PT97468B

PT97468B - Processo para a preparacao de suspensoes aquosas de lipossomas contendo em especial derivados iodados ou complexos de gadolinio

Info

Publication number: PT97468B
Application number: PT97468A
Authority: PT
Inventors: Georg Roessling; Andreas Schase; Hans-Joachim Schroter; Claudia Sprenger; Cornelia Wawretschek
Original assignee: Schering Ag
Priority date: 1990-04-24
Filing date: 1991-04-24
Publication date: 1999-12-31
Also published as: HU9200235D0; HUT62457A; NO303481B1; HU215960B; FI103178B1; DE59108097D1; ZA913091B; DK0478727T3; ES2093701T3; AU7593391A; DE4013580A1; NO915012D0; JPH04506814A; EP0478727B1; WO1991016039A1; PT97468A; AU651969B2; FI916120A0; ATE141503T1; NO915012L

Description

A invenção refere-se a um processo para a preparação de suspensões lipossomais aquosas contendo substâncias activas, obtidas a partir de uma solução de uma substância ou de várias substâncias misturadas que formam lipossomas (seguidamente também designadas como lípidos ou misturas de lípidos) num álcool inferior com um máximo

de três átomos de carbono e uma fase aquosa em que a substância activa ou a mistura das substâncias activas está dissolvida ou suspensa na solução de lípidos e/ou na fase aquosa, caracterizado por se introduzir a fase aquosa na solução alcoólica sob homogeneização e se eliminar o álcool inferior por meio de destilação em vácuo.

Como se sabe, os lipossomas são vesículas de lípidos esféricas ou elípticas fechadas que encerram uma fase aquosa. De acordo com o número de camadas duplas de lípidos existentes, subdividem-se em lipossomas unilamelares grandes e pequenos (LUV e SUV) e lipossomas multilamelares (MLV).

Os primeiros lipossomas foram prepara dos por dispersão de películas de lípidos em fases aquosas As dispersões de MLV assim obtidas podem ser transformadas em SUV por utilização de processos de homogeneização apropriados como, por exemplo, irradiação com ultrassons ou homogeneização sob alta pressão. Os MLV e os SUV, no entanto, possuem apenas um pequeno volume encerrado (volume de fase aquosa encerrado em litros por mole de lipido) de modo que não são apropriados para encerrar efectivamente substâncias hidrofílicas.

Os LUV, pelo contrário, possuem um volume enoerrado nitidamente maior e, por consequência, uma elevada capacidade de inclusão (percentagem do fármaco encerrado).

Os métodos mais acessíveis até ao presente empregados para a preparação de LUV podem ser englobados sob a designação de métodos de evaporação de dissolvente.

melhor método mais largamente conhecido e relativamente à quantidade encerrada obtida é o méto2 do de REV (evaporarão em fase inversa) de Papahadjopoulos (Patènte de Invenção Norte-Americana Número 4 255 871).

De aoordo oom este processo, o lípido ou, designadamente a mistura de lípidos, é primeiramente dissolvido num dissolvente imisoível com água ou apenas Iligeiramente miscível com água (em geral, éter dietílico ou clorofórmio).

Depois da adição à fase aquosa que contém o fármaoo a pistura é transformada numa emulsão âe água em óleo por meio de ultra-sons. A partir desta, elimina-se em seguida o dissolvente num evaporador de rotação, eia que, em primeiro lugar, se forma um gel, que se transforma numa suspensão de lipossomas por aumento do vácuo ou por adição de água.

Ao contrário deste método, no método de injecção de éter introduzido por Deamer e Bangham, de acordo com o qual o lípido, igualmente dissolvido em éter dietílico, é injectado numa solução aquosa quente (50 a 60°C) a uma pressão inferior à atmosférica. Os lipossomas obtidos por filtração através de um filtro com 1,2 micrómetros são heterogéneos e possuem tamanhos compreendidos entre 150 e 250 nanómetros.

Os dissolventes utilizados nestes métodos devem ser avaliados criticamente por razões de ordem toxicológica e de técnica de segurança.

