ES2906785T3 - Pirazoles 3,5-disustituidos útiles como inhibidores de la quinasa de punto de control 1 (CHK1), y sus preparaciones y aplicaciones - Google Patents

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Abstract

Un compuesto de fórmula (II): **(Ver fórmula)** en la que: R1 es -F, -Cl o -Br; R2 y R3 son cada uno independientemente -H, o R2 y R3 junto con el átomo de carbono al que están unidos forman ciclopropilo; R4 es -H o metilo; y R5 es -CN, o una sal, isómero geométrico, enantiómero, diastereómero, racemato, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

DESCRIPCIÓN
Pirazoles 3,5-disustituidos útiles como inhibidores de la quinasa de punto de control 1 (CHK1), y sus preparaciones y aplicaciones
CAMPO DE LA APLICACIÓN
La presente invención se refiere a compuestos que tienen un núcleo de pirazol 3,5-disustituido que son potentes inhibidores de la quinasa de punto de control 1 (Chkl). Más específicamente, la presente invención proporciona un compuesto de fórmula (II) o isómeros geométricos, enantiómeros, distereómeros, racematos, sales farmacéuticamente aceptables, solvatos o hidratos de los mismos, una composición farmacéutica que comprende el compuesto y un procedimiento para hacer el compuesto. El compuesto actúa como un inhibidor de Chkl, y es útil en el tratamiento de cánceres caracterizados por la activación constitutiva de Chkl o por un elevado daño intrínseco del ácido desoxirribonucleico (ADN) o lesiones en la replicación del ADN.
ANTECEDENTES
El daño en el ADN, que se produce en todas las células y orgánulos que contienen ADN, puede ser el resultado de errores cometidos durante la replicación del ADN, así como de agentes que modifican químicamente o se intercalan dentro de la estructura del ADN. Estas alteraciones del ADN activan el punto de control G1/S de la replicación del ADN o el punto de control G2/M, que inhiben la progresión del ciclo celular de G1 a S o de G2 a mitosis, respectivamente. La detención del ciclo celular permite a las células reparar el ADN dañado en los cánceres tratados con agentes anticancerígenos o radiaciones ionizantes, evitando así la transmisión de errores genéticos a las células hijas.
Las proteínas de reparación de daños en el ADN y de control del ciclo celular han atraído recientemente la atención como dianas farmacológicas moleculares para el tratamiento de cánceres en combinación con quimioterapia o radiaciones ionizantes. En la actualidad se están desarrollando varios inhibidores moleculares pequeños de las proteínas que intervienen en la reparación del ADN y el control del ciclo celular, entre ellos los inhibidores moleculares pequeños de la poli-adenosina difosfato-ribosa polimerasa-1 (PARP-1), la proteína quinasa dependiente del ADN (DNA-PK), la proteína quinasa relacionada con la ataxia-telangiectasia (ATR) y la quinasa de punto de control 1 (Chkl).
Chkl es una proteína quinasa de serina/treonina conservada. La activación de ATR fosforila Chkl, que desactiva Cdc25A y Cdc25C, lo que conduce a la detención en S y G2/M, respectivamente (Chen T. et al., Drug Discov Today 17, 194-202, 2012). Se ha observado que muchos tumores son deficientes en los puntos de control G1, lo que los hace dependientes de los puntos de control S y G2 para reparar el daño en el ADN y sobrevivir (Janetka J. W. et al., Opinion in Drug Discov Develop 10:473, 2007). Los puntos de control S y G2 están regulados por Chkl. Por lo tanto, Chkl actúa como un actor principal en la vía de transducción de señales que se activa en respuesta al daño del ADN.
Se ha demostrado que la inhibición de Chk 1 suprime los puntos de control S y G2, con lo que se deteriora la reparación del ADN, se anula la detención del ciclo celular y se produce un aumento de la muerte de las células tumorales incluso en ausencia de daños en el ADN. Varios inhibidores de Chkl han pasado a la fase de desarrollo clínico. MK-8776 (Daud A.L. et al., J Clin Oncol 33:1060-1066, 2015). Chkl inhibitors LY2603618 (Doi T. et al. Anticancer Drugs. 2015 Ago 18. [Epub ahead of print]) y GDC-0425 (AACR 2015, Filadelfia, Pensilvania) fueron tolerados como monoterapia y en combinación con gemcitabina. Se han observado pruebas tempranas de eficacia clínica. Está en marcha un estudio de fase II de LY2606368 en pacientes con cáncer de mama, ovario o próstata (ClinicalTrials.gov Identifier: NCT02203513).
Los inhibidores de Chkl se han desarrollado para su uso en combinación con antimetabolitos y agentes que dañan el ADN (por ejemplo, gemcitabina, irinotecán, topotecán, cisplatino, radiación ionizante y docetaxel) que causan detención S y G2, para aumentar la sensibilidad del tratamiento (Koh S-B. et al. Cancer Res 75:3583-3595, 2015 Morgan M.A. et al. Cancer Discov 4:280-291, 2014.).
KRAS es uno de los oncogenes que mutan con más frecuencia en el cáncer humano, y todavía no se ha desarrollado ningún tratamiento clínicamente eficaz para los tumores con mutaciones en KRAS. El cáncer con mutación KRAS muestra una mayor actividad de Chkl y MK2. La focalización simultánea de Chkl y MK2 conduce a la catástrofe mitótica en las células con mutación KRAS e induce la muerte celular apoptótica en las células tumorales con mutación KRAS o BRAF aisladas directamente de los pacientes. La combinación de un inhibidor de Chkl con un inhibidor de MK2 podría proporcionar una estrategia terapéutica para el tratamiento de los cánceres impulsados por KRAS o BRAF (Dietlein F. etal., Cell 162: 146-159, 2015).
ATR, Chkl and WEE1 son proteínas esenciales necesarias para el desarrollo embrionario en ratones (Brown y Baltimore, 2000; Liu et al., 2000; Tominaga et al., 2006). En consonancia con un papel esencial, no se han observado mutaciones homocigóticas inactivadoras de los genes que codifican estas quinasas de punto de control en el cáncer. Sin embargo, un pequeño subgrupo de tumores humanos muestra mutaciones heterocigotas en ATR o Chkl (Bertoni et al., 1999; Lewis et al., 2005; Zighelboim et al., 2009), lo que resulta en una expresión reducida de la proteína. Hasta donde sabemos, no se ha informado de mutaciones en WEE1. Sin embargo, w EE1 puede estar subregulado a través de otros mecanismos, como la expresión de microARNs asociada al cáncer (Butz et al., 2010; Tili et al., 2011). Es posible que las células cancerosas con una expresión reducida inherente de ATR, Chkl o WEE1 respondan a bajas concentraciones de inhibidores de los puntos de control de la quinasa, con lo que las células normales podrían quedar a salvo.
Por otro lado, ATR, Chkl y WEE1 también se sobreexpresan en un subconjunto de cánceres humanos (Iorns et al., 2009; Mir et al., 2010; Cole et al., 2011; Magnussen et al., 2012; Parikh et al., 2014). En algunos casos, las quinasas de punto de control pueden ser sobrerreguladas como parte de una respuesta celular para hacer frente a un elevado estrés de replicación (Sorensen y Syljuasen, 2012; Lecona y Fernández-Capetillo, 2014). Por ejemplo, la amplificación de Myc se ha relacionado con niveles elevados de Chkl y una mayor sensibilidad a los inhibidores de Chkl (Cole et al., 2011; Hoglund et al., 2011). Posiblemente, estas células dependan por tanto de los altos niveles de ATR, Chkl o WEE1 para sobrevivir. Por tanto, los inhibidores de ATR, Chkl o WEE1 pueden ser potencialmente más tóxicos para las células cancerosas que expresan intrínsecamente altos niveles de estas quinasas. En conjunto, esto crea un cuadro complejo en el que la baja expresión anormal, o la alta expresión, de ATR, Chkl o WEE1 en las células cancerosas puede potencialmente causar una mayor sensibilidad a los inhibidores de estas quinasas de punto de control. Es muy convincente que la inhibición de CHK1 y WEE1 se combinan sinérgicamente para mejorar la eficacia terapéutica en ciertos tipos de cánceres humanos.
La proteína p53 es una proteína supresora de tumores. Cuando se produce un daño en el ADN, la p53 se estabiliza y se activa para inducir una detención G1 dependiente de la p53, lo que conduce a la apoptosis o a la reparación del ADN. Más de la mitad de los cánceres presentan defectos funcionales de p53. Estas células deficientes en p53 no se detienen en el punto de control G1/S, lo que las hace más dependientes del punto de control G2/M para su viabilidad y replicación. Los inhibidores de Chkl, que bloquean la función del punto de control G2/M, tienen efectos potenciadores más pronunciados en algunos tumores deficientes en p53, como los de colon, mama y próstata y los asociados a la leucemia (Chen T et al., Drug Discov Today 17, 194-202, 2012 Ma C.X. et al., J Clin Invest. 122:1541-1552, 2012). Se han divulgado inhibidores de Chkl, incluyendo, por ejemplo, compuestos de urea sustituidos por arilos y heteroarilos descritos en WO 2006/021002 A3, WO 2006/014359 A3y WO 02/070494 A1; los compuestos de aminopirazol descritos en WO 2012/064548 A1 y WO 2010/077758 A1; compuestos de urea sustituida descritos en WO 2006/105262 A1; derivados de tiofeno y tiazol descritos en EP 2 305671 A1; y compuestos de carbamato descritos en US 2005/0148643 A1.
Además, se han hecho varios intentos de desarrollar inhibidores de la quinasa Chk-1. WO 2015/120390 A1 divulga un compuesto de fórmula (0) que inhibe o modula la actividad de la quinasa Chk-1. C. KING et al. ("LY2606368 Causes Replication Catastrophe and Antitumor Effects through CHK1-Dependent Mechanisms", MOLECULAR CANCER THERAPEUTICS, vol. 14, n° 9, septiembre de 2015 (2015/09), páginas 2004-2013) describe la caracterización de un novedoso inhibidor de Chkl, LY2606368, que como agente único provoca la rotura de la doble cadena del ADN al tiempo que elimina la protección de los puntos de control del daño del ADN. El documento US 2011/144126 A1 divulga compuestos de aminopirazol o sales o solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos que inhiben la Chkl y son útiles para tratar cánceres caracterizados por defectos en la replicación del ácido desoxirribonucleico (ADN), la segregación de cromosomas o la división celular.
Sin embargo, todavía se necesitan nuevos compuestos que sean inhibidores potentes de Chkl y beneficiosos para el tratamiento de los cánceres. La presente invención responde a esta necesidad.
SUMARIO DE LA INVENCIÓN
La presente invención se refiere a inhibidores de Chkl que tienen un núcleo de pirazol 3,5-disustituido.
Un aspecto de la presente invención es proporcionar un compuesto de fórmula (II)
Figure imgf000003_0001
en la que:
Ri es -F, -Cl o -Br;
R2 y R3 son cada uno independientemente -H, o R2 y R3 junto con el átomo de carbono al que están unidos forman ciclopropilo;
R4 es -H o metilo; y
R5 es -CN,
o una sal, isómero geométrico, enantiómero, diastereómero, racemato, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo.
También se divulga, pero no forma parte de la invención, un compuesto de fórmula (I):
Figure imgf000004_0001
en la que R, R1 , R2 , R3 , R4 y R5 son como se definen en la especificación, o una sal, isómero geométrico, enantiómero, diastereómero, racemato, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo.
Otro aspecto de la invención es proporcionar una composición farmacéutica que comprenda una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (II), o una sal farmacéuticamente aceptable, isómero geométrico, enantiómero, distereómero, racemato, solvato o hidrato del mismo, y uno o más portadores o excipientes farmacéuticamente aceptables del mismo. La composición farmacéutica de la presente invención es eficaz en la inhibición de Chkl, y por lo tanto es útil en el tratamiento del cáncer.
Otro aspecto de la invención es proporcionar un compuesto de fórmula (II), o una una sal, isómero geométrico, enantiómero, diastereómero, racemato, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer.
Otro aspecto de la invención es proporcionar un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula (II), o una sal farmacéuticamente aceptable, isómero geométrico, enantiómero, distereómero, racemato, solvato o hidrato del mismo. Estos y otros aspectos de la presente invención se harán evidentes a partir de la siguiente descripción detallada. BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS
La figura 1 muestra el análisis de Transferencia Western para la fosforilación de ChK1 mediante el cotratamiento con inhibidores de ChK1 y SN-38 (200 nM).
La figura 2 muestra el análisis de Transferencia Western para la fosforilación de ChK1 por el inhibidor de ChK1 en las células HT-29 pretratadas con SN-38.
La figura 3 muestra el estudio PK del compuesto 3 en ratones con Xenoinjerto de HT-29.
La figura 4 muestra la inhibición del crecimiento tumoral mediante la combinación del compuesto 3 y el CPT-11 en el modelo de xenoinjerto de HT-29.
La figura 5 muestra la inhibición del crecimiento tumoral dependiente de la dosis del compuesto 3 en el modelo de xenoinjerto de LoVo.
DESCRIPCIÓN DETALLADA
La presente invención puede entenderse más fácilmente por referencia a la siguiente descripción detallada de varias realizaciones de la invención, los ejemplos y las tablas con sus descripciones pertinentes. A menos que se defina lo contrario, todos los términos (incluidos los términos técnicos y científicos) que se utilizan en este documento tienen el mismo significado que comúnmente entiende una persona con conocimientos ordinarios en la técnica a la que pertenece esta invención. Se entenderá además que términos como los definidos en diccionarios de uso común deben interpretarse de forma coherente con su significado en el contexto de la técnica correspondiente y no se interpretarán en un sentido idealizado o excesivamente formal a menos que se definan expresamente en el presente documento. También debe entenderse que la terminología empleada en el presente documento tiene por objeto describir las realizaciones particulares y no pretende ser limitativa.
Compuestos
Los compuestos de acuerdo con la presente invención son los de fórmula (II) como se definen arriba y en las reivindicaciones.
Además de los compuestos de fórmula (II), también se divulgan en el presente documento otros compuestos, como los de fórmula (I). Estos compuestos no forman parte de la invención, y sólo se divulgan para una mejor comprensión de la invención, que se define únicamente por las reivindicaciones adjuntas.
Así, también se divulgan, pero no forman parte de la invención, compuestos que tienen una estructura de fórmula (I):
Figure imgf000005_0001
en la que:
Ri es halógeno, alquilo no sustituido o sustituido, alquenilo no sustituido o sustituido, alquinilo no sustituido o sustituido, cicloalquilo no sustituido o sustituido, alcoxi no sustituido o sustituido, arilo no sustituido o sustituido, -NO2 , -OH, -C(O)R, -C(O)OR, -C(O)N(R')(R"), o -N(R')(R");
R2 y R3 son cada uno independientemente -H, halógeno, alquilo no sustituido o sustituido, cicloalquilo no sustituido o sustituido, alcoxi no sustituido o sustituido, -NO2 , -OH, o -N(R')(R"), o R2 y R3 junto con el átomo de carbono al que están unidos forman un anillo cíclico o heterocíclico de carbono no sustituido o sustituido; R4 es -H, alquilo no sustituido o sustituido, cicloalquilo no sustituido o sustituido, alcoxi no sustituido o sustituido, arilo no sustituido o sustituido, -OH, -C(O)R, -C(O)OR, -C(O)N(R')(R"), o -N(R')(R");
Rs es -CN, halógeno, alquilo no sustituido o sustituido, alquenilo no sustituido o sustituido, alquinilo no sustituido o sustituido, cicloalquilo no sustituido o sustituido, alcoxi no sustituido o sustituido, -NO2 , -OH, o -N(R')(R");
R es un alquilo no sustituido o sustituido; y
R' y R" son cada uno independientemente -H o alquilo no sustituido o sustituido,
o una sal, isómero geométrico, enantiómero, diastereómero, racemato, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo.
También se divulga, pero no forma parte de la invención, un compuesto de fórmula (I), en la que R1 es halógeno, alquilo no sustituido o sustituido, alquenilo no sustituido o sustituido, alquino no sustituido o sustituido, alcoxi no sustituido o sustituido, -NO2 , -OH, -C(O)OR, -C(O)N(R')(R"), o -N(R')(R"), en la que R es alquilo no sustituido o sustituido; y R2 , R3 , R4, R5 , R, R' y R "son como se han definido anteriormente. Preferentemente, R1 es halógeno, alquilo no sustituido, alcoxi no sustituido, -OH, -CF3 o hidroxialquilo. Aún más preferentemente, R1 es -F, -Cl, -Br, metilo, etilo, propilo, isopropilo, metoxi, etoxi, isopropoxi, -OH, -CF3 , o hidroximetilo.
También se divulga, pero no forma parte de la invención, un compuesto de fórmula (I), en el que R2 y R3 son cada uno independientemente -H, -OH, halógeno, alquilo no sustituido o sustituido, o -N(R')(R"), o R2 y R3 junto con el átomo de carbono al que están unidos forman un anillo cíclico o heterocíclico de carbono no sustituido o sustituido; y R1 , R4, R5 , R, R' y R" son como se han definido anteriormente. Preferentemente, R2 y R3 son cada uno independientemente -H, -OH, halógeno, alquilo no sustituido o hidroxialquilo, o R2 y R3 junto con el átomo de carbono al que están unidos forman un anillo cíclico de carbono no sustituido o un anillo heterocíclico. Más preferentemente, R2 y R3 son cada uno independientemente -H, -OH, -F, -Cl, metilo, etilo o hidroximetilo, o R2 y R3 junto con el átomo de carbono al que están unidos forman ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, oxirano, aziridina o azetidina.
También se divulga, pero no forma parte de la invención, un compuesto de fórmula (I), en el que R4 es -H, alquilo no sustituido o sustituido, -C(O)OR, o -C(O)R; y R1 , R2 , R3 , R5 , R, R' y R" son como se han definido anteriormente. Preferentemente, R4 es -H, metilo, etilo, propilo, acetilo, aminoacetilo, metoxicarbonilo, 1-(1-oxo-2-metilpropoxi)etoxicarbonilo o etoxicarbonilo.
También se divulga, pero no forma parte de la invención, un compuesto de fórmula (I), en el que R5 es -CN, halógeno, alquilo no sustituido o sustituido, alquenilo no sustituido o sustituido, o alquino no sustituido o sustituido; y R1 , R2 , R3 , R4, R, R' y R" son como se definen anteriormente. Preferentemente, R5 es -CN, halógeno o alquilo no sustituido. Más preferentemente, R5 es -CN, -F, -Cl, -Br, metilo, etilo, propilo o isopropilo.
De acuerdo con las reivindicaciones adjuntas, el compuesto de la presente invención es un compuesto de fórmula (II):
Figure imgf000005_0002
en la que:
Ri es -F, -Cl o -Br;
R2 y R3 son cada uno independientemente -H o R2 y R3 junto con el átomo de carbono al que están unidos forman ciclopropilo;
R4 es -H, o metilo; y
R5 es -CN;
o una sal, isómero geométrico, enantiómero, diastereómero, racemato, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo.
En otra realización preferida, la presente invención proporciona un compuesto seleccionado del grupo que consiste en:
5-(5-(2-(3-aminopropoxi)-4-fluoro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo;
5-(5-(2-(3-aminopropoxi)-4-cloro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo;
5-(5-(2-(3-aminopropoxi)-4-bromo-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo;
5-(5-(2-(3-metilaminopropoxi)-4-fluoro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin) pirazin-2-carbonitrilo;
5-(5-(2-(3-metilaminopropoxi)-4-cloro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin) pirazin-2-carbonitrilo;
5-(5-(2-(3-metilaminopropoxi)-4-bromo-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin) pirazin-2-carbonitrilo;
5-(5-(2-((aminometil)ciclopropil)metoxi)-4-fluoro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo; 5-(5-(2-((aminometil)ciclopropil)metoxi)-4-cloro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo; 5-(5-(2-((aminometil)ciclopropil)metoxi)-4-bromo-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo; 5-(5-(4-fluoro-2-metoxi-6-((1-((metilamin)metil)ciclopropil)metoxi)fenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo;
5-((5-(4-cloro-2-metoxi-6-((1-((metilamin)metil)ciclopropil)metoxi)fenil)-1H-pirazol-3-il)amino)pirazin-2-carbonitrilo; o
5-((5-(4-bromo-2-metoxi-6-((1-((metilamin)metil)ciclopropil)metoxi)fenil)-1H-pirazol-3-il)amino)pirazin-2-carbonitrilo;
o una sal, isómero geométrico, enantiómero, diastereómero, racemato, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo.
