PT1924593E - Inibidores da protease ns3 do hcv - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO "INIBIDORES DE PROTEASE NS3 DO HCV"

Descrição A presente invenção refere-se a compostos macrociclicos que são úteis como inibidores da protease NS3 do vírus da hepatite C (HCV), respectiva síntese e utilização no tratamento e prevenção de infecções por HCV.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO 0 vírus da hepatite C (HCV) é um grande problema de saúde que provoca doenças hepáticas crónicas, tais como cirrose e carcinoma hepatocelular, num número substancial de indivíduos infectados que se estima corresponder a 2 a 15 % da população mundial. Estima-se que existem 3,9 milhões de infectados apenas nos Estados Unidos, de acordo com o U.S. Center for Disease Control, aproximadamente cinco vezes o número de infectados com o vírus da imunodeficiência humano (HIV). De acordo com a Organização Mundial de Saúde existem mais de 170 milhões de infectados em todo o mundo, sendo infectadas a cada ano pelo menos 3 a 4 milhões de pessoas. Uma vez infectadas, cerca de 20 % dos indivíduos eliminam o vírus, mas os restantes permanecem com HCV para o resto da vida. Dez a vinte por cento dos indivíduos com infecção crónica acabam por desenvolver uma cirrose destruidora do fígado ou cancro. A doença virai é transmitida por via parentérica, por meio de sangue ou produtos derivados do sangue contaminados, seringas contaminadas ou sexualmente e verticalmente, a partir de mães infectadas ou portadoras para o filho. 2

Os tratamentos actuais contra a infecção, que estão restritos a imunoterapia com interferão α recombinante apenas ou em combinação com o análogo nucleosideo ribavirina, apresentam benefícios clínicos limitados. Além disso, não existe uma vacina contra o HCV. Consequentemente, existe uma necessidade urgente de agentes terapêuticos aperfeiçoados, que combatam efectivamente a infecção crónica por HCV. 0 actual estado da técnica no tratamento da infecção de HCV tem sido discutido nas seguintes referências: B. Dymock, et al., "Novel approaches to the treatment of hepatitis C vírus infection," Antiviral Chemistry & Chemotherapy, 11: 79-96 (2000); H. Rosen, et al., "Hepatitis Cvirus: current understanding and prospects for future therapies," Molecular Medicine Today, 5: 393-399 (1999); D. Moradpour, et al., "Current and evolving therapies for hepatitis C," European J. Gastroenterol. Hepatol., 11: 1189-1202 (1999); R. Bartenschlager, "Candidate Targets for Hepatitis C Virus-Specific Antiviral Therapy," Intervirology, 40: 378-393 (1997); G.M. Lauer and B.D. Walker, "Hepatitis C Virus Infection," N. Engl. J. Med., 345: 41-52 (2001); B.W. Dymock, "Emerging therapies for hepatitis C virus infection,' Emerging Drugs, 6: 13-42 (2001); and C. Crabb, "Hard-Won Advances Spark Excitement about Hepatitis C," Science: 506-507 (2001). Várias enzimas codificadas pelo vírus são alvos putativos para intervenção terapêutica, incluindo uma metaloprotease (NS2-3) uma protease serínica (NS3), uma helicase (NS3) e uma ARN polimerase dependente do ARN (NSSB). A protease NS3 está localizada no domínio N-terminal da proteína NS3 e é considerada um alvo primário para o desenvolvimento de fármacos uma vez que é responsável por uma clivagem intramolecular no local NS3/4A e processamento 3 intermolecular a jusante, nas junções NS4A/4B, NS4B/ 5A e NS5A/5B. Uma investigação anterior identificou classes de peptideos, tal como os hexapeptídeos, bem como tripeptideos discutidos nos pedidos de patente norte-americana US2005/0020503, US2004/0229818 e US2004/00229776, revelando graus de actividade na inibição da protease NS3. 0 pedido de patente internacional WO 03/064455 revela peptideos macrociclicos que são úteis como inibidores da protease NS3 de HCV. O objectivo da presente invenção consiste em proporcionar mais compostos com actividade contra a protease NS3 de HCV.

RESUMO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se a novos compostos macrociclicos da fórmula (I) e/ou seus sais ou hidratos farmaceuticamente aceitáveis. Estes compostos são úteis na inibição da protease NS3 (não estrutural 3) do HCV (virus da hepatite C), na prevenção ou tratamento de um ou vários dos sintomas da infecção por HCV, seja como compostos ou respectivos sais ou hidratos farmaceuticamente aceitáveis (quando apropriado) ou como ingredientes para uma composição farmacêutica, em combinação ou não com outros antivirais anti-HCV, anti-infecciosos, imunomoduladores, antibióticos ou vacinas. Mais especificamente, a presente invenção refere-se a um composto da fórmula (I) e/ou seu sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável. 4

em que: P e q são ambos 1 R1 é CONR10SO2R6; R θ alquilo Ci-C6 ou alcenilo C2~Cí,; , sendo o alquilo ou alcenilo opcionalmente substituídos por 1 a 3 halogéneos; R e alquilo Ci-Cs ou cicloalquilo C3-C8; R5 é H; R6 é cicloalquilo C3-C6; Y é C(=0);

ZisO; M é alquileno C1-C12 ou alcenileno C1-C12 e cada R10 é independentemente H ou alquilo Ci-C6. A presente invenção inclui também composições farmacêuticas contendo um composto da presente invenção e métodos de preparação destas composições farmacêuticas. A presente invenção refere-se ainda a métodos de tratamento e prevenção de um ou vários sintomas de infecção por HCV.

Outras formas de realização, aspectos e características da presente invenção são descritas em maior detalhe ou serão evidentes a partir da descrição, exemplos e reivindicações anexas apresentados em seguida. 5

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO A presente invenção inclui compostos da fórmula (I) anterior e respectivos sais e/ou hidratos farmaceuticamente aceitáveis. Estes compostos e respectivos sais e/ou hidratos farmaceuticamente aceitáveis são inibidores da protease de HCV (por exemplo inibidores da protease NS3 de HCV). A presente invenção inclui ainda compostos das fórmulas ΙΙ-a e IlI-a, em que todas as variáveis são tal como definidas para a fórmula I.

Uma primeira forma de concretização da presente invenção consiste num composto da fórmula I, ΙΙ-a ou IlI-a, ou um respectivo sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável, em que R1 é C0NHS02R6 e todas as outras variáveis são tal como originalmente definidas (isto é, tal como definido no Resumo da Presente Invenção). Num primeiro aspecto da primeira forma de concretização, R1 é C0NHS02R6, em que R6 é cicloalquilo C3-C5 e todas as outras variáveis são tal como definido na primeira forma de concretização. Numa característica do primeiro aspecto da primeira forma de concretização, R1 é C0NHS02R6, em que R6 é ciclopropilo e todas as outras variáveis são tal como definido na primeira forma de concretização. Uma segunda forma de concretização da presente invenção consiste num composto da fórmula I, ΙΙ-a ou Ill-a, ou um respectivo sal ou hidrato 6 farmaceuticamente aceitável, em que R2 é alquilo Ci-Cô ou alcenilo C2-C6 e todas as outras variáveis são tal como originalmente definidas em qualquer uma das concretizações precedentes. Num primeiro aspecto de uma segunda forma de concretização, R2 é alquilo C1-C4 ou alcenilo C2-C4 e todas as outras variáveis são tal como definido originalmente ou tal como definido em qualquer uma das formas de concretização precedentes. Num segundo aspecto de uma segunda forma de concretização, R2 é alcenilo C2-C4 e todas as outras variáveis são tal como definido originalmente ou tal como definido em qualquer uma das formas de concretização precedentes. Numa caracteristica do segundo aspecto da segunda forma de concretização, R2 é vinilo e todas as outras variáveis são tal como definido originalmente ou tal como definido em qualquer uma das formas de concretização precedentes. Num terceiro aspecto da segunda forma de concretização, R2 é alquilo Ci-C4 e todas as outras variáveis são tal como definido originalmente ou tal como definido em qualquer uma das formas de concretização precedentes. Numa caracteristica do terceiro aspecto da terceira forma de concretização, R2 é etilo e todas as outras variáveis são tal como definido originalmente ou tal como definido em qualquer uma das formas de concretização precedentes.

Uma terceira forma de concretização da presente invenção consiste num composto da fórmula I, ΙΙ-a ou IlI-a, ou um respectivo sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato, em que R3 é cicloalquilo C3-C8 ou alquilo Ci-Cs e todas as outras variáveis são tal como originalmente definidas em qualquer uma das concretizações precedentes. Num primeiro aspecto de uma segunda forma de concretização, R3 é alquilo C1-C5 ou alcenilo C7-C8 e todas as outras variáveis são tal 7 como definido originalmente ou tal como definido em qualquer uma das formas de concretização precedentes. Num segundo aspecto de uma terceira forma de concretização, R3 é cicloalquiloCi-Cê ou alquilo Ci-C8 e todas as outras variáveis são tal como definido na terceira forma de concretização ou tal como definido em qualquer uma das formas de concretização precedentes. Num terceiro aspecto da terceira forma de concretização, R3 é propilo ou butilo e todas as outras variáveis são tal como definido na terceira forma de concretização ou tal como definido em qualquer uma das formas de concretização precedentes. Numa caracteristica do terceiro aspecto da terceira forma de concretização, R3 é ipropilo, n-butilo ou t-butilo e todas as outras variáveis são tal como definido na terceira forma de concretização ou tal como definido em qualquer uma das formas de concretização precedentes. Num quarto aspecto da terceira forma de concretização, R3 é ciclopentilo ou ciclo-hexilo e todas as outras variáveis são tal como definido na terceira forma de concretização ou tal como definido em qualquer uma das formas de concretização precedentes.

Uma quarta forma de concretização da presente invenção consiste num composto da fórmula I, ΙΙ-a ou IlI-a, ou um respectivo sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato, em que M é alquileno C1-C10 ou alcenileno C2-C10 (incluindo alquileno ou alcenileno de cadeia linear e ramificada) e todas as outras variáveis são tal como originalmente definidas em qualquer uma das concretizações precedentes. Num primeiro aspecto da quarta forma de concretização, M é alquileno Ci-Ce ou alcenileno C2-C8 (incluindo alquileno ou alcenileno de cadeia linear e ramificada) e todas as outras variáveis são tal como definido originalmente ou tal como definido em qualquer uma das formas de concretização precedentes. Num segundo aspecto da quarta forma de concretização, M é alquileno C4 ou alcenileno C4 (incluindo alquileno ou alcenileno de cadeia linear e ramificada) e todas as outras variáveis são tal como definido na quarta forma de concretização ou tal como definido em qualquer uma das formas de concretização precedentes. Num terceiro aspecto da quarta forma de concretização, M é alquileno C5 ou alcenileno C5 (incluindo alquileno ou alcenileno de cadeia linear e ramificada) e todas as outras variáveis são tal como definido na quarta forma de concretização ou tal como definido em qualquer uma das formas de concretização precedentes. Num quarto aspecto da quarta forma de concretização, M é alquileno C6 ou alcenileno C6 (incluindo alquileno ou alcenileno de cadeia linear e ramificada) e todas as outras variáveis são tal como definido na quarta forma de concretização ou tal como definido em qualquer uma das formas de concretização precedentes. Num quinto aspecto da quarta forma de concretização, M é alquileno C7 ou alcenileno C7 (incluindo alquileno ou alcenileno de cadeia linear e ramificada) e todas as outras variáveis são tal como definido na quarta forma de concretização ou tal como definido em qualquer uma das formas de concretização precedentes. Num sexto aspecto da quarta forma de concretização, M é alquileno C8 ou alcenileno C8 (incluindo alquileno ou alcenileno de cadeia linear e ramificada) e todas as outras variáveis são tal como definido na quarta forma de concretização ou tal como definido em qualquer uma das formas de concretização precedentes. Num sétimo aspecto da quarta forma de concretização, M é alquileno C9 ou alcenileno C9 (incluindo alquileno ou alcenileno de cadeia linear e ramificada) e todas as outras variáveis são tal como definido na quarta forma de concretização ou tal como 9 definido em qualquer uma das formas de concretização precedentes. Num oitavo aspecto da quarta forma de concretização, M é alquileno Cio ou alcenileno C10 (incluindo alquileno ou alcenileno de cadeia linear e ramificada) e todas as outras variáveis são tal como definido na quarta forma de concretização ou tal como definido em qualquer uma das formas de concretização precedentes. Num nono aspecto da quarta forma de concretização, M é seleccionado de entre os seguintes e todas as outras variáveis são tal como definido na quarta forma de concretização ou tal como definido em qualquer uma das formas de concretização precedentes.

Uma quinta forma de concretização da presente invenção é um composto ou um respectivo sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável seleccionado do grupo constituído pelos seguintes compostos 10

ιπ-5 m-8 m-9 11 m-79 m-77 m-78

m-96 m-97 m-ii3

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m-226

m-2io ΙΠ-196 13

m-206

m-225 14

15

111-225 16

Outras formas de concretização da presente invenção referem-se ao seguinte: (a) uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz de um composto da fórmula I, ΙΙ-a ou III-a e um veiculo farmaceuticamente aceitável. (b) A composição farmacêutica de (a), compreendendo ainda um segundo agente terapêutico seleccionado do grupo constituído por um agente antiviral anti-HCV, um imunomodulador e um agente anti-infeccioso. (c) A composição farmacêutica de (b), em que o agente antiviral anti-HCV é um antiviral seleccionado do grupo constituído por um inibidor da protease de HCV e um inibidor da polimerase NS5B de HCV. (d) Uma combinação farmacêutica que é (i) um composto da fórmula I, ΙΙ-a ou IlI-a e (ii) um segundo agente terapêutico seleccionado do grupo constituído por um agente antiviral anti-HCV, um imunomodulador e um agente anti-infeccioso, em que o composto da fórmula I, ΙΙ-a ou IlI-a e o segundo agente terapêutico são empregues, cada um, numa quantidade que torna a combinação eficaz para a inibição da protease NS3 de HCV ou para o tratamento ou prevenção de infecção por HCV. (e) A combinação de (d), em que o agente antiviral de HCV é um antiviral seleccionado do grupo constituído por um inibidor da protease de HCV e um inibidor da polimerase NS5B de HCV. (f) Um método de inibição da protease NS3 HCV num indivíduo com necessidade deste, o qual compreende a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um composto da fórmula I, ΙΙ-a ou IlI-a. 17 (g) Um método de prevenção ou tratamento de uma infecção por HCV num indivíduo com necessidade deste, o qual compreende a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um composto da fórmula I, ΙΙ-a ou IlI-a. (h) 0 método de (g) , em que o composto da fórmula I, Il-a ou IlI-a é administrado em combinação com uma quantidade eficaz de pelo menos um segundo agente terapêutico seleccionado do grupo constituído por um agente antiviral de HCV, um imunomodulador e um agente anti-infeccioso. (i) 0 método de (h), em que o agente antiviral de HCV é um antiviral seleccionado do grupo constituído por um inibidor da protease de HCV e um inibidor da polimerase NS5B de HCV. (j) Um método de inibição da protease NS3 de HCV num indivíduo com necessidade deste, o qual compreende a administração ao indivíduo de uma composição farmacêutica de (a) , (b) ou (c) ou a combinação de (d) ou (e) . (k) Um método de prevenção ou tratamento da infecção de HCV num indivíduo com necessidade deste, o qual compreende a administração ao indivíduo de uma composição farmacêutica de (a), (b) ou (c) ou a combinação de (d) ou (e). A presente invenção inclui também um composto da presente invenção (i) para utilização em, (ii) para utilização como medicamento para ou (iii) para utilização na preparação de um medicamento destinado a: (a) inibição da protease NS3 de HCV ou (b) prevenção ou tratamento de infecção por HCV. Nestas utilizações os compostos da presente invenção podem ser opcionalmente empregues em combinação com um ou vários dos segundos agentes terapêuticos, seleccionados de entre os agentes antivirais, agentes anti-infecciosos e imunomoduladores. 18

Formas de concretização adicionais da presente invenção referem-se às composições farmacêuticas, combinações e métodos anteriormente apresentados em (a) a (k) e utilizações apresentadas no parágrafo anterior, em que o composto da presente invenção empregue é um composto de uma da formas de concretização, aspectos, classes, sub-classes ou caracteristicas dos compostos descritos anteriormente. Em todas estas formas de concretização, o composto pode ser utilizado opcionalmente sob a forma de um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável, conforme apropriado.

Tal como presentemente utilizado, o termo "alquilo" refere-se a qualquer grupo alquilo de cadeia linear ou ramificada, com um número de átomos de carbono dentro dos limites especificados. Assim, por exemplo "alquilo Ci-6" (ou "alquilo Ci-Cê") refere-se a todos isómeros hexilo alquilo e pentil alquilo, bem como n-butilo, iso-butilo, sec-butilo e t-butilo, n-isopropilo e isopropilo, etilo e metilo. Outro exemplo, "alquilo C1-4" refere-se a n-butilo, iso-butilo, sec-butilo e t-butilo, n-isopropilo e isopropilo, etilo e metilo. 0 termo "haloalquilo" refere-se a um grupo alquilo em que um hidrogénio foi substituído por um halogénio. 0 termo "alcoxi" refere-se a um grupo "alquil-O-". 0 termo "alquileno" refere-se a qualquer grupo alquileno de cadeia linear ou ramificada, com um número de átomos de carbono dentro dos limites especificados. Assim, por exemplo "alquileno Ci-s" refere-se a qualquer um dos alquilenos de cadeia linear ou ramificada Ci a C6. Uma classe de alquilenos com particular interesse relativamente à presente invenção é -(CH2)i-6- e subclasses com particular interesse incluem -(CH2)i-4-, -(CH2)i_3-, — (CH2) i-2— e -CH2-. Reveste-se também de interesse o alquileno -CH(CH3)-. 19 0 termo "alquileno" refere-se a qualquer qrupo alquileno de cadeia linear ou ramificada divalente, com um número de átomos de carbono dentro dos limites especificados. 0 termo "cicloalquilo" refere-se a qualquer anel ciclico de um alcano ou alceno, com um número de átomos de carbono dentro dos limites especificados. Assim, por exemplo "cicloalquilo C3-8" (ou "cicloalquilo C3-C8 ") refere-se a ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclo-hexilo, ciclo-heptilo e ciclooctilo. 0 termo "cicloalcoxi" refere-se a um grupo "cicloalquil-O-". 0 termo "halogénio" refere-se a flúor, cloro, bromo e iodo.

Excepto se for expressamente indicado em contrário, todos os intervalos citados são inclusive. Por exemplo, um anel heteroarilo descrito como contendo entre "1 a 3 heteroátomos" significa que 0 anel pode conter 1, 2 ou 3 heteroátomos. Pressupõe-se também que qualquer intervalo citado inclui no seu âmbito todos os sub-intervalos contidos nesse intervalo. As formas oxidadas dos heteroátomos N e S são também incluídas no âmbito da presente invenção.

Quando ocorre qualquer variável (por exemplo R10) mais do que uma vez em qualquer constituinte ou na fórmula I, Il-a ou IlI-a ou em qualquer outra fórmula que descreva compostos da presente invenção, a sua definição em cada ocorrência é independente da sua definição em todas as outras ocorrências. Do mesmo modo, as combinações de substituintes e/ou variáveis são admissíveis apenas se estas combinações resultarem em compostos estáveis.

Excepto se houver indicação expressa em contrário, a substituição por um substituinte nomeado é permitida em qualquer átomo num anel (por exemplo, arilo, um anel 20 heteroaromático ou um anel heterocíclico saturado) desde que essa substituição do anel seja quimicamente permitida e tenha como resultado um composto estável. Um composto "estável" é um composto que pode ser preparado e isolado e cuja estrutura e propriedades se mantêm ou podem ser condicionadas a manter-se essencialmente imutáveis durante um período de tempo suficiente para permitir a utilização do composto para os fins presentemente descritos (por exemplo, administração terapêutica ou profilática a um indivíduo). Em resultado da selecção de substituintes e padrões de substituintes, alguns dos compostos da presente invenção podem ter centros assimétricos e podem ocorrer como misturas de estereoisómeros ou como diastereómeros individuais ou enantiómeros. Todas as formas isoméricas destes compostos, isolados ou misturados, estão incluídos no âmbito da presente invenção.