Se num método de injecção de éter, se utiliza o etanol empregado no processo previamente indicado como dissolvente, então obtem-se como resultado dispersantes de SUV fortemente diluídos, que são concentradas por ultrafiltração (Biochim. Biophys. Acta, 298 (1975), 1015 - 1019). 0 tamanho médio dos liposomas assim obtidos é nitidamente menor do que 50 nanómeros e a proporção de MLV é igual a 6%.

Na patente dâ Invenção Europeia Ep-A 0 255 619, descreve-se um aperfeiçoamento deste processo.

De acordo com este processo, injecta-se, por exemplo, uma solução etanólioa de lípido e de fármaco, que constitui no total 10$ da formulação global, sob uma pressão compreendida entre 1.000 e 5.000.000 hpa, numa solução aquosa, qúe é agitada por meio de um. homogeneizador. De acordo com este processo, que é muito dispendioso, obtem-se lipossomas unilamelares de pequenas dimensões. Para a preparação de suspensões lipossomais que contém substâncias activas hidrofílicas, este processo não é apropriado.

Também se deve mencionar um método para a preparação de lipossomas com dissolventes solúveis em água, que permite a preparação de uma monofase (patente de Invenção da Organização Mundial da Propriedade Industrial W0 85/00751). A mistura monofásica é preparada, em geral, a partir de 5 ml do dissolvente que contém lípidos (por exemplo, etanol) e 0,2 ml de componente aquoso, 0 dissolvente é em seguida eliminado por introdução de gás inerte com um simultâneo tratamento com ultrassons da mistura, obtendo-se uma película. Esta é em seguida ressuspensa com uma fase aquosa. Desta maneira obíem-se as assim chamadas MPV (vesículas monofásicas), que possuem várias camadas duplas de lípidos. Ao contrário das MDV clássicas, estas possuem uma elevada estabilidade em tampões, assim co mo uma elevada quantidade de fármaco encerrado.

Por fim, pode mencionar-se o processo descrito na Patente de Invenção Europeia EP-A 0 549 429, de acordo oom o qual uma solução de lípidos etanólioa que eventualmente contém a substância activa é introduzida numa fase aquosa sob ligeira agitação. Como os ensaios específicos mostram, com este processo obtem-se essencialmente menores capacidades de inclusão do que as que se obtem por meio dos processos de aoordo com a presente invenção. Além disso, o processo de acordo com a presente invenção tem a vantagem de que com a sua utilização também se obtem elevadas capacidades de inolusão com uma concentração de lípidos

- 4 «tKKORlWI

maior do que 10% relatívamente à fase etanólica, na realidade, em muito maior aumento da capacidade de inclusão.

Em comparação com estes processos previamente conhecidos, o processo de acordo com a presente invenção tem a vantagem de também se poder realizar tecnicamente de maneira mais simples em grande escala industrial. Evita-se a utilização de dissolventes fortemen te tóxicos ou muito facilmente inflamáveis.

3S de realçar também a muito boa reprodutividade do processo de acordo com a presente invenção relativamente às inclusões de substância activa obtidas e aos tamanhos dos lipossomas, assim como as muito ele vadas taxas de inclusão de substância activa nos lipossomas iguais a até mais de 50% nos lipossomas e as elevadas concentrações de substância activa obtidas por meio do processo de acordo com a presente invenção nas suspensões lipossomais (até 800 mg/ml). Além disso, é de realçar que, com o auxílio do processo de acordo com a presente invenção, consegue-se preparar suspensões de lipossomas que possuem apenas uma muito pequena teor de dissolvente residual e boa capacidade de armazenamento. 0 processo de acordo oom a presente invenção também pode realizar-se sem problemas em condições asséptidas.

Para a realização do processo de acordo com a presente invenção, podem utilizar-se as mesmas substâncias que foram lipossomas que nos processos previamente conhecidos.