En todavía otra realización preferida, la presente invención proporciona compuestos seleccionados del grupo que consiste en:
5-(5-(2-(3-aminopropoxi)-4-fluoro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo;
5-(5-(2-(3-aminopropoxi)-4-cloro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo;
5-(5-(2-(3-aminopropoxi)-4-bromo-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo;
5-(5-(2-((aminometil)ciclopropil)metoxi)-4-fluoro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo; 5-(5-(2-((aminometil)ciclopropil)metoxi)-4-cloro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo; 5-(5-(2-((aminometil)ciclopropil)metoxi)-4-bromo-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo; 5-(5-(4-fluoro-2-metoxi-6-((1-((metilamin)metil)ciclopropil)metoxi)fenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo; y
o una sal, isómero geométrico, enantiómero, diastereómero, racemato, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo.
Definiciones
Las definiciones expuestas en esta sección pretenden aclarar los términos utilizados a lo largo de esta solicitud. En esta sección, la definición se aplica a los compuestos de las fórmulas (I) y (II), salvo que se indique lo contrario. El término "en el presente" significa la totalidad de la solicitud.
Cabe señalar que, tal y como se utilizan aquí, las formas singulares "un", "uno, una" y "el, la" incluyen referentes plurales a menos que el contexto dicte claramente lo contrario. Así, salvo que el contexto exija lo contrario, los términos en singular incluirán el plural y los términos en plural incluirán el singular.
A menudo, los intervalos se expresan aquí como desde "aproximadamente" un valor particular y/o hasta "aproximadamente" otro valor particular. Cuando se expresa dicho intervalo, una realización incluye el intervalo desde un valor particular y/o hasta el otro valor particular. Del mismo modo, cuando los valores se expresan como aproximaciones, mediante el uso de la palabra "aproximadamente", se entenderá que el valor particular forma otra realización. Se entenderá además que los puntos finales de cada uno de los intervalos son significativos tanto en relación con el otro punto final como independientemente del otro punto final. Tal y como se utiliza aquí, el término "aproximadamente" se refiere a ± 20 %, preferentemente ± 10 %, y aún más preferentemente ± 5 %.
Tal como se utiliza aquí, la expresión "no sustituido o sustituido" significa que la sustitución es opcional. En caso de que se desee una sustitución, dicha sustitución significa que cualquier número de hidrógenos del átomo designado se sustituye por una selección del grupo indicado, siempre que no se supere la valencia normal del átomo designado y que la sustitución dé lugar a un compuesto estable. Por ejemplo, cuando un sustituyente es ceto (es decir, =O), entonces se sustituyen 2 hidrógenos en el átomo. Ejemplos de sustituyentes para un grupo "sustituido" son los que se encuentran en los compuestos ejemplares y las realizaciones divulgadas en el presente documento y pueden incluir, por ejemplo, halógeno, -OH, -CF3, - C n , -NO2 , alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, alcoxi, haloalquilo, alquilamino, aminoalquilo, dialquilamino, hidroxialquilo, alcoxialquilo, hidroxialcoxi, alcoxialcoxi, aminoalcoxi, alquilaminoalquilo, alquilaminoalquilo y arilo.
El término "hidrocarburo" utilizado aquí se refiere a cualquier estructura que comprenda sólo átomos de carbono e hidrógeno hasta 12 átomos de carbono.
El término "radical de hidrocarburo" o "hidrocarbilo" utilizado en este documento se refiere a cualquier estructura resultante de la eliminación de uno o más hidrógenos de un hidrocarburo.
Tal como se utiliza aquí, el término "halógeno" incluye el flúor, el cloro, el bromo y el yodo. "Halo", utilizado como prefijo de un grupo, significa que uno o más hidrógenos del grupo están sustituidos por uno o más halógenos.
El término "hidroxi" se define como -OH.
El término "alquilo" utilizado aquí se refiere a un radical hidrocarburo monovalente, saturado, recto o ramificado que contiene de 1 a 12 átomos de carbono. Preferentemente, el alquilo es un grupo alquilo C1-C8. Más preferentemente, el alquilo es un grupo alquilo C1-C6. El alquilo puede estar sin sustituir o sustituido con uno o más sustituyentes. Ejemplos de un grupo alquilo C1-C6 incluyen, pero no se limitan a, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, t-butilo, pentilo (incluyendo todas las formas isoméricas), y hexilo (incluyendo todas las formas isoméricas), heptilo (incluyendo todas las formas isoméricas), octilo (incluyendo todas las formas isoméricas).
El término "alquenilo" utilizado en el presente documento se refiere a un radical hidrocarburo insaturado de cadena recta o ramificada que tiene al menos un doble enlace carbono-carbono y que comprende de 2 a 12 átomos de carbono. Preferentemente, el alquenilo es un grupo alquenilo C2-C8. Más preferentemente, el alquenilo es un grupo alquenilo C2-C6. Ejemplos de radicales alquenilo incluyen, pero no se limitan a, etenilo, propenilo, butenilo, 1,4-butadienilo.
El término "alquinilo" utilizado en el presente documento se refiere a un radical hidrocarburo de cadena recta o ramificada insaturado que tiene al menos un triple enlace carbono-carbono y que comprende de 2 a 12 átomos de carbono. Preferentemente, el alquilo es un grupo alquinilo C2-C8. Más preferentemente, el alquilo es un grupo alquinilo C2-C6. Ejemplos de radicales alquilo incluyen, pero no se limitan a, etilo, propinilo, butilo.
El término "amino" se refiere al grupo -NH2. "Amino", utilizado como prefijo o sufijo de un grupo, significa que uno o más hidrógenos del grupo son sustituidos por uno o más grupos amino.
El término "alcoxi", utilizado solo o como sufijo o prefijo, se refiere a los radicales de la fórmula general -O-(alquilo), en la que el alquilo se define anteriormente. Los alcoxi ejemplares incluyen, pero no se limitan a, metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi, n-butoxi, iso-butoxi, sec-butoxi, tert-butoxi.
Un grupo "alcoxialquilo" está representado por-(alquilo)-O-(alquilo), en el que el alquilo se define anteriormente.
El término "cicloalquilo" utilizado en el presente documento se refiere a un radical hidrocarburo saturado y monovalente que tiene configuraciones cíclicas, incluidos los radicales alquílicos monocíclicos, bicíclicos, tricíclicos y multicíclicos superiores (y, cuando son multicíclicos, incluyen las fracciones bicíclicas y espirocíclicas fusionadas y con puentes) en las que cada fracción cíclica tiene de 3 a 12 átomos de carbono. Preferentemente, el cicloalquilo tiene de 3 a 8 átomos de carbono. Más preferentemente, el cicloalquilo tiene de 3 a 6 átomos de carbono. Cuando el cicloalquilo contiene más de un anillo, los anillos pueden estar fusionados o sin fusionar e incluir radicales bicíclicos. Los anillos fusionados se refieren generalmente a al menos dos anillos que comparten dos átomos entre sí. Dichos grupos cicloalquilos incluyen, a modo de ejemplo, estructuras de anillo simple como el ciclopropilo, el ciclobutilo, el ciclopentilo, el ciclohexilo, el cicloheptilo, el ciclooctilo, el 1-metilciclopropilo, el 2-metilciclopentilo, el 2-metilciclooctilo, o estructuras de anillo múltiples o con puente como el adamantilo.
El término "hidroxialquilo" se refiere a un grupo alquilo como el descrito anteriormente sustituido con uno o más grupos hidroxi.
El término "hidroxialcoxi" se refiere a un grupo alcoxi como el descrito anteriormente sustituido con uno o más grupos hidroxi.
El término "arilo" utilizado en el presente documento se refiere a un radical de hidrocarburo que tiene uno o más anillos de carbono poliinsaturados y un sistema de electrones pi conjugado y que comprende de 6 a 14 átomos de carbono, en el que el radical está situado en un carbono del anillo aromático. En algunas realizaciones, el grupo arilo contiene de 6 a 12 átomos de carbono, preferentemente de 6 a 10 átomos de carbono, en las porciones de anillo de los grupos. Los arilos ejemplares incluyen, pero no se limitan a, fenilo, bifenilo, naftilo, indenilo.
El término "uno o más" utilizado aquí se refiere a uno a diez, preferentemente, uno, dos, tres o cuatro.
Los compuestos de la invención pueden existir como sales farmacéuticamente aceptables. Tal y como se utiliza en el presente documento, las "sales farmacéuticamente aceptables" se refieren a los derivados de los compuestos divulgados en los que el compuesto original se modifica mediante la elaboración de sales ácidas o básicas farmacéuticamente aceptables del mismo. Ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, sales minerales o de ácidos orgánicos de residuos básicos como las aminas; sales alcalinas u orgánicas de residuos ácidos como los ácidos carboxílicos. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen las sales convencionales no tóxicas o las sales de amonio cuaternario del compuesto madre formadas, por ejemplo, a partir de ácidos inorgánicos u orgánicos no tóxicos. Los ácidos no tóxicos adecuados incluyen, pero no se limitan a, ácidos inorgánicos y orgánicos tales como el ácido acético, algínico, antranílico, bencenosulfónico, benzoico, canforsulfónico, cítrico, etenosulfónico, fórmico, fumárico, fúrico, galacturónico, glucónico, glucurónico, glutámico, glicólico, bromhídrico, clorhídrico, isetiónico, láctico, maleico, málico, mandélico, metanosulfónico, múcico, nítrico, pamoico, pantoténico, fenilacético, fosfórico, propiónico, salicílico, esteárico, succínico, sulfanílico, sulfúrico, tartárico y ptoluenosulfónico. Ejemplos no limitantes de sales de compuestos de la invención incluyen, pero no se limitan a, sales de hidrocloruro, hidrobromuro, hidroyoduro, sulfato, bisulfato, 2-hidroxietanosulfonato, fosfato, hidrógeno fosfato, acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, butirato, canforato, canforosulfonato, citrato, digluconato, glicerolfosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, formiato, succinato, malonato, fumarato, maleato, metanosulfonato, mesitilenesulfonato, naftilenosulfonato, nicotinato, oxalato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, picrato, pivalato, propionato, tricloroacetato, trifluoroacetato, glutamato, bicarbonato, undecanoato, lactato, citrato, tartrato, gluconato, sulfonato de benceno y de p-toluenosulfonato.
Los compuestos de la invención pueden existir como solvatos. Tal como se utiliza en el presente documento y a menos que se indique lo contrario, el término "solvato" significa un compuesto de fórmula (II), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que incluye además una cantidad estequiométrica o no estequiométrica de un disolvente unido por fuerzas intermoleculares no covalentes. Si el disolvente es agua, el solvato puede denominarse convenientemente "hidrato", por ejemplo, un hemihidrato, un monohidrato, un sesquihidrato, un dihidrato, un trihidrato, etc.
Los compuestos de la presente invención pueden existir en una o más formas geométricas, ópticas, enantioméricas, diasterioméricas, epiméricas, atrópicas, estereoisoméricas, tautoméricas, conformacionales o anoméricas particulares, incluyendo pero no limitándose a las formas cis y trans; formas E y Z; formas c, t y r; formas endo y exo; Las formas R, S y meso; las formas D y L; las formas d e I; las formas (+) y (-); las formas ceto, enol y enolato; las formas syn y anti; las formas synclinal y anticlinal; las formas a y p; las formas axiales y ecuatoriales; formas de bote, silla, torcida, sobre y media silla; y las combinaciones de las mismas, en adelante denominadas colectivamente "isómeros"."
Tal como se utiliza aquí, el término "enantiómeros" se refiere a un par de estereoisómeros que son imágenes especulares no superponibles entre sí. Una mezcla 1:1 de un par de enantiómeros es una mezcla racémica. El término "enantiómeros" se utiliza para designar una mezcla racémica cuando es apropiado. Los "diastereoisómeros" son estereoisómeros que tienen al menos dos átomos asimétricos, pero que no son imágenes especulares entre sí. La estereoquímica absoluta puede especificarse según el sistema Cahn- lngold- Prelog R-S. Cuando un compuesto es un enantiómero puro, la estereoquímica en cada carbono quiral puede especificarse por R o por S. Los compuestos resueltos pueden designarse (+) o (-) en función de la dirección (dextrógira o levógira) en la que giran la luz polarizada plana a la longitud de onda de la línea D del sodio. Algunos de los compuestos descritos en el presente documento contienen uno o más centros o ejes asimétricos y, por tanto, pueden dar lugar a enantiómeros, diastereómeros y otras formas estereoisoméricas que pueden definirse, en términos de estereoquímica absoluta, como (R)- o(S)-. La presente invención pretende incluir todos los isómeros posibles, incluidas las mezclas racémicas, las formas ópticamente puras y las mezclas intermedias. Los isómeros (R) y (S) ópticamente activos pueden prepararse utilizando sintonías o reactivos quirales, o resolverse mediante técnicas convencionales. Si el compuesto contiene un doble enlace, el sustituyente puede ser de configuración E o Z. Si el compuesto contiene un cicloalquilo disustituido, el sustituyente cicloalquilo puede tener una configuración cis o trans.
Composiciones farmacéuticas, uso y procedimientos
Los compuestos de la presente invención pueden administrarse terapéuticamente como producto químico puro, pero puede ser útil administrar los compuestos como una composición o formulación farmacéutica. Así pues, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (II) o una sal, isómero geométrico, enantiómero, diastereómero, racemato, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo, y uno o más portadores o excipientes farmacéuticamente aceptables.
Las composiciones farmacéuticas pueden administrarse en una variedad de formas de dosificación que incluyen, pero no se limitan a, una forma de dosificación sólida o una forma de dosificación líquida, una forma de dosificación oral, una forma de dosificación parenteral, una forma de dosificación intranasal, un supositorio, un comprimido para deshacer en la boca, un trocillo, bucal, una forma de dosificación de liberación controlada, una forma de dosificación de liberación pulsada, una forma de dosificación de liberación inmediata, una solución intravenosa, una suspensión o combinaciones de las mismas. Los compuestos pueden administrarse, por ejemplo, por vía oral o parenteral, incluyendo la administración intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, subcutánea, transdérmica, por vía aérea (aerosol), rectal, vaginal y tópica (incluyendo la bucal y sublingual).
Preferentemente, el compuesto de acuerdo con la presente invención se administra por vía parenteral, tal como administración intravenosa (IV). Las formulaciones para la administración comprenderán comúnmente una solución del compuesto de acuerdo con la presente invención disuelta en un portador farmacéuticamente aceptable. Entre los vehículos y disolventes aceptables que pueden emplearse están el agua y la solución de Ringer, un cloruro de sodio isotónico. Además, los aceites fijos estériles pueden emplearse convencionalmente como disolvente o medio de suspensión. Para ello, se puede emplear cualquier aceite fijo insípido, incluidos los mono o diglicéridos sintéticos. Además, los ácidos grasos como el ácido oleico también pueden utilizarse en la preparación de inyectables. Estas soluciones son estériles y, por lo general, están libres de materias indeseables. Estas formulaciones pueden ser esterilizadas mediante técnicas de esterilización convencionales y conocidas. Las formulaciones pueden contener sustancias auxiliares farmacéuticamente aceptables según se requiera para aproximarse a las condiciones fisiológicas, como agentes de ajuste del pH y tamponadores, agentes de ajuste de la toxicidad, por ejemplo, acetato de sodio, cloruro de sodio, cloruro de potasio, cloruro de calcio, lactato de sodio. Para la administración intravenosa, la formulación puede ser una preparación inyectable estéril, como una suspensión acuosa u oleaginosa inyectable estéril. Esta suspensión puede formularse según la técnica conocida utilizando aquellos agentes dispersantes o humectantes y agentes de suspensión adecuados. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o disolvente no tóxico y parenteralmente aceptable , tal como una solución de 1,3-butanodiol.
En una realización de la invención, el compuesto de acuerdo con la presente invención se administra por vía oral. Para la administración oral, los compuestos se proporcionarán generalmente en forma de dosificación unitaria de un comprimido, píldora, gragea, comprimido para deshacer en la boca o cápsula; como polvo o gránulos; o como una solución acuosa, suspensión, líquido, gel, jarabe, suspensión, etc. adecuados para la ingestión por el sujeto. La forma farmacéutica puede ser una forma farmacéutica de liberación controlada formulada como un comprimido o una cápsula dura. Los comprimidos para su uso oral pueden incluir los ingredientes activos mezclados con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. Un "excipiente" se refiere generalmente a una sustancia, a menudo inerte, que se añade a una composición farmacológica o se utiliza como vehículo para facilitar la administración de un compuesto. Ejemplos de excipientes incluyen, pero no se limitan a, diluyentes inertes, agentes desintegradores, agentes aglutinantes, agentes lubricantes, agentes edulcorantes, agentes saborizantes, agentes colorantes, conservantes, mezclas efervescentes y adsorbentes. Los diluyentes inertes adecuados incluyen, pero no se limitan a, carbonato de sodio y de calcio, fosfato de sodio y de calcio, lactosa y similares. Los agentes desintegradores adecuados incluyen, pero no se limitan a, almidones, como el almidón de maíz, la polivinilpirrolidona reticulada, el agar, el ácido algínico o una sal del mismo, como el alginato de sodio, y similares. Los agentes aglutinantes pueden incluir, pero no se limitan a, silicato de aluminio y magnesio, almidones como el de maíz, trigo o arroz, gelatina, metilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio, polivinilpirrolidona. Un agente lubricante, si está presente, será generalmente estearato de magnesio y estearato de calcio, ácido esteárico, talco o aceites vegetales hidrogenados. Si se desea, el comprimido puede estar recubierto de un material como el monoestearato de glicerilo o el diestearato de glicerilo, para retrasar la absorción en el tracto gastrointestinal. Las composiciones también pueden formularse como comprimidos masticables, por ejemplo, utilizando sustancias como el manitol en la formulación.
Las composiciones farmacéuticas para su uso oral pueden obtenerse mediante la combinación de un compuesto de acuerdo con la presente invención con un excipiente sólido, opcionalmente moliendo la mezcla resultante, y procesando la mezcla de gránulos, tras añadir compuestos adicionales adecuados, si se desea, para obtener comprimidos o núcleos de grageas. Los excipientes sólidos adecuados, además de los mencionados anteriormente, son rellenos de carbohidratos o proteínas que incluyen, pero no se limitan a, azúcares, tales como la lactosa, la sacarosa, el manitol o el sorbitol; almidón de maíz, trigo, arroz, patata u otras plantas; celulosa, como la metilcelulosa, la hidroxipropilmetilcelulosa o la carboximetilcelulosa sódica; y gomas, ctales omo la arábiga y el tragacanto; así como proteínas, tales como la gelatina y el colágeno.
Las cápsulas para su uso oral incluyen cápsulas de gelatina dura en las que el ingrediente activo se mezcla con un diluyente sólido, y cápsulas de gelatina blanda en las que el ingrediente activo se mezcla con agua o un aceite tal como el aceite de cacahuete, la parafina líquida o el aceite de oliva.
Los núcleos de las grageas están provistas de recubrimientos adecuados. Para ello, pueden utilizarse soluciones concentradas de azúcar, que pueden contener opcionalmente goma arábiga, talco, polivinilpirrolidona, gel de carbopol, polietilenglicol y/o dióxido de titanio, soluciones de laca y disolventes orgánicos adecuados o mezclas de disolventes. Pueden añadirse colorantes o pigmentos a los comprimidos o a los recubrimientos de las grageas para su identificación o para caracterizar diferentes combinaciones de dosis de compuestos activos.
Para la administración transmucosa (por ejemplo, bucal, rectal, nasal, ocular, etc.), se utilizan en la formulación penetrantes adecuados a la barrera que se va a permeabilizar. Tales penetrantes son generalmente conocidos en el arte.
Las composiciones farmacéuticas también pueden comprender portadores sólidos o en fase de gel adecuados. Ejemplos de tales portadores incluyen, pero no se limitan a, carbonato de calcio, fosfato de calcio, diversos azúcares, almidones, derivados de la celulosa, gelatina y polímeros tal como los polietilenglicoles.
