KR20180105700A - 체크포인트 키나아제 1(chk1) 억제제로서 유용한 3,5-이치환된 피라졸, 및 이의 제조 및 적용 - Google Patents

체크포인트 키나아제 1(chk1) 억제제로서 유용한 3,5-이치환된 피라졸, 및 이의 제조 및 적용 Download PDF

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Abstract

Chk1의 강력한 억제제는 하기 구조식 (I)을 갖는다. Chk1 억제제를 포함하는 약제 조성물, 이의 용도, 및 이의 제조 공정이 제공된다:
Figure pct00023

Description

체크포인트 키나아제 1(CHK1) 억제제로서 유용한 3,5-이치환된 피라졸, 및 이의 제조 및 적용
본 발명은 체크포인트 키나아제 1(Chk1)의 강력한 억제제인 3,5-이치환된 피라졸 코어를 갖는 화합물에 관한 것이다. 더욱 상세하게, 본 발명은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 기하 이성질체, 거울상 이성질체, 부분입체이성질체, 라세미체, 약제학적으로 허용되는 염, 전구약물, 용매화물, 또는 수화물, 이러한 화합물을 포함하는 약제 조성물, 및 이러한 화합물을 제조하는 방법을 제공한다. 본 화합물은 Chk1 억제제로서 작용하고, Chk1의 구성적 활성화 또는 DNA 복제에서 높은 내재성 데옥시리보핵산(DNA) 손상 또는 병변에 의해 특징되는 암의 치료에서 유용하다. 본 발명은 또한, 본 화합물을 사용함으로써 암을 치료하는 방법에 관한 것이다.
DNA를 함유한 모든 세포 및 세포 기관에서 일어나는 DNA 손상은 DNA 복제 동안 발생하는 오류뿐만 아니라 DNA 구조내에서 화학적으로 변형되거나 인터칼레이션시키는 작용제로 인해 발생할 수 있다. 이러한 DNA 교체는 DNA 복제 G1/S 체크포인트 또는 G2/M 체크포인트를 활성화시키는데, 이는 각각 G1에서 S로 또는 G2에서 유사분열로 세포 주기 진행을 억제한다. 세포 주기 정지는 항암제 또는 이온화 방사선으로 처리된 암에서 손상된 DNA를 세포가 복구할 수 있게 하여, 이에 따라, 딸 세포로의 유전적인 오류의 전파를 방지할 수 있게 한다.
DNA 손상 복원 및 세포 주기 조절 단백질은 최근에, 화학요법 또는 이온화 방사선과 병용하여 암의 치료를 위한 분자 약물 타겟으로서 주목을 받고 있다. 폴리-아데노신 디포스페이트-리보오스 폴리머라아제-1(PARP-1), DNA-의존 단백질 키나아제(DNA-PK), 모세혈관 확장성 운동실조-관련(ATR) 단백질 키나아제 및 체크포인트 키나아제 1(Chk1)의 소분자 억제제를 포함하는, DNA 복원 및 세포 주기 조절과 연관된 단백질의 다수의 소분자 억제제가 현재 개발되고 있다.
Chk1은 보존된 세린/트레오닌 단백질 키나아제이다. ATR의 활성화는 Chk1을 포스포릴화하며, 이는 Cdc25A 및 Cdc25C를 비활성화시켜 각각 S 및 G2/M 정지를 초래한다(Chen T. 등, Drug Discov Today 17, 194-202, 2012). 다수의 종양이 G1 체크포인트에서 부족하여, 이를 S 및 G2 체크포인트에 의존적이게 하여 DNA 손상을 복원하고 생존한다는 것이 관찰되었다(Janetka J. W. 등, Opinion in Drug Discov Develop 10:473, 2007). S 및 G2 체크포인트는 Chk1에 의해 조정된다. 이에 따라, Chk1은 DNA 손상에 응하여 활성화되는 신호 전달 경로에서 주요 작용제(major player)로서 작용한다.
Chk1의 억제는 S 및 G2 체크포인트를 폐지시켜, DNA 복원을 방해하고 세포 주기 정지를 중단시키고 심지어 DNA 손상의 부재 하에서 증가된 종양 세포사를 야기시키는 것으로 나타났다. 여러 Chk1 억제제는 임상 개발로 발전하였다. MK-8776(Daud A.L. 등, J Clin Oncol 33:1060-1066, 2015). Chk1 억제제 LY2603618(Doi T. 등 Anticancer Drugs. 2015 Aug 18.[Epub ahead of print]) 및 GDC-0425(AACR 2015, Philadelphia, Pennsylvania)는 단일요법으로서 및 겜시타빈과 병용하여 용인되었다. 임상적 효능의 초기 증거가 관찰되었다. 유방, 난소 또는 전립선암에 걸린 환자에서 LY2606368의 II상 연구는 진행 중에 있다(ClinicalTrials.gov 식별자: NCT02203513).
Chk1 억제제는 치료의 감수성을 증가시키기 위해, S 및 G2 중지를 야기시키는 항-대사물질 및 DNA-손상제(예를 들어, 겜시타빈, 이리노테칸, 토포테칸, 시스플라틴, 이온화 방사선 및 도세탁셀)와 병용하여 사용하기 위해 개발되었다(Koh S-B. 등 Cancer Res 75:3583-3595, 2015; Morgan M.A. 등 Cancer Discov 4:280-291, 2014.).
KRAS는 인간 암에서 가장 흔한 돌연변이된 종양 유전자들 중 하나이며, KRAS-돌연변이 종양에 대한 임상적으로 효과적인 치료법은 아직 개발되지 않았다. KRAS-돌연변이 암은 증가된 Chk1 및 MK2 활성을 나타낸다. Chk1 및 MK2의 동시 표적화는 KRAS-돌연변이 세포의 유사분열 파국을 초래하고, 환자로부터 직접적으로 단리된 KRAS- 또는 BRAF-돌연변이 종양 세포에서 아폽토시스성 세포사를 유도한다. Chk1 억제제와 MK2 억제제의 조합은 KRAS- 또는 BRAF-유래 암의 치료를 위한 치료 전략을 제공할 수 있다(Dietlein F. 등, Cell 162: 146-159, 2015).
ATR, Chk1, 및 WEE1 모두는 마우스에서 배아 발달을 위해 요구되는 필수 단백질이다(Brown and Baltimore, 2000; Liu 등, 2000; Tominaga 등, 2006). 필수적인 역할과 일치하여, 이러한 체크포인트 키나아제를 엔코딩하는 유전자의 동형 접합성 비활성화 돌연변이는 암에서 관찰되지 않았다. 그러나, 작은 하위세트의 인간 종양은 ATR 또는 Chk1에서 이형 접합성 돌연변이를 나타내서(Bertoni 등, 1999; Lewis 등, 2005; Zighelboim 등, 2009), 감소된 단백질 발현을 야기시킨다. 당업자의 지식에 WEE1에서의 돌연변이는 보고되지 않았다. 그러나, WEE1은 마이크로RNA의 암-관련 발현과 같은 다른 메커니즘을 통해 하향조절될 수 있다(Butz 등, 2010; Tili 등, 2011). ATR, Chk1, 또는 WEE1의 내재적인 감소된 발현을 갖는 암 세포가 저농도의 체크포인트 키나아제 억제제에 반응할 수 있고, 이에 의해 정상 세포가 아껴질 수 있다는 것이 가능하다.
다른 한편으로, ATR, Chk1, 및 WEE1은 또한, 인간 암의 하위세트에서 과발현된다(Iorns 등, 2009; Mir 등, 2010; Cole 등, 2011; Magnussen 등, 2012; Parikh 등, 2014). 일부 경우에, 체크포인트 키나아제는 상승된 복제 스트레스에 대처하기 위해 세포 반응의 일부로서 상향 조절될 수 있다(Sørensen and Syljuasen, 2012; Lecona and Fernandez-Capetillo, 2014). 예를 들어, Myc 증폭은 상승된 Chk1 수준 및 Chk1 억제제에 대한 증가된 감수성과 연관되어 있다(Cole 등, 2011; Hoglund 등, 2011). 이에 따라, 아마도, 이러한 세포는 높은 수준의 ATR, Chk1, 또는 WEE1에 의존하여 생존할 것이다. 이에 따라, ATR, Chk1, 또는 WEE1의 억제제는 잠재적으로, 높은 수준의 이러한 키나아제를 본질적으로 발현시키는 암 세포에 대해 보다 독성적일 수 있다. 이를 종합하면, 이는 암 세포의 ATR, Chk1, 또는 WEE1의 비정상적인 낮은 발현, 또는 높은 발현이 이러한 체크포인트 키나아제의 억제제에 대한 감수성을 잠재적으로 증가시킬 수 있는 복잡한 그림(complex picture)을 생성시킨다. CHK1 및 WEE1 억제가 특정 타입의 인간 암에서 치료 효능을 상승적으로 상승시키기 위해 결합한다는 것이 매우 설득력이 있다.
단백질 p53은 종양 저해제 단백질이다. DNA 손상 시에, p53은 p53-의존 G1 중지를 유도하기 위해 안정화되고 활성화되어, 아폽토시스 또는 DNA 손상을 야기시킨다. 모든 암 중 절반 이상은 p53에 대해 기능적으로 결함이 있다. 이러한 p53-결핍 세포는 G1/S 체크포인트에서 중지하는 데 실패하여, 이를 생존 능력 및 복제를 위한 G2/M 체크포인트에 더욱 의존적이게 만든다. G2/M 체크포인트의 기능을 차단하는 Chk1 억제제는 결장, 유방, 및 전립선에서와 같은 일부 p53-결핍 종양 및 백혈병과 관련된 것에서 더욱 현저한 상승 효과를 갖는다(Chen T 등, Drug Discov Today 17, 194-202, 2012; Ma C.X. 등, J Clin Invest. 122:1541-1552, 2012).
예를 들어, WO 2006/021002 A3호, WO 2006/014359 A3호, 및 WO 02/070494 A1호에 기술된 아릴- 및 헤테로아릴-치환된 우레아 화합물; WO 2012/064548 A1호 및 WO 2010/077758 A1호에 기술된 아미노피라졸 화합물; WO 2006/105262 A1호에 기술된 치환된 우레아 화합물; EP 2 305 671 A1호에 기술된 티오펜 및 티아졸 유도체; 및 US 2005/0148643 A1호에 기술된 카르바메이트 화합물을 포함하는 Chk1 억제제가 개시되었다.
그러나, Chk1의 강력한 억제제이고 암의 치료를 위해 유익한 신규한 화합물이 여전히 요구되고 있다. 본 발명은 이러한 요구를 다룬다.
본 발명은 3,5-이치환된 피라졸 코어를 갖는 Chk1 억제제에 관한 것이다.
본 발명의 일 양태는 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 기하 이성질체, 거울상 이성질체, 부분입체이성질체, 라세미체, 전구약물, 용매화물, 또는 수화물을 제공하는 것이다:
Figure pct00001
상기 식에서, R, R1, R2, R3, R4 및 R5는 명세서에서 정의된 바와 같다.
본 발명의 다른 양태는 치료학적 유효량의 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 기하 이성질체, 거울상 이성질체, 부분입체이성질체, 라세미체, 전구약물, 용매화물, 또는 수화물, 및 이를 위한 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 약제 조성물을 제공하는 것이다. 본 발명의 약제 조성물은 Chk1의 억제에 효과적이고, 이에 따라, 암을 치료하는 데 유용하다.
본 발명의 다른 양태는 암을 치료하는 데 유용한, Chk1을 억제하기 위한 약제의 제조에서, 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 기하 이성질체, 거울상 이성질체, 부분입체이성질체, 라세미체, 전구약물, 용매화물, 또는 수화물의 용도를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 양태는 대상체에서 암의 성장이 억제되는 것을 필요로 하는 대상체에 치료학적 유효량의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 기하 이성질체, 거울상 이성질체, 부분입체이성질체, 라세미체, 전구약물, 용매화물, 또는 수화물을 투여하는 것을 포함하는 암을 치료하는 방법을 제공하는 것이다. 화학식 (I)의 화합물은 단독으로 또는 다른 치료제와 병용하여 사용될 수 있다.
본 발명의 다른 양태는 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 기하 이성질체, 거울상 이성질체, 부분입체이성질체, 라세미체, 전구약물, 용매화물, 또는 수화물을 제조하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 이러한 양태 및 다른 양태는 하기 상세한 설명으로부터 명백하게 될 것이다.
도 1은 ChK1 억제제 및 SN-38(200 nM)로의 동시-치료에 의한 ChK1 포스포릴화에 대한 웨스턴 블롯 분석을 도시한 것이다.
도 2는 SN-38로 사전처리된 HT-29 세포에서 ChK1 억제제에 의한 ChK1 포스포릴화에 대한 웨스턴 블롯 분석을 도시한 것이다.
도 3은 HT-29 이종이식 마우스에서 화합물 3의 PK 연구를 도시한 것이다.
도 4는 HT-29 이종이식 모델에서 화합물 3 및 CPT-11의 병용에 의한 종양 성장 억제를 도시한 것이다.
도 5는 LoVo 이종이식 모델에서 화합물 3에 의한 용량-의존 종양 성장 억제를 도시한 것이다.
본 발명은 본 발명의 다양한 구현예의 하기 상세한 설명, 실시예, 및 표를 참조하여 이의 관련된 설명과 함께 더욱 용이하게 이해될 수 있다. 달리 정의하지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 용어(기술 용어 및 과학 용어를 포함함)는 본 발명이 속하는 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로 사용되는 사전에서 정의된 것과 같은 용어가 관련 분야의 맥락에서 이의 의미와 일관되게 해석되어야 하고, 본원에서 명시적으로 이에 따라 정의하지 않는 한 이상적이거나 지나치게 형식적인 의미로 해석되지 않을 것으로 추가로 이해될 것이다. 또한, 본원에서 사용되는 용어가 단지 특정 구현예를 기술할 목적을 위한 것이고, 한정적인 것은 아닌 것으로 이해되어야 한다.
화합물
본 발명의 화합물은 하기 화학식 (I)의 구조, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 기하 이성질체, 거울상 이성질체, 부분입체이성질체, 라세미체, 전구약물, 용매화물, 또는 수화물을 갖는다:
Figure pct00002
상기 식에서,
R1은 할로겐, 비치환되거나 치환된 알킬, 비치환되거나 치환된 알케닐, 비치환되거나 치환된 알키닐, 비치환되거나 치환된 사이클로알킬, 비치환되거나 치환된 알콕시, 비치환되거나 치환된 아릴, -NO2, -OH, -C(O)R, -C(O)OR, -C(O)N(R')(R"), 또는 -N(R')(R")이며;
R2 및 R3은 각각 독립적으로, -H, 할로겐, 비치환되거나 치환된 알킬, 비치환되거나 치환된 사이클로알킬, 비치환되거나 치환된 알콕시, -NO2, -OH, 또는 -N(R')(R")이거나, R2 및 R3은 여기에 결합된 탄소 원자와 함께 비치환되거나 치환된 탄소 사이클릭 또는 헤테로사이클릭 고리를 형성하며;
R4는 -H, 비치환되거나 치환된 알킬, 비치환되거나 치환된 사이클로알킬, 비치환되거나 치환된 알콕시, 비치환되거나 치환된 아릴, -OH, -C(O)R, -C(O)OR, -C(O)N(R')(R"), 또는 -N(R')(R")이며;
R5는 -CN, 할로겐, 비치환되거나 치환된 알킬, 비치환되거나 치환된 알케닐, 비치환되거나 치환된 알키닐, 비치환되거나 치환된 사이클로알킬, 비치환되거나 치환된 알콕시, -NO2, -OH, 또는 -N(R')(R")이며;
R은 비치환되거나 치환된 알킬이며;
R' 및 R"는 각각 독립적으로, -H 또는 비치환되거나 치환된 알킬이다.
화학식 (I)의 화합물의 일 구현예에서, R1은 할로겐, 비치환되거나 치환된 알킬, 비치환되거나 치환된 알케닐, 비치환되거나 치환된 알키닐, 비치환되거나 치환된 알콕시, -NO2, -OH, -C(O)OR, -C(O)N(R')(R"), 또는 -N(R')(R")이며, 여기서, R은 비치환되거나 치환된 알킬이며; R2, R3, R4, R5, R, R' 및 R"는 상기에서 정의된 바와 같다. 바람직하게, R1은 할로겐, 비치환된 알킬, 비치환된 알콕시, -OH, -CF3, 또는 하이드록시알킬이다. 더욱더 바람직하게, R1은 -F, -Cl, -Br, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 메톡시, 에톡시, 이소프로폭시, -OH, -CF3, 또는 하이드록시메틸이다.
화학식 (I)의 화합물의 다른 구현예에서, R2 및 R3은 각각 독립적으로, -H, -OH, 할로겐, 비치환되거나 치환된 알킬, 또는 -N(R')(R")이거나, R2 및 R3은 여기에 결합된 탄소 원자와 함께 비치환되거나 치환된 탄소 사이클릭 또는 헤테로사이클릭 고리를 형성하며; R1, R4, R5, R, R' 및 R"는 상기에서 정의된 바와 같다. 바람직하게, R2 및 R3은 각각 독립적으로, -H, -OH, 할로겐, 비치환된 알킬, 또는 하이드록시알킬이거나, R2 및 R3은 여기에 결합된 탄소 원자와 함께 비치환된 탄소 사이클릭 고리 또는 헤테로사이클릭 고리를 형성한다. 더욱 바람직하게, R2 및 R3은 각각 독립적으로, -H, -OH, -F, -Cl, 메틸, 에틸, 또는 하이드록시메틸이거나, R2 및 R3은 여기에 결합된 탄소 원자와 함께 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 옥시란, 아지리딘, 또는 아제티딘을 형성한다.
화학식 (I)의 화합물의 다른 구현예에서, R4는 -H, 비치환되거나 치환된 알킬, -C(O)OR, 또는 -C(O)R이며; R1, R2, R3, R5, R, R' 및 R"는 상기에서 정의된 바와 같다. 바람직하게, R4는 -H, 메틸, 에틸, 프로필, 아세틸, 아미노아세틸, 메톡시카르보닐, 1-(1-옥소-2-메틸프로폭시)에톡시카르보닐, 또는 에톡시카르보닐이다.
화학식 (I)의 화합물의 다른 구현예에서, R5는 -CN, 할로겐, 비치환되거나 치환된 알킬, 비치환되거나 치환된 알케닐, 또는 비치환되거나 치환된 알키닐이며; R1, R2, R3, R4, R, R' 및 R"는 상기에서 정의된 바와 같다. 바람직하게, R5는 -CN, 할로겐, 또는 비치환된 알킬이다. 더욱 바람직하게, R5는 -CN, -F, -Cl, -Br, 메틸, 에틸, 프로필, 또는 이소프로필이다.
추가 구현예에서, 본 발명의 화합물은 하기 화학식 (II)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 기하 이성질체, 거울상 이성질체, 부분입체이성질체, 라세미체, 전구약물, 용매화물, 또는 수화물이다:
Figure pct00003
상기 식에서,
R1은 -F, -Cl, -Br, 메틸, 메톡시이며;
R2 및 R3은 각각 독립적으로, -H 또는 -OH이거나, R2 및 R3은 여기에 결합된 탄소 원자와 함께 사이클로프로필을 형성하며;
R4는 -H, 메틸, 아미노아세틸, 1-(1-옥소-2-메틸프로폭시)에톡시카르보닐, 또는 에톡시카르보닐이며;
R5는 -CN, 메틸, 또는 -Cl이다.
또 다른 바람직한 구현예에서, 본 발명은 하기 화합물들로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 기하 이성질체, 거울상 이성질체, 부분입체이성질체, 라세미체, 전구약물, 용매화물, 또는 수화물을 제공한다:
5-(5-(2-(3-아미노프로폭시)-3-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-((5-(6-(3-아미노프로폭시)-3-플루오로-2-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일)아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-(3-아미노프로폭시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-(3-아미노프로폭시)-4-클로로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-(3-아미노프로폭시)-4-브로모-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-(3-아미노프로폭시)-6-메톡시-4-메틸페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-(3-아미노프로폭시)-4,6-디메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-(3-메틸아미노프로폭시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-(3-메틸아미노프로폭시)-4-클로로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-(3-메틸아미노프로폭시)-4-브로모-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-(3-메틸아미노프로폭시)-4-메틸-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-(3-메틸아미노프로폭시)-4,6-디메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-((1-(아미노메틸)사이클로프로필)메톡시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-((1-(아미노메틸)사이클로프로필)메톡시)-4-클로로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-((1-(아미노메틸)사이클로프로필)메톡시)-4-브로모-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-((1-(아미노메틸)사이클로프로필)메톡시)-6-메톡시-4-메틸페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-((1-(아미노메틸)사이클로프로필)메톡시)-4,6-디메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(3-플루오로-6-메톡시-2-((1-((메틸아미노)메틸)사이클로프로필)메톡시)페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-((5-(3-플루오로-2-메톡시-6-((1-((메틸아미노)메틸)사이클로프로필)메톡시)페닐)-1H-피라졸-3-일)아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(4-플루오로-2-메톡시-6-((1-((메틸아미노)메틸)사이클로프로필)메톡시)페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-((5-(4-클로로-2-메톡시-6-((1-((메틸아미노)메틸)사이클로프로필)메톡시)페닐)-1H-피라졸-3-일)아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-((5-(4-브로모-2-메톡시-6-((1-((메틸아미노)메틸)사이클로프로필)메톡시)페닐)-1H-피라졸-3-일)아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-((5-(2-메톡시-4-메틸-6-((1-((메틸아미노)메틸)사이클로프로필)메톡시)페닐)-1H-피라졸-3-일)아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-((5-(2,4-디메톡시-6-((1-((메틸아미노)메틸)사이클로프로필)메톡시)페닐)-1H-피라졸-3-일)아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-(2-하이드록시-3-아미노프로폭시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-(2-하이드록시-3-아미노프로폭시)-4-메틸-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-(2-하이드록시-3-아미노프로폭시)-4,6-디메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
2-메틸-5-(5-(2-(3-아미노프로폭시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진;
2-클로로-5-(5-(2-(3-아미노프로폭시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진;
2-메틸-5-(5-(2-(3-메틸아미노프로폭시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진;
2-클로로-5-(5-(2-(3-메틸아미노프로폭시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진;
2-메틸-5-(5-(2-((1-(아미노메틸)사이클로프로필)메톡시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진;
2-클로로-5-(5-(2-((1-(아미노메틸)사이클로프로필)메톡시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진;
2-메틸-5-(5-(2-((1-(아미노메틸)사이클로프로필)메톡시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진;
2-클로로-5-(5-(2-((1-(아미노메틸)사이클로프로필)메톡시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진;
2-메틸-5-(5-(2-(2-하이드록시-3-아미노프로폭시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진;
2-클로로-5-(5-(2-(2-하이드록시-3-아미노프로폭시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진;
에틸 3-(2-(3-(5-시아노피라진-2-일아미노)-1H-피라졸-5-일)-5-플루오로-3-메톡시페녹시)프로필카르바메이트;
2-아미노-N-(3-(2-(3-((5-시아노피라진-2-일)아미노)-1H-피라졸-5-일)-5-플루오로-3-메톡시페녹시)프로필)아세트아미드; 또는
1-(((3-(2-(3-((5-시아노피라진-2-일)아미노)-1H-피라졸-5-일)-5-플루오로-3-메톡시페녹시)프로필)카르바모일)옥시)에틸 이소부티레이트.
또 다른 바람직한 구현예에서, 본 발명은 하기 화합물들로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 기하 이성질체, 거울상 이성질체, 부분입체이성질체, 라세미체, 전구약물, 용매화물, 또는 수화물을 제공한다:
5-(5-(2-(3-아미노프로폭시)-3-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-((5-(6-(3-아미노프로폭시)-3-플루오로-2-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일)아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-(3-아미노프로폭시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-(3-아미노프로폭시)-4-클로로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-(3-아미노프로폭시)-4-브로모-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-(3-아미노프로폭시)-6-메톡시-4-메틸페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-(3-아미노프로폭시)-4,6-디메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-((1-(아미노메틸)사이클로프로필)메톡시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-((1-(아미노메틸)사이클로프로필)메톡시)-4-클로로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-((1-(아미노메틸)사이클로프로필)메톡시)-4-브로모-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-((1-(아미노메틸)사이클로프로필)메톡시)-6-메톡시-4-메틸페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-((1-(아미노메틸)사이클로프로필)메톡시)-4,6-디메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(3-플루오로-6-메톡시-2-((1-((메틸아미노)메틸)사이클로프로필)메톡시)페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-((5-(3-플루오로-2-메톡시-6-((1-((메틸아미노)메틸)사이클로프로필)메톡시)페닐)-1H-피라졸-3-일)아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(4-플루오로-2-메톡시-6-((1-((메틸아미노)메틸)사이클로프로필)메톡시)페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴; 및
에틸 3-(2-(3-(5-시아노피라진-2-일아미노)-1H-피라졸-5-일)-5-플루오로-3-메톡시페녹시)프로필카르바메이트.
정의
본 섹션에 기술된 정의는 본 명세서 전반에 걸쳐 사용되는 용어를 명확하게 하기 위한 것이다. 이러한 섹션에서, 정의는 달리 기술하지 않는 한, 화학식 (I) 및 (II)의 화합물에 적용한다. 용어 "본원에서(herein)"는 전체 적용을 의미한다.
본원에서 사용되는 단수 용어("a," "an" 및 "the")는 문맥이 달리 명확하게 지시하지 않는 한 복수의 지시대상을 포함한다는 것이 주지되어야 한다. 이에 따라, 문맥에 의해 달리 요구되지 않는 한, 단수 용어는 복수를 포함할 것이며, 복수 용어는 단수를 포함할 것이다.
종종, 범위는 "약" 하나의 특정 값에서 및/또는 "약" 다른 특정 값까지로 표현된다. 이러한 범위가 표현될 때, 구현예는 하나의 특정 값에서 및/또는 다른 특정 값까지의 범위를 포함한다. 유사하게, 값이 단어 "약"을 사용함으로써 근사치로서 표현될 때, 특정 값이 다른 구현예를 형성하는 것으로 이해될 것이다. 범위의 각각의 종결점이 다른 종결점과 관련하여 및 다른 종결점과 독립적으로 유의미하다는 것으로 추가로 이해될 것이다. 본원에서 사용되는 용어 "약"은 ± 20%, 바람직하게, ± 10%, 및 더욱더 바람직하게, ± 5%를 지칭한다.
본원에서 사용되는 구 "비치환되거나 치환된"은 치환이 선택적인 것을 의미한다. 치환이 요망되는 경우에, 이러한 치환은 명시된 원자 상의 임의의 수의 수소가 명시된 기로부터의 선택으로 대체되고, 단, 명시된 원자의 명목상 원자가는 초과하지 않으며, 치환이 안정한 화합물을 야기시킴을 의미한다. 예를 들어, 치환체가 케토(즉, =O)일 때, 원자 상의 2개의 수소가 대체된다. "치환된" 기에 대한 치환체의 예는 본원에 개시된 예시적인 화합물 및 구현예에서 확인된 것이고, 예를 들어, 할로겐, -OH, -CF3, -CN, -NO2, 알킬, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬, 알콕시, 할로알킬, 알킬아미노, 아미노알킬, 디알킬아미노, 하이드록실알킬, 알콕시알킬, 하이드록시알콕시, 알콕시알콕시, 아미노알콕시, 알킬아미노알콕시, 알킬아미노알킬, 및 아릴, 등을 포함할 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "탄화수소"는 최대 12개의 탄소 원자까지의 단지 탄소 및 수소를 포함한 임의의 구조를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "탄화수소 라디칼" 또는 "하이드로카르빌"은 탄화수소로부터 하나 이상의 수소를 제거하여 형성된 임의의 구조를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "할로겐"은 불소, 염소, 브롬, 및 요오드를 포함한다. 기의 접두어로서 사용되는 "할로"는 기 상의 하나 이상의 수소가 하나 이상의 할로겐으로 대체된 것을 의미한다.
용어 "하이드록시"는 -OH로서 정의된다.
