KR101629521B1 - 난용성 약물 가용화 및 생체막 투과증진을 위한 알코올성 수상을 내상으로 하는 리포좀, 리포좀 조성물 및 리포좀의 제조방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 난용성 약물 가용화 및 생체막 투과증진을 위한 알코올성 수상을 내상으로 하는 리포좀, 리포좀 조성물 및 리포좀의 제조방법에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 인지질, 인산완충용액, 수난용성이며 알코올 가용성인 약물 및 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올을 포함하여 이루어지는 리포좀 조성물과, 알코올성 수용액을 내상(內相)으로 하는 이중층 리포좀으로서, 상기 내상에는 수난용성이며 알코올 가용성인 약물이 담지되고, 상기 이중층의 지질층이 인지질을 포함하여 이루어지는 리포좀 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명에 의하면, 리포좀의 내상(inner phase)을 알코올을 함유하는 알코올성 수상으로 하여, 물에 난용성인 약물을 리포좀 내상으로 봉입율을 증가시켜 가용화하고, 이 조성물을 경구투여하거나 혹은 피부 및 점막 등에 적용 하였을 때 단순한 약물 용액으로 투여한 경우에 비하여 생체내 흡수율을 증진시킬 수 있는 효과를 기대할 수 있다.

Description

난용성 약물 가용화 및 생체막 투과증진을 위한 알코올성 수상을 내상으로 하는 리포좀, 리포좀 조성물 및 리포좀의 제조방법{Liposomal compositions and liposome with alcoholic aqueous inner phase to solubilize and enhance the membrane permeability of water-insoluble agents, and preparing method for the same}
본 발명은 리포좀의 내상 (inner phase)을 알코올을 함유하는 알코올성 수상으로 한 리포좀에 관한 것으로, 물에 난용성이면서 알코올에 가용성인 약물을 리포좀 내상으로 봉입율을 증가시켜 가용화함으로써, 이를 경구투여하거나 혹은 피부 및 점막 등에 적용 하였을 때 단순한 약물 용액으로 투여한 경우에 비하여 생체내 흡수율을 증진시킬 수 있게 한 리포좀에 관한 것이다.
약물이 약효를 나타내기 위해서는, 약물이 투여부위로부터 혈중으로 흡수되고, 혈류를 따라서 작용을 나타내는 장기나 조직으로 이행하여야 한다. 따라서 적용부위 혹은 투여부위에서 흡수의 장벽으로 작용하는 피부나 위장관 막, 또는 기타 비강점막, 질점막 등의 다양한 생체점막을 투과하여 혈중으로 이행될 수 있어야 하며, 따라서 각종 생체막을 통한 투과가 약물의 작용발현을 위해 필수적이다.
그러나 약물들 중 생체막 투과 자체는 큰 어려움이 없으나, 물에 대한 용해도가 낮아 제제개발이 어렵고 제형으로부터의 용출률이 낮아 흡수가 불량해지는 경우가 빈번하다. 이러한 난용성 약물의 경우에는 가용화 전략이 필요한데, 가용화 방안으로 난용성 약물을 염이나 무정형 고체로 하거나 혹은 보조용매나 계면활성제를 첨가하는 전략들이 사용된다. 이러한 방법들 외에도 생체막투과를 높여 생체이용률을 증가시키기 위해 사용하는 방법으로서 다양한 약물전달체를 이용하여 난용성 약물을 가용화하고, 더불어 약물수송체의 독특한 특성들을 이용하여 생체막투과를 증진시키고자 하는 전략들이 사용된다. 이러한 목적으로 응용되는 약물수송체로서는 고분자 마이크로 및 나노입자, 지질유제, 마이크로유제, 미셀 및 리포좀 등을 들 수 있다.
