JPH0446129A

JPH0446129A - 新規なリポソーム形成助剤

Info

Publication number: JPH0446129A
Application number: JP2153453A
Authority: JP
Inventors: Renji Aikawa; 相川　練二; Hideo Sakakibara; 秀夫榊原
Original assignee: Toyo Jozo KK; Asahi Chemical Industry Co Ltd
Current assignee: Toyo Jozo KK; Asahi Chemical Industry Co Ltd
Priority date: 1990-06-12
Filing date: 1990-06-12
Publication date: 1992-02-17

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

ｒ産業上の利用分野］本発明は、リポソームを効率的に形成し得るリポソーム
形成助剤、とそれを利用したリポソームおよびリポソー
ム製剤に関する。

【従来の技術】

Ｂａｎｇｈａ−により、レシチンが水中で脂質二分子膜
より成る直径０．０５〜１０　μｍのリポソームを形成
することが１９６５年に発見された。それ以来リポソー
ムについて薬物や酵素を封入した一種の超マイクロカプ
セル材料および遺伝子工学への応用など多くの研究が成
されてきた。また、エーロゾルＯＴ型のアニオン性ジアルキル化合物
、ジドデシルジメチルアンモニウムプロミドやアシルタ
ウリン塩のような合成界面活性剤、さらに、オレイルア
ミン−コバルトコンプレックスやダイマー酸−シクロヘ
キシルアミン系などを用いてリポソームを形成している
〔τ、）Ｉｕｎｉｔａｋｅ＋　Ｙ、０ｋａｈａｔａ、Ｂ
ｕｌｌ、Ｃｈｅｗ、Ｓｏｃ、Ｊａｐａｎ、５１　．１８
７７（１９７Ｂ）；Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、＋９
９．３８６０（１９７７）　　；特開昭６４−１４公報
、吉日忠義、奥山政高、名工大学報Ｎｏ、３１．１５９
（１９７９）；　　Ｊ、Ｈ，Ｆｕｈｒｈｏｐ＋Ｖ、Ｋａ
ｕｆｍａｎ、Ｐ、Ｓｃｈａｍｂｉｌ、Ｌａｎｇ■ｕｉｒ
、１．３８７（１９８５））。

【発明が解決しようとする課題】

レシチンなどのリン脂質のみからリポソームを製造する
場合には、リポソームを形成できないか、または極めて
形成し難く、通常上述の通りの合成界面活性剤等を使用
している。しかしながら、合成界面活性剤を用いて形成されるリポ
ソームは、安全性、皮膚刺激性および生分解性などの問
題が多く生体に係わる用途の使用には問題があった０例
えば、極めて安定なリポソームを形成するために用いら
れるステアリルアミンは、痙ｆの報告（Ｊ、Ｎｅｕｒｏ
ｌ、Ｓｃｉ　、　、　３１　、１７３　（１９７７））
があり、また、リポソーム形成の安定化剤であるフォス
ファチジルセリンが脳内ブドウ糖代謝を抑えるとの報告
（Ｂｒ、Ｊ、・Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、、６６、１６７（
１９７９）〕がある。したがって、安全性に問題がなくリポソームを効率的に
形成しえるリポソーム形成助剤の開発が求められていた
。

