JPH0114A - リポソーム製剤およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 髪棗北Δ机杷分訃 本発明はリポソーム製剤およびその製造法に関する。

従来の技術 薬物を封入したリポソームを静脈内投与し、限定された
部位に薬物をターゲットさせる叶ｕｇＤｅｌ　１ｖｅｒ
ｙ　　５ｙｓｔｅｓ　　（Ｄ　Ｄ　Ｓ　）の考えはすで
に一般化されている　［ジ・グレゴリアゾイスら著；リ
セプターメディエイテッド・ターゲツティング・オブ・
ドラッグス、　ブレナム・プレス（Ｇ。

Ｇｒ、ｅｇｏｒｉａｄｉｓ　　ｅｔ　　ａｌ、、　Ｒｅ
ｃｅｐｔｏｒｔｅｄｆａｔｅｄｔａｒｇｅｔｔｎｇ　　
ｏｒ　　ｄｒｕｇｓ、　　Ｐｌｅｎｕａ　　Ｐｒｅｓｓ
、　　ＮｅｖＹｏｒｋ、ｐ２４３−２６６（１９８０）
］。そのようなりＤＳにおいて、リポソームが静脈内投
与された後、より長時間安定に血液とともに体内を循環
することが第−義的に要求される。ところが、本来リポ
ソームは、その膜成分である脂質と血液中のリボプロテ
ィンなどの成分とのインターラクションにより、血液中
ではそれほど安定ではない。また、静脈内投与されたリ
ポソームはその物理的形状や生化学的特性によって、網
内系（ＲＥＳ）により異物として認識され直中から消失
しやすい特性を有する。そのため薬物を内封したリポソ
ームを静脈内投与してもリポソームの血中からの消失は
期待に反して速い。従って、いかに血中でのリポソーム
の安定化をはかり、ＲＥＳによる認識を回避させて、リ
ポソームの血中からの消失時間を延長させるかが、従来
より重要な検討課題とされてきた。例えば、リポソーム
の膜組成にコレステロールを添加することにより血中で
のリポソームの安定性を増大させる報告がある［シ・ジ
・ナイト著、「リポソーム：物理構造から治療的応用ま
で」（Ｃ，Ｇ、　Ｋｎｉｇｈｉ、　”　Ｌｉｐｏｓｏｍ
ｅｓ；ｒｒｏｍ　　ｐｈｙｓｉｃａｌｓｔｒｕｃｔｕｒ
ｅ　　ｔｏ　　ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　　ａｐｐｌｉ
ｃａｔｉｏｎｓ”。

Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、　Ｎｏｒｔｈ　　１ｌｏｌｌａｎｄ
　　　ｐ３１０−３１１（１９８１月。しかしその添加
効果はもともと用いられているリポソームの膜組成に依
存して大きく異なるといえる［バイオケミ力・工・バイ
オフィジカ・アクタ（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ　　ｅｔ　
Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ　　Ａｃｔａ）８３９、　　ｌ−
８（１９８５）コ。また、これとは別にリポソームの膜
組成をジアール基を有する糖蛋白を用いてリポソームの
膜表面をジアール酸で被覆することにより、ＲＥＳへの
分布がおさえられるという報告がある［ケミカル・アン
ド・ファーマシューティカル・ブレタン　（Ｃｈｅｍ、
　　Ｐｈａｒｍ。

Ｂｕｌｌ、）、　３土、　　２９７９−　　２９８８（
１９８６）］。それとは反対にそのようなジアール酸を
有する糖脂質がＲＥＳのひとつである肝臓によく分布す
るという報告もある［バイオケミ力・工・バイオフィジ
カ・アクタ　　　（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ　　ｅｔＢｉ
ｏｐｈｙｓｉｃａ　　Ａｃｔａ、　４９７　、　７６０
−７６５（＋９７７）］。

一方、界面活性剤をリポソーム膜構成成分に用いた例は
ほとんどない。その理由は、一般に界面活性剤はリポソ
ームの膜構造を不安定にすると考えられているからであ
り　［細胞工学、Ｉ。

＋１３６（１９８３）］、むしろ膜を壊すために用いら
れることが多い［バイオケミ力・工・バイオフィジカ・
アクタ（Ｂｉｏｃｈｅｎ＋ｉｃａ　　ｅｔ　Ｂｉｏｐｈ
ｙｓｊｃａＡｃｔａ、５５１．　２９５（１９７９）］
。界面活性剤を用いる唯一と考えられるリポソーム調製
法として、イオン性界面活性剤と脂質の均質混合物を水
性相における界面活性剤の臨界ミセル濃度より低い濃度
で水性相に分散させ、単葉リポソームを製造する方法が
知られている（特開昭５９−８９６３３）。この方法で
得られるリポソームは、静脈内投与した場合、血中から
の消失が早＜ＤＤＳの目的からは必ずしも充分な効果が
期待できない。

発明が解決しようとする課題 上記のように、薬物を封入したリポソームを静脈内投与
によりＤＤＳとして利用するという考えはあるものの、
従来法によるリポソーム製剤は、静脈内投与後、血中か
らの消失時間が早く、ＤＤＳの目的を効果的に達するた
めの実用性の高い手段はまだ開発されていない。

課題を解決するための手段 上記の状況に鑑み、本発明者等は静脈内投与されたリポ
ソーム製剤が、より長時間、安定に血液とともに体内に
循環させるだめの方法を種々検討した。その結果、リポ
ソームを調製するに際して、アシル基として飽和アシル
基を有するリン脂質を用いて、特定の界面活性剤、すな
わちクラフト点が３７℃以上のアニオン性界面活性剤の
存在下にリポソーム膜を構成させることにより、得られ
たリポソーム製剤が体内血液中での安定性が高くなるこ
とを知り、さらに研究をして本発明を完成したものであ
る。

すなわち本発明は（１）アシル基が飽和アシル基である
リン脂質とクラフト点が３７℃以上であるアニオン性界
面活性剤とを膜構成成分とするリポソーム内に薬物を封
入してなるリポソーム製剤、（２）アニオン性界面活性
剤がアシルタウリン塩である上記第（１）項記載の製剤
、および（３）薬物を封入してなるリポソーム製剤の製
造に際して、アシル基が飽和アシル基であるリン脂質と
、クラフト点が３７℃以上であるアニオン性界面活性剤
を臨界ミセル濃度以上に含有する水性液との乳化液ない
し分散液を用いてリポソーム膜を構成させることを特徴
とするリポソーム製剤の製造法である。

