RU2000129933A - Новые кодирующие нуклеотидные последовательности гена glk - Google Patents

Claims (22)

1. Выделенный из коринебактерий полинуклеотид, содержащий полинуклеотидную последовательность, выбранную из группы, включающей а) полинуклеотид, идентичный по крайней мере на 70%-ному полинуклеотиду, кодирующему полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2, б) полинуклеотид, кодирующий полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, идентичную по крайней мере на 70% аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 2, в) полинуклеотид, комплементарный полинуклеотидам, указанным в подпункте а) или б), и г) полинуклеотид, содержащий по крайней мере 15 последовательных пар оснований полинуклеотидной последовательности, указанной в подпункте а), б) или в).

2. Полинуклеотид по п. 1, который представляет собой способную к репликации в коринебактериях, предпочтительно рекомбинантную, ДНК.

3. Полинуклеотид по п. 1, который представляет собой РНК.

4. Способная к репликации ДНК по п. 2, которая включает (I) нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1, или (II) по крайней мере одну последовательность, которая соответствует последовательности, указанной в подпункте (I), в пределах вырожденности генетического кода, или (III) по крайней мере одну последовательность, которая гибридизуется с последовательностью, комплементарной последовательности, указанной в подпункте (I) или (II), и при необходимости (IV) функционально нейтральные смысловые мутации в последовательности, указанной в подпункте (I).

5. Полинуклеотидная последовательность по п. 2, кодирующая полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2.

6. Вектор, содержащий полинуклеотидную последовательность по п. 1.

7. Коринебактерия, содержащая вектор по п. 6.

8. Способ ферментативного получения L-аминокислот, отличающийся тем, что осуществляют следующие стадии а) ферментацию с использованием продуцирующих L-аминокислоту коринебактерий, в которых по крайней мере усиливают, прежде всего сверхэкспрессируют, ген, кодирующий фермент глюкокиназу, б) накопление L-аминокислоты в среде или в клетках бактерий и в) выделение L-аминокислоты.

9. Способ по п. 8, отличающийся тем, что применяют бактерии, в которых дополнительно усиливают другие гены пути биосинтеза целевой L-аминокислоты.

10. Способ по п. 8, отличающийся тем, что применяют бактерии, в которых по крайней мере частично подавляют пути обмена веществ, препятствующие образованию L-аминокислоты.

11. Способ по п. 8, отличающийся тем, что применяют штамм, трансформированный плазмидным вектором, который несет нуклеотидную последовательность гена, кодирующего фермент глюкокиназу.

12. Способ по любому из пп. 8-11, отличающийся тем, что применяют коринебактерии, продуцирующие L-лизин.

13. Способ по п. 9, отличающийся тем, что одновременно сверхэкспрессируют ген dapA, кодирующий дигидродипиколинатсинтазу.

14. Способ по п. 9, отличающийся тем, что одновременно сверхэкспрессируют ген lysC, кодирующий устойчивую в отношении обратной связи аспартаткиназу.

15. Способ по п. 9, отличающийся тем, что одновременно сверхэкспрессируют ген gap, кодирующий глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназу.

16. Способ по п. 9, отличающийся тем, что одновременно сверхэкспрессируют ген tpi, кодирующий триозофосфатизомеразу.

17. Способ по п. 9, отличающийся тем, что одновременно сверхэкспрессируют ген pgk, кодирующий 3-фосфатглицераткиназу.

18. Способ по п. 9, отличающийся тем, что одновременно сверхэкспрессируют ген рус, кодирующий пируваткарбоксилазу.

19. Способ по п. 9, отличающийся тем, что одновременно сверхэкспрессируют ген mqo, кодирующий малат-хинон-оксидоредуктазу.

20. Способ по п. 9, отличающийся тем, что одновременно сверхэкспрессируют ген lysE, кодирующий экспорт лизина.

21. Способ по п. 10, отличающийся тем, что одновременно ослабляют ген pgi, кодирующий глюкозо-6-фосфатизомеразу.

22. Способ по п. 10, отличающийся тем, что одновременно ослабляют ген pck, кодирующий фосфоенолпируваткарбоксикиназу.