본원에서 사용되는 용어 "알킬"은 1 내지 12개의 탄소 원자를 함유한 1가, 포화된, 선형 또는 분지형의 탄화수소 라디칼을 지칭한다. 바람직하게, 알킬은 C1-C8 알킬 기이다. 더욱 바람직하게, 알킬은 C1-C6 알킬 기이다. 알킬은 하니 이상의 치환체로 치환되거나 비치환될 수 있다. C1-C6 알킬 기의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, t-부틸, 펜틸(모든 이성질체 형태를 포함함), 및 헥실(모든 이성질체 형태를 포함함), 헵틸(모든 이성질체 형태를 포함함), 옥틸(모든 이성질체 형태를 포함함), 등을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 용어 "알케닐"은 적어도 1개의 탄소-탄소 이중 결합을 가지고 2 내지 12개의 탄소 원자를 포함하는, 불포화된, 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 라디칼을 지칭한다. 바람직하게, 알케닐은 C2-C8 알케닐 기이다. 더욱 바람직하게, 알케닐은 C2-C6 알케닐 기이다. 알케닐 라디칼의 예는 에테닐, 프로페닐, 부테닐, 1,4-부타디에닐, 등을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 용어 "알키닐"은 적어도 1개의 탄소-탄소 삼중 결합을 가지고 2 내지 12개의 탄소 원자를 포함하는 불포화된 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 라디칼을 지칭한다. 바람직하게, 알키닐은 C2-C8 알키닐 기이다. 더욱 바람직하게, 알키닐은 C2-C6 알키닐 기이다. 알키닐 라디칼의 예는 에티닐, 프로피닐, 부티닐, 등을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
용어 "아미노"는 -NH2 기를 지칭한다. 기의 접두사 또는 접미사로서 사용되는 "아미노"는 기 상의 하나 이상의 수소가 하나 이상의 아미노 기로 대체됨을 의미한다.
단독으로 또는 접미사 또는 접두사로서 사용되는 용어 "알콕시"는 일반 화학식 -O-(알킬)의 라디칼을 지칭하며, 여기서, 알킬은 상기에서 정의된 바와 같다. 예시적인 알콕시는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 이소프로폭시, n-부톡시, 이소-부톡시, sec-부톡시, 3차-부톡시, 등을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
"알콕시알킬" 기는 -(알킬)-O-(알킬)로 표현되며, 여기서, 알킬은 상기에서 정의된 바와 같다.
본원에서 사용되는 용어 "사이클로알킬"은 모노시클릭, 바이시클릭, 트리시클릭, 및 보다 고차의 다중시클릭 알킬 라디칼(및 융합 및 브릿징된 바이시클릭 및 스피로시클릭 모이어티를 포함하는 다중시클릭일 때)을 포함하는, 환형 배열을 갖는 포화된, 1가 탄화수소 라디칼을 지칭하며, 여기서, 각 환형 모이어티는 3 내지 12개의 탄소 원자를 갖는다. 바람직하게, 사이클로알킬은 3 내지 8개의 탄소 원자를 갖는다. 더욱 바람직하게, 사이클로알킬은 3 내지 6개의 탄소 원자를 갖는다. 사이클로알킬이 1개 초과의 고리를 함유할 때, 고리는 융합되거나 비융합될 수 있고, 바이사이클로 라디칼을 포함한다. 융합된 고리는 일반적으로, 2개의 고리들 사이에 2개의 원자를 공유하는 적어도 2개의 고리를 지칭한다. 이러한 사이클로알킬 기는 일 예로서, 단일 고리 구조, 예를 들어, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸, 사이클로옥틸, 1-메틸사이클로프로필, 2-메틸사이클로펜틸, 2-메틸사이클로옥틸, 등, 또는 다중 또는 브릿징된 고리 구조, 예를 들어, 아다만틸, 등을 포함한다.
용어 "하이드록시알킬"은 하나 이상의 하이드록시 기로 치환된 상술된 바와 같은 알킬 기를 지칭한다.
용어 "하이드록시알콕시"는 하나 이상의 하이드록시 기로 치환된 상술된 바와 같은 알콕시 기를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "아릴"은 하나 이상의 다중불포화된 탄소 고리 및 컨쥬게이션된 pi 전자계를 가지고 6 내지 14개의 탄소 원자를 포함하는 탄화수소 라디칼을 지칭하며, 여기서, 라디칼은 방향족 고리의 탄소 상에 위치된다. 일부 구현예에서, 아릴 기는 기의 고리 부분에, 6 내지 12개의 탄소 원자, 바람직하게, 6 내지 10개의 탄소 원자를 함유한다. 예시적인 아릴은 페닐, 바이페닐, 나프틸, 인데닐, 등을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 용어 "하나 이상"은 1 내지 10, 바람직하게, 1, 2, 3, 또는 4를 지칭한다.
본 발명의 화합물은 약제학적으로 허용되는 염으로서 존재할 수 있다. 본원에서 사용되는 "약제학적으로 허용되는 염"은 개시된 화합물의 유도체를 지칭하며, 여기서, 모 화합물은 이의 약제학적으로 허용되는 산 또는 염기염을 제조함으로써 개질된다. 약제학적으로 허용되는 염의 예는 아민과 같은 염기성 잔기의 미네랄 또는 유기산염; 카복실산과 같은 산성 잔기의 알칼리 또는 유기염; 등을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 약제학적으로 허용되는 염은 예를 들어, 비-독성 무기산 또는 유기산으로부터 형성된 모 화합물의 통상적인 비-독성 염 또는 4차 암모늄 염을 포함한다. 적합한 비-독성 산은 무기산 및 유기산, 예를 들어, 아세트산, 알긴산, 안트라닐산, 벤젠설폰산, 벤조산, 캄포르설폰산, 시트르산, 에텐설폰산, 포름산, 푸마르산, 푸로산, 갈락투론산, 글루콘산, 글루쿠론산, 글루탐산, 메탄설폰산, 무크산, 질산, 파모산, 판토텐산, 페닐아세트산, 인산, 프로피온산, 살리실산, 스테아르산, 숙신산, 설파닐산, 황산, 타르타르산, 및 p-톨루엔설폰산을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 본 발명의 화합물의 염의 비제한적인 예는 하이드로클로라이드, 하이드로브로마이드, 하이드로요오다이드, 설페이트, 바이설페이트, 2-하이드록시에탄설포네이트, 포스페이트, 하이드로겐 포스페이트, 아세테이트, 아디페이트, 알기네이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 부티레이트, 캄포레이트, 캄포르설포네이트, 시트레이트, 디글루코네이트, 글리세롤포스페이트, 헤미설페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 포르메이트, 숙시네이트, 말로네이트, 푸마레이트, 말레에이트, 메탄설포네이트, 메시틸렌설포네이트, 나프틸렌설포네이트, 니코티네이트, 옥살레이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼설페이트, 3-페닐프로피오네이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 트리클로로아세테이트, 트리플루오로아세테이트, 글루타메이트, 바이카르보네이트, 운데카노에이트, 락테이트, 시트레이트, 타르트레이트, 글루코네이트, 벤젠 설포네이트, 및 p-톨루엔설포네이트 염을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 "전구약물"은 이러한 전구약물이 대상체에 투여될 때, 가수분해, 대사, 등과 같은 생체내 생리학적 작용을 통해 화학식 (I)에 따른 활성 모 약물을 방출하는 임의의 공유 결합된 담체를 포함하는 것으로 의도된다. 전구약물을 제조하고 사용하는 데 연관된 적합성 및 기술은 당업자에 의해 널리 공지되어 있다. 화학식 (I)의 화합물(모 화합물)의 전구약물은 개질이 일상적인 조작 또는 생체내 중 어느 하나에서 모 화합물로 절단되는 방식으로, 화합물에 존재하는 작용기를 개질시킴으로써 제조될 수 있다. "전구약물"은 전구약물이 대상체에 투여될 때, 하이드록시, 아미노, 또는 설프히드릴 기가 각각 자유 하이드록실, 자유 아미노, 또는 자유 설프히드릴 기를 형성시키기 위해 절단하는 임의의 기에 결합된 화학식 (I)의 화합물을 포함한다. 전구약물의 예는 생체 가수분해 가능한 모이어티, 예를 들어, 생체 가수분해 가능한 아미드, 생체 가수분해 가능한 에스테르, 생체 가수분해 가능한 카르바메이트, 생체 가수분해 가능한 카르보네이트, 생체 가수분해 가능한 우레이드, 및 생체 가수분해 가능한 포스페이트 유사체를 포함하는 화학식 (I)의 화합물의 유도체 및 대사물을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 특정 구현예에서, 카르복실 작용기를 갖는 화학식 (I)의 화합물의 전구약물은 카르복실산의 저급 알킬(예를 들어, C1-C6) 에스테르이다. 카르복실레이트 에스테르는 분자 상에 존재하는 임의의 카르복실산 모이어티를 에스테르화함으로써 보편적으로 형성된다.
본 발명의 화합물은 용매화물로서 존재할 수 있다. 본원에서 사용되고 달리 명시하지 않는 한, 용어 "용매화물"은 비-공유 분자간 힘에 의해 결합된 화학양론적 또는 비-화학양론적 양의 용매를 추가로 포함하는, 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 의미한다. 용매가 물인 경우에, 용매화물은 보편적으로, "수화물," 예를 들어, 반-수화물, 일-수화물, 세스퀴(sesqui)-수화물, 이-수화물, 삼-수화물, 등으로서 지칭될 수 있다.
본 발명의 화합물은 시스- 및 트랜스-형태; E- 및 Z-형태; c-, t-, 및 r-형태; 엔도- 및 엑소-형태; R-, S-, 및 메소-형태; D- 및 L-형태; d- 및 l-형태; (+) 및 (-) 형태; 케토-, 에놀-, 및 에놀레이트-형태; syn- 및 anti-형태; 향사-(synclinal-) 및 배사-(anticlinal-)형태; α- 및 β-형태; 축방향 및 수평방향 형태; 보트-, 의자-, 트위스트-, 엔벨로프-(envelope-), 및 반의자-형태; 및 이들의 조합을 포함하지만, 이로 제한되지 않는 하나 이상의 특정 기하, 광학, 거울상 이성질체, 부분입체이성질체, 에피머, 아트로픽, 입체이성질체, 호변체, 구조, 또는 아노머 형태로 존재할 수 있으며, 하기에서는 총괄적으로, "이성질체"로서 지칭된다.
본원에서 사용되는 용어 "거울상 이성질체"는 서로 중첩되지 않는 거울상을 갖는 한 쌍의 입체이성질체를 지칭한다. 한 쌍의 거울상 이성질체의 1:1 혼합물은 라세미체 혼합물이다. 용어 "거울상 이성질체"는 적절한 경우에, 라세미체 혼합물을 명시하기 위해 사용된다. "부분입체이성질체"는 적어도 2개의 비대칭 원자를 가지지만 서로 거울상이 아닌 입체이성질체이다. 절대 입체화학은 Cahn-lngold-Prelog R-S 시스템에 따라 특정될 수 있다. 화합물이 순수한 거울상 이성질체일 때, 각 키랄 탄소에서의 입체화학은 R 또는 S 중 어느 하나에 의해 특징될 수 있다. 분리된 화합물은 이러한 것이 소듐 D 라인의 파장에서 면 평광된 광을 회전시키는 방향(우회전성 또는 좌회전성)에 따라 (+) 또는 (-)로 명시될 수 있다. 본원에 기술된 특정 화합물은 하나 이상의 비대칭 중심 또는 축을 함유하고, 이에 따라, 절대 입체화학의 측면에서, (R)- 또는 (S)-로서 규정될 수 있는 거울상 이성질체, 부분입체이성질체, 및 다른 입체이성질체 형태를 형성시킬 수 있다. 본 발명은 라세미체 혼합물, 광학적으로 순수한 형태 및 중간체 혼합물을 포함하는, 이러한 모든 가능한 이성질체를 포함하는 것을 의미한다. 광학적 활성의 (R)- 및 (S)-이성질체는 키랄 신톤(chiral synthon) 또는 키랄 시약을 이용하여 제조되거나, 통상적인 기술을 이용하여 분리될 수 있다. 화합물이 이중 결합을 함유하는 경우에, 치환체는 E 또는 Z 배열일 수 있다. 화합물이 이치환된 사이클로알킬을 함유하는 경우에, 사이클로알킬 치환체는 시스- 또는 트랜스-배열을 가질 수 있다.
약제 조성물, 용도 및 방법
본 발명의 화합물은 순수한 화학물질로서 치료학적으로 투여될 수 있지만, 화합물을 약제 조성물 또는 제형으로서 투여하는 것이 유용할 수 있다. 이에 따라, 본 발명은 치료학적 유효량의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 기하 이성질체, 거울상 이성질체, 부분입체이성질체, 라세미체, 전구약물, 용매화물, 또는 수화물, 및 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 약제 조성물을 제공한다.
약제 조성물은 고체 투약 형태 또는 액체 투약 형태, 경구 투약 형태, 비경구 투약 형태, 비강내 투약 형태, 좌제, 로젠지, 트로치, 협측, 제어된 방출 투약 형태, 펄스화된 방출 투약 형태, 속방출 투약 형태, 정맥내 용액, 현탁액 또는 이들의 조합을 포함하지만, 이로 제한되지 않는, 다양한 투약 형태로 투여될 수 있다. 화합물은 예를 들어, 정맥내, 근육내, 복강내, 피하, 경피, 기도(에어로졸), 직장, 질 및 국소(협측 및 설하를 포함함) 투여에 의해 투여될 수 있다.
바람직하게, 화학식 (I)의 화합물은 정맥내(IV) 투여와 같이 비경구내로 투여된다. 투여를 위한 제형은 일반적으로, 약제학적으로 허용되는 담체에 용해된 화학식 (I)의 화합물의 용액을 포함할 것이다. 사용될 수 있는 허용 가능한 비히클 및 용매 중에는 물 및 링거액, 등장성 소듐 클로라이드가 있다. 또한, 멸균 고정유가 보편적으로 용매 또는 현탁 매질로서 사용될 수 있다. 이러한 목적을 위하여, 합성 모노- 또는 디글리세라이드를 포함하는 임의의 자극적이지 않은 고정유가 사용될 수 있다. 또한, 지방산, 예를 들어, 올레산이 마찬가지로, 주사제의 제조에서 사용될 수 있다. 이러한 용액은 멸균된 것이고, 일반적으로 요망되지 않는 물질이 존재하지 않는다. 이러한 제형은 통상적인, 널리 공지된 멸균 기술에 의해 멸균될 수 있다. 제형은 pH 조절 및 완충제, 독성 조절제, 예를 들어, 소듐 아세테이트, 소듐 클로라이드, 포타슘 클로라이드, 칼슘 클로라이드, 소듐 락테이트, 등과 같은 생리학적 조건을 근사화하는 데 요구되는 바와 같은 약제학적으로 허용되는 보조 물질을 함유할 수 있다. IV 투여를 위하여, 제형은 멸균 주사용 제제, 예를 들어, 멸균 주사용 수성 또는 유성 현탁액일 수 있다. 이허나 현탁액은 그러한 적합한 분산 또는 습윤제 및 현탁제를 사용하여 공지된 당해 분야에 따라 제형화될 수 있다. 멸균 주사용 제제는 또한, 비독성의 비경구적으로 허용 가능한 희석제 또는 용매 중의 멸균 주사용 용액 또는 현탁액, 예를 들어, 1,3-부탄디올의 용액일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 경구적으로 투여된다. 경구 투여를 위하여, 화합물은 일반적으로, 대상체에 의한 소화를 위해 적합한, 정제, 환제, 당의정, 로젠지 또는 캡슐; 분말 또는 과립으로서; 또는 수용액, 현탁액, 액체, 겔, 시럽, 슬러리로서, 등의 단위 투약 형태로 제공될 것이다. 투약 형태는 정제 또는 캐플렛(caplet)으로서 제형화된 제어된 방출 투약 형태일 수 있다. 경구 사용을 위한 정제는 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제와 혼합된 활성 성분을 포함할 수 있다. "부형제"는 일반적으로, 약리학적 조성물에 첨가되거나 달리 화합물의 투여를 더욱 용이하게 하기 위한 비히클로서 사용되는, 물질, 종종 불활성 물질을 지칭한다. 부형제의 예는 불활성 희석제, 붕해제, 결합제, 윤활제, 감미제, 착향제, 착색제, 보존제, 발포 혼합물, 및 흡착제를 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 적합한 불활성 희석제는 소듐 및 칼슘 카르보네이트, 소듐 및 칼슘 포스페이트, 락토오스, 등을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 적합한 붕해제는 전분, 예를 들어, 옥수수 전분, 가교된 폴리비닐 피롤리돈, 아가, 알긴산, 또는 이들의 염, 예를 들어, 소듐 알기네이트, 등을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 결합제는 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분, 예를 들어, 옥수수, 밀 또는 쌀 전분, 젤라틴, 메틸셀룰로오스, 소듐 카르복시메틸셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 등을 포함할 수 있지만, 이로 제한되지 않는다. 윤활제는 존재하는 경우에, 일반적으로, 마그네슘 스테아레이트 및 칼슘 스테아레이트, 스테아르산, 탈크, 또는 수소화된 식물성 오일일 것이다. 요망되는 경우에, 정제는 위장관에서 흡수를 지연시키기 위해, 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트와 같은 물질로 코팅될 수 있다. 조성물은 또한, 예를 들어, 제형에서 만니톨과 같은 물질을 사용함으로써 츄어블 정제로서 제형화될 수 있다.
경구 사용을 위한 약제 조성물은 화학식 (I)의 화합물과 고체 부형제를 조합함을 통해, 선택적으로, 얻어진 혼합물을 그라인딩하고, 요망되는 경우에 적합한 추가 화합물을 첨가한 후에, 과립들의 혼합물을 가공하여 정제 또는 당의정 코어를 수득함을 통해 얻어질 수 있다. 적합한 고체 부형제는, 이전에 언급된 것 이외에, 락토오스, 수크로오스, 만니톨, 또는 소르비톨을 포함하는 당; 옥수수, 밀, 쌀, 감자, 또는 다른 식물로부터의 전분; 셀룰로오스, 예를 들어, 셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸-셀룰로오스 또는 소듐 카르복시메틸셀룰로오스; 및 아라빅 및 트래거캔스를 포함하는 검뿐만 아니라 단백질, 예를 들어, 젤라틴 및 콜라겐을 포함하지만, 이로 제한되지 않는 탄수화물 또는 단백질 충전제이다.
경구 사용을 위한 캡슐은 활성 성분이 고체 희석제와 혼합된 경질 젤라틴 캡슐, 및 활성 성분이 물 또는 오일, 예를 들어, 땅콩 오일, 액체 파라핀 또는 올리브유와 혼합된 연질 젤라틴 캡슐을 포함한다.
당의정 코어에는 적합한 코팅이 제공된다. 이러한 목적을 위하여, 선택적으로, 검 아라빅, 탈크, 폴리비닐 피롤리돈, 카르보폴 겔, 폴리에틸렌 글리콜, 및/또는 이산화티탄, 라커 용액, 및 적합한 유기 용매 또는 용매 혼합물을 함유할 수 있는, 농축된 당 용액이 사용될 수 있다. 색소 또는 안료는 식별을 위해 또는 활성 화합물 용량의 상이한 조합을 특징화하기 위해 정제 또는 당의정 코팅에 첨가될 수 있다.
경점막 투여(예를 들어, 협측, 직장, 비강, 안구, 등)를 위하여, 침투하고자 하는 배리어에 대해 적절한 침투제는 제형에서 사용된다. 이러한 침투제는 일반적으로, 당해 분야에 공지되어 있다.
약제 조성물은 또한, 적합한 고체 또는 겔상 담체를 포함할 수 있다. 이러한 담체의 예는 칼슘 카르보네이트, 칼슘 포스페이트, 다양한 당, 전분, 셀룰로오스 유도체, 젤라틴, 및 폴리머, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
본 발명에서 사용하기에 적합한 화합물 및 약제 조성물은 활성 성분이 이의 의도된 목적을 달성하기 위한 유효량으로 투여되는 것을 포함한다. 용어 "치료학적 유효량"은 단독으로 또는 대상체에 단일 또는 다중 용량 투여 시에, 치료 중의 대상체에서 요망되는 효과를 제공하는 이온화 방사선 또는 항암제와 병용하는, 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 기하 이성질체, 거울상 이성질체, 부분입체이성질체, 라세미체, 약제학적으로 허용되는 염, 전구약물, 용매화물, 또는 수화물의 양을 지칭한다. 이러한 화합물의 독성 및 치료 효능은 세포 배양물 또는 실험 동물에서 표준 약제학적 절차에 의해, 예를 들어, IC50 또는 EC50 값을 결정하기 위해 결정될 수 있다. 본원에서 사용되는 "IC50"은 그러한 제제에 대해 가능한 최대 억제 반응의 50%를 형성시키는 제제의 농도를 지칭하며, "EC50"은 그러한 제제에 대해 가능한 최대 반응의 50%를 형성시키는 제제의 농도를 지칭한다.
실제로 투여되는 화학식 (I)의 화합물의 양은 치료될 질환, 신생물의 크기 및 타입, 선택된 투여 경로, 투여되는 본 발명의 실제 화합물, 다른 치료법에 대한 Chk1 억제제 투여의 타이밍(timing), 대상체의 타입, 종, 연령, 체중, 성별, 및 의학적 상태, 대상체의 신장 및 간 기능, 및 대상체의 증상의 중증도를 포함하는, 관련된 상황 하에서 전문의에 의해 결정될 것이다. 효능을 나타내는 범위내의 약물의 농도를 달성하는 데 있어서의 최적의 정밀도는 타겟 부위에 대한 약물의 이용 가능성의 동력학을 기초로 한 처방을 필요로 한다. 이는 약물의 분배, 평형 및 제거에 대한 고려를 포함한다. 1일당 투여량은 일반적으로 체중 1 kg 당 약 0.1 내지 약 10 mg/kg의 범위내에 속한다. 일부 경우에, 상기 범위의 하한치 미만의 투여량 수준은 적절한 양 이상일 수 있으며, 다른 경우에, 여전이 더 많은 용량이 사용될 수 있다.
본 발명의 방법에 의해 치료되는 "대상체"는 인간 또는 비-인간 동물, 예를 들어, 영장류, 포유류, 및 척추동물을 의미한다.
"생체내"는 동물 또는 인간내와 같은, 살아있는 대상체내를 의미한다. 이러한 맥락에서, 제제는 비정상적으로 복제하는 세포의 증식을 지연시키거나 제한하기 위해 치료학적으로 생체내에서 사용될 수 있다. 제제는 또한, 이상 세포 증식 또는 이와 관련된 증상의 발현을 예방하기 위해 예방제로서 생체내에서 사용될 수 있다.
"생체외"는 살아있는 대상체의 외측을 의미한다. 생체외 세포 집단의 예는 세포 배양물 및 생물학적 샘플, 예를 들어, 인간 또는 동물로부터의 유체 또는 조직 샘플을 포함한다. 이러한 샘플은 당해 분야에서 널리 공지된 방법에 의해 얻어질 수 있다. 예시적인 생물학적 유체 샘플은 혈액, 뇌척수액, 소변, 및 타액을 포함한다. 예시적인 조직 샘플은 종양 및 이의 생검을 포함한다. 이러한 맥락에서, 본 발명은 여러 적용, 치료 및 실험 둘 모두의 적용에서 사용될 수 있다.
본 발명은 또한, Chk1을 억제하기 위한 약제의 제조에서, 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 기하 이성질체, 거울상 이성질체, 부분입체이성질체, 라세미체, 전구약물, 용매화물, 또는 수화물의 용도에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 암으로 고통 당하는 대상체에 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 기하 이성질체, 거울상 이성질체, 부분입체이성질체, 라세미체, 전구약물, 용매화물, 또는 수화물을 투여하는 것을 포함하는 암을 치료하는 방법에 관한 것이다.
본원에서 사용되는 용어 "암"은 유방암; 편평세포 암종, 예를 들어, 두경부의 편평세포 암종, IV기 폐 편평세포 암종, 항문 편평세포 암종; 폐암, 예를 들어, 비-소세포 폐암; 식도암; 간암; 위암; 대장암; 방광암; 난소 암종; 전립선암, 예를 들어, 전이성 거세저항성 전립선암(mCRPC); 교아세포종; 췌장암; 또는 백혈병, 예를 들어, 성인 급성 거핵모구 백혈병, 성인 급성 단핵모구 백혈병, 성인 급성 단핵 백혈병, Inv(16)(p13.1q22), CBFB-MYH11를 갖는 성인 급성 골수성 백혈병, 성숙한 성인 급성 골수성 백혈병, 최소 분화된 성인 급성 골수성 백혈병, t(16;16)(p13.1;q22)를 갖는 성인 급성 골수성 백혈병, t(8;21)(q22;q22), RUNX1-RUNX1T1를 갖는 성인 급성 골수성 백혈병, t(9;11)(p22;q23), MLLT3-MLL을 갖는 성인 급성 골수성 백혈병, 성숙하지 않은 성인 급성 골수성 백혈병, 성인 급성 골수단핵 백혈병, 성인 적백혈병, 성인 순수 적혈구 백혈병, 알킬화제-관련 급성 골수성 백혈병, 재발성 성인 급성 골수성 백혈병을 포함하는 고형 종양 암과 같은 장애를 지칭한다.
본 발명에 의해 치료될 수 있는 추가 타입의 암은 선암종, 혈관 육종, 성상 세포종, 청신경집종, 역형성별 아교세포종, 기저세포 암종, 신경아교종, 연골 육종, 융모막 암종, 척색종, 두개인두종, 피부 흑색종, 낭선암종, 내피육종, 배아 암종, 상의 세포종, 유윙 종양, 상피 암종, 섬유육종, 위암, 비뇨생식관 암, 다형성 교아종, 두경부암, 혈관모세포종, 간세포 암종, 간암(hepatoma), 카포시 육종, 대세포 암종, 후두암, 평활근육종, 백혈병, 지방육종, 림프계 암, 림프종, 림프관 육종, 림프관 내피 육종, 수질 갑상선 암종, 수모세포종, 수막종 중피종, 골수종, 점액육종 신경아세포종, 신경섬유육종, 핍지교종, 골육종, 상피성 난소암, 유두상 암종, 유두상 선암, 부갑상선 종양, 크롬친화성 세포종, 송과체종, 형질세포종, 망막아종, 횡문근육종, 피지선암종, 정상피종, 피부암, 흑색종, 소세포 폐 암종, 편평세포 암종, 한선 암종, 윤활막종, 갑상선 암, 포도막 흑색종, 위암, 및 빌름스 종양을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
화학식 (I)의 화합물은 단독 활성제로서, 또는 다른 공지된 암 치료와 병행하여 투여될 수 있다.
용어 "~와 병용하여(in combination with)"는 다른 항-신생물 치료법 직전, 후, 또는 이와 동시에, 또는 이러한 치료법 전, 후, 또는 이와 동시에 임의의 좝으로 투여될 수 있음을 의미한다. 이에 따라, 화학식 (I)의 화합물 및 항암제는 단일 조성물로서 또는 2개의 별개의 조성물로서 동시에 또는 2개의 별도의 조성물로서 순차적으로 투여될 수 있다. 마찬가지로, 화학식 (I)의 화합물 및 이온화 방사선 요법은 동시에, 별도로 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 화학식 (I)의 화합물은 하나 초과의 항암제와 병용하여 투여될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 임의의 화학요법 전 2주 내지 1일에, 또는 임의의 이온화 방사선 요법 전 2주 내지 1일에 투여될 수 있다. 다른 바람직한 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학요법 및 이온화 방사선 요법 동안 투여될 수 있다. 이러한 화학요법 또는 이온화 방사선 요법 이후에 투여되는 경우에, 화학식 (I)의 화합물은 1차 치료 후 1 내지 14일내에 제공될 수 있다. 화학식 (I)의 화합물은 또한, 약 2주 내지 약 5년의 기간에 걸쳐, 장기간 또는 반-장기적으로 투여될 수 있다. 당업자는, 항암제와 병용하여 투여되는 화학식 (I)의 화합물의 양이 바람직하게, 항암제 또는 이온화 방사선 요법의 효과를 향상시키는 데 충분한 양, 또는 항암제 또는 이온화 방사선 요법과 함께 아폽토시스 또는 세포사를 유도하고/거나 혈관형성억제 효과(antiangiogenic effect)를 유지시키는 데 충분한 양이라는 것을 인식할 것이다.
본원에서 사용되는 용어 "제2 항암제"는 달리 명시하지 않는 한, 신생물의 성장을 억제하거나 막거나, 악성(암) 세포의 돌연변이 및 증식을 체크할 수 있는 제제를 지칭한다. 화학식 (I)의 화합물과 병용하여 사용하기에 적합한 제2 항암제는 타겟화된 암 약물, 예를 들어, 트라스투주맙, 라무시루맙, 비스모데깁, 소니데깁, 베바시주맙, 에베롤리무스, 타목시펜, 토레미펜, 풀베스트란트, 아나스트로졸, 엑세메스탄, 라파티닙, 레트로졸, 페르투주맙, ado-트라스투주맙 엠탄신, 팔보시클립, 세툭시맙, 파니투무맙, ziv-아플리베르셉트, 레고라페닙, 리마티닙 메실레이트, 란레오타이드 아세테이트, 수니티닙, 레고라페닙, 데노수맙, 알리트레티노인, 소라페닙, 파조파닙, 템시롤리무스, 에베롤리무스, 트레티노인, 다사티닙, 닐로티닙, 보수티닙, 리툭시맙, 알렘투주맙, 오파투무맙, 오비누툭주맙, 이브루티닙, 이델랄리십, 블리나투모맙, 소라게닙, 크리조티닙, 에를로티닙, 게피티닙, 아파티닙 디말레에이트, 세리트닙, 라무시루맙, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 오시메르티닙, 및 네시투무맙; 알킬화제, 예를 들어, 부술판, 클로람부실, 시클로포스파미드, 이포스파미드, 멜팔란, 질소 머스타드, 스트렙토조신, 티오테파, 우라실 질소 머스타드, 트리에틸렌멜라민, 테모졸로마이드, 및 2-클로로에틸-3-사르코신아미드-1-니트로소우레아(SarCNU); 항생제 또는 식물 알칼로이드, 예를 들어, 악티노마이신-D, 블레오마이신, 크립토피신스, 다우노루비신, 독소루비신, 이다루비신, 이리노테칸, L-아스파라기나아제, 미토마이신-C, 미트라마아신, 나벨빈, 파클리탁셀, 도세탁셀, 토포테칸, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 테니포사이드(VM-26), 및 에토포사이드(VP-16); 호르몬 또는 스테로이드, 예를 들어, 5α-환원효소 억제제, 아미노글루테티미드, 아나스트로졸, 비칼루타미드, 클로로트리아니센, 디에틸스틸베스트롤(DES), 드로모스타놀론, 에스트라무스틴, 에티닐 에스트라디올, 플루타미드, 플루옥시메스테론, 고세렐린, 하이드록시프로게스테론, 레트로졸, 류프롤라이드, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 메게스트롤 아세테이트, 메틸 프레드니솔론, 메틸테스토스테론, 미토탄, 닐루타미드, 프레드니솔론, 아르족시펜(SERM-3), 타목시펜, 테스토락톤, 테스토스테론, 트리암시놀론, 및 졸라덱스; 합성, 예를 들어, 모두-트랜스 레티노산, 카르무스틴(BCNU), 카르보플라틴(CBDCA), 로무스틴(CCNU), 시스-디아민디클로로백금(시스플라틴), 다카르바진, 글리아델, 헥사메틸멜라민, 하이드록시우레아, 레바미솔, 미톡산트론, o,p'-디클로로디페닐디클로로에탄(o,p'-DDD)(리소드렌 또는 미토탄으로도 알려짐), 옥살리플라틴, 포르피머 소듐, 프로카르바진, 및 이마티닙 메실레이트(Gleevec®); 항대사물질, 예를 들어, 클로로데옥시아데노신, 시토신 아라비노사이드, 2'-데옥시코포르마이신, 플루다라빈 포스페이트, 5-플루오로우라실(5-FU), 5-플루오로-2'-데옥시우리딘(5-FUdR), 겜시타빈, 캄프토테신, 6-메르캅토푸린, 메토트렉세이트, 4-메틸티오암페타민(4-MTA), 및 티오구아닌; 및 생물제제, 예를 들어, 알파 인터페론, BCG(바실러스 칼메테-구에린(Bacillus Calmette-Guerin)), 과립구 콜로니 자극 인자(G-CSF), 과립구-대식세포 콜로니-자극 인자(GM-CSF), 인터류킨-2, 및 헤르셉틴을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
하나의 바람직한 구현예에서, 제2 항암제는 이리노테칸이다.
본원에서 사용되는 용어 "치료하는"은 달리 명시하지 않는 한, 이러한 용어가 적용되는 장애 또는 질환, 또는 이러한 장애 또는 질환의 하나 이상의 증상의 진행을 반전, 완화, 억제하거나, 이러한 장애 또는 질환, 또는 이러한 장애 또는 질환의 하나 이상의 증상을 예방하는 것을 의미한다. 본원에서 사용되는 용어 "치료"는 달리 명시하지 않는 한, 바로 위에서 규정된 "치료하는"과 같은 치료하는 행위를 지칭한다.
화합물 합성
본 발명은 또한, 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 기하 이성질체, 거울상 이성질체, 부분입체이성질체, 라세미체, 약제학적으로 허용되는 염, 전구약물, 용매화물, 또는 수화물을 제조하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 피라졸은 일반적인 유기 합성 및 상업적으로 입수 가능한 물질을 이용하여 당업자에 의해 제조될 수 있다.
일 구현예에서, 본 발명은 하기 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 기하 이성질체, 거울상 이성질체, 부분입체이성질체, 라세미체, 전구약물, 용매화물, 또는 수화물을 제조하는 방법으로서,
a. 용매의 존재 하에서 하기 화학식 (1)의 화합물을 화학식 H2N-NH2의 하이드라진과 반응시켜 하기 화학식 (2)의 화합물을 수득하고;
b. 화학식 (2)의 화합물을 탈보호화하고, 이후에, 커플링제의 존재 하에 탈보호화된 화합물을 하기 화학식 (3)의 화합물과 반응시켜 하기 화학식 (4)의 화합물을 제공하고;
c. 화학식 (4)의 화합물을 탈보호화하여 화학식 (I)의 화합물을 수득하는 것을 포함하는 방법을 제공한다:
Figure pct00004
Figure pct00006
Figure pct00007