本発明のリポソーム製剤の製造に用いられるアシル基が
飽和アシル基であるリン脂質（以下、単にリン脂質と略
称することがある）としては、アシル基が飽和アシル基
であるグリセロリン脂質あるいはスフィンゴリン脂質が
あげられる。本リン脂質としては、たとえばその２個の
アシル基が炭素数８以上の飽和アルキルであり、少なく
ともその一方が炭素数１０以上、好ましくは＋２−１８
の飽和アルキルであるものがあげられる。さらに両方の
飽和アシル基が炭素数＋２−１８の飽和アルキルである
ものがより好ましく用いられる。このようなリン脂質と
しては、動植物起源のレシチン（例、卵黄レシチン、大
豆レシチン）に水素添加して得られる水添レシチンやラ
ウリル、ミリストイル、バルミトイル、ステアロイルな
どの組合せからなる半合成によりえられるホスファチジ
ルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファ
チジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ス
フィンゴミエリンなどがあげられる。さらにくわしくは
、それぞれの相転移温度が通常、約２０〜８０℃のもの
を好ましく用いることができる。たとえば相転移温度の
実測値が以下の（）内で示されるような、ジミリストイ
ルポスファチノルコリン（ＤＭＰＣ，２３，９℃）、パ
ルミトイルミリストイルホスファチジルコリン（ＰＭＰ
Ｃ。

２７．２°Ｃ）、ミリストイルバルミトイルホスファチ
ジルコリン（ＭＰＰＣ，３５，３℃）、ジパルミトイル
ホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ，４１，４℃）、ステ
アロイルバルミトイルホスファチジルコリン（ＳＰＰＣ
，４４，０°Ｃ）、バルミトイルステアロイルホスファ
チジルコリンＣＰＳＰＣ，４７，４℃）、ジステアロイ
ルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ。

５４．９℃）、シミリストイルホスファデジルエタノー
ルアミン（ＤＭＰＥ、５０°Ｃ）、ジパルミトイルホス
ファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ。

６０℃）、ジステアロイルホスファチジルエタノールア
ミン（ＤＳＰＥ、６０℃以上）、シミリストイルホスフ
ァチジルセリン（ＤＭＰＳ、３８℃）、ジパルミトイル
ホスファチジルセリン（Ｄ　Ｐ　Ｐ　Ｓ　。

５１℃）、ジステアロイルホスファチジルセリン（ＤＳ
ＰＳ、５０℃以上）、シミリストイルホスファチジルグ
リセロール（ＤＭＰＧ、２３℃）、ジパルミトイルホス
ファチジルグリセロール（Ｄ　Ｐ　Ｐ　Ｇ　。

４１℃）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール
（ＤＳＰＧ、５５℃）、ジパルミトイルスフィンゴミエ
リン（Ｉ）ＰＳＭ、４１℃）、ジステアロイルスフィン
ゴミエリン（ＤＳＳＭ、５７℃）などがあげられる。

本発明においては、クラフト点が３７℃以上でめろアニ
オン性界面活性剤（以下、単に、アニオン性界面活性剤
と略称することがある）は、通常、硫酸基あるいはスル
ホン酸基を有するものが有利に利用できる。クラフト点
の上限は特に限定されないが、通常９０℃までのものか
ら選択される。

このアニオン性界面活性剤としては、たとえば次の一般
式で示されるものを用いることができる。

Ｒ−Ｘ＋ａ−（Ｙ、またはＹｔ）ｎ−Ｚ［式中、Ｒは硫
酸基で置換されていてもよい炭素数１２以上のアルキル
基を、Ｘは−ＣＯＮＨ−。

のいずれかを、Ｙｌは−ＣＨ２ＣＨｔ−。

ＣＨＣＨｔ　　、　　　ＣＨｚＣＨまたはＣ１１３ＣＨ
３ −Ｃｌ−１，ＣＩＩｔＣＩＩｔ−のいずれかを、Ｙ、は
−ＯＣＨｔ　ＣＨｔ　　。

−０ＣＨＣＨｔ−、−ｏｃｔ−ｒｔｃｎ＊−またはＣＨ
３ＣＨ３ 〜ＯＣＨｔ　ＣＨｔ　ＣＨｔ−のいずれかを、Ｚは−８
０３−Ｍ”、　　−８Ｑ、−Ｍ”（Ｍはアルカリ金属元
素を表わす）を示し、ｍは０（直接結合）または■であ
り、ｎは０（直接結合）〜２の整数である。

ただし、Ｘが一〇　〇　Ｎ　Ｈ−または−〇０Ｎ−４あ
ＣＩ４＊ るときＹ、のｎは０であり、Ｘが→（Ｄ←のとき口は０
（直接結合）である。］ Ｒで表わされるアルキル基は、通常炭素数１２〜２５で
あり、硫酸基で置換されている場合は炭素数１６〜２５
のものが好ましく、この硫酸基は対イオンとしてアルカ
リ金属イオン（ナトリウム、カリウム、リチウム）を何
していてもよい。

以下に、アニオン性界面活性剤の具体例を示す。

硫酸基を有するアニオン性界面活性剤としては、たとえ
ばヘキサデシル硫酸ナトリウム（クラフト点：４３℃）
、オクタデシル硫酸ナトリウム（クラフト点；５８℃）
などのアルキル硫酸エステル塩類；ヘキサデシルジ硫酸
エステルナトリウム（クラフト点；３９℃）、オクタデ
ンルジ硫酸エステルナトリウム（クラフト点；４５℃）
などのアルキルジ硫酸エステル塩類；オクタデシルエー
テル硫酸エステルナトリウム（クラフト点；４６℃）、
オクタデシルジエーテル硫酸エステルナトリウム（クラ
フト点；４０℃）などのアルキルエーテル硫酸エステル
塩類、バルミトイルエタノールアミド硫酸エステルナト
リウム（クラフト点：４２℃）、ステアロイルエタノー
ルアミド硫酸エステルナトリウム（クラフト点：５３℃
）、バルミトイルプロパツールアミド硫酸エステルナト
リウム（クラフト点；４７℃）、ステアロイルプロパツ
ールアミド硫酸エステルナトリウム（クラフト点：５７
℃）などの脂肪酸アルカノールアミド硫酸エステル塩類
などかあげられる。また、スルポン酸を有するアニオン
性界面活性剤としては、たとえばドデカンスルホン酸ナ
トリウム（クラフト点；３８°Ｃ）、テトラデカンスル
ホン酸ナトリウム（クラフト点；４８℃）、ペンタデカ
ンスルホン酸ナトリウム（クラフト点：４８℃）、ヘキ
サデカンスルホン酸ナトリウム（クラフト点；５７℃）
、ヘプタデカンスルホン酸ナトリウム（クラフト点；６
２℃）、オクタデカンスルホン酸ナトリウム（クラフト
点；７０°Ｃ）などのアルカンスルホン酸塩類；ドデシ
ルベンゼンスルホン酸ナトリウム（クラフト点；４０℃
）、テトラデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム（クラ
フト点；４３°Ｃ）。

ヘキサデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム（クラフト
点；４６°Ｃ）、オクタデンルベンゼンスルホン酸ナト
リウム（クラフト点：５６℃）などのアルキルベンゼン
スルホン酸塩類；ミリストイルオキシエタンスルホン酸
ナトリウム（クラフト点：３９℃）、パルミトイルオキ
シエタンスルホン酸ナトリウム（クラフト点：５１℃）
、ステアロイルオキシエタンスルホン酸ナトリウム（ク
ラフト点、５１℃）などのアシロキシエタンスルホン酸
塩類；バルミトイルタウリンナトリウム（クラフト点；
４３℃）、ステアロイルタウリンナトリウム（クラフト
点；５８℃）、パルミトイルメチルタウリンナトリウム
（クラフト点：４３℃）、ステアロイルメチルタウリン
ナトリウム（クラフト点；５８℃）などのアシルタウリ
ン塩類またはアシルメチルタウリン塩類があげられる。

上記の各アニオン性界面活性剤のなかでら、得られるリ
ポソームの血液中での安定性が高いこと、工業的な供給
が容易であることなど考慮すると、とりわけアシルタウ
リン塩類またはアシルメチルタウリン塩類が好ましく使
用できる。　次に、本発明のリポソーム製剤の調製法に
ついて説明する。

本発明におけるリポソームは、その膜の相転移温度が一
般に約３７〜６０℃、好ましくは約４０〜５５°Ｃを示
すように調製される。この相転移温度の調整には、用い
るリン脂質およびアニオン性界面活性剤の各種類や配合
割合などを適宜に選択することによって行うことができ
る。

リポソーム膜の相転移温度は、ＤＳＣのような熱量測定
や、内封された薬物の放出を測定することによって確認
することができる。通常、上記のようなリポソーム膜の
相転移温度にするためには、リン脂質とアニオン性界面
活性剤は、リン脂質１００重量部に対し、アニオン性界
面活性剤を約０．５〜５０重重部、好ましくは約５〜２
０重量部の割合で使用される。リポソーム膜の相転移温
度を上記に示すような範囲に調整することにより、得ら
れるリポソーム製剤の血中での消失時間を長くするとい
う本発明の目的が有利に達成される。

本発明のリポソーム製剤の調製に際しては、アニオン性
界面活性剤を臨界ミセル濃度以上に含有する水性液が用
いられる。ここでいう臨界ミセル濃度は通常の方法で測
定することができ、例えば表面張力、浸透圧係数、電気
伝導度などの物理化学的性質と、アニオン性界面活性剤
の濃度との関係を調べることによって求めることができ
る［中垣正幸、古賀直文共著、「薬品物理化学」、第３
版、第１１１頁（昭和４４年）、南江堂］。従って、こ
れらの測定値を指標としながら、アニオン性界面活性剤
の濃度が臨界ミセル濃度以上でかつリン脂質に対する使
用量が前述のような割合となるよう水性液をＭｌずれば
よい。本水性液の調製に際しては、アニオン性界面活性
剤をクラフト点以上の高い温度で水性媒体中に溶解さけ
てもよいし、クラフト点以下の低い温度で分散させても
よい。薬物が水溶性である場合は、この水性液中に含有
砂しめておくのが好ましく、さらに必要に応じてその他
の添加物（例、浸透圧調整剤としての糖類や塩類、ｐＩ
Ｉ調整剤としての緩衝剤）を含有せしめておくこともで
きる。薬物の含有型は、その治療目的や薬効の程度に応
じて適宜に決定される。

上記のようにして得られた水性液とリン脂質とを用いて
乳化液ないしは分散液を調製し、リポソームを形成させ
るが、その方法自体は公知のＲＥＶ、ＭＬＶ、ＳＵＶま
たはその他のリポソーム調製法に準じて実施できる。た
とえば、乳化液からのリポソームの調製は、まずリン脂
質を有機溶媒（例、ジエチルエーテル、イソプロピルエ
ーテル、クロロホルムあるいはこれらの２種以上の混合
溶媒）に溶解した後、上記のアニオン性界面活性剤の水
性液を加えて、常法によりＷ１０型乳化液を調製する。

このＷ１０型乳化液からリポソームのＵＭｔＪは、プロ
シーデインゲス・オプ・ザ・ナショナル・アカデミ−・
オブ・ザ・ユナイテッド・ステーブ・オブ・アメリカ（
Ｐｒｏｃ、　　Ｎａｔｌ、　　Ａｃａｄ。

Ｓｃｉ、、ＵＳＡ）７５．４１９４（１９７８）あるい
は特開昭５５−１１８４１５に記載の方法に準じて実施
できる。乳化液調製において使用される有機溶媒は封入
液量に対して、一般に２〜１０倍程度が用いられる。リ
ン脂質の量は封入液１ｄに対し約１０〜１００μｍｏｌ
程度が用いられ、一般に有機溶媒に予じめ溶解しておく
方か好ましい。

Ｗ１０型乳化液を得ろための乳化方法は、従来の方法、
たとえば攪拌法、圧力法、超音波照射法が採用できる。

超音波照射の場合２ＯＫＨｚｐｒｏｂｅ型で約１分〜２
０分程度の超音波照射により均一な乳化液が得られる。

アニオン性界面活性剤の本発明の製法では、乳化が容易
であり、均一で細かな乳化液が得られる。

かくして得られるＷ１０型乳化液から溶媒を常法により
除去する。これは例えばロータリーエバポレータを用い
、溶媒を留去させればよい。このときの温度は、４０℃
以上が望ましく、また留去の初期においては約６０〜４
００ｍｍＨｇの減圧下で行ない、内容物がゲルを形成し
た後は約１００〜７００ｍｍＨｇ程度の減圧下とするの
が好ましい。

ざらに留去を続は溶媒を除去するとｒ（ＥＶ（Ｒｅｖｅ
ｒｓｅ−ｐｈａｓｅ　　Ｅｖａｐｏｒａｔｉｏｎ　　Ｖ
ｅｓｉｃｌｅ）リポソームが得られる。本リポソームは
ユニラメラ−またはオリゴラメラ−（通常、約１０層以
Ｆの脂質二重膜よりなる）の形態を有し、その内部に薬
物が封入されている。

一方、上記と同様の方法により調製したリン脂質の有機
溶媒溶液を減圧下に有機溶媒を蒸発除去してリン脂質の
薄膜を形成さけ、次いで薬物を含むアニオン性界面活性
剤の水性液を加えて、４０℃以上の温度で分散させるこ
とによって、薬物を含有するマルチラメラ−ベシクル（
ＭＬＶ）のりボソーム製剤を得ることができる。さらに
、かくして得られたＭＬＶをプローブ型超音波発振機で
振盪することによってスモールユニラメラ−ベシクル（
ＳＵＶ）であるリポソーム製剤を得ることができる。