As substâncias que foram lipossomas apropriadas são geralmente lípidos ou misturas de lípidos anfifáticas como, por exemplo, fosfolipidos, esfingomielinas ou éter-fosfolípidos. Estes lípidos podem possuir cadeias laterais de acilo lineares ou ramificadas, saturadas ou não saturadas, do mesmo tipo ou diferentes. Os fos- 5 -

folípidos apropriados são, por exemplo, as £osfotidilcolinas, as £osfatidil-etanolaminas, as fosfatidil-serinas, os fosfatidilinósitos, os fosfatidilgliceróis, ou os ácidos £osfatídicos. Os éter-fosfolípidos apropriados são, por exemplo, os plasmalogéneos (doutor Otto-Albert Neumuller: Rompps Ohemis-Dexikon; Pranck’ sche Verlagshondlung, Estugarda (DE) 2665, 5159, 3920 e 40 45),

Para a preparação dos lipossomas, pode também utilizar-se misturas destes lípidos e, especial mente, também misturas destes lípidos com colesterol, hemi-succinato de colesterol, alfa-tocoferol, hemi-succipato de alfa-tocoferol e/ou portadores de carga, por exemplo, estearilamina, ácido esteárico, fosfato de dietilo, ácido oleioo, ácido palmítico, ácido biliar, oomo, por exemplo, ácido eólico, ácido glicocólico. As misturas apropriadas podem conter até oeroa de 60$ em moles de colesteripa e até 20$ em moles de agentes portadores de carga. Oomo dissolventes para os fosfolípidos ou suas misturas, utiliza-se, de preferência isopropanol ou, especialmente, etanol.

Pundamentalmente, o processo de aoordo com a presente invenção deve também poder ser realizado com outros dissolventes de baixo ponto de ebulição, solúveis em água, como, por exemplo, álcoois inferiores. E apropriado, por exemplo, tetra-hidrofurano. No entanto, a realização do processo é essencialmente dispendioso do que o processo de acordo com a presente invenção.

Para a realização do processo de acordo com a presente invenção, utilizam-se, de preferência, soluçóes alcoólicas que contém 0,2 a 30 gramas de substância ou de mistura de substância que forma lipossomas por 10o ml de dissolvente. Oaso isso seja necessário, essas soluçóes podem preparar-se por aquecimento dos componentes.

processo de acordo oom a presente invenção realiza-se como já se mencionou de tal maneira que a fase aquosa é introduzida na solução alcoólica sob mistura (por exemplo, por agitação intensa) e do álcool inferior é eliminado, por exemplo, por destilação em vácuo ou por introdução de uma corrente de azoto.

Eventualmente, a dispersão obtida depois de algum tempo após a junção (oerca de dez a cento e oitenta minutos) é aquecida a uma temperatura de cerca de 20 a 90°0 para misturar, antes que o dissolvente seja completa ou parcialmente separado.

As temperaturas apropriadas para o processo de acordo com a presente invenção dependem da solução solubilidade das substâncias que formam lipossomas, assim oomo das suas temperaturas de transição de fase (tc), da estabilidade térmica da substância activa ou da mistura de substâncias aotivas e da pressão de vapor do álcool a separar, variando de preferência entre 20 e 90°C e especialmente entre 40 e 70°0. Em geral, é suficiente trabalhar-se sob um vácuo compreendido entre 10 e 100 hpa.

A fase aquosa utilizada no processo de acordo com a presente invenção pode, caso assim se pretenda, conter substâncias tampão e/ou aditivos de isotonização. Os aditivos apropriados são, por exemplo, sais ou substâncias tampão inorgânicas ou orgânicas, como cloreto de sódio, tampão de Tris, tampão ou fosfato, tampão de citrato, tampão de glicina, tampão de citrato-fosfato, tampão de maleato , etc, monosacáridos ou disacáridos, oomo glucose, lactose, sacarose ou tetra-halose, álcoois de açúcar como manite, sorbite, xilita ou glicerina ou polímeros solúveis em água, como dextrano ou polietilenoglicol.