상기 식에서, R1, R2, R3, R4 및 R5는 본원에서 규정된 바와 같으며; R6은 하이드록시 보호기이며; R7은 알킬이며; R9는 아미노 보호기이다.
일 예로서 그리고 비제한적으로, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 기하 이성질체, 거울상 이성질체, 부분입체이성질체, 라세미체, 전구약물, 용매화물, 또는 수화물은 하기 도시된 반응식 1 내지 반응식 4에 개략된 바와 같이 제조될 수 있다. 당업자는 요망되는 생성물에 도달하기 위해 예시된 반응식 및 실시예에 기술된 절차를 변경시킬 수 있다는 적이 주지되어야 한다.
반응식 1
Figure pct00008
반응식 2
Figure pct00009
반응식 3
Figure pct00010
반응식 4
"보호기"는 유기 합성에서 널리 사용되고 널리 알려져 있고, 특정 조건(예를 들어, pH, 온도, 방사선, 용매, 등) 하에서의 민감한 반응에서 특정 기의 반응성을 차폐할 수 있는 작용기를 지칭한다. 본원에서 사용되는 용어 "하이드록시 보호기"는 하이드록시 민감한 반응에서 하이드록시 기의 반응성을 차폐할 수 있는 작용기를 지칭한다. 하이드록시 보호기의 예는 메톡시메틸(MOM) 에테르, 메톡시에톡시메틸(MEM) 에테르, 메틸 티오메틸(MTM) 에테르, 트리메틸실릴(TMS) 에테르, 3차-부틸디메틸실릴(TBDMS) 에테르, 트리-이소-프로필실릴옥시메틸(TOM) 에테르, 트리이소프로필실릴(TIPS) 에테르, 벤질옥시메틸(BOM) 에테르, 테트라하이드로피라닐(THP) 에테르, 에톡시에틸(EE) 에테르, 2-나프틸메틸 에테르(NAP), 등을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 용어 "아미노 보호기"는 특정 조건(예를 들어, pH, 온도, 방사선, 용매, 등) 하에서의 아미노 민감한 반응에서 아미노 기의 반응성을 차폐할 수 있는 작용기를 지칭한다. 아미노 보호기의 예는 카르보벤질옥시(Cbz), p-메톡시벤질(PMB), p-메톡시벤질 카르보닐(MeOZ), 3차-부틸옥시카르보닐(BOC), 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐(FMOC), 벤질(Bn), 벤조일(Bz), 카르바메이트, 톡실(Ts) 기, 등을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
용어 "커플링제"는 커플링 반응을 가능하게 하는 화합물을 지칭한다. 커플링제의 예는 1차 및 2차 아민, 티올, 티올레이트, 및 티오에테르, 알코올, 알콕사이드, 아지드, 세미카르바지드, 등을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
더욱 정교하게 하지 않고, 상기 설명이 본 발명을 적절하게 가능하게 한다는 것으로 사료된다. 이에 따라, 하기 실시예는 단지 예시적인 것이고, 어떠한 방식으로도 본 개시내용의 나머지 부분을 제한하지 않는 것으로 해석되어야 한다.
실시예
실시예 1:
5-(5-(2-(3- 아미노프로폭시 )-3- 플루오로 -6- 메톡시페닐 )-1H- 피라졸 -3- 일아미노 )피라진-2-카르보니트릴(화합물 1)의 제조
단계 1a. 2- 플루오로 -5- 메톡시페놀 (화합물 102):
무수 THF(25 mL) 중 1-플루오로-4-메톡시벤젠(5.0 g, 40.0 mmol) 및 펜타메틸디에틸렌트리아민(6.9 g, 40.0 mmol)의 용액에 N2 하, -70℃에서 n-BuLi(16.5 mL, 헥산 중 2.5 M, 41.0 mmol)를 첨가하였다. 트리메틸 보레이트(9.4 g, 90.0 mmol)를 3시간 후에 첨가하였다. 1시간 후에, 반응 혼합물을 -10℃까지 가온시키고, 아세트산(7 mL)을 첨가하였다. 이후에, 반응 온도를 5℃로 변경하고, 30% H2O2(7.5 mL)를 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 10% 수성 소듐 설파이트로 켄칭시키고, 3차-부틸 메틸 에테르로 추출하였다. 유기층에 2 N 수성 소듐 하이드록사이드(25 mL)를 첨가하였다. pH를 6으로 조절하기 위해 수성 층에 5 N 염산을 첨가한 후에, 얻어진 혼합물을 3차-부틸 메틸 에테르로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 중에서 증발시켜 미정제 생성물을 수득하고, 이를 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸 아세테이트: 40/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 102(5.2 g, 91% 수율)를 무색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 3.76 (s, 3H), 5.42 (s, 1H), 6.39-6.35 (m, 1H), 6.57 (dd, J = 7.2, 2.8 Hz, 1H), 6.99-6.94 (m, 1H).
단계 1b. 1- 플루오로 -4- 메톡시 -2-( 메톡시메톡시 )벤젠(화합물 103):
DMF(25 mL) 중 화합물 101(3.0 g, 21.1 mmol) 및 소듐 하이드라이드(1.7 g, 42.2 mmol)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 이후에, 얼음욕으로 냉각시켰다. 이러한 냉각된 혼합물에 클로로(메톡시)메탄(2.6 g, 31.7 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 이후에, 물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 중에서 증발시켜 미정제 생성물을 수득하고, 이를 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸 아세테이트: 5/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 103(3.35 g, 85% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 3.52 (s, 3H), 3.76 (s, 3H), 5.20 (s, 2H), 6.48-6.45 (m, 1H), 6.77 (dd, J = 6.8, 2.8 Hz, 1H), 6.99 (dd, J = 10.8, 9.2 Hz, 1H).
단계 1c. 1-(3- 플루오로 -6- 메톡시 -2-( 메톡시메톡시 )페닐)에탄올(화합물 104):
무수 THF(35 mL) 중 화합물 103(3.5 g, 18.8 mmol)의 용액에 -70℃에서 1.3 N t-BuLi(29 mL, 헥산 중 1.3 M)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 3시간 동안 교반하고, 이후에, 아세트알데하이드(1.7 g, 37.6 mmol)를 첨가하고, 추가 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 중에서 증발시켜(헥산/에틸 아세테이트: 4/1) 표제 화합물 104(3.0 g, 70% 수율)를 무색 오일로서 수득하였다. LCMS:253.0[M+1]+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 1.56 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 3.59 (s, 3H), 3.85 (s, 3H), 5.19-5.13 (m, 2H), 5.33-5.25 (m, 1H), 6.58 (dd, J = 9.2, 3.6 Hz, 1H), 6.98-6.91 (m, 1H).
단계 1d. 1-(3- 플루오로 -6- 메톡시 -2-( 메톡시메톡시 )페닐)에탄올(화합물 105):
아세토니트릴(45 mL) 중 화합물 104(3.0 g, 13.0 mmol) 및 2-요오독시벤조산(5.5 g, 19.5 mmol)의 혼합물을 1.5시간 동안 환류하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 중에서 증발시켜 미정제 생성물을 수득하고, 이를 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸 아세테이트: 40/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 105(2.29 g, 77% 수율)를 무색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 2.51 (s, 3H), 3.50 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 5.12 (s, 2H), 6.59 (dd, J = 9.2, 3.2 Hz, 1H), 7.05 (dd, J = 10.8, 9.2 Hz, 1H).
단계 1e. 1-(3- 플루오로 -6- 메톡시 -2-( 메톡시메톡시 )페닐)-3,3- 비스(메틸티 오)프로프-2-엔-1-온(화합물 106):
무수 DMSO(40 mL) 중 리튬 3차-부톡사이드(2.4 g, 30.0 mmol)의 교반된 혼합물에 실온에서 화합물 105(2.29 g, 10.0 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30℃에서 2시간 동안 교반하고, CS2(1.52 g, 20.0 mmol)를 실온에서 서서히 첨가하였다. 2시간 후에, 요오도메탄(2.84 g, 20.0 mmol)을 온도를 30℃ 미만으로 유지시키면서 서서히 첨가하였다. 얻어진 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 이후에, 물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔부를 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸 아세테이트: 4/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 106(2.8 g, 85% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다. LCMS: 333.1 [M+1]+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ2.43 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 3.47 (s, 3H), 3.76 (s, 3H), 5.09 (s, 2H), 6.22 (s, 1H), 6.59 (dd, J = 9.2, 3.2 Hz, 1H), 7.06-7.01 (m, 1H).
단계 1f. (Z)-5-(3-(3- 플루오로 -6- 메톡시 -2-( 메톡시메톡시 )페닐)-1-( 메틸티오 )-3-옥소프로프-1-에닐아미노)피라진-2-카르보니트릴(화합물 107):
THF(20 mL) 중 5-아미노피라진-2-카르보니트릴(542 mg, 4.5 mmol)의 교반된 혼합물에 15℃ 미만에 소듐 하이드라이드(240 mg, 6.02 mmol)를 서서히 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 화합물 106(1.0 g, 3.01 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 4시간 동안 교반하고, 얼음-물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하여 표제 화합물 107(1.0 g, 미정제물)을 황색 고체로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계를 위해 사용하였다.
단계 1g. 5-(5-(3- 플루오로 -6- 메톡시 -2-( 메톡시메톡시 )페닐)-1H- 피라졸 -3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴(화합물 108):
에탄올(10 mL) 중 화합물 107(1.0 g, 미정제물)의 교반된 혼합물에 하이드라진 일수화물(0.5 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 55℃에서 1시간 동안 교반하였다. 얻어진 슬러리를 여과하였다. 케이크를 차가운 에탄올로 세척하고, 건조시켜 표제 화합물 108(500 mg, 45% 수율-2 단계)을 황색 고체로서 수득하였다. LCMS:371.3 [M+1]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 3.18 (s, 3H), 3.78 (s, 3H), 4.93 (s, 2H), 6.81 (s, 1H), 6.90 (dd, J = 9.2, 4.0 Hz, 1H), 7.33 (dd, J = 10.8, 9.2 Hz, 1H), 8.69-8.42 (m, 2H), 10.76 (s, 1H), 12.57 (s, 1H).
단계 1h. 5-(5-(3-플루오로-2-하이드록시-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴(화합물 109):
HCl-디옥산(20 mL, 2 M 용액) 중 화합물 108(160 mg, 0.43 mmol)의 용액을 실온에서 밤새 가열하였다. 반응 혼합물을 여과하였다. 케이크를 NH3/H2O로 7 내지 8의 pH를 갖도록 조절하고, 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하여 표제 화합물 3-101-A8(100 mg, 71% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다. LCMS:327.1 [M+1]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 3.80 (s, 3H), 6.53 (dd, J = 9.2, 3.6 Hz, 1H), 6.90 (s, 1H), 7.15 (dd, J = 10.4, 9.2 Hz, 1H), 8.72-8.36 (m, 2H), 10.76 (s, 1H), 12.48 (s, 1H).
단계 1i. 3차-부틸 3- (2-(3-(5-시아노피라진-2-일아미노) -1H- 피라졸 -5-일)-6-플루오로-3-메톡시페녹시)프로필카르바메이트(화합물 111-1):
무수 테트라하이드로푸란(10 mL) 중 PPh3(157 mg, 0.6 mmol)의 용액에 0 내지 5℃에서 DIAD(121 mg, 0.6 mmol)를 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물은 변하여 백색 현탁액이 되었다. 10분 후에, 무수 테트라하이드로푸란(5 mL) 중 3차-부틸 3-하이드록시프로필카르바메이트(110-1)(104 mg, 0.6 mmol)의 용액을 온도를 0 내지 5℃로 유지시키면서 현탁액에 서서히 첨가하였다. 상기 제조된 혼합물을 실온에서 무수 테트라하이드로푸란(5 mL) 중 화합물 109(45 mg, 0.138 mmol)의 용액에 조금씩 첨가하였다. 첨가 후에, 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공 중에서 증발시켜 미정제 생성물을 수득하고, 이를 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/에틸 아세테이트: 5/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 111-1(30 mg, 미정제물)을 황색 고체로서 수득하였다. LCMS: 484.5 [M+1]+.
단계 1j. 5-(5-(2-(3-아미노 프로폭시 )-3-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2- 카르보니트릴( 화합물 1):
디클로로메탄(2 mL) 중 화합물 111-1(30 mg, 미정제물)의 용액에 트리플루오로아세트산(1 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 이후에, 진공 중에서 증발시켜 미정제 생성물을 수득하고, 이를 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물 1(10 mg, 18% 수율-2 단계)을 황색 고체로서 수득하였다. M.p.: 221 내지 224℃. LCMS: 384.2 [M+1]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.80-1.71 (m, 2H), 2.64 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.85 (s, 3H), 4.00 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 7.03-6.88 (m, 2H), 7.36 (dd, J = 10.8, 9.2 Hz, 1H), 8.66-8.46 (m, 1H), 8.72 (s, 1H).
실시예 2:
5-((5-(6-(3-아미노 프로폭시 )-3-플루오로-2-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일)아미노)피라진-2- 카르보니트릴( 화합물 2)
단계 2a. 4-플루오로-3-메톡시아닐린(화합물 202):
메탄올(25 mL) 중 1-플루오로-2-메톡시-4-니트로벤젠(101)(5.0 g, 29.0 mmol)의 용액에 H2 분위기 하, 실온에서 10% Pd/C(500 mg)를 첨가하였다. 반응 완료 후에(TLC에 의해 모니터링함), 혼합물을 여과하고, 여액을 진공 중에서 증발시켜 표제 화합물 202(4.0 g, 97% 수율)를 수득하였다. 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 3.72 (s, 3H), 4.93 (s, 2H), 6.02-6.05 (m, 1H), 6.33 (dd, J =7.6, 2.4 Hz, 1H), 6.81 (dd, J = 11.6, 8.8 Hz, 1H).
단계 2b. 4-플루오로-3-메톡시페놀(화합물 203):
30% 황산(15 mL) 중 화합물 202(4.0 g, 28.0 mmol)의 현탁액에 0℃에서 소듐 니트라이트(2.15 g, 31.0 mmol)를 첨가하였다. 반응을 0℃에서 20분 동안 교반하고, 이후에, 100℃에서 60% 황산(15 mL)에 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 무수 NaHCO3으로 중화시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공 중에 증발시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(헥산/디클로로메탄:3/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 203(1.84 g, 46.7% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 3.76 (s, 3H), 6.24-6.27 (m, 1H), 6.51 (dd, J = 6.8, 2.8 Hz, 1H), 6.96 (dd, J = 11.2, 8.4 Hz, 1H), 9.36 (s, 1H).
단계 2c. 1-플루오로-2-메톡시-4-(메톡시메톡시)벤젠(화합물 204):
DMF 중 화합물 203(4.8 g, 33.8 mmol)의 혼합물에 0℃에서 소듐 하이드라이드(2.7 g, 67.6 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이후에, 클로로(메톡시)메탄(4.1 g, 50.7 mmol)을 얼음욕에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공 중에 증발시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸 아세테이트:10/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 204(4. 5 g, 86% 수율)를 무색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ3.38 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 5.16 (m, 2H), 6.54-6.56 (m, 1H), 6.80 (dd, J = 7.6, 2.0 Hz, 1H), 6.80 (dd, J = 11.6, 9.2 Hz, 1H).
단계 2d. 1-(3- 플루오로 -2- 메톡시 -6-( 메톡시메톡시 )페닐)에탄올(화합물 205):
무수 THF(35 mL) 중 화합물 204(4.35 g, 23.4 mmol)의 용액에 -70℃에서 1.3 N t-BuLi(29 mL, 헥사 중 1.3 M)를 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 3시간 동안 교반하였다. 아세트알데하이드(1.5 g, 35.1 mmol)를 첨가하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공 중에 증발시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸 아세테이트: 4/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 205(3.0 g, 56% 수율)를 무색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 3.49 (s, 3H), 3.68-3.68 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.98 (d, J = 2.0 Hz, 3H), 5.16-5.20 (m, 2H), 5.24-5.28 (m, 1H), 6.78 (dd, J = 5.2, 3.6 Hz, 1H), 6.89-6.94 (m, 1H).
단계 2e. 1- (3-플루오로-2-메톡시-6- ( 메톡시메톡시 )페닐) 에탄온 (화합물 206):
아세토니트릴(15 mL) 중 화합물 205(860 mg, 3.7 mmol) 및 2-요오독시벤조산(2.09 g, 7.47 mmol)의 혼합물을 1.5시간 동안 환류하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공 중에 증발시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸 아세테이트: 40/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 206(778 mg, 91% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ2.51 (s, 3H), 3.45 (s, 3H), 3.93 (d, J = 2.0 Hz, 3H), 5.11 (s, 2H), 6.79 (dd, J = 9.2, 3.2 Hz, 1H), 7.00 (dd, J = 11.2, 9.2 Hz, 1H).
단계 2f. 1-(3-플루오로-2-메톡시-6-(메톡시메톡시)페닐)-3,3-비스(메틸티오)프로프-2-엔-1-온(화합물 207):
무수 DMSO(30 mL) 중 리튬 3차-부톡사이드(1.1 g, 30.0 mmol)의 혼합물에 실온에서 화합물 206(780 mg, 3.48 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 30℃에서 2시간 동안 교반하고, CS2(651 mg, 8.55 mmol)를 실온에서 서서히 첨가하였다. 2시간 후에, 요오도메탄(1.21 g, 8.55 mmol)을 온도를 30℃ 미만으로 유지시키면서 서서히 첨가하였다. 얻어진 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축하였다. 잔부를 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸 아세테이트: 4/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 207(1.07 g, 94% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ2.42 (s, 3H), 2.52 (s, 3H), 3.44 (s, 3H), 3.90 (d, J = 1.6 Hz, 3H), 5.09 (s, 2H), 6.19 (s, 1H), 6.80 (dd, J = 8.8, 3.2 Hz, 1H), 7.00 (dd, J = 10.8, 9.2 Hz, 1H).
단계 2g. (Z)-5-((3-(3- 플루오로 -2- 메톡시 -6-( 메톡시메톡시 )페닐)-1-( 메틸티오 )-3-옥소프로프-1-엔-1-일)아미노)피라진-2-카르보니트릴(화합물 208):
THF(8 mL) 중 5-아미노피라진-2-카르보니트릴(131 mg, 1.09 mmol)의 교반된 혼합물에 15℃ 미만에서 소듐 하이드라이드(73 mg, 1.82 mmol)를 서서히 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 화합물 207(302 mg, 0.91 mmol)을 첨가하였다. 이후에, 반응 혼합물을 60℃에서 4시간 동안 교반하고, 얼음-물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축하여 표제 화합물 208(280 mg, 미정제물)을 황색 고체로서 수득하였다.
단계 2h. 5-((5-(3- 플루오로 -2- 메톡시 -6-( 메톡시메톡시 )페닐)-1H- 피라졸 -3-일)아미노)피라진-2-카르보니트릴(화합물 209):
에탄올(3 mL) 중 화합물 208(250 mg, 미정제물)의 교반된 혼합물에 하이드라진 일수화물(0.15 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 55℃에서 1시간 동안 교반하고, 얻어진 슬러리를 여과하였다. 케이크를 차가운 에탄올로 세척하고, 건조시켜 표제 화합물 209(174 mg, 52% 수율-2 단계)를 황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 3.33 (s, 3H), 3.73 (d, J = 1.2 Hz, 3H), 5.18 (s, 2H), 6.84 (s, 1H), 6.96 (dd, J = 9.2, 4.4 Hz, 1H), 8.54 (m, 1H), 8.65 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 10.76 (s, 1H), 12.55 (s, 1H).
단계 2i. 5-((5-(3- 플루오로 -6- 하이드록시 -2- 메톡시페닐 )-1H- 피라졸 -3-일)아미노)피라진-2-카르보니트릴(화합물 210):
HCl-디옥산(20 mL, 2 M 용액) 중 화합물 209(175 mg, 0.47 mmol)의 용액을 실온에서 밤새 가열하였다. 반응 혼합물을 여과하였다. 케이크를 NH3/H2O로 9 내지 10의 pH를 갖도록 조절하고, 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축하여 표제 화합물 210(58mg, 38% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 3.75 (s, 3H), 6.67 (dd, J = 8.8, 4.0 Hz, 1H), 6.88 (s, 1H), 7.13 (dd, J = 10.8, 9.2 Hz, 1H), 8.53 (br, 1H), 8.67 (s, 1H), 10.15 (br, 1H), 10.76 (s, 1H), 12.42 (s, 1H).
단계 2j. 3차-부틸(3-(2-(3-((5- 시아노피라진 -2- 일 )아미노)-1H-피라졸-5-일)-4-플루오로-3-메톡시페녹시)프로필)카르바메이트(화합물 211-2):
무수 테트라하이드로푸란(5 mL) 중 PPh3(121 mg, 0.46 mmol)의 용액에 0 내지 5℃에서 DIAD(93 mg, 0.46 mmol)를 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물이 변하여 백색 현탁액이 되었다. 10분 후에, 무수 테트라하이드로푸란(3 mL) 중 화합물 110-1(81 mg, 0.46 mmol)의 용액을 온도를 0 내지 5℃에서 유지시키면서 현탁액에 서서히 첨가하였다. 상기에서 제조된 혼합물을 실온에서 무수 테트라하이드로푸란(3 mL) 중 화합물 210(50 mg, 0.15 mmol)의 용액에 조금씩 첨가하였다. 첨가 후에, 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공 중에 증발시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/에틸 아세테이트: 5/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 211-2(80 mg, 미정제물)를 황색 고체로서 수득하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접적으로 사용하였다.
단계 2k. 5-((5-(6-(3-아미노 프로폭시 )-3-플루오로-2-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일)아미노)피라진-2-카르보니트릴(화합물 2):
디클로로메탄(3 mL) 중 화합물 211-2(80 mg, 미정제물)의 용액에 트리플루오로아세트산(3 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 이후에 진공 중에서 증발시켜 미정제 생성물을 수득하고, 이를 HPLC(수 중 40% 내지 90% CH3CN, 0.1% CF3COOH)에 의해 정제하여 표제 화합물 2(20 mg, 34% 수율-2 단계)를 황색 고체로서 수득하였다. M.p.: 80 내지 84℃. LCMS: 384.3 [M+1]+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 1.94-1.98 (m, 2H), 2.82 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.83(s, 3H), 4.12 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 6.85 (dd, J = 9.2, 4.0 Hz, 1H), 6.95 (s, 1H), 7.15-7.20 (m, 1H), 8.49-8.55 (m, 2H).
실시예 3:
5-(5-(2-(3-아미노 프로폭시 )-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴(화합물 3)
단계 3a. 1- (4-플루오로-2,6-디메톡시페닐)에탄온 (화합물 302-3):
톨루엔(30 mL) 중 알루미늄 클로라이드(8.6 g, 64.04 mmol)의 현탁액에 0℃에서 1-플루오로-3,5-디메톡시벤젠(301-3)(10.0 g, 64.04 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물에 아세틸 클로라이드(5.0 g, 64.04 mmol)를 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 추가 0.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공 중에 증발시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸 아세테이트: 25/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 302-3을 백색 고체로서 수득하였다(2.78 g, 22% 수율). 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 2.46 (s, 3H), 3.79 (s, 6H), 6.29 (d, J = 10.8 Hz, 2H).
단계 3b. 1- (4-플루오로-2-하이드록시-6-메톡시페닐)에탄온 (화합물 303-3):
디클로로메탄(20 mL) 중 화합물 302-3(2.78 g, 14.0 mmol)의 용액에 -20℃에서 1 N 보론트리브로마이드(15.5 mL, 디클로로메탄 중 1 M)를 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공 중에서 증발시켜 표제 화합물 303-3을 백색 고체로서 수득하였다(2.3 g, 89% 수율). LCMS: 185.1 [M+1]+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 2.54 (s, 3H), 3.86 (s, 3H), 6.35 (dd, J = 10.8, 2.4 Hz, 1H), 6.51 (dd, J = 11.6, 2.4 Hz, 1H), 12.76 (s, 1H).
단계 3c. 1- (4-플루오로-2-메톡시-6- ( 메톡시메톡시 )페닐) 에탄온 (화합물 304-3):