【課題を解決するための手段】

本発明者らは、上記問題点を解決するために鋭意研究し
た結果、安全性に問題のないグリチルリチン類を用いる
ことにより、リポソームが効率的に形成し得るとともに
、リポソームに薬物を封入したリポソーム製剤となす場
合において、薬物を効率的に封入し得ること、およびリ
ポソーム製剤として安定性に優れ、好ましい粒径と成し
得ることを知り、本発明を完成するに至った。即ち、本発明は、グリチルリチン類を有効成分とするリ
ポソーム形成助剤である。また、本発明は、リポソーム形成助剤としてグリチルリ
チン類を含有することを特徴とするリポソーム、および
その製造法である。本発明のリポソーム形成助剤は、グリチルリチン類を有
効成分とするものであり、グリチルリチン類とは、式：（式中、Ｒ３−Ｒ１は水素原子または適宜の置換基）で
表される基本骨格を共通にする化合物の総称であり、こ
れらの単一の化合物またはこれら化合物の混合物であっ
てもよく、具体的には、１８α−グリチルリチン酸（上
記式におけるＲ、は、グルクロニル−グルクロン酸残基
、Ｒ２はＣ０ＯＨ基、Ｒ３はＣＨ１基、Ｒ４は８０基、
Ｒ１はＣＨ，基をそれぞれ示す）、１８β−グリチルリ
チン酸（同前）、１８α−グリチルレチン＃ｉ（Ｒ＋；
ＯＨ基、Ｒ、、Ｃ０ＯＨ基、Ｒ，；ＣＨ２基、Ｒ，；、
ｏ基、Ｒ５１ＣＨユ基）、１８β−グリチルレチン酸（
同前）、３β−グルクロニル−１８β−グリチルレチン
酸（Ｒ１；グルクロン酸残基、Ｒ，、Ｃ（１１）Ｉ（基
、Ｒ２１ｃＬ基、Ｒ，；＝ｏ基、Ｒ，；Ｃ１，基）、カ
ルベノキソロン（Ｒ，１ｃＯＯｃｌ］ＺｃＨＩＣＯＯＨ
基、Ｒｚ；Ｃ０ＯＨ基、Ｒ５：ＣＨ，基、Ｒ，；＝ｏ基
、Ｒ５；Ｃ８，基）、デオキソグリチルレチン酸（Ｒ，
ｉ０Ｂ基、Ｒ、Ｃ０ＯＨ基、Ｒ，；ＣＨ３基、Ｒ４：水
素原子、Ｒ；Ｃ）１．基）、３α−デヒドロキシグリチ
ルレチン酸（Ｒ，ｉ＝ｏ基、Ｒ，：Ｃ０ＯＨ基、Ｒ，：
ＣＨ，基、Ｒ４；・０基、Ｒ５１ｃＨ３基）、ヘデラゲ
ニン（Ｒ＋；Ｏｉｌ基、Ｒ２；ＣＨ３基、Ｒ，、Ｃ０Ｏ
Ｈ基、Ｒ４：水素原子、Ｒ５；ＣＨ２基）、１１−オキ
ソヘデラゲニン（Ｒ＋；ＯＨ基、Ｒ，；Ｃ１ｌコ基、Ｒ
，；Ｃ０ＯＨ基、Ｒ，；＝ｏ基、Ｒ，ｉｃＨ，ＯＨ基）
、オレアノール酸（Ｒ１：ＯＨ基、Ｒ，；Ｃ）ｌ、基、
Ｒ，；ｃｏｏｎ基、Ｒ４；水素原子、Ｒｓ：ＣＨｓ基）
、１１−オキソオレアノール酸（Ｒ，；ＯＨ基、Ｒ２；
ＣＨ３基、Ｒｓ　　；Ｃ０ＯＨ基、Ｒ４；・０基、Ｒ５
；Ｃ１，基）、およびそれらの非毒性塩等が例示され、
非毒性塩としては、カリウム塩、ナトリウム塩、アンモ
ニウム塩、ヘミサクシネート等が例示される。グリチル
リチン類のカルボン酸基の数により、モノ、ジ、トリ塩
等とすることができ、通常、１８β−グリチルリチン酸
、同ジカリウム塩、同モノアンモニウム塩、同ジアンモ
ニウム塩、同ジナトリウム塩、同トリナトリウム塩、１
８β−グリチルレチン酸、カルベノキソロンジナトリウ
ム等が好ましく使用される。本発明ムこおいてリポソームとは、レシチン等のリン脂
質を主成分として水中で脂質二分子膜を形成した微粒子
であって、通常、直径１０μｍ以下の粒径のものをいう
。本発明におけるリポソームを形成する主成分であるリ
ン脂質としては、天然由来のリン脂質および合成リン脂
質のいずれであってもよく、例えば、卵黄レシチン、大
豆レシチン、およびそれらの水素添加物、ジミリストイ
ルフオスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）　、ジバルミト
イルフォスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）　、ジステア
ロイルフォスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジリノオ
レイルフォスファチジルコリン（ＤＲＰＣ）、ジオレイ
ルフォスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）等が挙げられ、