Tal como seria reconhecido por alguém com formação ordinária na técnica, alguns dos compostos da presente invenção podem existir como tautómeros. Para os objectivos da presente invenção, uma referência a um composto da fórmula I, ΙΙ-a ou IlI-a é uma referência ao compostos per se ou a qualquer um dos seus tautómeros per se ou misturas de dois ou mais desses tautómeros. Os compostos da presente invenção são úteis na inibição da protease de HCV (por exemplo protease NS3 de HCV) e na prevenção ou tratamento de infecção por HCV. Por exemplo, os compostos da presente invenção são úteis no tratamento da infecção por HCV na sequência de suspeita de exposição a HCV por meio de transfusão de sangue, troca de fluidos corporais, mordidas, picada acidental com agulha ou exposição a sangue de um paciente no decurso de uma cirurgia. 21

Os compostos da presente invenção são úteis na preparação e execução de análises de detecção de compostos antivirais. Por exemplo, os compostos da presente invenção são úteis para o isolamento de mutantes da enzima, os quais são excelentes ferramentas de detecção para compostos antivirais mais potentes. Além disso, os compostos da presente invenção são úteis no estabelecimento ou determinação do local de ligação de outros antivirais à protease de HCV, por exemplo por meio de inibição competitiva. Assim, os compostos da presente invenção são produtos comerciais destinados a serem vendidos para estes fins.

Os compostos da presente invenção podem ser administrados sob a forma de sais farmaceuticamente aceitáveis. 0 termo "sal farmaceuticamente aceitável" refere-se a um sal possuidor de eficácia do composto activo e que não é indesejável do ponto de vista biológico ou outro (por exemplo, não é tóxico ou prejudicial para o seu receptor). Os sais adequados incluem sais de adição de ácido que podem ser formados, por exemplo, por meio de mistura de uma solução do composto da presente invenção com uma solução de um ácido farmaceuticamente aceitável, tal como ácido clorídrico, ácido sulfúrico, ácido acético, ácido trifluoroacético ou ácido benzóico. Muitos dos compostos da presente invenção possuem uma fracção ácida, nesse caso os sais farmaceuticamente aceitáveis adequados respectivos podem incluir sais de metais alcalinos (por exemplo, sais de sódio ou de potássio), sais de metais alcalino-terrosos (por exemplo, sais de cálcio ou de magnésio) e sais formados com ligandos orgânicos adequados, tais como sais de amónio quaternário. Do mesmo modo, no caso da presença de um grupo ácido (-COON) ou alcoólico, podem ser empregues 22 ésteres farmaceuticamente aceitáveis para modificar a solubilidade ou características de hidrólise do composto. 0 termo "administração" e respectivas variantes (por exemplo "administrar" um composto) com referência a um composto da presente invenção significa proporcionar o composto ou um pró-fármaco do composto ao indivíduo com necessidade de tratamento. Quando é apresentado um composto da presente invenção ou um respectivo pró-fármaco em combinação com um ou mais outros agentes activos (por exemplo, agentes antivirais úteis para o tratamento de infecção com HCV), subentende-se que "administração" e respectivas variantes incluem o fornecimento concomitante ou sequencial do composto ou sal (ou hidrato) e outros agentes.

Tal como presentemente utilizado, o termo "composição" pretende englobar um produto compreendendo os ingredientes especificados, bem como qualquer produto resultante, directa ou indirectamente, da combinação dos ingredientes especificados.

Com "farmaceuticamente aceitável" significa que os ingredientes da composição farmacêutica têm de ser compatíveis entre si e não prejudiciais para o seu receptor. 0 termo "indivíduo" (alternativamente designado como "paciente"), tal como presentemente utilizado refere-se a um animal, de preferência um mamífero, mais preferencialmente um ser humano que foi alvo de tratamento, observação ou experiência. 0 termo "quantidade eficaz", tal como presentemente utilizado, significa a quantidade de composto activo ou agente farmacêutico que promove a resposta biológica ou 23 medicinal num tecido, sistema, animal ou ser humano que está a ser examinado por um investigador, veterinário, médico ou outro clinico. Numa forma de concretização, a quantidade eficaz é uma "quantidade com eficácia terapêutica" para o alivio dos sintomas da doença ou estado em tratamento. Numa forma de concretização, a quantidade eficaz é uma "quantidade com eficácia profilática" para a profilaxia dos sintomas da doença ou estado em tratamento. 0 termo inclui também a quantidade de composto activo suficiente para inibir a protease NS3 HCV e promover assim a resposta procurada (por exemplo uma "quantidade eficaz para inibição") . Quando o composto activo (isto é, o ingrediente activo) é administrado como sal, as referências à quantidade de ingrediente activo englobam a forma do ácido livre ou da base livre do composto.

Com o objectivo de inibir a protease NS3 HCV e prevenir ou tratar a infecção de HCV, os compostos da presente invenção, opcionalmente sob a forma de um sal ou de um hidrato, podem ser administrados por qualquer meio que estabeleça o contacto do agente activo com o local de acção do agente. Estes compostos podem ser administrados através de qualquer meio convencional disponível destinado a utilização em conjunto com produtos farmacêuticos seja como agentes terapêuticos individuais ou em combinação com outros agentes terapêuticos. Podem ser administrados isoladamente, mas tipicamente serão administrados com um veículo farmacêutico seleccionado com base na via de administração escolhida e prática farmacêutica padrão. Os compostos da presente invenção podem ser administrados, por exemplo, oralmente, parentericamente (incluindo injecções subcutâneas, intravenosas, intramusculares, intraesternal ou técnicas de perfusão) , por spray de inalação ou via 24 rectal, sob a forma de uma dosagem unitária de uma composição farmacêutica contendo uma quantidade eficaz de um composto e suportes, adjuvantes e veículos farmaceuticamente aceitáveis, não tóxicos, convencionais. As preparações líquidas adequadas para administração oral (por exemplo, suspensões, xaropes, elixires e semelhantes) podem ser preparados de acordo com técnicas conhecidas na técnica e podem empregar qualquer um dos meios habituais, tal como água, glicóis, óleos, álcoois e semelhantes. As preparações sólidas adequadas para administração oral (por exemplo, pós, pílulas, cápsulas e comprimidos) podem ser preparados de acordo com técnicas conhecidas na técnica e podem empregar excipientes sólidos tal como amidos, açúcares, caulino, lubrificantes, aglutinantes, desintegrantes e semelhantes. As composições para administração parentérica podem ser preparados de acordo com as técnicas conhecidas na técnica e empregam tipicamente água esterilizada como veículo e opcionalmente outros ingredientes, tal como adjuvantes da solubilidade. Podem ser preparadas soluções injectáveis de acordo com os métodos conhecidos na técnica, incluindo o veículo uma solução salina, uma solução de glucose ou uma solução contendo uma mistura de sais e glucose. Uma descrição mais pormenorizada dos métodos adequados para utilização na preparação das composições farmacêuticas da presente invenção e ingredientes adequados para utilização nas composições mencionadas é apresentada em Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a edição, editado por A. R. Gennaro, Mack Publishing Co., 1990.

Os compostos da presente invenção podem ser administrados por via oral numa dose entre 0,001 e 1.000 mg/kg de peso corporal do mamífero (por exemplo ser humano) por dia numa 25 dose única ou em várias doses. Um intervalo de dosagem preferido é 0,01 a 500 mg/kg de peso corporal por dia numa dose única ou em várias doses. Outro intervalo de dosagem preferido é 0,1 a 100 mg/kg de peso corporal por dia numa dose única ou em várias doses. Para administração oral, as composições podem ser apresentadas sob a forma de comprimidos ou cápsulas contendo 1,0 a 500 miligramas do ingrediente activo, particularmente 1, 5, 10, 15, 20, 25, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 400 e 500 miligramas do ingrediente activo para o ajuste sintomático da dosagem ao paciente em tratamento. O nível de dosagem específico e frequência da dosagem para qualquer paciente específico pode variar e irá depender de uma variedade de factores, incluindo a actividade do composto específico empregue, a estabilidade metabólica e o comprimento da acção desse composto, a idade, peso corporal, saúde em geral, sexo, dieta, moda e tempo de administração, velocidade da excreção, combinação de medicamentos, gravidade do estado particular e terapia em curso do hospedeiro.

Tal como anteriormente indicado, a presente invenção refere-se também a um método para a inibição da protease NS3 de HCV, inibição da replicação do HCV ou prevenção ou tratamento de infecção com HCV com um composto da presente invenção em combinação com um ou vários agentes terapêuticos e uma composição farmacêutica compreendendo um composto da presente invenção e um ou vários agentes terapêuticos seleccionados do grupo constituído por um agetne antiviral de HCV, um imunomodulador e um agente anti-infeccioso. Estes agentes terapêuticos activos contra HCV incluem, sem constituir limitação, ribavirina, levovirina, viramidina, timosina alfa-1, R7025 (um interferão intensificado (Roche)), interferão-β, 26 interferão-α, interferão-α pequilado (peginterferão-α), uma combinação de interferão-α e ribavirina, uma combinação de peginterferão-α e ribavirina, uma combinação de interferão-α e levovirina e uma combinação de peginterferão-α e levovirina. Interferão-α inclui, sem constituir limitação interferão-a2a recombinante (tal como interferão Roferon disponível junto da Hoffmann-LaRoche, Nutley, NJ) , interferão-a2a pegilado (PegasysTM), interferão-a2b (tal como interferão Intron-A disponível junto da Schering Corp., Kenilworth, NJ) , interferão-a2b pegilado (PeglntronTM), um interferão de consenso recombinante (tal como interferão alphaconl), albuferon (interferão-α ligado a albumina de soro humana (Human Genome Sciences)) e um produto de interferão-α purificado. 0 interferão de consenso recombinante Amgen possui a designação comercial Infergen®. Levovirina é o enantiómero L de ribavirina, o qual revelou possuir actividade imunomoduladora semelhante à ribavirina. A viramidina representa um análogo da ribavirina apresentado na WO 01/60379 (atribuído à ICN Pharmaceuticals). De acordo com o método da presente invenção, os componentes individuais da combinação podem ser administrados separadamente em momentos diferentes durante o curso da terapia ou concomitantemente em formas de combinação divididas ou únicas.

Para o tratamento da infecção por HCV, os compostos da presente invenção podem também ser administrados em combinação com um agente que seja um inibidor da protease NS3 de HCV. A protease serínica NS3 de HCV é uma enzima virai essencial e tem sido descrita como sendo um alvo excelente para a inibição da replicação de HCV. Ambos os inibidores à base de substrato e sem ser à base de 27 substrato de NS3 de HCV são apresentados nas WO 98/224 96, WO 98/46630, WO 99/07733, WO 99/07734, WO 99/38888, WO 99/50230, WO 99/64442, WO 00/09543, WO 00/59929, GB-2337262, WO 02/48116, WO 02/48172 e patente norte-americana n°. 6,323,180.

Ribavirina, levovirina e viramidina podem exercer os seus efeitos anti-HCV modulando os conjuntos intracelulares de nucleótidos guanina, através da inibição da enzima intracelular inosina monofosfato desidrogenase (IMPDH). O IMPDH é a enzima limitadora da velocidade na via biossintética na biossintese do nucleótido guanina novos. A ribavirina é rapidamente fosforilada intracelularmente e o derivado de monofosfato é um inibidor de IMPDH. Deste modo, a inibição de IMPDH representa outro alvo útil para a descoberta de inibidores da replicação de HCV. Por conseguinte, os compostos da presente invenção podem também ser administrados em combinação com um inibidor de IMPDH, tal como as VX-497, que é apresentado em WO 97/41211 e WO 01/00622 (atribuído à Vertex); outro inibidor IMPDH tal como o apresentado na WO 00/25780 (atribuído à Bristol-Myers Squibb) ou micofenolato de mofetil [vide A.C. Allison e E.M. Eugui, Agents Action, 44 (Suppl.): 165 (1993)]. Para o tratamento da infecção por HCV, os compostos da presente invenção podem também ser administrados em combinação com o agente antiviral amantadina (1-aminoadamantano) [para uma descrição exaustiva deste agente, vide J. Kirschbaum, Anal. Profiles Drug Subs. 12: 1-36 (1983)].

Para o tratamento da infecção por HCV, os compostos da presente invenção podem também ser administrados em combinação com o agente antiviral inibidor da polimerase R7128 (Roche). 28

Os compostos da presente invenção podem também ser combinados para o tratamento da infecção com HCV com os ribonucleosideos ramificados 2'—C— antiviral apresentados em R. E. Harry-0'kuru, et al., J. Org. Chem., 62: 1754-1759 (1997); M. S. Wolfe, et al., Tetrahedron Lett., 36: 7611-7614 (1995); patente norte-americana n°. 3,480,613 (25 Nov., 1969); Número de Publicação Industrial WO 01/90121 (29 de Novembro de 2001); Número de Publicação Industrial WO 01/92282 (6 de Dezembro de 2001) e Número de Publicação Industrial WO 02/32920 (25 de Abril de 2002) e Número de Publicação Industrial WO 04/002999 (8 de Janeiro de 2004) e Número de Publicação Industrial WO 04/003000 (8 de Janeiro de 2004)e Número de Publicação Industrial WO 04/002422 (8 de Janeiro de 2004). Estes ribonucleosideos ramificados 2'-C- incluem, sem constituir limitação, 2'-C-metil-citidina, 2'-C-metil-uridina, 2'-C-metil-adenosina, 2'-C-metil-guanosina e 9-(2-C-metil-p-D-ribofuranosil)-2,6-diatninopurina e o éster de aminoácido correspondente da ribose C-2', 0-3' e 0-5' hidroxilos e os ésteres ciclicicos correspondentes opcionalmente substituídos de 1,3-propanediol dos derivados de 5'-fosfato.

Os compostos da presente invenção pode também ser combinados para o tratamento da infecção com HCV com outros nucleosideos possuidores de propriedades anti HCV, tal como os apresentados na WO 02/51425 (4 de Julho de 2002), atribuido à Mitsubishi Pharma Corp.; WO 01/79246, WO 02/32920, WO 02/48165 (20 de Junho de 2002) e W02005003147 (13 de Jan. de 2005) (incluindo R1656, (2'R)-2'-deoxi-2'-fluoro-2'-C-metilcitidina, apresentado como compostos 3-6 na página 77) atribuido à Pharmasset, Ltd.; WO 01/68663 (20 de Setembro de 2001), atribuido à ICN Pharmaceuticals; WO 99/43691 (2 de Set. de 1999); WO 02/18404 (7 de Março de 29 2002) , US2005/0038240 (17 de Fev. de 2005) e W02006021341

(2 de Março de 2006), incluindo nucleosideos 4'-azido tal como R1626, 4'-azidocitidina, atribuído a Hoffmann-LaRoche; U.S. 2002/0019363 (14 de Fev. de 2002); WO 02/100415 (19 de Dez. de 2002); WO 03/026589 (3 de Abr. de 2003); WO 03/026675 (3 de Abr. de 2003); WO 03/093290 (13 de Nov. de

2003) ; );: US 2003/0236216 (25 de Dez. de 2003); US 2004/0006007 (8 de Jan. de 2004); WO 04/011478 (5 de Fev.

de 2004); WO 04/013300 (12 de Fev. de 2004); US 2004/0063658 (1 de Abr. de 2004) e WO 04/028481 (8 de Abr. de 2004) .

Para o tratamento da infecção por HCV, os compostos da presente invenção podem também ser administrados em combinação com um agente que seja um inibidor da polimerase NS5B de HCV. Estes inibidores de polimerase NS5B de HCV que podem ser utilizados como terapia combinada incluem, sem constituir limitação, os que estão apresentados em WO 02/057287, US 6,777,395, WO 02/057425, US 2004/0067901, WO 03/068244, WO 2004/000858, WO 04/003138 e WO 2004/007512. Outros inibidores de polimerase de HCV incluem, sem constituir limitação valopicitabina (NM-283; Idenix) e 2'-F-2'-beta-metilcitidina (consultar também WO 2005/003147, atribuído à Pharmasset, Ltd.).

Numa forma de concretização, os inibidores da polimerase NS5B HCV nucleosideos que são utilizados em combinação com os inibidores da protease NS3 de HCV da presente invenção são seleccionados de entre os seguintes compostos: 4-amino-7-(2-C-metil-p-D-arabinofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina; 4-amino-7-(2-C-metil-p-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina; 4-metilamino-7-(2-C-metil-p-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina; 4-dimetilamino-7-(2-C-metil-p-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3- 30 d]pirimidina; 4-ciclopropilamino-7-(2-C-metil-p-D- ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3—d]pirimidina; 4-amino-7(2-0 νίηίΙ-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3—d]pirimidina; 4-amino-7-(2-C-hidroximetil-p-D-ribofuranosil) -7H-pirrolo[2,3—d]pirimidina; 4-amino-7-(2-C-fluorometil-p-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3—d]pirimidina; 4-amino-5- metil-7-(2-C-metil-p-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2, 3-d]pirimidina; ácido 4-amino-7-(2-C-metil-p-D- ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3—d]pirimidina-5-carboxílico; 4-amino-5-bromo-7-(2-C-metil-p-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo [2,3-d]pirimidina; 4-amino-5-cloro-7-(2-C-metil-p-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina; 4-amino-5- fluoro-7- (2-C-metil-p-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina; 2,4-diamino-7-(2-C-metil-p-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina; 2-amino-7-(2-C-metil-p-D- ribofuranosil)-7H-pirrolo[2, 3-d]pirimidina; 2-amino-4- ciclopropilamino-7-(2-C-metil-p-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina; 2-amino-7-(2-C-metil-p-D- ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4(3H) -ona; 4- amino-7-(2-C-etil-p-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina; 4-amino-7-(2-C,2-0-dimetil-p-D- ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina; 7-(2-C-metil-p-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4(3H)-ona; 2-ami-ino-5-metil-7- (2-C, 2-0-dimetil-p-D-ribofuranosil) -7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4(3H)-ona 4-amino-7-(3-deoxi-2-C-metil-p-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina; 4-amino-7-(3-deoxi-2-C-metil-p-D-arabinofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina; 4-amino-2-fluoro-7-(2-C-metil-p-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina; 4-amino-7-(3-C-metil-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina; 4-amino-7-(3-C-metil-β-D-xilofuranosil)-7H-pirrolo[2, 3-d]pirimidina; 4-amino-7- (2, 4-di-C-metil^-D-ribofuranosil) -7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina; 4-amino-7-(3-deoxi-3-fluoro-2- 31 C-metil-p-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina; e os 5'-trifosfatos correspondentes ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

Os compostos da presente invenção podem ainda ser combinados para o tratamento da infecção por HCV com inibidores não nucleosideos da polimerase de HCV, tais como os revelados na WO 01/77091 (18 de Out. de 2001), atribuído a Tularik, Inc.; WO 01/47883 (5 de Julho de 2001), atribuído a Japan Tobacco, Inc.; WO 02/04425 (17 de Janeiro de 2002), atribuído a Boehringer Ingelheim; WO 02/06246 (24 de Jan. de 2002), atribuído a Istituto di Ricerche di Biologia Moleculare P. Angeletti S.P.A.; WO 02/20497 (3 de Março de 2002); WO 2005/016927 (em particular JTK003) , atribuído a Japan Tobacco, Inc.; e HCV-796 (Viropharma Inc.) .