THF(20 mL) 중 화합물 303-3(2.3 g, 12.49 mmol)의 용액에 0℃에서 소듐 하이드라이드(1.0 g, 24.98 mmol)를 조금씩 첨가하였다. 반응을 주변 온도까지 가온시키고, 1시간 동안 교반하였다. 클로로(메톡시)메탄(1.51 g, 18.73 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 주변 온도까지 가온시키고, 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음-물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공 중에 증발시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸 아세테이트: 15/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 304-3을 무색 오일로서 수득하였다(1.56 g, 55% 수율). 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 2.48 (s, 3H), 3.46 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 5.14 (s, 2H), 6.33 (dd, J = 10.4, 2.0 Hz, 1H), 6.53 (dd, J = 10.4, 2.0 Hz, 1H).
단계 3d. 1-(4-플루오로-2-메톡시-6-(메톡시메톡시)페닐)-3,3-비스(메틸티오)프로프-2-엔-1-온(화합물 305-3):
무수 DMSO(30 mL) 중 리튬 3차-부톡사이드(2.19 g, 27.34 mmol)의 교반 혼합물에 주변 온도에서 화합물 304-3(1.56 g, 6.84 mmol)을 첨가하였다. 반응을 40℃까지 가온시키고, 40℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 주변 온도까지 냉각시키고, 이후에, CS2(1.3 g, 17.09 mmol)를 서서히 첨가하였다. 2시간의 반응 후에, 요오도메탄(2.4 g, 17.09 mmol)을 온도를 30℃ 미만으로 유지시키면서 서서히 첨가하였다. 얻어진 반응 혼합물을 주변 온도에서 1시간 동안 교반하고, 이후에, 얼음-물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축하였다. 잔부를 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸 아세테이트: 4/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 305-3을 황색 고체로서 수득하였다(1.42 g, 62% 수율). LCMS:333.0 [M+1]+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 2.42 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 3.44 (s, 3H), 3.77 (s, 3H), 5.12 (s, 2H), 6.19 (s, 1H), 6.33 (dd, J = 10.8, 2.0 Hz, 1H), 6.53 (dd, J = 10.8, 2.0 Hz, 1H).
단계 3e. (Z)-5-(3-(4- 플루오로 -2- 메톡시 -6-( 메톡시메톡시 )페닐)-1-( 메틸티오 )-3-옥소프로프-1-에닐아미노)피라진-2-카르보니트릴(화합물 306-3):
THF(10 mL) 중 5-아미노피라진-2-카르보니트릴(433 mg, 3.61 mmol)의 교반 혼합물에 15℃ 미만에서 소듐 하이드라이드(240 mg, 6.02 mmol)를 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물에 화합물 305-3(1.0 g, 3.01 mmol)을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 60℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음-물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축하여 표제 화합물 306-3(1.5 g, 미정제물)을 황색 오일로서 수득하였다. LCMS:405.0[M+1]+.
단계 3f. 5-(5-(4-플루오로-2-메톡시-6-(메톡시메톡시)페닐)-1H-피라졸-3 일아미노)피라진-2-카르보니트릴(화합물 307-3):
에탄올(10 mL) 중 화합물 306-3(1.2 g, 미정제물)의 교반 혼합물에 하이드라진 일수화물(265 mg, 4.5 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 주변 온도까지 냉각시킨 후에, 고형물을 여과에 의해 수집하고, 차가운 에탄올로 세척하고, 건조시켜 표제 화합물 307-3을 황색 고체로서 수득하였다(450 mg, 2 단계를 통해 40% 수율). LCMS:371.2 [M+1]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 3.34 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 5.23 (s, 2H), 6.71-6.76 (m, 3H), 8.54 (s, 1H), 8.63 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 10.71 (s, 1H), 12.39 (d, J = 1.6 Hz, 1H).
단계 3g. 5-(5-(4-플루오로-2-하이드록시-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴(화합물 308-3):
HCl-디옥산(20 mL, 2 M 용액) 중 화합물 307-3(200 mg, 0.54 mmol)의 현탁액을 주변 온도에서 밤새 교반하였다. 얻어진 고형물을 여과에 의해 수집하였다. 이후에, 고형물을 수 중에 현탁시키고, 암모니아로 9 내지 10의 pH를 갖도록 조절하고, 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축하여 표제 화합물 308-3을 황색 고체로서 수득하였다(140 mg, 79.4% 수율). LCMS:327.0[M+1]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 3.86 (s, 3H), 6.44 (dd, J = 10.4, 2.4 Hz, 1H), 6.56 (dd, J = 11.2, 2.4 Hz, 1H), 6.86 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 10.56 (br, 1H), 10.76 (br, 1H), 12.34 (s, 1H).
단계 3h. 3차-부틸 3-(2-(3-(5- 시아노피라진 -2- 일아미노 )-1H-피라졸-5-일)-5-플루오로-3-메톡시페녹시)프로필카르바메이트(화합물 309-3):
무수 테트라하이드로푸란(10 mL) 중 PPh3(546 mg, 2.08 mmol)의 용액에 0 내지 5℃에서 DIAD(421 mg, 2.08 mmol)를 적가하고, 이후에, 무수 테트라하이드로푸란(5 mL) 중 3차-부틸 3-하이드록시프로필카르바메이트(110-1)(365 mg, 2.08 mmol)의 용액을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 무수 테트라하이드로푸란(5 mL) 중 화합물 308-3(170 mg, 0.52 mmol)의 용액에 첨가하고, 주변 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공 중에 증발시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/에틸 아세테이트: 5/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 309-3을 황색 고체로서 수득하였다(200 mg, 미정제물). LCMS: 484.2 [M+1]+.
단계 3i. 5-(5-(2-(3-아미노 프로폭시 )-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴(화합물 3):
디클로로메탄(4 mL) 중 화합물 309-3(200 mg, 미정제물)의 용액에 트리플루오로아세트산(2 mL)을 첨가하고, 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 중에서 증발시키고, 잔부를 prep-HPLC(수 중 35% 내지 90% CH3CN, 0.1% CF3COOH)에 의해 정제하여 표제 화합물 3을 황색 고체로서 수득하였다(20 mg, 2 단계를 통해 10% 수율). M.p.: 229 내지 232℃. LCMS: 384.1 [M+1]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.76-1.82 (m, 2H), 2.71 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.82 (s, 3H), 4.10 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 6.66-6.70 (m, 3H), 6.85 (s, 1H), 8.52 (br, 1H), 8.64 (s, 1H).
실시예 4:
5-(5-(2-(3-아미노 프로폭시 )-4- 클로로 -6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴(화합물 4)
단계 4a. 1- (4-클로로-2,6-디메톡시페닐)에탄온 (화합물 302-4):
디클로로메탄(100 mL) 중 알루미늄 클로라이드(9.3 g, 69.5 mmol) 및 아세틸 클로라이드(4.7 g, 60.8 mmol)의 혼합물에 0℃에서 1-클로로-3,5-디메톡시벤젠(301-4)(10.0 g, 57.9 mmol)을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공 중에 증발시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸 아세테이트: 25/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 302-4를 백색 고체로서 수득하였다(4.5 g, 36% 수율). 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 2.45 (s, 3H), 3.79 (s, 6H), 6.56 (s, 2H).
단계 4b. 1- (4-클로로-2-하이드록시-6-메톡시페닐)에탄온 (화합물 303-4):
디클로로메탄(20 mL) 중 화합물 302-4(4.5 g, 21.0 mmol)의 용액에 -20℃에서 1 N 보론트리브로마이드(23.0 mL, 디클로로메탄 중 1 M)를 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음-물로 켄칭시키고, 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공 중에서 증발시켜 표제 화합물 303-4를 백색 고체로서 수득하였다(3.5 g, 83% 수율). 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 2.66 (s, 3H), 3.91 (s, 3H), 6.39 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.61 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 13.48 (s, 1H).
단계 4c. 1- (4-클로로-2-메톡시-6-(메톡시메톡시) 페닐) 에탄온 (화합물 304-4):
THF(20 mL) 중 화합물 303-4(2.58 g, 12.86 mmol) 및 소듐 하이드라이드(1.03 g, 25.72 mmol)의 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이후에, 클로로(메톡시)메탄(1.55 g, 19.29 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 주변 온도에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공 중에 증발시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸 아세테이트: 15/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 304-4(2.0 g, 64% 수율)를 무색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 2.46 (s, 3H), 3.45 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 5.13 (s, 2H), 6.59 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 6.79 (d, J = 1.6 Hz, 1H).
단계 4d. 1-(4- 클로로 -2-메톡시-6-(메톡시메톡시)페닐)-3,3-비스(메틸티오)프로프-2-엔-1-온(화합물 305-4):
무수 DMSO(30 mL) 중 리튬 3차-부톡사이드(2.62 g, 32.7 mmol)의 현탁액에 주변 온도에서 화합물 304-4(2.0 g, 8.17 mmol)를 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. CS2(1.56 g, 20.44 mmol)를 주변 온도에서 첨가하고, 2시간 동안 교반하였다. 요오도메탄(2.9 g, 20.44 mmol)을 첨가하고, 주변 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축하였다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸 아세테이트: 5/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 305-4를 황색 고체로서 수득하였다(1.8 g, 63% 수율). 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 2.41 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 3.44 (s, 3H), 3.77 (s, 3H), 5.11 (s, 2H), 6.17 (s, 1H), 6.60 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 1.6 Hz, 1H).
단계 4e. (Z)-5-(3-(4- 클로로 -2-메톡시-6-(메톡시메톡시)페닐)-1-(메틸티오)-3-옥소프로프-1-에닐아미노)피라진-2-카르보니트릴(화합물 306-4):
THF(10 mL) 중 5-아미노피라진-2-카르보니트릴(414 mg, 3.44 mmol)의 현탁액에 0℃에서 소듐 하이드라이드(230 mg, 5.73 mmol)를 첨가하고, 이후에 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 화합물 305-4(1.0 g, 2.87 mmol)를 첨가하고, 60℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축하여 표제 화합물 306-4를 황색 고체로서 수득하였다(500 mg, 42% 수율). LCMS:420.9 [M+1]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 2.36 (s, 3H), 3.35 (s, 3H), 3.77 (s, 3H), 5.21 (s, 2H), 5.68 (s, 1H), 6.86-6.88 (m, 2H), 8.63 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 8.86 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 13.89 (s, 1H).
단계 4f. 5-(5-(4- 클로로 -2-메톡시-6-(메톡시메톡시)페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴(화합물 307-4):
에탄올(10 mL) 중 화합물 306-4(500 mg, 1.19 mmol) 및 하이드라진 일수화물(105 mg, 1.78 mmol)의 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 주변 온도까지 냉각시킨 후에, 고형물을 여과에 의해 수집하고, 차가운 에탄올로 세척하고, 건조시켜 표제 화합물 307-4를 황색 고체로서 수득하였다(400 mg, 87% 수율). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 3.35 (s, 3H), 3.83 (s, 3H), 5.25 (s, 2H), 6.80 (br, 1H), 6.91 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.54 (br, 1H), 8.63 (d, J=1.2 Hz, 1H), 10.68 (s, 1H), 12.41 (d, J = 1.6 Hz, 1H).
단계 4g. 5-(5-(4- 클로로 -2-하이드록시-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴(화합물 308-4):
HCl/1,4-디옥산(30 mL, 2 M 용액) 중 화합물 307-4(400 mg, 1.03 mmol)의 현탁액을 주변 온도에서 밤새 교반하였다. 고형물을 여과에 의해 수집하고, NH3/H2O로 9 내지 10의 pH를 갖도록 조절하고, 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축하여 표제 화합물 308-4를 황색 고체로서 수득하였다(300 mg, 85% 수율). LCMS:343.0[M+1]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 3.83 (s, 3H), 6.64 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.67 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.86 (s, 1H), 8.54 (br, 1H), 8.64 (s, 1H), 10.68 (br, 2H), 12.32 (s, 1H).
단계 4h. 3차-부틸 3-(5- 클로로 -2-(3-(5- 시아노피라진 -2- 일아미노 )-1H-피라졸-5-일)-3-메톡시페녹시)프로필카르바메이트(화합물 309-4):
무수 테트라하이드로푸란(10 mL) 중 PPh3(286 mg, 1.09 mmol)의 용액에 0 내지 5℃에서 시린지에 의해 DIAD(221 mg, 1.09 mmol)를 첨가하고, 이후에, 무수 테트라하이드로푸란(5 mL) 중 3차-부틸 3-하이드록시프로필카르바메이트(110-1)(192 mg, 1.09 mmol)의 용액을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 무수 테트라하이드로푸란(5 mL) 중 화합물 308-4(150 mg, 0.44 mmol)의 용액에 붓고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공 중에 증발시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/에틸 아세테이트: 5/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 309-4를 황색 고체로서 수득하였다(300 mg, 미정제물). LCMS: 500.2 [M+1]+.
단계 4i. 5-(5-(2-(3-아미노 프로폭시 )-4- 클로로 -6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2- 카르보니트릴(화합물 4):
디클로로메탄(4 mL) 중 화합물 309-4(300 mg, 미정제물)의 용액에 트리플루오로아세트산(2 mL)을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 중에서 증발시켜 미정제 생성물을 수득하고, 이를 prep-HPLC(수 중 40% 내지 90% CH3CN, 0.1% CF3COOH)에 의해 정제하여 표제 화합물 4를 황색 고체로서 수득하였다(26 mg, 2 단계를 통해 15% 수율). M.p.: 198 내지 203℃. LCMS: 400.4 [M+1]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.77-1.83 (m, 2H), 2.72 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.85 (s, 3H), 4.12 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 6.85-6.87 (m, 2H), 6.92 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.65 (s, 1H).
실시예 5:
5 -(5-(2-(3- 아미노프로폭시 )-4- 브로모 -6- 메톡시페닐 )-1H- 피라졸 -3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴(화합물 5)
단계 5a. 1-(4-브로모-2,6- 디메톡시페닐)에탄온( 화합물 302-5):
디클로로메탄(40 mL) 중 AlCl3(3.69 g, 0.028 mol)의 현탁액에 -5℃ 미만에서 아세틸 클로라이드(1.99 g, 0.025 mol)를 첨가하였다. 얻어진 혼합물이 투명하게 되자마자, 디클로로메탄(10 mL) 중 1-브로모-3,5-디메톡시벤젠(301-5)(5.0 g, 0.023 mol)을 -5℃에서 첨가하였다. 황색 반응 혼합물을 포화 암모늄 클로라이드로 켄칭시키고, 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공 중에 증발시켰다. 미정제 생성물을 헥산(20 mL) 및 에틸 아세테이트(4 mL)로부터 재결정화하여 표제 생성물 302-5를 백색 고체로서 수득하였다(3 g, 50% 수율). 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 2.44 (s, 3H), 3.79 (s, 6H), 6.72 (s, 2H).
단계 5b. 1- (4-브로모-2-하이드록시-6-메톡시페닐)에탄온 (화합물 303-5):
DCM(3 mL) 중 화합물 302-5(200 mg, 0.77 mmol)의 용액에 -15℃ 미만에서 BBr3(213 mg, 0.85 mmol)을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 황색 반응 용액을 얼음물로 켄칭시키고, 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축하였다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸 아세테이트: 20/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 303-5를 밝은 황색 고체로서 수득하였다(160 mg, 85% 수율). 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 2.65 (s, 3H), 3.90 (s, 3H), 6.54 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.78 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 13.41 (s, 1H).
단계 5c. 1- (4-브로모-2-메톡시-6- ( 메톡시메톡시 )페닐) 에탄온 (화합물 304-5):
건조 THF(10 mL) 중 화합물 303-5(160 mg, 0.65 mmol)의 용액에 0℃에서 NaH(40 mg, 0.98 mmol)를 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 클로로(메톡시)메탄(78 mg, 0.98 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 주변 온도에서 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축하였다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸 아세테이트: 10/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 304-5를 무색 오일로서 수득하였다(160 mg, 85% 수율). 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 2.46(s, 3H), 2.46 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 5.13 (s, 2H), 6.75 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 6.96 (d, J = 1.6 Hz, 1H).
단계 5d. 1-(4-브로모-2-메톡시-6-(메톡시메톡시)페닐)-3,3-비스(메틸티오)프로프-2-엔-1-온(화합물 305-5):
DMSO(5 mL) 중 화합물 304-5(160 mg, 0.55 mmol)의 용액에 주변 온도에서 t-BuOLi(111 mg, 1.38 mmol)를 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 이후에, CS2(63 mg, 0.83 mmol)를 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 2시간 동안 교반한 후에, 요오도메탄(196 mg, 1.38 mmol)을 주변 온도에서 첨가하고, 추가 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축하였다. 잔부를 컬럼 크로마토그래피(에틸 아세테이트/헥산: 1/5)에 의해 정제하여 표제 화합물 305-5(120 mg, 55% 수율)를 황색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 2.41 (s, 3H) 2.51 (s, 3H), 3.44 (s, 3H), 3.77 (s, 3H), 5.11 (s, 2H), 6.16 (s, 1H), 6.75 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.96 (d, J = 1.2 Hz, 1H).
단계 5e. (Z)-5-(3-(4-브로모-2-메톡시-6-(메톡시메톡시)페닐)-1-(메틸티오)-3-옥소프로프-1-에닐아미노)피라진-2-카르보니트릴(화합물 306-5):
THF(10 mL) 중 5-아미노피라진-2-카르보니트릴(44.3 mg, 0.37 mmol)의 현탁액에 0℃에서 NaH(24.4 mg, 0.61 mmol)를 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 1시간 동안 교반하였다. THF(2 mL) 중 화합물 305-5(120 mg, 0.31mmol)의 용액을 첨가하고, 55℃에서 3.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축하였다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸 아세테이트: 3/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 306-5를 황색 고체로서 수득하였다(110 mg, 77% 수율).
단계 5f. 5-(5-(4-브로모-2-메톡시-6-(메톡시메톡시)페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴(화합물 307-5):
에탄올(10 mL) 중 화합물 306-5(540 mg, 1.16 mmol) 및 하이드라진 일수화물(116 mg, 2.32 mmol)의 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 주변 온도까지 냉각시킨 후에, 고형물을 여과에 의해 수집하고, 차가운 에탄올로 세척하고, 건조시켜 표제 화합물 307-5를 황색 고체로서 수득하였다(176 mg, 35% 수율).
단계 5g. 5-(5-(4-브로모-2-하이드록시-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴(화합물 308-5):
HCl/1,4-디옥산(8 mL, 2 M 용액) 중 화합물 307-5(200 mg, 0.46 mmol)의 현탁액을 40℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 주변 온도까지 냉각시킨 후에, 고형물을 여과에 의해 수집하고, NH3/H2O로 9 내지 10의 pH를 갖도록 조절하고, 건조시켜 표제 화합물 308-5를 황색 고체로서 수득하였다(166 mg, 93% 수율).
단계 5h. 3차-부틸 3- (5-브로모-2- (3-(5- 시아노피라진 -2- 일아미노 )-1H- 피라졸 -5-일)-3-메톡시페녹시)프로필카르바메이트(화합물 309-5):
건조 THF(4 mL) 중 PPh3(179 mg, 0.68 mmol)의 용액에 0 내지 5℃에서 시린지에 의해 DIAD(138 mg, 0.68 mmol)를 첨가하고, 이후에, 무수 THF(2 mL) 중 3차-부틸 3-하이드록시프로필카르바메이트(110-1)(82 mg, 0.68 mmol)의 용액을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 건조 THF(2 mL) 중 화합물 308-5(88 mg, 0.23 mmol)의 용액내에 붓고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공 중에 증발시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/에틸 아세테이트: 3/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 309-5를 황색 고체로서 수득하였다(190 mg, 미정제물). LCMS: 545.9 [M+1]+.
단계 5i. 5-(5-(2-(3-아미노 프로폭시 )-4-브로모-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴(화합물 5):
TFA(1.5 mL) 및 DCM(2 mL) 중 화합물 309-5(376 mg, 미정제물)의 혼합물을 주변 온도에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 중에서 증발시켜 미정제 생성물을 수득하고, 이를 prep-HPLC(수 중 40% 내지 90% CH3CN, 0.1% CF3COOH)에 의해 정제하여 표제 화합물 5를 밝은 황색 고체로서 수득하였다(48 mg, 2 단계를 통해 47% 수율). M.p.: 165 내지 175℃. LCMS: 446.0 [M+1]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ1.85-1.88 (m, 2H), 2.78 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.87 (s, 3H), 4.16 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 6.94(br, 1H), 7.00 (s, 1H), 7.01 (s, 1H), 8.53 (br, 1H), 8.68 (s, 1H).
실시예 6:
5-(5-(2-(3-아미노 프로폭시 )-6-메톡시-4-메틸페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴(화합물 6)
단계 6a. 1- (2-하이드록시-6-메톡시-4-메틸페닐)에탄온 (화합물 303-6):
클로로벤젠(60 mL) 중 5-메틸벤젠-1,3-디올(10.0 g, 80.55 mmol) 및 알루미늄 클로라이드(32.0 g, 241.66 mmol)의 용액에 0℃에서 아세틸 클로라이드(8.9 g, 112.78 mmol)를 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 얻어진 혼합물을 70℃까지 가온시키고, 추가 2시간 동안 교반하였다. 이후에, 반응 혼합물을 얼음물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공 중에 증발시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸 아세테이트: 20/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 1-(2,6-디하이드록시-4-메틸페닐)에탄온을 황색 고체로서 수득하였다(10 g, 75% 수율). LCMS: 167.0 [M+1]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 2.17 (s, 3H), 2.62 (s, 3H), 6.20 (s, 2H), 11.87 (s, 2H). 아세토니트릴(50 mL) 중 상기 화합물(5.0 g, 30.11 mmol), 요오도메탄(6.4 g, 45.17) 및 K2CO3(20.8 g, 150.5 mmol)의 혼합물을 35℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 아세토니트릴로 세척하였다. 여액을 진공 중에 증발시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸 아세테이트: 50/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 303-6을 황색 고체로서 수득하였다(4.5 g, 83% 수율). 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 2.30 (s, 3H), 2.64 (s, 3H), 3.88 (s, 3H), 6.19 (s, 1H), 6.39 (s, 1H), 13.33 (s, 1H).
