WO2016153394A1 - Применение новых химических соединений (варианты) в качестве ингибиторов nuak1 киназы для лечения онкологических заболеваний - Google Patents

Применение новых химических соединений (варианты) в качестве ингибиторов nuak1 киназы для лечения онкологических заболеваний Download PDF

Info

Publication number
WO2016153394A1
WO2016153394A1 PCT/RU2016/000157 RU2016000157W WO2016153394A1 WO 2016153394 A1 WO2016153394 A1 WO 2016153394A1 RU 2016000157 W RU2016000157 W RU 2016000157W WO 2016153394 A1 WO2016153394 A1 WO 2016153394A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
tetrahydropyrazino
dichlorobenzyl
phenyl
carboxamide
pyridazine
Prior art date
Application number
PCT/RU2016/000157
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Гермес Григорьевич ЧИЛОВ
Олег Валентинович СТРОГАНОВ
Виктор Сергеевич СТРОЙЛОВ
Федор Николаевич НОВИКОВ
Илья Юрьевич ТИТОВ
Original Assignee
Общество С Ограниченной Ответственностью "Отечественные Фармацевтические Технологии"
Общество С Ограниченной Ответственностью "Фарминтерпрайсез"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Общество С Ограниченной Ответственностью "Отечественные Фармацевтические Технологии", Общество С Ограниченной Ответственностью "Фарминтерпрайсез" filed Critical Общество С Ограниченной Ответственностью "Отечественные Фармацевтические Технологии"
Publication of WO2016153394A1 publication Critical patent/WO2016153394A1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/50—Pyridazines; Hydrogenated pyridazines
    • A61K31/5025—Pyridazines; Hydrogenated pyridazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems

Definitions

  • NUAK1 kinase inhibitors for the treatment of cancer.
  • This invention relates to the chemistry of organic compounds, pharmacology and medicine and relates to the treatment of oncological, chronic inflammatory and other diseases through the use of compounds having increased efficiency in the inhibition of NUAK1 kinase, in particular, involved in the process of metastasis.
  • Metastasis or the process of migration of tumor cells from the primary focus, followed by the formation of secondary tumor foci (metastases) in various tissues, is one of the most important components of the problem of carcinogenesis. Considering that the majority of patients with malignant tumors do not die from the initial tumor, but from metastases that disorganize the functioning of the tissues affected by them, the clinical significance of the metastasis problem is obvious.
  • Protein kinases are an important family of proteins involved in the regulation of key cellular processes, the violation of the activity of which can lead to cancer, chronic inflammatory diseases, diseases of the central nervous system, etc.
  • protein kinases are key regulators of cellular signal transduction, they become targets for modulating cell function with low molecular weight kinase inhibitors.
  • NUAK1 kinase (ARK5) is a serine-threonine protein kinase involved in cell processes such as cell adhesion, regulation of ploidy, senescence and proliferation. Studies have shown a relationship between NUAK1 kinase activity and tumor progression.
  • NUAK1 kinase The effect of NUAK1 kinase on one of the main processes of the development of a malignant tumor — metastasis of tumor cells — is due to NUAK1 -dependent expression of matrix metalloproteases (MMPs).
  • MMPs matrix metalloproteases
  • Akt kinase Under the influence of growth factors (for example, IGF-1) secreted by tumor cells, or located in the systemic circulation, Akt kinase is activated, which, in turn, phosphorylates and activates NUAK1 kinase.
  • Akt kinase Under the influence of growth factors (for example, IGF-1) secreted by tumor cells, or located in the systemic circulation, Akt kinase is activated, which, in turn, phosphorylates and activates NUAK1 kinase.
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) factor mTORCI induces the expression of matrix metals on rotases MMP-14, MMP-2 and MMP-9, which are involved in matrix degradation and tumor invasion (Suzuki, A. et. al., Mol Cell Biol, 2004, 24, 3526-35; Lu, S. et. Al., Eur J Cancer, 2013, 49, 752-63).
  • the role of NUAK1 kinase in tumor invasion has been confirmed in preclinical in vitro and in vivo models of non-small cell lung cancer (Chen, P. et. Al., Exp Lung Res, 2013, 39, 9-17), colorectal cancer (Suzuki, A. et.
  • NUAK1 activity was found to prevent the death of colorectal cancer cells expressing both the “death receptor” FAS and its ligand FASL. In normal cells, the binding of FAS to FASL leads to apoptosis, but in colorectal cancer cells, NUAK1 phosphorylates and inactivates the key enzyme involved in signaling from FASL - caspase 6. It was previously shown (Suzuki, A. et. Al., Oncogene, 2004 , 23, 7067-75) that NUAK1 protects colorectal cancer cells expressing FAS against apoptosis caused by FASL.
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) multiple myeloma and angioimmunoblastic T-cell lymphoma (Suzuki, A. et. al., Oncogene, 2005, 24, 6936-44), melanoma (Bell, R. et. al., J. Invest. Dermatol., 2014, 134 (2), 441-51).
  • NUAK1 kinase inhibitors are currently known, including pyrimidine-diazopinones (WO 2014/145909), some of the small molecules described in recent reviews (Banerjee, S. et. Al., Biochem J, 2014, 457, 215-25,. V. Ramana Reddy et. Al., J. Med. Chem. 2014, 57, 578-599).
  • pyrimidine-diazopinones WO 2014/145909
  • NUAK1 kinase inhibitors are currently known, including pyrimidine-diazopinones (WO 2014/145909), some of the small molecules described in recent reviews (Banerjee, S. et. Al., Biochem J, 2014, 457, 215-25,. V. Ramana Reddy et. Al., J. Med. Chem. 2014, 57, 578-599).
  • there is not a single drug that acts as an inhibitor of NUAK1 kinase which
  • This invention relates to the use of new chemical compounds that are highly effective in inhibiting NUAK1 kinase in the treatment of cancer, chronic inflammatory and other diseases associated with aberrant activity of NUAK1 kinase, in particular, to suppress tumor growth and prevent metastasis.
  • the objective (technical result) of the present invention is the development of new NUAK1 kinase inhibitors that are highly effective and promising for use in the treatment of diseases associated with the aberrant activity of NUAK1 kinase, especially oncological diseases, in particular by suppressing tumor growth and / or preventing metastasis.
  • L A represents CH 2 or CH (CH 3 );
  • L B represents C (0) NH or NH
  • cycle A is phenyl optionally substituted with 1-3 R A groups
  • R A is independently selected and is halogen, partially or fully halogenated C 1-5 alkyl, OC 3 -alkyl;
  • cycle B is a phenyl or 6-membered heteroaryl ring containing 1-2 N atoms; cycle B optionally contains 1-3 substituents R B ;
  • R B is independently selected and is L c —R c , L c —H, halogen, partially or fully halogenated C 1-5 alkyl;
  • L c represents a covalent chemical bond, O, OCH 2 or C (O);
  • R c is independently selected and is C1.z alkyl, a 4-6 membered heteroalicyclic containing 1-2 N atoms and 0-1 O atom; R c optionally contains 1-3 substituents R D ;
  • R D is independently selected and is halogen, CH 3 , NHR F , N (R F ) 2 or 5-6 membered heteroalicyclic containing 0-1 atom N and 0-1 atom O; R D optionally contains 1-2 substituents, which are independently selected from C1.z-alkyl;
  • R F is independently selected and is C 1-3 alkyl.
  • a particular class of compounds of interest includes compounds of formula I in which:
  • L A represents CH 2 ;
  • L B represents C (0) NH
  • cycle A is phenyl optionally substituted with 1-3 R A groups
  • R A is independently selected and is halogen or CF 3 ;
  • cycle B is phenyl; cycle B optionally contains 1-3 substituents
  • R B is independently selected and is L c —R c , L c —H;
  • L c represents a covalent chemical bond, O, OCH 2 or C (O);
  • R c is independently selected and is a 4-6 membered heteroalicyclic containing 1-2 N atoms and 0-1 O atom; R c optionally contains 1-3 substituents R;
  • R D is independently selected and represents CH 3 , NHRF, N (RF) 2 or 5-6 membered heteroalicyclic containing 0-1 atom N and 0-1 atom O; R D optionally contains 1-2 substituents that are independently selected from C ⁇ e-alkyls;
  • R F is independently selected and is C 1-3 alkyl.
  • the compounds of interest may be selected from the following compounds of general formula I:
  • the present invention also relates to the use of compounds of formula I for the preparation of a pharmaceutical composition for the treatment and / or prevention of a disease associated with the aberrant activity of NUAK1 kinase.
  • Such pharmaceutical compositions can be used to inhibit tumor growth and / or treat and / or prevent metastasis.
  • a disease may in particular be non-small cell lung cancer, colorectal cancer, triple negative breast cancer, osteosarcoma, pancreatic cancer, hepatocellular carcinoma, pancreatic adenocarcinoma, multiple myeloma, angioimmunoblastic T-cell lymphoma, ovarian cancer, prostate cancer, melanoma.
  • compositions comprising at least one compound of the invention or its enantiomer, a pharmaceutically acceptable salt, hydrate or other solvate thereof, and at least one pharmaceutically acceptable carrier, solvent and / or excipient.
  • Such compositions are intended for the treatment and / or prevention of a disease associated with the aberrant activity of NUAK1 kinase, and can be administered to an object in need of, in particular, inhibition of the growth, development or metastases of a malignant tumor, including solid tumors (e.g., prostate cancer, colon cancer , pancreas, ovaries, breast, esophagus, non-small cell lung cancer (NSCLC)), tumorous diseases of the brain, including glioblastoma and neuroblastoma; malignant neoplasms of the soft tissues, including osteosarcoma and others; various forms of melanoma, lymphoma, such as, for example, T-cell lymphoma, and other forms of malignant neoplasms
  • the present invention also relates to a method for the treatment of malignant tumors, comprising the introduction of (as monotherapy or in combination with
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) one or more other antitumor agents, one or more agents to alleviate side effects, irradiation, etc.) of at least one compound of formula I.
  • antitumor agents that may be selected are, in particular, antitumor preparations, which are 5-fluorouracil, afatinib, bevacizumab, bortezomib, capecitabine, carboplatin, cetuximab, cisplatin, cyclophosphamide, dabrafenib, dexerbutamin, docetrubicin, docetrubicin, docetrubicin, docetrubicin, docetrubicin, docetrubicin, , etoposide, gemcitabine, ifosfamide, imatinib, irinotecan, lapatinib, lenalidomide, leucovorin, melphalan, methotrexate, mitomycin, oxaliplatin, paclitaxel, panitumumab, pemetrexed, prednisone, regorafenib, sorafenib temozolomide, thal
  • the present invention also relates to a method for treating and / or preventing the metastasis of malignant tumors by administering at least one compound of formula I.
  • the present invention also relates to a method for treating or preventing diseases caused by the aberrant activity of NUAK1 kinase by administering at least one compound of formula I.
  • administering means the delivery to a recipient of a compound of the present invention, a prodrug, or other pharmacologically acceptable derivative of such a compound, using any suitable preparation or route of administration to the body, as described herein.
  • the compound is administered to the patient once or several times a week, for example, daily, every other day, 5 days a week, and the like. Oral and intravenous administration is of particular interest.
  • the invention also includes the preparation of compounds of general formula I.
  • the invention also includes the use of a compound of the invention or a pharmacologically acceptable derivative thereof in the manufacture of a medicament for the treatment of an acute or chronic form of a malignant tumor (including lymphoma and solid tumors, primary or metastatic, including tumor types already noted herein, and including tumor types that are resistant or resistant to one or more types of treatment).
  • a malignant tumor including lymphoma and solid tumors, primary or metastatic, including tumor types already noted herein, and including tumor types that are resistant or resistant to one or more types of treatment.
  • the compounds of the present invention can be used in the manufacture of antitumor drugs.
  • the compounds of the present invention can also be used in the manufacture of medicaments to attenuate or prevent various disorders by inhibiting NUAK1 kinase.
  • compositions containing compounds of the present invention including compounds of any of the described classes or subclasses, including any of the formulas described above, inter alia, preferably in a therapeutically effective amount, in combination with at least one therapeutically acceptable carrier , solvent or excipient.
  • the present invention also provides the use of the compounds of the invention in the treatment of chronic inflammatory and other diseases associated with the aberrant activity of NUAK1 kinase.
  • the compounds of the present invention can also be used as standards and reagents for characterizing NUAK1 kinase, as well as for studying the role of NUAK1 kinase in biological and pathological phenomena; to study the intracellular signal transduction via NUAK1 kinase, for a comparative evaluation of new kinase inhibitors; as well as to study various types of malignant neoplasms in models of cell lines and animals.
  • aliphatic as used herein means both saturated and unsaturated (but not aromatic) straight (i.e. unbranched), branched, cyclic or polycyclic non-aromatic hydrocarbon chain — a residue that may optionally be substituted with one or more functional groups.
  • alkyl, other aliphatic, alkoxy, and acyl groups typically contain 1-6 (i.e., C -6 ), and in most cases 1-3 (C, 3 ) of adjacent aliphatic carbon atoms.
  • such aliphatic groups include methyl, ethyl, isopropyl, cyclopropyl, methylene, methylcyclopropyl, cyclobutylmethyl, cyclopentyl derivatives and the like, which may contain one or more substituents.
  • aliphatic therefore, means the inclusion of alkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl and cycloalkenyl fragments.
  • alkyl refers to groups typically having from one to five, preferably from one to three carbon atoms.
  • alkyl may mean methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, etc.
  • substituted alkyl groups include, but are not limited to, the following groups: fluoromethyl, difluoromethyl, trifluoromethyl, etc.
  • C- 3 alkyl means alkyl containing from 1 to 3 carbon atoms, and includes C ⁇ C 2 , C 3 -alkyl groups.
  • alkyl as used herein means both straight or branched, cyclic or polycyclic alkyl groups. Similar conventions apply to other general terms, such as alkenyl, alkynyl, etc. In addition, “alkyl” may be either substituted or unsubstituted.
  • haloalkyl includes branched and linear saturated hydrocarbon chains in which one or more hydrogen atoms are replaced by halogen.
  • haloalkyl groups include, but are not limited to, the following groups: trifluoromethyl, trichloromethyl, —C (CF 3 ) 2 CH 3, and the like.
  • heteroaryl means a stable heterocyclic and polyheterocyclic aromatic moiety having 5-6 atoms in a ring.
  • a heteroaryl group may be substituted or unsubstituted. Possible substituents include, but are not limited to, any of the previously mentioned substituents. Examples of typical heteroaryl rings are five- and six-membered monocyclic groups such as thienyl, pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridyl, pyrimidinyl, pyridazinyl, and the like.
  • heteroaryl also includes rings with possible substituents.
  • the term “heteroaryl” may be used equivalently with the terms “heteroaryl ring” or “heteroaromatic”.
  • a stable or chemically feasible compound is a compound whose stability is sufficient for its synthesis and analytical detection.
  • Preferred compounds of this invention are sufficiently stable and do not decompose at temperatures up to 40 ° C in the absence of chemically active conditions, for at least one week.
  • Certain compounds of this invention may exist in tautomeric forms, and this invention includes all such tautomeric forms of such compounds, unless otherwise indicated.
  • the structures depicted herein also include all stereoisomers, i.e., R- and S-isomers for each asymmetric center.
  • individual stereochemical isomers, as well as enantiomers and diastereomeric mixtures of the present compounds, are also the subject of this invention.
  • this invention encompasses each diastereomer or enantiomer substantially free of other isomers (> 90%, and preferably> 95% molar purity), as well as a mixture of such isomers.
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26)
  • a particular optical isomer can be obtained by resolving a racemic mixture in accordance with a standard procedure, for example, by preparing diastereoisomeric salts by treatment with an optically active acid or base, followed by crystallization of the diastereomer mixture, followed by isolation of the optically active bases from these salts.
  • suitable acids are tartaric, diacetyl tartaric, dibenzoyl tartaric, ditoluolvic and camphorsulfonic acid.
  • Another technique for separating optical isomers is to use a chiral chromatographic column.
  • another separation method involves the synthesis of covalent diastereomeric molecules by reacting the compounds of the invention with an optically pure acid in an activated form or an optically pure isocyanate.
  • the resulting diastereomers can be separated by conventional methods, for example, chromatography, distillation, crystallization or sublimation, and then hydrolyzed to obtain an enantiomerically pure compound.
  • optically active compounds of this invention can be prepared using optically active starting materials.
  • Such isomers may be in the form of a free acid, free base, ester or salt.
  • the compounds of the invention may exist in a radioisotope-labeled form, i.e. these compounds may contain one or more atoms, whose atomic mass or mass number differs from the atomic mass or mass number of the most common natural isotopes.
  • the radioisotopes of hydrogen, carbon, phosphorus, chlorine include 3 H, 4 C, 32 P, 35 S, and 36 CI, respectively.
  • Compounds of the present invention that contain such radioisotopes and / or other radioisotopes of other atoms are within the scope of the present invention.
  • Tritium, i.e. 3 N and carbon, i.e. 14 C radioisotopes are particularly preferred due to the ease of preparation and detection.
  • the compounds of the present invention labeled with radioactive isotopes can be prepared using methods well known to those skilled in the art. Labeled compounds can be prepared using the procedures described herein by simply replacing unlabelled reagents with the corresponding labeled reagents.
  • aberrant activity of a kinase means a kinase activity that is significantly different from the base level of activity of this kinase in cells in the absence of pathology. Aberrant activity can be caused by a change in the kinase expression level, disruption of the processes leading to kinase activation, deregulation of degradation pathways, and other factors.
  • Figure 1 Inhibition of tumor cell invasion through matrigel caused by insulin growth factor IGF-1 in ovarian cancer (SKOV3) (a) and prostate cancer PC-3 (b) cell lines by the compound of the invention (compound (1), 5- (2 , 5-dichlorobenzyl) - M- (4- (4-methylpiperazin-1-carbonyl) phenyl) -5,6,7,8-tetrahydropyrazino [2,3-c] pyridazine-4-carboxamide).
  • compound (1) 5- (2 , 5-dichlorobenzyl) - M- (4- (4-methylpiperazin-1-carbonyl) phenyl) -5,6,7,8-tetrahydropyrazino [2,3-c] pyridazine-4-carboxamide
  • the compounds of the present invention can be prepared using the synthetic methods described below. The listed methods are not exhaustive and allow the introduction of reasonable modifications. These reactions should be carried out using suitable solvents and materials. When implementing these general procedures for the synthesis of specific substances, it is necessary to take into account the functional groups present in the substances and their influence on the course of the reaction. To obtain some substances, it is necessary to change the order of the stages or give preference to one of several alternative synthesis schemes.
  • a protective group is a functional group introduced into a molecule of a chemical compound to ensure the chemoselectivity of the necessary chemical reaction.
  • Protective groups play an important role in organic synthesis. Some reagents used in organic synthesis can interact immediately with many functional groups of the transformed molecule. In the event that it is necessary to carry out a reaction with only one type of functional groups, without affecting the others, the latter are modified (“protected”) by means of protective groups.
  • An example of a protecting group is a tert-butoxycarbonyl group (Boe).
  • Boc groups leads to the desired compound.
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) one ) .
  • 17.5 g (100 mmol) of 2,5-dichlorobenzaldehyde are dissolved in 150 ml of anhydrous methanol, 0.1 ml of glacial acetic acid and 16.0 g (100 mmol) of tert-butyl-2-aminoethylcarbamate are added.
  • the reaction mixture is stirred for 4 hours at room temperature, then cooled to 0 ° C and 13.3 g (350 mmol) of sodium borohydride are added in portions while maintaining the desired temperature (0 ° C) and left overnight at room temperature.
  • reaction mixture was stirred at 90 ° C for 7 hours. After cooling, the analysis of LC / MS shows the full course of the reaction.
  • the reaction mixture was concentrated under reduced pressure, and the residue was partitioned between ethyl acetate and sodium bicarbonate solution. The aqueous layer was extracted twice with ethyl acetate, the combined organic layer was washed with saturated NaCI solution and dried over anhydrous Na 2 S0 4 . After distilling off the solvent, 3.8 g of product (1f) are obtained, which is hydrolyzed without further purification.