다양한 약물수송체중 리포좀 (liposome)은 특히 리포좀막을 구성하는 인지질의 생체 적합성이 우수하여 인체에 적용할 수 있는 가장 적절한 수송체 중의 하나로 여겨지고 있다. 리포좀은 인지질 이중막으로 이루어진 구형의 입자로서, 내부에 인지질막으로 둘러싸인 수상이 존재하여 친수성 약물은 내부 수상에, 지용성 약물은 지질이중막 사이에 가용화할 수 있어 친수성 및 지용성 약물 모두를 수송할 수 있는 수송체로서 널리 응용되어 오고 있다. 그러나 리포좀 내부로의 약물의 봉입효율은 높지 않다는 것이 단점이다. 특히 친수성 약물의 경우에는 리포좀의 내부 수상으로만 가용화가 가능하지만 내부 수상의 용적은 크지 않아 봉입율이 낮아 10-20% 정도만이 봉입되는 경우가 많다. 반면 지용성 약물의 경우에는 지질 이중막에 가용화되므로 비교적 봉입효율은 양호한 편이지만 지질 이중막을 불안정화시켜 리포좀의 안정성이 불량해 질 수 있다.
본 발명의 발명자들은 상기한 문제점을 해결하기 위하여 연구노력한 결과, 리포좀 내부로 난용성 약물, 특히 물에는 난용성이지만 알코올에는 잘 녹는 약물의 봉입효율을 높일 수 있는 방안으로서, 리포좀의 내부에 알코올성 수상을 함유하도록 제조한 리포좀 조성물을 제공하는데 그 목적이 있다.
또한 본 발명은 물에 난용성인 약물, 특히 물에는 녹지 않지만 알코올에 대한 용해도가 높은 약물을 가용화할 수 있는 리포좀으로 된 약물수송체를 제조하고, 이를 통하여 생체막 투과도가 증진될 수 있는 조성물과 리포좀 및 리포좀의 제조방법을 제공하는데 그 목적이 있다.
상기한 목적을 달성하기 위한 일례로서 본 발명의 리포좀 조성물은, 인지질, 인산완충용액, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 및 수난용성이며 알코올 가용성인 약물을 포함하여 이루어지는 것을 특징으로 한다.
더욱 구체적으로 상기 리포좀 조성물은, 인지질 0.5 내지 50 wt%, 인산완충용액 10 내지 95 wt%, 및 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올 0.1 내지 10 wt%, 및 수난용성이며 알코올 가용성인 약물 0.5 내지 30 wt% 를 포함하여 이루어지는 것을 특징으로 한다.
상기한 목적을 달성하기 위한 다른 일례로서 본 발명의 리포좀은, 알코올성 수용액을 내상(內相)으로 하는 이중층 리포좀으로서, 상기 내상에는 수난용성이며 알코올 가용성인 약물이 담지되고, 상기 이중층의 지질층이 인지질을 포함하여 이루어지는 것을 특징으로 한다.
상기한 목적을 달성하기 위한 다른 일례로서 본 발명의 리포좀 제조방법은,
1) 인지질과 유기용매를 교반하여 혼합한 다음 유기용매를 제거하여 인지질 피막을 형성하는 단계, 2) 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올과 인산 완충용액이 혼합된 알코올성 완충액을 제조하고, 여기에 수난용성이며 알코올 가용성인 약물을 혼합하는 단계, 및, 3) 상기 1) 단계에서 제조된 인지질 피막과 상기 2) 단계에서 약물을 용해한 알코올성 완충액을 혼합하고 40 내지 70 ℃ 범위에서 교반하여 리포좀을 형성하는 단계를 포함하여 이루어지는 것을 특징으로 한다.
이하 본 발명을 구체적으로 설명한다.
본 발명의 리포좀은, 알코올성 수용액을 내상(內相)으로 하는 이중층 리포좀으로서, 상기 내상에는 수난용성이며 알코올 가용성인 약물이 담지되고, 상기 이중층의 지질층이 인지질을 포함하여 이루어지며, 이를 위한 리포좀 조성물은, 인지질, 인산완충용액, 수난용성이며 알코올 가용성인 약물, 및 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올을 포함하여 이루어진다.
본 발명의 리포좀은 물에 녹지 않는 수난용성이면서, 알코올에는 녹는 약물들을 가용화할 수 있는 방안으로서, 리포좀의 내상에 알코올성 수용액을 함유하도록 제조하고, 함유된 알코올이 리포좀 막을 통하여 유리되지 못하도록 알코올에 대한 투과도가 낮은 인지질을 이용하여 리포좀을 구성한다.