단계 6b. 1-(2-메톡시-6-(메톡시메톡시)-4-메틸페닐)에탄온(화합물 304-6):
THF(50 mL) 중 화합물 303-6(4.5 g, 25 mmol)의 용액에 0℃에서 소듐 하이드라이드(2.0 g, 50 mmol)를 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 클로로(메톡시)메탄(3.0 g, 37.5 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 주변 온도에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공 중에 증발시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸아세테이트: 15/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 304-6을 황색 오일로서 수득하였다(4.5 g, 84% 수율).
단계 6c. 1-(2-메톡시-6-(메톡시메톡시)-4-메틸페닐)-3,3-비스(메틸티오)프로프-2-엔-1-온(화합물 305-6):
무수 DMSO(100 mL) 중 리튬 3차-부톡사이드(8.0 g, 100 mmol)의 교반된 혼합물에 주변 온도에서 화합물 304-6(4.5 g, 20 mmol)을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. CS2(3 g, 40 mmol)를 주변 온도에서 서서히 첨가하고, 3시간 동안 교반하였다. 이후에, 요오도메탄(8.5 g, 60 mmol)을 50℃에서 첨가하고, 2시간 동안 교반하였다. 주변 온도까지 냉각시킨 후에, 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트 및 물로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축하였다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸 아세테이트: 4/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 305-6을 황색 고체로서 수득하였다(1.7 g, 26% 수율). LCMS:329.3 [M+1]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 2.29 (s, 3H), 2.42 (s, 3H), 2.45 (s, 3H), 3.33 (s, 3H), 3.70 (s, 3H), 5.11 (s, 2H), 6.15 (s, 1H), 6.55 (s, 1H), 6.58 (s, 1H).
단계 6d. (Z)-5-(3-(2-메톡시-6-(메톡시메톡시)-4-메틸페닐)-1-(메틸티오)-3-옥소 프로프- 1- 에닐아미노 )피라진-2- 카르보니트릴( 화합물 306-6):
THF(10 mL) 중 5-아미노피라진-2-카르보니트릴(750 mg, 6.22 mmol)의 현탁액에 0 내지 5℃에서 소듐 하이드라이드(420 mg, 10.36 mmol)를 첨가하였다. 이후에, 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 화합물 305-6(1.7 g, 5.18 mmol)을 첨가하고, 60℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음-물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축하였다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸 아세테이트: 5/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 306-6을 황색 고체로서 수득하였다(1.0 g, 50% 수율). LCMS:401.1[M+1]+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 2.34 (s, 3H), 2.36 (s, 3H), 3.46 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 5.16 (s, 2H), 5.69 (s, 1H), 6.46 (s, 1H), 6.63 (s, 1H), 8.37 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 8.52 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 14.64 (s, 1H).
단계 6e. 5-(5-(2-메톡시-6-(메톡시메톡시)-4-메틸페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2- 카르보니트릴( 화합물 307-6):
에탄올(10 mL) 중 화합물 306-6(800 mg, 2 mmol) 및 하이드라진 일수화물 (150 mg, 3 mmol)의 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 실온까지 냉각시킨 후에, 고형물을 여과에 의해 수집하고, 차가운 에탄올로 세척하고, 건조시켜 표제 화합물 307-6을 황색 고체로서 수득하였다(600 mg, 82% 수율). LCMS:367.4 [M+1]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 2.33 (s, 3H), 3.34 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 5.19 (s, 2H), 6.64 (s, 1H), 6.68 (s, 1H), 6.78 (s, 1H), 8.56 (br, 1H), 8.62 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 10.64 (s, 1H), 12.29 (d, J = 1.6 Hz, 1H).
단계 6f. 5-(5-(2-하이드록시-6-메톡시-4-메틸페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2- 카르보니트릴( 화합물 308-6):
HCl/디옥산(20 mL, 2 M 용액) 중 화합물 307-6(600 mg, 1.64 mmol)의 현탁액을 주변 온도에서 밤새 교반하였다. 고형물을 여과에 의해 수집하고, NH3/H2O로 pH를 9 내지 10까지 조절하고, 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축하여 표제 화합물 308-6을 황색 고체로서 수득하였다(480 mg, 91% 수율). LCMS:323.1[M+1]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 2.25 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 6.42 (s, 2H), 6.86 (s, 1H), 8.58 (br, 1H), 8.63 (s, 1H), 9.91 (s, 1H), 10.60 (s, 1H), 12.16 (s, 1H).
단계 6g. 3차-부틸 3-(2-(3-(5- 시아노피라진 -2- 일아미노 )-1H-피라졸-5-일)-3-메톡시-5-메틸페녹시) 프로필카르바메이트( 화합물 309-6):
무수 테트라하이드로푸란(10 mL) 중 PPh3(314 mg, 1.2 mmol)의 용액에 0 내지 5℃에서 시린지에 의해 DIAD(242 mg, 1.2 mmol)를 첨가하고, 이후에 무수 테트라하이드로푸란(5 mL) 중 3차-부틸 3-하이드록시프로필카르바메이트(110-1)(210 mg, 1.2 mmol)의 용액을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 무수 테트라하이드로푸란(5 mL) 중 화합물 308-6(130 mg, 0.4 mmol)의 용액내에 붓고, 10분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공 중에 증발시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/에틸 아세테이트: 5/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 309-6을 황색 고체로서 수득하였다(100 mg, 미정제물).
단계 6h. 5-(5-(2-(3-아미노 프로폭시 )-6-메톡시-4-메틸페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2- 카르보니트릴( 화합물 6):
디클로로메탄(4 mL) 중 화합물 309-6(100 mg, 미정제물)의 용액에 트리플루오로아세트산(2 mL)을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 중에서 증발시키고, prep-HPLC(수 중 30% 내지 90% CH3CN, 0.1% CF3COOH)에 의해 정제하여 표제 화합물 3-113을 황색 고체로서 수득하였다(20 mg, 2 단계를 통해 10% 수율). M.p.: 188 내지 191℃. LCMS: 380.4 [M+1]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.93-1.97 (m, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.87 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.81 (s, 3H), 4.10 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 6.61 (s, 2H), 6.88 (s, 1H), 8.55 (br, 1H), 8.67 (s, 1H).
실시예 7:
5-(5-(2-(3-아미노 프로폭시 )-4,6- 디메톡시페닐 )-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카 르보니트릴( 화합물 7)
단계 7a. 1-(2-하이드록시-4,6- 디메톡시페닐)에탄온( 화합물 303-7):
1,2-디클로로에탄(10 mL) 중 3,5-디메톡시페놀(2.0 g, 12.9 mmol) 및 트리에틸아민(2.0 g, 19.4 mmol)의 혼합물에 0℃에서 아세틸 클로라이드(1.2 g, 15.6 mmol)를 첨가하였다. 이후에, 얻어진 혼합물을 0.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공 중에 증발시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸 아세테이트: 15/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 3,5-디메톡시페닐 아세테이트를 황색 고체로서 수득하였다(2.2 g, 85% 수율). LCMS: 197.1 [M+1]+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 2.27 (s, 3H), 3.76 (s, 6H), 6.26 (d, J=2.4 Hz, 2H), 6.31-6.38 (m, 1H). 클로로벤젠(4 mL) 중 알루미늄 트리클로라이드(120 mg, 1.53 mmol)의 현탁액에 클로로벤젠(4 mL) 중 상기에서 수득된 화합물(200 mg, 1.02 mmol)을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 70℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공 중에 증발시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸 아세테이트: 20/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 303-7을 황색 고체로서 수득하였다(65 mg, 33% 수율). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 2.55 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 3.86 (s, 3H), 6.08 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.11 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 13.76 (s, 1H).
단계 7b. 1-(2,4- 디메톡시 -6-(메톡시메톡시)페닐)에탄온(화합물 304-7):
THF(10 mL) 중 화합물 303-7(500 mg, 2.55 mmol)의 용액에 0℃에서 소듐 하이드라이드(153 g, 3.82 mmol)를 첨가하였다. 이후에, 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 클로로(메톡시)메탄(308 mg, 3.82 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 주변 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공 중에 증발시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸 아세테이트: 15/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 304-7을 황색 오일로서 수득하였다(403 mg, 66% 수율). LCMS: 241.1 [M+1]+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 2.47 (s, 3H), 3.46 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 5.14 (s, 2H), 6.15 (t, J =2.0 Hz, 1H), 6.33 (d, J = 2.0 Hz, 1H).
단계 7c. 1-(2,4- 디메톡시 -6-(메톡시메톡시)페닐)-3,3-비스(메틸티오)프로프-2-엔-1-온(화합물 305-7):
무수 DMSO(20 mL) 중 리튬 3차-부톡사이드(416 mg, 5.20 mmol)의 현탁액에 주변 온도에서 화합물 304-7(500 mg, 2.08 mmol)을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. CS2(237 mg, 3.12 mmol)를 주변 온도에서 첨가하고, 3시간 동안 교반하였다. 요오도메탄(739 mg, 5.20 mmol)을 주변 온도에서 첨가하고, 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축하였다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸 아세테이트: 4/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 305-7을 황색 고체로서 수득하였다(180 mg, 26% 수율). LCMS:345.3 [M+1]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 2.40 (s, 3H), 2.49 (s, 3H), 3.45 (s, 3H), 3.77 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 5.12 (s, 2H), 6.17 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.26 (s, 1H), 6.34 (d, J = 2.0 Hz, 1H).
단계 7d. (Z)-5-(3-(2,4- 디메톡시 -6-(메톡시메톡시)페닐)-1-(메틸티오)-3-옥소 프로프- 1- 에닐아미노 )피라진-2- 카르보니트릴( 화합물 306-7):
THF(10 mL) 중 5-아미노피라진-2-카르보니트릴(211 mg, 1.74 mmol)의 현탁액에 0℃에서 소듐 하이드라이드(116 mg, 2.90 mmol)를 첨가하고, 주변 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 화합물 305-7(500 mg, 1.45 mmol)을 첨가하고, 55℃에서 2시간 동안 교반하였다. 주변 온도까지 냉각시킨 후에, 반응 혼합물을 얼음-물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축하였다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸 아세테이트: 5/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 306-7을 황색 고체로서 수득하였다(253 mg, 42% 수율).
단계 7e. 5-(5-(2,4- 디메톡시 -6-(메톡시메톡시)페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2- 카르보니트릴( 화합물 307-7):
에탄올(6 mL) 중 화합물 306-7(253 mg, 0.61 mmol) 및 하이드라진 일수화물(48 mg, 0.96 mmol)의 혼합물을 85℃에서 20분 동안 교반하였다. 주변 온도까지 냉각시킨 후에, 고형물을 여과에 의해 수집하고, 차가운 에탄올로 세척하고, 건조시켜 표제 화합물 307-7을 황색 고체로서 수득하였다(203 mg, 88% 수율).
단계 7f. 5-(5-(2-하이드록시-4,6- 디메톡시페닐 )-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카 르보니트릴( 화합물 308-7):
HCl/1,4-디옥산(20 mL, 2 M 용액) 중 화합물 307-7(1.2 g, 3.14 mmol)의 용액을 주변 온도에서 밤새 교반하였다. 고형물을 여과에 의해 수집하고, NH3/H2O로 9 내지 10의 pH를 갖도록 조절하고, 디클로로메탄으로 추출하였다. 합한 유기층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축하여 표제 화합물 308-7을 황색 고체로서 수득하였다(1.0 g, 94% 수율).
단계 7g. 3차-부틸 3-(2-(3-(5- 시아노피라진 -2- 일아미노 )-1H-피라졸-5-일)-3,5-디메톡시페녹시) 프로필카르바메이트( 화합물 309-7):
무수 테트라하이드로푸란(6 mL) 중 PPh3(236 mg, 0.9 mmol)의 용액에 0 내지 5℃에서 시린지에 의해 DIAD(182 mg, 0.9 mmol)를 첨가하고, 이후에, 무수 테트라하이드로푸란(5 mL) 중 3차-부틸 3-하이드록시프로필카르바메이트(110-1)(155 mg, 0.9 mmol)의 용액을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 무수 테트라하이드로푸란(5 mL) 중 화합물 308-7(100 mg, 0.3 mmol)의 용액내에 붓고, 10분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공 중에 증발시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/에틸 아세테이트: 5/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 309-7을 황색 고체로서 수득하였다(300 mg, 미정제물). LCMS: 496.6 [M+1]+.
단계 7h. 5-(5-(2-(3-아미노 프로폭시 )-4,6- 디메톡시페닐 )-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2- 카르보니트릴( 화합물 7):
디클로로메탄(4 mL) 중 화합물 309-7(100 mg, 미정제물)의 용액에 트리플루오로아세트산(2 mL)을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 중에서 증발시키고, prep-HPLC(수 중 30% 내지 90% CH3CN, 0.1% CF3COOH)에 의해 정제하여 표제 화합물 7을 황색 고체로서 수득하였다(20 mg, 2 단계를 통해 10% 수율). M.p.: 145 내지 151℃. LCMS: 396.4 [M+1]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.80-1.87 (m, 2H), 2.76 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.82 (d, J = 2.4 Hz, 6H), 4.10 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 6.33 (s, 1H), 6.34 (s, 1H), 6.84 (s, 1H), 8.54 (br, 2H), 8.65 (s, 1H).
실시예 8:
5-(5-(2-((1-(아미노 메틸 )사이클로프 로필 )메톡시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3- 일아미노 )피라진-2- 카르보니트릴( 화합물 13)
단계 8a. 3차-부틸(1-((2-(3-(5- 시아노피라진 -2- 일아미노 )-1H-피라졸-5-일)-5-플루오로-3-메톡시페녹시)메틸)사이클로프 로필 )메틸카르바메이트(화합물 309-13):
무수 테트라하이드로푸란(10 mL) 중 PPh3(242 mg, 0.92 mmol)의 용액에 0 내지 5℃에서 시린지에 의해 DIAD(186 mg, 0.92 mmol)를 첨가하고, 이후에, 무수 테트라하이드로푸란(5 mL) 중 3차-부틸(1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메틸카르바메이트(110-13)(185 mg, 0.92 mmol)의 용액을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 무수 테트라하이드로푸란(5 mL) 중 화합물 308-3(100 mg, 0.306 mmol)의 용액내에 붓고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공 중에 증발시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/에틸 아세테이트: 5/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 309-13을 황색 고체로서 수득하였다(400 mg, 미정제물). LCMS: 510.5 [M+1]+.
단계 8b. 5-(5-(2-((1-(아미노 메틸 )사이클로프 로필 )메톡시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3- 일아미노 )피라진-2- 카르보니트릴( 화합물 13):
디클로로메탄(4 mL) 중 화합물 309-13(400 mg, 미정제물)의 용액에 트리플루오로아세트산(2 mL)을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 중에서 증발시키고, prep-HPLC(수 중 35% 내지 90% CH3CN, 0.1% CF3COOH)에 의해 정제하여 표제 화합물 13을 황색 고체로서 수득하였다(40 mg, 2 단계를 통해 32% 수율). M.p.: 202 내지 206℃. LCMS: 410.5 [M+1]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 0.48-0.51 (m, 4H), 2.66 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.96 (s, 2H), 6.63-6.69 (m, 2H), 6.95 (s, 1H), 8.50 (br, 1H), 8.61 (s, 1H).
실시예 9:
5 -(5-(2-((1-(아미노 메틸 )사이클로프 로필 )메톡시)-4- 클로로 -6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3- 일아미노 )피라진-2- 카르보니트릴( 화합물 14)
단계 9a. 3차-부틸(1-((5- 클로로 -2-(3-(5- 시아노피라진 -2- 일아미노 )-1H-피라졸-5-일)-3-메톡시페녹시)메틸)사이클로프 로필 )메틸카르바메이트(화합물 309-14):
무수 테트라하이드로푸란(10 mL) 중 PPh3(459 mg, 1.75 mmol)의 용액에 0 내지 5℃에서 시린지에 의해 DIAD(354 mg, 1.75 mmol)를 첨가하고, 이후에, 무수 테트라하이드로푸란(5 mL) 중 3차-부틸(1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메틸카르바메이트(110-13)(352 mg, 1.75 mmol)의 용액을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 무수 테트라하이드로푸란(5 mL) 중 화합물 308-4(200 mg, 0.58 mmol)의 현탁액내에 붓고, 주변 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공 중에 증발시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/에틸 아세테이트: 5/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 309-14를 황색 고체로서 수득하였다(500 mg, 미정제물). LCMS: 526.2 [M+1]+.
단계 9b. 5-(5-(2-((1-(아미노 메틸 )사이클로프 로필 )메톡시)-4- 클로로 -6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3- 일아미노 )피라진-2- 카르보니트릴( 화합물 14):
디클로로메탄(3 mL) 중 화합물 309-14(500 mg, 미정제물)의 용액에 트리플루오로아세트산(3 mL)을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 중에서 증발시키고, prep-HPLC(수 중 40% 내지 90% CH3CN, 0.1% CF3COOH)에 의해 정제하여 표제 화합물 14를 황색 고체로서 수득하였다(50 mg, 2 단계를 통해 20% 수율). M.p.: 232 내지 236℃. LCMS: 427.0 [M+1]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 0.44-0.54 (m, 4H), 2.64 (s, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.99 (s, 2H), 6.84 (s, 1H), 6.85 (s, 1H), 7.01 (s, 1H), 8.50 (br, 1H), 8.62 (d, J = 1.2 Hz, 1H).
실시예 10:
5 -(5-(2-((1-(아미노 메틸 )사이클로프 로필 )메톡시)-4-브로모-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3- 일아미노 )피라진-2- 카르보니트릴( 화합물 15)
단계 10a. 3차-부틸(1-((5-브로모-2-(3-(5- 시아노피라진 -2- 일아미노 )-1H-피라졸-5-일)-3-메톡시페녹시)메틸)사이클로프 로필 )메틸카르바메이트(화합물 309-15):
무수 THF(4 mL) 중 PPh3(240 mg, 0.91 mmol)의 용액에 0 내지 5℃에서 시린지에 의해 DIAD(185 mg, 0.91 mmol)를 첨가하고, 이후에, 무수 THF(2 mL) 중 3차-부틸(1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메틸카르바메이트(110-13)(185 mg, 0.91 mmol)의 용액을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 건조 THF(2 mL) 중 화합물 308-5(118 mg, 0.30 mmol)의 용액내에 붓고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공 중에 증발시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/에틸 아세테이트: 3/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 309-15를 황색 고체로서 수득하였다(300 mg).
단계 10b. 5-(5-(2-((1-(아미노 메틸 )사이클로프 로필 )메톡시)-4-브로모-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3- 일아미노 )피라진-2- 카르보니트릴( 화합물 15):
DCM(3 mL) 중 화합물 309-15(300 mg, 50% 순도)의 용액에 TFA(2 mL)를 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 중에서 증발시키고, prep-HPLC(수 중 40% 내지 90% CH3CN, 0.1% CF3COOH)에 의해 정제하여 표제 화합물 15를 밝은 황색 고체로서 수득하였다(48.2 mg, 2 단계를 통해 39% 수율). LCMS: 472.0 [M+1]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 0.48-0.49 (m, 4H), 2.64 (s, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.99 (s, 2H), 6.95-6.96 (m, 2H), 7.01 (br, 1H), 8.50 (br, 1H),8.61 (d, J = 1.2 Hz, 1H).
실시예 11:
5 -(5-(2-((1-(아미노 메틸 )사이클로프 로필 )메톡시)-6-메톡시-4-메틸페닐)-1H-피라졸-3- 일아미노 )피라진-2- 카르보니트릴( 화합물 16)
단계 11a. 3차-부틸(1-((2-(3-(5- 시아노피라진 -2- 일아미노 )-1H-피라졸-5-일)-3-메톡시-5-메틸페녹시)메틸)사이클로프 로필 )메틸카르바메이트(화합물 309-16):
무수 테트라하이드로푸란(10 mL) 중 PPh3(244 mg, 0.93 mmol)의 용액에 0 내지 5℃에서 시린지에 의해 DIAD(188 mg, 0.93 mmol)를 첨가하고, 무수 테트라하이드로푸란(5 mL) 중 3차-부틸(1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메틸카르바메이트(110-13)(187 mg, 0.93 mmol)의 용액을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 무수 테트라하이드로푸란(5 mL) 중 화합물 308-6(100 mg, 0.31 mmol)의 용액내에 붓고, 주변 온도에서 10분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공 중에 증발시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/에틸 아세테이트: 5/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 309-16을 황색 고체로서 수득하였다(180 mg, 미정제물). LCMS: 506.6 [M+1]+.
단계 11b. 5-(5-(2-((1-(아미노 메틸 )사이클로프 로필 )메톡시)-6-메톡시-4-메틸페닐)-1H-피라졸-3- 일아미노 )피라진-2- 카르보니트릴 (화합물 16):
디클로로메탄(3 mL) 중 화합물 309-16(180 mg, 미정제물)의 용액에 트리플루오로아세트산(3 mL)을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 중에서 증발시키고, prep-HPLC(수 중 30% 내지 90% CH3CN, 0.1% CF3COOH)에 의해 정제하여 표제 화합물을 황색 고체의 화합물 16으로서 수득하였다(60 mg, 2 단계를 통해 48% 수율). M.p.: 165 내지 170℃. LCMS: 406.4 [M+1]+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 0.60-0.63 (m, 4H), 2.37 (s, 3H), 2.73 (s, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.97 (s, 2H), 6.56 (s, 1H), 6.59 (s, 1H), 6.97 (s, 1H), 8.43 (br, 1H), 8.47 (d, J = 1.2 Hz, 1H).
