PT88260B - Processo para a preparacao de derivados de imidazopiridazina com actividade citotoxica - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO

DA

PATENTE DE INVENÇÃO

N.° 88 260

REQUERENTE: THE WELLCOME FOUNDATION LIMITED .britânica, industrial e comercial,com sede em 183-193 Euston Road, London NW1 2BP, Inglaterra.

EPÍGRAFE: PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE DERIVADOS DE

IMIDAZOPIRIDAZINA COM ACTIVIDADE CITOTOXICA

INVENTORES: Simon Teanby Hodgson.

Reivindicação do direito de prioridade ao abrigo do artigo 4.° da Convenção de Paris de 20 de Março de 1883.

Reino Unido em 15 de Agosto de 1987,sob ο η?. 8719368.

INPI. MOO. 113 R F 18732

Descrição referente à patente de invenção de THE WELLCOME FOUNDATION LIMITED, britânica, industrial e comercial, com se de em 103—193 Euston Road, Lon don NW1 2BP, Inglaterra, (inventor ί Simon Teanby Hodgson, residente na Inglaterra), para PROCESSO PARA A PREPARAÇAO DE

DERIVADOS DE IMIDAZOPIRIDAZINA

COM ACTIVIDADE CITOTÓXICA.

DESCRIÇÃO

A presente invenção refere-se a compostos heterocíclicos que se observou terem actividade citotóxica· Mais especificamente, a invenção refere—se a derivados de imidazo— piridazina, processos para a sua preparaçao, formulações farmacêuticas que os contêm e à sua utiiizaçao como agentes cito tóxicos, em particular, como agentes antitumores.

A investigação na área da quimioterapia do cancro ptoporcionou diversos agentes antitumores, que têm graus de eficécia diferentes. Os agentes correntes utilizados clinicamente incluem adriamicina, actinomicina D, metotrexato, 5—fluoruracilo, cis—platina, vincristina e vinblastina. No en tanto, sabe—se que estes agentes antitumores presentemente disponíveis têm vários inconvenientes, por exemplo, toxicidade em relaçao a células saudáveis e resistência a certos tipos de tumor.

Sabe-se que a vincristina, além de ter acti—

vidade antitumoresi ê um inibidor da função microtubular. Outros compostos que possuem actividade inibitória da função mi crotubuia e foram indicados como sendo agentes antitumores po tenciaiS) sao nocodazole, tubulazoie e NSC - 181928}

nocodazole

NSC-181928

Contudo, nenhum destes compostos foi ainda comprovado clinicamente.

Continua, portanto, a existir a necessidade de novos e melhores agentes antitumores.

A Requerente descobriu agora uma nova classe de derivados de imidazopiridazina que manifestam uma potente actividade antitumores.

I

De acordo com um primeiro aspecto» a presente invenção proporciona um composto com a fórmula geral (I)

na qual r! representa um grupo arilo carbocfclico ou heteroc!clico opcionalmente substituido, ou um grupo alquilo, alcenilo, ci cioalquilo ou cicloalcenilo opcionalmente substituidoJ

R representa um grupo alquilo, alcenilo, alcinilo, cicloalquilo ou cicloalcenilo opcionalmente substituido, ou um grupo arilo ou aralquilo carbocíclico ou heteroc!clico opcionalmente substituidoi β

R^ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo» e

X representa um átomo de oxigénio ou enxofre, um grupo —CH 44 , ,² ou um grupo NR em que R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo em e

Y representa um grupo -CH^- ou -CH₂CH₂~ ou

X—Y em conjunto, representam o grupo —CH=CH—j e os seus sais e derivados fisiologicamente aceitáveis.

Com referência aos grupos R e R da fórmula geral (I), um grupo arilo caebocíclico pode conter 6 ou 10 membros no anel, por exemplo fenilo e naftilo, e contêm pelo menos um anel aromático. Um grupo arilo heterocíclico pode con ter 5—10 átomos no anel, um dos quais, pelo menos, ê um hete— roátomo. O anel heterociclico contêm em geral 1—4 heteroáto— mos escolhidos de entre azoto, oxigénio e enxofre. Exemplos ’ de anéis heterociclicos apropriados incluem os anéis de tieni • lo, furilo, piridilo, indol e quinolina.

Os substituintes que podem estar presentes no grupo arilo carbocíclico ou heterocíclico incluem alquilo em

C_± θ! alcoxi em (que podei por sua vez, ser opcionalmente substituido por um grupo alcoxi em C ou alcoxi em C -L— & JL — —alcoxi em C ), halogêneo (por exemplo flúor, cloro ou bromo), amino (opcionalmente substituido por um ou dois grupos alquilo em ^), haloalquilo em (por exemplo trifluoro— metilo), alquiltio em carboxi, alcoxi em ^-carbonilo, —SOgH, ciano e fenilo. 0 grupo arilo carbocíclico ou heterocí clico pode apropriadamente possuir i a 4 substituintes.

Salvo indicaçao em contrário, os grupos alqui ^— io R e R presentes na fórmula geral (l) podem ser grupos al quilo de cadeia linear ou ramificada e podem conter 1-10 átomos de carbono, por exemplo, 3—1θ átomos de carbono. Um grupo alcenilo ou alcinilo pode conter 2—10 átomos de carbono, por exemplo 3—10 átomos de carbono. Um grupo cicloalquilo ou ci— cioaicenilo pode conter 3“1θ átomos de carbono. Os substituin tes que podem estar presentes num grupo alquilo, alcenilo, ai cinilo, cicloalquilo ou cicloalcenilo incluem átomos de halo— gêneos, grupos alcoxi em hidroxi, amino (opcionalmente substituidos por um ou dois grupos alquilo em )> halogeno alquilo em (por exemplo trifluormetilo), alquiltio em

Ci carboxi, alcoxi em ’ carbonilo —SO^H e ciano.

Quando R representa um grupo aralquilo, este pode conter 1 a 4 átomos no agrupamento alquilo e o agrupamen to arilo pode ser um grupo arilo carbocíclico ou heterocícli— 1 2 co como definido acima para R e R .

Quando R representa um grupo alquilo, este contêm de preferência mais de dois átomos de carbono, por exem pio, alquilo em _r.

^M 3-b

Quando R representa um grupo alquilo, este contém de preferência 1 a 6 átomos de carbono, por exemplo la 4 átomos de carbono.

4

Quando R ou R representam um grupo alquilo, este pode ser de cadeia linear ou ramificada e pode conter 1 a 4 átomos de carbono.

Alguns compostos da fórmula (I) podem formar sais. Assim, compostos (I) que contêm um grupo amino básico podem formar sais com ácidos e compostos que contêm um grupo ácido podem formar sais com bases.

Os sais de adiçao de ácido apropriados incluem os formados a partir de ácidos clorídrico, bromídrico, azóti— co, perclórico, sulfúrico, cítrico, tartárico , fosfórico, láctico, benzóico, glutâmico, oxálico, aspártico, piróvico, acá tico, succínico, fumárico, maleico, oxaloacético, isetiónico, esteárico, ftálico, metanossulfónico, p-toluenossulfónico, benzenossulfónico, lactobiónico e glucurónico. Os sais deriva dos de bases apropriados incluem sais de bases inorgânicas, por exemplo, sais de metais alcalinos (por exemplo, sódio e potássio) e sais de metais alcalino—terrosos (por exemplo cál cio); sais de bases orgânicas, por exemplo sais de feniletilbenzilamina, dibenzilenodiamina, etanolamina e dietanolaminaj e sais de aminoácidos, por exemplo lisina e arginina. Mais preferivelmente, os sais serão farmaceuticamente aceitáveis.

Nos compostos da fórmula geral (I), R representa de preferência um grupo fenilo ou naftilo opcionalmente substituido, um grupo arilo heterocíclico com 5 ou 6 membros opcionaimente substituido, que contêm 1 a 4, por exemplo 1 ou 2 heteroátomos escolhidos entre azoto, oxigénio e enxofre. Os substituintes preferidos que podem estar presentes no grupo R incluem alcoxi em alquilo em , e grupos mono— al —amino e átomos de xcia um grup lo nao substituido, por exemplo um grupo alquilo em C quilo em amino, ou di—alquilo em ai halogéneo. R representa ainda de preferência um grupo alqui— '3-6*

Λ

R representa de preferencia um grupo fenilo ou um grupo alquilo em opcionalmente substituido^ Os

- 5 substituíntes preferidos que podem estar presentes no grupo

R incluem haiogenoalquiio em (por exemplo trifluormetiio), alcoxi em hidroxi, halogéneo, mono—alquil em —amino ou di—alquilo em amino e grupos heterocíclicos com 5 ou 6 membros ligados ao azoto (por exemplo morfolino, . 2 _z piperidino, pirrolidino). Valtajosamente, R e um grupo alqui io em C/

Rde preferência hidrogénio ou metilo.

Y representa de preferência —CH^—· 0 grupo

-Y—X- representa de preferência —CH Q—, -CHS-, —CH CH - ou £» ti· i i —CH=CH-.

Um grupo de compostos da fórmula (I) particularmente preferido é constituído por aqueles em que R⁴ repre senta um grupo fenilo ou naftilo que pode ser substituido por 1 a 4 substituíntes escolhidos entre alcoxi em C^ (por exem pio metoxi ou etoxi), alquilo em C^ (por exemplo metilo, etilo, n—propilo, i—propilo, n—butilo ou t-butilo) e halogéneo (por exemplo bromo ou cloro).

,

R representa um grupo alquilo em (de pre ferência metilo ou etilo)} o _z

R^ representa hidrogénio ou metilo} e

Y—X representa o grupo —CH^O—} e os seus sais e derivados fisiologicamente aceitáveis.

Os compostos de acordo com a presente invenção, particularmente preferidos com base na sua actividade, incluem '·

N-/5-(3,4,5-trimetoxibenziloxi)imidazo/l,2—b7piridazin-2-i1/carbamato de metilo.

Ν—/δ—(3 » 5-dimetoxibenziloxi)imidazo/ΐ ,2-b/piri dazin— 2—ii/carbamato de metilo»

N- /δ-(2,5-dimet oxibenziloxi)imidazo/ΐ » 2—b/piri dazin—2-i í7car— bamato de metilo »

Ν—/δ—(1—naftilmetiloxi)imidazo/ΐ , 2—b/piridazin—2—il/carbamato de metilo ,

Ν—/δ—(3-metilbenziloxi)imidazo/ΐ , 2—b/piridazin—2—i i/carbamato de metilo,

N—/b-(2 , 3“dimetoxibenziloxi)imidazo/ΐ , 2-b7piridazin—2-il7carbaraato de metilo»

Ν /δ—(2 » 5—dimetiibenziloxi)imidazo/l,2—b/piridazin-2-i1/carba mato de metilo»

Ν—/δ-2,5—dimetoxibenziloxi)imidazo/ΐ» 2-b/piridazin-2-il7carba mato de etilo»

Ν—/δ—(3 »4 >5-trimetoxibenziloxi)imidazo/l» 2—b7piridazin-2—il7carbamato de etilo»

N—met ii—Ν—/δ—(3 »4»5-trimetoxibenziloxi)imidazo/ΐ,2—b7pirida— zin—2—il7carbamato de metilo,

Ν—/δ— ( 2—bromo— 3 »4,5—tr imet oxi benzi loxi ) itni da ζο/ΐ , 2-b/pirida— zin—2—il/carbamato de metilo,

Ν—/δ—(3 »4,5—trimetoxibenziloxi)imidazo/ΐ,2—b7piridazin—2—il7— carbamato de n—propilo,

Ν—/δ—(3,4,5—trimetoxibenziloxi)imidazo/ΐ,2—b/piridazin-2-i1/— carbamato de n-butilo,

Ν—/δ—(3 >4,5—trimetoxibenziloxi)imidazo/ΐ,2—b7piridazin—2-il/carbamato de 2—metoxietilo,

Ν—/δ-(3 , 5-dimetoxi-4—etoxibenziloxi)imidazo/ΐ,2—b7piridazin—2—ii/carbamato de metilo e os seus derivados fisiologicamente funcionais.

Os compostos de acordo com a presente invenção têm actividade citotóxica, isto ê, sao tóxicos para certas células vivas que sao prejudiciais a mamíferos, por exem—

células de tumores

A actividade anti—tumores de compostos da fór mula geral (i) foi demonstrada em vários ensaios padrao tanto in vitro como in vivo, principalmente por actividade contra linhas de células leucêmicas murídeasj por exemplo» P388.

Assim, verificou—se que compostos da fórmula geral (I) manifestam potente actividade antitumores contra P388 in vitro em ensaios de proliferação e em ensaios mais ri gorosos de formaçao de colonias. In vivo, compostos de acordo com a invenção efectuaram uma redução do número de células de tumor em ratos atacados por tumores ascíticos de leucemia P388 e um aumento consequente da duraÇao de sobrevivência em comparaçao com um grupo de controlo atacado por tumores nao tratado s.

A actividade no ensaio de tumores in vivo padrao foi considerada uma indicaÇao de actividade antitumor no homem (A. Goldin et a 1. , em Methods in Câncer Research, ed. V.T. DeVita Jr. e H. Bush, 16 198—199, Academic Press, N.Y. 1979).

Verificou—se também que compostos de acordo com a invenção interferem com a função tubulina, conforme é posto em evidência pela inibição de polimerização de tubulina in vitro.

Já foi indicado anteriormente que os compostos que actuam como inibidores de microtúbulos parecem bloquear a migraçao direccional de células de tumor. Afigura—se^ portanto, que os compostos da presente invenção terão proprie dades anti—invasivas e antimetastáticas.

Além das propriedades descritas acima, verifi cou-se que vários compostos preferidos da invenção manifestam actividade contra diversas linhas de células de tumores humanos in vitro (DLD—1 de carcinoma do cólon humano, WiDr de ade

- 8 1 nocarcinoma do cólon humano, HCT—lló de carcinoma do cólon hu mano e A5^9 de carcinoma do pulmão humano) o que indica que os compostos têm um amplo espectro de actividade antitumores.

Um composto particularmente preferido com base na sua actividade ê Ν-/δ-(3»4,5-trimetoxibenziloxi)imidazo /1,2-b/p iridazin—2-il/carbamato de metilo e os seus derivados fisiologicamente funcionais. Verificou—se também que este composto manifesta boa actividade contra vários tumores murí— deos in vivo (Bi6 de meianoma e L1210 de leucemia. Alêm disso, verificou-se também que manifestava vantajosamente uma boa actividade in vivo contra estirpes de */388 que sao resistentes aos principais agentes anti—tumores utilizados clinicamen te, incluindo ciciofosfamida, metotrexato, actinomicina D, vincristina, adriamicina, 5-fluor—uracilo, cis—platina, bis— —cloronitroso—ureia e ansacrina. Admite—se que os tumores resistentes à adriamicina, vincristina e actinomicina D sao de facto resistentes a uma grande variedade de medicamentos anti tumores.

Sem se pretender ficar limitado por uma teoria, admite—se que certos compostos de acordo com a invenção actuam como pró—medicamentos. Assim, compostos da fórmula (i) na quai R^J ê um grupo alquilo têm uma actividade in vivo mais intensa do que se esperaria com base na sua actividade in vitro e supoe—se que sao transformados in vivo num composto da fórmula (i) na qual R^ ê hidrogénio.

De acordo com outro aspecto, a presente inven çao proporciona também um processo para a preparaçao de compostos da fórmula geral (I), caracterizado por compreender!

(A) a reacçao de um derivado de piridazina da fórmula gerai (II)

(II)

- 9 (na qual R , X e Y têm as significações anteriormente indicadas) com um composto da fórmula geral (III)

R³ zch₂conco₂r² (III) na qual R e R^J têm as significações anteriormente indica das e Z representa um átomo de halogéneo, por exemplo, um átomo de cloro ou de bromo)} ou (B) a reacçao de um derivado de piridazina da fórmula geral (IV)

(IV)

3 λ ~ (na qual R e R^ têm as significações anteriormente indicadas e Ά representa um grupo facilmente separável, por exemplo, um átomo de halogéneo ou um grupo sulfonato, por exemplo, metanossulfonato ou p—toluenossulfonato) com um composto da fórmula geral (V)

RⁱCH X^H

4* feia qual R tem as significações anteriormente indicadas e χΐ representa um átomo de oxigénio ou de enxofre ou um gru po NR que tem a significação anterior).

(C) a reacçao de um composto da fórmula (VI) 0

-CN.

R^J

(VI) com um álcool R OH apropriado} (D) a reacçao de um composto da fórmula (VII)

R‘

NH, (VII) com um reagente que serve para introduzir o grupo — CO^R .

(E) a transformaçao de um composto da fórmula (I) noutro composto da fórmula (I), por exemplo» por permutação de um grupo de esterificaÇao R por um grupo de esterificaçao ~ ,

R diferente» ou por alquilaçao de um composto com a for— mula (I) na qual R^ representa hidrogénio; em seguida, se assim se desejar e/ou for apropriado, por formaçao de sal.

processo geral (A) pode efectuar-se de maneira conveniente num dissolvente aprótico, por exemplo, dimetilformamida, 1,3-dimetilimidazolidinona ou hexametilfosforamida, e a uma temperatura nao extrema, por exemplo entre 5θ e 120°C.

Podem preparar—se compostos de fórmula geral (II), na qual X representa um átomo de oxigénio ou de enxofre ou um grupo NR , por meio da reacçao de um álcool apropriado, tiol ou amina com a fórmula (V) de acordo com a significação anteriormente indicada, com um composto de fórmula (VIII):

NH, (VIII) (na qual Z^ t em as significações anteriormente indicadas.

A reacçao efectua-se em geral na presença de uma base, por exemplo t-butóxido de potássio, num dissolvente como dimetoxietano. As bases e dissolventes alternativos que podem ser utilizados nesta reacçao incluem hidreto de sódio num dissolvente aprótico, por exemplo dimetilformamida ou sul fóxido de dimetilo e metóxido ou etóxido de sódio num álcool, por exemplo metanol ou etanol, ou num dissolvente aprótico co mo os mencionados acima.

