JPH04506814A - 作用物質含有水性リポソーム懸濁液の製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 作用物質含有水性リポソーム懸濁液の製法本発明は、炭化水素最高３個を有する 低級アルコール及び水相中のリポソーム形成物質（混合物）（以後、脂質又は脂 質混合物とも称する）の溶液から、作用物質含有水性リポソーム懸濁液濁液（こ こで、作用物質又は作用物質混合物は、脂質溶液及び／又は水相中に溶かされて いるか又は懸濁されている）を製造する方法に関し、この方法は、水相を均質化 下にアルコール溶液中に導入し、かつ低級アルコールを真空蒸留により除去する ことよりなる。

リポソームは、水相を包埋する、閉鎖した球形又は楕円形の脂質小胞で公知であ る。存在する脂質二重層の数に応じて、それぞれ大きな及び小さな単ラメラリポ ソーム（ＬＵＶ及び５ＵＶ）と多重ラメラリポソーム（ＭＬＶ）とに分類される 。

第１のリポソームを、水相中に脂質フィルムを分散することにより製造した。こ うして得られたＭＬＶ−分散液は、適当な均質化法、例えば超音波処理又は高圧 均質化の使用により、ＳＵＶに変えることができる。

しかしながら、ＭＬＶ及びＳＵＶは、僅かな包理容量（水相を包埋する容量［１ ／脂脂質子ル）コ）シか有さないので、これは、親水性物質を効果的に包埋する には適当でない。

これに対してＬＵＶは、明らかに増加した包理容量及び従って高まった包埋能（ 使用薬物の％）を有する。

今日まで最も慣用なＬ　Ｕ　Ｖの製法は、「溶剤蒸留ｒｓｏｌｖｅｎｔ　ｅｖａ ｐｏｒａｔｉｏｎ）　Ｊ法の上位概念下にまとめることができる。

最も公知で、かつ得られる包埋に関する最良の方法は、パパハドジョボウロス（ Ｐａｐａｂａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ）　（米国特許第４２３５８７１号明細書）に よるＲＥＶ　（逆相蒸留；　ｒｅｖｅｒｓｅ　ｐｈａｓｅ　ｅｖａｐｏｒａｔｉ ｏｎ）法である。こ・の際、先ず、脂質もしくは脂質混合物を、水に混ざらない か又は僅かに混ざる溶剤（一般的にはジエチルエーテル又はクロロホルム）中に 溶かす。次いで、この混合物を、薬剤含有水相に添加後に、超音波処理によりＷ ｌｏ−エマルジョンに変える。引き続き、これから、溶剤を回転蒸発器で除去し 、その際、先ず、ゲルが生じるので、これを真空の増加又は水の添加により、リ ポソーム懸濁液に変える。

これに対するものとして、場合によりジエチルエーテル中に溶かした脂質を温水 溶液（５０〜６０℃）中に、減圧下で注入する、デアマー（Ｄｅａｍｅｒ　）及 びバングハム（Ｂａｎｇｈａｍ　）により導入された「エーテル注入（ｅｔｈｅ ｒ　１ｎｊｅｃｔｉｏｎ）　Ｊ法［Ｂｉｏｃｈｉｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ 、４４３（１９７６）６２９−６３４１がある。１．２μｍフィルターでの濾過 により得られたリポソームは、不均一であり、ｌ特表千４−５０６８１４　（２ ） ５０〜２５０ｎｍの大きさを有する。

この方法で使用される溶剤は、毒物学的及び安全技術的理由から批判的に評価さ れている。

しかしながら、エーテル注入法に先立つ方法で、溶剤としてエタノールを使用す る場合には、著しく希釈された５ＵＶ−分散液が得られ、これは、限外濾過によ り十分濃縮される［Ｂｉｏｃｂｉｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ、２９８（＋９ ７３）　＋０１５−１０１９　］。こうして得られたリポソームの平均粒度は、 ５０　ｎ　ｍより小さいことが明らかであり、ＭＬＶ成分は、６％を示す。

