RS51101B - Inhibitori hcv ns3 proteaze - Google Patents

Abstract

Jedinjenje formule (I):naznačeno time što:i p i q su 1;R1 je CONR10SO2R6;R2 je C1-C6 alkil ili C2-C6 alkenil, pri čemu je navedeni alkil ili alkenil izborno supstituisan sa 1 do 3 halo;R3 je C1-C8 alkil ili C3-C8 cikloalkil; R5 je H;R6 je C3-C6 cikloalkil;Y je C(=0);Z je O;M je C1-C12 alkilen ili C2-C12 alkenilen; isvako R10 je nezavisno H ili C1-C6 alkil; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili hidrat.Prijava sadrži još 16 patentnih zahteva.

Description

Predstavljeni pronalazak se odnosi na makrociklična jedinjenja koja su korisna kao inhibitori NS3 proteaze virusa hepatitisa C (HCV), na njihovu sintezu, i njihovu primenu za lečenje ili prevenciju HCV infekcije.

OSNOVA PRONALASKA

Infekcija virusom hepatitisa C (HCV) je glavni zdravstveni problem koji dovodi do hronične bolesti jetre, kao što je ciroza i hepatoćelijski karcinom, kod značajnog broja inficiranih osoba, što se procenjuje da predstavlja 2-15% svetske populacije. Procenjuje se da je samo u Sjedinjenim Američkim državama 3.9 miliona inficiranih ljudi, prema Centru za kontrolu bolesti SAD, što je približno pet puta više od broja ljudi inficiranih virusom humane imunodeficijencije (HIV). Prema Svetskoj zdravstvenoj organizaciji, širom sveta je inficirano više od 170 miliona osoba, sa najmanje 3 do 4 miliona ljudi inficiranih svake godine. Posle infekcije, kod oko 20% ljudi virus nestane, ali ostatak se bori sa HCV do kraja svog života. Deset do dvadeset procenata hronično inficiranih osoba konačno razvija cirozu ili kancer koji uništavaju jetru. Virusna bolest se prenosi parenteralno preko zaražene krvi i proizvoda krvi, zaraženih igala, polnim putem ili vertikalno sa inficiranih majki ili majki koje su nosioci virusa na njihovo potomstvo.

Trenutni tretmani za HCV infekciju, koji su ograničeni na imunoterapiju sa rekombinantnim interferonom-a pojedinačno ili u kombinaciji sa nukleozidnim analogom ribavirinom, su ograničene kliničke koristi. Pored toga, nema ustanovljene vakcine za HCV. Posledično, postoji hitna potreba za poboljšanim terapeutskim sredstvima koja se efikasno bore protiv hronične HCV infekcije. Trenutno stanje tehnike u lečenju HCV infekcije je razmatrano u sledećoj literaturi: B. Dvmock, et al., "Novel approaches to the treatment of hepatitis C virus infection," Antiviral Chemistrv & Chemotherapv, 11: 79-96 (2000); H. Rosen, et al., "Hepatitis C virus: current understanding and prospects for future therapies." Molecular Medicine Today, 5: 393-399 (1999); D. Moradpour, et al.. "Current and evolving therapies for hepatitis C," European J. Gastroenterol. Hepatol., 11: 1189-1202 (1999); R. Bartenschlager, "Candidate Targets for Hepatitis C Virus-Specific Antiviral Therapy." lntervirology, 40: 378-393 (1997); G.M. Lauer and B.D. Walker, "Hepatitis C Virus Infection," N. Engl. J. Med., 345: 41-52 (2001); B.W. Dvmock, "Emerging therapies for hepatitis C virus infection," Emerging Drugs, 6: 13-42 (2001); i C. Crabb, "Hard-Won Advances Spark Excitement about Hepatitis C," Science: 506-507 (2001).

Nekoliko enzima kodiranih od strane virusa su pretpostavljena ciljna mesta za terapeutsku intervenciju, uključujući metaloproteazu (NS2-3), serinsku proteazu (NS3), helikazu (NS3), i RNK-zavisnu RNK polimerazu (NSSB). NS3 proteaza se nalazi u N-terminalnom domenu NS3 proteina i smatra se prvim ciljnim mestom za lek s obzirom na to da je odgovoran za intramolekularno odvajanje na NS3/4A mestu i za nishodnu intermolekularnu obradu na spojevima NS4A/4B, NS4B/5A i NS5A/5B. Prethodno istraživanje je identifikovalo klase peptida, kao što su heksapeptidi kao i tripeptidi razmatrani u SAD patentnim prijavama US2005/0020503, US2004/0229818 i US2004/00229776, pokazujući stepene aktivnosti u inhibiciji NS3 proteaze. Međunarodna prijava WO 03/064455 pokazuje makrociklične peptide koji su korisni kao inhibitori HCV NS3 proteaze. Cilj predstavljenog pronalaska je obezbediti dodatna jedinjenja koja pokazuju aktivnost protiv HCV NS3 proteaze.

REZIME PRONALASKA

Predstavljeni pronalazak se odnosi na nova makrociklična jedinjenja formule (I) i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli ili hidrate. Ova jedinjenja su korisna u inhibiciji HCV (virus hepatitisa C) NS3 (ne-struktume 3) proteaze, prevenciji ili tečenju jednog ili više simptoma HCV infekcije, bilo kao jedinjenja, njihove farmaceutski prihvatljive soli ili hiđrati (kada je to odgovarajuće), ili kao sastojci farmaceutske kompozicije, bilo u kombinaciji ili ne sa drugim HCV antivirusnim sredstvima, anti-infektivnim sredstvima, imunomodulatorima, antibioticima ili vakcinama. Naročito, predstavljeni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I) i/ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili hidrat:

gde:

i p i q su 1;

R'jeCONR^SO.R<6>:

R2 je Ci-C6alkil ili C2-C6alkenil; gde je navedeni alkil ili alkenil izborno supstituisan sa 1 do 3 halo;

R3 je Ci-C8alkil ili C3-C8cikloalkil;

R5je H;

R6jeC3-C6 cikloalkil;

YjeC(=0);

ZjeO;

M je C|-C)2alkilen ili C1-C12alkenilen; i

svako R10 je nezavisno H ili Ci-C^, alkil.

Predstavljeni pronalazak takode obuhvata farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenje prema predstavljenom pronalasku i postupke za pripremu takvih farmaceutskih kompozicija. Predstavljeni pronalazak se dalje odnosi na postupke za lečenje ili prevenciju jednog ili više simptoma HCV infekcije.

Druge varijante, aspekti i karakteristike predstavljenog pronalaska su ili dalje opisani u, ili će biti jasni iz narednog opisa, primera i priloženih patentnih zahteva.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

Predstavljeni pronalazak obuhvata jedinjenja formule I iz prethodnog teksta, i njihove farmaceutski prihvatljive soli i/ili hidrate. Ova jedinjenja i njihove farmaceutski prihvatljive soli i/ili hidrati su inhibitori HCV proteaze (npr., inhibitori HCV NS3 proteaze). Predstavljeni pronalazak takođe obuhvata jedinjenja formulaH-aiIH-apri čemu su sve promenljive kao što su definisane za formulu I.

Prva varijanta predstavljenog pronalaska je jedinjenje formule I,Il-ailiIH-a,ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili hidrat, gde je R<1>jednako CONHSO2R<6>, i sve ostale promenljive su kao što su originalno definisane (tj., kao što je definisano u Rezimeu pronalaska). U prvom aspektu prve varijante, R<1>je CONHSO2R<6>gde je R<6>jednako C3-C5cikloalkil; i sve ostale promenljive su kao što su definisane u prvoj varijanti. U karakteristici prvog aspekta prve varijante, R<1>je CONHSOiR6 gde je R<6>jednako ciklopropil; i sve druge promenljive su kao što su definisane u prvoj varijanti.

Druga varijanta predstavljenog pronalaska je jedinjenje formule I,Il-ailiIH-a,ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili hidrat, gde je R2 jednako Ci-C6alkil ili C2-C6alkenil; i sve druge promenljive su kao što su originalno definisane u bilo kojoj od prethodnih varijanti. U prvom aspektu druge varijante, R~je C1-C4alkil ili C2-C4alkenil; i sve druge promenljive su kao što su originalno definisane ili kao što su definisane u bilo kojoj od prethodnih varijanti. U drugom aspektu druge varijante, R<2>je C2-C4alkenil; i sve druge promenljive su kao što su originalno definisane ili kao što su definisane u bilo kojoj od prethodnih varijanti. U karakteristici drugog aspekta druge varijante, R<2>je viml; i sve druge promenljive su kao što su definisane u trećoj varijanti ili kao što je definisano u bilo kojoj od prethodnih varijanti. U trećem aspektu druge varijante. R"je C1-C4alkil; i sve druge promenljive su kao što su originalno definisane ili kao što su definisane u bilo kojoj od prethodnih varijanti. U karakteristici trećeg aspekta treće varijante, R<2>je etil; i sve druge promenljive su kao što su definisane u trećoj varijanti ili kao što je definisano u bilo kojoj od prethodnih varijanti.

Treća varijanta predstavljenog pronalaska je jedinjenje formule I, Il-a ili IH-a, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili hidrat, gde je R<3>jednako Cs-Cscikloalkil ili C|-Cxalkil; i sve druge promenljive su kao što su originalno definisane ili kao što je definisano u bilo kojoj od prethodnih varijanti. U prvom aspektu treće varijante, R<J>je C5-C7cikloalkil ili Ci-Cg alkil; i sve druge promenljive su kao što su definisane u trećoj varijanti ili kao što su definisane u bilo kom od prethodnih patentnih zahteva. U drugom aspektu treće varijante, R' je C5-C6cikloalkil ili Cj-Csalkil; i sve druge promenljive su kao što su definisane u trećoj varijanti ili kao što su definisane u bilo kom od prethodnih patentnih zahteva. U trećem aspektu treće varijante, R<3>je propil ili butil; i sve druge promenljive su kao što su definisane u trećoj varijanti ili kao što su definisane u bilo kojoj od prethodnih varijanti. U karakteristici trećeg aspekta treće varijante, R<J>je i-propil, n-butil ili t-butil; i sve druge promenljive su kao što su definisane u trećoj varijanti ili kao što su definisane u bilo kojoj od prethodnih varijanti. U četvrtom aspektu treće varijante, R<J>je ciklopentil ili cikloheksil; i sve druge promenljive su kao što su definisane u trećoj varijanti ili kao što su definisani u bilo kojoj od prethodnih varijanti.

Četvrta varijanta predstavljenog pronalaska je jedinjenje formule I, Il-a ili IH-a, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili hidrat, gde je M jednako C1-C10alkilen ili C1-C10alkenilen (uključujući pravolančani ili sa granatim lancem alkilen ili alkenilen); i sve druge promenljive su kao što su originalno definisane ili kao što su definisane u bilo kojoj od prethodnih varijanti. U prvom aspektu četvrte varijante, M je Ci-Csalkilen ili Ci-C«alkenilen (uključujući pravolančani i sa granatim lancem alkilen ili alkenilen); i sve druge promenljive su kao što su originalno definisane ili kao što su definisane u bilo kom od prethodnih patentnih zahteva. U drugom aspektu četvrte varijante, M je C4alkilen ili C4alkenilen (uključujući pravolančani i sa granatim lancem alkilen ili alkenilen); i sve druge promenljive su kao što su definisane u četvrtoj varijanti ili kao što su definisane u bilo kojoj od prethodnih varijanti. U trećem aspektu četvrte varijante, M je Cs alkilen ili C5alkenilen (uključujući pravolačani i sa granatim lancem alkilen ili alkenilen); i sve druge promenljive su kao što su definisane u četvrtoj varijanti ili kao što su definisane u bilo kojoj od prethodnih varijanti. U četvrtom aspektu četvrte varijante, M je C6 alkilen ili C(, alkenilen (uključujući pravolančani i sa granatim lancem alkilen ili alkenilen); i sve druge promenljive su kao što su definisane u

četvrtoj varijanti ili kao što su definisane u bilo kojoj od prethodnih varijanti. U petom aspektu četvrte varijante, M je C7alkilen ili C7alkenilen (uključujući pravolančani i sa granatim lancem alkilen ili alkenilen); i sve druge promenljive su kao što su definisane u četvrtoj varijanti ili kao što su definisane u bilo kojoj od prethodnih varijanti. U šestom aspektu četvrte varijante, M je Q alkilen ili Cg alkenilen (uključujući pravolančani ili sa granatim lancem alkilen ili alkenilen); i sve druge promenljive su kao što su definisane u četvrtoj varijanti ili kao što su definisane u bilo kojoj od prethodnih varijanti. U sedmom aspektu četvrte varijante, M je C9alkilen ili C9alkenilen (uključujući pravolinijski i sa granatim lancem alkilen ili alkenilen); i sve druge promenljive su kao što su definisane u četvrtoj varijanti ili kao što su definisane u bilo kojoj od prethodnih varijanti. U osmom aspektu četvrte varijante, M je Cioalkilen ili Cioalkenilen (uključujući pravolančani i sa granatim lancem alkilen ili alkenilen); i sve druge promenljive su kao što su definisane u četvrtoj varijanti ili kao što su definisane u bilo kom od prethodnih patentnih zahteva. U devetom aspektu četvrte varijante. M je izabran od sledećih; i sve druge promenljive su kao što su definisane u četvrtoj varijanti ili kao što su definisane u bilo kojoj od prethodnih varijanti.

Peta varijanta predstavljenog pronalaska je jedinjenje, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili hidrat, izabrano iz grupe koju čine sledeća jedinjenja.

Druge varijante predstavljenog pronalaska odnose se na sledeće:

(a) Farmaceutska kompozicija koja sadrži efikasnu količinu jedinjenja formule I, Il-a ili IH-a i farmaceutski prihvatljiv nosač. (b) Farmaceutska kompozicija prema (a), koja dalje sadrži drugo terapeutsko sredstvo izabrano iz grupe koju čine HCV antivirusno sredstvo, imunomodulator i anti-infektivno sredstvo. (c) Farmaceutska kompozicija prema (b), gde je HCV antivirusno sredstvo - antivirusno sredstvo izabrano iz grupe koju čine inhibitor HCV proteaze i inhibitor HCV NS5B polimeraze. (d) Farmaceutska kombinacija koja je (i) jedinjenje formuleI, Il-ailiIH-ai (ii) drugo terapeutsko sredstvo izabrano iz grupe koju čine HCV antivirusno sredstvo, imunomodulator i anti-infektivno sredstvo; pri čemu se i jedinjenje formuleI, Il-ailiIH-ai drugo terapeutsko sredstvo koriste u količini koja čini kombinaciju efikasnom za inhibiciju HCV NS3 proteaze, ili za lečenje ili prevenciju HCV infekcije. (e) Kombinacija prema (d), pri čemu je HCV antivirusno sredstvo - antivirusno sredstvo izabrano iz grupe koju čine inhibitor HCV proteaze i inhibitor HCV NS5B polimeraze. (f) Postupak za inhibiciju HCV NS3 proteaze kod subjekta kod koga postoji potreba za tim, koji sadrži primenu na subjekta efikasne količine jedinjenja formuleI,Il-a iliIH-a.(g) Postupak za prevenciju ili lečenje HCV infekcije kod subjekta kod koga postoji potreba za tim, koji sadrži primenu na subjekta efikasne količine jedinjenja formuleI, Il-aili Hl-a. (h) Postupak prema (g), u kome se jedinjenje formuleI, Il-ailiIH-aprimenjuje u kombinaciji sa efikasnom količinom najmanje jednog drugog terapeutskog sredstva izabranog iz grupe koju čine HCV antivirusno sredstvo, imunomodulator i anti-infektivno sredstvo. (i) Postupak prema (h), gde je HCV antivirusno sredstvo - antivirusno sredstvo izabrano iz grupe koju čine inhibitor HCV proteaze i inhibitor HCV NS5B polimeraze.

(j) Postupak za inhibiciju HCV NS3 proteaze kod subjekta kod koga postoji potreba za tim, koji sadrži primenu na subjekta farmaceutske kompozicije prema (a), (b) ili (c) ili kombinacije prema (d) ili (e).

(k) Postupak za prevenciju ili lečenje HCV infekcije kod subjekta kod koga postoji potreba za tim, koji sadrži primenu na subjekta farmaceutske kompozicije prema (a), (b) ili (c) ili kombinacije prema (d) ili (e).

Predstavljeni pronalazak takođe obuhvata jedinjenje prema predstavljenom pronalasku (i) za primenu u, (i i) za primenu kao leka za, ili (iii) za primenu u pripremi leka za: (a) inhibiciju HCV NS3 proteaze, ili (b) prevenciju ili lečenje HCV infekcije. Kod ovih primena, jedinjenja prema predstavljenom pronalasku mogu se izborno koristiti u kombinaciji sa jednim ili više drugih terapeutskih sredstava izabranih od HCV antivirusnih sredstava, anti-infektivnih sredstava i imunomodulatora.

Dodatne varijante prema pronalasku se odnose na farmaceutske kompozicije, kombinacije i postupke navedene pod (a)-(k) u prethodnom tekstu i primene navedene u prethodnom pasusu, gde je jedinjenje prema predstavljenom pronalasku koje je ovde korišćeno jedinjenje jedne od varijanti, aspekata, klasa, pod-klasa, ili karakteristika jedinjenja opisanih u prethodnom tekstu. U svim ovim varijantama, jedinjenje se izborno može koristiti u obliku farmaceutski prihvatljive soli ili hidrata kako je odgovarajuće.

Kao što je ovde korišćen, termin "alkil" označava svaku pravolančanu ili sa granatim lancem alkil grupu koja ima broj ugljenikovih atoma u naznačenom opsegu. Na taj način, na primer, "CV6 alkil" (ili" C\- C(,alkil") označava sve heksil alkil i pentil alkil izomere kao i n-, izo-, sek- i t-butil, n- i izopropil, etil i metil. Kao sledeći primer, "Cm alkil" označava n-, izo-, sek- i t-butil, n- i izopropil, etil i metil.

Termin "haloalkil" označava alkil grupu u kojoj je atom vodonika zamenjen sa halogenom. Termin "alkoksi" označava "alkil-O" grupu.

Termin "alkilen" označava svaku pravolačanu ili sa granatim lancem alkilen grupu koja ima broj ugljenikovih atoma u naznačenom opsegu. Na taj način, na primer, "-Cu, alkilen-" označava svaki od Ctdo C6 pravolančanih ili granatih alkilena. Klasa alkilena od posebnog značaja u vezi sa pronalaskom je -(CH2)i-6-, i pod-klase od naročitog značaja obuhvataju -(CH2)m- -(CH/Oio-, -(CI12)1-2- i -CH2-. Takođe je od značaja alkilen -CII(CH3)-.

Termin "alkenilen" označava svaki pravolančani ili granati lanac dvovalentne alkenilen grupe koji ima broj ugljenikovih atoma u naznačenom opsegu.

Termin "cikloalkil" označava svaki ciklični prsten alkana ili alkena koji ima broj ugljenikovih atoma u naznačenom opsegu. Na taj način, na primer. "C3.8cikloalkil" (ili "C3-C8cikloalkil") označava ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil i ciklooktil. Termin "cikloalkoksi" označava "cikloalkil-O-" grupu.

Termin "halogen" (ili "halo") označava fluor, hlor, brom i jod (alternativno označen kao fluoro, hloro, bromo i jodo).

Osim ukoliko nije izričito naznačeno suprotno, uključeni su svi opsezi navedeni ovde. Na primer. heteroaril prsten opisan tako da sadrži od "1 do 3 heteroatoma" označava da prsten može da sadrži 1, 2 ili 3 heteroatoma. Takođe je potrebno razumeti da svaki opseg koji je ovde citiran obuhvata unutar svog obima sve pod-opsege unutar tog opsega. Oksidovani oblici heteroatoma N i S su takođe uključeni unutar obima predstavljenog pronalaska.

Kada se bilo koja promenljiva (npr.. R<10>) javlja više od jednog puta u bilo kom sastavnom delu ili u formuliI,Il-a ili III-a, ili u bilo kojoj drugoj formuli koja prikazuje i opisuje jedinjenja prema pronalasku, njena definicija u svakom slučaju je nezavisna od njene definicije u svakom drugom slučaju. Takođe, kombinacije supstituenata i/ili promenljivih su dozvoljene samo ukoliko takve kombinacije imaju kao rezultat stabilna jedinjenja.