Podem preparar-se compostos da fórmula (II) na quai X e Y em conjunto representam o grupo -CH=CH— a partir de um composto da fórmula (IX), por meio de reacções sucessivas com um agente halogenante como tricioreto fosforoso e amoníaco.

(IX) (IXA) (IIA) por meio da pentanôico cooi aquoso ácidas para

Podem preparar—se compostos da fórmula (IX) reacçao de um arilaideído R^CHO com ácido 3~ο^χο— ácido levulínico) na presença de uma base em ái— seguido por reacçao com hidrazina em condiçoes se obter um composto da fórmula (X)

(X) que pode ser desidrogenado, por exemplo com o emprego de díó— xido de selénio num álcool, por exemplo etanol, para se obter um composto da fórmula (IX).

Quando se deseja preparar compostos da fórmula (II), na qual X e Y sao ambos grupos metileno, o agrupamen to etenilo do composto de fórmula (IX) ou (X) pode ser primei ramente reduzida, por exemplo por meio de hidrogenação catalí tica com o emprego, por exemplo, de paládio sobre carvao vege tai.

Podem preparar—se compostos da fórmula (III) • por meio da reacçao da halogenoacetamida correspondente da fór . mula (XI)

ZCH CONH (XI)

Z 2 com cloreto de oxalilo, e um álcool R OH, segundo processos conhecidos na técnica.

Podem preparar-se álcoois da fórmula geral (V) a partir dos ácidos carboxílicos ou carboxaideídos correspondentes, aplicando processos normais, por exemplo por meio de redução com boro-hidreto de sódio num dissolvente como metanol ou etanol, ou com alumínio-hidreto de lítio num dissoiven te como éter dietílico ou tetrahidrofurano.

Pode preparar—se um diol da fórmula gerai (V) 13 3 a partir do correspondente halogeneto R CH₂Z^ (na qual Z^ ê um átomo de halogéneo) por meio de reacçao com tio—ureia num dissolvente como etanol, para se obter um sal de isotio—uró— nio correspondente, e hidrólise subsequente, por exemplo, com solução de hidróxido de sódio.

Podem preparar—se aminas da fórmula geral (V) de maneira convencional, por meio de reacçao de um halogeneto correspondente com amoníaco.

A reacçao de um composto da fórmula geral (IV) com um composto da fórmula geral (V) de acordo com o processo (B) efectua—se em geral na presença de uma base. As bases apro priadas incluel aicóxidos de metais alcalinos, por exemplo me tóxido , etóxido ou t—butóxido de sódio ou de potássio. A re^ic çao pode efectuar—se de maneira conveniente num dissolvente, por exemplo dimetoxietano} um álcool, por exemplo metanol ou etanol, ou um dissolvente aprótico como dimetilformamida ou sulfóxido de dimetilo.

Podem preparar—se compostos da fórmula geral (IV) por meio da reacçao de um composto da fórmula (VII) com “

um composto da fórmula (III) procedendo de maneira análoga ao processo geral (A) descrito acima.

processo geral (C) pode ser efectuado por meio do aquecimento de um composto da fórmula (VI) a uma temperatura na gama de 80 a 150°C, opcionalmente na presença de ~ /2 um dissolvente, e reacçao com um álcool R OH.

Os dissolventes apropriados incluem dissolven tes orgânicos inertes, por exemplo hidrocarbonetos como benze 2 no ou tolueno. Alternativamente, o próprio álcool R OH pode actuar como dissolvente.

Crê—se que o processo (C) prossegue por meio de um derivado isocianato intermédio com a fórmula (XII).

R'

Y--X

N = C = 0 (XII)

Podem preparar—se derivados de acil—azida de fórmula (VI) a partir dos ácidos carboxilicos correspondentes por meio da formaçao de um derivado de ácido activado (poe exemplo, um halogeneto de ácido como um cloreto de ácido formado por meio de reacçao com um agente halogenante como clore to de oxaiilo, cloreto de tionilo ou pentacloreto de fósforo) seguida por reacçao com uma azida, por exemplo uma azida de metal alcalino, convenientemente numa solução de éter aquosa, por exemplo dioxano aquoso. Os derivados de ácido carboxílico correspondentes a compostos (VI) podem ser preparados, por sua vez, por meio da reacçao de um composto da fórmula (II) com broraopiruvato de etilo, em condiçoes analogas ao processo geral (A) acima, para se obter um éster, seguida por hidrólise para se obter o ácido desejado.

No processo (D), um reagente que serve para

introduzir o grupo — CO R pode ser o correspondente haiogeno— formiato, por exemplo um haiogenoformiato de alquilo como cio roformiato de metilo ou de etilo. Compostos da fórmula (VII), por sua vez, podem ser preparados a partir de um composto com a fórmula (I), por meio da separaçao de um grupo — COgR (preferivelmente um grupo eliminável como t-butoxicarbonilo) em condiçoes ácidas (utilizando, por exemplo, um ácido carboxíli co opcionalmente halogenado como ácido fórmico, clorofórmico ou trifluoracêtico), opcionalmente na presença de um dissolvente, por exemplo um hidrocarboneto halogenado como diclorometano. Assim, numa forma de realizaÇao particular do processo (D), um composto com a fórmula (I) pode ser transformado num composto diferente da fórmula (I), por meio da separaçao 2 de um grupo -CO R e de reacçao para introduzir um grupo 2 ²

-CO^R diferente conforme descrito acima.

A transformaçao de um composto da fórmula (I) num composto da fórmula (i) diferente de acordo com o processo gerai (E) pode ser efectuada, por exemplo, por meio da sub ~ 2 , ~ stituiçao de um grupo esterificador R no composto com a for2 mula (I) por um grupo R diferente, aquecendo um composto (I) com um álcool apropriado na presença de uma base, por exemplo um alcóxido de metal alcalino como t—butóxido de potássio, a uma temperatura na gama de 5θ a l80°C. Embora essa permuta de éster possa ser efectuada sob a forma de uma fase da reacçao separada, mas também pode ser convenientemente efectuada no decurso da reacçao entre um composto da fórmula (IV) com um composto (V) de acordo com o processo geral (B).

A intertransformaçao de acordo com o processo (E) também pode ser realizada por meio de alquilaçao de um composto no qual R³ ê um átomo de hidrogénio, para proporcio— nar um composto no qual R^ é um grupo alquilo. A alquilaçao pode ser efectuada de maneira convencional, por exemplo utili zando um halogeneto de alquilo, como iodeto de metilo ou iode to de etilo, na presença de uma base, por exemplo hidreto de sódio.

Os produtos intermediários com as fórmulas (II) a (XI) que sao novos formam um aspecto adicional da pse— sente invenção. Sao produtos intermediários preferidos os que têm as fórmulas (II), (IV) e (VI).

Os compostos da presente invenção sao úteis pa ra o tratamento de tumores. Podem ser utilizados no tratamento de várias formas de cancro, incluindo leucemias, linfomas, sarcomas e tumores sólidos.

A invenção proporciona também um processo para o tratamento de tumores em animais, incluindo mamíferos, especialmente seres humanos, o qual compreende a administração de uma quantidade clinicamente útil de um composto da fór mula (I) ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável ou de um derivado fisiologicamente funcional numa forma farmaceuticamente utilizável, uma ou várias vezes por dia ou em qualquer outro ritmo apropriado, administrada por via oral, rectal ou parentérica ou aplicada topicamente.

Além disso, ê proporcionado como um aspecto adicional ou alternativo da invenção, um composto da fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável ou um derivado fisiologicamente funcional para utiiizaçao em terapêutica, por exemplo como agente antitumores.

A quantidade de composto da fórmula (I) neces sária para ser eficaz como agente citotóxico será variável, evidentemente, e será decidida em última análise pelo médico ou peio veterinário em cada caso. Os factores a considerar in cluem o estado que está em tratamento, a via de administraçao e a natureza da formulação, o peso corporal do mamífero, a área de superfície, a idade e estado geral e o composto parti cular a administrar. Uma dose antitumores eficaz apropriada está dentro da gama de cerca de 0,01 atê cerca de 120 mg/kg de peso corporal, por exemplo 0,1 atê cerca de 120 mg/kg de peso corporal e, de preferência, na gama de cerca de 0,1 atê

mg/kg, por exemplo 0,5 a 5 mg/kg. A dose diária total pode ser administrada de uma sS vez ou várias vezes, por exemplo duas a seis vezes por dia ou por infusão intravenosa com a du raçao escolhida. Por exemplo, para um mamífero de 75 kgj a ga ma de dose seria de cerca de 8 atê 9000 mg por dia e uma dose típica poderia ser de cerca de 50 mg por dia. Se foram indica das doses descontinuas múltiplas, o tratamento poderá ser efe ctuado tipicamente com 15 mg de um composto da fórmula (I), administrados atê 4 vezes por dia.

Embora seja possível que o composto activo se ja administrado isoladamente, ê preferível administrar—se o ** Λ composto activo sob a forma de uma composição farmacêutica.

As formulações de acordo com a presente invenção, para uso me dicinai, compreendem um composto da fórmula (X) ou um seu sal em conjunto com uma ou mais substâncias veiculares farmaceuti camente aceitáveis e opcionalmente outros ingredientes terapêuticos. A(s) substância(s) veicuiar(es) deve(m) ser farma— ceuticamente aceitável(veis) no sentido de serem compatíveis com os outros ingredientes da formulação e nao serem prejudiciais para os pacientes.

A presente invenção, portanto, proporciona também uma formulação farmacêutica que compreende um composto da fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável ou um seu derivado fisiologicamente funcional conjuntamente som uma substância veicular farmaceuticamente aceitável para o me smo.

Proporciona—se também um processo para a preparaçao de uma formulação farmacêutica que compreende a asso— ciaçao de um composto da fórmula (I) ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável ou de um derivado fisiologicamente fun cional, com uma substância veicular farmaceuticamente aceitável para o mesmo.

As formulações de acordo com a presente inven çao incluem as apropriadas para administraçao por via oral,

tópica» rectal ou parentérica (incluindo a administraçao subcutânea» intramuscular e intravenosa). As formulações preferi das sao as apropriadas para administraçao por via oral ou pa— rentêrica.

As formulações podem ser apresentadas de maneira conveniente sob a forma de dose unitária e podem ser preparadas por qualquer dos processos conhecidos na técnica da farmácia. Todos os processos incluem a operaçao que consis te em associar o composto activo com uma substância veicular constituída por um ou mais ingredientes acessórios. Em gerai» as formulações sao preparadas por meio da associaçao uniforme e íntima do composto activo com uma substância veicular líqui da ou com uma substância veicular sólida finamente dividida ou ambas e depois» se for necessário» conferido ao produto a forma pretendida para as formulações finais.

As composiçoes farmacêuticas da presente in— vençao apropriadas para a administraçao por via orai podem ser apresentadas como unidades separadas tais como cápsulas» pílu las, comprimidos ou pastilhas» cada uma das quais contém uma quantidade previamente determinada do composto activo} ou sob a forma de pó ou de glândulos} ou sob a forma de solução ou de suspensão num liquido aquoso ou nao aquoso como xarope, elixir, emulsão ou bebida.

Pode fabricar—se um comprimido por meio de compressão ou moldaçao, opcionalmente com um ou mais ingredientes acessórios. Podem preparar—se comprimidos por meio de compressão numa máquina apropriada do composto activo sob uma forma capaz de escorrer livremente, por exemplo um pó ou grânulos, opcionalmente misturados com um agente ligante, agente lubrificante, diluente inerte, agente tensio—activo ou agente dispersante. Podem fabricar—se comprimidos moldados por meio da moldaçao numa máquina apropriada de uma mistura do composto activo em pó com qualquer substância veicular apropriada.

Pode fabricar—se um xarope por meio da adiçao do composto activo a uma solução aquosa concentrada de um açú car, por exemplo sacarose, à qual também se podem adicionar quaisquer ingredientes acessórios. Esse(s) ingrediente(s) acessório(s) podem incluir agentes aromatizantes, um agente para atrasar a cristalizaÇao do açficar ou um agente para aumentar a solubilidade de quaisquer outros ingredientes, por exemplo um álcool poli funcional como glicerol ou sorbitol.

As preparações para administraçao por via rec tal podem ser apresentadas como um supositório com uma substancia veicular convencional como manteiga de cacau.

As formulações apropriadas para a administração por via parentêrica compreendem convenientemente uma preparaçao aquosa esterilizada do composto activo que ê preferivelmente isotônica com o sangue do paciente. Essas preparações compreendem apropriadamente uma solução de um sal de adi çao de ácido farmacêutica e farmacològicamente aceitável de um composto da fórmula (I) que ê isotônica com o sangue do pa ciente.

As preparações óteis compreendem também soluções concentradas ou sólidas que contêm o composto da fórmula (I) que, depois da diluição com um dissolvente apropriado, originam uma solução para a administraçao por via parentêrica conforme indicado acima.

Alêm dos ingredientes mencionados anteriormen te, as formulações da presente invenção podem incluir também um ou mais ingredientes acessórios escolhidos entre diluentes, tampões, agentes aromatizantes, agentes ligantes, agentes ten sio—activos, agentes espessantes, lubrificantes, preservantes (incluindo anti—oxidantes), etc.

De acordo com um outro aspecto, a presente in vençao proporciona a utilização de um composto da fórmula (i) ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável ou de um derivado fisiologicamente funcional para a fabricaçao de um medicamento para o tratamento de tumores.

A invenção vai agora ser esclarecida pelos Exemplos nao limitativos seguintes.

Todas as temperaturas estão expressas em graus centígrados (°C).

Os espectros de ressonância magnética nuclear protónica foram obtidos numa máquina Bruker AH200 FT NMR ou Bruker HFX9O FT NMR.

Nas preparações e Exemplos usam—se as seguintes abreviaturas:

DME — dimetoxietano

DMEU — 1,3—dimetil—2—imidazolidona

LAH - alumínio-hidreto de lítio.

Preparaçao de Produtos Intermediários

Produto intermediário 1

3—Amino—6-( 3 >4,5—trimetoxibenziloxi)—piridazina

Adicionou-se álcool 3j4,5—trimetoxibeçzilico (Aldrich, 19,82 g, 0,1 mole), dissolvido em DME (20 ml) durante 15 minutos a uma suspensão de t—butóxido de potássio (11,22 g, 0,1 mole) em DME (80 ml) com agitaçao sob uma atmos fera de N e arrefecimento num banho de gelo. Decorridas 0,5 horas, a mistura foi tratada com 3~a<ⁿl^no~6—cloro—piridazina (Helv. Chim. Acta. 1954, 37, 121, J. Druey, Kd. Meyer e K.

Eichenberger) (12,95 g, 0,1 mole) e decorridas 1,5 horas foi aquecida atê refluxo durante 3 horas. A mistura foi arrefecida e filtrada e o sólido filtrado foi lavado com êter. 0 fil— trado foi evaporado in vacuo para proporcionar um óleo que foi repartido entre acetato de etilo e água. A fase orgânica foi lavada com água, seca (Nq£O^) e evaporada para proporcionar um óleo (A) que foi cromatografado sobre gel de sílica eluindo com 5% de metanol—clorofórmio. As fracções eluidas fo ram combinadas para se obter um óleo (B) que foi triturado com clorofórmio e éter di—isopropilico e originar o composto indi cado em título sob a forma de um sólido quase branco (9,44 g), p.f. = 142-4°} espectro de ressonância nuclear magnética!

$H (CDC1₃) 6,87 (JLH, J_ab8,8Hz 5-H), 6,78 (IH, J_ab8,8Hz, 4-h), 6,72 (2H, s, PhH), 5,30 (2H, s, CH₂), 4,45 (2H, br. s, NH₂),

3,87 (óH,s,OMe) e 3,84(3Η,s,OMe).

Produto intermediário 2

3-Amino—6-(2,5-dimetoxibenziloxi)piridazina

Adicionou—se álcool 2,5—dimetoxibenzílico (3θ,6 g, 0,182 mole) em DME (20 ml) a t—butóxido de potássio (20,38 g) 0,182 mole) em DME (6θ ml) mantendo em agitaçao numa atmosfera de N₂ e arrefecimento num banho gelado. Depois de 0,5 horas, tratou—se a mistura com 3^—amino—6—cloropiridazi na e, depois de 1,5 horas, aqueceu—se até refluxo durante 5 horas e, em seguida, arrefeceu-se e filtrou-se. Evaporou-se o filtrado in vacuo e repartiu—se entre acetato de etilo e água. Lavou-se a fase orgânica com água, secou—se (Na^SO/^) ® evaporou—se para se obter um sólido (A) que foi recristalizado em tolueno para se obter um sólido (B). Este foi cromatografado sobre gel de sílica, eluindo—se com 5% metanol—clorofórmio pa ra se obter o composto em título sob a forma de um sólido bran co (27 g)j p.f. = 94-94,5°; espectro de ressonância nuclear magnético ÓHÍCDCl^) 7,05 (lH, m, PhH), 6,90-6,73 (4H,m,ArH),

5,42 (2H,s,CH₂), 4,5 (2H,brs, NH₂), 3,78 e 3,75 (6H,s,0Me).

Produtos Intermediários 3 a 12

Prepararam-se os seguintes compostos a partir

do álcool apropriado» pelo processo geral descrito para os Produtos Intermediários 1 e 2:

(3) 3-Amino-6-(1-naftilmetiloxi)piridazinaj p.f. 143—144° ;

espectro de ressonância nuclear magnética 6™ (d^-DMSO) π o

8,00 (3H,m,naft Η) , 7,55 (4H,m,naft Η) , 6,97 (lH, J_o Atí

8,8Hz 4-H), 6,89 (IH, J_AB 8,8Hz 5-H), 6,0 (2H,s,CH₂) e 5,80 (2H,s,NH₂).