또한 약물을 리포좀에 봉입함으로서 리포좀의 인지질 이중막과 생체막의 지질막 성분과의 상호작용으로 인하여 봉입된 약물의 생체막 투과도가 증진되도록 하며, 이러한 생체막 투과 증진효과가 리포좀 내에 함유된 알코올에 의해 더 증가되도록 한다.
본 발명에서 상기 인지질은 중성지질, 음이온성 및 양이온성 지질 모두 사용가능하다. 예를 들어 중성지질로서는 L-a-포스파티딜콜린 (L-a-phosphatidylcholine, PC), 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린 (1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine, DOPC), 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린 (1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phophocholine, DSPC), 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린 (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phophocholine, DPPC), 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민 (1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine, DOPE), 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민 (1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phophoethanolamine, DSPE), 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민 (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phophoethanolamine, DPPE), 콜레스테롤 (cholesterol), 및 이소프로필 미리스테이트 (isopropyl myristate) 등 중에서 선택된 것을 사용할 수 있다.
상기 음이온성 지질로는 L-α-포스파티딕산(L-α-phosphatidic acid), L-α-포스파티딜-DL-글리세롤(L-α-phosphatidyl-DL-glycerol), 카디오리핀(cardiolipin), L-a-포스파티딜이노시톨(L-aphosphatidylinositol), L-α-포스파티딜세린(L-α-phosphatidylserine), 1,2-디라우로일-sn-글리세로-3-[포스포-rac-(1-글리세롤)] (1,2-dilauroyl-sn-glycero-3-[phospho-rac-(1-glycerol)], DLPG), 1,2-디라우로일-sn-글리세로-3-[포스포-L-세린] (1,2-dilauroyl-sn-glycero-3-[phospho-L-serine], DLPS), 1,2-디라우로일-sn-글리세로-3-포스페이트 (1,2-dilauroyl-sn-glycero-3-phosphate, DLPA), 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-[포스포-rac-(1-글리세롤)] 1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-[phospho-rac-(1-glycerol)], DMPG), 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-[포스포-L-세린] (1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-[phospho-L-serine], DMPS), 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스페이트 (1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphate, DMPA), 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-[포스포-rac-(1-글리세롤)] (1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-[phospho-rac-(1-glycerol)], DOPG), 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-[포스포-L-세린] (1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-[phospho-L-serine], DOPS), 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스페이트 (1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphate, DOPA), 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-[포스포-L-세린] (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-[phospho-L-serine], DPPS), 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스페이트 (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphate, DPPA), 1,2-디스테로일-sn-글리세로-3-[포스포-rac-(1-글리세롤)](1,2-distearoyl-sn-glycero-3-[phospho-rac-(1-glycerol)], DSPG), 1,2-디스테로일-sn-글리세로-3-[포스포-L-세린](1,2-distearoyl-sn-glycero-3-[phospho-L-serine], DSPS), 1,2-디스테로일-sn-글리세로-3-포스페이트(1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphate, DSPA),1,2-디스테로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[카복시(폴리에틸렌글리콜2000](1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[carboxy(polyethylene glycol)2000]), 1,2-디스테로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[말레이미드(폴리에틸렌글리콜)2000](1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine -N-[maleimide(polyethylene glycol)2000]), 1,2-디스테로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[PDP(폴리에틸렌글리콜)2000](1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[PDP(polyethylene glycol)2000]), 1-팔미토일-2-올레일-sn-글리세로-3-[포스포-rac-(1-글리세롤)] (1-palmitoyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-[phospho-rac-(1-glycerol)], POPG), 1-팔미토일-2-올레일-sn-글리세로-3-[포스포-L-세린](1-palmitoyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-[phospho-L-serine], POPS), 1-팔미토일-2-올레일-sn-글리세로-3-포스페이트(1-palmitoyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-phosphate, POPA) 및 올레산 (oleicacid) 등w중에서 선택된 것을 사용할 수 있다.