Osim ukoliko nije izričito naznačeno suprotno, supstitucija sa naznačenim supstituentom je dozvoljena na bilo kom atomu u prstenu (npr., aril, heteroaromatičan prsten ili zasićeni heterociklični prsten) uz uslov daje takva supstitucija prstena hemijski dozvoljena i ima za rezultat stabilno jedinjenje. "Stabilno" jedinjenje je jedinjenje koje može biti pripremljeno i izolovano i čija struktura i osobine ostaju ili mogu biti uzrokovane da ostanu uglavnom nepromenjene tokom vremenskog perioda koji je dovoljan da bi se omogućila primena jedinjenja za svrhe koje su ovde opisane (npr., terapeutska ili profilaktička primena na subjekta).

Kao rezultat izbora supstituenata i obrazaca supstituenta, određena jedinjenja od onih prema predstavljenom pronalasku mogu imati asimetrične centre i mogu se javiti kao smeše stereoizomera, ili kao pojedinačni diastereomeri ili enantiomeri. Svi izomerni oblici ovih jedinjenja, bilo izolovani ili u smešama, su unutar obima predstavljenog pronalaska.

Kao što bi moglo biti jasno stručnjaku iz date oblasti tehnike, određena jedinjenja od onih prema predstavljenom pronalasku mogu da postoje kao tautomeri. Za svrhe predstavljenog pronalaska pozivanje na jedinjenje formule I, Ii-a ili IH-a je pozivanje na jedinjenjeper se,ili na bilo koji od njegovih tautomeraper se,ili na smeše dva ili više tautomera.

Jedinjenja prema predstavljenom pronalasku su korisna u inhibiciji HCV proteaze (npr., HCV NS3 proteaze) i pevenciji ili lečenju HCV infekcije. Na primer, jedinjenja prema ovom pronalasku su korisna u lečenju HCV infekcije pošto postoji sumnja prošlog izlaganja HCV virusu preko na primer transfuzije krvi, razmene telesnih tečnosti, ugriza, slučajnih uboda iglom ili izlaganja krvi pacijenta u toku operacije.

Jedinjenja prema ovom pronalasku su korisna u pripremi i izvođenju skrining testova za antivirusna jedinjenja. Na primer, jedinjenja prema ovom pronalasku su korisna za izolaciju mutanata enzima, koji su odlično sredstvo za skrining za jača antivirusna jedinjenja. Pored toga, jedinjenja prema ovom pronalasku su korisna u uspostavljanju ili određivanju mesta vezivanja drugih antivirusnih sredstava za HCV proteazu, npr., kompetitivnom inhibicijom. Na taj način, jedinjenja prema ovom pronalasku su komercijalni proizvodi koji će se prodavati za ove namene.

Jedinjenja prema predstavljenom pronalasku mogu se primenjivati u obliku farmaceutski prihvatljivih soli. Termin "farmaceutski prihvatljiva so" označava so koja poseduje efikasnost matičnog jedinjenja i koja nije biološki ili na drugi način nepoželjna

(npr., nije toksična, niti na drugi način štetna za primaoca). Pogodne soli obuhvataju kisele adicione soli koje mogu, na primer, biti formirane mešanjem rastvora jedinjenja prema predstavljenom pronalasku sa rastvorom farmaceutski prihvatljive kiseline kao što je hlorovodonična kiselina, sumporna kiselina, sirćetna kiselina, trifluorosirćetna kiselina ili benzoeva kiselina. Mnoga od ovih jedinjenja prema pronalasku nose kiselu grupu, u kom slučaju njihove pogodne farmaceutski prihvatljive soli mogu da obuhvataju soli alkalnih metala (npr., soli natrijuma ili kalijuma), soli zcmnoalkalnih metala (npr.. soli kalcijuma ili magnezij uma), i soli formirane sa pogodnim organskim ligandima kao što su kvaternarne amonijum soli. Takođe, u slučaju da je prisutna kisela (-COOH) ili alkoholna grupa, farmaceutski prihvatljivi estri mogu biti korišćeni za modifikaciju karakteristika rastvorljivosti ili hidrolize jedinjenja.

Termin "primena" i njegove varijante (npr., "primena" jedinjenja) u vezi sa jedinjenjem prema pronalasku, označava obezbeđivanje jedinjenja ili proleka jedinjenja osobi kod koje postoji potreba za tretmanom. Kada je jedinjenje prema pronalasku ili njegov prolek obezbeđeno u kombinaciji sa jednim ili više drugih aktivnih sredstava (npr., antivirusnih sredstava korisnih za lečenje HCV infekcije), "primena" i njene varijante razumeju se tako da svaka od njih obuhvata istovremeno i uzastopno obezbeđenje jedinjenja ili soli (ili hidrata) i drugih sredstava.

Kao što je ovde korišćen, termin "kompozicija" određenje tako da obuhvata proizvod koji sadrži naznačene sastojke, kao i bilo koji proizvod koji nastaje, direktno ili indirektno, kombinovanjem naznačenih sastojaka.

"Farmaceutski prihvatljiv" označava da sastojci farmaceutske kompozicije moraju biti međusobno kompatibilni i ne štetni za primaoca.

Termin "subjekat" (alternativno ovde označen kao "pacijent") kao što je ovde korišćen označava životinju, poželjno sisara, najpoželjnije čoveka, koji je bio podvrgnut tretmanu, posmatranju ili eksperimentu.

Termin "efikasna količina" kao što je ovde korišćena označava onu količinu aktivnog jedinjenja ili farmaceutskog sredstva koja izaziva biološki ili medicinski odgovor u tkivu, sistemu, životinji ili čoveku koji je tražen od strane istraživača, veterinara, medicinskog doktora ili drugog lekara. U jednoj varijanti, efikasna količina je "terapeutski efikasna količina" za ublažavanje simptoma bolesti ili stanja koje se leci. U sledećoj varijanti, efikasna količina je "profilaktički efikasna količina" za profilaksu simptoma bolesti ili stanja koje se sprečava. Termin takođe ovde obuhvata količinu aktivnog jedinjenja dovoljnu za inhibiciju HCV NS3 proteaze i time izazivanje odgovora koji je tražen (tj., "količina efikasna za inhibiciju"). Kada se aktivno jedinjenje (tj., aktivni sastojak) primenjuje kao so, pozivanje na količinu aktivnog sastojka odnosi se na oblik jedinjenja kao slobodnu kiselinu ili slobodnu bazu.

Za svrhu inhibicije HCV NS3 proteaze i prevencije ili lečenja HCV infekcije, jedinjenja prema predstavljenom pronalasku, izborno u obliku soli ili hidrata, mogu se primenjivati pomoću bilo kojih sredstava koja proizvode kontakt aktivnog sredstva sa mcstom delovanja sredstva. Ona se mogu primenjivati pomoću bilo kojih uobičajenih sredstava dostupnih za primenu zajedno sa farmaceutskim sredstvima, bilo kao pojedinačna terapeutska sredstva ili u kombinaciji terapeutskih sredstava. Ona se mogu primenjivati pojedinačno, ali se tipično primenjuju sa farmaceutskim nosačem koji je izabran na osnovu izabranog načina primene i standardne farmaceutske prakse. Jedinjenja prema pronalasku se mogu, na primer, primenjivati oralno, parenteralno (uključujući tehnike subkutane injekcije, intravenozne, intramuskularne, intrastemalne injekcije ili infuzije), pomoću spreja za inhalaciju, ili rektalno, u obliku jedinice doze farmaceutske kompozicije koja sadrži efikasnu količinu jedinjenja i uobičajene ne-toksične farmaceutski prihvatljive nosače, adjuvante i prenosioce. Tečni preparati pogodni za oralnu primenu (npr., suspenzije, sirupi, eliksiri i slično) mogu se primenjivati prema tehnikama poznatim u stanju tehnike i mogu da koriste bilo koji od uobučajenih medijuma kao što su voda, glikoli. ulja, alkoholi i slično. Čvrsti preparati pogodni za oralnu primenu (npr., praškovi, pilule, kapsule i tablete) mogu biti pripremljeni prema tehnikama koje su poznate u stanju tehnike i mogu da koriste takve čvrste inertne punioce kao što su škrobovi, šećeri, kaolin, lubrikanti. vezujuća sredstva, sredstva za raspadanje i slično. Parenteralne kompozicije mogu biti pripremljene prema tehnikama koje su poznate u stanju tehnike i tipično koriste sterilnu vodu kao nosač i izborno druge sastojke, kao što je sredstvo koje povećava rastvorljivost. Injektabilni rastvori mogu biti pripremljeni prema postupcima koji su poznati u stanju tehnike, pri čemu nosač sadrži fiziološki rastvor, rastvor glukoze ili rastvor koji sadrži smešu fiziološkog rastvora i glukoze. Dodatni opis postupaka pogodnih za primenu u pripremi farmaceutskih kompozicija prema predstavljenom pronalasku i sastojaka pogodnih za primenu u navedenim kompozicijama dat je u Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, edited by A. R. Gennaro, Mack Publishing Co., 1990.

Jedinjenja prema ovom pronalasku mogu se primenjivati oralno u opsegu doza od 0.001 do 1000 mg/kg telesne težine sisara (npr.. čoveka) na dan u jednoj dozi ili u podeljenim dozama. Jedan poželjan opseg doza je 0.01 do 500 mg/kg telesne težine na dan u jednoj dozi ili u podeljenim dozama. Sledeći poželjan opseg doza je 0.1 do 100 mg/kg telesne težine na dan oralno u jednoj dozi ili u podeljenim dozama. Za oralnu primenu, kompozicije mogu biti date u obliku tableta ili kapsula koje sadrže 1.0 do 500 miligrama aktivnog sastojka, naročito 1, 5, 10, 15, 20, 25, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300. 400 i 500 miligrama aktivnog sastojka za simptomatsko podešavanje doze prema pacijentu koji se leči. Specifičan nivo doze i učestalost doziranja za svakog određenog pacijenta mogu se varirati i zavisiće od različitih faktora uključujući aktivnost specifičnog korišćenog jedinjenja, metaboličku stabilnost i dužinu delovanja tog jedinjenja, starost, telesnu težinu, opšte zdravstveno stanje, pol, ishranu, način i vreme primene, stopu izlučivanja, kombinaciju lekova. težinu određenog stanja i domaćina koji se podvrgava terapiji.

Kao što je navedeno u prethodnom tekstu, predstavljeni pronalazak se takođe odnosi na postupak za inhibiciju HCV NS3 proteaze. inhibiciju HCV replikacije. ili prevenciju ili lečenje HCV infekcije sa jedinjenjem prema predstavljenom pronalasku u kombinaciji sa jednim ili više terapeutskih sredstava i farmaceutskom kompozicijom koja sadrži jedinjenje prema predstavljenom pronalasku i jedno ili više terapeutskih sredstava izabranih iz grupe koju čine HCV antivirusno sredstvo, imunomodulator i anti-infektivno sredstvo. Takva terapeutska sredstva koja su aktivna protiv HCV obuhvataju, ali bez ograničenja na, ribavirin, levovirin, viramidin, timozin alfa-1, R7025 (pojačani interferon (Roche)), interferon-P, interferon-a, pegilovani interferon-a (peginterferon-a), kombinaciju interferona-a i ribavirina, kombinaciju peginterferona-a i ribavirina, kombinaciju interferona-a i levovirina, i kombinaciju pcginterferona-a i levovirina. Interferon-a obuhvata, ali bez ograničenja na, rekombinantni interferon-a2a (kao što je Roferon interferon dostupan iz Hoffmann-LaRoche, Nutlev, NJ), pegilovani interferon-ct2a (Pegasys '), interferon-a2b (kao što je Intron-A interferon dostupan iz Schering Corp., Kenilvvorth, NJ), pegilovani interferon-o2b (Peglntron™), rekombinantni konsenzus interferon (kao što je interferon alfakon-1), albuferon (interferon-a vezan za humani serum albumin (Human Genome Sciences)) i prečišćeni interferon-a proizvod. Amgen-ov rekombinantni konsenzus interferon ima zaštićeno ime Infergen®. Levovirin je L-enantiomer ribavirina koji je pokazao imunomodulatornu aktivnost sličnu ribavirinu. Viramidin predstavlja analog ribavirina naveden u WO 01/60379 (dođeljen ICN Pharmaceuticals). U skladu sa postupkom predstavljenog pronalaska, pojedinačne komponente kombinacije se mogu primenjivati odvojeno u različito vreme tokom terapije ili istovremeno u podeljenim ili pojedinačnim oblicima kombinacije.

Za lečenje HCV infekcije, jedinjenja prema predstavljenom pronalasku mogu se takođe primenjivati u kombinaciji sa sredstvom koje je inhibitor HCV NS3 serin proteaze. HCV NS3 serin proteazaje esencijalni virusni enzim i opisan je kao odlično ciljno mesto za inhibiciju HCV replikacije. Inhibitori HCV NS3 proteaze na bazi supstrata i oni koji nisu na bazi supstrata navedeni su u WO 98/22496, WO 98/46630, WO 99/07733, WO 99/07734. WO 99/38888, WO 99/50230, WO 99/64442, WO 00/09543. WO 00/59929, GB-2337262, WO 02/48116, WO 02/48172 i U.S. Patent br. 6.323,180.

Ribavirin, levovirin i viramidin mogu da ispoljavaju svoje anti-HCV efekte modulacijom unutarćelijskih rezervi guaninskih nukleotida preko inhibicije unutarćelijskog enzima inozin monofosfat dehidrogenaze (IMPDH). IMPDH je enzim koji ograničava stopu biosintetičkog puta ude novobiosintezi guaninskog nukleotida. Ribavirin se lako fosforiliše unutarćelijski i monofosfatni derivat je inhibitor IMPDH. Na taj način, inhibicija IMPDH predstavlja sledeće korisno ciljno mesto za otkriće inhibitora HCV replikacije. Prema tome, jedinjenja prema predstavljenom pronalasku takođe se mogu primenjivati u kombinaciji sa inhibitorom IMPDH, kao stoje VX-497, koji je naveden u WO 97/41211 i WO 01/00622 (dodeljen Vertex-u); sledeći inhibitor IMPDH, kao što je onaj naveden u WO 00/25780 (dodeljen Bristol-Myers Squibb); ili mikofenolat mofetil [videti A.C. Allison and E.M. Eugui, Agents Action, 44 (Suppl.): 165 (1993)].

Za lečenje HCV infekcije, jedinjenja prema predstavljenom pronalasku takođe se mogu primenjivati u kombinaciji sa antivirusnim sredstvom amantadinom (1-aminoadamantanom) [za detaljan opis ovog sredstva, videti J. Kirschbaum, Anal. Profiles Drug Subs. 12: 1-36 (1983)].

Za lečenje HCV infekcije, jedinjenja prema predstavljenom pronalasku se takođe mogu primenjivati u kombinaciji sa antivirusnim sredstvom inhibitorom R7128 (Roche) polimeraze.

Jedinjenja prema predstavljenom pronalasku takođe mogu biti kombinovana za lečenje HCV infekcije sa antivirusnim 2'-C-granatim ribonukleozidima navedenim u R. E. Harry-0'kuru, et al., J. Org. Chem., 62: 1754-1759 (1997); M. S. Wolfe, et al., Tetraheđron Letu 36: 7611-7614 (1995); U.S. Paten No. 3,480,613 (Nov. 25, 1969); međunarodni broj objave WO 01/90121 (29.11.2001.); međunarodni broj objave WO 01/92282 (6.12.2001.); i međunarodni broj objave WO 02/32920 (25.04.2002.); i međunarodni broj objave WO 04/002999 (8.01.2004.); i međunarodni broj objave WO 04/003000 (8.01.2004.); i međunarodni broj objave WO 04/002422 (8.01.2004.). Takvi 2'-ć'-granati ribonukleozidi obuhvataju, ali bez ograničenja na, 2'-C-metiI-citidin, 2'-C-metil-uridin, 2'-C-metil-adenozin. 2'-C-metil-guanozin, i 9-(2-C-metil-p-D-ribofuranozil)-2,6-điaminopurin, i odgovarajući amino kiseli estar riboze C-2', C-3' i C-5' hidroksili i odgovarajući izborno supstituisani ciklični 1,3-propandiol estri 5'-fosfatnih derivata.

Jedinjenja prema predstavljenom pronalasku takođe se mogu kombinovati za lečenje HCV infekcije sa drugim nukleozidima koji imaju anti-HCV osobine, kao što su oni navedeni u WO 02/51425 (4.07.2002.), dodeljeni Mitsubishi Pharma Corp.; WO 01/79246, WO 02/32920, WO 02/48165 (20.06.2002.), i WO2005003147 (13.01.2005.) (uključujući R1656, (2'7?)-2'-deoksi-2'-fluoro-2'-C-metilcitidin, prikazani kao jedinjenja 3^6 na stranici 77) dodeljeni Pharmasset, Ltd.; WO 01/68663 (20.09.2001.), dodeljeni ICN Pharmaceuticals; WO 99/43691 (2.09.1999.); WO 02/18404 (7.03.2002.), US2005/0038240 (17.02.2005.) i WO2006021341 (2.03.2006.), uključujući 4'-azido nukleozide kao što je R1626, 4'-azidocitidin, dodeljen Hoffmann-LaRoche; U.S. 2002/0019363 (14.02.2002.); WO 02/100415 (19.12.2002.); WO 03/026589 (3.04.2003.); WO 03/026675 (3.04.2003.); WO 03/093290 (13.11.2003.): US 2003/0236216 (25.12.2003.); US 2004/0006007 (8.01.2004.); WO 04/011478 (5.02.2004.); WO 04/013300 (12.02.2004.); US 2004/0063658 (1.04.2004.); i WO 04/028481 (8.04.2004.).

Za lečenje HCV infekcije, jedinjenja prema predstavljenom pronalasku takođe se mogu primenivati u kombinaciji sa sredstvom koje je inhibitor HCV NS5B polimeraze. Takvi inhibitori HCV NS5B polimeraze koji se mogu koristiti kao kombinovana terapija obuhvataju, ali bez ograničenja na, one navedene u WO 02/057287, US 6,777,395, WO 02/057425, US 2004/0067901, WO 03/068244. WO 2004/000858, WO 04/003138 i WO 2004/007512. Drugi takvi inhibitori HCV polimeraze obuhvataju, ali bez ograničenja na. valopicitabin (NM-283; Idenix) i 2'-F-2'-beta-metilcitidin (videti takođe WO 2005/003147, dodeljen Pharmasset, Ltd.).

U jednoj varijanti, nukleozidni inhibitori HCV NS5B polimeraze koji se koriste u kombinaciji sa predstavljenim inhibitorima HCV NS3 proteaze izabrani su od sledećih jedinjenja: 4-amino-7-(2-C-metil-P-D-arabinofuranozil)-7H-pirolo[2,3-d]piriinidin; 4-amino-7-(2-C-metil-P-D-ribofuranozil)-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin; 4-metilamino-7-(2-C-metil-P-D-ribofuranozil)-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin; 4-dimetilamino-7-(2-C-metil-P-D-ribofuranozil)-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin; 4-ciklopropilamino-7-(2-C-metil-P-D-ribofuranozil)-7H-pirolo[2.3-d]pirimidin; 4-amino-7-(2-C-vinil-P-D-ribofuranozil)-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin: 4-amino-7-(2-C-hidroksimetil-P-D-ribofuranozil)-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin; 4-amino-7-(2-C-fluorometil-P-D-ribofuranozil)-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin; 4-amino-5-metil-7-(2-C-metil-P-D-ribofuranozil)-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin; 4-anrino-7-(2-C-metil-P-D-ribofuranozil)-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-5-karbonska kiselina; 4-amino-5-bromo-7-(2-C-metil-p-D-ribofuranozil)-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin; 4-amino-5-hloro-7-(2-C-metil-p-D-ribofuranozil)-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin; 4-amino-5-fluoro-7-(2-C-metil-P-D-ribofuranozil)-7H-pirolof2.3-d]pirimidin; 2,4-diamino-7-(2-C-metil-P-D-ribofuranozil)-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin; 2-amino-7-(2-C-metil-|3-D-ribofuranozil)-7H-pirolo[2,3-d]piiriTiidin; 2-amino-4-ciklopropilamino-7-(2-C-metil-P-D-ribofuranozil)-7H-pirolo[2.3-d]pirimidin; 2-amino-7-(2-C-metil-p-D-ribofuranozil)-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4(3II)-on; 4-amino-7-(2-C-etil-p-D-ribofuranozil)-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin; 4-amino-7-(2-C.2-0-dimetiI-p-D-ribofuranozil)-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin; 7-(2-C-metil-P-D-ribofuranozil)-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4(3H)-on; 2-amino-5-metil-7-(2-C, 2-0-dimetil-P-D-ribofuranozil)-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4(3H)-on; 4-amino-7-(3-deoksi-2-C-metil-P-D-ribofuranozil)-7H-piro]o[2,3-d]pirimidin; 4-amino-7-(3-deoksi-2-C-metil-P-D-arabinofuranozil)-7H-pirolo[23-d]pirimidin; 4-amino-2-fluoro-7-(2-C-metil-P-D-ribofuranozil)-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin; 4-amino-7-(3-C-metil-P-D-ribofuranozil)-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin; 4-amino-7-(3-C-metil-P-D-ksilofuranozil)-7M-pirolo[2,3-d]pirimidin; 4-amino-7-(2,4-di-C-metil-P-D-ribofuranozil)-7H-pirolo[2,3-djpirimidin; 4-amino-7-(3-deoksi-3-fluoro-2-C-metil-p-D-ribofuranozil)-71I-pirolo[2,3-djpirimidin; i odgovarajući 5'-trifosfati; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

Jedinjenja prema predstavljenom pronalasku se takođe mogu kombinovati za lečenje HCV infekcije sa ne-nukleozidnim inhibitorima HCV polimeraze kao što su oni navedeni u WO 01/77091 (18.10.2001.), dodeljen Tularik, Inc.; WO 01/47883 (05.07.2001.), dodeljen Japan Tobacco, Inc.; WO 02/04425 (17.01.2002.), dodeljen Boehringer Ingelheim; WO 02/06246 (24.01.2002.), dodeljen Istituto di Ricerche di Biologia Moleculare P. Angeletti S.P.A.; WO 02/20497 (03.03.2002.); WO 2005/016927 (naročito JTK003), dodeljen Japan Tobacco, Inc.; i HCV-796 (Viropharma Inc.).