A partir de i-natilmetanoi, Aldrich) (4) 3-Amino-6-(3-metoxibenziloxi)piridazina, p.f. 55-60°; espectro de ressonância nuclear magnética _B (dg-DMSO) 7,38 (iH,dd, J8-4Hz,PhH), 7,13-6,89 (5«,m,ArH), 6,05 (2H,s,NH₂), 5,35 (2H,s,CH₂ e 3,82 (3H,s,0Me).

(5) 3~ Amino— 6— ( 3 , 5- dimetoxibenziloxi )piri dazina , p.f. 89—92°;

espectro de ressonância nuclear magnética (dg—DMSO)

6,88 (IH, J_AB 8,8Hz, 5-H), 6,75 (IH, J_AB 8,8Hz, 4-H),

6,62 (2H,d, 2'-H e 6’-H), 6,42 (1H,7,4'-H), 5,35 (2H,s, CH₂), 4,53 (2H,br.s, NH₂) e 3,75 (6H,s,0Me).

(6) 3—Amino—6—(3—metilbenziloxi)piridazina> espectro de ressonância nuclear magnética _B (dg—DMSO) 7,40-7,10 (4H, m,PhH), 6,90 (2H, J_Afi 8,8Hz, 4-H e 5-H), 5,91 (2H,br.s, NH₂), 5,17 (2H,s,CH₂) e 2,31 (3H,s,Me)j M/Z 215 (M⁺,

30%), 198 (9), 123 (23), 111(31) e 105(100).

(7) 3^-Amino-6—(3-dimetilaminobenziioxi)piridazina, p.f. 127— —129°i espectro de ressonância nuclear magnética (dg—

-DMSO) 7,25 (lH,t,5«-H), 7,00 (IH, J_4t5 8,8Hz, 4-H) , 6,92 (IH, J_AB 8,8Hz, 5-H), 6,90-6,70 (3H,tn, 2»-,4’- e 6'-H), 5,95 (2H,s,CH₂), 5,30 (2H,br,s,NH₂) e 2,98 (6H,s,NMe₂).

(A partir de álcool 3—dimetiiaminobenzílico, preparado por redução com LAH de ácido 3—dimetilaminobenzóico, Al— drich).

(8) 3-Amino—6—(2-metoxibenziloxi)piridazina, p.f. 166—168°;

espectro de ressonância nuclear magnética ú.. (CDC1 )

H 3

7,8 (lH,dd, J6,7 e 2,2Hz, PhH), 7,30 (lH,dd, J6,6 e

2,2Ηζ, PhH), 6,98 (iH,dt, J6,6Hz,PhH), 6,92 (1Η,d,J6,6Hz, PhH), 6,90 (1H,J_ab 8,8Hz, 5-H), 6,78 (IH, J_AB 8,8Hz,

4-h), 5,5 (2H,s,CH ), 4,42 (2H,br,s,NH₂) e 3,87 (3H,s, OMe).

(9) 3—Amino—6—/3,5—dimetoxi-(4—metoxietoximetoxi) benziloxi/piridazina, p.f. 110—114°} espectro de ressonância nuclear magnética <5^ (CDC1_O) 6,88 (IH, J_An 8,8Hz, 5—H),

AB

6,78 (IH, J_AD 8,8Hz, 4-H), 6,7 (2H,5,2'~ e 6--H), (2H, s,CH₂), 5,2 (2H,s,CH₂), 4,49 (2H,br,s,NH₂), 4,05 (2H,m, CH₂), 3,85 (6H,s,0Me), 3,61-3,51 (2H,m,CH₂) e 3,35 (3«, s , OM e ).

(10) 3-Amino-6-(3—clorobenziloxi)piridazina} espectro de ressonância nuclear magnética _b (d^—DMSO) 7,51-7,32 (4H, m,PhH), 6,91 (2H, J._n 8,8Hz, 4H e 5~H), 5,92 (2H,br.s,

Atí nh₂) e 5,34 (2H,s,CH₂); m/z 235 (M⁺, 68%), 218(10), 125 (65) e 97 (100).

(11) 3—Amino-6—(2—tienilmetiloxi)piridazina, p.f. 101—103°, espectro de ressonância nuclear magnética (d^—DMSO),

7,52 (iH,d,5'-H), 7,20 (lH,d,3'-H), 7,02 (IH,dd,4'-H),

6,94 e 6,85 (2H, J_AU 8,8Hz, 4-H e 5-H), 5,95 (2H,s,CH )e Ad Z

5,50 (2H,s,NH₂).

(12) 3-Amino-6-(3,4,5—trimetoxibenziltio)-piridazina foi preparada de acordo com o processo descrito para os Produtos Intermediários 1 e 2, utilizando 3,4,5—trimetoxiben— ziitiol e 3-amino-6-cioro-piridazina para se obter o pro duto, p.f. l43-l46°} espectro de ressonância nuclear magnética (CDCl^) 7,07 e 6,63 (2H, J_AB 8,8Hz, 4-H e

5-H), 6,66 (2H,s,PhH) 4,63 (2H,br,s,NH₂), 4,44 (2H,s, CH₂), 3,85 (6H,s,0Me) e 3,84 (3H,s,0Me).

Produto Intermediário 13

2—Metoxieti1—N— cloroacetilcarbamato

Seguiu—se o processo descrito por R.J. Bochis et alι J. Med. Chem. 1978, 21, 235 para se obter o composto em título, p.f. 97-99°j espectro de ressonância magnética nuclear c&_H ( dg- DMSO ) 11,07 (IH,br,s,NH), 4,56 ( 2h , s , CiCH₂ ) ,

4,28 (2H,m, CO.DCH₂), 3,62 (2H ,m, CH^OMe) e 3,34 (3H,s,Me).

Sao conhecidos os produtos intermediários da fórmula (III) seguintes, descritos na literatura indicada!

R Literatura cit

Z-CH CONHCO R²

Pro duto

Intermediário Z

NQ
14	Cl
15	Br
16	Cl
17	Cl
18	Cl
19	Cl

CH	a
t—Butilo	b
-CH CH	c
2 3
-CH CH CH	c
2 2 3
-(CH ) CH	c
23 3
— iso—propilo	d

(a) (b)

R. J. Bochis et ai, J.Med. Chem. 1978, 21 , 235· N. J. Leonard e K.A. Cruikshank — J. 0rg« Chem. 50, 2480

1985, (c) (d)

M. Pianka e D.J. Pelton J. Chem. Soc. 1960, 983.

G. I. Derkach e V.P. Belaya, Zh. Obsch. Khim, 1966, 38, 1942.

Produtos Intermediários 20-32

Prepararam—se os compostos seguintes peio pro cesso geral descrito para os Produtos Intermediários (l) e (2), utilizando o álcool apropriado como material de partida.

Produto Intermediário 20

3—Amino—6—(2,3—dimetoxibenziioxi)piridazina

A partir de álcool 2,3-8imetoxibenzílio (Al— drich) para se obter o composto em título p.f. 103-106°; espectro de ressonância nuclear magnético j^HÍCDCl^) 7,12-7,05 (2H,m,5’ e 6'H)} 6,91 (IH,m , 4 ' H) , a 6,85 (lH, J^Hz, 5H); 6,77 (IH,J_AB9Hz,4H)} 5,50 (2H,s,ArCH₂); 4,50 (2H, largo s, NH₂) e 3,89 (6H,s,0CH₃).

Produto Intermediário 21

3-Amino—6-(3,5~dimetoxi—4-etoxibenziloxi)piridazina

A partir de álcool 3»5—dimetoxi—4—etoxibenzí— lico para se obter o composto em título p.f. 1Ó9—171°» espectro de ressonância nuclear magnética HÍCDCl^) 6,89 (lH, J_AB8,8Hz,5H); 6,79 (ih,j_ab8,8h_z,4h); 6,70 (2H,s,ArH);

5,38 (2H,s,ArCH ); 4,48 (2H,brs,NH ); 4,θ6(2H,q,J?Hz, CH CH );

d ^{r 111} fc j

3,88 (6H,S,OCH ) e 1,38 (3H,t,J7Hz, CH CH ).

2—3

Preparou-se o álcool 3,5—dimetoxi-4-etoxibenzílico da maneira seguinte.

a ) 3 , 5~Dimetoxi—4-etoxibenzaldeído

Uma mistura de siringaIdeído (50 g, 0,275 moles), iodeto de etilo (85,8 g, 0,55 moles) e carbonato de potássio (151,7 g, 1,09 moles) em DMF (6θ ml) foi mantida em agitaçao e aquecida a 60—70° durante 6 horas. A mistura foi arrefecida e evaporada in vacuo e seguidamente tradada com água e extraída com éter dietílico. Os extractos foram secos (Na₂S0^) e evaporados para se obter o composto em título (59 g) sob a forma de um sólido branco, puro, por cromatografia em camada fina e utilizado sem purificação adicional.

b) Álcool 3 > 5—dimetoxi—4—etoxibenzílico produto proveniente da reacçao anterior (59 g, 0,28 moles) foi dissolvido em metanol-etanol (600 ml, l:l) e tratado com boro—hidreto de sódio (10,8 g, 0,285 moles) em porçoes durante 1 hora. A mistura foi mantida em agitaçao du25 -

rante 24 horas à temperatura ambiente e, em seguida, tradada lentamente com agua ( 5θ ml) para proporcionar um precipitado. Evaporou-se a mistura para separar os dissolventes orgânicos, tratou-se com água (300 ml) e extraiu-se com clorofórmio. Secaram—se os extractos (Na^SO^) e evaporaram-se para se obter um sólido branco que foi recristalizado a partir de éter para se obter o composto em título (26 g) sob a forma de agulhas branca s.

Produto Intermediário 22

3—Amino—6—(2—t—Butilbenziloxi)piridazina

A partir de álcool 2-t-butilbenzílico para se obter o composto em título p.f. 147—l49°> espectro de ressonância nuclear magnética ^H(DMSO) 7,4(2H,m,ArH)i 7,28 (2H, m,ArH); 6,9 (1H,,8Hz,4H)J 6,85 (1H,J_AB,8Hz,5H)J 6,0 (2H, brs, NH₂); 5,3 (2H,s,CH₂); 1,4 (9H,s,Me₃).

(Álcool pr eparado por redução HAL de ácido 2—t-butiibenzóico; M. Crawford e F.H. C. Stewart , J. Chem. Soc. , 1952, 4444).

Produto intermediário 23

3—Amino—6—(2—etilbenziloxi)piridazina

A partir de álcool 2—etilbznzílico.

Álcool preparado a partir de ácido 2-etilbenzóico (M. Crawford e F. H. C. Stewart, J. Chem. Soc. , 1952,

4444) por meio de redução com LAH.

Produto intermediário 24

3—Amino—6—(2,5~dimetilbenziloxi)piridazina

A partir de álcool 2,5—dimetilbenzílico para se obter o composto em título, p. f. 109—111°C.

Álcool preparado por redução com LAH do ácido

2.5- dimetiibenzóico (Aidrich).

Produto Intermediário 25

3-Amino— 6-( 3 >4,5-trimetilbenziloxi )piridazina

A partir de álcool 3,4,5—trimetilbenzílico.

Álcool preparado por redução com LAH do ácido

3.4.5— trimetilbenzóico (G. H. Kosolapoff) J. Am. Chem. Soc. , 69, 1652, 1947).

Produto Intermediário 26

3—Amino—6—(2—fenilbenziloxi)piridazina

A partir de álcool 2—fenilbenzílico.

Álcool preparado por redução com LAH do ácido

2— fenilbenzóico (Aidrich).

Produto Intermediário 27

3— Amino-6-(3—dietilaminobenziioxi)piridazina

A partir de álcool 3~dietilaminobenzílico para se obter o composto em titulo , p.f. 115-118° CEspectro de ressonância magnética nuclear: q)h(DMSO): 7,15 (iH,t,5'H)j 6,95 (ih,j_ab,8Hz,4h); 6,85 (1H,J_AB,8Hz,5H); 6,75 (lH,brs,2’H)} 6,65 (2H,m,4’H+6’H)J 5,9 (2H,s,NH₂)j 5,25 (2Η, s,CH₂0)} 3,3 (4H,quad,2xCH₂N)} 1,05 (6H,t,2xMe).

Álcool preparado por redução com LAH do ácido 3—dietilaminobenzóico (P. Griess, Chem. Ber., 5 (l04l, 1872)

Produto Intermediário 28

3—Amino-6—(3—metilaminobenziloxi)piridazina

A partir de álcool 3^—metilaminobenzílico para se obter o composto em título com a forma de uma goma. Espectro de ressonância magnética nuclear: ^H(DMSO) 7,1 (lH,t,5'H)i 6,95 (IH,J_ab,8Hz,4h)} 6,85 (lH,J_AB,8Hz,5H); 6,6 (2H,m,2ArH)} 6,45 (iH,d,ArH)j 5,95 (2H,s,NH )} 5,65 (lH,brs, NH)} 5,2 (2H,s,CH₂0); 2,65 (3H,s,MeN).

—Ãlcool preparado por redução com LAH de ácido 3-nietilaminobenzóico (J. Houben e W. Brassert. Chem. Ber. , 43, 209, 1910).

Produto Intermediário 29

3—Amino—6—(3—metoxi—1—naftilmetoxi)piridazina

A partir de 3—metoxi—1-naftilmetanol para se obter o composto em título p.f. 167—170°C.

Espectro de ressonância magnética nuclear: <íH(DMS0}

7,95 (2H,2d,2ArH); 7,40 (3H,m,2ArH)} 7,30 (lH,s,2’H)}

7,0 (íh,j,8hz,4h)í 6,90 (IH,j ,8Hz,5H); 6,00 (2H,s,nh );

Ad Ad 2

5,75 (2H,s,CH₂0); 3,90 (3H,s,0Me).

Álcool pr eparado por redução com LAH do ácido 3-metoxi—1—naftóico (R. Lesser e G. Gad, Chem. Ber., 5θΒ,

2551 - 9, 1925).

Produto Intermediário 30

3-Amino-6—/2—(3,4,5-trimetoxifenil)etoxi/piridazina

A partir de 2—(3,4,5—trimetoxifenil)etanol pa ra se obter um óleo.

Espectro de ressonância magnética nuclear: çjH(DMSO),

6,95 (IH,J_AB,8Hz,4H); 6,90 (lH, j_ab,8h_z, 5H); 6,60 (2H,s, 2ArH); 6,25 (2H,brs,NH )} 4,45 (2H,t,CH 0)j 3,75 (6H,s,3MeO e 5MeO); 3,58 (3H,s,4MeO)j 3,0 (2H,t,CH ).

ri·

Âlcooi preparado por redução com LAH do ácido 3 ,¼ ','5— trimetoxi f eni la cê tico (Aldrich).

Produto intermediário 31

3—Amino—6—(2—piridiImetoxi)piridazina

A partir d» 2—piridiimetanol (Aldrich) para se obter o composto de título p.f. 114—115°·

Espectro de ressonância magnética nuclear.' cí H (dg-DMSO):

8,65 (lH,d,6'-H)i 7,85 (1H, tr de d, 5'-H)j 7,55 (lH,d,3’H)i

7,45 (iH,m,4’-H); 7,10 (1H, J^_B fi,8h_z, 4-H); 6,95 (1H, J_AB

8,8Hz, 5-H); 6,05 (2H,s,NH )} 5,45 (2H,s,CH₂).

Produto intermediário 32

3-Amino-6-(2-furfuriloxi)piridazina

A partir de álcool furfurílico para se obter o composto em título p.f. 96—99°·

Espectro de ressonância magnética nuclear·* (J H (dg—DMSO),

7,70 (iH,d,5’-H)i 6,90 (1H, J_AB 8,8Hz, 4-H); 6,85 (1H, J_Afi

8,8Hz, 5-H); 6,60 (iH,d,4'-H); 6,50 (ih,s,3’-H); 5,95 (2H,s, nh₂); 5,30 (2H,S,CH₂).

Exemplo 1

N—/6-(3,4,5-Trimetoxibenziloxi)imidazo/l,2-b7piridazin-2—ii/-carbamato de metilo

Aqueceram—se o produto intermediário 1 (29,1 g, 0,1 moles) e N-cloroacetiicarbamato de metilo (15,15 g,

0,1 moles) â temperatura de 100° durante 3 horas com agitaçao numa atmosfera de em 1,3—dimetil—2—imidazolidinona seca (DMEU) (lOO ml). Arrefeceu—se a mistura reaccional, despejou— —se sobre solução gelada de bicarbonato de sódio e filtrou-se para se obter um sólido que foi lavado com água- Dissolveu—se o sólido em 5# metanol—clorofórmio e eluiu—se através de fio— rosil. A evaporaçao proporcionou um sólido que se recristalizou a partir de dimetilformamida e água para se obter o com— • posto em título com a forma de um pó branco (l4 g), p.f. 217—

-220°; espectro de ressonância magnética nuclear: q) H (d^—

-DMSO) 10,36 (IH, largo s, NH); 7,87 (IH, J^_B 8,8Hz, 8-H);

7,85 (1H,s,3-H); 6,87 (IH, J_AB 8,8Hz, 7-H); 6,85 (2H,s,PhH)

5,25 (2H,s,CH₂); 3,79, 3,70 e 3,56 (2H,s,0Me).

