PT1891101E - Agentes de ligação a esclerostina - Google Patents

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PT1891101E PT67519033T PT06751903T PT1891101E PT 1891101 E PT1891101 E PT 1891101E PT 67519033 T PT67519033 T PT 67519033T PT 06751903 T PT06751903 T PT 06751903T PT 1891101 E PT1891101 E PT 1891101E
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Christopher Paszty
Martyn Kim Robinson
Kevin Graham
Alistair James Henry
Kelly Sue Hoffmann
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Hsieng Sen Lu
Andy Popplewell
Wenyan Shen
David Winkler
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Description

ΕΡ 1 891 101/ΡΤ DESCRIÇÃO "Agentes de ligação a esclerostina"
CAMPO TÉCNICO 0 presente invento refere-se genericamente a anticorpos capazes de se ligar a esclerostina
ANTECEDENTES DO INVENTO
Duas ou três fases distintas de mudanças da massa óssea ocorrem ao longo da vida de um indivíduo (ver Riggs, West J. Med. 154: 63-77 (1991)) . A primeira fase ocorre em homens e mulheres e prossegue até à obtenção de um pico de massa óssea. Esta primeira fase é conseguida através de crescimento linear das placas de crescimento endocondral e crescimento radial devido a uma taxa de aposição periosteal. A segunda fase começa por volta dos 30 anos para o osso trabecular (ossos chatos tais como as vértebras e a pélvis) e cerca dos 40 anos para o osso cortical (p. ex., ossos longos verificados nos membros) e continua até uma idade avançada. Esta fase caracteriza-se pela perda lenta de osso e ocorre tanto nos homens como nas mulheres. Nas mulheres, uma terceira fase de perda de osso ocorre também, muito provavelmente devido a deficiências de estrogénio pós-menopausa. Só durante esta fase, as mulheres podem perder uma massa óssea adicional a partir do osso cortical e do compartimento trabecular (ver Riggs, supra). A perda de teor mineral ósseo pode ser causada por uma ampla variedade de condições e pode resultar em problemas médicos significativos. Por exemplo, a osteoporose é uma doença debilitante nos seres humanos e é caracterizada por marcadas diminuições na massa e na densidade mineral do osso esquelético, deterioração estrutural do osso, incluindo degradação da microarquitectura óssea e correspondentes aumentos na fragilidade óssea (isto é, diminuições da resistência óssea) e susceptibilidade à fractura em indivíduos afectados. A osteoporose nos seres humanos é geralmente precedida por osteopenia clínica (densidade mineral óssea que é maior que um desvio padrão mas menor que 2 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ 2,5 desvios padrão abaixo do valor médio para osso adulto jovem), uma condição verificada em aproximadamente 25 milhões de pessoas nos Estados Unidos. Outros 7-8 milhões de pacientes nos Estados Unidos foram diagnosticados com osteoporose clinica (definida como conteúdo mineral ósseo maior que 2,5 desvios padrão abaixo do do osso adulto jovem maduro) . A frequência da osteoporose na população humana aumenta com a idade. Entre os caucasianos, a osteoporose é predominante nas mulheres que, nos Estados Unidos, constituem 80% do grupo de pacientes com osteoporose. O aumento da fragilidade e susceptibilidade a fracturas do osso esquelético em idosos é agravado pelo maior risco de quedas acidentais nesta população. Quadris, pulsos e vértebras fracturados estão entre as lesões mais comuns associadas a osteoporose. As fracturas de quadril, em particular, são extremamente desconfortáveis e dispendiosas para o paciente, e, para as mulheres, correlacionam-se com elevadas taxas de mortalidade e morbidez.
Embora a osteoporose tenha sido considerada como um aumento no risco de fractura devido a uma diminuição da massa óssea, alguns dos tratamentos presentemente disponíveis para distúrbios esqueléticos podem aumentar a densidade óssea de adultos, e a maioria dos tratamentos presentemente disponíveis funcionam primariamente através da inibição de mais reabsorção óssea em vez de estimularem a formação de osso novo. O estrogénio está actualmente a ser prescrito para retardar a perda óssea. No entanto, existe alguma controvérsia sobre se os pacientes obtêm qualquer benefício a longo prazo e se o estrogénio tem qualquer efeito em pacientes com mais de 75 anos de idade. Além disso, acredita-se que a utilização de estrogénio aumenta o risco de cancro da mama e do endométrio. A calcitonina, osteocalcina com vitamina K, ou doses elevadas de cálcio na dieta, com ou sem vitamina D, foram também sugeridas para mulheres pós-menopáusicas. Doses elevadas de cálcio, contudo, têm muitas vezes efeitos secundários gastrointestinais indesejáveis, e os níveis séricos e urinários de cálcio devem ser monitorizados continuamente (p. ex., Khosla e Riggs, Mayo Clin. Proc. 70: 978982, 1995). 3 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Outras abordagens terapêuticas actuais para a osteoporose incluem bisfosfonatos (p. ex., Fosamax™, Actonel™, Bonviva™, Zometa™, olpadronato, neridronato, Skelid, Bonefos), hormona da paratiróide, calciliticos, calcimiméticos (p. ex., cinacalcet), estatinas, esteróides anabolizantes, lantânio e sais de estrôncio, e fluoreto de sódio. Tais terapêuticos, no entanto, são muitas vezes associadas a efeitos secundários indesejáveis (ver Khosla e Riggs, supra). A esclerostina, o produto do gene SOST, está ausente na esclerosteose, uma doença do esqueleto caracterizada por sobrecrescimento do osso e ossos fortes e densos (Brunkow et al., Am. J. Hum. Genet., 68: 577-589, 2001; Balemans et al., Zumbido. Mol. Genet., 10: 537-543, 2001). A sequência de aminoácidos da esclerostina humana está relatada por Brunkow et al., ibid e é aqui divulgada como SEQ ID NO: 1.
BREVE SUMÁRIO DO INVENTO São aqui divulgadas composições e métodos que podem ser utilizados para aumentar pelo menos uma de formação de osso, densidade mineral óssea, teor mineral ósseo, massa óssea, qualidade óssea e resistência óssea, e que podem portanto ser utilizados para tratar uma ampla variedade de condições em que um aumento em pelo menos uma de formação de osso, densidade mineral óssea, teor mineral ósseo, massa óssea, qualidade óssea e resistência óssea é desejável. O presente invento oferece também outras vantagens relacionadas aqui descritas. O invento refere-se a anticorpos que se ligam especificamente a esclerostina. Os anticorpos compreendem as seguintes sequências de CDR: CDR-H1 DYNMH (SEQ ID NO:245); CDR-H2 EINPNSGGAGYNQKFKG (SEQ ID NO:246); CDR-H3 LGYDDIYDDWYFDV (SEQ ID NO:247); CDR-L1 RASQDISNYLN (SEQ ID NO:7 8); CDR-L2 YTSRLLS (SEQ ID NO:79); e CDR-L3 QQGDTLPYT (SEQ ID NO:80). Os anticorpos podem ser caracterizados pela sua capacidade para bloquear de forma cruzada a ligação de pelo menos um anticorpo aqui divulgado a esclerostina e/ou ser bloqueados de forma cruzada de se ligar a esclerostina através de pelo menos um anticorpo aqui divulgado. Os 4 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ anticorpos também podem ser caracterizados pelo seu padrão de ligação a péptidos de esclerostina humana em um "ensaio de ligação de competição a epitopos de péptidos de esclerostina humana", tal como aqui divulgado. 0 invento refere-se a anticorpos que podem aumentar pelo menos um de formação de osso, densidade mineral óssea, teor mineral ósseo, massa óssea, qualidade óssea e resistência óssea num mamífero. 0 invento refere-se a anticorpos que podem bloquear o efeito inibidor da esclerostina num ensaio de mineralização baseado em células. A divulgação refere-se também a uma porção imunogénica de esclerostina humana compreendendo os aminoácidos 86-111 de SEQ ID N0:1; a porção imunogénica pode consistir essencialmente em aminoácidos contíguos CGPARLLPNAIGRGKWWRPSGPDFRC (SEQ ID NO:6). A divulgação refere-se ainda a uma porção imunogénica de esclerostina de rato, compreendendo os aminoácidos 92-109 de SEQ ID NO:98; a porção imunogénica pode consistir essencialmente nos aminoácidos contíguos PNAIGRVKWWRPNGPDFR (SEQ ID NO:96). A descrição refere-se ainda a uma porção imunogénica de esclerostina de rato, compreendendo os aminoácidos 99-120 de SEQ ID NO:98; a porção imunogénica pode consistir essencialmente nos aminoácidos contíguos KWWRPNGPDFRCIPDRYRAQRV (SEQ ID NO:97). A divulgação refere-se também a um anticorpo isolado que bloqueia de forma cruzada a ligação de pelo menos um dos anticorpos 1-24 (Ab-1 a Ab-24) a uma proteína esclerostina. O agente de ligação a esclerostina pode também ser bloqueado de forma cruzada de se ligar a esclerostina através de pelo menos um dos anticorpos 1-24 (Ab-1 a Ab-24) . O anticorpo isolado, ou um fragmento seu de ligação ao antigénio, pode ser um anticorpo policlonal, um anticorpo monoclonal, um anticorpo humanizado, um anticorpo humano, ou um anticorpo quimérico. 5 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ A divulgação refere-se também a um anticorpo isolado que é bloqueado de forma cruzada de se ligar a esclerostina através de pelo menos um dos anticorpos 1-24 (Ab-1 a Ab-24); o anticorpo isolado, ou um fragmento de ligação ao antigénio deste, podem ser um anticorpo policlonal, um anticorpo monoclonal, um anticorpo humanizado, um anticorpo humano, ou um anticorpo quimérico. A divulgação refere-se também a um anticorpo isolado que exibe um padrão de ligação semelhante aos péptidos de esclerostina humana num "ensaio de ligação de competição a epitopos de péptidos de esclerostina humana", tal como o exibido por pelo menos um dos anticorpos Ab-A, Ab-B, Ab-C ou Ab-D; o anticorpo isolado, ou um fragmento seu de ligação ao antigénio, pode ser um anticorpo policlonal, um anticorpo monoclonal, um anticorpo humanizado, um anticorpo humano, ou um anticorpo quimérico. 0 invento refere-se ainda ao anticorpo reivindicado para utilização num método para tratamento de um distúrbio ósseo associado a pelo menos um de reduzida formação de osso, reduzida densidade mineral óssea, reduzido teor mineral ósseo, reduzida massa óssea, reduzida qualidade óssea e reduzida resistência óssea num sujeito mamífero, que compreende o proporcionar a um sujeito com necessidade de tal tratamento, uma quantidade do anticorpo suficiente para aumentar pelo menos um de formação de osso, densidade mineral óssea, teor mineral ósseo, massa óssea, qualidade óssea e resistência óssea. São aqui proporcionados anticorpos que se ligam especificamente a esclerostina humana. Os anticorpos têm a capacidade de bloquear de forma cruzada a ligação de pelo menos um anticorpo aqui divulgado a esclerostina humana e/ou de serem bloqueados de forma cruzada de se ligar a esclerostina humana através de pelo menos um anticorpo aqui divulgado. É também proporcionado um anticorpo isolado, ou um fragmento de ligação ao antigénio deste, que pode aumentar pelo menos um de formação de osso, densidade mineral óssea, 6 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ teor mineral ósseo, massa óssea, qualidade óssea e resistência óssea num mamífero. É também proporcionado um anticorpo isolado, ou um fragmento de ligação ao antigénio deste, que pode bloquear o efeito inibidor da esclerostina num ensaio de mineralização baseado em células. É também descrito um anticorpo, que se liga especificamente a esclerostina humana e tem pelo menos uma sequência CDR seleccionada a partir de SEQ ID NOs : 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48 , 49, 50, 51, 52, 53 , 54, 55, 56, 57, 58, 59 , 60, 61, 62, 78, 79, 80 , 81 , 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 351, 352, 353, 358 , 359, e 360, e variantes destas, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antigénio deste neutraliza a esclerostina. É também descrito um anticorpo que se liga especificamente a esclerostina humana e tem pelo menos uma sequência CDR seleccionada a partir de SEQ ID NOs : 39, 40 41, 42, 43 , 44 , 45, 46, 47, 4 8, 49, 50, 51, 52, 53 , 54, 55 KD LO 57, 58, 59, 60, 61, 62, 78, 79, 80 , 81 , 99, 100, 101 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113 114, 115, 116, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 268, 269 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281 282, 283, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293 294, 295, 296, 297, 298, 351, 352, 353, 358 , 359, e 360, variantes destas. São também descritas regiões de esclerostina humana que são importantes para a actividade in vivo da proteína. 7 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS A Figura 1 representa as sequências de aminoácidos da forma madura (péptidos sinal clivados) da cadeia leve (Figura IA) (SEQ ID NO:23) e cadeia pesada (Figura 1B) (SEQ ID NO:27) para o anticorpo anti-esclerostina humana e anti-esclerostina de ratinho Ab-A. A Figura 2 representa as sequências de aminoácidos da forma madura (péptidos sinal clivados) da cadeia leve (Figura 2A) (SEQ ID N0:31) e cadeia pesada (Figura 2B) (SEQ ID NO:35) para o anticorpo anti-esclerostina humana e anti-esclerostina de ratinho Ab-B. A Figura 3 representa as sequências de aminoácidos da forma madura (péptidos sinal clivado) da cadeia leve (Figura 3A) (SEQ ID NO: 15) e da cadeia pesada (Figura 3B) (SEQ ID NO:19) para o anticorpo anti-esclerostina humana e anti-esclerostina de ratinho Ab-C. A Figura 4 representa as sequências de aminoácidos da forma madura (péptidos sinal clivados) da cadeia leve (Figura 4A) (SEQ ID N0:7) e cadeia pesada (Figura 4B) (SEQ ID N0:11) para o anticorpo anti-esclerostina humana e anti-esclerostina de ratinho Ab-D. A Figura 5 representa a densidade mineral óssea em ratinhos medida em dois locais do esqueleto (vértebras lombares e metáfise tibial), após 3 semanas de tratamento com veículo, PTH (1-34), Ab-A ou AB-B. A Figura 6 mostra a densidade mineral óssea em ratinhos medida em dois locais do esqueleto (vértebras lombares e metáfise tibial) após 2 semanas de tratamento com veículo, PTH (1-34) ou Ab-C. A Figura 7 representa a densidade mineral óssea em ratinhos medida em dois locais do esqueleto (vértebras lombares e metáfise tibial) após 3 semanas de tratamento com veiculo ou com Ab-D. 8 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ A Figura 8 representa a sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal clivado) da esclerostina humana (SEQ ID N0:1). É também representada a sequência nucleotidica da região de codificação da esclerostina humana que codifica a forma madura da esclerostina humana. As oito cisteinas estão numeradas de Cl a C8. 0 nó de cistinas é formado por três ligações dissulfureto (C1-C5; C3-C7; C4-C8). C2 e C6 também formam uma ligação dissulfureto, no entanto este dissulfureto não faz parte do nó de cistinas. A Figura 9 representa um esquema da estrutura básica da esclerostina humana. Existe um braço N-terminal (desde o primeiro Q até Cl) e um braço C-terminal (de C8 ao Y terminal). Entre estes braços existe a estrutura de nó de cistinas (formada por três dissulfuretos: C1-C5; C3-C7; C4-C8) e três voltas que são designadas Volta 1, Volta 2 e Volta 3. As regiões distais de Volta 1 e Volta 3 são ligadas através do dissulfureto C2-C6. Os potenciais locais de clivagem por tripsina estão indicados (arginina=R e lisina=K). Alguns dos potenciais locais de clivagem por AspN são indicados (são mostrados somente os resíduos de ácido aspártico (D)). A Figura 10 representa os mapas peptídicos de HPLC de esclerostina humana após digestão com tripsina ou AspN. Os péptidos de esclerostina humana gerados através de digestão com tripsina estão indicados (T19.2, T20, T20.6 e T21-22) tal como os péptidos de esclerostina humana gerados através de AspN (AspN14.6, AspN18.6 e AspN22.7-23.5). A Figura 11 representa a informação de sequência e da massa para os péptidos ligados com dissulfureto da esclerostina humana isolados gerados através de digestão com tripsina. Pos. seq. = posição na sequência. Obs. = observada. A massa observada foi determinada através de análise ESI-LC-MS. A Figura 12 representa a informação de sequência e da massa para os péptidos de esclerostina humana isolados gerados através de digestão com AspN. O péptido AspN22.7-23.5 contém as 4 ligações dissulfureto. Pos. seq. = posição na 9 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ sequência. Obs. = observada. A massa observada foi determinada através de análise ESI-LC-MS. A Figura 13 mostra um esquema linear de quatro péptidos de esclerostina humana (T19.2, T20, T20.6 e T21-22) gerados através de digestão com tripsina. A Figura 14 mostra um esquema linear de cinco péptidos de esclerostina humana (AspN14.6, AspN 18.6 e AspN22.7-23.5) gerados através de digestão com AspN. 0 pico de HPLC de AspN14.6 é composto por três péptidos não ligados através de quaisquer ligações dissulfureto. A Figura 15 mostra o sinal da unidade de ressonância (Ru) do "ensaio de ligação de competição a epitopos de
péptidos de esclerostina humana" baseado em Biacore. A ligação relativa do mAb a vários péptidos de esclerostina humana (em solução) versus a ligação do mAb à esclerostina humana na forma intacta madura (imobilizada num chip Biacore) foi avaliada. Os dados mostrados são para Ab-A. Os péptidos de esclerostina humana utilizados foram T19.2, T20, T20.6, T21-22, AspN14.6, AspN18.6 e AspN22.7-23.5. A Figura 16 mostra o sinal da unidade de ressonância (Ru) do "ensaio de ligação de competição a epitopos de
péptidos de esclerostina humana" baseado em Biacore. A ligação relativa do mAb a vários péptidos de esclerostina humana (em solução) versus a ligação do mAb à esclerostina humana na forma intacta madura (imobilizada num chip Biacore) foi avaliada. Os dados mostrados são para Ab-B. Os péptidos de esclerostina humana utilizados foram T19.2, T20, T20.6, T21-22, AspN14.6, AspN18.6 e AspN22.7-23.5. A Figura 17 mostra o sinal da unidade de ressonância (Ru) do "ensaio de ligação de competição a epitopos de
péptidos de esclerostina humana" baseado em Biacore. A ligação relativa do mAb a vários péptidos de esclerostina humana (em solução) versus a ligação do mAb à esclerostina humana na forma intacta madura (imobilizada num chip Biacore) foi avaliada. Os dados mostrados são para Ab-C. Os péptidos de esclerostina humana utilizados foram T19.2, T20, T20.6, T21-22, AspN14.6, AspN18.6 e AspN22.7-23.5. 10 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ A Figura 18 mostra ο sinal da unidade de ressonância (Ru) do "ensaio de ligação de competição a epitopos de péptidos de esclerostina humana" baseado em Biacore. A ligação relativa do mAb a vários péptidos de esclerostina humana (em solução) versus a ligação do mAb à esclerostina humana na forma intacta madura (imobilizada num chip Biacore) foi avaliada. Os dados mostrados são para Ab-D. Os péptidos de esclerostina humana utilizados foram T19.2, T20, T20.6, T21-22, AspNl4.6, AspN18.6 e AspN22.7-23.5. A Figura 19 mostra dois epitopos de ligação a mAb da esclerostina humana. A Figura 19A mostra a sequência do epitopo da Volta 2 para a ligação de Ab-A e Ab-B a esclerostina humana (SEQ ID NO:6). A Figura 19B mostra a sequência, a ligação dissulfureto e o esquema do epitopo de T20.6 para a ligação de Ab-C e Ab-D à esclerostina humana (SEQ ID NO:2-5). A Figura 20 representa os mapas peptídicos de HPLC da esclerostina humana após digestão com tripsina. A Figura 20A mostra a digestão do complexo esclerostina humana-Ab-D. A Figura 20B mostra a digestão da esclerostina humana sozinha. Os picos dos péptidos T19.2, T20, T20.6 e T21-22 estão indicados. A Figura 21 mostra a sequência, a ligação dissulfureto e 0 esquema do epitopo "derivado 1 de T20.6 (nó de cistinas + 4 braços)" para a ligação de Ab-D a esclerostina humana. (SEQ ID NO :70-73) . A Figura 22 mostra os resultados do ensaio de mineralização da linha celular de osteoblastos MC3T3-E1-BF utilizado para identificação de mAb neutralizadores anti-esclerostina. A esclerostina de ratinho (Scl) foi utilizada a 1 yg/ml. Os anticorpos monoclonais foram utilizados a 10 e 5 pg/ml. A extensão de mineralização (vários tipos de fosfato de cálcio insolúvel) foi quantificada através da medição do cálcio.
A Figura 23 representa os resultados do ensaio de mineralização da linha celular de osteoblastos MC3T3-E1-BF 11 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ utilizado para identificação de mAb neutralizadores anti-esclerostina. A esclerostina humana (Scl) foi utilizada a 1 yg/ml. Os anticorpos monoclonais foram utilizados a 8 e 4 pg/ml. A extensão da mineralização (vários tipos de fosfato de cálcio insolúvel) foi quantificada através da medição do cálcio. A Figura 24 mostra os resultados do ensaio de mineralização da linha celular de osteoblastos MC3T3-E1-BF utilizado para identificação de mAb neutralizadores anti-esclerostina. A esclerostina humana (Scl) foi utilizada a 1 yg/ml. Os anticorpos monoclonais foram utilizados a 10 yg/ml. A extensão da mineralização (vários tipos de fosfato de cálcio insolúvel) foi quantificada através da medição do cálcio. A Figura 25 representa os resultados de um modelo de ratinho SCID de perda óssea induzida por inflamação. O tratamento com Ab-A protegeu os ratinhos de perda óssea relacionada com inflamação associada a colite quando medido como densidade mineral óssea total (Figura 25A), densidade óssea vertebral (Figura 25B), e densidade óssea femoral (Figura 25C).
DESCRIÇÃO DETALHADA A presente divulgação refere-se a regiões da proteína esclerostina humana que contêm epitopos reconhecidos pelos anticorpos que também se ligam a esclerostina inteira, e métodos de produção e utilização destes epitopos. A divulgação proporciona também anticorpos que se ligam especificamente a esclerostina ou porções de esclerostina, e métodos para a utilização de tais anticorpos. Os anticorpos são úteis para bloquear ou impedir a ligação da esclerostina humana a um ou mais ligandos.
Esclerostina humana recombinante/SOST está comercialmente disponível em R&D Systems (Minneapolis, MN, USA; cat# 1406-ST-025 de 2006). Além disso, esclerostina recombinante de ratinho/SOST está comercialmente disponível em R&D Systems (Minneapolis, MN, USA; cat# 1589-ST-025 de 2006) . Anticorpos monoclonais de ligação a esclerostina de 12 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ grau de investigação estão comercialmente disponíveis em R&D Systems (Minneapolis, MN, USA; monoclonal de ratinho: 2006 cat# MAB1406; monoclonal de rato: 2006 cat# MAB1589). As Patentes U.S. Nos. 6395511 e 6803453, e as Publicações de Patente U.S. 20040009535 e 20050106683 referem-se em geral a anticorpos anti-esclerostina.
Tal como aqui se utiliza, o termo esclerostina humana pretende incluir a proteína de SEQ ID NO:l e variantes alélicas desta. A esclerostina pode ser purificada a partir de células hospedeiras 293T que tenham sido transfectadas por um gene codificando esclerostina através de eluição de sobrenadante filtrado do fluido de cultura das células hospedeiras utilizando uma coluna Heparina HP, utilizando um gradiente de sal. A preparação e purificação utilizando cromatografia de permuta catiónica são descritas nos Exemplos 1 e 2. O termo "anticorpo" refere-se a um anticorpo intacto, ou um fragmento de ligação deste. Um anticorpo pode compreender uma molécula de anticorpo completa (incluindo anticorpo policlonal, monoclonal, quimérico, humanizado, ou versões humanas possuindo cadeias pesadas e/ou leves inteiras) ou compreender um fragmento de ligação ao antigénio deste. Fragmentos de anticorpo incluem fragmentos F(ab')2/ Fab, Fab', Fv, Fc e Fd, e podem ser incorporados em anticorpos de domínio simples, anticorpos de cadeia simples, maxicorpos, minicorpos, intracorpos, diacorpos, triacorpos tetracorpos, v-NAR e bis-scFv (Ver p. ex., Hollinger e Hudson, 2005, Nature Biotechnology, 23, 9: 1126-1136). Polipéptidos de anticorpo são também divulgados na Patente U.S. No. 6703199, incluindo monocorpos de polipéptidos de fibronectina. Outros polipéptidos de anticorpos são divulgados na Publicação de Patente U.S. 2005/0238646, que são polipéptidos de cadeia simples.
Fragmentos de ligação ao antigénio derivados de um anticorpo podem ser obtidos, por exemplo, através de hidrólise proteolítica do anticorpo, por exemplo, digestão com pepsina ou papaína de anticorpos inteiros de acordo com os métodos convencionais. A título de exemplo, fragmentos de anticorpo podem ser produzidos por clivagem enzimática dos 13 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ anticorpos com pepsina para proporcionar um fragmento 5S denominado F(ab')2· Este fragmento pode ainda ser clivado utilizando um agente redutor de tiol para produzir fragmentos monovalentes 3.5S Fab'. Opcionalmente, a reacção de clivagem pode ser realizada utilizando um grupo bloqueador para os grupos sulfidrilo que resultam da clivagem de ligações dissulfureto. Como alternativa, uma clivagem enzimática utilizando papaina produz dois fragmentos Fab monovalentes e um fragmento Fc directamente. Estes métodos são descritos, por exemplo, por Goldenberg, Patente U.S. No. 4331647, Nisonoff et ai., Arch. Biochem. Biophys. 89: 230, 1960; Porter, Biochem. J. 73: 119, 1959; Edelman et ai., em Methods in Enzymology 1: 422 (Academic Press 1967); e por Andrews, S.M. e Titus, J.A. em Current Protocols in Immunology (Coligan J.E., et al., eds) , John Wiley & Sons, New York (2003) páginas 2.8.1-2.8.10 e 2.10A.1-2.10A.5. Podem também ser utilizados outros métodos para clivagem de anticorpos, tais como separação de cadeias pesadas para formar fragmentos monovalentes de cadeia leve-pesada (Fd), mais clivagem de fragmentos ou outras técnicas enzimáticas, químicas, ou genéticas, desde que os fragmentos se liguem ao antigénio que é reconhecido pelo anticorpo intacto.
Um fragmento de anticorpo pode também ser qualquer proteína sintética ou geneticamente modificada. Por exemplo, fragmentos de anticorpo incluem fragmentos isolados consistindo na região variável da cadeia leve, fragmentos "Fv" consistindo nas regiões variáveis das cadeias pesadas e leves, moléculas polipeptídicas de cadeia simples recombinantes em que as regiões variáveis das cadeias leves e pesadas estão ligadas por um péptido ligador (proteínas scFv).
Outra forma de um fragmento de anticorpo é um péptido compreendendo uma ou mais regiões determinantes de complementaridade (CDR) de um anticorpo. As CDR (também referidas como "unidades mínimas de reconhecimento", ou "região hipervariável") podem ser obtidas através da construção de polinucleótidos que codificam a CDR de interesse. Tais polinucleótidos são preparados, por exemplo, utilizando a reacção em cadeia da polimerase para sintetizar a região variável utilizando ARNm de células produtoras de 14 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ anticorpos, como um molde (ver, por exemplo, Larrick et al., Methods: A Companion to Methods in Enzymology 2: 106, 1991; Courtenay-Luck, "Genetic Manipulation of Monoclonal Antibodies," em Monoclonal Antlbodles: Productlon, Englneerlng and Clinicai Application, Ritter et al. (eds.), página 166 (Cambridge University Press 1995); e Ward et al., "Genetic Manipulation and Expression of Antibodies," em Monoclonal Antibodies: Principies and Applications, Birch et al., (eds.)/ página 137 (Wiley-Liss, Inc. 1995)). O anticorpo reivindicado compreende seis CDR tal como aqui descrito. O anticorpo pode ainda compreender pelo menos um dominio de região variável de SEQ ID NO: 376 ou 378 aqui descritas. O dimero da região V compreende pelo menos uma cadeia VH e pelo menos uma VL que podem estar associadas de forma não covalente (daqui em diante designado como Fv) . Se desejado, as cadeias podem estar ligadas covalentemente, quer directamente, por exemplo através de uma ligação dissulfureto entre os dois domínios variáveis, quer através de um ligador, por exemplo um péptido ligador, para formar um Fv de cadeia simples (scFv) . O domínio da região variável pode ser um domínio variável de ocorrência natural ou uma versão modificada deste. Por versão modificada entenda-se um domínio da região variável que foi criado utilizando técnicas de engenharia de ADN recombinante. Tais versões modificadas incluem aquelas criadas, por exemplo, a partir de uma região variável de um anticorpo específico através de inserções, deleções ou alterações nas sequências de aminoácidos do anticorpo específico. Exemplos particulares incluem domínios da região variável modificados contendo pelo menos uma CDR e opcionalmente um ou mais aminoácidos estruturais de um primeiro anticorpo e o restante do domínio da região variável de um segundo anticorpo. O domínio da região variável pode ser covalentemente ligado num aminoácido C-terminal a pelo menos um outro domínio de anticorpo ou um fragmento deste. Assim, por exemplo, um domínio VH, que esteja presente no domínio da região variável pode ser ligado a um domínio CHI de imunoglobulina ou um fragmento deste. Da mesma forma, um 15 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ domínio VL pode estar ligado a um domínio CK ou a um fragmento deste. Deste modo, por exemplo, o anticorpo pode ser um fragmento Fab em que o domínio de ligação ao antigénio contém os domínios VH e VL associados ligados covalentemente nos seus terminais C a um domínio CHI e CK, respectivamente. 0 domínio CHI pode ser prolongado com mais aminoácidos, por exemplo para proporcionar uma região de charneira ou uma porção de um domínio de região charneira tal como verificado num fragmento Fab', ou para proporcionar outros domínios, tais como domínios de anticorpo CH2 e CH3.
Por exemplo, as CDR podem ser incorporadas em regiões estruturais de anticorpo conhecidas (IgGl, IgG2, etc.), ou conjugadas com um veículo adequado para melhorar a semivida destas. Veículos apropriados incluem, mas não estão limitados a Fc, polietilenoglicol (PEG) , albumina, transferrina, e semelhantes. Estes e outros veículos adequados são conhecidos na técnica. Tais péptidos CDR conjugados podem estar na forma monomérica, dimérica, tetramérica, ou outra. Numa concretização, um ou mais polímeros solúveis em água estão ligados a uma ou mais posições específicas, por exemplo no terminal amino de um anticorpo.
Em certas concretizações preferidas, um anticorpo compreende uma ou mais ligações a polímeros solúveis em água, incluindo, mas não limitado a, polietilenoglicol, polioxietilenoglicol ou polipropilenoglicol. Ver, p. ex., Pat. U.S. Nos. 4640835, 4496689, 4301144, 4670417, 4791192 e 4179337. Em certas concretizações, um anticorpo derivado compreende um ou mais de monometoxi-polietilenoglicol, dextrano, celulose, ou outros polímeros baseados em hidratos de carbono, poli-(N-vinil-pirrolidona)-polietilenoglicol, homopolímeros de propilenoglicol, um copolímero de óxido de polipropileno/óxido de etileno, polióis polioxietilados (p. ex., glicerol) e álcool polivinílico, bem como misturas de tais polímeros. Em certas concretizações, um ou mais polímeros solúveis em água estão ligados aleatoriamente a uma ou mais cadeias laterais. Em certas concretizações, PEG pode actuar melhorando a capacidade terapêutica de um agente de ligação, tal como um anticorpo. Alguns destes métodos são discutidos, por exemplo, na Pat. U.S. No. 6133426. 16 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Será apreciado que um anticorpo aqui descrito possa ter pelo menos uma substituição de aminoácidos, desde que o anticorpo mantenha a especificidade de ligação. Portanto, as modificações das estruturas dos anticorpos estão englobadas dentro do âmbito da divulgação. Estas podem incluir substituições de aminoácidos, que podem ser conservativas ou não conservativas, que não destroem a capacidade de ligação de um anticorpo a esclerostina. As substituições de aminoácidos conservativas podem englobar residuos de aminoácidos que não ocorrem naturalmente, que são tipicamente incorporados através de sintese quimica de péptidos, em vez de através de sintese em sistemas biológicos. Estes incluem peptidomiméticos e outras formas revertidas ou invertidas de porções de aminoácidos. Uma substituição de aminoácidos conservativa pode também envolver uma substituição de um residuo de aminoácido nativo com um residuo normativo de modo a que exista pouco ou nenhum efeito sobre a polaridade ou carga do residuo de aminoácido nessa posição.
As substituições não conservativas podem envolver a troca de um membro de uma classe de aminoácidos ou miméticos de aminoácidos por um membro de outra classe, com diferentes propriedades físicas (p. ex., tamanho, polaridade, hidrofobia, carga). Tais resíduos substituídos podem ser introduzidos em regiões do anticorpo humano que sejam homólogas com anticorpos não humanos ou em regiões não homólogas da molécula.
Além disso, um perito na técnica pode gerar variantes de ensaio contendo uma única substituição de aminoácidos em cada resíduo de aminoácido desejado. As variantes podem depois ser pesquisadas utilizando ensaios de actividade conhecidos dos peritos na técnica. Tais variantes podem ser utilizadas para reunir informações sobre as variantes adequadas. Por exemplo, se se descobrir que uma alteração num determinado resíduo de aminoácido resultou em actividade destruída, reduzida indesejavelmente ou inadequada, variantes com essa alteração podem ser evitadas. Por outras palavras, com base na informação recolhida a partir dessas experiências de rotina, um perito na técnica pode facilmente determinar os aminoácidos onde outras substituições devem ser evitadas quer isoladamente quer em combinação com outras mutações. 17 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Um perito na técnica será capaz de determinar variantes adequadas do polipéptido tal como aqui exposto, utilizando técnicas bem conhecidas. Em certas concretizações, um perito na técnica pode identificar áreas apropriadas da molécula que podem ser alteradas sem destruir a actividade através do direccionamento para regiões que não se creia serem importantes para a actividade. Em certas concretizações, pode-se identificar residuos e porções das moléculas que são conservados entre polipéptidos semelhantes. Em certas concretizações, mesmo áreas que podem ser importantes para a actividade biológica ou para a estrutura podem estar sujeitas a substituições de aminoácidos conservativas sem destruir a actividade biológica ou sem afectar adversamente a estrutura do polipéptido.
Além disso, um perito na técnica pode rever os estudos de estrutura-função que identificam os residuos em polipéptidos semelhantes que são importantes para a actividade ou estrutura. Tendo em vista uma tal comparação, é possivel prever a importância de residuos de aminoácidos numa proteína que correspondem a resíduos de aminoácidos que sejam importantes para a actividade ou estrutura em proteínas semelhantes. Um perito na técnica pode optar por substituições de aminoácidos quimicamente semelhantes para tais resíduos de aminoácidos previstos serem importantes.
Um perito na técnica pode também analisar a estrutura tridimensional e a sequência de aminoácidos em relação a essa estrutura em polipéptidos semelhantes. Tendo em vista tal informação, um perito na técnica pode prever o alinhamento de resíduos de aminoácidos de um anticorpo em relação à sua estrutura tridimensional. Em certas concretizações, um perito na técnica pode escolher não fazer alterações radicais nos resíduos de aminoácidos previstos estarem na superfície da proteína, uma vez que tais resíduos podem estar envolvidos em interacções importantes com outras moléculas.
Um certo número de publicações científicas tem sido dedicado à previsão da estrutura secundária. Ver Moult, J., Curr. Op. in Biotech., 7(4): 422-427 (1996), Chou et al. , Biochemistry, 13(2): 222-245 (1974); Chou et al., 18 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Biochemistry, 113(2): 211-222 (1974); Chou et al. , Adv.
Enzymol. Relat. Areas Mol. Biol., 47: 45-148 (1978); Chou et al., Ann. Rev. Biochem., 47: 251-27 6 e Chou et al., Biophys. J., 26: 367-384 (1979). Além disso, estão disponíveis programas de computador para auxiliar na previsão da estrutura secundária. Um método de previsão da estrutura secundária baseia-se na modelação de homologia. Por exemplo, dois polipéptidos ou duas proteínas que tenham uma identidade de sequência maior do que 30% ou semelhança maior do que 40%, têm frequentemente topologias estruturais semelhantes. O crescimento recente da base de dados da estrutura de proteínas (BDP) tem proporcionado maior previsibilidade da estrutura secundária, incluindo o número potencial de dobras dentro de uma estrutura de polipéptido ou de proteína. Ver Holm et al., Nucl. Acid. Res., 27(1): 244-247 (1999). Foi sugerido (Brenner et al., Curr. Op. Struct. Biol., 7(3): 369-376 (1997)) que existe um número limitado de dobras num dado polipéptido ou proteína e que uma vez resolvido um número crítico de estruturas, a previsão estrutural tornar-se-á significativamente mais precisa. Métodos adicionais de prever a estrutura secundária incluem "enfiamento" (Jones, D., Curr. Opin. Struct. Biol., 7(3): 377-87 (1997); Sippl et al., Structure, 4(1): 15-19 (1996)), "análise do perfil" (Bowie et al., Science, 253: 164-170 (1991); Gribskov et al., Meth. Enzym., 183: 146-159 (1990); Gribskov et al., Proc. Nat. Acad. Sei., 84(13): 4355-4358 (1987)), e "ligação evolutiva" (Vr Holm, supra (1999), e
Brenner, supra (1997)).
Variantes de anticorpos incluem variantes de glicosilação em que o número e/ou tipo de local de glicosilação foi alterado comparativamente com as sequências de aminoácidos de um polipéptido parental. Em certas concretizações, as variantes compreendem um número maior ou menor de locais de glicosilação ligados em N do que a proteína nativa. Um local de glicosilação ligado em N é caracterizado pela sequência: Asn-X-Ser ou Asn-X-Thr, em que o resíduo de aminoácido designado por X pode ser qualquer resíduo de aminoácido excepto prolina. A substituição de resíduos de aminoácidos para criar esta sequência proporciona um potencial novo local para a adição de uma cadeia de 19 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ hidrato de carbono ligada em N. Alternativamente, substituições que eliminem esta sequência removerão uma cadeia de hidratos de carbono existente ligada em N. É também proporcionado um rearranjo de cadeias de hidratos de carbono ligadas em N em que um ou mais locais de glicosilação ligados em N (tipicamente os que são de ocorrência natural) são eliminados e um ou mais novos locais ligados em N são criados. Variantes de anticorpo preferidas incluem variantes de cisteina em que um ou mais resíduos de cisterna são suprimidos ou substituídos por outro aminoácido (p. ex., serina) em comparação com a sequência de aminoácidos parental. As variantes de cisteina podem ser úteis quando os anticorpos devem ser redobrados numa conformação biologicamente activa, tal como após o isolamento de corpos de inclusão insolúveis. As variantes de cisteina têm geralmente menos resíduos de cisteina do que a proteína nativa, e têm tipicamente um número par para minimizar as interacções resultantes de cisteínas desemparelhadas.
Substituições de aminoácidos desejadas (quer conservativas quer não conservativas) podem ser determinadas pelos peritos na técnica no momento de tais substituições serem desejadas. Em certas concretizações, as substituições de aminoácidos podem ser utilizadas para identificar resíduos importantes de anticorpos para esclerostina, ou para aumentar ou diminuir a afinidade dos anticorpos para esclerostina aqui descritos.
De acordo com certas concretizações, substituições de aminoácidos preferidas são aquelas que: (1) reduzem a susceptibilidade à proteólise, (2) reduzem a susceptibilidade à oxidação, (3) alteram a afinidade de ligação para a formação de complexos proteicos, (4) alteram as afinidades de ligação, e/ou (4) conferem ou modificam outras propriedades físico-químicas ou funcionais em tais polipéptidos. Substituições de aminoácidos únicas ou múltiplas (p. ex., substituições de aminoácidos conservativas) podem ser feitas na sequência de ocorrência natural (em certas concretizações, na porção do polipéptido fora do domínio ou dos domínios formando contactos intermoleculares). Em certas concretizações, uma substituição de aminoácidos conservativa pode tipicamente não mudar substancialmente as 20 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ características estruturais da sequência parental (p. ex., uma substituição de aminoácidos não deve tender a quebrar uma hélice que ocorra na sequência parental, ou destruir outro tipo de estrutura secundária que caracterize a sequência parental). Exemplos de estruturas secundárias e terciárias polipeptidicas reconhecidas na técnica estão descritas em "Proteins, Structures and Molecular Principies" (Creighton, Ed., W. H. Freeman and Company, New York (1984)); Introduction to Protein Structure (C. Branden e J. Tooze, eds., Garland Publishing, New York, N.Y. (1991)); e Thornton et al. Nature 354:105 (1991).
Os anticorpos do invento podem ser quimicamente ligados com polímeros, lípidos, ou outras porções.
Os anticorpos compreendem as CDR aqui descritas incorporadas numa estrutura de esqueleto biocompativel. Num exemplo, a estrutura de esqueleto biocompativel compreende um polipéptido ou uma porção deste que é suficiente para formar um suporte estrutural ou uma estrutura ou um andaime de conformação estável, que é capaz de apresentar as CDR, uma região variável, etc., numa região superficial localizada. Tais estruturas podem ser um polipéptido de ocorrência natural ou uma "dobra" polipeptídica (um motivo estrutural), ou podem ter uma ou várias modificações, tais como adições, deleções ou substituições de aminoácidos, em relação a um polipéptido de ocorrência natural ou dobra. Esses suportes podem ser derivados de um polipéptido de qualquer espécie (ou de mais de uma espécie) , tal como de um ser humano, outro mamifero, outro vertebrado, invertebrado, planta, bactéria ou virus. São conhecidas estruturas de esqueleto biocompativeis baseadas em andaimes ou esqueletos proteicos além dos dominios de imunoglobulina. Por exemplo, são conhecidas as baseadas em fibronectina, anquirina, lipocalina, neocarzinostaina, citocromo b, dedo de zinco CPI, PST1, hélice superenrolada (coiled coil), LACI-D1, dominio Z e dominios tendramisat (Ver p. ex., Nygren e Uhlen de 1997, Current Opinion in Structural Biology, 7: 463-469). 21 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Em concretizações preferidas, será apreciado que os anticorpos da presente invenção incluem os anticorpos humanizados aqui descritos. Anticorpos humanizados tais como aqueles aqui descritos podem ser produzidos utilizando técnicas conhecidas dos peritos na técnica (Zhang, W. et al. Molecular Immunology. 42 (12) : 1445-1451, 2005; Hwang W. et ai., Methods 36(1): 35-42, 2005; Dall'Acqua WF, et ai.,
Methods 36(1): 43-60, 2005; e Clark, M., Immunology Today 21(8): 397-402, 2000) .
Um anticorpo que compreende CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-Ll, CDR-L2 e CDR-L3 tal como descrito acima pode ser obtido através de expressão a partir de uma célula hospedeira contendo ADN codificando para estas sequências. Um ADN codificando para cada sequência de CDR pode ser determinado com base na sequência de aminoácidos da CDR e sintetizado em conjunto com qualquer estrutura da região variável do anticorpo desejada e sequências de ADN da região constante, utilizando técnicas de sintese de oligonucleótidos, mutagénese dirigida ao local e reacção em cadeia da polimerase (PCR), conforme apropriado. ADN codificando para estruturas de região variável e regiões constantes está amplamente disponível aos peritos na técnica a partir de bases de dados de sequências genéticas tais como GenBank®. Cada uma das CDR acima mencionadas estará tipicamente localizada numa estrutura de região variável nas posições 31-35 (CDR-Hl), 50-65 (CDR-H2) e 95-102 (CDR-H3) da cadeia pesada e as posições 24-34 (CDR-L1), 50-56 (CDR-L2) e 89-97 (CDR-L3) da cadeia leve de acordo com o sistema de numeração de Kabat (Kabat et al., 1987 em Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Health and Human Services, NIH, USA).
Uma vez sintetizado, o ADN codificando um anticorpo do invento ou um fragmento deste, pode ser propagado e expresso de acordo com qualquer um de uma variedade de procedimentos bem conhecidos para excisão, ligação, transformação e transfecção de ácidos nucleicos utilizando qualquer um de vários vectores de expressão conhecidos. Assim, em certas concretizações a expressão de um fragmento de anticorpo pode ser preferida num hospedeiro procariótico, tal como Escherichla coll (ver, p. ex., Pluckthun et al., 1989, 22 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Methods Enzymol. 178: 497-515). Em certas outras concretizações, a expressão do anticorpo ou de um fragmento deste pode ser preferida numa célula hospedeira eucariótica, incluindo levedura (p. ex., Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces pombe e Pichia pastoris), células animais (incluindo células de mamífero) ou células vegetais. Exemplos de células animais adequadas incluem, mas não estão limitados a, mieloma (tal como uma linha NSO de ratinho), COS, CHO, ou células de hibridoma. Exemplos de células vegetais incluem tabaco, milho, soja e células de arroz.
Um ou mais vectores de expressão replicáveis contendo ADN codificando uma região variável e/ou constante de anticorpo, podem ser preparados e utilizados para transformar uma linha celular apropriada, por exemplo uma linha celular de mieloma não produtora, tal como uma linha NSO de ratinho ou uma bactéria, tal como E. coli, na qual ocorrerá a produção do anticorpo. Para obter uma transcrição e tradução eficientes, a sequência de ADN em cada vector deve incluir sequências reguladoras apropriadas, particularmente um promotor e uma sequência líder operativamente ligadas à sequência do domínio variável. Métodos particulares para produzir anticorpos desta forma são geralmente bem conhecidos e utilizados rotineiramente. Por exemplo, procedimentos básicos de biologia molecular são descritos por Maniatis et al. ("Molecular Cloning, A Laboratory Manual", 2a ed., Cold Spring Harbor Laboratory, New York, 1989; ver também Maniatis et al., 3a ed., Cold Spring Harbor Laboratory, New York, (2001)). A sequenciação de ADN pode ser efectuada tal como descrito em Sanger et al. (PNAS 74: 5463, (1977)) e "Amersham International plc sequencing handbook", e a mutagénese dirigida ao local pode ser realizada de acordo com métodos bem conhecidos na técnica (Kramer et al., Nucleic Acids Res. 12: 9441, (1984); Kunkel Proc. Natl. Acad. Sei. USA 82: 488-92 (1985); Kunkel et al., Methods in Enzymol. 154: 367-82 (1987); Anglian Biotechnology Ltd handbook). Além disso, numerosas publicações descrevem técnicas adequadas para a preparação de anticorpos através de manipulação de ADN, criação de vectores de expressão, e transformação e cultura de células apropriadas (Mountain, A. e Adair, J.R. em "Biotechnology and Genetic Engineering Reviews" (ed. Tombs, M.P., 10, Capítulo 1, 1992, Intercept, Andover, UK); "Current 23 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Protocols in Molecular Biology", 1999, F.M. Ausubel (ed.), Wiley Interscience, New York).
Quando é desejado melhorar a afinidade de anticorpos de acordo com a divulgação contendo uma ou mais das CDR acima mencionadas, vários protocolos de maturação de afinidade podem ser utilizados, incluindo manutenção das CDR (Yang et al., J. Mol. Biol., 254, 392-403, 1995), baralhamento de cadeias (Marks et al., Bio/Technology, 10: 779-783, 1992), utilização de estirpes de mutação de E. coli. (Low et al., J. Mol.. Biol., 250: 350-368, 1996), baralhamento de ADN (Pattern et al., Curr. Opin. Blotechnol., 8, 724-733, 1997), apresentação fágica (Thompson et al., J. Mol. Biol., 256, 7-88, 1996) e PCR sexual (Crameri, et al., Nature, 391: 288-291, 1998). Todos estes métodos de maturação de afinidade são divulgados por Vaughan et al. (Nature Biotechnology, 16: 535-539, 1998).
Os anticorpos podem ser obtidos através de imunização convencional e procedimentos de fusão de células tal como aqui descrito e conhecido na técnica. Os anticorpos monoclonais podem ser gerados utilizando uma variedade de técnicas conhecidas. Em geral, os anticorpos monoclonais que se ligam a antigénios específicos podem ser obtidos através de métodos conhecidos dos peritos na técnica (ver, por exemplo, Kohler et al., Nature 256: 495, 1975; Coligan et al. (eds.), Current Protocols in Immunology, 1: 2.5.12.6.7 (John Wiley & Sons 1991); Patente U.S. Nos. RE 32011, 4902614, 4543439, e 4411993; "Monoclonal Antibodies, Hybridomas: A New Dimension in Biological Analyses", Plenum Press, Kennett, McKearn, e Bechtol (eds.) (1980); e "Antibodies: A Laboratory Manual", Harlow and Lane (eds.), Cold Spring Harbor Laboratory Press (1988); Picksley et al., "Production of monoclonal antibodies against proteins expressed in E. coli”, em "DNA Cloning 2: Expression Systems2, 2a Edição, Glover et al. (eds.), página 93 (Oxford University Press 1995)). Os fragmentos de anticorpo podem ser derivados utilizando qualquer técnica padrão adequada, tal como digestão proteolítica ou, opcionalmente, através de digestão proteolítica (por exemplo, utilizando papaína ou pepsina), seguido de redução suave de pontes dissulfureto e alquilação. Alternativamente, tais fragmentos podem também ser gerados 24 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ através de técnicas de engenharia genética recombinante tal como aqui descrito.
Os anticorpos monoclonais podem ser obtidos através da injecção de um animal, por exemplo, um rato, hamster, coelho, ou, preferivelmente, um ratinho, incluindo, por exemplo, um transgénico ou um knock-out, tal como é conhecido na técnica, com um imunogénio compreendendo a esclerostina humana de SEQ ID N0:1, ou um fragmento deste, de acordo com métodos conhecidos na técnica e aqui descritos. A presença de produção de anticorpos específicos pode ser monitorizada após a injecção inicial e/ou após uma injecção de reforço através da obtenção de uma amostra de soro e detecção da presença de um anticorpo que se liga a esclerostina humana ou péptido utilizando qualquer um dos vários métodos de imunodetecção conhecidos na técnica e aqui descritos. A partir de animais produtores dos anticorpos desejados, células linfóides, as células mais vulgarmente utilizadas do baço ou nódulo linfático, são removidas para obter linfócitos B. Os linfócitos B são então fundidos com um parceiro de fusão de células de mieloma sensibilizado com um fármaco, de preferência um que seja singeneico com o animal imunizado e que, opcionalmente, tenha outras propriedades desejáveis (p. ex., incapacidade para expressar produtos de genes de Ig endógenos, p. ex., P3X63 - Ag 8.653 (ATCC No. CRL 1580); NSO, SP20) para produzir hibridomas, que são linhas celulares eucarióticas imortais. As células linfóides (p. ex., do baço) e as células de mieloma podem ser combinadas por alguns minutos com um agente de promoção da fusão de membranas, tal como polietilenoglicol ou um detergente não iónico, e depois plaqueadas a baixa densidade num meio selectivo que suporte o crescimento de células de hibridoma, mas não de células de mieloma não fundidas. Um meio de selecção preferido é HAT (hipoxantina, aminopterina, timidina). Após um tempo suficiente, geralmente cerca de uma a duas semanas, são observadas colónias de células. Colónias simples são isoladas e os anticorpos produzidos pelas células podem ser testados quanto à actividade de ligação a esclerostina humana, utilizando qualquer um de uma variedade de imunoensaios conhecidos na técnica e aqui descritos. Os hibridomas são clonados (p. ex., através de clonagem por diluição limitante ou através de isolamento de placas em agar macio) e os clones 25 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ positivos que produzam um anticorpo especifico para esclerostina são seleccionados e cultivados. Os anticorpos monoclonais das culturas de hibridoma podem ser isolados a partir dos sobrenadantes das culturas de hibridomas. Um método alternativo para produção de um anticorpo monoclonal de murideo é injectar as células de hibridoma na cavidade peritoneal de um ratinho singeneico, por exemplo, um ratinho que tenha sido tratado (p. ex., iniciado com pristano), para promover a formação de fluido de ascite contendo o anticorpo monoclonal. Os anticorpos monoclonais podem ser isolados e purificados através de uma variedade de técnicas bem estabelecidas. Tais técnicas de isolamento incluem cromatografia de afinidade com Proteina A-Sepharose, cromatografia de exclusão de tamanho e cromatografia de permuta iónica (ver, por exemplo, Coligan nas páginas 2.7.1-2.7.12 e páginas 2.9.1-2.9.3; Baines et al., "Purification of Immunoglobulin G (IgG)", em Methods in Molecular Blology, Vol. 10, páginas 79-104 (The Humana Press, Inc. 1992)). Os anticorpos monoclonais podem ser purificados através de cromatografia de afinidade utilizando um ligando apropriado seleccionado com base em propriedades particulares do anticorpo (p. ex., isotipo da cadeia pesada ou leve, especificidade de ligação, etc.). Exemplos de um ligando adequado, imobilizado num suporte sólido, incluem Proteina A, Proteína G, um anticorpo anti-região constante (de cadeia leve ou cadeia pesada), um anticorpo anti-idiotipo, e uma proteína de ligação a TGF-beta, ou um fragmento ou variante deste.
Um anticorpo do presente invento pode ser um anticorpo monoclonal humano. Os anticorpos monoclonais humanos podem ser gerados através de qualquer número de técnicas com as quais aqueles que possuem perícia normal na técnica estarão familiarizados. Tais métodos incluem, mas não estão limitados a, transformação com vírus de Epstein Barr (EBV) de células do sangue periférico humano (p. ex., contendo linfócitos B), imunização In vltro de células B humanas, fusão de células de baço de ratinhos transgénicos imunizados portadores de genes de imunoglobulina humana inseridos, isolamento a partir de bibliotecas fágicas da região V de imunoglobulinas humanas, ou outros procedimentos como conhecido na técnica e com base na divulgação aqui. Por exemplo, anticorpos monoclonais 26 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ humanos podem ser obtidos a partir de ratinhos transgénicos que foram modificados para produzir anticorpos humanos específicos em resposta a um confronto antigénico. Métodos para obter anticorpos humanos a partir de ratinhos transgénicos são descritos, por exemplo, por Green et al., Nature Genet. 7:13, 1994; Lonberg et al., Nature 368: 856, 1994; Taylor et al., Int. Immun. 6: 579, 1994; Patente U.S. No. 5877397; Bruggemann et al., 1997 Curr. Opin. Blotechnol. 8: 455-58; Jakobovits et al., 1995 Ann. N. Y. Acad. Sei. 764: 525-35. Nesta técnica, elementos do locus da cadeia pesada e leve humana são introduzidos em estirpes de ratinhos derivadas de linhas celulares estaminais embrionárias que contêm rupturas alvo dos loci da cadeia pesada e da cadeia leve endógenas (ver também Bruggemann et al., Curr. Opin. Blotechnol. 8: 455-58 (1997)). Por exemplo, transgenes de imunoglobulina humana podem ser construções de mini-genes, ou transloei em cromossomas artificiais de levedura, que sofrem rearranjo de ADN específico de células B e hipermutação no tecido linfóide de ratinho. Anticorpos monoclonais humanos podem ser obtidos através de imunização dos ratinhos transgénicos, que podem em seguida produzir anticorpos humanos específicos para esclerostina. As células linfóides dos ratinhos transgénicos imunizados podem ser utilizadas para produzir hibridomas secretores de anticorpos humanos de acordo com os métodos aqui descritos. Soros policlonais contendo anticorpos humanos podem também ser obtidos a partir do sangue dos animais imunizados.
Outro método para gerar anticorpos humanos inclui a imortalização de células de sangue periférico humano através de transformação com EBV. Ver, p. ex., Patente U.S. No. 4464456. Uma tal linha de células B imortalizadas (ou linha de células linfoblastóides), produzindo um anticorpo monoclonal que se liga especificamente a esclerostina pode ser identificada através de métodos de imunodetecção tal como aqui proporcionados, por exemplo, um ELISA, e depois isolada através de técnicas de clonagem padrão. A estabilidade da linha celular linfoblastóide produtora de um anticorpo anti-esclerostina pode ser melhorada através da fusão da linha celular transformada com um mieloma de murídeo para a produção de uma linha celular híbrida ratinho-humana de acordo com métodos conhecidos na técnica (ver, p. ex., Glasky 27 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ et al., Hybridoma 8: 377-89 (1989)). Ainda outro método para gerar anticorpos monoclonais humanos é a imunização in vitro, que inclui iniciação de células B do baço humanas com esclerostina humana, seguida pela fusão de células B iniciadas com um parceiro de fusão heterohibrido. Ver, p. ex., Boerner et al., 1991, J. Immunol. 147: 86-95.
Em certas concretizações, uma célula B que está a produzir um anticorpo anti-esclerostina humana é seleccionada e as regiões variáveis da cadeia pesada e da cadeia leve são clonadas a partir da célula B, de acordo com técnicas de biologia molecular conhecidas na técnica (WO 92/02551; patente US 5627052; Babcook et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 93: 7843-48 (1996)) e aqui descritas. Células B de um animal imunizado podem ser isoladas a partir da amostra de baço, nódulos linfáticos ou sangue periférico, através da selecção de uma célula que esteja a produzir um anticorpo que se ligue especificamente a esclerostina. As células B podem também ser isoladas a partir de humanos, por exemplo, a partir de uma amostra de sangue periférico. Os métodos para a detecção de células B individuais que estejam a produzir um anticorpo com a especificidade desejada são bem conhecidos na técnica, por exemplo, através de formação de placas, separação de células activada por fluorescência, estimulação in vitro seguida por detecção do anticorpo especifico, e semelhantes. Métodos para selecção de células B produtoras de anticorpos específicos incluem, por exemplo, a preparação de uma suspensão células individuais de células B em agar mole que contém esclerostina humana. A ligação do anticorpo específico produzido pela célula B ao antigénio resulta na formação de um complexo, que pode ser visível como um imunoprecipitado. Após as células B produtoras do anticorpo desejado serem seleccionadas, os genes de anticorpos específicos podem ser clonados através de isolamento e amplificação do ADN ou ARNm de acordo com os métodos conhecidos na técnica e aqui descritos.
Um método adicional para a obtenção de anticorpos é através de apresentação fágica. Ver, p. ex., Winter et al., 1994 Annu. Rev. Immunol. 12: 433-55; Burton et al., 1994 Adv. Immunol. 57: 191-280. Bibliotecas combinatórias de genes da região variável de imunoglobulinas humanas ou de murídeo 28 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ podem ser criadas em vectores fágicos que podem ser pesquisados para seleccionar fragmentos de Ig (Fab, Fv, sFv, ou multimeros destes) que se ligam especificamente à proteína de ligação a TGF-beta ou variante ou fragmento desta. Ver, p. ex., Patente U.S. No. 5223409; Huse et al., 1989 Science 246: 1275-81; Sastry et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 86: 5728-32 (1989); Alting-Mees et al., Strategies in Molecular Biology 3: 1-9 (1990); Kang et al., 1991 Proc. Natl. Acad. Sei. USA 88: 4363-66; Hoogenboom et al., 1992 J. Molec. Biol. 227: 381-388; Schlebusch et al., 1997 Hybridoma 16: 47-52 e referências citadas ai. Por exemplo, uma biblioteca contendo uma pluralidade de sequências polinucleotidicas codificando fragmentos da região variável de Ig pode ser inserida no genoma de um bacteriófago filamentoso, tal como M13 ou uma variante deste, enquadrado com a sequência codificando uma proteina de revestimento fágica. Uma proteina de fusão pode ser uma fusão da proteina de revestimento com o dominio da região variável da cadeia leve e/ou com o dominio da região variável de cadeia pesada. De acordo com certas concretizações, os fragmentos Fab de imunoglobulina também podem ser apresentados numa particula fágica (ver, p. ex., Patente U.S. No. 5698426).
Bibliotecas de expressão de ADNc de cadeia pesada e leve de imunoglobulina podem também ser preparadas em fago lambda, por exemplo, utilizando os vectores ÀlmmunoZap™(H) e ÀlmmunoZap™(L) (Stratagene, La Jolla, Califórnia). Resumidamente, o ARNm é isolado a partir de uma população de células B e utilizado para criar bibliotecas de expressão de ADNc de cadeia pesada e leve de imunoglobulina nos vectores ÀlmmunoZap(H) e ÀlmmunoZap(L). Estes vectores podem ser pesquisados individualmente ou co-expressos para formar fragmentos Fab ou anticorpos (ver Huse et al., supra; ver também Sastry et al., supra). As placas positivas podem ser subsequentemente convertidas num plasmideo não litico que permite um elevado nivel de expressão de fragmentos de anticorpos monoclonais de E. coli.
Num hibridoma, as regiões variáveis de um gene expressando um anticorpo monoclonal de interesse podem ser amplificadas utilizando iniciadores nucleotídicos amplificados. Estes iniciadores podem ser sintetizados por um 29 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ perito na técnica ou podem ser adquiridos a partir de fontes comercialmente disponíveis. (Ver, p. ex., Stratagene (La Jolla, Califórnia), que vende iniciadores para regiões variáveis de ratinho e humano incluindo, entre outros, iniciadores para as regiões VHa, VHb, VHc, VHci, Chi, Vl e CL) . Estes iniciadores podem ser utilizados para amplificar regiões variáveis de cadeia pesada ou leve, que podem então ser inseridas em vectores tais como ImmunoZAP™H ou ImmunoZAP™L (Stratagene), respectivamente. Estes vectores podem então ser introduzidos em E. coli, levedura, ou sistemas baseados em mamífero para expressão. Grandes quantidades de uma proteína de cadeia simples contendo uma fusão dos domínios VH e VL podem ser produzidas utilizando estes métodos (ver Bird et al., Science 242: 423-426, 1988).
Uma vez obtidas células produtoras de anticorpos utilizando qualquer uma das técnicas de imunização acima descritas e outras técnicas, os genes de anticorpos específicos podem ser clonados através do isolamento e da amplificação de ADN ou ARNm destes de acordo com procedimentos padrão tal como aqui descrito. Os anticorpos produzidos a partir daí podem ser sequenciados e as CDR identificadas e o ADN codificando para as CDR pode ser manipulado, tal como descrito anteriormente para gerar outros anticorpos de acordo com o invento.