U jednoj varijanti, ne-nukleozidni inhibitori HCV NS5B polimeraze koji se koriste u kombinaciji sa predstavljenim inhibitorima HCV NS3 proteaze izabrani su od sledećih jedinjenja: 14-cikloheksil-6-[2-(dimetilamino)etil]-7-okso-5,6,7,8-tetrahidroindolo[2.1 - a][2,5]benzodiazocin-l 1-karbonska kiselina; 14-cikloheksil-6-(2-morfolin-4-ilctil)-5,6,7,8-tetrahidroindolo[2,l-a][2,5]benzodiazocin-l 1-karbonska kiselina; 14-cikloheksil-6-[2-(diinetil amino)etil]-3-metoksi-5,6,7,8-tetrahidroindolo[2,l-<7][2,5]benzodiazocin-l I-karbonska kiselina; 14-cikloheksil-3-metoksi-6-metiI-5,6,7.8-tetrahidroindolo[2,l-a][2,5]benzodiazocin-11- karbonska kiselina; metil ({[(14-cikloheksil-3-metoksi-6-metil-5,6,7,8-tetrahidroindolo (2,1 -a|(2,5]benzodiazocin-11 -il)karbonil]amino}sulfonil)acetat; ({[(14-cikloheksil-3-metoksi-6-metil-5,6,7,8-tetrahidroindolo[2,l-a][2,5]benzodiazocin-l l-il)karbonil]amino] sulfonil) sirćetna kiselina; 14-cikloheksil-A-[(dimetilamino)sulfonil|-3-metoksi-6-metil-5,6,7.8-tetrahidroindolo[2,l-«][2,5]benzodiazocin-l 1 -karboksamid; 3-hloro-14-cikloheksil-6-L2-(dimetilamino)etil|-7-okso-5,6,7,8-tetrahidroindolo[2.1-a][2,5]benzodiazocin 11-karbonska kiselina; 7V-(1 l-karboksi-14-cikloheksil-7,8-dihidro-6//-indolo[1.2-e][l,5]benzoksazocin-7-il)-M/vr-dimetiletan-l,2-diaminijum bis(trifluoroacetat); 14-cikloheksil-7,8-dihidro-6H-indolo [l,2-e][l,5]benzoksazocin-l 1-karbonska kiselina; 14-cikloheksil-6-metil-7-okso-5,6,7.8-tetrahidroindolo[2, l- a][2,5]benzodiazocin-l 1-karbonska kiselina;14-cikloheksil-3-metoksi-6-metil-7-okso-5,6,7,8-tetrahidroindolo[2,l-a][2,5]benzodiazocin-l 1-karbonska kiselina; 14-cikloheksil-6-[2-(dimetilamino)elil]-3-metoksi-7-okso-5,6,7,8-tetrahidroindolo[2,l-a][2,5] benzodiazocin-11-karbonska kiselina; 14-cikloheksil-6-[3-(dimetilamino)propil]-7-okso-5,6,7,8-tetrahiđroindolo[2,l-a][2,5]benzodiazocin-l 1-karbonska kiselina; 14-cikloheksil-7-okso-6-(2-piperidin-l-iletil)-5,6,7,8-tetrahidroindolo[2,l-a][2,5]benzodiazocin-l 1-karbonska kiselina; 14-cikloheksil-6-(2-morfolin-4-iletil)-7-okso-5.6,7,8-tetrahidroindolo[2,l-a][2,5] benzodiazocin-11-karbonska kiselina; 14-cikloheksil-6-[2-(dietilamino)etil]-7-okso-5,6,7.8-tetrahidroindolo[2,l-<3][2,5]benzodiazocin-l 1-karbonska kiselina; 14-cikloheksil-6-(l-metil

piperidin-4-il)-7-okso-5,6,7,8-tetrahidroindolo[2,1 - a] [2,5]benzodiazocin-l 1-karbonska

kiselina; 14-cikloheksil-N-[(dimetilamino)sulfonil]-7-okso-6-(2-piperidin-l-iletil)-5,6,7,8-tetrahidroindolo[2,l-a][2,5]benzodiazocin-l 1 -karboksamid; 14-cikloheksil-6-[2-(dimetil amino)etil]-A<r->[(dimetilamino)sulfonil]-7-okso-5.6,7,8-tetrahidroindolo[2,l-a][2.5]benzo diazocin-11-karboksamid; 14-ciklopentil-6-[2-(dimetilamino)etil]-7-okso-5,6,7,8-tetrahidroindolo[2,1 -a] [2,5]benzodiazocin-11 -karbonska kiselina; 14-cikloheksil-5,6,7,8-tetrahidroindolo[2,l-a][2,5]benzodiazocin-l 1-karbonska kiselina; 6-alil-14-cikloheksil-3-metoksi-5,6,7,8-tetrahidroindolo[2,l-a][2,5]benzodiazocin-l 1-karbonska kiselina; 14-ciklopentil-6-[2-(dimetilamino)etil]-5,6,7,8-tetrahidroindolof2,l-<7][2,5]benzodiazocin-l 1-karbonska kiselina; 14-cikloheksil-6-[2-(dimetilamino)etil]-5,6,7,8-tetrahidropiridolo[2,l-a|[2,5]benzodiazocin-l 1-karbonska kiselina; 13-cikloheksil-5-metil-4.5,6,7-tetrahidrofuro[3',2':6,7][1.4]diazocino[l ,8-tf]indol-10-karbonska kiselina; 15-cikloheksil-6-[2-(dimetilamino)etil]-7-okso-6,7,8,9-tetrahidro-5//-indolo[2,l-c/][2,6]benzodiazonin-12-karbonska kiselina; 15-cikloheksil-8-okso-6,7,8,9-tetrahidro-5//-indolo[2,l-<a]l2,5]benzodiazonin-12-karbonska kiselina; 13-cikloheksiI-6-okso-6,7-dihidro-5//- indolo[l,2-</][l,4]benzodiazepin-10-karbonska kiselina; i njihove farmaceutski prihvatljive soli.

Prethodno navedeni tetraciklični, na bazi indola, inhibitori HCV NS5B polimeraze mogu se dobiti praćenjem postupaka A-E kao što je navedeno u daljem tekstu, gde različite promenljive mogu biti izabrane u skladu sa specifičnim tetracikličnim indolnim jedinjenjem koje će se pripremiti: 2-Bromoindolni intermedijer (pripremljen kao što je opisano u objavljenoj međunarodnoj prijavi patenta WO2004087714) je funkcionalizovan na azotu indola da bi se uvela prekursorska funkcionalna grupa W7X' na bilo kom ili na oba elementa W/X lanca. Metodologija Pd-posredovanog unakrsnog-spajanja (npr., Suzuki, StilleUd.)zatim je uvedena u prekursorsku funkcionalnu grupu Z'/Y' koja nosi C2 aromatični prsten, na bilo koji ili oba elementa Z/Y lanca. Manipulacija funkcionalnom grupom posle koje sledi zatvaranje prstena dala je tetraciklični sistem. Deprotekcija estra zatim je dala ciljne indole karbonske kiseline, sa C2 aromatičnim prstenom vezanim za azot indola.

Posle formiranja lanca izvan odgovarajućeg 2-haloaromatičnog prstena, Pd-posredovano zatvaranje prstena dalo je fuzionisani tetraciklični sistem. Deprotekcija estra zatim je dala ciljne indol karbonske kiseline, sa C2 aromatičnim prstenom vezanim za azot indola.

C2 aromatični prsten je uveden kao što je navedeno na početku preko metodologije Pd-posredovanog unakrsnog-spajanja (Suzuki, StilleUd).Zatim je formiran lanac, sa ciklizacijom na azotu indola konačno zatvarajući prsten. Deprotekcija estra zatim je dala ciljne indol karbonske kiseline, sa C2 aromatičnim prstenom vezanim za azot indola.

Fuzionisani tetraciklični intermedijeri koji nastaju iz Postupaka A-C podvrgavaju se manipulaciji funkcionalne grupe u lancu pre deprotekcije estra da bi se dobile ciljne Ob-vezane indol karbonske kiseline.

C2-vezane indol karbonske kiseline dobijene pomoću Postupaka A-D dalje su derivatizovane manipulacijom karboksilatne funkcionalne grupe da bi se dobila jedinjenja koja nose karboksilatnu zamenu ili karboksamid. Tokom bilo koje od prethodno navedenih sintetičkih postupaka može biti neophodno i/ili poželjno zaštititi osetljive ili reaktivne grupe na bilo kom od dotičnih molekula. Ovo se može postići pomoću uobičajenih zaštitnih grupa, kao što su one opisane u Protective Groups in Organic Chemistrv. ed. J.F.W. McOmie, Plenum Press, 1973; i T.W. Greene & P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Svnthesis. John Wiley & Sons, 3rd edition. 1999. Zaštitne grupe mogu biti uklonjene na prikladnom kasnijem stadijumu primenom postupaka poznatih iz tehnike.

Inhibitorna aktivnost predstavljenih jedinjenja prema HCV NS3 proteazi može biti testirana primenom testova poznatih u tehnici. Jedan takav test je vremenski razložen fluorescentni (TRF) test HCV NS3 proteaze kao što je opisano u Primeru 56. Drugi primeri takvih testova su opisani u npr., međunarodnoj objavi patenta WO2005/046712. Jedinjenja korisna kao inhibitori HCV NS3 proteaze bi imala Ki manji od 50 uM, poželjnije manji od 10 uM, i čak još poželjnije manji od 100 nM.

Predstavljeni pronalazak takođe obuhvata postupke za pripremu jedinjenja formule1, Il-ailiIH-a.Jedinjenja prema predstavljenom pronalasku mogu se lako pripremiti prema sledećim reakcionim šemama i primerima, ili njihovim modifikacijama, primenom lako dostupnih početnih materijala, reagenasa i uobičajenih sintetičkih postupaka. U ovim reakcijama, takođe je moguće koristiti varijante koje su same po sebi poznate stručnjacima iz date oblasti tehnike, ali nisu detaljnije navedene. Pored toga. drugi postupci za pripremu jedinjenja prema pronalasku lako će biti jasni stručnjaku iz date oblasti tehnike u svetlu sledećih reakcionih šema i primera. Osim ukoliko nije naznačeno drugačije, sve promenljive su kao što su definisane u prethodnom tekstu. Sledeće reakcije šeme i primeri služe samo za ilustraciju pronalaska i njegovog izvođenja. Primere ne bi trebalo tumačiti kao ograničenja obima i smisla pronalaska.

Opšti opis sinteze:

Jedinjenja prema predstavljenom pronalasku mogu biti sintetisana kao stoje navedeno u opštim Semama 1 i 2.

U Šemi 1 (n=0-9) navedena je sinteza reprezentativnog molekula. Odgovarajuće zaštićeni 4-hidroksiprolinski derivat (na primer, karbamatom zaštićeni azot i estrom zaštićena kiselina) može da reaguje sa karbonildiimidazolom ili ekvivalentnim reagensom i zatim reaguje sa odgovarajuće supstituisanim izoindolinom ili tetrahidroizohinolinom. Alkenil funkcionalna grupa može biti uvedena na ovom ili kasnijem stadijumu pomoću reakcije, koja je katalizovana paladijumom halogenidnog supstituenta kao što su hlorid, bromid i jodid, ili druga funkcionalna grupa kao što je triflat sa organometalnim reagensom kao što je vinil ili aliltrialkilkalaj. Alternativno, alkenil funkcionalna grupa može biti uvedena pre reakcije sa zaštićenim prolinolom.

Šema 2 opisuje sintezu aminokiselinskog dela koji sadrži olefin. Aminokiselina (ili je komercijalno dostupna ili može biti jednostavno pripremljena primenom postupaka poznatih u stanju tehnike) u kojoj je kisela funkcionalna grupa zaštićena kao estar (na primer, R-metil) može biti prevedena u amide A spajanjem olefinskc karbonske kiseline korišćenjem širokog

opsega sredstava za spajanje peptida koji su poznati stručnjacima iz date oblasti tehnike kao što su DCC, EDC, BOP, TBTU, itd. Priprema sulfonamida B može se postići reakcijom sa odgovarajućim sulfonil hloridom u organskom rastvaraču (npr., THF) sa bazom amina kao sakupljačem („scavenger"). Derivati uree C mogu biti pripremljni reakcijom aminoestra sa reagensom kao što je karbonilđiimidazol, da bi se formirao intermedijerni izocijanat (Catalano et al., WO 03/062192) nakon čega sledi dodavanje drugog amina koji sadrži olefin. Alternativno, fozgen, difozgen ili trifozgen se mogu koristiti umesto karbonildiimidazola. Cijanoguanidinski derivati D mogu biti pripremljeni reakcijom aminokiselinskog estra sa difenil C-cijanokarbonimidatom u organskom rastvaraču, nakon čega sledi dodavanje drugog amina koji sadrži olefin. Derivati karbamata E mogu biti pripremljeni reakcijom alkohola koji sadrži olefin sa karbonildiimidazolom (ili fozgenom, trifozgenom ili difozgenom) u organskom rastvaraču, nakon čega sledi dodavanje amino estra.

Posle funkcionalizacije amina, estar može biti hidrolizovan pod opsegom baznih uslova poznatih stručnjacima iz date oblasti tehnike (Theodora W. Greene. Protective Groups in Organic Svnthesis, Third Edition. John Wiley and Sons, 1999).

Deprotekcija karbamat zaštitne grupe na prolinskom delu može biti izvedena pomoću različitih postupaka poznatih stručnjacima iz date oblasti tehnike (Theodora W. Greene, Protective Groups in Organic Svnthesis, Third Edition, John Wiley and Sons. 1999).

Da bi se završila sinteza jedinjenja prema ovom pronalasku, aminokiselinski derivat može biti spojen sa prolinskim derivatom pomoću širokog opsega reagenasa peptidnog spajanja kao što su DCC, EDC, BOP. TBTU itd. (videti Šemu 1). Makrociklizacija se zatim postiže preko metateze olefina primenom opsega katalizatora koji su opisani u literaturi za ovu svrhu. Na ovom stadijumu olefinska veza proizvedena u metatezi zatvaranja prstena može biti izborno hidrogenisana da bi se dobila zasićena veza ili funkcionalizovana na alternativne načine kao što je ciklopropanacija. Prolinski estar je zatim hidrolizovan pod baznim uslovima i spojen sa ciklopropilamino kiselim estrom (odgovarajući alkenil ili alkilciklopropan deo molekula može biti pripremljen kao što je prethodno opisano (Llinas-Brunet et al., US 6,323,180) i podvgnut dodatnom koraku bazne hidrolize da bi se obezbedila krajnja jedinjenja. Prolinski estar takođe može biti hidrolizovan i direktno spojen sa odgovarajuće funkcionalizovanim ciklopropilamino kiselim acil sulfonamidom (koji može biti pripremljen prema Wang X.A. et al. WO2003/099274) da bi se obezbedila krajnja jedinjenja.

Katalizatori metateze olefina obuhvataju sledeće vrste na bazi rutenijuma: F: Miller et al J. Ara. Chem. Soc 1996, 118, 9606; G: Kingsburv et al J.Am. Chem. Soc 1999, 121, 791; H: Scholl et al Org. Lett. 1999, 1, 953; Ilovevda et al US2002/0107138; K: Furstner et al. J. Org. Chem 1999, 64, 8275. Korist ovih katalizatora u metatezi zatvaranja prstena dobro je poznata u literaturi (npr. Trnka and Grubbs, Acc. Chem. Res. 2001, 34, 18).

PRIMER 1 f5RJS, 10S)- 10- Butil- A7-(( lR, 2SVl-{ f( ciklopropilsulfonil) amino| karbonin- 2-vinilcikIopropiI)- 3, 9J2- triokso- l, 6, 7, 9a0<liq2, 14, 15a6- dekahidro- 5H- 2, 22:5, 8-dimctano- 4J3, 2, 8, ll- benzodioksatriazacikloikozin- 7- karboksaniid ( TII- 1) Korak 1: 4- hIoroizoindolin

Smeša anhidrida 3-hloroftalne kiseline (9 g, 49.2 mmol) i formamida (100 mL) zagrevanaje do 125°C i mešana 3 časa. Zatim je dodata voda (300 mL) i smeša je hlađena do sobne temperature. Smeša je filtrirana i dobijena bela čvrsta supstanca je isprana vodom i sušena da bi se dobio 4-hloro-lH-izoindol-l,3(2H)-dion (7.7 g, 86% prinos).

U čvrsti 4-hloro-lH-izoindol-l,3(2H)-dion (4.0 g, 22.0 mmol) ukapavanjem je dodavan boran-THF kompleks (1 M/THF, 88.1 mL, 88.1 mmol) uz mešanje. Kada je dodavanje završeno, reakciona smeša je zagrevana do refluksa (80°C) i mešana 6 časova. Reakciona smeša je zatim hlađena do 0°C, pažljivo je ukapavanjem dodavan metanol (2.8 mL, 88.1 mmol) i reakciona smešaje zagrevana do sobne temperature. HC1 (6 N) je dodavana sve dok smeša nije postala kisela i zatim je smeša koncentrovana. Sirovi proizvod je rastvoren u 1 M HC1 i ekstrahovan dva puta sa etil etrom i dva puta sa dihlorometanom. pH vrednost vodenog sloja je podešena do pH = 11 sa čvrstim NaOH i on je ekstrahovan tri puta sa etil acetatom. Kombinovani etil acetatni ekstrakti su sušeni preko Na2SC>4, filtrirani i koncentrovani da bi se dobio 4-hloroizoindolin (1.8 g, 53% prinos). LRMS (ESI)mlz154 [(M+H)<+>; izrač. zaC8H9ClN: 154].

Korak 2:1- fg/ c- Butil2- metil ( 2S, 4R)- 4-{(( 4- hloro- l, 3- dihidro- 2H- izoindoI- 2-

iDkarbonilloksi) pirolidin- l, 2- dikarboksilat

U rastvorTV-Boc prolin metil estra (2.87 g, 11.7 mmol) u DMF (15 mL) na 0°C dodat je karbonildiimidazol (1.9 g, 11.7 mmol). Reakcija je zagrevana do sobne temperature i mešana 30 min. Zatim je dodat rastvor 4-hloroizoindolina (1.8 g, 11.7 mmol) u DMF (10 mL) i reakciona smeša je zagrevana do 50°C i mešana 2 časa. Reakciona smeša je sipana na etil etar i 0.5 M HC1, i slojevi su se razdvojili. Organski sloj je ispran vodom, sušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan. Sirovi proizvod je prečišćen na silika gelu (eluiranje gradijentom od 10% do 90% etil acetata u heksanima) da bi se dobio 1-terc-butil 2-metil (2S,4R)-4-{[(4-hloro-l,3-dihidro-2H-izoindol-2-il)karbonil]oksi}pirolidin-l,2-dikarboksilat

(3.3 g, 66% prinos). LRMS (ESI)mlz325 [(M+H-Boc)<+>; izrač. za C15H18CIN2O4: 325].