Los compuestos y las composiciones farmacéuticas adecuados para su uso en la presente invención incluyen aquellos en los que el ingrediente activo se administra en una cantidad eficaz para lograr su propósito previsto. El término "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a la cantidad de un compuesto de acuerdo con la presente invención, o de isómeros geométricos, enantiómeros, distereómeros, racematos, sales farmacéuticamente aceptables, solvatos o hidratos del mismo, solo o en combinación con radiación ionizante o un agente anticanceroso que, tras la administración de una dosis única o múltiple al sujeto, proporciona el efecto deseado en el sujeto en tratamiento. La toxicidad y la eficacia terapéutica de dichos compuestos pueden determinarse mediante procedimientos farmacéuticos estándar en cultivos celulares o animales de experimentación, por ejemplo, para determinar los valores IC50 o EC50. Tal como se utiliza aquí, "IC50" se refiere a la concentración de un agente que produce el 50 % de la respuesta inhibitoria máxima posible para ese agente y "EC50" se refiere a la concentración de un agente que produce el 50 % de la respuesta máxima posible para ese agente.
La cantidad del compuesto de acuerdo con la presente invención realmente administrada será determinada por un médico bajo las circunstancias relevantes, incluyendo la condición a tratar, el tamaño y el tipo de neoplasia, la vía de administración elegida, el compuesto real de la presente invención administrado, el momento de la administración de los inhibidores de Chkl en relación con las otras terapias, el tipo, la especie, la edad, el peso, el sexo y la condición médica del sujeto, la función renal y hepática del sujeto, y la gravedad de los síntomas del sujeto. La precisión óptima para lograr la concentración del fármaco dentro del intervalo que produce la eficacia requiere un régimen basado en la cinética de la disponibilidad del fármaco en los sitios objetivo. Esto implica la consideración de la distribución, el equilibrio y la eliminación de un fármaco. Las dosis diarias suelen estar comprendidas entre 0,1 y 10 mg/kg de peso corporal. En algunos casos, los niveles de dosificación por debajo del límite inferior del intervalo mencionado pueden ser más que adecuados, mientras que en otros casos pueden emplearse dosis aún mayores.
Un "sujeto" a tratar en la presente invención significa un animal humano o no humano, tales como primates, mamíferos y vertebrados.
"In vivo" significa dentro de un sujeto vivo, como dentro de un animal o un ser humano. En este contexto, los agentes pueden utilizarse terapéuticamente in vivo para retrasar o eliminar la proliferación de las células con replicación aberrante. Los agentes también pueden utilizarse in vivo como profilácticos para prevenir la proliferación celular aberrante o la manifestación de síntomas asociados a ella.
"Ex vivo" significa fuera de un sujeto vivo. Entre los ejemplos de poblaciones celulares ex vivo se encuentran los cultivos celulares y las muestras biológicas, como las muestras de fluidos o tejidos de seres humanos o animales. Dichas muestras pueden obtenerse por procedimientos bien conocidos en la técnica. Las muestras de fluidos biológicos ejemplares incluyen sangre, líquido cefalorraquídeo, orina y saliva. Las muestras de tejido ejemplares incluyen tumores y biopsias de los mismos. En este contexto, los presentes compuestos pueden emplearse en numerosas aplicaciones, tanto terapéuticas como experimentales.
También se divulga, pero no forma parte de la invención, el uso de un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable, isómero geométrico, enantiómero, distereómero, racemato, solvato o hidrato del mismo, en la fabricación de un medicamento para inhibir la Chkl.
El término "cáncer", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a trastornos como el cáncer de tumor sólido, incluido el cáncer de mama; el carcinoma de células escamosas, como el carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello, el carcinoma de células escamosas de pulmón en estadio IV, el carcinoma de células escamosas de ano; el cáncer de pulmón, como el cáncer de pulmón no microcítico; el cáncer de esófago; el cáncer de hígado; el cáncer gástrico cáncer colorrectal; cáncer de vejiga; carcinoma de ovario; cáncer de próstata, como el cáncer de próstata resistente a la castración metastásico (mCRPC); giloblastoma; cáncer de páncreas; o leucemia, como la leucemia megacarioblástica aguda de adulto, la leucemia monoblástica aguda de adulto, la leucemia mieloide aguda de adulto con Inv(16)(p13.1q22), CBFB-MYH11, leucemia mieloide aguda del adulto con maduración, leucemia mieloide aguda del adulto con diferenciación mínima, leucemia mieloide aguda del adulto con t(16;16)(pl3.1;q22), leucemia mieloide aguda del adulto con t(8;21)(q22;q22), RUNX1-RUNX1T1, leucemia mieloide aguda del adulto con t(9;11)(p22;q23), MLLT3-MLL, leucemia mieloide aguda del adulto sin maduración, leucemia mielomonocítica aguda del adulto, eritroleucemia del adulto, leucemia eritroide pura del adulto, leucemia mieloide aguda relacionada con agentes alquilantes y leucemia mieloide aguda del adulto recurrente.
Otros tipos de cánceres que pueden ser tratados por la presente invención incluyen, pero no se limitan a: adrenocarcinoma, angiosarcoma, astrocitoma, neuroma acústico, astrocitoma anaplásico, carcinoma de células basales, blastoglioma, condrosarcoma, coriocarcinoma, cordoma, craneofaringioma, melanoma cutáneo, cistadenocarcinoma, endoteliosarcoma, carcinoma embrionario, ependimoma, tumor de Ewing, carcinoma epitelial, fibrosarcoma, cáncer gástrico, cánceres del tracto genitourinario, glioblastoma multiforme, cáncer de cabeza y cuello, hemangioblastoma, carcinoma hepatocelular, hepatoma, sarcoma de Kaposi, carcinoma de células grandes, cáncer de laringe, leiomiosarcoma, leucemias, liposarcoma, cáncer del sistema linfático, linfomas, linfangiosarcoma, linfangioendoteliosarcoma, carcinoma medular de tiroides, meduloblastoma, meningioma mesotelioma, mielomas, mixosarcoma neuroblastoma, neurofibrosarcoma, oligodendroglioma, sarcoma osteogénico, cáncer epitelial de ovario, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilares, tumores paratiroideos, feocromocitoma, pinealoma, plasmocitomas, retinoblastoma, rabdomiosarcoma, carcinoma de glándulas sebáceas, seminoma, cánceres de piel, melanoma, carcinoma de pulmón de células pequeñas, carcinoma de células escamosas, carcinoma de glándulas sudoríparas, sinovioma, cáncer de tiroides, melanoma uveal, cánceres de estómago y tumor de Wilm.
Los compuestos de acuerdo con la presente invención pueden administrarse como único agente activo, o en combinación con otros tratamientos conocidos contra el cáncer.
El término "en combinación con" significa que el compuesto de acuerdo con la presente invención puede administrarse poco antes, poco después, simultáneamente, o cualquier combinación de antes, después o simultáneamente, con otras terapias antineoplásicas. Así, el compuesto de acuerdo con la presente invención y el agente anticanceroso pueden administrarse simultáneamente como una única composición o como dos composiciones separadas o secuencialmente como dos composiciones separadas. Asimismo, el compuesto de acuerdo con la presente invención y la radioterapia ionizante pueden administrarse simultáneamente, por separado o secuencialmente. El compuesto de acuerdo con la presente invención puede administrarse en combinación con más de un agente anticanceroso. En una realización preferida, el compuesto de acuerdo con la presente invención puede administrarse de 2 semanas a 1 día antes de cualquier quimioterapia, o de 2 semanas a 1 día antes de cualquier radioterapia ionizante. En otra realización preferida, el compuesto de acuerdo con la presente invención puede administrarse durante las quimioterapias y las radioterapias ionizantes. Si se administra después de dicha quimioterapia o radioterapia ionizante, el compuesto de acuerdo con la presente invención puede administrarse entre 1 y 14 días después de los tratamientos primarios. El compuesto de acuerdo con la presente invención también puede administrarse de forma crónica o semicrónica, durante un periodo de unas 2 semanas a unos 5 años. Un experto en la materia reconocerá que la cantidad de compuesto de acuerdo con la presente invención que se administrará en combinación con agentes anticancerígenos es preferentemente aquella cantidad suficiente para potenciar el efecto de los agentes anticancerígenos o las terapias de radiación ionizante o aquella cantidad suficiente para inducir la apoptosis o la muerte celular junto con los agentes anticancerígenos o la terapia de radiación ionizante y/o para mantener un efecto antiangiogénico.
El término "segundos agentes anticancerígenos", tal como se utiliza aquí, a menos que se indique lo contrario, se refiere a agentes capaces de inhibir o prevenir el crecimiento de neoplasias, o de frenar la maduración y proliferación de células malignas (cancerosas). Los segundos agentes anticancerígenos adecuados para su uso en combinación con los compuestos de fórmula (I) incluyen, pero no se limitan a los fármacos dirigidos contra el cáncer, tales como trastuzumab, ramucirumab, vismodegib, sonidegib bevacizumab, everolimus, tamoxifeno, toremifeno, fulvestrant, anastrozol, exemestano, lapatinib, letrozol, pertuzumab, ado-trastuzumab emtansina, palbociclib, cetuximab, panitumumab, ziv-aflibercept, regorafenib, Mesilato de imatinib, acetato de lanreotida, sunitinib, regorafenib, denosumab, alitretinoína, sorafenib, pazopanib, temsirolimus, everolimus, tretinoína, dasatinib, nilotinib, bosutinib, rituximab, alemtuzumab, ofatumumab, obinutuxumab, ibrutinib, idelalisib, blinatumomab, soragenib, crizotinib, erlotinib, gefitinib, dimaleato de afatinib, ceritnib, ramucirumab, nivolumab, pembrolizumab, osimertinib y necitumumab; un agente alquilante, como busulfán, clorambucil, ciclofosfamida, iphosphamida, melfalán, mostaza nitrogenada, estreptozocina, tiotepa, mostaza nitrogenada con uracilo, trietilenemelamina, temozolomida y 2-cloroetil-3-sarcosinamida-1-nitrosourea (SarCNU);un antibiótico o alcaloide vegetal, tal como actinomicina-D, bleomicina, criptoficinas, daunorubicina, doxorrubicina, idarubicina, irinotecán, L-asparaginasa, mitomicina-C, mitramicina, navelbina, paclitaxel, docetaxel, topotecán, vinblastina, vincristina, tenipósido (VM-26) y etopósido (VP-16) una hormona o esteroide, como el inhibidor de la 5a-reductasa, la aminoglutetimida, el anastrozol, la bicalutamida, el clorotrianiseno, el dietilstilbestrol (DES), la dromostanolona, la estramustina, el etinilestradiol, la flutamida, la fluoximesterona, la goserelina, la hidroxiprogesterona, letrozol, leuprolida, acetato de medroxiprogesterona, acetato de megestrol, metil prednisolona, metiltestosterona, mitotano, nilutamida, prednisolona, arzoxifeno (SERM-3), tamoxifeno, testolactona, testosterona, triamicnolona y zoladex; un sintético, como el ácido todo-trans retinoico, carmustina (BCNU), carboplatino (CBDCA), lomustina (CCNU), cis-diaminicloroplatino (cisplatino), dacarbazina, gliadel, hexametilmelamina, hidroxiurea, levamisol, mitoxantrona, o,p'- diclorodifenildicloroetano (o,p'-DDD) (también conocido como lisodren o mitotano), oxaliplatino, porfimer sódico, procarbazina y mesilato de imatinib (Gleevec®); un antimetabolito, como la clorodeoxiadenosina, el arabinósido de citosina, la 2'-desoxicoformicina, el fosfato de fludarabina, el 5-fluorouracilo (5-FU), la 5-fluoro-2'-desoxiuridina (5-FUdR), la gemcitabina, la camptotecina, la 6mercaptopurina, el metotrexato, la 4-metiltioanfetamina (4-MTA) y la tioguanina y un biológico, como el interferón alfa, el BCG (Bacillus Calmette-Guerin), el factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF), el factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos (GM-CSF), la interleucina-2 y la herceptina.
En una realización preferida, el segundo agente anticanceroso es el irinotecán.
El término "tratar", tal como se utiliza aquí, a menos que se indique lo contrario, significa revertir, aliviar, inhibir el progreso o prevenir el trastorno o la afección a la que se aplica dicho término, o uno o más síntomas de dicho trastorno o afección. El término "tratamiento", tal como se utiliza aquí, a menos que se indique lo contrario, se refiere al acto de tratar como se define "tratar" inmediatamente antes.
Síntesis de compuestos
La presente invención también se refiere a un procedimiento para preparar un compuesto de acuerdo con la presente invención, siendo dicho procedimiento como se define en las reivindicaciones. También se divulga, pero no forma parte de la invención, un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula (I), o isómeros geométricos, enantiómeros, distereómeros, racematos, sales farmacéuticamente aceptables, solvatos o hidratos del mismo. Los compuestos de pirazol de la presente invención pueden ser fabricados por un experto en la materia utilizando la síntesis orgánica convencional y materiales disponibles en el mercado.
También se divulga, pero no forma parte de la invención, un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula (I), o una una sal, isómero geométrico, enantiómero, diastereómero, racemato, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo, que comprende
Figure imgf000012_0001
a. hacer reaccionar un compuesto de fórmula (1)
Figure imgf000012_0002
con una hidracina de fórmula H2N-NH2, en la que Ri y R5 son como se definen en el presente documento; R6 es un grupo protector hidroxi; R7 es alquilo; en presencia de un disolvente para obtener un compuesto de fórmula (2)
Figure imgf000012_0003
en la que Ri, R5 y R6 son como se definen anteriormente;
b. la desprotección del compuesto de fórmula (2), seguida de la reacción del compuesto desprotegido con un compuesto de fórmula (3)
Figure imgf000012_0004
en la que R2, R3 y R4 son los definidos en el presente documento, y R9 es un grupo protector amino, en presencia de un agente de acoplamiento para proporcionar un compuesto de fórmula (4)
Figure imgf000013_0001
en la que R1, R2, R3, R4, R5 y R9 son los definidos anteriormente; y
c. desproteger el compuesto de fórmula (4) para obtener un compuesto de fórmula (I).
A modo de ejemplo y no de limitación, un compuesto de fórmula (I) o una una sal, isómero geométrico, enantiómero, diastereómero, racemato, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo puede prepararse como se indica en los esquemas 1 a 4 mostrados a continuación. Cabe señalar que un experto en la materia puede modificar los procedimientos expuestos en los esquemas y ejemplos ilustrativos para llegar al producto deseado
Esquema 1
Figure imgf000013_0002
Esquema 2
Figure imgf000015_0001
Los "grupos protectores" son ampliamente utilizados y bien conocidos en síntesis orgánica y se refieren a grupos funcionales que son capaces de enmascarar la reactividad de ciertos grupos en una reacción sensible bajo condiciones específicas (por ejemplo, pH, temperatura, radiación, disolvente, y similares). Tal como se utiliza en el presente documento, el término "grupo protector hidroxi" se refiere a un grupo funcional capaz de enmascarar la reactividad de un grupo hidroxi en una reacción sensible a los hidroxi. Ejemplos de grupos protectores hidroxi incluyen, pero no se limitan a, un éter metoximetilo (MOM), un éter metoximetilo (MEM), un éter metiltiometilo (MTM), un éter trimetilsililo (TMS), un éter tert-butildimetilsililo (TBDMS), un étertri-iso-propilisiloximetilo (TOM), un étertriisopropilsililo (TIPS), un éter benzoiloximetilo (BOM), un éter tetrahidropiranilo (THP), un éter etoxietilo (EE), un éter 2-naftilmetilo (NAP). El término "grupo amino protector" se refiere a un grupo funcional que es capaz de enmascarar la reactividad de un grupo amino en una reacción amino sensible bajo condiciones específicas (por ejemplo, pH, temperatura, radiación, disolvente). Ejemplos de grupos protectores amino incluyen, pero no se limitan a, carbobenciloxi (Cbz), p- metoxibencilo (PMB), p-metoxibencilcarbonilo (MeOZ), tert-butiloxicarbonilo (BOC), 9-fluorenilmetiloxicarbonilo (FMOC), bencilo (Bn), benzoilo (Bz), carbamato, grupo toxilo (Ts).
El término "agente de acoplamiento" se refiere a los compuestos que permiten una reacción de acoplamiento. Ejemplos de agentes de acoplamiento incluyen, pero no se limitan a, aminas primarias y secundarias, tioles, tiolatos y tioéteres, alcoholes, alcóxidos, azidas y semicarbazidas.
Sin más detalles, se cree que la descripción anterior ha permitido adecuadamente la presente invención. Por lo tanto, los siguientes ejemplos deben interpretarse como meramente ilustrativos y no limitativos del resto de la divulgación en modo alguno.
Ejemplos (los ejemplos de referencia no forman parte de la invención)
EJEMPLO 1: (Ejemplo de referencia)
Preparación de 5-(5-(2-(3-Aminopropoxi)-3-fluoro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 1)
Paso 1a. 2-Fluoro-5-metoxifenol (Compuesto 102):
A una solución de 1-fluoro-4-metoxibenceno (5,0 g, 40,0 mmol) y pentametildietilentriamina (6,9 g, 40,0 mmol) en THF anhidro (25 ml) se añadió n-BuLi (16,5 ml, 2,5 M en hexano, 41,0 mmol) a -70 °C bajo N2. Se añadió borato detrimetilo (9,4 g, 90,0 mmol) 3 horas después. Después de 1 hora, la mezcla de reacción se calentó a -10 °C y se añadió ácido acético (7 ml). A continuación, se cambió la temperatura de la reacción a 5 °C y se añadió H2O2 al 30 % (7,5 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se inactivó con sulfito sódico acuoso al 10 % y se extrajo con tert-butil metil éter. A la capa orgánica se le añadió hidróxido de sodio acuoso 2 N (25 ml). Tras añadir ácido clorhídrico 5 N a la capa acuosa para ajustar el pH a 6, la mezcla resultante se extrajo con tert-butil metil éter. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró y se evaporó in vacuo para obtener el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna (hexanos/acetato de etilo: 40/1) para obtener el compuesto del título 102 (5,2 g, 91 % de rendimiento) como un aceite incoloro. 1H RMN (400 MHz, CDCla): 83,76 (s, 3H), 5,42 (s, 1H), 6,39-6,35 (m, 1H), 6,57 (dd, J = 7,2, 2,8 Hz, 1H), 6,99-6,94 (m, 1H).
Paso 1b. 1-Fluoro-4-metoxi-2-(metoxi)benceno (Compuesto 103):
Una mezcla del compuesto 101 (3,0 g, 21,1 mmol) e hidruro de sodio (1,7 g, 42,2 mmol) en DMF (25 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas y luego se enfrió con un baño de hielo. A esta mezcla fría se añadió cloro(metoxi)metano (2,6 g, 31,7 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas y luego se inactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró y se evaporó in vacuo para obtener el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna (hexanos/acetato de etilo: 5/1) para obtener el compuesto del título 103 (3,35 g, 85 % de rendimiento) como un aceite incoloro. 1H RMN (400 MHz, CDCla): 83,52 (s, 3H), 3,76 (s, 3H), 5,20 (s, 2H), 6,48-6,45 (m, 1H), 6,77 (dd, J = 6,8, 2,8 Hz, 1H), 6,99 (dd, J =10,8, 9,2 Hz, 1H).
Paso 1c. 1-(3-Fluoro-6-metoxi-2-(metoximetoxi)fenil)etanol (Compuesto 104):
A una solución del compuesto 103 (3,5 g, 18,8 mmol) en THF anhidro (35 ml) se añadió 1,3 N t-BuLi (29 ml, 1,3M en hexano ) a -70 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 3 horas y después se añadió acetaldehído (1,7 g, 37,6 mmol) y se agitó durante 1 hora más. La mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró y se evaporó in vacuo (hexanos/acetato de etilo): 4/1) para obtener el compuesto del título 104 (3,0 g, 70 % de rendimiento) como un aceite incoloro. LCMS:253.0[M+1]+. 1H RMN (400 MHz, CDCh): 8 1,56 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 3,59 (s, 3H), 3,85 (s, 3H), 5,19­ 5,13 (m, 2H), 5,33-5,25 (m, 1H), 6,58 (dd, J =9,2, 3,6 Hz, 1H), 6,98-6,91 (m, 1H).
