RU2001100696A

RU2001100696A - Новые кодирующие нуклеотидные последовательности гена ptsh

Info

Publication number: RU2001100696A
Application number: RU2001100696/13A
Authority: RU
Inventors: Мике ФАРВИКК; Беттина МЁККЕЛЬ; Вальтер ПФЕФФЕРЛЕ
Original assignee: Дегусса Аг
Priority date: 2000-01-13
Filing date: 2001-01-12
Publication date: 2003-03-27

Claims

1. Выделенный из коринебактерий полинуклеотид, содержащий полинуклеотидную последовательность, выбранную из группы, включающей: а) полинуклеотид, идентичный по крайней мере на 70% полинуклеотиду, кодирующему полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2, б) полинуклеотид, кодирующий полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, идентичную по крайней мере на 70% аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 2, в) полинуклеотид, комплементарный полинуклеотидам, указанным в подпункте а) или б), и г) полинуклеотид, содержащий по крайней мере 15 последовательных пар оснований полинуклеотидной последовательности, указанной в подпункте а), б) или в).

2. Полинуклеотид по п. 1, который представляет собой реплицируемую в коринебактериях, предпочтительно рекомбинантную, ДНК.

3. Полинуклеотид по п. 1, который представляет собой РНК.

4. Реплицируемая ДНК по п. 2, которая включает (I) нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1, или (II) по крайней мере одну последовательность, которая соответствует последовательности, указанной в подпункте (I), в пределах вырожденности генетического кода, или (III) по крайней мере одну последовательность, которая гибридизуется с последовательностью, комплементарной последовательности, указанной в подпункте (I) или (II), и при необходимости (IV) функционально нейтральные смысловые мутации в последовательности, указанной в подпункте (I).

5. Полинуклеотидная последовательность по п. 2, кодирующая полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2.

6. Вектор, содержащий полинуклеотидную последовательность по п. 1.

7. Коринебактерия, содержащая вектор по п. 6.

8. Способ ферментативного получения L-аминокислот, отличающийся тем, что осуществляют следующие стадии а) ферментацию с использованием продуцирующих L-аминокислоту коринебактерий, в которых усиливают, прежде всего сверхэкспрессируют, по крайней мере ген, кодирующий компонент Н системы фосфотрансферазы, б) накопление L-аминокислоты в среде или в клетках бактерий и в) выделение L-аминокислоты.

9. Способ по п. 8, отличающийся тем, что применяют бактерии, в которых дополнительно усиливают другие гены пути биосинтеза целевой L-аминокислоты.

10. Способ по п. 8, отличающийся тем, что применяют бактерии, в которых по крайней мере частично подавляют пути обмена веществ, препятствующие образованию L-аминокислоты.

11. Способ по п. 8, отличающийся тем, что применяют штамм, трансформированный плазмидным вектором, который несет нуклеотидную последовательность гена, кодирующего компонент Н системы фосфотрансферазы.

12. Способ по любому из пп. 8-11, отличающийся тем, что применяют коринебактерии, продуцирующие L-лизин.

13. Способ по п. 9, отличающийся тем, что одновременно усиливают, прежде всего сверхэкспрессируют или амплифицируют, один или несколько генов, выбранных из группы, включающей ген dapA, кодирующий дигидродипиколинат-синтазу, ген рус, кодирующий пируваткарбоксилазу, ген tpi, кодирующий триозофосфатизомеразу, ген gap, кодирующий глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназу, ген ptsM, кодирующий компонент М системы фосфоенолпируват-сахар-фосфотрансферазы (ptsM), ген pgk, кодирующий 3-фосфоглицераткиназу и ген lysE, обеспечивающий экспорт лизина.

14. Способ по п. 10, отличающийся тем, что для продуцирования L-лизина применяют бактерии, в которых одновременно ослабляют один или несколько генов, выбранных из группы, включающей ген рек, кодирующий фосфоенолпируваткарбоксикиназу, ген pgi, кодирующий глюкозо-б-фосфатйзомеразу, ген рох, кодирующий пируватоксидазу.

15. Способ по любому из пп. 8-14, отличающийся тем, что применяют микроорганизмы вида Corynebacterium glutamicum.

16. Применение полинуклеотидных последовательностей по п. 1 в качестве праймеров для получения с помощью полимеразной цепной реакции ДНК генов, кодирующих продукт гена ptsH.

17. Применение полинуклеотидных последовательностей по п. 1 в качестве гибридизационных зондов.