さらに、本発明のリポソーム製法は、ステイブルブルリ
ラメラーベシクル（ＳＰＬＶ）法（特開昭５９−５００
９５２号）や、デハイドレイションーレハイドレイショ
ンベシクル法［Ｃ，Ｋｔｒｂｙ　　ｅｔａｌ、、Ｂｉｏ
ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、　　Ｎｏｖ、、　　９７９　（
１９８４）］などにも適用できる。また脂溶性であって
水への溶解度が低い薬物の場合は、薬物を上記脂質有機
溶媒溶液に溶かして薬物を封入するリポソームを得るこ
ともできる。このようにして得られる薬物を封入したリ
ポソームはそのまま使用してもよいが、必要とあらば好
ましい粒子サイズに調製することができる。　この調製
法としては、ニュークリポアーフィルターあるいはゲル
濾過などが利用できる。一方、リポソームの使用に際し
ては、例えば、遠心分離、ゲル濾過あるいは透析によっ
て封入されない遊離の薬物を分離除去するのが好ましい
。

次に、本発明において使用される薬物は、ＤＤＳの目的
で使用されるらのであれば特に限定されず、たとえば白
金化合物（例、ンスプラヂン、カルポプラチン、スビロ
ブラヂンなど）、アトリヤマイシン、マイトマイシンＣ
１アクチノマイシン、アンサマイトシン、プレオマイシ
ン、５−ＦＵ。

メトトレキセートのような抗癌剤；天然型あるいは遺伝
子組換え型インターフェロン（α、β、γ）や天然型あ
るいは遺伝子組換え型インターロイキン２のようなリン
ホカイン類；マンガンスーパーオキサイドデスムターゼ
（ＳＯＤ）あるいはその誘導体であるスーパーオキサイ
ドデスムターゼＰＥＧ（ＰＥＧ−５００）（特開昭５８
−１６６８５号、ＥＰＣ公開公報Ｎｏ、０２１０７６１
）のような生理活性ペプチド類；スルフアゼシンのよう
なベーターラクタム系抗生物質、ゲンタマイシン、スト
レプトマイシン、カナマイシンのようなアミノ配糖体系
抗生物質等の抗生物質類；ジアノコバラミン、ユビキノ
ンのようなビタミン類、アンチモン酸メグルミンのよう
な抗原虫薬：アルカリホスファターゼ等の酵素剤；ヘパ
リン等の抗血液凝固剤：アモキサノクス等の抗アレルギ
ー剤；ムラミルジペプチド、ムラミルトリペプチド、Ｔ
ＭＤ−６６（Ｇａｎｎ　７４　　（２）、１９２〜１９
５（１９８３戸のような免疫賦活剤；プロプラノロール
のような循環器用薬；グルタチオンのような代謝賦活薬
があげられる。本発明は、　その目的上、とりわけ水溶
性薬物に好ましく適用できる。たとえば、オクタツール
／水間の分配率の対数値が１０以下の薬物があげられる
。薬物の使用量は、対象薬物の薬効量、投与量等を考慮
して、その治療目的が達成しうるように適宜に選択すれ
ばよい。

本発明のリポソーム製剤は一般に水剤あるいは乳剤とし
て治療目的に応じて適宜の飛を生理食塩水等に分散して
注射あるいは点滴などにより静脈内に投与して用いられ
る。

実施例 以下に実施例、試験例および実験例をあげて本発明を具
体的に説明する。

実施例１ ２７０＋ｎｇのＤ　Ｉ）　Ｐ　Ｃおよび３０ＩＩ１ｇの
ＤＳＰＣを１リツターのビーカー内でクロロホルムとイ
ソプロピルエーテルの１：Ｉの混合溶液７０−に溶解さ
せた。一方、あらかじめ生理食塩液と同じ浸透圧となる
ように調製しておいたＩ）Ｉ−１７の６−カルポキシフ
ルオレツセイン（６−ＣＦ’）水溶液１０ｄに室温下で
３０ｍｇのステアロイルメチルタウリンナトリウム（Ｓ
ＭＴ）を加えた。この時ＳＭＴはほとんど不溶であるが
、クラフト点よりも高い温度ではミセルを形成し急速に
溶解した。次いで、この溶液を上記のリン脂質有機溶媒
液に加えプローブ型超音波発振機（Ｏｈｔａｋｅ）で乳
化し、ｗ１０型乳化液を作成した。超音波の照射は５０
ワツトの条件で３０秒間、１０回くりかえして行った。

このようにしてえた乳化液をロータリーエバポレーター
にかけて、６０℃、減圧下で有機溶媒を留去しＲＥＶを
えた。エバポレーターの真空度は初めは高く、有機溶媒
の蒸発が進むにつれて真空度をさげて突沸しないように
調節した。その後さらにＲＥＶ中に残存する少量の有機
溶媒を窒素ガスをふきつけることにより留去した。さら
にえられたＲＥＶに適当量の生理食塩水を加え１０蔵と
し、１．２ミクａンのフィルター（Ａｃｒｏｄｉｓｃ、
　　Ｇｅｌｍａｎ）で濾過し、透析膜（Ｓｐｅｃｔｒａ
ｐｏｒ、　ＳｐｅｃｔｒｕｍＭｅｄｉｃａｌ）を用いて
生理食塩水中で２４時間透析することにより６−　Ｃｆ
；’が封入されたリポソームをえた。さらに、リポソー
ム中に封入された６−ＣＦの量を定量することにより（
註１）、このリポソームへの封入率は、３３．２％であ
ることがわかった。

リポソーム０．１ｄをリン酸緩衝生理食塩液（Ｐｒ３ｓ
、ｐＨ７，２）で１００倍希釈後、さらに０．０２％ト
リトンｘ−ｔｏｏを含有するＰ　［３Ｓで１００倍希釈
し、６０℃、３０分加温して、リポソームを破壊し、そ
の溶液の蛍光強度を測定（日立、Ｆ’３０００蛍光スペ
クトロメーター、励起波長４９４　ｎｍ、測定波長５１
５　ｎｍ）することによりリポソーム分散液中の総６−
ＣＦｆｆｉを求めた。またそれとは別にリポソーム０．
１ｄをＰＢＳで１００００倍希釈し、その２．５滅を遠
心分離型フィルター（Ｃｅｎｔｒｉｓａｒｔ、　　Ｓ　
Ｍ　Ｉ　３２４９　Ｅ。

５ａｒｔｏｒｉｕｓ）で濾過し、その濾液の蛍光強度を
測定ずろことにより封入されないでリポソーム分散液中
に残存する遊離の６−ＣＦ量をもとめた。

封入率＝ ［（リポソーム中の総ｅ＝ｃｐｆｌ）−（リポソーム中
の遊離の６−ＣＦり］／（リポソーム作製に使用された
６−ＣＦ量）　　Ｘ　　１００ 実施例２ 実施例１で用いられる３　０　ｍｇｓ　Ｍ　Ｔの代わり
に１５ｍｇのＳＭＴを用いて、実施例１と同じ方法で６
−ＣＦの封入率が３４．９％のリポソームをえた。