Numa forma de concretização, os inibidores da polimerase NS5B HCV não nucleosideos que são utilizados em combinação com os inibidores da protease NS3 de HCV da presente invenção são seleccionados de entre os seguintes compostos: ácido 14-ciclo-hexil-6[2-(dimetilamino)etil]-7-oxo-5, 6,7,8-tetra-hidroindolo[2,1-a][2,5]benzodiazocine-ll-carboxílico; ácido 14-ciclo-hexil-6-(2-morfolin-4-iletil)-5,6,7,8- tetralridroindolo[2,1-a][2,5]benzodiazocine-ll-carboxílico; ácido 14-ciclo-hexil-6-[2-(dimetilamino etil]-3-metoxi-5,6,7,8-tetra-hidroindolo[2,1-a] [2,5]benzodiazocine-ll-carboxílico; ácido 14-ciclo-hexil-3-metoxi-6-metil-5,6,7,8-tetra-hidroindolo[2,1-a][2,5]benzodiazoeine-11-carboxlic; ({[(14-ciclo-hexil-3-metoxi-6-metil-5,6,7,8-tetra-hidroindolo [2,1-a][2,5]benzodiazocin-11- il)carbonil]amino]sulfoni)acetato de metilo; ácido ({[(14-ciclo-hexil-3-metoxi-6-metil-5, 6,7,8-tetra-hidroindolo[2,1-a][2,5]benzodiazocin-ll-il)carbonil]amino]sulfonil) acético; 32 14-ciclo-hexil-N-[(dimetilamino)sulfonil]-3-metoxi-6-metil- 5.6.7.8- tetra-hidroindolo[2,1-a][2,5]benzodiazocine-11- carboxamida; ácido 3-cloro-14-ciclo-hexil-6-[2- (dimetilamino)etil]-7-oxo-5,6, 7, 8-tetra-hidroindolo[2,1- a] [2,5]benzodiazocina ll-carboxilico; bis (trifluoroacetato) Ν'- (ll-carboxi-14-ciclo-hexil-7,8-di-hidro-6-H-indolo[1,2-e] [1,5]benzoxazocin-7-il)-N,N-dimetiletane-1,2-diamnio; ácido 14-ciclo-hexil-7,8-di-hidro-6-H-indolo[1,2- e][1,5]benzoxazocine-ll-carboxílico; ácido 14-ciclo-hexil-6-metil-7-oxo-5,6,7,8-tetra-hidroindolo[2,1-a][2,5]benzodiazocine-ll-carboxílico; ácido 14-ciclo-hexil-3-metoxi-6-metil-7-oxo-5,6, 7,8-tetra-hidroindolo[2,1-a][2,5]benzodiazocine-ll-carboxilico; ácido 14-ciclo-hexil- 6- [2-(dimetilamino)etil]-3-metoxi-7-oxo-5,6,7,8-tetra- hidrondolo[2,1-a] [2,5]benzodiazocine-ll-carboxilico; ácido 14-ciclo-hexil-6-[3-(dimetilamino)propil]-7-oxo-5, 6,7,8-tetra-hidroindolo[2,1-a][2,5]benzodiazocine-ll-carboxílico; ácido 14-ciclo-hexil-7-oxo-6-(2-piperidin-l-iletil)- 5.6.7.8- tetra-hidroindolo[2,1-a][2,5]benzodiazocine-ll-carboxilico; ácido 14-ciclo-hexil-6-(2-morfolin-4-iletil)- 7- oxo-5,6,7,8-tetra-hidroindolo[2,1-a][2,5]benzodiazocine- ll-carboxilico; ácido 14-ciclo-hexil-6-[2- (dietilamino)etil]-7-oxo-5,6,7,8-tetra-hidroindolo[2,1- a][2,5]benzodiazocine-ll-carboxilico; ácido 14-ciclo-hexil- 6- (l-metilpiperidin-4-iI)-7-oxo-5,6,7,8-tetra-hidroindolo [2, 1-a] [2,5]benzodiazocine-ll-carboxilico; 14-ciclo-hexil-N- [(dimetilamino)sulfonil]-7-oxo-6- (2-piperidin-l-iletil)-5, 6,7,8-tetra-hidroindolo[2,1- a][2,5]benzodiazocine-ll-carboxamida; 14-ciclo-hexil-6[2-(dimetilamino)etil]-N-[(dimetilamino)sulfonil]-7-oxo5,6,7,8-tetra-hidroindolo[2,1-a][2,5]benzodiazocine-ll-carboxamida; ácido 14-ciclopentil-6-[2-(dimetilamino)etil]- 7- oxo-5,6,7,8-tetra-hidroindolo[2,1-a][2,5]benzodiazocine- 33 11-carboxílico; ácido 14-ciclo-hexil-5,6,7,8-tetra-hidroindolo[2,1-a] [2,5]benzodiazocine-ll-carboxílico; ácido 6-alil-14-ciclo-hexil-3-metoxi-5,6,7,8-tetra- hidroindolo[2,1-a] [2,5]benzodiazocine-ll-carboxílico; ácido 14-ciclopentil-6-[2-(dimetilamino)etil]-5,6,7,8-tetra-hidroindolo[2,1-a][2,5]benzodiazocine-ll-carboxílico; ácido 14-ciclo-hexil-6-[2-(dimetilamino)etil]-5,6,7,8-tetra-hidroiridolo[2,1-a][2,5]benzodiazocinell-carboxílico; ácido 13-ciclo-hexil-5-metil-4,5,6,7-tetra-hidrofuro[3',2':6, 7] [1,4]diazocino[1,8-a]indole-10-carboxílico; ácido 15-ciclo-hexil-6-[2-(dimetilamino)etil]- 7- oxo-6,7,8,9-tetra-hidro-5-H-indolo[2,1- a][2,6]benzodiazonine-12-carboxílico; ácido 15-ciclo-hexil- 8- oxo-6,7,8,9-tetra-hidro-5-H-indolo[2,1- a] [2,5]benzodiazonine-12-carboxílico; ácido 13-cilo-hexil-β-οχο-β,7-di-hidro-5-H-indolo[1,2-d][1,4]benzodiazepine-10-carboxílico e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

Os inibidores de polimerase NS5B de HCV à base de indole tetracíclicos anteriores podem ser obtidos segundo os métodos A-E, conforme esquematizado em seguida, em que as diferentes variáveis podem ser seleccionadas de acordo com o composto indole tetracíclico específico que vai ser preparado:

Método A 34

1) manipulação do grupo funcional 2) encerramento do anel ho2c

desprotecção A ’r ROjC—

Intermediário de 2-bromoindole (preparado como descrito no pedido de patente internacional publicado W02004087714) foi funcionalizado no azoto índole para introduzir funcionalidade precursora VI'/X' em qualquer um ou ambos os elementos W/X da ligação. Metodologia de acoplamento cruzado mediado pr Pd (por exemplo Suzuki, Stille, etc.) introduziu a funcionalidade precursora com composto aromático C2 Z'/Y' em qualquer um ou ambos os elementos Z/Y da ligação. Uma manipulação funcional de grupo seguida de encerramento do anel proporcionou o sistema tetracíclico. A desprotecção do éster proporcionou então os ácidos carboxílicos indole alvo com o composto aromático C2 ligado ao azoto no anel indole. Método B 35 Η ROjC-

A H/Br -*~ Halogénio X'-W'

Na sequência da montagem da ligação até ao composto 2-haloaromático apropriado, um encerramento do anel mediado por Pd proporcionou o sistema tetraciclico fundido. A desprotecção do éster proporcionou então os ácidos carboxilicos índole alvo com o composto aromático C2 ligado ao azoto no anel índole.

Método C

H A ROzC-

PdL,’

WL ro2c

desprotecção -

0 composto aromático C2 foi introduzido no início através da metodologia de acoplamento cruzado mediado por Pd (Suzuki, Stille etc). A ligação foi então montada com ciclização no azoto no anel índole a fechar finalmente o anel. A desprotecção do éster proporcionou então os ácidos 36 carboxílicos indole alvo com o composto aromático C2 ligado ao azoto no anel indole.

Método D

1) manipulação do grupo funcional 2) desprotecção

Intermediários tetraciclicos fundidos, originários dos métodos A-C foram sujeitos a manipulação da funcionalidade na ligação antes da desprotecção do éster para se obter os ácidos carboxílicos no anel indole ligados-C2.

Método E

Ácidos carboxílicos indole ligados-C2 originários dos métodos A-D foram derivadizados mais profundamente através de manipulação da funcionalidade carboxilato para se obter compostos possuidores de uma substituição carboxilato ou carboxamida. Durante qualquer uma das sequências sintéticas anteriores poderá ser necessário e/ou desejável proteger grupos sensíveis ou reactivos em qualquer uma das moléculas envolvidas. Este objectivo pode ser atingido por meio de grupo de protecção convencionais, tais como os descritos em Protective Groups in Organic Chemistry, ed. J.F.W. McOmie, Plenum Press, 1973; e T.W. Greene & P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, 3a edição, 37 1999. Os grupos protectores podem ser removidos numa fase posterior conveniente utilizando métodos conhecidos da técnica. A actividade inibidora da protease NS3 de HCV dos compostos da presente invenção pode ser testada recorrendo a análises conhecidas na técnica. Uma análise destas é fluorescência resolvida no tempo (TRF) de protease NS3 de HCV, conforme descrito no exemplo 56. Outros exemplos destas análise encontram-se descritos em por exemplo, publicação da patente europeia W02005/046712. Os compostos úteis como inibidores de protease NS3 de HCV teriam um Ki inferior a 50 KM, mais preferencialmente inferior a 10 μΜ e ainda mais preferencialmente inferior a 100 nM. A presente invenção inclui ainda processos para a preparação de compostos da fórmula I, ΙΙ-a ou IlI-a. Os compostos da presente invenção podem ser facilmente preparados de acordo com os esquemas reaccionais e exemplos seguintes ou respectivas modificações, utilizando materiais de partida, reagentes e procedimentos de síntese já disponíveis. Nestas reacções é também possível recorrer a variantes que são conhecidas dos que têm formação ordinária na técnica, mas não são mencionadas em grande detalhe. Além disso, outros métodos de preparação dos compostos da presente invenção serão imediatamente evidentes para quem possuir formação ordinária na técnica à luz dos esquemas reaccionais e exemplos seguintes. Excepto no caso de indicação em contrário, todas as variáveis são tal como anteriormente definido. Os esquemas reaccionais e exemplos seguintes destinam-se apenas a ilustrar a presente invenção e sua prática. Os exemplos não devem ser encarados como limitações do âmbito ou espírito da presente invenção.

Descrição geral da síntese: 38

Os compostos da presente invenção podem ser sintetizados conforme se esboça nos esquemas gerais 1 e 2.

ESQUEMA 1 0 esquema 1 (n=0-9) esboça a síntese de uma molécula representativa. Um derivado de 4-hidroxiprolina protegido apropriado (por exemplo, um azoto protegido por carbamato e um ácido protegido por éster podem ser feitos reagir com carbonildiimidazole ou reagente equivalente e depois feitos reagir com uma isoindolina ou tetra-hidrossubstituída apropriadamente substituída. A funcionalidade alcenilo pode ser introduzida nesta fase ou numa fase posterior por meio de reacção catalisada por paládio de um substituinte haleto tal como cloreto, brometo e iodeto ou outra funcionalidade, tal como um triflato com um reagente organometálico, tal como vinilo ou aliltrialquilestanho. Em alternativa, a funcionalidade alcenilo pode ser introduzida antes da reacção com prolinol protegido. 0 esquema 2 descreve a síntese da porção de aminoácido contendo olefina. Um aminoácido (seja disponível no 39 comércio como preparado utilizando métodos conhecidos na técnica) em que a funcionalidade ácida é protegida como um éster (por exemplo, R=metilo) pode ser convertida nas amidas A por meio de acoplagem de um ácido carboxilico olefinico, utilizando uma ampla gama de agentes de acoplagem de peptideo, conhecidos dos peritos na especialidade, tal como DCC, EDC, BOP, TBTU, etc. A preparação das sulfonamidas B pode ser conseguida por meio de reacção com um cloreto de sulfonilo num solvente orgânico (por exemplo THF) com uma base amina como depurador. Os derivados de ureia C podem ser preparados por meio da reacção do aminoéster com um reagente, tal como carbonildiimidazole, para formar um isocianato intermediário (Catalano et al., WO 03/062192) seguido da adição de uma segunda olefina contendo amina. Em alternativa, podem ser utilizados fosgénio, difosgénio ou trifosgénio em vez de carbonildiimidazole. Os derivados de cianoguanidina D podem ser preparados por meio de reacção do éster de aminoácido com C-cianocarbonimidato de difenilo num solvente orgânico, seguido da adição de uma segunda amina contendo olefina. Os derivados de carbamato E podem ser preparados por meio da reacção de um álcool contendo olefina com carbonildiimidazole (ou fosgénio, trifosgénio ou difosgénio) num solvente orgânico, seguido da adição do amino éster. ESQUEMA 2 40

Na sequência da funcionalização da amina, o éster pode ser hidrolisado sob uma série de condições básicas conhecidas dos peritos na especialidade (Theodora W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, terceira edição, John Wiley and Sons, 1999). A desprotecção do grupo de protecção carbamato na porção prolina pode ser efectuada por meio de uma variedade de métodos conhecidos dos peritos na especialidade (Theodora W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, terceira edição, John Wiley and Sons, 1999).

Para completar a síntese dos compostos da presente invenção, o derivado de aminoácido pode ser acoplado com o derivado de prolina através de uma ampla gama de reagentes de acoplagem de peptídeos, tal como DCC, EDC, BOP, TBTU, etc (ver esquema 1). A macrociclização é então atingida por uma metátese da olefina, utilizando uma gama de catalisadores descritos na literatura para este fim. Nesta fase, a ligação olefinica produzida pela metátese de encerramento do anel pode ser opcionalmente hidrogenada 41 para se obter uma ligação saturada ou funcionalizada em modos alternativos tal como ciclopropanação. 0 éster prolina é então hidrolizado sob condições básicas e acoplado com o éster de ciclopropilaminoácido (a porção alcenilo ou alquilciclopropano apropriada da molécula pode ser preparada tal como anteriormente descrito (Llinas-Brunet et al., US 6,323,180) e sujeito a uma etapa adicional de hidrólise básica para proporcionar os compostos finais. O éster prolina pode também ser hidrolisado e acoplado directamente a um ciclopropilaminoácido acilo sulfonamida (que pode ser preparado de acordo com Wang X.A. et al. W02003/099274) para se obter os compostos finais.

Os catalisadores da metátese da olefina incluem as seguintes espécies à base ruténio: F: Miller et al J. Am. Chem. Soc 1996, 118, 9606; G: Kingsbury et al J.Am. Chem. Soc 1999, 121, 791; H: Scholl et al Org. Lett. 1999, 1, 953; Hoveyda et al US2002/0107138; K: Furstner et al. J. Org. Chem 1999, 64, 8275. A utilidade destes catalisadores na metátese de encerramento do anel é bem conhecida na literatura (por exemplo, Trnka and Grubbs, Acc. Chem. Res. 2001, 34, 18). 42

Catalisador de metátese de ruténio Zhan RC-303 (catalisador Zhan 1B, RC-303, Zannan Pharma Ltd.)

Lista de abreviaturas BOP Hexafluorofosfato de benzotriazole-l-il-oxi-tris- (dimetilamino)-fosfónio DCC Diciclo-hexilcarbodiimida C3CN Acetonitrilo DBU 1,8-Diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno DCE Dicloroetano DCM Diclorometano DMAP 4-Dimetilamino piridina DIPEA Diisoproiletilamina DMF Dimetilformamida DMSO Dimetilsulfóxido EDC N-(3-Dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida

Et3N Trietilamina Et20 Éter dietilico EtOAc Acetato de etilo EtOH Etanol HATU hexafluorofosfato de O-(7-Azabenzotriazol-l-il)- N,N,N',Ν'-tetrametilurónio HBr ácido bromídrico HC1 ácido clorídrico HOAc ácido acético HOAt l-hidroxi-7-azabenzotriazole LiOH hidróxido de litio 43

MeOH metanol MgS04sulfato de magnésio de

NaHC03 bicarbonato de sódio Na2S04 sulfato sódio cloreto de amónio

NaOH hidróxido de sódio NH4CI NH4OHhidróxido de amónio Pd/C paládio em carbono

Pd(PPh3)4 tetrakis(trifenilfosfina)paládio (0)

PhMe Tolueno PPh3 Trifenilfosfina TA temperatura ambiente TE tetra-hidofurano TBTU tetrafluoroborato de O-benzotriazol-l-il-Ν,Ν,Ν', N'-tetrametilurónio EXEMPLO 1 (5R,7S,10S)-10-Butil-N-((1R,2S)-1- {[ (ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-vinilciclopropil)-3,9,12-trioxo-l,6,7, 9,10,11,12,14,15,16-deca-hidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatrtazacicloicosine-7-carboxamida (III-l)

m-i

Etapa 1: 4-cloroisoindolina 44

Uma mistura de anidrido do ácido 3-cloroftálico (9 g, 49,2 mmol) e formamida (100 ml) foi aquecida a 125 °C e agitada durante 3 h. Foi então adicionada água (300 ml) e a mistura foi arrefecida à temperatura ambiente. A mistura foi filtrada e o sólido branco resultante foi lavado com água e seco para se obter 4-cloro-lH-isoindole-l,3(2H)-diona (7,7 g, 86 % de rendimento).

Adicionou-se a 4-cloro-lH-isoindole-l,3(2H)-diona sólido (4,0 g, 22,0 mmol) complexo de borano-THF (1 M/THF, 88,1 ml, 88,1 mmol) gota a gota sob agitação. Uma vez completa a adição, a mistura reaccional foi aquecida sob refluxo (80 °C) e agitada durante 6 h. A mistura reaccional foi depois arrefecida a 0 °C, adicionou-se cuidadosamente metanol (2,8 ml, 88,1 mmol) gota a gota e a mistura reaccional foi aquecida à temperatura ambiente. Adicionou-se HC1 (6 N) até a mistura ficar ácida e depois a mistura foi concentrada. O produto bruto foi dissolvido em HC1 1M e extraída por duas vezes com éter etílico e duas vezes com diclorometano. O pH da camada aquosa foi ajustado a 11 com NaOH sólido e foi extraída por três vezes com acetato de etilo. Os extractos de acetato de etilo combinados foram secos sobre Na2S04, filtrados e concentrados para se obter 4-cloroisoindolina (1,8 g, 53 % de rendimento). LRMS (ESI) m/z 154 [(M+H)+; calc. para C8H9CIN: 154].

Etapa 2: (2S,4R)-4-{[(4-cloro-l,3-di-hidro-2H-isoindol-2-il)carbonil]oxi}pirrolidina-l,2-dicarboxilato de 1-terc-butil 2-metilo 45

,0

Cl )=°

o‘ A uma solução de éster metilo de N-Boc-prolina (2,87 g, 11,7 mmol) em DMF (15 ml) a 0 °C adicionou-se carbonildiimidazole (1,9 g, 11,7 mmol). A reacção foi aquecida à temperatura ambiente e agitada durante 30 min. Foi então adicionada uma solução de 4-cloroisoindolina (1,8 g, 11,7 mmol) em DMF (10 ml) e a mistura reaccional foi aquecida a 50 °C e agitada durante 2 h. A mistura reaccional foi vertida em éter etílico HC1 0,5 N e as camadas foram separadas. A camada orgânica foi lavada com água, seco sobre Na2S04, filtrada e concentrada. O produto bruto foi purificado sobre gel de sílica (eluição do gradiente 10 % a 90 % de acetato de etilo em hexanos) para se obter (2S, 4R)-4-{[(4-cloro-l,3-di-hidro-2H-isoindol-2-il)carbonil]oxi}pirrolidina-l,2-dicarboxilato de 1-terc-butil 2-metilo (3,3 g, 66 % de rendimento). LRMS (ESI) m/z 325 [(M+HBoc)+; calc. para Ci5Hi8CIN204: 325].

Etapa 3: (2S, 4R)-4-{[(4-vinil-l,3-di-hidro-2H-isoindol-2- il)carbonil]oxi}pirrolidina-l,2-dicarboxilato de 1-terc-butil 2-metilo

>=0

O

O 46

Uma solução de (2S,4R)-4-{[(4-vinil-l,3-di-hidro-2H-isoindol-2-il)carbonil]oxi}pirrolidina-l,2-dicarboxilato de 1-terc-butil 2-metilo (40 mg, 0,09 mmol), tributilestanano de vinilo (36 mg, 0,11 mmol) e fluoreto de césio (31 mg, 0,21 mmol) em dioxano (0,5 ml) foi desgaseificado com N2 durante 15 min. Bis(tributilfosfina)paládio(0) (2 mg, 0,005 mmol) foi depois adicionado e o reactor foi selado e aquecido a 100 °C durante 18 h. Após o arrefecimento, a mistura reaccional foi concentrada e purificada por cromatografia em gel de sílica (10 % a 90 % de acetato de etilo em hexanos) para se obter (2S,4R)-4-{[(4-vinil-l,3-di-hidro-2H-isoindol-2-il)carbonil]oxi}pirrolidina-l, 2-dicarboxilato de 1-terc-butil 2-metilo (10 mg, 25 % de rendimento). LRMS (ESI) m/z 317 [(M+H-Boc)+; calc. para

Ci7H2iN204: 317],

Etapa 4: N-(pent-4-eniloxi)carbonil]-L-norleucil-(4R)-{[(4-vinil-1,3-di-hidro-2H-isoindol-2-il)carbonil]oxi]-L-prolinato de metilo

Num balão contendo (2S,4R)-4-{[(4-vinil-l,3-di-hidro-2H-isoindol-2-il)carbonil]oxi}pirrolidina-l,2-dicarboxilato de 1-terc-butil 2-metilo (60 mg, 0,14 mmol) adicionou-se uma solução de 4 M de HC1 em dioxano (2 ml). Passada 1 hora, a análise LC-MS indicava um consumo completo do material de partida e a formação do produto Boc desejado. Os componentes voláteis foram então removidos sob vácuo e o material em bruto foi recolhido em DMF (2 ml). 47 A esta mistura adicionou-se N-[(pent4-en-l-iloxi)carbonil]-L-norleucina (41 mg, 0,17 mmol) (preparado de acordo com o procedimento seguinte), DIPEA (0,076 ml, 0,43 mmol), EDC (54 mg, 0,28 mmol) e HOAt (44 mg, 0,28 mmol). Após agitação à ta durante 30 min, provou-se o completo consumo da amina por LC-MS. A mistura reaccional foi então processada com HC1 0,5 N e EtOAc. A camada orgânica foi lavada com salmoura e seca sobre MgS04. O solvente foi então removido sob vácuo e o produto bruto foi purificado em silica (10-90 % EtOAc/hexanos) para se obter 60 mg (79 % de rendimento) de N-(pent-4-eniloxi)carbonil]-L-norleucil-(4R)-{[(4-vinil-1,3-di-hidro-2H-isoindol-2-il)carbonil]oxi}-L-prolinato de metilo. LRMS (ESI) m/z 542 [(M+H)+; calc. para C29H40N3O7: 542] .