Exemplo 2

N— /6— ( 2,5-Dimetoxi benzi loxi ) imida zo/1,2—b/piri dazin— 2-i l/— -carbamato de etilo

Aqueceram—se o produto intermediário 2 (2,6l g, 10 mmoles), 2,6-lutidina (1,04 g, 10 mmoles) e N-cloroacetilcabamato de etilo (1,66 g, 10 mmoles) à temperatura de 100° durante 3 horas mantendo sob agitaçao em atmosfera de N em DMEU seco (10 ml). A mistura foi arrefecida e filtrada e o só lido foi lavado com água e éter e depois passado através de florosil, eluindo com 5% metanol-clorofórmio. A evaporaçao do eluido originou um sólido que foi recristalizado a partir de dimetilformamida e água para se obter o composto em título na forma de pó branco (1,26 g), p.f. 210—211°; espectro de ressonância magnética nuclear: q)_b (d^-DMSO) 10,24 (IH, largo s, NH); 7,85 (2H,M,3-H e 8-H); 7,10-6,86 (4H,m,7-H e PhH); 5,27 (2H,s,CH₂Ar); 4,17 (2H,q, J 6,6Hz, ÇE^CH^); 3,78 e 3,73 (6H, s,0Me) e 1,27 (3H,t,J 6,6Hz, ^CH2^CH3)·

Exemplo 3

Ν-/ύ— ( 2,5-Dimetoxibenziloxi )imidazo/l, 2—b7piridazin-2— i 77— —carbamato de metilo

Aqueceram—se o produto intermediário 2 (12,0 g, 0,046 moles), 2,6—iutidina (4,92 g, 0,046 moles) e carbama to de N-cloroacetilo (6,97 g, 0,046 moles), mantendo em agita çao numa atmosfera de N₂ a 100° durante 4 horas em DMEU seco (46 ml). Adicionou—se a mistura a água gelada e, em seguida, filtrou—se para se obter um sólido que foi recristalizado a partir de dimetilformamida e água para se obter o composto em título com a forma de pó castanho claro (2,46 g), p.f. 228—

-230°; espectro de ressonância magnética nuclear! ¢0 (dg—

-DMSO) 10,30 (IH, largo s, NH); 7,88 (lH, J_Afi 8,8Hz, 8-H);

7,85 (lH,s,3-H); 7,12-6,85 (4H,m, ArH); 5,32 (2H,s,CH ), e

3,79, 3,72 e 3,69 (9H,s, OMe).

Exemplos 4 a 22

Prepararam—se os seguintes compostos peio pro cesso geral descrito nos Exemplos i—3, por meio da reacçao das piridazinas 3^-amino-6-substituídas com os carbamatos de cloro acetilo apropriados.

(4) N—/5—(3,4,5—trimetoxibenziioxi)imi dazo/1,2—b/piri dazin—

- 2—i1/-carbamato de n—propilo , p.f. 174-175°» espectro de ressonância magnética nuclear! (dg—DMSO) 10,25 (IH, largo s, NH); 7,87 (lH, J_AB 8,8Hz, 8-H); 7^85 (1H,s,3-H); 6,87 (IH, J_AB 8,8Hz, 7-H); 6,85 (2H,s,PhH)i

5,26 (2H,s,CH Ar); 4,07 (2H,t,JÓHz, CH CH CH„); 3,8θ

M M Al &

(6H,s,0Me); 3,68 (3H,s,0Me); 1,55 (2H,dt,JÓHz, ^CH2^CH2~

CH ) e 0,94 (3H,t,J6Hz, CH₂CH₂ÇH₃).

(5) N—/5—(3,4,5—trimet oxibenziloxi)imida zo/i,2—b/piri dazin— —2—i1/—carbamato de n-butiio, p.f. 185—l87°i espectro de ressonância magnética nuclear! (dg—DMSO) 10,23 (IH, largo s, NH); 7,85 (1H,J_AB 8,8Hz, 8-H); 7,8 (lH, s,3-H); 6,86 (IH, J_AB 8,8Hz, 7-H); 6,65 (2H,_s,PhP); 5,27 (2H,s,CH Ar); 4,12 (2H,t,J 6Hz, CH CH CH CH ); 3,80 m At £ j (6H,s,0Me); 3,67 (3«,s,0Me); l,6l ( 2H ,m , CH_£CJ^CH^CH^ ) ;

1,38 (2H,m,CH₂CH₂CH₂CH₃) e 0,92 (3H,t,J6Hz, CH^H^H^CH^) (6) N— /6—(2,5—dimetoxibenziloxi)imi dazo/1,2—b/piridazin—2—

-il/-carbamato de n—propilo, p.f. 199—200°; espectro de ressonância magnética nuclear: _B (dg—DMSO) 9,93 (lH, largo s, NH); 7,87 (2H,m,3“H e 8-H); 7,17-6,89 (4H,m,

7-H e PhH); 5,42 (2H,s CH Ar); 4,17 (2H,t,JÓHz, CH CH^—

At “^“2 At

C0); 3,85 e 3,80 (6H,s,0Me); 1,73 (2H,dt,JÓHz,

CH„CH„CH„) e 1,04 (3H,t,JÓHz, CH„CH„CH„).

2'a. 3 2 2 3

(7) Ν—/δ—(3,4,5-1rimetoxibenziioxi)imidazo/1, 2—b/pirida zin—

-2-il7-carbamato de etiio, p.f. 204-206°; espectro de ressonância magnética nuclear·' ^H(d^-DMSO) 10,25 (1H, largo s, NH)} 7,85 (1H, J_Afi 8,8Hz, 8-H)j 7,83 (lH,s,

3-H); 6,85 (1H J_AB 8,8Hz, 7-H); 6,64 (2H,s,PhH); 5,27 (2H,s,CH₂Ar) i 4,15 (2H,q,J6Hz, ΟΗ^,ΟΗ^) ; 3,28 ( ÓH, s ,

OMe); 3,16 (3H,s,0Me) e 1,25 (3H,t,J6Hz, CHÇH ).

(8) Ν-/δ-(3,4,5-trimetoxibenziloxi)imidazo/1,2-b7piridazin— 2— il/— carbamato de 2—metoxietilo , p.f. 183— 185°; espectro de ressonância magnética nuclear: DMSO) 10,36 (1H, largo s, NH); 7,85 (1H, J_Ag 8,8Hz, 8-H); 7,83 (1H,S,3-H); 6,85 (lH, J._Q 8,8Hz, 7-H); 6,84 (2H,s,PhH);

5,2b (2H,s,CH₂Ar); 4,25 (2H,m, COCH ); 3,79 (6H,s,0Me);

3,18 (3H,s,0Me)j 3,08 (2H,m,CH₂0Me) e 3,32 ( 3H, s , CH^Me ) (9) Ν-/δ—(1—naftiImetiIoxi)imi dazo/1,2-b/pirimi dazin-2—ii/— —carbamato de metilo, p.f. 243—246°; espectro de ressonância magnética nuclear: <SH(dgDMSO) 10,05 (1H,largo s, NH); 8,25-7,55 (9H,m,naft H e 3~H e 8-H); 6,92 (lH,

J.„ 8,8Hz, 7-H); 5,92 (2H,s,CH e 3,80 (3H,s,0Me).

Atí Δ (10) Ν—/δ—(2—metoxibenziIoxi)imidazo/1,2—b/pirida zin-2-i1/carbamato de metilo, p.f. 241—243°; espectro de ressonância magnética nuclear: (^^(dgDMSO) 10,1 (1H, largo s, NH); 7,92 (lH, S, 3-H); 7,65 (1H, J_AB 8,8Hz, 8-h);

7,45 (lH,d,J7Hz, PhH); 7,35 (lH,dd,J7Hz, PhH); 6,95 (2H,m,PhP); 6,72 (lH, J_AB 8,8Hz, 7-H); 5,36 (2H,s,CH₂);

3,89 (3H,s,0Me) e 3,77 (3H,s,0Me).

(11) Ν—/Έ—(3,5-dimetoxibenziloxi)imidazo/l,2—b7piridazin—2— —il/—carbamato de metilo, p.f. 236—238°; espectro de ressonância magnética nuclear: (d^DMSO) 10,30 (1H, largo s, NH); 7,88 (1H, J._n, 8,8Hz, 8-H); 7,82 (lH,s,

3-H); 6,90 (ih,J_ab 8,8Hz, 7-H); 6,66 (2H,d,J0,9Hz, 2·—H e 6'-H); 6,46 (lH,t,J0,9Hz, 4'-H); 5,36 (2H,s,CH₂);

3,78 (6H,s,0Me), e 3,70 (3H,s,0Me).

(12) Ν—/5—(3-metilbenziloxi)imidazo/i,2-b/piridazin—2-il/car bamato de metilo p.f. 205-208°; espectro de ressonância magnética nuclear! (d^-DMSO) 9,95 (IH, largo s,NH);

7,85 (ih,s,3-h); 7,8o (IH, J_AB 8,8Hz, 8-h); 7,30 (3H,m,

2'—H,4’—H e b'-H); 7,15 (iH,m,5'-H)} 6,82 (IH, J._AB 8,8

Hz, 7-H); 5,80 (2H,s,CH₂); 3,72 (3H,s,0Me) e 2,34 (3H,s,Me).

(13) N-/S-(3,4,5-trimetoxibenziloxi)imidazo/i,2-b/piridazin-2—ii/carbamato de 7-butilo, p.f. 191,5-192,5°; espectro de ressonância magnética nuclear! (d^-DMSO) 9,95 (IH, largo s. NH); 7,85 (1H,J_AB 8,8Hz, 8-H); 7,79 (IH, largo s, 3-h); 6,87 (lH, J_AB 8,8Hz, 7-H); 6,86 (2H,s,

PhH); 5,25 (2H,s,CH₂); 3,79 (6H,s,0Me); 3,68 (3H,s,

OMe e 1,50 (9H, s, t-Bu).

(14) N- /6—3,4,5—trimetoxibenzilt io)imidazo/1,2—b/piridazin— —2-il/carbamato de metilo, p.f. 221—223°i espectro de ressonância magnética nuclear.' (d^-DMSO) 10,51 (IH, largo s, NH); 8,11 (lH,s,3-H); 7,87 (IH, J_Afi

8,8Hz, 8-h); 7,17 (IH, J_AQ 8,8Hz, 7-H); 6,88 (2H,s,

PhH); 4,49 (2H,s,CH₂); 3,83 (6H,s,0ME) e 3,70 (3H,s,

OMe).

(15 ) N-/S— ( dimetilaminobenziloxi )imidazo/l, 2— b7piridazin— 2—i1/carbamato de metilo, p.f. 200—203°; espectro de ressonância magnética nuclear: Μθ—DMSO) 10,05 (IH, largo s, NH); 7,93 (1H,s,3-H); 7,90 (IH, J_AB 8,8Hz,

8-H); 7,30 (iH,t,5'-H); 6,95-6,80 (4H,m2’-H, 4’-H, 6'-h e 7-H); 5,4o (2H,s,CH₂); 3,78 (3H,s,MeO) e 2,98 (6H,s,NMe₂).

(l6) N—/6—(3—metoxibenziloxi)imidazo/i,2—b7piridazin—2—il/— carbamato de metilo, p.f. 184—l89,5°i espectro de ressonância magnética nuclear: (CDCl^) 10,55 (IH, largo s, NH); 8,02 (IH, largo s, 3-H), 7,75 (IH, J_A0 8,8Hz, 8-H), 7,32 (iH,dd,J7,5Hz, 5'-H), 7,07 (2H,m,ArH); 6,88 (lH,dd,J7,5 e 2Hz, ArH); 6,70 (IH, J_Afi 8,8Hz, 7-H);

5,34 (2H,s,CH₂); 3,88 e 3,83 (6H,s,0Me).

(17) Ν-/5—benziloxiimidazo/1,2—b/piridazin—2—il/carbamato de etilo, p.f. ^>211° (decomp. )j espectro de ressonância ma gnética nuclear! (d^-DMSO) 10,25 (lH, largo s, NH)}

7,87 (IH, J_AB 8,8 Hz, 8-H); 7,72 (lH,s,3-H)} 7,57-7,37 (5H,m,Ph)i 5,35 (2H,s,CH₂Ar)} 4,15 (2H,q,JÓHz, CI^CH ) e 1,27 (3H,t,JÓHz, CH CH ).

(18) N—/7>-n—but i Itioimi da ζο/ϊ , 2—b/piri dazin—2—i 1/carbama to de metilo, p.f. 170—171°} espectro de ressonância magnética nuclear: Λ (d.-DMSO) 10,4θ (IH,largo s,NH)} 7,94 (IH, ri O s,3H)} 7,76 (IH, J 8,8Hz, 8-H)} 7,06 (IH, J._D8,8Hz,

7-H)} 3,72 (3H,s,0Me)} 3,18 (2H,t,JÓHz, CHS)} 1,68 (2H,m,CH₂CH₂S), 1,44 (2H,m,CH CHgCH S) e 0,93 (3H,t,J6Hz, çh₃ch₂ch₂s).

(19) N-/6—benziltioimidazo/1,2-b7piridazin-2—i1/carbamato de metilo, p.f. 223—225° (decomp.)} espectro de ressonância magnética nuclear! (d^—DMSO ) 10,42 (-LH, largo s,NH)}

7,99 (1H,s,3-H); 7,77 (IH, J_AB8,8Hz, 8-H); 7,52-7,20 (5H,m,Ph)} 7,07 (IH, J_AB8,8Hz, 7-H)} 4,45 (2H,s,CH₂) e

3,68 (3H,s,0Me).

(20) N— jó-/3,5-dimetoxi—4-(metoxietoximetoxi)benziloxi/imidaso/l,2—b/piridazin—2—iljcarbamato de metilo, p.f. 149— -150°} espectro de ressonância magnética nuclear:

Ô_H (CDCl^) 9,58 (IH,largo s, NH)} 8,02 (IH, largo s,

3-H)} 7,75 (IH, J_AB8,8Hz, 8-H)} 6,75 (IH, J_AB 8,8Hz,

7-H)} 6,70 (2H,s,2’-H e 6'-H)} 5,29 (2H,s,CH₂)} 5,18 (2H,s,CH₂)} 4,08-3,91 (2H,m,CH₂)} 3,85 (9H,s,0Me)}

3,6-3,45 (2H,m,CH₂) e 3,35 (3H,s,0Me).

( 21) N—/5— ( 3—clorobenzi loxi )itnidazo/l , 2—b/piridazin—2—il/— carbamato de metilo, p.f. 268—270°} espectro de ressonância magnética nuclear: δ jj (d^—DMSO) 10,32 (IH, largo s,NH)} 7,87 (lH, J_AB 8,8Hz, 8-H); 7,83 (lH,s,3-H)}

7,61 (1H,S,2'-H); 7,53-7,41 (3H,m,PhP); 6,91 (lH, J_AB

8,8Hz, 7-H); 5,38 (2H,s,CH ) e 3,68 (3H,s,0Me).

xá

(22) Ν-/Έ—(2-tieniimetiiimidazo/l, 2-b7piridazin-2-il/-carbamato de metilo» p.f. 207-209°» espectro de ressonância magnética nuclear! (d^-DMSO), 10,38 (lH, largo s, nh); 7,85 (ih,s,3-H); 7»82 (ih,J_A08,8Hz,8-H); 7»58 (!H,d,5'-H); 7,30 (iH,d,3’-H); 7,05 (iH,t, 4*-h); 6,82 (IH, J_AB 8,8Hz, 7-H); 5»56 (2H,s,CH₂) e 3,66 (3H,s,0Me).

Exemplo 23

N-/6-(3,4,5-Tr imetoxibenziloxi)imidazo/I ,2—b/piridazina-2— —il/carbamato de 2,2,2—trifluoretilo a ) 6-(3,4,5-Trimetoxibenziloxi)imidazo/l,2-b7piridazino—2—

-carboxilato de etilo

Adicionou-se bromopiruvato de etilo (117 g,

0,6 moles) a 3~amino—6—(3,4,5—trimetoxi)piridazina (174,6 g, 0,6 moles) e 2,6—lutidina (62,4 g, 0,6 moles) em DMF anidro (600 ml) mantendo em agitaçao numa atmosfera de N . Aqueceu— -se a mistura a 100° durante 3 horas, arrefeceu—se e concentrou-se in va cuo; em seguida tratou-se com água e filtrou—se para se obter um sólido castanho que foi lavado com água e éter. 0 sólido foi cristalizado a partir de DMF e água para se obter o composto em título na forma de um sólido cristalino (88 g), p.f. 159—163°» espectro de ressonância nuclear magnética! (cdci^) 8,31 (ih,s,3H); 7»84 (ih,j_ab 8,8h_z, 8h)

6,82 (lH, J_AB 8,8Hz, 7H); 6,70 (2H,s,ArH); 5,30 (2H,s,CH₂Ar)» 4,45 (2H,q, J7Hz, OCH^CH^); 3,88 (6H,s,ΟεΗ^); 3,86 (3H, s OCH^ e 1,44 (3H,7,J7Hz,CH^).

b) Acido 6—( 3 14,5—t rimetoxibenzi ioxi ) imi da zo/1,2—b/’—pirida— zina—2—carboxílico

Aqueceu—se o produto da fase (a) (1,94 g , 5 milimoles) em refluxo, mantendo em agitaçao com hidróxido de sódio (l ml, 10M, 10 milimoles), água (9 ml) e metanol (5 ml) durante 20 minutos. A mistura foi arrefecida e acidulada com ácido clorídrico diluído e filtrada para se obter um sólido que foi seco a 6θ in vacuo para se obter o composto em títu lo na forma de um ρδ (1,5 g ) , ρ·f· 224-226° (decomp.)j

Espectro de ressonância nuclear ma gnêticaí ^^(d^-DMSO) 8,56 (1H,S,3H); 8,07 (ih,J._d 8,8Hz, 8h); 7,05 (ih, j._ 8,8Hz,

AB

3,82 (6H, s,

AB

7H); 6,88 (2H,s,ArH); 5,29 (2H,s,CH₂Ar)i

OCH ); 3,68 (3H, s, OCH ) e 3,32 (IH, largo s, CO H).

c) Azida de ácido 6—(3,4,5—trimetoxibenziloxi)imidazo/ΐ,2— -b7- piridazino—2—carboxilico

Adicionou-se cloreto de oxaiilo (0,13 ml, 1,5 milimoles) ao produto da base (b) (0,36 g, 1 miiimole) e piri dina (0,079 S, 1 miiimole) em benzeno anidro (5 mi) com agita çao numa a mosfera de N^. Aqueceu—se a mistura a refluxo durante 3 horas, arrefeceu-se e evaporou-se in vacuo para se obter um sólido cinzento.