Korak 3: 1- ferc- Butii 2- metil ( 2S, 4R)- 4-{[( 4- vinil- L3- dihidro- 2H- izoindol- 2-

iI) karbonil| oksi} pirolidin- l, 2- dikarboksilat

Rastvor 1 -/crc-butil 2-metil (2S.4R)-4-{[(4-vinil-l,3-dihidro-2H-izoindol-2-il)karbonil]oksi}pirolidin-l,2-dikarboksilata (40 mg, 0.09 mmol), vinil tributilstanana (36 mg, 0.11 mmol) i cezijum fluorida (31 mg, 0.21 mmol) u dioksanu (0.5 mL) degaziran je sa N2u trajanju od 15 min. Zatim je dodat bis(tributilfosfin)paladijum(0) (2 mg, 0.005 mmol) i reakciona posuda je zatvorena hermetički i zagrevana do 100°C u trajanju od 18 časova. Posle hlađenja, reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena pomoću hromatografije na silika gelu (10% do 90% etil acetat u heksanima) da bi se dobio 1-/erc-butil 2-metil (2S,4R)-4-[[(4-vinil-l,3-dihidro-2H-izoindol-2-il)karbonil]oksijpiroliđin-1.2-dikarboksilat (10 mg, 25% prinos). LRMS (ESI)m/ z 317[(M+H-Boc)<+>: izrač. za C,7H2,N204: 317].

Korak 4: Metil Ar- f( pent- 4- eniloksi) karbonil|- L- norleucil-( 4R)-{(( 4- vinil- L3-

dihidro- 2H- izoindol- 2- iI) karbonilioksi}- L- proHnat

U posudu koja sadrži 1-ferc-butil 2-metil (2S,4R)-4-{[(4-vinil-1.3-dihidro-2H-izoindol-2-il)karbonil]oksi}pirolidin-l,2-dikarboksilat (60 mg, 0.14 mmol) dodat je 4 M rastvor HC1 u dioksanu (2 mL). Posle 1 časa, LC-MS analiza je pokazala potpunu potrošnju početnog materijala i formiranje željenog Boe proizvoda. Isparljive komponente su zatim uklonjenein vacuo,i sirovi materijal je sipan u DMF (2 mL).

U ovu smešu je dodat A<r->[(pent4-en-l-iloksi)kai"bonil]-L-norleucin (41 mg, 0.17 mmol) (pripremljen prema postupku koji je naveden u daljem tekstu), DIPEA (0.076 mL, 0.43 mmol), EDC (54 mg, 0.28 mmol) i HOAt (44 mg, 0.28 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi u trajanju od 30 min, potpuna potrošnja amina je dokazana preko LC-MS. Reakciona smeša je zatim obrađena sa 0.5 N HC1 i EtOAc. Organski sloj je ispran fiziološkim rastvorom i sušen preko MgS04. Rastvarač je zatim uklonjenin vacuoi sirovi proizvod je prečišćen na silicijum dioksidu (10-90% EtOAc/heksani) da bi se proizvelo 60 mg (79% prinos) metil 7Y-[(pent-4-eniloksi)karbonil]-L-norleucil-(4R)-4- ([(4-vinil-l ,3-dihidro-2H-izoindol-2-il)karbonil]oksi}-L-prolinata. LRMS (ESI)mlz542 [(M+ILf; izrač. za C29H40N3O7: 542].

Korak 5: Metil ( 5R, 7S, l0S)- l0- butil- 3, 9, l2- triokso- l, 6, 7, 9, l0, ll, l2, l4, l5, 16-

dekahidro- 5H- 2, 22:5, 8- dimetano- 4, 13, 2, 8, ll- benzodžoksatriazacikloikozin- 7- karboksilat

Rastvor metil 7Y-[(pent-4-eniloksi)karbonil]-L-norleucil-(4R)-4-{[(4-vinil-L3-dihidro-2H-izoindol-2-il)karbonil]oksi}-L-prolinata (60 mg, 0.11 mmol) u DCE (20 mL) degaziran je sa N2u trajanju od 15 min. Zatim je dodat Zhan rutenijumski katalizator metateze RC-301 (Zhan katalizator I (prikazan kao J na stranici 43), RC-301, Zannan Pharma Ltd.) (7 mg. 0.01 mmol). Rastvor je zatim zagrevan do 100°C 1 čas. U to vreme, LC-MS i TLC analize su pokazale potpunu potrošnju početnog materijala i formiranje skoro pojedinačnog proizvoda koji je imao željenu masu. Rastvarač je zatim uklonjenin vacuo,i sirovi proizvod je prečišćen na silicijum dioksidu (5-70% EtOAc/heksan) da bi se dobilo 45 mg (79% prinos) metil (5R.7S, 1 OS)-10-butil-3,9,12-triokso-1.6,7,9,10,11,12,14,15.16-dekahidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,1 l-benzodioksatriazacikloikozin-7-karboksilata. LRMS (ESI)mlz514 [(M+H)<+>; izrač. za Cvtt^ Of. 514].

Korak 6: ( 5R, 7S, 10S)- 10- Butil- A/-(( lR, 2S)- l-{|( ciklopropilsulfonil) aminol

karbonil}- 2- vinileiklopropiI)- 3, 9, 12- triokso- l, 6, 7, 9, 1041, 12, 14, 15, 16- dekahidro- 5H-2, 22:5, 8- dimetano- 4, 13, 2, 8, ll- benzodioksatriazacikloikozin- 7- karboksamid

U rastvor metil (5R,7S,10S)-10-butil-3,9,12-triokso-l,6,7,9,10,l 1,12,14,15,16-dekahidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,1 l-benzodioksatriazacikloikozin-7-karboksilata (45 mg, 0.09 mmol) u THF (2 mL), MeOH (0.5 mL) i vodi (1 mL) dodat je LiOH (21 mg, 0.87 mmol). Reakciona smeša je zagrevana do 40°C i mešana 1 čas, nakon čega je zabeležena kompletna potrošnja metil estarskog početnog materijala i to pomoću LC-MS. Smeša je zatim obrađena sa 0.5 N HC1 i EtOAc. Organski sloj je zatim sušen preko K2CO3, i rastvarač je uklonjenin vacuo.Sirovi proizvod je sipan u DMF (1 mL).

U prethodno navedeni rastvor dodat je (lR,2S)-l-[[(ciklopropilsulfonil)amino] karbonil}-2-vinilciklopropanaminijum hlorid (Llinas-Brunet et al US03/15755 and Wang et al

W0 03/099274) (32 mg, 0.12 mmol), TBTU (51 mg, 0.16 mmol) i DIPEA (0.071 mL, 0.40 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 časa. Reakciona smeša je direktno prečišćena pomoću reverzno fazne HPLC da bi se dobio (5R,7S,10S)-10-butil-/V-((1 R,2S)-1 - {[(ciklopropilsulfonil)amino] karboni 1} -2-vinilciklopropil)-3,9,12-triokso-1,6,7,9,10,11.12,14,15,16-dekahidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,ll-benzodioksatriazacikloikozin-7-karboksamid (27 mg, 47% prinos). !H NMR (500 MHz, ppm. CDCb) § 10.01 (s, 1 H), 7.27 (m, 2 H), 7.12 (d, 1 H). 7.04 (s, 1 H), 6.40(d, J=16.1 Hz, 1 H), 6.08 (m, 1 H), 5.76 (m, 1 H), 5.44 (s, 1 H), 5.36 (d, 1 H), 5.25 (d, 1 H), 5.14 (d. 1 H), 4.80-4.68 (m, 3 H), 4.59 (d, 1 H), 4.44 (m, 2 H). 4.38 (m. 1 H), 4.28 (m, 1 H), 3.95 (m, 1 H), 3.77 (dd, 1 H), 2.94 (m, 1 H), 2.43 (m, 2 II), 2.29 (d, 2 II), 2.06 (m, 2 H), 1.94 (m, 1 IT), 1.78 (m, 4 H), 1.45 (m, 1 H), 1.38-1.06 (m, 5 H), 2.04 (d, 2 H), 0.92 (t, 3 H) ppm. LRMS (ESI)mlz712 [(M+H)<+>; izrač. za C35H46N509S: 712].

PRIMER 2

( 5R, 7SaOS)- 10- ferc- Butil- A^-(( lR, 2S)- l- li( cikloDroDilsuIfoniI) aminoikarboniI)- 2

vinilciklopropin- 3, 9a2- triokso- l, 6, 7, 9, 10, ll, 12a4, 15a6- dekahidro- 5H- 2, 22:5S-dimetano- 4a3, 2, 8a I- benzodioksatriazacikloikozin- 7- karboksamid ( H- 2)

PRIMER 2 je pripremljen prema postupku koji je korišćen za PRIMER 1 sa tora razlikom što je 3-metil-7vT-[(pent-4-eniloksi)karbonil]-L-valin (pripremljen prema postupku koji je dat u daljem tekstu) korišćen umesto ,V-[(pent-4-en-l-iloksi)karbonil]-L-norleucina u Koraku 4.<*>H NMR (500 MHz, ppm, CDC13) 5 9.90 (s, 1 H), 7.28 (m, 2 H), 7.13 (m, 2 H), 6.31(d, J=15.9 Hz, 1 H), 6.04 (m, 1 H), 5.74 (m, 1 H), 5.45 (m, 2 H), 5.27 (d, 1 H), 5.16 (d, 1 H), 4.77-4.66 (m, 3 H), 4.55 (d, 1 H), 4.48 (t, 1 H). 4.41-4.35 (m, 2 H), 4.27 (m, 1 H), 3.93 (m, 1 H), 3.74 (dd, 1 H), 2.93 (m, 1 H), 2.45 (d, 2 H), 2.32 (m, 2 H), 2.10-1.95 (m, 2 H). 1.74

(m, 1 H), 1.47 (m, 1 H), 1.37 (m. 2 H), 1.07 (s, 9 H) ppm. LRMS (ESI)mlz712 [(M+Hf; izrač. zaC35H46N509S: 712].

PRIMER 3

( 5RJS40SHO- efre- Butil-/ y^

vinilciklopropil)- 15J5- dimetil- 3, 942-triokso- l,6J, 9aOJL12J4a5J6- dekahidro- 5H-2, 22:5, 8- dimetano- 4, 13, 2, 8, ll benzodioksatriazacikloikozin- 7- karboksamid ( III- 8)

Korak 1: l- Bromo- 2 3- bis( bromometil) benzen

Suspenzija 3-bromo-o-ksiIena (196 g, 1.06 mol)..V-bromosukcinimida (377 g, 2.15 mol) i benzoil peroksida (0.26 g, 1.0 mmol) u ugljen tetrahloridu (1800 mL) zagrevana je do refluksa pod azotom u trajanju od 15 časova. Sadržaj reakcione posude je hlađen, filtriran i filtrat je isparavam Sirovi materijal je destilovan pod visokim vakuumom. Glavne frakcije su destilovane između 88°C i 152°C. Dobij eno je 108 g čistog materijala. Dobij eno je 182 g neznatno sirovog materijala koji se može koristiti u sledećoj reakciji.<!>H NMR (CDC13) 5 (ppm) 7.56 (d,J= 8.0 Hz, 1 H), 7.31(d, J=8.0 Hz, 1 H), 7.26 (s, 1 II), 7.16 (t,./ = 8.0 Hz, 1 H), 4.84 (s, 2 II), 4.64 (s, 2 H).

Korak2:2- Benzi]- 4- bromoizoindolin

Kalijum bikarbonat (204 g, 2.04 mol) je suspenđovan u acetonitrilu (12 L) i smeša je zagrevana do 80°C. Rastvori l-bromo-2,3-bis(bromometil)benzena (280 g, 0.82 mol u 500 mL acetonitrila) i benzilamina (87.5 g, 0.82 mol u 500 mL acetonitrila) istovremeno su dodavani preko levaka za dodavanje tokom 1 časa. Reakciona smeša je mešana na 77°C 16 časova. Sadržaj reakcione posude je hlađen, filtriran i rastvarač je uklonjen isparavanjem. Reakcija je podeljena između IM K2CO3i EtOAc. Organske materije su isprane fiziološkim rastvorom, sušene anhidrovanim Na2S04, filtrirane i isparavane...Flash" hromatografijom (eluiranje gradijentom: heptan do 10% EtOAc u heptanu) posle isparavanja dobijeno je jedinjenje iz naslova kao bledo ulje. 'li NMR (CDCI3) 5 (ppm) 7.41-7.39 (m, 2 H), 7.37-7.34 (m, 2 H), 7.32-7.27 (m, 2 H). 7.10-7.03 (m, 2 II), 4.02 (s, 2 H), 3.97 (s, 2 H), 3.91 (s, 2 H). LRMS (ESI)m/ z289 [(M+H)<+>; izrač. za Ci5H15BrN: 289].

Izvršena je konverzija u HC1 so u HCl/MeOH. Dodat je MTBE i filtrirana je čvrsta supstanca da bi se dobilo 118 g proizvoda kao HC1 so.

Korak 3: 2- Benzil- 4- vinilizoindolin

Rastvor 2-benzil-4-bromoizoindolina (16.7 g, 58.0 mmol) i tributil(vinil)kalaja (20.3 mL, 69.6 mmol) u toluenu (400 mL) je degaziran propuštanjem gasovitog azota kroz rastvor u trajanju od 0.25 časova. Dodat je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum (0) (1.30 g, 1.16 mmol) i dobijeni rastvor je zagrevan u uljanom kupatilu na 100°C pod azotom u trajanju od 24 časa. Sadržaj reakcione posude je hlađen, isparavan i podvrgnut ,.flash" hromatografiji na koloni eluiranjem sa heksanom/etil acetatom 95/5 đa bi se posle isparavanja dobilo jedinjenje iz naslova kao bledo ulje koje je stajanjem postalo rože. LRMS (ESI)mlz236 [(M+H)<+>; izrač. za C17H18N: 236].

Korak 4: 4- Vinilizoindolin

Rastvor 2-benzil-4-vinilizoindolina (58 mmol) u L2-dihloroetanu (150 mL) postavljen je u posudu sa okruglim dnom od 1L pod azotom. Ovome je dodat levak za dodavanje koji sadrži rastvor 1-hloroetil hlorofbrmijata (7.5.1 mL, 69.6 mmol) u 1,2-dihloroetanu. Reakciona posuda je hlađena u ledenom kupatilu i sadržaj levka za dodavanje ukapavanjem je dodavan tokom 20 min uz održavanje unutrašnje reakcione temperature <5°C. Pošto je dodavanje završeno, reakciona posuda je ostavljena da se zagreva do sobne temperature i zatim je zagrevana do refluksa 45 min. Sadržaj reakcione posude je hlađen đo sobne temperature i zatim je rastvarač uklonjen isparavanjem. Dodat je metanol (200 mL) i sadržaj reakcione posude je zagrevan do refluksa u trajanju od 30 min. Reakciona posuda je hlađena i rastvarač je uklonjen isparavanjem. Dodata je voda (200 mL) i dobijena smeša je isprana etil acetatom (2 x 250 mL). Vodeni sloj je napravljen baznim sa 2N natrijum hidroksidom i zatim je ekstrahovan sa metilen hloridom (4x250 mL). Spojeni organski ekstrakti su sušeni sa anhidrovanim natrijum sulfatom, filtrirani i filtrat je isparavam Ostatak je podvrgnut „flash"' hromatografiji na koloni eluiranjem sa metilen hloridom/metanolom/amonijum hidroksidom 97/3/0.3 do 95/5/0.5. Isparavanjem frakcija dobijeno je jedinjenje iz naslova kao braon ulje, 6.00 g (41.4 mmol, 71% prinos za dva koraka). LRMS (ESI)m/ z146 [(M+H)<+>; izrač. za C,0H,2N: 146].

Korak 5: l-/ <?rc- Butil 2- metil ( 25, 4i?)- 4-{ f( 4- vinil- l, 3- dihidro- 2//- izoindoI- 2-

il) karbonilloksi} pirolidin- l, 2- dikarboksilat

Rastvor L/erobutil 2-metil (2tS',4/^)-4-hidroksipirolidin-1.2-dikarboksilata (10.1 g, 41.4 mmol) u DMF (90 mL) pod azotom hlađenje do 0°C. U reakciju je dodat čvrsti 1.1'-karbonildiimidazol (6.70 g, 41.4 mmol). Sadržaj reakcione posude je zagrevan do sobne temperature i posle 2 časa dodat je rastvor 4-vinilizoindolina (6.00 g, 41.4 mmol) u DMF (10 mL). Reakcija je zagrevana u uljanom kupatilu na 60°C u trajanju od 2 časa i zatim je hlađena i sipana u vodu i 5% kalijum bisulfat. Dobijena smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (4 x 250 mL). Spojene organske materije su isprane fiziološkim rastvorom, sušene anhidrovanim natrijum sulfatom, filtrirane i isparavane...Flash"hromatografijom na koloni eluiranjem sa heksanom/etil acetatom 70/30 dobijeno je jedinjenje iz naslova kao bela pena, 13.9 g (33.4 mmol, 81% prinos). LRMS (ESI)mlz417 [(M+H)<f>; izrač. za C227H29N206: 417].

Korak 6: ( 3i?, 55V5-( Metoksikarbonil) pirolidiii- 3- U 4- vinil- l, 3- dihidro- 2H-izoindol- 2/ 7- karboksilat hidrohlorid

Rastvor 1-ferc-Butil 2-metil (25<*>,4^)-4-{[(4-vinil-l,3-dihidro-2//-izoindol-2-il)karbonil]oksi)pirolidin-l,2-dikarboksilata (13.9 g, 33.4 mmol) u etil acetatu (700 mL) hlađen je u ledenom kupatilu i zasićen sa gasovitim hlorovodonikom. Reakciona posuda je zatvorena hermetički i ostavljena da se zagreva do sobne temperature. Posle 3.5 časa rastvarač je uklonjen isparavanjem da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao siva čvrsta supstanca, 11.2 g, 95% prinos).<!>H NMR (500 MHz, ppm, CD3OD) 5 7.47-7.45 (m, 1 H), 7.32-7.31 (m, 1 H), 7.26-7.21 (m, 1 H), 6.79-6.73 (m, 1 H). 5.79 - 5.73 (m, 1 H), 5.46 (s, 1 H), 5.41 - 5.38 (m, 1 H), 4.80 - 4.72 (m, 4 H), 3.91 (s, 3 H), 3.74 - 3.63 (m, 2 H), 2.77 - 2.71 (m, 1 H), 2.51-2.46 (m, 1 H). LRMS (ESI)m/ z317 [(M+H)<+>; izrač. za Ci7H2iN204: 317].

Korak 7: Metil / y-( f( 2, 2- dimetHpent- 4- enil) oksilkarbonil)- 3- metil- L- valil- f4R)- 4-

{ K4- vinil- l, 3- dihidro- 2H- izoindol- 2- il) karbonilloksi}- L- prolinat

U rastvor (3^,5S)-5-(metoksikarbonil)pirolidin-3-il 4-vinil-1.3-dihidro-2//-izoindol-2-karboksilat hidrohlorida (2.00 g, 5.67 mmol) i A<r->{[(2,2-dimetilpent-4-enil)oksi]karbonil}-3-metil-L-valina (1.54 g, 5.67 mmol) u DMF (100 mL) dodat je EDC (1.41 g, 7.37 mmol), HOBt (1.00 g, 7.37 mmol) i DIPEA (3.16 mL, 22.8 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 18 časova i zatim razblažena sa etil acetatom i vodenim NaIIC03. Slojevi su razdvojeni i organski sloj je ispran vodom i fiziološkim rastvorom, sušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan. Sirovi ostatak je prečišćen na silika gelu (eluiranje gradijentom 5% do 50% etil acetata u heksanima) da bi se dobio metil A-{[(2,2-dimetilpent-4-enil)oksi]karbonil}-3-metil-L-valiL(4R)-4-([(4-vinil-l,3-dihidro-2H-izoindol-2-il)karbonil]oksi}-L-prolinat (2.75 g, 85% prinos) kao bela pena. LRMS (ESI)mlz570 [(M+H)<+>; izrač. za C31H44N3O7: 570].