Etapa 5: (5R, 7S, 10S)-10-butil-3,9,12-trioxo- 1,6,7,9,10,11,12,14,15,16-decahidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2, 8,ll-benzodioxatriazacicloicosine-7-carboxilato de metilo

Uma solução de N-(pent-4-eniloxi)carbonil]-L-norleucil-(4R)-{[(4-vinil-l, 3-di-hidro-2H-isoindol-2-il)carbonil]oxi}-L-prolinato de metilo (60 mg, 0,11 mmol) em DCE (20 ml foi desgaseificada com N2 durante 15 min. O catalisador de metátese de ruténio Zhan RC-301 (Zhan Catalyst I (descrito como J na página 43), RC-301, Zannan Pharma Ltd.) (7 mg, 0,01 mmol) foi depois adicionado. A 48 solução foi então aquecida a 100 °C durante 1 h. Nesta altura, a análise LC-MS e TLC indicavam um consumo completo do material de partida e a formação de quase um produto único que tinha a massa desejada. O solvente foi então removido sob vácuo e o produto bruto foi purificado em sílica (5-70% EtOAc/hexanos) para se obter 45 mg (79 % de rendimento) de (5R, 7S, 10S)-10-butil-3,9,12-trioxo- 1.6.7.9.10.11.12.14.15.16- deca-hidro-5H-2,22:5,8-dimetano- 4,13,2, 8,ll-benzodioxatriazacicloicosine-7-carboxilato de metilo. LRMS (ESI) m/z 514 [(M+H)+; calc. para C27H36N307: 514] .

Etapa 6: (5R,7S,10S)-10-butil-N-((IR,2S)-1- {[(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-vinilciclopropil)-3,9,12-trioxo-l, 6, 7, 9,10,11,12,14,15,16-deca-hidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatriazacicloicosine-7-carboxamida A uma solução de (5R, 7S,10S)-10-butil-3,9,12-trioxo- 1.6.7.9.10.11.12.14.15.16- deca-hidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,ll-benzodioxatriazacicloicosine-7-carboxilato de metilo (45 mg, 0,09 mmol) em THE (2 ml), MeOH (0,5 ml) e água (1 ml) foi adicionado LiOH (21 mg, 0,87 mmol). A mistura reaccional foi aquecida a 40 °C e agitada durante 1 h, altura em que se observou o consumo completo do material de partida éster metílico por LC-MS. A mistura foi então processada com HC1 0,5 N e EtOAc. A camada orgânica foi então seca sobre K2C03 e o solvente foi removido sob vácuo. O produto bruto foi tomado em DMF (1 ml).

Adicionou-se à solução anterior cloreto de (IR,2S)-1-{[(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2- vinilciclopropanaminio (Llinas-Brunet et al US03/15755 e Wang et al WO 03/099274) (32 mg, 0,12 mmol), TBTU (51 mg, 0,16 mmol) e DIPEA (0,071 mL, 0,40 mmol) e a mistura 49 reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. A mistura reaccional foi purificada directamente por meio de HPLC de fase inversa para se obter (5R,7S,10S)-10-butil-N-((IR,2S)-1-{[(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-vinilciclopropil)-3,9,12-trioxo-l,6,7,9,10,11,12,14,15,16-deca-hidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatrtazacicloicosine-7-carboxamida (27 mg, 47 % de rendimento). 1H NMR (500 MHz, ppm, CDC13) δ 10.01 (s, 1 H),

7.27 (m, 2 H), 7.12 (d, 1 H) , 7.04 (s, 1 H) , 6.40 (d, J =16.1 Hz, 1 H), 6.08 (m, 1 H) , 5.76 (m, 1 H) , 5.44 (s, 1 H), 5.36 (d, 1 H), 5.25 (d, 1 H), 5.14 (d, 1 H), 4.80-4.68 (m, 3 H), 4.59 (d, 1 H), 4.44 (m, 2 H), 4.38 (m, 1 H), 4.28 (m, 1 H) , 3.95 (m, 1 H), 3.77 (dd, 1 H), 2.94 (m, 1 H), 2.43 (m, 2 H), 2.29 (d, 2 H), 2.06 (m, 2 H), 1.94 (m, 1 H), 1.78 (m, 4 H), 1.45 (m, 1 H), 1.38-1.06 (m, 5 H), 1.04 (d, 2 H), 0.92 (t, 3 H) ppm. LRMS (ESI) m/z 712 [(M+H)+; calc. para C35H46N5O9S: 712]. EXEMPLO 2 (5R,7S,10S)-10-terc. butil-N-((1R,2S)-1- {[ (ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-vinilciclopropil)-3,9,12-trioxo-l,6,7,9,10,11,12,14,15,16-deca-hidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,20,8,11-benzodioxatriazacicloicosine-7-carboxamida (II—2)

50 EXEMPLO 2 foi preparado de acordo com o procedimento utilizado para o EXEMPLO exceptuando a utilização de 3-metil-N-[ (pent-4-eniloxi)carbonil]-L-valina (preparado de acordo com o procedimento seguinte) em vez de N-[(pent-4-en-l-iloxi)carbonil]-L-norleucina na etapa 4. 1H NMR (500 MHz, ppm, CDCI3) 6 9.90 (s , 1 H) , 7.28 (m, 2 H) , 7.13 (m, 2 H), 6.31 (d, J= 15.9 Hz, 1 H), 6.04 (m, 1 H), 5.74 (m, 1 H) , 5.45 (m, 2 H), 5.27 (d, 1 H), 5.16 (d, 1 H), 4.77-4.66 (m, 3 H), 4.55 (d, 1 H), 4.48 (t, 1 H), 4.41-4.35 (m, 2 H) , 4.27 (m, 1 H), 3.93 (m, 1 H) , 3.74 (dd, 1 H) , 2.93 (m, 1 H), 2.45 (d, 2 H), 2.32 (m, 2 H), 2.10-1.95 (m, 2 H), 1.74 (m, 1 H) , 1.47 (m, 1 H) , 1.37 (m, 2 H) , 1.07 (s, 9 H) ppm. LRMS (ESI) m/z 712 [(M+H)+; calc. para CasH^OgS: 712]. EXEMPLO 3 (5R,7S,10S)-10-terc. butil-N-((IR, 2S)-1- {[(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-vinilciclopropil) -15,15-dimetil-3,9,12-trioxo-l,6,7,9,100,11,12,14,15,16-deca-hidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,20,8,11-benzodioxatriazacicloicosine-7-carboxamida (III-8)

Π1-8

Etapa 1: l-bromo-2 3-bis(bromometil)benzeno 51

Br

Br Br

Uma suspensão de 3-bromo-o-xileno (196 g, 1,06 mol), N-bromosuccinimida (377 g, 2,15 mol) e peróxido de benzoilo (0,26 g, 1,0 mmol) em tetracloreto de carbono (1800 ml) foi aquecida sob refluxo em atmosfera de azoto durante 15 h. O conteúdo do balão de reacção foi arrefecido, filtrado e o filtrado foi evaporado. O material em bruto foi destilado sob alto vácuo. As fracções maiores foram destiladas entre 88 °C e 152 °C. Recuperou-se 108 g de material puro. Recuperaram-se 182 g de um material ligeiramente em bruto que foi possivel aplicar na reacção seguinte. 1H NMR (CDC13) 5 (ppm) 7.56 (d, J= 8.0 Hz, 1 H) , 7.31 (d, J= 8.0 Hz, 1 H), 7.26 (s, 1 H), 7.16 (t, J= 8.0 Hz, 1 H), 4.84 (s, 2 H) , 4.64 (s, 2 H) .

Etapa 2: 2-benzil-4-bromoisoindolina

Suspendeu-se bicarbonato de potássio (204 g, 2,04 mol) em acetonitrilo (12 1) e a mistura foi aquecida a 80 °C. Soluções de l-bromo-2,3-bis(bromometil)benzeno (280 g, 0,82 mol em 500 ml acetonitrilo) e benzilamina (87,5 g, 0,82 mol em 500 ml acetonitrilo) foram adicionadas simultaneamente através de funis de adição ao longo de 1 h. A mistura reaccional foi agitada a 77 °C durante 16 h. O conteúdo do balão de reacção foi arrefecido, filtrado e o solvente foi removido por evaporação. A reacção foi dividida entre K2C03 1M e EtOAc. Os compostos orgânicos foram lavados com salmoura, secos com Na2S04, filtrados e evaporados. 52 cromatografia em coluna relâmpago (eluição do gradiente: heptano para 10 % EtOAc em heptano) produzium após evaporação o composto em epígrafe sob a forma de um óleo pálido. NMR (CDC13) 5 (ppm) 7.41-7.39 (m, 2 H) , 7.37- 7.34 (m, 2 H), 7.32-7.27 (m, 2 H), 7.10-7.03 (m, 2 H), 4.02 (s, 2 H), 3.97 (s, 2 H), 3.91 (s, 2 H). LRMS (ESI) m/z 289 [(M+H)+; calc. para Ci5Hi5BrN: 289].

Convertido em sal HC1 em HCl/MeOH. Adicinado MTBE e filtrado sólido para se obter 118 g de produto soba a forma de um sal HC1.

Etapa 3: 2-benzil-4-vinilisoindolina

Uma solução de 2-benzil-4-bromoisoindolina (16,7 g, 58,0 mmol) e tributil(vinil)estanho (20,3 ml, 69,6 mmol) em tolueno (400 ml) foi desgaseificada borbulhando azoto gasoso através da solução durante 0,25 h. Tetrakis (trifenilfosfina)paládio (0) (1,30 g, 1,16 mmol) foi adicionado e a solução resultante foi aquecida num banho de óleo a 100 °C sob atmosfera de azoto durante 24 h. 0 conteúdo do balão de reacção foi arrefecido, evaporado e sujeito a cromatografia em coluna relâmpago eluindo com hexano/acetato de etilo 95/5 para se obter, após a evaporação, o composto em epígrafe sob a forma de um óleo pálido que se tornou rosado em repouso. LRMS (ESI) m/z 236 [(M+H)+; calc. para C17H18N: 236].

Etapa 4: 4-Vinilisoindolina

53

Uma solução de 2-benzil-4-vinilisoindolina (58 mmol) em 1,2-dicloroetano (150 ml) foi colocada num balão de fundo redondo de 1 1, sob atmosfera de azoto. A este foi ligado um funil de adição contendo uma solução de cloroformato de 1-cloroetilo (7.5.1 ml, 69,6 mmol) em 1,2-diclorometano. O balão de reacção foi arrefecido num banho de gelo e o conteúdo do funil de adição foi adicionado gota a gota ao longo de 20 min, mantendo a temperatura de reacção interna <5 °C. Uma vez completa a adição, o balão de reacção foi deixado aquecer até à temperatura ambiente, depois foi aquecido até à temperatura de refluxo durante 45 min. O conteúdo do balão de reacção foi arrefecido à temperatura ambiente, depois o solvente foi removido por evaporação. Foi adicionado metanol (200 ml) e o conteúdo do balão de reacção foi aquecido à temperatura de refluxo durante 30 min. O balão de reacção foi arrefecido e o solvente foi removido por evaporação. Foi adicionada água (200 ml) e a mistura resultante foi lavada com acetato de etilo (2 x 250 ml) . A camada aquosa foi tornada básica com hidróxido de sódio 2N, depois foi extraída com cloreto de metileno (4 x 250 ml). Os extractos orgânicos combinados foram secos com sulfato de sódio anidro, filtrados e o filtrado foi evaporado. O resíduo restante foi sujeito a cromatografia em coluna relâmpago eluindo com cloreto de metileno/metanol/hidróxido de amónio 97/3/0,3 a 95/5/0,5. Evaporação das fracções produziu o composto em epígrafe sob a forma de um óleo castanho, 6,00 g (41,4 mmol, 71 % de rendimento para as duas etapas). LRMS (ESI) m/z 146 [(M+H)+; calc. para Ci0Hi2N: 146].

Etapa 5: (2S, 4R)-4-{[(4-vinil-l,3-di-hidro-2H-isoindol-2- il)carbonil]oxi}pirrolidina-l,2-dicarboxilato de 1-terc-butil 2-metilo 54 54

N CO2CH3

Uma solução de (2S,4R)-4-hidroxipirrolidina-l, 2-dicarboxilato de 1-terc butil 2-metilo (10,1 g, 41,4 mmol) em DMF (90 ml) sob atmosfera de azoto foi arrefecida a 0 °C. Adicionou-se 1,1'-carbonildiimidazole (6,70 g de 41,4 mmol) à reacção. O conteúdo do balão de reacção foi atenuado à temperatura ambiente e passadas 2 horas foi adicionada uma solução de 4-vinilisoindolina (6,00 g, 41,4 mmol) em DMF (10 ml) . A reacção foi aquecida num banho de óleo a 60 °C durante 2h, depois foi arrefecida em água e bissulfato de potássio. A mistura resultante foi extraida com acetato de etilo (4 x 250 ml) . Os compostos orgânicos combinados foram lavados com salmoura, secos com sulfato de sódio anidro, filtrados e evaporados. Cromatografia em coluna relâmpago, eluindo com hexano/acetato de etilo 70/30 produziu o composto em epígrafe sob a forma de uma espuma branca, 13,9 g (33,4 mmol, 81 % de rendimento). LRMS (ESI) m/z 417 [(M+H)+; calc. para C22H29N2O6: 417].

Etapa 6: Cloridrato de (3R,5S)-5-(metoxicarbonil)pirrolidin-3-il 4-vinil-1,3-di-hidro-2H-isoindole-2H-carboxilato

N CO2CH3

Uma solução de (2S,4R)-4-{[(4-vinil-l,3-di-hidro-2H-isoindol-2-il)carbonil]oxi}pirrolidina-l,2-dicarboxilato de 55 1-terc-butil 2-metilo (13,9 g, 33,4 mmol), em acetato de etilo (700 ml) foi arrefecida num banho de gelo, depois saturada com cloreto de hidrogénio gasoso. 0 balão de reacção foi selado e deixado aquecer à temperatura ambiente. Passadas 3,5 h, foi removido o solvente por meio de evaporação, para se obter o composto em epígrafe sob a forma de um sólido cinzento, 11,2 g, 95 % de rendimento). 1H NMR (500 MHz, ppm, CD3OD) 5 7.47-7.45 (m, 1 H) , 7.32 — 31 (m, 1 H) , v. 26 -7. 21 (m, 1 H) , 6.79· -6.73 (m, 1 H) , 5 .79 5. 73 (m, 1 H), 5. 46 (s , 1 H) , 5. ,41 - 5.38 (m, 1 H) , 4 .80 4 . 72 (m, 4 H), 3. 91 (s , 3 H) , 3. ,74 - 3.63 (m, 2 H) , 2 .77 2, .71 (m, 1 H) , 2 .51 -2. 46 (m , 1 H) . LRMS (ES I) m/z 317 [ (M+H)+; calc. para C17H21N2O4: 317].

Etapa 7: N-{[(2,2-dimetilpent-4-enil)oxi]carbonil}-3-metil-L-valil-(4R)-4-{[(4-vinil-1,3-dihidro-2H-isoindol-2-il)carbonil]oxi}-L-prolinato de metilo

A uma solução de cloridrato de (3R,5S)-5-(metoxicarbonil)pirrolidin-3-il-4-vinil-l,3-dihidro-2H-isoindole-2-carboxilato (2,00 g, 5,67 mmol) e N—{[(2,2— dimetilpent-4-enil)oxi]carbonil}-3-metil-L-valina (1,54 g, 5,67 mmol) em DMF (100 ml) foi adicionado EDC (1,41 g, 7,37 mmol), HOBt (1,00 g, 7,37 mmol) e Dl PE A (3,16 ml, 22,8 mmol). A mistura reaccional foi agitada à TA durante 18 h e depois foi diluída com acetato de etilo e NaHC03 aquoso. As camadas foram separadas e a camada orgânica foi lavada com 56 água e salmoura, seca sobre Na2S04, filtrada e concentrada. 0 resíduo em bruto foi purificado sobre gel de sílica (eluição do gradiente 5 % a 50 % de acetato de etilo em hexanos) para se obter N-{[ (2,2-dimetilpent-4-enil)oxi]carbonil}-3-metil-L-valil-(4R)-4-{[(4-vinil-l,3-dihidro-2H-isoindol-2-il)carbonil]oxi}-L-prolinato de metilo (2,75 g, 85 % de rendimento) sob a forma de uma espuma branca. LRMS (ESI) m/z 570 [(M+H)+; calc. para C31H44N3O7: 570] .

Etapa 8: (5R, 7S, 10S)-10-terc butil-15,15-dimetil-3, 9,12- trioxo-1,6,7,9,10,11,12,14,15,16-decahidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,ll-benzodioxatriazacicloicosine-7-carboxilato de metilo

Uma solução de N-{[(2,2-dimetilpent-4-enil)oxi]carbonil}-3-metil-L-valil-(4R)-4-{[(4-vinil-l,3-dihidro-2H-isoindol-2-il)carbonil]oxi}-L-prolinato de metilo (2,46 g, 4,32 mmol) em diclorometano anidro (450 ml) foi purgada com azoto durante 15 min. Uma solução de dicloridrato de bis(tricilo-hexilfosfina)-3-fenil-lH-indene-l-ilidenerutenio (catalisador Neolyst Ml adquirido junto da Strem) (0,40 g, 0,43 mmol) em diclorometano anidro desgaseificado (50 ml) foi depois adicionada gota a gota ao longo de 30 min. A mistura reaccional foi agitada à TA, durante esse tempo foram adicionadas porções de 0,2 g do catalisador aproximadamente a cada 80-12h. A evolução da reacção foi 57 vigiada por HPLC até a reacção estar completa a 48 h. 0 resíduo foi purificado por cromatografia relâmpago em gel de sílica, eluindo com 10 a 70 % EtOAc/hexano para dar (5R, 7S, 10S)-10-terc butil-15,15-dimetil-3,9,12-trioxo- 1,6,7,9,10,11,12,14,15,16-decahidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,ll-benzodioxatriazacicloicosine-7-carboxilato de metilo (1,85 g, 76 % de rendimento). LRMS (ESI) m/z 542 [(M+H)+; cale. para C29H40N3O7: 542],

Etapa 9: Ácido (5R, 7S, 10S)-10-terc butil-15,15-dimetil-3,9,12-trioxo-l, 6, 7, 9,10,11,12,14,15,16-decahidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatriazacicloicosine-7-carboxílico

A uma solução de (5R,7S,10S)-10-terc butil-15,15-dimetil-3,9,12-trioxo-l,6,7,9,10,11,12,14,15,16-deca-hidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatriazacicloicosine-7-carboxilato de metilo (0,9 g, 1,67 mmol) em THF:H20 (2:1 45 ml)foi adicionado LiOH (0,40, 16,7 mmol). A mistura reaccional foi aquecida a 40 °C e agitada durante 1 h. A mistura reaccional foi diluída com HC1 aquoso e depois foi extraída com EtOAc. A camada de EtOAc combinada foi lavada com água, salmoura, seca sobre Na2S04, filtrada e concentrada. O produto foi utilizado sem mais purificação. LRMS (ESI) m/z 528 [(M+H)+; calc. para C28H38N3O7: 528]. 58

Etapa 10: (5R,7S,10S)-10-terc butil-N-((IR, 2S)-1- { [ (ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-vinilciclopropil) - 15.15- dimetil-3,9,12-trioxo-l,6,7,9,10,11,12,14,15,16-deca-hidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatrtazacicloicosine-7-carboxamida