Como os lípidos e também algumas substâncias activas são sensíveis à oxidação, a fase aquosa

pode também ser misturada oom agentes anti-oxidantes como ascorbato de sódio, toooferol ou hidrógeno-sulfito de sódio

As suspensões aquosas de lipossomas preparadas pelo processo de acordo com a presente invenção servem, de preferência, para a encapsulagem de substâncias activas solúveis em água,

Essas substâncias activas solúveis em água são, por exemplo, agentes auxiliares de diagnóstico como, por exemplo, agentes de contraste de raios X Iotrolano, Iopromid, Iohexol, Isosimida, Metrizamlda, sais do ácido amido-acético, ácido iotroxínico, Iopamidol, (2,5-di-hidroxi-N-metilpropil)-(2-hidroxietil)-diamida do ácido 5-hidroxi-acetamido-2,4,6-tri-iodo-isoftálico (=ZK 1199095) e /(lRS,2SR)-2,5-di-hidroxi-l-hidroximetilpropil_7~amida do ácido 5-carbamoil-5-/^-K-(2-hidroxi-etil)-acetamido_7-2,4,6-tri-iodo-benzóico (=ZK 159129) ou agentes de contraste de ressonância magnética nuclear como, por exemplo, o sal de gadolínio de DTPA, o sal de DOTA de gadolínio e o oomplexo de gadolínio do 10-(l-hidroxi-metil-2,5-di-hidroxipropil)-1,4,7-tris-/”(carboximetil)-1,4,7,10-tetra-aza-ciolodeoano_7·

As substâncias activas terapêuticas apropriadas são, entre outros, alguns antibióticos como gentamicina ou canamicina, agentes citostáticos, como clori drato de desoxo-rubicina ou ciclofosfamida ou agentes estáticos dos vírus como Vidarabina ou substâncias activas como cioridrato de Mitoxantrona.

Estas substâncias activas aquosas são dissolvidas na fase aquosa antes da realização do processo de acordo com a presente invenção.

Além disso, as suspensões aquosas de lipossomas podem ser utilizadas para a encapsulagem de substâncias activas dificilmente solúveis em água.

- '8 - .

Essas substâncias activas são, por exemplo, agentes de protecção de plantas, tais como agentes insecticidas ou herbicidas dificilmente solúveis e, especialmente, substâncias activas farmacêuticas dificilmente solúveis.

As substâncias activas farmacêuticas insolúveis em água ou dificilmente solúveis em água dos seguintes grupos de substâncias activas são apropriados, por exemplo, para a preparação de suspensães aquosas de acordo com o processo da presente invenção.

Utilizam-se, por exemplo, hormonas esteróides que actuam gestagenicamente como, por exemplo, 13-etil-17beta-hidroxi-18,19-dinor-17alfa,pregn-4-en-20~il-3-ona (=levonorgestrel), a 13-etil-17beta-hidroxi-18,19-dinor-17alfa-pregna-4,15-dien-20-in-3-ona (=Gestoden) ou o 13-etil-17beta-hidróxi-ll-metileno-18.19-dinor-17alfa-pregn-4-en-20-ino (=Desorgestrel), hormonas esteróides que actuam estrogenioamente como 3-hidroxi-1,3,5-(10)-estratrien-7-ona (=0stron) ou l,9-nor-17alfa-pregn-1,3,5(10)trien-20-in-3_}17beta-diol (=Etinilostradiol),

Também se podem empregar hormonas estereóides que actuam androgenicamente oomo, por exemplo, 17beta-hidroxi-4-androstero-3-ona (=Testosterona) e os seus ésteres, ou 17beta-hidróxi-lalfa-metil-5alfa-androsten -3-ona (=Mesterolona).

Interessam também hormonas esteróides que actuam anti-androgenica mente como, por exemplo, 17alfa-aoetóxi-6-cloro-lbeta, 2beta-di-hidro-3H-oiclopropona 1,2 pregna-l,4-6-trieno-4,20-diona (=acetato de cipoterona)

Também podem empregar-se conticóides, como, por exemplo, Ibeta, I7alfa, 21-tri-hidroxi-4-pregneno-3,20-diona (=hidrocortisona), Ilheta, 17alfa, 21-tri- 9 -hidroxi-l,4-pregnadien-3,20-diona (=prednisolona), llbeta, 17alfa,21-tri-hidroxi-6al^a-metil-1,4-pregnatrieno-3,20-diona (=metilprednisri)lona) e 6alfa-flúor-llbeta, 21-di-hidroxi-16alfa-metil-l,4-pregnadien-3,20-diona (=difluor-oortolona) e os seus ésteres.