この方法の１態様は、欧州特許（ＥＰ−Ａ）第０２５３６１９号明細書中に記載 されている。この方法で、例えば全組織の合計１０％になるエタノール性脂質− 及び薬剤−溶液を１０００〜３００００００　ｈ　Ｐ　ａの圧力下で、ホモゲナ イザーにより撹拌する水相中に注入する。非常に経費がかかるこの方法により、 小さな単ラメラリポソームが生じる。この方法は、親水性作用物質を含有するリ ポソーム懸濁液を製造するには、この方法は、適当ではない。

水性溶剤を用いるリポソームの製法も重要であり、これには、「単相」の製造が 含まれる（国際公開（ＷＯ）第８５１００７５１号明細書）。一般的に、この単 相混合物を脂質含有溶剤（例えばエタノール）５ｍ１及び水性成分０．２ｍｌか ら製造する。引き続き、混合物を同時に超音波処理する際に、不活性ガス導入に より、溶剤を除去し、その際、フィルムが生じる。

引き続き、これを水相を用いて再懸濁する。この際に、いわゆるＭＰＶ　（単相 小胞）が生じ、これは、多くの脂質二重層を有する。典型的ＭＬＶに対して、こ れは、緩衝液中での高められた安定性並びに高められた包埋を有する。

最後に、場合により作用物質を含有するエタノール性脂質溶液を軽く撹拌下に水 相中に導入する、欧州特許（ＥＰ−Ａ）第０３４９４２９号明細書中に記載の方 法も記載しておく。固有の試験が示すように、この公知の方法では、本発明方法 を用いるより実質的には僅かな包埋能しか得られない。更に、本発明方法は、エ タノール相に対して１０％より高い脂質濃度で本発明方法を用いても、高い包埋 能、又は更に、包埋能の更なる増加が得られるという利点を有する。

これらの公知の方法に対して、本発明方法は、大規模でも技術的に簡単な方法で 実施できるという利点を有する。著しく毒性又は非常に易引火性の溶剤を使用す ることは、避ける。得られた作用物質包埋及びリポソーム粒度に関する本発明方 法の非常に良好な再生の可能性、並びにリポソーム中５０％より多い程度のリポ ソーム中の非常に高い作用物質包埋及び本発明方法により得られた並みはずれて 高いリポソーム懸濁液中の作用物質濃度（８００ｍｇ／ｍ＋まで）も優れている 。更に、本発明方法により、非常に僅かな残分溶剤含有率を有し、かつ良好な貯 蔵可能性を有するリポソーム懸濁液を製造することが達成されることは、重要で ある。本発明方法は、無菌条件下でも問題な〈実施できる。

本発明方法を実施する際、公知の方法と同じ脂質形成物質を使用することができ る。

適当なリボンーム形成物質は、慣例の両親媒性脂質又は脂質混合物、例えばリン 脂質、スフィンゴミエリン又はエーテルリン脂質である。これらの脂質は、直鎖 又は分枝鎖、飽和又は不飽和、同種又は異種のアシル側鎖を有していてよい。適 当なリン脂質は、例えば次のものである：ホスファチジルコリン、ホスファチジ ルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノジット、ホス ファチジルグリセロール又はホスファチジン酸。適当なエーテルリン脂質は、例 えば次のものである：プラスマローゲン（Ｄｒ、０ｔｔｏ−Ａｌｂｅｒｔ　Ｎｅ ｕｍＮＩｌｅｒ：Ｒ５ｍｐｐｓ　Ｃｈｅｍｉｅ−Ｌｅｘｉｋｏｎ；Ｆｒａｎｃｋ ’５ｃｈｅ　Ｖｅｒｌａｇｓｈａｎｄｌｕｎｇ、シュツツツガルト（ＤＥ）２６ ６５．３１５９．３９２０及び４０４５）。