Paso 1d. 1-(3-Fluoro-6-metoxi-2-(metoximetoxi)fenil)etan-1-ona (Compuesto 105):
Una mezcla del compuesto 104 (3,0 g, 13,0 mmol) y el ácido 2-yodoxibenzoico (5,5 g, 19,5 mmol) en acetonitrilo (45 ml) se sometió a reflujo durante 1,5 horas. La mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró y se evaporó in vacuo para obtener el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna (hexanos/acetato de etilo: 40/1) para obtener el compuesto del título 105 (2,29 g, 77 % de rendimiento) como un aceite incoloro. 1H RMN (400 MHz, CDCh): 82,51 (s, 3H), 3,50 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 5,12 (s, 2H), 6,59 (dd, J = 9,2, 3,2 Hz, 1H), 7,05 (dd, J =10,8, 9,2 Hz, 1H).
Paso 1e. 1-(3-Fluoro-6-metoxi-2-(metoximetoxi)fenil)-3,3-bis(metiltio) prop-2-en-1-ona (Compuesto 106): A una mezcla agitada de tert-butóxido de litio (2,4 g, 30,0 mmol) en DMSO anhidro (40 ml) se añadió el compuesto 105 (2,29 g, 10,0 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se agitó a 30 °C durante 2 horas y se añadió lentamente el CS2 (1,52 g, 20,0 mmol) a temperatura ambiente. Tras 2 horas, se añadió lentamente yodometano (2,84 g, 20,0 mmol) manteniendo la temperatura por debajo de 30 °C. La mezcla de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y después se inactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se separó y se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (hexanos/acetato de etilo: 4/1) para obtener el compuesto del título 106 (2,8 g, 85 % de rendimiento) como un sólido de color amarillo. LCMS: 333.1 [M+1]+. 1H RMN (400 MHz, CDCla): 62,43 (s, 3H), 2,51 (s, 3H), 3,47 (s, 3H), 3,76 (s, 3H), 5,09 (s, 2H), 6,22 (s, 1H), 6,59 (dd, J = 9,2, 3,2 Hz, 1H), 7,06-7,01 (m, 1H).
Paso 1f. (Z)-5-(3-(3-Fluoro-6-metoxi-2-(metoximetoxi)fenM)-1-(metNtio)-3-oxoprop-1-emlamm)pirazm-2-carbonitrilo (Compuesto 107):
A una mezcla agitada de 5-aminopirazin-2-carbonitrilo (542 mg, 4,5 mmol) en THF (20 ml) se añadió lentamente hidruro de sodio (240 mg, 6,02 mmol) por debajo de 15 °C. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y se añadió el compuesto 106 (1,0 g, 3,01 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 60 °C durante 4 horas, se inactivó con agua helada y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró para obtener el compuesto del título 107 (1,0 g, crudo) como un sólido de color amarillo, que se utilizó para el siguiente paso sin purificación adicional.
Paso 1g. 5-(5-(3-Fluoro-6-metoxi-2-(metoximetoxi)fenil)-1H-pirazol-3-ilamin) pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 108):
A una mezcla agitada del compuesto 107 (1,0 g, crudo) en etanol (10 ml) se añadió monohidrato de hidracina (0,5 ml). La mezcla de reacción se agitó a 55 °C durante 1 hora. La suspensión resultante se filtró. La torta se lavó con etanol frío y se secó para obtener el compuesto del título 108 (500 mg, 45 % de rendimiento-2 pasos) como un sólido de color amarillo. LCMS:371.3 [M+1]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 63,18 (s, 3H), 3,78 (s, 3H), 4,93 (s, 2H), 6,81 (s, 1H), 6,90 (dd, J = 9,2, 4,0 Hz, 1H), 7,33 (dd, J =10,8, 9,2 Hz, 1H), 8,69-8,42 (m, 2H), 10,76 (s, 1H), 12,57 (s, 1H).
Paso 1h. 5-(5-(3-Fluoro-2-hidroxi-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin) pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 109):
Una solución de 108 (160 mg, 0,43 mmol) en HCl-dioxano (20 ml, solución 2M) se calentó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se filtró. La torta se ajustó a un pH de 7-8 con NH3/H2O y se extrajo con diclorometano. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró para obtener el compuesto del título 3-101-A8 (100 mg, 71 % de rendimiento) como un sólido de color amarillo. LCMS:327.1 [M+1]+. 1H Rm N (400 MHz, DMSO-d6): 63,80 (s, 3H), 6,53 (dd, J = 9,2, 3,6 Hz, 1H), 6,90 (s, 1H), 7,15 (dd, J = 10,4, 9,2 Hz, 1H), 8,72-8,36 (m, 2H), 10,76 (s, 1H), 12,48 (s, 1H).
Paso 1i. 3-(2-(5-cianopirazin-2-ilamin)-1H-pirazol-5-il)-6-fluoro-3-metoxifenoxi)propilcarbamato de tert-butilo (Compuesto 111-1):
A una solución de PPh3 (157 mg, 0,6 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (10 ml) se añadió DIAD (121 mg, 0,6 mmol) en porciones a 0~5 °C. La mezcla de reacción se convirtió en una suspensión blanca. Después de 10 minutos, se añadió lentamente a la suspensión una solución de 3-hidroxipropilcarbamato de tert-butilo (110-1) (104 mg, 0,6 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (5 ml) mientras se mantenía la temperatura entre 0~5 °C. La mezcla preparada anteriormente se añadió en porciones a una solución del compuesto 109 (45 mg, 0,138 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (5 ml) a temperatura ambiente. Tras la adición, la solución se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó in vacuo para dar un producto crudo que se purificó por cromatografía en columna (diclorometano/acetato de etilo: 5/1) para obtener el compuesto del título 111-1 (30 mg, crudo) como un sólido de color amarillo. LCMS: 484.5 [M+1]+.
Paso 1j. 5-(5-(2-(3-Aminopropoxi)-3-fluoro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin) pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 1):
A una solución del compuesto 111-1 (30 mg, crudo) en diclorometano (2 ml) se añadió ácido trifluoroacético (1 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y luego se evaporó in vacuo para dar un producto crudo que se purificó por HPLC para obtener el compuesto del título 1 (10 mg, 18 % de rendimiento-2 pasos ) como un sólido de color amarillo. M.p.: 221-224 °C. LCMS: 384.2 [M+1]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 61,80-1,71 (m, 2H), 2,64 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 3,85 (s, 3H), 4,00 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 7,03-6,88 (m, 2H), 7,36 (dd, J = 10,8, 9,2 Hz, 1H), 8,66-8,46 (m, 1H), 8,72 (s, 1H).
EJEMPLO 2: (Ejemplo de referencia)
5-((5-(6-(3-Aminopropoxi)-3-fluoro-2-metoxifenil)-1H-pirazol-3-il)amino) pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 2)
Paso 2a. 4-Fluoro-3-metoxianilina (Compuesto 202):
A una solución de 1-fluoro-2-metoxi-4-nitrobenceno (101) (5,0 g, 29,0 mmol) en metanol (25 ml) se añadió Pd/C al 10 % (500 mg) a temperatura ambiente bajo atmósfera de H2. Una vez completada la reacción (controlada por TLC), la mezcla se filtró y el filtrado se evaporó in vacuo para obtener el compuesto 202 (4,0 g, 97 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 83,72 (s, 3H), 4,93 (s, 2H), 6,02-6,05 (m, 1H), 6,33 (dd, J =7,6, 2,4 Hz, 1H), 6,81 (dd, J =11,6, 8,8 Hz, 1H).
Paso 2b. 4-Fluoro-3-metoxifenol (Compuesto 203):
A una suspensión del compuesto 202 (4,0 g, 28,0 mmol) en ácido sulfúrico al 30 % (15 ml) se añadió nitrito de sodio (2,15 g, 31,0 mmol) a 0 °C. La reacción se agitó a 0 °C durante 20 minutos y después se añadió ácido sulfúrico al 60 % (15 ml) a 100 °C y se agitó durante 30 min. La mezcla de reacción se neutralizó con NaHCO3 anhidro y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó in vacuo. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna (hexanos/diclorometano: 3/1) para obtener el compuesto del título 203 (1,84 g, 46,7 % de rendimiento) como un aceite incoloro. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 8 3,76 (s, 3H), 6,24-6,27 (m, 1H), 6,51 (dd, J = 6,8, 2,8 Hz, 1H), 6,96 (dd, J =11,2, 8,4 Hz, 1H), 9,36 (s, 1H).
Paso 2c. 1-Fluoro-2-metoxi-4-(metoxi)benceno (Compuesto 204):
A una mezcla del compuesto 203 (4,8 g, 33,8 mmol) en DMF se añadió hidruro de sodio (2,7 g, 67,6 mmol) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. A continuación se añadió cloro(metoxi)metano (4,1 g, 50,7 mmol) en baño de hielo. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó in vacuo. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna (hexanos/acetato de etilo: 10/1) para obtener el compuesto del título 204 (4. 5 g, 86 % de rendimiento) como un aceite incoloro. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 83,38 (s, 3H), 3,81 (s, 3H), 5,16 (m, 2H), 6,54­ 6,56 (m, 1H), 6,80 (dd, J = 7,6, 2,0 Hz, 1H), 6,80 (dd, J =11,6, 9,2 Hz, 1H).
Paso 2d. 1-(3-Fluoro-2-metoxi-6-(metoximetoxi)fenil)etanol (Compuesto 205):
A una solución del compuesto 204 (4,35 g, 23,4 mmol) en THF anhidro (35 ml) se añadió 1,3 N t-BuLi (29 ml, 1,3 M en hexano) a -70 °C. La mezcla resultante se agitó durante 3 horas. Se añadió acetaldehído (1,5 g, 35,1 mmol) y se agitó durante 1 hora. La mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó in vacuo. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna (hexanos/acetato de etilo: 4/1) para obtener el compuesto del título 205 (3,0 g, 56 % de rendimiento) como un aceite incoloro. 1H RMN (400 MHz, CDCh): 83,49 (s, 3H), 3,68-3,68 (d, J =11,2 Hz, 1H), 3,98 (d, J = 2,0 Hz, 3H), 5,16-5,20 (m, 2H), 5,24-5,28 (m, 1H), 6,78 (dd, J =5,2, 3,6 Hz, 1H), 6,89-6,94 (m, 1H).
Paso 2e. 1-(3-Fluoro-2-metoxi-6-(metoximetoxi)fenil)etanona (Compuesto 206):
Una mezcla del compuesto 205 (860 mg, 3,7 mmol) y el ácido 2-yodoxibenzoico (2,09 g, 7,47 mmol) en acetonitrilo (15 ml) se sometió a reflujo durante 1,5 horas. La mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó in vacuo. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna (hexanos/acetato de etilo: 40/1) para obtener el compuesto del título 206 (778 mg, 91 % de rendimiento) como un aceite incoloro. 1H RMN (400 MHz, CDCla): 82,51 (s, 3H), 3,45 (s, 3H), 3,93 (d, J = 2,0 Hz, 3H), 5,11 (s, 2H), 6,79 (dd, J =9,2, 3,2 Hz, 1H), 7,00 (dd, J = 11,2, 9,2 Hz, 1H).
Paso 2f. 1-(3-Fluoro-2-metoxi-6-(metoximetoxi)fenil)-3,3-bis(metiltio) prop-2-en-1-ona (Compuesto 207):
A una mezcla de tert-butóxido de litio (1,1 g, 30,0 mmol) en DMSO anhidro (30 ml) se añadió el compuesto 206 (780 mg, 3,48 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se agitó a 30 °C durante 2 horas y se añadió lentamente el CS2 (651 mg, 8,55 mmol) a temperatura ambiente. Dos horas después, se añadió lentamente yodometano (1,21 g, 8,55 mmol) manteniendo la temperatura por debajo de 30 °C. La mezcla de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, se inactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (hexanos/acetato de etilo: 4/1) para obtener el compuesto del título 207 (1,07 g, 94 % de rendimiento) como un sólido de color amarillo. 1H RMN (400 MHz, CDCls): 82,42 (s, 3H), 2,52 (s, 3H), 3,44 (s, 3H), 3,90 (d, J =1,6 Hz, 3H), 5,09 (s, 2H), 6,19 (s, 1H), 6,80 (dd, J = 8,8, 3,2 Hz, 1H), 7,00 (dd, J =10,8, 9,2 Hz, 1H).
Paso 2g. (Z)-5-((3-(3-fluoro-2-metoxi-6-(metoximetoxi)fenil)-1-(metiltio)-3-oxoprop-1-en-1-il)amino)pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 208):
A una mezcla agitada de 5-aminopirazin-2-carbonitrilo (131 mg, 1,09 mmol) en THF (8 ml) se añadió lentamente hidruro de sodio (73 mg, 1,82 mmol) por debajo de 15 °C. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y se añadió el compuesto 207 (302 mg, 0,91 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 60 °C durante 4 horas, se inactivó con agua helada y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se concentró para obtener el compuesto del título 208 (280 mg, crudo) como un sólido de color amarillo.
Paso 2h. 5-((5-(3-Fluoro-2-metoxi-6-(metoximetoxi)fenil)-1H-pirazol-3-il) amino)pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 209):
A una mezcla agitada del compuesto 208 (250 mg, crudo) en etanol (3 ml) se añadió monohidrato de hidracina (0,15 ml). La mezcla de reacción se agitó a 55 °C durante 1 hora y la suspensión resultante se filtró. La torta se lavó con etanol frío y se secó para obtener el compuesto del título 209 (174 mg, 52 % de rendimiento-2 pasos) como un sólido de color amarillo. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 83,33 (s, 3H), 3,73 (d, J =1,2 Hz, 3H), 5,18 (s, 2H), 6,84 (s, 1H), 6,96 (dd, J =9,2, 4,4 Hz, 1H), 8,54 (m, 1H), 8,65 (d, J =1,2 Hz, 1H), 10,76 (s, 1H), 12,55 (s, 1H).
Paso 2i. 5-((5-(3-Fluoro-6-hidroxi-2-metoxifenil)-1H-pirazol-3-il)amino)pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 210):
Una solución del compuesto 209 (175 mg, 0,47 mmol) en HCl-dioxano (20 ml, solución 2M) se calentó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se filtró. La torta se ajustó a un pH de 9-10 con NH3/H2O y se extrajo con diclorometano. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se concentró para obtener el compuesto delt'tulo 210 (58 mg, 38 % de rendimiento) como un sólido de color amarillo. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 83,75 (s, 3H), 6,67 (dd, J = 8,8, 4,0 Hz, 1H), 6,88 (s, 1H), 7,13 (dd, J = 10,8, 9,2 Hz, 1H), 8,53 (br, 1H), 8,67 (s, 1H), 10,15 (br, 1H), 10,76 (s, 1H), 12,42 (s, 1H).
Paso 2j. (3-(2-(5-cianopirazin-2-il)amino)-1H-pirazol-5-il)-4-fluoro-3-metoxifenoxi)propil)carbamato de tertbutilo (Compuesto 211-2):
A una solución de PPh3 (121 mg, 0,46 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (5 ml) se añadió DIAD (93 mg, 0,46 mmol) en porciones a 0~5 °C. La mezcla de reacción se convirtió en una suspensión blanca. Después de 10 minutos, se añadió lentamente a la suspensión una solución del compuesto 110-1 (81 mg, 0,46 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (3 ml) mientras se mantenía la temperatura entre 0~5 °C. La mezcla preparada anteriormente se añadió en porciones a la solución del compuesto 210 (50 mg, 0,15 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (3 ml) a temperatura ambiente. Tras la adición, la solución se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó in vacuo. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna (diclorometano/acetato de etilo: 5/1) para obtener el compuesto del título 211-2 (80 mg, crudo) como un sólido de color amarillo, que se utilizó directamente en el siguiente paso sin purificación adicional.
Paso 2k. 5-((5-(6-(3-Aminopropoxi)-3-fluoro-2-metoxifenil)-1H-pirazol-3-il) amino)pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 2):
A una solución de 211-2 (80 mg, crudo) en diclorometano (3 ml) se añadió ácido trifluoroacético (3 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y luego se evaporó in vacuo para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC (40 %-90 % CH3CN en agua, 0,1 % CF3COOH) para obtener el compuesto del título 2 (20 mg, 34 % de rendimiento-2 pasos ) como un sólido de color amarillo. M.p.: 80-84 °C. LCMS: 384.3 [M+1]+ . 1 H RMN (400 MHz, CD3OD): 81,94-1,98 (m, 2H), 2,82 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 3,83(s, 3H), 4,12 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 6,85 (dd, J = 9,2, 4,0 Hz, 1H), 6,95 (s, 1H), 7,15-7,20 (m, 1H), 8,49-8,55 (m, 2H).
EJEMPLO 3:
5-(5-(2-(3-Aminopropoxi)-4-fluoro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 3)
Paso 3a. 1-(4-Fluoro-2,6-dimetoxifenil)etanona (Compuesto 302-3):
A una suspensión de cloruro de aluminio (8,6 g, 64,04 mmol) en tolueno (30 ml) se añadió 1-fluoro-3,5-dimetoxibenceno (301-3) (10,0 g, 64,04 mmol) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 2 horas. A la mezcla anterior se añadió cloruro de acetilo (5,0 g, 64,04 mmol). La mezcla resultante se agitó durante 0,5 horas más. La mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó in vacuo. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna (hexanos/acetato de etilo: 25/1) para obtener el compuesto del título 302-3 como un sólido blanco (2,78 g, 22 % de rendimiento). 1 H RMN (400 MHz, CDCh): 82,46 (s, 3H), 3,79 (s, 6H), 6,29 (d, J =10,8 Hz, 2H).
Paso 3b. 1-(4-Fluoro-2-hidroxi-6-metoxifenil)etanona (Compuesto 303-3):
A una solución del compuesto 302-3 (2,78 g, 14,0 mmol) en diclorometano (20 ml) se añadió tribromuro de boro 1 N (15,5 ml, 1M en diclorometano) a -20 °C. La mezcla resultante se agitó con agua y se extrajo del diclorometano. La mezcla resultante se agitó durante 1 h. La mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con diclorometano. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó in vacuo para obtener el compuesto del título 303-3 como un sólido blanco (2,3 g, 89 % de rendimiento). LCMS: 185.1 [M+1]+ .1 H RMN (400 MHz, CDCh): 82,54 (s, 3H), 3,86 (s, 3H), 6,35 (dd, J =10,8, 2,4 Hz, 1H), 6,51 (dd, J =11,6, 2,4 Hz, 1H), 12,76 (s, 1H).
Paso 3c. 1-(4-Fluoro-2-metoxi-6-(metoximetoxi)fenil)etanona (Compuesto 304-3):
A una solución del compuesto 303-3 (2,3 g, 12,49 mmol) en THF (20 ml) se añadió hidruro de sodio (1,0 g, 24,98 mmol) en porción a 0 °C. La reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 1 h. Se añadió cloro(metoxi)metano (1,51 g, 18,73 mmol) a 0 °C. La mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante toda la noche. La mezcla de reacción se inactivó con agua helada y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó in vacuo. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna (hexanos/acetato de etilo: 15/1) para obtener el compuesto del título 304-3 como un aceite incoloro (1,56 g, 55 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCh): 82,48 (s, 3H), 3,46 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 5,14 (s, 2H), 6,33 (dd, J =10,4, 2,0 Hz, 1H), 6,53 (dd, J = 10,4, 2,0 Hz, 1H).
Paso 3d. 1-(4-Fluoro-2-metoxi-6-(metoximetoxi)fenil)-3,3-bis(metiltio) prop-2-en-1-ona (Compuesto 305-3):
A una mezcla agitada de tert-butóxido de litio (2,19 g, 27,34 mmol) en DMSO anhidro (30 ml) se añadió el compuesto 304-3 (1,56 g, 6,84 mmol) a temperatura ambiente. La reacción se calentó a 40 °C y se agitó a 40 °C durante 2 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se añadió lentamente CS2 (1,3 g, 17,09 mmol). Tras 2 horas de reacción, se añadió lentamente yodometano (2,4 g, 17,09 mmol) manteniendo la temperatura por debajo de 30 °C. La mezcla de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y a continuación se inactivó con agua helada y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (hexanos/acetato de etilo: 4/1) para obtener el compuesto del título 305-3 como un sólido de color amarillo (1,42 g, 62 % de rendimiento). LCMS:333.0 [M+1]+. 1H RMN (400 MHz, CDCla): 82,42 (s, 3H), 2,51 (s, 3H), 3,44 (s, 3H), 3,77 (s, 3H), 5,12 (s, 2H), 6,19 (s, 1H), 6,33 (dd, J = 10,8, 2,0 Hz, 1H), 6,53 (dd, J = 10,8, 2,0 Hz, 1H).