실시예 12:
5 -(5-(2-((1-(아미노 메틸 )사이클로프 로필 )메톡시)-4,6-디메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴(화합물 17)
단계 12a. 3차-부틸(1-((2-(3-(5- 시아노피라진 -2- 일아미노 )-1H-피라졸-5-일)-3,5- 디메톡시페녹시 )메틸)사이클로프 로필 )메틸카르바메이트(화합물 309-17):
무수 테트라하이드로푸란(10 mL) 중 PPh3(244 mg, 0.90 mmol)의 용액에 0 내지 5℃에서 시린지에 의해 DIAD(188 mg, 0.90 mmol)를 첨가하고, 이후에 무수 테트라하이드로푸란(5 mL) 중 3차-부틸(1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메틸카르바메이트(110-13)(178 mg, 0.90 mmol)의 용액을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 무수 테트라하이드로푸란(5 mL) 중 화합물 308-7(100 mg, 0.30 mmol)의 용액내에 붓고, 10분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공 중에 증발시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/에틸 아세테이트: 5/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 309-17을 황색 고체로서 수득하였다(100 mg, 미정제물). LCMS: 522.3 [M+1]+.
단계 12b. 5-(5-(2-((1-(아미노 메틸 )사이클로프 로필 )메톡시)-4,6-디메톡시페닐)-1H-피라졸-3- 일아미노 )피라진-2- 카르보니트릴( 화합물 17):
디클로로메탄(3 mL) 중 화합물 309-17(100 mg, 미정제물)의 용액에 트리플루오로아세트산(3 mL)을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 중에 증발시켰다. 잔부를 prep-HPLC(수 중 35% 내지 90% CH3CN, 0.1% CF3COOH)에 의해 정제하여 표제 화합물 17을 황색 고체로서 수득하였다(30 mg, 2 단계를 통해 20% 수율). M.p.: 160 내지 164℃. LCMS: 422.5 [M+1]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 0.49-0.52 (m, 4H), 2.67 (s, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.83 (s, 3H), 3.96 (s, 2H), 6.32 (d, J =2.0 Hz, 2H), 6.92 (s, 1H),8.52 (br, 1H), 8.61(s, 1H).
실시예 13:
5 -(5-(3-플루오로-6-메톡시-2-((1-((메틸아미노)메틸)사이클로프로필)메톡시)페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴(화합물 18)
단계 13a. 3차-부틸(1-((2-(3-(5-시아노피라진-2-일아미노)-1H-피라졸-5-일)-6-플루오로-3-메톡시페녹시)메틸)사이클로프 로필 )메틸 (메틸)카르바메이트( 화합물 111-18):
무수 테트라하이드로푸란(10 mL) 중 PPh3(321 mg, 1.23 mmol)의 용액에 0 내지 5℃에서 DIAD(248 mg, 1.23 mmol)를 적가하였다. 10분 후에, 무수 테트라하이드로푸란(5 mL) 중 3차-부틸((1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메틸)(메틸)카르바메이트(110-18)(263 mg, 1.23 mmol)의 용액을 0 내지 5℃에서 현탁액내에 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 무수 테트라하이드로푸란(5 mL) 중 화합물 109(100 mg, 0.31 mmol)의 용액에 첨가하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공 중에 증발시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/에틸 아세테이트: 5/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 111-18을 황색 고체로서 수득하였다(230 mg, 미정제물). LCMS: 524.4 [M+1]+.
단계 13b. 5-(5-(3-플루오로-6-메톡시-2-((1-((메틸아미노)메틸)사이클로프로필)메톡시)페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴(화합물 18):
디클로로메탄(3 mL) 중 화합물 111-18(230 mg, 미정제물)의 용액에 트리플루오로아세트산(3 mL)을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 중에 증발시켰다. 잔부를 prep-HPLC(수 중 40% 내지 90% CH3CN, 0.1% CF3COOH)에 의해 정제하여 표제 화합물 18을 황색 고체로서 수득하였다(40 mg, 2 단계를 통해 30% 수율). M.p.: 213 내지 215℃. LCMS: 424.4 [M+1]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 0.41-0.42 (m, 4H), 2.25 (s, 3H), 2.42 (s, 2H), 3.78 (s, 2H), 3.80 (s, 3H), 6.86 (dd, J = 9.2, 4.0 Hz, 1H), 6.96 (s, 1H), 7.28 (dd, J = 11.2, 9.2 Hz, 1H), 8.53 (br, 1H), 8.65 (d, J = 1.2 Hz, 1H).
실시예 14:
5-((5-(3-플루오로-2-메톡시-6-((1-((메틸아미노)메틸)사이클로프로필)메톡시)페닐)-1H-피라졸-3-일)아미노)피라진-2-카르보니트릴(화합물 19)
단계 14a. 3차-부틸((1-((2-(3-((5- 시아노피라진 -2- 일 )아미노)-1H-피라졸-5-일)-4-플루오로-3-메톡시페녹시)메틸)사이클로프로필)메틸)(메틸)카르바메이트(화합물 211-19):
무수 테트라하이드로푸란(5 mL) 중 PPh3(140 mg, 0.53 mmol)의 용액에 0 내지 5℃에서 DIAD(108 mg, 0.53 mmol)를 첨가하고, 이후에, 무수 테트라하이드로푸란(3 mL) 중 3차-부틸((1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메틸)(메틸)카르바메이트(110-18)(115 mg, 0.53 mmol)의 용액을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 무수 테트라하이드로푸란(3 mL) 중 화합물 210(58 mg, 0.18 mmol)의 용액에 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공 중에 증발시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/에틸 아세테이트: 5/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 211-19를 황색 고체로서 수득하였다(60 mg, 미정제물). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 0.54-0.57(m, 4H), 1.15-1.23 (m, 9H), 2.72 (s, 3H), 3.29 (s, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.76 (s, 2H), 6.77-6.80 (m, 1H), 7.23-7.29 (m, 1H), 8.49 (br, 1H), 8.62 (s, 1H), 10.80 (br, 1H), 12.38-12.47 (m 1H).
단계 14b. 5-((5-(3-플루오로-2-메톡시-6-((1-((메틸아미노)메틸)사이클로프로필)메톡시)페닐)-1H-피라졸-3-일)아미노)피라진-2-카르보니트릴(화합물 19):
디클로로메탄(3 mL) 중 화합물 211-19(60 mg, 미정제물)의 용액에 트리플루오로아세트산(3 mL)을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 중에서 증발시키고, 미정제 생성물을 prep-HPLC(수 중 35% 내지 90% CH3CN, 0.1% CF3COOH)에 의해 정제하여 표제 화합물 19를 황색 고체로서 수득하였다(40 mg, 2 단계를 통해 53% 수율). M.p.: 215 내지 219℃. LCMS: 424.4 [M+1]+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 0.62-0.64 (m, 4H), 2.37 (s, 3H), 2.65 (s, 2H), 3.84 (d, J = 1.2 Hz, 3H), 3.95 (s, 2H), 6.81 (dd, J = 9.2, 4.0 Hz, 1H), 7.01 (s, 1H), 7.16 (dd, J = 10.8, 9.2 Hz, 1H), 8.51 (br, 1H), 8.53 (s, 1H).
실시예 15:
5 -(5-(4-플루오로-2-메톡시-6-((1-((메틸아미노)메틸)사이클로프로필)메톡시)페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴(화합물 20)
단계 15a. 3차-부틸(1-((2-(3-(5-시아노피라진-2-일아미노)-1H-피라졸-5-일)-5-플루오로-3-메톡시페녹시)메틸)사이클로프 로필 )메틸 (메틸)카르바메이트( 화합물 309-20):
무수 테트라하이드로푸란(10 mL) 중 PPh3(451 mg, 1.72 mmol)의 용액에 0 내지 5℃에서 DIAD(348 mg, 1.72 mmol)를 적가하였다. 10분 후에, 현탁액에 0 내지 5℃에서 무수 테트라하이드로푸란(5 mL) 중 3차-부틸((1-(하이드록시메틸)사이클로프로필)메틸)(메틸)카르바메이트(110-18)(370 mg, 1.72 mmol)의 용액을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 무수 테트라하이드로푸란(5 mL) 중 화합물 308-3(140 mg, 0.43 mmol)의 용액내에 붓고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공 중에 증발시켰다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/에틸 아세테이트: 5/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 309-20을 황색 고체로서 수득하였다(300 mg, 미정제물). LCMS: 524.3 [M+1]+.
단계 15b. 5-(5-(4-플루오로-2-메톡시-6-((1-((메틸아미노)메틸)사이클로프로필)메톡시)페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴(화합물 20):
디클로로메탄(3 mL) 중 화합물 309-20(300 mg, 미정제물)의 용액에 트리플루오로아세트산(3 mL)을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 중에서 증발시키고, 잔부를 pre-HPLC(수 중 40% 내지 90% CH3CN, 0.1% CF3COOH)에 의해 정제하여 표제 화합물 20을 황색 고체로서 수득하였다(20 mg, 2 단계를 통해 11% 수율). M.p.: 228 내지 230℃. LCMS: 424.1 [M+1]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 0.53 (d, J = 8.0 Hz, 4H), 2.32 (s, 3H), 2.57 (s, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.95 (s, 2H), 6.64-6.70 (m, 2H), 6.98 (s, 1H), 8.54 (br, 1H), 8.62 (s, 2H), 10.71 (br, 1H).
실시예 16:
에틸 3-(2-(3-(5- 시아노피라진 -2- 일아미노 )-1H-피라졸-5- 일 )-5-플루오로-3-메톡시페녹시) 프로필카르바메이트( 화합물 38)
무수 테트라하이드로푸란(10 mL) 중 화합물 3(75 mg, 0.19 mmol) 및 K2CO3(54 mg, 0.39 mmol)의 현탁액에 0℃에서 에틸 카본클로리데이트(21 mg, 0.19 mmol)를 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공 중에 증발시켰다. 미정제 생성물을 prep-HPLC(수 중 60% 내지 90% CH3CN, 0.1% CF3COOH)에 의해 정제하여 표제 화합물 38을 황색 고체로서 수득하였다(37 mg, 43% 수율). LCMS: 456.5 [M+1]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.13 (t, J = 6.8 Hz, 3H), 1.83-1.86 (m, 2H), 3.13 (q, J = 6.4 Hz, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.94 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 4.03 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 6.66-6.70 (m, 2H), 6.87 (s, 1H), 7.15 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 8.50 (br, 1H), 10.7 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 12.29 (s,1H).
실시예 17: 하기 화합물들은 또한 상기 실시예 1 내지 실시예 16에 기술된 절차와 유사한 절차를 이용하여 제조될 수 있다:
5-(5-(2-(3-메틸아미노프로폭시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-(3-메틸아미노프로폭시)-4-클로로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-(3-메틸아미노프로폭시)-4-브로모-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-(3-메틸아미노프로폭시)-4-메틸-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-(3-메틸아미노프로폭시)-4,6-디메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-((5-(4-클로로-2-메톡시-6-((1-((메틸아미노)메틸)사이클로프로필)메톡시)페닐)-1H-피라졸-3-일)아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-((5-(4-브로모-2-메톡시-6-((1-((메틸아미노)메틸)사이클로프로필)메톡시)페닐)-1H-피라졸-3-일)아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-((5-(2-메톡시-4-메틸-6-((1-((메틸아미노)메틸)사이클로프로필)메톡시)페닐)-1H-피라졸-3-일)아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-((5-(2,4-디메톡시-6-((1-((메틸아미노)메틸)사이클로프로필)메톡시)페닐)-1H-피라졸-3-일)아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-(2-하이드록시-3-아미노프로폭시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-(2-하이드록시-3-아미노프로폭시)-4-메틸-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
5-(5-(2-(2-하이드록시-3-아미노프로폭시)-4,6-디메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
2-메틸-5-(5-(2-(3-아미노프로폭시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진;
2-클로로-5-(5-(2-(3-아미노프로폭시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진;
2-메틸-5-(5-(2-(3-메틸아미노프로폭시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진;
2-클로로-5-(5-(2-(3-메틸아미노프로폭시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진;
2-메틸-5-(5-(2-((1-(아미노메틸)사이클로프로필)메톡시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진;
2-클로로-5-(5-(2-((1-(아미노메틸)사이클로프로필)메톡시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진;
2-메틸-5-(5-(2-((1-(아미노메틸)사이클로프로필)메톡시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진;
2-클로로-5-(5-(2-((1-(아미노메틸)사이클로프로필)메톡시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진;
2-메틸-5-(5-(2-(2-하이드록시-3-아미노프로폭시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진;
2-클로로-5-(5-(2-(2-하이드록시-3-아미노프로폭시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진;
2-아미노-N-(3-(2-(3-((5-시아노피라진-2-일)아미노)-1H-피라졸-5-일)-5-플루오로-3-메톡시페녹시)프로필)아세트아미드; 또는
1-(((3-(2-(3-((5-시아노피라진-2-일)아미노)-1H-피라졸-5-일)-5-플루오로-3-메톡시페녹시)프로필)카르바모일)옥시)에틸 이소부티레이트.
시험관내 및 생체내 약리학적 연구:
1. ChK1 효소 검정
1) Chk1 활성을 억제하는 시험 화합물의 능력을 결정하는 시험관내 ADP- Glo 검정
화합물을 100% DMSO에 용해시켰다. 100 nl의 화합물을 echo와 함께 Echo 인증된 384-웰 검정 플레이트(LABCYTE, Cat. No. P05525)로 옮겼다. 화합물을 함유하지 않은 대조 웰은 100 nl의 100% DMSO를 함유하였다. 2.5 ㎕의 Chk1 효소 용액(BPS, Cat. No. 40039, Lot. No. 1001)의 2배 희석액을 다양한 농도의 화합물과 함께 웰내에 분배하고, 2.5 ㎕의 검정 완충제(pH 7.5의 40 mM 트리스, 20 mM MgCl2, 0.10% BSA, 1 mM DTT)를 낮은 대조 웰(low control well)내에 첨가하였다. 실온에서 10분 동안 인큐베이션한 후에, 2.5 ㎕의 기질 펩타이드 FAM-P10(Invitrogen, Cat. No. 116583, Lot. No. P080804-WY116583)의 2배 희석액을 첨가하였다. 37℃의 온도에서 60분 동안 인큐베이션한 후에, 5 ㎕의 ADP-Glo 시약(Promega, Cat. No. v9102/3, Lot. No. 314795)을 첨가하고, 플레이트를 실온에서 60분 동안 인큐베이션하였다. 10 ㎕의 키나아제 검출 시약(Promega, Cat. No. v9102/3, Lot. No. 314795)을 모든 웰내로 옮기고, 플레이트를 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 변환 데이터를 Synergy(Biotek)로 판독하고, RLU 값을 억제 값으로 변환시켰다. 억제률(%) = (최대-변환)/(최대-최소)*100.
2) Chk2 활성을 억제하는 시험 화합물의 능력을 결정하는 시험관내 ADP- Glo 검정
화합물을 100% DMSO에 용해시켰다. 100 nl의 화합물을 echo와 함께 Echo 인증된 384-웰 검정 플레이트(LABCYTE, Cat. No. P05525)로 옮겼다. 화합물을 함유하지 않은 대조 웰은 100 nl의 100% DMSO를 함유하였다. 2.5 ㎕의 Chk2 효소 용액(Carna, Cat. No. 02-162, Lot. No. 10CBS-0386)의 2.5배 희석액을 다양한 농도의 화합물과 함께 웰내에 분배하고, 2.5 ㎕의 검정 완충제(pH 7.5의 40 mM 트리스, 20 mM MgCl2, 0.10% BSA, 1 mM DTT)를 낮은 대조 웰내에 첨가하였다. 실온에서 10분 동안 인큐베이션한 후에, 2.5 ㎕의 기질 펩타이드 FAM-P10(Invitrogen, Cat. No. 116583, Lot. No. P080804-WY116583)의 2.5배 희석액을 첨가하였다. 37℃의 온도에서 60분 동안 인큐베이션한 후에, 5 ㎕의 ADP-Glo 시약(Promega, Cat. No. v9102/3, Lot. No. 314795)을 첨가하고, 플레이트를 37℃에서 60분 동안 인큐베이션하였다. 10 ㎕의 키나아제 검출 시약(Promega, Cat. No. v9102/3, Lot. No. 314795)을 모든 웰내로 옮기고, 플레이트를 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 변환 데이터를 Synergy(Biotek)로 판독하고, RLU 값을 억제 값으로 변환시켰다. 억제률(%) = (최대-변환)/(최대-최소)*100.
하기 표 1은 본 발명의 예시적인 화합물 및 Chk1 및 Chk2 검정에서의 이의 활성을 나열한 것이다. 이러한 검정에서, 하기 등급화(grading)를 사용하였다: I > 100 nM, 100 nM ≥ II > 50 nM, 50 nM ≥ III > 10 nM, 10 nM ≥ IV > 1 nM, V ≤ 1 nM.
표 1. 시험관내 효소 활성
Figure pct00012
2. 암 세포 성장 억제 검정
인간 암 세포주를 미국세포주은행(American Type Culture Collection; Manassas, VA)으로부터 구매하였다. 트립신 처리된 세포를 44,000개 세포/ml의 밀도로 요망되는 부피까지 희석하였다. 90 ㎕의 세포 슬러리를 권장된 배양 배지를 함유한 96-웰의 바닥이 평평한 플레이트에 웰 당 분배하였다. 세포를 가습 조건 하, 5% CO2 중 37℃에서 24시간 동안 인큐베이션하였다. 이후에, 세포를 0.5%(v/v) FBS가 보충된 배양 배지 중에서 다양한 농도의 화합물과 함께 72시간 동안 인큐베이션하였다. 성장 억제를 각 웰에 대한 CellTiter-Glo 시약을 사용한 세포 ATP 함량의 검정에 의해 평가하였다. 발광을 Envision 상에서 판독하였다. 억제율(%) = (최대 신호 - 화합물 신호)/(최대 신호 - 최소 신호)×100
하기 표 2는 본 발명의 예시적인 화합물 및 세포-기반 검정에서의 이의 항-세포 증식 활성을 나열한 것이다. 이러한 검정에서, 하기 등급화를 이용하였다: I > 500 nM, 500 nM ≥ II > 100 nM, 100 nM ≥ III > 50 nM, 50 nM ≥ IV > 10 nM, V ≤ 10 nM.
표 2. 세포 증식 검정
Figure pct00013
3. 웨스턴 블롯 분석
단층 배양물에서 성장된 HT-29 결장암 세포를 명시된 바와 같이 처리하였다. 도면 범례에서, 세포 용리액을 균질화하였다. 13,000 rpm에서 원심분리하고 8분 동안 비등시킨 후에 준비된 샘플을 SDS-PAGE 겔 상에 로딩하였다. 면역블롯팅(Immunoblotting)을 1차 Chk1 마우스 항체CST Cat # 2360, pChK1(S296) 항체(CST Cat # 2349) 또는 β-액틴 항체(CST Cat #4970) 및 IRDye 680RD- 또는 IRDay 800CW-컨쥬게이션된 2차 항체(Li-COR Cat#926-68071, Cat # 926-32210)를 함유한 블로킹 용액(blocking solution)과 함께 표준 절차를 이용하여 수행하였다. 막을 LI-COR Odyssey Infrared Imaging System으로 이미지화하였다.
HT-29 세포를 0.5시간 동안 다양한 농도의 Chk1 억제제와 함께 사전-인큐베이션하고, 이후에, 16시간 동안 SN-38(200 nM)로 처리하였다. 화합물 3 및 화합물 13은 HT-29 결장 세포에서의 Chk1 포스포릴화의 억제에서 LY-260636에 대한 유사한 효능을 나타내었다. GDC-575는 이러한 화합물들보다 덜 강력하였다(도 1). HT-29 세포를 24시간 동안 SN-38(50 nM)과 함께 사전-인큐베이션하고, 이후에 3시간 동안 다양한 농도의 ChK1 억제제로 처리하였다. LY-260636 및 화합물 3 둘 모두는 종양 세포에서 ChK1 포스포릴화를 강력하게 억제하였다(도 2).
4. 약동학 연구
화합물을 1 몰당량의 HCl(pH를 3 내지 5까지 조절함)을 함유한 30% SEB-β-CD(Zhiyuan Bio-technology)에서 제형화하였다. 수컷 SD 랫트(280 내지 350 g)를 광둥(Guangdong)의 Medical Laboratory Animal Center로부터 구매하였다. 3마리의 랫트를 각 PK 연구를 위해 사용하였다. 각 랫트에 10 mg/kg으로 꼬리 정맥을 정맥내 주사를 통해 투약하였다. 화합물 투여 후 다양한 시점에, 꼬리의 단부를 K2-EDTA를 함유한 튜브내로 절단함으로써 대략 0.2 내지 0.3 mL의 혈액을 수집하였다. 혈장을 원심분리를 통해 분리하고, -80℃에서 저장하였다. 혈장에서 화합물 농도를 분석하기 위해 PE Sciex API-3000 LC-MS/MS 시스템(Applied Biosystems, Inc.)을 이용하였다.
ChK1 억제제의 PK 연구를 10 mg/kg의 정맥내 투여 후에 랫트에서 수행하였다. 동물은 랫트에서 10 mg/kg에서 LY-2606368를 견디지 못하였다. LY-2606368의 용량을 5 mg/kg으로 조정하였다. 화합물 3, 4, 5, 14 및 15는 LY2606368보다 더 긴 반감기 및 더 높은 노출을 나타내었다(표 3).
표 3. 화합물 3, 4, 5, 14 및 15의 PK 파라미터
Figure pct00014
5. 인간 암 이종이식 모델
7주령 내지 8주령의 암컷 Balb/c 누드 마우스(17 내지 18 g의 체중)를 Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd로부터 구매하였다. HT-29 세포를 10% 우태아혈청을 함유한 DMEM 배양 배지에서 배양하고, LoVo 세포를 10% 우태아혈청을 함유한 RPMI 1640 배양 배지에서 배양하였다. 세포를 수확하고, 혈청 부재 배양 배지로 세척하였다. 마지막으로, 세포를 이식을 위해 혈청 부재 배양 배지에서 5×107개 세포/ml의 세포 밀도로 현탁시켰다. 0.1 ml 혈청 부재 배양 배지 및 1:1 매트리겔(matrigel) 중에 현탁된 동물 당 5백만개의 세포를 1주일의 순응 기간 후에 동물의 우측 옆구리내에 주사하였다. 평균 종양 용적이 허용 가능한 종양 크기(100 내지 200 ㎣) 및 형상에 도달하였을 때, 동물을 처리군으로 무작위적으로 지정하였다.
6. 종양-보유 마우스에서의 PK 연구
종양 보유 마우스에서의 추가 PK 연구를 위하여 화합물 3을 선택하였다. Balb/c 누드 마우스에서 이종이식 모델을 수립하기 위해 HT-29 결장암 세포를 이식하였다. 24마리의 마우스를 군 당 n=3로 8개의 시간 군(time group)으로 나누었다. 화합물 3을 1 몰당량의 HCl을 함유한 30% SEB-β-CD(Zhiyuan Bio-technology) 중에 용해시켰다. 각 동물에 40 mg/kg으로 화합물 3을 정맥내 투여를 통해 투약하였다. 마우스를 CO2로 마취시킨 후 다양한 시점에 혈액 및 종양을 수집하였다. 혈액 샘플을 수집 직후에 4℃에서 원심분리하였다. 상청액을 가능한 한 바로, 1.5 mL의 Eppendorf 바이알로 옮기고, 냉동고에서 -80℃에서 저장하였다. 종양 샘플을 수집하고, 생분석(bioanalysis)을 위해 -80℃ 냉동고로 옮겨질 때까지 드라이 아이스에 넣었다.
화합물은 종양 조직으로 빠르게 분포되었다. 혈액 및 종양 조직에서 반감기는 각각 6.1시간 및 14.0시간이었다. 종양 노출은 IV 투여 후 혈장 노출보다 약 6배 더 높았다(도 3).
7. 종양 모델에서의 효능 연구
1) 화합물 3은 HT-29 결장암 이종이식 모델에서 종양 성장을 억제하였다
Balb/c 누드 마우스에서 이종이식 모델을 수립하기 위해 HT-29 결장암 세포를 이식하였다. 화합물 3 및 LY2606368을 1 몰당량의 HCl을 함유한 30% SEB-β-CD(Zhiyuan Bio-technology) 중에 용해시켰다. GDC-575를 수중 0.5% 메틸 셀룰로오스/0.1% Tween 80에 현탁시켰다. 화합물 3의 치료(40 mg/kg, IV, 주 2회)는 이의 MTD에서 기준 LY-2606368(15 mg/kg, IV, 주 2회) 또는 GDC-575(25 mg/kg, po, 3회/주)보다 더욱 효능적이었다. %T/C 값은 각각 화합물 3의 경우에 31%(P<0.001), LY-2606368의 경우 61%(P<0.05), GDC-0575의 경우 50%(P<0.001)이었다(표 4). 동물들은 누드 마우스 모델에서의 HT-29 결장암의 각 치료를 잘 견뎌내었다.
표 4. HT-29 이종이식 모델에서 화합물 3에 의한 종양 성장 억제
Figure pct00015
2) 화합물 3은 HT-29 이종이식 모델에서 CPT11의 항-종양 활성을 향상시켰다
HT-29 종양 이종이식 모델에서, 동물을 단일 화합물, ChK1 억제제 또는 CPT-11, 또는 CPT11와의 조합물로 치료하였다. 화합물 3 및 LY-2606368 둘 모두는 종양 모델에서 CPT11의 향상된 항-종양 성장 활성을 나타내었다. 화합물 3(40 mg/kg, IV, 주 2회) 단독 또는 CPT-11(50 mg/kg, IV, 주 1회)와 함께 화합물 3의 치료는 기준 LY-2606368(15 mg/kg, IV, 주 2회) 단독과 또는 CPT-11(50 mg/kg, IV, 주 1회)과 함께 기준 LY-2606368보다 더욱 효능적임을 나타내었다. %T/C 값은 각각 화합물 3 단독의 경우 26%(p<0.001), 및 화합물 3과 CPT-11의 경우 -9%(p<0.001), 및 LY-2606368의 경우 61%(p<0.001) 및 LY-2606368과 CPT11의 경우 0%(p<0.001)이었다(도 4). 동물은 누드 마우스 모델에서의 HT-29 결장암의 각 치료를 잘 견뎌내었다.
3) 화합물 3은 LoVo 결장 이종이식 모델에서 종양 성장을 억제하였다
Balb/c 누드 마우스에서 이종이식 모델을 수립하기 위해 Lovo 결장암 세포를 이식하였다. 화합물 3 및 LY2606368을 1 몰당량의 HCl을 함유한 30% SEB-β-CD(Zhiyuan Bio-technology) 중에 용해시켰다. LoVo 종양 이종이식 모델에서, 주 2회 IV로의 15 mg/kg의 LY2606368 및 10 mg/kg, 20 mg/kg, 40 mg/kg의 화합물 3의 치료는 용량-의존 방식으로 유의미한 종양 성장 억제를 나타내었다. 그러나, MTD 용량에서, 화합물 3의 치료는 LoVo 모델에서 LY2606368보다 더욱 효능적이었다. T/C 값은 각각 40 mg/kg의 화합물 3의 경우 -77%, 및 15 mg/kg의 LY-2606368의 경우 -57%이었다(도 5).
8. 대사 안정성
화합물(1 μM)을 37℃에서 0, 5, 15, 30, 45분 동안 0.5 mg/mL의 최종 간 마이크로솜 단백질 농도에서 인간 간 S9(BD Gentest로부터)와 함께 인큐베이션하였다. 반응에서 나머지 화합물을 LC-MS/MS에 의해 측정하였다. 반감기(T1/2) = 0.693/K (K는 인큐베이션 시간에 대한 ln[농도]의 플롯으로부터의 속도 상수임).
화합물 3, 4, 13 및 15는 인간 간 S9 마이크로솜에서 LY2606368보다 더 대사 적합하였다. 이러한 화합물에 대한 반감기는 165.41 내지 6181분의 범위이었다(표 5).
표 5. 인간 간 S9 대사 안정성
Figure pct00016

