RU2001108877A

RU2001108877A - Новые кодирующие нуклеотидные последовательности гена rp1k

Info

Publication number: RU2001108877A
Application number: RU2001108877/13A
Authority: RU
Inventors: Лутц ВЕМАЙЕР; Андреас ТАУХ; Альфред ПЮЛЕР; Йёрн КАЛИНОВСКИ; Беттина МЁККЕЛЬ
Original assignee: Дегусса Аг
Filing date: 2001-04-04
Publication date: 2003-03-27

Claims

1. Выделенный из коринебактерий полинуклеотид, содержащий полинуклеотидную последовательность, выбранную из группы, включающей а) полинуклеотид, идентичный по крайней мере на 70% полинуклеотиду, кодирующему полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2, б) полинуклеотид, кодирующий полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, идентичную по крайней мере на 70% аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 2, в) полинуклеотид, комплементарный полинуклеотидам, указанным в подпункте а) или б), и г) полинуклеотид, содержащий по крайней мере 15 последовательных пар оснований полинуклеотидной последовательности, указанной в подпункте а), б) или в).

2. Полинуклеотид по п. 1, который представляет собой способную к репликации, предпочтительно рекомбинантную ДНК.

3. Полинуклеотид по п. 1, который представляет собой РНК.

4. Полинуклеотид по п. 2, содержащий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1.

5. Полинуклеотидная последовательность по п. 2, кодирующая полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2.

6. Полинуклеотид по п. 1, прежде всего согласно подпункту г), содержащий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3.

7. Полинуклеотид по п. 1, прежде всего согласно подпункту г), кодирующий полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 4.

8. Способная к репликации ДНК по п. 2, которая включает (I) нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1, или (II) по крайней мере одну последовательность, которая соответствует последовательности, указанной в подпункте (I), в пределах вырожденности генетического кода, или (III) по крайней мере одну последовательность, которая гибридизуется с последовательностью, комплементарной последовательности, указанной в подпункте (I) или (II), и необязательно (IV) функционально нейтральные смысловые мутации в последовательности, указанной в подпункте (I).

9. Вектор, который содержит полинуклеотид по п. 1 и который депонирован в штамме Е. coli DH5α/pΔrp1K под регистрационным номером DSM 13158, представлен в SEQ ID NO: 3 и схематично показан на чертеже.

10. Коринебактерии, служащие в качестве клеток-хозяев и содержащие делецию или инсерцию в гене rр1К.

11. Способ получения L-аминокислот, прежде всего L-лизина, отличающийся тем, что осуществляют следующие стадии: а) ферментацию с использованием продуцирующих требуемую L-аминокислоту бактерий, в которых ослабляют по крайней мере ген гр1К, б) накопление L-аминокислоты в среде или в клетках бактерий и в) выделение L-аминокислоты.

12. Способ по п. 11, отличающийся тем, что применяют бактерии, в которых дополнительно усиливают другие гены пути биосинтеза целевой L-аминокислоты.

13. Способ по п. 11, отличающийся тем, что применяют бактерии, в которых по крайней мере частично подавляют пути метаболизма, которые ингибируют образование целевой L-аминокислоты.

14. Способ по п. 11, отличающийся тем, что ослабляют экспрессию полинуклеотида по п. 1, прежде всего согласно подпунктам 1а)-1г).

15. Способ по п. 11, отличающийся тем, что ослабляют каталитические свойства полипептида (фермента), кодируемого полинуклеотидом по п. 1, прежде всего согласно подпунктам 1а)-1г).

16. Способ по п. 11, отличающийся тем, что применяют бактерии, которые для достижения ослабления подвергают инсерционному мутагенезу с использованием представленной на чертеже плазмиды pΔrp1K, которая депонирована под регистрационным номером DSM 13158.

17. Способ по п. 11, отличающийся тем, что для ферментативного получения L-аминокислот, прежде всего L-лизина, применяют бактерии, в которых одновременно сверхэкспрессируют один или несколько генов, выбранных из группы, включающей 17.1. ген dapA, кодирующий дигидродипиколинат-синтазу, 17.2. ген lysC, кодирующий устойчивую в отношении обратной связи аспартаткиназу, 17.3. фрагмент ДНК, обеспечивающий устойчивость к S-(2-аминоэтил) цистеину, 17.4. ген рус, кодирующий пируват-карбоксилазу, 17.5. ген рус (Eikmanns, Journal of Bacteriology (1992)), 17.6. ген mqo, кодирующий малат-хиноноксидоредуктазу, 17.7. ген lysE, кодирующий экспорт лизина, 17.8. ген zwal.

18. Способ по п. 11, отличающийся тем, что для ферментативного получения аминокислот, прежде всего L-лизина, применяют бактерии, в которых одновременно ослабляют один или несколько генов, выбранных из группы, включающей 18.1. ген рск, кодирующий фосфоенолпируваткарбоксикиназу, 18.2. ген pgi, кодирующий глюкозо-6-фосфатизомеразу. 18.3. ген рохВ, кодирующий пируватоксидазу, 18.4. ген zwa2 или 18.5. ген rela, кодирующий PPGPP-синтетазу.

19. Способ по любому из пп. 11-18, отличающийся тем, что применяют микроорганизмы вида Corynebacterium glutamicum.

20. Применение полинуклеотидных последовательностей по п. 1 в качестве праймеров для конструирования с помощью полимеразной цепной реакции ДНК генов, которые обладают действием, соответствующим действию гена rр1К.

21. Применение полинуклеотидных последовательностей по п. 1 в качестве гибридизационных зондов.