リポソームを製造するために、これらの脂質の混合物、及び殊にこれらの脂質と コレステロールコレステロールヘミスフシネ−１−、α−トコフェロール、α〜 トコフェロールヘミスクシネート及び／又は担体、例えばステアリルアミン、ス テアリン酸、ジエチルホスフェート、油酸、パルミチン酸、胆汁酸、例えばコ− ル酸、グリコール酸との混合物も使用することができる。適当な混合物は、コレ ステリン約６０モル％まで及び担体２０モル％までを含有していてよい。リン脂 質又は混合物の溶剤としては、イソプロパツール又は殊にエタノールを使用する のが有利である。

基本的に、本発明方法は、低級アルコール以外の水溶性低沸点溶剤を用いて実施 してもよく、例えばテトラヒドロフランが好適である。しかしこの方法を実施す るには、実質的に本発明方法より経費がかかる。

本発明方法を実施するためには、溶剤１００ｍ１当たりリポソーム形成物質（混 合物）０．２ｇ〜３０ｇを含有するアルコール性溶液を使用するのが有利である 。

この溶液は、所望に応じて、成分の加温により製造することができる。

本発明方法は、前記したように、水相を混合（たとえば強い撹拌）下に、アルコ ール溶液中に入れ、かつ低級アルコールを、例えば真空蒸留又は窒素の導入によ り除去する方法で実施する。

場合により、結合により得られた分散液は、溶剤が完全又は部分的に分離する前 に、数時間（約１０〜１８０分）、約２０〜９０℃の温度で混合されうる。

本発明方法に適当な温度は、リポソーム形成物質の可溶性並びにその相転移温度 （ｔｃ）、作用物質又は作用物質混合物の耐熱性及び分離すべきアルコールの蒸 気圧に依り、これは、２０℃〜・９０℃、殊に４０℃？Ｓ表千４−５０６８１４ 　（３） 〜７０℃が有利である。一般的に、１０ｈＰａ　〜１．　Ｏ０ｈＰａの真空で操 作することは、十分である。

本発明方法で使用される水相は、所望により、緩衝物質及び／又は等張化添加物 を含有していてよい、適当な添加物は、例えば次のものである：無機又は有機塩 又は緩衝物質、例えば塩化ナトリウム、ＴＲｌ５−緩衝液、リン酸塩−緩衝液、 クエン酸塩−緩衝液、グリシン−緩衝液、クエン酸塩−リン酸塩−緩衝液、マレ イン酸塩−ａ街液等、モノ−又はジサッヵリド、例えばグルコース、ラクトース 、サッカロース又はトレハロース、糖アルコール、例えばマンニット、ソルビッ ト、キシリット又はグリセリン又は水溶性ポリマー、例えばデキストラン又はポ リエチレングリコール。

脂質、更にいくつかの作用物質は、酸化敏感性であるので、水相に酸化防止剤、 例えばアスコルビン酸ナトリウム、ｌ・コフェロール又は亜硫酸水素ナトリウム を加えることができる。

本発明方法により製造された水性リポソーム懸濁液は、特に、水溶性作用物質を 被包するために使用される。

このような水溶性作用物質は、例えば次のものである：診断薬、例えばレントゲ ン造影剤ヨードロラン、ヨープロミド、ヨーヘキソール、ヨーシミド、メトリザ ミド、アミド酢酸の塩、ヨートロキシン酸、ヨープミドール、５−ヒドロキシア セトアミド−２，４，６−トリヨード−イソ２タル酸−（２，３−ジヒドロキシ −Ｎ−メチルプロピル）−（２−ヒドロキシエチル）−ジアミド（＝ＺＫ１１９ ０９５）及び３−カルバモイル−５−ＵＮ−（２−ヒドロキシエチル）−アセト アミド］−２．４．６−ドリヨードー安患苦酸−〇（ＩＲ８，２ＳＲ）−２，３ −ジヒドロキシ−１−ヒドロキシメチルプロピル］−アミド（＝ＺＫ１３９１２ ９）又はＮＭＲ−造影剤、例えばガドリニウム−ＤＴＰＡ、ガドリニウム−ＤＯ ＴＡ及びｔｏ−［１−ヒドロキシメチル−２，３−ジヒドロキシプロピル］−１ ，４，７−１リス−（カルボキシメチル）−１，４゜７．１０−テトラアザシク ロデカンのガドリニウム錯体。

