RU2000123636A - Новые кодирующие нуклеотидные последовательности гена pg1 - Google Patents

Claims (17)

1. Выделенный полинуклеотид, содержащий полинуклеотидную последовательность, выбранную из группы, включающей а) полинуклеотид, идентичный по крайней мере на 70% полинуклеотиду, кодирующему полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2, б) полинуклеотид, кодирующий полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, идентичную по крайней мере на 70% аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 2, в) полинуклеотид, комплементарный полинуклеотидам, указанным в подпункте а) или б), и г) полинуклеотид, содержащий по крайней мере 15 последовательных пар оснований полинуклеотидной последовательности, указанной в подпункте а), б) или в).

2. Полинуклеотид по п. 1, который представляет собой реплицируемую, предпочтительно рекомбинантную ДНК.

3. Полинуклеотид по п. 1, который представляет собой РНК.

4. Полинуклеотид по п. 2, который содержит нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1.

5. Полинуклеотид по п. 2, который кодирует полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2.

6. Вектор, содержащий полинуклеотид по п. 1, подпункт г), прежде всего рМС1, депонированный в штамме Е. coli DSM 12969.

7. Коринебактерии, служащие в качестве клетки-хозяина и содержащие вектор по п. 6.

8. Способ увеличения интенсивности метаболизма в пентозо-фосфатном пути в коринебактериях, заключающийся в том, что полинуклеотид по п. 1 ослабляют, прежде всего осуществляют экспрессию с низким уровнем или исключают, и проводят ферментацию с использованием указанных бактерий.

9. Способ по п. 8, в котором осуществляют ферментацию с использованием коринебактерий, которые продуцируют нуклеотиды, витамины и прежде всего L - аминокислоты.

10. Способ по п. 8, в котором снижают экспрессию полинуклеотида по п. 1.

11. Способ по п. 8, в котором снижают каталитические свойства полипептида (протеина фермента), кодируемого полинуклеотидом по п. 1.

12. Способ по п. 8, в котором достигают ослабления с помощью метода интеграционного мутагенеза с использованием плазмиды рМС1, представленной на фиг. 2 и депонированной под регистрационным номером DSM 12969.

13. Способ по п. 9, в котором нуклеотиды продуцируют с использованием ферментирующих бактерий, в которых одновременно сверхэкспрессируют а) ген purF, кодирующий глутамин-РКРР-амидотрансферазу, и/или б) ген carAB, кодирующий карбамоилфосфатсинтазу.

14. Способ по п. 9, в котором L-лизин продуцируют с использованием ферментирующих бактерий, в которых одновременно сверхэкспрессируют ген dapA, кодирующий дигидропиколинат-синтазу, и/или одновременно сверхэкспрессируют ген gdh, кодирующий глутаматдегид-рогеназу, и/или одновременно амплифицируют фрагмент ДНК, обусловливающий устойчивость к S-(2-аминоэтил)цистеину.

15. Способ по п. 9, в котором L-триптофан продуцируют с использованием ферментирующих бактерий, в которых одновременно сверхэкспрессируют ген tkt, кодирующий транскетолазу, и/или одновременно сверхэкспрессируют ген prs, кодирующий фосфорибозил-пирофосфатсинтазу.

16. Способ получения нуклеотидов, витаминов или L-аминокислот, отличающийся тем, что осуществляют следующие стадии: а) ферментацию с использованием микроорганизмов по любому из предыдущих пунктов, в которых по крайней мере ген pgi ослабляют или выключают, необязательно в сочетании с усилением других генов, б) накопление требуемого продукта в среде или в клетках микроорганизмов и в) выделение продукта.

17. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что используют микроорганизмы вида Corynebacterium glutamicum.