実施例３ 実施例１で用いられる３０ｍｇＳＭＴの代わりに４５ｍ
ｇのＳＭＴを用いて、実施例１と同じ方法で６−ＣＦの
封入率が３９．４％のリポソームをえた。

実施例４ 実施例Ｉで用いられる３０ｍｇＳＭＴの代わりにＧＯＢ
のＳ　Ｍ　’Ｉ’を用いて、実施例１と同じ方法で６−
ＣＦの封入率が４６．３％のリポソームをえた。

実施例５ 実施例Ｉで用いられる３０ｍｇＳＭＴの代わりに３０ｍ
ｇのバルミトイルメチルタウリンナトリウム（Ｐ　Ｍ　
’Ｉ’　）を用いて、実施例Ｉと同じ方法で６−ＣＦの
封入率が３２．３％のリポソームをえた。

実施例６ 実施例１で用いられる３０ｍｇＳＭＴの代わりに３０Ｊ
のオクタデカンスルホン酸ナトリウム（ＯＤＳ）を用い
て、実施例Ｉと同じ方法で６−ＣＦの封入率が３３．３
％のリポソームをえた。

実施例７ 実施例Ｉで用いられる３０ｍｇ０ＤＳの代わりに＋ｓｍ
ｇのＯＤＳを用いて、実施例１と同じ方法で６−ＣＦの
封入率が２４．１％のリポソームをえた。

実施例８ 実施例！で用いられる３０ｍｇ０ＤＳの代わりに４５ｍ
ｇのＯＤＳを用いて、実施例１と同じ方法で６−ＣＦの
封入率が３８．３％のリポソームをえた。

実施例９ 実施例１で用いられる３０ｍｇ０ＤＳの代わりに６０ｍ
ｇのＯＤＳを用いて、実施例１と同じ方法で６−ＣＦの
封入率が４０．１％のリポソームをえた。

実施例ＩＯ 実施例！で用いられろ２７０ｍｇのＤＰＰＣ。

３０ｍｇのＤＳＰＣの代わりに、２１０ＤのＤＰＰＣ，
９０ｍｇのＤＳＰＣを用いて、実施例１と同じ方法で６
−ＣＦの封入率が２４．１％のリポソームをえた。

実施例１１ 実施例１で用いられる２７０ｍｇのＤＰＰＣ。

３０ＢのＤＳＰＣの代わりに、３００ｍｇのＤＰＰＣを
用いて、実施例Ｉと同じ方法で６−ＣＦの封入率が３５
．２％のリポソームをえた。

実施例■２ 実施例６で用いられる２７０ｍｇのＤＰＰＣ。

３０Ｉｌ１ｇのＤＳＰＣの代わりに、２１０ｍｇのＤＰ
ＰＣ，９０ｍｇのＤＳＰＣを用いて、実施例！と同じ方
法で６−ＣＦの封入率が２８．３％のリポソームをえた
。

実施例１３ 実施例６で用いられる２７０ｍｇのＤＰＰＣ。

３０ｍｇのＤＳＰＣの代わりに、３ｏｏｍｇのＤＰＰＣ
を用いて、実施例１と同じ方法で６−ＣＦの封入率が３
４．６％のリポソームをえた。

実施例１４ 実施例１で用いられる３０ｍｇ５Ｍ’ｒの代わりに３０
ｍｇのバルミトイルタウリンナトリウム（ＰＴ）を用い
て、実施例１と同じ方法で６−ＣＦの封入率が２２，４
％のリポソームをえた。

実施例！５ ３６０ｍｇのＤＰＰＣおよび４０ｍｇのＤＳＰＣをｌリ
ッター容のビーカー内で、クロロポルム４０〃Ｊに溶解
させた。さらに、ロータリーエバポレーターを用いて有
機溶媒を留去し、ガラス壁に脂質薄膜を形成した。薄膜
中に残存する微量の有機溶媒は、窒素ガスをふきつける
ことにより除去した。

このようにして作製した薄膜に、６０℃の温度下で、あ
らかじめ６０℃で保っておいた実施例１で用いた４０１
ｇのＳＭＴを含む６−ＣＦ溶液を１０蔵加えて、ポルテ
ックスにより分散させることによりＭＬＶのリポソーム
をえた。このようにしてえられたＭＬＶに対して、実施
例１で用いられるプローブ型超音波発振機を用いて超音
波の照射を５０ワツトの条件で約１０分間行いＳＵ■を
えた。

さらに実施例１と同じ方法で濾過および透析を行い、６
−ＣＦの封入率が５．７％のリポソームをえた。

実施例１６ 実施例１５で用いられる３６０ｍｇのＤＰＰＣ。

４０ｍｇのＤＳＰＣの代わりに、２８０ｍｇのＤＰＰＣ
，１２０ｍｇのＤＳＰＣを用いて、実施例１５と同じ方
法で６−ＣＦの封入率が６．３％のリポソームをえた。

実施例１７ 実施例１５で用いられる３６０ｍｇのＤＰＰＣ。

４０ｍｇのＤＳＰＣの代わりに、４００ｍｇのＤＰＰＣ
を用いて、実施例！５と同じ方法で６−ＣＦの封入率が
６，０％のリポソームをえた。

実施例１８ 実施例Ｉ５で用いられる４０ｍｇＳＭＴの代わりに４（
１ｍｇのＰＭＴを用いて、実施例Ｉ５と同じ方法で６−
ＣＦの封入率６．８％のリポソームをえた。

実施例１９ 実施例１５で用いられる４０ｍｇＳＭＴの代わりに４Ｏ
ｎ＋ｇのＯＤＳを用いて、実施例１５と同じ方法で６−
ＣＦの封入率が６．５％のリポソームをえた。

実施例２０ 実施例１５で用いられる４０ｍｇＳＭＴの代わりに４Ｏ
ｎ＋ｇのバルミトイルタウリンナトリウム（ＰＴ）を用
いて、実施例１５と同じ方法で６−ＣＦの封入率が６．
０％のリポソームをえた。

実施例２１ 実施例Ｉで得られる６−ＣＦ溶液の代わりに、５００ｇ
ｇ／−濃度のシスプラチン（ＣＤＤＰ）生理食塩溶液を
用いて、実施例１と同じ方法でＣＤＤＰの封入率が２３
．５％で相転移温度が４２，７℃のリポソーム製剤をえ
た。

（註２）　リポソーム中のＣＤＤＰ含量の測定力先 リポソーム０．１艷を５−の生理食塩溶液に分散さけ、
その２．５１Ｒ１，を凍結ならびに加温処理し、えられ
たリポソームの破壊液的２．５−をＣｅｎｔｒｉｓａｌ
Ｌでろ過し、そのろ液０．１ｄにジエチルジチオ力ルバ
メート（ＤＤＴＣ）を１０％含有する０、１Ｎ　　Ｎａ
ＯＨ溶液を２蔵加え、３０分間室温下で放置後えられる
アダクトをｎ−ヘキサン５−で抽出して、その抽出液を
ＨＰＬＣ（カラム；Ｚｏｒｂａｘ　　ＣＮ　ｓ溶液；ｎ
−ヘキサン／イソプロピルアルコール−８／２；　ＵＶ
＝２５０ｎｍ）で定量し、リポソーム分散液の総ＣＤＤ
ＰＩをしとめた。