Também se podem inserir ergolinas como, por exemplo, 3-(9,10-di-hidro-6-metil-8alfa-ergolinil)-l,l-dietil-ureia (=ergolina), 5-(2-bromo-9,10-di-hidro-6-metil-8alfa-ergolinil)-l,l-dietil-ureia (=bromergo lina) ou 3-(6-metil-8alfa-ergolinil)-l,l-dietil-ureia (=Tergurid).

Interessam também anti-hipertónieos como, por exemplo, gama-lactona do ácido 7alfa-acetiltio-17alfa-h.idroxi-3-oxo-4-pregneno-21-carbox£lioo (=espirolactona) ou 7alfa-acetiltio-15beta, 16beta-metileno-3-oxo-17alfa-pregna-l,4-dieno-21,17-carbolactona (= Mespirenona).

Também se podem empregar agentes anticoagulantes como, por exemplo, ácido 5-Zb.exa-b.idro-5-h.idroxi-4-(3-bidroxi-4-metil-l-octen“6-inil)-2(lH)-pentalenilideno)^7-pentenóico (= Ilourost).

Também podem utilizar-se psicofármicos como, por exemplo, 4-(3-ciclopentiloxi-4-metoxifenil)-2-pirrolidona (= Rolipram) e 7-oloro-l,3-di-hidro-l-metil-5-fenil-2H-l,4-benzodiazepin-2-ona (= Diazepam).

Também podem utilizar-se oarotinóides como, por exemplo, alfa-oaroteno e beta-caroteno.

Também interessam vitaminas solúveis em gorduras como, por exemplo, as vitaminas do grupo formado pela vitamina A, vitamina D, vitamina E e vitamina K.

Um outro grupo que interessa é constituído pelas beta-carbolinas como se descrevem, por exemplo, nos Pedidos de Patente de Invenção Europeias Números 234 173 e 239 667. Gomo beta-carbolinas, podem mencionar-se, por exemplo, 6-benzoiloxi-4“metoximetil-beta-carbolina-3-carboxilato de isopropilo (= Becarnil) e 5-(4-clorofenoxi)-4-metoximetil-beta-carbolino-carboxilato de isopropilo (= Cl-PHOCIP).

Também podem mencionar-se agentes de contraste dificilmente solúveis ou insolúveis, como 0 agente de contraste de raios X de éster de Iodipamida ou um agente de contraste de ressonância magnética nuclear como os quelatos de ferroporfirina ou de manganesporfirina ou também as magnetites.

Como substâncias activas apropriadas para serem inseridas nos lipossomas, podem mencionar-se ainda 0 ácido salicílico, o ácido retinélico e o ácido azelai co. Além disso, podem usar-se também antimicotinas como Anfotericina-B, Iconacol ou Meoonazol.

Estas substâncias activas para a realização do processo de acordo com a presente invenção, são dissolvidas na solução alcoólica ou suspensão na sua própria fase e/ou numa fase aquosa.

No processo de acordo com a presente invenção, por grama de substância ou de mistura de substâncias que formam lipossomas, empregam-se, em gerai, entre 0,05 e 10 gramas e, de preferência, entre 1 e 3 gramas de substância activa. Por meio do processo de acordo com a presente invenção, podem preparar-se de maneira simples suspensões lipossomas estéreis, em que ambas as soluções são filtradas para esterilização antes da realização do processo e todas as fases do processo subsequentes são realizadas em condições assépticas.

As inclusões que se obtém nas suspensões de lipossomas são naturalmente dependentes do tipo de substância activa e da substância ou da mistura de substâncias que formam lipossomas, assim como das suas proporções em relação umas às outras. Caso se pretenda, a subs tância activa não encapsulada pode ser eleminada por meio da ultrafiltração, diâlise, miorofiltração ou centrifugação.