상기 양이온성 지질로서는 1,2-디올레오일-3-트리메틸암모늄-프로판 (1,2-dioleoyl-3-trimethylammonium-propane, DOTAP), 디올레오일 글루타마이드 (dioleoyl glutamide), 디스테아로일 글루타마이드 (distearoyl glutamide), 디팔미토일 글루타마이드 (dipalmitoyl glutamide), 디올레오일 아스파르타마이드 (dioleoyl aspartamide), 1,2-디올레오일-3-디메틸암모늄-프로판 (1,2-dioleoyl-3-dimethylammonium-propane, DODAP), ß-[N-(N',N'-디메틸아미노에탄-카바모일], (3ß-[N-(N',N'-dimethylaminoethane)-carbamoyl], DC-Chol), 및 메틸디옥타데실암모늄 브로마이드 (dimethyldioctadecylammonium bromide, DDAB) 등 중에서 선택된 것을 사용할 수 있다.
상기 인지질로서 바람직하기로는 중성 지질인 포스파티딜콜린(phosphatidylcholine)과 포스파티딜에탄올아민(phosphatidylethanolamine), 음이온성 지질인 포스파티딜글리세롤 (phsophatidylglycerol), 포스파티딜이노시톨(phosphatidylinositol), 포스파티딜세린(phsophatidylserine), 및 포스파틱산(phosphatidic acid), 양이온성 지질인 1,2-디올레오일-3-트리메틸암모늄-프로판(DOTAP) 및 콜레스테롤 등 중에서 선택된 하나 또는 그 이상의 혼합물을 사용할 수 있다.
상기 인지질은 특히 알코올에 대한 용해도가 낮으므로 내상을 구성하는 알코올성 수용액으로 인한 리포좀의 안정성에 영향을 적게 미치게 된다.
이러한 인지질은 리포좀 조성물 중 0.5 내지 50 wt% 사용할 수 있으며, 사용량이 상기 범위를 벗어나면 리포좀 막이 안정적이지 않은 경향이 있다.
본 발명의 리포좀의 내상을 구성하는 알코올성 수용액은, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 바람직하기로는 에탄올을 포함하는 인산완충용액으로 이루어진다. 상기 인산완충용액 중 알코올은 0.1 내지 10 wt% 범위로 포함될 수 있다.
한편, 리포좀 조성물 중 인산완충용액은 10 내지 95 wt% 범위로 포함되고, 저급 알코올은 0.1 내지 10 wt% 범위로 포함되는 것이 리포좀 조성물의 리포좀화에 바람직하다.
상기 인산완충용액과 저급 알코올을 충분히 혼합하여 침전이 없도록 하며, 여기에 약물을 녹여 사용한다.
상기 약물은 수난용성이며 알코올 가용성인 약물이다. 즉, 물에는 녹지 않고 알코올에는 녹는 약물로서, 특히 에탄올에 대한 용해도가 비교적 우수한 난용성 약물에 대해 적용하는 것이 바람직하다. 예를 들어 파클리탁셀(paclitaxel), 레스베라트롤(resveratrol), 커큐민(curcumin), 도세탁셀(docetaxel), 시스플라틴(cisplatin), 카르보플라틴(carboplatin), 독소루비신(doxorubicin), 다우노루비신(daunorubicin), 에피루비신(epirubicin), 이다루비신(idarunbicin), 이트라코나졸(itraconazole), 케토코나졸(ketoconazole) 등에 대해 적용할 수 있으며, 이들 약물에만 국한되는 것은 아니다.
상기한 수난용성이며 알코올 가용성인 약물은 리포좀 조성물 중 0.5 내지 30 wt% 포함될 수 있으며, 함량이 상기 범위를 초과하면 봉입률 대비 약물량이 과하여 미봉입 상태로 제거되는 약물량이 많아지는 경향이 있다.
이하, 본 발명의 리포좀의 제조방법을 각 단계별로 구체적으로 설명한다.
1) 인지질과 유기용매를 교반하여 혼합한 다음 유기용매를 제거하여 인지질 피막을 형성하는 단계.