De preferência, os anticorpos ligam-se especificamente a esclerostina. Tal como acontece com todos os anticorpos e ensaios de ligação, um perito na técnica reconhece que as várias porções a que um anticorpo não se deve ligar de forma detectável para ser terapeuticamente eficaz e adequado seriam exaustivas e seria impraticável listá-las. Portanto, para um anticorpo aqui divulgado, o termo "liga-se especificamente" refere-se à capacidade de um anticorpo para se ligar a esclerostina, de preferência esclerostina humana, com uma afinidade maior do que se liga a uma proteína de controlo não relacionada. De preferência, a proteína de controlo é lisozima da clara de ovo de galinha. De preferência o anticorpo liga-se a esclerostina com uma afinidade que é de pelo menos 50, 100, 250, 500, 1000 ou 10000 vezes maior que a afinidade para uma proteína de controlo. Um anticorpo pode ter uma afinidade de ligação para esclerostina humana de menos de ou igual a 1χ10“7 M, menos de ou igual a 1χ10“8 M, 30 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ menos de ou igual a 1x10 9 M, menos de ou igual a 1x10 10 M, menos de ou igual a ΙχΙΟ-11 M, ou menos de igual a 1χ10“12 M. A afinidade pode ser determinada através de um ensaio ELISA de afinidade. Em certas concretizações, a afinidade pode ser determinada através de um ensaio BIAcore. Em certas concretizações, a afinidade pode ser determinada através de um método cinético. Em certas formas de realização, a afinidade pode ser determinada através de um método de equilibrio/solução. Tais métodos são descritos em maior detalhe aqui ou são conhecidos na técnica.
Os anticorpos de esclerostina modulam de preferência a função da esclerostina no ensaio baseado em células aqui descrito e/ou no ensaio in vivo aqui descrito e/ou ligam-se a um ou mais dos epitopos aqui descritos e/ou bloqueiam de forma cruzada a ligação de um dos anticorpos aqui descritos e/ou são bloqueados de forma cruzada de se ligarem a esclerostina por um dos anticorpos aqui descritos. Deste modo, tais anticorpos podem ser identificados utilizando os ensaios aqui descritos.
Os anticorpos podem ser gerados através, primeiro, da identificação dos anticorpos que se ligam a um ou mais dos epitopos aqui proporcionados e/ou neutralizam em ensaios baseados em células e/ou in vivo aqui descritos e/ou bloqueiam de forma cruzada os anticorpos aqui descritos e/ou são bloqueados de forma cruzada de se ligarem a esclerostina através de um dos anticorpos aqui descritos. As regiões CDR destes anticorpos são então utilizadas para inserir nas estruturas biocompatíveis adequadas para gerar agentes de ligação a esclerostina. A porção não-CDR do agente de ligação pode ser composta de aminoácidos, ou pode ser uma molécula não proteica. Os ensaios aqui descritos permitem a caracterização de agentes de ligação. Os agentes de ligação da presente invenção são anticorpos, tal como aqui definidos.
Será entendido por um perito na técnica que algumas proteínas, tais como anticorpos, podem ser submetidas a uma variedade de modificações pós-tradução. O tipo e a extensão destas modificações dependem frequentemente da linha celular hospedeira utilizada para expressar a proteína bem como das condições de cultura. Tais modificações podem incluir 31 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ variações na glicosilação, oxidação de metionina, formação de dicetopiperizina, isomerização de aspartato e desamidação de asparagina. Uma modificação frequente é a perda de um residuo básico do terminal carboxilo (tal como lisina ou arginina), devido à acção de carboxipeptidases (tal como descrito em Harris, R.J. Journal of Chromatography 705: 129-134, 1995).
Os anticorpos referidos como Ab-A, Ab-B, Ab-C, Ab-D e Ab-1 são descritos abaixo. "HC" refere-se à cadeia pesada e "LC" refere-se à cadeia leve. Para alguns anticorpos abaixo, as CDR estão numa caixa sombreada e as regiões constantes (C) são mostradas em negrito e itálico.
Ab-D
Anticorpo D (também aqui referido como Ab-D e Mab-D) é um anticorpo de ratinho que exibe elevada afinidade de ligação a esclerostina. O padrão de ligação BIAcore de Ab-D é mostrado na Figura 18. A sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da cadeia leve de Ab-D: 1 DVQMIQSPSS LSASLGDIVT MTCQASQGTSINLNWFQQKP GKAPKLLIYG 51 SSNLÈDGVPS RFSGSRYGTD FTLTISSLÈD EDLÁTYFCLQ HSYLPYÍFGG 101 GTkLElKRADAAPTVSIFPP SSEQLTSGGA SJ^VCFLNNFYPKDINVkWKI 151DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT LTKBEYERHN SYTCEATHKT 201STSPIVKSFNRNEC (SEQ ID NO:7) A sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) de LC de Ab-D é como se segue: 1 GATGTCCAGA TGATTCAGTC TCCATCCTCC CTGTCTGCAT CTTTGGGAGA 51 CATAGTCACC ATGACTTGCC AGGCAAGTCA GGGCACTAGC ATTAATTTAA 101 ACTGGTTTCA GCAAAAACCA GGGAAGGCTC CTAAGCTCCT GATCTATGGT 151 TCAAGCAACT TGGAAGATGG GGTCCCATCA AGGTTCAGTG GCAGTAGATA 201 TGGGACAGAT TTCACTCTCA CCATCAGCAG CCTGGAGGAT GAAGATCTGG 251 CAACTTATTT CTGTCTACAA CATAGTTATC TCCCGTACAC GTTCGGAGGG 301 GGGACCAAGC TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA CTGTATCCAT 351 CTTCCCACCA TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC TCAGTCGTGT 401 GCTTCTTGAA CAACTTCTAC CCCAAAGACA TCAATGTCAA GTGGAAGATT 451 GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA CTGATCAGGA 501 CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG TTGACCAAGG 551 ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC TCACAAGACA 601 TCAACTTCAC CCATTGTGAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT GTTAG (SEQ ID NO: 8) 32 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ A sequência de aminoácidos de LC de Ab-D incluindo o péptido sinal é como se segue: 1 MNTRAPAEFL GFLLLWFLGA RCDVQMIQSP SSLSASLGDIVTMTCQASQG 51 TSINLNWFQQ KPGKAPKLLIYGSSNLEDGV PSRFSGSRYG TDFTLTISSL 101 EDEDLATYFC LQHSYLPYTF GGGTKLEIKR ADAAPTVSIF PPSSEQLTSG 151 GASWCFLNN FYPKDINVKW KIDGSERQNG VLNSWTDQDS KDSTYSMSST 201 LTLTKDEYER HNSYTCEATH KTSTSPIVKS FNRNEC (SEQID NO:9) A sequência de ácido nucleico de LC de Ab-D incluindo a sequência codificando o péptido sinal: 1 ATGAACACGA GGGCCCCTGC TGAGTTCCTT GGGTTCCTGT TGCTCTGGTT 51 TTTAGGTGCC AGATGTGATG TCCAGATGAT TCAGTCTCCA TCCTCCCTGT 101 CTGCATCTTT GGGAGACATA GTCACCATGA CTTGCCAGGC AAGTCAGGGC 151 ACTAOCATTA ATTTAAACTG QTTTCAGCÀA AAACCAOGGA AGGCTCCTAA 201 gctcctgatc tatggttcaa gcaacttgga agatggggtc CCATCAAGGT 251 TCAGTGGCAG TAGATATGGG ACAGATTTCA CTCTCACCAT CAGCAGCCTG 301 GAGGATGAAG ATCTGGCAAC TTATTTCTGT CTACAAÇATA GTTATCTCCC 351 GTACÁCGTTC GGAGGGGGGA CCAAGCTGGA AATAAAACGG GCTGATGCTG 401 CÁCCAACTGT ATCCÀTCTTC CCACCATCCA GTGAGCAGTT AACATCTGGA 451 GGTGCCTCAG TCGTGTGCTT CTTGAACAAC TTCTACCCCA AAGACATCAA 501 TGTCAAGTGG AAGATTGATG GCAGTGAACG ACAAAATGGC GTCCTGAACA 551 GTTGGACTGA TCAGGACAGC AAAGACAGCA CCTACAGCAT GAGCAGCACC 601 CTCACGTTGA CCAAGGACGA GTATGAACGA CATAACAGCT ATACCTGTGA 651 GGCCACTCAC AAGACATCAA CTTCACCCAT TGTCAAGAGC TTCAACAGGA 701 ATGAGTGTTA G (SEQ ID NO: 10) A sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da cadeia peada HC de Ab-D é como se segue: 1 EVQLQQSGPE LVTPGASVKISCKASGYTFT DHYMS;WVKQS HGKSLEWIGD' 51 ínpysgetíynçíkfkgtatl tvdksssiay méirgLtsed savyycardd ioiIydáspfaywg QGTtVTVSA^ kttppsvyplapgsaaqtnsmvtlgclvkg 151 YFPEPVTVnVNSGSLSSGVH TFPA VLQSDL YTLSSSVTVP SSTWPSETVT 201 CNVAHPASSTKVDKKTVPRD CGCKPCÍCTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTIT 251L TPK VTC KFF DISKDDPE VQ FSWFVDDVEV HTAQTQPREE QFNSTFSSVS 301ELPJMHQPWL NGKEFKCR VN SP A FPAP1EK TISKTKGRPK APQVYTIPPP 351KEQMAKDKVS LTCMITDFFP EDITVEWQWN GQPAENYKNT OPIMDTDGSY 401FIYSELNVQK SNWEAGNTFT CSVLHEGLHNHHTEKSLSHS PGK (SEQ ID NO: 11) 33 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ A sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) de HC de Ab-D é: 1 GAGGTCCAGC TGCAACAOTC TGGACCTGAA CTGGTGACGC CTGGGGCTTC 51 AGTGAAGATA TCTTGTAAGG CTTCTGGATA CACATTCACT GACCACTACA 101 TGAGCTGGGT GAAGCAGAGT CATGGAAAAA GCCTTGAGTG GATTGGAGAT 151 ATTAATCCCT ATTCTGGTGA AACTACCTAC AACCAGAAGT TCAAGGGCAC 201 GGCCACATTG ACTGTAGACA AGTCTTCCAG TATAGCCTAC ATGGAGATCC 251 GCGGCCTGAC ATCTGAGGAC TCTGCAGTCT ATTACTGTGC AAGAGATGAT 301 TACGACGCCT CTCCGTTTGC TTACTGGGGC CAAGGGACTC TGGTCACTGT 3 51 CTCTGCAGCC AAAACGACAC CCCCATCTGT CTATCCACTG GCCCCTGGAT . 401 CTGCTGCCCA AACTAACTCC ATGGTGACCC TGGGATGCCT GGTCAAGGGC 451 TATTTCCCTG AGCCAGTGAC AGTGACCTGG AACTCTGGAT CCCTGTCCAG 501 CGGTGTGCAC ACCTTCCCAG CTGTCCTGCA GTCTGACCTC TACACTCTGA 551 GCAGCTCAGT GACTGTCCCC TCCAGCACCT GGCCCAGCGA GACCGTCACC 601 TGCAACGTTG CCCACCCGGC CAGCAGCACC AAGGTGGACA AGAAAATTGT 651 GCCCAGGGAT TGTGGTTGTA AGCCTTGCAT ATGTACAGTC CCAGAAGTAT 701 CATCTGTCTT CATCTTCCCC CCAAAGCCCA AGGATGTGCT CACCATTACT 751 CTGACTCCTA AGGTCACGTG TGTTGTGGTA GACATCAGCA AGGATGATCC 801 CGAGGTCCAG TTCAGCTGGT TTGTAGATGA TGTGGAGGTG CACACAGCTC 851 AGACGCAACC CCGGGAGGAG CAGTTCAACA GCACTTTCCG CTCAGTCAGT 901 GAACTTCCCA TCATGCACCA GGACTGGCTC AATGGCAAGG AGTTCAAATG 951 CAGGGTCAAC AGTCCAGCTT TCCCTGCCCC CATCGAGAAA ACCATCTCCA 1001 AAACCAAAGG CAGACCGAAG GCTCCACAGG TGTACACCAT TCCACCTCCC 1051 AAGGAGCAGA TGGCCAAGGA TAAAGTCAGT CTGACCTGCA TGATAACAGA 1101 CTTCTTCCCT GAAGACATTA CTGTGGAGTG GCAGTGGAAT GGGCAGCCAG 1151 CGGAGAACTA CAAGAACACT CAGCCCATCA TGGACACAGA TGGCTCTTAC 1201 TTCATCTACA GCAAGCTCAA TGTGCAGAAG AGCAACTGGG AGGCAGGAAA 1251 TACTTTCACC TGCTCTGTGT TACATGAGGG CCTGCACAAC CACCATACTG 1301 AGAAGAGCCT CTCCCACTCT CCTGGTAAAT GA (SEQ ID NO: 12) A sequência de aminoácidos de HC de Ab-D incluindo o péptido sinal é: 1 MRCRW1FLFL LSGTAGVLSE VQLQQSGPEL VTPGASVKIS CKASGYTFTD 51 HYMSWVKQSH GKSLEW1GDINPYSGETTYN QKFKGTATLT VDKSSSIAYM 101 EIRGLTSEDS AVYYCARJDDY DASPFAYWGQ GTLVTVSAAK TTPPSVYPLA 151 PGSAAQTNSM VTLGCLVKGY FPEPVTVTWN SGSLSSGVHT FPAVLQSDLY 201 TLSSSVTVPS STWPSETVTC NVAHPASSTK VDKKIVPRDC GCKPCICTVP 251 EVSSVFIFPP KPKDVLTITL TPKVTCVWDISKDDPEVQF SWFVDDVEVH 301 TAQTQPREEQ FNSTFRSVSE LP1MHQDWLN GKEFKCRVNS PAFPAPIEKT 351ISKTKGRPKA PQVYTIPPPK EQMAKDKVSL TCMITDFFPE DITVEWQWNG 401 QPAENYKNTQ PIMDTDGSYFIYSKLNVQKS NWEAGNTFTC SVLHEGLHNH 451 HTEKSLSHSP GK (SEQ ID NO: 13) 34 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ A sequência de ácido nucleico de HC de Ab-D incluindo a sequência codificando o péptido sinal é: 1 ATGAGATGCA GGTGGATCTT TCTCTTTCTC CTGTCAGGAA CTGCAGGTGT 51 CCTCTCTGAG GTCCAGCTGC AACAGTCTGG ACCTGAACTG GTGACGCCTG 101 GGGCTTCAGT GAAGATATCT TGTAAGGCTT CTGGATACAC ATTCACTGAC 151 CACTACATGA GCTGGGTGAA GCAGAGTCAT GGAAAAAGCC TTGAGTGGAT 201 TGGAGATATT AATCCCTATT CTGGTGAAAC TACCTACAAC CAGAAGTTCA 251 AGGGCACGGC CACATTGACT GTAGACAAGT CTTCCAGTAT AGCCTACATG 301 GAGATCCGCG GCCTGACATC TGAGGACTCT GCAGTCTATT ACTGTGCAAG 351 AGATGATTAC GACGCCTCTC CGTTTGCTTA CTGGGGCCAA GGGACTCTGG 401 TCACTGTCTC TGCAGCCAAA ACGACACCCC CATCTGTCTA TCCACTGGCC 451 CCTGGATCTG CTGCCCAAAC TAACTCCATG GTGACCCTGG GATGCCTGGT 501 CAAGGGCTAT TTCCCTGAGC CAGTGACAGT GACCTGGAAC TCTGGATCCC 551 TGTCCAGCGG TGTGCACACC TTCCCAGCTG TCCTGCAGTC TGACCTCTAC 601 ACTCTGAGCA GCTCAGTGAC TGTCCCCTCC AGCACCTGGC CCAGCGAGAC 651 CGTCACCTGC AACGTTGCCC ACCCGGCCAG CAGCACCAAG GTGGACAAGA 701 AAATTGTGCC CAGGGATTGT GGTTGTAAGC CTTGCATATG TACAGTCCCA 751 GAAGTATCAT CTGTCTTCAT CTTCCCCCCA AAGCCCAAGG ATGTGCTCAC 801 CATTACTCTG ACTCCTAAGG TCACGTGTGT TGTGGTAGAC ATCAGCAAGG 851 ATGATCCCGA GGTCCAGTTC AGCTGGTTTG TAGATGATGT GGAGGTGCAC 901 ACAGCTCAGA CGCAACCCCG GGAGGAGCAG TTCAACAGCA CTTTCCGCTC 951 AGTCAGTGAA CTTCCCATCA TGCACCAGGA CTGGCTCAAT GGCAAGGAGT 1001 TCAAATGCAG GGTCAACAGT CCAGCTTTCC CTGCCCCCAT CGAGAAAACC 1051 ATCTCCAAAA CCAAAGGCAG ACCGAAGGCT CCACAGGTGT ACACCATTCC 1101 ACCTCCCAAG GAGCAGATGG CCAAGGATAA AGTCAGTCTG ACCTGCATGA 1151 TAACAGACTT CTTCCCTGAA GACATTACTG TGGAGTGGCA GTGGAATGGG 1201 CAGCCAGCGG AGAACTACAA GAACACTCAG CCCATCATGG ACACAGATGG 1251 CTCTTACTTC ATCTACAGCA AGCTCAATGT GCAGAAGAGC AACTGGGAGG 1301 CAGGAAATAC TTTCACCTGC TCTGTGTTAC ATGAGGGCCT GCACAACCAC 1351 CATACTGAGA AGAGCCTCTC CCACTCTCCT GGTAAATGA (SEQ ID NO: 14)
As sequências de CDR (região determinante de complementaridade) na reqião variável da cadeia pesada de Ab-D são como se segue: CDR-Hl: DHYMS (SEQ ID NO:39) CDR-H2: DINPYSGETTYNQKFKG (SEQ ID NO:40) CDR-H3: DDYDASPFAY (SEQ ID NO:41)
As sequências de CDR da região variável da cadeia leve de Ab-D são: CDR-L1: QASQGTSINLN (SEQ ID NO:42) CDR-L2: GSSNLED (SEQ ID NO:43) CDR-L3: LQHSYLPYT (SEQ ID NO:44)
Ab-C O anticorpo C (também aqui referido como Ab-C e Mab-C) é um anticorpo de ratinho que exibe elevada afinidade de 35 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ ligação a esclerostina. 0 padrão de ligação BIAcore de Ab-C é mostrado na Figura 17. A sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da Cadeia Leve de Ab-C é como se segue: 1 DIVLTQSPAS LTVSLGLRATISCKASQS VD YDGDSYMNWY QQKPGQPPKL 51 L1YAÁSNLES GIPARFSGNG SGTDFTLisiÍH PVÈÉEDÀVTY YCQQSNEDPW 101 TFGGGTKLEI YJtADAAPTVS IFPPSSEQLT SGGASVVCFL NNFYPKDINV 151KWKIDGSERQ NGVLNSWTDQ DSKDSTYSMS STLTLTKDEY ERHNSYTCEA 201 THKTSTSPIV KSFNRNEC (SEQID NO: 15) A sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) de LC de Ab-C é: 1 GACATTGTGC TGACCCAATC TCCAGCTTCT TTGACTGTGT CTCTAGGCCT 51 GAGGGCCACC ATCTCCTGCA AGGCCAGCCA AAGTGTTGAT TATGATGGTG 101 ATAGTTATAT GAACTGGTAC CAGCAGAAAC CAGGACAGCC ACCCAAACTC 151 CTCATCTATG CTGCATCCAA TCTAGAATCT GGGATCCCAG CCAGGTTTAG 201 TGGCAATGGG TCTGGGACAG ACTTCACCCT CAACATCCAT CCTGTGGAGG 251 AGGAGGATGC TGTAACCTAT TACTGTCAAC AAAGTAATGA GGATCCGTGG 301 ACGTTCGGTG GAGGCACCAA GCTGGAAATC AAACGGGCTG ATGCTGCACC 351 AACTGTATCC ATCTTCCCAC CATCCAGTGA GCAGTTAACA TCTGGAGGTG 401 CCTCAGTCGT GTGCTTCTTG AACAACTTCT ACCCCAAAGA CATCAATGTC 451 AAGTGGAAGA TTGATGGCAG TGAACGACAA AATGGCGTCC TGAACAGTTG 501 GACTGATCAG GACAGCAAAG ACAGCACCTA CAGCATGAGC AGCACCCTCA 551 CGTTGACCAA GGACGAGTAT GAACGACATA ACAGCTATAC CTGTGAGGCC 601 ACTCACAAGA CATCAACTTC ACCCATTGTC AAGAGCTTCA ACAGGAATGA 651 GTGTTAG (SEQ ID NO: 16) A sequência de aminoácidos de LC de Ab-C incluindo o péptido sinal é:
1 METDTILLWV LLLWVPGSTG DIVLTQSPAS LTVSLGLRAT ISCKASQSVD 51 YDGDSYMNWY QQKPGQPPKL LIYAASNLES GIPARFSGNG SGTDFTLNIH 101 PVEEEDAVTY YCQQSNEDPW TFGGGTKLEI KRADAAPTVS IFPPSSEQLT 151 SGGASVVCFL NNFYPKDINV KWKIDGSERQ NGVLNSWTDQ DSKDSTYSMS 201 STLTLTKDEY ERHNSYTCEA THKTSTSPIV KSFNRNEC (SEQ ID NO:l 7) 36 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ A sequência de ácido nucleico de LC de Ab-C incluindo a sequência codificando o péptido sinal é: 1 ATGGAGACAG ACACAATCCT GCTATGGGTG CTGCTGCTCT GGGTTCCAGG 51 CTCCACTGGT GACATTGTGC TGACCCAATC TCCAGCTTCT TTGACTGTGT 101 CTCTAGGCCT GAGGGCCACC ATCTCCTGCA AGGCCAGCCA AAGTGTTGAT 151 TATGATGGTG ATAGTTATAT GAACTGGTAC CAGCAGAAAC CAGGACAGCC 201 ACCCAAACTC CTCATCTATG CTGCATCCAA TCTAGAATCT GGGATCCCAG 251 CCAGGTTTAG TGGCAATGGG TCTGGGACAG ACTTCACCCT CAACATCCAT 301 CCTGTGGAGG AGGAGGATGC TGTAACCTAT TACTGTCAAC AAAGTAATGA 351 GGATCCGTGG ACGTTCGGTG GAGGCACCAA GCTGGAAATC AAACGGGCTG 401 ATGCTGCACC AACTGTATCC ATCTTCCCAC CATCCAGTGA GCAGTTAACA 451 TCTGGAGGTG CCTCAGTCGT GTGCTTCTTG AACAACTTCT ACCCCAAAGA 501 CATCAATGTC AAGTGGAAGA TTGATGGCAG TGAACGACAA AATGGCGTCC 551 TGAACAGTTG GACTGATCAG GACAGCAAAG ACAGCACCTA CAGCATGAGC 601 AGCACCCTCA CGTTGACCAA GGACGAGTAT GAACGACATA ACAGCTATAC 651 CTGTGAGGCC ACTCACAAGA CATCAACTTC ACCCATTGTC AAGAGCTTCA 701 ACAGGAATGA GTGTTAG (SEQ ID NO: 18)
Cadeia Pesada de Ab-C A sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) de HC de Ab-C é: 1 EVQLQQSGPE LVKPGTSVKM SCKASGYTFT DCTMNWVKQS HGKSLEWIGD 51 INPFNGGTTY NQKFKGKATL TVDKSSSTAY MQLNSLTSDD SAVYYCARSH 101 YYFDGRVPWD AMDYWGQGTS VTVSSAKTTP PSVYPLAPGS AAQTNSMVTL 151 GCLVKGYFPE PVTVTWNSGSLSSGVÍÍTFPA VLQSDLYTLSSSVTVPSSTW 201 PSETVTCNVA HPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVS SVFIFPPKPK 251DVLTITLTPK VTCVWDISKDDPEVQFSWF VDDVEVHTAQ TQPREEQFNS 301 TFRS \ SELP1MHOD WLNGKE FKCR VNSAAF PAPÍEKTÍSK TKGEPKAPQV 351 YT1PPPKEQM AKDKVSLTCMITDFFPEDIT JGSWQWNGQPA ENYKNTQPÍM 401DTDGSYFIYS KLNVOKSNWE A GNTFTCSVL HEGLHNHHTE KSLSHSPGK (SEQ IDNO:19) A sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) de HC de Ab-C é como se segue:
1 GAGGTCCAGC TGCAACAATC TGGACCTGAG CTGGTGAAGC CTGGGACTTC 51 AGTGAAGATG TCCTGTAAGG CTTCTGGATA CACATTCACT GACTGCTACA 101 TGAACTGGGT GAAGCAGAGC CATGGGAAGA GCCTTGAATG GATTGGAGAT 151 ATTAATCCTT TCAACGGTGG TACTACCTAC AACCAGAAGT TCAAGGGCAA 201 GGCCACATTG ACTGTAGACA AATCCTCCAG CACAGCCTAC ATGCAGCTCA 251 ACAGCCTGAC ATCTGACGAC TCTGCAGTCT ATTACTGTGC AAGATCCCAT 301 TATTACTTCG ATGGTAGAGT CCCTTGGGAT GCTATGGACT ACTGGGGTCA 351 AGGAACCTCA GTCACCGTCT CCTCAGCCAA AACGACACCC CCATCTGTCT 401 ATCCACTGGC CCCTGGATCT GCTGCCCAAA CTAACTCCAT GGTGACCCTG 451 GGATGCCTGG TCAAGGGCTA TTTCCCTGAG CCAGTGACAG TGACCTGGAA 37 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ 501 CTCTGGATCC CTGTCCAGCG GTGTGCACAC CTTCCCAGCT GTCCTGCAGT 551 CTGACCTCTA CACTCTGAGC AGCTCAGTGA CTGTCCCCTC CAGCACCTGG 601 CCCAGCGAGA CCGTCACCTG CAACGTTGCC CACCCGGCCA GCAGCACCAA 651 GGTGGACAAG AAAATTGTGC CCAGGGATTG TGGTTGTAAG CCTTGCATAT 701 GTACAGTCCC AGAAGTATCA TCTGTCTTCA TCTTCCCCCC AAAGCCCAAG 751 GATGTGCTCA CCATTACTCT GACTCCTAAG GTCACGTGTG TTGTGGTAGA 801 CATCAGCAAG GATGATCCCG AGGTCCAGTT CAGCTGGTTT GTAGATGATG 851 TGGAGGTGCA CACAGCTCAG ACGCAACCCC GGGAGGAGCA GTTCAACAGC 901 ACTTTCCGCT CAGTCAGTGA ACTTCCCATC ATGCACCAGG ACTGGCTCAA 951 TGGCAAGGAG TTCAAATGCA GGGTCAACAG TGCAGCTTTC CCTGCCCCCA 1001 TCGAGAAAAC CATCTCCAAA ACCAAAGGCA GACCGAAGGC TCCACAGGTG 1051 TACACCATTC CACCTCCCAA GGAGCAGATG GCCAAGGATA AAGTCAGTCT 1101 GACCTGCATG ATAACAGACT TCTTCCCTGA AGACATTACT GTGGAGTGGC 1151 AGTGGAATGG GCAGCCAGCG GAGAACTACA AGAACACTCA GCCCATCATG 1201 GACACAGATG GCTCTTACTT CATCTACAGC AAGCTCAATG TGCAGAAGAG 1251 CAACTGGGAG GCAGGAAATA CTTTCACCTG CTCTGTGTTA CATGAGGGCC 1301 TGCACAACCA CCATACTGAG AAGAGCCTCT CCCACTCTCC TGGTAAATGA (SEQ ID ΝΟ:20) A sequência de aminoácidos de HC de Ab-C incluindo o péptido sinal é: 1 MGWNWIFLFL LSGTAGVYSE VQLQQSGPEL VKPGTSVKMS CKASGYTFTD 51 CYMNWVKQSH GKSLEWIGDINPFNGGTTYN QKFKGKATLT VDKSSSTAYM 101 QLNSLTSDDS AVYYCARSHY YFDGRVPWDA MDYWGQGTSV TVSSAKTTPP 151 SVYPLAPGSA AQTNSMVTLG CLVKGYFPEP VTVTWNSGSL SSGVHTFPAV 201 LQSDLYTLSS SVTVPSSTWP SETVTCNVAH PASSTKVDKKIWRDCGCKP 251 CICTVPEVSS VFIFPPKPKD VLTITLTPKV TCVWDISKD DPEVQFSWFV 301 DDVEVHTAQT QPREEQFNST FRSVSELPIM HQDWLNGKEF KCRVNSAAFP 351 APIEK.TISKT KGRPKAPQVY TIPPPKEQMA KDKVSLTCMITDFFPEDITV 401 EWQWNGQPAE NYKNTQPIMD TDGSYFIYSK LNVQKSNWEA GNTFTCSVLH 451 EGLHNHHTEK SLSHSPGK (SEQ ID NO:21) A sequência de ácido nucleico de HC de Ab-C incluindo a sequência codificando o péptido sinal é:
1 ATGGGATGGA ACTGGATCTT TCTCTTCCTC TTGTCAGGAA CTGCAGGTGT 51 CTACTCTGAG GTCCAGCTGC AACAATCTGG ACCTGAGCTG GTGAAGCCTG 101 GGACTTCAGT GAAGATGTCC TGTAAGGCTT CTGGATACAC ATTCACTGAC 151 TGCTACATGA ACTGGGTGAA GCAGAGCCAT GGGAAGAGCC TTGAATGGAT 201 TGGAGATATT AATCCTTTCA ACGGTGGTAC TACCTACAAC CAGAAGTTCA 251 AGGGCAAGGC CACATTGACT GTAGACAAAT CCTCCAGCAC AGCCTACATG 301 CAGCTCAACA GCCTGACATC TGACGACTCT GCAGTCTATT ACTGTGCAAG 351 ATCCCATTAT TACTTCGATG GTAGAGTCCC TTGGGATGCT ATGGACTACT 401 GGGGTCAAGG AACCTCAGTC ACCGTCTCCT CAGCCAAAAC GACACCCCCA 451 TCTGTCTATC CACTGGCCCC TGGATCTGCT GCCCAAACTA ACTCCATGGT 501 GACCCTGGGA TGCCTGGTCA AGGGCTATTT CCCTGAGCCA GTGACAGTGA 551 CCTGGAACTC TGGATCCCTG TCCAGCGGTG TGCACACCTT CCCAGCTGTC 601 CTGCAGTCTG ACCTCTACAC TCTGAGCAGC TCAGTGACTG TCCCCTCCAG 651 CACCTGGCCC AGCGAGACCG TCACCTGCAA CGTTGCCCAC CCGGCCAGCA 701 GCACCAAGGT GGACAAGAAA ATTGTGCCCA GGGATTGTGG TTGTAAGCCT 751 TGCATATGTA CAGTCCCAGA AGTATCATCT GTCTTCATCT TCCCCCCAAA 801 GCCCAAGGAT GTGCTCACCA TTACTCTGAC TCCTAAGGTC ACGTGTGTTG 38 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ 851 TGGTAGACAT CAGCAAGGAT GATCCCGAGG TCCAGTTCAG CTGGTTTGTA 901 GATGATGTGG AGGTGCACAC AGCTCAGACG CAACCCCGGG AGGAGCAGTT 951 CAACAGCACT TTCCGCTCAG TCAGTGAACT TCCCATCATG CACCAGGACT 1001 GGCTCAATGG CAAGGAGTTC AAATGCAGGG TCAACAGTGC AGCTTTCCCT 1051 GCCCCCATCG AGAAAACCAT CTCCAAAACC AAAGGCAGAC CGAAGGCTCC 1101 ACAGGTGTAC ACCATTCCAC CTCCCAAGGA GCAGATGGCC AAGGATAAAG 1151 TCAGTCTGAC CTGCATGATA ACAGACTTCT TCCCTGAAGA CATTACTGTG 1201 GAGTGGCAGT GGAATGGGCA GCCAGCGGAG AACTACAAGA ACACTCAGCC 1251 CATCATGGAC ACAGATGGCT CTTACTTCAT CTACAGCAAG CTCAATGTGC 1301 AGAAGAGCAA CTGGGAGGCA GGAAATACTT TCACCTGCTC TGTGTTACAT 1351 GAGGGCCTGC ACAACCACCA TACTGAGAAG AGCCTCTCCC ACTCTCCTGG 1401 TAAATGA (SEQID ΝΟ:22)
As sequências de CDR (região determinante de complementaridade) na região variável da cadeia pesada de Ab-C são como se segue: CDR-H1: DCYMN (SEQ ID NO:45) CDR-H2: DINPFNGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO:46) CDR-H3: SHYYFDGRVPWDAMDY (SEQ ID NO:47)
As sequências de CDR da região variável da cadeia leve de Ab-C são: CDR-L1: KASQSVDYDGDSYN (SEQ ID NO:48) CDR-L2: AASNLES (SEQ ID NO:49) CDR-L3: QQSNEDPWT (SEQ ID NO:50)
Ab-A O anticorpo A (também aqui referido como Ab-A e Mab-A) é um anticorpo quimérico de coelho-ratinho que exibe elevada afinidade a esclerostina. O padrão de ligação BIAcore de Ab-A é mostrado na Figura 15.
Cadeia Leve de Ab-A A sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) de LC de Ab-A: 1 AQVLTQTPAS VSAAVGGTVTINCQSSQSVY DNNWLÃWFQQ KPGQPPKLLI 51 YpÀSDLÃSGV PSRFSGSGSG TQFTLTISGV QCÃDAATYYC QGAYNDVIYA 101 FGGGTEWVK RTDAAPTVSIFPPSSEQLTS GGASVVCFLNNF\TK&tíWK 151 WKIDGSERQN GVLNSWTDQD SKDSTYSMSS TLTLTKDEYE RHNSYTCEAT 201HKTSTSPIVK SFNRNEC (SEQ ID NO:23) 39 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ A sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) de LC de Ab-A: I GCGCAAGTGC TGACCCAGAC TCCAGCCTCC GTGTCTGCAG CTGTGGGAGG 51 CACAGTCACC ATCAATTGCC AGTCCAGTCA GAGTGTTTAT GATAACAACT 101 GGTTAGCCTG GTTTCAGCAG AAACCAGGGC AGCCTCCCAA GCTCCTGATT 151 TATGATGCAT CCGATCTGGC ATCTGGGGTC CCATCGCGGT TCAGTGGCAG 201 TGGATCTGGG ACACAGTTCA CTCTCACCAT CAGCGGCGTG CAGTGTGCCG 251 ATGCTGCCAC TTACTACTGT CAAGGCGCTT ATAATGATGT TATTTATGCT 301 TTCGGCGGAG GGACCGAGGT GGTGGTCAAA CGTACGGATG CTGCACCAAC 351 TGTATCCATC TTCCCACCAT CCAGTGAGCA GTTAACATCT GGAGGTGCCT 401 CAGTCGTGTG CTTCTTGAAC AACTTCTACC CCAAAGACAT CAATGTCAAG 451 TGGAAGATTG ATGGCAGTGA ACGACAAAAT GGCGTCCTGA ACAGTTGGAC 501 TGATCAGGAC AGCAAAGACA GCACCTACAG CATGAGCAGC ACCCTCACGT 551 TGACCAAGGA CGAGTATGAA CGACATAACA GCTATACCTG TGAGGCCACT 601 CACAAGACAT CAACTTCACC CATTGTCAAG AGCTTCAACA GGAATGAGTG 651 TTAG (SEQID NO:24) A sequência de aminoácidos de LC de Ab-A incluindo o péptido sinal é: 1 MDTRAPTQLL GLLLLWLPGA TFAQVLTQTP ASVSAAVGGT VTTNCQSSQS 51 VYDNNWLAWF QQKPGQPPKL LIYDASDLAS GVPSRFSGSG SGTQFTLTIS 101 GVQCADAATY YCQGAYNDVIYAFGGGTEW VKRTDAAPTV SIFPPSSEQL 151 TSGOASWCF LNNFYPKDIN VKWKIDGSER QNGVLNSWTD QDSKDSTYSM 201 SSTLTLTKDE YERHNSYTCE ATHKTSTSPI VKSFNRNEC (SEQ ID NO:25) A sequência de ácido nucleico de LC de Ab-A incluindo a sequência codificando o péptido sinal é: 1 ATGGACACGA GGGCCCCCAC TCAGCTGCTG GGGCTCCTGC TGCTCTGGCT 51 CCCAGGTGCC ACATTTGCGC AAGTGCTGAC CCAGACTCCA GCCTCCGTGT 101 CTGCAGCTGT GGGAGGCACA GTCACCATCA ATTGCCAGTC CAGTCAGAGT 151 GTTTATGATA ACAACTGGTT AGCCTGGTTT CAGCAGAAAC CAGGGCAGCC 201 TCCCAAGCTC CTGATTTATG ATGCATCCGA TCTGGCATCT GGGGTCCCAT 251 CGCGGTTCAG TGGCAGTGGA TCTGGGACAC AGTTCACTCT CACCATCAGC 301 GGCGTGCAGT GTGCCGATGC TGCCACTTAC TACTGTCAAG GCGCTTATAA 351 TGATGTTATT TATGCTTTCG GCGGAGGGAC CGAGGTGGTG GTCAAACGTA 401 CGGATGCTGC ACCAACTGTA TCCATCTTCC CACCATCCAG TGAGCAGTTA 451 ACATCTGGAG GTGCCTCAGT CGTGTGCTTC TTGAACAACT TCTACCCCAA 501 AGACATCAAT GTCAAGTGGA AGATTGATGG CAGTGAA CG A CAAAATGGCG 551 TCCTGAACAG TTGGACTGAT CAGGACAGCA AAGACAGCAC CTACAGCATG 601 AGCAGCACCC TCACGTTGAC CAAGGACGAG TATGAACGAC ATAACAGCTA 651 TACCTGTGAG GCCACTCACA AGACATCAAC TTCACCCATT GTCAAGAGCT 701 TCAACAGGAA TGAGTGTTAG (SEQ ID NO:26) 40 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ A sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) de HC de Ab-A é:
1 QSyEESGGRL VTPGTPLTLT CTASGFSLSS YWMNWVRQAP GEGLEWIGTI 51 DSGGRTDYÂSWÃKGRFriSR TSTTMDLIGVÍT SLTTGDTARY FCARNWNLWG 101 QGTLVTVS&4 STKGPSVYPL APGSAAQTNSMVTLGCLVKG YFPEPVTl^TW 151NSGSLSSGVH TFPA VLQSDL YTLSSSVTVP SSTWPSETVT CNVAHPASST 201 ΚνηΚΚΠΦΚΏ cgckpcictvpevssvfifppkpkdvltitltpkvtcvw 251DISKDDPEVQ FSWFVDDVEVHTAQTQPREE QFNSTFRSVSELPIMHQDWL 301NGKEFKCRVNSAAFPAPIEK TISKTKGRPKAPQVYTIPPP KEQMAKDKVS 351LTCMITDFFP EDITVEWQWN GQPAENYKNT QPIMNTNGSY FVYSKLNVQK 401SNWEAGNTFT CSVLHEGLHN HHTEKSLSBS PGK (SEQID NO:27) A sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) de HC de Ab-A: I CAGTCGCTGG AGGAGTCCGG GGGTCGCCTG GTCACGCCTG GGACACCCCT 51 GACACTCACC TGCACAGCCTCTGGATTCTC CCTCAGTAGTTATTGGATGA 101 ACTGGGTCCG CCAGGCTCCA GGGGAGGGGC TGGAATGGAT CGGAACCATT 151 GATTCTGGTG GTAGGACGGA CTACGCGAGC TGGGCAAAAG GCCGATTCAC 201 CATCTCCAGA ACCTCGACTA CGATGGATCT GAAAATGACC AGTCTGACGA 251 CCGGGGACAC GGCCCGTTAT TTCTGTGCCA GAAATTGGAA CTTGTGGGGC 301 CAAGGCACCC TCGXCACCGT CTCGAGCGCT TCTACAAAGG GCCCATCTGT 351 CTATCCACTG GCCCCTGGAT CTGCTGCCCA AACTAACTCC ATGGTGACCC 401 TGGGATGCCT GGTCAAGGGC TATTTCCCTG AGCCAGTGAC AGTGACCTGG 451 AACTCTGGAT CCCTGTCCAG CGGTGTGCAC ACCTTCCCAG CTGTCCTGCA 501 GTCTGACCTC TACACTCTGA GCAGCTCAGT GACTGTCCCC TCCAGCACCT 551 GGCCCAGCGA GACCGTCACC TGCAACGTTG CCCACCCGGC CAGCAGCACC 601 AAGGTGGACA AGAAAATTGT GCCCAGGGAT TGTGGTTGTA AGCCTTGCAT 651 ATGTACAGTC CCAGAAGTAT CATCTGTCTT CATCTTCCCC CCAAAGCCCA 701 AGGATGTGCT CACCATTACT CTGACTCCTA AGGTCACGTG TGTTGTGGTA 751 GACATCAGCA AGGATGATCC CGAGGTCCAG TTCAGCTGGT TTGTAGATGA 801 TGTGGAGGTG CACACAGCTC AGACGCAACC CCGGGAGGAG CAGTTCAACA 851 GCACTTTCCG CTCAGTCAGT GAACTTCCCA TCATGCACCA GGACTGGCTC 901 AATGGCAAGG AGTTCAAATG CAGGGTCAAC AGTGCAGCTT TCCCTGCCCC 951 CATCGAGAAA ACCATCTCCA AAACCAAAGG CAGACCGAAG GCTCCACAGG 1001 TGTACACCAT TCCACCTCCC AAGGAGCAGA TGGCCAAGGA TAAAGTCAGT 1051 CTGACCTGCA TGATAACAGA CTTCTTCCCT GAAGACATTA CTGTGGAGTG 1101 GCAGTGGAAT GGGCAGCCAG CGGAGAACTA CAAGAACACT CAGCCCATCA 1151 TGGACACAGA TGGCTCTTAC TTCGTCTACA GCAAGCTCAA TGTGCAGAAG 1201 AGCAACTGGG AGGCAGGAAA TACTTTCACC TGCTCTGTGT TACATGAGGG 1251 CCTGCACAAC CACCATACTG AGAAGAGCCT CTCCCACTCT CCTGGTAAAT 1301 GA (SEQ ID NO:28) 41 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ A sequência de aminoácidos da HC de Ab-A incluindo o péptido sinal é: 1 METGLRWLLL VAVLKGVHCQ SLEESGGRLV TPGTPLTLTC TASGFSLSSY 51 WMNWVRQAPG EGLEWIGTID SGGRTDYASW AKGRFTISRT STTMDLKMTS 101 LTTGDTARYF CARNWNL.WGQ GTLVTVSSAS TKGPSVYPLA PGSAAQTNSM 151 VTLGCLVKGY FPEPVTVTWN SGSLSSGVHT FPAVLQSDLY TLSSSVTVPS 201 STWPSETVTC NVAHPASSTK VDKKIVPRDC GCKPCICTVP EVSSVFIFPP 251 KPKDVLTITL TPKVTCVWDISKDDPEVQF SWFVDDVEVH TAQTQPREEQ 301 FNSTFRSVSE LPIMHQDWLN GKEFKCRVNS AAFPAPIEKTISKTKGRPKA 351 PQVYITPPPK EQMAKDKVSL TCMITDFFPE DITVEWQWNG QPAENYKNTQ 401 PIMNTNGSYF VYSKLNVQKS NWEAGNTFTC SVLHEGLHNH HTEKSLSHSP 451 GK (SEQE>NO:29) A sequência de ácido nucleico de HC de Ab-A incluindo a sequência codificando o péptido sinal: 1 ATGGAGACTG GGCTGCGCTG GCTTCTCCTG GTCGCTGTGC TCAAAGGTGT 51 CCACTGTCAG TCGCTGGAGG AGTCCGGGGG TCGCCTGGTC ACGCCTGGGA 101 CACCCCTGAC ACTCACCTGC ACAGCCTCTG GATTCTCCCT CAGTAGTTAT 151 TGGATGAACT GGGTCCGCCA GGCTCCAGGG GAGGGGCTGG AATGGATCGG 201 AACCATTGATTCTGGTGGTA GGACGGACTA CGCGAGCTGG GCAAAAGGCC 251 GATTCACCAT CTCCAGAACC TCGACTACGA TGGATCTGAA AATGACCAGT 301 CTGACGACCG GGGACACGGC CCGTTATTTC TGTGCCAGAA ATTGGAACTT 351 GTGGGGCCAA GGCACCCTCG TCACCGTCTC GAGCGCTTCT ACAAAGGGCC 401 CATCTGTCTA TCCACTGGCC CCTGGATCTG CTGCCCAAAC TAACTCCATG 451 GTGACCCTGG GATGCCTGGT CAAGGGCTAT TTCCCTGAGC CAGTGACAGT 501 GACCTGGAAC TCTGGATCCC TGTCCAGCGG TGTGCACACC TTCCCAGCTG 551 TCCTGCAGTC TGACCTCTAC ACTCTGAGCA GCTCAGTGAC TGTCCCCTCC 601 AGCACCTGGC CCAGCGAGAC CGTCACCTGC AACGTTGCCC ACCCGGCCAG 651 CAGCACCAAG GTGGACAAGA AAATTGTGCC CAGGGATTGT GGTTGTAAGC 701 CTTGCATATG TACAGTCCCA GAAGTATCAT CTGTCTTCAT CTTCCCCCCA 751 AAGCCCAAGG ATGTGCTCAC CATTACTCTG ACTCCTAAGG TCACGTGTGT 801 TGTGGTAGAC ATCAGCAAGG ATGATCCCGA GGTCCAGTTC AGCTGGTTTG 851 TAGATGATGT GGAGGTGCAC ACAGCTCAGA CGCAACCCCG GGAGGAGCAG 901 TTCAACAGCA CTTTCCGCTC AGTCAGTGAA CTTCCCATCA TGCACCAGGA 951 CTGGCTCAAT GGCAAGGAGT TCAAATGCAG GGTCAACAGT GCAGCTTTCC 1001 CTGCCCCCAT CGAGAAAACC ATCTCCAAAA CCAAAGGCAG ACCGAAGGCT 1051 CCACAGGTGT ACACCATTCC ACCTCCCAAG GAGCAGATGG CCAAGGATAA 1101 AGTCAGTCTG ACCTGCATGA TAACAGACTT CTTCCCTGAA GACATTACTG 1151 TGGAGTGGCA GTGGAATGGG CAGCCAGCGG AGAACTACAA GAACACTCAG 1201 CCCATCATGG ACACAGATGG CTCTTACTTC GTCTACAGCA AGCTCAATGT 1251 GCAGAAGAGC AACTGGGAGG CAGGAAATAC TTTCACCTGC TCTGTGTTAC 1301 ATGAGGGCCT GCACAACCAC CATACTGAGA AGAGCCTCTC CCACTCTCCT 1351 GGTAAATGA (SEQID NO:30)
As sequências de CDR (região determinante de complementaridade) na região variável da cadeia pesada de Ab-A são como se segue: CDR-H1: SYWMN (SEQ ID NO:51) CDR-H2: TIDSGGRTDYASWAKG (SEQ ID NO:52) CDR-H3: NWNL (SEQ ID NO:53) 42 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
As sequências de CDR da região variável da cadeia leve de Ab-A são: CDR-L1: QSSQSVYDNNWLA (SEQ ID NO:54) CDR-L2: DASDLAS (SEQ ID NO:55) CDR-L3: QGAYNDVIYA (SEQ ID NO:56)
Ab-A foi humanizado, e é referido como Anticorpo 1 (também aqui referido como Ab-1), possuindo as seguintes sequências: A sequência de ácido nucleico da região variável da LC de Ab-1 incluindo a sequência codificando o péptido sinal é:
ATGGACACGAGGGCCCCCACrCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGT
GCCACATTTGCTCAAGTTCTGACCCAGAGTCCAAGCAGTCTCTCCGCCAGCGTAGGC
GATCGTGTGACTATTACCTGTCAATCTAGTCAGAGCGTGTATGATAACAATTGGCTG
GCGTGGTACCAGCAAAAACCGGGCAAAGCCCCGAAGCTGCTCATCTATGACGCGTC
CGATCTGGCTAGCGGTGTGCCAAGCCGTTTCAGTGGCAGTGGCAGCGGTACTGACT
TTACCCTCACAATTTCGTCTCrCCAGCCGGAAGATTTCGCCACTTACTATTGTCAAG
GTGCTTACAACGATGTGATTTATGCCTTCGGTCAGGGCACTAAAGTAGAAATCAAA CGT (SEQ ID NO:74) A sequência de aminoácidos da região variável de LC de Ab-1 incluindo o péptido sinal é: MDTRAPTOLLGLLLLWLPG ATFAOVT .TOSPSSI .RARVGnRVTITCÒSRÒSVYDNNWLÀ· WyQQKPGKAPKLUYiDASDLÃSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQGAYN DVIYÃFGQGTKVEIKR (SÉQffi NO:75) A sequência de ácido nucleico da região variável de HC de Ab-1 incluindo a sequência codificando o péptido sinal é:
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCACTGT
GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGAGGCGGGCTTGTCCAGCCTGGAGGGAGCCTGCG
TCTCTCTTGTGCAGCAAGCGGCTTCAGCTTATCCTCTTACTGGATGAATTGGGTGCG
GCAGGCACCTGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTGGGCACCATTGATTCCGGAGGCCGTA
CAGACTACGCGTCTTGGGCAAAGGGCCGTTTCACCATTTCCCGCGACAACTCCAAA
AATACCATGTACCTCCAGATGAACTCTCTCCGCGCAGAGGACACAGCACGTTATTA
CTGTGCACGCAACTGGAATCTGTGGGGTCAAGGTACTCTTGTAACAGTCTCGAGC (SEQ ID NO:76 ) A sequência de aminoácidos da região variável de HC de Ab-1 incluindo o péptido sinal MFTGLRWLLLVAVLKGVHCFVQIXESGGCtLVOPGÇt.ST.RLSCAASGFSLSSYWMNWVK QAPGKσLE^WGTΊpSGGRTDΫASWAK.GFFΉSRDNSIiNTMYLQMNSLRÀEbTÁRYYC ARNWNLWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:77 ) 43 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
As sequências de CDR (região determinante de complementaridade) na região variável da cadeia pesada de Ab-1 são como se segue: CDR-H1: SYWMN (SEQ ID NO:51) CDR-H2: TIDSGGRTDYASWAKG (SEQ ID NO:52) CDR-H3: NWNL (SEQ ID NO:53)
As sequências de CDR da região variável da cadeia leve de Ab-1 são: CDR-L1: QSSQSVYDNNWLA (SEQ ID NO:54) CDR-L2: DASDLAS (SEQ ID NO:55) CDR-L3: QGAYNDVIYA (SEQ ID NO:56)
Ab-B
Anticorpo B (também aqui referido como Ab-B e Mab-B) é um anticorpo de ratinho que exibe elevada afinidade de ligação a esclerostina. 0 padrão de ligação BIAcore de Ab-B é mostrado na Figura 16.
Cadeia Leve de Ab-B A sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-B é: 1 QIVLTQSPTI VSASPGEKVT LICSÁ'SS~SVS ~FVDWFQQKPG TSPKRWIYRT 51 SNLGFGVPAR FSGGGSGTSH SLTISRMEAE DAATYYC‘qQR STYPPTFGAG 101 TKLELKBADA APTVSIFPPS SEQLTSGGAS WCFLNNFYP KDINVKWKID 151 GSERQNGVLN SWTDQDSKDS TYSMSSTLTL TKDEYERHNS YTCEATHKTS 201 TSPIVKSFNR NEC (SEQ ID NO:31) A sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) de LC de Ab-B é: 1 CAAATTGTTC TCACCCAGTC TCCAACAATC GTGTCTGCAT CTCCAGGGGA 51 GAAGGTCACC CTAATCTGCA GTGCCAGTTC AAGTGTAAGT TTCGTGGACT 101 GGTTCCAGCA GAAGCCAGGC ACTTCTCCCA AACGCTGGAT TTACAGAACA 151 TCCAACCTGG GTTTTGGAGT CCCTGCTCGC TTCAGTGGCG GTGGATCTGG 201 GACCTCTCAC TCTCTCACAA TCAGCCGAAT GGAGGCTGAA GATGCTGCCA 251 CTTATTACTG CCAGCAAAGG AGTACTTACC CACCCACGTT CGGTGCTGGG 301 ACCAAGCTGG AACTGAAACG GGCTGATGCT GCACCAACTG TATCCATCTT 351 CCCACCATCC AGTGAGCAGT TAACATCTGG AGGTGCCTCA GTCGTGTGCT 401 TCTTGAACAA CTTCTACCCC AAAGACATCA ATGTCAAGTG GAAGATTGAT 451 GGCAGTGAAC GACAAAATGG CGTCCTGAAC AGTTGGACTG ATCAGGACAG 501 CAAAGACAGC ACCTACAGCA TGAGCAGCAC CCTCACGTTG ACCAAGGACG 551 AGTATGAACG ACATAACAGC TATACCTGTG AGGCCACTCA CAAGACATCA 601 ACTTCACCCA TTGTCAAGAG CTTCAACAGG AATGAGTGTT AG (SEQ ID NO:32) 44 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ A sequência de aminoácidos de LC de Ab-B incluindo o péptido sinal é: 1 MHFQVQIFSF LLISASVIVS RGQIVLTQSP TIVSASPGÉK VTLICSASSS 51 VSFVDWFQQK PGTSPKRWIY RTSNLGFGVP ARFSGGGSGT SHSLTISRME 101 AEDAATYYCQ QRSTYPPTFG AGTKLELKRA DAAPTVSIFP PSSEQLTSGG 151 ASWCFLNNF YPKDINVKWK IDGSERQNGV LNSWTDQDSK DSTYSMSSTL 201 TLTKDEYERH NSYTCEATHK TSTSPIVKSF NRNEC (SEQ ID NO:33) A sequência de ácido nucleico de LC de Ab-B incluindo a sequência codificando o péptido sinal é: 1 ATGCATTTTC AAGTGCAGAT TTTCAGCTTC CTGCTAATCA GTGCCTCAGT 51 CATAGTGTCC AGAGGGCAAA TTGTTCTCAC CCAGTCTCCA ACAATCGTGT 101 CTGCATCTCC AGGGGAGAAG GTCACCCTAA TCTGCAGTGC CAGTTCAAGT 151 GTAAGTTTCG TGGACTGGTT CCAGCAGAAG CCAGGCACTT CTCCCAAACG 201 CTGGATTTAC AGAACATCCA ACCTGGGTTT TGGAGTCCCT GCTCGCTTCA 251 GTGGCGGTGG ATCTGGGACC TCTCACTCTC TCACAATCAG CCGAATGGAG 301 GCTGAAGATG CTGCCACTTA TTACTGCCAG CAAAGGAGTA CTTACCCACC 351 CACGTTCGGT GCTGGGACCA AGCTGGAACT GAAACGGGCT GATGCTGCAC 401 CAACTGTATC CATCTTCCCA CCATCCAGTG AGCAGTTAAC ATCTGGAGGT 451 GCCTCAGTCG TGTGCTTCTT GAACAACTTC TACCCCAAAG ACATCAATGT 501 CAAGTGGAAG ATTGATGGCA GTGAACGACA AAATGGCGTC CTGAACAGTT 551 GGACTGATCA GGACAGCAAA GACAGCACCT ACAGCATGAG CAGCACCCTC 601 ACGTTGACCA AGGACGAGTA TGAACGACAT AACAGCTATA CCTGTGAGGC 651 CACTCACAAG ACATCAACTT CACCCATTGT CAAGAGCTTC AACAGGAATG 701 AGTGTTAG (SEQ ID NO:34)
Cadeia Pesada de Ab-B A sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) de HC de Ab-B: 1 QVTLKESGPG ILQPSQTLSL TCSFSGFSLS .TSGMGVGWIR HPSGKNLEWL 51 AHIWWDDVKR YNPVLKS:FLLT ISKDTSNSQV FLKIANVDTA DTATYYCARI 101 ÉDFDYDEEYY AMDYWGQGTS VIVSSAXriP PSVYPLAPGS AAQTNSMVTL 151 GCLVKGYFPÈ PVTVTmSGS LSSGVHTFPA VLQSDLYTLS SSVTVPSSTW 201 PSETVTCNVA HPASSTKVDK KIVPRDCGCK PC1CTVPEVS SVFIFPPKPK 251 DVLTITLTPK VTCVWDISK DDPEVQFSWF VDDVEVHTAQ TQPREEQFNS 301 TFRSVSELPI MHQDWLNGKE FKCRVNSAAF PAPIEKTISK TKGPPKAPQV 351 YTIPPPKEQM AKDKVSLTCM ITDFFPEDXT VEWQWNGQPA ENYKNTQPIM 401 DTDGSYFVYS KLNVQKSNWE AGNTFTCSVL HEGLHNHHTE KSLSHSPGK(SEQ IDNO:35) 45 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ A sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) de HC de Ab-B: 1 CAGGTTACTC TGAAAGAGTC TGGCCCTGGG ATATTGCAGC CCTCCCAGAC 51 CCTCAGTCTG ACTTGTTCTT TCTCTGGGTT TTCACTGAGC ACTTCTGGTA 101 TGGGTGTAGG CTGGATTCGT CACCCATCAG GGAAGAATCT GGAGTGGCTG 151 GCACACATTT GGTGGGATGA TGTCAAGCGC TATAACCCAG TCCTGAAGAG 201 CCGACTGACT ATCTCCAAGG ATACCTCCAA CAGCCAGGTA TTCCTCAAGA 251 TCGCCAATGT GGACACTGCA GATACTGCCA CATACTACTG TGCTCGAATA 301 GAGGACTTTG ATTACGACGA GGAGTATTAT GCTATGGACT ACTGGGGTCA 351 AGGAACCTCA GTCATCGTCT CCTCAGCCAA AACGACACCC CCATCTGTCT 401 ATCCACTGGC CCCTGGATCT GCTGCCCAAA CTAACTCCAT GGTGACCCTG 451 GGATGCCTGG TCAAGGGCTA TTTCCCTGAG CCAGTGACAG TGACCTGGAA 501 CTCTGGATCC CTGTCCAGCG GTGTGCACAC CTTCCCAGCT GTCCTGCAGT 551 CTGACCTCTA CACTCTGAGC AGCTCAGTGA CTGTCCCCTC CAGCACCTGG 601 CCCAGCGAGA CCGTCACCTG CAACGTTGCC CACCCGGCCA GCAGCACCAA 651 GGTGGACAAG AAAATTGTGC CCAGGGATTG TGGTTGTAAG CCTTGCATAT 701 GTACAGTCCC AGAAGTATCA TCTGTCTTCA TCTTCCCCCC AAAGCCCAAG 751 GATGTGCTCA CCATTACTCT GACTCCTAAG GTCACGTGTG TTGTGGTAGA 801 CATÇAGCAAG GATGATCCCG AGGTCCAGTT CAGCTGGTTT GTAGATGATG 851 TGGAGGTGCA CACAGCTCAG ACGCAACCCC GGGAGGAGCA GTTCAACAGC 901 ACTTTCCGCT CAGTCAGTGA ACTTCCCATC ATGCACCAGG ACTGGCTCAA 951 TGGCAAGGAG TTCAAATGCA GGGTCAACAG TGCAGCTTTC CCTGCCCCCA 1001 TCGAGAAAAC CATCTCCAAA ACCAAAGGCA GACCGAAGGC TCCACAGGTG 1051 TACACCATTC CACCTCCCAA GGAGCAGATG GCCAAGGATA AAGTCAGTCT 1101 GACCTGCATG ATAACAGACT TCTTCCCTGA AGACATTACT GTGGAGTGGC 1151 AGTGGAATGG GCAGCCAGCG GAGAACTACA AGAACACTCA GCCCATCATG 1201 GACACAGATG GCTCTTACTT CGTCTACAGC AAGCTCAATG TGCAGAAGAG 1251 CAACTGGGAG GCAGGAAATA CTTTCACCTG CTCTGTGTTA CATGAGGGCC 1301 TGCACAACCA CCATACTGAG AAGAGCCTCT CCCACTCTCC TGGTAAATGA (SEQ ID NO:36) A sequência de aminoácidos de HC de Ab-B incluindo o péptido sinal: 1 MGRLTSSFLL LIVPAYVLSQ VTLKESGPGI LQPSQTLSLT CSFSGFSLST 51 SGMGVGWIRH PSGKNLEWLA HIWWDDVKRY NPVLKSRLTI SKDTSNSQVF 101 LKIANVDTAD TATYYCARIE DFDYDEEYYA MDYWGQGTSV IVSSAKTTPP 151 SVYPLAPGSA AQTNSMVTLG CLVKGYFPEP VTVTWNSGSL SSGVHTFPAV 201 1QSDLYTLSS SVTVPSSTWP SETVTCNVAH PASSTKVDKK IVPRDCGCKP 251 CICTVPEVSS VFIFPPKPKD VLTITLTPKV TCVWDISKD DPEVQFSWFV 301 DDVEVHTAQT QPREEQFNST FRSVSELPIM HQDWLNGKEF KCRVNSAAFP 351 APIEKTISKT KGRPKAPQVY TIPPPKEQMA KDKVSLTCMI TDFFPEDITV 401 EWQWNGQPAE KYKNTQPIMD TDGSYFVYSK LNVQKSNWEA GNTFTCSVLH 451 EGLHNHHTEK SLSHSPGK (SEQ 1D NO:37) 46 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ A sequência nucleotídica de HC de Ab-B incluindo a sequência codificando o péptido sinal: 1 ATGGGCAGGC TTACTTCTTC ATTCCTGCTA CTGATTGTCC CTGCATATGT 51 CCTGTCCCAG GTTACTCTGA AAGAGTCTGG CCCTGGGATA TTGCAGCCCT 101 CCCAGACCCT CAGTCTGACT TGTTCTTTCT CTGGGTTTTC ACTGAGCACT 151 TCTGGTATGG GTGTAGGCTG GATTCGTCAC CCATCAGGGA AGAATCTGGA 201 GTGGCTGGCA CACATTTGGT GGGATGATGT CAAGCGCTAT AACCCAGTCC 251 TGAAGAGCCG ACTGACTATC TCCAAGGATA CCTCCAACAG CCAGGTATTC 301 CTCAAGATCG CCAATGTGGA CACTGCAGAT ACTGCCACAT ACTACTGTGC 351 TCGAATAGAG GACTTTGATT ACGACGAGGA GTATTATGCT ATGGACTACT 401 GGGGTCAAGG AACCTCAGTC ATCGTCTCCT CAGCCAAAAC GACACCCCCA 451 TCTGTCTATC CACTGGCCCC TGGATCTGCT GCCCAAACTA ACTCCATGGT 501 GACCCTGGGA TGCCTGGTCA AGGGCTATTT CCCTGAGCCA GTGACAGTGA 551 CCTGGAACTC TGGATCCCTG TCCAGCGGTG TGCACACCTT CCCAGCTGTC 601 CTGCAGTCTG ACCTCTACAC TCTGAGCAGC TCAGTGACTG TCCCCTCCAG 651 CACCTGGCCC AGCGAGACCG TCACCTGCAA CGTTGCCCAC CCGGCCAGCA 701 GCACCAAGGT GGACAAGAAA ATTGTGCCCA GGGATTGTGG TTGTAAGCCT 751 TGCATATGTA CAGTCCCAGA AGTATCATCT GTCTTCATCT TCCCCCCAAA 801 GCCCAAGGAT GTGCTCACCA TTACTCTGAC TCCTAAGGTC ACGTGTGTTG 851 TGGTAGACAT CAGCAAGGAT GATCCCGAGG TCCAGTTCAG CTGGTTTGTA 901 GATGATGTGG AGGTGCACAC AGCTCAGACG CAACCCCGGG AGGAGCAGTT 951 CAACAGCACT TTCCGCTCAG TCAGTGAACT TCCCATCATG CACCAGGACT 1001 GGCTCAATGG CAAGGAGTTC AAATGCAGGG TCAACAGTGC AGCTTTCCCT 1051 GCCCCCATCG AGAAAACCAT CTCCAAAACC AAAGGCAGAC CGAAGGCTCC 1101 ACAGGTGTAC ACCATTCCAC CTCCCAAGGA GCAGATGGCC AAGGATAAAG 1151 TCAGTCTGAC CTGCATGATA ACAGACTTCT TCCCTGAAGA CATTACTGTG 1201 GAGTGGCAGT GGAATGGGCA GCCAGCGGAG AACTACAAGA ACACTCAGCC 1251 CATCATGGAC ACAGATGGCT CTTACTTCGT CTACAGCAAG CTCAATGTGC 1301 AGAAGAGCAA CTGGGAGGCA GGAAATACTT TCACCTGCTC TGTGTTACAT 1351 GAGGGCCTGC ACAACCACCA TACTGAGAAG AGCCTCTCCC ACTCTCCTGG 14 01 TAAATGA (SEQ ID NO:38)
As sequências de CDR (reqião determinante de complementaridade) na região variável da cadeia pesada de Ab-B são como se segue: CDR-H1: TSGMGVG (SEQ ID NO:57) CDR-H2: HIWWDDVKRYNPVLKS (SEQ ID NO:58) CDR-H3: EDFDYDEEYYAMDY (SEQ ID NO:59)
As sequências de CDR da região variável da cadeia leve de Ab-B são: CDR-L1: SASSSVSFVD (SEQ ID NO:60) CDR-L2: RTSNLGF (SEQ ID NO:61) CDR-L3: QQRSTYPPT (SEQ ID NO:62)
Os anticorpos aqui divulgados ligam-se a regiões de esclerostina humana que são importantes para a actividade in vivo da proteina. A ligação de um anticorpo a esclerostina 47 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ pode ser correlacionada com aumentos, por exemplo, na densidade mineral óssea alcançados através da utilização do anticorpo in vivo tal como descrito nos Exemplos 5 e 9 (ratinhos) e Exemplo 12 (macaco) . Os aumentos em pelo menos um de formação de osso, teor mineral ósseo, massa óssea, qualidade óssea e resistência óssea podem também ser alcançados através da utilização do anticorpo in vivo tal como descrito nos Exemplos 5 e 9 (ratinhos) e Exemplo 12 (macaco) . Uma vez que a ligação de um anticorpo a esclerostina é principalmente determinada pelas suas sequências de CDR, um anticorpo para a prática do invento pode ser gerado com as sequências de CDR divulgadas numa estrutura apropriada, em que o anticorpo mantém a capacidade para se ligar especificamente a esclerostina, e pode esperar-se que se alcancem aumentos, por exemplo, na densidade mineral óssea. Tais anticorpos são úteis no tratamento de condições humanas ou animais que sejam causadas por, estejam associadas a, ou resultem em pelo menos um de baixa formação de osso, baixa densidade mineral óssea, baixo teor mineral ósseo, baixa massa óssea, baixa qualidade óssea e baixa resistência óssea. Os métodos de construção e expressão de anticorpos e fragmentos destes compreendendo as CDR do presente invento são conhecidas dos peritos na técnica.