適当な治療作用物質は、特に次のものである：抗生物質、例えばゲンタマイシン 又はカナマイシン、サイトスタテイカ（Ｃｙｔｏｓｔａｔｔｃａ）　、例えばド キンルビシンーヒドリクロリド又はシクロホスファミド及びピルスタテイ力（Ｖ ｉｒｕｓｔａｔｉｃａ）　、例えばビダラビン（Ｖｉｄａｒａｂｉｎ）又は作用 物質、例えばミドキサントロン−ヒドロクロリド。

これらの水溶性作用物質を、本発明方法の実施の前に、水相中に溶かす。

更に、水性リポソーム懸濁液は、水に難溶性の作用物質の被包のために使用する こともできる。

このような作用物質は、例えば植物保護剤、例えば難溶性殺虫剤又は除草剤及び 殊に難溶性薬物学的作用物質である。

水中に難溶性又は不溶性の次の作用物質群の薬物学的作用物質は、例えば本発明 による水性懸濁液を製造するために好適である。

ゲスターゲン作用ステロイドホルモン、例えば１３−エチル−１７β−ヒドロキ シ−１８，１９−ジノル−１７α−ブレグネー４−エンー２０イル−３−オン（ ＝レボノルゲストレル（Ｌｅｖｏｎｏｒｇｅｓｔｒｅｌ））、１３−エチル−１ ７β−ヒドロキシ−１８，１９〜ジノル−１７α−プレグナ−４，１５−ジエン −２０イン−３−オン（＝ゲストーデン（Ｇｅｓｔｏｄｅｎ））又は１３−エチ ル−１７β−ヒドロキシ−１１−メチレン−１８，１９−ジノル−１７α−ブレ グネー４−エンー２０イン（デソルゲストレル）。

エストロゲン作用ステロイドホルモン、例えば３−ヒトロキシー１，３．５−　 （１０）−エストラトリエン−１７−オンにオストロン（Ｏｓｔｒｏｎ）　）又 は１，９−ツルー１７α−プレグナ−１，３，５（１０）−トリエン−２０−イ ン−３，１７β−ジオール（エチニレーストラジオール（Ｅｔｈｉｎｙｌδ５ｔ ｒａｄｉｏｌ））。

アンドロゲン作用ステロイドホルモン、例えば１７β−ヒドロキシ−４−アンド ロステン−３−オン（＝テストステロン）及びそのエステル又は１７β−ヒドロ キシ−】α−メチル−５α−アンドロステン−３−オン（＝メステロロン（Ｍｅ ｓｔｅｒｏｌｏｎ））。

抗アンドロゲン作用ステロイドホルモン、例えば１７α〜アセトキシ−６−クロ ル−１β、２β−ジヒドロ−３Ｈ−シクロプロパ［ｌ、２コーブレグナー１゜４ ．６−ドリエンー３．２０−ジオンでサイボテロンアセテート（Ｃｙｐｏｔｅｒ ｏｎａｃｅｔａｔ））。

コルチコイド、例えば、１】β、１７α、２１−）。

リヒドロキシー４−プレグネン−３，２ｏ−ジオン（＝ヒドロコルチゾン（）Ｉ ｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎ））、１１β。

１７α、２１−トリヒドロキシ−１，４−プレグナジェン−３，２０〜ジオン（ ＝プレドニソロン（Ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎ））、１１β、１７α−２１−トリ ヒドロキシ−６α−メチル−１，４−プレグナトリエン−３，２０−シオン（＝ メチルプレドニソロン（Ｍｅｔｈｙｌｐｒｅｄｎｉｓ。

１ｏｎ）　）及び６α−フルオル−１１β、２１−ジヒドロキシ−１６α−メチ ル−１，４−プレグナジェン−３゜２０−ジオン（＝ジフルオコルトロン（Ｄｉ ｆｌｕｏｃｏｒｔｏｌｏｎ））及びそのエステル。