즉, 리포좀의 내상에 알코올을 함유시키기 위해 유기용매에 인지질을 녹이고, 적량을 취하여 유리용기에 가한 다음 이를 감압하에서 회전증발건고시켜 유기용매를 제거시킨 인지질 피막을 제조한다.
상기 유기용매로는 클로로포름, 에테르 및 헥산 등을 사용할 수 있다.
상기 유기용매를 완전히 제거하기 위하여 상기 1) 단계 종료 후 질소가스를 불어넣는 단계를 추가하면 유기용매의 제거가 더 충분히 이루어지게 된다.
2) 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올과 인산 완충용액이 혼합된 알코올성 완충액을 제조하고, 여기에 수난용성이며 알코올 가용성인 약물을 혼합하는 단계.
상기 알코올은 인산 수용액 중 5 내지 70 wt% 범위가 되는 것이 좋다. 상기 인산완충용액과 알코올을 충분히 혼합하여 알코올성 완충액을 제조한다.
여기에 수난용성이며 알코올 가용성인 약물을 녹인 후 인지질 피막을 가하기 전에 0.45 μm 필터를 통하여 여과하여 녹지 않은 침전물을 제거하도록 한다.
상기 알코올성 완충액에 포함되는 약물의 양은 약물의 종류에 따라 적절하게 선택할 수 있다.
3) 상기 1) 단계에서 제조된 인지질 피막과 상기 2) 단계에서 약물을 용해한 알코올성 완충액을 혼합하고 40 내지 70 ℃ 범위에서 교반하여 리포좀을 형성하는 단계.
유기용매가 완전히 제거된 인지질 피막에 약물을 함유하는 알코올성 완충액을 혼합하고, 인지질의 전이온도 이상으로 가온하면서 회전시켜 지질막이 수화되면서 리포좀이 제조되도록 한다. 일반적으로 40 내지 70 ℃ 범위로 가온하는 것이 좋다.
상기 3) 단계에서 제조된 리포좀을 초음파 분쇄기로 수욕상에서 균일하게 분산시키고 분자배제크기한도가 10,000 인 투석막을 이용하여 투석하는 단계를 추가할 수 있다. 즉, 수화된 리포좀 분산액은 다시 초음파분쇄기에서 분쇄하여 입자의 크기가 더 고르게 분산되도록 한다. 이렇게 제조된 리포좀 분산액으로부터 봉입된 약물과 봉입되지 않은 약물을 분리하기 위하여 알코올이 함유되지 않은 완충액을 이용하여 투석을 실시한다.
상기한 성분을 포함하여 이루어지는 본 발명의 리포좀은 약물의 봉입률이 5 내지 90 % 이며, 리포좀의 크기는 10 내지 1,000 nm 범위로 이루어진다.
특히 리포좀 내상에 알코올 용액을 함유하므로 리포좀 지질막이 알코올에 녹지 않고 알코올에 대한 투과도가 낮은 지질막 성분을 이용하여 제조함으로서, 리포좀의 안정성을 개선하고 리포좀 내상의 알코올 함량이 유지되도록 하여 봉입된 약물이 가용화된 상태로 유지될 수 있다.
이렇게 제조된 리포좀은 리포좀 자체를 구성하는 인지질 이중막 성분과 생체막과의 상호작용으로 인하여 생체막 투과도가 증진될 수 있으며, 그와 더불어 내상의 알코올이 생체막을 통한 투과 촉진기능을 가지므로 약물 흡수 증진효과가 현저히 높은 효과를 나타낸다.
본 발명은 리포좀에 가용화하여 봉입된 약물의 생체막 투과증진을 위해 적용가능하다. 적용부위로서는 피부, 위장관 점막, 구강점막, 비강점막, 질점막 및 직장점막이 가능하다.
상기한 본 발명에 의하면, 물에 난용성인 약물, 특히 물에 난용성이지만 알코올에 녹을 수 있는 약물을 가용화하고, 생체막 투과를 증진시킬 수 있는 리포좀 조성물을 제공할 수 있다.