Anticorpos anti-esclerostina adicionais são descritos abaixo. Para algumas das sequências de aminoácidos as regiões determinantes de complementaridade (CDR) estão em caixas sombreadas e as regiões constantes estão a negrito e itálico.
Ab-2
As sequências de LC e HC do Anticorpo 2 (também referido como Ab-2) são como se segue:
Cadeia Leve de Ab-2:
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-2: 1 QIVLSQSPAILSTSPGEKVT MTC^SSWYMWYQQKPq SSPKPWIY&T 51 SNLA^GVPVR FSGSGSGTSY SLTITRVÈAE DAATYYCQQW SSDPLTFGÀG 101TKLELKRADA APTVSIFPPS SEQLTSGGAS WCFLNNFYPICOtíNVKWEID 151 GSERQNGVLNSWTDQDSKDS TYSMSSTLTL TKDEYERBNS YTCEATHKTS 201 TSPIVKSFNR NEC (SEQID NO: 117) 48 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-2: 1 CAAATTGTTC TCTCCCAGTC TCCAGCAATC CTGTCTACAT CTCCAGGGGA 51 GAAGGTCACA ATGAGTTGCA GGGCCAGCTC AAGTGTATAT TACATGCACT 101 GGTACCAGCA GAAGCCAGGA TCCTCCCCCA AACCCTGGAT TTATGCCACA 151 TCCAACCTGG CTTCTGGAGT CCCTGTTCGC TTCAGTGGCA GTGGGTCTGG 201 GACCTCTTAC TCTCTCACAA TCACCAGAGT GGAGGCTGAA GATGCTGCCA 251 CTTATTACTG CCAGCAGTGG AGTAGTGACC CACTCACGTT CGGTGCTGGG 301ACCAAGCTGG AGCTGAAACG GGCTGATGCT GCACCAACTG TATCCATCTT 351 CCCACCATCC AGTGAGCAGT TAACATCTGG AGGTGCCTCA GTCGTGTGCT 401 TCTTGAACAA CTTCTACCCC AAAGACATCA ATGTCAAGTG GAAGATTGAT 451 GGCAGTGAAC GACAAAATGG CGTCCTGAAC AGTTGGACTG ATCAGGACAG 501 CAAAGACAGC ACCTACAGCA TGAGCAGCAC CCTCACGTTG ACCAAGGACG 551 AGTATGAACG ACATAACAGC TATACCTGTG AGGCCACTCA CAAGACATCA 601 ACTTCACCCA TTGTCAAGAG CTTCAACAGG AATGAGTGTT AG (SEQ DD NO: 118)
Sequência de aminoácidos da LC de Ab-2 incluindo o péptido sinal: 1 MDFQVQIFSF LLISASVIMS JIGQIVLSQSP A1LSTSPGEK VTMTCRASSS 51 VYYMHWYQQK PGSSPKPWIY ATSNLASGVP VRFSGSGSGT SYSLTITRVE 101 AEDAATYYCQ QWSSDPLTFG AGTKLELKRA DAAPTVSIFP PSSEQLTSGG 151 AS WCFLNNF YPKDINVKWKIDGSERQNGV LNSWTDQDSK DSTYSMSSTL 201 TLTKDEYERH NSYTCEATUK TSTSPIVKSF NRNEC (SEQ IDNO:119)
Sequência de ácido nucleico da LC de Ab-2 incluindo a sequência codificando o péptido sinal: 1 ATGGATTTTC AAGTGCAGAT TTTCAGCTTC CTGCTAATCA GTGCTTCAGT 51 CATTATGTCC AGGGGACAAA TTGTTCTCTC CCAGTCTCCA GCAATCCTGT 101 CTACATCTCC AGGGGAGAAG GTCACAATGA CTTGCAGGGC CAGCTCAAGT 151 GTATATTACA TGCACTGGTA CCAGCAGAAG CCAGGATCCT CCCCCAAACC 201 CTGGATTTAT GCCACATCCA ACCTGGCTTC TGGAGTCCCT GTTCGCTTCA 251 GTGGCAGTGG GTCTGGGACC TCTTACTCTC TCACAATCAC CAGAGTGGAG 301 GCTGAAGATG CTGCCACTTA TTACTGCCAG CAGTGGAGTA GTGACCCACT 351 CACGTTCGGT GCTGGGACCA AGCTGGAGCT GAAACGGGCT GATGCTGCAC 401 CAACTGTATC CATCTTCCCA CCATCCAGTG AGCAGTTAAC ATCTGGAGGT 451 GCCTCAGTCG TGTGCTTCTT GAACAACTTC TACCCCAAAG ACATCAATGT 501 CAAGTGGAAG ATTGATGGCA GTGAACGACA AAATGGCGTC CTGAACAGTT 551 GGACTGATCA GGACAGCAAA GACAGCACCT ACAGCATGAG CAGCACCCTC 601 ACGTTGACCA AGGACGAGTA TGAACGACAT AACAGCTATA CCTGTGAGGC 651 CACTCACAAG ACATCAACTT CACCCATTGT CAAGAGCTTC AACAGGAATG 701 AGTGTTAG (SEQ ID NO:120) 49 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Cadeia Pesada de Ab-2
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-2: 1EVQVQQSGPE LVKPGASVKL SCTASGFNIK DYFTHWVKQR PEQGLEWIGR 51 ÍÍ)PEDGESDY APKFQDKAIM TADTSSNTAY LQLRSLTSED TAIYYCERED 101 YDGTYTJFFPY WGQGTLVTVS ÁAKTTPPSVY PLAPGSAAOT NSMVTLGCLV 151KGYFPEPVTV TWNSGSLSSG VHTFPA VLOS DLYTLSSSVT VPSSTWPSET 201 VTCNVAHPAS STKVDKKIVP RDCGCKPCIC TVPEVSSVF1FPPKPKDVLT 251ITLTPKVTCV WDISKDDPE VQFSWFVDDVEVHTAQTQPR EEQFNSTFRS 301 VSELPIMHQD WLNGKEFKCR VNSA4FPAPIEKTISKTKGR PKAPQVYTIP 351PPKEQMASDK VSLTCMITDF FPEDITVEWQ WNGQPAENYKNTQPIMDTDG 401SYFHSKLNV QKSNWEA GNT FTCSVLHE GL HNHHTEKSLS HSPGK (SEQID NO:121)
Sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-2: 1 GAGGTTCAGG TGCAGCAGTC TGGGCCAGAA CTTGTGAAGC CAGGGGCCTC 51 AGTCAAGTTG TCCTGCACAG CTTCTGGCTT CAACATTAAA GACTACTTTA 101 TACACTGGGT GAAGCAGAGG CCTGAACAGG GCCTGGAGTG GATTGGAAGG 151 CTTGATCCTG AGGATGGTGA AAGTGATTAT GCCCCGAAGT TCCAGGACAA 201 GGCCATTATG ACAGCAGACA CATCATCCAA CACAGCCTAT CTTCAGCTCA 251 GAAGCCTGAC ATCTGAGGAC ACTGCCATCT ATTATTGTGA GAGAGAGGAC 301 TACGATGGTA CCTACACCTT TTTTCCTTAC TGGGGCCAAG GGACTCTGGT 351 CACTGTCTCT GCAGCCAAAA CGACACCCCC ATCTGTCTAT CCACTGGCCC 401 CTGGATCTGC TGCCCAAACT AACTCCATGG TGACCCTGGG ATGCCTGGTC 451 AAGGGCTATT TCCCTGAGCC AGTGACAGTG ACCTGGAACT CTGGATCCCT 501 GTCCAGCGGT GTGCACACCT TCCCAGCTGT CCTGCAGTCT GACCTCTACA 551 CTCTGAGCAG CTCAGTGACT GTCCCCTCCA GCACCTGGCC CAGCGAGACC 601 GTCACCTGCA ACGTTGCCCA CCCGGCCAGC AGCACCAAGG TGGACAAGAA 651 AATTGTGCCC AGGGATTGTG GTTGTAAGCC TTGCATATGT ACAGTCCCAG 701 AAGTATCATC TGTCTTCATC TTCCCCCCAA AGCCCAAGGA TGTGCTCACC 751 ATTACTCTGA CTCCTAAGGT CACGTGTGTT GTGGTAGACA TCAGCAAGGA 801 TGATCCCGAG GTCCAGTTCA GCTGGTTTGT AGATGATGTG GAGGTGCACA 851 CAGCTCAGAC GCAACCCCGG GAGGAGCAGT TCAACAGCAC TTTCCGCTCA 901 GTCAGTGAAC TTCCCATCAT GCACCAGGAC TGGCTCAATG GCAAGGAGTT 951 CAAATGCAGG GTCAACAGTG CAGCTTTCCC TGCCCCCATC GAGAAAACCA 1001 TCTCCAAAAC CAAAGGCAGA CCGAAGGCTC CACAGGTGTA CACCATTCCA 1051 CCTCCCAAGG AGCAGATGGC CAAGGATAAA GTCAGTCTGA CCTGCATGAT 1101 AACAGACTTC TTCCCTGAAG ACATTACTGT GGAGTGGCAG TGGAATGGGC 1151 AGCCAGCGGA GAACTACAAG AACACTCAGC CCATCATGGA CACAGATGGC 1201 TCTTACTTCA TCTACAGCAA GCTCAATGTG CAGAAGAGCA ACTGGGAGGC 1251 AGGAAATACT TTCACCTGCT CTGTGTTACA TGAGGGCCTG CACAACCACC 1301 ATACTGAGAA GAGCCTCTCC CACTCTCCTG GTAAATGA (SEQ ID NO:122) 50 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de aminoácidos da HC de Ab-2 incluindo o péptido sinal: 1 MKCSWVIFFL MAVVTGVNSE VQVQQSGPEL VKPGASVKLS CTASGFNIKD 51 YFIIIWVKQRP EQGLEWIGRL DPEDGESDYA PKFQDKAIMT ADTSSNTAYL 101 QLRSLTSEDT AIYYCEREDY DGTYTFFPYW GQGTLVTVSA AKTTPPSVYP 151 LAPGSAAQTN SMVTLGCLVK GYFPEPVTVT WNSGSLSSGV HTFPAVLQSD 201 LYTLSSSVTV PSSTWPSETV TCNVAHPASS TKVDKKTVPR DCGCKPCICT 251 VPEVSSVF1F PPKPKDVLTITLTPKVTCW VDISKDDPEV QFSWFVDDVE 301 VHTAQTQPRE EQFNSTFRSV SELPIMHQDW LNGKEFKCRV NSAAFPAPIE 351 KTISKTKGRP KAPQVYTIPP PKEQMAKDKV SLTCMITDFF PEDITVEWQW 401 NGQPAENYKN TQPIMDTDGS YFIYSKLNVQ KSNWEAGNTF TCSVLHEGLH 451 NHHTEKSLSH SPGK (SEQ ED NO: 123)
Sequência de ácido nucleico da HC de Ab-2 incluindo a sequência codificando o péptido sinal:
1 ATGAAATGCÀ GCTGGGTCAT CTTCTTCCTG ATGGCAGTGG TTACAGGGGT 51 CAATTCAGAG GTTCAGGTGC AGCAGTCTGG GCCAGAACTT GTGAAGCCAG 101 GGGCCTCAGT CAAGTTGTCC TGCACAGCTT CTGGCTTCAA CATTAAAGAC 151 TACTTTATAC ACTGGGTGAA GCAGAGGCCT GAACAGGGCC TGGAGTGGAT 201 TGGAAGGCTT GATCCTGAGG ATGGTGAAAG TGATTATGCC CCGAAGTTCC 251 AGGACAAGGC CATTATGACA GCAGACACAT CATCCAACAC AGCCTATCTT 301 CAGCTCAGAA GCCTGACATC TGAGGACACT GCCATCTATT ATTGTGAGAG 351 AGAGGACTAC GATGGTACCT ACACCTTTTTTCCTTACTGG GGCCAAGGGA 401 CTCTGGTCAC TGTCTCTGCA GCCAAAACGA CACCCCCATC TGTCTATCCA 451 CTGGCCCCTG GATCTGCTGC CCAAACTAAC TCCATGGTGA CCCTGGGATG 501 CCTGGTCÁAG GGCTATTTCC CTGAGCCAGT GACAGTGACC TGGAACTCTG 551 GATCCCTGTC CAGCGGTGTG CACACCTTCC CAGCTGTCCT GCAGTCTGAC 601 CTCTACACTC TGAGCAGCTC AGTGACTGTC CCCTCCAGCA CCTGGCCCAG 651 CGAGACCGTC ACCTGCAACG TTGCCCACCC GGCCAGCAGC ACCAAGGTGG 701 ACAAGAAAAT TGTGCCCAGG GATTGTGGTT GTAAGCCTTG CATATGTACA 751 GTCCCAGAAG TATCATCTGT CTTCATCTTC CCCCCAAAGC CCAAGGATGT 801 GCTCACCATT ACTCTGACTC CTAAGGTCAC GTGTGTTGTG GTAGACATCA 851 GCAAGGATGA TCCCGAGGTC CAGTTCAGCT GGTTTGTAGA TGATGTGGAG 901 GTGCACACAG CTCAGACGCA ACCCCGGGAG GAGCAGTTCA ACAGCACTTT 951 CCGCTCAGTC AGTGAACTTC CCATCATGCA CCAGGACTGG CTCAATGGCA 1001 AGGAGTTCAA ATGCAGGGTC AACAGTGCAG CTTTCCCTGC CCCCATCGAG 1051 AAAACCATCT CCAAAACCAA AGGC AGACCG AAGGCTCCAC AGGTGTACAC 1101 CATTCCACCT CCCAAGGAGC AGATGGCCAA GGATAAAGTC AGTCTGACCT 1151 GCATGATAAC AGACTTCTTC CCTGAAGACA TTACTGTGGA GTGGCAGTGG 1201 AATGGGCAGC CAGCGGAGAA CTACAAGAAC ACTCAGCCCA TCATGGACAC 1251 AGATGGCTCT TACTTCATCT ACAGCAAGCT CAATGTGCAG AAGAGCAACT 1301 GGGAGGCAGG AAATACTTTC ACCTGCTCTG TGTTACATGA GGGCCTGCAC 1351 AACCACCATA CTGAGAAGAG CCTCTCCCAC TCTCCTGGTA AATGA (SEQ ID NO: 124) 51 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Ab-3
As sequências da LC e HC do Anticorpo 3 (também aqui referido como Ab-3) são como se segue:
Cadeia Leve de Ab-3
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-3:
1 EIVLTQSPAL MAASPGEKVT ITCSVSSTIS;SNHLfí\VTQQK SDTSPKPWIY 51 gtsnlXsgvp vrpsgsgsgt sysltissme aedaatyyqq qwssypltfg 101 AGTKLELRA4 DAAPTVSIFP PSSEQLTSGGASWCFLNNF YPKDINVKWK 151IDGSERONGV LNSWTDODSK DSTYSMSSTL TLTKDEYERH NSYTCEATHK 201 TSTSP1VKSF NRNEC (SEQID NO:125)
Sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-3: 1 GAAATTGTGC TCACCCAGTC TCCAGCACTC ATGGCTGCAT CTCCGGGGGA 51 GAAGGTCACC ATCACCTGCA GTGTCAGTTC AACTATAAGT TCCAACCACT 101TGCACTGGTT CCAGCAGAAG TCAGACACCT CCCCCAAACC CTGGATTTAT 151 GGCACATCCA ACCTGGCTTC TGGAGTCCCT GTTCGCTTCA GTGGCAGTGG 201 ATCTGGGACC TCTTATTCTC TCACAATCAG CAGCATGGAG GCTGAGGATG 251 CTGCCACTTA TTACTGTCAA CAGTGGAGTA GTTACCCACT CACGTTCGGC 301 GCTGGGACCA AGCTGGAGCT GAGACGGGCT GATGCTGCAC CAACTGTATC 351 CATCTTCCCA CCATCCAGTG AGCAGTTAAC ATCTGGAGGT GCCTCAGTCG 401 TGTGCTTCTT GAACAACTTC TACCCCAAAG ACATCAATGT CAAGTGGAAG 451ATTGATGGCA GTGAACGACA AAATGGCGTC CTGAACAGTT GGACTGATCA 501 GGACAGCAAA GACAGCACCT ACAGCATGAG CAGCACCCTC ACGTTGACCA 551AGGACGAGTA TGAACGACAT AACAGCTATA CCTGTGAGGC CACTCACAAG 601 ACATCAACTT CACCCATTGT CAAGAGCTTC AACAGGAATG AGTGTTAG (SEQ EDNO:126)
Sequência de aminoácidos da LC de Ab-3 incluindo o péptido sinal: 1 NffiFHVQffSFMlSVTVILS SGEIVLTQSP ALMAASPGEK VT1TCSVSST 51ISSNHLHWFQ QKSDTSPKPWIYGTSNLASG VPVRFSGSGS GTSYSLTISS 101 MEAEDAATYY CQQWSSYPLT FGAGTKLELR RADAAPTVSIFPPSSEQLTS 151 GGASWCFLN NFYPKDINVK WKGDGSERQN GVLNSWTDQD SKDSTYSMSS 201 TLTLTKDEYE RHNSYTCEAT HKTSTSPIVK SFNRNEC (SEQ ID NO: 127) 52 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de ácido nucleico da LC de Ab-3 incluindo a sequência codificando o péptido sinal: 1ATGGATTTTC ATGTGCAGAT TTTCAGCTTC ATGCTAATCA GTGTCACAGT 51 CATTTTGTCC AGTGGAGAAA TTGTGCTCAC CCAGTCTCCA GCACTCATGG 101 CTGCATCTCC GGGGGAGAAG GTCACCATCA CCTGCAGTGT CAGTTCAACT 151 ATAAGTTCCA ACCACTTGCA CTGGTTCCAG CAGAAGTCAG ACACCTCCCC 201 CAAACCCTGG ATTTATGGCA CATCCAACCT GGCTTCTGGA GTCCCTGTTC 251 GCTTCAGTGG CAGTGGATCT GGGACCTCTT ATTCTCTCAC AATCAGCAGC 301 ATGGAGGCTG AGGATGCTGC CACTTATTAC TGTCAACAGT GGAGTAGTTA 351 CCCACTCACG TTCGGCGCTG GGACCAAGCT GGAGCTGAGA CGGGCTGATG 401 CTGCACCAAC TGTATCCATC TTCCCACCAT CCAGTGAGCA GTTAACATCT 451 GGAGGTGCCT CAGTCGTGTG CTTCTTGAAC AACTTCTACC CCAAAGACAT 501 CAATGTCAAG TGGAAGATTG ATGGCAGTGA ACGACAAAAT GGCGTCCTGA 551ACAGTTGGAC TGATCAGGAC AGCÀAAGACA GCACCTACAG CATGAGCAGC 601 ACCCTCACGT TGACCAAGGA CGAGTATGAA CGACATAACA GCTATACCTG 651 TGAGGCCACT CACAAGACAT CAACTTCACC CATTGTCAAG AGCTTCAACA 701 GGAATGAGTG TTAG (SEQID NO:128)
Cadeia Pesada de Ab-3
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-3: 51IDPÈNGDTLY DEKFQDKATL TTDTSSNTAY LQLSGLTSET TAVYYCSREÁ; 101 DYFí^GTS YWYEDV WG AGTT ITVSS^ÍTTP PS VYPLAPGS AAQTNSMVTL 151 GCL VKGYFPE PVTVTWNSGS LSSGVHTFPA VLOSDL YTLS SS VTVPSSTW 201PSETJTCNVA HPASSTKADK KIVPRDCGCK PCICTVPEVS SVFIFPPKPK 251DVLTITLTPK VTCWVDISKDDPEVQFSWF VDDVEVHTAQ TQPREEQFNS 301 TFRSVSELPIMHQDWLNGKE FKCR VNSAAF PAPIEKTISK TKGRPKAPQV 351 YTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDIT VEWQWNGQPA ENYKNTQPIM 401DTDGSYFÍYS KLM^QKSNWE A GNTFTCSl^L HEGLHNHHTE KSLSHSPGK (SEQ EDNO:129) 53 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-3: 1GAGGTTCAGC TGCAGCAGTC TGGGGCTGAA CTTGTGAGGC CAGGGGCCTT 51 AGTCAAGTTG TCCTGCACAG CTTCTGACTT CAACATTAAA GACTTCTATC 101 TACACTGGAT GAGGCAGCGG CCTGAACAGG GCCTGGACTG GATTGGAAGG 151 ATTGATCCTG AGAATGGTGA TACTTTATAT GACCCGAAGT TCCAGGACAA 201 GGCCACTCTT ACAACAGACA CATCCTCCAA CACAGCCTAC CTGCAGCTCA 251 GCGGCCTGAC ATCTGAGACC ACTGCCGTCT ATTACTGTTC TAGAGAGGCG 301 GATTATTTCC ACGATGGTAC CTCCTACTGG TACTTCGATG TCTGGGGCGC 351AGGGACCACA ATCACCGTCT CCTCAGCCAA AACGACACCC CCATCTGTCT 401 ATCCACTGGC CCCTGGATCT GCTGCCCAAA CTAACTCCAT GGTGACCCTG 451 GGATGCCTGG TCAAGGGCTA TTTCCCTGAG CCAGTGACAG TGACCTGGAA 501 CTCTGGATCC CTGTCCAGCG GTGTGCACAC CTTCCCAGCT GTCCTGCAGT 551 CTGACCTCTA CACTCTGAGC AGCTCAGTGA CTGTCCCCTC CAGCACCTGG 601 CCCAGCGAGA CCGTCACCTG CAACGTTGCC CACCCGGCCA GCAGCACCAA 651 GGTGGACAAG AAAATTGTGC CCAGGGATTG TGGTTGTAAG CCTTGCATAT 701 GTACAGTCCC AGAAGTATCA TCTGTCTTCA TCTTCCCCCC AAAGCCCAAG 751 GATGTGCTCA CCATTACTCT GACTCCTAAG GTCACGTGTG TTGTGGTAGA 801 CATCAGCAAG GATGATCCCG AGGTCCAGTT CAGCTGGTTT GTAGATGATG 851 TGGAGGTGCA CACAGCTCAG ACGCAACCCC GGGAGGAGCA GTTCAACAGC 901 ACTTTCCGCT CAGTCAGTGA ACTTCCCATC ATGCACCAGG ACTGGCTCAA 951 TGGCAAGGAG TTCAAATGCA GGGTCAACAG TGCAGCTTTC CCTGCCCCCA 1001 TCGAGAAAAC CATCTCCAAA ACCAAAGGCA GACCGAAGGC TCCACAGGTG 1051 TACACCATTC CACCTCCCAA GGAGCAGATG GCCAAGGATA AAGTCAGTCT 1101 GACCTGCATG ATAACAGACT TCTTCCCTGA AGACATTACT GTGGAGTGGC 1151 AGTGGAATGG GCAGCCAGCG GAGAACTACA AGAACACTCA GCCCATCATG 1201 GACACAGATG GCTCTTACTT CATCTACAGC AAGCTCAATG TGCAGAAGAG 1251 CAACTGGGAG GCAGGAAATA CTTTCACCTG CTCTGTGTTA CATGAGGGCC 1301 TGCACAACCA CCATACTGAG AAGAGCCTCT CCCACTCTCC TGGTAAATGA (SEQ IDNO:130)
Sequência de aminoácidos da HC de Ab-3 incluindo o péptido sinal: 1 MKCSWVTFFL MAWTGVNSE VQLQQSGAEL VRPGALVKLS CTASDFNIKD 51 FYLHWMRQRP EQGLDWIGRIDPENGDTLYD PKFQDKATLT TDTSSNTAYL 101 QLSGLTSETT AVYYCSREAD YFHDGTSYWY FDVWGAGTTITVSSAKTTPP 151 SVYPLAPGSA AQTNSMVTLG CLVKGYFPEP VTVTWNSGSL SSGVHTFPAV 201 LQSDLYTLSS SVTVPSSTWP SETVTCNVAH PASSTKVDKKIVPRDCGCKP 251 CICTVPEVSS VFIFPPKPKD VLTITLTPKV TCVWDISKD DPEVQFSWFV 301 DDVEVHTAQT QPREEQFNST FRSVSELPIM HQDWLNGKEF KCRVNSAAFP 351APIEÍOISKT KGRPKAPQVY TIPPPKEQMA KDKVSLTCMITDFFPEDITV 401EWQWNGQPAE NYKNTQPIMD TDGSYFIYSK LNVQKSNWEA GNTFTCSVLH 451EGLHNHHTEK SLSHSPGK (SEQ ID NO: 131) 54 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de ácido nucleico da HC de Ab-3 incluindo a sequência codificando o péptido sinal: 1 ATGAAATGCA GCTGGGTCAT CTTCITCCTG ATGGCAGTGG TTACAGGGGT 51 CAATTCAGAG GTTCAGCTGC AGCAGTCTGG GGCTGAACTT GTGAGGCCAG 101 GGGCCTTAGT CAAGTTGTCC TGCACAGCTT CTGACTTCAA CATTAAAGAC 151 TTCTATCTAC ACTGGATGAG GCAGCGGCCT GAACAGGGCC TGGACTGGAT 201TGGAAGGATT GATCCTGAGA ATGGTGATAC TTTATATGAC CCGAAGTTCC 251 AGGACAAGGC CACTCTTACA ACAGACACAT CCTCCAACAC AGCCTACCTG 301 CAGCTCAGCG GCCTGACATC TGAGACCACT GCCGTCTATT ACTGTTCTAG 351AGAGGCGGAT TATTTCCACG ATGGTACCTC CTACTGGTAC TTCGATGTCT 401 GGGGCGCAGG GACCACAATC ACCGTCTCCT CAGCCAAAAC GACACCCCCA 451 TCTGTCTATC CACTGGCCCC TGGATCTGCT GCCCAAACTA ACTCCATGGT 501 GACCCTGGGA TGCCTGGTCA AGGGCTATTT CCCTGAGCCA GTGACAGTGA 551 CCTGGAACTC TGGATCCCTG TCCAGCGGTG TGCACACCTT CCCAGCTGTC 601 CTGCAGTCTG ACCTCTACAC TCTGAGCAGC TCAGTGACTG TCCCCTCCAG 651 CACCTGGCCC AGCGAGACCG TCACCTGCAA CGTTGCCCAC CCGGCCAGCA 701 GCACCAAGGT GGACAAGAAA ATTGTGCCCA GGGATTGTGG TTGTAAGCCT 751 TGCATATGTA CAGTCCCAGA AGTATCATCT GTCTTCATCT TCCCCCCAAA 801 GCCCAAGGAT GTGCTCACCA TTACTCTGAC TCCTAAGGTC ACGTGTGTTG 851 TGGTAGACAT CAGCAAGGAT GATCCCGAGG TCCAGTTCAG CTGGTTTGTA 901 GATGATGTGG AGGTGCACAC AGCTCAGACG CAACCCCGGG AGGAGCAGTT 951 CAACAGCACT TTCCGCTCAG TCAGTGAACT TCCCATCATG CACCAGGACT 1001 GGCTCAATGGCAAGGAGTTC AAATGCAGGG TCAACAGTGC AGCTTTCCCT 1051 GCCCCCATCG AGAAAACCAT CTCCAAAACC AAAGGCAGAC CGAAGGCTCC 1101ACAGGTGTAC ACCATTCCAC CTCCCAAGGA GCAGATGGCC AAGGATAAAG 1151 TCAGTCTGAC CTGCATGATA ACAGACTTCT TCCCTGAAGA CATTACTGTG 1201 GAGTGGCAGT GGAATGGGCA GCCAGCGGAG AACTACAAGA ACACTCAGCC 1251 CATCATGGAC ACAGATGGCT CTTACTTCAT CTACAGCAAG CTCAATGTGC 1301AGAAGAGCAA CTGGGAGGCA GGAAATACTT TCACCTGCTC TGTGTTACAT 1351 GAGGGCCTGC ACAACCACCA TACTGAGAAG AGCCTCTCCC ACTCTCCTGG 1401 TAAATGA (SEQID NO:132)
Ab-4
As sequências da LC e HC do Anticorpo 4 (também aqui referido como Ab-4) são como se segue:
Cadeia Leve de Ab-4:
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-4: 1 DIQMTQITSS LSASLGDRVSISCRASQDIS NYLNWQQKP DGTFKLLIFYj 51 íTSRLLSGVPS RFSGSGSGTD YSLTÍYNLÉQ EDFATYFCQQ GDTLPYfFGG 101 GTKLEIKA1D AAPTVSIFPP SSEQL TSGGA SVVCFLh^FYPKDim^KWKI 151DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTL T L TKDEYERHN SYTCEÂ THKT 201STSPIVKSFNRNEC (SEQ ID NO: 133) 55 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ A sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-4: 1 GATATCCAGA TGACACAGAT TACATCCTCC CTGTCTGCCT CTCTGGGAGA 51 CAGGGTCTCC ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA AGACATTAGC AATTATTTAA 101 ACTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTT TTAAACTCCT TATCTTCTAC 151 ACATCAAGAT TACTCTCAGG AGTCCCATCA AGGTTCAGTG GCAGTGGGTC 201 TGGAACAGAT TATTCTCTCA CCATTTACAA CCTGGAGCAA GAAGATTTTG 251 CCACTTACTT TTGCCAACAG GGAGATACGC TTCCGTACAC TTTCGGAGGG 301 GGGACCAAGC TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA CTGTATCCAT 351 CTTCCCACCA TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC TCAGTCGTGT 401 GCTTCTTGAA CAACTTCTAC CCCAAAGACA TCAATGTCAA GTGGAAGATT 451 GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA CTGATGAGGA 501 CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG TTGACCAAGG 551ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC TCACAAGACA 601 TCAACTTCAC CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT GTTAG (SEQID NO: 134)
Sequência de aminoácidos da LC de Ab-4 incluindo o péptido sinal: 1 MMSSAQFLGL LLLCFQGTRC DIQMTQITSS LSASLGDRVSISCRASQDIS 51 NYLNWYQQKP DGTFKLLIFY TSRLLSGVPS RFSGSGSGTD YSLUYNLEQ 101 EDFATYFCQQ GDTLPYTFGG GTKLEDCRAD AAPTVSIFPP SSEQLTSGGA 151 SWCFLNNFY PKDINVKWKIDGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT 201 LTKDEYERHN SYTCEATHKT STSPIVKSFN RNEC (SEQ ID NO:135)
Sequência de ácido nucleico da LC de Ab-4 incluindo a sequência codificando o péptido sinal: 1ATGATGTCCT CTGCTCAGTT CCTTGGTCTC CTGTTGCTCT GTTTTCAAGG 51TACCAGATGT GATATCCAGA TGACACAGAT TACATCCTCC CTGTCTGCCT 101 CTCTGGGAGA'CAGGGTCTCC ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA AGACATTAGC 151 AATTATTTAA ACTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTT TTAAACTCCT 201 TATCTTCTAC ACATCAAGAT TACTCTCAGG AGTCCCATCA AGGTTCAGTG 251 GCAGTGGGTC TGGAACAGAT TATTCTCTCA CCATTTACAA CCTGGAGCAA 301 GAAGATTTTG CCACTTACTT TTGCCAACAG GGAGATACGC TTCCGTACAC 351 TTTCGGAGGG GGGACCAAGC TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA 401 CTGTATCCAT CTTCCCACCA TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC 451 TCAGTCGTGT GCTTCTTGAA CAACTTCTAC CCCAAAGACA TCAATGTCAA 501 GTGGAAGATT GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA 551 CTGATCAGGA CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG 601 TTGACCAAGG ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC 651 TCACAAGACA TCAACTTCAC CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT 701 GTTAG (SEQ ID NO: 136) 56 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Cadeia Pesada de Ab-4:
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-4: 1 EVQLQQSGPE LMKPGASVKM SCKASGYTFT DYNMHWVKQN QGKTLEWIGE 51INPNSGGAGY NQKFKGKATL TVDKSSTTAY MELRSLTSED SAVYYCARLG 101 YDDnçèDWYF DVWGAGTTVT VSSAKTTPPS VYPLAPGSAA QTNSMVTLGC 151LVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVL QSDIYTLSSS VTVPSSTWPS 201ETVTCNVAHP ASSTKVDKK1VPRDCGCKPCICTVPEVSSV FIFPPEPKDV 251LT1TLTPKVT CWVDISKDD PEVQFSWFVD DVEVHTAQTQ PREEQFNSTF 301RSVSELP1MH QDWLNGKEFK CRVNSAAFPA PIEKTISETK GRPKAPQVYT 351IPPPKEQMAK DKVSLTCMITDFFPEDITVE WQWNGOPAEN YKNTQPIMDT 401DGSYFIYSKL NVQKSNWEAG NTFTCSVLHE GLHNHHTEKSLSHSPGK (SEQID NO:137)
Sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-4: 1 GAGGTCCAAC TGCAACAGTC TGGACCTGAA CTAATGAAGC CTGGGGCTTC 51 AGTGAAGATG TCCTGCAAGG CTTCTGGÀTA TACATTCACT GACTACAACA 101 TGCACTGGGT GAAGCAGAAC CAAGGAAAGA CCCTAGAGTG GATAGGAGAA 151 ATTAATCCTA ACAGTGGTGG TGCTGGCTAC AACCAGAAGT TCAAGGGCAA 201 GGCCACATTG ACTGTAGACA AGTCCTCCAC CACAGCCTAC ATGGAGCTCC 251 GCAGCCTGAC ATCTGAGGAC TCTGCAGTCT ATTACTGTGC AAGATTGGGC 301 TACGATGATA TCTACGACGA CTGGTACTTC GATGTCTGGG GCGCAGGGAC 351 CACGGTCACC GTCTCCTCAG CCAAAACGAC ACCCCCATCT GTCTATCCAC 401TGGCCCCTGG ATCTGCTGCC CAAACTAACT CCATGGTGAC CCTGGGATGC 451 CTGGTCAAGG GCTATTTCCC TGAGCCAGTG ACAGTGACCT GGAACTCTGG 501ATCCCTGTCC AGCGGTGTGC ACACCTTCCC AGCTGTCCTG CAGTCTGACC 551 TCTACACTCT GAGCAGCTCA GTGACTGTCC CCTCCAGCAC CTGGCCCAGC 601 GAGACCGTCA CCTGCAACGT TGCCCACCCG GCCAGCAGCA CCAAGGTGGA 651 CAAGAAAATT GTGCCCAGGG ATTGTGGTTG TAAGCCTTGC ATATGTACAG 701 TCCCAGAAGT ATCATCTGTC TTCATCTTCC CCCCAAAGCC CAAGGATGTG 751 CTCACCATTA CTCTGACTCC TAAGGTCACG TGTGTTGTGG TAGACATCAG 801 CAAGGATGAT CCCGAGGTCC AGTTCAGCTG GTTTGTAGAT GATGTGGAGG 851TGCACACAGC TCAGACGCAA CCCCGGGAGG AGCAGTTCAA CAGCACTTTC 901 CGCTCAGTCA GTGAACTTCC CATCATGCAC CAGGACTGGC TCAATGGCAA 951 GGAGTTCAAA TGCAGGGTCA ACAGTGCAGC TTTCCCTGCC CCCATCGAGA 1001AAACCATCTC CAAAACCAAA GGCAGACCGA AGGCTCCACA GGTGTACACC 1051 ATTCCACCTC CCAAGGAGCA GATGGCCAAG GATAAAGTCA GTCTGACCTG 1101 CATGATAACA GACTTCTTCC CTGAAGACAT TACTGTGGAG TGGCAGTGGA 1151 ATGGGCAGCC AGCGGAGAAC TACAAGAACA CTCAGCCCAT CATGGACACA 1201 GATGGCTCTT ACTTCATCTA CAGCAAGCTC AATGTGCAGA AGAGCAACTG 1251 GGAGGCAGGA AATACTTTCA CCTGCTCTGT GTTACATGAG GGCCTGCACA 1301 ACCACCATAC TGAGAAGAGC CTCTCCCACT CTCCTGGTAA ATGA (SEQ Π) NO: 138) 57 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de aminoácidos da HC de Ab-4 incluindo o péptido sinal: 1MGWSWTFLFL LSGTAGVLSE VQLQQSGPEL MKPGASVKMS CKASGYTFTD 51 YNMHWVKQNQ GKTLEWIGEINPNSGGAGYN QKFKGKATLT VDKSSTTAYM 101 ELRSLTSEDS AVYYCARLGY DDIYDDWYFD VWGAGTTVTV SSAKTTPPSV 151 YPLAPGSAAQ TNSMVTLGCL VKGYFPEPVT VTWNSGSLSS GVHTFPAVLQ 201 SDLYTLSSSV TVPSSTWPSE TVTCNVAHPA SSTKVDKKIV PRDCGCKPCI 251 CTVPEVSSVFIFPPKPKDVL TITLTPKVTC VWDISKDDP EVQFSWFVDD 301 VEVHTAQTQP REEQFNSTFR SVSELPIMHQ DWLNGKEFKC RVNSAAFPAP 351 IEKTISKTKG RPKAPQVYTI PPPKEQMAKD KVSLTCMITD FFPEDITVEW 401 QWNGQPAENY KNTQPIMDTD GSYFIYSKLN VQKSNWEAGN TFTCSVLHEG 451 LHNHHTEKSL SHSPGK (SEQID NO: 139)
Sequência de ácido nucleico da HC de Ab-4 incluindo a sequência codificando o péptido sinal: 1 ATGGGATGGA GCTGGACCTT TCTCTTCCTC CTGTCAGGAA CTGCAGGTGT 51 CCTCTCTGAG GTCCAACTGC AACAGTCTGG ACCTGAACTA ATGAAGCCTG 101 GGGCTTCAGT GAAGATGTCC TGCAAGGCTT CTGGATATAC ATTCACTGAC 151 TACAACATGC ACTGGGTGAA GCAGAACCAA GGAAAGACCC TAGAGTGGAT 201 AGGAGAAATT AATCCTAACA GTGGTGGTGC TGGCTACAAC CAGAAGTTCA 251 AGGGCAAGGC CACATTGACT GTAGACAAGT CCTCCACCAC AGCCTACATG 301 GAGCTCCGCA GCCTGACATC TGAGGACTCT GCAGTCTATT ACTGTGCAAG 351 ATTGGGCTAC GATGATATCT ACGACGACTG GTACTTCGAT GTCTGGGGCG 401 CAGGGACCAC GGTCACCGTC TCCTCAGCCA AAACGACACC CCCATCTGTC 451 TATCCACTGG CCCCTGGATC TGCTGCCCAA ACTAACTCCA TGGTGACCCT 501 GGGATGCCTG GTCAAGGGCT ATTTCCCTGA GCCAGTGACA GTGACCTGGA 551 ACTCTGGATC CCTGTCCAGC GGTGTGCACA CCTTCCCAGC TGTCCTGCAG 601 TCTGACCTCT ACACTCTGAG CAGCTCAGTG ACTGTCCCCT CCAGCACCTG 651 GCCCAGCGAG ACCGTCACCT GCAACGTTGC CCACCCGGCC AGCAGCACCA 701 AGGTGGACAA GAAAATTGTG CCCAGGGATT GTGGTTGTAA GCCTTGCATA 751 TGTACAGTCC CAGAAGTATC ATCTGTCTTC ATCTTCCCCC CAAAGCCCAA 801 GGATGTGCTC ACCATTACTC TGACTCCTAA GGTCACGTGT GTTGTGGTAG 851ACATCAGCAA GGATGATCCC GAGGTCCAGT TCAGCTGGTT TGTAGATGAT 901 GTGGAGGTGC ACACAGCTCA GACGCAACCC CGGGAGGAGC AGTTCAACAG 951 CACTTTCCGC TCAGTCAGTG AACTTCCCAT CATGCACCAG GACTGGCTCA 1001 ATGGCAAGGA GTTCAAATGC AGGGTCAACA GTGCAGCTTT CCCTGCCCCC 1051ATCGAGAAAA CCATCTCCAA AACCAAAGGC AGACCGAAGG CTCCACAGGT 1101 GTACACCATT CCACCTCCCA AGGAGCAGAT GGCCAAGGAT AAAGTCAGTC 1151 TGACCTGCAT GATAACAGAC TTCTTCCCTG AAGACATTAC TGTGGAGTGG 1201 CAGTGGAATG GGCAGCCAGC GGAGAACTAC AAGAACACTC AGCCCATCAT 1251 GGACACAGAT GGCTCTTACT TCATCTACAG CAAGCTCAAT GTGCAGAAGA 1301GCAACTGGGA GGCAGGAAAT ACTTTCACCT GCTCTGTGTT ACATGAGGGC 1351CTGCACAACC ACCATACTGA GAAGAGCCTC TCCCACTCTC CTGGTAAATG 1401 A (SEQ Π) NO: 140) 58 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Ab-4 foi humanizado para gerar Ab-5.