Este sólido foi tratado com dioxano (10 ml), água (10 ml) e azida de sódio (excesso) e foi mantido em agitaÇao forte até ao dia seguinte â temperatura ambiente. A mis tura foi filtrada e o sólido seco in vacuo para se obter o composto em título na forma de pó (0,29 g) , p.f. 2>139° ( de— comp. )í espectro de ressonância magnética nuclear! <5 H (CDCl^)

8,35 (ih,s,3H); 7,85 (IH, J_AB 8,8Hz, 8n); 6,85 (ih, j_ab

8,8Hz, 7H); 6,70 (2H,s, ArH); 5,31 (2H,s,CH₂Ar); 3,90 (6H,s,0CH^) e 3,88 (3H,s,0CH^).

d) N/δ— (3,4,5—Trimet oxi benzi loxi ) imi dazo /1,2— b/piri dazin- 2—il/carbamato de 2,2,2—trifluoretilo

Aqueceram-se o produto da fase (c) (2,3 g, 6 milimoles), 2,2,2—trifluoroetanol (aprox. 3 mi) e tolueno (6θ ml) mantendo em agitaÇao numa atmosfera de N a refluxo até o ensaio de cromatografia em camada fina mostrar que a reacçao estava completa (apr. 2 horas).

Arrefeceu-se a mistura durante a noite e filtrou—se para se obter um sólido que foi lavado com éter e se—

co para se obter o composto em título na forma de pó (0,43 g), p.f. 205-210° (decomp.)« espectro de ressonância magnética nuclear: <^H^6 ^^O) 10,8l (lH, largo s, NH); 7,88 (lH,

J_AB 8,8Hz, 8h); 7,85 (1H,S,3H); 6,90 (1H,J_AB 8Hz, 7H); 6,85 (2H,s, ArH); 5,25 (2H, s, CH^r); 4,83 (2H,q, J9Hz, CH^F ) ; 3,76 (ÓH, s, 0CH₃) e 3,65 (3H, s, OCH^.

Exemplo 24

N-/^—(3,4,5-trimetoxibenziloxi)imidazo/l,2—b/pirimidazin—2— il/carbamato de 2—hidroxietilo

Seguiu-se um processo análogo ao descrito no Exemplo 23(d), com a excepção de que o produto impuro foi cro matografado sobre SiO_Q , eluindo com 5% metanoi—clorofórmio com recristalizaçao subsequente a partir de DMF—água para se obter o composto em título na forma de pó< p.f. 193—195°i espectro dr ressonância magnética nuclear! <$_H (d₆ DMSO)

10,35 (IH, largo s, NH); 7,85 (lH, J_AB, 8,8Hz, 8H)J 7,83 (IH, s, 3H); (IH, J_AB 8,8Hz, 3H); 6,84 (2H, s, ArH); 5,25 (2H, s, CH₂Ar)i 4,82 (IH, t, J4Hz, 0H); 4,15 (2H, m); 3,8θ (6h, s, OCH ) e 3,66 (5H, m, OCH e OCH ).

23

Exemplo 25

N—/6—(3,4,5-Trimetoxibenziloxi) imidazo/l,2—b7piridazin-2—iΓ7carbamato de 2-(1—morfolino)etilo

Seguiu—se um processo análogo ao descrito no Exemplo 23(d), com a excepção de que o produto impuro foi cro matografado sobre Si0₂ ^el^ui^n<3o com 5% met ano 1—c ioro fórmio e fervido com um pouco de etanol para se obter o composto em título na forma de pó, p.f. l6l-l62°, espectro de ressonância magnética nuclear! ÓH (d^ DMSO) 10,30 (lH, largo s, NH);

7,88 (lH, S, 3H); 7,85 (IH, J._n, 8,8Hz, 8h); 6,87 (lH, J._n

8,8Hz, 7H); 6,85 (2H, S, ArH)} 5,26 (2H, s,CH₂Ar); 4,22 (2H, t, J5Hz, co.och₂); 3,80 (6H,s, OCH₃); 3,68 (3H, s,

OCH ); 3,58 (4H, m, CH OCH ); 2,59 (2H, t, J5Hz, C0. OCH — *5 fc·

ÇH₂N) e 2,45 (4η, m, CH^NCh ).

Exemplo 26

N-/N-Meti1—6-(3,4,5-trimetoxibenziloxi)imidazo/ΐ,2-b/piridazin—2—il/carbamato de metilo

Adicionou—se hidreto de sódio (1,26 g, 60%, 31,5 milimoles) em porçoes a uma suspensão mantida em agita— çao de N—/6-(3,4,5—trimetoxibenziloxi)imidazo/1,2—b/piridazin— -2—il/carbamato de metilo (9,51 gt 24,5 milimoles) em DMEU (100 ml) numa atmosfera de N à temperatura ambiente. A mistu

I <£ — ra foi tratada com iodometano (4,9 g, 2,15 mi, 35 milimoles) e, decorrida mais 1 hora, a mistura í'oi tratada com os equiva lentes molares de hidreto de sódio e iodometano. Decorridas 2 horas, a mistura foi despejada em água (100 ml) e foi filtrada para se obter um sólido branco que foi cromatagrafado sobre SiO eluindo com 2% de metanol—clorofórmio. 0 produto foi recristalizado a partir de DMF e água para se obter o compo Βίο em título na forma de pó branco (8,29 g), p.f. 177-178°; espectro de ressonância magnética nuclear : ÍH (dg DMSO)

8,04 (1H,S,3H); 7,96(1H,J_ab,8,8Hz,8h); 6,92 (lH, J_AB, 8,8Hz,

7H); 6,86 (2H,s,ArH); 5,25 (2H,s,ch₂); 3,79 (9H,s,OCH₃);

3,68 (3H,s,C0.OCHg) e 3,42 (3H,s,NCHg).

Exemplo 27

Ν—/N—Etil—6-(3,4,5—trimetoxibenziloxi)imidazo/l,2—b/piridazin— —2—il/carbamato de metilo

Seguiu—se um processo análogo ao descrito no

Exemplo 26, para se obter o composto em título na forma de só lido branco, p.f. 153—155°J espectro de ressonância magnética nuclear: j£h( d.DMSO ) , 8,04 (lH,s,3H); 7,96 (IH,J.„,8,8Hz,

D Atí

8H); 6,92 (1H,J . 8,8Hz, 7H); 6,86 (2H,s,ArH); 5,25 (2H,S,

Ab

ArCH₂); 3,90 (2H,q,ÇH₂CH₃); 3,78(9H,s,ArOCHg); 3,66 (3H,s,

NCH e 1,19(3«,t,CH„CH ).

2-3

- 38 Ν— /ó—(3,4, 5—trimetoxibenziloxi)imi da zo/1,2—b/piri dazin— 2—i 1/-

Exemplo 28 carbamato de 2,3—di-hidroxipropilo produto do Exemplo 23(c) foi posto em reacçao com solcetal) seguindo um processo análogo ao descrito no Exemplo 23(d), com a excepção de que, uma vez terminada a reacçao entre a azida de ácilo e solcetal, a mistura impura foi evaporada in vacuo e seguidamente aquecida a 60-70° durante 0,5 horas com ácido clorídrico diluido e etanol. A mistura reaccional foi neutralizada com solução de bicarbonato de sodio, evaporada in vacuo e cromatografada sobre SiO₂ eluindo com 7% de metanol—clorofórmio para se obter o composto em título na forma de sólido branco, p.f. 175—176°; espectro de ressonância magnética nuclear·’ ^H(d^DMSO) 10,28 (1H, largo S, NH); 7,88 (ih,J_4D 8,8Hz, 8H); 7,86 (lH,s,3H); 6,87 (1H,J_ab 8,8Hz,7H); 6,85 (2H,s,ArH); 5,28 (2H,s, ArCH^);

4,90 (1H,d,J4Hz,2’—OH)J 4,65 (1H,t,J4Hz,1'—OH); 4,20-4,0 (2H,m, C0.0CH₂); 3,80 (όΗ,β,ΟΟΗ^); 3,80-3,70 (1H,m,H0-CH)}

3,69 (3H,s,0CH ) e 3,40 (2H,t,J4Hz,H0CH ).

J £

Exemplo 29

N—/ó-(3,4,5-Trimetoxibenziloxi)imidazo/1,2—b/piridazin-2—ii/carbamato de 2-dimetilaminoetilo produto do Exemplo 23(c) foi feito reagir com (2—dimetilamino)etanol seguindo um processo análogo ao des crito no Exemplo 23(d), com a excepção de que o produto impuro foi cromatografado sobre Si0₂ eluindo com 5% de metanol— —clorofórmio para se obter um sólido que foi lavado com etanol e seco para se obter o composto em título na forma de pó branco, p.f. 185—186°; espectro de ressonância magnética nuclear: á'H (dgDMSO), 10,32 (1H, largo s, NH); 7,88 (1H, ,

8,8Hz, 8h); 7,85 (1H,S,3H); 6,89 (lH, J_AB» 8,8Hz, 7H); 6,85 (2H,s,ArH); 5,77 (2H,s,ArCH₂); 4,6θ (2H,t,J4Hz, C0.0CH₂);

3,80 (6H, s,OCHg); 3,69 (3H,s£>CHg); 2,50 (2H,t,CH₂N) e 2,21

(6H,s,NMe ).

Exemplo 3θ

N-/6-(3 »4 >5-Trimetoxibenziloxi)imidazo/l,2-b/piridazin-2-il/carbamato de fenilo produto do Exemplo 23(3) foi feito reagir com fenol, seguindo um processo análogo ao descrito no Exemplo 23(d), com a excepçao de que o produto impuro foi cromato grafado sobre Si0₂ eluindo com 5% de metanol-clorofórmio para se obter um sólido que foi lavado com acetonitrilo e seco para se obter o composto em título na forma de pó branco, p.f. 210—213°j espectro de ressonância magnética nuclear: <ÍH(CDC1₃) 10,12 (lH,largo s, NH); 8,05 (lH,s,3H)> 7,80 (1H,

J_AB, 8,8h_z,8h); 7i55-7ii5 (5H,m,Ph); 6,69 (2H,_s,ArH); 6,67 (1H,J_AB,8,8Hz, 7H); 5,28 (2H,s,ArCH₂) e 3,90(9H,s,OCH^).

Exemplo 31

3-Amino-6-(2—bromo-3 >4,5-trimetoxibenziloxi)piridazina

a) Tratou-se 3-a^miⁿo^—6— ( 3 > 5-trimetoxibenziloxi )piridazina (Produto Intermediário i, 2,91 gi 10 milimoles) em ácido acético (20 mi), gota a gota, com uma solução de bro mo (1,59 gi 10 milimoles) em ácido ac*etico (2 ml) durante 5 minutos. Decorridas 0,5 horas, filtrou—se a mistura para se obter um sólido creme que foi suspenso em égua e alcalinizado com sóluçao de hidróxido de sódio. Extraiu—se a mistura com clorofórmio e lavaram—se os extractos com água, secou—se (NagSO^) e evaporou-se in vacuo para se obter um sólido creme que foi recristalizado a partir de tolueno para se obter o composto em título (2,76 g) na forma de agulhas creme, p.f. l60—l6l°; espectro de ressonância magnética nuclear:

<Fh(CDC1 ) 6,93(IH,s,ArH); 6,91 (1H,J._D,8,8Hz,5H); 6,8O(1H,

J Ad

J_ab,8,8Hz,4H); 5*49 (2H,s,CH₂); 4,95 (2H, largo s, NHg);

3>91 (3H,s,OCH₃); 3,90 (3H,s,OCH₃) e 3189 (3H,s,OCH₃).

b) N-/S-(2—Bromo-3 ,4 , 5^_trimetoxibenziloxi)imidazo/i,2-b/piridazin—2—il/carbamato de metilo

Seguiu—se um processo análogo ao descrito nos

Exemplos 1—3 para se obter o composto em título na forma de po btancoí p.f. 2l8-219°i espectro de ressonância magnética nuclear: e$H (CDCl^) 9,45 (lH, largo SjNH); 8,03 (lH,largo s, 3H); 7,75 (lH,J_ab,8,8Hz, 8H); 6,94 (lH,s,ArH); 6,75 (1H, J ,8,8Hz, 7H)i 5,40 (2H,s,ArCH ) e 3,96-3,86 (l2H,m,

Ad 2

OCH.}).

Exemplos 32~35

Prepararam—se os compostos seguintes, seguindo um processo análogo ao descrito nos Exemplos 1—3·

Exemplo 32

N—/6—(2,3-Dimetoxibenziloxi)imidazo/1,2—b/piridazin—2—41/— carbamato de metilo

p.f. 210-211°; espectro de ressonânci magnêti ca nuclear: JH d_ó(DMSO) 10,35 (lH,largo s,NH); 7,86 (lH, J_AB,8,8Hz,8H); 7,84 (lH,s,3H); 7,10 (3H,_s,PhH); 6,88 (lH,

J_AB,8,8Hz,7H)} 5,35 (2H,s,CH₂) e 3,86, 3,80 e 3,72 (9H,s,

OCH.}).

Exemplo 33

N—/6—(3 » 5“0imetoxi—4— etoxibenziloxi)imidazo/i,2—b/pi ri da zin— —2—i1/—carbamato de metiio

p.f. 190—193°5 espectro de ressonância magnética nuclear:

<5h (d^DMSO) 10,33 (1H,largo,s,NH)j 7,88 (1H,J_AB,8,8Hz,8H);

7,85 (1H,s,3H); 6,88 (1H,J_ab,8,8Hz, 7H); 6,85 (2H,s,ArH);

5,77 (2H,s,ArCH₂) ; 3,90 ( 2H, q , J7Hz , C^CH^ ) ; 3,8θ (ÓH,s,

ArOCH ); 3,69 (3H,s,C0. OCH ) e 1,24 (3H,t,J7Hz,CH CH ) .

3 2-3

Ν—/6—(2—t—Butilbenziloxi)imi dazo/i,2—b/piri da zin-2-i1/carbama

to de metilo

p.f. 220-223° <$H(DMS0) 9,95 (1H, largo, s, NH); 7,85 (1H, s, 3H); 7,8 (1H, J_AB 8Hz, 8H); 7,5 (2H,m, ArH); 7,28 (2H, m, ArH); 6,8 (1H, J_AB ÔHz, 7H); 5,5 (2H, s, CH₂); 3,7 (3H, s, OMe); 1,4 (9H, s, Me^).

(A partir de Produto Intermédio 22).

Exemplo 35

N- /6—(2—Etilbenziloxi) imidazo/i,2—b/piridazin—2—il/—carbamato de metilo

p.f. 190-191° ^H(DMSO) 9,95 (1H, largo s, NH); 7,85 (1H, s, 3H); 7,8 (1H, J_AB 8Hz, 8h); 7,45 (1H, d, ArH); 7,3 (3«, m, ArH); 6,8 (1H, J_AB 8Hz, 7H); 5,4 (2H, s, 0-CH₂); 3,7 (3H, s, OMe); , 2,7 (2H, quad, CH₂); 1,2 (3«, t, Me).

(A partir do Produto Intermédio 23)·

Exemplo 36

N-/b-(2,5-Dimetilbenziloxi)imidazo/l,2-b7piridazin—2-il/carbamato de n—propilo

p.f. 196-197° oJh(DMSO) 9,85 (1H, largo s, NH); 7,85 (1H, s,

3H); 7,80 (1Η, J_AB 8Hz, 8h); 7,25 (1H, s, 6'H); 7,1 (2Η,

2d, 3'H e 4’H); 6,8 (1H, J 8Hz, 7H); 5,35 (2H, s, OCH );

Ad Z

4,1 (2H, t, 0CH₂); 2,3 (6H, 2s, 2 x ArMe); 1,7 (2H, quad,

CH₂); 0,95 (3H, t, Me).

(A partir de cloroacetilcarbamato de n—propilo e Produto Intermédio 24).

Exemplo 37

Ν—/δ—(3,4,5~Trimetiibenziloxi)imidazo/l,2-b/piridazin-2—ii/carbamato de metilo

p.f. 227-229° &H(DMSO) 9,90 (1H, largo s, NH); 7,85 (1H, s, 3H)i 7,75 (J-Η, J_AB 8Hz, 8H)í 7,15 (2H, s, ArH); 6,80 (1H, J_AB 8Hz, 7H); 5,25 (2H, s, 0CH₂); 3,7 (3H, s, OMe); 2,28 (6η, s, 2 x ArMe); 2,15 (3H, s, ArMe).

(A partir do Produto Intermédio 25)·

Exemplo 38

Ν—/δ-(2-Fenilbenziloxi)imidazo/l,2-b/piridazin-2-il/-carbamato de metilo

p. f. 203-204°	<$H(DMS0) 9,92 (1H, largo s, NH);	7,75	(1H,
J 8Hz,8H); AB	7,70 (ih,s,3H); 7,4 (9H,m,9ArH);	6,75	(1H,
JAB 8Hz,7H);	5,3 (2H,s,0CH2); 3,7 (3H,s,och3).
(A partir do	Produto Intermédio 26).

Exemplo 39

Cloridrato de Ν—/δ-( 3-dietiI aminobenziloxi)imi dazo/i,2-b/pi— ridazin—2—il/—carbamato de metilo

p.f. 220-225° ÓH(DMSO), 10,35 (1H, largo s, NH); 7,9 (1H,

J_AB 8Hz, 8h); 7,8 (1H, s, 3tf; 7,6 (4H, m, 4 x ArH); 6,9 (1H, J_AB 8Hz, 7H); 5,4 (2H, s, CH₂O); 3,7 (3H, s, OMe);

3,5 (4η, largo s, 2 x CH N); 1,05 (6H, t, 2 x Me).