これらのリン脂質の混合物であってもよい。また、その
他のリン脂質又は添加剤として、スフィンゴミエリン、
フォスファチジルエタノールアミン、フォスファチジル
グリセロール、フォスファチジルセリン、フォスファチ
ジン酸、フォスファチジルイノシトール、カルシオリビ
ン、その他に各種脂肪酸、脂肪族アルコール等ヤ、α−
トコフェロールやそのエステル等の酸化防止剤、必要に
応してカチオン性、アニオン性、非イオン性の種々の界
面活性剤、パラベン類、フェノール、塩化ベンザルコニ
ウム、塩化ベンゼトニウム等の防腐剤、塩化ナトリウム
、塩化カリウム等の塩類やグルコース等の糖類またはポ
リエチレングリコールやグリセリン等の多価アルコール
の等張化剤を、安全性に問題にならない限り添加しても
よい。また、上述のリン脂質に、さらにコレステロール
を添加するとリポソームの安定性において極めて好まし
い。本発明のリポソーム形成助剤であるグリチルリチン類の
使用量は、形成するリポソームの材料や、リポソーム製
剤の製造においては、封入する薬物および求められる封
入率に従って、適宜の量を用いれば良く、添加量が少な
いと好ましいリポソームの形成や薬物の封入率が得られ
ないので、通常、リン脂質１重量部に対し、グリチルリ
チン類として０．１〜１重量部程度の例が挙げられる。また、リン脂質にコレステロールを添加するとリポソー
ムの形成、およびリポソームの安定において好ましいが
、例えば、通常、リン脂１ｔ１重量部に対し、コレステ
ロールを０．１〜１重量部程度の添加が例示される。リポソームの製造に際しては、リポソームの形成時に、
前述のグリチルリチン類を存在せしめると、効率的にリ
ポソームが形成される。即ち、前述のリン脂質と必要に
応じて添加されるその他の添加剤等に本発明のリポソー
ム形成助剤を存在せしめ、常法によりリポソームを製造
すればよく、例えば、リポソームに薬物を封入したリポ
ソーム製剤を製造するに際しては、薬物の存在下、本発
明のリポソーム形成助剤をリポソームの形成時、又は少
なくともそれ以前に添加または存在せしめると、効率的
にリポソーム製剤が形成され、薬物のリポソームへの封
入が効率的に行われる。リポソーム製剤の製造法としては、公知の逆相蒸発ベシ
クル（ＲＥＶ）、マルチラメラ−ベシクル（ＭＬＶ）、
スモールユニラメラ−ベシクル（ＳＵＶ）又はその他の
リポソームの調製法に準して実施できる。例えば、ＲＥ
Ｖリポソームの調製は、まずリン脂質および必要に応じ
て添加されるコレステロール等を有機溶媒、例えば、ジ
エチルエーテル、イソプロピルエーテル、クロロホルム
あるいはこれらの２種以上の混合溶媒に溶解した後、例
えば各種緩衝液やこれらに各種の塩類やグルコース等の
等張剤等を適宜添加した液に前述のグリチルリチン類お
よび薬物を溶解した薬物−グリチルリチン類の水性液を
加え、常法によりＷ１０型乳化液を調製する。グリチル
リチン類を添加することにより、乳化が容易であり、均
一で細かな乳化液が得られる。このＷ／○型乳化液から
リポソームの調製は、プロシーディング・オン・ザ・ナ
ショナル・アカデミ−・オン・ザ・ユナイテノド・ステ
ーク・オン・アメリカ（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ
、ｓｃｉ、ＩＪｓＡ）　７５．４１９４　（１９７Ｂ）
あるいは特開昭５５−４１８４１５に記載の方法に準し
て実施できる。乳化液調製において使用される有機溶媒
は、封入液量に対し、一般に０．１〜１０倍量程度が用
いられる。リン脂質の量は封入液１ｍｌに対し約５〜２
（１１）μｍｏ１程度が用いられ一般に有機溶媒に予め
熔解しておく方が好ましい。薬物−グリチルリチン類の
水性液の濃度は、製造する薬物により適宜選択しえるが
、グリチルリチン類の濃度としては、例えば５〜５０ｍ
Ｍ程度が挙げられる。Ｗ１０型乳化液を得るための乳化方法は、従来の方法、
例えば撹拌法、圧力法、超音波法が採用できるが、特に
