RU2000125061A - Новые кодирующие нуклеотидные последовательности гена eno - Google Patents

Claims (17)

1. Выделенный из коринебактерий полинуклеотид, содержащий полину клеотидную последовательность, выбранную из группы, включающей: а) полинуклеотид, идентичный по крайней мере на 70% полину клеотиду, кодирующему полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2, б) полинуклеотид, кодирующий полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, идентичную по крайней мере на 70% аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 2, в) полинуклеотид, комплементарный полину клеотидам, указанным в подпункте а) или б), и г) полинуклеотид, содержащий по крайней мере 15 последовательных пар оснований полинуклеотидной последовательности, указанной в подпункте а), б) или в).

2. Полинуклеотид по п. 1, который представляет собой предпочтительно рекомбинантную ДНК, способную к репликации в коринебактериях.

3. Полинуклеотид по п. 1, который представляет собой РНК.

4. Полинуклеотид по п. 2, содержащий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1.

5. Способная к репликации ДНК по п. 2, которая включает: (I) нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1, или (II) по крайней мере одну последовательность, которая соответствует последовательности, указанной в подпункте (I), в пределах вырожденности генетического кода, или (III) по крайней мере одну последовательность, которая гибридизуется с последовательностью, комплементарной последовательности, указанной в подпункте (I) или (II), и необязательно (IV) функционально нейтральные смысловые мутации в последовательности, указанной в подпункте (I).

6. Полинуклеотидная последовательность по п. 2, кодирующая полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2.

7. Способ ферментативного получения L-аминокислот, прежде всего L-лизина, отличающийся тем, что осуществляют следующие стадии: а) ферментацию с использованием продуцирующих L-лизин коринебактерий, в которых усиливают, прежде всего сверхэкспрессируют, по крайней мере ген eno или его кодирующие нуклеотидные последовательности, б) накопление L-аминокислоты в среде или в клетках бактерий и в) выделение L-аминокислоты.

8. Способ по п. 7, отличающийся тем, что применяют бактерии, в которых дополнительно усиливают другие гены пути биосинтеза целевой L-аминокислоты.

9. Способ по п. 7, отличающийся тем, что применяют бактерии, в которых по крайней мере частично подавляют пути обмена веществ, которые снижают образование L-лизина.

10. Способ по п. 7, отличающийся тем, что применяют штамм, трансформированный плазмидным вектором, причем этот плазмидный вектор несет кодирующую нуклеотидную последовательность гена eno.

11. Способ по любому из пп. 7-10, отличающийся тем, что применяют коринебактерии, продуцирующие L-лизин.

12. Способ по п. 8, отличающийся тем, что одновременно сверхэкспрессируют ген dapA, кодирующий дигидродипиколинатсинтазу.

13. Способ по п. 8, отличающийся тем, что одновременно амплифицируют фрагмент ДНК, обусловливающий устойчивость к S-(2-аминоэтил)цистеину.

14. Способ по п. 8, отличающийся тем, что одновременно сверхэкспрессируют ген gap, кодирующий глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназу.

15. Способ по п. 8, отличающийся тем, что одновременно сверхэкспрессируют ген tpi, кодирующий триозофосфатизомеразу.

16. Способ по п. 8, отличающийся тем, что одновременно сверхэкспрессируют ген pgk, кодирующий 3-фосфатглицераткиназу.

17. Способ по п. 8, отличающийся тем, что одновременно сверхэкспрессируют ген рус, кодирующий пируваткарбоксилазу.