  • the reaction mixture was partitioned between ethyl acetate and water, acidified with 0.1 N HCI; the organic layer was washed with sodium bicarbonate and saturated NaCI solution. The solution was dried over anhydrous Na 2 S0 4 and the solvent was removed. The residue was dissolved in a mixture of dichloromethane: THF (1: 1, 200 ml) and insisted at room temperature until complete deprotection (LC / MS). The solvents were removed in vacuo and the reaction mixture was partitioned between ethyl acetate and water; the organic layer was washed with sodium bicarbonate and saturated NaCI solution. The solution was dried over anhydrous sodium sulfate and the solvent was removed.
  • THF 1, 200 ml
  • reaction mixture was stirred at 90 ° C for 7 hours. After cooling, the analysis of LC / MS shows the full course of the reaction.
  • the reaction mixture was concentrated under reduced pressure, and the residue was partitioned between ethyl acetate and sodium bicarbonate solution. The aqueous layer was extracted twice with ethyl acetate, the combined organic layer was washed with saturated NaCI solution and dried over anhydrous Na 2 S0 4 . After distillation of the solvent, Zbg of product (2f) is obtained, which is subjected to hydrolysis without further purification.
  • the subject of the invention also includes the administration to a subject in need of appropriate treatment of a therapeutically effective amount of a compound of general formula I.
  • “Therapeutically effective amount” refers to the amount of a compound that is necessary for detectable killing of cancer cells or inhibition of their growth or spread rate throughout the body, the size or number of tumors, or other characteristics of a tumor disease. The exact amount required can vary from subject to subject, depending on the type, age and general condition of the patient, the severity of the disease, the characteristics of the antitumor agent, the method of administration of the drug, combined treatment with other drugs, etc.
  • the substance, or pharmaceutical composition containing the substance can be introduced into the patient's body in any quantity and by any route of administration effective to kill tumor cells or inhibit their growth, as well as to prevent metastasis.
  • Single doses of the antitumor compounds of the invention are preferably formulated in a form convenient for administration to a patient.
  • Single dose in terms of the present invention means a portion of an antitumor agent suitable for treating a patient.
  • the total daily dose of the compounds and compositions described in the present invention is prescribed by the attending physician, relying on a thorough medical opinion.
  • the specific therapeutically effective dosage level for each individual patient or organism depends on a number of factors, including the type of disorder, the severity of the disease, the activity of the particular drug used, the characteristics of the pharmaceutical composition, age, body weight, general health, gender and diet of the patient, method and schedule of administration the metabolic rate and / or excretion of the compound, the duration of treatment, medications,
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) used in combination or in conjunction with the administration of a compound of the invention, and the like, well known in medicine.
  • compositions constituting the essence of the invention can be administered orally, rectally, parenterally, intracisternally, intravaginally, intraperitoneally, topically (using skin patches, powders, ointments or drops), sublingually, buccally, in the form of a spray for mouth or nose, etc.
  • An effective systemic dosage of the compound usually lies in the range from 0.01 to 500 mg of the compound per kg of patient body weight, preferably from 0.1 to 125 mg / kg.
  • the compound is administered to a patient in need of such treatment in a daily dosage of from about 50 to 2000 mg per patient.
  • the introduction can be carried out both once and several times a day, week (or any other time interval), or from time to time.
  • the compound may be administered to the patient once or several times a day on a weekly basis (for example, every Monday) for an indefinite time or for several weeks (for example, 4-10 weeks).
  • the compound can be introduced into the patient’s body every day for a certain period of days (for example, 2-10 days), and then a period without taking the substance (for example, 1-30 days) follows.
  • a cycle can be repeated indefinitely or for a predetermined number of cycles, for example 4-10 cycles.
  • the compound of the present invention can be administered to the patient daily for 5 days, followed by a break of 9 days, and so on, repeating the cycle an undetermined number of times, or for 4-10 cycles.
  • the amount of compound that will be effective in treating or preventing a particular disorder or condition depends, in particular, on well-known factors that influence the effective dosage of drugs.
  • in vitro or in vivo measurements can optionally be used to determine the optimal dose range.
  • a rough way to determine the effective dose is to extrapolate the dose-response curves, which will depend on the in vitro or animal testing model.
  • the exact dosage level determined by the attending physician depends on well-known factors, including the method of administration of the drug, as well as the age, body weight, gender and general health of the patient; the nature, severity and clinical condition of the disease; use (or non-use) of concomitant therapy; as well as the nature and extent of genetic changes in the patient’s cells.
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) the invention may vary depending on the particular compound employed, the route of administration of the drug to the body, the conditions and severity of such administration; the state of the disease, as well as a different number of physical factors associated with the patient undergoing treatment. In most cases, a satisfactory result can be achieved by administering to the patient a compound in a daily dosage of from about 0.01 mg / kg to 500 mg / kg, usually between 0.1 and 125 mg / kg. The estimated daily dosage is expected to vary depending on the method of administration to the patient. Thus, the dosage level for parenteral administration often ranges from 10 to 20% of the oral dosage level.
  • a dose of each of the components of the combination therapy is administered during the required treatment period.
  • the compounds that make up the combination therapy can be administered into the patient’s body both at a time, in the form of a dosage containing all the components, and in the form of individual dosages of the components; in addition, the combination compounds may be administered to the patient at different times during the treatment period, or one of them may be administered as a preliminary therapy for the other.
  • the compounds of this invention may exist in free form during processing, or, if desired, in the form of a pharmaceutically acceptable salt or other derivative.
  • pharmaceutically acceptable salt refers to those salts which, within the framework of a medical opinion, are suitable for use in contact with human and animal tissues without undue toxicity, irritation, allergic reaction, etc., and correspond to a reasonable balance of benefits and risk.
  • Pharmaceutically acceptable salts of amines, carboxylic acids, phosphonates and other types of compounds are well known in medicine. A detailed description of the properties of such salts is given by Berge S. M., et al., In "Pharmaceutical Salts” J. Pharmaceutical Science, 66: 1-19 (1977), incorporated herein by reference.
  • Salts can be prepared in situ during the isolation or purification of the compounds of the invention, and can also be prepared separately by reacting the free acid or free base of the compound of the invention with a suitable base or acid, respectively.
  • An example of pharmaceutically acceptable, non-toxic acid salts is the amino group formed by inorganic acids such as hydrochloric, hydrobromic, phosphoric, sulfuric and perchloric acids, or organic acids such as acetic, oxalic, maleic, tartaric, succinic or malonic acids, or the resulting other methods used in this field, for example, using ion exchange.
  • suitable base or acid respectively.
  • An example of pharmaceutically acceptable, non-toxic acid salts is the amino group formed by inorganic acids such as hydrochloric, hydrobromic, phosphoric, sulfuric and perchloric acids, or organic acids such as acetic, oxalic, maleic, tartaric, succinic or malonic acids, or the resulting other methods used in this field, for example, using i
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) salts include adipate, alginate, ascorbate, aspartate, benzenesulfonate, benzoate, bisulfate, borate, butyrate, camphorate, camphorsulfonate, citrate, cyclopentane propionate, digluconate, dodecyl sulfate, ethanesulfonate, formate, fumarate, glucose phosphate, glucose gluconate heptanate, hexanate, hydroiodide, 2-hydroxy ethanesulfonate, lactobionate, lactate, laurate, lauryl sulfate, malate, maleate, malonate, methanesulfonate, 2-naphthalene sulfonate, nicotinate, nitrate, oleate, oxalate, palmitate, pamoate, perspecate -phenylpropionate,
  • Typical alkali and alkaline earth metal salts contain sodium, lithium, potassium, calcium, magnesium and others.
  • pharmaceutically acceptable salts may contain, if desired, non-toxic cations of ammonium, quaternary ammonium and amine obtained using counterions such as halides, hydroxides, carboxylates, sulfates, phosphates, nitrates, lower alkyl sulfonates and aryl sulfonates.
  • ester means an in vivo hydrolyzable ester that readily decomposes in the human body to the parent compounds or their salts.
  • a suitable ester group includes, for example, derivatives of pharmaceutically acceptable aliphatic carboxylic acids, in particular alkanoic, alkenic, cycloalkanoic and alkanedienic acids, in which each alkyl or alkenyl component usually has no more than 6 carbon atoms.
  • specific esters include derivatives of formates, acetates, propionates, butyrates, acrylates and ethyl succinates.
  • esters can also be formed by a hydroxyl group or a carboxylic acid group of a compound of the invention.
  • prodrug form in the context of this invention, means such prodrugs from among the compounds that make up the essence of this invention, which are suitable for use by humans and animals without undue toxicity, irritation, allergic reactions, etc., correspond to a reasonable balance of benefits and risk.
  • prodrugs means compounds that are transformed in vivo to form the parent compound of the above formula, for example, by hydrolysis in the blood.
  • solvate refers to an association or complex of one or more solvent molecules and a compound of the invention.
  • solvate forming solvents include, but are not limited to, water, isopropanol, ethanol, methanol, DMSO, ethyl acetate, acetic acid, and ethanolamine.
  • hydrate refers to a complex wherein the solvent molecules are water.
  • compositions that contain at least one of the compounds described herein (or a prodrug, a pharmaceutically acceptable salt or other pharmaceutically acceptable derivative) and one or more pharmaceutically acceptable carriers, solvents and / or excipients.
  • These compositions may also contain one or more additional therapeutic agents.
  • a compound of the invention may be administered to a patient in need of appropriate therapy in combination with one or more other therapeutic regimens (e.g., together with other kinase inhibitors, interferon, bone marrow transplantation, farnesyl transferase inhibitors, bisphosphonates, thalidomide, antitumor vaccines hormone therapy, antibodies, radiation, etc.).
  • additional therapeutic agents for co-administration or incorporation into a pharmaceutical composition with the compounds of this invention may be one or more other antitumor agents.
  • compositions of this invention comprise the compounds of this invention together with pharmaceutically acceptable carriers, which may include any solvents, diluents, dispersions or suspensions, surfactants, isotonic agents, thickeners and emulsifiers, preservatives, astringents, lubricants materials, etc., suitable for a particular dosage form.
  • pharmaceutically acceptable carriers may include any solvents, diluents, dispersions or suspensions, surfactants, isotonic agents, thickeners and emulsifiers, preservatives, astringents, lubricants materials, etc.
  • compositions are within the scope of this invention.
  • Materials that may serve as pharmaceutically acceptable carriers include, but are not limited to, mono- and oligosaccharides, as well as their derivatives; malt, gelatin; talcum powder; excipients such as: cocoa butter and suppository wax; oils such as peanut, cottonseed, safrole, sesame, olive, corn and soybean oil; glycols such as propylene glycol; esters such as ethyl oleate and ethyl laurate; agar; buffering agents such as magnesium hydroxide and aluminum hydroxide; alginic acid; pyrogen-free water; isotonic solution, Ringer's solution; ethyl alcohol and phosphate buffers.
  • Other non-toxic compatible lubricants such as
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) sodium lauryl sulfate and magnesium stearate, as well as dyes, release fluids, film formers, sweeteners, flavors and fragrances, preservatives and antioxidants.
  • the subject of this invention is also dosage forms — a class of pharmaceutical compositions whose composition is optimized for a particular route of administration into the body at a therapeutically effective dose.
  • the medicinal compositions of this invention can be administered orally, topically, rectally, intraocularly, pulmonally, for example, as an inhalation spray, or intravascularly, intranasally, intraperitoneally, subcutaneously, intramuscularly, intrasternally, and also by infusion, in the recommended dosages.
  • the dosage form of the present invention may contain a compound of the formula described here or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and an additional active agent, for example, selected from the following: kinase inhibitor, antidepressant, antitumor drug, antiviral drug, anti-inflammatory drug, antifungal drug or compound against vascular hyperproliferation, and any pharmaceutically acceptable carrier or solvent.
  • pharmaceutically acceptable carrier means a carrier that can be introduced into the patient’s body together with the compound constituting the essence of the present invention, and which does not destroy the pharmacological activity of this compound, and is non-toxic when administered in doses sufficient to deliver a therapeutic amount of the compound.
  • Dosage forms of the present invention may contain formulations prepared using liposome or microencapsulation methods, methods for preparing nanoforms of the preparation, and other examples known in the pharmaceutical art.
  • the compounds of this invention can be administered as an individual active pharmaceutical agent, they can also be used in combination with one or more compounds of the invention, or one or more other agents, in particular, the other agent may be 5-fluorouracil, afatinib , bevacizumab, bortezomib, capecitabine, carboplatin, cetuximab, cisplatin, cyclophosphamide, dabrafenib, dexamethasone, docetaxel, doxorubicin, enzalutamide, epirubicin, erlotinib, etoposide, gemcitabine , ifosfamide, imatinib, irinotecan, lapatinib, lenalidomide, leucovorin, melphalan, methotrexate, mitomycin, oxaliplatin, paclitaxel, panitumumab, pemetrexed, prednisone, regorafen
  • the therapeutic agents can be different dosage forms that are administered simultaneously or sequentially at different times, or the therapeutic agents can be combined into a single dosage form.
  • combination therapy in relation to the compounds of this invention in combination with other pharmaceutical agents, means the simultaneous or sequential administration of all agents, which in one way or another will provide a beneficial effect of the combination of drugs.
  • Co-administration includes, in particular, co-delivery, for example, in one tablet, capsule, injection, or in another form, having a fixed ratio of active substances, as well as simultaneous delivery in several separate dosage forms for each compound, respectively.
  • the introduction of the compounds of this invention can be carried out in combination with additional methods of treatment known to specialists in the field of prevention and treatment of tumor diseases, including radiation therapy, the use of cytostatic and cytotoxic drugs, other antitumor agents and drugs to suppress the symptoms or side effects of one of medicines.
  • the dosage form is a fixed dose, such a combination uses the compounds of this invention in an acceptable dosage range.
  • the substances of this invention can also be introduced into the patient's body sequentially with other antitumor or cytotoxic agents, in the case when the combination of these drugs is not possible.
  • the invention is not limited to the sequence of administration; the compounds of this invention can be administered to the patient together, before or after the administration of another antitumor or cytotoxic drug.
  • the ability to inhibit NUAK1 kinase has been studied.
  • the activity and inhibition of kinase was determined in accordance with known protocols.
  • a measure of enzymatic activity was the rate of transfer of labeled 33 P0 from ATP to the Chktide substrate (KKKVSRSGLYRSPSMPENLNRPR) attached to the bioactive surface of the microtiter substrate.
  • the substrate was washed with 0.5% phosphoric acid, liquid scintillant was added, and the amount of phosphate transferred was determined on the basis of counting the number of scintillations on a liquid scintillation detector.
  • IC 50 corresponded to concentration
  • the NUAK1 inhibitor is 5- (2,5-dichlorobenzyl) -1M- (4- (4-methylpiperazin-1-carbonyl) phenyl) -5, 6,7,8-tetrahydropyrazino [2,3- c] pyridazine-4-carboxamide (compound 1), as well as compounds 4, 10 and 21 significantly reduce the ability of breast cancer cells (MDA-MB-231), ovarian cancer (SKOV3), prostate cancer (RSH), lung cancer (H1299 ) and pancreatic cancer (PANC1) break down the matrigel under the influence of the insulin growth factor at a concentration of less than 1 ⁇ M (see Figure 1).
  • the compounds of the invention can prevent the destruction of the intercellular matrix by matrix metalloproteases and prevent the formation of metastases.
  • the effect of NUAK1 inhibitors on tumor cell migration was investigated in the wound healing test on the SKOV3 cell line (human ovarian adenocarcinoma cell line).
  • the cell line was seated in 6-well plates up to 90% confluency. A straight line was drawn at the bottom of the plate with a pipette tip (1000 ⁇ l). After this procedure, attached cells on a plate were washed from floating cells and the test compound was added in the required concentrations (100 nM and 1 ⁇ M). Plots of cups with a “wound” were photographed using an Olympus IX-51 inverted light microscope; the coordinates of the point were fixed. After 24 hours, the medium was changed to fresh, after which repeated photographing of the same sections of the “wound” was carried out.
  • the NUAK1 inhibitor was found to be 5- (2,5-dichlorobenzyl) -1H- (4- (4-methylpiperazin-1-carbonyl) phenyl) -5,6,7,8-tetrahydropyrazino [2,3-c] pyridazine -4- carboxamide (compound 1) at a concentration of 1 ⁇ M reduces the migration ability of SKOV3 ovarian cancer cells by 55%.
  • the NUAK1 inhibitor in lung cancer cells causes an increase in stress fibrils, and increases the number and size of focal contacts; the number of motile cells with a large number of filopodia and small focal contacts decreases.
  • IAR-2 cell line immortalized rat liver cell line
  • control cells have an epithelial morphology in which most cells are combined into dense islets.
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) located on the edge of the cell.
  • IGF-1 IAR-2 cells become more mobile, elongated (fibroblast-like), lose the annular bundle and undergo EMF (epithelio-mesenchymal transition).
  • EMF epidermal growth factor
  • NUAK1 inhibitors block the epithelio-mesenchymal transition caused by activation of the IGFR-1 - Akt - m-TOR signaling pathway and thus stop one of the most important metastasis mechanisms.
  • DMPA DMPA
  • M M'-dimethyl-1, 3-propanodamine (A /, / V'-Dimethyl-1, 3-propanediamine); EMF - epithelio-mesenchymal transition;
  • IGF-1 insulin growth factor
  • HATU - 1- [Bis (dimethylamino) methylene] -1 H-1, 2,3-triazolo [4,5-b] pyridinium 3-oxide hexafluorophosphate, 1- [Bis (dimethylamino) methylene] -1 H-1, 2,3-triazolo [4,5-b] pyridinium 3-oxid hexafluorophosphate;
  • composition for injection I (with an active agent concentration of 50 mg / ml)
  • Tablets I-III may be enteric coated using, for example, cellulose acetate phthalate.
  • Aerosol composition can be used in combination with standard dispensers; as a suspending agent, instead of sorbitan trioleate and soya lecithin, sorbitan monooleate, sorbitan semi-oleate, polysorbate 80, polyglycerol oleate or oleic acid can be used.