超音波法が好ましい。超音波法の場合には、約２０ＫＨ
ｚのプローブ型ホモジナイザーで数秒間〜２０分間の、
１回乃至複数回の処理を行えば均一な乳化液が得られる
。かくして得られるＷ１０型乳化液から溶媒を常法により
除去する。これは例えばロータリーエバポレータを用い
、減圧下にて溶媒を留去させればよい。このときの温度
は、薬物により適宜の温度を選択しえるが、安定性にお
いて好ましくない場合には、４０〜５０°Ｃ以下とする
ことが好ましい。さらに留去を続は溶媒を除去するとＲＥＶリポソーム製
剤が得られる。本リポソーム製剤はユニラメラ−または
オリゴラメラ−（通常、約１０個以下の脂質二重膜より
なる）の形態を有し、その内部に薬物が封入されている
。一方、上記と同様の方法により調製したリン脂質および
必要に応して添加されるコレステロール等の有機溶媒を
減圧下で有機溶媒を留去してリン脂質のドライフィルム
を形成させ、次いで薬物グリチルリチン類の水性液を加
えて、適当な温度下にて分散せしめればマルチラメラ−
ベシクルのリポソーム製剤が得られ、この分散の時にプ
ローブ型ホモジナイザーで超音波処理するか、または先
に得たマルチラメラ−ベシクルのリポソーム製剤をプロ
ーブ型ホモジナイザーで超音波処理することによりスモ
ールユニラメラーヘシクルのリポソーム製剤が得られる
。また、上述のリン脂質からドライフィルムを形成する方
法において、予めグリチルリチン類を添加しておいてド
ライフィルムを形成してもよくこのようにして得たグリ
チルリチン類を含むドライフィルムに、薬物の水性液を
分散、超音波処理することによりリポソーム製剤が得ら
れる。本発明のリポソームに含有せしめる薬物は、水溶性薬物
、脂溶性薬物のいずれでもよいが、特に好ましくは、水
溶性薬物である。薬物の種類としては、生理活性ペプタ
イド或いは生理活性蛋白質、酵素、アミノグルコシド系
抗生物質、マクロライド系抗生物質、ヘータラクタム系
抗生物質等の抗生！７Ｉ賃、抗原虫薬、合成抗菌剤、制
癌剤、抗血液凝固剤、抗ヒスタミン剤、抗アレルギー剤
、免疫抑制剤、免疫賦活側、循環器用薬、代謝賦活剤等
が挙げられるが、より具体的には、各種のスーパーオキ
サイド・ディスムターゼ１１Ｆ　（ＳＯＤ）、およびそ
のＰＥＧ等の誘導体、エルカトニン等のカルシトニン類
、パラチロイドホルモン（ＰＴＨ）類、カルシトニン遺
伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）類、インシュリン、ウロ
キナーゼ、プロウロキナーゼ、ティッシュ〜ブラスミノ
ーゲンアクチベーター（ＴＰＡ）、トロンボモジュリン
、インターフェロン（α、β、Ｔ）、インターロイキン
Ｉ、ソマトスタチン、ヘパリン、ヘモグロビン、ムラミ
ルトリベブチドーフオスファチジルエタノールアミン（
ＭＴＰ−ＰＥ）　、Ｐ−１８ペプチド、成長ホルモン等
が例示される。特に上記の製造法において、ＲＥＶリポソーム製剤の調
製方法を採ると、極めて効率的に薬物が調製され、従来
法に比較して高い温度での処理もられる薬物、例えば生
理活性ペプチド等において特に好ましい方法である。このようにして得られるリポソーム製剤は、そのまま使
用してもよいが、必要に応じて好ましい粒子サイズに調
製することができる。この調製法としては、ミリボアー
フィルターやニュークリボアーフィルターあるいはゲル
濾過、またはエクストルーダー（商品名、口演リポソー
ム社製）等の加圧式濾過装置等が利用できる。また、リ
ポソーム製剤の製造に際しては、例えば遠心分離、ゲル
濾過あるいは透析によって封入されない遊離の薬物を分
離除去するのが好ましい。また、本発明のリポソーム製剤は懸濁液として保存・提
供してもよいが、特に凍結乾燥したリポソーム製剤が好
ましく、凍結乾燥する場合には、凍結乾燥添加剤として
、グルコース、シュークロース、ラクトース、トレハロ
ース、マンニトール、ソルビトール、デキストラン（例
えば、Ｔ−４０、Ｔ−７０等）、サイクロデキストリン
等を添加してもよい。

