Claims (17)
1. Выделенный из коринебактерий полинуклеотид, содержащий полину клеотидную последовательность, выбранную из группы, включающей: а) полинуклеотид, идентичный по крайней мере на 70% полину клеотиду, кодирующему полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2, б) полинуклеотид, кодирующий полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, идентичную по крайней мере на 70% аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 2, в) полинуклеотид, комплементарный полину клеотидам, указанным в подпункте а) или б), и г) полинуклеотид, содержащий по крайней мере 15 последовательных пар оснований полинуклеотидной последовательности, указанной в подпункте а), б) или в).1. A polynucleotide isolated from corynebacteria containing a polynucleotide sequence selected from the group comprising: a) a polynucleotide identical to at least 70% polynucleotide encoding a polypeptide that contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2, b) a polynucleotide encoding a polypeptide that contains an amino acid sequence identical to at least 70% of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2, c) a polynucleotide complementary to polynucleotide indicated annym in a) or b), and d) polynucleotide comprising at least 15 consecutive base pair polynucleotide sequence given in a), b) or c).
2. Полинуклеотид по п. 1, который представляет собой предпочтительно рекомбинантную ДНК, способную к репликации в коринебактериях. 2. The polynucleotide according to claim 1, which is preferably a recombinant DNA capable of replication in corynebacteria.
3. Полинуклеотид по п. 1, который представляет собой РНК. 3. The polynucleotide according to claim 1, which is an RNA.
4. Полинуклеотид по п. 2, содержащий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1. 4. The polynucleotide according to claim 2, containing the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 1.
5. Способная к репликации ДНК по п. 2, которая включает: (I) нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1, или (II) по крайней мере одну последовательность, которая соответствует последовательности, указанной в подпункте (I), в пределах вырожденности генетического кода, или (III) по крайней мере одну последовательность, которая гибридизуется с последовательностью, комплементарной последовательности, указанной в подпункте (I) или (II), и необязательно (IV) функционально нейтральные смысловые мутации в последовательности, указанной в подпункте (I). 5. Able to replicate DNA according to claim 2, which includes: (I) the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 1, or (II) at least one sequence that corresponds to the sequence specified in subparagraph (I), within the degeneracy of the genetic code, or (III) at least one sequence that hybridizes with the sequence complementary to the sequence specified in subparagraph (I) or (II), and optionally (IV) functionally neutral sense mutations in the sequence specified in subparagraph unte (I).
6. Полинуклеотидная последовательность по п. 2, кодирующая полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2. 6. The polynucleotide sequence of claim 2, encoding a polypeptide that contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2.
7. Способ ферментативного получения L-аминокислот, прежде всего L-лизина, отличающийся тем, что осуществляют следующие стадии: а) ферментацию с использованием продуцирующих L-лизин коринебактерий, в которых усиливают, прежде всего сверхэкспрессируют, по крайней мере ген eno или его кодирующие нуклеотидные последовательности, б) накопление L-аминокислоты в среде или в клетках бактерий и в) выделение L-аминокислоты. 7. A method for the enzymatic production of L-amino acids, especially L-lysine, characterized in that the following steps are carried out: a) fermentation using L-lysine-producing corynebacteria, in which at least the eno gene or its coding is overexpressed, nucleotide sequences, b) the accumulation of L-amino acids in the medium or in bacterial cells, and c) the isolation of L-amino acids.
8. Способ по п. 7, отличающийся тем, что применяют бактерии, в которых дополнительно усиливают другие гены пути биосинтеза целевой L-аминокислоты. 8. The method according to p. 7, characterized in that bacteria are used in which other genes of the biosynthesis pathway of the target L-amino acid are additionally enhanced.
9. Способ по п. 7, отличающийся тем, что применяют бактерии, в которых по крайней мере частично подавляют пути обмена веществ, которые снижают образование L-лизина. 9. The method according to p. 7, characterized in that bacteria are used in which at least partially inhibit metabolic pathways that reduce the formation of L-lysine.
10. Способ по п. 7, отличающийся тем, что применяют штамм, трансформированный плазмидным вектором, причем этот плазмидный вектор несет кодирующую нуклеотидную последовательность гена eno. 10. The method according to p. 7, characterized in that apply a strain transformed with a plasmid vector, and this plasmid vector carries the coding nucleotide sequence of the eno gene.
11. Способ по любому из пп. 7-10, отличающийся тем, что применяют коринебактерии, продуцирующие L-лизин. 11. The method according to any one of paragraphs. 7-10, characterized in that the use of corynebacteria producing L-lysine.
12. Способ по п. 8, отличающийся тем, что одновременно сверхэкспрессируют ген dapA, кодирующий дигидродипиколинатсинтазу. 12. The method according to p. 8, characterized in that at the same time overexpressing the dapA gene encoding dihydrodipicolinate synthase.
13. Способ по п. 8, отличающийся тем, что одновременно амплифицируют фрагмент ДНК, обусловливающий устойчивость к S-(2-аминоэтил)цистеину. 13. The method according to p. 8, characterized in that the DNA fragment amplifying resistance to S- (2-aminoethyl) cysteine is simultaneously amplified.
14. Способ по п. 8, отличающийся тем, что одновременно сверхэкспрессируют ген gap, кодирующий глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназу. 14. The method according to p. 8, characterized in that at the same time overexpressing the gap gene encoding glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase.
15. Способ по п. 8, отличающийся тем, что одновременно сверхэкспрессируют ген tpi, кодирующий триозофосфатизомеразу. 15. The method according to p. 8, characterized in that at the same time overexpress tpi gene encoding triosophosphatisomerase.
16. Способ по п. 8, отличающийся тем, что одновременно сверхэкспрессируют ген pgk, кодирующий 3-фосфатглицераткиназу. 16. The method according to p. 8, characterized in that at the same time sverkhekspressiya pgk gene encoding 3-phosphate glycerate kinase.
17. Способ по п. 8, отличающийся тем, что одновременно сверхэкспрессируют ген рус, кодирующий пируваткарбоксилазу. 17. The method according to p. 8, characterized in that at the same time overexpressing the gene rus encoding pyruvate carboxylase.