Uma solução de ácido (5R,7S,10S)-10-terc butil-15,15-dimetil-3,9,12-trioxo-l,6,7,9,10,11,12,14,15,16-deca-hidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,11- benzodioxatriazacicloicosine-7-carboxílico (100 mg, 0,19 mmol), cloreto de (1R,2S)-1- {[ (ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2- vinilciclopropanaminio (Llinas-Brunet et al US03/15755 e Wang et al WO 03/099274) (76 mg, 0,28 mmol), O-(7- azabenzotriazol-l-il)-N,N,Ν',N'-tetrametilurónio (HATU, 108 mg, 0,28 mmol), DIPEA (0,073 ml, 0,42 mmol) e 4- dimetilaminopiridina (2 mg) em diclorometano (5 ml) foi agitada a 4 0 °C durante 1 h. A solução reaccional foi diluída com NaHC03 aquoso saturado e depois foi extraída com EtOAc. A camada de EtOAc combinada foi lavada com água, salmoura, seca sobre Na2S04, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificadopor meio de cromatografia relâmpago eluindo com 3 % de MeOH/CH2Cl2 para se obter (5R, 7S,10S)-10-butil-N-((1R,2S)1- {[(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-vinilciclopropil)- 15.15- diemtil-3,9,12-trioxo-l,6,7,9,10,11,12,14,15,16-deca-hidro-5H-2,22:5,8-dimetanoll,2,8,11- benzodioxatrtazacicloicosine-7-carboxamida (80 mg, 57% de rendimento). XH NMR (400 MHz, ppm, CDC13) δ 7.48 (s, 1 H), 7.23 (s, 1 H), 7.12 (d, 1 H) , 6.23 (d, J. 15.9 Hz, 1 H) , 5.94 (m, 1 H), 5.76 (m, 1 H), 5.50 (m, 2 H), 5.43 (s, 1 H), 5.24 (d, J. 16.6 Hz, 1 H) , 5.11 (d, 1 H) , 4.70 (s, 2 H) , 4.61 (d, 1 H), 4.48 (m, 3 H), 4.35 (d, 1 H), 4.14 (d, 1 H), 59 3.74 (d, 1 Η), 3.34 (d, 1 Η), 2.89 (m, 1 Η), 2.43 (dd, 2 Η), 2.06 (m, 1 Η), 1.93 (m, 1 Η), 1.89 (dd, 1 Η), 1.43 (d, 1 Η), 1.25 (m, 3 Η), 1.09 (s, 3 Η), 1.06 (s, 9 Η), 0.86 (s, 3 H). LRMS (ESI) m/z 740 [(M+H)+; calc. para C37H50N5O9S: 740] . EXEMPLO 4 (5R,7S,10S)-10-terc butil-N-((1R,2S)-1- {[ (ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-vinilciclopropil)-3,9,12-trioxo-6,7,9,10,11,12,14,15,1617-deca-hidro-lH,5H-2,23:5,8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatrtazaciclo-henicosine-7-carboxamida (I11-12)

O composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento utilizado para o EXEMPLO 3 exceptuando a utilização de 3-metil-N-[(hex-5-eniloxi)carbonil]-L-valina (preparado de acordo com o procedimento seguinte) em vez de N-[(2,2-dimetilpent-4-enil)oxi]carbonil}-3-metil-L-valina na etapa 7. 1H NMR (500 MHz, ppm, CD3OD) δ 9.13 (s, 1 H), 7.26 (t, 1 H), 7.23 (d, 1 H) , 7.16 (d, 1 H) , 6.39 (d, J= 16.4 Hz, 1 H), 6.08 (m, 1H) , 5.76 (m, 1 H), 5.38 (s, 1 H), 5.29 (d, 1 H) , 5.12 (d, 1 H) , 4.79 (d, 1 H) , 4.73 - 4.63 (m, 4 H), 4.41 (s, 1 H), 4.37 (q, 1 H), 4.24 (d, 1 H) , 3.96 (dd, 1 H), 3.77 (quin, 1 H), 2.94 (m, 1 H), 2.51 (q, 1 H), 2.29 - 2.13 (m, 4 H) , 1.87 (dd, 1 H) , 1.68 (m, 2 H) , 1.53 (quin, 2 H), 1.44 (dd, 1 H), 1.25 (m, 2 H), 1.05 (s, 9 H) . LRMS (ESI) m/z 726 [(M+H)+; calc. para C36H84NSO9S: 726]. 60 EXEMPLO 5 (5R, 7S,10S)-10-butil-N-((IR, 2S) -1- {[(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-vinilciclopropil) -3,9,12-trioxo-6,7,9,10,11,12,14,15,16,17-deca-hidro-lH,5H-2,23:5,8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatriazaciclo-henicosine-7-carboxamida (I11-133)

O composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento utilizado para o EXEMPLO 3 exceptuando a utilização de 3-metil-N-[(hex-5-eniloxi)carbonil]-L-norleucina (preparado de acordo com o procedimento seguinte) em vez de N-[ (2,2-dimetilpent-4- enil)oxi]carbonil}-3-metil-L-valina na etapa 7. 1H NMR (500 MHz, ppm, CD3OD) δ 7.24 (t, 1 H) , 7.23 (d, 1 H), 7.15 (d, 1 H), 6.91 (d, 1 H), 6.37 (d, J= 16.1 Hz, 1 H) , 6.07 (m, 1H) , 5.75 (m, 1 H), 5.39 (s, 1 H), 5.29 (d, 1 H), 5.12 (d, 1 H), 4.77 (d, 1 H), 4.66 (m, 3 H), 4.57 (m, 1 H), 4.47 (q, 1 H) , 4.39 (q, 1 H), 4.27 (d, 1 H), 3.90 (dd, 1 H), 3.77 (quin, 1 H), 2.96 (m, 1 H), 2.49 (q, 1 H), 2.29 (m, 1 H), 2.22 (m, 3 H), 1.88 (dd, 1 H) , 1.75 (m, 2 H) , 1.64 (m, 2 H) , 1.52 (m, 2 H), 1.39 (m, 5 H), 1.27 (m, 1 H), 1.18 (m, 1 H), 1.09 (m, 2 H), 0.94 (t, 3 H). LRMS (ESI) m/z 726 [(M+H)+; calc. para C36H48N5O9S: 726] . 61 EXEMPLO 6 (5R,7S,10S)-10-Butil-N-((IR,2S)-1- {[(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-vinilciclopropil)-3,9,12-trioxo-l,6,7,9,10,11,12,14,15,16,17,18-dodeca-hidro-5H-2,24:5,8-dimetano-4,13,2,8,11- benzodioxatrtazaciclodocosine-7-carboxamida (III—198)

O composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento utilizado para o EXEMPLO 3 exceptuando a utilização de N-[(hept-6-en-l-iloxi)carbonil]-L-norleucina (preparado de acordo com o procedimento seguinte) em vez de N-[(2,2-dimetilpent-4-enil)oxi]carbonil}-3-metil-L-valina na etapa 7. 1H NMR (500 MHz, ppm, CD3OD) δ 9.26 (s, 1 H) , 7.39 (d, 1 H), 7.24 (t, 1 H) , 7.15 (d, 1 H) , 6.30 (d, J= 15.9 Hz, 1 H), 6.20 (m, 1H), 5.75 (m, 1 H), 5.53 (s, 1 H), 5.31 (d, 1 H), 5.12 (d, 1 H) , 4.70 (m, 4 H) , 4.43 (dd, 1 H), 4.34 (m, 2 H), 4.27 (q, 1 H) , 3.91 (dd, 1 H) , 3.79 (quin, 1 H) , 3.31 (m, 1 H) , 2.97 (m, 1 H) , 2.31 (m, 1 H) , 2.22 (m, 3 H), 1.89 (dd, 1 H) , 1.74 (m, 2 H) , 1.66 (m, 1 H) , 1.56 (m, 3 H) , 1.38 (m, 8 H), 1.19 (m, 1 H) , 1.09 (m, 2 H) , 0.94 (t, 3 H) . LRMS (ESI) m/z 740 [(M+H)+; calc. para C37H50N5O9S: 740]. EXEMPLO 7 62 (5R, 7S, 10S)-10-terc butil-N-((IR,2S)-1- {[(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-vinilciclopropil)-15,15-dimetil-3,9,12-tioxo-6,7,9,10,11,12,14,15,16,17-deca-hidro-ΙΗ,5H-2,23:5,8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatrtazaciclo-henicosine-7-carboxamida (III—199)

0 composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento utilizado para o EXEMPLO 3 exceptuando a utilização de N-{[ (2,2-dimetil-hex-5-enil)oxi]carbonil}-3-metil-L-valina (preparado de acordo com o procedimento seguinte) em vez de N-{[(2,2-dimetilpent-4- enil)oxi]carbonil}-3-metil-L-valina na etapa 7. 1H NMR (500 MHz, ppm, CD3OD) δ 9.17 (s, 1 H), 7.27 (t, J. 7.5 Hz, 1 H), 7.21 (t, J. 7.5 Hz, 2 H) , 7.16 (d, J. 7.5 Hz, 1 H) , 6.38 (d, J. 16 Hz, 1 H), 6.03 (m, 1 H), 5.79 (m, 1 H) , 5.32 (m, 2 H), 5.13 (m, 1 H) , 4.82-4.77 (m, 1 H) , 4.73-4.61 (m, 4 H) , 4.48 (s, 1 H), 4.39 (m, 1 H), 4.19 (d, J. 12 Hz, 1 H) , 3.96 (m, 1 H), 2.96 (m, 1 H), 2.59-2.55 (m, 1 H), 2.35-2.12 (m, 4 H), 1.89 (m, 1 H), 1.49-1.23 (m, 6 H), 1.51-0.98 (m, 14 H) , 0.95-0.85 (m, 4 H) . LRMS (ESI) m/z 754 [(M+H)+; calc. para C38H52N5O9S: 754], EXEMPLO 8 (5R,7S,10S)-10-terc butil-N-((1R,2S)-1- {[ (ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-etilciclopropil)-3,9,12-trioxo-l,6,7,9,10,11,12,14,15,16,17,18-dodeca-hidro- 63 5Η-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,11- benzodioxatrtazacicloicosine-7-carboxamida (III—200)

m-200

Uma solução do EXEMPLO 2 (0,32 mg, 0,45 mmol) e paládio sobre carbono (10 % p. 0,03 g) em EtOAc (10 ml) foi vigorosamente agitada num balão de hidrogénio durante 1 h. A mistura reaccional foi filtrada e concentrada. O residuo foi purificado por HPLC de fase inversa (coluna DeltaPak C18), a correr 40-65 % CH3CN em água (com NH4OAc 1 g/1). As fracções foram concentradas, diluídas com NaHC03 aquoso, saturado (20 ml) e extraídas com CH2C12 (3 x 70 ml) . As camadas de CH2C12 combinadas foram lavadas com água (50 ml), secas sobre MgS04, filtradas e concentradas para se obter (5R, 7S,10S)-10-terc butil-N-((IR,2S)-1- {[(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-etilciclopropil)— 3, 9,12-trioxo-6,7,9,10,11,12,14,15,16,17,18-dodeca-hidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,11- benzodioxatrtazacicloicosine-7-carboxamida (0,31 g, 97 % de rendimento). 1H NMR (CD3OD ppm) 6 7.23 (t, 1 H), 7.14 (d, 1 H), 7.10 (d, 1 H), 7.02 (d, 1 H) , 5.52 (s, 1 H) , 4.74 - 4.60 (m, 4 H), 4.48 - 4.30 (m, 4 H) , 3.88 (d, 1 H) , 3.75 (s, 1 H), 2.99 (m, 1 H), 2.62 (m, 1 H), 2.41 (m, 2 H), 2.14 (m, 1H), 1.79 (m, 1 H) , 1.65 - 1.51 (m, 6 H) , 1.47 - 1.19 (m, 5 H), 1.07 (s, 9 H) , 0.99 (t, 3 H) . LRMS (ESI) m/z 716 [(M+H)+; calc. para C35H50N5O9S: 716]. EXEMPLO 9 64 (5R,7S,10S)-10-terc butil-N-((IR,2S)-1- {[(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-etilciclopropil)-3, 9,12-trioxo-6,7,9,10,11,12,14,15,16,17,18-dodeca-hidro-1H,5H-2,23:5,8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatriazaciclo-henicosine-7-carboxamida (I11-201)

O composto em epígrafe foi preparado a partir do EXEMPLO 4, utilizando o procedimento descrito para o EXEMPLO 8. ^ NMR (500 MHz, ppm, CD3OD) 5 7.23 (t, 1 H), 7.14 (d, 1 H), 7.10 (d, 1 H), 7.02 (d, 1 H), 5.36 (s, 1 H), 4.71 (m, 3 H), 4.64 (t, 1 H), 4.56 (m, 1 H), 4.40 (m, 2 H), 4.24 (d, 1 H), 3.96 (dd, 1 H) , 3.72 (quin, 1 H) , 2.98 (m, 1 H) , 2.58 (m, 1 H) , 2.49 (m, 2 H), 2.15 (t, 1 H) , 1.69 -1.19 (m, 15 H) , 1.09 (m, 1 H), 1.06 (s, 9 H) , 0.98 (t, 3 H) . LRMS (ESI) m/z 730 [ (M+H)+; calc. para C36H52N5O9S: 730] . EXEMPLO 10 (5R, 7S, 10S)-10-butil-N-((1R,2S) -1- { [ (ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-etilciclopropil)-3,9,12-trioxo-6,7,9,10,11,12,14,15,16,17,18,19-dodeca-hidro-lH,5H-2,23:5,8-dimetano-4,13,2,8,11 — benzodioxatriazaciclo-henicosine-7-carboxamida (III—202) 65

ν CH, Ύ ο Ύ ΙΠ-202 Ο composto em epígrafe foi preparado a partir do EXEMPLO 5, utilizando o procedimento descrito para o EXEMPLO 8. 1H NMR (500 MHz, ppm, CD3OD δ 7.23 (t, 1 H) , 7.14 (d, 1 H), 7.09 (d, 1 H), 6.99 (d, 1 H), 5.39 (s, 1 H) , 4.76 - 4.61 (m, 4 H), 4.43 (m, 3 H) , 4.29 (d, 1 H) , 3.92 (dd, 1 H) , 3.69 (quin, 1 H), 2.99 (m, 1 H) , 2.57 (m, 1 H) , 2.51 (m, 2 H) , 2.19 (tt, 1 H), 1.77 (m, 1 H) , 1.70 -1.30 (m, 20 H) , 1.17 (m, 2 H), 1.10 (m, 2 H), 0.99 (t, 3 H) , 0.95 (t, 3 H). LRMS (ESI) m/z 730 [(M+H)+; calc. para C36H52N5O9S: 730]. EXEMPLO 11 (5R, 7S, 10S)-10-butil-N-((IR,2R) -1- {[(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-etilciclopropil)-3, 9,12-trioxo-l,6,7,9,10,11,12,14,15,16,17,18,19,20-tetradeci-hidro-5H-2,24:5,8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatriazaciclo-docosine-7-carboxamida (II1-203)

m-203 O composto em epígrafe foi preparado a partir do EXEMPLO 6, utilizando o procedimento descrito para o EXEMPLO 8. 1H NMR (500 MHz, ppm, CD3OD) 8 7.2 (t, 1 H) , 7.15 (d, 1 H) , 7.11 (d, 1 H), 5.55 (s, 1 H), 4.70 (m, 4 H), 4.49 (m, 1 H) , 4.38 66 (t, 1 Η), 4.29 (m, 2 Η), 3.94 (dd, 1 Η), 3.73 (quin, 1 Η), 3.00 (m, 1 Η), 2.63 (quin, 1 Η), 2.51 (m, 1 Η), 2.38 (m, 1 Η), 2.20 (tt, 1 Η), 1.76 (quin, 1 Η), 1.68 - 1.07 (m, 24 Η), 1.00 (t, 3 Η), 0.95 (t, 3 H). LRMS (ESI) m/z 744 [ (M+H)+; calc. para C37H54N5O9S: 744]. EXEMPLO 12 (5R,7S,10S)-10-terc butil-N-((IR,2R)-1- {[(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-etilciclopropil)-15,15-dimetil-3,9,12-tioxo-l, 6,9,10,11,12,14,15,16,17,18-dodeca-hidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatrtazacicloicosine-7-carboxamida (III-204)

O composto em epígrafe foi preparado a partir do EXEMPLO 3, utilizando o procedimento descrito para o EXEMPLO 8. 1H NMR (400 MHz, ppm, CD3OD) δ 9.06 (s, 1 H), 7.22 (dd, 1 H), 7.13 (d, 1 H), 7.07 (d, 1 H), 5.51 (s, 1 H), 4.72 (d, 2 H), 4.68 (d, 2 H), 4.44 (d, 2 H), 4.28 (m, 2 H) , 3.87 (dd, 1 H), 3.28 (m, 1 H), 2.98 (d, 1 H), 2.85 (m, 3 H), 2.52 (m, 1 H), 2.43 (m, 2 H), 2.15 (m, 1 H), 1.15-1.17 (m, 3 H), 1.41 (m, 2 H), 1.30 (m, 1 H), 1.21 (m, 4 H), 1.08 (m, 1 H), 1.06 (s, 3 H), 1.05 (s, 9 H), 0.98 (t, 3 H) , 0.81 (s, 3 H) . LRMS (ESI) m/z 744 [(M+H)+; calc. para C37H54N5O9S: 744 ]. EXEMPLO 13 67 (5R,7S,10S)-10-terc butil-N-((IR,2R)-1- {[(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-etilciclopropil)-15,15-dimetil-3,9,12-tioxo- 6,7,9,10,11,12,14,15,16,17,18,19-dodeca-hidro-lH,5H-2,23:5, 8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatriazaciclo-henicosine-7-carboxamida (I11-205)

0 composto em epígrafe foi preparado a partir do EXEMPLO 7, utilizando o procedimento descrito para o EXEMPLO 8. ΧΗ NMR (500 MHz, ppm, CD3OD) δ 9.09 (s, 1 H), 7.24 (t, J= 7.5 Hz, 1 H) , 7.15 (d, J= 7.5 Hz, 1 H) , 7.10 (d, J= 7.5 Hz, 1 H) , 5.53 (s, 1 H), 4.75 - 4.59 (m, 4 H), 4.44 - 4.37 (m, 3 H), 4.20 (d, J= 12 Hz, 1 H) , 3.95 - 3.91 (m, 1 H) , 3.31 (m, 2 H), 2.99 - 2.96 (m, 1 H), 2.62 - 2.46 (m, 3 H), 2.17 - 2.13 (m, 1 H) , 1.67 - 1.50 (m, 6 H), 1.37 - 1.18 (m, 7 H), 1.15 - 0.96 (m, 16 H) , 0.80 (s, 3 H) . LRMS (ESI) m/z 758 [(M+H)+; calc. para C38H56N509S: 758].

Preparação alternativa:

Etapa 1: l-bromo-2,3-bis(bromometil)benzeno

Br

Br Br A uma suspensão de 3-bromo-o-xileno (999 g, 5,40 mol) em clorobenzeno (9 1) à TA foi adicionado N-bromosuccinimida 68 (1.620 g, 9,1 mol) e peróxido de benzoílo (2,6 g, 10,8 mmol). A mistura reaccional foi aquecida a 80 °C e agitada sob azoto durante 18 h. A mistura reaccional foi arrefecida a 70 °C e adicionou-se uma porção adicional de NBS (302 g, 1,7 mol). A mistura reaccional foi aquecida a 80 °C e agitada sob azoto durante 22 h. A mistura reaccional foi arrefecida à TA, diluída com heptano (6 1) e filtrada. O bolo de filtração foi lavado com heptano (4 1) e os filtrados combinados foram evaporados. O produto bruto foi dissolvido em heptano (2 1) e clorofórmio (200 ml) e filtrado através de alumina básica (500 g) . O chumaço de alumina foi lavado com heptano (4 1) e os filtrados combinados foram evaporados para se obter l-bromo-2,3-bis(bromoetil)benzeno (1.760 g, peso em bruto) que foi utilizado sem mais purificação. 1H NMR (CDC13) δ (ppm) 7.56 (d, J= 8.0 Hz, 1 H) , 7.31 (d, J= 8.0 Hz, 1 H) , 7.26 (s, 1 H), 7.16 (t, J= 8.0 Hz, 1 H), 4.84 (s, 2 H), 4.64 (s, 2 H).