Abstract

Изобретение относится к фармакологии и медицине и может быть использовано в терапии онкологических, хронических воспалительных и прочих заболеваний, связанных с аберрантной активностью NUAK1 киназы. Для этого предложено применение соединений общей формулы I, в которой обозначения LA, LB, LC, цикл А, цикл В, RA, RB, RC, RD, RF имеют значения, указанные в описании:. Данные соединения обладают высокой эффективностью в ингибировании NUAK1 киназы, в частности, вовлеченной в процесс метастазирования, в связи с чем они будут наиболее эффективны для ингибирования роста опухоли, а также лечения и предотвращения метастазирования.

Description

Применение новых химических соединений (варианты) в качестве ингибиторов NUAK1 киназы для лечения онкологических заболеваний.
Область техники
Данное изобретение относится к химии органических соединений, фармакологии и медицине и касается терапии онкологических, хронических воспалительных и прочих заболеваний посредством применения соединений, обладающих повышенной эффективностью в ингибировании NUAK1 киназы, в частности, вовлеченной в процесс метастазирования.
Уровень техники
Метастазирование, или процесс миграции клеток опухолей из первичного очага с последующим формированием вторичных опухолевых очагов (метастазов) в различных тканях, является одной из важнейших составных частей проблемы канцерогенеза. Учитывая, что большая часть пациентов со злокачественными опухолями умирает не от исходной опухоли, а от метастазов, дезорганизующих функционирование пораженных ими тканей, очевидна клиническая значимость проблемы метастазирования.
Понимание участников и процессов, вовлеченных в метастазирование, на молекулярном уровне может привести к эффективным, целевым подходам в его лечении и профилактике.
Протеинкиназы являются важным семейством белков, участвующим в регуляции ключевых клеточных процессов, нарушение активности которых может приводить к онкологическим заболеваниям, хроническим воспалительным заболеваниям, заболеваниям центральной нервной системы и т.д.
Поскольку протеинкиназы являются ключевыми регуляторами клеточной передачи сигнала, то они становятся мишенями для модулирования клеточной функции с помощью низкомолекулярных ингибиторов киназ.
Киназа NUAK1 (ARK5) - серин-треониновая протеинкиназа, принимающая участие в таких клеточных процессах, как клеточная адгезия, регуляция плоидности, сенесценции и пролиферация. Исследования показали взаимосвязь активности киназы NUAK1 и прогрессии опухолей.
Влияние киназы NUAK1 на один из основных процессов развития злокачественной опухоли - метастазирование опухолевых клеток - обусловлено NUAK1 -зависимой экспрессией матриксных металлопротеаз (ММР). Под действием факторов роста (например, IGF-1), выделяемых опухолевыми клетками, или находящихся в системной циркуляции, происходит активация киназы Akt, которая, в свою очередь, фосфорилирует и активирует киназу NUAK1. Активированная киназа NUAK1 через трансляционный
1
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) фактор mTORCI вызывает экспрессию матриксных металл on ротеаз ММР-14, ММР-2 и ММР-9, которые участвуют в деградации матрикса и инвазии опухолей (Suzuki, A. et. al., Mol Cell Biol, 2004, 24, 3526-35; Lu, S. et. al., Eur J Cancer, 2013, 49, 752-63). Роль киназы NUAK1 в инвазии опухолей подтверждена в доклинических in vitro и in vivo моделях немелкоклеточного рака лёгкого (Chen, P. et. al., Exp Lung Res, 2013, 39, 9-17), колоректального рака (Suzuki, A. et. al., Mol Cell Biol, 2004, 24, 3526-35; Kusakai, G. et. al., Am J Pathol, 2004, 164, 987-95; Suzuki, A. et. al., Oncogene, 2004, 23, 7067-75; Kusakai, G. et. al., J Ex Clin Cancer Res, 2004, 23, 263-8; Roh, S. A. et. al., J Korean Med Sci, 2010, 25, 353-60), тройного негативного рака молочной железы (Chang, X. Z. et. al., J Cancer Res Clin Oncol, 2012, 138, 247-54). Кроме того, в подтверждение перспективности использования NUAK1 как мишени свидетельствует корреляция между уровнем экспрессии киназы и стадией заболевания, наличием метастазов и общей выживаемостью пациентов.
Помимо этого, функциональные исследования показали взаимосвязь NUAK1 и механизмов защиты опухолевых клеток от апоптоза. Было установлено, что активность NUAK1 предотвращает гибель клеток колоректального рака, экспрессирующих одновременно «рецептор смерти» FAS и его лиганд FASL. В нормальных клетках связывание FAS с FASL приводит к апоптозу, но в клетках колоректального рака NUAK1 фосфорилирует и инактивирует ключевой фермент, принимающий участие в передаче сигнала от FASL - каспазу 6. Ранее было показано (Suzuki, A. et. al., Oncogene, 2004, 23, 7067-75), что NUAK1 защищает клетки колоректального рака, экспрессирующие FAS, от апоптоза, вызванного FASL. Одновременная экспрессия FAS и FASL наблюдается на ранних стадиях колоректального рака (Bennett, М. W. et. al., J Clin Pathol, 2001 , 54, 598- 604), поэтому ингибирование NUAK1 является эффективным способом остановить рост опухоли.
В других исследованиях (Liu, L. et. al., Nature, 2012, 483, 608-12) было показано, что в опухолевых клетках, экспрессирующих транскрипционный фактор MYC, происходит гиперактивация сигнального пути mTOR, приводящая к быстрому истощению клеточного резерва энергии в виде АТФ и накоплению АМФ, продукта распада АТФ. Внутриклеточный сенсор АМФ - киназа АМРК - активируется при увеличении соотношения АМФ/АТФ и отключает mTOR, переводя клетку в энергосберегающий режим. Киназа NUAK1 фосфорилирует регуляторную субъединицу АМРК и защищает её от деградации. В отсутствии NUAK1 , АМРК быстро утрачивает функциональность и клетки гибнут от чрезмерного расхода энергии. Взаимосвязь NUAK1 с сигнальным путем mTOR в MYC-положительных клетках показана в in vitro моделях аденокарциномы поджелудочной железы, гепатоцеллюлярной карциномы, колоректального рака.
Показана роль NUAK1 в остеосаркоме (Liu, L. et. al., Nature, 2012, 483, 608-12; Banerjee, S. et. al., Biochem J, 2014, 457, 215-25), c-MAF, MAF-B-положительной
2
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) множественной миеломе и ангиоиммунобластной Т-клеточной лимфоме (Suzuki, A. et. al., Oncogene, 2005, 24, 6936-44), меланоме (Bell, R. et. al., J. Invest. Dermatol., 2014, 134(2), 441 -51 ).
К настоящему времени известны ингибиторы NUAK1 киназы, включающие пиримидин-диазопиноны (WO 2014/145909), некоторые небольшие молекулы, описанные в обзорах последнего времени (Banerjee, S. et. al., Biochem J, 2014, 457, 215-25, . V. Ramana Reddy et. al., J. Med. Chem. 2014, 57, 578-599). При этом нет ни одного препарата, действующего как ингибитор NUAK1 киназы, который бы применяли в терапии. Поэтому сохраняется потребность в создании и внедрении в клинику новых эффективных ингибиторов NUAK 1 киназы.
Данное изобретение касается применения новых химических соединений, обладающих повышенной эффективностью в ингибировании NUAK1 киназы, в терапии онкологических, хронических воспалительных и прочих заболеваний, связанных с аберрантной активностью NUAK1 киназы, в частности, для подавления роста опухоли и предотвращения метастазирования.
Раскрытие изобретения
Задачей (техническим результатом) настоящего изобретения является разработка новых ингибиторов NUAK1 киназы, имеющих высокую эффективность, и перспективных для применения при лечении заболеваний, связанных с аберрантной активностью NUAK1 киназы, особенно онкологических заболеваний, в частности, путем подавления роста опухоли и/или предотвращения метастазирования.
Указанный технический результат достигается путем применения соединений общей формулы I или их энантиомеров, фармацевтически приемлемых солей, гидратов или сольватов в качестве ингибиторов NUAK1 киназы:
Формула I
Figure imgf000005_0001
где:
LA представляет собой СН2 или СН(СН3);
LB представляет собой C(0)NH или NH;
цикл А представляет собой фенил, опционально замещенный 1-3 группами RA;
3
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) RA выбирается независимо и представляет собой галоген, частично или полностью галогенированный С1-5-алкил, ОС -3-алкил;
цикл В представляет собой фенил или 6-членный гетероарильный цикл, содержащий 1-2 атома N; цикл В необязательно содержит 1-3 заместителя RB;
RB выбирается независимо и представляет собой Lc-Rc, Lc-H, галоген, частично или полностью галогенированный С1-5-алкил;
Lc представляет собой ковалентную химическую связь, О, ОСН2 или С(О);
Rc выбирается независимо и представляет собой С1.з-алкил, 4-6-членный гетероалициклил, содержащий 1-2 атома N и 0-1 атом О; Rc необязательно содержит 1-3 заместителя RD;
RD выбирается независимо и представляет собой галоген, СН3, NHRF, N(RF)2 или 5- 6-членный гетероалициклил, содержащий 0-1 атом N и 0-1 атом О; RD необязательно содержит 1-2 заместителя, которые независимо выбираются из С1.з-алкилов;
RF выбирается независимо и представляет собой С1-3-алкил.
Данные соединения известны и подробно описаны в заявке RU2013143520.
Предпочтительные варианты воплощения изобретения
Отдельный класс соединений, представляющих интерес, включает соединения формулы I, в которых:
LA представляет собой СН2;
LB представляет собой C(0)NH;
цикл А представляет собой фенил, опционально замещенный 1-3 группами RA;
RA выбирается независимо и представляет собой галоген или CF3;
цикл В представляет собой фенил; цикл В необязательно содержит 1-3 заместителя
RB;
RB выбирается независимо и представляет собой Lc-Rc, Lc-H;
Lc представляет собой ковалентную химическую связь, О, ОСН2 или С(О);
Rc выбирается независимо и представляет собой 4-6-членный гетероалициклил, содержащий 1-2 атома N и 0-1 атом О; Rc необязательно содержит 1-3 заместителя R ;
RD выбирается независимо и представляет собой СН3, NHRF, N(RF)2 или 5-6- членный гетероалициклил, содержащий 0-1 атом N и 0-1 атом О; RD необязательно содержит 1-2 заместителя, которые независимо выбираются из С^э-алкилов;
RF выбирается независимо и представляет собой С1-3-алкил.
4
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) В некоторых частных вариантах воплощения изобретения соединения, представляющие интерес, могут быть выбраны из следующих соединений общей формулы I:
5-(2,5-дихлоробензил)-М-(4-(4-метилпиперазин-1-карбонил)фенил)-5,6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,6-дихлоро-3-фторобензил)-1М-(4-(4-метилпиперазин-1 -карбонил)фенил)-5, 6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)-М-(3-(4-метилпиперазин-1-карбонил)фенил)-5,6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)-М-(4-(4-(диметиламино)пиперидин-1 -карбонил)фенил)-5, 6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)-М-(2-метокси-4-(4-метилпиперазин-1-карбонил)фенил)- 5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)-М-(3-метокси-4-(4-метилпиперазин-1-карбонил)фенил)- 5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)-1 -(5-(4-(диметиламино)пиперидин-1-карбонил)пиримидин-2- ил)-5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)-Ы-(5-(4-(диметиламино)пиперидин-1-карбонил)пиридин-2-ил)- 5,6,7, 8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)-М-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)фенил)-5,6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)-М-(4-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)фенил)-5,6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2l5-диxлopoбeнзил)-N-(3-(4-мeτилπиπepaзин-1-ил)φeнил)-5, 6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)-М-(4-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-2-метоксифенил)- 5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)-М-(2-изопропокси-5-метил-4-(пиперидин-4-ил)фенил)-5, 6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)-М-(4-(4-изопропилпиперазин-1-карбонил)фенил)-5, 6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-диxлopoбeнзил)- -(4-(3,3-димeτилπиπepaзин-1-ил)φeнил)-5,6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)-М-(4-(4-изопропилпиперазин-1 -ил)фенил)-5, 6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)-1Ч-(4-(1 -изопропилпиперидин-4-ил)фенил)-5, 6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) 5-(2,5-дихлоробензил)-М-(4-(4-морфолинопиперидин-1-ил)фенил)-5,6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)-М-(4-(4-(пирролидин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)-5,6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)-г>1-(4-(4-(изопропил(метил)амино)пиперидин-1-ил)фенил)- 5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)-Ы-(4-(4-(изопропиламино)пиперидин-1-ил)фенил)-5,6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид.
Настоящее изобретение также относится к применению соединений формулы I для получения фармацевтической композиции для лечения и/или предотвращения заболевания, связанного с аберрантной активностью NUAK1 киназы.
В частности, такие фармацевтические композиции могут быть использованы для ингибирования роста опухоли и/или лечения и/или предотвращения метастазирования Такое заболевание в частности, может представлять собой немелкоклеточный рак легкого, колоректальный рак, тройной негативный рак молочной железы, остеосаркому, рак поджелудочной железы, гепатоцеллюлярную карциному, аденокарциному поджелудочной железы, множественную миелому, ангиоиммунобластную Т-клеточную лимфому, рак яичника, рак простаты, меланому.
Кроме того, изобретением предусматриваются фармацевтические композиции, содержащие, как минимум, одно соединение, являющееся предметом изобретения, или его энантиомер, фармацевтически приемлемую соль, гидрат или другой сольват такового, и как минимум один фармацевтически приемлемый носитель, растворитель и/или наполнитель. Такие композиции предназначены для лечения и/или предотвращения заболевания, связанного с аберрантной активностью NUAK1 киназы, и могут быть введены объекту, нуждающемуся, в частности, в ингибировании роста, развития или метастазов злокачественной опухоли, включая солидные опухоли (например, рак простаты, толстой кишки, поджелудочной железы, яичников, молочной железы, пищевода, немелкоклеточный рак лёгкого (НМКРЛ)), опухолевые заболевания головного мозга, в том числе глиобластома и нейробластома; злокачественные новообразования мягких тканей, в том числе остеосаркома и другие; различные формы меланомы, лимфомы, такие как, например, Т-клеточная лимфома, и другие формы злокачественных новообразований, в том числе устойчивые к лечению другими киназными ингибиторами, а также в целом для лечения и профилактики заболеваний или неблагоприятных состояний организма, вызванных абберантной активностью NUAK1 киназы которую можно ингибировать путем применения соединений по изобретению.
Настоящее изобретение также относится к способу лечения злокачественных опухолей, включающему в себя введение (в качестве монотерапии или в комбинации с
6
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) одним или несколькими другими противоопухолевыми агентами, одним или несколькими агентами для смягчения побочных эффектов, облучением и т.п.), по меньшей мере, одного соединения формулы I.
В качестве других противоопухолевых агентов могут быть выбраны, в частности, противоопухолевые препараты, представляющие собой 5-фтороурацил, афатиниб, бевацизумаб, бортезомиб, капецитабин, карбоплатин, цетуксимаб, цисплатин, циклофосфамид, дабрафениб, дексаметазон, доцетаксель, доксорубицин, энзалутамид, эпирубицин, эрлотиниб, этопозид, гемцитабин, ифосфамид, иматиниб, иринотекан, лапатиниб, леналидомид, леуковорин, мелфалан, метотрексат, митомицин, оксалиплатин, паклитаксель, панитумумаб, пеметрексед, преднизон, регорафениб, сорафениб, темозоломид, талидомид, трастузумаб, вемурафениб, винкристин, афлиберцепт.
Настоящее изобретение также относится к способу лечения и/или профилактики метастазирования злокачественных опухолей путем введения, по меньшей мере, одного соединения формулы I.
Настоящее изобретение также относится к способу лечения или профилактики заболеваний, вызываемых аберрантной активностью NUAK1 киназы путем введения, по меньшей мере, одного соединения формулы I.
«Введение» в организм соединения согласно настоящему изобретению означает доставку к реципиенту соединения, описанного в настоящем изобретении, пролекарства, или другого фармакологически приемлемого производного такого соединения, используя любые допустимые препараты или пути введения в организм, как описано в настоящем документе. Обычно соединение вводится в организм пациента один или несколько раз в неделю, например, ежедневно, через день, 5 дней в неделю и т.п. Пероральное и внутривенное введение представляет особый интерес.
Изобретение также включает получение соединений общей формулы I.
Кроме того, изобретение также включает использование соединения по изобретению или его фармакологически приемлемого производного в производстве лекарственного средства для лечения как острой или хронической формы злокачественной опухоли (включая лимфому и солидные опухоли, первичные или метастатические, включая уже отмеченные в настоящем документе типы опухоли, и включая резистентные или устойчивые к одному или нескольким видам лечения виды опухоли). Соединения, составляющие суть настоящего изобретения, могут быть использованы в производстве противоопухолевых препаратов. Соединения настоящего изобретения также могут быть использованы в производстве лекарственных препаратов для ослабления или предотвращения различных расстройств путем ингибирования NUAK1 киназы.
7
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Изобретение также охватывает композиции, содержащие соединения настоящего изобретения, включая соединения любого из описанных классов или подклассов, в том числе любой из формул, описанных выше, помимо прочего, предпочтительно в терапевтически эффективном количестве, в соединении с, по крайней мере, одним терапевтически приемлемым носителем, растворителем или наполнителем.
Настоящим изобретением предусмотрено также применение соединений по изобретению при лечении хронических воспалительных и прочих заболеваний, связанных с аберрантной активностью NUAK1 киназы.
Соединения настоящего изобретения также могут быть использованы в качестве стандартов и реагентов для характеристики NUAK1 киназы, также как и для изучения роли NUAK1 киназы в биологических и патологических явлениях; для изучения внутриклеточных путей передачи сигнала, осуществляемого с помощью NUAK1 киназы, для сравнительной оценки новых киназных ингибиторов; а также для изучения различных видов злокачественных новообразований в моделях линий клеток и животных.
Определения (термины).
Следующие определения применяются в данном документе, если иное не указано явно. Кроме того, если не указано иное, все вхождения функциональных групп выбираются независимо.
Термин «алифатический» в настоящем документе означает как насыщенную, так и ненасыщенную (но не ароматическую) прямую (т.е. неразветвленную), разветвленную, циклическую или полициклическую неароматическую углеводородную цепочку - остаток, который может быть опционально замещен одной или более функциональной группой. Если иное не указано явно, алкил, другие алифатические, алкокси и ацильные группы обычно содержат 1 -6 (т.е. С -6), а в большинстве случаев 1 -3 (С,.3) смежных алифатических атомов углерода. В качестве примера такие алифатические группы включают метил, этил, изопропил, циклопропил, метилен, метилциклопропил, циклобутилметил, циклопентил производные и т.п., которые могут содержать один или несколько заместителей. Термин «алифатический», таким образом, подразумевает включение алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил и циклоалкенил фрагментов.
Термин «алкил» в настоящем документе относится к группам, обычно имеющим от одного до пяти, предпочтительно от одного до трех атомов углерода. Например, «алкил» может означать метил, этил, н-пропил, изопропил и т.д. В качестве иллюстрации, замещенные алкильные группы включают, но не ограничиваются, следующими группами: фторметил, дифторметил, трифторметил и т.д. Термин С -3 алкил означает алкил, содержащий от 1 до 3 атомов углерода, и включает С^ С2, С3-алкильные группы.