또한 본 발명에 의하면, 제제화가 어려운 난용성 약물에 대한 제제 개발을 가능하도록 한 효과를 기대할 수 있다.
또한 본 발명에 의하면, 생체이용률이 불량한 약물의 생체막 투과를 증진함으로서 생체이용률을 증진시킬 수 있다는 장점이 있다.
도 1은 알코올성 수상을 함유하는 리포좀에 난용성 약물인 파클리탁셀을 봉입한 조성물의 실시예 6을 가지고 랫드에 경구투여하였을 때의 위장관 흡수를 나타낸 것이다.
도 2는 알코올성 수상을 함유하는 리포좀에 난용성 약물인 레스베라트롤을 봉입한 조성물의 실시예 16을 가지고 무모생쥐의 피부에 적용하였을 때의 투과량을 나타낸 것이다.
이하, 실시예 및 실험예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다.
실시예 .
다음 표 1 및 2와 같은 조성 및 함량을 이용하여, 우선 인지질을 함유하는 클로르포름 용액을 취하여 유리관에 넣고 충분히 와류교반기(vortex mixer)를 이용하여 충분히 혼합하였다. 그런 다음 감압회전증발농축기(rotary evaporator)를 이용하여 약 1시간 이상 유기용매를 완전히 제거하여 유리관 표면에 인지질 피막이 형성되도록 하였다. 인지질 피막은 다시 질소가스를 불어넣어 유기용매를 제거하는 과정을 거쳐 클로르포름을 완전히 제거하였다. 그런 다음 여기에 약물을 녹인 알코올성 완충액(45 wt%의 에탄올) 1 mL을 가하여 인지질의 종류에 따라 인지질의 전이온도 보다 높은 온도인 40 내지 70 ℃에서 회전시키면서 인지질피막이 수화되면서 피막이 벗겨져 리포좀이 형성되도록 하였다. 형성된 리포좀은 다시 수욕상 초음파분쇄기(bath type sonicator)를 이용하여 더 미세, 균질하게 분산되도록 하였다. 제조된 리포좀 분산액은 분자배제크기한도가 10,000인 투석막을 이용하여, 투석액을 알코올이 함유되어 있지 않은 완충액으로 하여 투석을 실시함으로서 봉입되지 않은 약물을 제거하였다. 이렇게 미봉입 약물과 분리된 리포좀 분산액은 냉장보관 하였다.
조 성 실시예
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
인지질 (μmol) eggPC 20 20
DSPC 20 10 10 20 10 10
DPPC 20 20
DSPG 10 10
DOTAP 10 10
cholesterol(Chol) (μmol) 10 10 10 10 10
파클리탁셀 (mg) 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5
인산완충액, pH 7.4 (mL) 550 550 550 550 550 550 550 550 550 550
에탄올 (mL) 450 450 450 450 450 450 450 450 450 450
조 성 실시예
11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
인지질 (μmol) eggPC 20 20
DSPC 20 10 10 20 10 10
DPPC 20 20
DSPG 10 10
DOTAP 10 10
cholesterol(Chol) (μmol) 10 10 10 10 10
레스베라트롤 (mg) 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10
인산완충액, pH 7.4) (mL) 550 550 550 550 550 550 550 550 550 550
에탄올 (mL) 450 450 450 450 450 450 450 450 450 450
실험예 1. 입자크기 측정
상기 실시예에서 제조한 리포좀을 가지고 에탄올이 함유되어 있지 않은 완충액으로 희석하여 동적광산란 장비 (ELS-8000)를 이용하여 입자의 평균입자경을 측정하여 그 결과를 표 3에 요약하였다.