Ab-5
As sequências de LC e HC do Anticorpo 5 (também aqui referido como Ab-5) são como se segue:
Cadeia Leve de Ab-5:
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-5: 1 DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQDIS NYLNWYQQKP GKAPKLLIYY 51 TSRLLSGVPS RFSGSGSGTD FTLTtSSLQP ÈDFATYYCQQ GDTLPYTFGG 101 GTYMEÍKRTVAAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SWCLLNNFYPREAKVQWKV IS1DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLTLSKÁDYEKHK VYACEVTHQG 201LSSPVTKSFNRGEC (SEQID NO: 141)
Sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-5: 1 GACATCCAGA TGACCCAGTC TCCATCCTCC CTCTCCGCAT CCGTAGGCGA 51 CCGCGTAACC ATAACATGTA GAGCATCTCA AGATATTTCC AACTATTTGA 101 ATTGGTACCA ACAAAAACCC GGCAAAGCAC CTAAACTCCT CATTTACTÀT 151 ACATCAAGAC TCCTCTCCGG CGTTCCATCA CGATTCTCAG GCTCCGGCTC 201 CGGCACAGAT TTCACACTCA CTATTTCCTC CCTCCAACCA GAAGATTTTG 251 CAACCTATTA CTGTCAACAA GGCGATACAC TCCCATACAC ATTCGGCGGC 301 GGCACAAAAG TTGAAATTAA ACGTACGGTG GCTGCACCAT CTGTCTTCAT 351 CTTCCCGCCA TCTGATGAGC AGTTGAAATC TGGAACTGCC TCTGTTGTGT 401 GCCTGCTGAA TAACTTCTAT CCCAGAGAGG CCAAAGTACA GTGGAAGGTG 451 GATAACGCCC TCCAATCGGG TAACTCCCAG GAGAGTGTCA CAGAGCAGGA 501 CAGCAAGGAC AGCACCTACA GCCTCAGCAG CACCCTGACG CTGAGCAAAG 551 CAGACTACGA GAAACACAAA GTCTACGCCT GCGAAGTCAC CCATCAGGGC 601 CTGAGCTCGC CCGTCACAAA GAGCTTCAAC AGGGGAGAGT GT (SEQ ID NO: 142)
Sequência de aminoácidos da LC de Ab-5 incluindo o péptido sinal: I MDMRVPAQLL GLLLLWLRGA RCDIQMTQSP SSLSASVGDR VTITCRASQD 51ISNYLNWYQQ KPGKAPKLU YYTSRLLSGV PSRFSGSGSG TDFTLTISSL 101 QPEDFATYYC QQGDTLPYTF GGGTKVEIKR TVAAPSVFIF PPSDEQLKSG 151 TASWCLLNN FYPREAKVQW KVDNALQSGN SQESVTEQDS KDSTYSLSST 201 LTLSKADYEK HKVYACEVTH QGLSSPVTKS FNRGEC (SEQ Π) NO: 143) 59 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de ácido nucleico da LC de Ab-5 incluindo a sequência codificando o péptido sinal: 1ATGGACATGA GGGTCCCCGC TCAGCTCCTG GGGCTCCTGC TACTCTGGCT 51 CCGAGGTGCC AGATGTGACA TCCAGATGAC CCAGTCTCCA TCCTCCCTCT 101 CCGCATCCGT AGGCGACCGC GTAACCATAA CATGTAGAGC ATCTCAAGAT 151ATTTCCAACT ATTTGAATTG GTACCAACAA AAACCCGGCA AAGCACCTAA 201ACTCCTCATT TACTATACAT CAAGACTCCT CTCCGGCGTT CCATCACGAT 251 TCTCAGGCTC CGGCTCCGGC ACAGATTTCA CACTCACTAT TTCCTCCCTC 301 CAACCAGAAG ATTTTGCAAC CTATTACTGT CAACAAGGCG ATACACTCCC 351ATACACATTC GGCGGCGGCA CAAAAGTTGA AATTAAACGT ACGGTGGCTG 401 CACCATCTGT CTTCATCTTC CCGCCATCTG ATGAGCAGTT GAAATCTGGA 451ACTGCCTCTG TTGTGTGCCT GCTGAATAAC TTCTATCCCA GAGAGGCCAA 501 AGTACAGTGG AAGGTGGATA ACGCCCTCCA ATCGGGTAAC TCCCAGGAGA 551 GTGTCACAGA GCAGGACAGC AAGGACAGCA CCTACAGCCT CAGCAGCACC 601 CTGACGCTGA GCAAAGCAGA CTACGAGAAA CACAAAGTCT ACGCCTGCGA 651 AGTCACCCAT CAGGGCCTGA GCTCGCCCGT CACAAAGAGC TTCAACAGGG 701 GAGAGTGT (SEQID NO:144)
Cadeia Pesada de Ab-5:
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-5: 1 EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT DYNMHWVRQA PGQGLEWMGE 51ÍNENSGGAGY NQKFKGRVTM TTDTSTSTAY MELRSLRSDD TAVYYCAJRLG ' 101 YDDIYDD WYF DVWGQGTTVT VSSASTKGPS VFPLAPCSRS TSESTAALGC 151L VKDYFPÉPVTVSWNSGALT SGVHTFPA VL QSSGLYSLSS WTVPSSNFG 201 TQTYTCNVDH KPSNTKVDKT VERKCCVECP PCPAPPVAGP SVFLFPPKPK 251DTLMISRTPE VTCVWDVSHEDPEVQFNWY fDGVEVHNAK TKPREEQFNS 301 TFRWSVLTV VHQDWLNGKE YKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQV 351 YTLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPENNYKTTPPML 401DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGK (SEQ Π) NO: 145)
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-5 sem a lisina carboxi-terminal: 1 EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT DYNMHWVRQA PGQGLEWMGE 51 n^NSGGAG^NQPKGRVTM TTDTSTSTAY MELRSLRSDD TAVYYCARLG· 101 YDDIYDDWlÍ)ViWGQGriVT VSSASTKGPS VFPLAPCSRS TSESTAALGC 151LVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL QSSGLYSLSS WTVPSSNFG 201TQTYTCNIDHKPSNTKVDKT VERKCCVECP PCPAPPVAGP SVFLFPPKPK 251 DTLMISRTPE VTCVWD VSH EDPEVQFNWY VDGVEWNAK TKPREEQFNS 301 TFRWSVLTV VHQDWLNGKE YKCKVSNKGL PAPIEKTISK TKGQPREPQV 351 YTLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPML 401 DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPG (SEQ IDNO:392) 60 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-5: 1 GAGGTGCAGC TGGTGCAGAG CGGCGCCGAG GTAAAAAAAC CAGGAGCAAG 51 CGTTAAAGTT TCTTGTAAAG CAAGCGGATA TACATTTACA GATTACAACA 101TGCATTGGGT AAGACAAGCG CCAGGACAAG GATTGGAATG GATGGGCGAA 151 ATTAACCCTA ATAGTGGAGG AGCAGGCTAC AATCAAAAAT TCAAAGGGAG 201 AGTTACAATG ACAACAGACA CAAGCACTTC AACAGCATAT ATGGAACTGC 251 GATCACTTAG AAGCGACGAT ACAGCTGTAT ACTATTGCGC ACGACTTGGG 301 TATGATGATA TATATGATGA CTGGTATTTC GATGTTTGGG GCCAGGGAAC 351 AACAGTTACC GTCTCTAGTG CCTCCACCAA GGGCCCATCG GTCTTCCCCC 401 TGGCGCCCTG CTCCAGGAGC ACCTCCGAGA GCACAGCGGC CCTGGGCTGC 451 CTGGTCAAGG ACTACTTCCC CGAACCGGTG ACGGTGTCGT GGAACTCAGG 501 CGCTCTGACC AGCGGCGTGC ACACCTTCCC AGCTGTCCTA CAGTCCTCAG 551 GACTCTACTC CCTCAGCAGC GTGGTGACCG TGCCCTCCAG CAACTTCGGC 601 ACCCAGACCT ACACCTGCAA CGTAGATCAC AAGCCCAGCA ACACCAAGGT 651 GGACAAGACA GTTGAGCGCA AATGTTGTGT CGAGTGCCCA CCGTGCCCAG 701 CACCACCTGT GGCAGGACCG TCAGTCTTCC TCTTCCCCCC AAAACCCAAG 751 GACACCCTCA TGATCTCCCG GACCCCTGAG GTCACGTGCG TGGTGGTGGA 801 CGTGAGCCAC GAAGACCCCG AGGTCÇAGTT CAACTGGTAC GTGGACGGCG 851 TGGAGGTGCA TAATGCCAAG ACAAAGCCAC GGGAGGAGCA GTTCAACAGC 901 ACGTTCCGTG TGGTCAGCGT CCTCACCGTT GTGCACCAGG ACTGGCTGAA 951 CGGCAAGGAG TACAAGTGCA AGGTCTCCAA CAAAGGCCTC CCAGCCCCCA 1001 TCGAGAAAAC CATCTCCAAA ACCAAAGGGC AGCCCCGAGA ACCACAGGTG 1051 TACACCCTGC CCCCATCCCG GGAGGAGATG ACCAAGAACC AGGTCAGCCT 1101 GACCTGCCTG GTCAAAGGCT TCTACCCCAG CGACATCGCC GTGGAGTGGG 1151 AGAGCAATGG GCAGCCGGAG AACAACTACA AGACCACACC TCCCATGCTG 1201 GACTCCGACG GCTCCTTCTT CCTCTACAGC AAGCTCACCG TGGACAAGAG 1251 CAGGTGGCAG CAGGGGAACG TCTTCTCATG CTCCGTGATG CATGAGGCTC 1301 TGCACAACCA CTACACGCAG AAGAGCCTCT CCCTGTCTCC GGGTAAA (SEQ IDNO:146)
Sequência de aminoácidos da HC de Ab-5 incluindo o péptido sinal: 1 MDWTWRILFL VAAATGAHSE VQLVQSGAEV KKPGASVKVS CKASGYTFTD 51 YNMHWVRQAP GQGLEWMGEINPNSGGAGYN QKFKGRVTMT TDTSTSTAYM 101 ELRSLRSDDT AVYYCARLGY DDIYDDWYFD VWGQGTTVTV SSASTKGPSV 151 FPLAPCSRST SESTAALGCL VKDYFPEPVT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ 201 SSGLYSLSSV VTVPSSNFGT QTYTCNVDHK PSNTKVDKTV ERKCCVECPP 251 CPAPPVAGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVWDVSHE DPEVQFNWYV 301 DGVEVHNAKT KPREEQFNST FRWSVLTW HQDWLNGKEY KCKVSNKGLP 351 APIEKTISKT KGQPREPQVY TLPPSREEMT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV 401EWESNGQPEN NYKTTPPMLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH 451 EALHNHYTQK SLSLSPGK (SEQ ID NO: 147) 61 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de ácido nucleico da HC de Ab-5 incluindo a sequência codificando o péptido sinal: 1ATGGACTGGA CCTGGAGGAT CCTCTTCTTG GTGGCAGCAG CCACAGGAGC 51 CCACTCCGAG GTGCAGCTGG TGCAGAGCGG CGCCGAGGTA AAAAAACCAG 101 GAGCAAGCGT TAAAGTTTCT TGTAAAGCAA GCGGATATAC ATTTACAGAT 151 TACAACATGC ATTGGGTAAG ACAAGCGCCA GGACAAGGAT TGGAATGGAT 201 GGGCGAAATT AACCCTAATA GTGGAGGAGC AGGCTACAAT CAAAAATTCA 251AAGGGAGAGT TACAATGACA ACAGACACAA GCACTTCAAC AGCATATATG 301 GAACTGCGAT CACTTAGAAG CGACGATACA GCTGTATAÇT ATTGCGCACG 351ACTTGGGTAT GATGATATAT ATGATGACTG GTATTTCGAT GTTTGGGGCC 401 AGGGAACAAC AGTTACCGTC TCTAGTGCCT CCACCAAGGG CCCATCGGTC 451 TTCCCCCTGG CGCCCTGCTC CAGGAGCACC TCCGAGAGCA CAGCGGCCCT 501 GGGCTGCCTG GTCAAGGACT ACTTCCCCGA ACCGGTGACG GTGTCGTGGA 551ACTCAGGCGC TCTGACCAGC GGCGTGCACA CCITCCCAGC TGTCCTACAG 601 TCCTCAGGAC TCTACTCCCT CAGCAGCGTG GTGACCGTGC CCTCCAGCAA 651CTTCGGCACC CAGACCTACA CCTGCAACGT AGATCACAAG CCCAGCAACA 701 CCAAGGTGGA CAAGACAGTT GAGCGCAAAT GITGTGTCGA GTGCCCACCG 751 TGCCCAGCAC CACCTGTGGC AGGACCGTCA GTCTTCCTCT TCCCCCCAAA 801ACCCAAGGAC ACCCTCATGA TCTCCCGGAC CCCTGAGGTC ACGTGCGTGG 851TGGTGGACGT GAGCCACGAA GACCCCGAGG TCCAGTTCAA CTGGTACGTG 901 GACGGCGTGG AGGTGCATAA TGCCAAGACA AAGCCACGGG AGGAGCAGTT 951 CAACAGCACG TTCCGTGTGG TCAGCGTCCT CACCGTTGTG CACCAGGACT 1001 GGCTGAACGG CAAGGAGTAC AAGTGCAAGG TCTCCAACAA AGGCCTCCCA 1051 GCCCCCATCG AGAAAACCAT CTCCAAAACC AAAGGGCAGC CCCGAGAACC 1101 ACAGGTGTAC ACCCTGCCCC CATCCCGGGA GGAGATGACC AAGAACCAGG 1151 TCAGCCTGAC CTGCCTGGTC AAAGGCTTCT ACCCCAGCGA CATCGCCGTG 1201 GAGTGGGAGA GCAATGGGCA GCCGGAGAAC AACTACAAGA CCACACCTCC 1251 CATGCTGGAC TCCGACGGCT CCTTCTTCCT CTACAGCAAG CTCACCGTGG 1301 ACAAGAGCAG GTGGCAGCAG GGGAACGTCT TCTCATGCTC CGTGATGCAT 1351 GAGGCTCTGC ACAACCACTA CACGCAGAAG AGCCTCTCCC TGTCTCCGGG 1401 TAAA (SEQID NO:148)
Domínios variáveis de Ab-5:
Sequência de aminoácidos do domínio variável da cadeia leve de Ab-5 (sem o péptido sinal): 1 DIQMTQSPSS LSASVGDRVTITCRASQDÍS NYLNWYQQKP GKAPKLLIYY 51TSRLLSGVPS RFSGSGSGTD FTLTÍSSLQP ÊDFATYYCQQ GDTLPYTFGG ' 101 GTKVEIK (SEQ ID NO:376) 62 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de ADN do dominio variável da cadeia leve de Ab-5 (sem a sequência sinal): 1 GACATCCAGA TGACCCAGTC TCCATCCTCC CTCTCCGCAT CCGTAGGCGA 51 CCGCGTAACC ATAACATGTA GAGCATCTCA AGATATTTCC AACTATTTGA 101 ATTGGTACCA ACAAAAACCC GGCAAAGCAC CTAAACTCCT CATTTACTAT 151 ACATCAAGAC TCCTCTCCGG CGTTCCATCA CGATTCTCAG GCTCCGGCTC 201 CGGCACAGAT TTCACACTCA CTATTTCCTC CCTCCAACCA GAAGATTTTG 251 CAACCTATTA CTGTCAACAA GGCGATACAC TCCCATACAC ATTCGGCGGC 301 GGCACAAAAG TTGAAATTAA A (SEQID NO:377)
Sequência de aminoácidos do dominio variável da cadeia pesada de Ab-5 (sem o péptido sinal): 1 EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT DYNMHWVRQA PGQGLEWMGE 51ΪΝΡΝ SGGAGY NQKFKLGRVTM TTDTSTSTAY MELRSLRSDD TAVYYCARÍãS 101 lYDDIYDDWMDVWGQGTTVT VSS (SEQ ID NO:378) '
Sequência de ADN do dominio variável da cadeia pesada de Ab-5 (sem a sequência sinal): 1 GAGGTGCAGC TGGTGCAGAG CGGCGCCGAG GTAAAAAAAC CAGGAGCAAG 51 CGTTAAAGTT TCTTGTAAAG CAAGCGGATA TACATTTACA GATTACAACA 101 TGCATTGGGT AAGACAAGCG CCAGGACAAG GATTGGAATG GATGGGCGAA 151 ATTAACCCTA ATAGTGGAGG AGCAGGCTAC AATCAAAAAT TCAAAGGGAG 201 AGTTACAATG ACAACAGACA CAAGCACTTC AACAGCATAT ATGGAACTGC 251 GATCACTTAG AAGCGACGAT ACAGCTGTAT ACTATTGCGC ACGACTTGGG 301 TATGATGATA TATATGATGA CTGGTATTTC GATGTTTGGG GCCAGGGAAC 351 AACAGTTACC GTCTCTAGT (SEQ ID NO:379)
As sequências de CDR (região determinante de complementaridade) na região variável da cadeia pesada de Ab-5 são como se segue: CDR-H1: DYNMH (SEQ ID NO:245) CDR-H2: EINPNSGGAGYNQKFKG (SEQ ID NO:246) CDR-H3: LGYDDIYDDWYFDV (SEQ ID NO:247)
As sequências de CDR da região variável da cadeia leve de Ab-5 são: CDR-L1: RASQDISNYLN (SEQ ID NO:78) CDR-L2: YTSRLLS (SEQ ID NO:79) CDR-L3: QQGDTLPYT (SEQ ID NO:80) 63 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Ab-β
As sequências da LC e HC do Anticorpo 6 (também aqui referido como Ab-6) são como se segue:
Cadeia Leve de Ab-6:
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-6: 51ÍTSRLHSGVPS RFSGSGSGTD YSLTISNLÉQ EDÍATYFQQQGDTLPYTFGG 101GTKLÉÍR&4Z) AAPTVSIFPP SSEQLTSGGA Sl^VCFLNNFYPKDINVKWKI 151DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTL T L TKDEYERHN SYTCEA THKT 201STSPIVKSFN RNEC (SEQID NO: 149)
Sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-6: 1 GATATCCAGA TGACACAGAC TACATCCTCC CTGTCTGCCT CTCTGGGAGA 51 CAGAGTCACC ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA GGACATTAGC AATTATTTAA 101 ACTGGTTTCA GCAGAAACCA GATGGAACTC TTAAACTCCT GATCTTCTAC 151 ACATCAAGAT TACACTCAGG AGTTCCATCA AGGTTCAGTG GCAGTGGGTC 201 TGGAACAGAT TATTCTCTCA CCATTAGCAA CCTGGAGCAA GAAGATATTG 251 CCACTTACTT TTGCCAACAG GGTGATACGC TTCCGTACAC GTTCGGGGGG 301 GGGACCAAGC TGGAAATAAG ACGGGCTGAT GCTGCACCAA CTGTATCCAT 35] CTTCCCACCA TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC TCAGTCGTGT 401 GCTTCTTGAA CAACTTCTAC CCCAAAGACA TCAATGTCAA GTGGAAGATT 451 GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA CTGATCAGGA 501 CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG TTGACCAAGG 551 ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC TCACAAGACA 601 TCAACTTCAC CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT GTTAG (SEQ ID NO: 150)
Sequência de aminoácidos da LC de Ab-6 incluindo o péptido sinal: 1 MMSSAQFLGL LLLCFQGTRC DIQMTQTTSS LSASLGDRVTISCRASQDIS 51 NYLNWFQQKP DGTLKLLIFY TSRLHSGVPS RFSGSGSGTD YSLTISNLÉQ 101 EDIATYFCQQ GDTLPYTFGG GTKLEIRRAD AAPTVSIFPP SSEQLTSGGA 151 SVVCFLNNFY PKDINVKWKI DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT 201 LTKDEYERHN SYTCEATHKT STSPIVKSFN RNEC (SEQ ID NO:151) 64 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de ácido nucleico da LC de Ab-β incluindo a sequência codificando o péptido sinal: 1 ATGATGTCCT CTGCTCAGTT CCTTGGTCTC CTGTTGCTCT GTTTTCAAGG 51 TACCAGATGT GATATCCAGA TGACACAGAC TACATCCTCC CTGTCTGCCT 101 CTCTGGGAGA CAGAGTCACC ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA GGACATTAGC 151 AATTATTTAA ACTGGTTTCA GCAGAAACCA GATGGAACTC TTAAACTCCT 201 GATCTTCTAC ACATCAAGAT TACACTCAGG AGTTCCATCA AGGTTCAGTG 251 GCAGTGGGTC TGGAACAGAT TATTCTCTCA CCATTAGCAA CCTGGAGCAA 301 GAAGATATTG CCACTTACTT TTGCCAACAG GGTGATACGC TTCCGTACAC 351 GTTCGGGGGG GGGACCAAGC TGGAAATAAG ACGGGCTGAT GCTGCACCAA 401 CTGTATCCAT CTTCCCACCA TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC 451 TCAGTCGTGT GCTTCTTGAA CAACTTCTAC CCCAAAGACA TCAATGTCAA 501 GTGGAAGATT GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA 551 CTGATCAGGA CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG 601 TTGACCAAGG ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC 651 TCACAAGACA TCAACTTCAC CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT 701 GTTAG (SEQ IDNO:152)
Cadeia Pesada de Ab-6:
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-6: 1 EVQLQQSGPE LMKPGASVKM SCKASGYTFT DYNWHWVKQN QGKSLEWIGE 51 INÈ^SGGSGY-NQKEI^KATL TVDKSSSTAY MELRSLTSED SAVYYCARLVi “ lOl ^GiSYEDWYF DYWGAGTTVT YSSAKTTPPS VYPLAPGSAA QTNSMVTLGC 151L VKGYFPEPV TVTWNSGSLS SGVHTFPA VL QSDLYTLSSS VTVPSSTWPS 201ETVTCNVAHP ASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSV FIFPPKPKDV 251LTITLTPKVT CVJ^VDISKDD PEVQFSWFVD D VEVHTAQTQ PREEQFNSTF 301RSVSELPÍMH QDWLNGKEFK CRVNSAAFPA PIEKTISKTK GRPKAPQVYT 351IPPPKEQMAKDKVSLTCMTTDFFPEDITVE WQWNGQPAEN YKNTQPÍMDT 401DGSYFIYSKL NVQKSNWEAG NTFTCSVLHE GLHNHHTEES LSHSPGK (SEQ ID NO: 153) 65 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-6: 1 GAGGTCCAGC TGCAACAGTC TGGACCTGAA CTAATGAAGC CTGGGGCTTC 51 AGTGAAGATG TCCTGCAAGG CTTCTGGATA CACATTCACT GACTACAACA 101 TGCACTGGGT GAAACAGAAC CAAGGAAAGA GCCTAGAGTG GATAGGAGAA 151 ATTAATCCTA ACAGTGGTGG TAGTGGCTAC AACCAAAAGT TCAAAGGCAA 201 GGCCACATTG ACTGTAGACA AGTCTTCCAG CACAGCCTAC ATGGAGCTCC 251 GCAGCCTGAC ATCTGAGGAC TCTGCAGTCT ATTACTGTGC AAGATTGGTC 301 TACGATGGCA GCTACGAGGA CTGGTACTTC GATGTCTGGG GCGCAGGGAC 351 CACGGTCACC GTCTCCTCAG CCAAAACGAC ACCCCCATCT GTCTATCCAC 401 TGGCCCCTGG ATCTGCTGCC CAAACTAACT CCATGGTGAC CCTGGGATGC 451 CTGGTCAAGG GCTATTTCCC TGAGCCAGTG ACAGTGACCT GGAACTCTGG 501 ATCCCTGTCC AGCGGTGTGC ACACCTTCCC AGCTGTCCTG CAGTCTGACC 551 TCTACACTCT GAGCAGCTCA GTGACTGTCC CCTCCAGCAC CTGGCCCAGC 601 GAGACCGTCA CCTGCAACGT TGCCCACCCG GCCAGCAGCA CCAAGGTGGA 651 CAAGAAAATT GTGCCCAGGG ATTGTGGTTG TAAGCCTTGC ATATGTACAG 701 TCCCAGAAGT ATCATCTGTC TTCATCTTCC CCCCAAAGCC CAAGGATGTG 751 CTCACCATTA CTCTGACTCC TAAGGTCACG TGTGTTGTGG TAGACATCAG 801 CAAGGATGAT CCCGAGGTCC AGTTCAGCTG GTTTGTAGAT GATGTGGAGG 851 TGCACACAGC TCAGACGCAA CCCCGGGAGG AGCAGTTCAA CAGCACTTTC 90 rCGCTCAGTCA GTGAACTTCC CATCATGCAC CAGGACTGGC TCAATGGCAA 951 GGAGTTCAAA TGCAGGGTCA ACAGTGCAGC TTTCCCTGCC CCCATCGAGA 1001 AAACCATCTC CAAAACCAAA GGCAGACCGA AGGCTCCACA GGTGTACACC 1051 ATTCCACCTC CCAAGGAGCA GATGGCCAAG GATAAAGTCA GTCTGACCTG 1101 CATGATAACA GACTTCTTCC CTGAAGACAT TACTGTGGAG TGGCAGTGGA 1151 ATGGGCAGCC AGCGGAGAAC TACAAGAACA CTCAGCCCAT CATGGACACA 1201 GATGGCTCTT ACTTCATCTA CAGCAAGCTC AATGTGCAGA AGAGCAACTG 1251 GGAGGCAGGA AATACTTTCA CCTGCTCTGT GTTACATGAG GGCCTGCACA 1301 ACCACCATAC TGAGAAGAGC CTCTCCCACT CTCCTGGTAA ATGA (SEQID NO: 154)
Sequência de aminoácidos da HC de Ab-β incluindo o péptido sinal: 1 MGWSWTFLFL LSGTAGVLSE VQLQQSGPEL MKPGASVKMS CKASGYTFTD 51 YNMHWVKQNQ GKSLEWIGEINPNSGGSGYN QKFKGKATLT VDKSSSTAYM 101 ELRSLTSEDS AVYYCARLVY DGSYEDWYFD VWGAGTTVTV SSAKTTPPSV 151 YPLAPGSAAQ TNSMVTLGCL VKGYFPEPVT VTWNSGSLSS GVHTFPAVLQ 201 SDLYTLSSSV TVPSSTWPSE TVTCNVAHPA SSTKVDKKIV PRDCGCKPCI 251 CTVPEVSSVFIFPPKPKDVL T1TLTPKVTC VWDISKDDP EVQFSWFVDD 301 VEVHTAQTQP REEQFNSTFR SVSELPIMHQ DWLNGKEFKC RVNSAAFPAP 351IEKTISKTKG RPKAPQVYTIPPPKEQMAKD KVSLTCMITD FFPEDITVEW 401 QWNGQPAENY KNTQPIMDTD GSYFIYSKLN VQKSNWEAGN TFTCSVLHEG 451 LHNHHTEKSL SHSPGK (SEQ ID NO: 155) 66 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de ácido nucleico da HC de Ab-6 incluindo a sequência codificando o péptido sinal: 1 ATGGGATGGA GCTGGACCTT TCTCTTCCTC CTGTCAGGAA CTGCAGGTGT 51 CCTCTCTGAG GTCCAGCTGC AACAGTCTGG ACCTGAACTA ATGAAGCCTG 101 GGGCTTCAGT GAAGATGTCC TGCAAGGCTT CTGGATACAC ATTCACTGAC 151 TACAACATGC ACTGGGTGAA ACAGAACCAA GGAAAGAGCC TAGAGTGGAT 201 AGGAGAAATT AATCCTAACA GTGGTGGTAG TGGCTACAAC CAAAAGTTCA 251 AAGGCAAGGC CACATTGACT GTAGACAAGT CTTCCAGCAC AGCCTACATG 301 GAGCTCCGCA GCCTGACATC TGAGGACTCT GCAGTCTATT ACTGTGCAAG 351 ATTGGTCTAC GATGGCAGCT ACGAGGACTG GTACTTCGAT GTCTGGGGCG 401 CAGGGACCAC GGTCACCGTC TCCTCAGCCA AAACGACACC CCCATCTGTC 451 TATCCACTGG CCCCTGGATC TGCTGCCCAA ACTAACTCCA TGGTGACCCT 501 GGGATGCCTG GTCAAGGGCT ATTTCCCTGA GCCAGTGACA GTGACCTGGA 551 ACTCTGGATC CCTGTCCAGC GGTGTGCACA CCTTCCCAGC TGTCCTGCAG 601 TCTGACCTCT ACACTCTGAG CAGCTCAGTG ACTGTCCCCT CCAGCACCTG 651 GCCCAGCGAG ACCGTCACCT GCAACGTTGC CCACCCGGCC AGCAGCACCA 701 AGGTGGACAA GAAAATTGTG CCCAGGGATT GTGGTTGTAA GCCTTGCATA 751 TGTACAGTCC CAGAAGTATC ATCTGTCTTC ATCTTCCCCC CAAAGCCCAA 801 GGATGTGCTC ACCATTACTC TGACTCCTAA GGTCACGTGT GTTGTGGTAG 851 ACATCAGCAA GGATGATCCC GAGGTCCAGT TCAGCTGGTT TGTAGATGAT 901 GTGGAGGTGC ACACAGCTCA GACGCAACCC CGGGAGGAGC AGTTCAACAG 951 CACTTTCCGC TCAGTCAGTG AACTTCCCAT CATGCACCAG GACTGGCTCA 1001 ATGGCAAGGA GTTCAAATGC AGGGTCAACA GTGCAGCTTT CCCTGCCCCC 1051 ATCGAGAAAA CCATCTCCAA AACCAAAGGC AGACCGAAGG CTCCACAGGT 1101 GTACACCATT CCACCTCCCA AGGAGCAGAT GGCCAAGGAT AAAGTCAGTC 1151 TGACCTGCAT GATAACAGAC TTCTTCCCTG AAGACATTAC TGTGGAGTGG 1201 CAGTGGAATG GGCAGCCAGC GGAGAACTAC AAGAACACTC AGCCCATCAT "1251 GGACAUAGÀTGGCTCTTACT TCATCTACAG CAAGCTCAAT GTGCAGAAGA 1301 GCAACTGGGA GGCAGGAAAT ACTTTCACCT GCTCTGTGTT ACATGAGGGC 1351 CTGCACAACC ACCATACTGA GAAGAGCCTC TCCCACTCTC CTGGTAAATG 1401 A (SEQID NO:156)
Ab-7
As sequências da LC e HC do Anticorpo 7 (também aqui referido como Ab-7) são como se segue:
Cadeia Leve de Ab-7:
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-7: 1 DIQMTQTTSS LSASLGDRVTICCRASQVIT NYLYWYQQKP DGTFKLLIYY 51 TSRLHSGVPS RFSGSGSGTD YSLTÍSNLEQ EDIATYFCjQÇj GDTLPYTFGG 101 GTKLEIKJMD AAPTVSIFPP SSEQL TSGGA S WCFLNNFY PKDIN\/TCWKI 151DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT LTKDEYERHN SYTCEATHKT 201STSPIVKSFN SNEC (SEQ ID NO: 157) 67 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-7: 1 GATATCCAGA TGACACAGAC TACATCCTCC CTGTCTGCCT CTCTGGGAGA 51 CAGAGTCACC ATCTGTTGCA GGGCAAGTCA GGTCATTACC AATTATTTAT 101 ACTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTT TTAAACTCCT GATCTACTAC 151 ACATCAAGAT TACACTCAGG AGTCCCATCA AGGTTCAGTG GCAGTGGGTC 201 TGGAACAGAT TATTCTCTCA CCATTAGCAA CCTGGAACAG GAAGATATTG 251 CCACTTACTT TTGCCAACAG GGTGATACGC TTCCGTACAC GTTCGGAGGG 301 GGGACCAAGC TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA CTGTATCCAT 351 CTTCCCACCA TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC TCAGTCGTGT 401 GCTTCTTGAA CAACTTCTAC CCCAAAGACA TCAATGTCAA GTGGAAGATT 451 GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA CTGATCAGGA 501 CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG TTGACCAAGG 551 ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC TCACAAGACA 601 TCAACTTCAC CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT GT (SEQID NO: 158)
Sequência de aminoácidos da LC de Ab-7 incluindo o péptido sinal: 1 MMSSAQFLGL LLLCFQGTRC DIQMTQTTSS LSASLGDRVTICCRASQVIT 51 NYLYWYQQKP DGTFKLLIYY TSRLHSGVPS RFSGSGSGTD YSLTISNLEQ 101 F.D1ATYFCQQ GDTLPYTFGG GTKLEIKRAD AAPTVSIFPP SSEQLTSGGA 151 SVVCFLNNFY PKDINVKWKIDGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT 201 LTKDEYERHN SYTCEATHKT STSPIVKSFN RNEC (SEQ ID NO: 159)
Sequência de ácido nucleico da LC de Ab-7 incluindo a sequência codificando o péptido sinal: 1 ATGATGTCCT CTGCTCAGTT CCTTGGTCTC CTGTTGCTCT GTTTTCAAGG 51 TACCAGATGT GATATCCAGA TGACACAGAC TACATCCTCC CTGTCTGCCT 101 CTCTGGGAGA CAGAGTCACC ATCTGTTGCA GGGCAAGTCA GGTCATTACC 151 AATTATTTAT ACTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTT TTAAACTCCT 201 GATCTACTAC ACATCAAGAT TACACTCAGG AGTCCCATCA AGGTTCAGTG 251 GCAGTGGGTC TGGAACAGAT TATTCTCTCA CCATTAGCAA CCTGGAACAG 301 GAAGATATTG CCACTTACTT TTGCCAACAG GGTGATACGC TTCCGTACAC TSrGTTCGGAGGG -GGGACCAAGC TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA 401 CTGTATCCAT CTTCCCACCA TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC 451 TCAGTCGTGT GCTTCTTGAA CAACTTCTAC CCCAAAGACA TCAATGTCAA 501 GTGGAAGATT GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA 551 CTGATCAGGA CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG 601 TTGACCAAGG ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC 651 TCACAAGACA TCAACTTCAC CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT 701 GT (SEQ ED NO: 160) 68 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Cadeia Pesada de Ab-7:
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-7: 1 EVQLQQSGPE LMKPGASVKM SCKASGYTFT DYNMHWMKQN QGKSLEWIGE 51INPNSGGAGY NQQFKGKATL TVDKSSRTAY MELRSLTSED SAVYYCARLG 101 YVGNYEDWYF DyWGAGTTVT YSSAKTTPPS VYPLAPGSAA QTNSMVTLGC 151LVKGYFPEPV TVTWNSGSLSSGVHTFPA VL QSDLYTLSSS VTVPSSTWPS 201ETVTCNVAHP ASSTKVDKKIVPRDCGCKPC1CTVPEVSSV FIFPPKPKD V 251LTITLTPKVT CWVDISKDD PEVQFSWFVD D VEVHTAQTQ PREEQFNSTF 301 RS VSELPIMH QDWLNGKEFK CR VNSAAFPA PIEKTISKTK GRPKAPQVYT 351IPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVE WQWNGQPAEN YKNTQP1MDT 401DGSYFIYSKL NVQKSNWEA G NTFTCSVLHE GLHNHHTEKS LSHSPGK (SEQID NO:161)
Sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-7: 1 GAGGTCCAGC TGCAACAGTC TGGACCTGAA CTAATGAAGC CTGGGGCTTC 51 AGTGAAGATG TCCTGCAAGG CTTCTGGATA CACATTCACT GACTACAACA 101 TGCACTGGAT GAAGCAGAAC CAAGGAAAGA GCCTAGAATG GATAGGAGAA 151 ATTAATCCTA ACAGTGGTGG TGCTGGCTAC AACCAGCAGT TCAAAGGCAA 201 GGCCACATTG ACTGTAGACA AGTCCTCCAG GACAGCCTAC ATGGAGCTCC 251 GCAGCCTGAC ATCTGAGGAC TCTGCAGTCT ATTACTGTGC AAGATTGGGC 301 TACGTTGGTA ATTACGAGGA CTGGTACTTC GATGTCTGGG GCGCAGGGAC 351 CACGGTCACC GTCTCCTCAG CCAAAACGAC ACCCCCATCT GTCTATCCAC 401 TGGCCCCTGG ATCTGCTGCC CAAACTAACT CCATGGTGAC CCTGGGATGC 451 CTGGTCAAGG GCTATTTCCC TGAGCCAGTG ACAGTGACCT GGAACTCTGG 501 ATCCCTGTCC AGCGGTGTGC ACACCTTCCC AGCTGTCCTG CAGTCTGACC 551 TCTACACTCT GAGCAGCTCA GTGACTGTCC CCTCCAGCAC CTGGCCCAGC 601 GAGACCGTCA CCTGCAACGT TGCCCACCCG GCCAGCAGCA CCAAGGTGGA 651 CAAGAAAATT GTGCCCAGGG ATTGTGGTTG TAAGCCTTGC AT ATGTACAG 701 TCCCAGAAGT ATCATCTGTC TTCATCTTCC CCCCAAAGCC CAAGGATGTG 751 CTCACCATTA CTCTGACTCC TAAGGTCACG TGTGTTGTGG TAGACATCAG 801 CAAGGATGAT CCCGAGGTCC AGTTCAGCTG GTTTGTAGAT GATGTGGAGG 851 TGCACACAGC TCAGACGCAA CCCCGGGAGG AGCAGTTCAA CAGCACTTTC 901 CGCTCAGTCA GTGAACTTCC CATCATGCAC CAGGACTGGC TCAATGGCAA 951 GGAGTTCAAA TGCAGGGTCA ACAGTGCAGC TTTCCCTGCC CCCATCGAGA 1001 AAACCATCTC CAAAACCAAA GGCAGACCGA AGGCTCCACA GGTGTACACC 1051 ATTCCACCTC CCAAGGAGCA GATGGCCAAG GATAAAGTCA GTCTGACCTG 1101 CATGATAACA GACTTCTTCC CTGAAGACAT TACTGTGGAG TGGCAGTGGA 1151 ATGGGCAGCC AGCGGAGAAC TACAAGAACA CTCAGCCCAT CATGGACACA 1201 GATGGCTCTT ACTTCATCTA CAGCAAGCTC AATGTGCAGA AGAGCAACTG 1251 GGAGGCAGGA AATACTTTCA CCTGCTCTGT GTTACATGAG GGCCTGCACA ” Γ30Τ ACCACCATACTGAGAAGAGC CTCTCCCACT CTCCTGGTAA A (SEQ ID NO: 162) 69 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de aminoácidos da HC de Ab-7 incluindo o péptido sinal: 1 MGWSWTFLFL LSGTAGVLSE VQLQQSGPEL MKPGASVKMS CKASGYTFTD 51 YNMHWMKQNQ GKSLEWIGEINPNSGGAGYN QQFKGKATLT VDKSSRTAYM 101 ELRSLTSEDS AVYYCARLGY VGNYEDWYFD VWGAGTTVTV SSAKTTPPSV 151 YPLAPGSAAQ TNSMVTLGCL VKGYFPEPVT VTWNSGSLSS GVHTFPAVLQ 201 SDLYTLSSSV TVPSSTWPSE TVTCNVAHPA SSTKVDKKIV PRDCGCKPCI 251 CTVPEVSSVFIFPPKPKDVL TITLTPKVTC VVVDISKDDP EVQFSWFVDD 301 VEVHTAQTQP REEQFNSTFR SVSELPIMHQ DWLNGKEFKC RVNSAAFPAP 351IEKTISKTKG RPKAPQVYTIPPPKEQMAKD KVSLTCMITD FFPEDITVEW 401 QWNGQPAENY KNTQPIMDTD GSYFIYSKLN VQKSNWEAGN TFTCSVLHEG 451 LHNHHTEKSL SHSPGK (SEQID NO:163)
Sequência de ácido nucleico da HC de Ab-7 incluindo a sequência codificando o péptido sinal: 1 ATGGGATGGA GCTGGACCTT TCTCTTCCTC CTGTCAGGAA CTGCAGGTGT 51 CCTCTCTGAG GTCCAGCTGC AACAGTCTGG ACCTGAACTA ATGAAGCCTG 101 GGGCTTCAGT GAAGATGTCC TGCAAGGCTT CTGGATACAC ATTCACTGAC 151 TACAACATGC ACTGGATGAA GCAGAACCAA GGAAAGAGCC TAGAATGGAT 201 AGGAGAAATT AATCCTAACA GTGGTGGTGC TGGCTACAAC CAGCAGTTCA 251 AAGGCAAGGC CACATTGACT GTAGACAAGT CCTCCAGGAC AGCCTACÀTG 301 GAGCTCCGCA GCCTGACATC TGAGGACTCT GCAGTCTATT ACTGTGCAAG 351 ATTGGGCTAC GTTGGTAATT ACGAGGACTG GTACTTCGAT GTCTGGGGCG 401 CAGGGACCAC GGTCACCGTC TCCTCAGCCA AAACGACACC CCCATCTGTC 451 TATCCACTGG CCCCTGGATC TGCTGCCCAA ACTAACTCCA TGGTGACCCT 501 GGGATGCCTG GTCAAGGGCT ATTTCCCTGA GCCAGTGACA GTGACCTGGA 551 ACTCTGGATC CCTGTCCAGC GGTGTGCACA CCTTCCCAGC TGTCCTGCAG 601 TCTGACCTCT ACACTCTGAG CAGCTCAGTG ACTGTCCCCT CCAGCACCTG 651 GCCCAGCGAG ACCGTCACCT GCAACGTTGC CCACCCGGCC AGCAGCACCA 701 AGGTGGACAA GAAAATTGTG CCCAGGGATT GTGGTTGTAA GCCTTGCATA 751 TGTACAGTCC CAGAAGTATC ATCTGTCTTC ATCTTCCCCC CAAAGCCCAA 801 GGATGTGCTC ACCATTACTC TGACTCCTAA GGTCACGTGT GTTGTGGTAG 851 ACATCAGCAA GGATGATCCC GAGGTCCAGT TCAGCTGGTT TGTAGATGAT 901 GTGGAGGTGC ACACAGCTCA GACGCAACCC CGGGAGGAGC AGTTCAACAG 951 CACTTTCCGC TCAGTCAGTG AACTTCCCAT CATGCACCAG GACTGGCTCA 1001 ATGGCAAGGA GTTCAAATGC AGGGTCAACA GTGCAGCTTT CCCTGCCCCC 1051 ATCGAGAAAA CCATCTCCAA AACCAAAGGC AGACCGAAGG CTCCACAGGT 1101 GTACACCATT CCACCTCCCA AGGAGCAGAT GGCCAAGGAT AAAGTCAGTC 1151 TGACCTGCAT GATAACAGAC TTCTTCCCTG AAGACATTAC TGTGGAGTGG 1201 CAGTGGAATG GGCAGCCAGC GGAGAACTAC AAGAACACTC AGCCCATCAT 1251 GGACACAGAT GGCTCTTACT TCATCTACAG CAAGCTCAAT GTGCAGAAGA 1301 GCAACTGGGA GGCAGGAAAT ACTTTCACCT GCTCTGTGTT ACATGAGGGC 1351 CTGCACAACC ACCATACTGA GAAGAGCCTC TCCCACTCTC CTGGTAAA (SEQ ID NO: 164)
Ab-8
As sequências da LC e HC do Anticorpo 8 (também aqui referido como Ab-8) são como se seque: 70 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Cadeia Leve de Ab-8:
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-8: 1 DIQMTQTTSS LSASLGDRVSISCRASQDÍS NYLNWYQQKP DGTFKLLIFtf 51 TSRLLSGVPS RFSGSGSGTD YSLTIYNLEQ EDFATYFCQQ GDTLPYTÍFGG 101 GTKLEIKX4D AAPWSIFPP SSEQLTSGGA SVVCFLNNFY PKDINVKWKI 151DGSERQJNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT LTKDEYERHN SYTCEATHKT 201STSPIVKSFN RNEC (SEQID NO: 165)
Sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-8: 1 GATATCCAGA TGACACAGAC TACATCCTCC CTGTCTGCCT CTCTGGGAGA 51 CAGGGTCTCC ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA AGACATTAGC AATTATTTAA 101 ACTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTT TTAAACTCCT TATCTTCTAC 151 ACATCAAGAT TACTCTCAGG AGTCCCATCA AGGTTCAGTG GCAGTGGGTC 201 TGGAACAGAT TATTCTCTCA CCATTTACAA CCTGGAGCAA GAAGATTTTG 251 CCACTTACTT TTGCCAACAG GGAGATACGC TTCCGTACAC TTTCGGAGGG 301 GGGACCAAAC TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA CTGTATCCAT 351 CTTCCCACCA TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC TCAGTCGTGT 401 GCTTCTTGAA CAACTTCTAC CCCAAAGACA TCAATGTCAA GTGGAAGATT 451 GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA CTGATCAGGA 501 CAGCAAAGAC AGCACCTACÀ GCATGAGCAG CACCCTCACG TTGACCAAGG 551 ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC TCACAAGACA 601 TCAACTTCAC CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT GTTAG (SEQ ID NO: 166)
Sequência de aminoácidos da LC de Ab-8 incluindo o péptido sinal: 1 MMSSAQFLGL LLLCFQGTRC DIQMTQTTSS LSASLGDRVS ISCRASQDÍS 51 NYLNWYQQKP DGTFKLLIFY TSRLLSGVPS RFSGSGSGTD YSLTIYNLEQ 101 EDFATYFCQQ GDTLPYTFGG GTKLEIKRAD AAPTVSIFPP SSEQLTSGGA 151 SVVCFLNNFY PKDINVKWKI DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT 201 LTKDEYERHN SYTCEATHKT STSPIVKSFN RNEC (SEQ ID NO: 167) 71 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de ácido nucleico da LC de Ab-8 incluindo a sequência codificando o péptido sinal: 1 ATGATGTCCT CTGCTCAGTT CCTTGGTCTC CTGTTGCTCT GTTTTCAAGG 51 TACCAGATGT GATATCCAGA TGACACAGAC TACATCCTCC CTGTCTGCCT 101 CTCTGGGAGA CAGGGTCTCC ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA AGACATTAGC 151 AATTATTTAA ACTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTT TTAAACTCCT 201 TATCTTCTAC ACATCAAGAT TACTCTCAGG AGTCCCATCA AGGTTCAGTG 251 GCAGTGGGTC TGGAACAGAT TATTCTCTCA CCATTTACAA CCTGGAGCAA 301 GAAGATTTTG CCACTTACTT TTGCCAACAG GGAGATACGC TTCCGTACAC 351 TTTCGGAGGG GGGACCAAAC TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA 401 CTGTATCCAT CTTCCCACCA TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC 451 TCAGTCGTGT GCTTCTTGAA CAACTTCTAC CCCAAAGACA TCAATGTCAA 501 GTGGAAGATT GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA 551 CTGATCAGGA CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG 601 TTGACCAAGG ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC 651 TCACAAGACA TCAACTTCAC CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT 701 GTTAG (SEQID NO: 168)
Cadeia Pesada de Ab-8:
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-8: 1 EVQLQQSGPE LMKPGASVKM SCKASGYTFT DYNMHWVKQN QGKTLDWIGE 51 JNFNSGGÂGY NQKFKGKATL TVDKSSTTAY MELRSXtSED SAVYYCARLG 101 yDDIYDDWYF DYWGÃGTTVT VSSAKTTPPS VYPLAPGSAA QTNSMVTLGC 151LVKGYFPÉPVTVTWNSGSLSSGVHTFPA VL QSDLYTLSSS VTVPSSTWPS 201ETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSV FIFPPKPKD V 251LTITLTPKVT CVWDISKDD PEVQFSWFVD D VEVHTAQTQ PREEQFNSTF 301RSVSELPIMH QDWLNGKEFKCRVNSAAFPA PIEKTISKTK GRPKAPQVYT 351IPPPKEQMAKDKVSL TCMITDFFPEDITVE WQWNGQPAEN YKNTQPIMDT 401DGSYFIYSKL NVQKSNTfFAG NTFTCSVLHE GLHNHHTEKS LSHSPGK (SEQ ID NO: 169) 72 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-8: 1 GAGGTCCAAC TGCAACAGTC TGGACCTGAA CTAATGAAGC CTGGGGCTTC 51 AGTGAAGATG TCCTGCAAGG CTTCTGGATA TACATTCACT GACTACAACA 101 TGCACTGGGT GAAGCAGAAC CAAGGAAAGA CCCTAGACTG GATAGGAGAA 151 ATTAATCCTA ACAGTGGTGG TGCTGGCTAC AACCAGAAGT TCAAGGGCAA 201 GGCCACATTG ACTGTAGACA AGTCCTCCAC CACAGCCTAC ATGGAGCTCC 251 GCAGCCTGAC ATCTGAGGAC TCTGCAGTCT ATTACTGTGC AAGATTGGGC 301 TACGATGATA TCTACGACGA CTGGTACTTC GATGTCTGGG GCGCAGGGAC 351 CACGGTCACC GTCTCCTCAG CCAAAACGAC ACCCCCATCT GTCTATCCAC 401 TGGCCCCTGG ATCTGCTGCC CAAACTAACT CCATGGTGAC CCTGGGATGC 451 CTGGTCAAGG GCTATTTCCC TGAGCCAGTG ACAGTGACCT GGAACTCTGG 501 ATCCCTGTCC AGCGGTGTGC ACACCTTCCC AGCTGTCCTG CAGTCTGACC 551 TCTACACTCT GAGCAGCTCA GTGACTGTCC CCTCCAGCAC CTGGCCCAGC 601 GAGACCGTCA CCTGCAACGT TGCCCACCCG GCCAGCAGCA CCAAGGTGGA 651 CAAGAAAATT GTGCCCAGGG ATTGTGGTTG TAAGCCTTGC ATATGTACAG 701 TCCCAGAAGT ATCATCTGTC TTCATCTTCC CCCCAAAGCC CAAGGATGTG 751 CTCACC ATTA CTCTGACTCC TAAGGTCACG TGTGTTGTGG TAG ACATCAG 801 CAAGGATGAT CCCGAGGTCC AGTTC AGCTG GTTTGTAGAT GATGTGGAGG 851 TGCACACAGC TCAGACGCAA CCCCGGGAGG AGCAGTTCAA CAGCACTTTC 901 CGCTCAGTCA GTGAACTTCC CATCATGCAC CAGGACTGGC TCAATGGCAA 951 GGAGTTCAAA TGCAGGGTCA ACAGTGCAGC TTTCCCTGCC CCCATCGAGA 1001 AAACCATCTC CAAAACCAAA GGCAGACCGA AGGCTCCACA GGTGTACACC 1051 ATTCCACCTC CCAAGGAGCA GATGGCCAAG GATAAAGTCA GTCTGACCTG 1101 CATGATAACA GACTTCTTCC CTGAAGACAT TACTGTGGAG TGGCAGTGGA 1151 ATGGGCAGCC AGCGGAGAAC TACAAGAACA CTCAGCCCAT CATGGACACA 1201 GATGGCTCTT ACTTCATCTA CAGCAAGCTC AATGTGCAGA AGAGCAACTG 1251 GGAGGCAGGA AATACTTTCA CCTGCTCTGT GTTACATGAG GGCCTGCACA 1301 ACCACCATAC TGAGAAGAGC CTCTCCCACT CTCCTGGTAA ATGA (SEQID NO: 170)
Sequência de aminoácidos da HC de Ab-8 incluindo o péptido sinal:
1 MGWSWTFLFL LSGTAGVLSE VQLQQSGPEL MKPGASVKMS CKASGYTFTD 51 YNMHWVKQNQ GKTLDWIGEINPNSGGAGYN QKFKGKATLT VDKSSTTAYM 101 ELRSLTSEDS AVYYCARLGY DDIYDDWYFD VWGAGTTVTV SSAKTTPPSV 151 YPLAPGSAAQ TNSMVTLGCL VKGYFPEPVT VTWNSGSLSS GVHTFPAVLQ 201 SDLYTLSSSV YVPSSTWPSE TVTCNVAHPA SSTKVDKKIV PRDCGCKPCI 251 CTVPEVSSVFIFPPICPKDVL TITLTPKVTC WVDISKDDP EVQFSWFVDD 301 VEVHTAQTQP REEQFNSTFR SVSELPIMHQ DWLNGKEFKC RVNSAAFPAP 351IEKTISKTKG RPKAPQVYTIPPPKEQMAKD KVSLTCMITD FFPEDITVEW 401 QWNGQPAENY KNTQPIMDTD GSYFIYSKLN VQKSNWEAGN TFTCSVLHEG 451 LHNHHTEKSL SHSPGK (SEQ ID NO:171) 73 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de ácido nucleico da HC de Ab-8 incluindo a sequência codificando o péptido sinal: 1 ATGGGATGGA GCTGGACCTT TCTCTTCCTC CTGTCAGGAA CTGCAGGTGT 51 CCTCTCTGAG GTCCAACTGC AACAGTCTGG ACCTGAACTA ATGAAGCCTG 101 GGGCTTCAGT GAAGATGTCC TGCAAGGCTT CTGGATATAC ATTCACTGAC 151 TACAACATGC ACTGGGTGAA GCAGAACCAA GGAAAGACCC TAGACTGGAT 201 AGGAGAAATT AATCCTAACA GTGGTGGTGC TGGCTACAAC CAGAAGTTCA 251 AGGGCAAGGC CACATTGACT GTAGACAAGT CCTCCACCAC AGCCTACATG 301 GAGCTCCGCA GCCTGACATC TGAGGACTCT GCAGTCTATT ACTGTGCAAG 351 ATTGGGCTAC GATGATATCT ACGACGACTG GTACTTCGAT GTCTGGGGCG 401 CAGGGACCAC GGTCACCGTC TCCTCAGCCA AAACGACACC CCCATCTGTC 451 TATCCACTGG CCCCTGGATC TGCTGCCCAA ACTAACTCCA TGGTGACCCT 501 GGGATGCCTG GTCAAGGGCT ATTTCCCTGA GCCAGTGACA GTGACCTGGA 551 ACTCTGGATC CCTGTCCAGC GGTGTGCACA CCTTCCCAGC TGTCCTGCAG 601 TCTGACCTCT ACACTCTGAG CAGCTCAGTG ACTGTCCCCT CCAGCACCTG 651 GCCCAGCGAG ACCGTCACCT GCAACGTTGC CCACCCGGCC AGCAGCACCA 701 AGGTGGACAA GAAAATTGTG CCCAGGGATT GTGGTTGTAA GCCTTGCATA 751 TGTACAGTCC CAGAAGTATC ATCTGTCTTC ATCTTCCCCC CAAAGCCCAA 801 GGATGTGCTC ACCATTACTC TGACTCCTAA GGTCACGTGT GTTGTGGTAG 851 ACATCAGCAA GGATGATCCC GAGGTCCAGT TCAGCTGGTT TGTAGATGAT 901 GTGGAGGTGC ACACAGCTCA GACGCAACCC CGGGAGGAGC AGTTCAACAG 951 CACTTTCCGC TCAGTCAGTG AACTTCCCAT CATGCACCAG GACTGGCTCA 1001 ATGGCAAGGA GTTCAAATGC AGGGTCAACA GTGCAGCTTT CCCTGCCCCC 1051 ATCGAGAAAA CCATCTCCAA AACCAAAGGC AGACCGAAGG CTCCACAGGT 1101 GTACACCATT CCACCTCCCA AGGAGCAGAT GGCCAAGGAT AAAGTCAGTC 1151 TGACCTGCAT GATAACAGAC TTCTTCCCTG AAGACATTAC TGTGGAGTGG 1201 CAGTGGAATG GGCAGCCAGC GGAGAACTAC AAGAACACTC AGCCCATCAT 1251 GGACACAGAT GGCTCTTACT TCATCTACAG CAAGCTCAAT GTGCAGAAGA 1301 GCAACTGGGA GGCAGGAAAT ACITTCACCT GCTCTGTGTT ACATGAGGGC 1351 CTGCACAACC ACCATACTGA GAAGAGCCTC TCCCACTCTC CTGGTAAATG 1401 A (SEQID NO: 172)
Ab-9
As sequências da LC e HC do Anticorpo 9 (também aqui referido como Ab-9) são como se seque:
Cadeia Leve de Ab-9:
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-9: 1 DIQMTQITSS LSASLGDRVS ISCRASQDIS NYLNWYQQKP DGTFKLLIFY 51 TSRLFSGVPS RFSGSGSGTD YSLTIYNLÉQ EDFATYFCQí} GDTLPYTFGG 101 GTKVEIKJMi) AAPTVSIFPP SSEQLTSGGA SWCFLNNFYPKDÍNVKWKI 151DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTL T L TKDEYERIIN SYTCEA THKT 201STSPIVKSFNRNEC (SEQ ID NO: 173) 74 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-9: 1 GATATCCAGA TGACACAGAT TACATCCTCC CTGTCTGCCT CTCTGGGAGA 51 CAGGGTCTCC ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA AGACATTAGC AATTATTTAA 101 ATTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTT TTAAACTCCT TATCTTCTAC 151 ACATCAAGAT TATTTTCAGG AGTCCCATCA AGGTTCAGTG GCAGTGGGTC 201 TGGAACAGAT TATTCTCTCA CCATTTACAA CCTGGAGCAA GAAGATTTTG 251 CCACTTACTT TTGCCAACAG GGAGATACGC TTCCGTACAC TTTCGGAGGG 301 GGGACCAAGG TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA CTGTATCCAT 351 CTTCCCACCA TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC TCAGTCGTGT 401 GCTTCTTGAA CAACTTCTAC CCCAAAGACA TCAATGTCAA GTGGAAGATT 451 GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA CTGATCAGGA 501 CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG TTGACCAAGG 551 ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC TCACAAGACA 601 TCAACTTCAC CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT GT (SEQ ID NO: 174)
Sequência de aminoácidos da LC de Ab-9 incluindo o péptido sinal: 1 MMSSAQFLGL LLLCFQGTRC DIQMTQITSS LSASLGDRVS ISCRASQDIS 51 NYLNWYQQKP DGTFKLLIFY TSRLFSGVPS RFSGSGSGTD YSLTIYNLEQ 101 EDFATYFCQQ GDTLPYTFGG GTKVEIKRAD AAPTVSIFPP SSEQLTSGGA 151 SVVCFLNNFY PKDINVKWKIDGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT 201 LTKDEYERHN SYTCEATHKT STSPIVKSFN RNEC (SEQ ID NO:175)
Sequência de ácido nucleico da LC de Ab-9 incluindo a sequência codificando o péptido sinal: 1 ATGATGTCCT CTGCTCAGTT CCTTGGTCTC CTGTTGCTCT GTTTTCAAGG 51 TACCAGATGT GATATCCAGA TGACACAGAT TACATCCTCC CTGTCTGCCT 101 CTCTGGGAGA CAGGGTCTCC ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA AGACATTAGC 151 AATTATTTAA ATTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTT TTAAACTCCT 201 TATCTTCTAC ACATCAAGAT TATTTTCAGG AGTCCCATCA AGGTTCAGTG 251 GCAGTGGGTC TGGAACAGAT TATTCTCTCA CCATTTACAA CCTGGAGCAA 301 GAAGATTTTG CCACITACTT TTGCCAACAG GGAGATACGC TTCCGTACAC 351 TTTCGGAGGG GGGACCAAGG TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA 401 CTGTATCCAT CTTCCCACCA TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC 451 TCAGTCGTGT GCTTCTTGAA CAACTTCTAC CCCAAAGACA TCAATGTCAA 501 GTGGAAGATT GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA 551 CTGATCAGGA CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG 601 TTGACCAAGG ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC 651 TCACAAGACA TCAACTTCAC CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT 701 GT (SEQ ID NO: 176) 75 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Cadeia Pesada de Ab-9:
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-9:
1 EVQLQQSGPE LMKPGTSVKM SCKASGYTFT DYNMHWVKQT QGKTLEWIGÈ 51 INPNSGGÃGY.NQKFKGKATL TVDKSSTTAY MÉLRSLTSED SAVYYCAKLG, 101 ;YbpiYppWYF DVWGAGTTVT WSSAKTTAPS VYPLAPVCGD TTGSSVTLGC 151LVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSDVHTFPALL QSGLYTLSSS VTVTTWPSQT 201ITCNVAHPAS STKVDKKIEP RGSPTHKPCP PCPAPNLL GG PSVFIFPPKI 251 KDVLMISLSPMVTCVWDVS EDDPDVHVSW FVNNVEVHTA QTOTHREDYN
óUl úllK v t òALP 1QHQD WMSGK EFKCKVNNKA LPAPIERTIS KPKGPVRAPQ 351 VYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMITDFMPEDIYVEWTNNGQTELNYKNTEPV 401LDSDGSYFMYSKLRVEKKN1V VERNSYSCSV VHEGLHNHHT TKSFSRTPGK (SEQ ID NO: 177)
Sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-9: 1 GAGGTCCAAC TGCAACAGTC TGGACCTGAA CTAATGAAGC CTGGGACTTC 51 AGTGAAGATG TCCTGCAAGG CTTCTGGATA TACATTCACT GACTACAACA 101 TGCACTGGGT GAAGCAGACC CAAGGAAAGA CCCTAGAGTG GATAGGAGAA 151 ATTAATCCTA ACAGTGGTGG TGCTGGCTAC AACCAGAAGT TCAAGGGCAA 201 GGCCACATTG ACTGTAGACA AGTCCTCCAC CACAGCCTAC ATGGAGCTCC 251 GCAGCCTGAC ATCTGAGGAC TCTGCAGTCT ATTACTGTGC AAAATTGGGC 301 TACGATGATA TCTACGACGA CTGGTATTTC GATGTCTGGG GCGCAGGGAC 351 CACGGTCACC GTCTCCTCAG CCAAAACAAC AGCCCCATCG GTCTATCCAC 401 TGGCCCCTGT GTGTGGAGAT ACAACTGGCT CCTCGGTGAC TCTAGGATGC 451 CTGGTCAAGG GTTATTTCCC TGAGCCAGTG ACCTTGACCT GGAACTCTGG 501 ATCCCTGTCC AGTGATGTGC ACACCTTCCC AGCTCTCCTG CAGTCTGGCC 551 TCTACACCCT CAGCAGCTCA GTGACTGTAA CCACCTGGCC CAGCCAGACC 601 ATCACCTGCA ATGTGGCCCA CCCGGCAAGC AGCACCAAAG TGGACAAGAA 651 AATTGAGCCC AGAGGGTCCC CAACACATAA ACCCTGTCCT CCATGCCCAG 701 CTCCTAACCT CTTGGGTGGA CCATCCGTCT TCATCTTCCC TCCAAAGATC 751 AAGGATGTAC TCATGATCTC CCTGAGCCCC ATGGTCACGT GTGTGGTGGT 801 GGATGTGAGC GAGGATGACC CAGATGTCCA TGTCAGCTGG TTCGTGAACA 851 ACGTGGAAGT ACACACAGCT CAGACACAAA CCCATAGAGA GGATTACAAC 901 AGTACTATCC GGGTGGTCAG TGCCCTCCCC ATCCAGCACC AGGACTGGAT 951 GAGTGGCAAG GAGTTCAAAT GCAAGGTCAA CAACAAAGCC CTCCCAGCGC 1001 CCATCGAGAG AACCATCTCA AAACCCAAAG GGCCAGTAAG AGCTCCACAG 1051 GTATATGTCT TGCCTCCACC AGAAGAAGAG ATGACTAAGA AACAGGTCAC 1101 TCTGACCTGC ATGATCACAG ACTTCATGCC TGAAGACATT TACGTGGAGT 1151 GGACC AACAA CGGGCAAACA GAGCTAAACT ACAAGAACAC TGAACCAGTC 1201 CTGGACTCTG ATGGTTCTTA CTTCATGTAC AGCAAGCTGA GAGTGGAAAA 1251 GAAGAACTGG GTGGAAAGAA ATAGCTACTC CTGTTCAGTG GTCCACGAGG 1301 GTCTGCACAA TCACCACACG ACTAAGAGCT TCTCCCGGAC TCCGGGTAAA (SEQ 1D NO: 178) 76 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de aminoácidos da HC de Ab-9 incluindo o péptido sinal: 1 MGWSWTFLFL LSGTAGVLSE VQLQQSGPEL MKPGTSVKMS CKASGYTFTD 51 YNMHWVKQTQ GKTLEWIGEINPNSGGAGYN QKFKGKATLT VDKSSTTAYM ]01 ELRSLTSEDS AYYYCAKLGY DDIYDDWYFD VWGAGTTVTV SSAKTTAPSV 151 YPLAPVCGDT TGSSVTLGCL VKGYFPEPVT LTWNSGSLSS DVHTFPALLQ 201 SGLYTLSSSV TVTTWPSQTITCNVAHPASS TKVDKKIEPR GSPTHKPCPP 251 CPAPNLLGGP SVFIFPPKIK DVLMISLSPM VTCVWDVSE DDPDVHVSWF. 301 VNNVEVHTAQ TQTHREDYNS TIRWSALPI QHQDWMSGKE FKCKVNNKAL 351 PAPEERTISK PKGPVRAPQV YVLPPPEEEM TKKQVTLTCMITDFMPEDIY 401 VEWTNNGQTE LNYKNTEPVL DSDGSYFMYS KLRVEKKNWV ERNSYSCSVV 451 HEGLHNHHTT KSFSRTPGK (SEQID NO: 179)
Sequência de ácido nucleico da HC de Ab-9 incluindo a sequência codificando o péptido sinal: 1 ATGGGATGGA GCTGGACCTT TCTCTTCCTC CTGTCAGGAA CTGCAGGTGT 51 CCTCTCTGAG GTCCAACTGC AACAGTCTGG ACCTGAACTA ATGAAGCCTG 101 GGACTTCÃGT GAAGATGTCC TGCAAGGCTT CTGGATATAC ATTCACTGAC 151 TACAACATGC ACTGGGTGAA GCAGACCCAA GGAAAGACCC TAGAGTGGAT 201 AGGAGAAATT AATCCTAACA GTGGTGGTGC TGGCTACAAC CAGAAGTTCA 251 AGGGCAAGGC CACATTGACT GTAGACAAGT CCTCCACCAC AGCCTACATG 301 GAGCTCCGCA GCCTGACATC TGAGGACTCT GCAGTCTATT ACTGTGCAAA 351 ATTGGGCTAC GATGATATCT ACGACGACTG GTATTTCGAT GTCTGGGGCG 401 CAGGGACCAC GGTCACCGTC TCCTCAGCCA AAACAACAGC CCCATCGGTC 451 TATCCACTGG CCCCTGTGTG TGGAGATACA ACTGGCTCCT CGGTGACTCT 501 AGGATGCCTG GTCAAGGGTT ATTTCCCTGA GCCAGTGACC TTGACCTGGA 551 ACTCTGGATC CCTGTCCAGT GATGTGCACA CCTTCCCAGC TCTCCTGCAG 601 TCTGGCCTCT ACACCCTCAG CAGCTCAGTG ACTGTAACCA CCTGGCCCAG 651 CCAGACCATC ACCTGCAATG TGGCCCACCC GGCAAGCAGC ACCAAAGTGG 701 ACAAGAAAAT TGAGCCCAGA GGGTCCCCAA CACATAAACC CTGTCCTCCA 751 TGCCCAGCTC CTAACCTCTT GGGTGGACCA TCCGTCTTCA TCTTCCCTCC 801 AAAGATCAAG GATGTACTCA TGATCTCCCT GAGCCCCATG GTCACGTGTG 851 TGGTGGTGGA TGTGAGCGAG GATGACCCAG ATGTCCATGT CAGCTGGTTC 901 GTGAACAACG TGGAAGT ACA CACAGCTCAG ACACAAACCC ATAGAGAGGA 951 TTACAACAGT ACTATCCGGG TGGTCAGTGC CCTCCCCATC CAGCACCAGG 1001 ACTGGATGAG TGGCAAGGAG TTCAAATGCA AGGTCAACAA CAAAGCCCTC 1051 CCAGCGCCCA TCGAGAGAAC CATCTCAAAA CCCAAAGGGC CAGTAAGAGC 1101 TCCACAGGTA TATGTCTTGC CTCCACCAGA AGAAGAGATG ACTAAGAAAC 1151 AGGTCACTCT GACCTGCATG ATCACAGACT TCATGCCTGA AGACATTTAC 1201 GTGGAGTGGA CCAACAACGG GCAAACAGAG CTAAACTACA AGAACACTGA 1251 ACCAGTCCTG GACTCTGATG GTTCTTACTT CATGTACAGC AAGCTGAGAG 1301 TGGAAAAGAA GAACTGGGTG GAAAGAAATA GCTACTCCTG TTCAGTGGTC 1351 CACGAGGGTC TGCACAATCA CCACACGACT AAGAGCTTCT CCCGGACTCC 1401 GGGTAAA (SEQ ID NO:180)