Korak 8: Metil ( 5R, 7SJ0S)- 10- ferc- butil- 15, 15- dimetil- 3, 9, 12- triokso-

l, 6, 7, 9, 10, ll, 12, 14, 15, 16- dekahidro- 5H- 2, 22:5, 8- dimetano- 4, 13, 2, 8, ll-

benzodioksatriazacikloikozin- 7- karboksilat

Rastvor metil A<r->{[(2,2-dimetilpent-4-enil)oksi]karbonil}-3-metil-L-valil-(4R)-4-{[(4-vinil-l,3-dihidro-2H-izoindol-2-i3)karbonil]oksi}-L-prolinata (2.46 g. 4.32 mmol) u anhidrovanom dihlorometanu (450 mL) prečišćavan je azotom u trajanju od 15 min. Rastvor bis(tricikloheksilfosfin)-3-fenil-lH-inden-l-ilidenrutenijum dihlorida (Neolvst Ml katalizator nabavljen iz Strem) (0.40 g, 0.43 mmol) u degaziranom, anhidrovanom dihlorometanu (50 mL) zatim je dodavan ukapavanjem tokom 30 min. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi, tokom čega je na svakih približno 8-12 časova dodavano po 0.2 g katalizatora. Napredovanje reakcije je praćeno pomoću HPLC sve dok se reakcija nije završila na 48 časova. Ostatak je prečišćen .,flash"hromatografijom na silika gelu. eluiranjem sa 10-70% EtOAc/heksanom, da bi se dobio metil (5R,7S,10S)-I0-/erc-butil-15,15-dimetil-3,9,12-triokso-l,6,7,9,10,ll,12,14,15,16-dekahidro-5^ benzodioksatriazacikloikozin-7-karboksilat (1.85 g, 76% prinos). LRMS (ESI)mlz542 [(M+H)<+>; izrač. za C29H40N3O7: 542].

Korak 9: ( 5R, 7S, 10S)- 10- ferc- Butil- 15, 15- dimeti»- 3, 9, 12- triokso- l, 6, 7, 9a0, ll, 12,

14, 15, 16- dekahidro- 5H- 2, 22;5, 8- dimetano- 4, 13, 2, 8, ll- benzodioksatriazacikloikozin- 7-

karbonska kiselina

U rastvor metil (5R,7S,10S)-10-tox-butil-15,l5-dimetil-3,9,12-triokso-1,6,7,9,10,11,12,14,15,16-dekahidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,l 3,2.8,11-benzodioksatriaza

cikloikozin-7-karboksilata (0.9 g, 1.67 mmol) u THF:H20 (2:1, 45 mL) dodat je LiOH (0.40, 16.7 mmol). Reakciona smeša je zagrevana do 40°C i mešana 1 čas. Reakciona smeša je razblažena sa vodenim rastvorom HC1 i ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani EtOAc sloj je ispran vodom, fiziološkim rastvorom, sušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan. Proizvod je korišćen bez dodatnog prečišćavanja. LRMS (ESI)mlz528 [(M+H)<4>; izrač. za CSglL^N^O?: 528].

Korak 10: ( 5RJS, 10S>- 10- ef/- c- Butil- N- aR, 2SV14Kciklopropilsulfoninaminol

karbonil}- 2- vmilciklopropil>- 15, 15- dimetil- 3, 9, 12- triokso- l, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 14, 15, 16-

dekahidro- 5H- 2, 22:5. 8- dimetano- 4, 13, 2, 8, ll- benzodioksatriazacikloikozin- 7-

karboksamid

Rastvor (5R,7S, 1 OS)-1O-Zerobutil-15,15-dimetil-3.9,12-triokso-1,6,7,9,10,11,12,14, 15,16-dekahidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,l l-benzodioksatriazacikloikozin-7-karbonske kiseline (100 mg, 0.19 mmol), (li?.25')-l-}[(ciklopropilsulfonil)amino|karbonil}-2-vinilciklopropanaminijum hlorida (Llinas-Brunet et al. US03/15755 i Wang et al. WO 03/099274) (76 mg, 0.28 mmol), 0-(7-azabenzotriazol-l-il)-N.N,N'.N'-tetrametiluronijum fosforheksafluorida (HATU, 108 mg, 0.28 mmol), DIPEA (0.073 mL, 0.42 mmol) i 4-dimetilaminopiridina (2 mg) u dihlorometanu (5 mL) mešan je na 40°C u trajanju od 1 časa. Reakcioni rastvor je razblažen sa vodenim zasićenim rastvorom NaHCOj, i ekstrahovan sa EtOAc. Kombinovani EtOAc sloj je ispran vodom, fiziološkim rastvorom, sušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen .,flash" hromatografijom eluiranjem sa 3% MeOH/CH2Cl2, da bi se dobio (5R,7S.10S)-10-tor-butil-/V-((lR.2S)-l-{[(ciklopropilsulfonil)amino]karbonil} -2-vinilciklopropil)-15,15-dimetil-3,9,12-triokso-1,6,7,9,10,11,12,14,15,16-dekahidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,l 3.2,8,11-benzodioksatriaza cikloikozin-7-karboksamid (80 mg, 57% prinos).<*>H NMR (400 MHz, ppm, CDC13) 5 7.48 (s, 1 H). 7.23 (s, 1 H). 7.12 (d, 1 H), 6.23 (d, ./= 15.9 Hz, 1 H), 5.94 (m, 1 H), 5.76 (m. 1 H), 5.50 (m, 2 H), 5.43 (s, 1 H), 5.24 (d,J=16.6 Hz, 1 H). 5.11 (d, 1 H), 4.70 (s, 2 H), 4.61 (d, 1 H), 4.48 (m, 3 H), 4.35 (d, 1 H), 4.14 (d, 1 H), 3.74 (d, 1 H), 3.34 (d, 1 H), 2.89 (m, 1 H), 2.43 (dd, 2 H), 2.06 (m, 1 H), 1.93 (m. I H), 1.89 (dd, 1 H), 1.43 (d, 1 H), 1.25 (m, 3 H), 1.09 (s, 3 H), 1.06 (s, 9 H), 0.86 (s, 3 H). LRMS (ESI)mlz740 [(M+H)<+>; izrač. za C37H50N5O9S: 740].

PRIMER 4

( 5R, 7Sa0S) 40-/ grc- Butil-/ V-(( lRaS)- l-{|( cikloproDilsulfoniI) amino| karboniU- 2

vinilciklopropil)- 3, 942- triokso- 6^^

dimetano- 4, 13, 2, 841- benzodioksatriazaciklohenikozin- 7- karboksamid ( HI- 12)

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema postupku koji je korišćen za PRIMER 3 sa tom razlikom što je 3-metil-A<T->((heks-5-eniloksi)karbonil]-L-valin (pripremljen prema postupku koji je dat u daljem tekstu) korišćen umesto A</->{[(2,2-dimetilpent-4-enil)oksi]karbonil}-3-metil-L-valina u Koraku 7.<]>H NMR (500 MHz, ppm, CD3OD) 5 9.13 (s, 1 H), 7.26 (t, 1 H), 7.23 (d, 1 H), 7.16 (d, 1 H), 6.39 (d.J =16.4 Hz, 1 H). 6.08 (m, III), 5.76 (m, 1 H), 5.38 (s, 1 H), 5.29 (d, 1 H), 5.12 (d, 1 H), 4.79 (d. 1 H), 4.73 - 4.63 (m, 4 H), 4.41 (s, 1 H), 4.37 (q, 1 H), 4.24 (d, 1 H). 3.96 (dd, 1 H), 3.77 (kvin.. 1 H), 2.94 (m. 1 H), 2.51

(q, 1 H), 2.29 - 2.13 (m, 4 H), 1.87 (dd, 1 H), 1.68 (m, 2 H), 1.53 (kvin., 2 H), 1.44 (dd, 1 H), 1.25 (m, 2 H), 1.05 (s, 9 H). LRMS (ESI)mlz726 [(M+H)<+>; izrač. za C36H48Ns09S: 726].

PRIMER 5

( 5RJSa0S) q0- Butil- A^-(( lR, 2S)- 14f( ciklopropilsulfonil) aminolkarbonin- 2-

vinilciklopropin- 3, 9a2- triokso- 6J, 940qiJ2, 14J5, 16, 17- dekahidro- lH, 5H- 2, 23:5, 8-

dimetano- 4, 13, 2, 8, 1 l- benzodioksatriazaciklohenikozin- 7- karboksaniid ( IH- 133)

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema postupku koji je korišćen za PRIMER 3 sa tom razlikom što je 3-metil-7v'-[(heks-5-eniloksi)karbonil]-L-norleucin (pripremljen prema postupku koji je dat u daljem tekstu) korišćen umesto jV-{[(2,2-dimetilpent-4-enil)oksi]karbonil}-3-metil-L-valina u Koraku 7. 'H NMR (500 MHz, ppm. CD3OD) 8 7.24 (t, 1 H), 7.23 (d, 1 H), 7.15 (d, 1 H), 6.91 (d, 1 H), 6.37(d, J =16.1 Hz, 1 H), 6.07 (m, IH), 5.75 (m, 1 H), 5.39 (s, 1 II), 5.29 (d, 1 II), 5.12 (d, 1 H), 4.77 (d, 1 H). 4.66 (m, 3 H), 4.57 (m, 1 H), 4.47 (q, 1 H), 4.39 (q, 1 H), 4.27 (d, 1 H), 3.90 (dd, 1 H), 3.77 (kvin., 1 H), 2.96 (m, 1 H), 2.49 (q, 1 H), 2.29 (m, 1 H), 2.22 (m, 3 H). 1.88 (dd. 1 H), 1.75 (m, 2 H), 1.64 (m, 2 H), 1.52 (m, 2 H), 1.39 (m, 5 H), 1.27 (m, 1 H), 1.18 (m, 1 H). 1.09 (m, 2 H), 0.94 (t, 3 H). LRMS (ESI)m/ z726 [(M+H)<+>; izrač. za C36H48N509S: 726].

PRIMER 6

( 5R, 7S, 10S)- 10- Butil- 7V-( qR, 2S)- l-{[( ciklopropiIsulfonil) amino| karboniI}- 2-

viniIcvlopropU)- 3, 9a2- triokso- l, 6, 7, 9a0Jia2, 14q5, 1647a8- dodekahidro- 5H- 2, 24:5, 8-

dimetano- 4, l312, 8, ll- benzodioksatriazaciklodokozin- 7- karboksamid ( III- 198)

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema postupku koji je korišćen za PRIMER 3 sa tom razlikom što je A</->[(hept-6-en-l-iloksi)karbonil]-L-norleucin (pripremljen prema postupku koji je dat u daljem tekstu) korišćen umesto 7V-{[(2,2-dimetilpent-4-enil)oksi]karbonil}-3-metil-L-valina u Koraku 7. 'H NMR (500 MHz, ppm, CD3OD) 5 9.26 (s, l H), 7.39 (d, l H), 7.24 (t, l H), 7.15 (d, 1 H), 6.30 (d,J=15.9 Hz, 1 H), 6.20 (m, III), 5.75 (m, 1 H), 5.53 (s, 1 H), 5.31 (d, 1 li), 5.12 (d, 1 H), 4.70 (m, 4 H), 4.43 (dd. 1 H), 4.34 (m, 2 H), 4.27 (q, 1 H), 3.91 (dd, 1 H), 3.79 (kvin., 1 H), 3.31 (m, 1 II), 2.97 (m, 1 H), 2.31 (m, 1 H), 2.22 (m, 3 H), 1.89 (dd, 1 H), 1.74 (m, 2 H). 1.66 (m. 1 H), 1.56 (m. 3 H). 1.38 (m. 8 H), 1.19 (m, 1 H), 1.09 (m, 2 H), 0.94 (t. 3 H). LRMS (ESI)mlz740 [(M+H)~: izrač. za C37H50N5O9S: 740].

PRIMER 7

( 5RJSJ0S)- 10- fe;- c- ButU- Ai( aRq^^

vinilcikIopropil)- 15a5- dimetil- 3, 9a2- tiokso- 6, 7, 9J0aia2a4, 15a6, 17- dekahidro-

lH, 5H- 2, 23:5, 8- dimetano- 4a3, 2, 8ai- benzodioksatriazaciklohenikozin- 7- karboksaniid

( III- 199)

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema postupku koji je korišćen za PRIMER 3 sa tom razlikom što je A-{[(2,2-dimetilheks-5-enil)oksijkarbonil}-3-metil-L-valin (pripremljen prema postupku koji je dat u daljem tekstu) korišćen umesto A<r->{[(2,2-dimetilpent-4-enil)oksi]karbonil}-3-metil-L-valina u Koraku 7. 'li NMR (500 MHz, ppm, CD3OD) 5 9.17 (s, 1 H), 7.27 (t,./ = 7.5 Hz. 1 H), 7.21 (t,./= 7.5 Hz, 2 II). 7.16(d, J=7.5 Hz, 1 H), 6.38 (d, ./= 16 Hz, 1 II), 6.03 (m. 1 H), 5.79 (m, 1 H), 5.32 (m, 2 H), 5.13 (m, 1 H), 4.82-4.77 (m, 1 H), 4.73-4.61 (m, 4 H), 4.48 (s, 1 H), 4.39 (m, 1 H). 4.19 (d.J=12 Hz, 1 H), 3.96 (m, 1 H), 2.96 (m, 1 H), 2.59-2.55 (m, 1 H), 2.35-2.12 (m, 4 H), 1.89 (m, 1 H), 1.49-1.23 (m, 6 H), 1.51-0.98 (m, 14 H), 0.95-0.85 (m, 4 H). LRMS (ESI)mlz754 [(M+H)<4>; izrač. za C38H52N5O9S: 754]. PRIMER 8 ( 5RJ5aOSHO- ferc- Butil- AMQR2R)- Mf( ciM^ etilcikloDropil)- 3, 9a2- triokso- l, 6J, 9aoaia2a4a5a6J7a8- dodekahidro- 5H- 2, 22:5, 8-dimetano- 4a3, 2, 8a 1 - benzodioksatriazacikIoikozin- 7- karboksamid ( III- 200)

Rastvor PRIMERA 2 (0.32 mg, 0.45 mmol) i paladijuma na uglju (10% tež., 0.03 g) u EtOAc (10 mL) snažno je mešan pod balonom vodonika u trajanju od 1 časa. Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana. Ostatak je prečišćen reverzno-faznom HPLC (DeltaPak Cl8 kolona), sa 40-65% CH3CN u vodi (sa NH4OAc 1 g/L). Frakcije su koncentrovane, razblažene vodenim zasićenim rastvorom NaHC03(20 mL) i ekstrahovane sa CFLCL (3 x 70 mL). Kombinovani CILCL slojevi su isprani vodom (50 mL), sušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani da bi se dobio (5R,7S,10S)-10-/erc-butil-A-((lR,2R)-l-([(ciklopropilsulfonil) amino]karbonil}-2-etilciklopropil)-3,9.12-triokso-1,6,7,9,10,11,12,14,15,16,17,18-dodekahidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,l 3,2,8.1 l-benzodioksatriazacikloikozin-7-karboksamid (0.31 g, 97% prinos). 'H NMR (CD3OD ppm) 0" 7.23 (t, 1 H), 7.14 (d, 1 H), 7.10 (d, 1 H). 7.02 (d, 1 H), 5.52 (s, IH), 4.74 - 4.60 (m, 4 H), 4.48 - 4.30 (m, 4 H), 3.88 (d, 1 H), 3.75 (s, IH), 2.99 (m, 1 H), 2.62 (m, 1 H), 2.41 (m, 2 H), 2.14 (m. IH), 1.79 (m, 1 H), 1.65 - 1.51 (m, 6 H), 1.47-1.19 (m, 5 H), 1.07 (s, 9 H), 0.99 (t, 3 H). LRMS (ESI)mlz716 [(M+H)<+>; izrač. za C35H50N5O9S: 716].

PRIMER 9

( 5RJSqOS)- 10- fe/- c- Butil- AMaR, 2RH^

etilciklopropil)- 3, 9a2- triokso- 6J, 9a0ai42a4J5a6a74849- dodekahidrQ- lH, 5H-2, 23:5, 8- dimetano- 4, 13, 2, 8a 1 - benzodioksatriazaciklohenikozin- 7- karboksamid ( III- 201)

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno od PRIMERA 4 primenom postupka koji je opisan za PRIMER 8. 'H NMR (500 MHz, ppm, CD3OD) S 7.23 (t, 1 H), 7.14 (d, 1 H), 7.10 (d, 1 II), 7.02 (d, 1 H), 5.36 (s, 1 H), 4.71 (m, 3 H), 4.64 (t, 1 H), 4.56 (m, 1 H). 4.40 (m, 2 H), 4.24 (d, 1 H), 3.96 (dd, 1 H), 3.72 (kvin.. I H), 2.98 (m, 1 H), 2.58 (m, 1 H), 2.49 (m, 2 II), 2.15 (t, 1 H), 1.69 -1.19 (m, 15 H), 1.09 (m, 1 H), 1.06 (s, 9 H), 0.98 (t, 3 H). LRMS (ESI)mlz730 [(M+H)<+>; izrač. za C^H^NjOgS: 730].

PRIMER 10

( 5R, 7S, 10S)- 10- Butil-/ V-(( lR, 2R)- l -{ KciklopropilsulfoniDamino] karboniI)- 2-

etilciklopropil)- 3, 9a2- triokso- 6J, 9aoaia2a4a5a6a7a8a9- dodekahidro- lH, 5H-2, 23:5, 8- dimetano- 4a3, 2, 8al- benzodioksatriazaciklohenikozin- 7- karboksamid( 111- 202)

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno od PRIMERA 5 primenom postupka koji je opisan za PRIMER 8.<*>H NMR (500 MHz, ppm, CD3OD 5 7.23 (t, 1 H), 7.14 (d, 1 H), 7.09 (d, 1 H), 6.99 (d, 1 H), 5.39 (s, 1 H), 4.76 - 4.61 (m, 4 II), 4.43 (m, 3 H). 4.29 (d. 1 11), 3.92

(dd, 1 H), 3.69 (kvin., 1 H), 2.99 (ni. 1 H), 2.57 (m, 1 H), 2.51 (m, 2 H), 2.19 (tt, 1 H), 1.77 (m, 1 H), 1.70 -1.30 (m, 20 H), 1.17 (m, 2 H), 1.10 (m, 2 H), 0.99 (t, 3 H). 0.95 (t, 3 H). LRMS (ESI)mlz730 [(M+H)<+>; izrač. za C36H57N509S: 730].

PRIMER 11

( 5R, 7S, 10S)- 10- Butil-/ V-(( lR, 2R)- l-{ r( ciklopropiIsulfonil) amino1karbonin- 2-

etilciklopropin- 3, 9, 12- triokso- l, 6, 7, 9, 10, ll, 12, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20- tetradecihidro-^

2, 24:5, 8- dimetano- 4, 13, 2, 8, ll- benzodioksatriazaciklodokozin- 7- karboksatnid ( III- 2031

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno od PRIMERA 6 primenom postupka koji je opisan za PRIMER 8. 'H NMR (500 MHz, ppm. CD3OD) 5 7.2 (t. 1 H), 7.15 (d, 1 H), 7.11 (d, 1 H), 5.55 (s, 1 H), 4.70 (m, 4 H). 4.49 (m, 1 H), 4.38 (t, 1 H), 4.29 (m, 2 H), 3.94 (dd. 1 H), 3.73 (kvin., 1 H), 3.00 (m, 1 H), 2.63 (kvin., 1 H), 2.51 (m, 1 H), 2.38 (m, 1 H), 2.20 (tt, 1 H), 1.76 (kvin., 1 H), 1.68 - 1.07 (m, 24 H), 1.00 (t, 3 H), 0.95 (t, 3 H). LRMS (ESI)mlz 744[(M+H)<+>; izrač. za C37H54N5O9S: 744].

PRIMER 12

( 5RJSqOS)- 10- fgrc- Butil- N-(( lR, 2R)- 14{( cikloDropilsulfonil) aminolkarbonil}- 2-

etilciklopropin45a5- dimetil- 3, 9a2- triokso- l, 6J, 9JQai42, 14, 15a6, 17, 18- dodekahidro-5H- 2, 22:5, 8- dimetano- 4, 13, 2, 8, ll- bcnzodioksatriazacikloikozin- 7- karboksamid ( 111- 204)

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno od PRIMERA 3 primenom postupka koji je opisan za PRIMER 8.<[>H NMR (400 MHz, ppm, CD3OD) 5 9.06 (s, 1 H), 7.22 (dd, 1 H), 7.13 (d, 1 H), 7.07 (d, 1 H), 5.51 (s, 1 H), 4.72 (d, 2 H), 4.68 (d, 2 H), 4.44 (d. 2 H), 4.28 (m, 2 H), 3.87 (dd, 1 H), 3.28 (m, 1 H). 2.98 (d, 1 H), 2.85 (m, 3 H), 2.52 (m, 1 H), 2.43 (m, 2 H), 2.15 (m. 1 H), 1.15-1.17 (m, 3 H), 1.41 (m, 2 H), 1.30 (m, 1 H), 1.21 (m, 4 H), 1.08 (m, 1 H), 1.06 (s, 3 H), 1.05 (s, 9 H), 0.98 (t, 3 H), 0.81 (s. 3 H). LRMS (ESI)mlz744 [(M+H)<+>; izrač. za C37H54N5O9S: 744].