평균
입자경
(nm)		 실시예
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
121 120 132 129 142 132 152 143 132 145
실시예
11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
98 110 101 103 112 110 98 96 100 119
실험예 2. 봉입효율 측정
상기 실시예에서 제조한 리포좀을 가지고 리포좀에 봉입된 파클리탁셀 또는 레스베라트롤의 량을 측정하였다. 리포좀내 약물량은 투석을 실시하여 미봉입약물을 제거한 후 실시하였으며, 리포좀을 위하여 1% triton X-100으로 리포좀 막을 가용화시킨 후 이를 동결건조하였다. 동결건조한 리포좀에 에탄올을 가하여 약물을 용해시키고, 0.45 μm 필터를 사용하여 여과한 후 고속액체크로마토그라피법(HPLC)을 이용하여 정량하였다. 파클리탁셀과 레스베라트롤의 정량은 각각 227nm 및 245 nm에서 실시하였다. 봉입효율(%)은 리포좀 제조에 가해준 량을 100%로 하여 투석 후 봉입되어 남아있는 약물량의 백분율로서 산출하였다. 그 결과는 표 4에 요약하였다.
봉입
효율
(%)		 실시예
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
48 46 53 49 56 53 45 48 43 56
실시예
11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
65 64 67 70 69 66 65 68 67 63
실험예 3. 안정성시험
상기 실시예 1, 6, 11, 16의 조성물을 가지고 4 ℃와 25 ℃에서 6개월간 경시변화를 보면서 입자크기 변화와 파클리탁셀 함량을 측정하였다. 입자크기는 동적광산란 장비 (ELS-8000)를 가지고, 함량은 고속액체크로마토그라피법(HPLC)를 이용하여 측정하였다. 그 결과는 표 5 및 표 6에 요약하였다.
구분 0개월 2개월 4개월 6개월
입자크기(nm) 함량(%) 입자크기(nm) 함량(%) 입자크기(nm) 함량(%) 입자크기(nm) 함량(%)
온도 실시예 1
4oC 121 100 125 99.8 124 99.6 126 99.0
25oC 121 100 156 99.6 163 99.7 201 99.1
온도 실시예 6
4oC 132 100 133 99.7 132 99.7 143 99.7
25oC 132 100 165 99.9 166 99.5 208 99.5
구분 0개월 2개월 4개월 6개월
입자크기(nm) 함량(%) 입자크기(nm) 함량(%) 입자크기(nm) 함량(%) 입자크기(nm) 함량(%)
온도 실시예 11
4oC 98 100 102 99.7 132 98.4 165 98.3
25oC 98 100 156 98.5 220 97.4 250 96.8
온도 실시예 16
4oC 110 100 135 99.6 201 99.2 220 98.7
25oC 110 100 180 99.2 270 96.5 310 95.6
실험예 4. 위장관 흡수증진 시험
상기 실시예 6의 조성물을 가지고 파클리탁셀로서 25 mg/kg의 용량으로 랫드에 경구투여한 후 대퇴부 동맥을 통하여 시간별로 채혈하여 혈중 파클리탁셀의 농도를 측정하였다. 그 결과를 도 1에 나타내었다. 시판제제와 동일한 조성인 에탄올/크레모포아 이엘 1:1 용액에 6 mg/mL의 농도로 용해시킨 것을 비교례로서 사용하였다. 비교례는 투여할 때 인산완충액으로 2배 희석하여 투여하였다. 이상의 결과 본 발명에서 제조한 조성에서 위장관 흡수가 불량하여 경구용 제제로서는 시판되지 않는 난용성 함암제인 파클리탁셀의 위장관 흡수가 어느 정도 달성됨을 알 수 있다.또한 주사제로서만 시판되고 있는 비교례의 조성에서는 파클리탁셀을 가용화하기 위해 계면활성제인 크레모포아 이엘을 다량 사용하고 있어 투여시 아나필락시 쇼크와 같은 부작용을 초래하는데, 본 발명의 실시예에서는 크레모포아 이엘을 사용하지 않고서도 가용화효과를 얻을 수 있었다.
실험예 5. 피부투과증진 시험
상기 실시예 16의 조성물을 가지고 무모 마우스(hairless mouse)의 등쪽 피부를 이용한 피부투과실험을 실시하였다. 무모마우스의 피부를 적출하여 Franz diffusion cell에 장착하고, 피부표면에 레스베라트롤을 함유하는 실시례 16을 가하여 8시간동안 투과된 량을 측정하였다. 비교를 위하여 레스베라트롤을 인산완충액에 현탁한 현탁제와 45% 에탄올에 녹인 용액을 가하여 비교하였다. 피부투과된 레스베라트롤의 량은 수기에서 시료를 채취하여 HPLC로 정량하였다. 도 2에서 보는 바와 같이 실시예 16으로 하여 적용한 경우 현저히 피부투과도가 증진됨을 알 수 있다.