エルゴリン、例えば３−（９，１０−ジヒドロ−６−メチル−８α−エルゴリニ ル）−１，１−ジエチル尿素（＝エルゴリン）、３−（２−ブロム−９，］。

−］ジヒドロー６−メチルー８α−エルゴリニル−１゜１−ジエチル尿素（≧ブ ロムエルゴリン）又は３〜（６〜メチル−８α−エルゴリニル）−１，１−ジエ チル尿素（＝テルグリド（Ｔｅｒｇｕｒｉｄ））。

特表千４−５０６８１４　（４） 抗高血圧薬（Ａｎｔｉｈｙｐｅｒｔｏｎｉｋａ）　、例えば７α−アセチルチオ −１７α−ヒドロキシ−３−オキソ−４−プレグネン−２１−カルボン酸−γ− ラクトンにスピロノラクトン（Ｓｐｉｒｏｎｏ！ａｃｔｏｎ））又は７α−アセ チルチオ−１５β、１６β−メチレン−３−オキソ１７α−プレグナ−１，４− ジエン−２１，１７−カルポラ’７　ｈン（＝メス１：’Ｌ／／　ン（Ｍｅｓｐ ｉｒｅｎｏｎ））。

抗凝結薬、例えば５−［ヘキサヒドロ−５−ヒドロキシ−４−（３−ヒドロキシ −４−メチル−１−オクテン−６−イニル）−２（ＩＨ）−ペンタレニリデン） ］−ヘンタン酸（＝イロブロスト（Ｉ　Ｉｏｐｒｏｓｔ））。

精神薬、例えば４−（３−シクロペンチルオキシ−４−メトキシ−フェニル−２ −ピロリドン（＝ロリブラム（Ｒｏｔ　ｉｐｒａｍ）　）及び７−クロル−１， ３−ジヒドロ−１−メチル−５−フェニル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン− ２−オン（ミシアゼパム（Ｄｉａｚｅｐａｍ））。

カロチノイド、例えばα−カロチン及びβ−カロチン。

脂溶性ビタミン、例えばビタミンＡ−、ビタミンＤ−、ビタミンＥ−及びビタミ ンに一群のビタミン。

その他の群は、例えば欧州特許第２３４１７３号及び同第２３９６６７号明細書 中に記載されているβ−カルボリンである。β−カルボリンとしては、例えば６ −ペンゾイルオキシー４−メトキシ−メチル−βカルボリン−３−カルボン酸− イソプロビルエステル（＃ペカルニル（Ｂｅｃａｒｎｉｌ））及び５−（４−ク ロルフェノキシ）４〜メトキシメチル−β−カルボリン−３−カルボン酸−イソ プロビルエステル（＝Ｃｌ−ＰＨ０ＣｒＰ　）が挙げられる。

難溶性又は不溶性造影剤、例えばレントゲン造影剤ヨーシバミドエチルエステル 又はＮＭＲ−造影剤、例えば鉄−又はマンガンポルフィリンキレート又はマグネ タイトも重要である。

更に、適当な作用物質として、サリチル酸、レチノール酸及びアザレイン酸が挙 げられる。更に、アンチマイコチン（Ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｎｅ）　、例えばア ンホテリシンーＢ、イコナコール又はメコナコールが使用できる。

これらの作用物質を、本発明方法の実施前にアルコール溶液中に溶かすか又はア ルコール溶液及び／又は水相中で懸濁する。

本発明方法では、リポソーム形成物質（混合物）１β当たり、一般的に、作用物 質０．０５〜ｌｏｇ及び特に１〜３ｇを使用する。この方法の実施前に、双方の 溶液を滅菌濾過し、かつ引き続く全工程を無菌条件下に実施することにより、本 発明方法を用いて、簡単な方法で滅菌リポソーム懸濁液を製造することができる 。

リポソーム懸濁液中で得られる包埋は、作用物質及びリポソーム形成物質の種類 並びにその挙動に、互いに左右されることは明らかである。必要に応じて、被包 されていない作用物質を例えば限外濾過、透析、マイクロフィルター濾過は遠心 分離により分離することができる。