Ab-10
As sequências de LC e HC do Anticorpo 10 (também aqui referido como Ab-10) são como se segue: 77 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Cadeia Leve de Ab-10:
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-10: 1 DIQMTQTTSS LSASLGDRVS ISCRASQDIS.NYLNWYQQKP DGTFKLLIFY 51 TSRLLSGVPS RFSGSGSGTD YSLTIYNLEQ EDFÃTYFCQQ GDTLPYfFGG 101 GTKLEIKJMD AAPTVSIFPL SSEQLTSGGA SWCFLNNFYPKDINVKWKI 151DGSERQNGVL NSWTDODSKD STYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKT 201STSPIVKSFN RNEC (SEQID NO: 181)
Sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-10: 1 GATATCCAGA TGACACAGAC TACATCCTCC CTGTCTGCCT CTCTGGGAGA 51 CAGGGTCTCC ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA AGACATTAGC AATTATTTAA 101 ACTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTT TTAAACTCCT TATCTTCTAC 151 ACATCAAGAT TACTCTCAGG AGTCCCATCA AGGTTCAGTG GCAGTGGGTC 201 TGGAACAGAT TATTCTCTCA CCATTTACAA CCTGGAGCAA GAAGATTTTG 251 CCACTTACTT TTGCCAACAG GGAGATACGC TTCCGTACAC TTTCGGAGGG 301 GGGACCAAAC TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA CTGTATCCAT 351 CTTCCCACTA TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC TCAGTCGTGT 401 GCTTCTTGAA CAACTTCTAC CCCAAAGACA TCAATGTCAA GTGGAAGATT «i uaujUlauiu AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA CTGATCAGGA 501 CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG TTGACCAAGG 551 ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC TCACAAGACA 601 TCAACTTCAC CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT GTTAG (SEQ ID NO: 182)
Sequência de aminoácidos da LC de Ab-10 incluindo o péptido sinal: 1 MMSSAQFLGL LLLCFQGTRC DIQMTQTTSS LSASLGDRVS ISCRÀSQDIS 51 NYLNWYQQKP DGTFKLLIFY TSRLLSGVPS RFSGSGSGTD YSLTIYNLEQ 101 EDFATYFCQQ GDTLPYTFGG GTKLEIKRAD AAPTVSIFPL SSEQLTSGGA 151 SWCFLNNFY PKDINVKWKI DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT 201 LTKDEYERHN SYTCEATHKT STSPIVKSFN RNEC (SEQ ID NO: 183) 78 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de ácido nucleico da LC de Ab-10 incluindo a sequência codificando o péptido sinal: 1 ATGATGTCCT CTGCTCAGTT CCTTGGTCTC CTGTTGCTCT GTTTTCAAGG 51 TACCAGATGT GATATCCAGA TGACACAGAC TACATCCTCC CTGTCTGCCT 101 CTCTGGGAGA CAGGGTCTCC ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA AGACATTAGC 151 AATTATTTAA ACTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTT TTAAACTCCT 201 TATCTTCTAC ACATCAAGAT TACTCTCAGG AGTCCCATCA AGGTTCAGTG 251 GCAGTGGGTC TGGAACAGAT TATTCTCTCA CCATTTACAA CCTGGAGCAA 301 GAAGATTTTG CCACTTACTT TTGCCAACAG GGAGATACGC TTCCGTACAC 351 TTTCGGAGGG GGGACCAAAC TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA 401 CTGTATCCAT CTTCCCACTA TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC 451 TCAGTCGTGT GCTTCTTGAA CAACTTCTAC CCCAAAGACA TCAATGTCAA 501 GTGGAAGATT GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA 551 CTGATCAGGA CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG 601 TTGACCAAGG ACGAGTATGA ACGAC ATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC 651 TCACAAGACA TCAACTTCAC CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT 701 GTTAG (SEQID NO: 184)
Cadeia Pesada de Ab-10:
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-10: 1 EVQLQQSGPE LMKPGASVKM SCKASGYTFT DYNMHWVKQN QGKTLEWIGÈ 51INPNSGGAGYNQKFKGKATLTVDKSSTTAY MELRSLTSFJ) SAVYYCAREG 101 YDDIYDDWYF DVfWGAGTTVT VSSAKTTPPS VYPLAPGSAA QTNSMVTLGC 151LVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVL QSDLYTLSSS VTVPSSTWPS 201ETVTCNVAHPASSTKΙΦΚΚΙVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDV 251LTITLTPKVT CVWDISKDD PEVQFSWFVD DVEVHTAQTQ PREEQFNSTF 301RSVSELPIMH QD W^LNGKEFK CR VNSAAFPA PIEKTISKTK GRPKAPQVYT 351IPPPKEQM4K DKVSL TCMIT DFFPEDITVE WQWNGOPAEN YKNTQPIMDT 401DGSYF1YSKL NVQKSNWEAGNTFTCSVLHE GLHNHHTEKSLSHSPGK (SEQ ID NO: 185)
Sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-10:
1 GAGGTCCAAC TGCAACAGTC TGGACCTGAA CTAATGAAGC CTGGGGCTTC 51 AGTGAAGATG TCCTGCAAGG CTTCTGGATA TACATTCACT GACTACAACA 101 TGCACTGGGT GAAGCAGAAC CAAGGAAAGA CCCTAGAATG GATAGGAGAA 79 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ 151 ATTAATCCTA ACAGTGGTGG TGCTGGCTAC AACCAGAAGT TCAAGGGC ΑΑ 201 GGCCACATTG ACTGTAGACA AGTCCTCCAC CACAGCCTAC ATGGAGCTCC 251 GCAGCCTGAC ATCTGAGGAC TCTGCAGTCT ATTACTGTGC AAGATTGGGC 301 TACGATGATA TCTACGACGA CTGGTACTTC GATGTCTGGG GCGCAGGGAC 351 CACGGTCACC GTCTCCTCAG CCAAAACGAC ACCCCCATCT GTCTATCCAC 401 TGGCCCCTGG ATCTGCTGCC CAAACTAACT CCATGGTGAC CCTGGGATGC 451 CTGGTCAAGG GCTATTTCCC TGAGCCAGTG ACAGTGACCT GGAACTCTGG 501 ATCCCTGTCC AGCGGTGTGC ACACCTTCCC AGCTGTCCTG CAGTCTGACC 551 TCTACACTCT GAGCAGCTCA GTGACTGTCC CCTCCAGCAC CTGGCCCAGC 601 GAGACCGTCA CCTGCAACGT TGCCCACCCG GCCAGCAGCA CCAAGGTGGA 651 CAAGAAAATT GTGCCCAGGG ATTGTGGTTG TAAGCCTTGC ATATGTACAG 701 TCCCAGAAGT ATCATCTGTC TTCATCTTCC CCCCAAAGCC CAAGGATGTG 751 CTCACCATTA CTCTGACTCC TAAGGTCACG TGTGTTGTGG TAGACATCAG 801 CAAGGATGAT CCCGAGGTCC AGTTCAGCTG GTTTGTAGAT GATGTGGAGG 851 TGCACACAGC TCAGACGCAA CCCCGGGAGG AGCAGTTCAA CAGCACTTTC 901 CGCTCAGTCA GTGAACTTCC CATCATGCAC CAGGACTGGC TCAATGGCAA 951 GGAGTTCAAA TGCAGGGTCA ACAGTGCAGC TTTCCCTGCC CCCATCGAGA 1001 AAACCATCTC CAAAACCAAA GGCAGACCGA AGGCTCCACA GGTGTACACC 1051 ATTCCACCTC CCAAGGAGCA GATGGCCAAG GATAAAGTCA GTCTGACCTG 1101 CATGATAACA GACTTCTTCC CTGAAGACAT TACTGTGGAG TGGCAGTGGA 1151 ATGGGCAGCC AGCGGAGAAC TACAAGAACA CTCAGCCCAT CATGGACACA 1201 GATGGCTCTT ACTTCATCTA CAGCAAGCTC AATGTGCAGA AGAGCAACTG 1251 GGAGGCAGGA AATACTTTCA CCTGCTCTGT GTTACATGAG GGCCTGCACA 1301 ACCACCATAC TGAGAAGAGC CTCTCCCACT CTCCTGGTAA ATGA (SEQ ID ΝΟ:186)
Sequência de aminoácidos da HC de Ab-10 incluindo o péptido sinal: 1 MGWSWTFLFL LSGTAGVLSE VQLQQSGPEL MKPGASVKMS CKASGYTFTD 51 YNMHWVKQNQ GKTLEWIGEINPNSGGAGYN QKFKGKATLT VDKSSTTAYM 101 ELRSLTSEDS AVYYCARLGY DDIYDDWYFD VWGAGTTVTV SSAKTTPPSV 151 YPLAPGSAAQ TNSMVTLGCL VKGYFPEPVT VTWNSGSLSS GVHTFPAVLQ 201 SDLYTLSSSV TVPSSTWPSE TVTCNVAHPA SSTKVDKKIV PRDCGCKPCI 251 CTVPEVSSVFIFPPKPKDVL TITLTPKVTC WVDISKDDP EVQFSWFVDD 301 VEVHTAQTQP REEQFNSTFR SVSELPIMHQ DWLNGKEFKC RVNSAAFPAP 351 IEKTISKTKG RPKAPQVYTIPPPKEQMAKD KVSLTCMITD FFPEDITVEW 401 QWNGQPAENY KNTQPIMDTD GSYFIYSKLN VQKSNWEAGN TFTCSVLHEG 451 LHNHHTEKSL SHSPGK (SEQ ID NO: 187) 80 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de ácido nucleico da HC de Ab-10 incluindo a sequência codificando o péptido sinal: 1 ATGGGATGGA GCTGGACCTT TCTCTTCCTC CTGTCAGGAA CTGCAGGTGT 51 CCTCTCTGAG GTCCAACTGC AACAGTCTGG ACCTGAACTA ATGAAGCCTG 101 GGGCTTCAGT GAAGATGTCC TGCAAGGCTT CTGGATATAC ATTCACTGAC 151 TACAACATGC ACTGGGTGAA GCAGAACCAA GGAAAGACCC TAGAATGGAT 201 AGGAGAAATT AATCCTAACA GTGGTGGTGC TGGCTACAAC CAGAAGTTCA 251AGGGCAAGGC CACATTGACT GTAGACAAGT CCTCCACCAC AGCCTACATG 301 GAGCTCCGCA GCCTGACATC TGAGGACTCT GCAGTCTATT ACTGTGCAAG 351 ATTGGGCTAC GATGATATCT ACGACGACTG GTACTTCGAT GTCTGGGGCG 401 CAGGGACCAC GGTCACCGTC TCCTCAGCCA AAACGACACC CCCATCTGTC 451 TATCCACTGG CCCCTGGATC TGCTGCCCAA ACTAACTCCA TGGTGACCCT 501 GGGATGCCTG GTCAAGGGCT ATTTCCCTGA GCCAGTGACA GTGACCTGGA ddi aujlciuuaiu CCTGTCCAGCGGTGTGCACA CCTTCCCAGCTGTCCTGCAG 601 TCTGACCTCT ACACTCTGAG CAGCTCAGTG ACTGTCCCCT CCAGCACCTG 651 GCCCAGCGAG ACCGTCACCT GCAACGTTGC CCACCCGGCC AGCAGCACCA 701 AGGTGGACAA GAAAATTGTG CCCAGGGATT GTGGTTGTAA GCCTTGCATA 751 TGTACAGTCC CAGAAGTATC ATCTGTCTTC ATCTTCCCCC CAAAGCCCAA 801 GGATGTGCTC ACCATTACTC TGACTCCTAA GGTCACGTGT GTTGTGGTAG 851 ACATCAGCAA GGATGATCCC GAGGTCCAGT TCAGCTGGTT TGTAGATGAT 901 GTGGAGGTGC ACACAGCTCA GACGCAACCC CGGGAGGAGC AGTTCAACAG 951 CACTTTCCGC TCAGTCAGTG AACTTCCCAT CATGCACCAG GACTGGCTCA 1001 ATGGCAAGGA GTTCAAATGC AGGGTCAACA GTGCAGCTTT CCCTGCCCCC 1051 ATCGAGAAAA CCATCTCCAA AACCAAAGGC AGACCGAAGG CTCCACAGGT 1101 GTACACCATT CCACCTCCCA AGGAGCAGAT GGCCAAGGAT AAAGTCAGTC 1151 TGACCTGCAT GATAACAGAC TTCTTCCCTG AAGACATTAC TGTGGAGTGG 1201 CAGTGGAATG GGCAGCCAGC GGAGAACTAC AAGAACACTC AGCCCATCAT 1251 GGACACAGAT GGCTCTTACT TCATCTACAG CAAGCTCAAT GTGCAGAAGA 1301 GCAACTGGGA GGCAGGAAAT ACTTTCACCT GCTCTGTGTT ACATGAGGGC 1351 CTGCACAACC ACCATACTGA GAAGAGCCTC TCCCACTCTC CTGGTAAATG 1401 A (SEQID NO: 188)
Ab-11
As sequências de LC e HC do Anticorpo 11 (também aqui referido como Ab-11) são como se segue:
Cadeia Leve de Ab-11:
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-11: 1 QIVLSQSPAF LSVSPGDKVT MTCRÃSSSIS YIHWFQQKPG SSPRSWIYÀT 51 SNLASGVPGR FSGSGSGTSY SLTISRVEAE DÀATYYCQQW SSDPIcPFGAG 101 TKLÈLKRADA APTVSIFPPS SEQLTSGGAS WCFLNNFYPKDINVKWKID 151 GSERONGVLNSWTDQDSKDS TYSMSSTLTL TKDEYERHNS YTCEATHKTS 201 TSPIVKSFNR NEC (SEQ ID NO: 189) 81 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-11: 1 CAAATTGTTC TCTCCCAGTC TCCAGCATTC CTGTCTGTAT CTCCAGGGGA 51 TAAGGTCACA ATGACTTGCA GGGCCAGCTC AAGTATAAGT TACATACACT 101 GGTTTCAGCA GAAGCCAGGA TCCTCCCCCA GATCCTGGAT TTATGCCACA 151 TCCAACCTGG CTTCTGGAGT CCCTGGTCGC TTCAGTGGCA GTGGGTCTGG 201 GACCTCTTAC TCTCTCACAA TCAGCAGAGT GGAGGCTGAG GATGCTGCCA 251 CTTATTACTG CCAGCAGTGG AGTAGTGACC CACTCACGTT CGGTGCTGGG 301 ACCAAGCTGG AGCTGAAACG GGCTGATGCT GCACCAACTG TATCCATCTT 351 CCCACCATCC AGTGAGCAGT TAACATCTGG AGGTGCCTCA GTCGTGTGCT 401 TCTTGAACAA CTTCTACCCC AAAGACATCA ATGTCAAGTG GAAGATTGAT 451 GGCAGTGAAC GACAAAATGG CGTCCTGAAC AGTTGGACTG ATCAGGACAG 501 CAAAGACAGC ACCTACAGCA TGAGCAGCAC CCTCACGTTG ACCAAGGACG 551 AGTATGAACG ACATAACAGC TATACCTGTG AGGCCACTCA CAAGACATCA 601 ACTTCACCCA TTGTCAAGAG CTTCAACAGG AATGAGTGTT AG (SEQ ID NO: 190)
Sequência de aminoácidos da LC de Ab-11 incluindo o péptido sinal:
1'MDFQVQIFSF LLISASVMS RGQIVLSQSP AFLSVSPGDK VTMTCRASSS STISYÍHWFOQK PGSSPRSWiy ATSNLASGVP grfsgsgsgt sysltisrve 101 AEDAATYYCQ QWSSDPLTFG AGTKLELKRA DAAPTVSIFP PSSEQLTSGG 151 ASVVCFLNNF YPKDENVKWKIDGSERQNGV LNSWTDQDSK DSTYSMSSTL 201 TLTKDEYERH NSYTCEATHK TSTSPIVKSF NRNEC (SEQ ID NO:191)
Sequência de ácido nucleico da LC de Ab-11 incluindo a sequência codificando o péptido sinal: 1 ATGGATTTTC AAGTGCAGAT TTTCAGCTTC CTGCTAATCA GTGCTTCAGT 51 CATAATGTCC AGAGGACAAA TTGTTCTCTC CCAGTCTCCA GCATTCCTGT 101 CTGTATCTCC AGGGGATAAG GTCACAATGA CTTGCAGGGC CAGCTCAAGT 151 ATAAGTTACA TACACTGGTT TCAGCAGAAG CCAGGATCCT CCCCCAGATC 201 CTGGATTTAT GCCACATCCA ACCTGGCITC TGGAGTCCCT GGTCGCTTCA 251 GTGGCAGTGG GTCTGGGACC TCTTACTCTC TCACAATCAG CAGAGTGGAG 301 GCTGAGGATG CTGCCACTTA TTACTGCCAG CAGTGGAGTA GTGACCCACT 351 CACGTTCGGT GCTGGGACCA AGCTGGAGCT GAAACGGGCT GATGCTGCAC 401 CAACTGTATC CATCTTCCCA CCATCCAGTG AGCAGTTAAC ATCTGGAGGT 451 GCCTCAGTCG TGTGCTTCTT GAACAACTTC TACCCCAAAG ACATCAATGT 501 CAAGTGGAAG ATTGATGGCA GTGAACGACA AAATGGCGTC CTGAACAGTT 551 GGACTGATCA GGACAGCAAA GACAGCACCT ACAGCATGAG CAGCACCCTC 601 ACGTTGACCA AGGACGAGTA TGAACGACAT AACAGCTATA CCTGTGAGGC 651 CACTCACAAG ACATCAACTT CACCCATTGT CAAGAGCTTC AACAGGAATG 701 AGTGTTAG (SEQ ID NO: 192) 82 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Cadeia Pesada de Ab-11:
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-11: 101 YDÒTYTWFFy; WGQGTLVTVS AAKTTPPSVY PLAPGSAAQT NSMVTLGCLV 151KGYFPÊPVTVTWNSGSLSSG VHTFPAVLQSDLYTLSSSVT VPSSTWPSET 201 WCNVAHPAS STKVDKKBF RDCGCKPCIC TFPEVSSVFIFPPKPKD VLT 251ITLTPKVTCV WDISKDDPE VQFSWFÍDDVEVHTAQTQPR EEQFNSTFRS 301 VSELPIMHQD WLNGKEFKCR VNSAAFPAPIEKTISKTKGR PKAPQVYTIP 351PPKEQMAKDE VSLTCMITDF FPEDITVEWQ HWGQPAENYK NTQPIMDTDG 401 SYFIYSKLNV QKSNWEA GNT FTCSVLIIEGL HNHHTEKSLS HSPGK (SEQID NO. 193)
Sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-11: 1 GAAGTTCAGC TGCAACAGTC TGGGGCAGAC CTTGTGCAGC CAGGGGCCTC 51 AGTCAAGGTG TCCTGCACAG CTTCTGGCTT CGACATTAAG GACTACTATA 101 TACACTGGAT GAAACAGAGG CCTGACCAGG GCCTGGAGTG GATTGGAAGG 151 GTTGATCCTG ACAATGGTGA GACTGAATTT GCCCCGAAGT TCCCGGGCAA 201 GGCCACTTTT ACAACAGACA CATCCTCCAA CACAGCCTAC CTACAACTCA 251 GAGGCCTGAC ATCTGAGGAC ACTGCCATCT ATTACTGTGG GAGAGAAGAC 301 TACGATGGTA CCTACACCTG GTTTCCTTAT TGGGGCCAAG GGACTCTGGT 351 CACTGTCTCT GCAGCCAAAA CGACACCCCC ATCTGTCTAT CCACTGGCCC 401 CTGGATCTGC TGCCCAAACT AACTCCATGG TGACCCTGGG ATGCCTGGTC 451 AAGGGCTATT TCCCTGAGCC AGTGACAGTG ACCTGGAACT CTGGATCCCT 501 GTCCAGCGGT GTGCACACCT TCCCAGCTGT CCTGCAGTCT GACCTCTACA 551 CTCTGAGCAG CTCAGTGACT GTCCCCTCCA GCACCTGGCC CAGCGAGACC 601 UTUACCTGCA ÃCGTTGCCCA CCCGGCCAGC AGCACCAAGG TGGACAAGAA 651 AATTGTGCCC AGGGATTGTG GTTGTAAGCC TTGCATATGT ACAGTCCCAG 701 AAGTATCATC TGTCTTCATC TTCCCCCCAA AGCCCAAGGA TGTGCTCACC 751 ATTACTCTGA CTCCTAAGGT CACGTGTGTT GTGGTAGACA TCAGCAAGGA 801 TGATCCCGAG GTCCAGTTCA GCTGGTTTGT AGATGATGTG GAGGTGCACA 851 CAGCTCAGAC GCAACCCCGG GAGGAGCAGT TCAACAGCAC TTTCCGCTCA 901 GTCAGTGAAC TTCCCATCAT GCACCAGGAC TGGCTCAATG GCAAGGAGTT 951 CAAATGCAGG GTCAACAGTG CAGCTTTCCC TGCCCCCATC GAGAAAACCA 1001 TCTCCAAAAC CAAAGGCAGA CCGAAGGCTC CACAGGTGTA CACCATTCCA 1051 CCTCCCAAGG AGCAGATGGC CAAGGATAAA GTCAGTCTGA CCTGCATGAT 1101 AACAGACTTC TTCCCTGAAG ACATTACTGT GGAGTGGCAG TGGAATGGGC 1151 AGCCAGCGGA GAACTACAAG AACACTCAGC CCATCATGGA CACAGATGGC 1201 TCTTACTTCA TCTACAGCAA GCTCAATGTG CAGAAGAGCA ACTGGGAGGC 1251 AGGAAATACT TTCACCTGCT CTGTGTTACA TGAGGGCCTG CACAACCACC 1301 ATACTGAGAA GAGCCTCTCC CACTCTCCTG GTAAATGA (SEQ ID NO: 194) 83 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de aminoácidos da HC de Ab-11 incluindo o péptido sinal: 1 MKCSWVIFFL MAVVTGVNSE VQLQQSGADL VQPGASVKVS CTASGFDIKD 51 YYIHWMKQRP DQGLEWIGRV DPDNGETEFA PKFPGKATFT TDTSSNTAYL 101 QLRGLTSEDT AIYYCGREDY DGTYTWFPYW GQGTLVTVSA AKTTPPSVYP 151 LAPGSAAQTN SMVTLGCLVK GYFPEPVTVT WNSGSLSSGV HTFPAVLQSD 201 LYTLSSSVTV PSSTWPSETV TCNVAHPASS TKVDKKIVPR DCGCKPCICT 251 VPEVSSVFIF PPKPKDVLTITLTPKVTCW VDISKDDPEV QFSWFVDDVE 301 VHTAQTQPRE EQFNSTFRSV SELPIMHQDW LNGKEFKCRV NSAAFPAPIE 351 KTISKTKGRP KAPQVYTIPP PKEQMAKDKV SLTCMITDFF PEDITVEWQW 401 NGQPAENYKN TQPIMDTDGS YFIYSKLNVQ KSNWEAGNTF TCSVLHEGLH 451 NHHTEKSLSH SPGK (SEQ DD NO: 195)
Sequência de ácido nucleico da HC de Ab-11 incluindo a sequência codificando o péptido sinal: 1 ATGAAATGCA GCTGGGTCAT CTTCTTCCTG ATGGCAGTGG TTACAGGGGT 51 CAATTCAGAA GTTCAGCTGC AACAGTCTGG GGCAGACCTT GTGCAGCCAG 101 GGGCCTCAGT CAAGGTGTCC TGCACAGCTT CTGGCTTCGA CATTAAGGAC 151 TACTATATAC ACTGGATGAA ACAGAGGCCT GACCAGGGCC TGGAGTGGAT 201 TGGAAGGGTT GATCCTGACA ATGGTGAGAC TGAATTTGCC CCGAAGTTCC 251 CGGGCAAGGC CACTTTTACA ACAGACACAT CCTCCAACAC AGCCTACCTA 301 CAACTCAGAG GCCTGACATC TGAGGACACT GCCATCTATT ACTGTGGGAG 351 AGAAGACTAC GATGGTACCT ACACCTGGTT TCCTTATTGG GGCCAAGGGA 401 CTCTGGTCAC TGTCTCTGCA GCCAAAACGA CACCCCCATC TGTCTATCCA 451 CTGGCCCCTG GATCTGCTGC CCAAACTAAC TCCATGGTGA CCCTGGGATG 501 CCTGGTCAAG GGCTATTTCC CTGAGCCAGT GACAGTGACC TGGAACTCTG 551 GATCCCTGTC CAGCGGTGTG CACACCTTCC CAGCTGTCCT GCAGTCTGAC 601 CTCTACACTC TGAGCAGCTC AGTGACTGTC CCCTCCAGCA CCTGGCCCAG 651 CGAGACCGTC ACCTGCAACG TTGCCCACCC GGCCAGCAGC ACCAAGGTGG 701 ACAAGAAAAT TGTGCCCAGG GATTGTGGTT GTAAGCCTTG CATATGTACA 751 GTCCCAGAAG TATCATCTGT CTTCATCTTC CCCCCAAAGC CCAAGGATGT 801 GCTCACCATT ACTCTGACTC CTAAGGTCAC GTGTGTTGTG GTAGACATCA 851 GCAAGGATGA TCCCGAGGTC CAGTTCAGCT GGTTTGTAGA TGATGTGGAG 901 GTGCACACAG CTCAGACGCA ACCCCGGGAG GAGCAGTTCA ACAGCACTTT 951 CCGCTCAGTC AGTGAACTTC CCATCATGCA CCAGGACTGG CTCAATGGCA 1001 AGGAGTTCAA ATGCAGGGTC AACAGTGCAG CTTTCCCTGC CCCCATCGAG 1051 AAAACCATcrUCAAAACCAA AGGCAGACCG AAGGCTCCAC AGGTGTACAC 1101 CATTCCACCT CCCAAGGAGC AGATGGCCAA GGATAAAGTC AGTCTGACCT 1151 GCATGATAAC AGACTTCTTC CCTGAAGACA TTACTGTGGA GTGGCAGTGG 1201 AATGGGCAGC CAGCGGAGAA CTACAAGAAC ACTCAGCCCA TCATGGACAC 1251 AGATGGCTCT TACTTCATCT ACAGCAAGCT CAATGTGCAG AAGAGCAACT 1301 GGGAGGCAGG AAATACTTTC ACCTGCTCTG TGTTACATGA GGGCCTGCAC 1351 AACCACCATA CTGAGAAGAG CCTCTCCCAC TCTCCTGGTA AATGA (SEQ ED NO: 196)
Ab-12
As sequências de LC e HC do Anticorpo 12 (também aqui referido como Ab-12) são como se segue: 84 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Cadeia Leve de Ab-12:
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-12: 1 DLQMTÇTTSS LSASLGDRVT ISCRASQDJS NYLNWYQQKP DGTVKLLIFVi 51 TSTLQSGVPS RFSGSGSGTN YSLTITNLEQ DDAATYFÇQQ GDTLPYTFGG 101 GTKLEÍKJL4Í) AAPTVSIFPP SSEQLTSGGA SVVCFLNNFYPKDÍNVKWKI 151DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT LTKDEYERHN SYTCEATHKT 201STSPIVKSFN RNEC (SEQID NO: 197)
Sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-12: I GATCTCCAGA TGACACAGAC TACTTCCTCC CTGTCTGCCT CTCTGGGAGA 51 CAGAGTCACC ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA GGACATTAGC AATTATTTAA 101 ACTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTG TTAAGCTCCT GATCTTCTAC 151 ACATCAACAT TACAGTCAGG AGTCCCATCG AGGTTCAGTG GCAGTGGGTC 201 TGGAACAAAT TATTCTCTCA CCATTACCAA CCTGGAGCAA GATGATGCTG 251 CCACTTACTT TTGCCAACAG GGTGATACGC TTCCGTACAC GTTCGGAGGG 301 GGGACCAAGC TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA CTGTATCCAT 351 CTTCCCACCA TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC TCAGTCGTGT 401 GCITCTTGAA CAACTTCTAC CCCAAAGACA TCAATGTCAA GTGGAAGATT 451 GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA CTGATCAGGA 501 CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG TTGACCAAGG 551 ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC TCACAAGACA 601 TCAACTTCAC CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT GTTAG (SEQ ID NO: 198)
Sequência de aminoácidos da LC de Ab-12 incluindo o péptido sinal: 1 MMSSAQFLGL LLLCFQGSRC DLQMTQTTSS LSASLGDRVT ISCRASQDIS 51 NYLNWYQQKP DGTVKLLIFY TSTLQSGVPS RFSGSGSGTN YSLTITNLEQ 101 DDAATYFCQQ GDTLPYTFGG GTKLEIKRAD AAPTVSIFPP SSEQLTSGGA 151 SVVCFLNNFY PKDÍNVKWKI DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT 201 LTKDEYERHN SYTCEATHKT STSPIVKSFN RNEC (SEQ ID NO: 199)
Sequência de ácido nucleico da LC de Ab-12 incluindo a sequência codificando o péptido sinal:
1 ATGATGTCCT CTGCTCAGTT CCTTGGTCTC CTGTTGCTCT GTTTTCAAGG 51 TTCCAGATGT GATCTCCAGA TGACACAGAC TACTTCCTCC CTGTCTGCCT 101 CTCTGGGAGA CAGAGTCACC ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA GGACATTAGC 85 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ 151 AATTATTTÂÃ SCTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTG TTAAGCTCCT 201 GATCTTCTAC ACATCAACAT TACAGTCAGG AGTCCCATCG AGGTTCAGTG 251 GCAGTGGGTC TGGAACAAAT TATTCTCTCA CCATTACCAA CCTGGAGCAA 301 GATGATGCTG CCACTTACTT TTGCCAACAG GGTGATACGC TTCCGTACAC 351 GTTCGGAGGG GGGACCAAGC TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA 401 CTGTATCCAT CTTCCCACCA TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC 451 TCAGTCGTGT GCTTCTTGAA CAACTTCTAC CCCAAAGACA TCAATGTCAA 501 GTGGAAGATT GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA 551 CTGATCAGGA CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG 601 TTGACCAAGG ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC 651 TCACAAGACA TCAACTTCAC CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT 701 GTTAG (SEQID N0:200)
Cadeia Pesada de Ab-12:
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-12: 1 EVQLQQSGPE LMKPGASVKM SCKASGYTFT DYNMHWMKQN QGKSLEWIGÈ 51 INiPNSGGSGY NQKFKGKATL TVDKSSSTAY MELRSLTSED SAVYYCARÍ/G 101 ;YYGNYEDWYF DVWGAGTTVT VSSAKT1PPS VYPLAPGSAA QTNSMVTLGC 151L VKGYFPEPVTVTWNSGSLS SGVHTFPA VL QSDLYTLSSS VTVPSSTWPS 201ETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSV FIFPPKPKDV 251 LTITLTPKVT CVJ^VDISKDD PE VQFSWFVD D VEVHTAQTQ PREEQFNSTF 301 RSVSELP1MH QDWLNGKEFK CRVNSAAFPA PIEKTISKTKGRPKAPQVYT 351JPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVE WQWNGQPAEN YKNTQPIMDT 401DGSYFIYSKL NVQKSNWEAG NTFTCSVLHE GLHNHHTEKS LSHSPGK (SEQ ID NO.201)
Sequência (péptido sinal de ácido removido) nucleico codificando a forma madura da HC de Ab-12:
1 GAGGTCCAGT TGCAACAGTC TGGACCTGAA CTAATGAAGC CTGGGGCTTC 51 AGTGAAGATG TCCTGCAAGG CTTCTGGATA CACATTCACT GACTACAACA 101TGCACTGGAT GAAGCAGAAC CAAGGAAAGA GCCTAGAGTG GATAGGAGAG 151ATTAATCCTA ACAGTGGTGG TTCTGGTTAC AACCAGAAGT TCAAAGGCAA 201 GGCCACATTG ACTGTAGACA AGTCCTCCAG CACAGCCTAC ATGGAGCTCC 251 GCAGCCTGAC ATCTGAGGAC TCTGCAGTCT ATTACTGTGC AAGATTGGGC 301 TACTATGGTA ACTACGAGGA CTGGTATTTC GATGTCTGGG GCGCAGGGAC 351 CACGGTCACC GTCTCCTCTG CCAAAACGAC ACCCCCATCT GTCTATCCAC 401TGGCCCCTGG ATCTGCTGCC CAAACTAACT CCATGGTGAC CCTGGGATGC 451 CTGGTCAAGG GCTATTTCCC TGAGCCAGTG ACAGTGACCT GGAACTCTGG 501 ATCCCTGTOC AGCGGTGTGC ACACCTTCCC AGCTGTCCTG CAGTCTGACC 551 TCTACACTCT GAGCAGCTCA GTGACTGTCC CCTCCAGCAC CTGGCCCAGC 601 GAGACCGTCA CCTGCAACGT TGCCCACCCG GCCAGCAGCA CCAAGGTGGA 651 CAAGAAAATT GTGCCCAGGG ATTGTGGTTG TAAGCCTTGC ATATGTACAG 701 TCCCAGAAGT ATCATCTGTC TTCATCTTCC CCCCAAAGCC CAAGGATGTG 751 CTCACCATTA CTCTGACTCC TAAGGTCACG TGTGTTGTGG TAGACATCAG 801 CAAGGATGAT CCCGAGGTCC AGTTCAGCTG GTTTGTAGAT GATGTGGAGG 851 TGCACACAGC TCAGACGCAA CCCCGGGAGG AGCAGTTCAA CAGCACTTTC 901 CGCTCAGTCA GTGAACTTCC CATCATGCAC CAGGACTG GC TCAATGGCAA 951 GGAGTTCAAA TGCAGGGTCA ACAGTGCAGC TTTCCCTGCC CCCATCGAGA 1001 AAACCATCTC CAAAACCAAA GGCAGACCGA AGGCTCCACA GGTGTACACC 1051 ATTCCACCTC CCAAGGAGCA GATGGCCAAG GATAAAGTCA GTCTGACCTG 86 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ 1101 C ATGÀTAÂdA^GACTTCTTCC CTGAAGACAT TACTGTGGAG TGGCAGTGGA 1151 ATGGGCAGCC AGCGGAGAAC TACAAGAACA CTCAGCCCAT CATGGACACA 1201 GATGGCTCTT ACTTCATCTA CAGCAAGCTC AATGTGCAGA AGAGCAACTG 1251 GGAGGCAGGA AATACTTTCA CCTGCTCTGT GTTACATGAG GGCCTGCACA 1301 ACCACCATAC TGAGAAGAGC CTCTCCCACT CTCCTGGTAA ATGA (SEQ Π> ΝΟ:202)
Sequência de aminoácidos da HC de Ab-12 incluindo o péptido sinal: 1 MGWSWTFLFL LSGTSGVLSE VQLQQSGPEL MKPGASVKMS CKASGYTFTD 51 YNMHWMKQNQ GKSLEWIGEINPNSGGSGYN QKFKGKATLT VDKSSSTAYM 101 ELRSLTSEDS AVYYCARLGY YGNYEDWYFD VWGAGTTVTV SSAKTTPPSV 151 YPLAPGSAAQ TNSMVTLGCL VKGYFPEPVT VTWNSGSLSS GVHTFPAVLQ 201 SDLYTLSSSV TVPSSTWPSE TVTCNVAHPA SSTKVDKKIV PRDCGCKPCI 251 CTVPEVSSVF IFPPKPKDVL TITLTPKVTC WVDISKDDP EVQFSWFVDD 301 VEVHTAQTQP REEQFNSTFR SVSELPIMHQ DWLNGKEFKC RVNSAAFPAP 351IEKTISKTKG RPKAPQVYTIPPPKEQMAKD KVSLTCMITD FFPEDITVEW 401 QWNGQPAENY KNTQPIMDTD GSYFIYSKLN VQKSNWEAGN TFTCSVLHEG 451 LHNHHTEKSL SHSPGK (SEQ ID NO:203)
Sequência de ácido nucleico da HC de Ab-12 incluindo a sequência codificando o péptido sinal: 1 ATGGGATGGA GCTGGACCTT TCTCTTCCTC CTGTCAGGAA CTTCGGGTGT 51 CCTCTCTGAG GTCCAGTTGC AACAGTCTGG ACCTGAACTA ATGAAGCCTG 101 GGGCTTC AGT GAAGATGTCC TGCAAGGCTT CTGGATACAC ATTCACTGAC 151 TACAACATGC ACTGGATGAA GCAGAACCAA GGAAAGAGCC TAGAGTGGAT 201 AGGAGAGATT AATCCTAACA GTGGTGGTTC TGGTTACAAC CAGAAGTTCA 251 AAGGCAAGGC CACATTGACT GTAGACAAGT CCTCCAGCAC AGCCTACATG 301 GAGCTCCGCA GCCTGACATC TGAGGACTCT GCAGTCTATT ACTGTGCAAG 351 ATTGGGCTAC TATGGTAACT ACGAGGACTG GTATTTCGAT GTCTGGGGCG 401 CAGGGACCAC GGTCACCGTC TCCTCTGCCA AAACGACACC CCCATCTGTC 451 TATCCACTGG CCCCTGGATC TGCTGCCCAA ACTAACTCCA TGGTGACCCT 501 GGGATGCCTG GTCAAGGGCT ATTTCCCTGA GCCAGTGACA GTGACCTGGA 551 ACTCTGGATC CCTGTCCAGC GGTGTGCACA CCTTCCCAGC TGTCCTGCAG 601 TCTGACCTCT ACACTCTGAG CAGCTCAGTG ACTGTCCCCT CCAGCACCTG 651 GCCCAGCGAG ACCGTCACCT GCAACGTTGC CCACCCGGCC AGCAGCACCA 701 AGGTGGACAA GAAAATTGTG CCCAGGGATT GTGGTTGTAA GCCTTGCATA 751 TGTACAGTCC CAGAAGTATC ATCTGTCTTC ATCTTCCCCC CAAAGCCCAA SOI GGATGTGCTC ACCATTACTC TGACTCCTAA GGTCACGTGT GTTGTGGTAG 851 ACATCAGCAA GGATGATCCC GAGGTCCAGT TCAGCTGGTT TGTAGATGAT 901 GTGGAGGTGC ACACAGCTCA GACGCAACCC CGGGAGGAGC AGTTCAACAG 951 CACTTTCCGC TCAGTCAGTG AACTTCCCAT CATGCACCAG GACTGGCTCA 1001 ATGGCAAGGA GTTCAAATGC AGGGTCAACA GTGCAGCTTT CCCTGCCCCC 1051 ATCGAGAAAA CCATCTCCAA AACCAAAGGC AGACCGAAGG CTCCACAGGT 1101 GTACACCATT CCACCTCCCA AGGAGCAGAT GGCCAAGGAT AAAGTCAGTC 1151 TGACCTGCAT GATAACAGAC TTCTTCCCTG AAGAC ATT AC TGTGGAGTGG 1201 CAGTGGAATG GGCAGCCAGC GGAGAACTAC AAGAACACTC AGCCCATCAT 1251 GGACACAGAT GGCTCTTACT TCATCTACAG CAAGCTCAAT GTGCAGAAGA 1301 GCAACTGGGA GGCAGGAAAT ACTTTCACCT GCTCTGTGTT ACATGAGGGC 1351 CTGCACAACC ACCATACTGA GAAGAGCCTC TCCCACTCTC CTGGTAAATG 1401 A (SEQ ED NO:204) 87 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Ab-13
As sequências de LC e HC do Anticorpo 13 (também aqui referido como Ab-13) são como se segue:
Cadeia Leve de Ab-13:
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-13: 1 QIVLTQSPAI MSASPGEKVT MTCRASSSVT SSYLNWYQQK PGSSPKLWIY 51 STSNLASGVP ARFSGSGSGT SYSLTISSVE AÊDAATYYCQ QYDFFPSTFG 101 GGTKLÉÍKA4 DAAPTVSIFP PSSEQLTSGG ASWCFLNNF ΫΡΚΌΙΝΙ'Κϊί'Κ 151LDGSERQNGV LNSWTDQDSKDSTYSMSSTL TLTKDEYERHNSYTCEATHE 201 TSTSPIVKSF NRNEC (SEQID NO:205)
Sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-13: 1 CAGATTGTTC TCACCCAGTC TCCAGCAATC ATGTCTGCAT CTCCAGGGGA 51 GAAGGTCACC ATGACCTGCA GGGCCAGCTC AAGTGTAACT TCCAGTTACT 101 TGAACTGGTA CCAGCAGAAG CCAGGATCTT CCCCCAAACT CTGGATTTAT 151 AGCACATCCA ACCTGGCTTC AGGAGTCCCA GCTCGCTTCA GTGGCAGTGG 201 GTCTGGGACC TCTTACTCTC TCACAATCAG CAGTGTGGAG GCTGAGGATG 251 CTGCCACTTA TTACTGCCAG CAGTATGATT TTTTCCCATC GACGTTCGGT 301 GGAGGCACCA AGCTGGAAAT CAAGCGGGCT GATGCTGCAC CAACTGTATC 351 CATCTTCCCA CCATCCAGTG AGCAGTTAAC ATCTGGAGGT GCCTCAGTCG 401 TGTGCTTCTT GAACAACTTC TACCCCAAAG ACATCAATGT CAAGTGGAAG 451 ATTGATGGCA GTGAACGACA AAATGGCGTC CTGAACAGTT GGACTGATCA 501 GGACAGCAAA GACAGCACCT ACAGCATGAG CAGCACCCTC ACGTTGACCA 551 AGGACGAGTA TGAACGACAT AACAGCTATA CCTGTGAGGC CACTCACAAG 601 ACATCAACTT CACCCATCGT CAAGAGCTTC AACAGGAATG AGTGT (SEQ ID NO:206)
Sequência de aminoácidos da LC de Ab-13 incluindo o péptido sinal: 1 MDSQVQIFSF LLISALVKMS RGQIVLTQSP AIMSASPGEK VTMTCRASSS 51 VTSSYLNWYQ QKPGSSPKLWIYSTSNLASG VPARPSGSGS GTSYSLTISS 101 VEAEDAATYY CQQYDFFPST FGGGTKLEIK RADAAPTVSI FPPSSEQLTS 151 GGASWCFLN NFYPKDINVK WKEDGSERQN GVLNSWTDQD SKDSTYSMSS 201 TLTLTKDEYE RHNSYTCEAT HKTSTSPIVK SFNRNEC (SEQ ID NO:207) 88 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de ácido nucleico da LC de Ab-13 incluindo a sequência codificando o péptido sinal: 1 ATGGATTCTC AAGTGCAGAT TTTCAGCTTC CTTCTAATCA GTGCCTTAGT 51 CAAAATGTCC AGAGGACAGA TTGTTCTCAC CCAGTCTCCA GCAATCATGT 101 CTGCATCTCC AGGGGAGAAG GTCACCATGA CCTGCAGGGC CAGCTCAAGT 151 GTAACTTCCA GTTACTTGAA CTGGTACCAG CAGAAGCCAG GATCTTCCCC 201 CAAACTCTGG ATTTATAGCA CATCCAACCT GGCTTCAGGA GTCCCAGCTC 251 GCTTCAGTGG CAGTGGGTCT GGGACCTCTT ACTCTCTCAC AATCAGCAGT 301 GTGGAGGCTG AGGATGCTGC CACTTATTAC TGCCAGCAGT ATGATTTTTT 351 CCCATCGACG TTCGGTGGAG GCACCAAGCT GGAAATCAAG CGGGCTGATG 401 CTGCACCAAC TGTATCCATC TTCCCACCAT CCAGTGAGCA GTTAACATCT 451 GGAGGTGCCT CAGTCGTGTG CTTCTTGAAC AACTTCTACC CCAAAGACAT 501 CAATGTCAAG TGGAAGATTG ATGGCAGTGA ACGACAAAAT GGCGTCCTGA 551 ACAGTTGGAC TGATCAGGAC AGCAAAGACA GCACCTACAG CATGAGCAGC 601 ACCCTCACGT TGACCAAGGA CGAGTATGAA CGACATAACA GCTATACCTG 651 TGAGGCCACT CACAAGACAT CAACTTCACC CATCGTCAAG AGCTTCAACA 701 GGAATGAGTG T (SEQID NO:208)
Cadeia Pesada de Ab-13:
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-13: 1 EVQLQQSGPE LVKPGASVKM SCKASGYTFT DYYMNWVKQS HGESLEWIGD 51INPYNDDTTY NHKEKGKATL TVDKSSNTAY MQLNSLTSED SAVYYCARET 101 AVITTNAMDY WGQGTSVTVS SAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLV 151 KGYFPEPVTV TWNSGSLSSG VHTFPA VLQS DL YTLSSS VT VPSSTWPSET 201 VTCNVAHPAS STKVDKKIVP RDCGCKPCIC TVPEVSSVFIFPPKPKDVLT 251ITLTPKVTCV WDISKDDPE VQFSWFVDD ΥΕ1ΉΤΑQTQPR EEQFNSTFRS 301 VSELPIMHQD WLNGKEFKCR VNSAAFPAPIEKTISKTKGR PKAPQVYTIP 351 PPKEQMAEDK VSLTCMITDF FPED1TVEWQ WNGQPAENYKNTQPIMDTDG 401 SYFIYSKLNV QKSNWEAGNT FTCSVLHEGL HNHHTEKSLS HSPGK (SEQ ID NO: 209) 89 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ Sequência (péptido sinal de ácido removido) nucleico codificando da HC de Ab-13: a forma madura 1 GAGGTCCAGC TGCAACAATC TGGACCTGAG CTGGTGAAGC CTGGGGCTTC 51 AGTGAAGATG TCCTGTAAGG CTTCTGGATA CACATTCACT GACTACTACA 101 TGAACTGGGT GAAGCAGAGC CATGGAGAGA GCCTTGAGTG GATTGGAGAT 151 ATTAATCCTT ACAACGATGA TACTACCTAC AACCACAAGT TCAAGGGCAA 201 GGCCACATTG ACTGTAGACA AATCCTCCAA CACAGCCTAC ATGCAGCTCA 251 ACAGCCTGAC ATCTGAGGAC TCTGCAGTCT ATTACTGTGC AAGAGAGACG 301 GCCGTTATTA CTACGAATGC TATGGACTAC TGGGGTCAAG GAACCTCAGT 351 CACCGTCTCC TCAGCCAAAA CGACACCCCC ATCTGTCTAT CCACTGGCCC 401 CTGGATCTGC TGCCCAAACT AACTCCATGG TGACCCTGGG ATGCCTGGTC 451 AAGGGCTATT TCCCTGAGCC AGTGACAGTG ACCTGGAACT CTGGATCCCT 501 GTCCAGCGGT GTGCACACCT TCCCAGCTGT CCTGCAGTCT GACCTCTACA 551 CTCTGAGCAG CTCAGTGACT GTCCCCTCCA GCACCTGGCC CAGCGAGACC 601 GTCACCTGCA ACGTTGCCCA CCCGGCCAGC AGCACCAAGG TGGACAAGAA 651 AATTGTGCCC AGGGATTGTG GTTGTAAGCC TTGCATATGT ACAGTCCCAG 701 AAGTATCATC TGTCTTCATC TTCCCCCCAA AGCCCAAGGA TGTGCTCACC 751 ATTACTCTGA CTCCTAAGGT CACGTGTGTT GTGGTAGACA TCAGCAAGGA 801 TGATCCCGAG GTCCAGTTCA GCTGGTTTGT AGATGATGTG GAGGTGCACA 851 CAGCTCAGAC GCAACCCCGG GAGGAGCAGT TCAACAGCAC TTTCCGCTCA 901 GTCAGTGAAC TTCCCATCAT GCACCAGGAC TGGCTCAATG GCAAGGAGTT 951 CAAATGCAGG GTCAACAGTG CAGCTTTCCC TGCCCCCATC GAGAAAACCA 1001 TCTCCAAAAC CAAAGGCAGA CCGAAGGCTC CACAGGTGTA CACCATTCCA 1051 CCTCCCAAGG AGCAGATGGC CAAGGATAAA GTCAGTCTGA CCTGCATGAT 1101 AACAGACTTC TTCCCTGAAG ACATTACTGT GGAGTGGCAG TGGAATGGGC 1151 AGCCAGCGGA GAACTACAAG AACACTCAGC CCATCATGGA CACAGATGGC 1201 TCTTACTTCA TCTACAGCAA GCTCAATGTG CAGAAGAGCA ACTGGGAGGC 1251 AGGAAATACT TTCACCTGCT CTGTGTTACA TGAGGGCCTG CACAACCACC 1301 ATACTGAGAA GAGCCTCTCC CACTCTCCTG GTAAA (SEQID NO:210)
Sequência de aminoácidos da HC de Ab-13 incluindo o péptido sinal: 1 MGWNWIFLFL LSGTAGVYSE VQLQQSGPEL VKPGASVKMS CKASGYTFTD 51 YYMNWVKQSH GESLEWIGDINPYNDDTTYN HKFKGKATLT VDKSSNTAYM 101 QLNSLTSEDS AVYYCARETA VITTNAMDYW GQGTSVTVSS AKTTPPSVYP 151 LAPGSAAQTN SMVTLGCLVK GYFPEPVTVT WNSGSLSSGV HTFPAVLQSD 201 LYTLSSSVTV PSSTWPSETV TCNVAHPASS TKVDKKIYPR DCGCKPCICT 251 VPEVSSVFIF PPKPKDVLTITLTPKVTCW VDISKDDPEV QFSWFVDDVE 301 VHTAQTQPRE EQFNSTFRSV SELPIMHQDW LNGKEFKCRV NSAAFPAPIE 351 KTISKTKGRP KAPQVYTIPP PKEQMAKDKV SLTCMITDFF PEDITVEWQW 401 NGQPAENYKN TQPIMDTDGS YFIYSKLNVQ KSNWEAGNTF TCSVLHEGLH 451 NHHTEKSLSH SPGK (SEQ ID NO:211) 90 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de ácido nucleico da HC de Ab-13 incluindo a sequência codificando o péptido sinal: 1 ATGGGATGGA ACTGGATCTT TCTCTTCCTC TTGTCAGGAA CTGCAGGTGT 51 CTACTCTGAG GTCCAGCTGC AACAATCTGG ACCTGAGCTG GTGAAGCCTG 101 GGGCTTCAGT GAAGATGTCC TGTAAGGCTT CTGGATACAC ATTCACTGAC 151 TACTACATGA ACTGGGTGAA GCAGAGCCAT GGAGAGAGCC TTGAGTGGAT 201 TGGAGATATT AATCCTTACA ACGATGATAC TACCTACAAC CACAAGTTCA 251 AGGGCAAGGC CACATTGACT GTAGACAAAT CCTCCAACAC AGCCTACATG 301 CAGCTCAACA GCCTGACATC TGAGGACTCT GCAGTCTATT ACTGTGCAAG 351 AGAGACGGCC GTTATTACTA CGAATGCTAT GGACT ACTGG GGTCAAGGAA 401 CCTCAGTCAC CGTCTCCTCA GCCAAAACGA CACCCCCATC TGTCTATCCA 451 CTGGCCCCTG GATCTGCTGC CCAAACTAAC TCCATGGTGA CCCTGGGATG 501 CCTGGTCAAG GGCTATTTCC CTGAGCCAGT GACAGTGACC TGGAACTCTG 551 GATCCCTGTC CAGCGGTGTG CACACCTTCC CAGCTGTCCT GCAGTCTGAC 601 CTCTACACTC TGAGCAGCTC AGTGACTGTC CCCTCCAGCA CCTGGCCCAG 651 CGAGACCGTC ACCTGCAACG TTGCCCACCC GGCCAGCAGC ACCAAGGTGG 701 ACAAGAAAAT TGTGCCCAGG GATTGTGGTT GTAAGCCTTG CATATGTACA 751 GTCCCAGAAG TATCATCTGT CTTCATCTTC CCCCCAAAGC CCAAGGATGT 801 GCTCACCATT ACTCTGACTC CTAAGGTCAC GTGTGTTGTG GTAGACATCA 851 GCAAGGATGA TCCCGAGGTC CAGTTCAGCT GGTTTGTAGA TGATGTGGAG 901 GTGCACACAG CTCAGACGCA ACCCCGGGAG GAGCAGTTCA ACAGCACTTT 951 CCGCTCAGTC AGTGAACTTC CCATCATGCA CCAGGACTGG CTCAATGGCA 1001 AGGAGTTCAA ATGCAGGGTC AACAGTGCAG CTTTCCCTGC CCCCATCGAG 1051 AAAACCATCT CCAAAACCAA AGGCAGACCG AAGGCTCCAC AGGTGTACAC 1101 CATTCCACCT CCCAAGGAGC AGATGGCCAA GGATAAAGTC AGTCTGACCT 1151 GCATGATAAC AGACTTCTTC CCTGAAGACA TTACTGTGGA GTGGCAGTGG 1201 AATGGGCAGC CAGCGGAGAA CTACAAGAAC ACTCAGCCCA TCATGGACAC 1251 AGATGGCTCT TACTTCATCT ACAGCAAGCT CAATGTGCAG AAGAGCAACT 1301 GGGAGGCAGG AAATACTTTC ACCTGCTCTG TGTTACATGA GGGCCTGCAC 1351 AACCACCATA CTGAGAAGAG CCTCTCCCAC TCTCCTGGTA AA (SEQID NO:212)
Ab-13 foi humanizado para gerar Ab-14.
As sequências de LC e HC do Anticorpo 14 (também aqui referido como Ab-14) são como se segue:
Cadeia Leve de Ab-14:
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-14: I DIQLTQSPSF LSASVGDRVTITCRASSSVf SSYLNWYQQK PGKAPKLLIY 51 STSNLÃS.GVP SRFSGSGSGT EFTLTÍSSLQ PEDFÀTYYdQ QYDFPPSTFG 101 GGTKVEIKír VAAPSVFIFP PSDEQLKSGTASWCLLNNF YPKEAKVQWK 151 VDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTL TLSKADYEKHKVYACEVTHQ 201 GLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:213) 91 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-14: 1 GACATCCAGC TGACCCAGAG CCCCAGCTTC CTTTCCGCAT CCGTTGGTGA 51 CCGAGTAACA ATCACATGCC GCGCCTCATC TTCAGTTACA TCTTCTTATC 101 TTAATTGGTA TCAACAAAAA CCAGGAAAAG CACCTAAACT TCTTATATAC 151 TCTACATCTA ATCTCGCATC AGGAGTTCCC TCTCGATTTT CAGGATCTGG 201 ATCAGGCACA GAATTTACAC TTACTATATC ATCACTCCAA CCAGAAGACT 251 TCGCCACTTA TTACTGCCAA CAATACGATT TTTTTCCAAG CACATTCGGA 301 GGAGGTACAA AAGTAGAAAT CAAGCGTACG GTGGCTGCAC CATCTGTCTT 351 CATCTTCCCG CCATCTGATG AGCAGTTGAA ATCTGGAACT GCCTCTGTTG 401 TGTGCCTGCT GAATAACTTC TATCCCAGAG AGGCCAAAGT ACAGTGGAAG 451 GTGGATAACG CCCTCCAATC GGGTAACTCC CAGGAGAGTG TCACAGAGCA 501 GGACAGCAAG GACAGCACCT ACAGCCTCAG CAGCACCCTG ACGCTGAGCA 551 AAGCAGACTA CGAGAAACAC AAAGTCTACG CCTGCGAAGT CACCCATCAG 601 GGCCTGAGCT CGCCCGTCAC AAAGAGCTTC AACAGGGGAG AGTGT (SEQ ID NO:214)
Sequência de aminoácidos da LC de Ab-14 incluindo o péptido sinal: 1 MDMRVPAQLL GLLLLWLPGA RCDIQLTQSP SFLSASVGDR VTITCRASSS 51 VTSSYLNWYQ QKPGKAPKLLIYSTSNLASG VPSRFSGSGS GTEFTLTISS 101 LQPEDFATYY CQQYDFFPST FGGGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKS 151 GTASVVCLLN NFYPREAKVQ WKVDNALQSG NSQESVTEQD SKDSTYSLSS 201 TLTLSKADYE KHKVYACEVT HQGLSSPVTK SFNRGEC (SEQ ID NO:215)
Sequência de ácido nucleico da LC de Ab-14 incluindo a sequência codificando o péptido sinal: 1 ATGGACATGA GGGTCCCCGC TCAGCTCCTG GGGCTCCTGC TACTCTGGCT 51 CCCAGGTGCC AGATGTGACA TCCAGCTGAC CCAGAGCCCC AGCTTCCTTT 101 CCGCATCCGT TGGTGACCGA GTAACAATCA CATGCCGCGC CTCATCTTCA 151 GTTACATCTT CTTATCTTAA TTGGTATCAA CAAAAACCAG GAAAAGCACC 201 TAAACTTCTr ATATACTCTA CATCTAATCT CGCATCAGGA GTTCCCTCTC 251 GATTTTCAGG ATCTGGATCA GGCACAGAAT TTACACTTAC TATATCATCA 301 CTCCAACCAG AAGACTTCGC CACTTATTAC TGCCAACAAT ACGATTTTTT 351 TCCAAGCACA TTCGGAGGAG GTACAAAAGT AGAAATCAAG CGTACGGTGG 401 CTGCACCATC TGTCTTCATC TTCCCGCCAT CTGATGAGCA GTTGAAATCT 451 GGAACTGCCT CTGTTGTGTG CCTGCTGAAT AACTTCTATC CCAGAGAGGC 501 CAAAGTACAG TGGAAGGTGG ATAACGCCCT CCAATCGGGT AACTCCCAGG 551 AGAGTGTCAC AGAGCAGGAC AGCAAGGACA GCACCTACAG CCTCAGCAGC 601 ACCCTGACGC TGAGCAAAGC AGACTACGAG AAACACAAAG TCTACGCCTG 651 CGAAGTCACC CATCAGGGCC TGAGCTCGCC CGTCACAAAG AGCTTCAACA 701 GGGGAGAGTG T (SEQ ID NO:216) 92 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Cadeia Pesada de Ab-14:
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-14: 1 EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT DYYMNWVRQA PGQRLEWMGD 51INPYNDDTTY NHKFKGRVTITRDTSASTAY MELSSLRSED TAVYYCARET 101 AV1TTNAMDY WGQGTTVTVS SASTKGPSVF PLAPCSRSTSESTAALGCL V 151ÍÍDYFPEPVTVSIWSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSW TVPSSNFGTQ 201 T\TCmn>HKP SNTKVDKTVE RKCCVECPPC PAPPVAGPSV FLFPPKPKDT 251LMISRTPEVT CWVDVSHED PEVQFNWYVD GVEVHNAKTKPREEQFNSTF 301R WSJ-ETVJ-TIQDWLNGKEYK CKVSNKGLPA PIEKT1SKTK GQPREPQVYT 351LPPSREEMTKNQVSLTCL\Ί( GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPMLDS 401DGSFFLYSKL TVDESRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQID NO:217)
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-14 sem a lisina carboxi-terminal: I EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT DYYMNWVRQA PGQRLEWMGS 51 INPYNDDTTY^HKFKQrVTI TRDTSASTAY MELSSLRSED TAVYYCARET 101 A VITTO AMD Y WGQGTTVTVS SASTKGPSVF PLAPCSRSTS ESTAALGCL V 151KD YFPEPVTV S WNSGAL TSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSW TVPSSNFGTQ 201 TYTCNVDHKP SNTKVDKTVE RKCCVECPPC PAPPVAGPSV FLFPPKPKDT 251 LMISRTPEVT CWi^DVSHED PEVQFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQFNSTF 301 ΚΥΎΞ\ΊΤ\·ΨΗQDWLNGKEYK CKVSNKGLPA PIEKTISKTKGQPREPQVYT 351LPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIA VE WESNGQPENN YKTTPPMLDS 401 DGSFFLYSKL TVDKSR WQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPG (SEQ ID NO:393)
Sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-14:
I GAGGTGCAGC TGGTGCAGAG CGGCGCCGAG GTCAAGAAAC CTGGAGCAAG 51 CGTAAAGGTT AGTTGCAAAG CATCTGGATA CACATTTACC GACTACTACA 101 TGAATTGGGT ACGACAAGCC CCTGGACAAA GACTTGAATG GATGGGAGAC 151 ATTAACCCTT ATAACGACGA CACTACATAC AATCATAAAT TTAAAGGAAG 201 AGTTACAATT ACAAGAGATA CATCCGCATC AACCGCCTAT ATGGAACTTT 251 CCTCATTGAG ATCTGAAGAC ACTGCTGTTT ATTACTGTGC AAGAGAAACT 301 GCCGTTATTA CTACTAACGC TATGGATTAC TGGGGTCAAG GAACCACTGT 3 51 TACCGTCTCT AGTGCCTCCA CCAAGGGCCC ATCGGTCTTC CCCCTGGCGC 401 CCTGCTCCAG GAGCACCTCC GAGAGCACAG CGGCCCTGGG CTGCCTGGTC 451 AAGGACTACT TCCCCGAACC GGTGACGGTG TCGTGGAACT CAGGCGCTCT 501 GACCAGCGGC GTGCACACCT TCCCAGCTGT CCTACAGTCC TCAGGACTCT 551 ACTCCCTCAG CAGCGTGGTG ACCGTGCCCT CCAGCAACTT CGGCACCCAG 601 ACCTACACCT GCAACGTAGA TCACAAGCCC AGCAACACCA AGGTGGACAA 651 GACAGTTGAG CGCAAATGTT GTGTCGAGTG CCCACCGTGC CCAGCACCAC 701 CTGTGGCAGG ACCGTCAGTC TTCCTCTTCC CCCCAAAACC CAAGGACACC 751 CTCATGATCT CCCGGACCCC TGAGGTCACG TGCGTGGTGG TGGACGTGAG 801 CCACGAAGAC CCCGAGGTCC AGTTCAACTG GTACGTGGAC GGCGTGGAGG 851 TGCATAATGC CAAGACAAAG CCACGGGAGG AGCAGTTCAA CAGCACGTTC 901 CGTGTGGTCA GCGTCCTCAC CGTTGTGCAC CAGGACTGGC TGAACGGCAA 951 GGAGTACAAG TGCAAGGTCT CCAACAAAGG CCTCCCAGCC CCCATCGAGA 1001 AAACCATCTC CAAAACCAAA GGGCAGCCCC GAGAACCACA GGTGTACACC 93 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ 1051 CTGCCCCCAT CCCGGGAGGA G ATG ACCAAG AACCAGGTCA GCCTG ACCTG 1101 CCTGGTCAAA GGCTTCTACC CCAGCGACAT CGCCGTGGAG TGGGAGAGCA 1151 ATGGGCAGCC GGAGAACAAC TACAAGACCA CACCTCCCAT GCTGGACTCC 1201 GACGGCTCCT TCTTCCTCTA CAGCAAGCTC ACCGTGGACA AGAGCAGGTG 1251 GCAGCAGGGG AACGTCTTCT CATGCTCCGT GATGCATGAG GCTCTGCACA 1301 ACCACTACAC GCAGAAGAGC CTCTCCCTGT CTCCGGGTAA A (SEQID ΝΟ:218)
Sequência de aminoácidos da HC de Ab-14 incluindo o péptido sinal: 1 MDWTWRILFL VAAATGAHSE VQLVQSGAEV KKPGASVKVS CKASGYTFTD 51 YYMNWVRQAP GQRLEWMGDINPYNDDTTYN HKFKGRVTIT RDTSASTAYM 101 ELSSLRSEDT AVYYCARETA VTTTNAMDYW GQGTTVTVSS ASTKGPSVFP 151 LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS 201 GLYSLSSVVT VPSSNFGTQT YTCNVDHKPS NTKVDKTVER KCCVECPPCP 251 APPVAGPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VWDVSHEDP EVQFNWYVDG 301 VEVHNAKTKP REEQFNSTFR WSVLTWHQ DWLNGKEYKC KVSNKGLPAP 351 IEKTISKTKG QPREPQVYTL PPSREEMTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW 401 ESNGQPENNY KTTPPMLDSD GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA 451 LHNHYTQKSL SLSPGK (SEQ ID NO:219)
Sequência de ácido nucleico da HC de Ab-14 incluindo a sequência codificando o péptido sinal:
1 ATGGACTGGA CCTGGAGGAT CCTCTTCTTG GTGGCAGCAG CCACAGGAGC 51 CCACTCCGAG GTGCAGCTGG TGCAGAGCGG CGCCGAGGTC AAGAAACCTG 101 GAGCAAGCGT AAAGGTTAGT TGCAAAGCAT CTGGATACAC ATTTACCGAC 151 TACTACATGA ATTGGGTACG ACAAGCCCCT GGACAAAGAC TTGAATGGAT 201 GGGAGACATT AACCCTTATA ACGACGACAC TACATACAAT CATAAATTTA 251 AAGGAAGAGT TACAATTACA AGAGATACAT CCGCATCAAC CGCCTATATG 301 GAACTTTCCT CATTGAGATC TGAAGACACT GCTGTTTATT ACTGTGCAAG 351 AGAAACTGCC GTTATTACTA CTAACGCTAT GGATTACTGG GGTCAAGGAA 401 CCACTGTTAC CGTCTCTAGT GCCTCCACCA AGGGCCCATC GGTCTTCCCC 451 CTGGCGCCCT GCTCCAGGAG CACCTCCGAG AGCACAGCGG CCCTGGGCTG 501 CCTGGTCAAG GACTACTTCC CCGAACCGGT GACGGTGTCG TGGAACTCAG 5 51 GCGCTCTGAC CAGCGGCGTG CACACCTTCC CAGCTGTCCT ACAGTCCTCA 601 GGACTCTACT CCCTCAGCAG CGTGGTGACC GTGCCCTCCA GCAACTTCGG 651 CACCCAGACC TACACCTGCA ACGTÁGATCA CAAGCCCAGC AACACCAAGG 701 TGGACAAGAC AGTTGAGCGC AAATGTTGTG TCGAGTGCCC ACCGTGCCCA 751 GCACCACCTG TGGCAGGACC GTCAGTCTTC CTCTTCCCCC CAAAACCCAA 801 GGACACCCTC ATGATCTCCC GGACCCCTGA GGTCACGTGC GTGGTGGTGG 851 ACGTGAGCCA CG AAGACCCC GAGGTCCAGT TCAACTGGTA CGTGGACGGC 901 GTGGAGGTGC ATAATGCCAA GACAAAGCCA CGGGAGGAGC AGTTCAACAG 951 CACGTTCCGT GTGGTCAGCG TCCTCACCGT TGTGCACC AG GACTGGCTGA 1001 ACGGCAAGGA GTACAAGTGC AAGGTCTCCA ACAAAGGCCT CCCAGCCCCC 1051 ATCGAGAAAA CCATCTCCAA AACCAAAGGG CAGCCCCGAG AACCACAGGT 1101 GTACACCCTG CCCCCATCCC GGGAGGAGAT GACCAAGAAC CAGGTCAGCC 1151 TGACCTGCCT GGTCAAAGGC TTCTACCCCA GCGACATCGC CGTGGAGTGG 1201 GAGAGCAATG GGCAGCCGGA GAACAACTAC AAGACCACAC CTCCCATGCT 1251 GGACTCCGAC GGCTCCTTCT TCCTCTACAG CAAGCTCACC GTGGACAAGA 1301 GCAGGTGGCA GCAGGGGAAC GTCTTCTCAT GCTCCGTGAT GCATGAGGCT 1351 CTGCAC AACC ACTACACGCA GAAGAGCCTC TCCCTGTCTC CGGGTAAA (SEQ”IDNOT22Õ) 94 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
As sequências de CDR na região variável da cadeia pesada de Ab-14 são: CDR-H1 CDR-H2 CDR-H3 DYYMN (SEQ ID NO:296) DINPYNDDTTYNHKFKG (SEQ ID NO:297) ETAVITTNAMD (SEQ ID NO:298)
As sequências de CDR da região variável da cadeia leve de Ab-14 são: CDR-L1 CDR-L2 CDR-L3 RASSSVTSSYLN (SEQ ID NO:284) STSNLAS (SEQ ID NO:285) QQYDFFPST (SEQ ID NO:286)
Dominios variáveis de Ab-14:
Sequência de aminoácidos do dominio variável da cadeia leve de Ab-14 (sem o péptido sinal): 1 DIQLTQSPSF LSASVGDRVT ITCRÀSS|VT SSYLNWYQQK PGKAPKLLIY 51 STSNLASlGVP SRFSGSGSGT EFTLTISSLQ PEDFÁTYYÇQ QYDFFPSTFG 101 GGTKVEIK (SEQ ID NO:380) .....
Sequência de ADN do dominio variável da cadeia leve de Ab-14 (sem a sequência sinal): 1 GACATCCAGC TGACCCAGAG CCCCAGCTTC CTTTCCGCAT CCGTTGGTGA 51 CCGAGTAACA ATCACATGCC GCGCCTCATC TTCAGTTACA TCTTCTTATC 101 TTAATTGGTA TCAACAAAAA CCAGGAAAAG CACCTAAACT TCTTATATAC 151 TCTACATCTA ATCTCGCATC AGGAGTTCCC TCTCGATTTT CAGGATCTGG 201 ATCAGGCACA GAATTTACAC TTACTATATC ATCACTCCAA CCAGAAGACT 251 TCGCCACTTA TTACTGCCAA CAATACGATT TTTTTCCAAG CACATTCGGA 301 GGAGGTACAA AAGT AGAAAT CAAG (SEQ ID NO:381)
Sequência de aminoácidos do dominio variável da cadeia pesada de Ab-14 (sem o péptido sinal): 1 EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT DYYMNWVRQA PGQRLEWMGÍ5; 51 INPYT^DTTYNEIKFKGRVTI TRDTSASTAY MELSSLRSED TAVYYCARET. 101 AV1TTNAMDY WGQGTTVTVS S (SEQIDNO:382) 95 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de ADN do domínio variável da cadeia pesada de Ab-14 (sem a sequência sinal): 1 GAGGTGCAGC TGGTGCAGAG CGGCGCCGAG GTCAAGAAAC CTGGAGCAAG 51 CGTAAAGGTT AGTTGCAAAG CATCTGGATA CACATTTACC GACTACTACA 101 TGAATTGGGT ACGACAAGCC CCTGGACAAA GACTTGAATG GATGGGAGAC 151 ATTAACCCTT ATAACGACGA CACTACATAC AATCATAAAT TTAAAGGAAG 201 AGTTACAATT ACAAGAGATA CATCCGCATC AACCGCCTAT ATGGAACTTT 251 CCTCATTGAG ATCTGAAGAC ACTGCTGTTT ATTACTGTGC AAGAGAAACT 301 GCCGTTATTÀCTACTAACGC TATGGATTAC TGGGGTCAAG GAACCACTGT 351 TACCGTCTCT AGT (SEQID NO:383)
Ab-3 foi humanizado para gerar Ab-15.