PRIMER 13

( 5R, 7S, 10S)- 10-/ g/- c- Butil- A^-(( lR, 2R)- l-{[( ciklopropilsulfoninaminolkarboniU- 2-

etilciklQpropin- 15, 15- dimetil- 3, 9, 12- triokso- 6, 7<9, 10, ll, 12;l4a5, 16a 7, 18, 19-

dodekahidro- 1 H, 5H- 2, 23:5, 8- dimetano- 4, 13, 2, 8a 1 - benzodioksatriazaciklohenikozin- 7-

karboksamid ( III- 205)

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno od PRIMERA 7 primenom postupka koji je opisan za PRIMER 8. 'H NMR (500 MHz, ppm, CD3OD 5 9.09 (s, 1 H), 7.24 (t,J=7.5 Hz, 1 H), 7.15 (d,J=7.5 Hz, 1 H), 7.10 (d,J=7.5 Hz, 1 H). 5.53 (s, 1 H), 4.75 - 4.59 (m, 4 H), 4.44 . 4.37 (m, 3 H), 4.20 (d, ./= 12 Hz, 1 H). 3.95 - 3.91 (m, 1 H), 3.31 (m, 2 H), 2.99 - 2.96 (m, 1 H), 2.62 - 2.46 (m, 3 H), 2.17 - 2.13 (m, 1 H), 1.67 - 1.50 (m, 6 H), 1.37 - 1.18 (m, 7 H), 1.15 - 0.96 (m, 16 H), 0.80 (s, 3 H). LRMS (ESI)m/ z758 [(M+H)<+>; izrač. za C^H^N^S: 758].

Alternativna priprema:

Korak 1: l- Bromo- 2, 3- bis( bromometil) benzen

U suspenziju 3-bromo-o-ksilena (999 g. 5.40 mol) u hlorobenzenu (9 L) na sobnoj temperaturi dodat je /V-bromosukcinimid (1620 g, 9.1 mol) i benzoil peroksid (2.6 g. 10.8 mmol). Reakciona smeša je zagrevana do 80°C i mešana pod azotom 18 časova. Reakciona smeša je hlađena do 70°C i dodat je još jedan deo NBS (302 g, 1.7 mol). Reakciona smeša je zagrevana do 80°C i mešana pod azotom 22 časa. Reakciona smeša je hlađena do sobne tenperature, razblažena heptanom (6 L) i filtrirana. Filterski kolač je ispran sa heptanom (4 L) i kombinovani filtrati su isparavani. Sirovi proizvod je rastvoren u heptanu (2 L) i hloroformu (200 mL) i filtriran kroz bazni aluminijum trioksid (500 g). Čep od aluminijum trioksida je ispran heptanom (4 L) i spojeni filtrati su isparavani da bi se dobio l-bromo-2,3-bis(bromometil)benzen (1760 g, sirova težina) koji je korišćen bez dodatnog prečišćavanja.

'H NMR (CDCI3) 5 (ppm) 7.56 (d,J =8.0 Hz, 1 H), 7.31 (d,J=8.0 Hz, 1 H), 7.26 (s, 1 H), 7.16 (t,J=8.0 Hz, 1 H), 4.84 (s, 2 H), 4.64 (s, 2 H).

Korak 2: 2- Benzil- 4- bromoizoindolin hidrohlorid

Kalijum bikarbonat (657 g, 6.56 mol) je suspendovan u MeCN (17 L) i smeša je zagrevana do 80°C. Rastvori sirovog l-bromo-2,3-bis(bromometil)benzena (900 g, 2.63 mol u 1 L MeCN) i benzilamina (281 g, 2.63 mol u 1 L MeCN) dodati su istovremeno preko levaka za dodavanje u toku 2 časa. Reakciona smeša je mešana na 77°C u trajanju od 2 časa i zatim hlađena do sobne temperature i mešana 16 časova. Sadržaj reakcione posude je hlađen, filtriran i rastvarač je uklonjen isparavanjem. Reakcija je podeljena između vode (6 L) i EtOAc (2 L). pH vrednost je podešena do pH >9 dodavanjem IM K2CO3, slojevi su razdvojeni i vodena faza je ekstrahovana sa dodatnim delom EtOAc (2 L). Spojene organske materije su isprane fiziološkim rastvorom, sušene anhidrovanim Na2S04, filtrirane i isparavane. Sirovo ulje je razblaženo sa EtOH (300 mL) i hlađeno do 0°C. Metanolski HC1 je dodavan sve dok smeša nije postala kisela, a zatim je dodat i MTBE (700 mL) i smeša je obrađena ultrazvukom, zatim je mešana 15 časova. Dodat je MTBE (1 L) i smeša je filtrirana i isprana sa 20% EtOH u MTBE i zatim sa MTBE. Čvrsta supstanca je sušena na vazduhu da bi se dobio 2-benzil-4-bromoizoindolin hidrohlorid (211 g). Dodatni deo proizvoda (86 g) je izolovan koncentrovanjem matičnih tečnosti. LRMS (ESI)mlz289 [(M+H)<f>; izrač. za C,5H,5BrN: 289].

Korak 3: 4- Bromoizoindolin

U rastvor 2-benzil-4-bromoizoindolin hidrohlorida (11 g. 30.96 mmol) u 200 mL EtOAc dodat je IM NaOH (100 mL) i smeša je mešana 30 min. Organski sloj je odvojen, ispran fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog Na2S04i rastvarač je isparavan do ulja koje je pretvoreno u azeotrop jednom sa toluenom (50 mL). Ulje je rastvoreno u hlorobenzenu (50 mL) i u mešani rastvor su dodate 4A molekularne rešetke (5 g). Posle 10 min, ukapavanjem je dodavan l-hloroetilhlorofomiijat (5.6 mL, 51 mmol) tokom 5 min. Reakciona smeša je zatim zagrevana do 90°C u trajanju od 2 časa, hlađena do sobne temperature i filtrirana. Čvrste supstance su isprane hlorobenzenom (5 mL) i metanolom (40 mL). Filtrat je zagrevan do 70°C 1 čas, ostavljen da se hladi i mešan na sobnoj temperaturi preko noći. Čvrste supstance su filtrirane, isprane hlorobenzenom (2 mL) i heksanom i sušene da bi se dobilo 6.84 g jedinjenja iz naslova. LRMS (ESI)mlz198.1 [(M+H)<+>; izrač. za C8H9BrN: 198.0].

Korak 4: 1- t- Butil 2- metil QS, 4R)- 4-{ l( 4- bromo- 13- dmidro- 2H- izoindol- 2-

il) karbonil| oksi} pirolidin- l, 2- dikarboksilat

U rastvor (2S,4R)-BOC-4-hidroksiprolin metil estra (126.3 g, 515 mmol) u DMF (960 mL) na 0°C dodat je N,N'-karbonildiimidazol (83.51 g, 515 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 3 časa. Dodati su 4-bromoizoindolin hidrohlorid (120 g, 515 mmol) i diizopropiletilamin (96.3 mL, 540 mmol) i reakciona smeša je je zagrevana do 50°C 6 časova i zatim je ostavljena da se hladi do sobne temperature i mešana preko noći. Reakciona smeša je podeljena između EtOAc (3 L) i 10% vodenog rastvora KHSO4(6 L), vodeni sloj je ponovo ekstrahovan sa EtOAc (2 L) i spojene organske faze su isprane sa 10% vodenim rastvorom NaHC03, fiziološkim rastvorom, sušene preko Na2S04i rastvarač je isparavan do pene (239 g). LRMS (ESI)mlz471.0 [(M+H)<+>; izrač. za C2oH26BrN206: 471.1].

Korak 5: 1- t- Butil 2- metil ( 2S, 4R)- 4-|[( 4- vinil- l, 3- dihidro- 2H- izoindol- 2-

il) karbonilloksi} pirolidin- l, 2- dikarboksilat

U rastvor 1-t-butil 2-metil (2S,4R)-4-{[(4-bromo-l,3-dihidro-2H-izoindol-2-il)karbouil]oksi}pirolidin-l,2-dikarboksilata (10.0 g, 21.3 mmol) u etanolu (200 mL) dodat je kalijum viniltrifluoroborat (4.28 g, 32 mmol) i trietilamin (4.5 mL, 32 mmol), a zatim dihloro[l,l-bis(difenilfosfino)ferocen]paladijum (II) hlorid dihlorometanski adukt (175 mg, 0.21 mmol). Reakciona smeša je zagrevana do refluksa 6 časova, hlađena do sobne temperature, razblažena sa 10% vodenim rastvorom KHSO4i etanol je uklonjen isparavanjemin vacuo.Vodeni ostatak je ekstrahovan sa EtOAc i organska faza je isprana fiziološkim rastvorom, sušena preko Na2S04, rastvarač je isparavan i sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silicijum dioksidu eluiranjcm sa 40-60% EtOAc/heksanom da bi se posle isparavanja dobilo jedinjenje iz naslova (8.18 g). LRMS (ESI)m/ z417.2 [(M+H)<1>; izrač. za C22H29N206: 417.2].

Korak 6: ( 3i?, 55)- 5-( Metoksikarbonil) pirolidin- 3- 14- vinil- l , 3- dihidro- 2//izoindol- 2- karboksilat hidrohlorid

Smeša 1-t-butil 2-metil (2S.4R)-4-([(4-vinil-l,3-dihidro-2H-izoindoI-2-il)karbonil]oksi}pirolidin-1.2-dikarboksilata (18.0 g. 43.2 mmol) i HCl/dioksana (4 M) (43.2 mL, 173 mmol) mešana je na sobnoj temperaturi 2 časa. Reakciona smeša je koncentrovana da bi se uklonio dioksan, nakon čega sledi koncentrovanje iz Et20 da bi se dobio(3/?. 5S)- S-(metoksikarbonil)pirolidin-3-il 4-vinil-l,3-dihidro-2//-izoindol-2-karboksilat hidrohlorid kao prljavo bela čvrsta supstanca (15 g) koja je korišćena bez dodatnog prečišćavanja. LRMS (ESI)mlz317 [(M+H)<+>; izrač. za C17H21N2O4: 317].

Korak 7: Metil AMT( 2, 2- dimetilheks- 5- en- l- tl) oksilkarbo^

4-{[( 4- viniM, 3- dihidro- 2^- izoindol- 2- il) karbonil] oksi}- L- prolinat

U rastvor (3/?.55)-5-(metoksikarbonil)pirolidin-3-iI 4-vinil-l,3-dihidro-2//-izoindol-2-karboksilat hidrohlorida (5.0 g, 14.2 mmol) i A-{[(2,2-dimetilheks-5-enil)oksi]karbonil}-3-metil-L-valina (4.0 g, 14.2 mmol) u DMF (20 ml) na sobnoj temperaturi dodat je DIPEA (2.5 mL, 14.2 mmol), EDC (5.5 g, 28.4 mmol) i HOAt (1.9 g, 14.2 mmol). Posle 18 časova reakciona smeša je sipana u Et20, i ekstrahovana sa 1 N HC1. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc, i spojeni organski slojevi su isprani sa 1 N HC1, vodom, NaHC03i fiziološkim rastvorom. Organski sloj je sušen preko MgS04i rastvarač je uklonjenin vacuo.Sirovi proizvod je prečišćen na silicijum dioksidu (30% EtOAc u heksanima) da bi se dobilo 4.2 g jedinjenja iz naslova kao gusto ulje. LRMS (ESI)m/ z584.4 [(M+H)<+>; izrač. za C32H|6N307: 584.3].

Korak 8: Metil ( 5j?, 7>Sa0Sa8g)- 10- ferc- butil- 15, 15- dimetiI- 3, 9, 12- triokso-6, 7, 9, 10, ll, 12, 14, 15, 16, 17- dekahidro- l/ f, S//- 2, 23:5, 8- dimetano- 4a3, 2, 8Jl-

benzodioksatriazaciklohenikozin- 7- karboksilat

U rastvor metil 7vT-{[(2,2-dimetilheks-5-ei>l-il)oksi]karbonil}-3-metil-L-valil-(47?)-4-([(4-vinil-l,3-dihidro-2/f-izoindol-2-il)karbonil]oksi}-L-prolinata (4.7 g, 8.05 mmol) u degaziranom (propuštanje mehurića azota u trajanju od 30 min) DCM (1410 mL) dodat je Zhan 1B katalizator (Zhan katalizator 1B, RC-303, Zannan Pharma Ltd.) (0.591 g, 0.805 mmol). Smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi pod atmosferom N2. Posle 19 časova, reakcija je završena i dodat je DMSO (57 uL, 0.805 mmol). Smeša je mešana 2 časa i smeša je koncentrovanain vacuodo -70 mL. Sirovi proizvod je zatim direktno prečišćen na silicijum dioksidu (eluiranje gradijentom, 0-50% EtOAc u heksanima) da bi se dobilo 4.4 g jedinjenja iz naslova kao ulje. LRMS (ESI)mlz556.3 [(M+H)"; izrač. za C30H42N3O7: 556.3].

Korak 9: Metil t5/ ?, 7^, 10^)- 10-^ rc- butil- 15q5- dimetil- 3, 9, 12- triokso-6, 7, 9, 10, 1 ia2a4, 15, 16, 17, 18, 19- dodekahidro- l//, 5jy- 2, 23:5, 8- dimetano- 4, 13, 2, 8ai-

benzodioksatriazaciklohenikozin- 7- karboksilat

U rastvor metil( 5RJS, 105.18£)-10-tere-butil-15,15-dimetil-3,9.12-triokso-6.7,9,10,1 L12,14.15,16,17-dekahidro-l//,5//-2.23:5,8-dimetano-4.13.2,8,ll-

benzodioksatriazaciklohenikozin-7-karboksilata (4.4 g, 7.92 mmol) u EtOAc (79 mL) dodat je

PaVC (0.421 g, 0.396 mmol). Balon H?je zatim postavljen na reakcionu posudu. Posuda je brzo ispražnjena i napunjena sa H2. Posle 17 časova, reakcija je završena kao što je određeno pomoću LC-MS. Pd/C je filtriran kroz staklenu vunu, i sirovi proizvod je prečišćen na silicijum dioksidu (eluiranje gradijent, 0-60% EtOAc u heksanima) da bi se dobilo 4.01 g jedinjenja iz naslova kao beli prašak. LRMS (ESI)mlz558.4 f(M+H)<+>; izrač. za C30H44N3O7: 558.3].

Korak 10: ( 5j?J5, q0il- 10- ferc- Butil- 15J5- dimetil- 3, 9, 12- triokso- 6, 7, 9, 10, llJ2,

14, 15, 16, 17, 18, 19- dodekahidro- l / y, 5/ 7- 2, 23:5. 8- dimetano- 4, l 3, 2, 8, 11-benzodioksatriazaciklohenikozin- 7- karbonska kiselina

U rastvor metil (5^,75,10^-10-/e/x-butil-15,15-dimetil-3,9,12-triokso-6,7,9.10,l1,12,

14,15,16,17,18,19-dodekahidro-1 H. 5H- 2, 23:5,8-dimetano-4,13,2,8,11 -benzodioksatriaza

ciklohenikozin-7-karboksilata (5.76 g, 10.33 mmol) u THF (41.3 mL), MeOH (41.3 mL) i vodi (20.7 mL) na sobnoj temperaturi dodat je LiOH (4.33 g, 103 mmol). Posle potpune konverzije (45 min), što je određeno preko LC-MS, reakcija je obrađena podelom između Et20 i IN HC1. Vodeni sloj je zatim ekstrahovan sa EtOAc. Spojeni organski slojevi su sušeni preko MgS04i rastvarač je uklonjenin vacuoda bi se dobilo 5.53 g jedinjenja iz naslova, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. LRMS (ESI)mlz544.4 [(M+H)<+>; izrač. za C29H42N3O7: 544.3].

Korak11: ( 5RJSaOS)- 10- ferc- ButiI- A-(( iR, 2RVl-{ r( ciklopropiIsulfoni1) aininol

karbonilV2- etilciklopropin- 15^^

dodekahidro- lH, 5H- 2, 23:5, 8- đimctano- 443, 2, 8ai- ben2odioksatriazaciklohenikozin- 7-

karboksamid ( 111- 205)

U rastvor (5^J5,105)-10-tor-Butil-15J5-dimetil-3,9,12-triokso-6,7,9,10,l 1,12, 14.15.16.17,18,19-dodekahidro-1/7,5/7-2,23:5,8-dimetano-4,13,2,8.11 -benzodioksatriaza ciklohenikozin-7-karbonske kiseline (5.53 g. 10.17 mmol) i(1 R, 2R)-\- amino- N-(ciklopropilsulfonil)-2-etilciklopropankarboksamid hidrohlorida (3.28 g, 12.21 mmol) u DMF (50.9 mL) dodat je DIPEA (7.11 ml, 40.7 mmol) i HATU (5.03 g, 13.22 mmol). Posle potpune konverzije (1 čas), reakciona smeša je podeljena između EtOAc i IN HC1. Organski sloj je ispran fiziološkim rastvorom tri puta, sušen preko MgS04, i rastvarač je uklonjenin vacuo.Sirovi materijal je zatim prečišćen na silicijum dioksidu (eluiranje gradijentom, 20-80% EtOAc u heksanima) da bi se dobilo 5.8 g jedinjenja iz naslova kao beli prašak.

PRIMER 14

( 5RJS, 10S)- 10- rgrc- ButikV-(( lR, 2S)- l-{ f( ciklopropilsulfonil) aminoikarboniI}- 2-

viniIcikIopropil)- 3, 9, 12- triokso- l, 6, 7, 9, 10, ll, 12, 14J5, 16, 17J8- dodekahidro- 5H- 2, 22:5, 8-

dimetano- 4, 13, 2, 8tll- benzodioksatriazacikloikozin- 7- karboksamid ( III- 5)

Korak 1: Metil ( 5R. 7Sa0S)- 10- efrc- butil- 3, 9J2- triokso- l, 6, 7, 9J0, lia2, 14J5, 16-dekahidro- 5H- 2<22:5, 8- dimetano- 4, 13, 2, 8, ll- benzodioksatriazacikloikozin- 7- karboksiIat

Metil (5R,7S, 1 OS)-10-^rc-butil-3,9,12-triokso-1,6,7,9,10.11,12,14.15,16-dekahidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,1 l-benzodioksatriazacikloikozin-7-karboksilat je pripremljen prema postupku koji je korišćen za metil (5R,7S,10S)-10-/ć'7x'-butil-15,15-dimetil-3,9,12-triokso-l,6,7,9,10,ll,12,14,15,16-dekahidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,ll-benzodioksatriazacikloikozin-7-karboksilat (PRIMER 3, Korak 8) sa tom razlikom što je 3-metil-A,-[(pent-4-eniloksi)karbonil]-L-valin (pripremljen prema postupku koji je dat u daljem tekstu) korišćen umesto A-{[(2,2-dimetilpent-4-enil)oksi]karbonil}-3-metil-L-valina u Koraku 7. LRMS (ESI)mlz514 [(M+H)<+>; izrač. za C27H36N307: 514].

Korak 2: Metil ( 5R, 75, 10S)- 10- rg/ c- butil- 3, 9, 12- triokso- l, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 14, 15,

16, 17, 18- dodekahidro- 5H- 2, 22:5, 8- dimetano- 4, 13, 2, 8, ll- benzodioksatriazacikloikozin- 7-

karboksilat

U rastvor metil (5R,7S,10S)-10-/e/r-butil-3,9,12-triokso-l,6,7,9,10,l 1,12. 14,15,16,17,18-dodekahidro-5H-2.22:5,8-dimetano-4,13,2,8.11 -benzodioksatriazacikloikozin-7-karboksilata (0.10 g, 0.20 mmol) u etil acetatu (7 mL) dodat je 10% paladijum na uglju (0.01 g). Reakciona smeša je mešana pod balonom vodonika u trajanju od 5 časova na sobnoj temperaturi. Sadržaj reakcione posude je filtriran kroz celit i filtrat je isparavati. Sirovi proizvod je korišćen bez dodatnog prečišćavanja (0.09g, 90% prinos). LRMS (ESI)mlz516 [(M+H)<+>; izrač. za C27H38N3O7: 516].