A suspensão de lipossomas assim obtida pode ser guardada directamente. Como variante, a suspensão de lipossomas pode ser transformada numa forma estável durante a armazenagem por meio de liofilização. Antes da lio filização, podem adicionar-se ao material a liofilizar, se isso for necessário, entre outras, por exemplo, adições como manitol ou sorbitol e/ou electrólitos e agentes influenoiadores da viscosidade, como cloreto de sódio.

Os liofilizados podem ser ressuspensos oom água biodestilada ou fases aquosas que oontém os mesmos aditivos que podem ser oontidos para as fases aquosas utilizadas para a preparação dos lipossomas.

A quantidade do meio de ressuspensão pode, nesse oaso, variar entre 0,5 e 20, de preferência, no entanto, entre 1 e 6 ml por grama de liofilizado. As suspensões obtidas podem ser utilizadas directamente ou depois de filtração através de um filtro de tamanho de poros apropriado.

Os lipossomas preparados por meio do processo de acordo com a presente invenção podem ser utiliizados, por exemplo, nos diferentes processos de diagnóstico se contiver um agente de contraste para os ensaios de ressonância magnética nuclear ou de diagnóstico por raios X. Entre eles, contam-se, por exemplo, o diagnóstico de tumores em órgãos do sistema retículo-endrotelial (por exemplo,

fígado de e baço) ou outros tecidos acessíveis intrabasalmente, assim como arterografias. A aplicação extravasai destas suspensões de lipossomas (como, por exemplo, subcutânea, intramuscular ou intraperitoneal) pode igualmente ser utilizada para fins de diagnóstico, como para linfografia indireota e directa ou para finalidades terapêuticas (c orno, por exemplo, composições de depósito intramusculares). Evidentemente, ê também possível administrar as composições por via oral, caso em que as composições podem ser embaladas em cápsulas resistentes ao suco gástrico.

As suspensões de lipossomas com composições apropriadas de lípidos preparadas pelo processo de acordo com a presente invenção podem também ser utilizadas como agentes de recolha de sangue ou como suportes de medicamentos oom finalidades específicas.

Os seguintes exemplos de realização servem para um mais completo esclarecimento da invenção. Nestes exemplos, utilizam-se as seguintes abreviaturas:

PO = fosfatidilcolina S 100 da firma Lipoid KG;

OH = colesterol pulverizado (JP) da firma Merck AG;

SS = ácido esteárioo puríssimo da firma Eluka AG;

DPPG = dipalmitoil-fosfatidil-glicerol DPPG da firma Lipoid KG;

HSPO = lecitina de soja hidratada (Phospholipon 90H) da firma Nattermann AG;

DCP = fosfato de dicetilo da firma Sigma.

EXEMPLOS

Exemplo 1

- 1.3 -

Dissolvem-se 9,25 gramas de mistura de lípidos (PC/CH/SS -4:5:1 mole : mole : mole) a 70°0 em 100 ml de etanol e filtra-se para esterilizar. Em seguida transfere-se a solução para um vaso reaccional com a temperatura regulada de 55 C e mistura-se este, sob agitação (300 rotações por minuto), com uma solução de substância activa filtrada para esterilizar (que contém 27,75 gramas de Ipromid em 200 ml de tampão de Tris-HOl aquoso 20 mM; pH 7,5).

Em seguida, destila-se o álcool a 55°C em um vácuo de 5.000 pa e ensaia-se a suspensão lipossomal assim obtida relativamente às suas propriedades.

Em seguida, embala-se directamente ^a suspensão de lipossomas em porções de 20 gramas em frascos de vidro de infusão de 50 ml e liofilizam-se estes. Ressuspendem-se os liofilizados assim obtidos de modo que se obtenha uma concentração de substância activa igual a cerca de 200 mg/ml e submete-se igualmente a ensaio.

Exemplo 2

A realização deste Exemplo efectua-se como se descreveu no Exemplo 1, muito embora se utilizem

18,5 gramas de Iopropid.

Exemplo 5

A realização deste Exemplo faz-se de aco do com a.itnaneira de proceder que se descreveu no Exemplo 2, muito embora se utilizem 13,9 gramas de mistura de lípidos.