Ab-15
As sequências de LC e HC do Anticorpo 15 (também aqui referido como Ab-15) são como se segue:
Cadeia Leve de Ab-15:
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-15: 1 DIQMTQSPSS LSASVGDRVTITCSVSSTIS 'SNHLÉWFQQK PGKAPKSLIY 51 pTSNLASGVP SRFSGSGSGT DFTLTISSLQ PEDFÁTYYCQ QWSSYPLTFG 101 GGTKVÉIKRr VAAPSVFIFPPSDEOLKSGT ASWCLLNNF YPRÈÀKVQWK 151 VDNALQSGNS QESVTEQDSK DSTYSLSSTL TLSKADYEKHKVYACEJ-THQ 201 GLSSPVTKSF NRGEC (SEQ ID NO:221)
Sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-15: 1 GACATCCAGA TGACCCAGTC TCCATCCTCC CTCTCAGCAT CCGTAGGCGA 51 TAGAGTTACA ATAACATGCA GCGTATCATC AACTATATCA TCAAATCATC 101 TTCATTGGTT CCAACAGAAA CCCGGCAAAG CACCTAAATC ACTTATATAC 151 GGCACATCAA ATCTCGCATC AGGCGTTCCT TCAAGATTTT CAGGCTCTGG 201 CTCAGGCACC GACTTTACTC TTACAATATC CTCCCTCCAA CCCGAAGACT 251 TCGCAACCTA TTACTGTCAA CAATGGTCCT CATATCCACT CACATTTGGC 301 GGCGGCACAA AAGTAGAAAT TAAACGTACG GTGGCTGCAC CATCTGTCTT 351 CATCTTCCCG CCATCTGATG AGCAGTTGAA ATCTGGAACT GCCTCTGTTG 401 TGTGCCTGCT GAATAACTTC TATCCCAGAG AGGCCAAAGT ACAGTGGAAG 451 GTGGATAACG CCCTCCAATC GGGTAACTCC CAGGAGAGTG TCACAGAGCA 501 GGACAGCAAG GACAGCACCT ACAOCCTCAG CAGCACCCTG ACGCTGAGCA 551 AAGCAGACTA CGAGAAACAC AAAGTCTACG CCTGCGAAGT CACCCATCAG 601 GGCCTGAGCT CGCCCGTCAC AAAGAGCTTC AACAGGGGAG AGTGT (SEQ ID NO:222) 96 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de aminoácidos da LC de Ab-15 incluindo o péptido sinal: 1 MDMRVPAQLL GLLLLWLRGA RCDIQMTQSP SSLSASVGDR VTITCSVSST 51ISSNHLHWFQ QKPGKAPKSLIYGTSNLASG VPSRFSGSGS GTDFTLTISS 101 LQPEDFATYY CQQWSSYPLT FGGGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKS 151 GTASWCLLN NFYPREAKVQ WKVDNALQSG NSQESVTEQD SKDSTYSLSS 201 TLTLSKADYE KHKVYACEVT HQGLSSPVTK SFNRGEC (SEQID NO:223)
Sequência de ácido nucleico da LC de Ab-15 incluindo a sequência codificando o péptido sinal: 1 ATGGACATGA GGGTCCCCGC TCAGCTCCTG GGGCTCCTGC TACTCTGGCT 51 CCGAGGTGCC AGATGTGACA TCCAGATGAC CCAGTCTCCA TCCTCCCTCT 101 CAGCATCCGT AGGCGATAGA GTTACAATAA CATGCAGCGT ATCATCAACT 151 ATATCATCAA ATCATCTTCA TTGGTTCCAA CAGAAACCCG GCAAAGCACC 201 TAAATCACTT ATATACGGCA CATCAAATCT CGCATCAGGC GTTCCTTCAA 251 GATTTTCAGG CTCTGGCTCA GGCACCGACT TTACTCTTAC AATATCCTCC 301 CTCCAACCCG AAGACTTCGC AACCTATTAC TGTCAACAAT GGTCCTCATA 351 TCCACTCACA TTTGGCGGCG GCACAAAAGT AGAAATTAAA CGTACGGTGG 401 CTGCACCATC TGTCTTCATC TTCCCGCCAT CTGATGAGCA GTTGAAATCT 451 GGAACTGCCT CTGTTGTGTG CCTGCTGAAT AACTTCTATC CCAGAGAGGC 501 CAAAGTACAG TGGAAGGTGG ATAACGCCCT CCAATCGGGT AACTCCCAGG 551 AGAGTGTCAC AGAGCAGGAC AGCAAGGACA GCACCTACAG CCTCAGCAGC 601 ACCCTGACGC TGAGCAAAGC AGACTACGAG AAACACAAAG TCTACGCCTG 651 CGAAGTCACC CATCAGGGCC TGAGCTCGCC CGTCACAAAG AGCTTCAACA 701 GGGGAGAGTG T (SEQ ID NO:224)
Cadeia Pesada de Ab-15
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-15. 1 EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASDFNIK DPYLHWVRQA PGQGLEWIGR 51 IDPÉNGDTEY DPíCFQDKVTM TTDTSTSTAY MELRSLRSDD TAVYYCAREA 10 ID YFHDGTSYWlYFDViWGRGTL VYVSSASTKG PSVFPLAPCS RSTSESTAAL 151 GCLVKDYFPÈPVTVSWNSGA LTSGVHTFPA WQSSGLYSL SSWTVPSSN 201 FGTQTYTCNV DHKPSNTKVD KTVERKCCVE CPPCPAPPVA GPSVFLFPPK 251 FKDTLMISRT PEVTCWVDV SHEDPEVQFN WYVDG FE VHN AKTKPREEQF 301NSTFRWSVL TWHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREP 351 QVYTLPPSRE EMTKNQVSLT CL VKGFYPSD IA VEWESNGQ PENNYKTTPP 401MLDSDGSFFL YSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG 451K (SEQ ID NO:225) 97 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-15 sem a lisina carboxi-terminal: 1 EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASDFNIK DIYLHWVRQA PGQGLEWIGR 51IDPÈNGDTLY DPKEQDKVTM TTDTSTSTAY MELRSLRSDD TAVYYCAREA 101 DYFHDGTSYW YFDV.WGRGTL VTVSSASTKG PSVFPLAPCS RSTSESTAAL 151 GCLVKDYFPE PVTVSWWSGA LTSGVHTFPA VLQSSGLYSL SSWTVPSSN 201 FGTQTYTCNVDHKPSNTKVD KTVERKCCVE CPPCPAPPVA GPSVFLFPPK 251 PKD TLMISR T PE VTCWVD V SHEDPE VQFN WYVDGVEVHN AKTKPREEQF 301NSTFKWSVL TWHQDWLNGKEYKCKVSNK GLPAPIEKTISKTKGQPREP 351 QIHTTLPPSRE EMTKNQVSLT CLVKGFYPSD IA VEWESNGQ PENNYKTTPP 401 MLDSDGSFFL YSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG 451 (SEQID NO:394)
Sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-15: 1 GAGGTGCAGC TGGTGCAGTC TGGGGCTGAG GTGAAGAAGC CTGGGGCCTC 51 AGTGAAGGTC TCCTGCAAGG CTTCTGACTT CAACATTAAA GACTTCTATC 101 TACACTGGGT GCGACAGGCC CCTGGACAAG GGCTTGAGTG GATTGGAAGG 151 ATTGATCCTG AGAATGGTGA TACTTTATAT GACCCGAAGT TCCAGGACAA 201 GGTCACCATG ACCACAGACA CGTCCACCAG CACAGCCTAC ATGGAGCTGA 251 GGAGCCTGAG ATCTGACGAC ACGGCCGTGT ATTACTGTGC GAGAGAGGCG 301 GATTATTTCC ACGATGGTAC CTCCTACTGG TACTTCGATG TCTGGGGCCG 351 TGGCACCCTG GTCACCGTCT CTAGTGCCTC CACCAAGGGC CCATCGGTCT 401 TCCCCCTGGC GCCCTGCTCC AGGAGCACCT CCGAGAGCAC AGCGGCCCTG 451 GGCTGCCTGG TCAAGGACTA CTTCCCCGAA CCGGTGACGG TGTCGTGGAA 501 CTCAGGCGCT CTGACCAGCG GCGTGCACAC CTTCCCAGCT GTCCTACAGT 551 CCTCAGGACT CTACTCCCTC AGCAGCGTGG TGACCGTGCC CTCCAGCAAC 601 TTCGGCACCC AGACCTACAC CTGCAACGTA GATCACAAGC CCAGCAACAC 651 CAAGGTGGAC AAGACAGTTG AGCGCAAATG TTGTGTCGAG TGCCCACCGT 701 GCCCAGCACC ACCTGTGGCA GGACCGTCAG TCTTCCTCTT CCCCCCAAAA 751 CCCAAGGACA CCCTCATGAT CTCCCGGACC CCTGAGGTCA CGTGCGTGGT 801 GGTGGACGTG AGCCACGAAG ACCCCGAGGT CCAGTTCAAC TGGTACGTGG 851 ACGGCGTGGA GGTGCATAAT GCCAAGACAA AGCCACGGGA GGAGCAGTTC 901 AACAGCACGT TCCGTGTGGT CAGCGTCCTC ACCGTTGTGC ACCAGGACTG 951 GCTGAACGGC AAGGAGTACA AGTGCAAGGT CTCCAACAAA GGCCTCCCAG 1001 CCCCCATCGA GAAAACCATC TCCAAAACCA AAGGGCAGCC CCGAGAACCA 1051 CAGGTGTACA CCCTGCCCCC ATCCCGGGAG GAGATGACCA AGAACCAGGT 1101 CAGCCTGACC TGCCTGGTCA AAGGCTTCTA CCCCAGCGAC ATCGCCGTGG 1151 AGTGGGAGAG CAATGGGCAG CCGGAGAACA ACTACAAGAC CACACCTCCC 1201 ATGCTGGACT CCGACGGCTC CTTCTTCCTC TACAGCAAGC TCACCGTGGA 1251 CAAGAGCAGG TGGCAGCAGG GGAACGTCTT CTCATGCTCC GTGATGCATG 1301 AGGCTCTGCA CAACCACTAC ACGCAGAAGA GCCTCTCCCT GTCTCCGGGT 1351 AAA (SEQ ID NO:226) 98 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de aminoácidos da HC de Ab-15 incluindo o péptido sinal: 1 MDWTWRILFL VAAATGAHSE VQLVQSGAEV KKPGASVKVS CKASDFNIKD 51 FYLHWVRQAP GQGLEWIGRIDPENGDTLYD PKFQDKVTMT TDTSTSTAYM 101 ELRSLRSDDT AVYYCAREAD YFHDGTSYWY FDVWGRGTLV TVSSASTKGP 151 SVFPLAPCSR STSESTAALG CLVKDYFPEP VTVSWNSGAL TSGVHTFPAV 201 LQSSGLYSLS SWTVPSSNF GTQTYTCNVD HKPSNTKVDK TVERKCCVEC 251 PPCPAPPVAG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVWDVS HEDPEVQFNW 301 YVDGVEVHNA KTKPREEQFN STFRVVSVLT WHQDWLNGK EYKCKVSNKG 351 LPAPIEKTIS KTKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI 401 AVEWESNGQP ENNYKTTPPM LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV 451 MHEALHNHYT QKSLSLSPGK (SEQ CD NO:227)
Sequência nucleotidica da HC de Ab-15 incluindo a sequência codificando o péptido sinal: 1 ATGGACTGGA CCTGGAGGAT CCTCTTCTTG GTGGCAGCAG CCACAGGAGC 51 CCACTCCGAG GTGCAGCTGG TGCAGTCTGG GGCTGAGGTG AAGAAGCCTG 101 GGGCCTCAGT GAAGGTCTCC TGCAAGGCTT CTGACTTCAA CATTAAAGAC 151 TTCTATCTAC ACTGGGTGCG ACAGGCCCCT GGACAAGGGC TTGAGTGGAT 201 TGGAAGGATT GATCCTGAGA ATGGTGATAC TTTATATGAC CCGAAGTTCC 251 AGGACAAGGT CACCATGACC ACAGACACGT CCACCAGCAC AGCCTACATG 301 GAGCTGAGGA GCCTGAGATC TGACGACACG GCCGTGTATT ACTGTGCGAG 351 AGAGGCGGAT TÀTTTCCACG ATGGTACCTC CTACTGGTAC TTCGATGTCT 401 GGGGCCGTGG CACCCTGGTC ACCGTCTCTA GTGCCTCCAC CAAGGGCCCA 451 TCGGTCTTCC CCCTGGCGCC CTGCTCCAGG AGCACCTCCG AGAGCACAGC 501 GGCCCTGGGC TGCCTGGTCA AGGACTACTT CCCCGAACCG GTGACGGTGT 551 CGTGGAACTC AGGCGCTCTG ACCAGCGGCG TGCACACCTT CCCAGCTGTC 601 CTACAGTCCT CAGGACTCTA CTCCCTCAGC AGCGTGGTGA CCGTGCCCTC 651 CAGCAACTTC GGCACCCAGA CCTACACCTG CAACGTAGAT CACAAGCCCA 701 GCAACACCAA GGTGGACAAG ACAGTTGAGC GCAAATGTTG TGTCGAGTGC 751 CCACCGTGCC CAGCACCACC TGTGGCAGGA CCGTCAGTCT TCCTCTTCCC 801 CCCAAAACCC AAGGACACCC TCATGATCTC CCGGACCCCT GAGGTCACGT 851 GCGTGGTGGT GGACGTGAGC CACGAAGACC CCGAGGTCCA GTTCAACTGG 901 TACGTGGACG GCGTGGAGGT GCATAATGCC AAGACAAAGC CACGGGAGGA 951 GCAGTTCAAC AGCACGTTCC GTGTGGTCAG CGTCCTCACC GTTGTGCACC 1001 AGGACTGGCT GAACGGCAAG GAGTACAAGT GCAAGGTCTC CAACAAAGGC 1051 CTCCCAGCCC CCATCGAGAA AACCATCTCC AAAACCAAAG GGCAGCCCCG 1101 AGAACCACAG GTGTACACCC TGCCCCCATC CCGGGAGGAG ATGACCAAGA 1151 ACCAGGTCAG CCTGACCTGC CTGGTCAAAG GCTTCTACCC CAGCGACATC 1201 GCCGTGGAGT GGGAGAGCAA TGGGCAGCCG GAGAACAACT ACAAGACCAC 1251 ACCTCCCATG CTGGACTCCG ACGGCTCCTT CTTCCTCTAC AGCAAGCTCA 1301 CCGTGGACAA GAGCAGGTGG CAGCAGGGGA ACGTCTTCTC ATGCTCCGTG 1351 ATGCATGAGG CTCTGCACAA CCACTACACG CAGAAGAGCC TCTCCCTGTC 1401 TCCGGGTAAA (SEQ ID NO:228) 99 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
As sequências de CDR da região variável da cadeia pesada de Ab-15 são: CDR-H1 CDR-H2 CDR-H3 DFYLH (SEQ ID NO:290) RIDPENGDTLYDPKFQD (SEQ ID NO:291) EADYFHDGTSYWYFDV (SEQ ID NO:292)
As sequências de CDR da região variável da cadeia leve de Ab-15 são: CDR-L1 CDR-L2 CDR-L3 SVSSTISSNHLH (SEQ ID NO:278) GTSNLAS (SEQ ID NO:279) QQWSSYPLT (SEQ ID NO:280)
Domínios variáveis de Ab-15:
Sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia leve de Ab-15 (sem o péptido sinal): 1 DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITdSYSSmsMLIíWFQQK PGKAPKSLIY 51 GTSNLÀSGVP SRFSGSGSGT DFrLTISSLQPEDFATYYCQQW^SYPLTFG 101 GGTKVEK (SEQID NO:384)
Sequência de ADN do domínio variável da cadeia leve de Ab-15 (sem a sequência sinal): 1 GACATCCAGA TGACCCAGTC TCCATCCTCC CTCTCAGCAT CCGTAGGCGA 51 TAGAGTTACA ATAACATGCA GCGTATCATC AACTATATCA TCAAATCATC 101 TTCATTGGTT CCAACAGAAA CCCGGCAAAG CACCTAAATC ACTTATATAC 151 GGCACATCAA ATCTCGCATC AGGCGTTCCT TCAAGATTTT CAGGCTCTGG 201 CTCAGGCACC GACTTTACTC TTACAATATC CTCCCTCCAA CCCGAAGACT 251 TCGCAACCTA TTACTGTCAA CAATGGTCCT CATATCCACT CACATTTGGC 301 GGCGGCACAA AAGTAGAAAT TAAA (SEQ ID NO:385)
Sequência de aminoácidos do domínio variável da cadeia pesada de Ab-15 (sem o péptido sinal): 1 EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASDFNIK DFYLHWVRQA PGQGLEWIGR 511DPENGDTLY DPKFQDKVTM TTDTSTSTAY MÉLRSLRSDD TAVYYCAREA 101 DYFHDGTSYW YFDVWGRGTL VTVSS (SEQ ID NO:386) 100 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de ADN do domínio variável da cadeia pesada de Ab-15 (sem a sequência sinal): 1 GAGGTGCAGC TGGTGCAGTC TGGGGCTGAG GTGAAGAAGC CTGGGGCCTC 51 AGTGAAGGTC TCCTGCAAGG CTTCTGACTT CAACATTAAA GACTTCTATC 101 TACACTGGGT GCGACAGGCC CCTGGACAAG GGCTTGAGTG GATTGGAAGG 151 ATTGATCCTG AGAATGGTGA TACTTTATAT GACCCGAAGT TCCAGGACAA 201 GGTCACCATG ACCACAGACA CGTCCACCAG CACAGCCTAC ATGGAGCTGA 251 GGAGCCTGAG ATCTGACGAC ACGGCCGTGT ATTACTGTGC GAGAGAGGCG 301 GATTATTTCC ACGATGGT AC CTCCTACTGG TACTTCGATG TCTGGGGCCG 351 TGGCACCCTG GTCACCGTCT CTAGT (SEQID NO:387)
Ab-11 foi humanizado para gerar Ab-16.
Ab-16
As sequências de LC e HC do Anticorpo 16 (também aqui referido como Ab-16) são como se segue:
Cadeia Leve de Ab-16:
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-16: 1 DIQLTQSPSF LSASVGDRVT lTCRASSS^YfflWYQQKPG KAPKLLIYAT 51 SNLASGVPSR FSGSGSGTEF TLTÍSSLQPÈ DFATYYCjQQW ^DPLTFGGG 101 TKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTAS WCLLNNFYP REAKVQWKVD 151NALQSGNSQE SVTEQDSKDS TYSLSSTLTL SKADYEKHKV YACEVTBQGL 201SSPITKSFNR GEC (SEQ ID NO:229)
Sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-16: 1 GACATCCAGT TGACCCAGTC TCCATCCTTC CTGTCTGCAT CTGTAGGAGA 51 CAGAGTCACC ATCACTTGCA GGGCCAGCTC AAGTATAAGT TACATACACT 101 GGTATCAGCA AAAACCAGGG AAAGCCCCTA AGCTCCTGAT CTATGCCACA 151 TCCAACCTGG CTTCTGGGGT CCCATCAAGG TTCAGCGGCA GTGGATCTGG 201 GACAGAATTC ACTCTCACAA TCAGCAGCCT GCAGCCTGAA GATTTTGCAA 251 CTTATTACTG TCAGCAGTGG AGTAGTGACC CACTCACGTT CGGCGGAGGG 301 ACCAAGGTGG AGATCAAACG TACGGTGGCT GCACCATCTG TCTTCATCTT 351 CCCGCCATCT GATGAGCAGT TGAAATCTGG AACTGCCTCT GTTGTGTGCC 401 TGCTGAATAA CTTCTATCCC AGAGAGGCCA AAGTACAGTG GAAGGTGGAT 451 AACGCCCTCC AATCGGGTAA CTCCCAGGAG AGTGTCACAG AGC AGGACAG 501 CAAGGACAGC ACCTACAGCC TCAGCAGCAC CCTGACGCTG AGCAAAGCAG 551 ACTACGAGAA ACACÀAAGTC TACGCCTGCG AAGTCACCCA TCAGGGCCTG 601 AGCTCGCCCG TCACAAAGAG CTTCAACAGG GGAGAGTGT (SEQ ID NO:230) 101 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de aminoácidos da LC de Ab-16 incluindo o péptido sinal: 1 MDMRVPAQLL GLLLLWLPGA RCDIQLTQSP SFLSASVGDR VTITCRASSS 51ISYIHWYQQK PGKAPKLLIY ATSNLASGVP SRFSGSGSGT EFTLΉSSLQ 101 PEDFATYYCQ QWSSDPLTFG GGTKVEIKRT VAAPSVFIFP PSDEQLKSGT 151 ASVVCLLNNF YPREAKVQWK VDNALQSGNS QESVTEQDSK DSTYSLSSTL 201 TLSKADYEKH KVYACEVTHQ GLSSPVTKSF NRGEC (SEQ ID NO:231)
Sequência de ácido nucleico da LC de Ab-16 incluindo a sequência codificando o péptido sinal: 1 ATGGACATGA GGGTCCCCGC TCAGCTCCTG GGGCTCCTGC TGCTCTGGCT 51 CCCAGGTGCC AGATGTGACA TCCAGTTGAC CCAGTCTCCA TCCTTCCTGT 101 CTGCATCTGT AGGAGACAGA GTCACCATCA CTTGCAGGGC CAGCTCAAGT 151 ATAAGTTACA TACACTGGTA TCAGCAAAAA CCAGGGAAAG CCCCTAAGCT 201 CCTGATCTAT GCCACATCCA ACCTGGCTTC TGGGGTCCCA TCAAGGTTCA 251 GCGGCAGTGG ATCTGGGACA GAATTCACTC TCACAATCAG CAGCCTGCAG 301 CCTGAAGATT TTGCAACTTA TTACTGTCAG CAGTGGAGTA GTGACCCACT 351 CACGTTCGGC GGAGGGACCA AGGTGGAGAT CAAACGTACG GTGGCTGCAC 401 CATCTGTCTT CATCTTCCCG CCATCTGATG AGCAGTTGAA ATCTGGAACT 451 GCCTCTGTTG TGTGCCTGCT GAATAACTTC TATCCCAGAG AGGCCAAAGT 501 ACAGTGGAAG GTGGATAACG CCCTCCAATC GGGTAACTCC CAGGAGAGTG 551 TCACAGAGCA GGACAGCAAG GACAGCACCT ACAGCCTCAG CAGCACCCTG 601 ACGCTGAGCA AAGCAGACTA CGAGAAACAC AAAGTCTACG CCTGCGAAGT 651 CACCCATCAG GGCCTGAGCT CGCCCGTCAC AAAGAGCTTC AACAGGGGAG 701 AGTGT (SEQ ID NO:232)
Cadeia Pesada de Ab-16:
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-16:
1 EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGFDIKDYyiHWVRQA PGQGLEWIGR 51 VDPPNGETEF ÁPOPGKVTM TTDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARED lOllypGTYTWFPY WGQGTLVTVS SASTKGPSVF PLAPCSRSTS ESTAALGCLV 151KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPA VLQS SGLYSLSSVV TVPSSNFGTQ 201 TYTCNVDHKP SNTKVDKTVE RKCCVECPPC PAPPVAGPSV FLFPPKPKDT 251LMISRTPEVTCWVDVSHED PEVQFNWYVD GVEVHNAKTKPREEQFNSTF 301RWSVLTWH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPA PIEKTISKTKGQPREPQVYT 351LPPSREEMTK NQ VSL TCL VK GFYPSDIA VE WESNGQPENN YKTTPPMLDS 401 UGòFFJLYSKL l VDKSR WQQG N)FSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGK (SEQ ID NO:233) 102 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-16 sem a lisina carboxi-terminal: 1 EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGFDIKDYYIHWVRQA PGQGLEWIGft 51 VDPDNGÉfEF ÁPKFPGKVTM TTDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCAEEO 101 lYDGTYTWFPY! WGQGTLVTVS SASTKGPSW PLAPCSRSTSESTAALGCLV 151KDYFPEP VTVSWNSGA L TSG VHTFPA VLQS SGL YSLSSW TVPSSNFGTQ 201 TYTCNVDHKP SNTKVDKTVE RKCCVECPPC PAPPVAGPSV FLFPPKPKDT 251LMISRTPEVT CWVD VSHED PEVOFNWWD GVEVHNAKTKPREEQFNSTF 301RWSVLTVVIIODWLNGKEYK CKVSNKGLPA PIEKTISKTK GQPREPQVYT 351LPPSREEMTK NQ VSL TCL VK GFYPSDIA VE WESNGQPENN YKJTPPMLDS 401DGSFFLYSKL TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQID NO:395)
Sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-16: 1 GAGGTGCAGC TGGTGCAGTC TGGGGCTGAG GTGAAGAAGO CTGGGGCCTC 51 AGTGAAGGTC TCCTGCAAGG CTTCTGGATT CGACATTAAG GACTACTATA 101 TACACTGGGT GCGACAGGCC CCTGGACAAG GGCTTGAGTG GATCGGAAGG 151 GTTGATCCTG ACAATGGTGA GACTGAATTT GCCCCGAAGT TCCCGGGCAA 201 GGTCACCATG ACCACAGACA CGTCCATCAG CACAGCCTAC ATGGAGCTGA 251 GCAGGCTGAG ATCTGACGAC ACGGCCGTGT ATTACTGTGC GAGAGAAGAC 301 TACGATGGTA CCTACACCTG GTTTCCTTAT TGGGGCCAAG GGACTCTGGT 351 CACCGTCTCT AGTGCCTCCA CCAAGGGCCC ATCGGTCTTC CCCCTGGCGC 401 CCTGCTCCAG GAGCACCTCC GAGAGCACAG CGGCCCTGGG CTGCCTGGTC 451 AAGGACTACT TCCCCGAACC GGTGACGGTG TCGTGGAACT CAGGCGCTCT 501 GACCAGCGGC GTGCACACCT TCCCAGCTGT CCTACAGTCC TCAGGACTCT 551 ACTCCCTCAG CAGCGTGGTG ACCGTGCCCT CCAGCAACTT CGGCACCCAG 601 ACCTACACCT GCAACGTAGA TCACAAGCCC AGCAACACCA AGGTGGACAA 651 GACAGTTGAG CGCAAATGTT GTGTCGAGTG CCCACCGTGC CCAGCACCAC 701 CTGTGGCAGG ACCGTCAGTC TTCCTCTTCC CCCCAAAACC CAAGGACACC 751 CTCATGATCT CCCGGACCCC TGAGGTCACG TGCGTGGTGG TGGACGTGAG 801 CCACGAAGAC CCCGAGGTCC AGTTCAACTG GTACGTGGAC GGCGTGGAGG 851 TGCATAATGC CAAGACAAAG CCACGGGAGG AGCAGTTCAA CAGCACGTTC 901 CGTGTGGTCA GCGTCCTCAC CGTTGTGCAC CAGGACTGGC TGAACGGCAA 951 GGAGTACAAG TGCAAGGTCT CCAACAAAGG CCTCCCAGCC CCCATCGAGA 1001 AAACCATCTC CAAAACCAAA GGGCAGCCCC GAGAACCACA GGTGTACACC 1051 CTGCCCCCAT CCCGGGAGGA GATGACCAAG AACCAGGTCA GCCTGACCTG 1101 CCTGGTCAAA GGCTTCTACC CCAGCGACAT CGCCGTGGAG TGGGAGAGCA 1151 ATGGGCAGCC GGAGAACAAC TACAAGACCA CACCTCCCAT GCTGGACTCC 1201 GACGGCTCCT TCTTCCTCTA CAGCAAGCTC ACCGTGGACA AGAGCAGGTG 1251 GCAGCAGGGG AACGTCTTCT CATGCTCCGT GATGCATGAG GCTCTGCACA 1301 ACCACTACAC GCAGAAGAGC CTCTCCCTGT CTCCGGGTAA A (SEQ ID NO:234) 103 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de aminoácidos da HC de Ab-16 incluindo o péptido sinal: 1 MDWTWRUFL VAAATGAHSE VQLVQSGAEV KKPGASVKVS CKASGFDIKD 51 YYIHWVRQAP GQGLEWIGRV DPDNGETEFA PKFPGKVTMT TDTSISTAYM 101 ELSRLRSDDT AVYYCAREDY DGTYTWFPYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP 151 LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS 201 GLYSLSSWT VPSSNFGTQT YTCNVDHKPS NTKVDKTVER KCCVECPPCP 251 APPVAGPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC WVDVSHEDP EVQFNWYVDG 301 VEVHNAKTKP REEQFNSTFR VVSVLTWHQ DWLNGKEYKC KVSNKGLPAP 351IEKTISKTKG QPREPQVYTL PPSREEMTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW 401 ESNGQPENNY KTTPPMLDSD GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA 451 LHNHYTQKSL SLSPGK (SEQID NO:235)
Sequência de ácido nucleico da HC de Ab-16 incluindo a sequência codificando o péptido sinal: 1 ATGGACTGGA CCTGGAGGAT CCTCTTCTTG GTGGCAGCAG CCACAGGAGC 51 CCACTCCGAG GTGCAGCTGG TGCAGTCTGG GGCTGAGGTG AAGAAGCCTG 101 GGGCCTCAGT GAAGGTCTCC TGCAAGGCTT CTGGATTCGA CATTAAGGAC 151 TACTATATAC ACTGGGTGCG ACAGGCCCCT GGACAAGGGC TTGAGTGGAT 201 CGGAAGGGTT GATCCTGACA ATGGTGAGAC TGAATTTGCC CCGAAGTTCC 251 CGGGCAAGGT CACCATGACC ACAGACACGT CCATCAGCAC AGCCTACATG 301 GAGCTGAGCA GGCTGAGATC TGACGACACG GCCGTGTATT ACTGTGCGAG 351 AGAAGACTAC GATGGTACCT ACACCTGGTT TCCTTATTGG GGCCAAGGGA 401 CTCTGGTCAC CGTCTCTAGT GCCfCCACCA AGGGCCCATC GGTCTTCCCC 451 CTGGCGCCCT GCTCCAGGAG CACCTCCGAG AGCACAGCGG CCCTGGGCTG 501 CCTGGTCAAG GACTACTTCC CCGAACCGGT GACGGTGTCG TGGAACTCAG 551 GCGCTCTGAC CAGCGGCGTG CACACCTTCC CAGCTGTCCT ACAGTCCTCA 601 GGACTCTACT CCCTCAGCAG CGTGGTGACC GTGCCCTCCA GCAACTTCGG 651 CACCCAGACC TACACCTGCA ACGTAGATCA CAAGCCCAGC AACACCAAGG 701 TGGACAAGAC AGTTGAGCGC AAATGTTGTG TCGAGTGCCC ACCGTGCCCA 751 GCACCACCTG TGGCAGGACC GTCAGTCTTC CTCTTCCCCC CAAAACCCAA B01 GGACACCCTC ATGATCTCCC GGACCCCTGA GGTCACGTGC GTGGTGGTGG 851 ACGTGAGCCA CGAAGACCCC GAGGTCCAGT TCAACTGGTA CGTGGACGGC 901 GTGGAGGTGC ATAATGCCAA GACAAAGCCA CGGGAGGAGC AGTTCAACAG 951 CACGTTCCGT GTGGTCAGCG TCCTC ACCGT TGTGCACCAG GACTGGCTGA 1001 ACGGCAAGGA GTACAAGTGC AAGGTCTCCA ACAAAGGCCT CCCAGCCCCC 1051 ATCGAGAAAA CCATCTCCAA AACCAAAGGG CAGCCCCGAG AACCACAGGT 1101 GTACACCCTG CCCCCATCCC GGGAGGAGAT GACCAAGAAC CAGGTCAGCC 1151 TGACCTGCCT GGTCAAAGGC TTCTACCCCA GCGACATCGC CGTGGAGTGG 1201 GAGAGCAATG GGCAGCCGGA GAACAACTAC AAGACCACAC CTCCCATGCT 1251 GGACTCCGAC GGCTCCTTCT TCCTCTACAG CAAGCTCACC GTGGACAAGA 1301 GCAGGTGGCA GCAGGGGAAC GTCTTCTCAT GCTCCGTGAT GCATGAGGCT 1351 CTGCACAACC ACTACACGCA GAAGAGCCTC TCCCTGTCTC CGGGTAAA (SEQ IDNO:236) 104 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
As sequências de CDR na região variável da cadeia pesada de Ab-16 são: CDR-H1 CDR-H2 CDR-H3 DYYIH (SEQ ID NO:293) RVDPDNGETEFAPKFPG (SEQ ID NO:294) EDYDGTYTWFPY (SEQ ID NO:295)
As sequências de CDR da região variável da cadeia leve de Ab-16 são: CDR-L1 CDR-L2 CDR-L3 RASSSISYIH (SEQ ID NO:281) ATSNLAS (SEQ ID NO:282) QQWSSDPLT (SEQ ID NO:283)
Dominios variáveis de Ab-16:
Sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia leve de Ab-16 (sem o péptido sinal): l DIQLTQSPSF LSASVGDRVTITCRASSSIS YIHWYQQKPG KAPKLLIYÁlj 51 SNLASGVPSR FSGSGSGTEF TLTISSLQPE DFATYYC&QW SSDPLTFGGG 101 TKVEÍK (SEQ ID NO:3S8)
Sequência de ADN do domínio variável da cadeia leve de Ab-16 (sem a sequência sinal): 1 GACATCCAGT TGACCCAGTC TCCATCCTTC CTGTCTGCAT CTGTAGGAGA 51 CAGAGTCACC ATCACTTGCA GGGCCAGCTC AAGTATAAGT TACATACACT 101 GGTATCAGCA AAAACCAGGG AAAGCCCCTA AGCTCCTGAT CTATGCCACA 151 TCCAACCTGG CTTCTGGGGT CCCATCAAGG TTCAGCGGCA GTGGATCTGG 201 GACAGAATTC ACTCTCACAA TCAGCAGCCT GCAGCCTGAA GATTTTGCAA 251 CTTATTACTG TCAGCAGTGG AGTAGTGACC CACTCACGTT CGGCGGAGGG 301 ACCAAGGTGG AGATCAAA (SEQ ID NO:3S9)
Sequência de aminoácidos do domínio variável da cadeia pesada de Ab-16 (sem o péptido sinal): 1 EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGFDIKDYYIífWVRQA PGQGLEWÍGR 51 .VDPDNGÊTEF ÀPKFPGKVTM TTDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARED. 101 YDGTYTWFPY WGQGTLVTVS S (SEQ IDNO:390) 105 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de ADN do domínio variável da cadeia pesada de Ab-16 (sem a sequência sinal): 1 GAGGTGCAGC TGGTGCAGTC TGGGGCTGAG GTGAAGAAGC CTGGGGCCTC 51 AGTGAAGGTC TCCTGCAAGG CTTCTGGATT CGACATTAAG GACTACTATA 101 TACACTGGGT GCGACAGGCC CCTGGACAAG GGCTTGAGTG GATCGGAAGG 151 GTTGATCCTG ACAATGGTGA GACTGAATTT GCCCCGAAGT TCCCGGGCAA 201 GGTCACCATG ACCACAGACA CGTCCATCAG CACAGCCTAC ATGGAGCTGA 2S1 GCAGGCTGAG ATCTGACGAC ACGGCCGTGT ATTACTGTGC GAGAGAAGAC 301 TACGATGGTA CCTACACCTG GTTTCCTTAT TGGGGCCAAG GGACTCTGGT 351 CACCGTCTCT AGT (SEQ ID NO:391)
Anticorpos adicionais são aqui referidos como Anticorpos 17-22 (também aqui referidos como Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21 e Ab-22). A Reqião Constante Capa para todas as regiões VK de Ab-17, Ab-19, e Ab-21 é como se segue: TDAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQD SKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC (SEQ ID NO:323) A Região Constante Pesada para todas as regiões VH dos anticorpos 17, 19 e 21 é como se segue:
AKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQS
DLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIF
PPKPKDVLTITLTPKVTCVWDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRS
VSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKD
KVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEA GNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK (SEQ ID NO:324)
Nas seguintes sequências de aminoácidos de anticorpos, os aminoácidos em caixas sombreadas representam regiões determinantes de complementaridade (CDR) e os aminoácidos sublinhados representam o péptido sinal.
Ab-17
Sequência de aminoácidos da LC de Ab-17 incluindo o péptido sinal: SGTSPKIWIYGfsMÃSGVPVRFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWTTTYTFG SGTKLELKR (SEQ ED NO:299) 106 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de ácido nucleico da LC de Ab-17 incluindo o péptido sinal:
ATGGATTTTCAGGTGCAGATTTTCAGCTTCATGCTAATCAGTGTCACAGTCATATTG tccagtggagaaattgtgctcacccagtctccagcactcatggctgcatctccaggg gagaaggtcaccatcacctgcagtgtcagctcgagtataagttccagcaacttaca ctggtcccagcagaagtcaggaacctcccccaaactctggatttatggcacatcca accttgcttctggagtccctgttcgcttcagtggcagtggatctgggacctcttattc tctcacaatcagcagcatggaggctgaagatgctgccacttattactgtcaacagt ggactactacgtatacgttcggatcggggaccaagctggagctgaaacgt (SEQ id NO:300)
Sequência de aminoácidos da HC de Ab-17 incluindo o péptido sinal: mgwnmifflmawtgvnsevqlrqsgadlvkpgasvkxsctasgfnikdyyíbwvk QF^EQGLEWÍGRfpPDNGESTYVPKEQGKATITADTSSNTAYLQLRSLTSEDTAríVcGR ÈGLDYGDVyÀ\TDYWGQGTSVTVSS (SÉQ ID NO:301)
Sequência de ácido nucleico da HC de Ab-17 incluindo o péptido sinal: atgggatggaactggatcatcttcttcctgatggcagtggitacaggggtcaattca gaggtgcagttgcggcagtctggggcagaccttgtgaagccaggggcctcagtcaa gttgtcctgcacagcttctggcttcaacattaaagactactatatacactgggtgaa gcagaggcctgaacagggcctggagtggattggaaggattgatcctgataatggtg aaagtacatatgtcccgaagttccagggcaaggccactataacagcagacacatca tccaacacagcctacctacaactcagaagcctgacatctgaggacactgccatcta TTATTGTGGGACjAÍG^GGGGCTCGACTATGGTGACTACTATGCTGTGGACTACTGGG GTCAAGGAACCTCGGTCACAGTCTCGAGC (SEQ ID NO:302)
Ab-17 foi humanizado para gerar Ab-18.
Ab-18
Sequência de aminoácidos da LC de Ab-18 incluindo o péptido sinal: MDMRVPAQLLGLLLL WLPGARCDTOLTQSPSFLS A S V GDR VTITCS VSS SI SSSINLHWY O QKPGKAPKLLIYGTSMASGVPSRFSGSGSGTEFTLDSSLQPEDFATYYCQQWTTTYTF GQGTKLEIKR (SEQ ID NÓ:303) 107 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de ácido nucleico da LC de Ab-18 incluindo o péptido sinal:
ATGGATATGCGCGTGCCGGCGCAGCTGCTGGGCCTGCTGCTGCTGTGGCTGCCGGG cgcgcgctgcgatattcagctgacccagagcccgagctttctgagcgcgagcgtgg
GCGATCGCGTGACCATTACCTGCAGCGTGAGCAGCAGCATTAGCAGCAGCAACCTG
CATTGGTATCAGCAGAAACCGGGCAAAGCGCCGAAACTGCTGATTTATGGCACCAG
CAACCTGGCGAGCGGCGTGCCGAGCCGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGAAT
TTACCCTGACCATTAGCAGCCTGCAGCCGGAAGATTTTGCGACCTATTATTGCCAGC
AGTGGACCACCACCTATACCTTTGGCCAGGGCACCAAACTGGAAATTAAACGT(SEQ IDNO:304)
Sequência de aminoácidos da HC de Ab-18 incluindo o péptido sinal: MDWTWSnJIAAAPTGAHSEVQLVOSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDYYIHWVR QAPGQGLEWMGRIDPDNGESTYVPKFQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYY CAREGLDYGPYYAVDYWGQGTLVTVSS' (SEQID NO:305)
Sequência de ácido nucleico da HC de Ab-18 incluindo o péptido sinal:
ATGGATTGGACCTGGAGCATTCTGTTTCTGGTGGCGGCGCCGACCGGCGCGCATAG
CGAAGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGCGAGCGTG
AAAGTGAGCTGCAAAGCGAGCGGCTTTAACATTAAAGATTATTATATTCATTGGGT
GCGCCAGGCGCCGGGCCAGGGCCTGGAATGGATGGGCCGCATTGATCCGGATAACG
GCGAAAGCACCTATGTGCCGAAATTTCAGGGCCGCGTGACCATGACCACCGATACC
AGCACCAGCACCGCGTATATGGAACTGCGCAGCCTGCGCAGCGATGATACCGCGGT
GTATTATTGCGCGCGCGAAGGCCTGGATTATGGCGATTATTATGCGGTGGATTATTG GGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTCTCGAGC (SEQ IDNO:306)
Sequência de aminoácidos do dominio variável de cadeia leve de Ab-18 (sem o péptido sinal): DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCSVSSjíSSSNLHWYQQKPGKAPKLLIYGTSNLASGVPS RFSGSGSGTEFTMSSLQPEDFÂTYYCQQWlTf YTPGQGTKLEIKR (SEQ ÍD NO:368)
Sequência de ADN do dominio variável da cadeia leve de Ab-18 (sem a sequência sinal):
GATATTCAGCTGACCCAGAGCCCGAGCTTTCTGAGCGCGAGCGTGGGCGATCGCGT
GACCATTACCTGCAGCGTGAGCAGCAGCATTAGCAGCAGCAACCTGCATTGGTATC
AGCAGAAACCGGGCAAAGCGCCGAAACTGCTGATTTATGGCACCAGCAACCTGGCG
AGCGGCGTGCCGAGCCGCTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGAATTTACCCTGAC
CATTAGCAGCCTGCAGCCGGAAGATTTTGCGACCTATTATTGCCAGCAGTGGACCA CCACCTATACCTTTGGCCAGGGCACCAAACTGGAAATTAAACGT (SEQ IDNO:369) 108 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de aminoácidos do domínio variável da cadeia pesada de Ab-18 (sem o péptido sinal): STY V PKFQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAV YYCAREGLDYGDYYAVDYÍWG QGTLVTVSS (SEQID NO:370) ........*
Sequência de ADN do domínio variável da cadeia pesada de Ab-18 (sem a sequência sinal): gaagtgcagctggtgcagagcggcgcggaagtgaaaaaaccgggcgcgagcgtga
AAGTGAGCTGCAAAGCGAGCGGCTTTAACATTAAAGATTATTATATTCATTGGGTG
CGCCAGGCGCCGGGCCAGGGCCTGGAATGGATGGGCCGCATTGATCCGGATAACGG
CGAAAGCACCTATGTGCCGAAATTTCAGGGCCGCGTGACCATGACCACCGATACCA
GCACCAGCACCGCGTATATGGAACTGCGCAGCCTGCGCAGCGATGATACCGCGGTG
TATTATTGCGCGCGCGAAGGCCTGGATTATGGCGATTATTATGCGGTGGATTATTGG GGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO:371)
Ab-19
Sequência de aminoácidos da LC de Ab-19 incluindo o péptido sinal: MMSSAOFLGLLLLCFOGTRCDIOMTOTTSSLSASLGDRVNISCRASOPISSYLNWYQOK PDGTVKLlJYSTSRLNSGWSRFSGSGSGTDYSLTISNLAQEDIÀTYFCQQDimPTFGGG TKLELKR (SEQ ID NÕ:307)
Sequência de ácido nucleico da LC de Ab-19 incluindo o péptido sinal:
ATGATGTCCTCTGCTCAGTTCCTTGGTCTCCTGTTGCTCTGTTTTCAAGGTACCAGAT
GTGATATCCAGATGACACAGACTACATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTGGGAGACAGAG
TCAACATCAGCTGCAGGGCAAGTCAGGACATTAGCAGTTATTTAAACTGGTATCAG
CAGAAACCAGATGGAACTGTTAAACTCCTGATCTACTCCACATCAAGATTAAACTC
AGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGATTATTCTCTCACTAT
TAGCAACCTGGCACAAGAAGATATTGCCACTTACTTTTGCCAACAGGATATTAAGC ATCCGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGITGGAGCTGAAACGT (SEQ ID NO:30S)
Sequência de aminoácidos da HC de Ab-19 incluindo o péptido sinal: MEWIWIFLFLLSGTAfiVHSEVOLOOSGPELVKPGASVKMSCKASGFTFTnYTMTTWVKO KPGQGLEWIGYINPYNDDTEYNÉkFKGKATLTSDKSSSTAYMDLSSLTSÈGSÀVYYCA RSÍYYYDAPFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:309) 109 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de ácido nucleico da HC de Ab-19 incluindo o péptido sinal:
ATGGAATGGATCTGGATATTTCTCTTCCTCCTGTCAGGAACTGCAGGTGTCCACTCT
GAGGTCCAGCTGCAGCAGTCTGGACCTGAGCTGGTAAAGCCTGGGGCTTCAGTGAA
GATGTCCTGCAAGGCTTCTGGGTTCACATTCACTGACTACATTATGCACTGGGTGAA gcagaagcctgggcagggccttgagtggattggatatattaatccttacaatgatg ATACTGAATACAATGAGAAGTTCAAAGGCAAGGCCACACTGACTTCAGACAAATCC TCCAGCACAGCCTACATGGATCTCAGCAGTCTGACCTCTGAGGGCTCTGCGGTCTAT TACTGTGCAAGATCGATTTATTACTACGATGCCCCGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGG ACTCTGGTCACAGTCTCGAGC (SEQID NO:310) O Ab-19 foi humanizado para gerar o Anticorpo 20 (também aqui referido como Ab-20) e o Anticorpo 23 (também aqui referido como Ab-23).
Ab-20
Versão IgG4
Sequência de aminoácidos da LC de Ab-20 incluindo o péptido sinal:
MMSSAOFLGLLLLCFOGTRCDIOMTOSPSSLSASVGDRVTITCRÁSQDISS^N.WYOOK pgkapklliy;stsrln§gvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyyc;qqdikhptfgqg TKVEIKR (SEQ ID NÕ;311) .......... .....
Sequência de ácido nucleico da LC de Ab-20 incluindo o péptido sinal: atgatgtcctctgctcagttccttggtctcctgttgctctgttttcaaggtaccagat gtgatatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggtgaccgtg tcaccatcacttgccgcgcaagtcaggatattagcagctatttaaattggtatcagc agaaaccagggaaagcccctaagctcctgatctattctacttcccgtttgaatagtg gggtcccatcacgcttcagtggcagtggctctgggacagatttcactctcaccatca gcagtctgcaacctgaagattttgcaacttactactgtcaacaggatattaaacacc CTACGTTCGGTCAAGGCACCAAGGTGGAGATCAAACGT (SEQ ID NO: 312)
Sequência de aminoácidos da HC de Ab-20 incluindo o péptido sinal: MEWIWIFLFLLSGTAGVHSEyOLVOSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFTFTDYIMHWVRO APGQGLEWMGYINPYNDDTEYNEKÍKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCA RSIYYTOÁPrÀYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO;313) 110 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de ácido nucleico da HC de Ab-20 incluindo o péptido sinal: ATGGAATGGATCTGGATATTTCTCTTCCTCCTGTCAGGAACTGCAGGTGTCCACTCT "GAGGTGCAGCTGGrGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAA GGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTTTACCTTCACCGACTATATTATGCACTGGGTGCG TCAGGCCCCTGGTCAAGGGCTTGAGTGGATGGGCTATATCAACCCTTATAATGATG ACACCGAATACAACGAGAAGTTCAAGGGCCGTGTCACGATTACCGCGGACAAATCC ACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGCGCTCTGAGGACACGGCCGTGTA TTACTGTGCGCGTTCGATTTATTACTACGATGCCCCGTTTGOTTACTGGGGCCAAGG GACTCTGGTCACAGTCTCGAGC (SEQID NO:349)
Ab-23
Versão IgG2
Cadeia Leve:
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-23: 1 DIQMTQSPSS LSASVGDRVTITCRASQDJS SYENÍWYQQKP GKAPKLLIYS 51 TSRLNSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ_DIKHPTFGQG 101 TYMmtRTVA APSVFIFPPSDEQLKSGTAS WCLlNNFYPREAKVQWKl^D 151NALQSGNSQE SVTEQDSKDS TYSLSSTLTL SKADYEKHKV YACEVTHQGL 201SSP VTKSFNR GEC (SEQ ID NO:341)
Sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-23: 1 GACATCCAGA TGACCCAGTC TCCATCCTCC CTGTCTGCAT CTGTAGGTGA 51 CCGTGTCACC ATCACTTGCC GCGCAAGTCA GGATATTAGC AGCTATTTAA 101 ATTGGTATCA GCAGAAACCA GGGAAAGCCC CTAAGCTCCT GATCTATTCT 151 ACTTCCCGTT TGAATAGTGG GGTCCCATCA CGCTTCAGTG GCAGTGGCTC 201 TGGGACAGAT TTCACTCTCA CCATCAGCAG TCTGCAACCT GAAGATTTTG 251 CAACTTACTA CTGTCAACAG GATATTAAAC ACCCTACGTT CGGTCAAGGC 301 ACCAAGGTGG AGATCAAACG TACGGTGGCT GCACCATCTG TCTTCATCTT 351 CCCGCCATCT GATGAGCAGT TGAAATCTGG AACTGCCTCT GTTGTGTGCC 401 TGCTGAATAA CTTCTATCCC AGAGAGGCCA AAGTACAGTG GAAGGTGGAT 451 AACGCCCTCC AATCGGGTAA CTCCCAGGAG AGTGTCACAG AGCAGGACAG 501 CAAGGACAGC ACCTACAGCC TCAGCAGCAC CCTGACGCTG AGCAAAGCAG 551 ACTACGAGAA ACACAAAGTC TACGCCTGCG AAGTCACCCA TCAGGGCCTG 601 AGCTCGCCCG TCACAAAGAG CTTCAACAGG GGAGAGTGT (SEQ IDNO:342) 111 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de aminoácidos da LC de Ab-23 incluindo o péptido sinal: 1 MDMRVPAQLL GLLLLWLRGA RCDIQMTQSP SSLSASVGDR VTITCRASQD 51ISSYLNWYQQ KPGKAPKLLIYSTSRLNSGV PSRFSGSGSG TDFTLTISSL 101 QPEDFATYYC QQDIKHPTFG QGTKVEIKRT VAAPSVFIFP PSDEQLKSGT 151 ASVVCLLNNF YPREAKVQWK VDNALQSGNS QESVTEQDSK DSTYSLSSTL 201 TLSKADYEKH KVYACEVTHQ GLSSPVTKSF NRGEC (SEQID NO:343)
Sequência de ácido nucleico da LC de Ab-23 incluindo a sequência codificando o péptido sinal: 1 ATGGACATGA GGGTGCCCGC TCAGCTCCTG GGGCTCCTGC TGCTGTGGCT 51 GAGAGGTGCC AGATGTGACA TCCAGATGAC CCAGTCTCCA TCCTCCCTGT 101 CTGCATCTGT AGGTGACCGT GTCACCATCA CTTGCCGCGC AAGTCAGGAT 151 ATTAGCAGCT ATTTAAATTG GTATCAGCAG AAACCAGGGA AAGCCCCTAA 201 GCTCCTGATC TATTCTACTT CCCGTTTGAA TAGTGGGGTC CCATCACGCT 251 TCAGTGGCAG TGGCTCTGGG ACAGATTTCA CTCTCACCAT CAGCAGTCTG 301 CAACCTGAAG ATTTTGCAAC TTACTACTGT CAACAGGATA TTAAACACCC 351 TACGTTCGGT CAAGGCACCA AGGTGGAGAT CAAACGTACG GTGGCTGCAC 401 CATCTGTCTT CATCTTCCCG CCATCTGATG AGCAGTTGAA ATCTGGAACT 451 GCCTCTGTTG TGTGCCTGCT GAATAACTTC TATCCCAGAG AGGCCAAAGT 501 ACAGTGGAAG GTGGATAACG CCCTCCAATC GGGTAACTCC CAGGAGAGTG 551 TCACAGAGCA GGACAGCAAG GACAGCACCT ACAGCCTCAG CAGCACCCTG 601 ACGCTGAGCA AAGCAGACTA CGAGAAACAC AAAGTCTACG CCTGCGAAGT 651 CACCCATCAG GGCCTGAGCT CGCCCGTCAC AAAGAGCTTC AACAGGGGAG 701 AGTGT (SEQ ID NO:344)
Cadeia Pesada:
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-23:
1 EVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGFTFT DYIMHWVRQA PGQGLEWMGYi 51 DSTPYNDDTÈY NEKFKGRVTI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARSÍ 101 YYYDÀPFAYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCL VK 151DYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPA VLQjSS GLYSLSSWT VPSSNFGTQT 201 YTCNVDHKPS NTKVDKTVER KCCVECPPCP APPVA GPSVF LFPPKPKDTL 251MISRTPEFTC VVVD VSHEDP EVQFNIVYJOG VEVHNAKTKP REEQFNSTFR
301 WSVLTWHQ DWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKG QPREPQVYTL 351PPSREEMTKN QVSLTCL VKG FYPSD1A VEW ESNGQPENNY KTTPPMLDSD 401 GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL SLSPGK(SEQ ID NO:345) 112 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-23 sem a lisina carboxi-terminal: 1 EVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGFTFT DYÍMHWVRQA PGQGLEWMGY; 51 MPYHDDTEYIníEKFKGRVTI tadkststay melsslrsed tavyycarsi
101 YYYDAPFAYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPCSRSTSE STAALGCÍm 151 DYFPEPíàvS WNSGALTSGVHTFPA VLQSS GLYSLSSWT VPSSNFGTQT 201 YTCNVDHKPS NTKVDKTVER KCCVECPPCP APPVAGPSVF LFPPKPKDTL 251MISRTPEVTC1/WDVSHEDP EVQFNW^YVDG VEVHNAKTKPREEQFNSTFR 301 WSVL TWHQ D WLNGKEYKC KVSNKGLPAPIEKTISKTKG QPREPQVYTL 351PPSREEMTKN QVSLTCL VKG FYPSDIA VEW ESNGQPENNY KTTPPMLDSD 401 GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL SLSPG (SEQID NO:396)
Sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-23: 1 GAGGTGCAGC TGGTGCAGTC TGGGGCTGAG GTGAAGAAGC CTGGGTCCTC 51 GGTGAAGGTC TCCTGCAAGG CTTCTGGTTT TACCTTCACC GACTATATTA 101 TGCACTGGGT GCGTCAGGCC CCTGGTCAAG GGCTTGAGTG GATGGGCTAT 151 ATCAACCCTT ATAATGATGA CACCGAATAC AACGAGAAGT TCAAGGGCCG 201 TGTCACGÀTT ÀCCGCGGACA AATCCACGAG CACAGCCTAC ATGGAGCTGA 251 GCAGCCTGCG CTCTGAGGAC ACGGCCGTGT ATTACTGTGC GCGTTCGATT 301 TATTACTACG ATGCCCCGTT TGCTTACTGG GGCCAAGGGA CTCTGGTCAC 351 CGTCTCTAGT GCCTCCACCA AGGGCCCATC GGTCTTCCCC CTGGCGCCCT 401 GCTCCAGGAG CACCTCCGAG AGCACAGCGG CCCTGGGCTG CCTGGTCAAG 451 GACTACTTCC CCGAACCGGT GACGGTGTCG TGGAACTCAG GCGCTCTGAC 501 CAGCGGCGTG CACACCTTCC CAGCTGTCCT ACAGTCCTCA GGACTCTACT 551 CCCTCAGCAG CGTGGTGACC GTGCCCTCCA GCAACTTCGG CACCCAGACC 601 TACACCTGCA ACGTAGATCA CAAGCCCAGC AACACCAAGG TGGACAAGAC 651 AGTTGAGCGC AAATGTTGTG TCGAGTGCCC ACCGTGCCCA GCACCACCTG 701 TGGCAGGACC GTCAGTCTTC CTCTTCCCCC CAAAACCCAA GGACACCCTC 751 ATGATCTCCC GGACCCCTGA GGTCACGTGC GTGGTGGTGG ACGTGAGCCA 801 CGAAGACCCC GAGGTCCAGT TCAACTGGTA CGTGGACGGC GTGGAGGTGC 851 ATAATGCCAA GACAAAGCCA CGGGAGGAGC AGTTCAACAG CACGTTCCGT 901 GTGGTCAGCG TCCTCACCGT TGTGCACCAG GACTGGCTGA ACGGCAAGGA 951 GTACAAGTGC AAGGTCTCCA ACAAAGGCCT CCCAGCCCCC ATCGAGAAAA 1001 CCATCTCCAA AACCAAAGGG CAGCCCCGAG AACCACAGGT GTACACCCTG 1051 CCCCCATCCC GGGAGGAGAT GACCAAGAAC CAGGTCAGCC TGACCTGCCT 1101 GGTCAAAGGC TTCTACCCCA GCGACATCGC CGTGGAGTGG GAGAGCAATG 1151 GGCAGCCGGA GAACAACTAC AAGACCACAC CTCCCATGCT GGACTCCGAC 1201 GGCTCCTTCT TCCTCTACAG CAAGCTCACC GTGGACAAGA GCAGGTGGCA 1251 GCAGGGGAAC GTCTTCTCAT GCTCCGTGAT GCATGAGGCT CTGCACAACC 1301 ACTACACGCA GAAGAGCCTC TCCCTGTCTC CGGGTAAA (SEQ ID NO:346) 113 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de aminoácidos da HC de Ab-23 incluindo o péptido sinal: 1 MDWTWRILFL VAAATGAHSE VQLVQSGAEV KKPGSSVKVS CKASGFTFTD 51 YIMHWVRQAP GQGLEWMGYINPYNDDTEYN EKFKGRVTIT ADKSTSTAYM 101 ELSSLRSEDT AVYYCARSIY YYDAPFAYWG QGTLVTVSSA STKGPSVFPL 151 APCSRSTSES TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG 201 LYSLSSVVTV PSSNFGTQTY TCNVDHKPSN TKVDKTVERK CCVECPPCPA 251 PPVAGPSVFL FPPKPKDTLMISRTPEVTCV VVDVSHEDPE VQFNWYVDGV 301 EVHNAKTKPR EEQFNSTFRV VSVLTVVHQD WLNGKEYKCK VSNKGLPAPI 351 EKTISKTKGQ PREPQVYTLP PSREEMTKNQ VSLTCLVKGF YPSDIAVEWE 401 SNGQPENNYK TTPPMLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV FSCSVMHEAL 451 HNHYTQKSLS LSPGK (SEQ ID NO:347)
Sequência de ácido nucleico da HC de Ab-23 incluindo a sequência codificando o péptido sinal:
1 ATGGACTGGA CCTGGAGGAT CCTCTTCTTG GTGGCAGCAG CCACAGGAGC 51 CCACTCCGAG GTGCAGCTGG TGCAGTCTGG GGCTGAGGTG AAGAAGCCTG 101 GGTCCTCGGT GAAGGTCTCC TGCAAGGCTT CTGGTTTTAC CTTCACCGAC 151 TATATTATGC ACTGGGTGCG TCAGGCCCCT GGTCAAGGGC TTGAGTGGAT 201 GGGCTAT ATC AACCCTTATA ATGATGACAC CGAATACAAC GAGAAGTTCA 251 AGGGCCGTGT CACGATTACC GCGGACAAAT CCACGAGCAC AGCCTACATG 301 GAGCTGAGCA GCCTGCGCTC TGAGGACACG GCCGTGTATT ACTGTGCGCG 351 TTCGATTTAT TACTACGATG CCCCGTTTGC TTACTGGGGC CAAGGGACTC 401 TGGTCACCGT CTCTAGTGCC TCCACCAAGG GCCCATCGGT CTTCCCCCTG 451 GCGCCCTGCT CCAGGAGCAC CTCCGAGAGC ACAGCGGCCC TGGGCTGCCT 501 GGTCAAGGAC TACTTCCCCG AACCGGTGAC GGTGTCGTGG AACTCAGGCG 551 CTCTGACCAG CGGCGTGCAC ACCTTCCCAG CTGTCCTACA GTCCTCAGGA 601 CTCTACTCCC tUagcagcgt GGTGACCGTG CCCTCCAGCA ACTTCGGCAC 651 CCAGACCTAC ACCTGCAACG TAGATCACAA GCCCAGCAAC ACCAAGGTGG 701 ACAAGACAGT TGAGCGCAAA TGTTGTGTCG AGTGCCCACC GTGCCCAGCA 751 CCACCTGTGG CAGGACCGTC AGTCTTCCTC TTCCCCCCAA AACCCAAGGA 801 CACCCTCATG ATCTCCCGGA CCCCTGAGGT CACGTGCGTG GTGGTGGACG 851 TGAGCCACGA AGACCCCGAG GTCCAGTTCA ACTGGTACGT GGACGGCGTG 901 GAGGTGCATA ATGCCAAGAC AAAGCCACGG GAGGAGCAGT TCAACAGCAC 951 GTTCCGTGTG GTCAGCGTCC TCACCGTTGT GCACCAGGAC TGGCTGAACG 1001 GCAAGGAGTA CAAGTGCAAG GTCTCCAACA AAGGCCTCCC AGCCCCCATC 1051 GAGAAAACCA TCTCCAAAAC CAAAGGGCAG CCCCGAGAAC CACAGGTGTA 1101 CACCCTGCCC CCATCCCGGG AGGAGATGAC CAAGAACCAG GTCAGCCTGA 1151 CCTGCCTGGT CAAAGGCTTC TACCCCAGCG ACATCGCCGT GGAGTGGGAG 1201 AGCAATGGGC AGCCGGAGAA CAACTACAAG ACCACACCTC CCATGCTGGA 1251 CTCCGACGGC TCCTTCTTCC TCTACAGCAA GCTCACCGTG GACAAGAGCA 1301 GGTGGCAGCA GGGGAACGTC TTCTCATGCT CCGTGATGCA TGAGGCTCTG 1351 CACAACCACT ACACGCAGAA GAGCCTCTCC CTGTCTCCGG GTAAA (SEQ ID NO:348)
As sequências de CDR (região determinante de complementaridade) na região variável da cadeia pesada de Ab-23 são como se segue: CDR-H1: DYIMH (SEQ ID NO:269) CDR-H2: YINPYNDDTEYNEKFKG (SEQ ID NO:270) CDR-H3: SIYYYDAPFAY (SEQ ID NO:271) 114 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
As sequências de CDR da região variável da cadeia leve de Ab-23 são: CDR-L1 CDR-L2 CDR-L3 RASQDISSYLN (SEQ ID NO:239) STSRLNS (SEQ ID NO:240) QQDIKHPT (SEQ ID NO:241)
Domínios variáveis de Ab-23:
Sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia leve de Ab-23 (sem a sequência sinal): DIQMTQSPSS LSASVGDRVTITCRASQDIS SYLNWYQQKP GKAPKLLIYS TSRLNSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ DIKHPTFGQG TKVEIK (SEQ IDNO:364)
Sequência de ADN do domínio variável da cadeia leve de Ab-23 (sem a sequência sinal): GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGTGACCGTGTC ACC ATCACTTGCC GCGCAAGTCA GGATATTAGC AGCTATTTAAATTGGTATCA GCAGAAACCA GGGAAAGCCC CTAAGCTCCT GATCTATTCTACTTCCCGTT TGAATAGTGG GGTCCCATCA CGCTTCAGTG GCAGTGGCTCTGGGACAGAT TTCACTCTCA CCAT CAGCAG TCTGCAACCT GAAGATTTTGCAACTTACTA CTGTCAACAG GATATTAAAC ACCCTACGTT CGGTC AAGGC ACCAAGGT GG AGATCAAA (SEQ DD NO:365)
Sequência de aminoácidos do domínio variável da cadeia pesada de Ab-23 (sem a sequência sinal): EVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGFTFT DYIMHWVRQA PGQGLEWMGYINPYNDDTEY NEKFKGRVTITADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARSIYYYDAPFAYW GQGTLVTVSS (SEQ ID NO:366)
Sequência de ADN do domínio variável da cadeia pesada de Ab-23 (sem a sequência sinal):
GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAA GGTC TCCTGCAAGG CTTCTGGTTT TACCTTCACC GACTATATTATGCACTGGGT GCGTCAGGCC CCTGGTCAAG GGCTTGAGTG GATGGGCTATATCAACCCTT ATAATGATGA CACCGAATAC AACGAGAAGT TCAAGGGCCGTGTCACGATT ACCGCGGACA AATCCACGAG CACAGCCTAC ATGGAGCTGAGCAGCCTGCG CTCTGAGGAC ACGGCCGTGT ATTACTGTGC GCGTTCGATTTATTACTACG ATGCCCCGTT TGCTTACTGG GGCCAAGGGACTCTGGTCACCGTCTCTAGT (SEQ ID NO:367) 115 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Ab-21
Sequência de aminoácidos da LC de Ab-21 incluindo o péptido sinal: mksotovfvymllwlsgvegdivmtoshkfmstsvgdrvtitckasodyftávawyo
FGAGTKLELKR (SEQID NO:315)
Sequência de ácido nucleico da LC de Ab-21 incluindo o péptido sinal:
ATGAAGTCACAGACCCAGGTCTTTGTATACATGTTGCTGTGGTTGTCTGGTGTTGAA
GGAGACATTGTGATGACCCAGTCTCACAAATTCATGTCCACGTCAGTAGGAGACAG
GGTCACCATCACCTGCAAGGCCAGTCAGGATGTCTTTACTGCTGTAGCCTGGTATCA
ACAGAAACCAGGACAATCTCCTAAACTACTGATTTACTGGGCATCCACCCGGCACA
CTGGAGTCCCTGATCGCTTCACAGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCA
TTAGCAATGTGCAGTCTGAAGACTTGGCAGATTATTTCTGTCAACAATATAGCAGCT ATCCTCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGTTGGAGCTGAAACGT (SEQ ID NO:316)
Sequência de aminoácidos da HC de Ab-21 incluindo o péptido sinal: MGWNWIIFFLMAVVTGVNSEVOLOOSGAELVRPGALVKI.SCKASGFNIRDYYfvlHWV KQRPEQGLEWIGRIDPENGDÍIYDPICFQGKASITTDTSSNTAYLQLSSLTSEbTAVYYCA YDAGDPAWFTYÍWGQGTLVTVSS (SEQID NO:317)
Sequência de ácido nucleico da HC de Ab-21 incluindo o péptido sinal:
ATGGGATGGAACTGGATCATCTTCTTCCTGATGGCAGTGGTTACAGGGGTCAATTCA
GAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCTGAGCTTGTGAGGCCAGGGGCCTTAGTCAA
GTTGTCCTGCAAAGCTTCTGGCTTCAATATTAAAGACTACTATATGCACTGGGTGAA
GCAGAGGCCTGAACAGGGCCTGGAGTGGATTGGAAGGATTGATCCTGAGAATGGTG
ATATTATATATGACCCGAAGTTCCAGGGCAAGGCCAGTATAACAACAGACACATCC
TCCAACACAGCCTACCTGCAGCTCAGCAGCCTGACGTCTGAGGACACTGCCGTCTAT
TACTGTGCTTACGATGCTGGTGACCCCGCCTGGTTTACTTACTGGGGCCAAGGGACT CTGGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO:318) O Ab-21 foi humanizado para produzir Ab-22.
