RU2000122755A - Новые кодирующие нуклеотидные последовательности гена thre и способ ферментативного получения l-треонина с использованием коринебактерий - Google Patents

Claims (15)

1. Реплицируемая в коринеформных микроорганизмах предпочтительно рекомбинантная ДНК из коринебактерий, которая содержит по крайней мере кодирующую нуклеотидную последовательность гена thrE.

2. Реплицируемая ДНК по п. 1, содержащая:
(I) кодирующие нуклеотидные последовательности гена thrE, представленные в SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3, или
(II) по крайней мере одну последовательность, которая соответствует последовательностям, указанным в подпункте (I), в пределах вырожденности генетического кода, или
(III) по крайней мере одну последовательность, которая гибридизуется с последовательностями, комплементарными указанным в подпунктах (I) или (II) последовательностям, и/или при необходимости
(IV) функционально нейтральные смысловые мутации в последовательностях, указанных в подпункте (I).

3. Аминокислотная последовательность протеина, выведенная из нуклеотидных последовательностей по п. 1 или 2 и представленная в SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 4.

4. Коринеформные микроорганизмы, прежде всего из рода Corynebacterium, трансформированные путем встраивания одной или нескольких реплицируемых ДНК по п. 1 или 2.

5. Штамм Corynebacterium glutamicum DM368-2 pZlthrE, депонированный под регистрационным номером DSM 12840.

6. Способ получения L-треонина путем ферментации с использованием коринебактерий, отличающийся тем, что применяют бактерии, в которых усиливают, прежде всего сверхэкспрессируют, кодирующие нуклеотидные последовательности гена thrE.

7. Способ по п. 6, отличающийся тем, что применяют бактерии, в которых дополнительно усиливают один или несколько генов пути биосинтеза L-треонина.

8. Способ по п. 6 или 7, отличающийся тем, что применяют штамм, трансформированный плазмидным вектором, причем плазмидный вектор несет кодирующую нуклеотидную последовательность гена thrE.

9. Способ по любому из пп. 6-8, отличающийся тем, что ген thrE сверхэкспрессируют в микроорганизмах, которые имеют другие мутации, обусловливающие устойчивость к метаболитам, соответственно к антиметаболитам.

10. Способ по любому из пп. 6-9, отличающийся тем, что для достижения сверхэкспрессии микроорганизмы подвергают ферментации в измененной культуральной среде и/или изменяют условия процесса ферментации.

11. Способ по любому из пп. 6-10, отличающийся тем, что применяют микроорганизмы, в которых по крайней мере частично выключают пути биосинтеза, которые ингибируют образование треонина.

12. Способ по любому из пп. 6-11, отличающийся тем, что применяют микроорганизмы, в которых дополнительно к гену thrE усиливают (сверхэкспрессируют) по отдельности или в сочетании друг с другом другие гены пути биосинтеза треонина.

13. Способ получения L-треонина, отличающийся тем, что осуществляют следующие стадии: ферментацию с использованием микроорганизмов по любому из предыдущих пунктов, в которых усиливают (сверхэкспрессируют) по крайней мере ген thrE, при необходимости в сочетании с другими генами, накопление L-треонина в среде или в клетках микроорганизмов и выделение L-треонина.

14. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что применяют микроорганизмы рода Corynebacterium.

15. Способ выделения гена thrE, отличающийся тем, что в качестве индикаторного штамма получают имеющие дефект по гену thrE мутанты, предпочтительно коринебактерии, которые не растут или обладают лишь слабой способностью к росту на питательной среде, включающей олигопептид, содержащий треонин, и ген thrE идентифицируют и выделяют путем создания банка генов или в случае транспозонного мутагенеза осуществляют отбор по признаку наличия транспозона, предпочтительно обусловливающего устойчивость к антибиотикам, и таким путем получают ген thrE.