【実施例】

次いで本発明の実施例、比較例及び試験例を挙げて本発
明を具体的に説明するが、本発明は何らこれにより限定
されるものではない。実施例１ジバルミトイルフォスファチジルコリン（ＤＰＰＣ２日
本油脂■社製０．２５ｇ、コレステロール（シグマ社製
）０．１ｇ、およびグリチルリチン酸ジカリウム（丸善
化成■社製）　　０．４３６ｇを５０ｍＰのメタノール
に溶解し、アスピレータ−減圧下、溶媒を留去した。さ
らに油回転真空ポンプにて、真空度Ｑ　、　　ｌ　Ｔｏ
ｒｒ以下で数時間、溶媒を除去してドライフィルムを得
た。次いで、このドライフィルムに約５０°Ｃに加温し
た５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７，２）９０ｍｆｆｉを
加え、攪拌振盪することにより、リポソーム懸濁液を得
た。このリポソーム懸濁液に、Ｓｅｔ”’　−ｈ　−Ｓ　Ｏ
Ｄ（スーパーオキサイド・ディスムターゼ；特開昭６２
−１３０６８４号記載の方法による；活性約３２（１１
）Ｕ／ｒｎｇ）５（１１）ｍｇを含有する５０ｍＭリン
酸緩衝液（ｐＨ７，０）１０ｍｌ！を添加し、氷冷下で
超音波ホモジナイザー（日本精機製作新製、モデルＬＪ
−３（１１））にて約２０ＫＨｚで２０秒処理し、１０
秒休みのサイクルで５〜１０回処理し、５ｅｔＩ＋’−
ｈ−５ＯＤ入りのリポソームを作成した。次いで、この液を、約１０万ｇＧ以上で遠心分離して上
清を捨て、得られたペレットを冷やした５％グルコース
含有リン酸緩衝液（ｐＨ７，０）１（１１）ｍｌに再懸
濁し、ポリカーボぶ一ト膜（ミリボアー製、サイズ０．
４５μｍ）を通して除菌した後、予めオートクレーブ滅
菌した５ｍｊ２のノ＼イアルびんに、１ｍｒづつ分注し
凍結乾燥し、リポソーム製剤を得た。本実施例において、リポソーム製剤は効率良く形成され
、またこのリポソーム製剤は４“Ｃにて１箇月保存後も
安定であった。実施例２〜５および比較例１．２ジバルミトイルフォスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、
コレステロール、およびグリチルリチン酸ジカリウムの
混合比率（重量）を５：１：４〜８：１：１と変化させ
、実施例１と同様にして各リポソーム製剤を得た（実施
例２〜５）。なお、ＤＰＰＣの量は、２（１１）ｍｇと
一定にした。また、比較例として、グリチルリチン類を含有しない例
（比較例１）、並びにＤＰＰＣ、コレステロールおよび
フォスファチジン酸（日本油脂■社製）を７：１：２の
比率により調製した例（比較例２）を行った。なお、Ｄ
ＰＰＣの量は、２（１１）ｍｇと一定にした。各実施例および比較例におけるリポソームの平均粒径、
およびリポソーム中への薬物（Ｓｅｒｌ　Ｉ　１−ｈ−
３ＯＤ）の封入率について測定した結果は、第１表に示
す通りであった。なお、リポソームの粒径の測定は、レ
ーザー散乱光性測定器（大板電子■社製）によって測定
した。また、リポソーム中への薬物の封入率については、ＳＯ
ＤキットＷＡＫＯ（商品名、和光純薬■社製）によって
測定した。その結果は、ＤＰＰＣおよびコレステロールのみを用い
た比較例１ではリポソームが形成されず、薬物の封入率
も０．１％以下であった。フォスファチジン酸を用いた
比較例２の封入率は、２゜４％程度であり、これに対し
実施例２〜５であるグリチルリチン類を用いた場合には
、リポソームが効率的に形成されるとともに、その封入
率は、比較例２０２．０〜３．２倍と顕著に増加した。また、実施例２〜５のリポソーム製剤の平均粒径は、１
（１１）〜２５０ｎｍ程度であり、微小且つ均一な粒度
分布を示していた。第１表ＤＰＰＣ；ジパルミトイルフォスファチジルコリンｃｒ
ｙ；グリチルリチン酸ジカリウムＣｈｏ；コレステロールＰｈｏ　；フォスファチジン酸実施例６．７および比較例３ＤＰＰＣ量を各々２（１１）ｍｇ用い、ＤＰＰＣ、コレ
ステロールおよびグリチルレチン酸ジカリウムを第２表
の比率（重量比）にて添加し、５０ｍＰのメタノールに
熔解し、以下実施例１と同様にアスピレータ−および油
回転真空ポンプにて、ドライフィルムを得た。このドライフィルムに、予め５０°Ｃに加温したリン酸
緩衝液（ｐＨ７，０）４．５ｍｆを加え、１分間ポルテ
ックスミキサーをかけた。これに０．５ｍｆのリン酸緩
衝液（ＰＨ７，０）にＳｅｒ”−ｈ−ＳＯＤ５ｍｇを溶