Ab-22
Sequência de aminoácidos da LC de Ab-22 incluindo o péptido sinal: MDMRVPAOLLGLLLLWLRGARCDIOMTOSPS SLS AS VGDR VTITCk A SOD VFTAV A W YQQKPGKAPICLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSSYP LTFGGGTKVEIKR (SEQ ID NÒ:319) 116 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de ácido nucleico da LC de Ab-22 incluindo o péptido sinal: ATGGATATGCGCGTGCCGGCGCAGCTGCTGGGCCTGCTGCTGCTGTGGCTGCGCGG CGCGCGCTGCGATATCCAGATGACCCAGAGCCCGAGCAGCCTGAGCGCGAGCGTGG GCGATCGCGTGACCATTACCTGCAAAGCGAGCCAGGATGTGTTTACCGCGGTGGCG TGGTATCAGCAGAAACCGGGCAAAGCGCCGAAACTGCTGATTTATTGGGCGAGCAC CCGCCATACCGGCGTGCCGAGTCGCTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGATTTTA CCCTGACCATTAGCAGCCTGCAGCCGGAAGATTTTGCGACCTATTATTGCCAGCAGT ATAGCAGCTATCCGCTGACCTTTGGCGGCGGCACCAAAGTGGAAATTAAACGT (SEQ ID NO:320)
Sequência de aminoácidos da HC de Ab-22 incluindo o péptido sinal: M D WT WSILFLVAAPTGAHSEVOLVOSGAEVKKPGAS VK VSCKASGFNTKDYYMHWV RQAPGQGLEWIGÍ^PE^GDirYpPI^QGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAYYYC A YD AGDPA WFTY WGQGTLVTVSS(SEQ DD NO:321)
Sequência de ácido nucleico da HC de Ab-22 incluindo o péptido sinal:
ATGGATTGGACCTGGAGCATTCTGTTTCTGGTGGCGGCGCCGACCGGCGCGCATAG
CGAAGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGCGAGCGTG aaagtgagctgcaaagcgagcggctttaacattaaagattattatatgcattgggt GCGCCAGGCGCCGGGCCAGGGCCTGGAATGGATCGGCCGCATTGATCCGGAAAAC GGCGATATTATTTATGATCCGAAATTTCAGGGCCGCGTGACCATGACCACCGATACC AGCACCAGCACCGCGTATATGGAACTGCGCAGCCTGCGCAGCGATGATACCGCGGT GTATTATTGCGCGTATGATGCGGGCGATCCGGCGTGGTTTACCTATTGGGGCCAGGG CACCCTGGTGACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO:322)
Sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia leve de Ab-22 (sem a sequência sinal): DIQMTQSPSS LSASVGDRVTITCKASQDVF TAVAWYQQKP GKAPKLLIYW ASTRHTGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YSSYPLTFGG GTKVEIKR (SEQ ID NO:336)
Sequência de ADN do domínio variável da cadeia leve de Ab-22 (sem a sequência sinal):
GATATCCAGATGACCCAGAGCCCGAGCAGCCTGAGCGCGAGCGTGGGCGATCGCGT
GACCATTACCTGCAAAGCGAGCCAGGATGTGTTTACCGCGGTGGCGTGGTATCAGC
AGAAACCGGGCAAAGCGCCGAAACTGCTGATTTATTGGGCGAGCACCCGCCATACC
GGCGTGCCGAGTCGCTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGATTTTACCCTGACCAT
TAGCAGCCTGCAGCCGGAAGAnTTGCGACCTATTATTGCCAGCAGTATAGCAGCT ATCCGCTGACCTTTGGCGGCGGCACCAAAGTGGAAATTAAACGT (SEQ ID NO:337) 117 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de aminoácidos do domínio variável da cadeia pesada de Ab-22 (sem a sequência sinal): EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGFN1K DYYMHWVRQA PGQGLEWIGRIDPENGDIIY DPKFQGRVTM TTDTSTSTAY MELRSLRSDD TAVYYCAYDAGDPAWFTYWG QGTLVTVSS (SEQ Π) NO:338)
Sequência de ADN do domínio variável da cadeia pesada de Ab-22 (sem a sequência sinal):
GAAGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGCGAGCGTGA
AAGT GAGCT GC AAAGCG AGCGGCTTTAAC ATTAAAG ATTATTATATGC ATT G GGTG
CGCCAGGCGCCGGGCCAGGGCCTGGAATGGATCGGCCGCATTGATCCGGAAAACG
GCGATATTATTTATGATCCGAAATTTCAGGGCCGCGTGACCATGACCACCGATACCA
GCACCAGCACCGCGTATATGGAACTGCGCAGCCTGCGCAGCGATGATACCGCGGTG
TATTATTGCGCGTATGATGCGGGCGATCCGGCGTGGTTTACCTATTGGGGCCAGGGC ACCCTGGTGACCGTCTCGAGC (SEQ IDNO:339).
Para Ab-18, Ab-20 e Ab-22, a região constante capa da cadeia leve humana é como se segue: TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQD SKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC* (SEQ ID NO:325) e a região constante gama-4 da cadeia pesada humana é como se segue:
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS
GLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSV
FLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNS
TYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEE
MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSR WQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK* (SEQ ID NO:326) A região charneira contém a mutação Ser-241-Pro para melhorar a estabilidade da charneira (Angal, S. et al., (1993), Mol. Immunol., 30(1): 105-108).
Ab-24
As sequências de LC e HC do Anticorpo 24 (também aqui referido como Ab-24) são como se segue: 118 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Cadeia Leve:
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-24:
1 DIVLTQSPAS LAVSLGQRAT IACKÀSQSVD YÍtóTSYMNWY QQKPGQPPKL 51 LIYAASNLES E1PARFSGTG SGTDFTLNIH PVEÊÉDIÍTY YCQQSNEDPF 101 .TFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASWCFL NNFYPKDINV 151 KWKWGSERQ NGVLNSWTDQ DSKDSTYSMS STLTLTKDEY ERHNSYTCEA 201 THKTSTSPIV KSFNRNEC (SEQID NO:350)
Sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) da LC de Ab-24: 1 GACATTGTGT TGACCCAGTC TCCAGCTTCT TTGGCTGTGT CTCTAGGGCA 51 GAGGGCCACC ATCGCCTGCA AGGCCAGCCA AAGTGTTGAT TATGATGGTA 101 CTAGTTATAT GAATTGGTAC CAACAGAAAC CAGGACAGCC ACCCAAACTC 151 CTCATCTATG CTGCATCCAA TCTAGAATCT GAGATCCCAG CC AGGTTTAG 201 TGGCACTGGG TCTGGGACAG ACTTCACCCT CAACATCCAT CCTGTGGAGG 251 AGGAGGATAT CACAACCTAT TACTGTCAGC AAAGTAATGA GGATCCGTTC 301 ACGTTCGGAG GGGGGACCAA GTTGGAAATA AAACGGGCTG ATGCTGCACC 351 AACTGTATCC ATCTTCCCAC CATCCAGTGA GCAGTTAACA TCTGGAGGTG 401 CCTCAGTCGT GTGCTTCTTG AACAACTTCT ACCCCAAAGA CATCAATGTC 451 AAGTGGAAGA TTGATGGCAG TGAACGACAA AATGGCGTCC TGAACAGTTG 501 GACTGATCAG GACAGCAAAG ACAGCACCTA CAGCATGAGC AGCACCCTCA 551 CGTTGACCAA GGACGAGTAT GAACGACATA ACAGCTATAC CTGTGAGGCC 601 ACTCACAAGA CATCAACTTC ACCCATTGTC AAGAGCTTCA ACAGGAATGA 651 GTGTTAG (SEQ ID NO:354)
Sequência de aminoácidos da LC de Ab-24 incluindo o péptido sinal: 1 METDTILLWV LLLWVPGSTG DIVLTQSPAS LAVSLGQRATIACKASQSVD 51 YDGTSYMNWY QQKPGQPPKL LIYAASNLES EIPARFSGTG SGTDFTLNIH 101 PVEEEDITTY YCQQSNEDPF TFGGGTKLEI KRADAAPTVS IFPPSSEQLT 151 SGGASWCFL NNFYPKDINV KWKIDGSERQ NGVLNSWTDQ DSKDSTYSMS 201 STLTLTKDEY ERHNSYTCEA THKTSTSPIV KSFNRNEC (SEQ ID NO:355) 119 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de ácido nucleico da LC de Ab-24 incluindo a sequência codificando o péptido sinal: 1 ATGGAGACAG ACACAATCCT GCTATGGGTG CTGCTGCTCT GGGTTCCAGG 51 CTCCACTGGT GACATTGTGT TGACCCAGTC TCCAGCTTCT TTGGCTGTGT 101 CTCTAGGGCA GAGGGCCACC ATCGCCTGCA AGGCCAGCCA AAGTGTTGAT 151 TATGATGGTA CTAGTTATAT GAATTGGTAC CAACAGAAAC CAGGACAGCC 201 ACCCAAACTC CTCATCTATG CTGCATCCAA TCTAGAATCT GAGATCCCAG 251 CCAGGTTTAG TGGCACTGGG TCTGGGACAG ACTTCACCCT CAACATCCAT 301 CCTGTGGAGG AGGAGGATAT CACAACCTAT TACTGTCAGC AAAGTAATGA 351 GGATCCGTTC ACGTTCGGAG GGGGGACCAA GTTGGAAATA AAACGGGCTG 401 ATGCTGCACC AACTGTATCC ATCTTCCCAC CATCCAGTGA GCAGTTAACA 451 TCTGGAGGTG CCTCAGTCGT GTGCTTCTTG AACAACTTCT ACCCCAAAGA 501 CATCAATGTC AAGTGGAAGA TTGATGGCAG TGAACGACAA AATGGCGTCC 551 TGAACAGTTG GACTGATCAG GACAGCAAAG ACAGCACCTA CAGCATGAGC 601 AGCACCCTCA CGTTGACCAA GGACGAGTAT GAACGACATA ACAGCTATAC 651 CTGTGAGGCC ACTCACAAGA CATCAACTTC ACCCATTGTC AAGAGCTTCA 701 ACAGGAATGA GTGTTAG (SEQ Π> NO:356)
Cadeia Pesada de Ab-24:
Sequência de aminoácidos da forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-24: 1 QVQLQQPGTE LVRPGTSVKL SCKASGYIFT TYWMNWVKQR PGQGLEWIGM 51 IPIPSÁSEIRLbQKFlCDKATL TLDKSSSTAY MHLSGPTSVD SAVYYCARSG 101 EWGSMDY)WGQ GTSVTVSSAff TTPPSVYPLA PGSAAQTNSM VTLGCLWGY 151 FPÉPVTVTWNSGSLSSGVHT FPA VLQSDLY TLSSSVTVPS STWPSETVTC 201 NVAHPASSTK WKKIVPRDC GCEPCICTiV EVSSVFJFPP KPKDJ^TITL 251 TPKVTCVWDISKDDPE VQF SWFVDD VEVH TA QTQjPREEQ FNSTFRSVSE 301 LPIMHQDWLN GKEFKCR WSAAFPAPIEKTISKTKGRPKA PQVYTIPPPK 351 EQMAKDKVSL TCM1TDFFPE DITVEWQWNG QPAENYKNTQ PJMDTDGSYF 401 IYSKLNVQESNWEAGNTFTC SVLHEGLHNHHTEKSLSHSP G/f (SEQ ID NO:357) 120 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de ácido nucleico codificando a forma madura (péptido sinal removido) da HC de Ab-24: 1 CAGGTCCAAC TACAGCAGCC TGGGACTGAG CTGGTGAGGC CTGGAACTTC 51 AGTGAAGTTG TCCTGTAAGG CTTCTGGCTA CATCTTCACC ACCTACTGGA 101 TGAACTGGGT GAAACAGAGG CCTGGACAAG GCCTTGAGTG GATTGGCATG 151 ATTCATCCTT CCGCAAGTGA AATTAGGTTG GATCAGAAAT TCAAGGACAA 201 GGCCACATTG ACTCTTGACA AATCCTCCAG CACAGCCTAT ATGCACCTCA 251 GCGGCCCGAC ATCTGTGGAT TCTGCGGTCT ATTACTGTGC AAGATCAGGG 301 GAATGGGGGT CTATGGACTA CTGGGGTCAA GGAACCTCAG TCACCGTCTC 351 CTCAGCCAAA ACGACACCCC CATCTGTCTA TCCACTGGCC CCTGGATCTG 401 CTGCCCAAAC TAACTCCATG GTGACCCTGG GATGCCTGGT CAAGGGCTAT . 451 TTCCCTGAGC CAGTGACAGT GACCTGGAAC TCTGGATCCC TGTCCAGCGG 501 TGTGCACACC TTCCCAGCTG TCCTGCAGTC TGACCTCTAC ACTCTGAGCA 551 GCTCAGTGAC TGTCCCCTCC AGCACCTGGC CCAGCGAGAC CGTCACCTGC 601 AACGTTGCCC ACCCGGCCAG CAGCACCAAG GTGGACAAGA AAATTGTGCC 651 CAGGGATTGT GGTTGTAAGC CTTGCATATG TACAGTCCCA GAAGTATCAT 701 CTGTCTTCAT CTTCCCCCCA AAGCCCAAGG ATGTGCTCAC CATTACTCTG 751 ACTCCTAAGG TCACGTGTGT TGTGGTAGAC ATCAGCAAGG ATGATCCCGA 801 GGTCCAGTTC AGCTGGTTTG TAGATGATGT GGAGGTGCAC ACAGCTCAGA 851 CGCAACCCCG GGAGGAGCAG TTCAACAGCA CTTTCCGCTC AGTCAGTGAA 901 CTTCCCATCA TGCACCAGGA CTGGCTCAAT GGCAAGGAGT TCAAATGCAG 951 GGTCAACAGT gcagctttcc CTGCCCCCAT CGAGAAAACC ATCTCCAAAA 1001 CCAAAGGCAG ACCGAAGGCT CCACAGGTGT ACACCATTCC ACCTCCCAAG 1051 GAGCAGATGG CCAAGGATAA AGTCAGTCTG ACCTGCATGA TAACAGACTT 1101 CTTCCCTGAA G AC ATTACTG TGG AGTGGC A GTGGAATGGG CAGCCAGCGG 1151 AGAACTACAA GAACACTCAG CCCATCATGG ACACAGATGG CTCTTACTTC 1201 ATCTACAGCA AGCTCAATGT GCAGAAGAGC AACTGGGAGG CAGGAAATAC 1251 TTTCACCTGC TCTGTGTTAC ATGAGGGCCT GCACAACCAC CATACTGAGA 1301 AGAGCCTCTC CCACTCTCCT GGTAAATGA (SEQ IDNO:361)
Sequência de aminoácidos da HC de Ab-24 incluindo o péptido sinal: 1 MGWSSIILFL VATATGVHSQ VQLQQPGTEL VRPGTSVKLS CKASGYIFTT 51 YWMNWVKQRP GQGLEWIGMIHPSASEIRLD QKFKDKATLT LDKSSSTAYM 101 HLSGPTSVDS AVYYCARSGE WGSMDYWGQG TSVTVSSAKT TPPSVYPLAP 151 GSAAQTNSMV TLGCLVKGYF PEPVTVT WNS GSLSSGVHTF PAVLQSDLYT 201 LSSSVTVPSS TWPSETVTCN VAHPASSTKV DKKTVPRDCG CKPCICTVPE 251 VSSVFIFPPK PKDVLTITLT PKVTCVWDISKDDPEVQFS WFVDDVEVHT 301 AQTQPREEQF NSTFRSVSEL PIMHQDWLNG KEFKCRVNSA AFPAPIEKTI 351 SKTKGRPKAP QVYTIPPPKE QMAKDKVSLT CMITDFFPEDITVEWQWNGQ 401 PAENYKNTQPIMDTDGSYFIYSKLNVQKSN WEAGNTFTCS VLHEGLHNHH 451 TEKSLSHSPG K (SEQ ID NO:362) 121 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Sequência de ácido nucleico da HC de Ab-24 incluindo a sequência codificando o péptido sinal: 1 ATGGGATGGA GCTCTATCAT CCTCTTCTTG GTAGCAACAG CTACAGGTGT 51 CCACTCCCAG GTCCAACTAC AGCAGCCTGG GACTGAGCTG GTGAGGCCTG 101 GAACTTCAGT GAAGTTGTCC TGTAAGGCTT CTGGCTACAT CTTCACCACC 151 TACTGGATGA ACTGGGTGAA ACAGAGGCCT GGACAAGGCC TTGAGTGGAT 201 TGGCATGATT CATCCTTCCG CAAGTGAAAT TAGGTTGGAT CAGAAATTCA 251 AGGACAAGGC CACATTGACT CTTGACAAAT CCTCCAGCAC AGCCTATATG 301 CACCTCAGCG GCCCGACATC TGTGGATTCT GCGGTCTATT ACTGTGCAAG 351 ATCAGGGGAA TGGGGGTCTA TGGACTACTG GGGTCAAGGA ACCTCAGTCA 401 CCGTCTCCTC AGCCAAAACG ACACCCCCAT CTGTCTATCC ACTGGCCCCT 451 GGATCTGCTG CCCAAACTAA CTCCATGGTG ACCCTGGGAT GCCTGGTCAA 501 GGGCTATTTC CCTGAGCCAG TGACAGTGAC CTGGAACTCT GGATCCCTGT 551 CCAGCGGTGT GCACACCTTC CCAGCTGTCC TGCAGTCTGA CCTCTACACT 601 CTGAGCAGCT CAGTGACTGT CCCCTCCAGC ACCTGGCCCA GCGAGACCGT 651 CACCTGCAAC GTTGCCCACC CGGCCAGCAG CACCAAGGTG GACAAGAAAA 701 TTGTGCCCAG GGATTGTGGT TGTAAGCCTT GCATATGTAC AGTCCCAGAA 751 GTATCATCTG TCTTCATCTT CCCCCCAAAG CCCAAGGATG TGCTCACCAT 801 TACTCTGACT CCTAAGGTCA CGTGTGTTGT GGTAGACATC AGCAAGGATG 851 ATCCCGAGGT CCAGTTCAGC TGGTTTGTAG ATGATGTGGA GGTGCACACA 901 GCTCAGACGC AACCCCGGGA GGAGCAGTTC AACAGCACTT TCCGCTCAGT 951 CAGTGAACTT CCCATCATGC ACCAGGACTG GCTCAATGGC AAGGAGTTCA 1001 AATGCAGGGT CAACAGTGCA GCTTTCCCTG CCCCCATCGA GAAAACCATC 1051 TCCAAAACCA AAGGCAGACC GAAGGCTCCA CAGGTGTACA CCATTCCACC 1101 TCCCAAGGAG CAGATGGCCA AGGATAAAGT CAGTCTGACC TGCATGATAA 1151 CAGACTTCTT CCCTGAAGAC ATTACTGTGG AGTGGCAGTG GAATGGGCAG 1201 CCAGCGGAGA ACTACAAGAA CACTCAGCCC ATCATGGACA CAGATGGCTC 1251 TTACTTCATC TACAGCAAGC TCAATGTGCA GAAGAGCAAC TGGGAGGCAG 1301 GAAATACTTT CACCTGCTCT GTGTTACATG AGGGCCTGCA CAACCACCAT 1351 ACTGAGAAGA GCCTCTCCCA CTCTCCTGGT AAATGA (SEQID NO:363)
As sequências de CDR na região variável da cadeia leve de Ab-24 são como se segue: CDR-L1: KASQSVDYDGTSYMN (SEQ ID NO:351) CDR-L2: AASNLES (SEQ ID NO:352) CDR-L3: QQSNEDPFT (SEQ ID NO:353)
As sequências de CDR na região variável da cadeia pesada de Ab-24 são como se segue: CDR-H1: TYWMN (SEQ ID NO:358) CDR-H2: MIHPSASEIRLDQKFKD (SEQ ID NO:359) CDR-H3: SGEWGSMDY (SEQ ID NO:360) A Tabela 1 abaixo proporciona as SEQ ID NOs e as sequências de aminoácidos das CDR de Ab-A, Ab-B, Ab-C, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab-7, Ab-8, Ab-9, Ab-10, Ab-11, Ab-12, Ab-13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21, Ab-22, Ab-23 e Ab-24. Ll, L2 e L3 referem- 122 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ se às CDR de cadeia leve 1, 2 e 3, e Hl, H2 e H3 referem-se às CDR de cadeia pesada 1, 2 e 3 de acordo com o sistema de numeração de Kabat (Kabat et al., 1987 em "Sequences of Proteins of Immunological Interest", U.S. Department of Health and Human Services, NIH, USA).
Tabela 1 SEQ ID NO DESCRIÇÃO SEQUÊNCIA DE AMINOÁCIDOS 54 CDR-L1 de Ab-A e Ab-1 QSSQSVYDNNWLA 55 CDR-L2 de Ab-A e Ab-1 DASDLAS 56 CDR-L3 de Ab-A e Ab-1 QGAYNDVIYA 51 CDR-H1 de Ab-A e Ab-1 SYWMN 52 CDR-H2 de Ab-A e Ab-1 TIDSGGRTDYASWAKG 53 CDR-H3 de Ab-A e Ab-1 NWNL 60 CDR-L1 de Ab-B SASSSVSFVD 61 CDR-L2 de Ab-B RTSNLGF 62 CDR-L3 de Ab-B QQRSTYPPT 57 CDR-H1 de Ab-B TSGMGVG 58 CDR-H2 de Ab-B HIWWDDVKRYNPVLKS 59 CDR-H3 de Ab-B EDFDYDEEYYAMDY 48 CDR-L1 de Ab-C KASQSVDYDGDSYMN 49 CDR-L2 de Ab-C AASNLES 50 CDR-L3 de Ab-C QQSNEDPWT 45 CDR-H1 de Ab-C DCYMN 46 CDR-H2 de Ab-C DINPFNGGTTYNQKFKG 47 CDR-H3 de Ab-C SHYYFDGRVPWDAMDY 42 CDR-L1 de Ab-D QASQGTSINLN 43 CDR-L2 de Ab-D GSSNLED 44 CDR-L3 de Ab-D LQHSYLPYT 39 CDR-H1 de Ab-D DHYMS 40 CDR-H2 de Ab-D DINPYSGETTYNQKFKG 41 CDR-H3 de Ab-D DDYDASPFAY 275 CDR-L1 de Ab-2 RASSSVYYYMH 276 CDR-L2 de Ab-2 ATSNLAS 277 CDR-L3 de Ab-2 QQWSSDPLT 287 CDR-H1 de Ab-2 DYFIH 288 CDR-H2 de Ab-2 RLDPEDGESDYAPKFQD 289 CDR-H3 de Ab-2 EDYDGTYTFFPY 278 CDR-L1 de Ab-3 e Ab-15 SVSSTISSNHLH 279 CDR-L2 de Ab-3 e Ab-15 GTSNLAS 123 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
280 Ab-3 e Ab-15 CDR-L3 de QQWSSYPLT 290 Ab-3 e Ab-15 CDR-H1 de DFYLH 291 CDR-H2 de Ab-3 e Ab-15 RIDPENGDTLYDPKFQD 292 CDR-H3 de Ab-3 e Ab-15 EADYFHDGTSYWYFDV 78 CDR-L1 de Ab-4 e Ab-5 RASQDISNYLN 79 CDR-L2 de Ab-4 e Ab-5 YTSRLLS 80 CDR-L3 de Ab-4 e Ab-5 QQGDTLPYT 245 CDR-H1 de Ab-4 e Ab-5 DYNMH 246 CDR-H2 de Ab-4 e Ab-5 EINPNSGGAGYNQKFKG 247 CDR-H3 de Ab-4 e Ab-5 LGYDDIYDDWYFDV 81 CDR-L1 de Ab-6 RASQDISNYLN 99 CDR-L2 de Ab-6 YTSRLHS 100 CDR-L3 de Ab-6 QQGDTLPYT 248 CDR-H1 de Ab-6 DYNMH 249 CDR-H2 de Ab-6 EINPNSGGSGYNQKFKG 250 CDR-H3 de Ab-6 LVYDGSYEDWYFDV 101 CDR-L1 de Ab-7 RASQVITNYLY 102 CDR-L2 de Ab-7 YTSRLHS 103 CDR-L3 de Ab-7 QQGDTLPYT 251 CDR-H1 de Ab-7 DYNMH 252 CDR-H2 de Ab-7 EINPNSGGAGYNQQFKG 253 CDR-H3 de Ab-7 LGYVGNYEDWYFDV 104 CDR-L1 de Ab-8 RASQDISNYLN 105 CDR-L2 de Ab-8 YTSRLLS 106 CDR-L3 de Ab-8 QQGDTLPYT 254 CDR-H1 de Ab-8 DYNMH 255 CDR-H2 de Ab-8 EINPNSGGAGYNQKFKG 256 CDR-H3 de Ab-8 LGYDDIYDDWYFDV 107 CDR-L1 de Ab-9 RASQDISNYLN 108 CDR-L2 de Ab-9 YTSRLFS 109 CDR-L3 de Ab-9 QQGDTLPYT 257 CDR-H1 de Ab-9 DYNMH 258 CDR-H2 de Ab-9 EINPNSGGAGYNQKFKG 259 CDR-H3 de Ab-9 LGYDDIYDDWYFDV 110 CDR-L1 de Ab-10 RASQDISNYLN 111 CDR-L2 de Ab-10 YTSRLLS 112 CDR-L3 de Ab-10 QQGDTLPYT 260 CDR-H1 de Ab-10 DYNMH 261 CDR-H2 de Ab-10 EINPNSGGAGYNQKFKG 262 CDR-H3 de Ab-10 LGYDDIYDDWYFDV 281 CDR-L1 de Ab-11 e Ab-16 RASSSISYIH 124 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
282 CDR-L2 de Ab-11 e Ab-16 ATSNLAS 283 CDR-L3 de Ab-11 e Ab-16 QQWSSDPLT 293 CDR-H1 de Ab-11 e Ab-16 DYYIH 294 CDR-H2 de Ab-11 e Ab-16 RVDPDNGETEFAPKFPG 295 CDR-H3 de Ab-11 e Ab-16 EDYDGTYTWFPY 113 CDR-L1 de Ab-12 RASQDISNYLN 114 CDR-L2 de Ab-12 YTSTLQS 115 CDR-L3 de Ab-12 QQGDTLPYT 263 CDR-H1 de Ab-12 DYNMH 264 CDR-H2 de Ab-12 EINPNSGGSGYNQKFKG 265 CDR-H3 de Ab-12 LGYYGNYEDWYFDV 284 CDR-L1 de Ab-13 e Ab -14 RASSSVTSSYLN 285 CDR-L2 de Ab-13 e Ab -14 STSNLAS 286 CDR-L3 de Ab-13 e Ab-14 QQYDFFPST 296 CDR-H1 de Ab-13 e Ab -14 DYYMN 297 CDR-H2 de Ab-13 e Ab-14 DINPYNDDTTYNHKFKG 298 CDR-H3 de Ab-13 e Ab-14 ETAVITTNAMD 116 CDR-L1 de Ab-17 e Ab-18 SVSSSISSSNLH 237 CDR-L2 de Ab-17 e Ab-18 GTSNLAS 238 CDR-L3 de Ab-17 e Ab-18 QQWTTTYT 266 CDR-H1 de Ab-17 e Ab-18 DYYIH 267 CDR-H2 de Ab-17 e Ab-18 RIDPDNGESTYVPKFQG 268 CDR-H3 de Ab-17 e Ab-18 EGLDYGDYYAVDY 239 CDR-L1 de Ab-19, Ab-2 0 e Ab-23 RASQDISSYLN 240 CDR-L2 de Ab-19, Ab-2 0 e Ab-23 STSRLNS 241 CDR-L3 de Ab-19, Ab-20 e Ab-23 QQDIKHPT 269 CDR-H1 de Ab-19, Ab-2 0 e Ab-23 DYIMH 270 CDR-H2 de Ab-19, Ab-2 0 e Ab-23 YINPYNDDTEYNEKFKG 271 CDR-H3 de Ab-19, Ab-2 0 e Ab-23 SIYYYDAPFAY 242 CDR-L1 de Ab-21 e Ab-22 KASQDVFTAVA 243 CDR-L2 de Ab-21 e Ab-22 WASTRHT 244 CDR-L3 de Ab-21 e Ab-22 QQYSSYPLT 272 CDR-H1 de Ab-21 e Ab-22 DYYMH 273 CDR-H2 de Ab-21 e Ab-22 RIDPENGDIIYDPKFQG 274 CDR-H3 de Ab-21 e Ab-22 DAGDPAWFTY 351 CDR-L1 de Ab-24 KASQSVDYDGTSYMN 352 CDR-L2 de Ab-24 AASNLES 353 CDR-L3 de Ab-24 QQSNEDPFT 358 CDR-H1 de Ab-24 TYWMN 359 CDR-H2 de Ab-24 MIHPSASEIRLDQKFKD 360 CDR-H3 de Ab-24 SGEWGSMDY 125 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Um oligopéptido ou polipéptido está dentro do âmbito da divulgação, se possuir uma sequência de aminoácidos que seja pelo menos 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica a pelo menos uma das CDR da Tabela 1 acima, e/ou a uma CDR de um agente de ligação a esclerostina que bloqueia de forma cruzada a ligação de pelo menos um dos anticorpos Ab-A, Ab-B, Ab-C, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab-7, Ab-8, Ab-9, Ab-10, Ab-11, Ab-12, Ab-13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21, Ab-22, Ab-23, e Ab-24 a esclerostina, e/ou é bloqueada de forma cruzada de se ligar a esclerostina por pelo menos um dos anticorpos Ab-A, Ab-B, Ab-C, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab-7, Ab-8, Ab-9, Ab-10, Ab-11, Ab-12, Ab-13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21, Ab-22, Ab-23, e Ab-24; e/ou a uma CDR de um agente de ligação a esclerostina em que o agente de ligação pode bloquear o efeito inibidor da esclerostina num ensaio de mineralização baseado em células (i.e. um agente de ligação neutralizador de esclerostina) ; e/ou a uma CDR de um agente de ligação a esclerostina que se liga a um epitopo da Volta 2; e/ou a uma CDR de um agente de ligação a esclerostina que se liga a um epitopo T20.6; e/ou a uma CDR de um agente de ligação a esclerostina que se liga a um epitopo "derivado de T20.6 (nó de cistinas + 4 braços)".
Os polipéptidos e anticorpos agentes de ligação a esclerostina estão dentro do âmbito da divulgação se tiverem sequências de aminoácidos que sejam pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idênticas a uma região variável de pelo menos um dos anticorpos Ab-A, Ab-B, Ab-C, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab-7, Ab-8, Ab-9, Ab-10, Ab-11, Ab-12, Ab-13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21, Ab-22, Ab-23 e Ab-24, e bloquearem de forma cruzada a ligação de pelo menos um dos anticorpos Ab-A, Ab-B, Ab-C, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab-7, Ab-8, Ab-9, Ab-10, Ab-11, Ab-12, Ab-13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21, Ab-22, Ab-23 e Ab-24 a esclerostina, e/ou forem bloqueados de forma cruzada de se ligarem a esclerostina por pelo menos um dos anticorpos Ab-A, B-Ab, Ab-C, Ac-D, Ab-1, 126 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Ab-2, Ab-3, Ab-4, 5-Ab, Ab-6, 7-Ab, Ab-8, 9-Ab, Ab-10 Ab-11, Ab-12, Ab -13, Ab-14, Ab-15 Ab-16 Ab-17, Ab-18 Ab-19, Ab-20 Ab-21, Ab-22, Ab-23 e Ab-24; e/ou puderem bloquear o efeito inibidor da esclerostina num ensaio de mineralização baseado em células (i.e. um agente de ligação neutralizador da esclerostina); e/ou se ligarem a um epitopo de Volta 2; e/ou se ligarem a um epitopo T20.6; e/ou se ligarem a um epitopo "derivado de T20.6 (nó de cistinas + 4 braços)".
Polinucleótidos codificando agentes de ligação a esclerostina estão dentro do âmbito da divulgação se tiverem sequências polinucleotidicas que sejam, pelo menos, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idênticas a um polinucleótido codificando uma região variável de pelo menos um dos anticorpos Ab-A, Ab-B, Ab-C, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab-7, Ab-8, Ab-9, Ab-10, Ab-11, Ab-12, Ab-13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21; Ab-22, Ab-23, e Ab-24, e em que os agentes de ligação a esclerostina codificados bloquearem de forma cruzada a ligação de pelo menos um dos anticorpos Ab-A, Ab-B, Ab-C, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab-7, Ab-8, Ab-9, Ab-10, Ab-11, Ab-12, Ab-13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21, Ab-22, Ab-23 e Ab-24 a esclerostina, e/ou forem bloqueados de forma cruzada de se ligar a esclerostina por pelo menos um dos anticorpos Ab-A, Ab-B, Ab-C, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab-7, Ab-8, Ab-9, Ab-10, Ab-11, Ab-12, Ab-13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21, Ab-22, Ab-23 e Ab-24; e/ou puderem bloquear o efeito inibidor da esclerostina num ensaio de mineralização baseado em células (i.e. um agente de ligação neutralizador da esclerostina); e/ou se ligarem a um epitopo de Volta 2; e/ou se ligarem a um epitopo T20.6; e/ou se ligarem a um epitopo "derivado de T20.6 (nó de cistinas + 4 braços)".
Os anticorpos de acordo com o invento podem ter uma afinidade de ligação para a esclerostina humana de menos de ou igual a ΙχΙΟ'7 M, menos de ou igual a lxlCT8 M, menos de ou igual a ΙχΙΟ'9 M, menos de ou igual a ΙχΙΟ'10 M, menos de ou igual a ΙχΙΟ'11 M, ou menos de ou igual a ΙχΙΟ'12 M. 127 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ A afinidade de um agente de ligação tal como um anticorpo ou parceiro de ligação, bem como a extensão a que um agente de ligação (tal como um anticorpo) inibe a ligação, podem ser determinados por um perito na técnica utilizando técnicas convencionais, por exemplo as descritas por Scatchard et al. (Ann. N.Y. Acad. Sei. 51: 660-672 (1949)) ou através de ressonância de plasmão de superfície (SPR; BIAcore, Biosensor, Piscataway, NJ) . Para a ressonância de plasmão de superfície, as moléculas alvo são imobilizados numa fase sólida e expostas a ligandos numa fase móvel que corre ao longo de uma célula de fluxo. Se a ligação do ligando ao alvo imobilizado ocorrer, o índice de refraeção local muda, levando a uma mudança de ângulo de SPR, que pode ser monitorizada em tempo real, através da detecção de mudanças na intensidade da luz reflectida. As taxas de alteração do sinal de SPR podem ser analisadas para produzir constantes de velocidade aparentes para as fases de associação e de dissociação da reacção de ligação. A razão destes valores dá a constante de equilíbrio aparente (afinidade) (ver, p. ex., Wolff et al., Câncer Res. 53: 2560- 65 (1993)).
Um anticorpo de acordo com o presente invento pode pertencer a qualquer classe de imunoglobulinas, por exemplo IgG, IgE, IgM, IgD, ou IgA. Pode ser obtido a partir de ou derivado de um animal, por exemplo, aves (p. ex., galinha) e mamíferos, que incluem, mas não estão limitados a um ratinho, rato, hamster, coelho, ou outro roedor, vaca, cavalo, ovelha, cabra, camelo, humano ou outro primata. O anticorpo pode ser um anticorpo de internalização. A produção de anticorpos é descrita, em geral, na Publicação de Patente U.S. No. 2004/0146888 Al.
Ensaios de Caracterização
Nos métodos descritos acima para gerar anticorpos, incluindo a manipulação das CDR específicas de Ab-A, Ab-B, Ab-C, Ab-D, e Anticorpo 1-24 (Ab-1 to Ab-24) em novas estruturas e/ou regiões constantes, ensaios apropriados estão disponíveis para seleccionar os anticorpos desejados (i.e. ensaios para determinação da afinidade de ligação a esclerostina; ensaios de bloqueio cruzado; "ensaio de ligação 128 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ de competição ao epitopo do péptido de esclerostina humana" baseado em Biacore, ensaio baseado em células MC3T3-E1; ensaios in vivo).
Ensaios de Ligação ao Epitopo A forma madura da esclerostina humana é uma glicoproteina de 190 aminoácidos com uma estrutura de nó de cistinas (Figuras 8 e 9). Além da estrutura de nó de cistinas, a proteína é caracterizada como tendo três voltas designadas como Volta 1, Volta 2 e Volta 3. A esclerostina humana foi submetida a digestão proteolítica para produzir fragmentos. Resumidamente, utilizando diferentes proteases, incluindo tripsina, aspN e lysC, foram gerados fragmentos com vários locais de clivagem e tamanhos. As sequências e a massa para vários péptidos de esclerostina humana foram determinadas. A protecção de anticorpos foi avaliada para determinar o efeito na acessibilidade para proteólise, incluindo mascaramento do local cortado e mudança de péptidos. Finalmente, foi realizado um "ensaio de competição de epitopos do péptido de esclerostina humana" baseado em BIAcore. A exposição da esclerostina a clivagem com tripsina resultou num padrão de fragmentos peptídicos tal como resumido na Figura 13. Os fragmentos são referidos como T19.2, T20, T20.6 e T21-22. Tal como se mostra esquematicamente na Figura 19B, o epitopo T20.6 é um complexo de quatro sequências peptídicas separadas que são unidas através das três ligações dissulfureto da região do nó de cistinas. Dois dos péptidos são unidos por duas ligações dissulfureto. Os outros dois péptidos são ligados por uma ligação dissulfureto que, esquematicamente, divide os primeiros dois polipéptidos. O epitopo T20.6 que foi gerado através de digestão com tripsina retém a estrutura do nó de cistinas do polipéptido nativo e é reconhecido pelos anticorpos Ab-C e Ab-D. Um derivado do epitopo T20.6 consiste na região do nó de cistinas e nos aminoácidos 58-64, 73-81, 112-117 e 138-141 na posição da sequência com referência a SEQ ID NO:l. Este epitopo derivado é mostrado na Figura 21. Um epitopo 129 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ compreendendo a região do nó de cistinas pode ter um ou mais aminoácidos que estejam presentes no epitopo T20.6 (Figura 19B) mas não presente no epitopo T20.6 derivado (Figura 21).
Outra região contendo um epitopo foi identificada na região Volta 2 da esclerostina humana (Figura 19A) e é reconhecida pelos anticorpos Ab-A e Ab-B. Um epitopo da Volta 2 compreende os aminoácidos 86-111 de SEQ ID N0:1 (C4GPARLLPNAIGRGKWWRPSGPDFRC5, SEQ ID NO:6). Espacialmente, com referência à esclerostina inteira de SEQ ID N0:1, a estrutura contendo a Volta 2 é definida numa extremidade por uma ligação dissulfureto entre a cisteina na posição 86 (C4) e cisteina na posição 144 (C8), e na outra extremidade por uma ligação dissulfureto entre a cisteina na posição 111 (C5) e a cisteina na posição 57 (Cl).
Os péptidos gerados por clivagem de aspN da esclerostina humana são mostrados na Figura 12. Na Figura, estes péptidos são designados como AspN14.6, AspN18.6, e AspN22.7-23.5, e são também aqui referidos como N14.6, N18.6, e N22.7-23.5, respectivamente.
Um grupo de anticorpos exibe um padrão especifico de ligação a certos epitopos, tal como evidenciado por um "ensaio de ligação de competição ao epitopo do péptido de esclerostina humana" baseado em Biacore™. Resumidamente, o anticorpo é pré-incubado com o epitopo a testar, em concentrações que saturarão os locais de ligação ao epitopo do anticorpo. 0 anticorpo é então exposto a esclerostina ligada a uma superfície do chip. Após os procedimentos de incubação e lavagem adequados, é estabelecido um padrão de ligação competitiva. Tal como mostrado na Figura 18, o anticorpo exemplar Ab-D ligou-se a moléculas de esclerostina ligadas à superfície do chip. A pré-incubação do anticorpo Ab-D com esclerostina diminuiu a ligação do anticorpo a esclerostina no chip para perto de zero. A pré-incubação com um péptido consistindo no epitopo T19.2 mostrou que T19.2 não competiu com a esclerostina pela ligação ao anticorpo. No entanto, a pré-incubação com qualquer um dos epitopos designados T20, T20.6, T21-22, ou N22.7-23.5 aboliu uma grande proporção da ligação do anticorpo à esclerostina no chip. Em contraste, a pré-incubação do anticorpo com qualquer 130 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ um dos epitopos designados 119.2, N14.6 ou N18.6 não aboliu a capacidade do anticorpo para se ligar a esclerostina. Um segundo anticorpo exemplar com este perfil de ligação (Fig. 17) é Ab-C. O anticorpo Ab-D é portanto exemplar e representativo de um grupo de anticorpos que se ligam aos epitopos T20, T20.6, T21-22 e N22.7-23.5, e têm ligação detectável mínima aos epitopos T19.2, N14.6 e N18.6, tal como medido pela sua capacidade para bloquear a ligação do anticorpo à esclerostina. Os anticorpos possuindo este padrão de ligação característico podem ou não partilhar a sequência de aminoácidos em uma ou mais regiões da molécula de anticorpo. A semelhança dos anticorpos é determinada funcionalmente tal como através da capacidade de se ligarem a esclerostina após pré-incubação com cada um dos epitopos acima descritos. Por "semelhante a" entenda-se, por exemplo, que o anticorpo exibirá ligação a cada um dos polipéptidos T20, T20.6, T21-22 e N22.7-23.5 pelo que esta ligação competirá especificamente pelo menos 50% da ligação do anticorpo a esclerostina que de outra forma ocorreria na ausência de pré-incubação com esclerostina ou um péptido de esclerostina. 0 anticorpo exibirá também pouca ou nenhuma ligação detectável aos polipéptidos T19.2, N14.6 e N18.6, resultando numa redução de 30% ou menos na ligação que ocorreria na ausência de pré-incubação com esclerostina ou um péptido de esclerostina.
Por exemplo, sem estar vinculado a um mecanismo particular, o padrão de ligação do anticorpo da Figura 18 sugere que o espaço do epitopo ao qual o anticorpo Ab-D e outros anticorpos que possuem o padrão de ligação ao epitopo de Ab-D consiste num polipéptido compreendendo a região do nó de cistinas de esclerostina.
Assim, tal como aqui divulgado e com referência à Figura 19B, um epitopo T20.6 exemplar compreende quatro cadeias peptídicas ligadas através de três ligações dissulfureto separadas. A cadeia peptídica SAKPVTELVC3SGQC4GPAR (SEQ ID NO: 3) é ligada à cadeia peptídica LVASC7KC8KRLTR (SEQ ID NO:5) através de ligações dissulfureto de C3 a C7, e de C4 a C8. A cadeia peptídica DVSEYSC1RELHFTR (SEQ ID NO:2) é ligada à cadeia peptídica WWRPSGPDFRC5IPDRYR (SEQ ID NO:4) através 131 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ de uma ligação dissulfureto de Cl a C5. Os polipéptidos de SEQ ID NOs:3 e 5 permanecem associados aos polipéptidos de SEQ ID NOs:2 e 4 através de uma construção estérica através da qual a ligação C1-C5 cruza o plano das ligações C4-C8 e C3-C7, e está localizada entre elas, tal como ilustrado na Figura 19B.
Tal como aqui divulgado e com referência à Figura 21, um epitopo derivado exemplar de T20.6 compreende quatro cadeias peptidicas ligadas através de três ligações dissulfureto separadas. A cadeia peptídica SAKPVTELVC3SGQC4 (SEQ ID NO:70) é ligada à cadeia peptídica LVASC7KC8 (SEQ ID NO:71) através de ligações dissulfureto de C3 a C7, e de C4 a C8. A cadeia peptídica C1RELHFTR (SEQ ID NO:72) é ligada à cadeia peptídica C5IPDRYR (SEQ ID NO:73) através de uma ligação dissulfureto de Cl a C5. Os polipéptidos de SEQ ID-NOs:70 e 71 permanecem associados aos polipéptidos de SEQ ID NOs:72 e 73 através de uma construção estérica através da qual a ligação C1-C5 cruza o plano das ligações C4-C8 e C3-C7 e está localizada entre elas, tal como ilustrado na Figura 21. O anticorpo Ab-A é exemplar e representativo de um segundo grupo de anticorpos que possuem um padrão de ligação característico a péptidos de esclerostina humana, que é distinto daquele obtido para os anticorpos Ab-C e Ab-D. Ab-A e o grupo de anticorpos que representa ligam-se ao epitopo N22.7-23.5 e têm ligação detectável mínima aos epitopos T19.2, T20, T20.6, T21-22, N14.6 ou N18.6, tal como medido pela capacidade para bloquear a ligação do anticorpo a esclerostina (Fig. 15) . Um segundo anticorpo exemplar com este perfil de ligação (Fig. 16) é Ab-B. Os anticorpos tendo este padrão de ligação característico podem ou não partilhar a sequência de aminoácidos em uma ou mais regiões da molécula de anticorpo. A semelhança dos anticorpos é determinada funcionalmente tal como através da capacidade para se ligarem a esclerostina após pré-incubação com cada um dos epitopos acima descritos. Por "semelhante a" entenda-se, por exemplo, que o anticorpo exibirá ligação ao polipéptido N22.7-23.5 pelo que esta ligação competirá especificamente pelo menos 50% da ligação do anticorpo a esclerostina que de outra forma ocorreria na ausência de pré-incubação com esclerostina ou um péptido de esclerostina. O anticorpo exibirá também pouca ou 132 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ nenhuma ligação aos polipéptidos T19.2, T20, T20.6, T21-22, N14.6 e N18.6, resultando numa redução de 30% ou menos na ligação que ocorreria na ausência de pré-incubação com esclerostina ou um péptido de esclerostina.
Por exemplo, sem estar vinculado a um mecanismo particular, o padrão de ligação do anticorpo da Figura 15 sugere que o espaço do epitopo ao qual se ligam o anticorpo Ab-A e outros anticorpos possuindo o padrão de ligação ao epitopo da ligação de Ab-A consiste num polipéptido compreendendo a região Volta 2 de esclerostina. Assim, tal como aqui divulgado e com referência à Figura 19A, a região da Volta 2 pode ser descrita como um péptido linear, mas adquire uma estrutura terciária quando está presente na esclerostina nativa ou numa porção contendo nó de cistinas da esclerostina em que a estrutura da ligação dissulfureto nativa é mantida. A estrutura linear ou terciária do epitopo da Volta 2 pode afectar a ligação dos anticorpos a este, tal como discutido nos Exemplos. A região da Volta 2 pode compreender a seguinte sequência de aminoácidos: C4GPARLLPNAIGRGKWWRPSGPDFRC5 (SEQ ID NO:6). "C4" refere-se a um residuo de cisteina localizado na posição 86 com referência a SEQ ID NO:l. "C5" refere-se a um residuo de cisteina localizado na posição 111 com referência a SEQ ID N0:1. Na proteina esclerostina nativa, C4 está ligado a uma cisteina na posição 144 (C 8) através de uma ligação dissulfureto, e C5 está ligado a uma cisteina na posição 57 (Cl) através de uma ligação dissulfureto. Os epitopos derivados da região Volta 2 incluem CGPARLLPNAIGRGKWWRPS (SEQ ID NO:63); GPARLLPNAIGRGKWWRPSG (SEQ ID NO:64); PARLLPNAIGRGKWWRPSGP (SEQ ID NO:65); ARLL PNAIGRGKWWRP S GPD (SEQ ID NO:66); RLLPNAIGRGKWWRPSGPDF (SEQ ID NO:67); LLPNAIGRGKWWRPSGPDFR (SEQ ID NO:68); e LPNAIGRGKWWRPSGPDFRC (SEQ ID NO:69).
ENSAIOS DE BLOQUEIO CRUZADO
Os termos "bloqueio cruzado", "bloqueado de forma cruzada" e "bloquear de forma cruzada" são aqui utilizados indiscriminadamente para significar a capacidade de um anticorpo para interferir com a ligação de outros anticorpos a esclerostina. 133 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ A extensão a que um anticorpo é capaz de interferir com a ligação de outro a esclerostina, e portanto se pode ser dito que bloqueia de forma cruzada, pode ser determinada utilizando ensaios de ligação de competição. Um ensaio quantitativo particularmente adequado utiliza uma máquina Biacore que pode medir a extensão das interacções utilizando tecnologia de ressonância de plasmão de superficie. Outro ensaio de bloqueio de forma cruzada adequado utiliza uma abordagem baseada em ELISA para medir a competição entre anticorpos em termos da sua ligação a esclerostina.
ENSAIO BIACORE DE BLOQUEIO DE FORMA CRUZADA 0 seguinte descreve genericamente um ensaio Biacore adequado para determinar se um anticorpo bloqueia de forma cruzada ou é capaz de bloquear de forma cruzada. A máquina Biacore (por exemplo a Biacore 3000) é operada em linha com as recomendações do fabricante.
Assim num ensaio de bloqueio de forma cruzada, esclerostina é ligada a um chip CM5 Biacore utilizando química de acoplamento de amina padrão para gerar uma superfície revestida de esclerostina. Tipicamente 200-800 unidades de ressonância de esclerostina seriam ligadas ao chip (uma quantidade que dá níveis facilmente mensuráveis de ligação, mas que é facilmente saturável pelas concentrações de reagente de ensaio a utilizar).
Os dois anticorpos (denominados A* e B*) a avaliar quanto à sua capacidade para se bloquearem de forma cruzada um ao outro são misturados a uma razão molar de um para um de locais de ligação num tampão adequado para criar a mistura de ensaio. Quando se calculam as concentrações com base nos locais de ligação, o peso molecular de um anticorpo é assumido como sendo o peso molecular total do anticorpo dividido pelo número de locais de ligação a esclerostina nesse anticorpo. A concentração de cada anticorpo na mistura de ensaio deve ser suficientemente elevada para saturar prontamente os locais de ligação para esse anticorpo nas moléculas de 134 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ esclerostina capturadas no chip Biacore. Os anticorpos na mistura estão à mesma concentração molar (com base na ligação) e essa concentração situar-se-á tipicamente entre 1,00 e 1,5 micromolar (com base nos locais de ligação).
Soluções separadas contendo apenas anticorpo A* e apenas anticorpo B* são também preparadas. O Anticorpo A* e o Anticorpo B* nestas soluções devem estar no mesmo tampão e à mesma concentração que na mistura de ensaio. A mistura de ensaio é passada sobre o chip Biacore revestido a esclerostina e a quantidade total de ligação registada. O chip é então tratado de modo a remover os anticorpos ligados sem danificar a esclerostina ligada ao chip. Tipicamente, isto é feito através de tratamento do chip com HC1 30 mM durante 60 segundos. A solução de apenas Anticorpo A* é então passada sobre a superfície revestida a esclerostina e a quantidade de ligação registada. O chip é novamente tratado para remover todo o anticorpo ligado sem danificar a esclerostina ligada ao chip. A solução de apenas anticorpo B* é então passada sobre a superfície revestida a esclerostina e a quantidade de ligação registada. A ligação teórica máxima da mistura de anticorpo A* e anticorpo B* é calculada em seguida, e é a soma da ligação de cada anticorpo quando passado sobre a superfície de esclerostina sozinho. Se a ligação real registada da mistura for inferior a esse valor máximo teórico então os dois anticorpos estão a bloquear-se de forma cruzada um ao outro.
Assim, em geral, um anticorpo de bloqueio de forma cruzada é um que se ligará a esclerostina no ensaio de bloqueio de forma cruzada Biacore acima de modo a que durante o ensaio e na presença de um segundo anticorpo a ligação registada seja entre 80% e 0,1% (p. ex. 80% a 4%) da ligação máxima teórica, especificamente entre 75% e de 0,1% (p. ex. 75% a 4%) da ligação máxima teórica e, mais especificamente, entre 70% e 0,1% (p. ex. 70% a 4%) da ligação máxima teórica 135 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ (como definido logo acima) dos dois anticorpos ou agentes de ligação, em combinação. 0 ensaio Biacore descrito acima é um ensaio primário utilizado para determinar se os anticorpos se bloqueiam de forma cruzada um ao outro. Em raras ocasiões, determinados anticorpos podem não se ligar a esclerostina acoplada através de quimica de amina a um chip CM5 Biacore (o que normalmente ocorre quando o local de ligação relevante na esclerostina está mascarado ou destruído pelo acoplamento ao chip). Em tais casos o bloqueio de forma cruzada pode ser determinado utilizando uma versão marcada da Esclerostina, por exemplo Esclerostina marcada com His no terminal N (R & D Systems, Minneapolis, MN, USA; 2005 cat# 1406-ST-025) . Neste formato particular, um anticorpo anti-His seria ligado ao chip Biacore e depois a Esclerostina marcada com His seria passada sobre a superfície do chip e capturada pelo anticorpo anti-His. A análise do bloqueio de forma cruzada seria realizada essencialmente tal como descrito acima, excepto que após cada ciclo de regeneração do chip, seria carregada novamente nova esclerostina marcada com His sobre a superfície revestida de anticorpo anti-His. Além do exemplo dado utilizando Esclerostina marcada com His no terminal N, podia ser utilizada alternativamente esclerostina marcada com His no terminal C. Além disso, várias outras etiquetas e combinações de proteínas de ligação de etiqueta que são conhecidas na técnica podem ser utilizadas para tal análise de bloqueio de forma cruzada (p. ex. a etiqueta HA com anticorpos anti-HA; a etiqueta FLAG com anticorpos anti-FLAG; a etiqueta biotina com estreptavidina).
ENSAIO DE BLOQUEIO DE FORMA CRUZADA BASEADO EM ELISA O seguinte descreve em geral um ensaio ELISA para determinação de se um anticorpo anti-esclerostina bloqueia de forma cruzada ou é capaz de bloquear de forma cruzada. Por conveniência, é feita referência a dois anticorpos (Ab-X e Ab-Y). O princípio geral do ensaio é o de ter um revestimento de anticorpo anti-esclerostina nos poços de uma placa de ELISA. Uma quantidade em excesso de um segundo anticorpo 136 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ anti-esclerostina potencialmente bloqueador de forma cruzada é adicionada em solução (i.e. não ligado à placa de ELISA). Uma quantidade limitada de esclerostina é então adicionada aos poços. 0 anticorpo revestido e o anticorpo em solução competem pela ligação a um número limitado de moléculas de esclerostina. A placa é lavada para remover a esclerostina que não se ligou ao anticorpo revestido e também para remover o segundo anticorpo em fase de solução bem como quaisquer complexos formados entre o segundo anticorpo em fase de solução e a esclerostina. A quantidade de esclerostina ligada é então medida utilizando um reagente de detecção de esclerostina adequado. Um anticorpo em solução que é capaz de bloquear de forma cruzada o anticorpo revestido será capaz de causar uma diminuição no número de moléculas de esclerostina a que o anticorpo revestido se pode ligar relativamente ao número de moléculas de esclerostina a que o anticorpo revestido se pode ligar na ausência do segundo anticorpo em fase de solução.
Este ensaio é descrito com mais pormenor mais abaixo para Ab-X e Ab-Y. No caso em que Ab-X é escolhido para ser o anticorpo imobilizado, é revestido nos poços da placa de ELISA, após o que as placas são bloqueadas com uma solução de bloqueio adequada para minimizar a ligação não especifica de reagentes que são subsequentemente adicionados. Uma quantidade em excesso de Ab-Y é então adicionada à placa de ELISA, de tal modo que as moles de locais de ligação de Ab-Y a esclerostina por poço são pelo menos 10 vezes mais elevadas do que as moles dos locais de ligação de Ab-X a esclerostina que foram utilizadas, por poço, durante o revestimento da placa de ELISA. A esclerostina é então adicionada de modo a que as moles de esclerostina adicionadas por poço sejam pelo menos 25 vezes menores do que as moles dos locais de ligação de Ab-X a esclerostina que foram usadas para o revestimento de cada poço. Após um período de incubação adequado a placa de ELISA é lavada e um reagente de detecção de esclerostina é adicionado para medir a quantidade de esclerostina ligada especificamente ao anticorpo anti-esclerostina revestido (neste caso Ab-X) . 0 sinal de fundo para o ensaio é definido como o sinal obtido em poços revestidos com o anticorpo (neste caso Ab-X), o segundo anticorpo em fase de solução (neste caso Ab-Y), apenas tampão de esclerostina (i.e. sem 137 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ esclerostina) e reagentes de detecção de esclerostina. 0 sinal de controlo positivo para o ensaio é definido como o sinal obtido nos poços revestidos com o anticorpo (neste caso Ab-X), apenas tampão do segundo anticorpo em fase de solução (i.e. sem segundo anticorpo em fase de solução), esclerostina e reagentes de detecção de esclerostina. 0 ensaio ELISA tem de ser executado de modo a que o sinal de controlo positivo seja pelo menos 6 vezes o sinal de fundo.
Para evitar qualquer tipo de artefacto (p. ex. afinidades significativamente diferentes entre Ab-X e Ab-Y para esclerostina) resultando da escolha de qual anticorpo utilizar como anticorpo de revestimento e qual utilizar como segundo anticorpo (competidor), o ensaio de bloqueio cruzado precisa de ser executado em dois formatos: 1) o formato 1 é onde Ab-X é o anticorpo que é revestido na placa de ELISA e Ab-Y é o anticorpo competidor que está em solução e 2) o formato 2 é onde Ab-Y é o anticorpo que é revestido na placa de ELISA e Ab-X é o anticorpo competidor que está em solução.
Ab-X e Ab-Y são definidos como bloqueadores de forma cruzada se, quer no formato 1 ou no formato 2, o anticorpo anti-esclerostina em fase de solução for capaz de causar uma redução de entre 60% e 100%, especificamente entre 70% e 100%, e mais especif icamente entre 80% e 100%, do sinal de detecção de esclerostina (i.e. a quantidade de esclerostina ligada ao anticorpo revestido) em comparação com o sinal de detecção de esclerostina obtido na ausência do anticorpo anti-esclerostina em fase de solução (i.e. os poços de controlo positivo).
Um exemplo de tal ensaio de bloqueio cruzado baseado em ELISA pode ser verificado no Exemplo 7 ("ensaio de bloqueio cruzado baseado em ELISA").
ENSAIO DE NEUTRALIZAÇÃO BASEADO EM CÉLULAS A mineralização por células da linhagem dos osteoblastos em cultura, células primárias ou linhas celulares, é 138 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ utilizada como modelo in vitro de formação de osso. A mineralização leva de cerca de uma a seis semanas a ocorrer começando com a indução de diferenciação de células da linhagem dos osteoblastos através de um ou mais agentes de diferenciação. A sequência global de eventos envolve proliferação e diferenciação celulares, produção de matriz extracelular, maturação da matriz e, finalmente, deposição de mineral, que se refere a uma cristalização e/ou deposição de fosfato de cálcio. Esta sequência de eventos que começam com proliferação e diferenciação celulares, e terminam com deposição de mineral é aqui referida como mineralização. A medição de cálcio (mineral) é o resultado do ensaio. Células MC3T3-E1 (Sudo, H., Kodama, H-A, Amagai, Y., Yamamoto, S., Kasai, S. 1983. "In vitro differentiation and calcification in a new clonal osteogenic cell line derived from newborn mouse calvaria". J. Cell Biol. 96: 191-198) e subclones da linha celular original podem formar mineral em cultura após crescimento na presença de agentes de diferenciação. Tais subclones incluem MC3T3-E1-BF (Smith, E., Redman, R., Logg, C., Coetzee, G., Kasahara, N., Frenkel, B. 2000. "Glucocorticoids inhibit developmental stage-specific osteoblast cell cycle". J. Biol. Chem. 275: 19992-20001). Tanto para o subclone MC3T3-E1-BF como para as células MC3T3-E1 originais, a esclerostina pode inibir uma ou mais das sequências de eventos conduzindo a e incluindo a deposição de mineral (i.e. a esclerostina inibe a mineralização). Os anticorpos anti-esclerostina que são capazes de neutralizar a actividade inibidora da esclerostina permitem a mineralização da cultura na presença de esclerostina tal que existe um aumento estatisticamente significativo na deposição de fosfato de cálcio (medido como cálcio), em comparação com a quantidade de cálcio medida no grupo de tratamento com apenas esclerostina (i.e. sem anticorpo). Os anticorpos utilizados nas experiências de ensaio de mineralização baseado em células mostradas nas Figuras 22, 23 e 24 têm pesos moleculares de cerca de 145 Kd e têm 2 locais de ligação a esclerostina por molécula de anticorpo.
Quando se realiza o ensaio com o objectivo de determinar se um determinado anticorpo anti-esclerostina pode neutralizar a esclerostina, a quantidade de esclerostina 139 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ utilizada no ensaio deve ser a quantidade minima de esclerostina que causa uma redução de pelo menos 70%, estatisticamente significativa, na deposição de fosfato de cálcio (medido como cálcio) no grupo de apenas esclerostina, em comparação com a quantidade de cálcio medida no grupo sem esclerostina. Um anticorpo neutralizador anti-esclerostina é definido como um que causa um aumento estatisticamente significativo na deposição de fosfato de cálcio (medido como cálcio) em comparação com a quantidade de cálcio medida no grupo de tratamento de apenas esclerostina (i.e. sem anticorpo). Para determinar se um anticorpo anti-esclerostina é neutralizador ou não, a quantidade de anticorpo anti-esclerostina utilizada no ensaio deve ser tal que haja um excesso de moles de locais de ligação a esclerostina por poço, em comparação com o número de moles de esclerostina por poço. Dependendo da potência do anticorpo, as vezes em excesso que podem ser necessárias podem ser 24, 18, 12, 6, 3 ou 1,5, e um especialista está familiarizado com a prática de rotina para testar mais do que uma concentração de agente de ligação. Por exemplo, um anticorpo neutralizador anti-esclerostina muito potente será capaz de neutralizar esclerostina mesmo quando não há menos de um excesso molar de 6 vezes de moles de locais de ligação a esclerostina por poço em comparação com o número de moles de esclerostina por poço. Um anticorpo neutralizador anti-esclerostina menos potente será capaz de neutralizar esclerostina apenas com um excesso de 12, 18 ou 24 vezes. Os anticorpos de esclerostina dentro deste intervalo completo de potências são adequados como anticorpos neutralizadores de esclerostina. Ensaios de mineralização baseados em células exemplificativos estão descritos em pormenor no Exemplo 8.