Paso 3e. (Z)-5-(3-(4-Fluoro-2-metoxi-6-(metoximetoxi)feml)-1-(metNtio)-3-oxoprop-1-emlamm)pirazm-2-carbonitrilo (Compuesto 306-3):
A una mezcla agitada de 5-aminopirazin-2-carbonitrilo (433 mg, 3,61 mmol) en THF (10 ml) se añadió lentamente hidruro de sodio (240 mg, 6,02 mmol) por debajo de 15 °C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. A la mezcla anterior se añadió el compuesto 305-3 (1,0 g, 3,01 mmol). La mezcla resultante se agitó a 60 °C durante 4 h. La mezcla de reacción se inactivó con agua helada y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se concentró para obtener el compuesto del título 306-3 (1,5 g, crudo) como un aceite de color amarillo. LCMS:405.0[M+1]+.
Paso 3f.5-(5-(4-Fluoro-2-metoxi-6-(metoximetoxi)fenil)-1H-pirazol-3 ylamino)pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 307-3):
A una mezcla agitada del compuesto 306-3 (1,2 g, crudo) en etanol (10 ml) se añadió monohidrato de hidracina (265 mg, 4,5 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 50 °C durante 1 h. Tras enfriar a temperatura ambiente, el sólido se recogió por filtración, se lavó con etanol frío y se secó para obtener el compuesto del título 307-3 como un sólido de color amarillo (450 mg, rendimiento del 40 % mediante 2 pasos). LCMS:371.2 [M+1]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 8 3,34 (s, 3H), 3,80 (s, 3H), 5,23 (s, 2H), 6,71-6,76 (m, 3H), 8,54 (s, 1H), 8,63 (d, J =1,2 Hz, 1H), 10,71 (s, 1H), 12,39 (d, J = 1,6 Hz, 1H).
Paso 3g. 5-(5-(4-Fluoro-2-hidroxi-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin) pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 308-3):
Una suspensión del compuesto 307-3 (200 mg, 0,54 mmol) en HCl-dioxano (20 ml, solución 2M) se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El sólido resultante se recogió por filtración. A continuación, el sólido se suspendió en agua, se ajustó a un pH de 9-10 con amoníaco y se extrajo con diclorometano. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se concentró para obtener el compuesto del título 308-3 como un sólido de color amarillo (140 mg, 79,4 % de rendimiento). LCMS:327.0[M+1]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 83,86 (s, 3H), 6,44 (dd, J = 10,4, 2,4 Hz, 1H), 6,56 (dd, J = 11,2, 2,4 Hz, 1H), 6,86 (s, 1H), 8,61 (s, 1H), 8,71 (s, 1H), 10,56 (br, 1H), 10,76 (br, 1H), 12,34 (s, 1H).
Paso 3h. 3-(2-(5-cianopirazin-2-ilamin)-1H-pirazol-5-il)-5-fluoro-3-metoxifenoxi)propilcarbamato de tert-butilo (Compuesto 309-3):
A una solución de PPh3 (546 mg, 2,08 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (10 ml) se añadió DIAD (421 mg, 2,08 mmol) gota a gota a 0~5 °C, seguido de una solución de 3-hidroxipropilcarbamato de tert-butilo (110-1) (365 mg, 2,08 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (5 ml). La mezcla resultante se añadió a una solución del compuesto 308-3 (170 mg, 0,52 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (5 ml) a temperatura ambiente y se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó in vacuo. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna (diclorometano/acetato de etilo: 5/1) para obtener el compuesto del título 309-3 como un sólido de color amarillo (200 mg, crudo). LCMS: 484.2 [M+1]+.
Paso 3i. 5-(5-(2-(3-Aminopropoxi)-4-fluoro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin) pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 3):
A una solución del compuesto 309-3 (200 mg, crudo) en diclorometano (4 ml) se añadió ácido trifluoroacético (2 ml) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se evaporó in vacuo y el residuo se purificó por HPLC preparativa (35 %-90 % C ^C N en agua, 0,1 % CF3COOH) para obtener el compuesto del título 3 como un sólido de color amarillo (20 mg, 10 % de rendimiento en 2 pasos). M.p.: 229-232 °C. LCMS: 384.1 [M+1]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 51,76-1,82 (m, 2H), 2,71 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,82 (s, 3H), 4,10 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 6,66-6,70 (m, 3H), 6,85 (s, 1H), 8,52 (br, 1H), 8,64 (s, 1H).
EJEMPLO 4:
5-(5-(2-(3-Aminopropoxi)-4-cloro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 4)
Paso 4a. 1-(4-Cloro-2,6-dimetoxifenil)etanona (Compuesto 302-4):
A una mezcla de cloruro de aluminio (9,3 g, 69,5 mmol) y cloruro de acetilo (4,7 g, 60,8 mmol) en diclorometano (100 ml) se añadió 1-cloro-3,5-dimetoxibenceno (301-4) (10,0 g, 57,9 mmol) a 0 °C. La mezcla resultante se agitó durante 1 h. La mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con diclorometano. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó in vacuo. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna (hexanos/acetato de etilo: 25/1) para obtener el compuesto del título 302-4 como un sólido blanco (4,5 g, 36 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCh): 52,45 (s, 3H), 3,79 (s, 6H), 6,56 (s, 2H).
Paso 4b. 1-(4-cloro-2-hidroxi-6-metoxifenil)etanona (Compuesto 303-4):
A una solución del compuesto 302-4 (4,5 g, 21,0 mmol) en diclorometano (20 ml) se añadió tribromuro de boro 1 N (23,0 ml, 1M en diclorometano) a -20 °C. La mezcla resultante se agitó durante 1 h. La mezcla resultante se agitó durante 1 h. La mezcla de reacción se inactivó con agua helada y se extrajo con diclorometano. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó in vacuo para obtener el compuesto del título 303-4 como un sólido blanco (3,5 g, 83 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCla): 52,66 (s, 3H), 3,91 (s, 3H), 6,39 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,61 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 13,48 (s, 1H).
Paso 4c. 1-(4-Cloro-2-metoxi-6-(metoxietoxi)fenil)etanona (Compuesto 304-4):
Una mezcla del compuesto 303-4 (2,58 g, 12,86 mmol) e hidruro de sodio (1,03 g, 25,72 mmol) en THF (20 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. A continuación se añadió cloro(metoxi)metano (1,55 g, 19,29 mmol) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó in vacuo. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna (hexanos/acetato de etilo: 15/1) para obtener el compuesto del título 304-4 (2,0 g, 64 % de rendimiento) como un aceite incoloro. 1H RMN (400 MHz, CDCh): 52,46 (s, 3H), 3,45 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 5,13 (s, 2H), 6,59 (d, J =1,2 Hz, 1H), 6,79 (d, J = 1,6 Hz, 1H).
Paso 4d. 1-(4-cloro-2-metoxi-6-(metoximetoxi)fenil)-3,3-bis(metiltio) prop-2-en-1-ona (Compuesto 305-4):
A una suspensión de tert-butóxido de litio (2,62 g, 32,7 mmol) en DMSO anhidro (30 ml) se añadió el compuesto 304­ 4 (2,0 g, 8,17 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla resultante se agitó durante 2 h. Se añadió CS2 (1,56 g, 20,44 mmol) a temperatura ambiente y se agitó durante 2 h. Se añadió yodometano (2,9 g, 20,44 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna (hexanos/acetato de etilo: 5/1) para obtener el compuesto del título 305-4 como un sólido de color amarillo (1,8 g, 63 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCh): 52,41 (s, 3H), 2,51 (s, 3H), 3,44 (s, 3H), 3,77 (s, 3H), 5,11 (s, 2H), 6,17(s, 1H), 6,60 (d, J =1,6 Hz, 1H), 6,80 (d, J =1,6 Hz, 1H).
Paso 4e. (Z)-5-(3-(4-cloro-2-metoxi-6-(metoximetoxi)fenil)-1-(metiltio)-3-oxoprop-1-enilamin)pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 306-4):
A una suspensión de 5-aminopirazin-2-carbonitrilo (414 mg, 3,44 mmol) en THF (10 ml) se añadió hidruro de sodio (230 mg, 5,73 mmol) a 0 °C y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Se añadió el compuesto 305-4 (1,0 g, 2,87 mmol) y se agitó a 60 °C durante 4 h. La mezcla de reacción se inactivó con agua helada y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró para obtener el compuesto del título 306-4 como un sólido de color amarillo (500 mg, rendimiento del 42 %). LCMS:420.9 [M+1]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 52,36 (s, 3H), 3,35 (s, 3H), 3,77 (s, 3H), 5,21 (s, 2H), 5,68 (s, 1H), 6,86-6,88 (m, 2H), 8,63 (d, J =1,2 Hz, 1H), 8,86 (d, J =1,2 Hz, 1H), 13,89 (s, 1H).
Paso 4f. 5-(5-(4-cloro-2-metoxi-6-(metoximetoxi)fenil)-1H-pirazol-3-ilamin) pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 307-4):
Una mezcla de 306-4 (500 mg, 1,19 mmol) y monohidrato de hidracina (105 mg, 1,78 mmol) en etanol (10 ml) se agitó a 50 °C durante 1 h. Tras enfriar a temperatura ambiente, el sólido se recogió por filtración y se lavó con etanol frío, y se secó para obtener el compuesto del título 307-4 como un sólido de color amarillo (400 mg, 87 % de rendimiento).
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 53,35 (s, 3H), 3,83 (s, 3H), 5,25 (s, 2H), 6,80 (br, 1H), 6,91 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 8,54 (br, 1H), 8,63 (d, J=1,2 Hz, 1H), 10,68 (s, 1H), 12,41 (d, J =1,6 Hz, 1H).
Paso 4g. 5-(5-(4-cloro-2-hidroxi-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazina -2-carbonitrilo (Compuesto 308-4):
Una suspensión del compuesto 307-4 (400 mg, 1,03 mmol) en HCl/1,4-dioxano (30 ml, solución 2M) se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El sólido se recogió por filtración, se ajustó a un pH de 9-10 con NH3/H2O y se extrajo con diclorometano. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se concentró para obtener el compuesto del título 308-4 como un sólido de color amarillo (300 mg, 85 % de rendimiento). LCMS:343.0[M+1]+ .1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 83,83 (s, 3H), 6,64 (d, J =1,6 Hz, 1H), 6,67 (d, J =1,6 Hz, 1H), 6,86 (s, 1H), 8,54 (br, 1H), 8,64 (s, 1H), 10,68 (br, 2H), 12,32 (s, 1H).
Paso 4h. 3-(5-cloro-2-(3-(5-cianopirazin-2-ilamin)-1H-pirazol-5-il)-3-metoxifenoxi)propilcarbamato de tert-butilo (Compuesto 309-4):
A una solución de PPh3 (286 mg, 1,09 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (10 ml) se añadió DIAD (221 mg, 1,09 mmol) mediante jeringa a 0~5 °C, seguido de una solución de 3-hidroxipropilcarbamato de tert-butilo (110-1) (192 mg, 1,09 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (5 ml). La mezcla resultante se vertió en una solución del compuesto 308-4 (150 mg, 0,44 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (5 ml) a temperatura ambiente y se agitó durante 1 h. La mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó in vacuo. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna (diclorometano/acetato de etilo: 5/1) para obtener el compuesto del título 309-4 como un sólido de color amarillo (300 mg, crudo). LCMS: 500.2 [M+1]+ .
Paso 4i.5-(5-(2-(3-Aminopropoxi)-4-cloro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin) pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 4):
A una solución del compuesto 309-4 (300 mg, crudo) en diclorometano (4 ml) se añadió ácido trifluoroacético (2 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se evaporó in vacuo para dar el producto crudo, que se purificó por pre-HPLC (40 %-90 % CH3CN en agua, 0,1 % CF3COOH) para obtener el compuesto del título 4 como un sólido de color amarillo (26 mg, 15 % de rendimiento en 2 pasos). M.p.: 198-203 °C. LCMS: 400.4 [M+1]+ . 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 81,77-1,83 (m, 2H), 2,72 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,85 (s, 3H), 4,12 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 6,85-6,87 (m, 2H), 6,92 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 8,65 (s, 1H).
EJEMPLO 5:
5-(5-(2-(3-Aminopropoxi)-4-bromo-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazina -2-carbonitrilo (Compuesto 5)
Paso 5a. 1-(4-Bromo-2,6-dimetoxifenil)etanona (Compuesto 302-5):
A una suspensión de AlCh (3,69 g, 0,028 mol) en diclorometano (40 ml) se añadió cloruro de acetilo (1,99 g, 0,025 mol) por debajo de -5 °C. Una vez que la mezcla resultante se volvió límpida, se añadió 1-bromo-3,5-dimetoxibenceno (301-5) (5,0 g, 0,023 mol) en diclorometano (10 ml) a -5 °C. La mezcla de reacción amarilla se inactivó con cloruro de amonio saturado y se extrajo con diclorometano. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó in vacuo. El producto crudo se recristalizó de hexanos (20 ml) y acetato de etilo (4 ml) para obtener el producto titular 302-5 como un sólido blanco (3 g, 50 % de rendimiento). 1 H Rm N (400 MHz, CDCh): 8 2,44 (s, 3H), 3,79 (s, 6H), 6,72 (s, 2H).
Paso 5b. 1-(4-Bromo-2-hidroxi-6-metoxifenil)etanona (Compuesto 303-5):
A una solución del compuesto 302-5 (200 mg, 0,77 mmol) en DCM (3 ml) se añadió BBr3 (213 mg, 0,85 mmol) por debajo de -15 °C. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1h. La solución de reacción amarilla se inactivó con agua helada y se extrajo con diclorometano. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna (hexanos/acetato de etilo: 20/1) para obtener el compuesto del título 303-5 como un sólido de color amarillo pálido (160 mg, 85 % de rendimiento). 1 H RMN (400 MHz, CDCh): 82,65 (s, 3H), 3,90 (s, 3H), 6,54 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,78 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 13,41 (s, 1H).
Paso 5c. 1-(4-Bromo-2-metoxi-6-(metoximetoxi)fenil)etanona (Compuesto 304-5):
A una solución del compuesto 303-5 (160 mg, 0,65 mmol) en THF seco (10 ml) se añadió NaH (40 mg, 0,98 mmol) a 0 °C. La mezcla resultante se agitó durante 1h. Se añadió cloro(metoxi)metano (78 mg, 0,98 mmol) a 0 °C y se agitó a temperatura ambiente durante 15 min. La mezcla de reacción se inactivó con agua helada y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna (hexanos/acetato de etilo: 10/1) para obtener el compuesto del título 304-5 como un aceite incoloro (160 mg, 85 % de rendimiento). 1 H RMN (400 MHz, CDCh): 82,46(s, 3H), 2,46 (s, 3H), 3,80 (s, 3H), 5,13 (s, 2H), 6,75 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 6,96 (d, J =1,6 Hz, 1H).
Paso 5d. 1-(4-Bromo-2-metoxi-6-(metoximetoxi)fenil)-3,3-bis(metiltio) prop-2-en-1-ona (Compuesto 305-5):
A una solución de 304-5 (160 mg, 0,55 mmol) en DMSO (5 ml) se añadió t-BuOLi (111 mg, 1,38 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla resultante se agitó durante 1 h, seguida de la adición de CS2 (63 mg, 0,83 mmol). Tras agitar la mezcla resultante durante 2 horas, se añadió yodometano (196 mg, 1,38 mmol) a temperatura ambiente y se agitó durante 1 h más. La mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (acetato de etilo/hexanos: 1/5) para obtener el compuesto del título 305-5 (120 mg, 55 % de rendimiento) como un aceite de color amarillo. 1 H RMN (400 MHz, CDCh): 82,41 (s, 3H) 2,51 (s, 3H), 3,44 (s, 3H), 3,77 (s, 3H), 5,11 (s, 2H), 6,16 (s, 1H), 6,75 (d, J =1,6 Hz, 1H), 6,96 (d, J =1,2 Hz, 1H).
Paso 5e. (Z)-5-(3-(4-bromo-2-metoxi-6-(metoximetoxi)fenM)-1-(metNtio)-3-oxoprop-1-emlamm)pirazm-2-carbonitrilo (Compuesto 306-5):
A una suspensión de 5-aminopirazin-2-carbonitrilo (44,3 mg, 0,37 mmol) en THF (10 ml) se añadió NaH (24,4 mg, 0,61 mmol) a 0 °C. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Se añadió una solución del compuesto 305-5 (120 mg, 0,3 1mmol) en THF (2 ml) y se agitó a 55 °C durante 3,5 h. La mezcla de reacción se inactivó con agua helada y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna (hexanos/acetato de etilo: 3/1) para obtener el compuesto del título 306­ 5 como un sólido de color amarillo (110 mg, 77 % de rendimiento).
Paso 5f. 5-(5-(4-Bromo-2-metoxi-6-(metoximetoxi)fenil)-1H-pirazol-3-ilamin) pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 307-5):
Una mezcla del compuesto 306-5 (540 mg, 1,16 mmol) y monohidrato de hidracina (116 mg, 2,32 mmol) en etanol (10 ml) se agitó a 50 °C durante 1 h. Tras enfriar a temperatura ambiente, el sólido se recogió por filtración, se lavó con etanol frío y se secó para obtener el compuesto del título 307-5 como un sólido de color amarillo (176 mg, 35 % de rendimiento).
Paso 5g. 5-(5-(4-Bromo-2-hidroxi-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazina -2-carbonitrilo (Compuesto 308­ 5):
Una suspensión del compuesto 307-5 (200 mg, 0,46 mmol) en HCl/1,4-dioxano (8 ml, solución 2M) se agitó a 40 °C durante 1,5 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, el sólido se recogió por filtración, se ajustó para tener un pH de 9-10 con NH3/H2O y se secó para obtener el compuesto 308-5 del título como un sólido de color amarillo (166 mg, 93 % de rendimiento).
Paso 5h. 3-(5-bromo-2-(3-(5-cianopirazin-2-ilamin)-1H-pirazol-5-il)-3-metoxifenoxi)propilcarbamato de tertbutilo (Compuesto 309-5):
A una solución de PPh3 (179 mg, 0,68 mmol) en THF seco (4 ml) se añadió DIAD (138 mg, 0,68 mmol) mediante jeringa a 0~5 °C, seguido de una solución de 3-hidroxipropilcarbamato de tert-butilo (110-1) (82 mg, 0,68 mmol) en THF anhidro (2 ml). La mezcla resultante se vertió en una solución del compuesto 308-5 (88 mg, 0,23 mmol) en THF seco (2 ml) a temperatura ambiente y se agitó durante 1 h. La mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó in vacuo. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna (diclorometano/acetato de etilo: 3/1) para obtener el compuesto del título 309-5 como un sólido de color amarillo (190 mg, crudo). LCMS: 545.9 [M+1]+ .
Paso 5i. 5-(5-(2-(3-Aminopropoxi)-4-bromo-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin) pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 5):
Una mezcla del compuesto 309-5 (376 mg, crudo) en TFA (1,5 ml) y DCM (2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 h. La mezcla de reacción se evaporó in vacuo para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC preparativa (40 %-90 % CH3CN en agua, 0,1 % CF3COOH) para obtener el compuesto del título 5 como un sólido de color amarillo pálido (48 mg, 47 % de rendimiento en 2 pasos). M.p.: 165-175 °C. LCMS: 446.0 [M+1]+ .1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 81,85-1,88 (m, 2H), 2,78 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,87 (s, 3H), 4,16 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 6,94(br, 1H), 7,00 (s, 1H), 7,01 (s, 1H), 8,53 (br, 1H), 8,68 (s, 1H).