Exemplo 4

Procede-se à realização deste Exemplo procedendo como se descreveu no Exemplo 2, muito embora se

utilizem 18,5 gramas de mistura de lípidos.

Exemplo 5

A realização deste Exemplo faz-se de acordo com a maneira de proceder que se descreveu no Exemplo 2, muito embora se utilize Iotrolan em vez de Iopromid.

Exemplo 6

A realização deste Exemplo faz-se de aoordo com a maneira de prooeder que se descreveu no Exemplo 2, muito embora se utilize Iopamidol em vez de Iopromid

Exemplo 7

A realização deste Exemplo faz-se procedendo como se descreveu, no Exemplo 2, muito embora se utilize Iohexal em vez de Iopromid.

Exemplo 8

A realização deste Exemplo faz-se de acordo com a maneira de prooeder que se descreveu no Exemplo 2, muito embora se utilize o agente de contraste não iónico ((2,5-di-hidroxi-N-metilpropil)-(2-hidroxi-etil)-diamida do ácido 5-hidroxi-acetamido-2,4,6-tri-iodo-isoftálioo em vez de Iopromid.

Exemplo 9

A realização deste Exemplo faz-se oomo se descreveu no Exemplo 2, muito embora se empregue uma mis tura de lípidos de PC/CH/SS.- 4:4:2 mole 4 mole : mole.

- 1.5 λ,,^.

;!*'

Exemplo 10

A realização deste Exemplo faz-se de acordo com a maneira de proceder que se descreveu no Exemplo 2, muito embora se utilize uma mistura de lípidos constituída por PO/OH/PG -4:5:1 mole : mole í mole.

Exemplo 11

A realização deste Exemplo faz-se como se descreveu no Exemplo 2, muito embora se tenha empregado uma mistura de lípidos constituída por PG/CH/SS -6:3 : 1 mole : mole : mole.

Exemplo 12

A realização deste Exemplo efectua-se como se descreveu no Exemplo 2, muito embora empregando uma mistura de lípidos constituída por PC/CH/DCP -4:5;

Exemplo 13

A realização deste Exemplo faz-se como se descreveu no Exemplo 2, muito embora se empregue uma mis tura de lípidos constituída por PC/CH -1:1.

Exemplo 14

A realização deste Exemplo faz-se como se descreveu no Exemplo 2, muito embora se empregue uma mistura de lípidos constituída por PC/HSPC/CH/SS - 2 : 2 : 5 : 1,

Exemplo 15

A realização deste Exemplo faz-se como se descreveu no Exemplo 2, muito embora se tenha aumen- 16 -

tado dez vezes o tamanho da mistura reaccional.

Exemplo 16

A realização deste Exemplo faz-se de acordo oom a maneira de proceder que se descreveu no Exempl 2, muito embora se tenha empregado uma mistura reaeoional numa quantidade cento e c inquenta vezes maior.

A Tabela seguinte contém os resultados obtidos nos Exemplos 1 a 16.

ο ω

- 18 Exemplo 17

Determina-se o teor de etanol residua das suspensões de lipossomas preparadas de aoordo oom o Exemplo 2 antes e depois da liofilização provenientes de oito cargas por cromatografia em fase gasosa. Na suspensão inicial de lipossomas, determinam-se os t eores de etanol como sendo iguais a 0,59 + 0,010 Z (m/V).

Exemplo 18

Guardam-se as suspensões de lipossomas e os liofilizados preparados de acordo com os Exemplos 2 a 4, às temperaturas de 25 a 40°C. Para avaliação da estabilidade, determinam-se o aspecto, o tamanho, a inclúsãõ e o valor do pH = no caso dos produtos liofilizados depois da ressuspensão - ao fim dos intervalos de tempo referidos_o

Depois de armazenagem durante vários meses, os produtos liofilizados ressuspensos não apresentam diferenças significativas relativamente aos valores ensaiados.