得られたリポソーム懸濁液は、直接貯蔵することができる。リポソーム懸濁液は 、凍結乾燥により、安定した貯蔵形に変えることができる。凍結乾燥前に、凍結 乾燥すべき物品に、必要な場合、更に例えば添加物、例えばマンニトール又はソ ルビトール及び／又は電解質及び粘度影響作用物質、例えば塩化ナトリウムを加 えることができる。

凍結乾燥物は、再蒸留した水又はリポソーム製造のために使用した水相と同じ添 加物を含有していてよい水相と再懸濁することができる。

その際、再懸濁媒体の量は、凍結乾燥物１β当たり０．５〜２０ｍ１．特に１〜 ６　ｍ　ｌであってよい、得られた懸濁液は、直接又は適当な孔の大きさのフィ ルターで濾過後に、使用することができる。

本発明方法を用いて製造されたリポソームは、例えばこれがＮＭＲ又はレントゲ ン診断法のための造影剤を含む際に、種々異なる診断法で使用することができる 。更に、例えば細網内皮系（例えば肝臓及び牌臓）の器官又は他の脈管内で入手 可能な組織における腫瘍診断法、更に関節腔撮影が挙げられる。このようなリポ ソーム懸濁液の脈管外適用（例えば皮下、筋向又は腹膜内で）は、場合により、 例えば非直接的及び直接的リンパ撮影のような診断目的又は治療目的（例えば寄 託製剤（Ｄｅｐｏｔｐｒ；　ｐａｒａｔｅ））のために使用することができる。

調合物を経口的に応用することもでき、その際、場合により調合物を胃液に抵抗 性のカプセル中にｅｌｌすることができる。

更に、本発明方法を用いて製造する作用物質含有リポソーム懸濁液は、適当な脂 質組成において、血液貯蔵剤（ｂｌｏｏｄ　ｐｏｏｌ　ａｇｅｎｔｓ＞又は目的 に応じた薬剤担体として使用することができる。

次の実施例で本発明を詳述する。この例中、次の略語を使用する： ＰＣ−リポイド（Ｌｉｐｏｉｄ）　Ｋ　Ｇ社のホファチジルコリンＳ　１００ ＣＨ＝メルク（Ｍｅｒｋ）　Ａ　Ｇ社の粉末化されたクロルエステロール（ＪＰ ） ＳＳ＝フルカ（Ｆｌｕｋａ）　Ａ　Ｇ社のステアリン酸ブリス（ｐｕｒｉｓｓ） ＤＰＰＧ−リポイドＫＧ社のジパルミトイルホスファチジルグリセロールＤＰＰ Ｇ Ｈ３ＰＣ＝ナツタ−マン（Ｎａｔ　ｔｅ　ｒｍａｎｎ）社の水素添加した大豆レ シチン（ホスホリボン９０Ｈ）ＤＣＰ−シグマ（Ｓ　ｉｇｍａ）社のジセチルフ ボスフエート（Ｄ　１ｃｅｔｙｌｐｈｂｏｓｐｈａ。

特表平４−５０６８１４　（５） 脂質混合物（ＰＣ／ＣＨ／５Ｓ−４：　５・１　モル二モル：モル）９．２５ｇ を７０℃でメタノール１００ｍＩ中に溶かし、かつ滅菌濾過する。次いで、この 水溶液を５５℃まで熱処理した反応容器中に移し、かつこれを撹拌下に（１分当 たり３００回転）、滅菌濾過した作用物質溶液（ヨープロミド２７．７５ｇ＋水 性２０ｍＭトリスーＨＣｌ−緩衝液、ｐＨ７，５を含有）と混合する。

引き続き、アルコールを５５℃で５０００Ｐａの真空中で留去して、かつ生じた リポソーム＠濁液をその特性に関して試験する。

次いで、リポソーム懸濁液を直接、２０ｇの小皿当て、５０ｍ１ガラス注入ビン に充填し、かつこれを凍結乾燥させた。得られた凍結乾燥物を約２００ｍｇ／ｍ １作用物質濃度が生じるようにして再懸濁し、かつ同様に試験した。