Claims (22)

  1. 하기 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 기하 이성질체, 거울상 이성질체, 부분입체이성질체, 라세미체, 전구약물, 용매화물, 또는 수화물:
    Figure pct00017

    상기 식에서,
    R1은 할로겐, 비치환되거나 치환된 알킬, 비치환되거나 치환된 알케닐, 비치환되거나 치환된 알키닐, 비치환되거나 치환된 사이클로알킬, 비치환되거나 치환된 알콕시, 비치환되거나 치환된 아릴, -NO2, -OH, -C(O)R, -C(O)OR, -C(O)N(R')(R"), 또는 -N(R')(R")이며;
    R2 및 R3은 각각 독립적으로, -H, 할로겐, 비치환되거나 치환된 알킬, 비치환되거나 치환된 사이클로알킬, 비치환되거나 치환된 알콕시, -NO2, -OH, 또는 -N(R')(R")이거나, R2 및 R3은 여기에 결합된 탄소 원자와 함께 비치환되거나 치환된 탄소 사이클릭 또는 헤테로사이클릭 고리를 형성하며;
    R4는 -H, 비치환되거나 치환된 알킬, 비치환되거나 치환된 사이클로알킬, 비치환되거나 치환된 알콕시, 비치환되거나 치환된 아릴, -OH, -C(O)R, -C(O)OR, -C(O)N(R')(R"), 또는 -N(R')(R")이며;
    R5는 -CN, 할로겐, 비치환되거나 치환된 알킬, 비치환되거나 치환된 알케닐, 비치환되거나 치환된 알키닐, 비치환되거나 치환된 사이클로알킬, 비치환되거나 치환된 알콕시, -NO2, -OH, 또는 -N(R')(R")이며;
    R은 비치환되거나 치환된 알킬이며;
    R' 및 R"는 각각 독립적으로, -H 또는 비치환되거나 치환된 알킬이다.
  2. 제1항에 있어서,
    R1이 할로겐, 비치환되거나 치환된 알킬, 비치환되거나 치환된 알케닐, 비치환되거나 치환된 알키닐, 비치환되거나 치환된 알콕시, -NO2, -OH, -C(O)OR, -C(O)N(R')(R"), 또는 -N(R')(R")이며;
    R이 비치환되거나 치환된 알킬이며;
    R' 및 R"가 각각 독립적으로, -H 또는 비치환되거나 치환된 알킬인 화합물.
  3. 제2항에 있어서, R1이 할로겐, 비치환된 알킬, 비치환된 알콕시, -OH, -CF3, 또는 하이드록시알킬인 화합물.
  4. 제3항에 있어서, R1이 -F, -Cl, -Br, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 메톡시, 에톡시, 이소프로폭시, -OH, -CF3, 또는 하이드록시메틸인 화합물.
  5. 제1항에 있어서,
    R2 및 R3이 각각 독립적으로, -H, -OH, 할로겐, 비치환되거나 치환된 알킬, 또는 -N(R')(R")이거나, R2 및 R3이 여기에 결합된 탄소 원자와 함께 비치환되거나 치환된 탄소 사이클릭 또는 헤테로사이클릭 고리를 형성하며;
    R' 및 R"가 각각 독립적으로, -H 또는 비치환되거나 치환된 알킬인 화합물.
  6. 제5항에 있어서, R2 및 R3이 각각 독립적으로, -H, -OH, 할로겐, 비치환된 알킬, 또는 하이드록시알킬이거나, R2 및 R3이 여기에 결합된 탄소 원자와 함께 비치환된 탄소 사이클릭 고리 또는 헤테로사이클릭 고리를 형성하는 화합물.
  7. 제6항에 있어서, R2 및 R3이 각각 독립적으로, -H, -OH, -F, -Cl, 메틸, 에틸, 또는 하이드록시메틸이거나, R2 및 R3이 여기에 결합된 탄소 원자와 함께 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 옥시란, 아지리딘, 또는 아제티딘을 형성하는 화합물.
  8. 제1항에 있어서,
    R4가 -H, 비치환되거나 치환된 알킬, -C(O)OR, 또는 -C(O)R이며;
    R이 비치환되거나 치환된 알킬인 화합물.
  9. 제8항에 있어서, R4가 -H, 메틸, 에틸, 프로필, 아세틸, 아미노아세틸, 메톡시카르보닐, 1-(1-옥소-2-메틸프로폭시)에톡시카르보닐, 또는 에톡시카르보닐인 화합물.
  10. 제1항에 있어서, R5가 -CN, 할로겐, 비치환되거나 치환된 알킬, 비치환되거나 치환된 알케닐, 또는 비치환되거나 치환된 알키닐인 화합물.
  11. 제10항에 있어서, R5가 -CN, 할로겐, 또는 비치환된 알킬인 화합물.
  12. 제11항에 있어서, R5가 -CN, -F, -Cl, -Br, 메틸, 에틸, 프로필, 또는 이소프로필인 화합물.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 화학식 (II)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 기하 이성질체, 거울상 이성질체, 부분입체이성질체, 라세미체, 전구약물, 용매화물, 또는 수화물인 화합물:
    Figure pct00018