Etapa 2: Cloridrato de 2-benzil-4-bromoisoindolina

HCI

Suspendeu-se bicarbonato de potássio (657 g, 6,56 mol) em MeCN (17 1) e a mistura foi aquecida a 80 °C. Soluções de l-bromo-2,3-bis(bromometil)benzeno em bruto (900 g, 2,63 mol em 1 1 de MeCN) e benzilamina (281 g, 2,63 mol em 1 1 de MeCN) foram adicionadas simultaneamente através de funis de adição ao longo de 2 h. A mistura reaccional foi agitada a 77 °C durante 2 h e depois foi arrefecida à TA e agitada durante 16 h. O conteúdo do balão de reacção foi arrefecido, filtrado e o solvente foi removido por evaporação. A reacção foi dividida por água (6 1) e EtOAc 69 (2 1) . Ο ρΗ foi ajustado a >9 por meio da adição de K2CO3 1M, as camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com uma porção adicional de EtOAc (2 1) . Os compostos orgânicos combinados foram lavados com salmoura, secos com Na2S04 anidro, filtrados e evaporados. 0 óleo em bruto foi diluído com EtOH (300 ml) e arrefecido a 0 °C. Foi adicionado HC1 metanólico até a mistura ficar ácida, seguido de MTBE (700 ml) e a mistura foi sonicada, depois agitada durante 15 h. Adicionou-se MTBE (11) e a mistura foi filtrada e lavada com EtOH 20 % em MTBE, seguido de MTBE. O sólido foi seco ao ar para se obter cloridrato de 2-benzil-4-bromoisoindolina (211 g) . Uma porção adicional do produto (86 g) foi isolada por meio de concentração das águas mães. LRMS (ESI) m/z 289 [(M+H)+; calc. para

Ci5H15BrN: 289] .

Etapa 3: 4-Bromoisoindolina

Br

.HCI A uma solução de cloridrato de 2-benzil-4-bromoisoindolina (11 g, 30,96 mmol) em 200 ml de EtOAc adicionou-se NaOH 1M (100 ml) e a mistura foi agitada durante 30 min. A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca sobre Na2S04 anidro e o solvente foi evaporado, formando um óleo que foi azeotropizado uma vez com tolueno (50 ml) . O óleo foi dissolvido em clorobenzeno (50 ml) e foram adicionados crivos moleculares (5 g) à solução agitada. Passador 10 min, adicionou-se cloroformiato de 1-cloroetilo (5,6 ml, 51 mmol) gota a gota ao longo de 5 min. A mistura reaccional foi depois aquecida a 90 °C durante 2 h, deixada arrefecer à temperatura ambiente e filtrada. Os sólidos foram lavados com clorobenzeno (5 ml) e metanol (40 ml) . O filtrado foi 70 aquecido a 70 °C durante 1 h, deixado arrefecer e agitado à temperatura ambiente de um dia para o outro. Os sólidos foram filtrados, lavados com clorobenzeno (2 ml) e hexano e secos para se obter 6,84 g do composto em epígrafe. LRMS (ESI) m/z 198,1 [ (M+H)+; calc. para C8H9BrN: 198,0].

Etapa 4: (2S,4R)-4-{[(4-bromo-l,3-di-hidro-2H-isoindol-2-il)carbonil]oxi}pirrolidina-l,2-dicarboxilato de 1-terc-butil 2-metilo

A uma solução de éster metílico de (2S,4R)-Boc-4-hidroxiprolina (126,3 g, 515 mmol) em DMF (960 ml) a 0 °C adicionou-se N,Ν'-carbonildiimidazole (83,51 g, 515 mmol). A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durane 3 horas. Cloridrato de 4-bromoisoindolina (120 g, 515 mmol) e diisopropiletilamina (96,3 ml, 540 mmol) foram adicionados e a mistura reaccional foi aquecida a 50 °C durante 6 h e depois foi deixada arrefecer à temperatura ambiente e agitada de um dia para o outro. A mistura reaccional foi dividida por EtOAc (3 1) e KHS04 aquoso a 10 % (6 1), o re-extracto aquoso com EtOAc (2 1) e as fases orgânicas combinadas foram lavados com NaHC03 aquoso 10 %, salmoura, seco sobre Na2S04 e solvente evaporou formando uma espuma (239 g) . LRMS (ESI) m/z 471,0 [(M+H)+; calc. para C2oH26BrN206: 471,1] . 71

Etapa 5: (2S,4R)-4-{[(4-vinil-l,3-di-hidro-2H-isoindol-2-il)carbonil]oxi}pirrolidina-l,2-dicarboxilato de 1-t-butil 2-metilo

A uma solução de (2S,4R)-4-{[(4-bromo-l,3-di-hidro-2H-isoindol-2-il)carbonil]oxi}pirrolidina-l,2-dicarboxilato de 1-terc-butil 2-metilo (10,0 g, 21,3 mmol) em etanol (200 ml) foi adicionado viniltrifluoroborato de potássio (4,28 g, 32 mmol) e trietilamina (4,5 ml, 32 mmol) seguido de cloreto de dicloro-[1,1- bis(difenilfosfino)ferroceno]paládio (II) aducto diclorometano (175 mg, 0,21 mmol). A mistura reaccional foi aquecida à temperatura de refluxo durante 6 h, deixada arrefecer à temperatura ambiente, diluída com KHS04 aquoso a 10 % e o etanol foi removido por meio de evaporação sob vácuo. 0 resíduo aquoso foi extraído com EtOAc e a fase orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2S04, o solvente foi evaporado e o produto bruto foi purificado por cromatografia em sílica, eluindo com 40-60 % de

EtOAc/hexano, para se obter, após evaporação o composto em epígrafe (8,18 g). LRMS (ESI) m/z 417,2 [(M+H)+; calc. para C22H29N2Oê: 417,2].

Etapa 6: Cloridrato de (3R, 5S)-5- (metoxicarbonil)pirrolidin-3-14-vinil-l,3-di-hidro-2H-isoindole-2H-carboxilato 72

.HCI

Uma mistura de (2S,4R)-4-{[(4-vinil-l,3-di-hidro-2H-isoindol-2-il)carbonil]oxi}pirrolidina-l,2-dicarboxilato de 1-t-butil 2-metilo (18,0 g, 43,2 mmol) e HCl/dioxano (4 M) (43,2 ml, 173 mmol) foi agitada à TA durante 2 h. A mistura reaccional foi concentrada para se remover o dioxano, seguido de concentração a partir de Et20 para se obter o cloridrato de (3R,5S)-5-(metoxicarbonil)pirrolidin-3-14-vinil-1,3-di-hidro-2H-isoindole-2H-carboxilato sob a forma de um sólido quase branco (15 g) que foi utilizado sem mais purificação. LRMS (ESI) m/z 317 [(M+H)+; calc. para C17H21N2O4: 317 ] .

Etapa 7: N-{[ (2,2-dimetil-hex-5-en-l-il)oxi]carbonil}-3- metil-L-valil-(4R)-4-{[(4-vinil-l,3-dihidro-2H-isoindol-2-il)carbonil]oxi}-L-prolinato de metilo

A uma solução de cloridrato de (3R, 5S)-5-(metoxicarbonil)pirrolidin-3-il-4-vinil-l,3-dihidro-2H-isoindole-2-carboxilato (5,0 g, 14,2 mmol) e N—{[ (2,2— dimetil-hex-5-enil)oxi]carbonil}-3-metil-L-valina (4,0 g, 14,2 mmol) em DMF (20 ml) à TA foi adicionado DIPEA (2,5 ml, 14,2 mmol), EDC (5,5 g, 28,4 mmol) e HOAt (1,9 g, 14,2 73 mmol). Passadas 18 h a mistura reaccional foi vertida sobre Et20 e extraída com HC1 1 N. A camada aquosa foi extraída com EtOAc e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com HC1 1 N, água, NaHC03 e salmoura. A camada orgânica foi então seca sobre MgS04 e o solvente foi removido sob vácuo. 0 produto bruto foi purificado sobre sílica (30 % EtOAc em hexanos) para render 4,2 g do composto em epígrafe sob a forma de um óleo espesso. LRMS (ESI) m/z 584,4 [(M+H)+; calc. para C32H46N3O7: 584,3].

Etapa 8: (5R,7S,10S)-10-terc butil-15,15-dimetil-3,9,12- trioxo-6,7,9,10,11,12,14,15,16,17-decahidro-lH,5H-2,23:5,8-dimetano-4,13,2,8,ll-benzodioxatriazacicloicosine-7-carboxilato de metilo

A uma solução de N-{ [ (2,2-dimetil-hex-5-en-l-il)oxi]carbonil}-3-metil-L-valil-(4R)-4-{[(4-vinil-l, 3-dihidro-2H-isoindol-2-il)carbonil]oxi}-L-prolinato de metilo (4,7 g, 8,05 mmol) em DCM desgaseifiçado (azoto a borbulhar durante 30 min) (1.410 ml) adicionou-se catalisador Zhan 1B (Zhan catalyst 1B, RC-303, Zannan

Pharma Ltd.) (0,591 g, 0,805 mmol). A mistura foi então agitada à TA, sob atmosfera de N2. Passadas 19 h, a reacção estava completa e adicionou-se DMSO (57 μΐ, 0,805 mmol). A mistura foi agitada durante 2 h e a mistura foi concentrada sob vácuo a -70 ml. O produto bruto foi purificado directametne sobre sílica (eluição do gradiente 0-50 %

EtOAc em hexanos) para render 4,4 g do composto em epígrafe 74 sob a forma de um óleo. LRMS (ESI) m/z 556,3 [(M+H)+; calc. para C30H42N3O7: 556, 3].

Etapa 9: (5R,7S,10S)-10-terc butil-15,15-dimetil-3,9,12- trioxo-6,7,9,10,11,12,14,15,16,1718,19-dodeca-hidro-lH,5H-2,23:5,8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatriazaciclo-henicosine-7-carboxilato de metilo

A uma solução de (5R,7S,10S)-10-terc butil-15,15-dimetil-3,9,12-trioxo-6,7,9,10,11,12,14,15,16,17-deca-hidro-1H,5H2,23:5,8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatriazaciclo-henicosine-7-carboxilato de metilo (4,4 g, 7,92 mmol) em EtOAc (79 ml)foi adicionado Pd/C(0,421 g, 0,396 mmol). Foi colocado um balão de H2 no balão de reacção. O balão foi evacuado rapidamente e cheio com H2. Passadas 17 h, a reacção estava completa, tal como determinado por LC-MS. O Pd/C foi filtrado através de lã de vidro e o produto bruto foi purificado em sílica (eluição do gradiente, 0-60 % de EtOAc em hexanos) para render 4,01 g do composto em epígrafe sob a forma de um pó branco. LRMS (ESI) m/z 558,4 [ (M+H)+; calc. para C30H44N3O7: 558,3].

Etapa 10: (5R,7S,10S)-10-terc butil-15,15-dimetil-3,9,12- trioxo-6,7,9,10,11,12,14,15,16,17,18,19-dodeca-hidro-lH,5H-2,23:5, 8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatriazaciclo-henicosine-7-carboxilato de metilo 75

A uma solução de (5R,7S,10S)-10-terc butil-15,15-dimetil-3,9,12-trioxo-6,7,9,10,11,12,14,15,16,17,18,19-dodeca-hidro-ΙΗ,5H-2,23:5,8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatriazaciclo-henicosine-7-carboxilato de metilo (5,76 g, 10,33 mmol) em THF (41,3 ml), MeOH (41,3 ml) e água (20,7 ml) à TA foi adicionado LiOH (4,33 g, 103 mmol). Após conversão completa (45 min), segundo avaliação de LC-MS, a reacção foi dividida por Et20 e HC1 IN. A camada aquosa foi depois extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgS04 e o solvente foi removido sob vácuo para render 5,53 g do composto em epígrafe, o qual foi utilizado sem mais purificação. LRMS (ESI) m/z 544,4 [(M+H)+; calc. para C29H42N3O7: 544,3].

Etapa 11: (5R,7S,10S)-10-butil-N-((IR, 2R)-1- {[(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-etilciclopropil)15,15-dimetil-3,9,12-trioxo-6,7,9,10,11,12,14,15,16,17,18,19-dodeca-hidro-lH,5H-2,23:5, 8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatriazaciclo-henicosine-7-carboxamida (I11-205) A uma solução de ácido (5R, 7S,10S)-10-terc butil-15,15-dimetil-3, 9,12-trioxo-6,7,9,10,11,12,14,15,16,17,18,19- dodeca-hidro-ΙΗ,5H-2,23:5,8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatriazaciclo-henicosine-7-carboxílico (5,53 g, 10,17 mmol) e cloridrato de IR,2R)-1-amino-N-(ciclopropilsulfonil)-2-etilciclopropanecarboxamida (3,28 g, 12,21 mmol) em DMF (50,9 ml) foi adicionado DIPEA (7,11 ml, 40,7 mmol) e HATU (5,03 g, 13,22 mmol). Após conversão 76 completa (1 h), a mistura reaccional foi dividida por EtOAc e HC1 IN. A camada orgânica foi lavada com salmoura três vezes, seca sobre MgS04 e o solvente foi removido sob vácuo. 0 produto bruto foi purificado sobre sílica (eluição do gradiente 20-80 % EtOAc em hexanos) para render 5,8 g do composto em epígrafe sob a forma de um pó branco. EXEMPLO 14 (5R,7S,10S)-10-terc butil-N-((IR,2S)-1-{[(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-vinilciclopropil)-3,9,12-tioxo-l,6,9,10,11,12,14,15,16,17,18-dodeca-hidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatrtazacicloicosine-7-carboxamida (111—5)

Etapa 1: (5R,7S,10S)-10-terc butil-3,9,12-trioxo- 1,6,7,9,10,11,12,14,15,16-decahidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,ll-benzodioxatriazacicloicosine-7-carboxilato de metilo

(5R,7S,10S)-10-terc butil-3,9,12-trioxo- 1,6,7,9,10,11,12,14,15,16-decahidro-5H-2,22:5,8-dimetano- 77 4,13,2,8,ll-benzodioxatriazacicloicosine-7-carboxilato de metilo foi preparado de acordo com o procedimento utilizado para (5R,7S,10S)-10-terc butil-15,15-dimetil-3,9,12-trioxo-1,6,7,9,10,11,12,14,15,16-decahidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,ll-benzodioxatriazacicloicosine-7-carboxilato de metilo (EXEMPLO 3, etapa 8) exceptuando a utilização de 3-metil-N-[(pent-4-eniloxi)carbonil]-L-valina (preparado de acordo com o procedimento seguinte) em vez de N-[(2,2-dimetilpent-4-enil)oxi]carbonil}-3-metil-L-valina na etapa 7. LRMS (ESI) m/z 514 [(M+H)+; calo. para C27H36N3O7: 514].

Etapa 2: (5R,7S,10S)-10-terc butil-3,9,12-trioxo- 1,6,7,9,10,11,12,14,15,16,17,18-dodeca-hidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,ll-benzodioxatriazacicloicosine-7-carboxilato de metilo

A uma solução de (5R,7S,10S)-10-terc butil-3,9,12-trioxo-

dimetano-4,13,2,8,ll-benzodioxatriazacicloicosine-7-carboxilato de metilo (0,10 g, 0,20 mmol) em acetato de etilo (7 ml)foi adicionado paládio sobre carbono 10 % (0,01 g). A mistura reaccional foi agitada sob um balão de hidrogénio durante 5 horas à temperatura ambiente. O conteúdo do balão de reacção foi filtrado através de celite e o filtrado foi evaporado. O produto em bruto foi utilizado sem mais purificação (0,09 g, 90 % de 78 rendimento). LRMS (ESI) m/z 516 [(M+H)+; calc. para C27H38N3O7: 516] .

Etapa 3: (5R, 7S, 10S)-10-terc butil-N-((IR,2S)-1- { [(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-vinilciclopropil)-3,9,12-trioxo-6,7,9,10,11,12,14,15,16,17,18-dodeca-hidro-5H--2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatriazacicloicosine-7-carboxamida A uma solução de (5R,7S,10S)-10-terc butil-3,9,12-trioxo-1, 6,7, 9,10,11,12,14,15,16,17,18-dodeca-hidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,ll-benzodioxatriazacicloicosine-7-carboxilato de metilo (90 mg, 0,18 mmol) em THF (2 ml) e MeOH (0,5 ml) foi adicionado LiOH (1 N, 1,75 ml, 1,75 mmol). A mistura reaccional foi aquecida a 40 °C e agitada durante 1 h, altura em que se observou o consumo completo do material de partida éster metilico por LC-MS. A mistura foi então processada com HC1 0,5 N e EtOAc. A camada orgânica foi então seca sobre K2CO3 e o solvente foi removido sob vácuo. O produto bruto foi tomado em DMF (1 ml) .

Adicionou-se à solução anterior cloreto de (IR,2S)—1— { [(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2- vinilciclopropanaminio (51 mg, 0,19 mmol), TBTU (77 mg, 0. 24 mmol) e DIPEA (0,07 mL, 0,40 mmol) e a mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. A mistura reaccional foi purificada directamente por meio de HPLC de fase inversa para se obter (5R, 7S, 10S) 10-terc butil-N-((IR,2S)1-{[(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-vinilciclopropil)-3,9,12-trioxo- 1, 6,7, 9,10,11,12,14,15,16,17,18-dodeca-hidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,ll-benzodioxatriazacicloicosine-7-carboxamida (34 mg, 28% de rendimento) . 1H NMR (500 MHz, ppm, CD3OD) δ 9.14 (s, 1 H), 7.23 (t, 1 H) , 7.13 (d, 1 H) , 79 7.10 (d, 1 Η), 5.75 (quin, 1H) , 5.53 (s, 1 H) , 5.29 (d, 1 H), 5.12 (d, 1H), 4.75 - 4.59 (m, 5 H) , 4.42 (m, 2 H) , 4.34 (s, 1 H), 4.30 (d, 1 H), 3.88 (dd, 1 H) , 3.75 (m, 1 H) , 3.60 (q, 2 H), 2.95 (m, 1 H) , 2.63 (m, 1 H) , 2.41 (m, 2 H) , 2.26 - 2.12 (m, 2H) , 1.88 (dd, 1 H) , 1.79 (m, 1 H) , 1.56 (m, 3 H), 1.41 (m, 3 H), 1.25 (m, 2 H), 1.17 (t, 2 H) , 1.06 (s, 9 H) . LRMS (ESI) m/z 714 [(M+H)+; calc. para C35H48N5O9S: 714]. EXEMPLO 15 (5R,7S,10S)-10-terc butil-N-((1R,2S)-1- {[(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-vinilciclopropil)-15,15-dimetil-3,9,12-tioxo-l,6,9,10,11,12,14,15,16,17,18-dodeca-hidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatrtazacicloicosine-7-carboxamida (III-206)

O composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento utilizado no EXEMPLO 14 (utilizando as etapas 2 e 3) exceptuando a utilização de (5R,7S,10S)-10-terc butil-15,15-dimetil-3,9,12-trioxo- 1,6,7,9,10,11,12,14,15,16-decahidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,ll-benzodioxatriazacicloicosine-7-carboxilato de metilo (EXEMPLO 3, etapa 1) em vez de (5R,7S,10S)-10-terc butil-3,9,12-trioxo-l,6,7,9,10,11,12,14,15,16-deca-hidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,11- benzodioxatriazacicloicosine-7-carboxilato de metilo na etapa 2. ΧΗ NMR (400 MHz, ppm, CDCI3) 5 9.91 (s, 1 H), 7.22 80 (t, 1 H) , 7. 09 (d, 2 H), 7.05 (d, 1 H) , 5 .77 (m, 1 H) , . 5. 60 (s, 1 H) , 5. 45 (d, 1 H), 5.29 (s, 1 H) , 5 .15 (d, 1 H) , . 4. 72 (q, 2 H) , 4 . 40- 4.55 (m, 4 H), 4.30 (d, 1 H) , 4.25 (d, 1 H :), 3.78 (dd, 1 H) , 3. 26 (d, 1 H), 2.' 01 (m, 1 H) , 2. 50 (m, 3 H), 2 .39 (m, 3 H) , 2.11 (m, 1 Η), 1 .98 (m , 2 H) , 1 .51 (m, 2 H), 1 .38 (m, 4 H), 1.18(m, 1 H), 1. .04 (s, , 9 H) , 1 .01 (t, 3 H), 0 .79 (s, r 3 H) . LRMS (ESI) m/z 742 [ (M+H)+; calc. para C37H52N5O9S : 742] . EXEMPLO 16 (5R, 7S,10S)-10-terc butil-N-((IR,2R)-1- {[(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-etilciclopropil)-3,9,12-trioxo-l,6,7,9,10,11,12,14,15,16-deca-hidro-5H-2,22:5, 8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatriazacicloicosine-7-carboxamida (III-16)

A uma solução de (5R,7S,10S)-10-terc butil-3,9,12-trioxo-1,6,7,9,10,11,12,14,15,16-deca-hidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,ll-benzodioxatriazacicloicosine-7-carboxilato de metilo (EXEMPLO 4, etapa 1)(60 mg, 0,12 mmol) em THF (1 ml) e MeOH (0,5 ml) foi adicionado LiOH (1 N, 1,17 ml, 1,17 mmol). A mistura reaccional foi aquecida a 40 °C e agitada durante 1 h, altura em que se observou 0 consumo completo do material de partida éster metílico por LC-MS. A mistura foi então processada com HC1 0,5 N e EtOAc. A camada orgânica foi então seca sobre K2CO3 e o solvente foi 81 removido sob vácuo. 0 produto bruto foi tomado em DMF (1 ml) .