8
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Термин «алкил» в настоящем документе означает как неразветвленные, так и разветвленные, циклические или полициклические алкильные группы. Аналогичные условности применяются и к другим общим терминам, таким как «алкенил», «алкинил» и т.п. Кроме того, «алкил», может быть как замещенным, так и незамещенным.
Термин «галогеналкил» включает разветвленные и линейные насыщенные углеводородные цепи, в которых один или несколько атомов водорода замещены на галоген. Примеры галогеналкильных групп включают, но не ограничиваются, следующие группы: трифторметил, трихлорметил, -C(CF3)2CH3 и т.п.
Термин «гетероарил», как он используется здесь, означает стабильный гетероциклический и полигетероциклический ароматический фрагмент, имеющий 5-6 атомов в цикле. Гетероарильная группа может быть замещенной или незамещенной. Возможные заместители включают, помимо прочего, любой из ранее упомянутых заместителей. Примерами типичных гетероарильных циклов являются пяти- и шестичленные моноциклические группы, такие как тиенил, пирролил, имидазолил, пиразолил, пиридил, пиримидинил, пиридазинил, и т.п. Термин «гетероарил» также включает кольца с возможными заместителями. Термин «гетероарил» может использоваться эквивалентно с терминами «гетероарильный цикл» или «гетероароматический».
Данное изобретение содержит только такие комбинации заместителей и производных, которые образуют стабильное или химически возможное соединение. Стабильным или химически возможным соединением называется такое соединение, стабильности которого достаточно для его синтеза и аналитического детектирования. Предпочтительные соединения данного изобретения являются достаточно стабильными и не разлагаются при температуре до 40° С в отсутствие химически активных условий, в течение, по крайней мере, одной недели.
Некоторые соединения данного изобретения могут существовать в таутомерных формах, и это изобретение включает в себя все такие таутомерные формы таких соединений, если не указано иное.
Если не указано иначе, изображенные здесь структуры также подразумевают и все стереоизомеры, то есть R- и S- изомеры для каждого ассиметричного центра. Кроме того, отдельные стереохимические изомеры, равно как и энантиомеры и диастереомерные смеси настоящих соединений, также являются предметом данного изобретения. Таким образом, данное изобретение охватывает каждый диастереомер или энантиомер, свободный в значительной степени от других изомеров (>90%, а предпочтительно >95% мольной чистоты), так же как и смесь таких изомеров.
9
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Конкретный оптический изомер может быть получен разделением рацемической смеси в соответствии со стандартной процедурой, например, путем получения диастереоизомерных солей путем обработки оптически активной кислотой или основанием с последующим разделением смеси диастереомеров кристаллизацией с последующим выделением оптически активных оснований из этих солей. Примерами соответствующих кислот являются винная, диацетилвинная, дибензоилвинная, дитолуолвинная и камфорсульфоновая кислота. Другая методика разделения оптических изомеров заключается в использовании хиральной хроматографической колонки. Кроме того, другой метод разделения включает синтез ковалентных диастереомерных молекул путем реакции соединений изобретения с оптически чистой кислоты в активированной форме или оптически чистым изоцианатом. Полученные диастереомеры можно разделить обычными способами, например, хроматографией, дистилляцией, кристаллизаций или сублимацией, а затем гидролизовать для получения энантиомерно чистого соединения.
Оптически активные соединения данного изобретения могут быть получены с использованием оптически активных исходных материалов. Такие изомеры могут находиться в форме свободной кислоты, свободного основания, эфира или соли.
Соединения, составляющие суть данного изобретения, могут существовать в меченой радиоизотопом форме, т.е. указанные соединения могут содержать один или несколько атомов, чья атомная масса или массовое число отличается от атомной массы или массового числа наиболее распространенных природных изотопов. Радиоизотопы водорода, углерода, фосфора, хлора включают 3Н, 4С, 32Р, 35S, и 36CI, соответственно. Соединения данного изобретения, которые содержат такие радиоизотопы и/или другие радиоизотопы других атомов, находятся в сфере настоящего изобретения. Тритиевые, т.е. 3Н и углеродные, т.е. 14С радиоизотопы являются особенно предпочтительными благодаря простоте приготовления и обнаружения.
Соединения настоящего изобретения, меченые радиоактивными изотопами, могут быть получены с помощью методов, хорошо известных специалистам в данной области. Меченые соединения могут быть получены с помощью процедур, описанными здесь, простой заменой немеченых реагентов соответствующими мечеными реагентами.
Термин «аберрантная активность» киназы означает киназную активность, существенно отличающуюся от базового уровня активности этой киназы в клетках при отсутствии патологии. Аберрантная активность может быть вызвана изменением уровня экспрессии киназы, нарушением процессов, приводящих к активации киназы, дерегулированием путей деградации, а также другими факторами.
10
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Описание рисунков
Рисунок 1. Ингибирование инвазии опухолевых клеток через матригель, вызванной инсулиновым фактором роста IGF-1 в клеточных линиях рака яичника (SKOV3) (а) и рака простаты РС-3 (б) соединением по изобретению (соединение (1), 5-(2,5-дихлоробензил)- М-(4-(4-метилпиперазин-1-карбонил)фенил)-5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин- 4-карбоксамид).
Рисунок 2. Ингибирование эпителиально-мезенхимального перехода, вызванного инсулиновым фактором роста IGF-1 в клеточной линии IAR-2 соединением по изобретению (соединение (1), 5-(2,5-дихлоробензил)-гл1-(4-(4-метилпиперазин-1- карбонил)фенил)-5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид):
а) IGF-1
б) Соединение 1 + IGF-1
в) Контроль
г) Соединение 1
Осуществление изобретения
Обзор методов получения соединений изобретения
Соединения, являющиеся предметом настоящего изобретения, могут быть получены с использованием описанных ниже синтетических методов. Перечисленные методы не являются исчерпывающими и допускают введение разумных модификаций. Указанные реакции должны проводиться с использованием подходящих растворителей и материалов. При реализации данных общих методик для синтеза конкретных веществ необходимо учитывать присутствующие в веществах функциональные группы и их влияние на протекание реакции. Для получения некоторых веществ необходимо изменить порядок стадий либо отдать предпочтение одной из нескольких альтернативных схем синтеза.
Защитная группа - функциональная группа, вводящаяся в молекулу химического соединения для обеспечения хемоселективности протекания необходимой химической реакции. Защитные группы играют важную роль в органическом синтезе. Некоторые используемые в органическом синтезе реагенты могут взаимодействовать сразу со многими функциональными группами преобразуемой молекулы. В том случае, если необходимо провести реакцию только с одним типом функциональных групп, не задевая остальные, последние модифицируют («защищают») при помощи защитных групп. Примером защитной группы может быть терт-бутоксикарбонильная группа (Вое).
Промежуточные продукты для получения большинства соединений изобретения (соединения I-2 и I-4) могут быть получены по схеме I. На схеме I цикл А определен в разделе «раскрытие изобретения», а заместитель R представляет -Н или -СН3.
11
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) На первой стадии происходит синтез моно-Вос-замещенного этилендиамина, из которого на второй стадии путем восстановительного аминирования получается интермедиат 1-1. Взаимодействие данного интермедиата с 3,4,6-трихлорпиридазином в присутствии основания приводит к замещению атома хлора в 4 положении пиридазинового кольца. Взаимодействие полученного соединения с трифторуксусной кислотой приводит к снятию защитной Вос-группы. На следующем этапе происходит реакция внутримолекулярного нуклеофильного замещения, приводящая к получению бициклического продукта, взаимодействие которого с Вос-ангидридом приводит к интермедиату I-2. Карбонилирование этого интермедиата в метаноле в присутствии палладиевого катализатора приводит к метиловому эфиру I-3, гидролиз которого гидроксидом лития с последующим подкислением приводит к кислоте I-4.
Figure imgf000014_0001
Схема I
12
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Для синтеза соединений по формуле I, в которых циклы А и В определены в разделе «раскрытие изобретения» (цикл В представляет собой фенил или 6-членный гетероарильный цикл, содержащий 1-2 атома N), заместитель R представляет -Н, -СН3, LB представляет C(0)NH, может быть использована схема На или lib.
Схема Па
Figure imgf000015_0001
На первой стадии происходит активация карбоновой кислоты при помощи HATU и реакция с аминосоединением, приводящая к амиду. Снятие защитной Вос-группы под действем трифторуксусной кислоты приводит к искомому соединению.
Схема lib
Figure imgf000015_0002
Палладий-катализируемое карбонилирование соединения I-2 монооксидом углерода в присутствии аминосоединения приводит к амиду, снятие с которого защитной
Вос-группы приводит к искомому соединению.
Для синтеза соединений по формуле I, в которых цикл А определен по п. 1.1 описания изобретения, заместитель R представляет -Н, -СН3, LB представляет NH, а цикл
В определен по п. 1.1 описания изобретения, могут быть использованы схемы Ша или lllb.
13
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)
Figure imgf000016_0001
Палладий-катализируемое нуклеофильное замещение атома хлора под действием аминосоединения с последующим удалением защитной Вос-группы приводит к искомому
Схема ШЬ
Figure imgf000016_0002
Нуклеофильное замещение атома хлора под действием аминосоединения с последующим удалением защитной Вос-группы приводит к искомому соединению.
14
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Примеры
1. Синтез 5-(2,5-дихлоробензил)-М-(4-(4-метилпиперазин-1 -карбонил)фенил)-5,6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамида
Figure imgf000017_0001
15
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) 1 ) . 17.5 г (100 ммоль) 2,5-дихлорбензальдегида растворяют в 150 мл безводного метанола, прибавляют 0.1 мл ледяной уксусной кислоты и 16.0 г (100 ммоль) трет- бутил-2-аминоэтилкарбамат. Реакционную смесь перемешивают 4 часа при комнатной температуре, затем охлаждают до 0°С и прибавляют порциями 13.3 г (350 ммоль) боргидрида натрия поддерживая заданную температуру (0°С) и оставляют на ночь при комнатной температуре. Растворитель удаляют, к остатку прибавляют 2.5 М раствор гидроксида натрия (~80 мл) до рН~10 и экстрагируют дихлорметаном (3x200 мл), объединенные экстракты промывают насыщенным раствором NaHC03 (2x200 мл), а затем водой до нейтральной реакции, сушат, растворитель удаляют, остаток разделяют хроматографически. Получают: 24.9 г (78%) mpem-бутил 2-(2,5- дихлоробензиламино)этилкарбамата (1а).
2) К раствору 10.1 г (55 ммоль) 3,4,6-трихлорпиридазина в 80 мл безводного N- метилпирролидона прибавляют 16.0 г (50 ммоль) mpem-бутил 2-(2,5- дихлоробензиламино)этилкарбамата, и 9.6 мл (55 ммоль) основания Хунинга. Реакционную смесь перемешивают в атмосфере аргона при 70°С в течение 90 часов (ТСХ-контроль). Ν-метилпирролидон удаляют в вакууме, остаток растворяют в 300 мл дихлорметана и промывают насыщенным раствором NaHC03 (2x150 ml), а затем водой до нейтральной реакции, сушат, растворитель удаляют в вакууме, остаток перекристаллизовывают из диэтилового эфира. Получают:15.6 г (67%) mpem-бутил 2- ((2,5-дихлоробензил)(3,6-дихлоропиридазин-4-ил)амино) этилкарбамата (1 Ь).
3) Раствор 9.3 г (20 ммоль) mpem-бутил 2-((2,5-дихлоробензил)(3,6- дихлоропиридазин-4-ил)амино) этилкарбамата в 100 мл безводного дихлорметана охлаждают до -5°С и прибавляют 25 мл 20% (v/v) раствора трифторуксусной кислоты в безводном дихлорметане. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 18 часов, растворители удаляют, остаток промывают безводным эфиром (3x75 мл) и сушат. Получают: 9.2г (96%) трифторацетата М1-(2,5-дихлоробензил)-гл11 -(3,6- дихлоропиридазин-4-ил)этан-1 ,2-диамина (1 с).
4) К перемешиваемому раствору 9.6 г (20 ммоль) трифторацетата N -(2,5- дихлоробензил)-г>11-(3,6- дихлоропиридазин-4-ил)этан-1 ,2-диамина в 100 мл безводного N- метилпирролидона прибавляют 8.7 мл (0.05 моль) основания Хунинга и выдерживают полученную смесь 10 часов при 100°С (ТСХ-контроль), охлаждают, растворитель удаляют в вакууме, к остатку прибавляют 200 мл насыщенного раствора NaHC03 и отфильтровывают образовавшийся осадок, который промывают водой (3x50 мл), сушат и разделяют хроматографически. Получают: 1.6 г (25%) 3-хлоро-5-(2,5-дихлоробензил)- 5,6,7,8-тетрагидропиразино [2,3-с]пиридазина (1d).
5) 3-хлоро-5-(2,5-дихлоробензил)-5,6,7,8-тетрагидропиразино [2,3-с]пиридазин (2.83 г, 8.63 ммоль) и ангидрид Вое (6 г, 27.52 ммоль) смешивают в 80 мл безводного ТГФ. К смеси добавляют триэтиламин (6 мл, 41.6 ммоль) и DMAP (0.1 16 г, 0.95 ммоль). Смесь
16
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа (прохождение реакции контролируют с помощью LC/MS). Раствор разделяют между этилацетатом и водой, органический слой промывают насыщенным раствором NaCI и высушивают над безводным Na2S04. Получают твердый продукт (1е), который используется в следующей стадии непосредственно.
6) К раствору 3-хлоро-5-(2,5-дихлоробензил)-6,7-дигидропиразино[2,3-с]пиридази- 8(5Н)-карбоксилата (1е) (3 г, 2.32 ммоль) в метаноле (35 мл) и DMA (10 мл) добавляют [1 ,1 '-бис (диметилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий (0.25 г, 0.35 ммоль) и ацетат натрия (0.38 г, 4.6 ммоль) в комнатной температуре в автоклаве. Реактор троекратно продувают СО, и закрывают с давлением СО 200 psi. Реакционную смесь перемешивают при 90 °С в течение 7ч. После охлаждения анализ LC/MS показывает полное протекание реакции. Реакционную смесь концентрируют под уменьшенным давлением, и остаток разделяют между этилацетатом и раствором бикарбоната натрия. Водный слой дважды экстрагируют этилацетатом, комбинированный органический слой промывают насыщенным раствором NaCI и высушивают над безводным Na2S04. После отгонки сольвента получают 3.8 г продукта (1f), который подвергают гидролизу без дальнейшей очистки.
7) Неочищенный продукт (1f) растворяют в ТГФ (80 мл) и обрабатывают 1 М раствором LiOH в ТГФ (80 мл, 80 ммоль). После перемешивания смеси при комнатной температуре в течение 1ч ТГФ удаляют в вакууме, и добавляют 6N HCI до рН ~ . Остаток экстрагируют трёхкратным объемом этилацетата, объединенный органический слой промывают трёхкратным раствором насыщенного NaCI и высушивают над безводным Na2S04. После отгонки органического растворителя получают 8-(трет-бутоксикарбонил)- 5-(2,5-дихлоробензил)-5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-3-карбоновую кислоту (1д) (2.64 г, 6 ммоль, 97.4%).
8) Смесь 8-(трет-бутоксикарбонил)-5-(2,5-дихлоробензил)-5, 6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-3-карбоновой кислоты (1д, Юг, 22.8 ммоль), (4- аминофенил)(4-метилпиперазин-1-ил)-метанона (1 h, 6 г, 27.4 ммоль), триэтиламина (30 мл, 228 ммоль) и HATU (13 г, 34.25 ммоль) растворяют в безводном DMF (50 мл), и полученную смесь перемешивают в течение 20 - 40 мин при комнатной температуре до завершения реакции (LC/MS). Реакционную смесь разделяют между этилацетатом и водой, подкисленной 0.1 N HCI; органический слой промывают бикарбонатом натрия и насыщенным раствором NaCI. Раствор высушивают над безводным Na2S04 и сольвент удаляют. Остаток растворяют в смеси дихлорметан : ТГФ (1 : 1 , 200 мл) и настаивают при комнатной температуре до полного снятия защиты (LC/MS). Растворители удаляют в вакууме и реакционную смесь разделяют между этилацетатом и водой; органический слой промывают бикарбонатом натрия и насыщенным раствором NaCI. Раствор высушивают над безводным сульфатом натрия и растворитель удаляют. Твердый
17
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) остаток промывают смесью этилацетата и эфира (1 :2), затем гексаном и небольшим количеством ацетонитрила. Получившийся твердый продукт отфильтровывают и высушивают с получением Юг финального продукта 5-(2,5-дихлоробензил)-г>1-(4-(4- метилпиперазин-1-карбонил)фенил)-5,6,7,8-тетрагидропиразино [2,3-с]пиридазин-3- карбоксамида (1), m/z = 539.16.
2. Синтез 5-(2,6-дихлоро-3-фторобензил)-М-(4-(4-метилпиперазин-1 - карбонил)фенил)-5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамида
Figure imgf000020_0001
18
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)
Figure imgf000021_0001
1) 19.3 г (100 ммоль) 2,6-дихлоро-З-фторбензальдегида растворяют в 150 мл безводного метанола, прибавляют 0.1 мл ледяной уксусной кислоты и 16.0 г (100 ммоль) /77ре/77-бутил-2-аминоэтилкарбамата. Реакционную смесь перемешивают 4 часа при комнатной температуре, затем охлаждают до 0°С и прибавляют порциями 13.3 г (350 ммоль) боргидрида натрия поддерживая заданную температуру (0°С) и оставляют на ночь при комнатной температуре. Растворитель удаляют, к остатку прибавляют 2.5 М раствор гидроксида натрия (~80 мл) до рН~10 и экстрагируют дихлорметаном (3x200 мл), объединенные экстракты промывают насыщенным раствором NaHC03 (2x200 мл), а затем водой до нейтральной реакции, сушат, растворитель удаляют, остаток разделяют хроматографически. Получают: 26.3 г (75%) mpem-бутил 2-(2,6-дихлоро-3- фторобензиламино)этилкарбамата (2а).
2) К раствору 10.1 г (55 ммоль) 3,4,6-трихлорпиридазина в 80 мл безводного N- метилпирролидона прибавляют 16.8 г (50 ммоль) треш-бутил 2-(2,6-дихлоро-3- фторобензиламино)этилкарбамата, и 9.6 мл (55 ммоль) основания Хунинга. Реакционную смесь перемешивают в атмосфере аргона при 70°С в течение 90 часов (ТСХ-контроль). Ν-метилпирролидон удаляют в вакууме, остаток растворяют в 300 мл дихлорметана и промывают насыщенным раствором NaHC03 (2x150мл), а затем водой до нейтральной реакции, сушат, растворитель удаляют в вакууме, остаток перекристаллизовывают из диэтилового эфира. Получают: 15.6 г (67%) mpem-бутил 2-((2,6-дихлоро-3- фторобензил)(3,6-дихлоропиридазин-4-ил)амино) этилкарбамата (2Ь).
3) Раствор 9.7 г (20 ммоль) mpem-бутил 2-((2,6-дихлоро-3-фторобензил)(3,6- дихлоропиридазин-4-ил)амино) этилкарбамата в 100 мл безводного дихлорметана охлаждают до -5°С и прибавляют 25 мл 20% (v/v) раствора трифторуксусной кислоты в безводном дихлорметане. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 18 часов, растворители удаляют, остаток промывают безводным эфиром (3x75 мл) и сушат. Получают: 9.5 г (95%) трифторацетата М1-(2,6-дихлоро-3- фторобензил)-М-(3,6-дихлоропиридазин-4-ил)этан-1 ,2-диамина (2с).
4) К перемешиваемому раствору 10 г (20 ммоль) трифторацетата 1М1-(2,6-дихлоро-3- фторобензил)-1\11-(3,6-дихлоропиридазин-4-ил)этан-1 ,2-диамина, полученного на предыдущей стадии, в 100 мл безводного Ν-метилпирролидона прибавляют 8.7 мл (50
19
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) ммоль) основания Хунинга и выдерживают полученную смесь 10 часов при 00° С (ТСХ- контроль), охлаждают, растворитель удаляют в вакууме, к остатку прибавляют 200 мл насыщенного раствора NaHC03 и отфильтровывают образовавшийся осадок, который промывают водой (3x50 мл), сушат и разделяют хроматографически. Получают: 1.7 г (25%) 3-хлоро-5-(2,6-дихлоро-3-фторобензил)-5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3- с]пиридазина (2d).