EJEMPLO 6: (Ejemplo de referencia)
5-(5-(2-(3-aminopropoxi)-6-metoxi-4-metilfenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 6)
Paso 6a. 1-(2-Hidroxi-6-metoxi-4-metilfenil)etanona (Compuesto 303-6):
A una solución de 5-metilbenceno-1,3-diol (10,0 g, 80,55 mmol) y cloruro de aluminio (32,0 g, 241,66 mmol) en clorobenceno (60 ml) se añadió cloruro de acetilo (8,9 g, 112,78 mmol) a 0 °C. La mezcla resultante se agitó durante 30 min. La mezcla resultante se calentó a 70 °C y se agitó durante 2 h más. La mezcla de reacción se inactivó con agua helada y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó in vacuo. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna (hexanos/acetato de etilo: 20/1) para obtener el compuesto del título 1-(2,6-Dihidroxi-4-metilfenil)etanona como un sólido de color amarillo (10 g, 75 % de rendimiento). LCMS: 167.0 [M+1]+ .1 H RMN(400 MHz, DMSO-d6): 2.17 (s, 3H), 2,62 (s, 3H), 6,20 (s, 2H), 11,87 (s, 2H). Una mezcla del compuesto anterior (5,0 g, 30,11 mmol), yodometano (6,4 g, 45,17) y K2CO3 (20,8 g, 150,5 mmol) en acetonitrilo (50 ml) se agitó a 35 °C durante la noche. La mezcla de reacción se filtró y se lavó con acetonitrilo. El filtrado se evaporó in vacuo. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna (hexanos/acetato de etilo: 50/1) para obtener el compuesto del título 303-6 como un sólido de color amarillo (4,5 g, 83 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCla): 82,30 (s, 3H), 2,64 (s, 3H), 3,88 (s, 3H), 6,19 (s, 1H), 6,39 (s, 1H), 13,33 (s, 1H).
Paso 6b. 1-(2-Metoxi-6-(metoximetoxi)-4-metilfenil)etanona (Compuesto 304-6):
A una solución del compuesto 303-6 (4,5 g, 25 mmol) en THF (50 ml) se añadió hidruro de sodio (2,0 g, 50 mmol) a 0 °C. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Se añadió cloro(metoxi)metano (3,0 g, 37,5 mmol) a 0 °C y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se inactivó con agua helada y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó in vacuo. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna (hexanos/acetato de etilo: 15/1) para obtener el compuesto del título 304-6 como un aceite de color amarillo (4,5 g, 84 % de rendimiento).
Paso 6c. 1-(2-Metoxi-6-(metoximetoxi)-4-metilfenil)-3,3-bis(metiltio) prop-2-en-1-ona (Compuesto 305-6):
A una mezcla agitada de tert-butóxido de litio (8,0 g, 100 mmol) en DMSO anhidro (100 ml) se añadió el compuesto 304-6 (4,5 g, 20 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla resultante se agitó a 50 °C durante 1 h. Se añadió lentamente CS2 (3 g, 40 mmol) a temperatura ambiente y se agitó durante 3 h. A continuación se añadió yodometano (8,5 g, 60 mmol) a 50 °C y se agitó durante 2 h. Tras enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo y agua. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna (hexanos/acetato de etilo: 4/1) para obtener el compuesto del título 305-6 como un sólido de color amarillo (1,7 g, 26 % de rendimiento). LCMS:329.3 [M+1]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 82,29 (s, 3H), 2,42 (s, 3H), 2,45 (s, 3H), 3,33 (s, 3H), 3,70 (s, 3H), 5,11 (s, 2H), 6,15 (s, 1H), 6,55 (s, 1H), 6,58 (s, 1H).
Paso 6d. (Z)-5-(3-(2-metoxi-6-(metoximetoxi)-4-metNfenM)-1-(metMtio)-3-oxoprop-1-emlamm)pirazm-2-carbonitrilo (Compuesto 306-6):
A una suspensión de 5-aminopirazin-2-carbonitrilo (750 mg, 6,22 mmol) en THF (10 ml) se añadió hidruro de sodio (420 mg, 10,36 mmol) a 0~5 °C. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Se añadió el compuesto 305-6 (1,7 g, 5,18 mmol) y se agitó a 60 °C durante 4 h. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Se añadió el compuesto 305-6 (1,7 g, 5,18 mmol) y se agitó a 60 °C durante 4 h. La mezcla de reacción se inactivó con agua helada y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna (hexanos/acetato de etilo: 5/1) para obtener el compuesto del título 306-6 como un sólido de color amarillo (1,0 g, 50 % de rendimiento). LCMS:401.1[M+1]+. 1H RMN (400 MHz, CDCl3): 82,34 (s, 3H), 2,36 (s, 3H), 3,46 (s, 3H), 3,81 (s, 3H), 5,16 (s, 2H), 5.69 (s, 1H), 6,46 (s, 1H), 6,63 (s, 1H), 8,37 (d, J =1,2 Hz, 1H), 8,52 (d, J =1,6 Hz, 1H),14,64 (s, 1H).
Paso 6e. 5-(5-(2-Metoxi-6-(metoximetoxi)-4-metilfenil)-1H-pirazol-3-ilamin) pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 307-6):
Una mezcla del compuesto 306-6 (800 mg, 2 mmol) y monohidrato de hidracina (150 mg, 3 mmol) en etanol (10 ml) se agitó a 50 °C durante 1 h. Tras enfriar a temperatura ambiente, el sólido se recogió por filtración, se lavó con etanol frío y se secó para obtener el compuesto del título 307-6 como un sólido de color amarillo (600 mg, 82 % de rendimiento). LCMS:367.4 [M+1]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 82,33 (s, 3H), 3,34 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 5,19 (s, 2H), 6,64 (s, 1H), 6.68 (s, 1H), 6,78 (s, 1H), 8,56 (br, 1H), 8,62 (d, J =1,2 Hz, 1H), 10,64 (s, 1H), 12,29 (d, J = 1,6 Hz, 1H).
Paso 6f. 5-(5-(2-Hidroxi-6-metoxi-4-metilfenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazina -2-carbonitrilo (Compuesto 308-6):
Una suspensión del compuesto 307-6 (600 mg, 1,64 mmol) en HCl/dioxano (20 ml, solución 2M) se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El sólido se recogió por filtración, se ajustó el pH a 9-10 con NH3/H2O y se extrajo con diclorometano. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró para obtener el compuesto del título 308-6 como un sólido de color amarillo (480 mg, 91 % de rendimiento). LCMS:323.1[M+1]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 82,25 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 6,42 (s, 2H), 6,86 (s, 1H), 8,58 (br, 1H), 8,63 (s, 1H), 9,91 (s, 1H), 10,60 (s, 1H), 12,16 (s, 1H).
Paso 6g. 3-(2-(5-cianopirazin-2-ilamin)-1H-pirazol-5-il)-3-metoxi-5-metilfenoxi)propilcarbamato de tert-butilo (Compuesto 309-6):
A una solución de PPh3 (314 mg, 1,2 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (10 ml) se añadió DIAD (242 mg, 1,2 mmol) mediante jeringa a 0~5 °C, seguido de una solución de 3-hidroxipropilcarbamato de tert-butilo (110-1) (210 mg, 1,2 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (5 ml). La mezcla resultante se vertió en una solución del compuesto 308-6 (130 mg, 0,4 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (5 ml) a temperatura ambiente y se agitó durante 10 min. La mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó in vacuo. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna (diclorometano/acetato de etilo: 5/1) para obtener el compuesto del título como un sólido de color amarillo 309-6 (100 mg, crudo).
Paso 6h.5-(5-(2-(3-aminopropoxi)-6-metoxi-4-metilfenil)-1H-pirazol-3-ilamin) pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 6):
A una solución del compuesto 309-6 (100 mg, crudo) en diclorometano (4 ml) se añadió ácido trifluoroacético (2 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se evaporó in vacuo y se purificó por pre-HPLC (30 %-90 % CH3CN en agua, 0,1 % CF3COOH) para obtener el compuesto del título 3-113 como un sólido de color amarillo (20 mg, 10 % de rendimiento en 2 pasos). M.p.: 188-191 °C. lCm S: 380.4 [M+1]+ .1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 81,93-1,97 (m, 2H), 2,34 (s, 3H), 2,87 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 3,81 (s, 3H), 4,10 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 6,61 (s, 2H), 6,88 (s, 1H), 8,55 (br, 1H), 8,67 (s, 1H).
EJEMPLO 7: (Ejemplo de referencia)
5-(5-(2-(3-Aminopropoxi)-4,6-dimetoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 7)
Paso 7a. 1-(2-Hidroxi-4,6-dimetoxifenil)etanona (Compuesto 303-7):
A una mezcla de 3,5-dimetoxifenol (2,0 g, 12,9 mmol) y trietilamina (2,0 g, 19,4 mmol) en 1,2-dicloroetano (10 ml) se añadió cloruro de acetilo (1,2 g, 15,6 mmol) a 0 °C. La mezcla resultante se agitó durante 0,5 h. La mezcla de reacción se inactivó con agua helada y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó in vacuo. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna (hexanos/acetato de etilo: 15/1) para obtener el compuesto del título acetato de 3,5-dimetoxifenilo como un sólido de color amarillo (2,2 g, 85 % de rendimiento). LCMS: 197.1 [M+1]+ . 1 H RMN (400 MHz, CDCh): 82,27 (s, 3H), 3,76 (s, 6H), 6,26 (d, J=2,4 Hz, 2H), 6,31-6,38 (m, 1H). A una suspensión de tricloruro de aluminio (120 mg, 1,53 mmol) en clorobenceno (4 ml) se añadió el compuesto obtenido anteriormente (200 mg, 1,02 mmol) en clorobenceno (4 ml). La mezcla resultante se agitó a 70 °C durante 4 h. La mezcla de reacción se inactivó con agua helada y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó in vacuo. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna (hexanos/acetato de etilo: 20/1) para obtener el compuesto del título 303-7 como un sólido de color amarillo (65 mg, 33 % de rendimiento). 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 82,55 (s, 3H), 3,81 (s, 3H), 3,86 (s, 3H), 6,08 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 6,11 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 13,76 (s, 1H).
Paso 7b. 1-(2,4-Dimetoxi-6-(metoximetoxi)fenil)etanona (Compuesto 304-7):
A una solución del compuesto 303-7 (500 mg, 2,55 mmol) en THF (10 ml) se añadió hidruro de sodio (153 g, 3,82 mmol) a 0 °C. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Se añadió cloro(metoxi)metano (308 mg, 3,82 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Se añadió cloro(metoxi)metano (308 mg, 3,82 mmol) a 0 °C y se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó in vacuo. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna (hexanos/acetato de etilo: 15/1) para obtener el compuesto del título 304-7 como un aceite de color amarillo (403 mg, 66% de rendimiento). LCMS: 241.1 [M+1]+ .1 H RMN (400 MHz, CDCh): 82,47 (s, 3H), 3,46 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,80 (s, 3H), 5,14 (s, 2H), 6,15 (t, J =2,0 Hz, 1H), 6,33 (d, J = 2,0 Hz, 1H).
Paso 7c. 1-(2,4-Dimetoxi-6-(metoximetoxi)fenil)-3,3-bis(metiltio)prop-2-en -1-ona (Compuesto 305-7):
A una suspensión de tert-butóxido de litio (416 mg, 5,20 mmol) en DMSO anhidro (20 ml) se añadió 304-7 (500 mg, 2,08 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla resultante se agitó durante 1 h. Se añadió CS2 (237 mg, 3,12 mmol) a temperatura ambiente y se agitó durante 3 h. Se añadió yodometano (739 mg, 5,20 mmol) a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. La mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna (hexanos/acetato de etilo: 4/1) para obtener el compuesto del título 305-7 como un sólido de color amarillo (180 mg, 26 % de rendimiento). LCMS:345.3 [M+1]+ .1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 82,40 (s, 3H), 2,49 (s, 3H), 3,45 (s, 3H), 3,77 (s, 3H), 3,80 (s, 3H), 5,12 (s, 2H), 6,17 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,26 (s, 1H), 6,34 (d, J = 2,0 Hz, 1H).
Paso 7d. (Z)-5-(3-(2,4-dimetoxi-6-(metoximetoxi)fenil)-1-(metiltio)-3-oxoprop-1-enilamin)pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 306-7):
A una suspensión de 5-aminopirazin-2-carbonitrilo (211 mg, 1,74 mmol) en THF (10 ml) se añadió hidruro de sodio (116 mg, 2,90 mmol) a 0 °C y se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Se añadió el compuesto 305-7 (500 mg, 1,45 mmol) y se agitó a 55 °C durante 2 h. Tras enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se inactivó con agua helada y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna (hexanos/acetato de etilo: 5/1) para obtener el compuesto del título 306-7 como un sólido de color amarillo (253 mg, 42 % de rendimiento).
Paso 7e. 5-(5-(2,4-Dimetoxi-6-(metoximetoxi)fenil)-1H-pirazol-3-ilamin) pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 307­ 7):
Una mezcla del compuesto 306-7 (253 mg, 0,61 mmol) y monohidrato de hidracina (48 mg, 0,96 mmol) en etanol (6 ml) se agitó a 85 °C durante 20 min. Después de enfriar a temperatura ambiente, el sólido se recogió por filtración, se lavó con etanol frío y se secó para obtener el compuesto del título 307-7 como un sólido de color amarillo (203 mg, 88 % de rendimiento).
Paso 7f. 5-(5-(2-hidroxi-4,6-dimetoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 308-7):
Una solución del compuesto 307-7 (1,2 g, 3,14 mmol) en HCl/1,4-dioxano (20 ml, solución 2M) se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El sólido se recogió por filtración, se ajustó a un pH de 9-10 con NH3/H2O y se extrajo con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron para obtener el compuesto del título 308-7 como un sólido de color amarillo (1,0 g, 94 % de rendimiento).
Paso 7g. 3-(2-(5-cianopirazin-2-ilamin)-1H-pirazol-5-il)-3,5-dimetoxi fenoxi)propilcarbamato de tert-butilo (Compuesto 309-7):
A una solución de PPh3 (236 mg, 0,9 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (6 ml) se añadió DIAD (182 mg, 0,9 mmol) mediante jeringa a 0~5 °C, seguido de una solución de 3-hidroxipropilcarbamato de tert-butilo (110-1) (155 mg, 0,9 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (5 ml). La mezcla resultante se vertió en una solución del compuesto 308-7 (100 mg, 0,3 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (5 ml) a temperatura ambiente y se agitó durante 10 min. La mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó in vacuo. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna (diclorometano/acetato de etilo: 5/1) para obtener el compuesto del título 309-7 como un sólido de color amarillo (300 mg, crudo). LCMS: 496.6 [M+ 1]+ .
Paso 7h. 5-(5-(2-(3-Aminopropoxi)-4,6-dimetoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin) pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 7):
A una solución del compuesto 309-7 (100 mg, crudo) en diclorometano (4 ml) se añadió ácido trifluoroacético (2 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se evaporó in vacuo y se purificó por pre-HPLC (30 %-90 % CH3CN en agua, 0,1 % CF3COOH) para obtener el compuesto del título 7 como un sólido de color amarillo (20 mg, 10 % de rendimiento en 2 pasos). M.p.: 145-151 °C. Lc Ms : 396.4 [M+1]+ . 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 81,80-1,87 ( m, 2H), 2,76 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,82 (d, J = 2,4 Hz, 6H), 4,10 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 6,33 (s, 1H), 6,34 (s, 1H), 6,84 (s, 1H), 8,54 (br, 2H), 8,65 (s, 1H).
EJEMPLO 8:
5-(5-(2-((1-(Aminometil)ciclopropil)metoxi)-4-fluoro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 13)
Paso 8a. (1-((2-(5-cianopirazm-2-Namm)-1H-pirazol-5-N)-5-fluoro-3-metoxifenoxi)metil)ciclopropil)metilcarbamato de tert-butilo (Compuesto 309-13):
A una solución de PPh3 (242 mg, 0,92 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (10 ml) se añadió DIAD (186 mg, 0,92 mmol) mediante jeringa a 0~5 °C, seguido de una solución de (1-(hidroximetil)ciclopropil)metilcarbamato de tert-butilo (110­ 13) (185 mg, 0,92 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (5 ml). La mezcla resultante se vertió en una solución del compuesto 308-3 (100 mg, 0,306 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (5 ml) a temperatura ambiente y se agitó durante 1 h. La mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó in vacuo. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna (diclorometano/acetato de etilo: 5/1) para obtener el compuesto del título 309-13 como un sólido de color amarillo (400 mg, crudo). LCMS: 510.5 [M+1]+ .
Paso 8b. 5-(5-(2-((1-(Aminometil)ciclopropil)metoxi)-4-fluoro-6-metoxifenil) -1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 13):
A una solución del compuesto 309-13 (400 mg, crudo) en diclorometano (4 ml) se añadió ácido trifluoroacético (2 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se evaporó in vacuo y se purificó por pre-HPLC (35 %-90 % CH3CN en agua, 0,1 % CF3COOH) para obtener el compuesto del título 13 como un sólido de color amarillo (40 mg, 32 % de rendimiento en 2 pasos). M.p.: 202-206 °C. LCMS: 410.5 [M+1]+ .1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 80,48-0,51 (m, 4H), 2,66 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,96 (s, 2H), 6,63-6,69 (m, 2H), 6,95 (s, 1H), 8,50 (br, 1H), 8,61 (s, 1H).
5-(5-(2-((1-(Aminometil)ciclopropil)metoxi)-4-cloro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 14)
Paso 9a. (1 -((5-cloro-2-(3-(5-cianopirazm-2-ilamm)-1H-pirazol-5-N)-3-metoxifenoxi)metil)ciclopropil)metilcarbamato de tert-butilo (Compuesto 309-14):
A una solución de PPh3 (459 mg, 1,75 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (10 ml) se añadió DIAD (354 mg, 1,75 mmol) mediante jeringa a 0~5 °C, seguido de una solución de (1-(hidroximetil)cidopropil)metilcarbamato de tert-butilo (110­ 13) (352 mg, 1,75 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (5 ml). La mezcla resultante se vertió en una suspensión del compuesto 308-4 (200 mg, 0,58 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (5 ml) a temperatura ambiente y se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó in vacuo. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna (diclorometano/acetato de etilo: 5/1) para obtener el compuesto del título 309-14 como un sólido de color amarillo (500 mg, crudo). LCMS: 526.2 [M+1]+ .
Paso 9b. 5-(5-(2-((1-(Aminometil)ciclopropil)metoxi)-4-cloro-6-metoxifenil) -1H-pirazol-3-Namin)pirazm-2-carbonitrilo (Compuesto 14):
A una solución del compuesto 309-14 (500 mg, crudo) en diclorometano (3 ml) se añadió ácido trifluoroacético (3 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se evaporó in vacuo y se purificó por pre-HPLC (40 %-90 % CH3CN en agua, 0,1 % CF3COOH) para obtener el compuesto del título 14 como un sólido de color amarillo (50 mg, 20 % de rendimiento en 2 pasos). M.p.: 232-236 °C. LCMS: 427.0 [M+1]+ .1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 80,44-0,54 (m, 4H), 2,64 (s, 2H), 3,86 (s, 3H), 3,99 (s, 2H), 6,84 (s, 1H), 6,85 (s, 1H), 7,01 (s, 1H), 8,50 (br, 1H), 8,62 (d, J =1,2 Hz, 1H).
EJEMPLO 10:
5-(5-(2-((1-(Aminometil)ciclopropil)metoxi)-4-bromo-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 15)
Paso 10a. (1-((5-bromo-2-(3-(5-cianopirazin-2-Namm)-1H-pirazo|-5-y|)-3-metoxifenoxi)metil)ciclopropil)metilcarbamato de tert-butilo (Compuesto 309-15):
A una solución de PPh3 (240 mg, 0,91 mmol) en THF anhidro (4 ml) se añadió DIAD (185 mg, 0,91 mmol) mediante jeringa a 0~5 °C, seguida de una solución de (1-(hidroximetil)ciclopropil)metilcarbamato de tert-butilo (110-13) (185 mg, 0,91 mmol) en THF anhidro (2 ml). La mezcla resultante se vertió en una solución del compuesto 308-5 (118 mg, 0,30 mmol) en THF seco (2 ml) a temperatura ambiente y se agitó durante 1 h. La mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó in vacuo. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna (diclorometano/acetato de etilo: 3/1) para obtener el compuesto del título 309-15 como un sólido de color amarillo (300 mg).