이상에서 설명한 본 발명은 전술한 실시예 및 첨부된 도면에 의해 한정되는 것이 아니고, 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 여러 가지 치환, 변형 및 변경이 가능함은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 명백할 것이다.
.

Claims (11)

  1. 최외각에 존재하는 인지질 이중층(phospholipid bilayer) 및 상기 인지질 이중층의 내부에 존재하는 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 수난용성이며 알코올 가용성인 약물 및 인산완충용액의 혼합물로 구성되며 96-152nm의 입자크기를 가지는 리포좀(liposome)과 인산완충용액을 포함하는 리포좀 조성물로서,
    상기 인지질 이중층은 포스파티딜콜린(phosphatidylcholine, PC), 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린(1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine, DSPC), 및 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린(1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine, DPPC)으로 구성된 군으로부터 선택된 하나의 인지질 또는 둘 이상의 인지질 혼합물과 1,2-디올레오일-3-트리메틸암모늄-프로판(1,2-dioleoyl-3-trimethylammonium-propane, DOTAP) 및 콜레스테롤(cholesterol)로 구성된 군으로부터 선택된 하나의 양이온성 지질 또는 둘의 양이온성 지질 혼합물을 포함하며,
    상기 약물은 파클리탁셀(paclitaxel) 및 레스베라트롤(resveratrol)로 구성된 군으로부터 선택된 하나의 약물 또는 둘의 약물 혼합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 리포좀 조성물.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. 삭제
  7. 삭제
  8. 최외각에 인지질 이중층이 존재하고 상기 인지질 이중층의 내부에 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 수난용성이며 알코올 가용성인 약물 및 인산완충용액의 혼합물이 존재하는 리포좀으로서,
    상기 인지질 이중층은 포스파티딜콜린(phosphatidylcholine, PC), 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린(1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine, DSPC), 및 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린(1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine, DPPC)으로 구성된 군으로부터 선택된 하나의 인지질 또는 둘 이상의 인지질 혼합물과 1,2-디올레오일-3-트리메틸암모늄-프로판(1,2-dioleoyl-3-trimethylammonium-propane, DOTAP) 및 콜레스테롤(cholesterol)로 구성된 군으로부터 선택된 하나의 양이온성 지질 또는 둘의 양이온성 지질 혼합물을 포함하며,
    상기 약물은 파클리탁셀(paclitaxel) 및 레스베라트롤(resveratrol)로 구성된 군으로부터 선택된 하나의 약물 또는 둘의 약물 혼합물인 것을 특징으로 하는 리포좀.
  9. 1) 인지질과 유기용매를 교반하여 혼합한 다음 유기용매를 제거하여 인지질 피막을 형성하는 단계,
    2) 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올과 인산 완충용액이 혼합된 알코올성 완충액을 제조하고, 여기에 수난용성이며 알코올 가용성인 약물을 혼합하는 단계, 및,
    3) 상기 1) 단계에서 제조된 인지질 피막과 상기 2) 단계에서 약물을 용해한 알코올성 완충액을 혼합하고 40 내지 70 ℃ 범위에서 교반하여 리포좀을 형성하는 단계를 포함하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 리포좀의 제조방법.
  10. 청구항 9 에 있어서,
    상기 1) 단계 종료 후 질소가스를 불어넣어 유기용매를 완전히 제거하는 단계가 추가되는 것을 특징으로 하는 리포좀의 제조방법.
  11. 청구항 9 에 있어서,
    상기 3) 단계에서 제조된 리포좀을 초음파 분쇄기로 수욕상에서 균일하게 분산시키고 분자배제크기한도가 10,000 인 투석막을 이용하여 투석하는 단계를 추가적으로 포함하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 리포좀의 제조방법.




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