かした溶液を添加し、さらに１分間ポルテックスミキサ
ーをかけ、次いで、これをプローブ型超音波ホモジナイ
ザー（日本精機社製、モデル１Ｕｓ−３（１１））にて
２０秒間の超音波処理を行い、１０秒間休むサイクルで
、３分間処理を行って、リポソーム製剤を得た（実施例
６．７）。また、グリチルレチン酸ジカリウムを添加する代わりに
、フォスファチジルグリセロールを添加し、以下同様に
行って比較例３のリポソーム製剤を得た。これらのリポソーム製剤を１０万Ｇで４℃、３０分間の
超遠心分離を行い、得られた沈殿を集め、１％トリトン
ｘ−１（１１）を添加することによってそのリポソーム
製剤を破壊し、リポソーム内のＳｅｒ口’−ｈ　　Ｓ　
ＯＤの量をＳＯＤキットＷＡＫＯ（商品名、和光純薬■
社製）にて定量した。結果は、第２表に示される通り、比較例３であるフォス
ファチジルグリセロールを用いた場合における封入率は
２．１％であり、これに対し本発明の実施例６．７は、
３．１〜１１．５倍と効率良く薬物が封入された。第２表ＤＰＰＣ；ジパルミトイルフオスファチジルコリンＧｌ
ｙ；グリチルリチン酸ジカリウムＣｈｏ　；コレステロールＥｇｇＰＣ；卯黄レシチンＰＧ；　フォスファチジルグリセロール実施例８．９お
よび比較例４ＤＰＰＣ１３５ｍｇ、およびジステアロイルフォスファ
チジルコリン（ＤＳＰＣ）１５０ｍｇをクロロホルム：
イソプロピルエーテル１：１の混合溶媒３５ｍｌに溶解
し、この溶液に、グリチルリチン酸ジカリウム１５ｍｇ
を含むグルコースにて等張にした１ｍＭリン酸緩衝液（
ｐＨ７，０）４．５ｍｆを加え、さらに同しグルコース
等張緩衝液０．５ｍｊ！にＳｅｒ”’　−ｈ−３ＯＤを
０．５ｍｇ加えて６０°Ｃに加温して試薬を溶かしたも
のを加えて、プローブ型超音波ホモジナイザーで３０秒
処理することを１０回繰り返して乳化した。この乳化液
を６０℃で減圧上溶媒留去して、リポソーム製剤を得た
（実施例８）。また、実施例８において、グリチルリチン酸ジカリウム
１５ｍｇを用いる代わりに、グリチルリチン酸モノアン
モニウム（丸善化成社製）１５ｇを用いて、以下実施例
日と同様にして、リポソーム製剤を得た（実施例９）。また、実施例８において、グリチルリチン酸ジカリウム
１５ｍｇを用いる代わりに、ステアロイルメチルタウリ
ンナトリウムカル社製）１５ｍｇを用いて、以下実施例８と同様にし
て、リポソーム製剤を得た（比較例４）。超遠心にてリポソーム製剤を集め、リポソーム中へのＳ
ｅｒ”’ーｈーＳＯＤの封入率をＮＢＴ法により測定し
た．また、上清液中のＳｅｔ”’　−　ｈ　−　ＳＯＤ
の量も測定し、リポソーム内外のＳｅｒ”’−ｈＳＯＤ
の量と使用した元のＳｅｔ”’−ｈ　−　Ｓ　Ｏ　Ｄの
量と比率を計算することにより、回収率を求めた。その結果は、第３表に示す通り、従来の封入化方法（比
較例４、特開昭６４−１４号公報）に比較して、封入率
に優れているばかりでなく、薬物の回収率、液状が赤変
しないという点につき、優れていた。第３表ＤＰＰＣ　、ジバルミトイルフォスファチジルコリンｏ
ｓｐｃ　；ジステアロイルフォスファチジルコリンＧｌ
ｙ−Ｘ２；　グリチルリチン酸ジカリウムＧｌｙ−Ａ；
グリチルリチン酸モノアンモニウムＳＭＴ　、ステアロ
イルメチルタウリンナトリウム実施例１０および比較例
５ＤＰＰＣ１８０ｍｇ、およびＤＳＰＣ２０ｍｇをクロロ
ホルム２０ｍＡに熔解し、減圧下、溶媒を留去して乾固
せしめ、ドライフィルムを形成させた。これにグリチル
リチン酸モノアンモニウム１　５ｍｇを含むグルコース
にて等張にした１ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）４．
５ｍｆを加え、さらに同しグルコース等張緩衝液０．５
ｍＩ！にＳｅｒｌｏ−ｈ−ＳＯＤを０．５ｍｇ加えて６
０°Ｃに加温して試薬を溶かしたものを加えて、ポルテ
ックスミキサーにかけた後、プローブ型超音波ホモジナ
イザーで、２０秒間処理を１０回行い、リポソーム製剤
を作成した（実施例１０）。また、実施例１０において、グリチルリチン酸モノアン
モニウム１　５ｍｇの代わりにＳＭＴＩ５ｍｇを用い、
他は実施例１０と同様にしてリポソーム製剤を得た（比
較例５）。これらのリポソーム製剤を１０万Ｇの超遠心し、得られ
た沈殿と上清について、そのＳｅｒ口’−ｈ−ＳＯＤを