Adicionou-se à solução anterior cloreto de (IR,2R)-1-{[(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2- etilciclopropanamino (32 mg, 0,12 mmol), TBTU (48 mg, 0,15 mmol) e DIPEA (0,044 ml, 0,25 mmol) e a mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. A mistura reaccional foi purificada directamente por meio de HPLC de fase inversa para se obter (5R, 7S, 10S)10-terc butil-N-((IR,2R)-1-{[(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-etilciclopropil)-3,9,12-trioxo-l,6,7,9,10,11,12,14,15,16— dodeca-hidro-5H-2,22:5, 8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatriazacicloicosine-7-carboxamida (55 mg, 67% de rendimento). 1H NMR (500 MHz, ppm, CD3OD) δ 7.33 (d, 1 H) , 7.26 (t, 1 H), 7 .16 (d, 1 H) , 6. 39 (d , J= 15.7 Hz, 1 H), 6.13 (m, 1 H), 5 .37 (s, 1 H) , 4 . 69 (m , 4 H), 4 .47 - 4.28 (m, 4 H) , 3.89 (m , 1 H), 3. 83 (d, 1 H), 2.98 (m, 1 H) , 2.40 (m, 2 H) , 2.31 (m , i H) , 2 . 11 (t, 1 H), 1.99 (s, 1 H) , 1.73 (s, 1 H) , 1.60 (m, 2 H) , i ..52 (m, , 1 H) , 1.29 - 1.15 (m, 3 Η) , 1 .08 (s, 9 H), 0. 98 (t, 3 H) . LRMS (ESI) m/z 714 [(M+H)+; calc. para C35H48N509S: 714]. EXEMPLO 17 (5R,7S,10S)-10-terc butil-N-((IR,2R)-1- {[(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-etilciclopropil)-3,9,12-trioxo-6,7,9,10,11,12,14,15,16,17-deca-hidro-lH,5H-2,23:5,8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatriazaciclo-henicosine-7-carboxamida (I11-207) 82

Etapa 1: (5R,7S,10S)-10-terc butil-3,9,12-trioxo- 6,7,9,10,11,12,14,15,16,17-deca-hidro-lH,5H—2,23:5, 8 — dimetano-4,13,2,8,ll-benzodioxatriazaciclo-henicosine-7-carboxilato de metilo

(5R, 7S, 10S)-10-terc butil-3,9,12-trioxo- 6,7,9,10,11,12,14,15,16,17-deca-hidro-lH,5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,ll-benzodioxatriazaciclo-henicosine-7-carboxilato de metilo foi preparado de acordo com o procedimento utilizado para (5R,7S,10S)-10-terc butil-15,15-dimetil-3,9,12-trioxo-l,6,7,9,10,11,12,14,15,16-deca-hidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,11- benzodioxatriazacicloicosine-7-carboxilato de metilo (EXEMPLO 3, etapa 8) exceptuando a utilização de 3-metil-N-[(hex5-eniloxi)carbonil]-L-valina (preparado de acordo com o procedimento seguinte) em vez de N-{[ (2,2-dimetilpent-4-enil)oxi]carbonil}-3-metil-L-valina na etapa 7. LRMS (ESI) m/z 528 [(M+H)+; calc. para C28H38N3O7: 528].

Etapa 2: (5R, 7S,10S)-10-terc butil-N-((IR,2R)-1- {[(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-etilciclopropil)-3,9,12-trioxo-6,7,9,10,11,12,14,15,16,17-dodeca-hidro- 83 1Η,5H-2,23:5,8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatriazaciclo-henicosine-7-carboxamida 0 EXEMPLO 17 foi preparado de acordo com o procedimento utilizado no EXEMPLO 16 exceptuando a utilização de (5R,7S,10S)-10-terc

butil-3,9,12-trioxo- dimetano-4,13,2,8,ll-benzodioxatriazacicloicosine-7-carboxilato de metilo em vez de (5R,7S,10S)-10-terc butil-3,9,12-trioxo-l,6,7,9,10,11,12,14,15,16-deca-hidro-5H- 2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatriazacicloicosine-7-carboxilato de metilo (EXEMPLO 14, etapa 1) . NMR (500 MHz, ppm, CD3OD) δ 9.06 (s, 1 H), 7.27 (t, 1 H), 7.24 (d, 1 H), 7.18 (d, 1 H), 6.40 (d, J= 16.4 Hz, 1 H), 6.11 (m, 1H), 5.39 (t, 1 H), 4.80 (d, 1 H), 4.69 (m, 4 H), 4.42 (s, 1 H), 4.25 (d, 1 H), 3.97 (dd, 1 H), 3.79 (quin, 1 H), 2.98 (m, 1 H), 2.50 (q, 1 H), 2.78 (m, 2 H) , 2.15 (m, 1 H) , 1.77 - 1.54 (m, 8 H), 1.32 - 1.19 (m, 4 H) , 1.11 (m, 1 H) , 1.07 (s, 9 H), 0.98 (t, 3 H) . LRMS (ESI) m/z 728 [(M+H)+; calc. para C36H50N5O9S: 728] . EXEMPLO 18 (5R,7S,10S)-10-terc butil-N-((1R,2R)-1- {[ (ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-etilciclopropil)-15,15-dimetil-3,9,12-trioxo-6,7,9,10,11,12,14,15,16,17-deca-hidro-ΙΗ,5H-2,23:5,8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatriazaciclo-henicosine-7-carboxamida (III-208)

m-208 84

Etapa 1: (5R,7S,10S)-10-terc butil-15,15-dimetil-3,9,12- trioxo-6,7,9,10,11,12,14,15,16,17-deca-hidro-lH, 5H-2,23:5,8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatriazaciclo-henicosine-7-carboxilato de metilo

(5R,7S,10S)-10-terc butil-15,15-dimetil-3,9,12-trioxo- 6,7,9,10,11,12,14,15,16,17-deca-hidro-lH,5H-2,23:5,8— dimetano-4,13,2,8,ll-benzodioxatriazaciclo-henicosine-7-carboxilato de metilo foi preparado de acordo com o procedimento utilizado para (5R,7S,10S)-10-terc butil-15, 15-dimetil-3,9,12-trioxo-l,6,7,9,10,11,12,14,15,16-deca-hidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,11- benzodioxatriazacicloicosine-7-carboxilato de metilo (EXEMPLO 3, etapa 8) exceptuando a utilização de N—{[ (2,2 — dimetilhex-5-enil)oxi]carbonil}-3-metil-L-valina(preparado de acordo com o procedimento seguinte) em vez de N—{[ (2,2— dimetilpent-4-enil)oxi]carbonil}-3-metil-L-valina na etapa 7. LRMS (ESI) m/z 556 [(M+H)+; calc. para C30H42N3O7: 556]. Etapa 2: (5R,7S,10S)-10-terc butil-N-((IR,2R)-1- {[(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-etilciclopropil)-15,15-dimetil-3,9,12-trioxo-6, 7, 9,10,11,12,14,15,16,17-deca-hidro-lH, 5H-2,23:5,8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatriazaciclo-henicosine-7-carboxamida O EXEMPLO 18 foi preparado de acordo com o procedimento utilizado no EXEMPLO 16 exceptuando a utilização de (5R,7S,10S)-10-terc butil-15,15-dimetil-3,9,12-trioxo- 85 6, 7, 9,10,11,12,14,15,16,17-deca-hidro-lH,5H-2,23:5,8-dimetano-4,13,2,8,ll-benzodioxatriazaciclo-henicosine-7-carboxilato de metilo em vez de (5R,7S,10S)-10-terc butil-3,9,12-trioxo-l,6,7,9,10,11,12,14,15,16-deca-hidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatriazacicloicosine-7-carboxilato de metilo (EXEMPLO 14, etapa 1). 1H NMR (500 MHz, ppm, CD3OD) 5 10.05 (s, 1 H) , 7.24 (m, 2 H) , 7.17 (d, 1 H), 7.11 (d, 1 H), 6.61 (s, 1 H), 6.28 (d, J= 16.4 Hz, 1 H), 5.95 (m, 1 H), 5.58 (m, 1 H), 5.31 (s, 1 H), 4.71 (m, 2 H), 4.55 (m, 2 H) , 4.46 (d, 2 H), 4.29 (dd, 1 H), 4.17 (d, 1 H), 3.89 (d, 1 H) , 3.32 (d, 1 H), 2.92 (m, 1 H) , 2.59 (m, 1 H), 2.21-2.30 (m, 2 H) , 2.08 (m, 1 H) , 1.60-1.78 (m, 6 H), 1.22-1.31 (m, 5 H), 1.06 (s, 9 H), 1.04 (t, 3 H), 0.093 (t, 3 H), 0.87 (s, 3 H) . LRMS (ESI) m/z 756 [(M+H)+; calc. para C38H54N5O9S: 756].

Preparação de N-[(pent-4-eW-iloxi)carbonil]-1-norleucina:

A uma solução de l-penten-4-ol (0,95 g, 11,0 mmol) em DMF (15 ml) a 0 °C foi adicionado carbonildiimidazole (1,79 g, 11,0 mmol). A mistura reaccional foi aquecida à temperatura ambiente e agitada durante 30 min. Cloridrato do éster metilico 1-norleucina (2,0 g, 11,0 mmol) foi então adicionado, a mistura reaccional foi aquecida a 50 °C e agitada durante 15 min. Após arrefecimento, a mistura reaccional foi diluida com éter etílico e lavada duas vezes com água. As camadas orgânicas foram secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e depois concentradas. O produto bruto foi purificado por cromatografia em gel de sílica (eluição do gradiente 10 a 90 % de acetato de etilo em hexanos) para render 2,1 g (74 % de rendimento) de N- [ (pent-4-en-l- 86 iloxi)carbonil]-1-norleucinato de metilo sob a forma de um óleo transparente. A uam solução agitada de N-[(pent-4-en-l-iloxi)carbonil]-1-norleucinato de metilo (8,50g, 33,03 mmol) em THF (20 ml) adicionou-se NaOH IN (20 ml) . Esta solução de reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 3 h, depois foi acidificada a pH 3 com HC1 IN e extraída com (3 x 250 ml) de EtOAc. A camada de EtOAc combinada foi lavada com 50 ml de água, 50 ml de salmoura, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada para se obter 7,09 g (88 % de rendimento) do produto em epígrafe sob a forma de um óleo transparente. LRMS (ESI) m/z 244 [(M+H)+; calc. para C12H22N04: 244],

Preparação de 3-metil-N-[(pent-4-eniloxi)carbonil]-1-valina: H v

í^S^S^°v|f'NV^VOH 0

Uma solução de 4-pentenol (7,22 g, 83,8 mmol) e trifosgénio (11,3 g, 38,1 mmol) em dioxano (160 ml) foi arrefecida a 0 °C, seguido de adição gota a gota de DIPEA (9,85 g, 76,2 ml). A suspensão branca foi agitada vigorosamente durante 1 h a 25 °C, depois foi arrefecida a 0 °C. Foram adicionadas uma solução 1 N de NaOH (76,2 ml) e t-butilglicina (10,0 g, 76,2 mmol). A suspensão resultante foi aquecida a 25 °C e agitada durante 18 h. Aproximadamente metade do dioxano foi removida sob vácuo, a solução foi vertida em NaOH 1 N (100 ml) e lavada com diclorometano (3 x 150 ml) . A camada aquosa foi acidificada com HC1 6 N e o produto desejado foi extraído com diclorometano (3 x 150 ml) . Os compostos orgânicos combinados foram secos sobre MgS04 e concentrados para se obter 13,7 g (73,9 % de rendimento) de 3-metil-N- 87 [(pent-4-eniloxi)carbonil]-1-valina sob a forma de um óleo incolor. LRMS (ESI) m/z 244 [(M+H)+; calc. para C12H22NO4: 244] .

Preparação de N-[(hex-5-en-l-iloxi)carbonil]-1-norleucina:

N-[(hex-5-en-l-iloxi)carbonil]-1-norleucina foi preparado de acordo com o procedimento para N-[(pent-4-en-l-iloxi)carbonil]-1-norleucina, utilizando 5-hexenol em vez de 4-pentenol. LRMS (ESI) m/z 258 [(M+H)+; calc. para C13H24NO4: 258] .

Preparação de 3-metil-N-[(hex-5-eniloxi)carbonil]-1-valina: o

0 3- metil-N-[(hex-5-eniloxi)carbonil]-1-valina foi preparado de acordo com o procedimento para 3-metil-N-[(pent4-eniloxi)carbonil]-1-valina, utilizando 5-hexenol em vez de 4- pentenol. LRMS (ESI) m/z 258 [(M+H)+; calc. para C13H24NO4: 258] .

Preparação de N-[(hept-6-en-l-iloxi)carbonil]-1-norleucina: 0

N-[ (hept-6-en-l-iloxi)carbonil]-1-norleucina foi preparado de acordo com o procedimento para N-[ (pent-4-en-l-iloxi)carbonil]-1-norleucina, utilizando 6-heptenol em vez de 4-pentenol. LRMS (ESI) m/z 272 [(M+H)+; calc. para C14H26NO4: 272]. 88

Preparação de N-{[ (2,2-dimetilpent-4-enil)oxi]carbonil}-3-metil-l-valina:

Etapa 1: 2,2-dimetilpent-4-en-l-ol

Uma solução de ácido 2,2-dimetil-4-pentenóico (6,0 g, 46,8 mmol) em THF anidro foi arrefecida em banho de gelo a 0 °C. Um fluxo lento de hidreto de litio alumínio 1M em THF (56,2 ml, 56,2 mmol) foi adicionado e a reacção foi deixada aquecer a 25 °C. A mistura reaccional foi agitada durante 1 h antes de ser vertida para HC1 IN e éter dietílico. A camada orgânica foi separada, seca sobre MgS04 e concentrada para proporcionar 2,2-dimetilpent-4-en-l-ol sob a forma de um óleo transparente (4,7 g, 87,9 % de rendimento).

Etapa 2: N-{[(2,2-dimetilpent-4-enil)oxi]carbonil}-3-metil-1-valina

Adicionou-se DIPEA (2,48 g, 19,2 mmol) gota a gota a uma solução a 0 °C de 2,2-dimetilpent-4-en-l-ol (2,24 g, 19,6 mmol) e trifosgénio (2,56 g, 8,64 mmol) em 60 ml de dioxano. A suspensão branca resultante foi agitada durante 5 min a 0 °C, depois foi deixada aquecer a 25 °C ao longo de 1 h. A suspensão foi arrefecida a 0 °C com um banho de gelo, seguido de adição de NaOH IN (19,2 ml) e 1-terc butilglicina (2,52 g, 19,2 mmol). A mistura reaccional foi aquecida a 25 °C e agitada durante 72 h. O dioxano foi removido sob vácuo e a mistura reaccional foi tornada básica a pH 12 cp, NaOH 1 N. A camada aquosa foi extraída com diclorometano (3 x 150 ml) depois foi acidificada a 89 pH-1 com HC1 6 N. A camada aquosa foi extraída com diclorometano (3 x 150 ml) . Os compostos orgânicos combinados foram secos sobre MgS04 e concentrados para se obter N-{ [ (2,2-dimetilpent-4-enil)oxi]carbonil}-3-valina sob a forma de um pó branco (4,26 g, 827 % de rendimento). LRMS (ESI) m/z 272 [(M+H)+; calc. para Ci4Hz6N04: 272].

Preparação de N-{[(2,2-dimetilhex-5-enil)oxi]carbonil}-3-metil-l-valina:

Y^OH 0

Etapa 1: 2,2-dimetil-hex-5-enoato de etilo

OEt O A uma solução agitada de diisopropilamina (13,38 ml, 94,70 mmol) em THF anidro (50 ml) a -70 °C e sob azoto foi lentamente adicionado n-BuLi 2,5 M em éter (36,50 ml, 91,25 mmol). Agitada durante 15 minutos, a esta solução de reacção foi então adicionado gota a gota isobutirato de etilo (11,51 ml, 86, 09 mmol) em THF (50 ml), foi agitada durante 20 minutos antes de ser adicionada gota a gota 4-bromo-l-buteno (9,79 ml, 96,42 mmol) em HMPA (20 ml). A solução de reacção foi então agitada a -50 °C em 5 horas, atenuada com HC1 1M (10 ml) e água (100 ml), depois extraída com (3 x 125 ml) de éter. A camada de éter combinada foi lavada com água (4 x 70 ml), NaHCCh aquoso saturado (2 x 70 ml), seca sobre Na2S04, filtrada e concentrada. O produto bruto foi sujeito a cromatografia relâmpago em 120 g de gel de sílica 60, eluindo com 1-20 % EtOAc/hexano para se obter o produto em epígrafe sob a forma de um óleo transparente (11,01 g, 75 % de 90 rendimento). LRMS (ESI) m/z 171 [(M+H)+; calc. para C10H19O2: 171] .

Etapa 2: 2,2-dimetil-hex-5-en-l-ol

A uma solução agitada de LAH 1M em éter (142,14 ml, 142,14 mmol) a 0 °C e sob azoto, foi adicionado gota a gota 2,2-diemtil-hex-5-enoato de etilo (11,00 g, 64,61 mmol) dissolvido em 100 ml de éter anidro ao longo de 1 hora. A solução de reacção foi agitada a 22 °C durante 20 horas, depois foi atenuada com água (3 ml), NaOH 1M (11 ml) e água (9 ml) , seca sobre Na2S04, filtrada e concentrada para se obter o produto em epigrafe (7,22 g, 87,09 %). 1H NMR (500 MHz, CDCI3) δ 5.85-5.77 (m, 1 H) ; 5.01 (d, 1 H); 4.93 (d, 1 H); 3.33 (d, 2 H); 2.03 (m, 2 H); 1.34 (m, 2 H); 0.89 (m, 6 H) ppm.