5) 3-хлоро-5-(2,6-дихлоро-3-фторобензил)-5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3- с]пиридазин (2d, 2.86 г, 8.63 ммоль) и ангидрид Вое (6 г, 27.52 ммоль) смешивают в 80 мл безводного ТГФ. К смеси добавляют триэтиламин (6 мл, 41.6 ммоль) и DMAP (0.1 16 г, 0.95 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа (прохождение реакции контролируют с помощью LC/MS). Раствор разделяют между этилацетатом и водой, органический слой промывают насыщенным раствором NaCI и высушивают над безводным Na2S04. Получают твердый продукт (2е), который используется в следующей стадии непосредственно.
6) К раствору 3-хлоро-5-(2,6-дихлоро-3-фторобензил)-6,7-дигидропиразино[2,3- с]пиридази-8(5Н)-карбоксилата (2е) (1 г, 2.32 ммоль) в метаноле (35 мл) и DMA (10 мл) добавляют [1 ,1 '-бис (диметилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий (0.25 г, 0.35 ммоль) и ацетат натрия (0.38 г, 4.6 ммоль) в комнатной температуре в автоклаве. Реактор троекратно продувают СО, и закрывают с давлением СО 200 psi. Реакционную смесь перемешивают при 90 °С в течение 7ч. После охлаждения анализ LC/MS показывает полное протекание реакции. Реакционную смесь концентрируют под уменьшенным давлением, и остаток разделяют между этилацетатом и раствором бикарбоната натрия. Водный слой дважды экстрагируют этилацетатом, комбинированный органический слой промывают насыщенным раствором NaCI и высушивают над безводным Na2S04. После отгонки сольвента получают З.бг продукта (2f), который подвергают гидролизу без дальнейшей очистки.
7) Неочищенный продукт (1f) растворяют в ТГФ (80 мл) и обрабатывают 1 М раствором LiOH в ТГФ (80 мл, 80 ммоль). После перемешивания смеси при комнатной температуре в течение 1ч ТГФ удаляют в вакууме, и добавляют 6N HCI до рН ~ 1. Остаток экстрагируют трёхкратным объемом этилацетата, объединенный органический слой промывают трёхкратным раствором насыщенного NaCI и высушивают над безводным Na2S04. После отгонки органического растворителя получают 8-(тре/77-бутоксикарбонил)- 5-(2,5-дихлоробензил)-5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-3-карбоновую кислоту (2д) (2.56 г, 5.8 ммоль, 95%).
8) Смесь 8-( /г>рет-бутоксикарбонил)-5-(2,6-дифторо-3-фтородихлоробензил)- 5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-3-карбоновой кислоты (2д, Юг, 17.9 ммоль), (4-аминофенил)(4-метилпиперазин-1-ил)-метанона (1 п, 4.7 г, 21.5 ммоль), триэтиламина (30 мл, 228 ммоль) и HATU (13 г, 34.25 ммоль) растворяют в безводном DMF (50 мл), и
20
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) полученную смесь перемешивают в течение 20 - 40 мин при комнатной температуре до завершения реакции (LC/MS). Реакционную смесь разделяют между этилацетатом и водой, подкисленной 0.1 N HCI; органический слой промывают бикарбонатом натрия и насыщенным раствором NaCI. Раствор высушивают над безводным Na2S04 и сольвент удаляют. Остаток растворяют в смеси дихлорметан: ТГФ (1 :1 , 200 мл) и настаивают при комнатной температуре до полного снятия защиты (LC/MS). Растворители удаляют в вакууме и реакционную смесь разделяют между этилацетатом и водой; органический слой промывают бикарбонатом натрия и насыщенным раствором NaCI. Раствор высушивают над безводным сульфатом натрия и растворитель удаляют. Твердый остаток промывают смесью этилацетата и эфира (1 :2), затем гексаном и небольшим количеством ацетонитрила. Получившийся твердый продукт отфильтровывают и высушивают с получением 10 г финального продукта 5-(2,6-дифторо-3- фтородихлоробензил)-г>1-(4-(4-метилпиперазин-1-карбонил)фенил)-5,6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-3-карбоксамида (2), m/z = 557.15.
3. Синтез 5-(2,5-дихлоробензил )- -(3-(4-метил пиперазин-1 -карбонил)фенил)-5,6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамида
Figure imgf000023_0001
5-(2,5-дихлоробензил)-М-(3-(4-метилпиперазин-1 -карбонил)фенил)-5, 6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид (3) получают сочетанием 8-(mpem- бутоксикарбонил)-5-(2,5-дихлоробензил)-5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-3- карбоновой кислоты (1д) и (3-аминофенил)(4-метилпиперазин-1-ил)-метанона (За) в условиях, аналогичных условиям получения соединения (1). m/z = 539.16.
21
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) 4. Синтез 5-(2,5-дихлоробензил)-М-(4-(4-(диметиламино)пиперидин-1 - карбонил)фенил)-5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамида
Figure imgf000024_0001
5-(2,5-дихлоробензил)-М-(4-(4-(диметиламино)пиперидин-1-карбонил)фенил)-5,6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид (4) получают сочетанием 8-(mpem- бутоксикарбонил)-5-(2,5-дихлоробензил)-5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-3- карбоновой кислоты (1д) и (4-аминофенил)(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)метанона (4а) в условиях, аналогичных условиям получения соединения (1). m/z = 567.19.
5. Синтез 5-(2,5-дихлоробензил )-М-(2-метокси-4-(4-метил пиперазин-1 - карбонил)фенил)-5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамида
Figure imgf000024_0002
5-(2,5-дихлоробензил)-Ы-(4-(4-(диметиламино)пиперидин-1 -карбонил)фенил)-5, 6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид (5) получают сочетанием 8-(mpem- бутоксикарбонил)-5-(2,5-дихлоробензил)-5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-3- карбоновой кислоты (1д) и (4-аминофенил)(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)метанона (5а) в условиях, аналогичных условиям получения соединения (1). m/z = 567.19.
22
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) 6. Синтез 5-(2,5-дихлоробензил)-М-(3-метокси-4-(4-метил пиперазин-1 - карбонил)фенил)-5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамида
Figure imgf000025_0001
5-(2,5-дихлоробензил)-1 -(3-метокси-4-(4-метилпиперазин-1 -карбон ил)фенил )- 5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид (6) получают сочетанием 8- (тре/л-бутоксикарбонил)-5-(2,5-дихлоробензил)-5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3- с]пиридазин-3-карбоновой кислоты (1д) и (4-амино-2-метоксифенил)(4-метилпиперазин-1- ил)метанона (6а) в условиях, аналогичных условиям получения соединения (1). m/z = 569.17.
7. Синтез 5-(2,5-дихлоробензил)-М-(5-(4-(диметиламино)пиперидин-1- карбонил)пиримидин-2-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4- карбоксамида
Figure imgf000025_0002
5-(2,5-дихлоробензил)-М-(5-(4-(диметиламино)пиперидин-1-карбонил)пиримидин-2- ил)-5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид (7) получают сочетанием 8-(трет-бутоксикарбонил)-5-(2,5-дихлоробензил)-5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3- с]пиридазин-3-карбоновой кислоты (1д) и 4-(4-метилпиперазин-1-ил)анилина (9а) в условиях, аналогичных условиям получения соединения (1). m/z = 511.17.
23
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) 8. Синтез 5-(2,5-дихлоробензил)-ГЧ-(5-(4-(диметиламино)пиперидин-1 - карбонил)пиридин-2-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4- карбоксамида
Figure imgf000026_0001
5-(2,5-дихлоробензил)-М-(5-(4-(диметиламино)пиперидин-1-карбонил)пиридин-2-ил)- 5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид (8) получают сочетанием 8- (тре 7-бутоксикарбонил)-5-(2,5-дихлоробензил)-5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3- с]пиридазин-3-карбоновой кислоты (1д) и (6-аминопиридин-3-ил)(4- (диметиламино)пиперидин-1-ил)метанона (8а) в условиях, аналогичных условиям получения соединения (1). m/z = 568.19.
9. Синтез 5-(2,5-дихлоробензил)-М-(4-(4-метилпиперазин-1 -ил)фенил)-5, 6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамида
Figure imgf000026_0002
5-(2,5-дихлоробензил)-М-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)фенил)-5,6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид (9) получают сочетанием 8-( т?ре/ - бутоксикарбонил)-5-(2,5-дихлоробензил)-5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-3- карбоновой кислоты (1д) и (б-аминопиридин-3-ил)(4-(диметиламино)пиперидин-1-
24
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) ил)метанона (9a) в условиях, аналогичных условиям получения соединения (1). m/z = 568.19.
10. Синтез 5-(2,5-дихлоробензил )-Ы-(4-(4-(диметиламино)пиперидин-1 -ил)фенил)- 5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамида
Figure imgf000027_0001
5-(2,5-дихлоробензил)-М-(4-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)фенил)-5,6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид (10) получают сочетанием 8-(/т}ре/п- бутоксикарбонил)-5-(2,5-дихлоробензил)-5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-3- арбоновой кислоты (1д) и 1-(4-аминофенил)-М,1\1-диметилпиперидин-4-амина (10а) в условиях, аналогичных условиям получения соединения (1). m/z = 568.19.
11. Синтез 5-(2,5-дихлоробензил)-М-(3-(4-метилпиперазин-1-ил)фенил)-5,6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамида
Figure imgf000027_0002
5-(2,5-дихлоробензил)-М-(3-(4-метилпиперазин-1 -ил)фенил)-5, 6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид (11) получают сочетанием 8-(трет- бутоксикарбонил)-5-(2,5-дихлоробензил)-5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-3-
25
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) карбоновой кислоты (1g) и 3-(4-метилпиперазин-1 -ил)анилина (11а) в условиях, аналогичных условиям получения соединения (1). m/z = 511.17.
12. Синтез 5-(2,5-дихлоробензил)-М-(4-(4-(диметиламино)пиперидин-1 -ил)-2- метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамида
Figure imgf000028_0001
1) . К раствору 68 мг (0.16 ммоль) (1е) в 1 мл 2-метоксиэтанола добавляют 39 мг (0.16 ммоль) 1-(4-амино-3-метоксифенил)-К1,М-диметилпиперидин-4-амина (12а). Реакционная смесь перемешивается в течение 18 часов при 1 10°С К смеси прибавляют насыщенный раствор агСОз, раствор экстрагируют этилацетатом и разделяют хроматографически. Получают: 27% (27 мг) продукта (12Ь).
2) К раствору (12Ь), полученного на предыдущей стадии (167 г, 0.26 ммоль) в 3 мл хлористого метилена добавляют 1 мл безводной трифторуксусной кислоты. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа, растворители удаляют, к остатку прибавляют 10 мл насыщенного водного раствора NaHC03 до рН 9. Полученную смесь экстрагируют дихллорметаном (4x5 мл), объединенные органические фазы высушивают, растворитель удаляют, остаток разделяют хроматографически. Получают: 50% (70 мг) 5-(2,5-дихлоробензил)-1Ч-(4-(4-(диметиламино)пиперидин-1 -ил)-2- метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамида (12); m/z = 541.21.
26
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) 13. Синтез 5-(2,5-дихлоробензил)-М-(2-изопропокси-5-метил-4-(пиперидин-4- ил)фенил)-5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамида
Figure imgf000029_0001
1) К раствору 68 мг (0.16 ммоль) 3-хлоро-5-(2,5-дихлоробензил)-6,7- дигидропиразино[2,3-с]пиридази-8(5Н)-карбоксилата (1е) в 1 мл 2-метоксиэтанола добавляют 56 мг (0.16 ммоль) производного анилина (13а). Реакционная смесь перемешивается в течение 18 часов при 110°С. К смеси прибавляют насыщенный раствор Na2C03l раствор экстрагируют этилацетатом и разделяют хроматографически. Получают: 30% (37 мг) продукта (13Ь).
2) К раствору (13Ь), полученного на предыдущей стадии (118 г, 0.26 ммоль) в 3 мл хлористого метилена добавляют 1 мл безводной трифторуксусной кислоты. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа, растворители удаляют, к остатку прибавляют 10 мл насыщенного водного раствора NaHC03 до рН 9. Полученную смесь экстрагируют дихллорметаном (4x5 мл), объединенные органические фазы высушивают, растворитель удаляют, остаток разделяют хроматографически. Получают: 50% (70 мг) 5-(2,5-дихлоробензил)- >1-(2-изопропокси-5-метил-4-(пиперидин-4- ил)фенил)-5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамида (13); m/z = 540.22.
14. Синтез других соединений изобретения
Соединения (14-21), (25) получают сочетанием 8-(трет-бутоксикарбонил)-5-(2,5- дихлоробензил)-5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-3-карбоновой кислоты (1д) и 3-(4-метилпиперазин-1-ил)анилина (11а) в условиях, аналогичных условиям получения соединения (1).
27
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Для синтеза соединений (22), (23), (24) вместо 8-(тре/т)-бутоксикарбонил)-5-(2,5- дихлоробензил)-5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-3-карбоновой кислоты (1 д) используют аналогичные замещенные производные 5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3- с]пиридазин-3-карбоновой кислоты, которые сочетают с амином (1h) либо в условиях, аналогичных условиям получения соединения (1).
Структуры и m/z соединений приведены в таблице.
Figure imgf000030_0001
28
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)
Figure imgf000031_0001
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)
Figure imgf000032_0001
Применение химических соединений по изобретению
Применение соединений по медицинским показаниям
Способ терапевтического применения соединений
Предмет данного изобретения также включает введение субъекту, нуждающемуся в соответствующем лечении, терапевтически эффективного количества соединения общей формулы I.
«Терапевтически эффективным количеством» называется такое количество соединения, которое необходимо для детектируемого уничтожения раковых клеток или ингибирования их роста или скорости распространения по организму, размера или количества опухолей, или других характеристик опухолевого заболевания. Точное требуемое количество может меняться от субъекта к субъекту в зависимости от вида, возраста и общего состояния пациента, тяжести заболевания, особенностей противоопухолевого агента, методики введения препарата, комбинированного лечения с другими препаратами и т.п.
Вещество, или фармацевтическая композиция, содержащая вещество, может быть введена в организм пациента в любом количестве и любым путем введения, эффективным для уничтожения опухолевых клеток или ингибирования их роста, а также для предотвращения метастазирования.
Разовые дозы противоопухолевых соединений изобретения предпочтительно формулируются в виде, удобном для введения в организм пациента. Выражение
«разовая доза» в терминах настоящего изобретения означает порцию противоопухолевого агента, подходящую для лечения пациента. Согласно существующей практике, совокупная дневная доза соединений и композиций, описанных в настоящем изобретении, назначается лечащим врачом с опорой на тщательное медицинское заключение. Конкретный терапевтически эффективный уровень дозировки для каждого конкретного пациента или организма зависит от ряда факторов, включая тип расстройства, тяжесть заболевания, активность конкретного используемого препарата, особенности фармацевтической композиции, возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол и диету пациента, способ и график введения, скорость метаболизма и/или выведения соединения, продолжительность лечения, лекарственные препараты,
30
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) используемые в комбинации или совместно с введением соединения из изобретения, и тому подобные факторы, хорошо известные в медицине.
После смешения лекарственного препарата с конкретным подходящим фармацевтически приемлемым носителем в желаемой дозировке, композиции, составляющие суть изобретения, могут быть введены в организм человека или других животных перорально, ректально, парентерально, интрацистернально, интравагинально, интраперитонально, местно (с помощью кожных пластырей, порошков, мазей или капель), сублингвально, буккально, в виде спрея для рта или носа и т.п.
Эффективная системная дозировка соединения, вводимая разово или в виде нескольких отдельных доз, как правило, лежит в диапазоне от 0.01 до 500 мг соединения на кг массы тела пациента, предпочтительно от 0.1 до 125 мг/кг. Обычно соединение вводится пациенту, нуждающемуся в таком лечении, в дневной дозировке ориентировочно от 50 до 2000 мг на пациента. Введение может осуществляться как разово, так и несколько раз в день, неделю (или любой другой временной интервал), или время от времени. Например, соединение может быть введено в организм пациента один или несколько раз в день на недельной основе (например, каждый понедельник) в течение неопределенного времени или в течение нескольких недель (например, 4-10 недель). Кроме того, соединение может вводиться в организм пациента ежедневно в течение определенного периода дней (например, 2-10 дней), а затем следует период без приема вещества (например, 1-30 дней). Такой цикл может повторяться неопределенное время или в течение заданного числа циклов, например 4-10 циклов. В качестве примера, соединение настоящего изобретения может вводиться в организм пациента ежедневно в течение 5 дней, затем следует перерыв на 9 дней, и так далее, повторяя цикл неопределенное число раз, или в течение 4-10 циклов.
Количество соединения, которое будет эффективным в лечении или профилактике конкретного расстройства или состояния, зависит, в частности, от хорошо известных факторов, влияющих на эффективную дозировку препаратов. Кроме того, опционально могут применяться измерения in vitro или in vivo для определения оптимального дозового диапазона. Грубым путем определения эффективной дозы может стать экстраполяция кривых доза - отклик, которые будут зависеть от модели тестирования in vitro или на животных. Точный уровень дозировки, определяемый лечащим врачом, зависит от хорошо известных факторов, включающих способ введения препарата, а также возраста, массы тела, пола и общего состояния здоровья пациента; характера, тяжести и клинического состояния заболевания; использования (или неиспользования) сопутствующей терапии; а также характера и степени генетических изменений в клетках пациента.
При приеме внутрь для лечения или подавления конкретного состояния заболевания или расстройства, эффективная дозировка соединения данного
31
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) изобретения может изменяться в зависимости от конкретного применяемого соединения, пути введения препарата в организм, условий и тяжести такого введения; состояния болезни, а также различного числа физических факторов, связанных с пациентом, проходящем лечение. В большинстве случаев удовлетворительный результат может быть достигнуть при введении пациенту соединения в дневной дозировке от около 0.01 мг/кг до 500 мг/кг, обычно между 0.1 и 125 мг/кг. Предполагаемая дневная дозировка, как ожидается, может изменяться в зависимости от способа введения в организм пациента. Так, уровень дозировки при парентеральном введении часто составляет от 10 до 20 % уровня пероральной дозировки.
В том случае, когда соединение данного изобретения используется как часть режима комбинированной терапии, доза каждого из компонентов комбинированной терапии вводится в течение требуемого периода лечения. Соединения, составляющие комбинированную терапию, могут вводиться в организм пациента как единовременно, в виде дозировки, содержащей все компоненты, так и в виде индивидуальных дозировок компонентов; кроме того, соединения комбинации могут быть введены в организм пациента в разное время в течение периода лечения, или одно из них может быть введено в качестве предварительной терапии для другого.
Фармацевтически приемлемые производные соединений
Соединения данного изобретения могут существовать в свободной форме в процессе обработки, или, если требуется, в виде фармацевтически приемлемой соли или другого производного. Используемый здесь термин «фармацевтически приемлемая соль» относится к таким солям, которые, в рамках проведенного медицинского заключения, пригодны для использования в контакте с тканями человека и животных без излишней токсичности, раздражения, аллергической реакции и т.д., и отвечают разумному соотношению пользы и риска. Фармацевтически приемлемые соли аминов, карбоновых кислот, фосфонатов и другие типы соединений хорошо известны в медицине. Подробное описание свойств таких солей дано Berge S.M., et al., в "Pharmaceutical Salts" J. Pharmaceutical Science, 66: 1-19 (1977), приведенном здесь в качестве ссылки. Соли могут быть получены in situ в процессе выделения или очистки соединений изобретения, а также могут быть получены отдельно, путем взаимодействия свободной кислоты или свободного основания соединения изобретения с подходящим основанием или кислотой, соответственно. Примером фармацевтически приемлемых, нетоксичных солей кислот могут служить соли аминогруппы, образованные неорганическими кислотами, такими как соляная, бромоводородная, фосфорная, серная и хлорная кислоты, или органическими кислотами, такими как уксусная, щавелевая, малеиновая, винная, янтарная или малоновая кислоты, или полученные другими методами, используемыми в данной области, например, с помощью ионного обмена. К другим фармацевтически приемлемым