測定し、封入率と回収率を求めた。その結果は、第４表に示す通り、本発明の方が封入率に
優れ、液状においても変化がなかった。第４表ｏｐｐｃ　；ジバルミトイルフォスファチジルコリＤＳ
ＰＣ；ジステアロイルフォスファチジルコリＧｌｙ−＾
；グリチルリチン酸モノアンモニウムＳＭＴ　、ステア
ロイルメチルタウリンナトリウム実施例Ｉｆ−１４、比
較例６ンン実施例ＩＯにおいて、ＤＰＰＣｌ　８０ｍｇ５およびＤ
ＳＰＣ２０ｍｇの代わりに、第５表に示されたリン脂質
およびコレステロールを用いてドライフィルムを形成し
、グリチルリチン酸モノアンモニウム１５ｍｇとＳｅｔ
”東−ｈ−ＳＯＤ５ｍｇを含むグルコースにて等張にし
た１ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）溶液５ｍｌを加え
、以下実施例１０と同様に行って、実施例１１〜１４の
リポソーム製剤を得た。また、実施例１０において、ＤＰＰＣ１８０ｍｇ、およ
びＤＳＰＣ２０ｍｇを用いてドライフィルムを形成し、
５Ｍ７１５ｍｇとＳｅｔ”’　−ｈ　−ＳＯＤ５ｍｇを
含むグルコースにて等張にした１ｍＭリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ７，０）溶液５ｍｌを加え、以下実施例１０と同様に
行って、比較例６のリポソーム製剤を得た。その結果は、第５表に示す通りであり、比較例６に比べ
て、明らかに本発明のリポソーム製剤における薬物の封
入率は高かった。第５表ｏｐｐｃ　；ジパルミトイルフォスファチジルコリン［
ｌ５ＰＣ；ジステアロイルフォスファチジルコリンＣｈ
ｏ　；コレステロールＥｇｇＰＣ，卵黄レシチンｃｒｙ；グリチルリチン酸モノアンモニウムＳＭＴ、ス
テアロイルメチルタウリンナトリウム実施例１５および
比較例７．８ジパルミトイルフォスファチジルコリン（ＤＦＰＣ）２
（１１）ｍｇ、およびコレステロール２０ｒ１ｇをクロ
ロホルム２０ｍｊ２に溶解し、減圧下、溶媒を留去して
乾固せしめ、ドライフィルムを形成させた。これにグリ
チルリチン酸モノアンモニウム２０ｍｇとエルカトニン
（東洋醸造社製）２（１１）ｔｔｇを、５ｍｌの１ｍＭ
酢酸緩衝液（ｐＨ４゜５）に溶解したものを加え、ポル
テックスミキサーにかけた後、氷水中、プローブ型超音
波ホモジナイザーＵＳ−３０・０にて、２０秒間超音波
処理、１０秒間休憩のサイクルを５回繰り返し、更に１
０万Ｇで超遠心し、エルカトニン人のリポソーム製剤を
得た（実施例１５）。また、実施例１５において、グリチルリチン酸モノアン
モニウム２０ｍｇを用いない以外は実施例１５と同様に
して行った（比較例７）。また、ジバルミトイルフォスファチジルコリン（ＤＰＰ
Ｃ）２（１１）ｍｇ、コレステロール２０ｍｇにさらに
、ジバルミトイルフォスファチジルグリセロール（ＤＰ
ＰＣ）２０ｍｇを加えて、ドラィフィルムを調製し、エ
ルカトニン（東洋醸造製）２（１１）μｇを、５ｍｌの
１ｍＭ酢酸緩衝液ｐＨ４，５）に溶解したものを加え、
ポルテラスミキサーにかけた後、氷水中、プローブ型超
波ホモジナイザーＵＳ−３（１１）にて、２０秒間音波
処理、１０秒間休憩のサイクルを５回繰りし、更に１０
万Ｇで超遠心し、エルカトニン人リポソーム製剤を得た
（比較例８）。これらのリポソーム中のエルカトニンの量はリポソーム
を０．１％トリトンＸ−１（１１）にて理後、フォーリ
ン−ローリ−（Ｆｏｌｉｎ−Ｌｗｒ　ｙ）法によって、
比色定置して求めた。結果は、第６表の通りであり、比較例に比べ本発明では
、封入率が向上しており、粒径およ長期安定性において
も満足のいく優れたリボツム製剤が得られた。第６表ＤＰＰＣ；ジバルミトイルフォスファチジルコリンＤＰ
ＰＧ　ｉジバルミトイルフォスファチジルグリセロ−ルＣｈｏ　；コレステロールｃｒｙ、グリチルリチン酸モノアンモニウム実施例１６実施例１５において、エルカトニンの代わりにパラチロ
イドホルモン（ｈ−ＰＴＨ１−３４、東洋醸造社製）６
（１１）μｇを用いて、以下実施例１５と同様に行って
、リポソーム製剤を得た。超遠心後上清を除去して得られた沈殿物を４℃に冷やし
た５％グルコース入５ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５，０）２
０ｍｆに分散し、予め滅菌した５ｍｌのバイアルに１ｍ
ｌずつ分注し、凍結乾燥して、リポソーム製剤を得た。