    상기 식에서,
    R1은 -F, -Cl, -Br, 메틸, 또는 메톡시이며;
    R2 및 R3은 각각 독립적으로, -H 또는 -OH이거나, R2 및 R3은 여기에 결합된 탄소 원자와 함께 사이클로프로필을 형성하며;
    R4는 -H, 메틸, 아미노아세틸, 1-(1-옥소-2-메틸프로폭시)에톡시카르보닐, 또는 에톡시카르보닐이며;
    R5는 -CN, 메틸, 또는 -Cl이다.
  14. 5-(5-(2-(3-아미노프로폭시)-3-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-((5-(6-(3-아미노프로폭시)-3-플루오로-2-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일)아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-(5-(2-(3-아미노프로폭시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-(5-(2-(3-아미노프로폭시)-4-클로로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-(5-(2-(3-아미노프로폭시)-4-브로모-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-(5-(2-(3-아미노프로폭시)-6-메톡시-4-메틸페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-(5-(2-(3-아미노프로폭시)-4,6-디메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-(5-(2-(3-메틸아미노프로폭시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-(5-(2-(3-메틸아미노프로폭시)-4-클로로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-(5-(2-(3-메틸아미노프로폭시)-4-브로모-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-(5-(2-(3-메틸아미노프로폭시)-4-메틸-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-(5-(2-(3-메틸아미노프로폭시)-4,6-디메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-(5-(2-((1-(아미노메틸)사이클로프로필)메톡시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-(5-(2-((1-(아미노메틸)사이클로프로필)메톡시)-4-클로로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-(5-(2-((1-(아미노메틸)사이클로프로필)메톡시)-4-브로모-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-(5-(2-((1-(아미노메틸)사이클로프로필)메톡시)-6-메톡시-4-메틸페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-(5-(2-((1-(아미노메틸)사이클로프로필)메톡시)-4,6-디메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-(5-(3-플루오로-6-메톡시-2-((1-((메틸아미노)메틸)사이클로프로필)메톡시)페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-((5-(3-플루오로-2-메톡시-6-((1-((메틸아미노)메틸)사이클로프로필)메톡시)페닐)-1H-피라졸-3-일)아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-(5-(4-플루오로-2-메톡시-6-((1-((메틸아미노)메틸)사이클로프로필)메톡시)페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-((5-(4-클로로-2-메톡시-6-((1-((메틸아미노)메틸)사이클로프로필)메톡시)페닐)-1H-피라졸-3-일)아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-((5-(4-브로모-2-메톡시-6-((1-((메틸아미노)메틸)사이클로프로필)메톡시)페닐)-1H-피라졸-3-일)아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-((5-(2-메톡시-4-메틸-6-((1-((메틸아미노)메틸)사이클로프로필)메톡시)페닐)-1H-피라졸-3-일)아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-((5-(2,4-디메톡시-6-((1-((메틸아미노)메틸)사이클로프로필)메톡시)페닐)-1H-피라졸-3-일)아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-(5-(2-(2-하이드록시-3-아미노프로폭시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-(5-(2-(2-하이드록시-3-아미노프로폭시)-4-메틸-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-(5-(2-(2-하이드록시-3-아미노프로폭시)-4,6-디메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    2-메틸-5-(5-(2-(3-아미노프로폭시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진;
    2-클로로-5-(5-(2-(3-아미노프로폭시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진;
    2-메틸-5-(5-(2-(3-메틸아미노프로폭시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진;
    2-클로로-5-(5-(2-(3-메틸아미노프로폭시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진;
    2-메틸-5-(5-(2-((1-(아미노메틸)사이클로프로필)메톡시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진;
    2-클로로-5-(5-(2-((1-(아미노메틸)사이클로프로필)메톡시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진;
    2-메틸-5-(5-(2-((1-(아미노메틸)사이클로프로필)메톡시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진;
    2-클로로-5-(5-(2-((1-(아미노메틸)사이클로프로필)메톡시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진;
    2-메틸-5-(5-(2-(2-하이드록시-3-아미노프로폭시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진;
    2-클로로-5-(5-(2-(2-하이드록시-3-아미노프로폭시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진;
    에틸 3-(2-(3-(5-시아노피라진-2-일아미노)-1H-피라졸-5-일)-5-플루오로-3-메톡시페녹시)프로필카르바메이트;
    2-아미노-N-(3-(2-(3-((5-시아노피라진-2-일)아미노)-1H-피라졸-5-일)-5-플루오로-3-메톡시페녹시)프로필)아세트아미드; 또는
    1-(((3-(2-(3-((5-시아노피라진-2-일)아미노)-1H-피라졸-5-일)-5-플루오로-3-메톡시페녹시)프로필)카르바모일)옥시)에틸 이소부티레이트,
    또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 기하 이성질체, 거울상 이성질체, 부분입체이성질체, 라세미체, 전구약물, 용매화물, 또는 수화물로부터 선택된 화합물.
  15. 제14항에 있어서,
    5-(5-(2-(3-아미노프로폭시)-3-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-((5-(6-(3-아미노프로폭시)-3-플루오로-2-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일)아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-(5-(2-(3-아미노프로폭시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-(5-(2-(3-아미노프로폭시)-4-클로로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-(5-(2-(3-아미노프로폭시)-4-브로모-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-(5-(2-(3-아미노프로폭시)-6-메톡시-4-메틸페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-(5-(2-(3-아미노프로폭시)-4,6-디메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-(5-(2-((1-(아미노메틸)사이클로프로필)메톡시)-4-플루오로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-(5-(2-((1-(아미노메틸)사이클로프로필)메톡시)-4-클로로-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-(5-(2-((1-(아미노메틸)사이클로프로필)메톡시)-4-브로모-6-메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-(5-(2-((1-(아미노메틸)사이클로프로필)메톡시)-6-메톡시-4-메틸페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-(5-(2-((1-(아미노메틸)사이클로프로필)메톡시)-4,6-디메톡시페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-(5-(3-플루오로-6-메톡시-2-((1-((메틸아미노)메틸)사이클로프로필)메톡시)페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-((5-(3-플루오로-2-메톡시-6-((1-((메틸아미노)메틸)사이클로프로필)메톡시)페닐)-1H-피라졸-3-일)아미노)피라진-2-카르보니트릴;
    5-(5-(4-플루오로-2-메톡시-6-((1-((메틸아미노)메틸)사이클로프로필)메톡시)페닐)-1H-피라졸-3-일아미노)피라진-2-카르보니트릴; 및
    에틸 3-(2-(3-(5-시아노피라진-2-일아미노)-1H-피라졸-5-일)-5-플루오로-3-메톡시페녹시)프로필카르바메이트,
    또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 기하 이성질체, 거울상 이성질체, 부분입체이성질체, 라세미체, 전구약물, 용매화물, 또는 수화물로부터 선택된 화합물.
  16. 치료학적 유효량의 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 기하 이성질체, 거울상 이성질체, 부분입체이성질체, 라세미체, 전구약물, 용매화물, 또는 수화물, 및 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 약제 조성물.
  17. 암 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 암을 치료 또는 예방하기 위한 약제의 제조에서, 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 기하 이성질체, 거울상 이성질체, 부분입체이성질체, 라세미체, 전구약물, 용매화물, 또는 수화물의 용도.
  18. 제17항에 있어서, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 기하 이성질체, 거울상 이성질체, 부분입체이성질체, 라세미체, 전구약물, 용매화물, 또는 수화물이 대상체에 제2 항암제, 외과적 치료법, 이온화 방사선, 또는 이들의 조합과 병용하여 투여되는 용도.
  19. 제18항에 있어서, 제2 항암제가 타겟화된 암 약물, 예를 들어, 트라스투주맙, 라무시루맙, 비스모데깁, 소니데깁, 베바시주맙, 에베롤리무스, 타목시펜, 토레미펜, 풀베스트란트, 아나스트로졸, 엑세메스탄, 라파티닙, 레트로졸, 페르투주맙, ado-트라스투주맙 엠탄신, 팔보시클립, 세툭시맙, 파니투무맙, ziv-아플리베르셉트, 레고라페닙, 리마티닙 메실레이트, 란레오타이드 아세테이트, 수니티닙, 레고라페닙, 데노수맙, 알리트레티노인, 소라페닙, 파조파닙, 템시롤리무스, 에베롤리무스, 트레티노인, 다사티닙, 닐로티닙, 보수티닙, 리툭시맙, 알렘투주맙, 오파투무맙, 오비누툭주맙, 이브루티닙, 이델랄리십, 블리나투모맙, 소라게닙, 크리조티닙, 에를로티닙, 게피티닙, 아파티닙 디말레에이트, 세리트닙, 라무시루맙, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 오시메르티닙, 및 네시투무맙; 알킬화제, 예를 들어, 부술판, 클로람부실, 시클로포스파미드, 이포스파미드, 멜팔란, 질소 머스타드, 스트렙토조신, 티오테파, 우라실 질소 머스타드, 트리에틸렌멜라민, 테모졸로마이드, 및 2-클로로에틸-3-사르코신아미드-1-니트로소우레아(SarCNU); 항생제 또는 식물 알칼로이드, 예를 들어, 악티노마이신-D, 블레오마이신, 크립토피신스, 다우노루비신, 독소루비신, 이다루비신, 이리노테칸, L-아스파라기나아제, 미토마이신-C, 미트라마아신, 나벨빈, 파클리탁셀, 도세탁셀, 토포테칸, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 테니포사이드(VM-26), 및 에토포사이드(VP-16); 호르몬 또는 스테로이드, 예를 들어, 5α-환원효소 억제제, 아미노글루테티미드, 아나스트로졸, 비칼루타미드, 클로로트리아니센, 디에틸스틸베스트롤 (DES), 드로모스타놀론, 에스트라무스틴, 에티닐 에스트라디올, 플루타미드, 플루옥시메스테론, 고세렐린, 하이드록시프로게스테론, 레트로졸, 류프롤라이드, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 메게스트롤 아세테이트, 메틸 프레드니솔론, 메틸테스토스테론, 미토탄, 닐루타미드, 프레드니솔론, 아르족시펜(SERM-3), 타목시펜, 테스토락톤, 테스토스테론, 트리암시놀론, 및 졸라덱스; 합성, 예를 들어, 모두-트랜스 레티노산, 카르무스틴(BCNU), 카르보플라틴(CBDCA), 로무스틴(CCNU), 시스-디아민디클로로백금(시스플라틴), 다카르바진, 글리아델, 헥사메틸멜라민, 하이드록시우레아, 레바미솔, 미톡산트론, o,p'-디클로로디페닐디클로로에탄(o,p'-DDD)(리소드렌 또는 미토탄으로도 알려짐), 옥살리플라틴, 포르피머 소듐, 프로카르바진, 및 이마티닙 메실레이트(Gleevec®); 항대사물질, 예를 들어, 클로로데옥시아데노신, 시토신 아라비노사이드, 2'-데옥시코포르마이신, 플루다라빈 포스페이트, 5-플루오로우라실(5-FU), 5-플루오로-2'-데옥시우리딘(5-FUdR), 겜시타빈, 캄프토테신, 6-메르캅토푸린, 메토트렉세이트, 4-메틸티오암페타민(4-MTA), 및 티오구아닌; 및 생물제제, 예를 들어, 알파 인터페론, BCG(바실러스 칼메테-구에린), 과립구 콜로니 자극 인자(G-CSF), 과립구-대식세포 콜로니-자극 인자(GM-CSF), 인터류킨-2, 및 헤르셉틴으로부터 선택되는 용도.
  20. 제19항에 있어서, 제2 항암제가 이리노테칸인 용도.
  21. 제17항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 유방암, 편평세포 암종, 폐암, 식도암, 간암, 위암, 대장암, 방광암, 난소 암종, 전립선암, 교아세포종, 췌장암, 또는 백혈병인 용도.
  22. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 기하 이성질체, 거울상 이성질체, 부분입체이성질체, 라세미체, 전구약물, 용매화물, 또는 수화물을 제조하는 방법으로서,
    a. 용매의 존재 하에서 하기 화학식 (1)의 화합물을 화학식 H2N-NH2의 하이드라진과 반응시켜 하기 화학식 (2)의 화합물을 수득하는 단계;
    b. 화학식 (2)의 화합물을 탈보호화하고 커플링제 및 용매의 존재 하에서 탈보호화된 화합물을 하기 화학식 (3)의 화합물과 반응시켜 하기 화학식 (4)의 화합물을 수득하는 단계; 및
    c. 화학식 (4)의 화합물을 탈보호화하여 화학식 (I)의 화합물을 수득하는 단계를 포함하는 방법:
    Figure pct00019

    Figure pct00020

    Figure pct00021

    Figure pct00022

    상기 식에서, R1, R2, R3, R4 및 R5는 제1항에서 정의된 바와 같으며; R6은 하이드록시 보호기이며; R7은 알킬이며; R9는 아미노 보호기이다.
KR1020187024712A 2016-02-04 2016-02-04 체크포인트 키나아제 1(chk1) 억제제로서 유용한 3,5-이치환된 피라졸, 및 이의 제조 및 적용 KR102159442B1 (ko)

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PCT/CN2016/073454 WO2017132928A1 (en) 2016-02-04 2016-02-04 3,5-disubstituted pyrazoles useful as checkpoint kinase 1 (chk1) inhibitors, and their preparations and applications

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