RU2001109233A

RU2001109233A - Кодирующие нуклеотидные последовательности гена орсА

Info

Publication number: RU2001109233A
Application number: RU2001109233/13A
Authority: RU
Inventors: Л.К. Дуникан; Эшлинг МАККОРМАК; Клиона СТАПЕЛТОН; Кевин БЭРК; Бернд МОРИТЦ; Лотар ЭГГЕЛИНГ; Герман ЗАМ; Беттина МЕККЕЛЬ; Анке ВАЙССЕНБОРН
Original assignee: Дегусса Аг; Форшунгсцентрум Юлих Гмбх; Нэшнл Юниверсити Оф Айэрлэнд
Priority date: 1999-07-09
Filing date: 2000-07-05
Publication date: 2003-06-20

Claims

1. Выделенный из коринебактерий полинуклеотид, содержащий по крайней мере одну полинуклеотидную последовательность, выбранную из группы, включающей: а) полинуклеотид, идентичный по крайней мере на 70% полинуклеотиду, кодирующему полипептид, который содержит по крайней мере одну из аминокислотных последовательностей, представленных в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, в SEQ ID NO: 8 и в SEQ ID NO: 10, б) полинуклеотид, кодирующий полипептиды, которые содержат аминокислотные последовательности, идентичные по крайней мере на 70% аминокислотным последовательностям, представленным в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 8 или в SEQ ID NO: 10, в) полинуклеотид, комплементарный полинуклеотидам, указанным в подпункте а) или б), и г) полинуклеотид, содержащий по крайней мере 15 последовательных нуклеотидов полинуклеотидных последовательностей, указанных в подпункте а), б) или в).

2. Полинуклеотид по п.1, который представляет собой реплицируемую в коринебактериях, предпочтительно рекомбинантную, ДНК, и дополнительно содержит по крайней мере одну из кодирующих нуклеотидных последовательностей генов tal, tkt, zwf и devB.

3. Полинуклеотид по п.1, который представляет собой РНК.

4. Полинуклеотид по п.1, содержащий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 4 или в SEQ ID NO: 9.

5. Реплицируемая ДНК по п.2, которая включает: (I) одну или несколько нуклеотидных последовательностей, представленных в SEQ ID NO: 4 или в SEQ ID NO: 9, или (II) по крайней мере одну последовательность, которая соответствует последовательности, указанной в подпункте (I), в пределах вырожденности генетического кода, или (III) по крайней мере одну последовательность, которая гибридизуется с последовательностью, комплементарной последовательности, указанной в подпункте (I) или (II), и необязательно (IV) функционально нейтральные смысловые мутации в последовательности, указанной в подпункте (I).

6. Полинуклеотид по п.1, кодирующий полипептид, который содержит по крайней мере одну из аминокислотных последовательностей, представленных в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 8 и SEQ ID NO: 10.

7. Коринеформный микроорганизм, прежде всего относящийся к р. Corynebacterium, трансформированный путем встраивания реплицируемой ДНК по п.1 или 5.

8. Способ получения L-аминокислот, отличающийся тем, что осуществляют следующие стадии: а) ферментацию с использованием продуцирующих целевую L-аминокислоту бактерий, в которых в дополнение к гену орсА амплифицируют предпочтительно по крайней мере ген zwf и необязательно один или несколько генов, выбранных из группы, включающей ген tkt и ген devB, б) накопление целевого продукта в среде или в клетках бактерий и в накопленных клетках бактерий и в) выделение целевой L-аминокислоты.

9. Способ по п.8, отличающийся тем, что дополнительно к указанным генам амплифицируют, прежде всего сверхэкспрессируют, один или несколько генов пентозо-фосфатного цикла.

10. Способ по п.8 или 9, отличающийся тем, что для достижения амплификации увеличивают количество копий генов или нуклеотидных последовательностей путем трансформации микроорганизмов плазмидными векторами, несущими эти гены или нуклеотидные последовательности.

11. Способ по п.8, отличающийся тем, что для ферментативного получения аминокислот, прежде всего лизина, применяют бактерии, в которых в дополнение к гену орсА одновременно амплифицируют, прежде всего сверхэкспрессируют, один или несколько генов, выбранных из группы, включающей: 11.1. ген dapA, кодирующий дигидродипиколинат-синтазу, 11.2. ген lysC, кодирующий устойчивую в отношении обратной связи аспартаткиназу, 11.3. ген gap, кодирующий глицеролальдегид-3-фосфат-дегидрогеназу, 11.4. ген рус, кодирующий пируваткарбоксилазу, 11.5. ген tkt, кодирующий транскетолазу, 11.6. ген gnd, кодирующий 6-фосфоглюконат-дегидрогеназу, 11.7. ген lysE, кодирующий экспорт лизина, 11.8. ген zwal, 11.9. ген eno, кодирующий энолазу, 11.10. ген tal, кодирующий трансальдолазу, 11.11. прежде всего ген zwf.

12. Способ по п.8, отличающийся тем, что для ферментативного получения аминокислот, прежде всего L-лизина, применяют бактерии, в которых одновременно ослабляют один или несколько генов, выбранных из группы, включающей: 12.1. ген pck, кодирующий фосфоенолпируваткарбоксикиназу, 12.2. ген pgi, кодирующий глюкозо-6-фосфатизомеразу, 12.3. ген рохВ, кодирующий пируват-оксидазу, 12.4. ген zwa2.

13. Применение полинуклеотидных последовательностей по п.1 в качестве праймеров для получения с помощью полимеразной цепной реакции ДНК генов, обладающих активностью гена орсА.

14. Применение полинуклеотидных последовательностей по п.1 в качестве гибридизизационных зондов.