【発明の効果】

本発明によれば、安全性の高い原料により、簡単にリポ
ソームを形成し得るリポソーム形成助剤を提供し、安全
性の高いリポソーム、および種々の薬剤を実用的で安全
なリポソーム製剤を提供できる。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）グリチルリチン類を有効成分とするリポソーム形
成助剤。
（２）グリチルリチン類が、１８α−グリチルリチン酸
、１８β−グリチルリチン酸、１８α−グリチルレチン
酸、１８β−グリチルレチン酸、３β−グルクロニル−
１８β−グリチルレチン酸、カルベノキソロン、デオキ
ソグリチルレチン酸、３α−デヒドロキシグリチルレチ
ン酸、ヘデラゲニン、１１−オキソヘデラゲニン、オレ
アノール酸、１１−オキソオレアノール酸、およびそれ
らの非毒性塩からなる群より選ばれた１以上の物質であ
る請求項（１）記載のリポソーム形成助剤。
（３）リポソーム形成助剤としてグリチルリチン類を含
有することを特徴とするリポソーム。
（４）グリチルリチン類が、１８α−グリチルリチン酸
、１８β−グリチルリチン酸、１８α−グリチルレチン
酸、１８β−グリチルレチン酸、３β−グルクロニル−
１８β−グリチルレチン酸、カルベノキソロン、デオキ
ソグリチルレチン酸、３α−デヒドロキシグリチルレチ
ン酸、ヘデラゲニン、１１−オキソヘデラゲニン、オレ
アノール酸、１１−オキソオレアノール酸、およびそれ
らの非毒性塩からなる群より選ばれた１以上の物質であ
る請求項（３）記載のリポソーム。
（５）リポソームが、薬物を封入したリポソーム製剤で
ある請求項（３）記載のリポソーム。
（６）薬物が、水溶性生理活性ペプチドである請求項（
５）記載のリポソーム。
（７）水溶性生理活性ペプチドが、スーパーオキサイド
・ディスムターゼ類、カルシトニン類、パラチロイドホ
ルモン類、カルシトニン遺伝子関連ペプチド類からなる
群より選ばれたペプチドである請求項（６）記載のリポ
ソーム。
（８）リポソームが、少なくとも、リポソーム形成助剤
としてのグリチルリチン類、リン脂質およびコレステロ
ールからなる請求項（３）記載のリポソーム。
（９）リン脂質１重量部に対し、コレステロールが０．
１〜１重量部、グリチルリチン類が０．１〜１重量部で
ある請求項（８）記載のリポソーム。
（１０）リポソームの製造において、リポソームの形成
時にグリチルリチン類を存在せしめることを特徴とする
リポソームの製造方法。
（１１）リポソームが、薬物を封入したリポソーム製剤
である請求項（１０）記載の製造方法。