As suspensões de lipossomas assim preparados apresentam as seguintes propriedades quando ensaiadas em ensaios farmacológicos.

i

Ensaio A

Ensaiam-se os produtos liofilizados preparados de acordo com o ^xemplo 2 e ressuspensos relativamente à sua toxicidade aguda depois da administração de uma dose a ratos e a ratazanas.

valor respectivo de DL^q é de 2,8 g de i/kg de peso corporal no caso dos ratos (iodo total) e de 5,0 g i/kg de peso corporal no caso das ratazanas.

- lq -

Determina-se a toxicidade sub-aguda em ratazanas (n = 6) para os produtos liofilizados ressuspensos preparados de aoordo com o Exemplo 2.

Depois de uma administração por seis vezes de respectivamente 1 g de l/kg de peso oorporal (iodo total) no intervalo de respectivamente três dias, não se verificaram quaisquer alterações dos parâmetros histopatológicos ou olínicos.

Ensaio 0

Ensaiam-se os produtos liofilizados obtidos de acordo com o Exemplo 2 depois de resssuspensos relativamente à sua ligação a órgãos depois da administração i.vb. em ratazanas.

Uma hora depois da administração de 100 mg de l/kg de peso corporal (iodo total), deteota-se a presença no fígado de 0,54 I/g de peso húmido que corresponde a 24$ da dose administrada.

Ensaio D

Administraram-se produtos liofilizados, preparados de aoordo com o Exemplo 2, ressuspensos, a coelhos que possuem tumores no fígado, oom uma dose de 100 mg de iodo total/kg de peso corporal, intravenosamente. A diferença de intensidade resultante fígado/tumor é depois de uma hora 35 unidades de Hounsfied (UH).

Ensaio E

Ensaiam-se os produtos liofilizados obtidos de acordo com o Exemplo 2 depois de ressuspensos

- 20 relativamente à sua possibilidade êe utilização em linfografia indirecta CT no oão.

Três horas depois da administração interdigital de 200 miligramas de iodo total (em 5 ml de suspensão de lipossomas), mede-se uma elevação da densidade máxima de CT igual a 200 UH nos nós de linfa poplietais e iliacais.

Claims

Processo para a preparação de suspensões aquosas de lipossomas contendo ingredientes activos, em especial derivados iodados como Iotrolan, Iopromida, iohexol, Iosimida, Metrizamida, sais de ácido amidoaoético, ácido iotroxínioo, Iopomidol, (2,3-di-hidroxi-N-metilpropil) ~(2-hidroxietil)-diamida do ácido 5-hidroxiacetamido-2,4,6-triiodo-isoftálico e /(1RS, 2SR)-2,3-di-hidroxi-l-hidroximetilpropil_J7-amida do ácido 3-carbamoil-5-/~’N-(2-hidroxietil)-acetamido__7-2,4,6-triiodo-benzoico, usados agentes de contraste de raios X; sal de gadolínio de DTPA, de DOTA ou o complexo de gadolinio de 10-/^-l-hidroximetil-2,3-di-hidroxipropil__7-l, 4>7-tris-/ (carboximetil) -1,4,7 > 10-tetrazadecano_/ usados como agentes de contraste de ressonância magnética nuclear, para o diagnóstico de tumores ou para linfografia indirecta, ou agentes antibióticos como gentamicina ou canamicina, a partir de uma solução de uma substância ou de uma mistura de substâncias que formam lipossomas num álcool inferior com o máximo de 3 átomos de carbono e de uma fase aquosa em que a substância activa ou a mistura de substâncias aetivas é dissolvida ou suspensa na solução de lípidos e/ou na fase aquosa, caracterizado por se introduzir a fase aquosa sob mistura na fase alcoólica, se

21 eliminar o álcool ififerior por meio de destilação em vácuo e eventualmente se liofilizar a suspensão de lipossomas.
- 2& Processo para a preparação de lipossomas aquosas que contém ingredientes activos, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de a substância activa ser muito solúvel em água e se encontrar na fase aquosa.

Processo para a preparação de suspensões aquosas de lipossomas que contém um ingrediente activo caracterizado páo facto de a substância activa ser um agen te de contraste.

A requerente reivindica a prioridade do pedido alemão apresentado em 24 de Abril de 1990, sob ο ΪΓ2 P 40 15 580.2.