五主 試験の実施を例１に記載したのと同様にして行なうが、ヨーパミドを１８．５ｇ 使用する。

五ユ 試験の実施を例２に記載したのと同様にして行なうが、脂質混合物を１３．９ｇ 使用する。

五土 試験の実施を例２に記載したのと同様にして行なうが、脂質混合物を１８．５ｇ 使用する。

、例」− 試験の実施を例２に記載したのと同様にして行なうが、ヨープロミドの代わりに ヨードロランを使用する。

ｊ 試験の実施を例２に記載したのと同様にして行なうが、ヨープロミドの代わりに ヨープミドールを使用する。

！ＬＬ 試験の実施を例２に記載したのと同様にして行なうが、ヨープロミドの代わりに ヨーヘキサールを使用する。

一例」− 試験の実施を例２に記載したのと同様にして行なうが、ヨープロミドの代わりに 非イオン造影剤　５−ヒドロキシアセトアミド−２，４，６−トリヨー　ドーイ ソフタール酸−（２，３−ジヒドロキシ−Ｎ−メチルプロピル）−（２−ヒドロ キシエチル）−ジアミドを使用する。

五ユ 試験の実施を例２に記載したのと同様にして行なうが、脂質混合物ＰＣ／ＣＨ／ Ｓ　Ｓ−４＋　４　：　２　モルモル：モルを使用する。

例１０ 試験の実施を例２に記載したのと同様にして行なうが、脂質混合物ＰＣ／ＣＨ／ ＰＧ−４＋　５　：　１　モル：モル：モルを使用する。

！■工り 試験の実施を例２に記載したのと同様にして行なうが、脂質混合物ＰＣ／ＣＨ／ ＳＳ　６　：　３　：　１　モル：モル：モルを使用する。

珈ｊ＋２ 試験の実施を例２に記載したのと同様にして行なうが、脂質混合物ＰＣ／ＣＨ／ ＤＣＰ　４　：　５　：　１を使試験の実施を例２に記載したのと同様にして行 なう・が、脂質混合物ＰＣ／ＣＨ１：　１を使用する。

例１４ 試験の実施を例２に記載したのと同様にして行なうが、脂質混合物ＰＣ／Ｈ５Ｐ Ｃ／ＣＨ／３３　２　：　２　：５：１を使用する。

例１５ 試験の実施を例２に記載したのと同様にして行なうが、バッチの大きさを１０倍 にした。

例１６ 試験の実施を例２に記載したのと同様にして、しがし１５０倍の大きさのパッチ で行なう。

次の表は、例１〜１６で得られた結果を示す。

特表千４−５０６８１４　（６） 例１７ 例２により製造されたリポソーム懸濁液の凍結乾燥前又は後の残留エタノール含 有率は、ガスクロマトグラフィーを用いて、８装填量で測定される。初めのリポ ソーム懸濁液中、エタノール含有率は、０．５９±０．０１０％（ｍ／Ｖ）と測 定される。

例１８ 例２により製造されたリポソーム懸濁液及び凍結乾燥物を２５〜４０℃で４　貯 蔵する。安定性の評価のために、外見、大きさ、包埋及びｐＨ−値（再懸濁後の 凍結乾燥物の場合）を、それぞれ測定する。

数か月貯蔵後に、再懸濁した凍結乾燥物は、測定された大きさに関して、著しい 差異を示さなかった。

こうして製造されたリポソーム懸濁液は、薬物学的試験において次の特性を示す ： 試験Ａ 例２により製造された、再懸濁された凍結乾燥物は、マウス及びラッテへの１回 適用後に、その急性の毒性に関して試験する： それぞれＬＤ５０は＋　１　２．８ｇ／ＫＧＷマウス（ｋｇ＞（総ヨウ素）もし くはＩ　３．Ｏｇ／ＫＧＷラッテ（ｋｇ）と測定される。