Paso 10b. 5-(5-(2-((1-(Aminometil)ciclopropil)metoxi)-4-bromo-6-metoxifenil) -1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 15):
A una solución del compuesto 309-15 (300 mg, 50 % de pureza) en DCM (3 ml) se añadió TFA (2 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 h. La mezcla de reacción se evaporó in vacuo y se purificó por HPLC preparativa (40 %-90 % CH3CN en agua, 0,1 % CF3COOH) para obtener el compuesto del título 15 como un sólido de color amarillo pálido (48,2 mg, rendimiento del 39 % mediante 2 pasos). LCMS: 472.0 [M+1]+ .1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 80,48-0,49 (m, 4H), 2,64 (s, 2H), 3,86 (s, 3H), 3,99 (s, 2H), 6,95-6,96 (m, 2H), 7,01 (br, 1H), 8,50 (br, 1H),8,61 (d, J =1,2 Hz, 1H).
EJEMPLO 11: (Ejemplo de referencia)
5-(5-(2-((Aminometil)ciclopropil)metoxi)-6-metoxi-4-metilfenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 16)
Paso 11a. (1-((2-(5-cianopirazin-2-ilamin)-1H-pirazol-5-il)-3-metoxi -5-metilfenoxi)metil)ciclopropil)metilcarbamato de tert-butilo (Compuesto 309-16):
A una solución de PPh3 (244 mg, 0,93 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (10 ml) se añadió DIAD (188 mg, 0,93 mmol) mediante jeringa a 0~5 °C, seguido de una solución de (1-(hidroximetil)ciclopropil)metilcarbamato de tert-butilo (110­ 13) (187 mg, 0,93 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (5 ml). La mezcla resultante se vertió en una solución del compuesto 308-6 (100 mg, 0,31 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (5 ml) a temperatura ambiente y se agitó a temperatura ambiente durante 10 min. La mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó in vacuo. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna (diclorometano/acetato de etilo: 5/1) para obtener el compuesto del título 309-16 como un sólido de color amarillo (180 mg, crudo). LCMS: 506.6 [M+1]+ .
Paso 11b. 5-(5-(2-((Aminometil)ciclopropil)metoxi)-6-metoxi-4-metilfenil) -1H-pirazol-3-ilamin)pirazm-2-carbonitrilo (Compuesto 16):
A una solución del compuesto 309-16 (180 mg, crudo) en diclorometano (3 ml) se añadió ácido trifluoroacético (3 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se evaporó in vacuo y se purificó por HPLC preparativa (30 %-90 % CH3CN en agua, 0,1 % CF3COOH) para obtener el compuesto del título como un compuesto sólido de color amarillo 16 (60 mg, 48 % de rendimiento mediante 2 pasos ). M.p.: 165-170 °C. LCMS: 406.4 [M+1]+ . 1 H RMN (400 MHz, CD3OD): 80,60-0,63 (m, 4H), 2,37 (s, 3H), 2,73 (s, 2H), 3,87 (s, 3H), 3,97 (s, 2H), 6,56 (s, 1H), 6,59 (s, 1H), 6,97 (s, 1H), 8,43 (br, 1H), 8,47 (d, J =1,2 Hz, 1H).
EJEMPLO 12: (Ejemplo de referencia)
5-(5-(2-((Aminometil)ciclopropil)metoxi)-4,6-dimetoxifenil)-1H-pirazol-3-il amino)pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 17)
Paso 12a. (1-((2-(5-cianopirazin-2-ilamin)-1H-pirazol-5-il)-3,5-dimetoxifenoxi)metil)ciclopropil)metilcarbamato de tert-butilo (Compuesto 309-17):
A una solución de PPh3 (244 mg, 0,90 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (10 ml) se añadió DIAD (188 mg, 0,90 mmol) mediante jeringa a 0~5 °C, seguido de una solución de (1-(hidroximetil)ciclopropil)metilcarbamato de tert-butilo (110­ 13) (178 mg, 0,90 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (5 ml). La mezcla resultante se vertió en una solución del compuesto 308-7 (100 mg, 0,30 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (5 ml) a temperatura ambiente y se agitó durante 10 min. La mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó in vacuo. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna (diclorometano/acetato de etilo: 5/1) para obtener el compuesto del título 309-17 como un sólido de color amarillo (100 mg, crudo). LCMS: 522.3 [M+1]+ .
Paso 12b. 5-(5-(2-((Aminometil)ciclopropil)metoxi)-4,6-dimetoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 17):
A una solución del compuesto 309-17 (100 mg, crudo) en diclorometano (3 ml) se añadió ácido trifluoroacético (3 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se evaporó in vacuo. El residuo se purificó por HPLC preparativa (35 %-90 % CH3CN en agua, 0,1 % CF3COOH) para obtener el compuesto del título 17 como un sólido de color amarillo (30 mg, 20 % de rendimiento en 2 pasos). M.p.: 160-164 °C. LCMS: 422.5 [M+1]+ .1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 80,49-0,52 (m, 4H), 2,67 (s, 2H), 3,81 (s, 3H), 3,83 (s, 3H), 3,96 (s, 2H), 6,32 (d, J =2,0 Hz, 2H), 6,92 (s, 1H),8,52 (br, 1H), 8,61(s, 1H).
EJEMPLO 13: (Ejemplo de referencia)
5-(5-(3-fluoro-6-metoxi-2-((1-((metilamin)metil)ciclopropil)metoxi)fenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 18)
Paso 13a. (1-((2-(5-cianopirazin-2-ilamin)-1H-pirazol-5-il)-6-fluoro-3-metoxifenoxi)metil)ciclopropil)carbamato de tert-butilo (Compuesto 111-18):
A una solución de PPh3 (321 mg, 1,23 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (10 ml) se añadió DIAD (248 mg, 1,23 mmol) gota a gota a 0~5 °C. Después de 10 min, se añadió a la suspensión una solución de carbamato de tert-butilo ((1-(hidroximetil)ciclopropil)metil)(metil) (110-18) (263 mg, 1,23 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (5 ml) a 0~5 °C. La mezcla resultante se añadió a una solución de 109 (100 mg, 0,31 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (5 ml) a temperatura ambiente y se agitó durante 1 h. La mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó in vacuo. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna (diclorometano/acetato de etilo: 5/1) para obtener el compuesto del título 111-18 como un sólido de color amarillo (230 mg, crudo). LCMS: 524.4 [M+1]+ .
Paso 13b. 5-(5-(3-fluoro-6-metoxi-2-((1-((metilamin)metil)ciclopropil)metoxi) fenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 18):
A una solución del compuesto 111-18 (230 mg, crudo) en diclorometano (3 ml) se añadió ácido trifluoroacético (3 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se evaporó in vacuo. El residuo se purificó por HPLC preparativa (40 %-90 % CH3CN en agua, 0,1 % CF3COOH) para obtener el compuesto del título 18 como un sólido de color amarillo (40 mg, 30 % de rendimiento en dos pasos). M.p.: 213-215 °C. LCMS: 424.4 [M+1]+ .1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 80,41-0,42 (m, 4H), 2,25 (s, 3H), 2,42 (s, 2H), 3,78 (s, 2H), 3,80 (s, 3H), 6.86 (dd, J =9,2, 4,0 Hz, 1H), 6,96 (s, 1H), 7,28 (dd, J = 11,2, 9,2 Hz, 1H), 8,53 (br, 1H), 8,65 (d, J =1,2 Hz, 1H).
EJEMPLO 14: (Ejemplo de referencia)
5-((5-(3-fluoro-2-metoxi-6-((1-((metilamin)metil)ciclopropil)metoxi)fenil)-1H-pirazol-3-il)amino)pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 19)
Paso 14a. ((1-((3-((5-cianopirazin-2-il)amino)-1H-pirazol-5-il)-4-fluoro -3-metoxifenoxi)metil)cidopropM)(metM)carbamato de tert-butilo (Compuesto 211-19):
A una solución de PPh3 (140 mg, 0,53 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (5 ml) se añadió DIAD (108 mg, 0,53 mmol) a 0~5 °C, seguido de una solución de ((1-(hidroximetil)cidopropil)metil)(metil)carbamato de tert-butilo (110-18) (115 mg, 0,53 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (3 ml). La mezcla resultante se añadió a una solución de 210 (58 mg, 0,18 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (3 ml) a temperatura ambiente y se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó in vacuo. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna (diclorometano/acetato de etilo: 5/1) para obtener el compuesto del título 211-19 como un sólido de color amarillo (60 mg, crudo). 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 80,54-0,57(m, 4H), 1,15-1,23 (m, 9H), 2,72 (s, 3H), 3,29 (s, 2H), 3,73 (s, 3H), 3.76 (s, 2H), 6,77-6,80 (m, 1H), 7,23-7,29 (m, 1H), 8,49 (br, 1H), 8,62 (s, 1H), 10,80 (br, 1H), 12,38­ 12,47 (m 1H).
Paso 14b. 5-((5-(3-fluoro-2-metoxi-6-((1-((metNamm)metN)ddopropN)metoxi) fenil)-1H-pirazol-3-il)amino)pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 19):
A una solución del compuesto 211-19 (60 mg, crudo) en diclorometano (3 ml) se añadió ácido trifluoroacético (3 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se evaporó in vacuo y el producto crudo se purificó por HPLC preparativa (35 %-90 % CH3CN en agua, 0,1 % CF3COOH) para obtener el compuesto del título 19 como un sólido de color amarillo (40 mg, 53 % de rendimiento en dos pasos). M.p.: 215-219 °C. LCMS: 424.4 [M+1]+ .1 H RMN (400 MHz, CD3OD): 80,62-0,64 (m, 4H), 2,37 (s, 3H), 2,65 (s, 2H), 3,84 (d, J =1,2 Hz, 3H), 3,95 (s, 2H), 6.81 (dd, J =9,2, 4,0 Hz, 1H), 7,01 (s, 1H), 7,16 (dd, J =10,8, 9,2 Hz, 1H), 8,51 (br, 1H), 8,53 (s, 1H).
EJEMPLO 15:
5-(5-(4-Fluoro-2-metoxi-6-((1-((metilamin)metil)ciclopropil)metoxi)fenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo (Compuesto 20)
Paso 15a. (1-((2-(5-cianopirazin-2-ilamin)-1H-pirazol-5-il)-5-fluoro -3-metoxifenoxi)metil)ciclopropil)carbamato de tert-butilo (Compuesto 309-20):
A una solución de PPh3 (451 mg, 1,72 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (10 ml) se añadió DIAD (348 mg, 1,72 mmol) gota a gota a 0~5 °C. Después de 10 min, se añadió a la suspensión una solución de ((1-(hidroximetil)ciclopropil)metil)(metil)carbamato de tert-butilo (110-18) (370 mg, 1,72 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (5 ml) a 0~5 °C. La mezcla resultante se vertió en una solución del compuesto 308-3 (140 mg, 0,43 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (5 ml) a temperatura ambiente y se agitó durante 1 h. La mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó in vacuo. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna (diclorometano/acetato de etilo: 5/1) para obtener el compuesto del título 309-20 como un sólido de color amarillo (300 mg, crudo). LCMS: 524.3 [M+1]+ .
Paso 15b. 5-(5-(4-Fluoro-2-metoxi-6-((1-((metilamin)metil)ciclopropil)metoxi) fenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2- carbonitrilo (Compuesto 20):
A una solución del compuesto 309-20 (300 mg, crudo) en diclorometano (3 ml) se añadió ácido trifluoroacético (3 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se evaporó in vacuo y el residuo se purificó por HPLC preparativa (40 %-90 % CH3CN en agua, 0,1 % CF3COOH) para obtener el compuesto del título 20 como un sólido de color amarillo (20 mg, 11 % de rendimiento en 2 pasos). M.p.: 228-230 °C. LCMS: 424.1 [M+1]+ .1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 80,53 (d, J = 8,0 Hz, 4H), 2,32 (s, 3H), 2,57 (s, 2H), 3,85 (s, 3H), 3,95 (s, 2H), 6,64-6,70 (m, 2H), 6,98 (s, 1H), 8,54 (br, 1H), 8,62 (s, 2H), 10,71 (br, 1H).
EJEMPLO 16: (Ejemplo de referencia)
3- (2-(5-cianopirazin-2-ilamin)-1H-pirazol-5-il)-5-fluoro-3-metoxi fenoxi)propilcarbamato de etilo (Compuesto 38)
A una suspensión del compuesto 3 (75 mg, 0,19 mmol) y K2CO3 (54 mg, 0,39 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (10 ml) se añadió carbonocloridato de etilo (21 mg, 0,19 mmol) a 0 °C. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó in vacuo. El producto crudo se purificó por HPLC preparativa (60 %-90 % CH3CN en agua, 0,1 % CF3COOH) para obtener el compuesto del título 38 como un sólido de color amarillo (37 mg, 43% de rendimiento). LCMS: 456.5 [M+1]+ .1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 81,13 (t, J = 6,8 Hz, 3H), 1,83-1,86 (m, 2H), 3,13 (q, J = 6,4 Hz, 2H), 3,82 (s, 3H), 3,94 (q, J = 6,8 Hz, 2H), 4.03 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 6,66-6,70 (m, 2H), 6,87 (s, 1H), 7,15 (t, J =5,6 Hz, 1H), 8,50 (br, 1H), 10,7 (s, 1H), 8,59 (s, 1H), 12,29 (s,1H).
es os en os emp os a an erores:
5-(5-(2-(3-metilaminopropoxi)-4-fluoro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin) pirazin-2-carbonitrilo;
5-(5-(2-(3-metilaminopropoxi)-4-doro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin) pirazin-2-carbonitrilo;
5-(5-(2-(3-metilaminopropoxi)-4-bromo-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin) pirazin-2-carbonitrilo;
5-(5-(2-(3-metilaminopropoxi)-4-metil-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin) pirazin-2-carbonitrilo; (compuesto de referencia)
5-(5-(3-(3-metilaminopropoxi)-4,6-dimetoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin) pirazin-2-carbonitrilo; (compuesto de referencia)
5-((5-(4-cloro-2-metoxi-6-((1-((metilamin)metil)ciclopropil)metoxi)fenil)-1H-p yrazol-3-il)amino)pirazin-2-carbonitrilo;
5-((5-(4-bromo-2-metoxi-6-((1-((metilamin)metil)ciclopropil)metoxi)fenil)-1H-p yrazol-3-il)amino)pirazin-2-carbonitrilo;
5-((5-(2-metoxi-4-metil-6-((1-((metilamin)metil)ciclopropil)metoxi)fenil)-1H-pirazol-3-il)amino)pirazin-2-carbonitrilo; (compuesto de referencia)
5-((5-(2,4-dimetoxi-6-((1-((metilamin)metil)ciclopropil)metoxi)fenil)-1H-pirazo 1-3-il)amino)pirazin-2-carbonitrilo; (compuesto de referencia)
5-(5-(2-(2-hidroxi-3-aminopropoxi)-4-fluoro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin) pirazin-2-carbonitrilo; (compuesto de referencia)
5-(5-(2-(2-hidroxi-3-aminopropoxi)-4-metil-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin) pirazin-2-carbonitrilo; (compuesto de referencia)
5-(5-(2-(2-hidroxi-3-aminopropoxi)-4,6-dimetoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin) pirazin-2-carbonitrilo; (compuesto de referencia)
2-metil-5-(5-(2-(3-aminopropoxi)-4-fluoro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin) pirazina; (compuesto de referencia)
2-cloro-5-(5-(2-(3-aminopropoxi)-4-fluoro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin) pirazina; (compuesto de referencia)
2-metil-5-(5-(2-(3-metilaminopropoxi)-4-fluoro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-il amino)pirazina; (compuesto de referencia)
2-cloro-5-(5-(3-(3-metilaminopropoxi)-4-fluoro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-il amino)pirazina; (compuesto de referencia)
2-metil-5-(5-(2-((aminometil)ciclopropil)metoxi)-4-fluoro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazina;
(compuesto de referencia)
2-cloro-5-(5-(2-((aminometil)ciclopropil)metoxi)-4-fluoro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazina;
(compuesto de referencia)
2-metil-5-(5-(2-((aminometil)ciclopropil)metoxi)-4-fluoro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazina;
(compuesto de referencia)
2-cloro-5-(5-(2-((aminometil)ciclopropil)metoxi)-4-fluoro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazina;
(compuesto de referencia)
2-metil-5-(5-(2-(2-hidroxi-3-aminopropoxi)-4-fluoro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-il amino)pirazina; (compuesto de referencia)
2-cloro-5-(5-(2-(2-hidroxi-3-aminopropoxi)-4-fluoro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-il amino)pirazina; (compuesto de referencia)
2-amino-N-(3-(3-((5-cianopirazin-2-il)amino)-1H-pirazol-5-il)-5-fluoro-3-metoxifenoxi)propil)acetamida; (compuesto de referencia) o
isobutirato de 1-((3-(3-((5-cianopirazin-2-il)amino)-1H-pirazol-5-il)-5-fluoro-3-metoxifenoxi)pr opil)carbamoil)oxi)etilo. (Compuesto de referencia)
s u os armaco g cos n v ro e n vvo :
1. Ensayo enzimático ChK1
1) Ensayo ADP-Glo in vitro para determinar la capacidad de los compuestos de prueba de inhibir la actividad de Chk1
Los compuestos se disolvieron en DMSO al 100 %. Se transfirieron 100 nl de compuesto a una placa de ensayo de 384 pocillos calificada por Echo (LABCYTE, Cat. N° P05525) con eco. El pocillo de control sin compuesto contenía 100 nl de DMSO al 100 %. 2.5 ul de una dilución de 2 veces la solución de enzima Chk1 (BPS, Cat. No. 40039, lote. No. 1001) se dispensó en el pocillo con el compuesto a varias concentraciones y se añadieron 2,5 ul de tampón de ensayo (40 mM Tris a pH 7,5, 20 mM MgCh, 0,10 % BSA, 1 mM DTT) en los pozos de control bajo. Tras la incubación a temperatura ambiente durante 10 minutos, se añadieron 2,5 pl de una dilución 2 veces mayor del péptido sustrato FAM-P10 (Invitrogen, Cat. No. 116583, lote. N° P080804-WY116583). Tras la incubación a la temperatura de 37 °C durante 60 minutos, se añadieron 5 pl de reactivo ADP-Glo (Promega, Cat. No. v9102/3, Lote. N° 314795) y se incubó la placa a temperatura ambiente durante 60 minutos. 10 ul de reactivo de detección de quinasas (Promega, Cat. No. v9102/3, Lote. N° 314795) se transfirió a todos los pocillos, y la placa se incubó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Los datos de conversión se leyeron con Synergy (Biotek) y el valor de RLU se convirtió en valores de inhibición. La tasa de inhibición ( %) = (máx- conversión) / (máx-min) * 100.
2) Ensayo ADP-Glo in vitro para determinar la capacidad de los compuestos de prueba de inhibir la actividad de Chk2
Los compuestos se disolvieron en DMSO al 100 %. Se transfirieron 100 nl del compuesto a una placa de ensayo de 384 pocillos calificada por Echo (LABCYTE, Cat. N° P05525) con eco. El pocillo de control sin compuesto contenía 100 nl de DMSO al 100 %. 2.5 ul de una dilución de 2,5 veces la solución de enzima Chk2 (Carna, Cat. No. 02-162, Lote. N° 10CBS-0386) se dispensó en el pocillo con el compuesto a varias concentraciones y se añadieron 2,5 ul de tampón de ensayo (40 mM Tris a pH 7,5, 20 mM MgCl2, 0,10 % BSA, 1 mM DTT) en los pozos de control bajo. Tras la incubación a temperatura ambiente durante 10 minutos, se añadieron 2,5 pl de una dilución 2,5 veces mayor del péptido sustrato f A m - P 10 (Invitrogen, Cat. No. 116583, lote. N° P080804-WY116583). Tras la incubación a la temperatura de 37 °C durante 60 minutos, se añadieron 5 pl de reactivo ADP-Glo (Promega, Cat. No. v9102/3, Lote. N° 314795) y se incubó la placa a 37 °C durante 60 minutos. 10 ul de reactivo de detección de quinasas (Promega, Cat. No. v9102/3, Lote. N° 314795) se transfirió a todos los pocillos, y la placa se incubó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Los datos de conversión se leyeron con Synergy (Biotek) y el valor de RLU se convirtió en valores de inhibición. La tasa de inhibición ( %) = (máx- conversión) / (máx-min) * 100.