Etapa 3: N-{[(2,2-dimetilhex-5-enil)oxi]carbonil}-3-metil-1-valina A uma solução agitada de 2,2-diemtil-hex-5-en-l-ol (10,75 g, 83,85 mmol) em 1,4-dioxano anidro (100 ml), a 0 °C e sob azoto, adicionou-se trifosgénio (13,69 g, 46,12 mmol) e depois DIPEA (14,61 ml, 83,85 mmol) cuidadosamente. Esta solução de reacção foi agitada a 22 °C durante 1 hora, arrefecida a 0 °C e foi adicionada lentamente a NaOH IN (83,85 ml, 83,85 mmol) e 1-terc-leucina (11,00 g, 83,85 mmol), depois foi agitada a 22 °C durante 20 horas. A solução de reacção foi tornada básica, a pH 10, com NaOH IN, lavada com CH2C12 (3 x 100 ml) , acidificada a pH 5 com HC1 IN e extraída com CH2C12 (3 x 150 ml) . A camada de CH2C12 combinada foi lavada com água (100 ml), seca sobre Na2S04, filtrada e concentrada para se obter o produto em epígrade (20,26 g, 84,66 %) . ΧΗ NMR (500 MHz, CDC13) δ 91 5.85-5.77 (m, 1 Η) ; 5.24 (d, 1 Η); 5.01 (d, 1 Η); 4.93 (d, 1 H); 4.20 (d, 1 H); 3.86 (d, 1 H); 3.79 (d, 1 H); 2.01 (m,

2 H); 1.36 (m, 2 H); 1.04 (s, 9 H); 0.92 (m, 6 H) ppm. LRMS (ESI) m/z 286 [(M+H)+; calc. para C15H28NO4: 286].

Preparação de cloreto de (1R,2R-1- {[(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-etilciclopropanaminio:

Uma mistura de cloreto de (IR, 2S)-1- {[(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2- vinilciclopropanaminio (Llinas-Brunet et al US03/15755 e Wang et al WO 03/099274) (0,05 g, 0,187 mmol) e paládio em carbono (10 % em peso, 0,01 g) em EtOAc (5 ml) foi agitada vigorosamente sob atmosfera de hidrogénio fornecido por um balão de hidrogénio durante 1 hora. A mistura reaccional foi filtrada e concentrada para se obter cloreto de (IR,2R)-l-{[(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-vinilciclopropanaminio (0,045 g, 89 % de rendimento). EXEMPLO 19 (5R,7S,10S)-10-terc butil-N-((IR,2S)-1- {[ (ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-vinilciclopropil)-15,15-dimetil-3,9,12-trioxo- 6,7,9,10,11,12,14,15,16,17,18,19-dodeca-hidro-lH,5H-2,23:5,8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatriazaciclo-henicosine-7-carboxamida (I11-210) 92

0 EXEMPLO 19 foi preparado a partir de ácido (5R,7S,10S)-10-terc butil-15,15-dimetil-3,9,12-trioxo- 6,7,9,10,11,12,14,15,16,17,18,19-dodeca-hidro-lH,5H-2,23:5, 8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatriazaciclo-henicosine-7-carboxílico (EXEMPLO 13 Preparação alternativa, etapa 4) utilizando o procedimento do EXEMPLO 3, etapa 10. 1H NMR (500 MHz, CD3OD, ppm) δ 7.25-7.09 (m, 3 H) , 5.82-5.74 (m, 1 H) , 5.35-5.29 (m, 2 H), 5.15-5.12 (m, 1 H), 4.75-4.59 (m, 3 H), 4.45-4.38 (m, 2 H), 4.21-4.12 (m, 1 H), 4.13-4.09 (m, 1 H), 3.95-3.92 (m, 1 H), 2.98-2.94 (m, 1 H) , 2.62-2.54 (m, 1 H) , 2.49-2.46 (m, 2 H), 2.25-2.21 (m, 1 H), 2.19-2.13 (m, 1 H), 1.90-1.88 (m, 1 H) , 1.52 (m, 2 H), 1.48 -1.45 (m, 1 H), 1. 40-1.18 (m, 6 H), 1.15-1.00 (m, 14 H) , and 0.81 (m, 4 H) . LRMS (ESI) m/z : 756, 4 [ (M+H) +; calc. para C38H53N5O9S: 755,9]. EXEMPLO 20 (5R, 7S, 10S, 18E) -10-ciclo-hexil-N- ( (IR, 2S) -1-{[(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-vinilciclopropil)-15,15-dimetil-3,9,12-trioxo-6,7,9,10,11,12,14,15,16,17-deca-hidro-lH,5H-2,23:5,8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioxatriazaciclo-henicosine-7-carboxamida (III-225) 93

EXEMPLO 20 foi preparado a partir dos procedimentos do EXEMPLO 13 Preparação alternativa, etapas 1, 2, 4 e 5 utilizando ácido (2S)-ciclo-hexil({[(2,2-dimetil-hex-5-en-1-il)oxi]carbonil}amino)acético na etapa 1 e cloreto de (IR,25)-l-{[(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-vinilciclo-propanaminio na etapa 5. 1H NMR (500 MHz, CD3OD, ppm) 57.26 (m, 1 H), 7.20 (t, J= 7.5 Hz, 1 H), 7.15 (d, J = 9.5 Hz, 1 H), 6.38 (d, J= 9.5 Hz, 1 H) , 5.99-6.02 (m, 1 H) , 5.74-5.80 (m, 1 H), 5.29-5.34 (m, 2 H), 5.11-5.14 (m, 1 H) , 4.79-4.81 (m, 2 H) , 4.64-4.72 (m, 3 H) , 4.56 (d, J= 11.5

Hz, 1 H) , 4.36-4.40 (m, 2 H) , 4.18 (d, J= 11.5 Hz, 1 H) , 4.10 (d, J= 5.5 Hz, 0.5 H), 3.91-3.94 (dd, J= 11.5, 3.5 Hz, 1 H), 3.34 (d, J= 11.0 Hz, 1 H), 2.95-2.97 (m, 1 H), 2.52-2.56 (m, 1 H), 2.16-2.35 (m, 5 H), 1.65-1.82 (m, 8 H), and 0.85-1.43 (m, 17 H) . LRMS (ESI) m/z 780,4 [(M+H)+; calc. para C40H53N5O9S: 780,9] . EXEMPLO 21 (5R, 7S, 10S) -10-ciclo/hexil-N- ( (IR, 2R) -1- {[(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-etilciclopropil)-15,15-dimetil-3,9,12-trioxo- 6,7,9,10,11,12,14,15,16,17,18,19-dodeca-hidro-lH,5H-2,23:5,8-dimetano-4,13,2,8,1-benzodioxatriazaciclo-henicosine-7-carboxamida (I11-226) 94 94

ΙΠ-226 0 EXEMPLO 21 foi preparado a partir do EXEMPLO 20, utilizando o procedimento descrito para o EXEMPLO 8. 1H NMR (500 MHz, CDCI3, ppm) δ 10.13 (s, 1 H) , 7.22 (t, J= 7.5 Hz, 1 H) , 7.10 (d, J= 7.5 Hz, 1 H) , 7.05 (d, J= 7.5 Hz, 1 H) , 6.73 (s, 1 H), 5.40 (d, J= 9.5 Hz, 1 H) , 5.36 (m, 1 H) , 4.67-4.76 (m, 2 H), 4.55 (d, J= 15.5 Hz, 1 H), 4.44 (d, J= 14.5 Hz, 1 H) , 4.41 (d, J= 11.0 Hz, 1 H) , 4.29-4.39 (m, 2 H), 4.16 (d, J= 11.0 Hz, 1 H), 3.82-3.85 (dd, J= 11,5, 3.5 Hz, 1 H), 3.25 (d, J= 11.0 Hz, 1 H), 2.95 (m, 1 H), 2.51-2.59 (m, 2 H), 2.36-2.44 (m, 2 H), 1.73-1.76 (m, 5 H), and 0.79 (br s, 2 H) . LRMS (ESI) m/z 784,4 [(M+H)+; calc. para C40H57N5O9S: 784, 4].

Preparação alternativa de cloridrato de (IR, 2R)-1-amino-N-(ciclopropilsulfonil)-2-etilciclopropanocarboxamida:

de ((IR, 2R) -

Etapa 1: Preparação de 1{ [(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-etilciclopropil)carbamato terc butilo:

Um recipiente de hidrogenação foi carregado com uma suspensão em metanol (1.000 ml) de ((IR,2 S) — 95 1{[(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-vinilciclopropil)carbamato de terc butilo (164 g, 0,50 mol) (Wang et al, US 6,995,174) e 5 % Ru/C (seco, 7,5 % p, 12,4 g) e coemçada a agitação. O recipiente foi colocado sob azoto (20 psig) e ventilado com pressão atmosférica três vezes para remover oxigénio residual. O recipiente foi colocado sob atmosfera de hidrogénio (50 psig). Passadas 20 horas, o recipiente foi ventilado com pressão atmosférica. A suspensão de reacção foi depois transferida para fora da reacção e filtrada através de solka flok (34 gramas, humidificado h/100 ml metanol) para se obter uma solução transparente, castanho claro. O solka flok foi enxaguado com metanol (200 ml x 2). As soluções de metanol combinadas foram concentradas sob pressão reduzida para se obter o produto bruto sob a forma de um sólido branco (153 g) . O produto bruto foi suspenso em acetato de etilo (800 ml), aquecido a 40 °C e envelhecido durante 30 minutos. A solução foi depois semeada, envelhecida durante 30 minutos e foi adicionado heptano (500 ml) através do funil de adição ao longo de 30 minutos. Foi recolhido o sólido parcialmente cristalizado à temperatura ambiente e envelhecido de um dia para o outro, após o que foi adicionado heptano (500 ml) . Após uma hora, foi adicionado mais heptano (250 ml) através do funil de adição e a suspensão branca foi envelhecida durante 1 hora. A solução foi filtrada e o sólido foi enxaguado com heptano/EtOAc (500 ml, 4:1) e seco sob pressão reduzida para se obter ((IR,2R)-1{[(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2-etilciclopropil)carbamato de terc butilo (125,9 g).

Etapa 2: Cloridrato de (IR,2R)-1-amino-N- (ciclopropilsulfonil)-2-etilciclopropanocarboxamida: 96

Uma solução do produto da etapa 1, anterior, (92 g, 0,28 mol) em DCM (1.200 ml) foi arrefecida a 0 °C e fez-se borbulhar HC1 através da solução durante 10 min, o banho de arrefecimento foi removido e a mistura de reacção foi agitada durante 2 h. Fez-se borbulhar azoto através da mistura reaccional durante 5 min e os compostos voláteis evaporaram. O residuo foi azeotropizado com DCM (x 3) para se obter um pó esbranquiçado (75 g). LRMS (M+H)-, Cale. = 233; encontrado 233.

Preparação de ácido (2S)-ciclo-hexil({[2,2-dimetilhex-5-en-1-il)oxi]carbonil}amino)acético:

ácido

O (2S)-ciclo-hexil({[2,2-dimetilhex-5-en-l- il)oxi]carbonil}amino)acético foi preparado de acordo com o procedimento de 3-metil-N-[ (pent-4-eniloxi)carbonil]-1-valina utilizando ácido (2 S)-amino(ciclohexil)acético e 2,2-dimetilhex-5-en-l-ol LRMS (ESI) m/z 312,3 [(M+H)+; calc. para C17H30N2O4: 312,2]. EXEMPLO 22

Análise da protease NS3 de HCV de fluorescência resolvida no tempo (TRF) A análise TRF da protease NS3 foi executada num volume final de 100 μΐ em tampão de análise contendo HEPES 50 mM, pH 7,5, NaCl 50 mM, 15 % de glicerol, 0,15 % de Triton X-100, DTT 10 mM e 0,1 % PEG 8000. A protease NS3 foi pré-incubada a várias concentrações de inibidores durante 10-30 minutos. O substrato de peptídeo para a análise é Ac-C(Eu)-DDMEE-Abu-[COO]-XSAK(QSY7)-NH2, sendo Eu um grupo marcado 97 com európio, Abu é um ácido 1-aminobutanóico que liga um éster a ácido 2-hidroxipropanóico (X). A hidrólise do peptideo por meio da actividade da protease NS3 provoca a separação do fluoroforo do quencher, resultando num aumento da fluorescência. A actividade da protease foi iniciada por meio da adição do substrato de peptideo TRF (concentração final 50-100 nM) . A reacção foi bloqueada após 1 hora à temperatura ambiente com 100 μΐ de 500 mM MES, pH 5,5. A fluorescência do produto foi detectada com um fluorímetro Victor V2 ou Fusion (Perkin Elmer Life and Analytical Sciiences) com excitação a 340 nm e emissão a 615 nm com atraso de 50-400 ps. As concentrações de ensaio de diferentes formas enzimáticas foram seleccionadas com um sinal para rácio de fundo de 10-30. As constantes de inibição foram derivadas utilizando um ajuste de quatro parâmetros.

Testou-se se os compostos nos exemplos 1-21 possuíam um valor Ki inferior a 100 nM (por exemplo inferior a 1 nM) na análise TRF da protease NS3, tal como anteriormente descrito. 98

REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO A presente listagem de referências citadas pela requerente é apresentada meramente por razões de conveniência para o leitor. Não faz parte da patente de invenção europeia. Embora se tenha tomado todo o cuidado durante a compilação das referências, não é possível excluir a existência de erros ou omissões, pelos quais o IEP não assume nenhuma responsabilidade.

Patentes de invenção citadas na descrição • US 20050020503 A [0004] • US 20040229818 A [0004] • US 200400229776 A [0004] • WO 03064455 A [0004] WO 0160379 A [0038] WO 9822496 A [0039] WO 9846630 A [0039] WO 9907733 A [0039] WO 9907734 A [0039] WO 9938888 A [0039] WO 9950230 A [0039] WO 9964442 A [0039] WO 0009543 A [0039] WO 0059929 A [0039] GB 2337262 A [0039] WO 0248116 A [0039] WO 0248172 A [0039] US 6323180 B [0039] [0062] WO 9741211 A [0040] WO 0100622 A [0040] WO 0025780 A [0040] US 3480613 A [0043] 99 • WO 0190121 A [0043] • WO 0192282 A [0043] • WO 0232920 A [0043] [0044] • WO 04002999 A [0043] • WO 04003000 A [0043] • WO 04002422 A [0043] • WO 0251425 A [0044] • WO 0179246 A [0044] • WO 0248165 A [0044] • WO 2005003147 A [0044] [0045] • WO 0168663 A [0044] • WO 9943691 A [0044] • WO 0218404 A [0044] • US 20050038240 A [0044] • WO 2006021341 A [0044] • US 20020019363 A [0044] • WO 02100415 A [0044] • WO 03026589 A [0044] • WO 03026675 A [0044] • WO 03093290 A [0044] • US 20030236216 A [0044] • US 20040006007 A [0044] • WO 04011478 A [0044] • WO 04013300 A [0044] • US 20040063658 A [0044] • WO 04028481 A [0044] • WO 02057287 A [0045] • US 6777395 B [0045] • WO 02057425 A [0045] • US 20040067901 A [0045] • WO 03068244 A [0045] • WO 2004000858 A [0045] • WO 04003138 A [0045] 100 • WO 2004007512 A [0045] • WO 0177091 A [0047] • WO 0147883 A [0047] • WO 0204425 A [0047] • WO 0206246 A [0047] • WO 0220497 A [0047] • WO 2005016927 A [0047] • WO 2004087714 A [0050] • WO 2005046712 A [0055] • WO 03062192 A, Catalano [0059] • WO 2003099274 A, Wang X.A. [0062] • US 20020107138 A, Hoveyda [0063] • US 0315755 A, Llinas-Brunet [0079] [0102] [0186] • WO 03099274 A, Wang [0079] [0102] [0186] • US 6995174 B, Wang [0195]

Literatura citada na descrição, para além das patentes de invenção • B. Dymock et al. Novel approaches to the treatment of hepatitis C vírus infection. Antiviral Chemistry & Chemotherapy, 2000, vol. 11, 79-96 [0003] • H. Rosen et al. Hepatitis C vírus: current understanding and prospects for future therapies. Molecular Medicine Today, 1999, vol. 5, 393-399 [0003] • D. Moradpour et al. Current and evolving therapies for hepatitis C. European J. Gastroenterol. Hepatol., 1999, vol. 11, 1189-1202 [0003] • R. Bartenschlager. Candidate Targets for Hepatitis C Virus-Specific Antiviral Therapy. Intervirology, 1997, vol. 40, 378-393 [0003] • G.M. Lauer ; B.D. Walker. Hepatitis C Vírus Infection. N. Engl. J. Med., 2001, vol. 345, 41-52 [0003] 101 • B.W. Dymock. Emerging therapies for hepatitis C vírus infection. Emerging Drugs, 2001, vol. 6, 13-42 [0003] • C. Crabb. Hard-Won Advances Spark Excitement about Hepatitis C. Science, 2001, 506-507 [0003] • Remington's Pharmaceutical Sciences. Mack Publishing Co, 1990 [0036] • A.C. Allison ; E.M. Eugui. Agents Action, 1993, vol. 44, 165 [0040] • J. Kirschbaum. Anal. Profiles Drug Subs., 1983, vol. 12, 1-36 [0041] • R. E. Harry-0'kuru et al. J. Org. Chem., 1997, vol. 62, 1754-1759 [0043] • M. S. Wolfe et al. Tetrahedron Lett., 1995, vol. 36, 7611-7614 [0043] • Protective Groups in Organic Chemistry. Plenum Press, 1973 [0054] • T.W. Greene ; P.G.M. Wuts. Protective Groups in Organic Synthesis. John Wiley & Sons, 1999 [0054] • Theodora W. Greene. Protective Groups in Organic Synthesis. John Wiley and Sons, 1999 [0060] [0061] • F: Miller et al. J. Am. Chem. Soc, 1996, vol. 118, 9606 [0063] • G: Kingsbury et al. J.Am. Chem. Soc, 1999, vol. 121, 791 [0063] • H: Scholl et al. Org. Lett., 1999, vol. 1, 953 [0063] • K: Furstner et al. J. Org. Chem, 1999, vol. 64, 8275 [0063] • Trnka; Grubbs. Acc. Chem. Res., 2001, vol. 34, 18 [0063]

Lisboa, 27/11/2009

Claims (16)

1 REIVINDICAÇÕES Composto da fórmula (I): Λ v\ 0 ·*yV )=0 O <!* HNv^ íL*5 R1 Ϊ em que: p e q são ambos 1 R1 é CONR1SO2R6; ou 3 seu R2 é alquilo Ci-C6 ou alcenilo C2-C6, sendo o alquilo alcenilo opcionalmente substituídos por 1 a halogéneos; R3 é alquilo Ci-C8 ou cicloalquilo C3-C5; R5 é H; R6 é cicloalquilo C3-C6; Y é C(=0); Z é 0; M é alquileno Ci-Ci2 ou alcenileno C2-Ci2 e cada R10 é independentemente H ou alquilo Ci-Cô; ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável. 1 Composto da reivindicação 1, em que o composto apresenta a fórmula IlI-a: ou um seu sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável.

3. Composto da reivindicação 2, em que R1 é C0NHS02R6; ou um seu sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável.

4. Composto da reivindicação 3, em que R6 é ciclopropilo; ou um seu sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável.

5. Composto da reivindicação 4, em que R2 é alquilo C1-C4 ou alcenilo C2-C4; ou um seu sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável.

6. Composto da reivindicação 5, em que R3 é cicloalquilo C5-C6 ou alquilo C1-C4; ou um seu sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável.

7. Composto da reivindicação 6, em que M é alquileno C6-Ci0 ou alcenileno C4-Ci0; ou um seu sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável.

8. Composto da reivindicação 1, em que o composto é seleccionado de entre os sequintes: 3

m-5 III-S

ra-i* V t '"-l 0 =P 1 o 'NHV^N. )=o °N^c ^ :¾ π o ΠΤ-12

4

m-57 m-58 ffl-63 5

ΠΙ-59 ΙΠ-60 ΠΙ-64

m-76 ffl-80 m-83 6

1ΪΙ-84

/ ~nhnAnÕ Ô 111-96 ~NH -•Τ'

~NH V" ^mJ-ò )=0 S /λΑ?^ 1° E5 Ό ra-93

ffl-113

0 ^ iAf 0

lil-116 IU-111

1U-H2

Λ 7 7 0-1-133 ΒΙ-132

/=ο ΫΗ, 9 va Q ° n^’!Í 'ο t ffl-136 o N';- H 0 ΠΜ37 ΙΠ-Π7

N o P o -NH " y ΓΛ

^=0 r V^„ ι*Α ^ g^nvXn\ 1 QS 0 m-i52 > Ύ^γΔ ΙΠ-153

’-Ν )=0 •Ύ^αν» O A & s't> ffl-138 /Λ o^NH^r) A >« Is H o ΠΓ-192

í /“ Y4-f»ο ΙΠ-1% r A

Q-^f α Oj^ °A T 0 Ό b Η O III-226

J ‘"N j o p a ΛO

OX 'ΓΊ κ I S Y V“^0° S . 0 J CH, V í \A CXj JU >1' }KC m-197 IB49S "VM° i ’C V^ot, CH* } CH, 3 ΠΜ99 r YW ox V, P00 y^s-π ío, T ‘yxjlivn^aJvK-, J CXaAA r AVYyA h fY fí s Y [ c s m>s V W^vV «Λ° S k^^v^-ΕγΝ·γΑ0 0 ^ I J CM, .A... w. ' 0U,ÁU J ΒΠ-202 γν CH- m~2oo CH,'* ni-201 Q~i ( 'Ύ' Γ Η T Íi ’ '*< Yo 0 ^ o 1 yr N, f I*. ff 'rA^ ff op tí / o pCH, , , \V > s'\ w> ‘n " t> ch3 m-2»4

v ΓΠ-203

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ou um seu sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável.

9. Composto III-205 de acordo com a reivindicação 8 ou um seu sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável. 9

10. Composição farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz de um composto de qualquer uma das reivindicações 1 a 9 ou um seu sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável e um veiculo farmaceuticamente aceitável.

11. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 10, caracterizada por compreender ainda um segundo agente terapêutico seleccionado do grupo constituído por um agente antiviral anti-HCV, um imunomodulador e um agente anti-infeccioso.

12. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 11, caracterizada por o agente antiviral anti-HCV é um antiviral seleccionado do grupo constituído por um inibidor da protease de HCV e um inibidor da polimerase NS5B de HCV.

13. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9 ou um seu sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável que se destinar a ser utilizado em terapêutica.

14. Utilização de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9 ou um seu sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável na preparação de um medicamento para a prevenção ou tratamento de infecção por HCV num sujeito necessitado deste.

15. Composto de acordo com a reivindicação 13, para utilização num método de prevenção ou tratamento de HCV. 10

16. Combinação de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9 ou um seu sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável e pelo menos um segundo agente terapêutico seleccionado de entre os agentes antivirais anti-HCV, imunomoduladores e agentes anti-infecciosos.

17. Combinação de acordo com a reivindicação 16, em que o agente antiviral é um inibidor da protease de HCV ou um inibidor da polimerase NS5B de HCV. Lisboa, 27/11/2009