試験Ｂ 例２により製造された、再懸濁された凍結乾燥物のために、亜急性毒性をラッチ （ｎ＝６）に関して測定する。

それぞれ３目間隔に、Ｉ　１ｋｇ／ＫＧＷ（ｋｇ）（総ヨウ素）を６回添加後に 、組織−病理学的もしくは臨床学的パラメーターに変化がないことが確認される 。

試験Ｃ 例２により得られた、再懸濁された凍結乾燥物をラッテへｉ、ｖｂ、添加後に、 その臓器化合物に間して試験する。

？　１００ｍｇ／ＫＧＷ（ｋｇ）（Ｊｔ！ヨウ素）添加の１時間後に、肝臓中に 、適用量の２４％に相当する１０．５４／含水量（ｇ）が検出される。

試験り 例２により得られた、再！Ｉ！！濁された凍結乾燥物を、肝臓腫瘍を有するイエ ウサギに総ヨウ素１００ｍｇ／ＫＧＷ（ｋｇ）の用量でｉ、■適用する。得られ る肝臓／ａ瘍密度差は、１時間後、３５バウンスフイード（Ｈｏｕｎｓｆｉｅｄ ）ユニット（ＨＵ）である。

試験Ｅ 例２により得られた、再懸濁された凍結乾燥物を非直接的ＣＴ−リンパ撮影の特 性に関して、イヌで試験する。

総ヨウ素２００ｍｇ　（リポソーム懸濁液３ｍｌ中）の指間添加の３時間後に、 ＣＴで、最大２００ＨＵの密度上昇が膝窩及び腸骨窩リンパ結節中で測定される 。

要　約　書 炭化水素最高３個を有する低級アルコール及び水相中のリポソーム形成物質（混 合物）の溶液から、作用物質含有水性リポソーム懸濁液濁液を製造する方法にお いて、ここで、作用物質又は作用混合物は、脂質溶液及び／又は水相中に溶かさ れているか又は懸濁されていて、水相を混合下にアルコール溶液中に導入し、低 級アルコールを真空蒸留により除去し、かつ場合によりリポソーム懸濁液を凍結 乾燥させることを特徴とする、作用物質含有水性リポソーム懸濁液の製法。

国際調査報告 ｌｎｍｎ５１１ａＡｌ−＾１０１１＋１１１ａｎｌｉｏ、ｐｃゴ’ＩＤＥ９１１ ００２９４国際調査報告 ＤＥ　９１００２９４ ＳＡ　４６０６７ 匿１頁の続き ［相］Ｉｎｔ、　Ｃ１’　識別記号　庁内整理番号醗　明　名　ザクピ、アノド レアス　ドイツ連邦共和国アー　８ ｍ　明　者　シュレータ−、ハンスーヨアヒ　ドイツ連邦共和国ム　−セ　７５ り発　明　者　シュブレンガー、クラウディア　ドイツ連邦共和国トラーセ　２ １ 多発　明　者　ヴアフレチェク、コルネリア　ドイツ連邦共和国セ　器アー １０００　ベルリン　１０　ボンヘラファー　ウーフ１０００　ベルリン　４９ 　クルザウアー　シュトラ１０００　ベルリン　４４　ズユルツハイナー　シュ １０００　ベルリン　ｎ　ヴイツクラムシュトラー

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. １．炭化水素最高３個を有する低級アルコール及び水相中のリポソーム形成物質 （混合物）の溶液から、作用物質含有水性リポソーム懸濁液を製造する方法にお いて、ここで、作用物質又は作用混合物は、脂質溶液及び／又は水相中に溶かさ れているか又は懸濁されていて、水相を混合下にアルコール溶液中に導入し、低 級アルコールを真空蒸留により除去し、かつ必要に応じてリポソーム懸濁液と凍 結乾燥させることを特徴とする、作用物質含有水性リポソーム懸濁液の製法。
2. ２．作用物質が水に良好に可溶性であり、かつ水相中に存在する、請求項１記載 の作用物質含有水性リポソーム懸濁液の製法。
3. ３．作用物質が造影剤である、請求項１及び２記載の作用物質含有水性リポソー ム懸濁液の製法。
4. ４．請求項１〜３記載の方法により製造されたリポソーム懸濁液の種瘍診断学で の使用。
5. ５．請求項１〜３記載の方法により製造されたリポソーム懸濁液の非直接的リン パ撮影での使用。