La siguiente Tabla 1 enumera compuestos representativos de esta invención y su actividad en ensayos de Chk1 y Chk2. En estos ensayos, se utilizó la siguiente clasificación: I >100 nM, 100nM >II > 50 nM, 50 nM > III >10 nM, 10 nM > IV > 1 nM, V < 1 nM.
Tabla 1. Actividad enzimática in vitro
Figure imgf000031_0001
2. Ensayo de inhibición del crecimiento de las células cancerosas
Las líneas celulares de cáncer humano se adquirieron de American Type Culture Collection (Manassas, VA). Las células tripsinizadas se diluyeron hasta el volumen requerido a densidades de 44.000 células/ml. Se dispensaron 90 ul de suspensión celular por pocillo en placas de fondo plano de 96 pocillos con el medio de cultivo recomendado. Las células se incubaron durante 24 horas a 37 °C en un 5 % de CO2 en condiciones de humedad. A continuación, las células se incubaron con compuestos a diversas concentraciones durante 72 horas en medio de cultivo suplementado con 0,5 % (v/v) de FBS. La inhibición del crecimiento se evaluó mediante el ensayo del contenido de ATP celular utilizando el reactivo CellTiter-Glo en cada pocillo. La luminiscencia se leyó en Envision. La tasa de inhibición ( %) = (señal máxima - señal compuesta)/(señal máxima - señal mínima) x 100.
La siguiente Tabla 2 enumera los compuestos representativos de esta invención y su actividad anti proliferación celular en los ensayos basados en células. En estos ensayos, se utilizó la siguiente clasificación: I > 500 nM, 500 nM > II > 100 nM, 100 nM > III > 50 nM, 50 nM > IV > 10 nM, V <10 nM.
Tabla 2. Ensayo de proliferación celular
Figure imgf000032_0001
3. Análisis de Transferencia Western
Las células de cáncer de colon HT-29 cultivadas en monocapa se trataron como se indica. En las leyendas de las figuras se homogeneizaron los lisados celulares. Las muestras preparadas tras la centrifugación a 13.000 rpm y la ebullición durante 8 minutos se cargaron en un gel SDS-PAGE. La inmunotransferencia se llevó a cabo mediante procedimientos estándar con una solución de bloqueo (TBST con leche descremada al 5 % W/V) que contenía un anticuerpo primario de ratón Chk1 (CST Cat#2360, anticuerpo pChK1(S296) (CST Cat#2349) o anticuerpo p-actina (CST Cat #4970) y anticuerpos secundarios conjugados con IRDye 680RD o iRDay 800CW (Li-COR Cat#926-68071, Cat # 926-32210). Las membranas fueron fotografiadas con el sistema de imágenes infrarrojas LI-COR Odyssey.
Las células HT-29 se preincubaron con un inhibidor de Chk1 a varias concentraciones durante 0,5 horas, seguido de un tratamiento con SN-38 (200 nM) durante 16 horas. Los compuestos 3 y 13 mostraron una potencia similar a la de LY-260636 en la inhibición de la fosforilación de Chk1 en las células de colon HT-29. GDC-575 fue menos potente que estos compuestos (Figura 1). Las células HT-29 se preincubaron con SN-38 (50 nM) durante 24 horas, seguidas de un tratamiento con inhibidores de ChK1 a diversas concentraciones durante 3 horas. Tanto el LY-260636 como el Compuesto 3 inhibieron potentemente la fosforilación de ChK1 en las células tumorales (Figura 2).
4. Estudios farmacocinéticos
Los compuestos se formularon en un 30 % de SEB-p-CD (Zhiyuan Bio-technology) con 1 equivalente molar de HCl (pH ajustado a 3-5). Se adquirieron ratas SD macho (280-350 g) en el Centro de Animales de Laboratorio Médico de Guangdong. Se utilizaron tres ratas para cada estudio PK. Cada rata fue dosificada por inyección intravenosa en la vena de la cola a 10 mg/kg. En varios momentos después de la administración del compuesto, se recogieron aproximadamente 0,2~0,3ml de sangre cortando el extremo de la cola en tubos que contenían K2-EDTA. El plasma se separó por centrifugación y se almacenó a -80 °C. Se utilizó un sistema LC-MS/MS PE Sciex API-3000 (Applied Biosystems, Inc.) para analizar las concentraciones de compuestos en el plasma.
Los estudios de PK de los inhibidores de ChK1 se realizaron en ratas después de la administración intravenosa a 10 mg/kg. Los animales no toleraron el LY-2606368 a 10 mg/kg en ratas. La dosis de LY-2606368 se ajustó a 5 mg/kg. Los compuestos 3, 4, 5, 14 y 15 mostraron una semivida más larga y una mayor exposición que el LY2606368 (Tabla 3).
Tabla 3. Parámetros PK de los compuestos 3, 4, 5, 14 y 15
Figure imgf000033_0002
5. Modelo de xenoinjerto de cáncer humano
Se adquirieron ratones lampiños Balb/c hembra de 7-8 semanas de edad (peso corporal entre 17-18g) de Hunan SJA Laboratory Animal Co. Las células HT-29 se cultivaron en un medio de cultivo DMEM que contenía un 10 % de suero bovino fetal y las células LoVo se cultivaron en un medio de cultivo RPMI 1640 que contenía un 10 % de suero bovino fetal. Las células se recolectaron y se lavaron con medio de cultivo sin suero. Por último, las células se suspendieron a una densidad celular de 5*107 células/ml en un medio de cultivo sin suero para su implantación. Se inyectaron 5 millones de células por animal suspendidas en 0,1 ml de medio de cultivo sin suero y matrigel 1:1 en el flanco derecho de los animales tras un periodo de aclimatación de una semana. Cuando el volumen promedio del tumor alcanzó un tamaño (100-200 mm3) y una forma aceptables, los animales fueron asignados aleatoriamente a grupos de tratamiento.
6. Estudio PK en ratones portadores de tumores
El compuesto 3 se seleccionó para realizar más estudios de PK en ratones portadores de tumores. Se implantaron células de cáncer de colon HT-29 para establecer el modelo de xenoinjerto en ratones Balb/c lampiños. Se dividieron 24 ratones en 8 grupos de tiempo con n=3/grupo. El compuesto 3 se disolvió en un 30 % de SEB-p-CD (Zhiyuan Biotechnology) con 1 equivalente molar de HCl. A cada animal se le administró por vía intravenosa el Compuesto 3 a 40 mg/kg. La sangre y los tumores se recogieron en varios momentos después de que a los ratones se les aplicó la eutanasia con CO2. Las muestras de sangre se centrifugaron a 4 °C inmediatamente después de la recogida. Los sobrenadantes se transfirieron a viales Eppendorf de 1,5 ml lo antes posible y se almacenaron a -80 °C en un congelador. Las muestras de tumores se recogieron y se colocaron en hielo seco hasta que se transfirieron a un congelador a -80 °C para su bioanálisis.
El compuesto se distribuyó rápidamente en los tejidos tumorales. La semivida fue de 6,1 horas y 14,0 horas en sangre y tejidos tumorales, respectivamente. La exposición tumoral fue aproximadamente 6 veces mayor que la exposición plasmática tras la administración IV (Figura 3).
7. Estudios de eficacia en modelos tumorales
1) El compuesto 3 inhibió el crecimiento del tumor en el modelo de xenoinjerto de cáncer de colon HT-29
Se implantaron células de cáncer de colon HT-29 para establecer el modelo de xenoinjerto en ratones Balb/c lampiños. El compuesto 3 y el LY2606368 se disolvieron en un 30 % de SEB-p-CD (Zhiyuan Bio-technology) con 1 equivalente molar de HCl. El GDC-575 se suspendió en 0,5 % de metilcelulosa/0,1 % de Tween 80 en agua. El tratamiento del Compuesto 3 (40 mg/kg, IV, dos veces por semana) fue más eficaz que la referencia LY-2606368 (15 mg/kg, IV, dos veces por semana) o GDC-575 (25 mg/kg, po, 3 veces/semana) en su DPM. Los valores de %T/C fueron del 31 % para el compuesto 3 (P<0,001), del 61 % para el LY-2606368 (P<0,05), del 50 % para el GDC-0575 (P<0,001), respectivamente (Tabla 4). Los animales toleraron bien cada tratamiento en el modelo de cáncer de colon HT-29 en ratones lampiños.
Tabla 4. Inhibición del crecimiento tumoral por el compuesto 3 en el modelo de xenoinjerto HT-29
Figure imgf000033_0001
Figure imgf000034_0001
2) El compuesto 3 mejoró la actividad antitumoral de CPT11 en el modelo de xenoinjerto HT-29
En el modelo de xenoinjerto de tumor HT-29, los animales fueron tratados con un solo compuesto, un inhibidor de ChK1 o CPT-11, o una combinación con CPT11. Tanto el compuesto 3 como el LY-2606368 mostraron una mayor actividad de crecimiento antitumoral del CPT11 en el modelo tumoral. El tratamiento del Compuesto 3 (40 mg/kg, IV, dos veces por semana) solo o con CPT-11 (50 mg/kg, IV, una vez por semana) demostró ser más eficaz que la referencia LY-2606368 (15 mg/kg, IV, dos veces por semana) solo o con CPT-11 (50 mg/kg, IV, una vez por semana). Los valores de %T/C fueron del 26 % (p<0,001) para el compuesto 3 solo y del -9 % (p<0,001) para el compuesto 3 más CPT-11, y del 61 % (p<0,001) para LY-2606368 y del 0 % (p<0,001) para LY-2606368 más CPT11, respectivamente (Figura 4). Los animales toleraron bien cada tratamiento en el modelo de cáncer de colon HT-29 en ratones lampiños.
3) El compuesto 3 inhibió el crecimiento del tumor en el modelo de xenoinjerto de colon LoVo
Se implantaron células de cáncer de colon Lovo para establecer el modelo de xenoinjerto en ratones Balb/c lampiños. El compuesto 3 y el LY2606368 se disolvieron en un 30 % de SEB-p-CD (Zhiyuan Bio-technology) con 1 equivalente molar de HCl. En el modelo de xenoinjerto tumoral de LoVo, el tratamiento de LY2606368 a 15 mg/kg y del compuesto 3 a 10 mg/kg, 20 mg/kg, 40 mg/kg, por vía intravenosa, dos veces por semana, mostró una inhibición significativa del crecimiento tumoral de forma dependiente de la dosis. Sin embargo, a la dosis MTD, el tratamiento del Compuesto 3 fue más eficaz que el LY2606368 en el modelo LoVo. Los valores T/C fueron de -77 % para el Compuesto 3 a 40 mg/kg, y de -57 % para LY-2606368 a 15 mg/kg, respectivamente (Figura 5).
8. Estabilidad metabólica
Los compuestos (1 j M) se incubaron con S9 de hígado humano (de BD Gentest) a una concentración final de proteína microsomal de hígado de 0,5 mg/ml durante 0, 5, 15, 30, 45 min a 37 °C. Los compuestos restantes en la reacción se midieron por LC-MS/MS. La semivida (T1/2) = 0,693/K (K es la constante de velocidad de un gráfico de In [concentración] frente al tiempo de incubación).
Los compuestos 3, 4, 13 y 15 fueron más estables metabólicamente que el LY2606368 en microsomas de hígado humano S9. La semivida de estos compuestos estuvo en el intervalo de 165,41 a 6181 min (Tabla 5).
Tabla 5. Estabilidad metabólica de la S9 de hígado humano
Figure imgf000034_0002

Claims (10)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto de fórmula (II):
Figure imgf000035_0001
en la que:
Ri es -F, -Cl o -Br;
R2 y R3 son cada uno independientemente -H, o R 2y R3 junto con el átomo de carbono al que están unidos forman ciclopropilo;
R4 es -H o metilo; y
R5 es -CN,
o una sal, isómero geométrico, enantiómero, diastereómero, racemato, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo.
2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, que se selecciona entre:
5-(5-(2-(3-aminopropoxi)-4-fluoro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo;
5-(5-(2-(3-aminopropoxi)-4-cloro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo;
5-(5-(2-(3-aminopropoxi)-4-bromo-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo;
5-(5-(2-(3-metilaminopropoxi)-4-fluoro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin) pirazin-2-carbonitrilo;
5-(5-(2-(3-metilaminopropoxi)-4-cloro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin) pirazin-2-carbonitrilo;
5-(5-(2-(3-metilaminopropoxi)-4-bromo-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin) pirazin-2-carbonitrilo;
5-(5-(2-((aminometil)ciclopropil)metoxi)-4-fluoro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo;
5-(5-(2-((aminometil)ciclopropil)metoxi)-4-cloro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo;
5-(5-(2-((aminometil)ciclopropil)metoxi)-4-bromo-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo;
5-(5-(4-fluoro-2-metoxi-6-((1-((metilamin)metil)ciclopropil)metoxi)fenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo; 5-((5-(4-cloro-2-metoxi-6-((1-((metilamin)metil)ciclopropil)metoxi)fenil)-1H-pirazol-3-il)amino)pirazin-2-carbonitrilo; o
5-((5-(4-bromo-2-metoxi-6-((1-((metilamin)metil)ciclopropil)metoxi)fenil)-1H-pirazol-3-il)amino)pirazin-2-carbonitrilo;
o una sal, isómero geométrico, enantiómero, diastereómero, racemato, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo.
3. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 2, que se selecciona entre:
5-(5-(2-(3-aminopropoxi)-4-fluoro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carb oni trile;
5-(5-(2-(3-aminopropoxi)-4-cloro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo;
5-(5-(2-(3-aminopropoxi)-4-bromo-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo;
5-(5-(2-((aminometil)ciclopropil)metoxi)-4-fluoro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo;
5-(5-(2-((aminometil)ciclopropil)metoxi)-4-cloro-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo;
5-(5-(2-((aminometil)ciclopropil)metoxi)-4-bromo-6-metoxifenil)-1H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo;
5-(5-(4-fluoro-2-metoxi-6-((1-((metilamin)metil)ciclopropil)metoxi)fenil)-1 H-pirazol-3-ilamin)pirazin-2-carbonitrilo; o una sal, isómero geométrico, enantiómero, diastereómero, racemato, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo.
4. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o una sal, isómero geométrico, enantiómero, diastereómero, racemato, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable.
5. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o una una sal, isómero geométrico, enantiómero, diastereómero, racemato, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo o una composición farmacéutica de la reivindicación 4 para su uso en el tratamiento o la prevención del cáncer en un sujeto que lo necesite.
6. Un compuesto o una sal, isómero geométrico, enantiómero, diastereómero, racemato, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo o una composición farmacéutica para su uso de acuerdo con la reivindicación 5, en la que el compuesto o la sal farmacéuticamente aceptable, el isómero geométrico, el enantiómero, el destereómero, el racemato, el profármaco, el solvato o el hidrato del mismo o la composición farmacéutica se administra al sujeto en combinación con un segundo agente anticanceroso, una terapia quirúrgica, una radiación ionizante o una combinación de los mismos.
7. Un compuesto o una sal, isómero geométrico, enantiómero, diastereómero, racemato, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo o una composición farmacéutica para su uso de acuerdo con la reivindicación 6, en la que el segundo agente anticanceroso se selecciona entre fármacos oncológicos dirigidos, tales como trastuzumab, ramucirumab, vismodegib, sonidegib, bevacizumab, everolimus, tamoxifeno, toremifeno, fulvestrant, anastrozol, exemestano, lapatinib, letrozol, pertuzumab, ado-trastuzumab emtansina, palbociclib, cetuximab, panitumumab, ziv-aflibercept, regorafenib, mesilato de lmatinib, acetato de lanreotida, sunitinib, regorafenib, denosumab, alitretinoína, sorafenib, pazopanib, temsirolimus, everolimus, tretinoína, dasatinib, nilotinib, bosutinib, rituximab, alemtuzumab, ofatumumab, obinutuxumab, ibrutinib, idelalisib, blinatumomab, soragenib, crizotinib, erlotinib, gefitinib, dimaleato de afatinib, ceritnib, ramucirumab, nivolumab, pembrolizumab, osimertinib y necitumumab; un agente alquilante, como busulfán, clorambucil, ciclofosfamida, iphosphamida, melfalán, mostaza nitrogenada, estreptozocina, tiotepa, mostaza nitrogenada con uracilo, trietilenemelamina, temozolomida y 2-cloroetil-3-sarcosinamida-1-nitrosourea (SarCNU); un antibiótico o alcaloide vegetal, como actinomicina-D, bleomicina, criptoficinas, daunorubicina, doxorrubicina, idarubicina, irinotecán, L-asparaginasa, mitomicina-C, mitramicina, navelbina, paclitaxel, docetaxel, topotecán, vinblastina, vincristina, tenipósido (VM-26) y etopósido (VP-16) una hormona o esteroide, como el inhibidor de la 5a-reductasa, la aminoglutetimida, el anastrozol, la bicalutamida, el clorotrianiseno, el dietilstilbestrol (DES), la dromostanolona, la estramustina, el etinilestradiol, la flutamida, la fluoximesterona, la goserelina, la hidroxiprogesterona, letrozol, leuprolida, acetato de medroxiprogesterona, acetato de megestrol, metil prednisolona, metiltestosterona, mitotano, nilutamida, prednisolona, arzoxifeno (SERM-3), tamoxifeno, testolactona, testosterona, triamicnolona y zoladex; un sintético, como el ácido todo-trans retinoico, carmustina (BCNU), carboplatino (CBDCA), lomustina (CCNU), cis-diaminicloroplatino (cisplatino), dacarbazina, gliadel, hexametilmelamina, hidroxiurea, levamisol, mitoxantrona, o,p'-diclorodifenildicloroetano (o,p'-DDD) (también conocido como lisodren o mitotano), oxaliplatino, porfimer sódico, procarbazina y mesilato de imatinib (Gleevec®); un antimetabolito, como la clorodeoxiadenosina, el arabinósido de citosina, la 2'-desoxicoformicina, el fosfato de fludarabina, el 5-fluorouracilo (5-FU), la 5-fluoro-2'-desoxiuridina (5-FUdR), la gemcitabina, la camptotecina, la 6-mercaptopurina, el metotrexato, la 4-metiltioanfetamina (4-MTA) y la tioguanina y un biológico, como el interferón alfa, el BCG (Bacillus Calmette-Guerin), el factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF), el factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos (GM-CSF), la interleucina-2 y la herceptina.
8. Un compuesto o una sal, isómero geométrico, enantiómero, diastereómero, racemato, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo o una composición farmacéutica para su uso de acuerdo con la reivindicación 6 o 7, en la que el segundo agente anticanceroso es irinotecán.
9. Un compuesto o una sal, isómero geométrico, enantiómero, diastereómero, racemato, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo o una composición farmacéutica para su uso según una de las reivindicaciones 5 a 8, en la que el cáncer es un cáncer de mama, un carcinoma de células escamosas, un cáncer de pulmón, un cáncer de esófago, un cáncer de hígado, un cáncer gástrico, un cáncer colorrectal, un cáncer de vejiga, un carcinoma de ovario, un cáncer de próstata, un giloblastoma, un cáncer de páncreas o una leucemia.
10. Un procedimiento para preparar un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que comprende: a. hacer reaccionar un compuesto de fórmula (1')
Figure imgf000036_0001
con una hidracina de fórmula H2N-NH2, en la que Ri y R5 son como se definen en la reivindicación 1; R6 es un grupo protector hidroxi; R7 es alquilo; en presencia de un disolvente para obtener un compuesto de fórmula (2')
Figure imgf000036_0002
b. desproteger el compuesto de fórmula (2), seguido de hacer reaccionar el compuesto desprotegido con un compuesto de fórmula (3)
en la que R2, R3 y R4 son los definidos en la reivindicación 1 ; y R9 es un grupo amino protector, en presencia de un agente de acoplamiento y un disolvente para obtener un compuesto de fórmula (4')
Figure imgf000037_0001
en la que R1, R2, R3, R4, R5 y R9 son los definidos anteriormente; y
c. desproteger el compuesto de fórmula (4') para obtener un compuesto de fórmula (II).
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