず、脳、心、肝、脾、副腎への移行で検体
試料の方が対照試料に比べて、速やかでかつ高濃
度に分布した。すなわち、投与後30分では検体試
料の方が心臓において16倍、脳において２倍の濃
度に分布するのが判明する。以下に記載する実施例をもつて本発明をさらに
詳細に説明する。実施例１卵黄ホスフアチヂルコリン36mg（4.5×
10^-5mol）、コレステロール5.85mg（1.5×
10^-5mol）およびユビデカレノンすなわち
CoQ₁₀2.16mg（2.5×10^-6mol）を２mlのクロロホ
ルムに溶解し、ロータリー・エバポレーターを用
い減圧下でクロロホルムを除去した。得られた薄
膜を減圧デシケーターで一夜乾燥し、クロロホル
ムを完全に除去した。底に残つた薄膜に3.0mlず
つ２回計6.0mlの緩衝液Ａおよびグラスビーズ１
個を加えて、膜が完全にはがれるまでボルテツク
ス・ミキサーで振つた。次に、この溶液を枝付き試験管に移し、アルゴ
ン気流下氷浴中でプロープ型リニケーターを用
い、30秒ごと断続的に53分間、42Wで超音波処理
を行うと、半透明なうす黄色の溶液が得られた。この溶液をSepharose4Bカラム（1.6×45cm）
に移し、緩衝液Ａで溶出し、1.8mlずつ60本の試
験管に分取し試料を採取した。このカラムの排除
体積付近に溶出して来たものを0.08μｍのポア・
サイズを有するポリカーボネート製メンブレンを
用いて最終体積1.7ml（CoQ₁₀として0.55mg含有）
まで濃縮した。得られたリポソームの直径は電顕
観察により80〜100nmであつた。なお、緩衝液Ａ
とは、0.1M NaClを含む0.01Mリン酸緩衝液（PH
7.4）である。実施例２卵黄ホスフアチヂルコリン60.0mg（３モル比）、
コレステロール9.8mg（１モル比）、ユビデカレノ
ン6.5mg（0.3モル比）を200mlのナス型フラスコ
にとり、クロロホルム４mlを加えて溶解し、溶媒
を減圧溜去する。生理食塩水４mlとグラスビーズ
を加え、ボルテツクスミキサーを用いて拡散させ
る。得られる多重層膜を枝付試験管に移し、窒素
ガス雰囲気下、氷浴中で超音波処理（25kw、15
分）を行う。次にセフアデツクスＧ−50カラムに
負荷し、生理食塩水を溶出液として溶出せしめ、
リポソーム分劃を集め、30mlに希釈する。これを
凍結乾燥処理（0.3Torr、５時間）するとリポソ
ームが得られる。

【図面の簡単な説明】

図１は実験例１結果の項に記載の図１に相当す
る図面である。図２ないし図４は実験例２結果の
項に記載の図２ないし図４に相当する図面であ
る。

Claims

【特許請求の範囲】１リポソームの膜がリン脂質およびステロール
より構成される膜であるリポソームの膜の中にユ
ビデカレノンが存するユビデカレノンを含有する
リポーム２リン脂質がホスフアチヂルコリン、ホスフア
チヂルエタノールアミン、ホスフアチヂルセリ
ン、スフインゴミエリン、ジセチルリン酸、ステ
アリルアミン、ホスフアチヂルグリセロール、ホ
スフアチヂン酸、ホスフアチヂルイノシトール、
およびこれらの混合物である特許請求の範囲第１
項記載のリポソーム３ステロールがコレステロールである特許請求
の範囲第１項または第２項記載のリポソーム４ユビデカレノン１モル比に対してリン脂質が
10モル比以上、ステロールが１モル比以上である
特許請求の範囲第１項乃至第３項記載のリポソー
ム