またそれとは別に、リポソームの生理食塩液の残り約２
．５−をＣｅｎｔｒｉｓａｌｔでろ過し、同上の条件で
リポソームに封入されないで存在する遊離のＣＤＤＰ量
を定量した。

実施例２２ 実施例２で用いられる６−ＣＦ溶液の代わりに、５００
ｇｇｌｄａ度のシスプラチン（ＣＤＤＰ）生理食塩溶液
を用いて、実施例２と同じ方法でＣＤＩ）　Ｐの封入率
が２１．４％のリポソーム製剤をえた。

実施例２３ 実施例３で用いられる６−ＣＦ溶液の代わりに、５００
ｇｇ／ｄ濃度のシスプラチン（ＣＤＤＰ）生理食塩溶液
を用いて、実施例３と同じ方法でＣＤＤＰの封入率が２
５．８％のリポソーム製剤をえた。

実施例２４ 実施例５で用いられる６−ＣＦ溶液の代わりに、５００
ｇｇＺＭｌａ度のシスプラチン（ＣＤＤＰ）生理念塩溶
液を用いて、実施例５と同じ方法でＣＤＤＰの封入率が
２４．０％のリポソーム製剤をえた。

実施例２５ 実施例６で用いられる６−ＣＦ溶液の代わりに、５００
μｇ／滅濃度のシスプラチン（ＣＤＤＰ）生理食塩溶液
を用いて、実施例６と同じ方法でＣＩ）ＤＰの封入率が
２１．８％で、相転移温度が４３．９℃であるリポソー
ム製剤をえた。

実施例２６ 実施例７で用いられる６−ＣＦ溶液の代わりに、５００
μｇ／滅濃度のシスプラチン（ＣＤＩ）Ｐ）生理食塩溶
液を用いて、実施例７と同じ方法でＣＤＤＰの封入率が
２１，９％のリポソーム製剤をえた。

実施例２７ 実施例８で用いられる６−ＣＦ溶液の代わりに、５００
μｇＺＭｌａ度のシスプラチン（ＣＤＤＰ）生理食塩溶
液を用いて、実施例８と同じ方法でＣＤＤＰの封入率が
２４．９％のリポソーム製剤をえた。

実施例２８ 実施例１Ｏで用いられる６−ＣＦ溶液の代わりに、５０
０μｇ／滅農度のシスプラチン（ＣＤＤＰ）生理食塩溶
液を用いて、実施例１０と同じ方法でＣＤＤＰの封入率
が２３，３％のリポソーム製剤をえた。

実施例２９ 、実施例１１で用いられる６−ＣＦ溶液の代わりに、５
００μｇ／滅濃度のシスプラチン（ＣＤＤＰ）生理食塩
溶液を用いて、実施例１１と同じ方法でＣＤ　Ｄ　Ｉ）
の封入率が２７．７％で、相転移温度が４１．９℃であ
るリポソーム製剤をえた。

実施例３０ 実施例１２で用いられる６−ＣＦ溶液の代わりに、５０
０μｇ／蔵濃度のシスプラチン（ＣＤＤＰ）生理食塩溶
液を用いて、実施例１２と同じ方法でＣＤＤＰの封入率
が２４．０％のリポソーム製剤をえた。

実施例３１ 実施例１３で用いられる６−ＣＦ溶液の代わりに、５０
０μｇ／−濃度のシスプラチン（ＣＤＤＰ）生理食塩溶
液を用いて、実施例１３と同じ方法でＣＤＤＰの封入率
が２４．５％で、相転移温度が４２．５℃であるリポソ
ーム製剤をえた。

実施例３２ 実施例１４で用いられる６−ＣＦ溶液の代わりに、５０
０μｇ／滅濃度のシスプラチン（ＣＤＤＰ）生理食塩溶
液を用いて、実施例！４と同じ方法でＣＤＤＰの封入率
が２５．０％のリポソーム製剤をえた。

実施例３３ 実施例１５で用いられる６−ＣＦ溶液の代わりに、５０
０μｇ／滅濃度のシスプラチン（ＣＤＤＰ）生理食塩溶
液を用いて、実施例！５と同じ方法でＣＤＤＰの封入率
が４．８％のリポソーム製剤をえた。

実施例３４ 実施例１６で用いられる６−ＣＦ溶液の代わりに、５０
０μｇ／滅農度のシスプラチン（ＣＤＤＰ）生理食塩溶
液を用いて、実施例Ｉ６と同じ方法でＣＩ）　Ｄ　Ｐの
封入率が５．０％のリポソーム製剤をえた。

実施例３５ 実施例１７で用いられる６−ＣＦ溶液の代わりに、５０
０μｇ／成濃度のシスプラチン（ＣＤＤＰ）生理食塩溶
液を用いて、実施例１７と同じ方法でＣＤＤＰの封入率
が５．２％のリポソーム製剤をえた。

実施例３６ 実施例１８で用いられる６−ＣＦ溶液の代わりに、５０
０　ｕ　ｇ／１ｒｔｌａ度のシスプラチン（ＣＤＤＰ）
生理食塩溶液を用いて、実施例１８と同じ方法でＣＤ　
Ｉ）　Ｐの封入率が４．３％のリポソーム製剤をえた。

実施例３７ 実施例１９で用いられる６−ＣＦ溶液の代わりに、５０
０μｇ／旙濃度のシスプラチン（ＣＤＤＰ）生理食塩溶
液を用いて、実施例１９と同じ方法でＣＤＤＰの封入率
が４．９％のリポソーム製剤をえた。

実施例３８ 実施例２０で用いられる６−ＣＦ溶液の代わりに、５０
０μｇ／滅濃度のシスプラチン（ＣＤＤＰ）生理食塩溶
液を用いて、実施例２０と同じ方法でＣＤＤＰの封入率
が４．７％のリポソーム製剤をえた。

実施例３９ 実施例２で用いられる６−ＣＦ溶液の代わりに３０８μ
ｇプロティン／ｄのインターロイキン２（ＩＬ−２）水
溶液（溶液の種類；２５ｍＭ酢酸アンモニウム溶液　ｐ
Ｈ６）を用いて、実施例１１と同じ方法で本発明のリポ
ソーム製剤をえた。

実施例４０ 実施例１３で用いられる６−ＣＦ溶液の代わりに３０８
μｇプロティン／滅のｉし一２水溶液を用いて、実施例
１３と同じ方法で本発明のリポソーム製剤をえた。

実施例４１ 実施例１１で用いられる６−ＣＦ溶液の代わりに、１０
０μｇ／−の濃度のアンサマイトシン生理食塩溶液を用
いて、実施例１１と同じ方法で、アンサマイトシンを封
入する本発明のリポソーム製剤をえた。