(A partir do Produto Intermédio 27)·

Exemplo 40

Cloridrato de N—/δ—(3—metilaminobenziloxi)imidazo/l,2—b/piri— dazin-2-i1/carbamato de metilo

p.f. 213-215° ^H(DMSO) 10,4 (1H, largo s, NH); 7,9 (1H,

- 43 J_AB 8Hz, 8H); 7,85 (IH, s, 3H); 7,3 (4H, m, 4ArH); 6,9 (1H, J_AB 8Hz, 7H); 5,4 (2H, s, CH₂0); 3,7 (3H, s, OMe);

2,85 (3H, s, MeN).

(A partir do Produto Intermédio 28).

Exemplo 4l

Ν—/δ- (3-Dimetilaminobenziloxi)imi dazo/1,2—b/piri dazin—2—il7carbamato de etilo

P.f. 204-208° ^H(DMSO) 9,95 (IH, largo s, NH) ; 7,85 (lH, s, 3H)i 7,80 (IH, J_AB 8Hz, 8H)j 7,2 (1H, t, 5'H); 0,85 (IH, J_AB 8Hz, 7H); 6,75 (3H, m, 2ArH); 5,3 (2H, s, CH₂0);

4,2 (2H, quad, 0CH₂); 2,9 (ÓH, s, Me^)} 1,25 (3H, t, Me).

p.f. 240-245° cÍH(DMSO), 10,0 (1H, largo s, NH); 8,2 (lH, m, ArH); 8,05 (2H, m, 2ArH); 7,95 (IH, s, 3«)i 7,90 (lH, ^JAB ^8ílz’ ^8í1)’ ^{7,85 (1H}’ ^d’ ²’^H)’ ^{7,65 (}3^H’ ^m’ 3ArH); 6,90 (1H, J._ 8Hz, 7H)} 5,95 (2H, s, CHO); 4,25 (2H, quad,

Ad Δ

0CH₂)J 1,35 (3H, t, Me).

(A partir do Produto Intermédio 3)·

Exemplo 43

Ν—/δ—(1—Naftilmetoxi)imidazo/l,2—b/piridazin—2—il/—carbamato de n-propilo

p.f. 208-210° ^H(DMSO), 10,25 (IH, largo s, NH)j 8,15 (lH, m, ArH); 8,00 (2H, m, 2ArH); 7,90 (lH, s, 3H); 7,85 (lH, J_AB 8Hz, 8η); 7*75 (IH, d, 2Ή)} 7,60 (3H, m, 2ArH); 6,85

(IH, J_A_ 8Hz, 7H); 5,8 (2H, s, OCH ) ; 4,1 (2H, t, OCH ),

Atí d d

1.65 (2H, m, CH₂); 0,9 (3H, t, Me).

(A partir do Produto Intermédio 3)·

Exemplo 44

N-/5-(3-Met oxi—1—naftilmetoxi)imidazo/I,2—b7piridazin—2—ii/carbamato de metilo

Jh(DMSO) 10,0 (IH, largo s, NH); 8,1 (IH, d, ArH); 7,9 (2H, m, ArH + 3H); 7,85 (lH, J_Afi 8Hz, 8H)} 6,85 (IH, J_AB 8Hz, 7H); 5,8 (2H, s, CH₂0); 3,90 (3H, s, OMe); 3,7 (3H, s, OMe).

(A partir do Produto Intermédio 29)·

Exemplo 45

N--[6-/2-(3,4,5-t rimetoxifenii)etoxi/imidazo/1,2—b/piridazin- 2—i l( — carbamat o de metilo

p.f. 203-206° ^H(DMSO) 9,95 (IH, largo s, NH); 7,8θ (IH, s, 3H)J 7,75 (IH, J_AB 8riz, 8h); 6,8 (lH, J_AB 8Hz, 7H);

6.65 (2H, S, 2AfH); 4,5 (2H, t, CH^); 3,8 (6H, s, 3Me0,

5Me0); 3,7 (3H, s, OMe); 3,65 (3H, s, 4MeO)i 3,0 (2H, t, ch₂).

(A partir do Produto Intermédio 3θ)·

Exemplo 46

N—6—(3,4,5-Trimetoxifeneti1)imidazo /1,2—b/piridazin—2—i1/carbamato de metilo

a) Acido 4—oxo—6-(3,4,5-trimetoxifenetil)hex-5~enoico

Adicionou—se uma solução de ácido ievulínico (50 g, 0,43 moles) em água (200 ml) a uma mistura de 3,4,5- 45 -

-trimetoxibenzaldeído (85 g, 0,43 moles) em etanol (150 ml) e solução de hidróxido de sódio (5%, 700 mi). A mistura foi aque cida com agitaçao forte atê todo o aldeído se ter dissolvido e foi depois despejada sobre gelo (cerca de 2 Kg). Foi depois acidulada a pH 3—4 e deixada em repouso durante a noite. 0 ma teriai cristalino formado foi separado por filtraçao, seco in vacuo e depois recristaiizado a partir de etanol para se obte rem cristais amarelos pálidos (3θ,θ8 s)t p.f. 187—189°·

Espectro de ressonância magnética nuclear! ^H(d^-DMSO), 7,57 (IH, d, J_A1B1 = l8,0Hz» CH); 7,08 (2H, s, 2Ή, 6'H); 6,91 (IH, d, J= 18,0 Hz, CH); 3,83 (6H, s, 3'-MeO e 5'MeO);

Ad __

3,70 (lH, s, 4’MeO); 3,33 (IH largo, m, nao, C0₂H)} 2,92 (2H, t, J_A2B2 = 7,0 Hz, CH₂) e 2,50 (2H, t, J_A2B2 = 7,0Hz, ch₂>.

b) 4,5—Di—hidro—6-(3,4,5-trimetoxi— Λ—estiril)—piridazin—

- 3(2H)-ona

Dissolveu-se ácido 4-oxo—6-(3,4,5—trimetoxifenetil)hex—5-enóico (20 g, 0,068 moles) em ácido acético gla ciai (340 ml), e, em seguida, adicionou—se hidrato de hidrazi na (3,4 g, 0,0Ó8 moles). Aqueceu—se a mistura a refluxo duran te 2,5 horas, arrefeceu—se e despejou-se em água (cerca de 2 litros). Depois de repouso até ao dia seguinte, filtraram-se os cristais formados na bomba e secaram-se in vacuo para se obter o produto (13,58 g). Uma porção (3,5 g) foi recristalizada a partir de metanol e proporcionou cristais amarelos pálidos (3,18 g), p.f. 173-175°·

Expectro de ressonância magnética nuclear·' cSH(CDCl^), 8,91 (IH, largo s, NH); 6,82 (2H, s, CH, CH)} 6,70 (2H, s, CH, CH); 3,89 (6H, s, 3'—MeO e 5'-MeO)j 3,87 (3H, s, 4'Me0); 2,82 (2H, t, J_AB = 9.0Hz) e 2,56 (2H, t, J_AB = 9,0Hz).

c) 4,5—01—hidro—6-(3,4,5-1rimetoxifeneti 1)piridazin—3(2H)-ona

4,5— Ui—hidro— 6— (3,4,5-t rimet oxi— (X —estir il ) — piridazin-3(2H)-ona (5 g, 0,017 moles) foi hidrogenada (85°,

atm ) em ácido acético glaciai (150 ml), na presença de catalisador de 10% Pd/C (0,25 S até ter ocorrido a absorçao de hidrogénio necessária. Filtrou—se a seguir a mistura através sz Hyfio e evaporou-se o filtrado in vacuo a 35°· Os vestígios restantes de ácido acético glaciai foram separados por* destilação azeotrópica com tolueno e o sólido castanho (4,9 g) foi purificado adicionalmente por meio de cromatografia de gel de sílica, com 1% de metanoi/diciorometano como eluente. A se paraçao do dissolvente das fracçoes apropriadas originou o produto na forma de um sólido branco (3,θ^ g), p.f. 116-117°· Espectro de ressonância magnética nuclear:

^HÍCDCl^), 8,46 (IH, s, largo, NH); 6,43 (2H, s, 2Ή, 6'H); 3,83 (6H, s, 3'MeO e 5’MeO); 3,81 (3H, s, 4'MeO); 2,84 (2H, t, J_AB = 7Hz, CH₂); 2,6í (2H, t, J_AB = 7Hz e 1,95 (4H, m, pare, res, CH , CH ).

d) 6-(3,4,5-Trimetoxi fenetil)piridazin~3(2H)-ona

4,5-Di-hidr o-6— (3,4,5—tr imet oxi fenetil )-piridazin-3(2H)-ona (i,72 g, 5,93 milimoles) e dióxido de seiênio 0,98 g, 8,83 milimoles) foram mantidos a refluxo em etanol (80 ml) durante 4,5 dias. Adicionou—se mais dióxido de seié— nio (0,5 g, 4,51 milimoles) e a mistura foi mantida a refluxo durante 5 dias. A mistura foi filtrada para retirar o selénio que se tinha separado e evaporou—se o filtrado in vacuo para se obter um sólido pegajoso castanho (2,21 g). Este sólido foi sujeito a cromatografia instantânea sobre sílica com 1 —2% de metanol—diclorometano como eluente. A combinação das fracçoes apropriadas originou o produto na forma de um sólido cris talino castanho—amarelado (1,43 g), p.f. 122—124°.

Espectro de ressonância magnética nuclear: cíH (CDCl^), 11,64 (IH, largo s, NH); 7,08 (IH, d, J_Afi = 6Hz, HetCH); 6,89 (IH, d, J._D = 6Hz, HetCH); 6,48 (2H, s, 2Ή, 6’H); 3,83 Ad (9H, 2s, 3Me0 e 5’MeO, 4’MeO) e 2,82 (4H, s, CH —CH ).

e) 3~Cloro-6—(3,4,5—trimetoxifeneti1)piridazina

Uma mistura de 6-(3,4,5-trimetoxifenetil)pi- 47 -

àazin—3(2Η)—ona ( 2,8θ g, 9,65 milimoles) e oxicloreto fosforo so (70 ml) foi aquecida a 100° durante I hora, arrefecida até à temperatura ambiente e hidroiisada por meio de adiçao cuida dosa e graduai a água durante 3 horas, para que a temperatura nao excedesse 3θ°· A mistura foi depois alcalinizada a ρΗ12 por meio da adiçao de solução de hidróxido de sódio )1ON, 700 ml) e em seguida deixada a 4° durante a noite. 0 precipitado foi filtrado sob sucção , bem lavado com água para separar os sais inorgânicos e o resíduo da filtraçao foi retomado em di— clorometano. Depois de secagem (sulfato de sódio), a separaçao do dissolvente proporcionou um sólido castanho claro (2,84

g) que foi purificado por meio de cromatografia instantânea sobre sílica, com 10% de acetato de etilo/diclorometano como eluente. Combinaram—se as fracções apropriadas para se obter um sólido branco (2,l6 g), p.f. 105—106°.

Espectro de ressonância magnética nuclear! ^H(CDCi^) 7,3$ (IH, d, J._ = 9Hz, HetCH); 7,16 (lH, d, J_AD = 9Hz, HetCH);

6.37 (2H, s, 2’H, 6'H); 3,82 (9H, s, 3'Me0, 4’Me0 e 5'Me0);

3.37 (2H, t, J_A2B2 = 9H, CH₂) e 3,04 (2H, t, J_A2B2, 9HzCH₂).

f) 3—Amino—6—(3,4,5—trimetoxifenetil)—piridazina

Aqueceu-se 3—cloro-6-(3,4,5-trimetoxi feneti1)piridazina (1,97 g, 6,38 moles) em amónia metanólica (saturada, 800 ml) num autoclave de aço inoxidável a 150° durante 65 horas e, em seguida, deixou—se arrefecer. A mistura foi depois evaporada in vacuo para se obter um sólido pegajoso castanho escuro (2,84 g), que foi submetido a cromatografia instantânea sobre sílica com 3% de metanol/diclorometano como eluente. A combinação das fracções relevantes proporcionou o produto na forma de um sólido branco (0,56 g), p.f. 130-132°. Espectro de ressonância magnética nuclear:

(3h(CDC1₃) 6,96 (lH, d, J_AB = 9,0Hz, HetCH); 6,67 (IH largo, d, J_An = 9,0Hz, HetCH); 6,42 (2H, s, 2Ή, 6’H); 4,74 e 1,98 (2H, largo s, -NH₂)| 3,83 (9H, s, 3'MeO, 4'Me0 5’Meo)i 3,13 (2H, pare, res m. , CH₂) e 3,θ1 (2H pare. res. m. , CH₂).

-Jfe— g ) N- 6-(3,4,5-Trimetoxifenet i 1) imidazd/ΐ, 2-b/piri dazin-2-ilcarbamato de metilo

Aqueceram-se 3^-2mino-6—(3,4,5-trimetoxifenetil )piridazina (0,50 g, 1,73 milimoles) e N-cloroacetilcarbamato de metilo (0,26 g, 1,74 milimoles) em hexametilfosforami da isenta de água (destilada a partir de CaH₂ in vacuo, 15 ml) com agitaçao durante 4 horas a 100° numa atmosfera de azoto.

A mistura foi depois arrefecida, despejada em água (Ι5θ ml), após o que se formou um precipitado. Depois de repouso durante a noite, o precipitado foi separado por fiitraÇao e seco in vacuo para se obter um sólido cristalino de cor creme (0,53

g). Este sólido foi purificado adicionaimente por meio de cro matografia instantânea (sílica, 1—2% de metanol/diclorometano como eluente) e cristalizaçao a partir de acetato de etilo pa ra se obterem cristais esbranquiçados (0,l8 g), p.f. 175—176°. Espectro de ressonância magnética nuclear! ^HÍCDCl^) 10,17 (IH, largo s, NH); 8,l8 (IH, largo s, Het 3-H); 7,77 (lH,d,

JAB = 10Hz, Het CH); 6,85 (lH,d,JAB = 10Hz, HetCH), 6,42 (2H,s,2'-Η,6'-H); 3,88 (3H,s, C0₂Me) e 3,82 (9H,s, 3-Me0,

4'-MeO, 5'-MeO); 3,12 (2H, pare. res. m, CH₂) e 3,02 (2H, pare. res. m, CH₂).

Exemplo 47

N—6— (3,4,5—Trimetoxi—¢¢-estiri i )imidazo/l, 2—b/piridazin—2—il carbamato de metilo a ) 6-(3,4,5~Trimetoxi——estiril)piridazin-3(2H)—ona

Aqueceram—se o composto do Exemplo 46(b) (10,0 g, 34,4 milimoles) e dióxido de seiênio (10 g, 90,1 milimoles) a refluxo em etanol (300 ml) durante 80 horas. Adicionou—se mais uma carga de dióxido de seiênio (10 g) e manteve—se o re fluxo durante mais 40 horas. A mistura reaccional foi depois filtrada através de Hyflo, evaporada e o resíduo seco in va— cuo para se obter um sólido pegajoso castanho escuro (14,48 g). Este sólido foi depois cromatografado sobre sílica com 1—2 %

- 49 nfiHWIMÍPSíiUtÍ de metanol/diclorometano. A combinação das fracçoes apropriadas, seguida por cristaiizaçao a partir de metanol, proporcionou o produto na forma de um sólido castanho amarelado (5,57 g) , P- f. 194-196°.

Espectro de ressonância magnética nuclear: iÍH(CDCI^) 11,95 (1H, largo s, NH); 7,66 (lH,d,J._ini = 10Hz,Het CH); 7,10 (lH,d,J_A2B2 = 18Hz, CH); 7,01 (lH,d,J_A1Bi =10Hz,HetCH)}

6,92 (lH,d, J_A2B2 = l8Hz,CH); 6,74 (2H,s,2'-H, 6--H); 3,91 (6H,s, 3'-MeO, 5’-Me0) e 3,88 (3H,4’Meú).

b) 3—Cloro—6-(3,4,5-trimetoxi- X—estiril)piridazina

Aqueceu— se 6— ( 3,4,5— trimetoxí- /X—estiril )pi— ridazin-3(2H)-ona (5,3 g, 0,018 moles) em oxicloreto fosforoso (15O ml) a 100° durante 1,25 horas. A mistura foi depois adicionada a água (3 litros) durante 2 horas, mantendo a temperatura na gama de 10—30°. A mistura foi depois cuidadosamen te aicaiinizada até pH 10 com solução de hidróxido de sódio (lON, 1,3 litros). Depois de repouso durante a noitej o precipitado foi separado por filtraçao e seco in vacuo para se obter o produto na forma de um sólido castanho amarelado (6,23

g). Uma porção recristalizada de etanol tinha p.f. i62-ib3,5° Espectro de ressonância magnética nuclear : fh (CDCl^) 7,64 UH,d,J_AiB1 = I0Hz,Het CH); 7,54 (IH,d,J_A =l8Hz, CH)}

7,48 (iH,d,J_AiB =10Hz,Het CH); 7,27 ( IH , d , J = 18Hz , CH) ;

6,82 (2H,s,2'—Η,6’—H); 3,92 (6H,s,3'-MeO e 5'-Me0 e 3,88 (3H,s,4'-MeO).

c ) 3—Amino— 6— (trimet oxi— 06-e st ir i 1) pi ri dazina

Aqueceu—se 3“cloro— 6— ( 3,4,5-trimetoxi— (X-esti rilípiridazina (5,5 g, 17,1 milimoles) em amónia metanóiica (saturada, 800 mi) num autoclave de aço inoxidável a 15θ° durante 100 horas e depois deixou-se arrefecer. A separaçao do dissolvente e a cromatografia sobre sílica (2% de metanoi/diciorometano) proporcionaram o produto na forma de sólido castanho claro (ΐ,5θ g), p.f· 139-142°.