32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) солям относятся адипинат, альгинат, аскорбат, аспартат, бензолсульфонат, бензоат, бисульфат, борат, бутират, камфорат, камфорсульфонат, цитрат, циклопентанпропионат, диглюконат, д од еци л сульфат, этансульфонат, формиат, фумарат, глюкогептонат, глицерофосфат, глюконат, гемисульфат, гептанат, гексанат, гидройодид, 2-гидрокси- этансульфонат, лактобионат, лактат, лаурат, лаурил сульфат, малат, малеат, малонат, метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, нитрат, олеат, оксалат, пальмитат, памоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, фосфат, пикрат, пивалат, пропионат, стеарат, сукцинат, сульфат, тартрат, тиоцианат, п-толуолсульфонат, ундеканат, валериат и подобные. Типичные соли щелочных и щелочноземельных металлов содержат натрий, литий, калий, кальций, магний и другие. Кроме того, фармацевтически приемлемые соли могут содержать, если требуется, нетоксичные катионы аммония, четвертичного аммония и амина, полученные с использованием таких противоионов, как галогениды, гидроксиды, карбоксилаты, сульфаты, фосфаты, нитраты, низшие алкил сульфонаты и арил сульфонаты.
Кроме того, термин «фармацевтически приемлемый сложный эфир», как он используется здесь, обозначает гидролизующийся in vivo сложный эфир, который легко разлагается в теле человека до исходных соединений или их солей. Подходящая эфирная группа включает, например, производные фармацевтически приемлемых алифатических карбоновых кислот, в частности алкановых, алкеновых, циклоалкановых и алкандиеновых кислот, в которых каждый алкильный или алкенильный компонент обычно имеет не более 6 углеродных атомов. Примерами конкретных эфиров могут служить производные формиатов, ацетатов, пропионатов, бутиратов, акрилатов и этилсукцинатов. Очевидно, что эфиры также могут быть образованы гидроксильной группой или группой карбоновой кислоты соединения изобретения.
Термин «фармацевтически приемлемая пролекарственная форма», в контексте данного изобретения, означает такие пролекарства из числа соединений, составляющих суть данного изобретения, которые пригодны для использования человеком и животными без излишней токсичности, раздражения, аллергической реакции и т.д., отвечают разумному соотношению пользы и риска. Термин «пролекарства» означает соединения, которые трансформируются in vivo с образованием исходного соединения указанной выше формулы, например, при гидролизе в крови.
Термин «сольват» относится к ассоциации или комплексу из одной или нескольких молекул растворителя и соединения по изобретению. Примеры растворителей, образующих сольваты, включают, но ими не ограничиваются, воду, изопропанол, этанол, метанол, ДМСО, этилацетат, уксусную кислоту и этаноламин. Термин «гидрат» относится к комплексу, где молекулами растворителя является вода.
33
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Фармацевтические композиции
Изобретение также относится с фармацевтическим композициям, которые содержат, по меньшей мере, одно из описанных здесь соединений (или пролекарственную форму, фармацевтически приемлемую соль или другое фармацевтически приемлемое производное) и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, растворителей и/или наполнителей. Данные композиции также могут содержать один или несколько дополнительных терапевтических агентов. С другой стороны, соединение данного изобретения может быть введено пациенту, нуждающемуся в соответствующей терапии, в комбинации с одним или более других терапевтических режимов (например, совместно с другими ингибиторами киназ, интерфероном, трансплантацией костного мозга, ингибиторами фарнезилтрансферазы, бисфосфонатами, талидомидом, противоопухолевыми вакцинами, гормональной терапией, антителами, облучением и т.д.). К примеру, дополнительными терапевтическими агентами для совместного введения или включения в фармацевтическую композицию с соединениями данного изобретения могут быть один или несколько других противоопухолевых агентов.
Фармацевтические композиции, заявляемые в данном изобретении, содержат соединения данного изобретения совместно с фармацевтически приемлемыми носителями, которые могут включать в себя любые растворители, разбавители, дисперсии или суспензии, поверхностно-активные вещества, изотонические агенты, загустители и эмульгаторы, консерванты, вяжущие вещества, смазочные материалы и т.д., подходящие для конкретной формы дозирования. Remington's pharmaceutical sciences (15th edition, E.W. Martin, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1975) раскрывает различные носители, использованные при разработке фармацевтических композиций и известные методы их приготовления. За исключением таких случаев, когда среда обычных носителей несовместима с соединением изобретения, например, при появлении любых нежелательных биологических эффектов и иных нежелательных взаимодействий с любым другим компонентом (компонентами) фармацевтической композиции, использование таких композиций находится в рамках данного изобретения. Материалы, которые могут служить фармацевтически приемлемыми носителями, включают, но не ограничиваются, моно- и олигосахаридами, а также их производными; солодом, желатином; тальком; эксципиентами, такими как: какао-масло и воск для суппозиториев; масла, такие как арахисовое, хлопковое, сафроловое, кунжутное, оливковое, кукурузное и соевое масло; гликоли, такие как пропиленгликоль; сложные эфиры, такие как этилолеат и этиллаурат; агар; буферные вещества, такие как гидроксид магния и гидроксид алюминия; альгиновая кислота; апирогенная вода; изотонический раствор, раствор Рингера; этиловый спирт и фосфатные буферные растворы. Также в составе композиции могут быть другие нетоксичные совместимые смазочные вещества, такие как
34
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) лаурилсульфат натрия и стеарат магния, а также красители, разделительные жидкости, пленкообразователи, подсластители, вкусовые добавки и ароматизаторы, консерванты и антиоксиданты.
Лекарственные формы
Предметом данного изобретения являются также лекарственные формы - класс фармацевтических композиций, состав которых оптимизирован для определённого пути введения в организм в терапевтически эффективной дозе. Лекарственные композиции данного изобретения могут быть введены в организм перорально, местно, ректально, внутриглазным способом, пульмональным, например, в виде ингаляционного спрея, или внутрисосудистым способом, интраназально, интраперитонально, подкожно, внутримышечно, интрастернально, а также инфузионным способом, в рекомендованных дозировках.
Лекарственная форма данного изобретения может содержать соединение описанной здесь формулы или его фармацевтически приемлемую соль, и дополнительный активный агент, например, выбранный из числа следующих: ингибитор киназы, антидепрессант, противоопухолевый препарат, противовирусный препарат, противовоспалительный препарат, противогрибковый препарат или соединение против сосудистой гиперпролиферации, и любой фармацевтически приемлемый носитель, или растворитель. Термин «фармацевтически допустимый носитель» означает носитель, который может быть введен в организм пациента совместно с соединением, составляющем суть данного изобретения, и который не разрушает фармакологической активности этого соединения, и является нетоксичным при введении в дозах, достаточных для доставки терапевтического количества соединения.
Лекарственные формы данного изобретения могут содержать составы, полученные методами использования липосом или микрокапсуляционные методы, методами приготовления наноформ препарата, и прочие примеры, известные в фармацевтике.
Применение соединений в комбинированной терапии
Несмотря на то, что соединения данного изобретения могут вводиться в качестве индивидуального активного фармацевтического средства, их также можно использовать в сочетании с одним или несколькими соединениями изобретения, или одним или несколькими другими агентами, в частности, другой агент может представлять собой 5- фтороурацил, афатиниб, бевацизумаб, бортезомиб, капецитабин, карбоплатин, цетуксимаб, цисплатин, циклофосфамид, дабрафениб, дексаметазон, доцетаксель, доксорубицин, энзалутамид, эпирубицин, эрлотиниб, этопозид, гемцитабин, ифосфамид, иматиниб, иринотекан, лапатиниб, леналидомид, леуковорин, мелфалан, метотрексат, митомицин, оксалиплатин, паклитаксель, панитумумаб, пеметрексед, преднизон, регорафениб, сорафениб, темозоломид, талидомид, трастузумаб, вемурафениб,
35
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) винкристин, афлиберцепт. При совместном приеме внутрь терапевтические агенты могут представлять собой разные лекарственные формы, которые вводятся одновременно или последовательно в разное время, либо терапевтические агенты могут быть объединены в одну лекарственную форму.
Фраза «комбинированная терапия» в отношении соединений данного изобретения в сочетании с другими фармацевтическими агентами, означает одновременный или последовательный прием всех агентов, который так или иначе обеспечит благоприятное воздействие сочетания лекарств. Совместное введение подразумевает, в частности, совместную доставку, например, в одной таблетке, капсуле, инъекции или в другой форме, имеющий фиксированное соотношение активных веществ, также как и одновременную доставку в нескольких, отдельных лекарственных формах для каждого соединения соответственно.
Таким образом, введение соединений данного изобретения может быть осуществлено в сочетании с дополнительными методами лечения, известными специалистам в области профилактики и лечения опухолевых заболеваний, включающими лучевую терапию, применение цитостатических и цитотоксических препаратов, других противоопухолевых средств и препаратов для подавления симптомов или побочных эффектов одного из лекарств.
Если лекарственная форма представляет собой фиксированную дозу, такая комбинация использует соединения данного изобретения в приемлемом дозовом диапазоне. Вещества данного изобретения также могут быть введены в организм пациента последовательно с другими противоопухолевыми или цитотоксическими агентами, в том случае, когда комбинация этих препаратов невозможна. Изобретение не ограничено последовательностью введения; соединения данного изобретения могут быть введены в организм пациента совместно, до или после введения другого противоопухолевого или цитотоксического препарата.
Характеристика биологической активности соединений
Ингибирование киназной активности
Для соединений, являющихся предметом данного изобретения, была изучена способность ингибировать киназу NUAK1. Активность и ингибирование киназы определялось в соответствии с известными протоколами. Мерой ферментативной активности служила скорость переноса меченого 33Р0 с АТФ на субстрат Chktide (KKKVSRSGLYRSPSMPENLNRPR), присоединённый к биоактивной поверхности микротитрационной подложки. По окончании периода инкубации (120 мин) подложку промывали 0,5% фосфорной кислотой, добавляли жидкий сцинтиллянт, и на основании подсчёта количества сцинтилляций на жидкостном сцинтилляционном детекторе определяли количество перенесённого фосфата. IC50 соответствовало концентрации
36
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) вещества, уменьшающей на 50% количество 33Р, перенесённого на субстрат, связанный с подложкой. Результаты проведенных экспериментов представлены в таблице:
Ns Диапазон IC50 N2 Диапазон IC50 Ns Диапазон 1С
1 < 10 нМ 2 < 100 нМ 3 < 100 нМ
4 < 1 нМ 5 < 100 нМ 6 < 10 нМ
7 < 100 нМ 8 < 100 нМ 9 < 1 нМ
10 < 10 нМ 1 1 < 10 нМ 12 < 100 нМ
13 < 100 нМ 14 < 10 нМ 15 < 10 нМ
16 < 10 нМ 17 < 10 нМ 18 < 10 нМ
19 < 10 нМ 20 < 10 нМ 21 < 10 нМ
22 < 10 нМ 23 < 10 нМ 24 < 10 нМ
25 < 10 нМ
Наибольшую ингибирующую активность в отношении киназы NUAK1 проявили соединения 4, 9, ингибирующие киназу NUAK1 в концентрации менее 1 нМ.
Ингибирование инвазивности опухолевых клеточных линий в экспериментах in vitro
Эксперименты по ингибированию инвазивности in vitro были проведены на клеточных линиях, в которых был обнаружен высокий уровень экспрессии NUAK1. В постановке эксперимента опухолевые клетки инкубировались в камерах на подложке, содержащий матригель - искусственный аналог внеклеточного матрикса. После 24- часовой инкубации с помощью светового микроскопа подсчитывали количество клеток, оказавшихся по другую сторону подложки. Эксперимент проводили в четырех постановках: контроль (бессывороточная среда), инкубация в присутствии инсулинового фактора роста (IGF-1 ), инкубация в присутствии IGF-1 и ингибитора NUAK1 и инкубация в присутствии только ингибитора NUAK1.
В ходе эксперимента было установлено, что ингибитор NUAK1 5-(2,5- дихлоробензил)-1М-(4-(4-метилпиперазин-1 -карбонил)фенил)-5, 6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид (соединение 1 ), а также соединения 4, 10 и 21 существенно уменьшают способность клеток рака груди (MDA-MB-231 ), рака яичника (SKOV3), рака простаты (РСЗ), рака лёгкого (Н1299) и рака поджелудочной железы (PANC1 ) разрушать матригель под действием инсулинового фактора роста в концентрации менее 1 мкМ (см. Рисунок 1 ).
Таким образом, соединения изобретения могут предотвращать разрушение межклеточного матрикса матриксными металлопротеазами и препятствовать образованию метастазов.
37
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Влияние ингибиторов NUAK1 на миграцию опухолевых клеток
Влияние ингибиторов NUAK1 на миграцию опухолевых клеток было исследовано в тесте заживления ран на клеточной линии SKOV3 (клеточная линия аденокарциномы яичника человека). Для проведения эксперимента клеточную линию рассаживали на 6- луночные плашки до 90% конфлюэнтности. На дне плашки наконечником для дозаторов (1000 мкл) чертилась прямая линия. После этой процедуры прикрепленные клетки на чашке отмывались от плавающих клеток и добавлялось исследуемое соединение в необходимых концентрациях (100 нМ и 1 мкМ). Участки чашек с «раной» фотографировали с помощью инвертированного светового микроскопа Olympus IX-51 , координаты точки фиксировались. Через 24 часа среду меняли на свежую, после чего проводили повторное фотографирование тех же участков «раны».
Проводилось 5 измерений ширины «раны» для каждой из двух «ран». Таким образом, в одной временной точке для каждой клеточной линии проводилось 10 измерений. Затем рассчитывался процент миграции клеток, отражающий расстояние, на которое края «раны» приблизились друг к другу за 24 часа.
Было обнаружено, что ингибитор NUAK1 5-(2,5-дихлоробензил)-1Ч-(4-(4- метилпиперазин-1-карбонил)фенил)-5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4- карбоксамид (соединение 1) в концентрации 1 мкМ на 55% снижает миграционную способность клеток рака яичника SKOV3.
Влияние ингибиторов NUAK1 на морфологию цитоскелета
Изучалось строение актинового цитоскелета и фокальных контактов у клеток в четырех образцах: 1) контроль; 2) + 100 нг/млЮР-1 ; 3) + 100 нг/мл IGF-1 + 1 мкМ ингибитора NUAK1 (соединение 1); 4) + 1 мкМ ингибитора NUAK1 (соединение 1). Действующие вещества (IGF-1 , активирующий сигнальные пути, которые приводят к метастазированию, и ингибитор NUAK1) добавляли в среду для культивирования после прикрепления клеток (через 2-3 часа после посадки на стекла) и культивировали клетки 24 часа. Эксперименты проводились на клетках рака лёгкого, а также на клеточной линии IAR-2 (иммортализованная линия клеток печени крыс).
В результате эксперимента было обнаружено, что ингибитор NUAK1 в клетках рака лёгкого вызывает увеличение стресс-фибрилл, и увеличивает количество и размер фокальных контактов; количество подвижных клеток с большим количеством филоподий и мелкими фокальными контактами уменьшается.
В результате эксперимента на клеточной линии IAR-2 (иммортализованная линия клеток печени крыс) было обнаружено влияние ингибитора NUAK1 на эпителиально- мезенхимальный переход. Контрольные клетки имеют эпителиальную морфологию, в которой большинство клеток объединено в плотные островки. Одиночные клетки, как правило, имеют округлую морфологию; актин представлен в основном кольцевым пучком,
38
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) расположенным на краю клетки. Под действием IGF-1 клетки IAR-2 становятся более подвижными, вытянутыми (фибробластоподобными), теряют кольцевой пучок и претерпевают ЭМП (эпителио-мезенхимальный переход). В присутствии ингибитора NUAK1 (соединение 1) клетки, находящиеся под действием IGF-1 , становятся более округлыми и распластанными, местами восстанавливаются краевые пучки (подавляется ЭМП). Морфологические изменения клеток показаны на рисунке 2.
Проведенные эксперименты демонстрируют, что ингибиторы NUAK1 блокируют эпителио-мезенхимальный переход, вызванный активацией сигнального пути IGFR-1 - Akt - m-TOR, и таким образом останавливают один из наиболее важных механизмов метастазирования.
Список сокращений
ТСХ - тонкослойная хроматография;
ТГФ - тетрагидрофуран;
DMPA (ДМПА) - М,М'-диметил-1 ,3-пропанодамин (A/,/V'-Dimethyl-1 ,3-propanediamine); ЭМП - эпителио-мезенхимальный переход;
IGF-1 - инсулиновый фактор роста;
LC/MS - жидкостная хроматография-масс-спектрометрия (Liquid chromatography- mass spectrometry)
DMA (ДМФА) - Ν,Ν - диметилацетамид (Dimethylacetamide);
HATU - 1-[Бис(диметиламино)метилен]-1 Н-1 ,2,3-триазоло[4,5-Ь]пиридиний 3-оксид гексафторфосфат, 1-[Bis(dimethylamino)methylene]-1 Н-1 ,2,3-triazolo[4,5-b]pyridinium 3-oxid hexafluorophosphate;
DMF - N,N - диметилформамид (N,N-Dimethylformamide);
TFA - трифторуксусная кислота;
TEA - триэтилацетат.
Примеры фармацевтических композиций
Соединения, описанные в данном изобретении, могут быть использованы для профилактики и лечения заболеваний, например, в виде следующих составов (в приведенных ниже примерах под «Соединением» понимается активный ингредиент):
Таблетка I
мг/таблетка
Соединение 100
Лактоза Ph. Eur 182.75
39
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Кроскармеллоза натрия 12.0
Кукурузный крахмал (5% w/v паста) 2.25
Стеарат магния 3.0
Таблетка II
мг/таблетка
Соединение 50
Лактоза Ph. Eur 223.75
Кроскармеллоза натрия 6.0
Кукурузный крахмал 15
Поливинилпироллидон (5% w/v паста) 2.25
Стеарат магния 3.0
Таблетка III
мг/таблетка
Соединение 1 0
Дополнительный противоопухолевый агент ....1.0
Лактоза Ph. Eur 93.25
Кроскармеллоза натрия 4.0
Кукурузный крахмал (5% w/v паста) 0.75
Стеарат магния 1.0-76
Капсула
мг/капсула
Соединение 10
Лактоза Ph. Eur 488.5
Магнезия 1 -5
Состав для инъекций I (с концентрацией активного агента 50 мг/мл)
40
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Соединение 5.0 % об.
1М раствор гидроксида натрия 15.0% об.
1 М раствор соляной кислоты - до рН 7.6
Полиэтиленгликоль 400 4.5% об.
Вода для инъекций - до 100%
Аэрозоль I
Соединение
Триолеат сорбитана
Трихлорфторметан
Дихлордифторметан
Данные составы могут быть приготовлены в соответствии со стандартными фармацевтическими методиками. Таблетки I-III могут быть покрыты кишечнорастворимой оболочкой с использованием, например, фталата ацетата целлюлозы. Аэрозольный состав может быть использован в сочетании со стандартными диспенсерами; в качестве суспендирующего агента вместо триолеата сорбитана и соевого лецитина может быть использован моноолеат сорбитана, полуолеат сорбитана, полисорбат 80, олеат полиглицерина или олеиновая кислота.
41
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)