実施例４２ 実施例１３で用いられる６−ＣＦ溶液の代わりに、１０
０μｇ／ｄの濃度のアンサマイトシン生理食塩溶液を用
いて、実施例１３と同じ方法で、アンサマイトシンを封
入する本発明のリポソーム製剤をえた。

実施例４３ 実施例１１で用いられる６−ＣＦ’溶液の代わりに、５
ｍｇ／ｄの濃度のメトトレキセート生理食塩溶液を用い
て、実施例！１と同じ方法で、メトトレキセートを封入
する本発明のリポソーム製剤をえた。

実施例４４ 実施例Ｉ３で用いられる６−ＣＦ溶液の代わりに、５　
ｍｇ／−の濃度のメトトレキセート生理食塩溶液を用い
て、実施例Ｉ３と同じ方法で、メトトレキセートを封入
する本発明のリポソーム製剤をえた。

実施例４５ 実施例１！で用いられる６−ＣＦ溶液の代わりに、２０
０μｇ／−濃度のマイトマイシンＣ生理食塩溶液を用い
て、実施例１１と同じ方法で、マイトマイシンＣを封入
する本発明のリポソーム製剤をえた。

実施例４６ 実施例１３で用いられる６−ＣＦ溶液の代わりに、２０
０μｇ／ｄｉ１１度のマイトマイシンＣ生理食塩溶液を
用いて、実施例１３と同じ方法で、マイトマイシンＣを
封入する本発明のリポソーム製剤をえた。

実施例４７ 実施例１１で用いられる６−ＣＦ溶液の代わりに、Ｉ　
ａｇ／−の濃度のアトリヤマイシン生理食塩溶液を用い
て、実施例１１と同じ方法でアトリヤマイシンを封入す
る本発明のリポソーム製剤をえた。

実施例４８ 実施例１３で用いられる６−ＣＦ溶液の代わりに、Ｉ　
ｌａｇ／ｄの濃度のアトリヤマイシン生理食塩溶液を用
いて、実施例！１と同じ方法でアトリヤマイシンを封入
する本発明のリポソーム製剤をえた。

実施例４９ 実施例Ｉｔで用いられる６−ＣＦ溶液の代わりに、３　
ａ＋ｇ／−の濃度のプレオマイシン生理食塩溶液を用い
て、実施例１１と同じ方法でプレオマイシンを封入する
本発明のリポソーム製剤をえた。

実施例５０ 実施例１３で用いられる６−ＣＦ溶液の代わりに、３　
ｍｇ／−の濃度のプレオマイシン生理食塩溶液を用いて
、実施例１３と同じ方法でプレオマイシンを封入する本
発明のリポソーム製剤をえた。

実験例１−１ 実施例１．１０，１１、Ｉ５．１６および１７のリポソ
ームに対応させて、それぞれアニオン性界面活性剤を含
まないリポソームを対照として作製した。また、実施例
！の２７０ｍｇのＤＰＰＣ１３０ｍｇのＤ　Ｓ　Ｉ）　
Ｃおよび３０ｍｇのＳＭＴの代わりに、２００ｍｇの不
飽和系のアシル基を有する卵黄製ホスファチノルコリン
、ｌ００ｍｇのコレステロールおよび３０ｍｇのＳＭＴ
を用いて実施例１と同じ方法で対照リポソームを作製し
た。さらにこのリポソームに対応させてＳＭＴを含まな
いリポソームもまた対照として作製した。一方、実施例
１５のＳＭ’ｌ’の代わりに、ドデシル硫酸ナトリウム
（Ｓ　Ｄ　Ｓ　、クラフト点；９℃）をもちいて、対照
のリポソームを調製した。

実験例１−２ 実施例１で得られたリポソームと、アニオン性界面活性
剤を加えないで同様に調製されたリポソームの各０．１
−０．５ｄをラットに静脈内投与し、血中からのリポソ
ームの消失を調べると（註３）、第１図の結果かえられ
た。第１図に示されるように、アニオン性界面活性剤を
含むリポソームの血中濃度（図中、−・−で示される）
はそれを含まない対照リポソーム（図中、・・・Ｘ・・
・で示される）よりもはるかに高くなった。同様に、実
施例１，６、ＩＯ１！５．１８．１９および、２０で得
られたリポソームの各０．１−０．５−をラットに静脈
内投与し、投与１時間後の血中でのリポソームの残存は
、アニオン性界面活性剤を加えないで同様に調製された
リポソームと比較して、それぞれ９．７．１１．９．２
６．４．２．７．２．３．２．８．２．２倍であった。

一方、第２図に示されるように、卵黄製ホスファチジル
コリンおよびコレステロールより調製したアニオン性界
面活性剤を含むリポソーム（図中、−・−で示される）
の血中からの消失は、対照リポソーム（図中、・・・Ｘ
・・・で示される）と同様に速いことがわかった。また
、第３図に実験例１−１で得られたＳＤＳを含むリポソ
ーム（図中、・・・Ｘ・・・で示される）と、ＳＤＳを
加えないで同様に調製されたリポソーム（図中、−・−
で示される）の各０゜２１Ｒ１をラットに静脈内投与す
ることにより血中からリポソームの消失を調べた結果を
示した。これらの各図に示される結果から明らかなよう
にリポソーム膜組成として飽和系のアシル基を有するリ
ン脂質とクラフト点が３７℃以上であるアニオン性界面
活性剤を用いて調製された本発明のリポソーム製剤は、
対照リポソームに比較して静脈内投与後の血液中からの
消失時間が極めて長いという特徴を有する。

実験例１−３ 実施例１１１５．１８、Ｉ９および実験例１−１で得ら
れたリポソームをラットに静脈内投与して１時間後の肝
臓中の６−ＣＦｉ１度を測定しリポソームのＲＥＳへの
分布を調べると（註２）、表１の結果をえた。これらの
結果は、リポソームの血中からの消失時間が延長され、
肝臓などＲＥＳへの分布か減少したことを示している。

以下余白 表１１時間後のリポソームの肝臓中濃度（％）リポソー
ム　　アニオン性界　　アニオン性界の種類　　　　面
活性剤有　　　面活　作無し実施例１　　　　１６．７
　　　　　　３０．１実施例１５　　　１６．９　　　
　　　４４．７実施例１８　　　１９．１　　　　　　
４４．７実施例１９　　　１５．０　　　　　　４４．
７尾静脈よりえたヘパリン処理血液０．２ｗ１に１０−
のＰＢＳを加えた血液分散液をえた。さらにこれを遠心
分＃（３０００ｒｐｍ、　Ｉ　０分）してえられろ分離
上清５−にトリトンｘ−ｔｏｏを０．０５−加えて６０
−７０℃加温下でリポソームを破壊し、放出される６−
ＣＦの蛍光を測定することにより、血中のリポソーム濃
度を求めた。