Korak 3: ( SRJSgOSVlO- fgrc- Butil- A^- dlR^ SVl- IKciklopropilsulfoniDaminol

karboni]}- 2- vinilcikJopropin- 3, 9J2- triokso- L6J, 9, lQqiq2a4a5J6J7, 18- dodekahidro-5H- 2, 22:5, 8- dimetano- 4113, 2, 8, ll- benzodioksatriazacikloikozin- 7- karboksamid

U rastvor metil (5R.7S,10S)-10-/f?rc-butil-3,9,l2-triokso-1,6,7,9,10,11.12, 14,15,16,17,18-dodekahidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2.8,11-benzodioksatriazacikloikozin-7-karboksilata (90 mg, 0.18 mmol) u THF (2 mL) i MeOH (0.5 mL), dodat je LiOH (IN 1.75 mL, 1.75 mmol). Reakciona smeša je zagrevana do 40°C i mešana 1 čas, kada je pomoću LC-MS zabeleženo potpuna potrošnja metil estarskog početnog materijala. Smeša je zatim obrađena sa 0.5 N HCI i EtOAc. Organski sloj je zatim sušen preko K2CO3, i rastvarač je uklonjenin vacuo.Sirovi proizvod je sipan u DMF (1 mL).

U prethodno navedeni rastvor dodat je (lR.2S)-l-{[(ciklopropilsulfoniI)amino] karbonil}-2-vinilciklopropanaminijum hlorid (51 mg, 0.19 mmol), TBTU (77 mg, 0.24 mmol) i DIPEA (0.07 mL, 0.40 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 časa. Reakciona smeša je direktno prečišćena pomoću reverzno fazne HPLC da bi se dobio (5R,7S, 1 OS)-10-terc-butil-#-(( 1 R.2S)-1 - {[(ciklopropilsulfonil)amino]karbonil} -2-vinilciklopropil)-3,9,12-triokso-1,6,7,9,10,11,12,14.15,16,17,18-dodekahidro-5H-2,22:5.8-dimetano-4,13,2,8,1 l-benzodioksatriazacikloikozin-7-karboksamid (34 mg, 28% prinos), 'fl NMR (500 MHz, ppm, CD3OD) S 9.14 (s, 1 H), 7.23 (t, 1 H), 7.13 (d, 1 H). 7.10 (d, 1 H), 5.75 (kvin., IH), 5.53 (s. 1 H), 5.29 (d, 1 H), 5.12 (d, IH). 4.75 - 4.59 (m, 5 H), 4.42 (m, 2 H), 4.34 (s, 1 H), 4.30 (d, 1 H), 3.88 (dd, 1 H), 3.75 (m, 1 H), 3.60 (q, 2 H), 2.95 (m, 1 H), 2.63 (m, 1 H), 2.41 (m, 2 H), 2.26 - 2.12 (m, 2H), 1.88 (dd, 1 H), 1.79 (m, 1 H), 1.56 (m, 3 H). 1.41 (m, 3 H), 1.25 (m, 2 H), 1.17 (t, 2 H), 1.06 (s, 9 H). LRMS (ESI)mlz714 [(M+H)<+>; izrač. za C35H48N5O9S: 714].

PRIMER 15

( SRJSaOSHO- ferc- Butil- Ar- giR^ SV

vinilciklopropin- 15a5- dimetil- 3, 9a2- triokso- U6, 7, 9, 10, ll, 12, 14, 15, 16a7J8-

dodekahidro- 5H- 2, 22:5, 8- dimetano- 4, l 3, 2, 8, 1 l- benzodioksatriazacikloikozin- 7-

karboksamid ( III- 206)

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema postupku koji je korišćen za PRIMER 14 (primenom koraka 2 i 3) sa tom razlikom što je metil (5R,7S,10S)-10-etrobutil-15,15-dimetil-3,9,12-triokso-1,6,7,9,10,11,12,14,15,16-dekahidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,1 l-benzodioksatriazacikloikozin-7-karboksiIat (PRIMER 3, Korak 1) korišćen umesto metil (5R,7S. 1 OS)-10-/<?7x--butil-3.9.12-triokso-1,6,7,9,10,11,12,14,15,16-dekahidro-511-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,1 l-benzodioksatriazacikloikozin-7-karboksilata u Koraku 2.

'H NMR (400 MHz, ppm, CDC13) 5 9.91 (s, 1 H). 7.22 (t, 1 II), 7.09 (d, 2 H), 7.05 (d, 1 H). 5.77 (m, 1 H), 5.60 (s, 1 H), 5.45 (d, 1 H), 5.29 (s, 1 H), 5.15 (d, 1 H), 4.72 (q, 2 H), 4.40-4.55 (m. 4 H), 4.30 (d, 1 H), 4.25 (d, 1 H), 3.78 (dd, 1 H), 3.26 (d, 1 H), 2.91 (m, 1 H). 2.50 (m. 3 11), 2.39 (m, 3 H), 2.11 (m, 1 H). 1.98 (m, 2 H), 1.51 (m. 2 H), 1.38 (m, 4 H), 1.18(m. 1 H), 1.04 (s, 9 H), 1.01 (t, 3 H), 0.79 (s, 3 H). LRMS (ESI)mlz742 [(M+H)<+>; izrač. za C37n52N509S: 742].

PRIMER 16

( SRJSJOSHO- terc- Butil- AMgR^ R)

etilciklopropiiy3, 9, 12- triokso- l, 6, 7, 9, 10, l 1, 1244,^

4, 13, 2, 8, 1 l- benzodioksatriazacikloikozin- 7- karboksamid ( 111- 16)

U rastvor metil (5R,7S,10S)-10-/erc-butil-3,9,12-triokso-l,6,7.9,10,l 1.12,14,15,16-dekahidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,l l-benzodioksatriazacikloikozin-7-karboksilata (PRIMER 14, Korak 1) (60 mg, 0.12 mmol) u THF (1 mL) i MeOIT (0.5 mL) dodat je LiOH (IN 1.17 mL, 1.17 mmol). Reakciona smeša je zagrevana do 40°C i mešana 1 čas, kada je pomoću LC-MS zabeležena potpuna potrošnja metil estarskog početnog materijala. Smeša je zatim obrađena sa 0.5 N HCT i EtOAc. Organski sloj je zatim sušen preko K2CO3, i rastvarač je uklonjenin vacuo.Sirovi proizvod je sipan u DMF (1 mL). U prethodno navedeni rastvor dodat je (lR,2R)-l-{[(ciklopropilsulfonil)amino] karbonil}-2-etilciklopropanaminijum hlorid (32 mg, 0.12 mmol), TBTU (48 mg, 0.15 mmol) i DIPEA (0.044 mL, 0.25 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 časa. Reakciona smeša je prečišćena pomoću reverzno fazne HPLC da bi se dobio (5R.7S,10S)-10-/e;x'-butil-Ar-((lR,2R)-l-{[(ciklopropilsulfonil)amino]karbonil}-2-etilciklopropil)-3,9.12-triokso-l,6,7,9,10,ll,12,14,15,16-dekahidro-5H-2.22:5.8-dimetano-4,13,2,8,ll-benzodioksatriazacikloikozin-7-karboksamid (55 mg, 67% prinos). 'H NMR (500 MHz, ppm, CD3OD 5 7.33 (d, 1 H), 7.26 (t, 1 H), 7.16 (d, 1 H), 6.39( d, J=15.7 Hz, 1 H), 6.13 (m. IH), 5.37 (s, 1 H), 4.69 (m, 4 H), 4.47 - 4.28 (m, 4 H), 3.89 (m, 1 H), 3.83 (d, 1 H), 2.98 (m, 1 H), 2.40 (m, 2 H), 2.31 (m, 1 H), 2.11 (t, 1 H), 1.99 (s, 1 H), 1.73 (s, 1 H), 1.60 (m, 2 H), 1.52 (m, 1 H), 1.29 - 1.15 (m, 3 H), 1.08 (s. 9 H), 0.98 (t. 3 H). LRMS (ESI)mlz714 [(M+H)<+>; izrač. za C35H48N5O9S: 714J. PRIMER 17 ( SRJS40S)- 10- efrc- Butil- AqqR^ etilciklopropin- 3, 9a2- triokso- 6, 7<9a0qi, 12, 14, 15, 16, 17- dekahidro- lH, 5H- 2, 23:518-dimetano- 4, 13, 2, 8, ll- benzodioksatriazaciklohenikozin- 7- karboksamid ( III- 207) Korak 1: Metil (5R,7S,10S)-10-r<g>rc-butil-3,9,12-triokso-6,7,9,10,ll,12,14,15,16,17-dekahidro-lH,5H-2,23:5,8-dimetano-4,13,2,8,ll-benzodioksatriazaciklohenikozin-7-karboksilat

Metil (5R,7S, 1 OS)-10-/erc-butil-3,9,12-triokso-6,7,9,10,11,12,14,15,16,17-dekahiđro-1 H,5H-2,23:5,8-dimetano-4,l 3,2,8,1 l-benzodioksatriazaciklohenikozin-7-karboksilat je pripremljen prema postupku koji je korišćen za metil (5R,7S,10S)-10-otr-butil-15,15-dimetil-3,9,12-triokso-1,6,7,9,10,11,12,14,15,16-dekahidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,1 l-benzodioksatriazacikloikozin-7-karboksilat (PRIMER 3, Korak 8) sa tom razlikom što je 3-metil-7vT-[(heks-5-eniloksi)karbonil]-L-valin (pripremljen prema postupku koji je dat u daljem tekstu) korišćen umestoiV-([(2,2-dimetilpent-4-enil)oksi]karbonil}-3-metil-L-valina u Koraku 7. LRMS (ESI)mlz528 [(M+H)<+>; izrač. za C28H38N3O7: 528J.

Korak2: (5R,7S,10S)-10-^rc-Butil-A/-((lR,2R)-l-{[(ciklopropi)sulfonil)aminoj karbonil}-2-etilciklopropil)-3,9a24riokso-6,7,940414244,15,16,17-dckahidro-lH,5H-2,23:5,8-dimetano-4,13,2,8,ll-benzodioksatriazaciklohenikozin-7-karboksamid

PRIMER 17 je pripremljen prema postupku koji je korišćen za PRIMER 16 sa tom razlikom što je korišćen metil (5R,7S.10S)-10-tox--butil-3,9,12-triokso-6J,9a0,llJ2J4J5,16,17-dekahidro-lH,5H-2,23:5,8-dimetano-4,13,2.8,ll-benzodioksatriazaciklohenikozin-7-karboksilat umesto metil-(5R,7S,10S)-10-re;-c--butil-3,9a24riokso-l,67,9a0aia2J4J5,16-dekahidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,ll-benzodioksatriazacikloikozin-7-karboksilata (PRIMER 14. Korak 1).<*>H NMR (500 MHz. ppm, CD3OD) 5 9.06 (s, 1 H), 7.27 (t, 1 H), 7.24 (d, 1 H), 7.18 (d, 1 H), 6.40(d, J=16.4 Hz, 1 H), 6.11 (m, IH), 5.39 (t, 1 H), 4.80 (d, 1 H). 4.69 (m, 4 H), 4.42 (s, 1 H), 4.25 (d, 1 H), 3.97 (dd, 1 H), 3.79 (kvin., 1 H), 2.98 (m, 1 H), 2.50 (q, 1 H), 2.78 (m, 2 H), 2.15 (m, 1 H), 1.77 - 1.54 (m, 8 H), 1.32 - 1.19 (m, 4 H), 1.11 (m, 1 H), 1.07 (s, 9 H), 0.98 (t, 3 H). LRMS (ESI)mlz728 [(M+H)<+>; izrač. za C^HsoNsOoS: 728J.

PRIMER 18

( SRJSJOSHO- ferc- Butil- Aigm

etilciklopropin- 15a5- dimetil- 3, 9J24riokso- 6, 7, 9, 10ai, 12J4a5, 16, 17- dekahidro- lH, 5H-2, 23:5, 8- dimetano- 4a3, 2, 8ai- benzodioksatriazaciklohenikozin- 7- karboksamid ( III- 208)

Korak 1: Metil (5R,7S,10S)-10-^/c-buti]-15,15-dimetil-3,9,12-triokso-6,7,9,10,ll,12,14,15,16,17-dekahidro-lH,5H-2,23:5,8-dimetano-4,13,2,8,ll-benzodioksatriazaciklohenikozin-7-karboksilat

Metil (5R,7S, 1 OS)-1O-ferc-butil-15,15-dimetiI-3,9,12-triokso-6,7,9,10,11,12,14,15, 16,17-dekahidro-lH,5H-2,23:5,8-dimetano-4,l 3,2,8,1 l-benzodioksatriazaciklohenikozin-7-karboksilat je pripremljen prema postupku koji se koristi za metil (5R,7S,10S)-10-to-c-butil-15.15-dimetil-3,9,l 2-triokso-1,6,7.9,10,11,12,14,15,16-dekahidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,1 l-benzodioksatriazacikloikozin-7-karboksilat (PRIMER 3, Korak 8) sa tom razlikom što je iV-{[(2,2-dimetilheks-5-enil)oksi]karbonil}-3-metil-L-valin (pripremljen prema postupku koji je dat u daljem tekstu) korišćen umesto ,V-{[(2,2-dimetilpent-4-enil)oksi]karbonil}-3-metil-L-valina u Koraku 7. LRMS (ESI)mlz556 [(M+H)<+>; izrač. za C30H42N3O7: 556]. Korak 2: (5R,7S,10S)-10-/<?rc-ButiI-A'-((lR,2R)-l-([(ciklopropilsulfonil) aminojkarbonil} -2-etilciklopropil)-15,15-dimetil-3,9,12-triokso-6,7,9,10,11,12,14,15,16,17-dekahidro-lH,5H-2,23:5,8-dimetano-4,13,2.8,1 l-benzodioksatriazaciklohenikozin-7-karboksamid

PRIMER 18 je pripremljen prema postupku koji je korišćen za PRIMER 16 sa tom razlikom što je korišćen metil (5R,7S,10S)-10-fc/-c-butil-15,15-dimetil-3,9,12-triokso-6,7,9,10,11,12,14,15,16,17-dekahidro-lH,5H-2,23:5,8-dimetano-4.13,2,8,ll-benzodioksatriazaciklohenikozin-7-karboksilat umesto metil-(5R,75,l 0S)-10-/tTc-butil-3,9,12-triokso-l,6,7,9,10,l 1,12,14,15,16-dekahidro-5H-2,22:5,8-dimetano-4,13,2,8,l 1-benzodioksatriazacikloikozin-7-karboksilata (PRIMER 14, Korak 1). 'H NMR (500 MHz, ppm, CD3OD) 5 10.05 (s, 1 H). 7.24 (m, 2 H), 7.17 (d. 1 H). 7.11 (d, 1 H). 6.61 (s, 1 H). 6.28 (d,J= 16.4 Hz, 1 H), 5.95 (m, 1 H), 5.58 (m, 1 H), 5.31 (s, 1 H), 4.71 (m, 2 II), 4.55 (m, 2 H), 4.46 (d, 2 H), 4.29 (dd, 1 H), 4.17 (d, 1 H), 3.89 (d, 1 H), 3.32 (d, 1 H), 2.92 (m, 1 H), 2.59 (m. 1 H), 2.21-2.30 (m, 2 H), 2.08 (m, 1 li), 1.60-1.78 (m, 6 H), 1.22-1.31 (m, 5 H). 1.06 (s. 9 H), 1.04 (t, 3 H), 0.093 (t, 3 H), 0.87 (s, 3 H). LRMS (ESI)mlz756 [(M+H)<+>; izrač. za C38H54N5O9S: 756].

Priprema AH( Pent- 4- eAMloksi) karbonil1- L- norleucina:

U rastvor l-penten-4-ola (0.95 g, 11.0 mmol) u DMF (15 mL) na 0°C dodat je karbonildiimidazol (1.79 g, 11.0 mmol). Reakciona smeša je zagrevana do sobne temperature i mešana 30 min. Zatim je dodat L-norleucin metil estar hidrohlorid (2.0 g, 11.0 mmol), reakciona smeša je zagrevana do 50°C i mešana 15 min. Posle hlađenja, reakciona smeša je razblažena sa etil etrom i isprana dva puta vodom. Organski sloj je sušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu (eluiranje gradijentom 10 do 90% etil acetata u heksanima) da bi se dobilo 2.1 g (74% prinos) metil A4(pent-4-en-l-iloksi)karbonil]-L-norleucinata kao bistro ulje.

U mešani rastvor metil A-[(pent-4-eniloksi)karboniI]-L-norleucinata (8.50 g, 33.03 mmol) u TFIF (20 mL) dodat je IN NaOH (20 mL). Ovaj reakcioni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 3 časa, zatim je zakišeljen do pH 3 sa IN HC1 i eksatrahovan sa (3 x 250 mL) EtOAc. Kombinovani EtOAc sloj je ispran sa 50 mL vode, 50 mL fiziološkog rastvora, sušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan da bi se dobilo 7.09 g (88% prinos) proizvoda iz naslova kao bistro ulje. LRMS (ESI)mlz244 [(M+H)<+>; izrač. za C12H22NO4: 244].

Priprema 3- MetiI- A/- f( pent- 4- eniIoksi) karbonil]- L- valina:

Rastvor 4-pentenola (7.22 g, 83.8 mmol) i trifozgena (11.3 g, 38.1 mmol) u dioksanu (160 mL) hlađenje do 0°C, a zatim je ukapavanjem dodavan DIPEA (9.85 g, 76.2 mL). Bela suspenzija je snažno mešana 1 čas na 25°C, zatim je hlađena do 0°C. Dodati su 1 N rastvor NaOH (76.2 mL) i t-butilglicin (10.0 g. 76.2 mmol). Dobijena suspenzija je zagrevana do 25°C i mešana 18 časova. Približno polovina dioksana je uklonjenain vacuo.rastvor je sipan u 1 N NaOH (100 mL) i ispran dihlorometanom (3 x 150 mL). Vodeni sloj je zakišeljen sa 6 N HC1 i željeni proizvod je ekstrahovan sa dihlorometanom (3 x 150 mL). Spojene organske materije su sušene preko MgS04i koncentrovane da bi se dobilo 13.7 g (73.9% prinos) 3-metil-V-[(pent-4-eniloksi)karbonil]-L-valina kao bezbojno ulje. LRMS (ESI)mlz 244[(M+M<+>; izrač. za C12H22NO4: 244].

Priprema A^( Heks- 5- en- l- iloksi) karbonil|- L- norleucina:

A-[(Heks-5-en-l-iloksi)karbonil]-L-norleucin je pripremljen prema postupku zaN-[(pent-4-en-l-iloksi)karbonil]-L-norleucin primenom 5-heksenola umesto 4-pentenola. LRMS (ESI)mlz258 [(M+H)<+>; izrač. za C13H24NO4: 258].

Priprema S- Metil- N- t^ eks- S- eniloksOkarboniH- L- valina:

3-Metil-A-[(heks-5-eniloksi)karbonil]-L-valin je pripremljen prema postupku za 3-metil-A-[(pent-4-eniloksi)karboniI]-L-vaIin primenom 5-heksenola umesto 4-pentenola. LRMS (ESI)mlz258 [(M+H)<+>; izrač. za C13H24NO4: 258].

Priprema A7-[ Hept- 6- cn- l- iloksi) karbonUl- L- norleucina: V-[(Hept-6-en-l-iloksi)karboml]-L-norIeucin je pripremljen prema postupku zaA-[(pent-4-en-l-iloksi)karbonil]-L-norleucin primenom 6-heptenola umesto 4-pentenola. LRMS (ESI)m/ z272 [(M+H)<+>; izrač. za Cj4H26N04: 272].

Priprema N - f \( 2 , 2 - Dimetilpent- 4- enil) oksi] karboniU- 3- metil- L- valina: Korak 1: 2,2-DimetiIpent-4-en-l-ol

Rastvor 2,2-dimetil alil sirćetne kiseline (6.0 g, 46.8 mmol) u anhidrovanom THF hlađenje u ledenom kupatilu do 0°C. Dodata je lagana struja IM Iitijum aluminijum hidrida u THF (56.2 mL, 56.2 mmol) i reakcija je ostavljena da se zagreje do 25°C. Reakciona smeša je mešana 1 čas pre sipanja u IN HC1 i dietil etar. Organski sloj je odvojen, sušen preko MgS04i koncentrovan da bi se dobio 2,2-dimetilpent-4~en-l-ol kao bistro ulje (4.7 g, 87.9% prinos).

