RU2000126322A - Новые кодирующие нуклеотидные последовательности гена pck - Google Patents

Claims (15)

1. Выделенный из коринебактерий полинуклеотид, содержащий полинуклеотидную последовательность, выбранную из группы, включающей а) полинуклеотид, идентичный по крайней мере на 70% полинуклеотиду, кодирующему полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2, б) полинуклеотид, идентичный по крайней мере на 70% полинуклеотиду, который кодирует указанный полипептид и содержится в плазмиде рЕК-pckА (фиг. 1), соответственно в плазмиде pEK-pckB (фиг. 2), в) полинуклеотид, кодирующий полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, идентичную по крайней мере на 70% аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 2, г) полинуклеотид, комплементарный полинуклеотидам, указанным в подпунктах а), б) или в), и д) полинуклеотид, содержащий по крайней мере 15 последовательных пар оснований полинуклеотидной последовательности, указанной в подпункте а), б), в) или г).

2. Полинуклеотид по п. 1, который представляет собой способную к репликации, предпочтительно рекомбинантную, ДНК.

3. Полинуклеотид по п. 1, который представляет собой РНК.

4. Полинуклеотид по п. 2, содержащий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1.

5. Способная к репликации ДНК по п. 2, которая включает:
(I) нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1, или (II) по крайней мере одну последовательность, которая соответствует последовательности, указанной в подпункте (I), в пределах вырожденности генетического кода, или (III) по крайней мере одну последовательность, которая гибридизуется с последовательностью, комплементарной последовательности, указанной в подпункте (I) или (II), и/или при необходимости (IV) функционально нейтральные смысловые мутации в последовательности, указанной в подпункте (I).

6. Полинуклеотидная последовательность по п. 2, кодирующая полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2.

7. Вектор рЕК-pckA, представленный на фиг. 1.

8. Вектор pEK-pckB, представленный на фиг. 2.

9. Вектор pK19mobsacBΔpck, представленный на фиг. 3 и депонированный в штамме Е. coli DH5α под регистрационным номером DSM 13047.

10. Коринебактерии, которые служат в качестве клеток-хозяев и содержат один из векторов по любому из пп. 6-8 или в которых имеется делеция Δpck.

11. Способ ферментативного получения L-аминокислот, отличающийся тем, что применяют бактерии, в которых а) ослабляют полинуклеотид по п. 1 или понижают активность полипептида, кодируемого указанным полинуклеотидом, б) накапливают целевой продукт в среде или в клетках бактерий и в) выделяют продукт.

12. Способ по п. 11, отличающийся тем, что применяют бактерии вида Corynebacterium glutamicum.

13. Способ по п. 11, отличающийся тем, что ослабления достигают путем интеграционного мутагенеза с использованием плазмиды pK19mobsacBΔpck, представленной на фиг. 3 и депонированной под регистрационным номером DSM 13047.

14. Способ по п. 11, отличающийся тем, что для ферментативного получения L-лизина применяют бактерии, в которых при необходимости одновременно сверхэкспрессируют ген dapA, кодирующий дигидродипиколинатсинтазу, и/или одновременно амплифицируют фрагмент ДНК, обусловливающий устойчивость к S-(2-аминоэтил)цистеину.

15. Способ по п. 11, отличающийся тем, что для ферментативного получения L-треонина применяют бактерии, в которых при необходимости одновременно сверхэкспрессируют ген hom, кодирующий гомосериндегидрогеназу и/или аллели hom^dr, соответственно hom^FBR, кодирующие "устойчивую в отношении обратной связи" гомосериндегидрогеназу.