RU2000130809A

RU2000130809A - Новые кодирующие нуклеотидные последовательности гена zwa1

Info

Publication number: RU2000130809A
Application number: RU2000130809/13A
Authority: RU
Inventors: Беттина МЕККЕЛЬ; Вальтер ПФЕФФЕРЛЕ; Ахим МАРКС; Йерн КАЛИНОВСКИ; Бригитте БАТЕ; Альфред ПЮЛЕР
Original assignee: Дегусса Аг
Priority date: 1999-12-09
Filing date: 2000-12-08
Publication date: 2003-01-10

Claims

1. Выделенный полинуклеотид, содержащий полинуклеотидную последовательность, выбранную из группы, включающей:
а) полинуклеотид, идентичный по крайней мере на 70% полинуклеотиду, кодирующему полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2,
б) полинуклеотид, кодирующий полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, идентичную по крайней мере на 70% аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 2,
в) полинуклеотид, комплементарный полинуклеотидам, указанным в подпункте а) или б), и
г) полинуклеотид, содержащий по крайней мере 15 последовательных пар оснований полинуклеотидной последовательности, указанной в подпункте а), б) или в).

2. Полинуклеотид по п. 1, который представляет собой реплицируемую в коринебактериях, предпочтительно рекомбинантную, ДНК.

3. Полинуклеотид по п. 1, который представляет собой РНК.

4. Полинуклеотид по п. 2, содержащий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1.

5. Реплицируемая ДНК по п. 2, которая включает:
(I) нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1, или
(II) по крайней мере одну последовательность, которая соответствует последовательности, указанной в подпункте (I), в пределах вырожденности генетического кода, или
(III) по крайней мере одну последовательность, которая гибридизуется с последовательностями, комплементарными последовательностям, указанным в подпункте (I) или (II), и при необходимости
(IV) функционально нейтральные смысловые мутации в последовательности, указанной в подпункте (I).

6. Вектор, содержащий полинуклеотид по п. 1, прежде всего pCR2.1zwalexp, отличающийся тем, что он имеет рестрикционную карту, приведенную на чертеже, и депонирован в Е. coli под регистрационным номером DSM 13115.

7. Служащие в качестве клеток-хозяев коринебактерии, которые содержат вектор по п. 6 или в которых усилен ген zwal.

8. Способ получения L-аминокислот, прежде всего L-лизина, отличающийся тем, что осуществляют следующие стадии:
а) ферментацию с использованием продуцирующих целевую L-аминокислоту бактерий, в которых по крайней мере усиливают ген zwal,
б) накопление целевого продукта в среде или в клетках бактерий и
в) выделение L-аминокислоты.

9. Способ по п. 8, отличающийся тем, что применяют бактерии, в которых дополнительно усиливают другие гены пути биосинтеза целевой L-аминокислоты.

10. Способ по п. 8, отличающийся тем, что применяют бактерии, в которых по крайней мере частично подавляют пути обмена веществ, препятствующие образованию L-лизина.

11. Способ по любому из пп. 8-10, отличающийся тем, что применяют коринебактерии, продуцирующие L-лизин.

12. Способ по п. 8, отличающийся тем, что для получения L-лизина осуществляют ферментацию с использованием бактерий, в которых одновременно усиливают, прежде всего сверхэкспрессируют или амплифицируют, один или несколько генов, выбранных из группы, включающей
12.1. ген dapA, кодирующий дигидродипиколинат-синтазу,
12.2. ген lysC, кодирующий устойчивую в отношении обратной связи аспартаткиназу,
12.3. ген dapD, кодирующий тетрадигидродипиколинат-сукцинилазу,
12.4. ген dapE, кодирующий сукцинилдиаминопимелат-десукцинилазу,
12.5. ген gap, кодирующий глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназу,
12.6. ген рус, кодирующий пируваткарбоксилазу,
12.7. ген mqo, кодирующий малат-хинон-оксидоредуктазу,
12.8. ген lysE, кодирующий экспорт лизина.

13. Способ по п. 8, отличающийся тем, что для получения L-лизина осуществляют ферментацию с использованием бактерий, в которых одновременно ослабляют один или несколько генов, выбранных из группы, включающей
13.1. ген рск, кодирующий фосфоенолпируват-карбоксикиназу,
13.2. ген pgi, кодирующий глюкозо-6-фосфатизомеразу.

14. Способ по любому из пп. 8-13, отличающийся тем, что применяют микроорганизмы вида Corynebacterium glutamicum.

15. Применение полинуклеотидных последовательностей по п. 1 или их частей в качестве гибридизационных зондов для выделения кДНК, кодирующей генный продукт Zwal.

16. Применение полинуклеотидных последовательностей по п. 1 или их частей в качестве гибридизационных зондов для выделения кДНК или генов, обладающих высоким сходством с последовательностью гена zwal.