また開腹脱血後えられた肝臓を０．０２％トリトンｘ−
ｔｏｏを含有するＰＢＳにつけ、＋００成の容積とし組
織破壊機（ＰｏｌｙｔｒｏｎＳＫｉｎｅｍａｔｉｃａ）
で組織を破壊し、さらに６０−７０°Ｃで加温処理した
後、６−ＣＦがすべて遊離するホモジネートをえた。、
このホモジネートは超遠心分Ｍ　（５００００ｇ。

１０分）した後２０−５０倍希釈後０，４５ミクロンの
メンブランフィルタ−（Ａｃｒｏｄｉｓｋ、　　Ｇｅｌ
ｍａｎ）でろ適役その蛍光を測定することにより肝臓中
のリポソーム濃度をもとめた。

実験例１−４ 実施例１．２および６のリポソームとこれらのリポソー
ムに対するアニオン性界面活性剤を含まないリポソーム
のＰＢＳ（２％ｐｌａｓｍａ）で　　１００００倍希釈
した乙のの熱放出性を昇温システムと連結した蛍光測定
装置を用いて、リポソームからの６−ＣＦの放出量を連
続的に測定することにより求め、リポソーム膜の相変化
（ゲルから液晶への変化）を調べた。この放出曲線より
求められる熱放出開始温度と相転移温度は表２の結果と
なった。相転移温度は、熱分析システム（ＳＥＩＫＯ■
＆Ｅ、ＳＳＣ５０００型、２°（：７ｍ１ｎ）をもちい
て測定した。下表に示すように両者はよく対応している
。

表２　リポソーム膜の相転移温度（０Ｃ）とリポソーム
からの６−ＣＦの熱放出開始温度（℃）リポソームの種
類　相転移温度　熱放出開始温度実施例　　１　　　　
４２．３　　　　　３６．１実施例　　６　　　　４３
．７　　　　　３９．３実施例　１０　　　　４２．８
　　　　　３６．３界面活性剤なし　　　４１．９　　
　　　３７．９実験例２−１ 実施例２１．２８．２９．３３．３４および３５のリポ
ソーム製剤に対応させて、アニオン性界面活性剤を含ま
ないリポソーム製剤を対照として作製した。

実験例２−２ 実施例Ｉのリポソーム製剤をラットに静脈内投与したと
きの６時間までの血中での６−ＣＰａ度と、実施例１５
のリポソーム製剤をラットに静脈内投与したときのＣＤ
ＤＰ濃度（註４）を比較することにより、第４図の結果
をえた。いずれの時間においてもＣＤＤＰは６−ＣＦと
同程変の濃度を示し、ＣＤＤＰリポソーム製剤（図中、
−・−で示される）が血中では６−ＣＦリポソーム製剤
（図中、・・・Ｘ・・・で示される）と同様な挙動をと
ることを示した。また、実施例　２Ｉ、２２．２５．２
６、および２９で得られたリポソーム製剤についても、
Ｇ　−ＣＩ”リポソームの場合と同様に高い値を示した
。これらの結果からもリポソーム膜組成として飽和系の
アシル基を有するリン脂質とクラフト点が３７℃以上で
あるアニオン性界面活性剤を用いる本発明のリポソーム
製剤は、対照リポソームに比較して静脈内投与後の血液
中からの消失時間が極めて長いという特徴を有する。

（註４）ＣＤＤＰの血中濃度の測定方法尾静脈よりえた
ヘパリン処理血液０．２−に２ｄのＰＢＳをくわえた血
液分散液をえる。さらにこの遠心分離してえられる分離
上清Ｉ−に１−のＤＤＴＣ溶液を加えて前述のＣＤＤＰ
の定量方法と同様にして血中の総ＣＤＤＰ量を定量した
。

実験例２−３ 上記実施例２ＩのＳＭＴ含量を定量したところ（註５）
、リポソーム調製時の仕込量の約９０％か残存していた
。この量は、ＣＤＤＰの封入率の２３．５％より著しく
高く、このことは、Ｓ　Ｍ　’Ｉ’が明らかにリポソー
ムの膜構成成分となっていることを示し、リン脂質１０
００分子あたり、約１５０分子のＳＭＴがリポソーム膜
に存在することを意味している。

（註５）　　ＳＭＴ含量の測定方法 メチレンブルー１５ｍｇ、濃硫酸６ｇ１無水硫酸ナトリ
ウム２５ｇを蒸留水に溶かし、５００蔵の反応試液を調
製する。この反応試液５雁にリポソーム希釈液（１００
００倍月Ｏ滅およびクロロホルム５戒を加えて、充分し
んとうした後に２層に分け、クロロホルム層の吸光度（
６５３ｎｍ）を測定した。またＳＭＴ溶液（ｌｏｐｐｍ
以下）を用いて吸光度を測定し、検量線を作成した。ま
た実験例２−１のＳＭＴを含まないリポソームを用いて
、空試験をおこなった。

発明の効果 本発明のリポソーム製剤は飽和リン脂質と共にクラフト
点の高いアニオン性界面活性剤を臨界ミセル５度以上で
用いることを特徴とするものである。

本発明のリポソーム製剤は、静脈内投与後、長時間安定
に血液とともに体内を循環し、そのことにより薬物の毒
性を緩和するとともに特定の病巣への薬物のターゲット
効果を増大さ仕、薬物の持続的治療効果をたかめるため
に有用である。とりわけ、抗癌剤を封入してなる本発明
のリポソーム製剤は、癌の加温療法時に投与することに
よって治療効果の向上が期待でき、この場合にはリポソ
ーム膜の相転移温度が約４０〜５５℃のものを好ましく
用い得る。

【図面の簡単な説明】

第１．２および３図は、実験例１−２において６−ＣＦ
か封入されたリポソーム製剤をラットに静脈内投与した
ときの時間経過と血中の６−ＣＦ濃度との関係を示す。 また第４図は、実験例２−２において６−ＣＦまたはＣ
ＤＤＰが封入されたリポソーム製剤をラットに静脈内投
与したときの時間経過と各薬物の血中濃度との関係を示
す。 ここで、ラットの血液量は体重の１０％を占めるものと
する。 援１図 竿２図 時間１　ｈｒｌ ＄４図 時間Ｔｈｒ　ｌ

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）アシル基が飽和アシル基であるリン脂質とクラフ
   ト点が３７℃以上であるアニオン性界面活性剤とを膜構
   成成分とするリポソーム内に薬物を封入してなるリポソ
   ーム製剤。
2. （２）アニオン性界面活性剤がアシルタウリン塩である
   請求項（１）記載の製剤。
3. （３）薬物を封入してなるリポソーム製剤の製造に際し
   て、アシル基が飽和アシル基であるリン脂質と、クラフ
   ト点が３７℃以上であるアニオン性界面活性剤を臨界ミ
   セル濃度以上に含有する水性液との乳化液ないし分散液
   を用いてリポソーム膜を構成させることを特徴とするリ
   ポソーム製剤の製造法。