Espectro de ressonância magnética nuclear! h (CDCi^) 7,49 (iH,d,J. _D =10Hz CH); 7,24 (2H,2 x sobreposto d,J. _D , J.

^A2^tí2 = (iOHzxCH); 6,75 (3H,d sobreposto com s, J. „ =iOHz,CH,2¹-Η, «2^2

6'-H); 4,85 (2H, largo s, NHg), 3,92(6H,s, 3-MeO e 5-MeO) e

3,87(3« , s,4-MeO).

d) N-6-(3,4,5-Trimetoxi- O(.-est iri 1) imidazo/i , 2-b/piridazin--- - - - - - — — — - - —2—i1—carbamato de metilo

Aqueceram— se 3— amino— _6— (3,4,5—trimet oxi— -estiril)-piridazina (1,36 g, 4,72 milimoles) e N—cloroaceti1 carbamato de metilo (0,68 g, 4,49 moles) em hexametilfosforamida seca (destilada a partir de CaH^ in vacuo 30 mi) com agitaçao durante 4 horas a 100°. A mistura foi depois arrefecida e despejada em água (40 ml). 0 precipitado que se formou foi separado por fiitraçao e seco in vacuo para se obter um sólido castanho amarelado (i,0 g). Este sólido foi cromatogra fado sobre sílica para se obter o produto na forma de um sóli do amarelo pálido (0,4 g), p.f. 217-219°·

Espectro de ressonância magnética nuclear! o)H(d^—DMSO)

10,49(1H,largo s,NH); 7,99 (lH,s,Het 3-H); 7,94 (2H,d,

JA_iB_i=10Hz, HetCH); 7,60 (2H,d,JA₂B_£=18Hz, CH); 7,58 (2H,d,

JA B =10Hz, HetCH); 7,28 (2H,d,JA B =l8Hz,CH); 7,04 (2H,s,

XX £ &

2’H,6'H)} 3,87 (6H,s,3«-MeO e 5'Me0); /3,72 (3H,s) e 3,70 (2H,s)7 (C0 Me e 4’-MeO).

Exemplo 48

N—/6—(3,4,5-trimetoxibenziloxi)imidazo/ΐ,2—b/carbamato de metilo

Azida de ácido 6—(3,4,5—trimetoxibenziioxi) — imidazo/1,2-b7piridazino—2-carboxílico (Exemplo 23c) (1,0 g,

2,6 milimoles) foi aquecida em refluxo durante 24 horas em to lueno (20 ml) e metanol (cerca de 1,5 ml). Arrefeceu—se a mis tura e evaporou—se in vacua para se obter um sólido amarelo que foi recristalizado a partir de DMF e água para se obter o

produto em título (1,05 g), p.f· 213—215° e espectro de resso nância magnética nuclear igual ao do produto do Exemplo 1.

Exemplo 49

N-/S—( 3 ,^ , 5-Trimetoxibenziioxi)imidazo/l ,2-b7piridazin-2-il7 carbamato de metilo

a) Trifluoracetato de 2-amino-6-(3,^,5-trimetoxibenziloxi)imidazo/1,2-b/piridazina

Dissolveu— se N—/7,— ( 3 > 4 , 5— tr ime toxibenzi loxi ) — imidazo/1,2—b/piridazin-2-il7-carbamato de t-butilo (Exemplo 13, 0,43 g, 1 milimole) em diclorometano (2 ml) e tratou—se com*ácido trifluoracético (i mi). Decorridas 2 horas â temperatura ambiente, evaporou-se a mistura in vacuo para se obter um óleo castanho que foi triturado com éter dietílico para se obter o composto em título (0,25 g) na forma de sólido de cor creme, p.f. 150—157°, espectro de ressonância magnética nu— lear: H (DMSO) 8,0 (lH, J._D 8,8Hz, 8H) ; 7,48 (lH, s, 3H);

7,16 (1H, J_AB 8,8Hz, 7H)í 6,44 (2H, s, CH₂); 4,5 (largo s,

NH ); 3,89 (6η, s, OMe) e 3,75 (3«, s, OMe).

b) N-/5-(3,4,5—Trimetoxibenziloxi)imidazo/i,2—b/piridazin—2—il/—carbamato de metilo produto do passo (a) (1,0 g, 3,θ3 milimoles) foi posto em suspensão em diclorometano e sacudido com solução de hidróxido de sódio diluída. Secou—se a fase orgânica (NagSO^) e evaporou—se para se obter um óleo castanho que foi dissolvido em diclorometano e tratado, mantendo sob agitaçao, com trietilamina (0,42 ml, 3,θ3 milimoles), cloroformiato de metilo (0,23 ml, 3»θ3 milimoles) e 4—dimetilaminopiridina (i8 mg, 0,3 milimoles). Manteve—se a mistura em agitaçao à temperatura ambiente durante 17 horas, em seguida aqueceu—se sob refluxo durante 2 horas e evaporou—se in vacuo. 0 sólido resultante foi repartido entre clorofórmio e água, separou-se a fase orgânica, secou-se (Na₂S0^) e evaporou-se para se obter um sólido que foi cromatografado sobre SiO^, eluindo com 2% de metanol—clorofórmio. Recristalizou-se o produto a partir de DMF—H^O para se obter o composto em título (0,27 K ) , p.f·

210—212 ; espectro de ressonância magnética nuclear igual ao do produto do Exemplo 1.

Exemplos 5θ~52

Prepararam—se os compostos seguintes, por meio de um processo análogo ao descrito nos Exemplos 1-3:

Exemplo 50

N-/6—(2,5-Dimet iibenzi ioxi)imi dazo/i,2—b/piridazin-2-ii/carbamato de metilo

p.f. 208—209°} espectro de ressonância magnética nuclear: β) H (d^-DMSO), 10,05 (IH, largo s, NH)J 7,95 (IH, 8,8Hz,

8H); 7,85 (1H,s,3-H); 7,35 (1H,S,6’-H); 7,20 (2H, J_AB

8,8Hz,7H + d, 3' OU 4'-H); 6,90 (iH,d,3’ ou 4'-H); 5,90 (2H,s,CH₂); 3,80 (3H,s,0Me); 2,4 (3H,s,Me); 2,35 (3H,s,Me).

(A partir do Produto Intermédio 24).

Exemplo 51

N—/6—(2-Piridilmetoxi)imidazo/l ,2-b/piridazin-2-ii/-carbamato de metilo

p.f. 231—233^θ (dec) ; espectro de ressonância magnética nu-* ciear (dg-DMSO), 9,95 (lH, largo s, NH) ; 8,55 (lH,d,6'-H)

7,85 (3H,m,8-H + 3-H + 5'-H); 7,55 (lH,d,3'-H); 7,35 (lH,m,

4'-H); 6,90 (lH, J_AB 8,8Hz, 7-H); 5,45 (2H,s,CH₂); 3,70 (3H,s,0Me).

(A partir do Produto Intermédio 31)·

Exemplo 52

Ν- /δ— ( 2— Fur f uri ioxi ) imi da zo/1, 2—b/pirida zin— 2-il/— carbama to de metilo

p.f. 220—224°; espectro de ressonância magnética nuclear:

C?H (dg—DMSO), 10,05 (IH, largo s, NH); 7,95 (lH,s,3-H);

7,90 (IH, J_AB 8,8Hz, 8-H)í 7,75 (IH, largo s, 5'-H); 6,90 (IH, J_AB 8,8Hz, 7-H); 6,75 (lH,d,4’-H); 6,55 (IH, largo s,

3’-H)i 5,45 (2H,s,CH₂); 3,8o (3H,s,0Me).

(A partir do Produto Intermédio 32).

Resultados de Experiência Biológica

A) Experiência de Polimerizaçao de Tubulina

MATERIAIS E MÉTODOS

1. Preparaçao de tubulina

a) Cérebro de cavalo fresco

b) Tampões:

BBG BB2G

100mM MES*	Como BBG mas	Como BBG mas
2mM EGTA*	sem glicerol	com 8M glicerol
ImM MgSO^		e lnM GTP*
4M glicerol
2mM ditioeritrito1

pH 6,9 a 23° *MES = ácido 2(N—morfoiino)—etanossulfónico

EGTA = ácido etilenoglicol—bis—(/3 —aminoetil—éter)—Ν,Ν,Ν’,N'—tetracético GTP = trifosfato de guano sina

Todas as manipulações sao executadas a 4°, salvo indicaçao em contrário. 0 cérebro de cavalo é lavado com tampao de BBG gelado e separam—se meninges e vasos sanguíneos

superficiais. Depois de pesagem, os córtexes cerebrais sao cor tados em pedaços, homogeneizados em 75 mi de tampao de BBG/1OO g de cérebro, centrifugados a 65OO g durante 15 minutos e, de pois de ser separado o sobrenadante, centrifugados de novo a 100.000 g durante 75 minutos. 0 volume do sobrenadante (Vml) ê medido e adiciona—se V/10 ml de GTP lOmM (sai de Li) em 00. A mistura é incubada em tubos de centrifugação vedados ( 3θ mi nutos, 34°) num banho de água sacudido para poiimerizar a tu— buiina. Depois de polimerizaÇao, os tubos sao equilibrados e centrifugados a 100.000 g (i hora a 27°) num rotor previamen— te aquecido. 0 pelete obtido na centrigugaçao a alta veiocida de volta a ser posta em suspensão em V/4 ml de tampao de BB e a preparaçao foi agitada sobre gelo durante 3θ minutos e cen— trifugada a 100.000 g (1 hora a 4°) para separar os microtóbu los estáveis a frio. Adiciona—se um volume igual de tampao de BB2G ao sobrenadante que ê congelado rapidamente em amostras de 5 ml em cápsulas de pesagem de plástico que flutuam sobre uma massa de C0 sólido/etano1, e sao guardadas durante a noi lá ““ te a —80 . Depois de aproximadamente ±8 horas, as amostras congeladas de tubulina sao descongeladas, adiciona—se GTP lOmM em 00 para se obter uma concentração finai de lmM e mede—se o novo volume. Repete-se o ciclo poiimerizaçao/despolimerizaçao exactamente como descrito acima, mas substituindo V po W para se obter tubulina de ciclo duplo.

2. Ensaio de medição de turvaçao de polimerização de tubulina

Aparelho.’ espectrofotómetro registador com suporte da cuveta de 6 posiçoes com termostato} deflexão completa da escala =

0,2 unidades de absorvância·

Numa cuveta de espectrofotómetro de 1 ml misturam—se 100 pl de GTP (sal de Li lOmM preparada com tampao de BB, 10 pi 00 ou DMSO — conforme o dissolvente do medicamento escolhido, tampao BB e preparaçao de tubulina de maneira que o aumento final na A seja de 0,15 unidades depois j 5Unm de l6 minutos (aproximadamente 100 pl de preparaçao de tubuli

na ou 2,5 mg de proteína) num volume final de 1 mi a 37°· dos os reagentes sao armazenados em gelo.

ToInicia—se a polimerizaçao fazendo subir a tem peratura para 37° θ regista—se o aumento de A de amos—

5<Jnm tras em triplicado em relaçao a uma cuveta de referencia. A amostra de referência inclui uma mistura de incubaçao análoga 2 + sem tubulina ou com a adiçao de Ca 1 mM. 0 aumento em relaçao a A„__ iniciai, depois de decorridos 10 minutos após se

5 Onm ter completado a fase de desenvolvimento logarítmico (a polimerizaçao de controlo está 80% completa dentro deste tempo) é calculado e expresso como a percentagem do valor de controlo, para uma gama de concentrações de medicamento. Determina-se a concentração de medicamento necessária para originar uma alte raçao de 50% (CI ) no valor de controlo.

Resultado s

Tabela 1

Composto do Ex. N2

Polimerizaçao total Cl_?0 de tubulina (/Jtn)

9

0,42 0 ,l4 o,4i 0,37 0,49 0,52 0,23 0,89 4,24 1,21

B) Experiência de Formaçao de Colónia P338D^

Método

Neste ensaio, células provenientes de uma ii—

nha do neoplasma linfoide de rato, P388, adaptadas in vitro, sao primeiro expostas a concentrações diluídas em série de com posto de ensaio durante um período de 24 horas em cultura. Se guidamente, determina—se a capacidade dessas células tratadas para formar colónias separadas num período de l4 dias depois de ressuspensao num meio semi-sólido isento de medicamento.

Inicialmente, as células em desenvolvimento logarítmico sao placadas no interior de frascos de cultura de z

tecidos de 25 cm , cada um dos quais contem um volume final de 5 ml de meio de cultura Hepes com tampao RPMI i64O complementado com soro de feto de vitela a 10%, antibióticos e composto de experiência. Todos os compostos sao formulados inicialmente em concentrações apropriadas em DMSO, e 25 microlitros das respectivas preparações sao seguidamente adicionados a cada frasco. Todos os compostos sao avaliados em concentrações que variam em série em decréscimos de quatro vezes a par tir de uma concentraÇao superior aproximadamente quatro vezes maior que a já conhecida para inibir a proliferação destas cé lulas em cerca de 8θ a 90 por cento na primeira experiência de proliferação.

Depois de exposição de 24 horas ao composto do ensaio, as células sao contadas e um número conhecido de células vivas sao transferidas para um tubo de centrifugação de 15 ml ao qual se juntam depois 4 ml de uma solução a 0,25 por cento de agarose que gelifica a baixa temperatura em meio de cultura de tecidos RPMI completo. Depois de 13 dias de incubação a 37°, adiciona—se 1 ml de violeta de p-iodonitrote— trazôlio a 1% na parte superior de cada tubo e deixa—se passar através da agarose durante 24 a 48 horas. Este corante é metabolisado pelas células vivas para produzir um produto cris talino vermelho insolúvel que facilita a contagem das colónias. Tomam—se amostras de cada tubo e determina—se o número de colónias que contêm um mínimo de 50 células. Determina—se a concentração de composto necessário para inibir a formaçao de colónias em 5θ% reiativamente ao de células de controlo en

saia do.

Re sultado s

Tabela 2

Experiência de Formaçao de Colónias P388 D ι

Compo sto

do Exemplo N2	CI5°	(M)
i	1,32 X	10“ 8
2	5,15 χ	io-10
3	2,15 χ	10 9
4	5,12 X	10” 9
5	1,26 X	108
7	6,34 χ	10“ 9
8	2,93 x	10“ 9
li	4,10 x	10- 8

Ensaio com

388/O Leucemia Linfocítica

C.

Método

Ratos CD2—F^, do mesmo sexo, com o peso de 20 g Í 3 g, sao utilizados para este ensaio. Os animais de controlo e de ensaio sao injectados intraperitoneaimente com uma suspensão de 10 células de tumor P388/O viáveis no dia O. Em cada ensaio, avaliam—se vários níveis de dosagem que abrangem a 6Ε₂θ do composto; cada grupo com o mesmo nível de dosagem compreende 6 animais. Os compostos ensaiados sao preparados qu em solução fisiológica de cloreto de sódio que contêm 0,05% de Tween 8θ ou em água destilada que contêm dextrose a 5% θ sao administrados intraperitoneaimente nos dias 1, 5 e 9 em relaçao ao implante do tumor. As doses sao estabelecidas numa base de mg/kg de acordo com os pesos corporais individuais dos animais. 0 dia da morte de cada animal ê registado e o dia me diano de morte ê identificado para cada grupo. A diferença en tre o tempo de sobrevivência mediano de grupos tratados e o :' ***'**»^a3case^abcA_tí.·..

do grupo de controlo é expressa em percentagem de aumento do período de vida (%ILS).

jLafiúESigíiaaau^,

Resultados

Quadro 3

	Ensaio	com P388/O	Leucemia	Linfo cí ti ca
Composto do	Do se	°/oILS	Sobrevi-	Sobrevi—
Exemplo NQ	(mg/kg)		ventes 30 dias	vent e s 60 dias
1	10	300	6/6	2/6
2	7,3	31
3	50	136
4	20	44
5	I50	6l
7	5	iii
8	10	44
9	200	180
11	675	155	1/6	0/6
12	675	170
26	300	263
32	750	280		1/6
33	200	240		3/6 (dia 51)

D DL₂₀ (Rato)

Método

Preparam—se compostos de ensaio conforme descrito para a experiência com P/388/O leucemia linfocítica (C) e administraram-se intraperitonealmente em vários níveis de dosagem a grupos de 6 ratos CD2—F^, do mesmo sexo, com o peso de 20Ú 3 g) nos dias 1, 5 e 9· Os ratos sao observados até l4 dias (a contar do dia i), registam—se os números de mortes em cada grupo e determina-se a DL₂q.