Claims

Формула изобретения
1. Применение соединения формулы I
Figure imgf000044_0001
или его энантиомера или фармацевтически приемлемой соли, сольвата или гидрата в качестве ингибитора NUAK1 киназы,
где:
LA представляет собой СН2 или СН(СН3);
LB представляет собой C(0)NH или NH;
цикл А представляет собой фенил, опционально замещенный 1 -3 группами RA;
RA выбирается независимо и представляет собой галоген, частично или полностью галогенированный С1-5-алкил, ОС^-алкил;
цикл В представляет собой фенил или 6-членный гетероарильный цикл, содержащий 1 -2 атома N; цикл В необязательно содержит 1 -3 заместителя RB;
RB выбирается независимо и представляет собой Lc-Rc, Lc-H, галоген, частично или полностью галогенированный С1-5-алкил;
Lc представляет собой ковалентную химическую связь, О, ОСН2 или С(О);
Rc выбирается независимо и представляет собой С1-3-алкил, 4-6 членный гетероалициклил, содержащий 1-2 атома N и 0-1 атом О; Rc необязательно содержит 1 -3 заместителя RD;
RD выбирается независимо и представляет собой галоген, СН3, NHRF, N(RF)2 или 5-6 членный гетероалициклил, содержащий 0-1 атом N и 0-1 атом О; RD необязательно содержит 1 -2 заместителя, которые независимо выбираются из Ci-з-алкилов;
RF выбирается независимо и представляет собой С -3-алкил.
2. Применение по п.1 , в котором:
LA представляет собой СН2;
LB представляет собой C(0)NH;
цикл А представляет собой фенил, опционально замещенный 1 -3 группами RA;
RA выбирается независимо и представляет собой галоген или CF3;
42
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) цикл В представляет собой фенил; цикл В необязательно содержит 1-3 заместителя
RB;
RB выбирается независимо и представляет собой Lc-Rc, Lc-H;
Lc представляет собой ковалентную химическую связь, О, ОСН2 или С(О);
Rc выбирается независимо и представляет собой 4-6 членный гетероалициклил, содержащий 1-2 атома N и 0-1 атом О; Rc необязательно содержит 1-3 заместителя RD;
RD выбирается независимо и представляет собой СН3, NHRF, N(RF)2 или 5-6 членный гетероалициклил, содержащий 0-1 атом N и 0-1 атом О; RD необязательно содержит 1-2 заместителя, которые независимо выбираются из С1-3-алкилов;
RF выбирается независимо и представляет собой С з-алкил.
3. Применение по п.1 , в котором соединение общей формулы I выбрано из группы:
5-(2,5-дихлоробензил)-г>1-(4-(4-метилпиперазин-1-карбонил)фенил)-5,6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,6-дихлоро-3-фторобензил)-М-(4-(4-метилпиперазин-1-карбонил)фенил)-5,6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)-М-(3-(4-метилпиперазин-1-карбонил)фенил)-5,6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)-1 -(4-(4-(диметиламино)пиперидин-1-карбонил)фенил)-5,6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)-М-(2-метокси-4-(4-метилпиперазин-1-карбонил)фенил)- 5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)-1\1-(3-метокси-4-(4-метилпиперазин-1-карбонил)фенил)- 5,6,7, 8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)-М-(5-(4-(диметиламино)пиперидин-1-карбонил)пиримидин-2- ил)-5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)-Ы-(5-(4-(диметиламино)пиперидин-1-карбонил)пиридин-2-ил)- 5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)-М-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)фенил)-5,6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)-1\1-(4-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)фенил)-5,6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)-М-(3-(4-метилпиперазин-1-ил)фенил)-5,6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)-М-(4-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-2-метоксифенил)- 5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)-М-(2-изопропокси-5-метил-4-(пиперидин-4-ил)фенил)-5,6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
43
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) 5-(2,5-дихлоробензил)-г>1-(4-(4-изопропилпиперазин-1-карбонил)фенил)-5,6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)-М-(4-(3,3-диметилпиперазин-1-ил)фенил)-5,6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)-М-(4-(4-изопропилпиперазин-1-ил)фенил)-5,6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)-М-(4-(1-изопропилпиперидин-4-ил)фенил)-5,6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)-1\1-(4-(4-морфолинопиперидин-1-ил)фенил)-5,6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)-М-(4-(4-(пирролидин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)-5,6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)-1\1-(4-(4-(изопропил(метил)амино)пиперидин-1-ил)фенил)- 5,6,7,8-тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид;
5-(2,5-дихлоробензил)- -(4-(4-(изопропиламино)пиперидин-1 -ил)фенил)-5, 6,7,8- тетрагидропиразино[2,3-с]пиридазин-4-карбоксамид.
4. Применение по п.1 для получения фармацевтической композиции для лечения и/или предотвращения заболевания, связанного с аберрантной активностью NUAK1 киназы.
5. Применение по п. 4 для ингибирования роста опухоли и/или лечения и/или предотвращения метастазирования.
6. Применение по п. 4, в котором заболевание представляет собой немелкоклеточный рак легкого, колоректальный рак, тройной негативный рак молочной железы, остеосаркому, рак поджелудочной железы, гепатоцеллюлярную карциному, аденокарциному поджелудочной железы, множественную миелому, ангиоиммунобластную Т-клеточную лимфому, рак яичника, рак простаты, меланому.
7. Фармацевтическая композиция для лечения и/или предотвращения заболевания, связанного с аберрантной активностью NUAK1 киназы, характеризующаяся тем, что содержит эффективное количество соединения формулы I и фармацевтически приемлемый носитель, растворитель и/или наполнитель.
8. Фармацевтическая композиция по п.7, в котором заболевание представляет собой онкологическое заболевание.
44
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)
9. Фармацевтическая композиция по п.8, в котором онкологическое заболевание представляет собой немелкоклеточный рак легкого, колоректальный рак, тройной негативный рак молочной железы, остеосаркому, рак поджелудочной железы, гепатоцеллюлярную карциному, аденокарциному поджелудочной железы, множественную миелому, ангиоиммунобластную Т-клеточную лимфому, рак яичника, рак простаты, меланому.
10. Фармацевтическая композиция по п. 7, которая дополнительно содержит другой противоопухолевый агент.
11. Фармацевтическая композиция по п. 10, в которой противоопухолевый агент представляет собой 5-фтороурацил, афатиниб, бевацизумаб, бортезомиб, капецитабин, карбоплатин, цетуксимаб, цисплатин, циклофосфамид, дабрафениб, дексаметазон, доцетаксель, доксорубицин, энзалутамид, эпирубицин, эрлотиниб, этопозид, гемцитабин, ифосфамид, иматиниб, иринотекан, лапатиниб, леналидомид, леуковорин, мелфалан, метотрексат, митомицин, оксалиплатин, паклитаксель, панитумумаб, пеметрексед, преднизон, регорафениб, сорафениб, темозоломид, талидомид, трастузумаб, вемурафениб, винкристин, афлиберцепт.
45
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)
PCT/RU2016/000157 2015-03-23 2016-03-22 Применение новых химических соединений (варианты) в качестве ингибиторов nuak1 киназы для лечения онкологических заболеваний WO2016153394A1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2015110071 2015-03-23
RU2015110071A RU2015110071A (ru) 2015-03-23 2015-03-23 Применение новых химических соединений (варианты) в качестве ингибиторов nuak1 киназы для лечения онкологических заболеваний

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2016153394A1 true WO2016153394A1 (ru) 2016-09-29

Family

ID=56979130

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2016/000157 WO2016153394A1 (ru) 2015-03-23 2016-03-22 Применение новых химических соединений (варианты) в качестве ингибиторов nuak1 киназы для лечения онкологических заболеваний

Country Status (2)

Country Link
RU (1) RU2015110071A (ru)
WO (1) WO2016153394A1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11040027B2 (en) 2017-01-17 2021-06-22 Heparegenix Gmbh Protein kinase inhibitors for promoting liver regeneration or reducing or preventing hepatocyte death

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2942001A (en) * 1956-11-16 1960-06-21 Ciba Pharm Prod Inc Piperazo-pyridazines
WO2012048259A2 (en) * 2010-10-08 2012-04-12 Xcovery Holding Company, Llc Substituted pyridazine carboxamide compounds
WO2015047133A1 (ru) * 2013-09-26 2015-04-02 Общество С Ограниченной Ответственностью "Отечественные Фармацевтические Технологии" Новые химические соединения (варианты) и их применение для лечения онкологических заболеваний

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2942001A (en) * 1956-11-16 1960-06-21 Ciba Pharm Prod Inc Piperazo-pyridazines
WO2012048259A2 (en) * 2010-10-08 2012-04-12 Xcovery Holding Company, Llc Substituted pyridazine carboxamide compounds
WO2015047133A1 (ru) * 2013-09-26 2015-04-02 Общество С Ограниченной Ответственностью "Отечественные Фармацевтические Технологии" Новые химические соединения (варианты) и их применение для лечения онкологических заболеваний

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SOURAV BANERJEE ET AL.: "Characterization of WZ4003 and HTH-01-015 as selective inhibitors of the LKB1- tumour-suppressor-activated NUAK kinases", BIOCHEM J., vol. 457, 1 January 2014 (2014-01-01), pages 215 - 225, XP055281843 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11040027B2 (en) 2017-01-17 2021-06-22 Heparegenix Gmbh Protein kinase inhibitors for promoting liver regeneration or reducing or preventing hepatocyte death

Also Published As

Publication number Publication date
RU2015110071A (ru) 2016-10-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102236605B1 (ko) 피리도피리미딘온 cdk2/4/6 억제제
US20210163464A1 (en) Pyridine compound
JP2021176857A (ja) Ｒｓｋ阻害剤として有用なカルボキサミド誘導体
EA028175B1 (ru) Производные пиразолопирролидин-4-она в качестве ингибиторов вет и их применение при лечении заболевания
JP6846574B2 (ja) スルホンアミド化合物およびその使用
JP2019509990A (ja) チェックポイントキナーゼ１（ｃｈｋ１）阻害剤として有用な３，５−二置換ピラゾール、並びにその調製及び用途
CN110461853A (zh) 苯并噻吩雌激素受体调节剂
EA019534B1 (ru) ПРОИЗВОДНЫЕ 3-(3-ПИРИМИДИН-2-ИЛБЕНЗИЛ)-1,2,4-ТРИАЗОЛО[4,3-b]ПИРИДАЗИНА В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ Met КИНАЗЫ
JP7247092B2 (ja) キナーゼ阻害剤としての置換された縮合ヘテロアリール化合物及びその用途
CN108699024A (zh) 苯并噻吩基选择性雌激素受体下调剂化合物
CN114728945B (zh) 3,5-二取代吡唑化合物作为激酶抑制剂及其应用
CN107531683B (zh) Usp7抑制剂化合物及使用方法
CA3147266C (en) Imidazo[4,5-c]pyridine derivatives as toll-like receptor agonsits
US10501466B2 (en) WDR5 inhibitors and modulators
CA3105681A1 (en) Pyridazinone derivative
US20220348583A1 (en) Perk inhibiting imidazolopyrazine compounds
ES2927529T3 (es) Compuesto heterocíclico condensado
KR20130118731A (ko) 항증식성 질환 치료에 사용하기 위한 ｐｉ3ｋ 억제제로서 피페라지노트리아진
US10414767B2 (en) Deuterated quinazolinone compound and pharmaceutical composition comprising same
CA3000565A1 (en) 2-aminoquinazoline derivatives as p70s6 kinase inhibitors
WO2016153394A1 (ru) Применение новых химических соединений (варианты) в качестве ингибиторов nuak1 киназы для лечения онкологических заболеваний
KR20130093140A (ko) 옥사졸로[5,4-b]피리딘-5-일 화합물 및 암의 치료를 위한 그의 용도
CN108117551B (zh) 取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)脲类化合物及其抗肿瘤用途
KR20220133874A (ko) 매크로사이클릭 화합물
CN113493436B (zh) 胺基取代吡啶衍生物及其制法和药物组合物与用途

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 16769162

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

32PN Ep: public notification in the ep bulletin as address of the adressee cannot be established

Free format text: NOTING OF LOSS OF RIGHTS PURSUANT TO RULE 112(1) EPC (EPO FORM 1205N DATED 17/01/2018)

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 16769162

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1