Korak 2: ^-{^^-DimetilpenM-eniOoksijkarbonilJ-S-metil-L-valin

DIPEA (2.48 g, 19.2 mmol) je dodata ukapavanjem u 0°C rastvor 2,2-dimetilpent-4-en-l-ola (2.24 g, 19.6 mmol) i trifozgena (2.56 g, 8.64 mmol) u 60 mL dioksana. Dobijena bela suspenzija je mešana 5 min na 0°C, zatim je ostavljena da se zagreva do 25°C tokom 1 časa. Suspenzija je hlađena do 0°C sa ledenim kupatilom, nakon čega sledi dodavanje 1 N NaOH (19.2 mL) i L-terc-butilglicina (2.52 g, 19.2 mmol). Reakciona smeša je zagrevana do 25°C i mešana 72 časa. Dioksan je uklonjenin vacuoi reakciona smeša je bazifikovana do pH 12 sa 1 N NaOH. Vodeni sloj je ekstrahovan sa dihlorometanom (3x 150 mL), zatim zakišeljen do pH~1 sa 6 N HC1. Vodeni sloj je ekstrahovan sa dihlorometanom (3 x 150 mL). Spojeni organski slojevi su sušeni preko MgS04i koncentrovani da bi se dobio 7Y-{[(2,2-dimetilpent-4-enil)oksi]karbonil}-3-metil-L-valin kao beli prašak (4.26 g, 827% prinos). LRMS (ESI)m/ z272 [(M+H)<+>; izrač. za C14Hz6NO,: 272].

Priprema A^- IKŽ^- Dimetilheks- S- eniOoksilkarboniU- S- metil- L- valina: Korak 1: Etil 2,2-dimetilheks-5-enoat

U mešani rastvor diizopropilamina (13.38 mL, 94.70 mmol) u anhidrovanom THF (50 mL), na -70°C i pod azotom, lagano je dodavan 2.5 M n-BuLi u etru (36.50 mL, 91.25 mmol). Rastvor je mešan 15 minuta, ovom reakcionom rastvoru je zatim ukapavanjem dodat etil izobutirat (11.51 mL, 86.09 mmol) u THF (50 mL), rastvor je mešan 20 minuta pre dodavanja ukapavanjem 4-bromo-1-butena (9.79 mL, 96.42 mmol) u HMPA (20 mL). Reakcioni rastvor je zatim mešan do -50°C 5 časova, ugašen sa IM HC1 (10 mL) i vodom (100 mL), zatim ekstrahovan sa (3 x 125 mL) etrom. Kombinovani etarski sloj je ispran vodom (4 x 70 mL). vodenim zasićenim rastvorom NaHCOs(2 x 70 mL), sušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan. Sirovi proizvod je podvrgnut ..flash" hromatografiji na 120 g silika gela 60, eluiranjem sa 1 - 20% EtOAc / heksana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bistro ulje (1 l.Olg, 75% prinos). LRMS (ESI)m/ z171 [(M+H)<+>; izrač. za C10Hi9O2: 171].

Korak 2: 2,2-Dimetilheks-5-en-l-ol

U mešani rastvor IM LAH u etru (142.14 mL, 142.14 mmol). na 0°C i pod azotom. ukapavanjem je dodavan etil 2,2-dimetilheks-5-enoat (11.00 g, 64.61 mmol) rastvoren u 100 mL anhidrovanog etra tokom 1 časa. Ovaj reakcioni rastvor je mešan na 22°C 20 časova, zatim je ugašen vodom (3 mL), IM NaOH (11 mL) i vodom (9 mL), sušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan da bi se dobio proizvod iz naslova (7.22 g, 87.09%). 'H NMR (500 MHz, CDCI3) 5 5.85-5.77 (m, 1 H); 5.01 (d, 1 H); 4.93 (d, 1 H); 3.33 (d, 2 II); 2.03 (m, 2 H); 1.34 (m, 2 H); 0.89 (m, 6 H) ppm.

Korak 3: N-IKl^-Dimetilheks-S-eni^oksilkarbonilJ-S-metil-L-valin

U mešani rastvor 2,2-dimetilheks-5-en-l-ola (10.75 g, 83.85 mmol) u anhidrovanom 1,4-dioksanu (100 mL), na 0°C i pod azotom, dodat je trifozgen (13.69 g, 46.12 mmol) i zatim DIPEA (14.61 mL, 83.85 mmol) pažljivo. Ovaj reakcioni rastvor je mešan na 22°C 1 čas, hlađen do 0°C i lagano je dodat IN NaOH (83.85 mL, 83.85 mmol) i L-/<?;-c-leucin (11.00 g, 83.85 mmol), zatim je mešan na 22°C u trajanju od 20 časa. Reakcioni rastvor je bazifikovan do pH 10 sa IN NaOH, ispran sa CH2CL (3x 100 mL), zakišeljen do pH 5 sa IN HC1 i ekstrahovan sa CH2CI2(3 x 150 mL). Kombinovani CH2CI2sloj je ispran vodom (100 mL), sušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan da bi se dobio proizvod iz naslova (20.26 g, 84.66%). 'H NMR (500 MHz, CDCI3) 5 5.85-5.77 (m, 1 H); 5.24 (đ, 1 H); 5.01 (d, 1 H); 4.93 (d, 1 H); 4.20 (d, 1 H); 3.86 (d, 1 H); 3.79 (d, 1 H); 2.01 (m, 2 H); 1.36 (m, 2 H); 1.04 (s, 9 H); 0.92 (m, 6 H) ppm. LRMS (ESI)mlz286 [(M+H)<+>; izrač. za CsH.gNO,,: 286].

Priprema ( lR, 2R- l-{|( cikloproDiIsutfoniI) amino1karboniI)- 2- etiIciklopropanaminiium

hlorida:

Smeša (l/\,25)-l-{[(ciklopropilsulfonil)amino]karbonilj-2-vinilciklopropanaminijum hlorida (Llinas-Brunet et al US03/15755 i Wang et al WO 03/099274) (0.05 g, 0.187 mmol) i paladijuma na uglju (10% tež., O.Olg) in EtOAc (5 mL) snažno je mešana pod atmosferom vodonika sa balonom vodonika u trajanju od 1 časa. Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana da bi se dobio (17?,2/?)-l-{[(ciklopropiIsulfoniI)amino]karbonil}-2-etilciklopropanaminijum hlorid (0.045 g, 89% prinos).

PRIMER 19

(5?J?10?-10-/?c-Buti)-N-((l/<',2?-l-{KeikiopropHsu!fonH)aminojkarbonH}-2-

vinilciklopropil)- 15, 15- dimetil- 3, 9J2- triote^^

dodekahidro- l#, 5/ f- 2, 23:5. 8- dimetano- 4, 13, 2, 8, ll- benzodfo^

karboksamid ( 111- 210)

PRIMER 19 je pripremljen od (5/?,7S,105)-l0-/erc-butil-15,15-dimetil-3,9,12-triokso-6,7,9,10,11,12,14,15,16,17,18,19-dodekahidro-1 //,5//-2.23:5,8-dimetano-4,13,2,8,11-benzodioksatriazaciklohenikozin-7-karbonske kiseline (PRIMER 13 Alternativna priprema, Korak 4) primenom postupka za PRIMER 3, Korak 10.<*>H NMR (500 MHz, CD3OD, ppm) 5 7.25-7.09 (m, 3 H), 5.82-5.74 (m, 1 H), 5.35-5.29 (m, 2 H), 5.15-5.12 (m, 1 H), 4.75-4.59 (m, 3 H), 4.45-4.38 (m, 2 H), 4.21-4.12 (m, 1 H), 4.13-4.09 (m, 1 H), 3.95-3.92 (m, 1 H), 2.98-2.94 (m, 1 H), 2.62-2.54 (m, 1 H), 2.49-2.46 (m, 2 H), 2.25-2.21 (m. 1 H), 2.19-2.13 (m, 1 H), 1.90-1.88 (m, 1 H), 1.52 (m, 2 H), 1.48-1.45 (m, 1 H), 1.40-1.18 (m, 6 H), 1.15-1.00 (m, 14 H), and 0.81 (m, 4 H). LRMS (ESI)mlz756.4 [(M+H)<+>: izrač. za C3SH53N5O9S: 755.9].

PRIMER 20

( 5i?J5a05a8^- 10- CikloheksiI-/ V-(( lJ?, 2^- l- n( ciklopropilsulfoninaminol

karbonm- 2- vinilciklo propin- 15, 15- dimetil- 3, 9a2- triokso- 6, 7, 9, 10, liq2, 14, 15, 16a7-

dekahidro- l/ f, 5//- 2, 23:5, 8- dimetano- 4, 13, 2, 8, ll- benzodioksatriazaciklohenikozin- 7-

karboksamid ( III- 225)

PRIMER 20 je pripremljen primenom postupaka iz PRIMERA 13 Alternativna priprema, Koraci 1, 2, 4 i 5 primenom (2.S>cikloheksil( {[(2,2-dimetilheks-5-en-l - il)oksi]karboniI}amino)sirćetne kiseline u Koraku 1 i (lR,2S)-l-(l(ciklopropilsulfonil)amino] karbonil}-2-vinilciklo-propanaminijum hlorida u Koraku 5.<!>H NMR (500 MHz, CD3OD, ppm) 5 7.26 (m, 1 H), 7.20(t, J=7.5 Hz, 1 H), 7.15( d, J=9.5 Hz, 1 H), 6.38 (d, ,/= 9.5 Hz, 1 H), 5.99-6.02 (m, 1 H), 5.74-5.80 (m, 1 H), 5.29-5.34 (m. 2 H), 5.11-5.14 (m, 1 H), 4.79-4.81 (m, 2 H), 4.64-4.72 (m, 3 H), 4.56 (d,J=11.5 Hz. 1 I I), 4.36-4.40 (m, 2 H), 4.18 (d,J =11.5 Hz, 1H), 4.10 (d,J- 5.5Hz, 0.5 H), 3.91-3.94 (dd,./= 11.5, 3.5 Hz, 1H), 3.34 (d, J =11.0 Hz, 1 H), 2.95-2.97 (m, 1 H), 2.52-2.56 (m, 1 H), 2.16-2.35 (m. 5 H), 1.65-1.82 (m, 8 H), i 0.85-1.43 (m, 17 H). LRMS (ESI)mlz780.4 [(M+H)<+>; izrač. za C40H53N5O9S: 780.9].

PRIMER 21

( 5i?J5g05)- 10- Cikloheksil- Ar-(( l^ ai?)- l-{ ffciklopropilsulfonil) aminolkarbonil}-2- ctilciklopropilV15a5- dimetil- 3, 9J2- triokso- 6, 7, 9a0aig2a4, 15a6J7, 18, 19-

dodekahidro- l//^, 5/ f- 2, 23:5, 8- dimetano- 4, 13, 2, 8, ll- bcnzodioksatriazaciklohenikozin- 7-

karboksamid ( III- 226)

PRIMER 21 je pripremljen od PRIMERA 20 primenom postupka koji je opisan za PRIMER 8. 'H NMR (500 MHz, CDC13, ppm) § 10.13 (s, 1 H), 7.22 (t,J=7.5 Hz, 1 H), 7.10 (d,./=7.5 Hz, 1 H), 7.05( d, J=7. 5 Hz, 1 H), 6.73 (s, 1 H), 5.40 (d,J = 9. 5Hz, 1 H), 5.36 (m, 1 H), 4.67-4.76 (m, 2 H), 4.55 (d, ./= 15.5 Hz, 1 H), 4.44 (d, ./= 14.5 Hz. 1 H), 4.41 (d,J- 11.0 Hz, 1 H), 4.29-4.39(m, 2 H), 4.16 (d,/ =11.0 Hz, 1 H), 3.82-3.85(dd, 7=11,5, 3.5 Hz, 1 H), 3.25 (d,J=11.0 Hz, 1 H), 2.95 (m, 1 H), 2.51-2.59 (m, 2 H), 2.36-2.44 (m, 2 H), 1.73-1.76 (m, 5 H) i 0.79 (br s, 2 H). LRMS (ESI)mlz784.4 [(M+H)'; izrač. za C40H57N5O9S: 784.4].

Alternativna priprema ( l/ ?, 2/ ?)- l- amino- A-( ciklopropilsulfonil)- 2- etilciklopropan

karboksamid hidrohlorida:

Korak 1: rgrc- Butil(( lR, 2R)- l{[( cikloDropilsuifoniI) aminolkarbonil}- 2- etilciklo

propiDkarbamat:

Aparat za hidrogenaciju je napunjen metanoloskom (1000 mL) suspenzijom terc-butil ((lR,2S)-l-{[(ciklopropilsulfonil)amino]karbonil}-2-vinilciklopropil)karbamata (164 g, 0.50 mol) (Wang et al, US 6,995,174) i 5% RuC (suv, 7.5 tež.%, 12.4 g) i podešen za mešanje. Aparat je postavljen pod azot (20 psig) i ventiliran pod atmosferskim pritiskom tri puta da bi se uklonio zaostali kiseonik. Aparat je zatim postavljen pod vodonik (50 psig). Posle 20 časova, aparat je ventiliran pod atmosferskim pritiskom. Reakciona suspenzija je zatim prebačena izvan reakcije i filtrirana kroz solka Ilok (34 grama, vlažni tež./lOO mL metanol) da bi se dobio bistar, svetio braon rastvor. Solka flok je ispran metanolom (200 mL x 2). Kombinovani metanolski rastvori su koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi proizvod kao bela čvrsta supstanca (153 g). Sirovi proizvod je suspendovan u etil acetat (800 mL), zagrevan do 40°C i ostavljen da stari 30 minuta. Rastvor je zatim zasejan, ostavljen da stari 30 minuta, i dodavanje heptan (500 mL) preko levka za dodavanje tokom 30 minuta. Delimično kristalizovana čvrsta supstanca je hlađena do sobne temperature i ostavljena da stari preko noći nakon čega je dodata nova količina heptana (500 mL). Posle jednog časa. dodata je nova količina heptana (250 mL) preko levka za dodavanje, i bela suspenzija je ostavljena da stari jedan čas. Rastvor je filtriran i čvrsta supstanca je isprana sa heptanom/EtOAc (500 mL, 4:1) i sušena pod sniženim pritiskom da bi se dobio terc-butil ((1 R,2R)-1 -([(ciklopropilsulfonil)amino]karbonil) -2-etilciklopropil)karbamat (125.9 g).

Korak 2: ( l/ ?. 2/ ?)- l- amino- A-( ciklopropiIsulfonil)- 2- etilcikIopropankarboksamid

hidrohlorid:

Rastvor proizvoda iz Koraka 1 iz prethodnog teksta (92 g, 0.28 mol) u DCM (1200 mL) hlađen je do 0°C i HC1 je propuštana kroz rastvor u trajanju od 10 min, kupatilo za hlađenje je uklonjeno i reakciona smeša je mešana 2 časa. Azot je propuštan kroz reakcionu smešu 5 min i ispraljive materije su isparene. Od ostatka je napravljen azeotrop sa DCM (x 3) da bi se dobio prljavo beli prašak (75 g). LRMS (M+H)<+>izrač. = 233; nađeno 233.

Priprema ( 25^- cikloheksil({[ 2, 2- dimetilheks- 5- en- l- iI) oksi1karboniUamino)

sirćetne kiseline:

(2,S)-Cikloheksil( {[(2,2-dimetilheks-5-en-1 -il)oksi]karbonil} aminojsirćetna kiselina je pripremljena prema postupku za 3-metil-A/-f(pent-4-eniloksi)karbonil]-L-valin primenom (2>S)-amino(cikloheksil)sirćetne kiseline i 2.2-dimetilheks-5-en-l-ola. LRMS (ESI)m/ z312.3 [(M+H)<+>; izrač. za C7H30NO4: 312.2].

PRIMER 22

Vremenski razložen fluorescentni test ( TRF) HCV NS3 proteaze

TRF test NS3 proteaze izveden je u krajnjoj zapremini od 100 ul u test puferu koji sadrži 50 mM HEPES, pH 7.5, 150 mM NaCl, 15% glicerol, 0.15% Triton X-100, 10 mM DTT i 0.1% PEG 8000. NS3 proteaza je pre-inkubirana sa različitim koncentracijama inhibitora u trajanju od 10-30 minuta. Peptidni supstrat za test je Ac-C(Eu)-DDMEE-Abu-[COO]-XSAK(QSY7)-NH2, gde je Eu grupa obeležena europijumom, Abu je 1-aminobuterna kiselina koja povezuje estarsku vezu sa 2-hidroksi propionskom kiselinom (X). Hidroliza peptida preko aktivnosti NS3 proteaze izaziva odvajanje fluorofore od materijala za gašenje luminiscencije, što ima za rezultat povećanje fluorescencije. Aktivnost proteaze je započeta dodavanjem TRF peptidnog supstrata (krajnja koncentracija 50-100 11M). Reakcija je ugašena posle 1 časa na sobnoj temperaturi sa 100 u.1 500 mM MES, pH 5.5. Fluorescencija proizvoda je detektovana primenom ili Victor V2 ili fuzionog fluorimetra (Perkin Elmer Life i Analvtical Sciences) sa ekscitacijom na 340 nm i emisijom na 615 nm sa odlaganjem od 50-400 u.s. Testirane koncentracije različitih oblika enzima izabrane su sa odnosom signala prema pozadini od 10-30. Konstante inhibicije su izvedene primenom fitovanja na osnovu četiri parametra.

Jedinjenja u primerima 1-21 testirana su tako da imaju Ki vrednost manju od 100 nM (npr., manje od 1 nM) u TRP testu NS3 proteaze kao stoje opisano u prethodnom tekstu.

Claims (17)

1. Jedinjenje formule (I): naznačeno time što: i p i q su 1; R1 je CONR10SO2R6; R je C)-C6alkil ili Ci- Cf, alkenil, pri čemu je navedeni alkil ili alkenil izborno supstituisan sa 1 do 3 halo; R3 je C,-C8alkil ili C3-C8cikloalkil; R<5>jeH; R6je C3-C6 cikloalkil; YjeC(=0); Zje O; M je C1-C12alkilen ili C-2-C12 alkenilen; i svako R<10>je nezavisno H ili C1-C-6 alkil; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili hidrat.

2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što je jedinjenje formule IH-a: ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili hidrat.

3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 2, naznačeno time što je R<1>jednako CONHS02R<6>; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili hidrat.

4. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 3, naznačeno time što je R<6>jednako ciklopropil; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili hidrat.

5. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 4, naznačeno time što je R"jednako C1-C4alkil ili C2-C4alkenil; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili hidrat.

6. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 5, naznačeno time što je R<3>jednako Cj-O, cikloalkil ili CpC4 alkil; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili hidrat.

7. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 6, naznačeno time što je M jednako C4-C io alkilen ili C4-C10alkenilen; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili hidrat.

8. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što je jedinjenje izabrano od sledećih: ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili hidrat.

9. Jedinjenje III-205 prema patentnom zahtevu 8; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili hidrat.

10. Farmaceutska kompozicija naznačena time što sadrži efikasnu količinu jedinjenja prema bilo kom od patentnih zahteva 1-9 ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili hidrata, i farmaceutski prihvatljiv nosač.

11. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 10, naznačena time što dalje sadrži drugo terapeutsko sredstvo izabrano iz grupe koju čine HCV antivirusno sredstvo, imunomodulator i anti-infektivno sredstvo.

12. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 11. naznačena time što je HCV antivirusno sredstvo - antivirusno sredstvo izabrano iz grupe koju čine inhibitor HCV proteaze i inhibitor HCV NS5B polimeraze.

13. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-9 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili hidrat, za primenu u terapiji.

14. Primena jedinjenja prema bilo kom od patentnih zahteva 1-9 ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili hidrata, u pripremi leka za prevenciju ili lečenje HCV infekcije kod subjekta kod koga postoji potreba za tim.

15. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 13 za primenu u postupku prevencije ili lečenja HCV infekcije.

16. Kombinacija jedinjenja prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 9 ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili hidrata i najmanje jednog drugog terapeutskog sredstva koje je izabrano od HCV antivirusnih sredstava, imunomodulatora i anti-infektivnih sredstava.

17. Kombinacija prema patentnom zahtevu 16, naznačena time što je antivirusno sredstvo inhibitor HCV proteaze ili inhibitor HCV NS5B polimeraze.