Resultado s

Composto do Exemplo Nõ

Quadro 4

LD₂₍₎ (mg/kg)

E. Actividade conrra turno

20-30

200 l40

450 >450 >450

450

165 >450 s resistentes a medicamento

Seguindo um processo análogo ao do ensaio com P388/O de leucemia linfocítica, avaliou—se o composto do Exem pio 1 contra tumores P388/O que eram resistentes aos seguintes agentes antitumores padrao utilizados clinicamente: bis—cioronitroso—ureia (BCNU) ciclofosfamida (CPA) adriamicina (ADR) actinomicina D (ActD) metotrexato (MTX)

5—fiúor-uraciio (5FU) cis-platina (Cis—Pt)

Vincristina (VCR)

Amsacrina (AMSA) κ

fel

Quadro 5

Actividade in	vivo do	Composto do	Exemplo 1
contra	tumore s	re si st ent e s	a
medi camento s

Tumor/Re si stência	Compo sto	Do se óptima (mg/kg)	%ILS	Sobrevivente s 60 Dias
P388/BCNU	Ex. 1	7,5	+ 131	0/6
	BCNU	2,0	+ 36	0/6
P388/Cis-Pt	Ex. 1	10,0	+ 50	1/6
	Ci s-Pt	5,3	+ 21	0/6
P388)AMSA	Ex. 1	5,0	+ 134	4/6 (dia 3-b)
P388/ADR	Ex. 1	10,0	+ 90	0/6
	ADR	4,5	+ 27	0/6
P388/MTX	Ex. I	7,5	+ 100	i/6
	MTX	3,0	+ 15	0/6
P388/ActD	Ex. 1	12,5	+ 109	1/6
	ActD	0,5	+ 27	0/6
P388/CPA	Ex. 1	12,5	+ 150	1/6
	CP A	265,0	+ 55	0/6
P388/VGR	Ex. 1	12,5	+ 145	3/6
	VGR	1,5	+ 36	0/6
P388/5FU	Ex. 1	10,0	+ 92	0/6
	5 FU	20,0	+71	0/6

- 6l F. Actividade In Vivo Contra Linhas de Células de Tumor Humano

Méto do

Células provenientes das linhas de células de tumores humanos DLD-1, HCT-116, WiDr e A5^9 sao expostas a con centraçoes diluídas em série de compostos de experiência durante um periodo de 96 horas de cultura. Determina—se a capaci dade dessas células para proliferar durante o período do ensaio.

Aplicam—se células em crescimento logarítmico em placas de cultura de tecidos com poços múltiplos de 96 poços na quantidade de 100 jjl/poço de meio de cultura RPMI 1640 completado com soro de feto de vitela a 10%, antibiótidos e composto de ensaio.

Todos os compostos sao preparados inicialmente em concentrações apropriadas em DMSO, sendo as concentrações finais deste dissolvente vinte vezes maiores que a neces séria na placa. Em seguida, prepara-se uma diluição final de 1 para 10 em meio completo, antes de se adicionarem 100 jil a cada poço da placa. Todos os compostos sao avaliados em concentrações que variam em série em decréscimos de quatro vezes a partir de uma concentração superior aproximadamente quatro vezes maior que a j& conhecida para inibir a proliferação de células provenientes do neoplasma linfoide de rato, P388DI em cerca de 80 a 90 por cento num ensaio de proliferação primário.

Decorridas 96 horas, a proliferação de células expostas ao composto de ensaio ê comparada com céliias de controlo nao tratadas por um de dois métodos:

a) Aspiram—èe sobrenadantes de cultura e fixam—se células que sao manchadas por meio da adiçao de uma solução de azul de metileno ( g por litro de 50% etanoLagua, 100 ^il/poço). Decorridos 30 minutos à temperatura ambiente, a mancha nao

fjxada ê separada por lavagem por meio da imersão de placas em água. As células manchadas sao solubilizadas até ao dia s guinte utilizando 1% de Sarkozyl (Sigma) em solução fisiológ ca de cloreto de sódio com tampao de fosfato (100 yul/poço). Leem-se as absorvâncias por meio de um espectrofotómetro de placa ELISA num comprimento de onda de Ó20 nm. A ΟΙ^θ é definida como a concentração de medicamento que diminui a absorvancia para 50% da das cuituras de controlo (isentas de medicamento). Este método é utilizado para a linha de células DLD-1.

b) Adicionam—se 20 jil de MTT (5 mg/ml em PBS) a cada poço. De pois de um período de incubação de 4 horas, o meio proveniente de cada poço é aspirado e substituído por 200 μΛ de DMSO para dissolver os cristais de formazano formados. Leem —se as absorvâncias por meio de espectrofotómetro de placa ELISA num comprimento de onda de 540 nm. A IC θ é definida como a concentração de medicamento que diminui a absorvan— cia para 50% da das cuituras de controlo (isentas de medicamento). Este método é utilizado para linhas de células WiDr, HCT-116 e A549.

Quadro 6

Actividade in vitro Contra linhas de células de tumor humano _ 3

Composto do , , , , OI3Q ^x 10

Exemplo NQ DLD-l'^a' WiDr HCT-ll6(^fe)

A549^^b^

1	11,60	30,00	9,20	23,97
2	2,90	4,57	2,80	3Λ2
3	1,35	0,92	1,91	1,92
4	6,63	10,98	5,45	20,81
5	7,34	3,65	3,30	4,36
7	5,92	19,70	8,25	22,40
8	8,82	4l,00	20,52	38,96

- 63 G. Actividade in vivo do composto do Exemplo 1 contra tumo— res murídeos

Seguindo um processo análogo à do ensaio com P388/O de leucemia linfocítica, o composto do Exemplo 1 foi avaliado contra os tumores murídeos Bl6, L1210 e M5O76. Implanta—se uma suspensão de 10 células de tumor intraperito— neaimente em animais de controlo e de ensaio no dia zero. As células de tumor Bl6 sao administradas intraperitonealmente como uma suspensão 1:10 de células no dia zero. 0 composto de experiência ê administrado intraperitonealmente nos dias 1, 5 e 9· Para os ensaios com Bl6 e M5076 usam—se 10 ratos por gru po tratado e para L1210 utilizam-se 6 ratos por grupo tratato. 0 dia da morte de cada animal é registado e calcula—se a %ILS (aumento percentual de duraÇao de vida). Os resultados estão indicados no Quadro 7·

Quadro 7

Actividade In Vivo contra tumores murídeos

Tumor Dose (mg/kg) %ILS Média (+ EPM

NS de

A expenencias

M5076	5	28	1
L12I0	10	134 (+72)	2
Bl6	5	69 (±4)	3

Exemplos de Composiçoes

A. COMPRIMIDOS

Composto de fórmula I (como cloridrato) Amido de milho pré—geiatinizado Amido giicolato de sódio Estearato de magnésio

100,0 mg 60,0 mg 20,0 mg 4,0 mg

composto da fórmula (I) é finalmente moído e infimamente misturado como os excipientes em pó, amido de milho pré-gelatinizado e amido—glicolato de sódio. Os pós sao molhados com água purificada para formar grânulos, Os grânulos sao secos e misturados com o estearato de magnésio. A pre paraçao é depois aglomerada em comprimidos com o peso aproximado de 184 mg cada um.

B. COMPRIMIDO

Composto de fórmula (I)	100,0	mg
Amido—glicolato de Sódio	20,0	mg
La ctose	83,8	mg
Estearato de magnésio	4,2	mg
Poiivinilpirroiidona	i4,0	mg

composto de fórmula (I) é finamente moído e infimamente misturado com os excipientes em pó, amido glicola to de sódio e lactose. Os pós sao molhados com uma solução de polivinilpirrolidona dissolvida em água purificada e álcool desnaturado para formar grânulos. Os grânulos sao secos e mis turados com o estearato de magnésio. A preparaçao é depois aglomerada para obtenção de comprimidos com o peso aproximado de 222 mg cada um.

C. CAPSULAS

Composto de fórmula (I) 100,0 mg

Amido de milho 5θ,0 mg

Estearato de magnésio 3,θ mg composto de fórmula (i) finamente dividido é misturado com amido de milho em pó. 0 pó seco é misturado com estearato de magnésio e ê utilizado para encher cápsulas de gelatina dura.

D. SUSPENSÃO

Composto de fórmula (i) Celulose dispersável Glicerina

Sacarose

Agente aromatizante Agente corante Agente preservante Agua purificada

q. s. para

100,0 mg 100,0 mg 500,0 mg

3,500,0 mg

q. s.

q. s.

0,1% 5,0 ml composto de fórmula (I) é posto em suspensão na glicerina e numa porção da água purificada. A sacarose e o agente preservante sao dissolvidos noutra porção de água purificada quente e, em seguida, o agente corante é adicionado e dissolvido, seguido peia celulose dispersável. As duas preparações sao misturadas e arrefecidas antes de o agente aromatizante ser adicionado. Adiciona-se água purificada atê perfazer o volume final. A suspensão resultante ê completamen te misturada.

E. INJECÇAO INTRAVENOSA

Composto de fórmula (I) Acido Clorídrico

Agua para Injecções

5,0 mg conforme necessário para ajustamen to do pH

q.s. para 10 mi composto de fórmula (I) é adicionado a uma porção da Ãgua para injecções. Ajusta—se o pH com ácido clorí drico para dissolver o composto. Adiciona—se água para injec— çoes atê perfazer o volume final e a solução completa—se mediante mistura íntima. A soiuçao é esterilizada por meio de fiitraçao através de um filtro de membrana de 0,22 mícrons e ê introduzida assepticamente em ampolas ou frascos de 10 ml, esterilizados.

Claims (6)

1. REIVINDICAÇÕES

   - ia Processo de preparaçao de um composto com a fórmula geral (I)

   Y-X

   N-CO R 2

   R· (I) na qual

   R³ representa um grupo carbocíclico opcionalmente substituído que tem 6 ou 10 membros de anel e contêm pelo menos um anel aromático, um grupo arilo heteroclclico opcionalmente substituido que tem 5 a 10 membros de anel, ou um grupo alqui lo C^ alcenilo ^2-10* ^g_io ^{ou c}i-^cI°^aI^ce~ nilo Cy ιθ opcionalmente substituídos;

   R representa um grupo alquilo j alcenilo C _1Q, ^a^^<l^u;’-^riI lo C^ ^θ, cicloalquilo C^ ou cicloalcenilo ^3—10 °P^CI°“ nalmente substituídos, um grupo arilo carbocíclico opcionalmente substituido que tem 6 ou 10 membros de anel e con têm pelo menos um anel aromático, um grupo heteroclclico opcionalmente substituido que tem desde 5 atê 10 membros de anel, ou um grupo aril—alquilo opcionalmente substituído em que a porção arilo ê um grupo carbocíclico ou heteroclclico com as significações anteriores.

   Rrepresenta um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo e representa um átomo de oxij^nio ou enxofre, um grupo — CH —

   4 4 , , ou um grupo NR no qual R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo C^_ e

   Y representa um grupo —CH^~ ou ou

   X-Y em conjunto representam o grupo —CH=CH-} e dos seus sais e derivados fisiologicamente funcionais, caracterizado por cempreender:

   (A) a reacçao de um derivado de piridazina com a fórmula gerai (II):

   (II) (na qual R e X e Y têm as significações anteriormente indicadas) com um composto com a fórmula geral (III) j

   RZCHCONCOR 2 2 (III)
2. 2 3** ** (na qual R e R^J têm as significações anteriores e Z repre senta um átomo de halogéneo)} ou (B) a

   ra com a fórmula ge(na qual presenta la geral reacçao de um derivado de piridazina 1 (IV) (IV)

   2 3** *** r e R'' têm as significações anteriores e um grupo separável) com um composto com a (V)} r¹ch₂x¹h (V) re— fôrmu— (na qual R tem a átomo de oxigénio do para a fórmula significação anterior e X ou enxofre ou um grupo NR (I)i ou representa um como defini— (C) a reacçao de um composto com a fórmula (VI):

   0 N.

   CN.

   (VI)

   R- Y--X com um álcool R OH apropriado} ou (D) a reacçao de um composto com a fórmula (VII):

   R-— γ χ (VII) com um reagente adequado para introduzir o grupo -CO_QR } ou (E) a transformaçao de um composto com a fórmula (I) noutro composto com a fórmula (i)} e seguidamente, se se desejar e/ou for apropriado, formando—se um sal.

   - 2S Processo para a preparaÇao de um composto com a fórmula (IA)

   R^J na qual

   R^ representa um grupo arilo carbocíclico opcionalmente substituído que contêm 6 ou 10 membros de anel, um grupo ari— io heterocíclico opcionalmente substituido que contêm des de 5 atê 7 átomos no anel, um dos quais, pelo menos, é um heteroátomo, sendo o anel heterocíclico opcionaimente fun dido com um anel fenilo, ou um grupo alquilo alce—

   - 69 R- nilo C2-IO’ ^clcl°^al⁽3^ul 1° ^{OU c;}*-^c^^0a^^cen^^⁰ °^-10 °P^- cionalmente substituidoj representa um grupo alquilo C

   1-10* ^{alceniio c}2_io’ alquinilo C

   2-10 ou cicloalquilo C
3. 3-10 opcionalmente substituidos, um grupo arilo carbocíclico que contêm 6 ou 10 membros de anel) um grupo arilo heterocíclico opcionalmente substituido que contêm desde 5 atê 7 Stomos no anel, um dos quais, pelo menos, ê um heteroStomo, sendo o anel he— terocíciico opcionalmente fundido com um anel fenilo, ou um grupo aralquilo, representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo ^Cl-
4. 4’ ^θ representa um átomo de oxigénio ou enxofre, um grupo -CH ou um grupo NR no qual R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo C^_^ ^e I representa um grupo -^CH2~» ^ou

   X—Y, conjuntamente, representam o grupo —CH=CH—J e dos seus sais, caracterizado por compreender:

   (A) a reacçao de um derivado de piridazina com a fórmula gera 1 (II ) :

   R·

   NH, (II) (na qual R e X e Y têm as significações anteriores indicadas para a fórmula (IA)), com um composto com a fórmula gerai (III):

   Rzch₂conco₂r (III)

   2 3 λ ~ (na qual R e R^J tem as significações anteriores indicadas para a fórmula (IA) e Z representa um átomo de halo—

   70 gêneo ) j ou (B) a reacçao de um derivado de piridazina ral (IV):

   com a fórmula ge— (IV)

   2 3a ** (na qual R e R^J têm as significações anteriores indicadas para a fórmula (IA) e representa um átomo de halogéneo) com um composto com a fórmula geral (V):

   r^ích₂x¹h (V) (na qual R^ tem as significações anteriores indicadas para a fórmula (IA) e X^ representa um átomo de oxigénio ou enxofre ou um grupo NR que tem a significação anterior indicada para a fórmula (IA) j ou (C) a reacçao de um composto com a fórmula (VI)

   R0 (VI) com um álcool R OH apropriado, e (D) a transformaçao de um composto com a fórmula (I) noutro composto com a fórmula (l)i seguida, se se desejar e/ou for apropriado, da formaçao de um sal.

   - 3^a Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparaçao de um composto com a fórmula (I) caracterizado por se obter um composto em que R^ representa um grupo fe— nilo ou naftilo opcionalmente substituído, um grupo arilo he—

   71 7>

   >Ws25ia

   St// terocíciico com
5. 5 ou contém desde i atê a gênio ou enxofre, ou
6. 6 membros opcionalmente substituido heteroétomos escolhidos entre azoto um grupo alquilo C £.

   que oxi

   - 4a Processo de acordo com as reivindicações 1 ou

   3, caracterizado por se obter um composto com a fórmula (i) em que R representa um grupo fenilo ou um grupo alquilo C opcionalmente substituido.

   - 5^S Processo de acordo com qualquer das reivindicações 1, 3 ou 4, caracterizado por se obter um composto com

   O a fórmula (l) na qual R^J representa hidrogénio ou metilo.

   — 6a —

   Processo de acordo com qualquer das reivindicações 1 ou 3 a 5 caracterizado por se obter um composto com a fórmula (i) na qual Y representa -CH -, X representa um óto

   Xá mo de oxigénio ou enxofre ou -CH ou o grupo X-Y representa

   A —CH=CH—.

   Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se obter um composto escolhido no grupo que consiste em:

   Ν—/ζ—(3,4,5^—trimetoxibenziloxi)imidazo/ΐ,2—b/piridazin—2—il/— carbamato de metilo

   Ν—/δ—(3,5— dimetoxibenziloxi)imidazo/i,2-b/pi ridazin-2—i1/carbamato de metilo,

   Ν-/δ-(2,5-dimetoxibenziloxi) imidazo/7,2-b/piridazin-2-i1/carbamato de metilo,

   Ν—/δ—(1—na ft iImetiloxi)imidazo/7,2—b/piri dazin—2-i1/carbamato de metilo

   N—/5—(3—metilbenziioxi)imidazo/l,2—b/piridazin-2-il/carbamato de metilo

   Ν—/δ—(2,3-dimetoxibenziloxi)imi dazo/7,2—b/piridazin-2—i1/carbamato de metilo,

   Ν—/δ—(2,5~dimetilbenziloxi)imidazo/7,2—b/piridazin—2—ii/carbamato de metilo ,

   N—/Ç>— ( 2,5—dimetoxibenziloxi ) imidazo/7,2— b7piridazin-2—il/— carbamato de etilo,

   Ν—/δ—(3,4,5—trimetoxibenziloxi)imidazo/7,2—b/piridazin—2-i1/— carbamato de etilo ,

   N-meti1-Ν-/δ-(3,4,5-trimetoxibenziloxi)imidazo/7,2-b/piridazin—2—il/carbamato de metilo,

   Ν—/δ— ( 2—bromo—3, 4-^5-trimetoxibenziloxi )imidazo/1,2— b/pirida— zin—2—ii/carbamato de metilo,

   Ν— /δ—(3,4,5-trimetoxibenziloxi)imidazo/7,2—b/carbamato de n— -propilo, e

   Ν-/δ—(3,4,5-trimetoxibenziloxi)imidazo/7,2—b/piridazin-2-ii/carbamato de n—butilo,

   N_—/δ—(3,4,5—trimetoxibenziloxi)imidazo/7,2—b/piridazin—2— —ii/carbamato de 2—metoxietilo,

   Ν -/δ-(3,5—dimetoxi—4—etoxibenziloxi)imidazo/7,2-b/piridazin-2-i17 —carbamato de metilo, e os seus derivados fisiologicamente funcionais.

   73 8a Processo para a preparaçao de farmacêutica, caracterizada por se incorporar uma composição como ingrediente activo um composto com a fórmula (i) ou um seu sai farma— ceuticamente aceitável ou um seu derivado fisiologicamente funcional quando preparado de acordo com as reivindicações an teriores conjuntamente com um veículo farmaceuticamente aceitável.

   requerente declara que o primeiro pedi do desta patente foi apresentado no Reino Unido em 15 de Agosto de 1987, sob o n2 8719368.