Anticorpos anti-esclerostina que podem neutralizar a esclerostina humana podem ser úteis no tratamento de condições/distúrbios humanos que sejam causados por, associados a, ou resultem de, pelo menos, um de baixa formação de osso, baixa densidade mineral óssea, baixo teor mineral ósseo, baixa massa óssea, baixa qualidade óssea e baixa resistência óssea. 140 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
ENSAIO DE NEUTRALIZAÇÃO IN VIVO
Aumentos nos vários parâmetros associados a, ou que resultam de, a estimulação de nova formação de osso, podem ser medidos como resultado de testes in vivo de anticorpos de esclerostina para identificar aqueles anticorpos que são capazes de neutralizar esclerostina e consequentemente capazes de causar estimulação de nova formação de osso. Tais parâmetros incluem vários marcadores séricos anabólicos (p. ex. osteocalcina, P1NP (pró-péptido N-terminal do procolagénio de tipo 1) ) , marcadores histomorfométricos de formação de osso (p. ex. superfície de osteoblasto/superfície do osso; velocidade de formação de osso/superfície do osso; espessura trabecular), densidade mineral óssea, teor mineral ósseo, massa óssea, qualidade e resistência óssea. Um anticorpo neutralizador de esclerostina é definido como um capaz de causar um aumento estatisticamente significativo, em comparação com animais tratados com veículo, em qualquer parâmetro associado a, ou que resulte da estimulação de nova formação de osso. Tais testes in vivo podem ser realizados em qualquer mamífero adequado (p. ex. ratinho, rato, macaco). Um exemplo de tais testes in vivo pode ser verificado no Exemplo 5 ("In vivo testing of anti-sclerostin monoclonal antibodies").
Embora a sequência de aminoácidos de esclerostina não seja 100% idêntica entre as espécies de mamíferos (p. ex. a esclerostina de ratinho não é 100% idêntica à esclerostina humana), será apreciado por um perito na técnica que é muito provável que um anticorpo de esclerostina que possa neutralizar in vivo a esclerostina de uma determinada espécie (p. ex. ratinho) e que também se possa ligar a esclerostina humana in vitro, seja capaz de neutralizar a esclerostina humana in vivo. Assim, tal anticorpo anti-esclerostina humana pode ser útil no tratamento de condições/distúrbios humanos que sejam causados por, associados a, ou resultem em pelo menos um de baixa formação de osso, baixa densidade mineral óssea, baixo teor mineral ósseo, baixa massa óssea, baixa qualidade óssea e baixa resistência óssea. Ratinhos nos quais tinha sido utilizada recombinação homóloga para suprimir o gene de esclerostina de ratinho e inserir o gene de esclerostina humana no seu lugar (i.e. ratinhos knock-in para 141 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ ο gene de esclerostina humana ou ratinhos knock-in para SOST humana) seriam um exemplo de um sistema in vivo adicional. São proporcionadas composições farmacêuticas, compreendendo um dos anticorpos acima descritos tais como pelo menos um de anticorpo Ab-A, Ab-B, Ab-C, Ab-D e Ab-1 a Ab-24 para esclerostina humana, juntamente com um transportador, excipiente ou diluente farmaceuticamente ou fisiologicamente aceitável. As composições farmacêuticas e métodos de tratamento são divulgados no Pedido copendente com o No. de Série 10/868497, apresentado a 16 de Junho de 2004, que reivindica prioridade para o No. de Série 60/478977. O desenvolvimento de regimes de dosagem e tratamento adequados para utilização das composições aqui particulares descritas numa variedade de regimes de tratamento, incluindo p. ex. administração e formulação subcutânea, oral, parentérica, intravenosa, intranasal e intramuscular, é bem conhecido na técnica, alguns dos quais são brevemente discutidos abaixo para fins gerais de ilustração.
Em certas aplicações, as composições aqui farmacêuticas divulgadas podem ser distribuídas através de administração oral a um animal. Como tal, estas composições podem ser formuladas com um diluente inerte ou com um transportador comestível assimilável, ou podem ser encerradas em cápsulas de gelatina dura ou mole, ou podem ser comprimidas em comprimidos, ou podem ser incorporadas directamente na alimentação da dieta.
Em certas circunstâncias, será desejável administrar as composições farmacêuticas aqui divulgadas subcutaneamente, parentericamente, intravenosamente, intramuscularmente, ou mesmo intraperitonealmente. Tais abordagens são bem conhecidas dos peritos na técnica, algumas das quais são descritas mais adiante, por exemplo, na Patente U.S. No. 5543158, Patente U.S. No. 5641515 e Patente U.S. No. 5399363. Em certas concretizações, podem ser preparadas soluções dos compostos activos como base livre ou sais farmacologicamente aceitáveis em água adequadamente misturada com um tensioactivo, tal como hidroxipropilcelulose. Podem também ser preparadas dispersões em glicerol, polietilenoglicóis 142 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ líquidos e misturas destes, e em óleos. Sob condições vulgares de armazenamento e utilização, estas preparações conterão geralmente um conservante para prevenir o crescimento de microorganismos.
Formas farmacêuticas ilustrativas adequadas para utilização injectável incluem soluções ou dispersões aquosas estéreis e pós estéreis para a preparação extemporânea de soluções ou dispersões injectáveis estéreis (por exemplo, ver Patente U.S. No. 5466468). Em todos os casos a forma tem de ser estéril e tem de ser fluida até ao ponto de existir facilidade de utilização com seringa. Deve ser estável sob as condições de fabrico e armazenamento e deve ser conservada contra a acção contaminante de microorganismos, tais como bactérias e fungos. 0 transportador pode ser um solvente ou meio de dispersão contendo, por exemplo, água, etanol, poliol (p. ex., glicerol, propilenoglicol, e polietilenoglicol líquido, e semelhantes), misturas adequadas destes e/ou óleos vegetais. A fluidez correcta pode ser mantida, por exemplo, através da utilização de um revestimento, tal como lecitina, através da manutenção do tamanho de partícula requerido no caso de dispersão e/ou através da utilização de tensioactivos. A prevenção da acção de microrganismos pode ser facilitada por vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico, timerosal, e semelhantes. Em muitos casos, será preferível incluir agentes isotónicos, por exemplo, açúcares ou cloreto de sódio. A absorção prolongada das composições injectáveis pode ser alcançada através da utilização nas composições de agentes que retardem a absorção, por exemplo, monoestearato de alumínio e gelatina.
Para administração parentérica numa solução aquosa, a solução deve ser adequadamente tamponada se necessário e o diluente líquido tornado primeiro isotónico com suficiente solução salina ou glicose. Estas soluções aquosas particulares são especialmente adequadas para administração intravenosa, intramuscular, subcutânea e intraperitoneal. A este respeito, um meio aquoso estéril que pode ser empregue será conhecido dos peritos na técnica à luz da presente divulgação. Por exemplo, uma dosagem pode ser dissolvida em 1 ml de solução isotónica de NaCl e adicionado a 1000 ml de 143 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ fluido de hipodermóclise ou injectada no local proposto para infusão (ver, por exemplo, "Remington's Pharmaceutical Sciences", 15a ed., págs. 1035-1038 e 1570-1580). Alguma variação na dosagem ocorrerá necessariamente dependendo da condição do sujeito a tratar. Além disso, para administração a humanos, as preparações verificarão de preferência, como é claro, os padrões de esterilidade, pirogenicidade, e os gerais de segurança e pureza conforme exigido pelos padrões de FDA Office of Biologics.
As composições aqui divulgadas podem ser formuladas numa forma neutra ou de sal. Sais farmaceuticamente aceitáveis ilustrativos incluem os sais de adição ácida (formados com os grupos amino livres da proteina) e que são formados com ácidos inorgânicos tais como, por exemplo, ácidos clorídrico ou fosfórico, ou ácidos orgânicos tais como acético, oxálico, tartárico, mandélico, e semelhantes. Os sais formados com os grupos carboxilo livres podem também ser derivados de bases inorgânicas tais como, por exemplo, hidróxidos de sódio, potássio, amónio, cálcio, ou férrico, e bases orgânicas tais como isopropilamina, trimetilamina, histidina, procaína e semelhantes. Após formulação, as soluções serão administradas de uma maneira compatível com a formulação de dosagem e numa quantidade tal que seja terapeuticamente eficaz.
Os transportadores podem ainda compreender qualquer um e todos os solventes, meios de dispersão, veículos, revestimentos, diluentes, agentes antibacterianos e antifúngicos, agentes isotónicos e retardadores da absorção, tampões, soluções transportadoras, suspensões, colóides e semelhantes. A utilização de tais meios e agentes para substâncias activas farmacêuticas é bem conhecida na técnica. Excepto na medida em que qualquer meio ou agente convencional é incompatível com o ingrediente activo, a sua utilização nas composições terapêuticas está contemplada. Ingredientes activos suplementares podem também ser incorporados nas composições. A frase "farmaceuticamente aceitável" refere-se a entidades moleculares e composições que não produzem uma reacção alérgica ou semelhante inconveniente, quando administradas a um ser humano. 144 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Em certas concretizações, lipossomas, nanocápsulas, micropartícuias, partículas lipídicas, vesículas e semelhantes, são utilizados para a introdução das composições do presente invento em células/organismos hospedeiros adequados. Em particular, as composições do presente invento podem ser formuladas para distribuição, quer encapsuladas numa partícula lipídica, um lipossoma, uma vesícula, uma nanosfera, ou uma nanopartícuia ou semelhantes. Alternativamente, as composições do presente invento podem ser ligadas, covalentemente ou não covalentemente, à superfície de tais veículos transportadores. A formação e utilização de preparações de lipossomas e semelhantes a lipossomas como potenciais transportadores de fármacos é geralmente conhecida dos peritos na técnica (ver, por exemplo, Lasic, Trends Biotechnol. 16(7): 307-21, 1998; Takakura, Nippon Rinsho 56(3): 691-95, 1998; Chandran et al., Indian J. Exp. Biol. 35(8): 801-09, 1997; Margalit, Cri t. Rev. Ther. Drug Carrier Syst. 12(2-3): 233-61, 1995; Patente U.S. No. 5567434; Patente U.S. No. 5552157; Patente U.S. No. 5565213; Patente U.S. No. 5738868 e Patente U.S. No. 5795587). A utilização de lipossomas não parece estar associada a respostas auto-imunes ou a toxicidade inaceitável após distribuição sistémica. Em certas concretizações, os lipossomas são formados a partir de fosfolípidos que estão dispersos num meio aquoso e formam espontaneamente vesículas multilamelares concêntricas em bicamada (também denominadas vesículas multilamelares (MLV)).
Alternativamente, a divulgação proporciona formulações de nanocápsulas farmaceuticamente aceitáveis das composições do presente invento. As nanocápsulas podem reter geralmente compostos de forma estável e reprodutível (ver, por exemplo, Quintanar-Guerrero et al., Drug Dev. Ind. Pharm. 24(12): 1113-28, 1998). Para evitar efeitos secundários devidos a sobrecarga polimérica intracelular, tais partículas ultrafinas (cerca de 0,1 ym de tamanho) podem ser desenhadas utilizando polímeros capazes de serem degradados in vivo. Tais partículas podem ser produzidas tal como é descrito, por exemplo, por Couvreur et al., Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst. 5(1): 1-20, 1988; zur Muhlen et al., Eur. J. Pharm. 145 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Biopharm. 45(2): 149-55, 1998; Zambaux et al., J. Controlled Release 50(1-3): 31-40, 1998; e Patente U.S. No. 5145684.
Adicionalmente, as composições farmacêuticas do presente invento podem ser colocadas dentro de recipientes, juntamente com o material de empacotamento que proporciona as instruções referentes à utilização de tais composições farmacêuticas. Geralmente, tais instruções incluirão uma expressão tangível descrevendo a concentração do reagente, bem como em certas concretizações, quantidades relativas de ingredientes excipientes ou diluentes (p. ex., água, solução salina ou PBS) que podem ser necessários para reconstituir a composição farmacêutica. A dose administrada pode variar de 0,01 mg/kg a 100 mg/kg de peso corporal. Tal como será evidente a um perito na técnica, a quantidade e frequência de administração dependerão, como é claro, de factores tais como a natureza e gravidade da indicação a tratar, a resposta desejada, a condição do paciente, e assim por diante. Tipicamente, as composições podem ser administradas através de uma variedade de técnicas, tal como observado acima.
Aumentos no teor mineral ósseo e/ou densidade mineral óssea podem ser determinados directamente através da utilização de raios X (p. ex., Absorciometria de Raios X de Dupla Energia ou "DEXA"), ou por inferência através da medição de 1) marcadores de formação de osso e/ou actividade de osteoblastos, tal como, mas não limitada a, fosfatase alcalina específica de osteoblastos, osteocalcina, pro-péptido de pró-colagénio C' de tipo 1 (PICP), fosfatase alcalina total (ver Comier, Curr. Opin. in Rheu. 7: 243(1995)) e pró-péptido N-terminal de pró-colagénio 1 do soro (P1NP) e/ou 2) marcadores de reabsorção óssea e/ou actividade dos osteoclastos, incluindo, mas não se limitando a, piridinolina desoxipiriridinolina, N-telopéptido, hidroxiprolina urinária, fosfatases ácidas resistentes a tartarato do plasma, e galactosil-hidroxilisina; (ver Comier, i.d.), TRAP 5b do soro (isoforma 5b da fosfatase ácida resistente a tartarato) e C-telopéptido reticulado do soro (sCTXI). A quantidade de massa óssea pode também ser calculada a partir dos pesos corporais ou utilizando outros 146 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ métodos (ver Guinness-Hey, Metab. Bone Dis. Relat. Res. 5: 177-181, 1984). Os animais e particularmente modelos animais são utilizados na técnica para testar o efeito das composições do invento, por exemplo, nos parâmetros da perda de osso, reabsorção óssea, formação de osso, resistência do osso ou mineralização óssea que imitam as condições de doenças humanas, tais como osteoporose e osteopenias. Exemplos de tais modelos incluem o modelo de rato ovariectomizado (Kalu, D.N., "The ovariectomized rat model of postmenopausal bone loss". Bone and Mineral 15: 175-192 (1991) ; Frost, H.M. e Jee, W.S.S. "On the rat model of human osteopenias and osteoponosis". Bone and Mineral 18: 227-236 (1992) ; e Jee, W.S.S. e Yao, W., "OverView: animal models of osteopenia and osteoporosis". J. Musculoskel. Neuron. Interact. 1: 193-207 (2001)).
As condições particulares que podem ser tratadas pelas composições do presente invento incluem displasias, em que o crescimento ou desenvolvimento de osso é anormal e uma ampla variedade de causas de osteopenia, osteoporose e perda óssea. Exemplos representativos de tais condições incluem acondroplasia, disostose cleidocraniana, encondromatose, displasia fibrosa, Doença de Gaucher, raquitismo hipofosfatémico, sindroma de Marfan, várias exotoses hereditárias, neurofibromatose, osteogénese imperfeita, osteopetrose, osteopoiquilose, lesões escleróticas, pseudoartrose e osteomielite piogénica, doença periodontal, perda óssea induzida por fármacos antiepilépticos, hiperparatiroidismo primário e secundário, síndromas de hiperparatiroidismo familiar, perda óssea induzida por falta de peso, osteoporose em homens, perda óssea pós-menopausa, osteoartrite, osteodistrofia renal, distúrbios infiltrativos do osso, perda óssea oral, osteonecrose da mandíbula, doença juvenil de Paget, melorreostose, doenças ósseas metabólicas, mastocitose, anemia/doença falciforme, perda óssea relacionada com transplante de órgãos, perda óssea relacionada com transplante renal, lúpus eritematoso sistémico, espondilite anquilosante, epilepsia, artrites juvenis, talassemia, mucopolissacaridoses, doença de Fabry, Sindroma de Turner, Sindroma de Down, Sindroma de Klinefelter, lepra, Doença de Perthes, escoliose idiopática do adolescente, doença inflamatória de múltiplos sistemas com 147 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ início na infância, Síndroma de Winchester, Doença de Menkes, Doença de Wilson, doença óssea isquémica (tal como doença de Legg-Calve-Perthes, osteoporose migratória regional), estados anémicos, condições causadas por esteróides, perda óssea induzida por glucocorticóides, perda óssea induzida por heparina, distúrbios da medula óssea, escorbuto, má nutrição, deficiência de cálcio, osteopenia ou osteoporose idiopática, osteopenia ou osteoporose congénita, alcoolismo, doença crónica do fígado, estado de pós-menopausa, condições inflamatórias crónicas, artrite reumatóide, doença inflamatória do intestino, colite ulcerativa, colite inflamatória, doença de Crohn, oligomenorreia, amenorreia, gravidez, diabetes mellitus, hipertiroidismo, distúrbios da tiróide, distúrbios da paratiróide, doença de Cushing, acromegalia, hipogonadismo, imobilização ou inactividade, síndroma de distrofia simpática de reflexo, osteoporose regional, osteomalacia, perda óssea associada a substituição de articulação, perda óssea associada a HIV, perda óssea associada a perda da hormona do crescimento, perda óssea associada a fibrose cística, displasia fibrosa, perda óssea associada a quimioterapia, perda óssea induzida por tumor, perda óssea relacionada com cancro, perda óssea ablativa de hormona, mieloma múltiplo, perda óssea induzida por fármacos, anorexia nervosa, perda óssea facial associada a doença, perda óssea craniana associada a doença, perda óssea da mandíbula associada a doença, perda óssea do crânio associada a doença e perda óssea associada a viagens espaciais. Outras condições referem-se a perda óssea associada ao envelhecimento, incluindo perda óssea facial associada ao envelhecimento, perda óssea craniana associada ao envelhecimento, perda óssea da mandíbula associada ao envelhecimento, perda óssea do crânio associada ao envelhecimento.
As composições do presente invento podem também ser úteis para melhorar os resultados em procedimentos ortopédicos, procedimentos dentários, cirurgia de implante, substituição de articulação, enxerto ósseo, cirurgia plástica do osso e reparação óssea tal como cicatrização de fractura, cicatrização de não união, cicatrização de união retardada e reconstrução facial. Uma ou mais composições podem ser 148 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ administradas antes, durante e/ou após o procedimento, substituição, enxerto, cirurgia ou reparação. 0 invento proporciona também um estojo de diagnóstico compreendendo pelo menos um anticorpo anti-esclerostina de acordo com o presente invento. Além disso, um tal estojo pode compreender opcionalmente um ou mais dos seguintes: (1) instruções para utilização de um ou mais agentes de ligação para pesquisa, diagnóstico, prognóstico, monitorização terapêutica ou qualquer combinação destas aplicações; (2) um parceiro de ligação marcado para o agente ou os agentes de ligação anti-esclerostina; (3) uma fase sólida (tal como uma tira reagente) na qual o agente ou os agentes de ligação anti-esclerostina são imobilizados; e (4) um marcador ou inserção indicando a aprovação reguladora para pesquisa, diagnóstico, prognóstico ou terapêutica ou qualquer combinação destes.
Se não for proporcionado qualquer parceiro de ligação marcado para o agente ou os agentes de ligação, o agente ou os agentes de ligação podem em si ser marcados com um ou mais marcadores detectáveis, p. ex. uma porção quimioluminescente, enzimática, fluorescente ou radioactiva.
Os seguintes exemplos são oferecidos para fins de ilustração, e não para fins de limitação. EXEMPLOS EXEMPLO 1
Expressão Recombinante de Esclerostina
Esclerostina humana recombinante/SOST está comercialmente disponível em R&D Systems (Minneapolis, MN, EUA, 2006 cat# 1406-ST-025) . Além disso, esclerostina de ratinho recombinante/SOST está comercialmente disponível em R&D Systems (Minneapolis, MN, EUA, 2006 cat # 1589-ST-025).
Alternativamente, as diferentes espécies de esclerostina podem ser expressas transientemente em células 293T ou 149 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ 293ΕΒΝΑ adaptadas em suspensão isenta de soro. As transfecções podem ser realizadas como culturas de 500 ml ou 11. Os seguintes reagentes e materiais estão disponíveis em Gibco BRL (actualmente Invitrogen, Carlsbad, CA) . Os números de catálogo estão listados entre parênteses: DMEM isento de soro (21068-028); DMEM/F12 (3:1) (21068/11765); Suplemento de Insulina-Transferrina-Selénio 1χ (51500-056); Pen Strep Glut lx (10378-016); 1-Glutamina 2 mM (25030-081); HEPES 20 mM (15630-080); Pluronic F68 a 0,01% (24040-032). Resumidamente, o inoculo celular (5,0-10,0χ105 células/ml χ volume de cultura) é centrifugado a 2500 rpm durante 10 minutos a 4°C para remover o meio condicionado.
As células são novamente suspensas em DMEM isento de soro e centrifugadas novamente a 2500 rpm durante 10 minutos a 4°C. Após aspiração da solução de lavagem, as células são ressuspensas em meio de crescimento [DMEM/F12 (3:1) + Suplemento de Insulina-Transferrina-Selénio lx + Pen Strep Glut lx + L-Glutamina 2 mM + HEPES 20 mM + Pluronic F68 a 0,01%] num frasco de cultura giratório de 1 1 ou 3 1. A cultura de frasco giratório é mantida na placa de agitação magnética a 125 rpm que é colocada numa incubadora humidificada mantida a 37 °C e CO2 a 5%. O ADN plasmídico de expressão em mamífero (p. ex., pcDNA3.1, pCEP4, Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA) , contendo a região de codificação completa (e codão de terminação) da esclerostina com uma sequência de consenso de Kozak (p. ex., CCACC) directamente a 5' do local de início ATG, é complexado com o reagente de transfecção num tubo cónico de 50 ml.
O complexo de reagente de transfecção de ADN pode ser preparado em 5-10% do volume final de cultura em DMEM isento de soro ou OPTI-MEM. Reagentes de transfecção que podem ser utilizados para este fim incluem X-tremeGene RO-1539 (Roche Applied Science, Indianapolis, IN) , FuGene6 (Roche Applied Science, Indianapolis, IN) , Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA) e 293fectin (Invitrogen, Carlsbad, CA) . 1-5 pg de ADN plasmídico/ml de cultura são primeiro adicionados a DMEM isento de soro, seguido de 1-5 μΐ de reagente de transfecção/ml de cultura. Os complexos podem ser incubados à temperatura ambiente durante aproximadamente 10-30 minutos e depois adicionados às células no frasco giratório. A 150 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ transfecção/expressão pode ser realizada durante 4-7 dias, após o que o meio condicionado (MC) é colhido através de centrifugação a 4000 rpm durante 60 minutos a 4°C. EXEMPLO 2
PURIFICAÇÃO DE ESCLEROSTINA RECOMBINANTE
Esclerostina recombinante foi purificada a partir de células hospedeiras de mamífero como se segue. Todos os processos de purificação foram realizados à temperatura ambiente. Um esquema de purificação foi utilizado para purificar várias espécies de esclerostina, incluindo esclerostina de murideo e humana. O esquema de purificação utilizou cromatografia de afinidade seguida por cromatografia de permuta catiónica.
Cromatografia de Heparina 0 meio condicionado das células hospedeiras de mamífero (MC) foi centrifugado numa centrifugadora Beckman J6-M1 a 4000 rpm durante 1 hora a 4°C para remover os restos celulares. O sobrenadante do MC foi então filtrado através de um filtro estéril de 0,2 pm. (Nesse momento o MC esterilizado por filtração pode ser opcionalmente armazenado congelado até à purificação). Se o MC fosse congelado, era descongelado às temperaturas seguintes, ou combinações destas: 4°C, temperatura ambiente ou água quente. Após descongelação, o MC foi filtrado através de um filtro estéril de 0,2 pm e, opcionalmente, concentrado através de ultrafiltração de fluxo tangencial (TFF), utilizando uma membrana separadora de peso molecular de 10 kDa. O MC concentrado foi filtrado através de um filtro estéril de 0,2 pm e depois carregado numa coluna de Heparina de Elevada Resolução (Heparin HP) (GE Healthcare, anteriormente Amersham Biosciences) equilibrada em PBS. Alternativamente, o sobrenadante do MC filtrado pode ser carregado directamente sobre a coluna Heparin HP equilibrada em PBS.
Após carga, a coluna Heparin HP foi lavada com PBS até a absorvância a 280 nm do fluxo corrido regressar ao limiar (i.e., a absorvância medida antes de carregar o sobrenadante 151 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ MC). A esclerostina foi então eluída da coluna utilizando um gradiente linear de cloreto de sódio de 150 mM a 2 M em PBS. A absorvância a 280 nm do eluato foi monitorizada e as fracções contendo proteína foram recolhidas. As fracções foram então avaliadas através de SDS-PAGE corado com
Coomassie para identificar as fracções contendo um polipéptido que migra com o tamanho da esclerostina glicosilada. As fracções apropriadas da coluna foram combinadas para fazer o banco de Heparin HP.
Cromatoqrafia de Permuta Catiónica A esclerostina eluída a partir da coluna Heparin HP foi ainda purificada através de cromatografia de permuta catiónica utilizando meio de cromatografia SP High
Performance (SPHP) (GE Healthcare, formerly Amersham Biosciences). Foi mudado o tampão do banco de Heparin HP para PBS através de diálise utilizando membranas 10000 MWCO (Pierce Slide-A-Lyzer). O banco de Heparin HP dialisado foi então carregado numa coluna SPHP equilibrada em PBS. Após carregamento, a coluna foi lavada com PBS até a absorvância a 280 nm do fluxo corrido regressar ao limiar. A esclerostina foi então eluida da coluna SPHP utilizando um gradiente linear de cloreto de sódio de 150 mM a 1 M em PBS. A absorvância a 280 nm do eluato foi monitorizada e a esclerostina eluída foi recolhida em fracções. As fracções foram então analisadas através de SDS-PAGE corado com
Coomassie para identificar fracções contendo um polipéptido que migra no tamanho da esclerostina glicosilada. As fracções apropriadas da coluna foram combinadas para fazer o banco de SPHP.
Formulação
Após purificação, o banco de SPHP foi formulado em PBS através de diálise utilizando membranas 10000 MWCO (Pierce Slide-A-Lyzer). Se fosse necessária a concentração de esclerostina, era utilizado um dispositivo de centrifugação (Amicon Centricon ou Centriprep) com uma membrana 10000 MWCO. Após a formulação a esclerostina era filtrada através de um filtro estéril de 0,2 ym e armazenada a 4°C ou congelada. 152 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ EXEMPLO 3
ELISA DE PÉPTIDOS DE LIGAÇÃO
Uma série de péptidos sobreponíveis (tendo cada péptido aproximadamente 20-25 aminoácidos de comprimento) foi sintetizada com base na sequência de aminoácidos conhecida da esclerostina de rato (SEQ ID NO:98). Os péptidos foram concebidos de modo a que todos contivessem um resíduo cisteína reduzido; uma cisterna adicional foi incluída no terminal C de cada péptido, que não contivesse já uma na sua sequência. Isto permitiu que os péptidos se ligassem às placas de ensaio através de ligação covalente, utilizando placas de ligação sulfidrilo comercialmente disponíveis (Costar), a uma concentração de 1 pg/ml, em solução salina tamponada com fosfato (PBS: pH 6,5) contendo EDTA 1 mM. Após incubação durante 1 hora à temperatura ambiente, as placas foram lavadas três vezes com PBS contendo Tween 20 a 0,5%. As placas foram bloqueadas através de incubação com uma solução de PBS contendo gelatina de pele de peixe a 0,5% (Sigma) durante 30 minutos à temperatura ambiente e depois lavou-se três vezes em PBS contendo Tween 20 a 0,5%.
Os anticorpos a testar foram diluídos até 1 pg/ml em PBS contendo gelatina de pele de peixe a 0,5% e incubados com as placas revestidas com péptidos durante 1 hora à temperatura ambiente. O excesso de anticorpo foi removido através de três lavagens com PBS, Tween 20 a 0,5%. As placas foram então incubadas com um anticorpo secundário apropriado conjugado com peroxidase de rábano (diluído apropriadamente em PBS contendo Tween 20 a 0,5%) e capaz de se ligar ao anticorpo de interesse. As placas foram então lavadas três vezes: uma vez com PBS contendo Tween 20 a 0,5% e duas vezes com PBS. Finalmente, as placas foram incubadas com um substrato cromogénico da peroxidase de rábano (TMB-Stable Stop, RDI) durante 5 minutos à temperatura ambiente, a revelação de cor foi parada com ácido, e a densidade óptica das placas medida a 450nm. 153 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Materiais
Placas de ligação a Sulfidrilo Costar (VWR # 29442-278) Tampão de Revestimento: PBS 1χ pH 6,5 + EDTA 1 mM Tampão de bloqueio: PBS 1* + Gelatina de Pele de Peixe a 0,5% (PBS de CS; FSG de Sigma# G 7765)
Tampão de Lavagem: PBS IX + Tween 20 a 0,5% Péptidos de Esclerostina de Rato
Amostras de Anticorpo: Ab Transiente, Ab recombinante Purificado, Soro de coelho, etc.
Ab secundário Apropriado: Cabra-anti-Coelho/Ratinho-HRP (Jackson Immuno Research, 115-036-072) TMB-Stable Stop (RDI# RDI-TMBSX-1L)
HC1 0,5 M
Os métodos foram como se segue: 1. Revestir as placas com 100 μΐ/poço de péptido de esclerostina de rato diluido em PBS 1* pH 6,5 + EDTA 1 mM a 1 pg/ml. Incubar as placas 1 hora à temperatura ambiente. (As placas devem ser usadas dentro de 30 minutos após a abertura). 2. Lavar as placas 3χ com tampão de lavagem. 3. Bloquear as placas com tampão de bloqueio a 200 μΐ/poço. Incubar as placas 30 minutos à temperatura ambiente. 4. Repetir a lavagem tal como descrito em (2). 5. Incubar as placas com 50 μΐ/poço de amostras diluidas em tampão de bloqueio - titulos séricos a partir de 1:100; Ab Recombinante Transiente usar puro; Ab recombinante Purificado usar a 1 pg/ml (todas as amostras corridas em duplicado). Incubar as placas 1 h à temperatura ambiente. 6. Lavar as placas tal como descrito em (2). 7. Incubar as placas com 50 μΐ/poço de Anticorpo Secundário apropriado (marcado com HRP) diluido 1:1600 em Tampão de Bloqueio. Incubar as placas 1 hora à temperatura ambiente. 8. Lavar as placas com tampão de lavagem 1*, PBS 2* 9. Incubar as placas com 50 μΐ/poço de TMB, 5 minutos à temperatura ambiente. 10. Parar a reacção com 50 μΐ/poço de HC1 0,5 M. 11. Ler as placas ao comprimento de onda de 450 nm. 154 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
As seguintes sequências peptídicas foram pesquisadas tal como descrito acima: QGWQAFKNDATEIIPGLREYPEPP(SEQ ID NO:82) TEIIPGLREYPEPPQELENN (SEQ ID NO:83) PEPPQELENNQTMNRAENGG (SEQ ID NO:84) ENGGRPPHHPYDTKDVSEYS (SEQ ID NO:85) CRELHYTRFVTDGP (SEQ ID NO:86) CRELHYTRFVTDGPSRSAKPVTELV (SEQ ID NO:87) CRSAKPVTELVSSGQSGPRARLL (SEQ ID NO:88) CGPARLLPNAIGRVKWWRPNGPDFR (SEQ ID NO:89) RAQRVQLLCPGGAAPRSRKV (SEQ ID NO:90) PGGAAPRSRKVRLVAS (SEQ ID NO:91) KRLTRFHNQSELKDFGPETARPQ (SEQ ID NO:92) IPDRYAQRVQLLSPGG (SEQ ID NO:93) SELKDFGPETARPQKGRKPRPRAR (SEQ ID NO:94) KGRKPRPRARGAKANQAELENAY (SEQ ID NO:95) PNAIGRVKWWRPNGPDFR (SEQ ID NO:96) KWWRPNGPDFRCIPDRYRAQRV (SEQ ID NO:97).
Um anticorpo neutralizador de elevada afinidade (Ab-19) ligou-se a duas sequências peptidicas sobreponiveis: PNAIGRVKWWRPNGPDFR (SEQ ID NO:96) e KWWRPNGPDFRCIPDRYRAQRV (SEQ ID NO:97).
Este procedimento permite o reconhecimento de epitopos para anticorpos que reagem com epitopos lineares aparentes. Os péptidos que contêm todo ou parte do local de ligação ao anticorpo ligar-se-ão ao anticorpo e serão assim detectados. EXEMPLO 4
IDENTIFICAÇÃO DE EPITOPOS DE ESCLEROSTINA HUMANA
Estrutura da esclerostina A forma madura (péptido sinal removido) da esclerostina humana é uma proteína de 190 aminoácidos (Figura 8) . A Figura 9 mostra uma representação esquemática da estrutura geral da esclerostina com um braço N-terminal (do Q N-terminal para a Cisteinal) e um braço C-terminal (da Cisteina8 para o terminal Y) . Ensanduichada entre estes dois braços está a estrutura de nó de cistinas e três laços que são designados 155 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Voltai, Volta2 e Volta3. As quatro ligações dissulfureto na esclerostina são Cysl na posição 57 da sequência ligada a Cys5 na posição 111 da sequência (referida como C1-C5), Cys2 na posição 71 da sequência ligada a Cys6 na posição 125 da sequência (referida como C2-C6), Cys3 na posição 82 da sequência ligada a Cys7 na posição 142 da sequência (referida como C3-C7), Cys4 na posição 86 da sequência ligada a Cys8 na posição 144 da sequência (referida como C4-C8). A estrutura de anel de 8 membros é formada através da ligação dissulfureto C3-C7 e C4-C8. Esta estrutura de anel, em conjunto com a ligação dissulfureto C1-C5 penetrando através do anel, forma um nó de cistinas tipico. C2-C6, que não faz parte do nó de cistinas, coloca duas grandes estruturas em volta, volta 1 (residuos 57 a 82) e volta 3 (residuos 111 a 142) juntas. Volta 2 vai de C4 (residuo 86) a C5 (residuo 111) .
Parte Experimental A abordagem geral para caracterização dos epitopos a que se ligam os anticorpos monoclonais anti-esclerostina envolveu a fragmentação da Esclerostina humana em péptidos com diferentes proteases, a determinação da sequência de vários péptidos de esclerostina humana, o isolamento destes péptidos e o teste de cada um deles quanto à sua capacidade para se ligarem a um determinado anticorpo monoclonal utilizando um "ensaio de ligação de competição ao epitopo do péptido de esclerostina humana" com base em Biacore. Os dados resultantes permitiram a localização do epitopo de ligação a determinar.
As digestões peptídicas foram sujeitas a mapeamento peptidico por HPLC; os picos individuais foram colhidos, e os péptidos identificados e mapeados através de análises de espectrometria de massa de dessorção laser assistida por matriz (MALDI-MS) e ionização por electrospray LC-MS (ESI-LC-MS) e/ou através de sequenciação N-terminal. Todas as análises de HPLC para estes estudos foram efectuadas utilizando uma coluna C8 de fase inversa (2,1 mm d.i. χ 15 cm de comprimento). 0 mapeamento peptidico por HPLC foi realizado com um gradiente linear de ácido trifluoroacético a 0,05% (fase móvel A) para acetonitrilo a 90% em ácido 156 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ trifluoroacético a 0,05%. As colunas foram reveladas durante 50 minutos com um caudal de 0,2 ml/min.
Digestões com Tripsina e AspN-Endoproteinase A esclerostina humana na forma madura foi digerida com tripsina, que cliva após a arginina e lisina, ou com AspN. Cerca de 200 pg de esclerostina a 0,5-1,0 mg/ml, foram incubados em PBS (pH 7,2) durante 20 horas a 37°C com 8 pg de tripsina ou AspN.
Digestão com tripsina A cromatografia de HPLC das digestões de tripsina produziu vários picos principais (Fig. 10A) . A análise da sequência foi realizada sobre os picos de péptidos recuperados da HPLC após digestão com tripsina. A análise ESI LC-MS em linha da digestão peptídica foi também realizada para determinar a massa precisa dos péptidos que foram separados por HPLC. A identidade dos péptidos presentes nos picos peptidicos foi assim determinada (Fig. 11). A Figura 13 mostra o alinhamento de várias sequências peptidicas (T19.2, T20, T20.6, T21-22) juntamente com a sequência de esclerostina. O número após cada T (p. ex., T19.2) reflecte o tempo de retenção. TI9.2 contém dois péptidos (um de volta 1 e um de volta 3) ligados através da ligação dissulfureto C2-C6. T20 contém dois péptidos mantidos juntos através da estrutura de nó de cistinas, com as voltas 1 e 3 intactas mantidas juntas através do dissulfureto C2-C6 e com a maior parte da volta 2 ausente. T20.6 contém quatro sequências mantidas juntas através da estrutura do nó de cistinas, mas com ausência de parte da volta 1 e 3 (a parte T19.2) e sem a maior parte da volta 2. T21-22 é quase idêntico a T20 mas tem 3 aminoácidos adicionais na região da volta 2.
Digestão com AspN A cromatografia de HPLC das digestões de AspN produziu vários picos principais (Fig. 10B) . A análise da sequência foi realizada sobre os picos de péptidos recuperados de HPLC. A análise ESI LC-MS em linha da digestão peptidica foi também realizada para determinar a massa precisa dos péptidos que 157 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ foram separados através de HPLC. A identidade dos péptidos presentes nos picos dos péptidos a partir da digestão de AspN foi assim determinada (Fig. 12). A Figura 14 mostra o alinhamento de várias sequências peptídicas (AspN14.6, AspN18.6, AspN22.7-23.5) ao longo da sequência de esclerostina. 0 número após cada AspN (p. ex. AspN18.6) reflecte o tempo de retenção. AspN14.6 contém três péptidos curtos de ambos os braços N e C-terminais de esclerostina, enquanto AspN18.6 é um péptido maior do braço N-terminal da esclerostina. AspN22.7-23.5 contém um único fragmento peptidico de 104 aminoácidos que engloba todas as oito cisteinas (as quatro ligações dissulfureto), o nó de cistinas e todas as voltas 1, 2 e 3. A estratégia para a caracterização dos epitopos foi utilizar estes diversos péptidos de esclerostina humana gerados por tripsina e AspN e determinar a que péptidos se podiam ligar os vários Anticorpos (Ab-A, Ab-B, Ab-C e Ab-D) . Especificamente estes foram testados num "ensaio de ligação de competição ao epitopo do péptido de esclerostina humana" baseado em Biacore onde a ligação de um determinado anticorpo monoclonal a esclerostina humana imobilizada no chip Biacore foi determinada na presença ou ausência de cada uma das várias fracções peptídicas de HPLC de tripsina e AspN isoladas. Na ausência de quaisquer péptidos competidores, o anticorpo monoclonal particular foi capaz de se ligar a esclerostina humana no chip e produzir uma resposta de unidade de ressonância, RU. A pré-incubação do anticorpo monoclonal particular com esclerostina humana intacta em solução, seguida de teste da ligação ao chip, demonstrou que a ligação do mAb à esclerostina humana em solução impediu a ligação do mAb à esclerostina humana no chip, validando assim o princípio geral deste ensaio de competição.
Este procedimento geral foi repetido individualmente para cada péptido. Uma resposta de RU robusta foi tomada para indicar que o péptido particular a testar não se podia ligar ao mAb em solução (assim o mAb estava livre de se ligar à esclerostina humana que tinha sido imobilizada no chip). Inversamente, a ausência de uma resposta de RU robusta indicou que o mAb era capaz de se ligar ao péptido esclerostina em solução. Estes padrões de ligação, ligados 158 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ com a identidade conhecida dos vários péptidos de esclerostina, foram utilizados para determinar os epitopos de esclerostina a que se ligavam os anticorpos anti-esclerostina Ab-A, Ab-B, Ab-C e Ab-D.
ENSAIO DE LIGAÇÃO DE COMPETIÇÃO AO EPITOPO DO PÉPTIDO DE ESCLEROSTINA HUMANA BASEADO EM BIACORE
Preparação da superfície de esclerostina humana: A imobilização da esclerostina humana de forma madura na superfície de um chip sensor BIAcore (CM5) foi realizada de acordo com as instruções do fabricante. Resumidamente, grupos carboxilo sobre as superfícies do chip sensor foram activados através da injecção de 60 μΐ de uma mistura contendo N-etil-N'-(dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC) 0,2 M e N-hidroxissuccinimida (NHS) 0,05 Μ. A esclerostina humana foi diluída em acetato de sódio 10 mM, pH 4,0 a uma concentração de 20 yg/ml seguido de injecção sobre a superfície de CM5 activada. O excesso de grupos reactivos nas superfícies foi desactivado através de injecção de 60 μΐ de etanolamina 1 M. Os níveis finais imobilizados foram de ~5000 unidades de ressonância (RU) para a superfície de esclerostina humana. Uma superfície de referência em branco, falsamente ligada foi também preparada nos chips sensores.
Análise da especificidade de ligação:
Solução salina tamponada com fosfato 1χ sem cloreto de cálcio ou cloreto de magnésio foi de Gibco/Invitrogen,
Carlsbad, CA. A albumina de soro bovino, fracção V, isenta de IgG foi de Sigma-Aldrich, St. Louis, MO. Cada mAb (2 nM) foi incubado separadamente com esclerostina humana 20 nM ou um determinado péptido de esclerostina humana (nota: existem
três péptidos não ligados em AspN14.6) em tampão de amostra (PBS 1χ + P-20 a 0,005% + BSA a 0,1 mg/ml) antes da injecção sobre a superfície de esclerostina humana imobilizada. O caudal de injecção da amostra foi de 5 ml/min, seguido pela regeneração da superfície utilizando NaCl 1 M em glicina 8 mM, pH 2,0 a 30 ml/min durante 30 segundos. Os dados foram analisados utilizando BIAevaluation 3.2, e são apresentados 159 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ na Figura 15 (Ab-A), Figura 16 (Ab-B), Figura 17 (Ab-C) e Figura 18 (Ac-D).
Epitopos da Volta 2 e T20.6: 0 padrão de ligação a péptidos de esclerostina para dois anticorpos representativos (Ab-A e Ab-B) foram virtualmente idênticos (Fig. 15 e Fig. 16) e mostrou que ambos os Anticorpos apenas se podem ligar ao péptido AspN22.7-23.5. A única diferença entre AspN22.7-23.5 e todos os outros péptidos de esclerostina é que AspN22.7-23.5 contém uma volta 2 intacta. Isto mostra que Ab-A e Ab-B se ligam à região da volta 2 de esclerostina definindo assim o epitopo da volta 2 (Fig. 19A). Os padrões de ligação a péptidos de esclerostina para Ab-C e Ab-D foram virtualmente idênticos um ao outro (Fig. 17 e Fig. 18) mas completamente distintos do verificado para Ab-A e Ab-B. Dos péptidos testados neste Exemplo, o péptido mais diminuto a que Ab-C e Ab-D se podiam ligar foi o péptido T20.6. Este resultado define o epitopo T20.6 (Fig. 19B) .
Ensaio de protecção de proteases: 0 principio geral deste ensaio é que a ligação de um Mab a esclerostina pode resultar na protecção de certos locais específicos de clivagem por proteases e esta informação pode ser utilizada para determinar a região da esclerostina onde se liga o Mab.
Epitopo "derivado 1 de T20.6 (nó de cistinas + 4 braços)": A Figura 20 mostra os mapas peptídicos de HPLC para um complexo de esclerostina humana-Ab-D (Fig 20A: a esclerostina humana foi pré-incubada a uma razão molar de 1:1 com Ab-D antes da digestão com tripsina tal como descrito acima) e apenas esclerostina humana (Fig 20B: a esclerostina humana foi digerida com tripsina tal como descrito acima). Os picos dos péptidos de T19.2 e T20.6 na Figura 20A mostraram uma clara redução na altura dos seus respectivos picos, em comparação com a Figura 20B. Esta redução na altura dos picos foi acompanhada de um aumento na altura dos picos para os péptidos T20 e T21-22. Estes dados indicam que os resíduos de 160 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ aminoácidos na volta 1 e volta 3, que na ausência de Ab D foram clivados por tripsina para gerar os péptidos T19.2 e T20.6, eram resistentes à clivagem por tripsina quando Ab-D era pré-ligado a esclerostina. A presença de T20, T20.6 e T21-22 indica que a volta 2 foi ainda clivada eficientemente quando Ab-D era pré-ligado a esclerostina. Estes dados indicam que Ab-D se ligou no lado da volta 1 e volta 3 do epitopo T20.6 definindo assim o menor epitopo "derivado 1 de T20.6 (nó de cistinas + 4 braços)" mostrado na Figura 21. EXEMPLO 5
TESTE IN VIVO DE ANTICORPOS MONOCLONAIS ΑΝΤΙ-ESCLEROSTINA EM
RATINHOS
Ratinhos machos BDF1 de quatro semanas de idade foram obtidos em Charles River Laboratories (Raleigh, NC) e alojados em jaulas limpas, cinco animais por jaula. A temperatura ambiente foi mantida entre 68 e 72°F e a humidade relativa do ar foi mantida entre 34 e 73%. O laboratório alojando as jaulas teve um ciclo de claro/escuro de 12 horas e verificou todas as especificações de AAALAC. Observações clinicas de todos os ratinhos no estudo ocorreram uma vez por dia.
Anticorpos monoclonais anti-esclerostina purificados (Ab-A Fig.l; Ab-B Fig.2; Ab-C Fig.3; Ab-D Fig.4) foram diluídos em solução salina tamponada com fosfato de Dulbecco estéril. Os ratinhos foram injectados com Anticorpos anti-esclerostina ou veículo de PBS por via subcutânea a 21 μΐ por grama de peso corporal, duas vezes por semana (Segunda e Terça-feira) a 25 mg/kg. PTH humana (1-34) foi diluída em tampão de PTH (HC1 0,001 N, NaCl 0,15 M, BSA a 2%), e doseada por via subcutânea a 21 μΐ por grama de peso corporal cinco vezes por semana (Segunda, Terça, Quarta, Quinta, Sexta) a 100 pg/kg como controlo positivo (Figuras 5 e 6). O número de ratinhos por grupo foi de N=5 na Fig. 5 e 6, e N=6 na Figura 7 . 161 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Densitometria Óssea PIXImus in vivo A densidade mineral óssea (DMO) foi determinada semanalmente na metáfise proximal da tibia e nas vértebras lombares através de Absorciometria de Raios-X de Dupla Energia periférica (pDEXA) com o sistema PIXImus2 de GE/Lunar Medicai Systems, Madison, WI. Uma região de 25 mm2 de interesse (ROI) foi colocada para incluir a superfície proximal articular, a epífise, e a extremidade proximal na metáfise da tíbia. Uma região de interesse (ROI) foi colocada para incluir as vértebras lombares (L1-L5). A tíbia proximal e as regiões lombares foram analisadas para determinar a densidade mineral óssea total. As médias dos grupos foram relatadas ± Desvio Padrão e comparadas com o grupo de tratamento de veículo para análise estatística.
Análise estatística A análise estatística foi realizada com um Dunnett e Tukey-Kramer (usando MS Excel e JMP v 5.0. para os dados de DMO) . As médias dos grupos para cada conjunto de dados foram consideradas significativamente diferentes quando o valor de P era inferior a 0,05 (R<0,05).
Actividade neutralizante de esclerostina dos anticorpos
Os aumentos estatisticamente significativos na DMO em comparação com o veículo, observados para cada um de Ab-A (Figura 5) , Ab-B (Figura 5) , Ab-C (Figura 6) e Ab-D (Figura 7) demonstram que estes quatro anticorpos são anticorpos neutralizadores de esclerostina. Além disso estes dados mostram que, para anticorpos anti-esclerostina que se ligam a esclerostina de ratinho, o tratamento e a análise dos ratinhos tal como descrito acima podem ser utilizados para identificar anticorpos neutralizadores de esclerostina. 162 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ EXEMPLO 6
ENSAIO DE PESQUISA PARA ANTICORPOS QUE BLOQUEIAM A LIGAÇÃO DE UM ANTICORPO A ESCLEROSTINA HUMANA A esclerostina humana foi ligada a um chip CM5 Biacore utilizando química padrão de acoplamento de aminas para gerar uma superfície revestida de esclerostina. 300 unidades de ressonância de esclerostina foram acopladas à superfície.
Os anticorpos a testar foram diluídos até uma concentração de 200 pg/ml em tampão HBS-EP (sendo HEPES 10 mM, pH 7,4, NaCl 150 mM, EDTA 3 mM, Tensioactivo P20 a 0,005% (v/v)) e, em seguida, misturados numa razão molar de um para um (com base nos locais de ligação) para gerar a mistura de teste. Esta mistura de teste continha assim cada anticorpo a uma concentração de 100 pg/ml (1,3 μΜ com base nos locais de ligação). Soluções separadas contendo cada um dos anticorpos na mistura de teste sozinho foram também preparadas. Estas soluções continham os anticorpos individuais em tampão HBS-EP, numa concentração de 100 pg/ml (1,3 μΜ com base nos locais de ligação). 20 gL da mistura de teste foram passados sobre o chip revestido de esclerostina a um caudal de 10 μΐ/min e a quantidade de ligação registada. O chip foi então tratado com pulsos de 60 segundos de HCl 30 mM para remover todo o anticorpo ligado. Uma solução contendo apenas um dos anticorpos da mistura de teste (a 1,3 μΜ no mesmo tampão que a mistura de teste com base nos locais de ligação) foi então passada sobre o chip do mesmo modo que a mistura de teste e a quantidade de ligação registada. O chip foi novamente tratado para remover todo o anticorpo ligado e finalmente uma solução contendo o outro anticorpo apenas da mistura de teste (a 1,3 μΜ in no mesmo tampão que a mistura de teste, com base nos locais de ligação) foi passada sobre o chip e a quantidade de ligação registada. A tabela abaixo mostra os resultados de ensaios de bloqueio cruzado num intervalo de anticorpos diferentes. Os valores em cada quadrado da tabela representam a quantidade de ligação (em RU) observada quando os anticorpos (a 1,3 μΜ 163 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ com base nos locais de ligação) ou o tampão indicado na linha superior da tabela foram misturados com os anticorpos (a 1,3 μΜ com base nos locais de ligação) ou o tampão indicado na primeira coluna da tabela.
Tampão Ab-4 Ab-13 Ab-A Ab-3 Ab-19 Tampão -0,5 693 428,5 707,3 316, 1 649, 9 Ab-4 687,7 795, 1 1018,2 860,5 869, 3 822,5 Ab-13 425, 6 1011,3 442,7 1108,4 431, 9 1042,4 Ab-A 692,4 833, 1 1080,4 738,5 946, 2 868,1 Ab-3 305,5 845, 1 428,2 952,2 344,4 895,7 Ab-19 618,1 788, 6 1022,5 863,3 891,5 658,7
Utilizando o valor de ligação média (em RU) para cada combinação de anticorpos na tabela acima (uma vez que cada combinação aparece duas vezes), é possível calcular a percentagem da ligação teórica mostrada por cada combinação de anticorpos. Sendo a ligação teórica calculada como a soma dos valores médios para os componentes de cada mistura de teste, quando ensaiados sozinhos (i.e., anticorpo e tampão).
Tampão Ab-4 Ab-13 Ab-A Ab-3 Ab-19 Tampão Ab-4 90,75 60,45 85, 4 60,75 Ab-13 96, 9 58,0 97,0 Ab-A 93, 5 65, 0 Ab-3 94,4 Ab-19
Dos dados de cima é claro que Ab-4, Ab-A e Ab-19 se bloqueiam de forma cruzada uns aos outros. De forma semelhante, Ab-13 e Ab-3 bloqueiam-se de forma cruzada um ao outro. EXEMPLO 7
ENSAIO DE BLOQUEIO CRUZADO BASEADO EM ELISA
Os volumes líquidos utilizados neste exemplo seriam os tipicamente utilizados em ELISA em placas de 96 poços (p. ex. 50-200 μΐ/poço). Ab-X e Ab-Y, neste exemplo assume-se que têm pesos moleculares de cerca de 145 Kd e têm 2 locais de 164 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ ligação a esclerostina por molécula de anticorpo. Um anticorpo anti-esclerostina (Ab-X) é revestido (p. ex., 50 μΐ de 1 pg/ml) numa placa de ELISA de 96 poços (p. ex. Corning 96 Well EIA/RIA Fiat Bottom Microplate (Product # 3590), Corning Inc., Acton, MA) durante pelo menos uma hora. Após este passo de revestimento a solução de anticorpo é removida, a placa é lavada uma ou duas vezes com solução de lavagem (p. ex., PBS e Tween 20 a 0,05%) e é então bloqueada utilizando uma solução de bloqueio apropriada (p. ex., PBS, BSA a 1%, soro de cabra a 1% e Tween 20 a 0,5%) e os procedimentos conhecidos na técnica. A solução de bloqueio é então removida da placa de ELISA e um segundo anticorpo anti-esclerostina (Ab-Y) , que está a ser testado quanto à sua capacidade para bloquear de forma cruzada o anticorpo revestido, é adicionado em excesso (p. ex., 50 μΐ de 10 pg/ml) em solução de bloqueio aos poços apropriados da placa de ELISA. Após isto, uma quantidade limitada (p. ex. 50 μΐ de 10 ng/ml) de esclerostina em solução de bloqueio é então adicionada aos poços apropriados e a placa é incubada durante pelo menos uma hora à temperatura ambiente enquanto se agita. A placa é então lavada 2-4 vezes com solução de lavagem. Uma quantidade apropriada de um reagente de detecção de esclerostina (p. ex., anticorpo policlonal anti-esclerostina biotinilado que foi pré-complexado com uma quantidade apropriada de um conjugado de estreptavidina-peroxidase de rábano (HRP)) em solução de bloqueio é adicionada à placa de ELISA e incubada durante pelo menos uma hora à temperatura ambiente. A placa é então lavada pelo menos 4 vezes com solução de lavagem e é revelada com um reagente apropriado (p. ex., substratos de HRP tais como TMB (colorimétrico) ou vários substratos luminescentes de HRP) . O sinal de fundo para o ensaio é definido como o sinal obtido em poços revestidos com o anticorpo (neste caso, Ab-X), o segundo anticorpo em fase de solução (neste caso, Ab-Y), apenas o tampão de esclerostina (i.e. sem esclerostina) e reagentes de detecção de esclerostina. O sinal de controlo positivo para o ensaio é definido como o sinal obtido em poços revestidos com o anticorpo (neste caso, Ab-X), apenas tampão do segundo anticorpo em fase de solução (i.e. sem segundo anticorpo em fase de solução), esclerostina e reagentes de detecção de esclerostina. O teste ELISA tem de ser corrido de modo a que 165 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ ο sinal de controlo positivo seja pelo menos 6 vezes o sinal de fundo.
Para evitar quaisquer artefactos (p. ex., afinidades significativamente diferentes entre Ab-X e Ab-Y para esclerostina) resultantes da escolha de que anticorpo utilizar como anticorpo de revestimento e qual utilizar como segundo anticorpo (competidor) , o ensaio de bloqueio cruzado precisa de ser executado em dois formatos: 1) o formato 1 é onde Ab-X é o anticorpo que é revestido sobre a placa de ELISA e Ab-Y é o anticorpo competidor que está em solução e 2) o formato 2 é onde Ab-Y é o anticorpo que é revestido sobre a placa de ELISA e Ab-X é o anticorpo competidor que está em solução.
Ab-X e Ab-Y são definidos como bloqueadores cruzados se, no formato 1 ou no formato 2, o anticorpo anti-esclerostina em fase de solução é capaz de causar uma redução de entre 60% e 100%, especif icamente entre 70% e 100%, e mais especificamente entre 80% e 100%, do sinal de detecção de esclerostina (i.e. a quantidade de esclerostina ligada através do anticorpo revestido) em comparação com o sinal de detecção de esclerostina obtido na ausência do anticorpo anti-esclerostina em fase de solução (i.e. os poços do controlo positivo).
No caso em que uma versão etiquetada de esclerostina é utilizada no ELISA, tal como uma Esclerostina etiquetada com His no terminal N (R&D Systems, Minneapolis, MN, EUA, 2005, cat# 1406-ST-025), então um tipo apropriado de reagente de detecção de esclerostina incluirá um anticorpo anti-His marcado com HRP. Para além de utilizar Esclerostina etiquetada com His no terminal N, pode também utilizar-se Esclerostina etiquetada com His no terminal C. Além disso, várias outras etiquetas e combinações de proteínas de ligação a etiquetas que são conhecidas na técnica podiam ser utilizadas nestes ensaio de bloqueio cruzado baseado em ELISA (p. ex., etiqueta HA com anticorpos anti-HA; etiqueta FLAG com anticorpos anti-FLAG; etiqueta biotina com estreptavidina). 166 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ EXEMPLO 8
ENSAIO DE MINERALIZAÇÃO BASEADO EM CÉLULAS PARA IDENTIFICAÇÃO DE AGENTES CAPAZES DE ANTAGONIZAR A ACTIVIDADE DE
ESCLEROSTINA
Introdução A mineralização através de células de linhagem de osteoblastos em cultura, células primárias ou linhas celulares, é utilizada como um modelo in vitro de formação de osso. A mineralização leva de cerca de uma a seis semanas a ocorrer começando com a indução de diferenciação das células da linhagem dos osteoblastos, através de um ou mais agentes de diferenciação. A sequência geral de eventos envolve proliferação e diferenciação celulares, produção de matriz extracelular, maturação da matriz e, finalmente, deposição de mineral, que se refere a uma cristalização e/ou deposição de fosfato de cálcio. Esta sequência de eventos que começam com a proliferação e diferenciação celulares, e terminam com a deposição de mineral é aqui referida como mineralização. A medição de cálcio (mineral) é o resultado do ensaio. A deposição de mineral tem uma forte caracteristica biofísica, por uma vez "sementes" de mineral se começarem a formar, a quantidade total de mineral que será depositada na cultura inteira pode por vezes ser depositada de forma bastante rápida, tal como dentro de poucos dias depois. 0 momento e a extensão da deposição mineral em cultura são influenciados, em parte, pelas células da linhagem/linha celular de osteoblastos particular a utilizar, pelas condições de crescimento, pela escolha dos agentes de diferenciação e pelo número do lote particular do soro utilizado no meio de cultura celular. Para culturas de mineralização da linhagem celular/linha celular de osteoblastos, pelo menos deveriam ser testados oito a quinze lotes de soro de mais de um fornecedor para identificar um lote de soro particular que permita que a mineralização ocorra. 167 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
As células MC3T3-E1 (Sudo, H. et al. , "In vitro differentiation and calcification in a new clonal osteogenic cell line derived from newborn mouse calvaria". J. Cell Biol. 96: 191-198) e os subclones da linha celular original podem formar mineral em cultura após crescimento na presença de agentes de diferenciação. Tais subclones incluem MC3T3-E1-BF (Smith, E., Redman, R., Logg, C., Coetzee, G., Kasahara, N., Frenkel, B. 2000. "Glucocorticoids inhibit developmental stage-specific osteoblast cell cycle". J. Biol. Chem. 275: 19992-20001).
Identificação de Anticorpos Neutralizadores de Esclerostina Células MC3T3-E1-BF foram utilizadas para o ensaio de mineralização. O ácido ascórbico e o B-glicerofosfato foram utilizados para induzir diferenciação de células MC3T3-E1-BF levando à deposição mineral. O protocolo de pesquisa especifico, no formato de 96 poços, envolveu plaqueamento de células numa Quarta-feira, seguido de sete mudanças de meio (tal como descrito abaixo) durante um periodo de 12 dias, com a maior parte da deposição mineral a ocorrer no final de aproximadamente dezoito horas (p. ex. de Domingo à noite até Segunda-feira). Para qualquer dado tratamento, foram usados 3 poços (N=3). O momento e a extensão específicos da deposição de mineral podem variar dependendo, em parte, do número do lote de soro particular a utilizar. As experiências de controlo irão permitir que tais variáveis sejam consideradas, tal como é bem conhecido na técnica de experimentação de cultura de células em geral.
Neste sistema de ensaio a esclerostina inibiu um ou mais da sequência de eventos que levam até e incluem a deposição mineral (i.e., a esclerostina inibiu a mineralização). Os anticorpos anti-esclerostina que foram capazes de neutralizar a actividade inibidora de esclerostina permitiram a mineralização da cultura na presença de esclerostina de modo a que houvesse um aumento estatisticamente significativo na deposição de fosfato de cálcio (medido como cálcio) em comparação com a quantidade de cálcio medida no grupo de tratamento de apenas esclerostina (i.e., sem anticorpo). Para análise estatística (utilizando MS Excel e JMP) foi utilizado um ANOVA de uma via seguido de comparação de Dunnett para 168 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ determinar diferenças entre os grupos. As médias dos grupos para cada conjunto de dados foi considerada significativamente diferente quando o valor de P foi inferior a 0,05 (P<0,05). Um resultado representativo de correr este ensaio é mostrado na Figura 22. Na ausência de esclerostina de ratinho recombinante, a sequência de eventos que levam à e incluem a deposição mineral prosseguiu normalmente. Os niveis de cálcio em cada grupo de tratamento são mostrados como médias ± Erro Padrão da Média (SEM). Nesta experiência exemplar os niveis de cálcio do ensaio de cálcio foram «31 pg/ml. No entanto, a adição de esclerostina de ratinho recombinante causou inibição da mineralização e o cálcio foi reduzido em «85%. A adição do anticorpo monoclonal anti-esclerostina Ab-19 ou Ab-4, juntamente com a esclerostina recombinante resultou num aumento estatisticamente significativo da deposição mineral, em comparação com o grupo de apenas esclerostina, porque a actividade inibitória da esclerostina foi neutralizada por ambos os anticorpos. Os resultados desta experiência indicam que Ab-19 e Ab-4 são anticorpos monoclonais (Mab) neutralizadores de esclerostina. A Figura 23 mostra um resultado muito semelhante utilizando esclerostina humana recombinante e dois Mab anti-esclerostina humanizados. A Figura 24 mostra também um resultado muito semelhante utilizando esclerostina humana recombinante e Mab anti-esclerostina de ratinho e humanizados tal como indicado.
Os anticorpos utilizados para as experiências mostradas nas Fig. 22, 23 e 24 têm pesos moleculares de cerca de 145 Kda, e têm dois locais de ligação a esclerostina por molécula de anticorpo.
Um protocolo detalhado de cultura de células MC3T3-E1-BF é descrito abaixo. 169 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Reagentes e Meios 169 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ Reagentes
Companhia
Catálogo #
Alfa-MEM Ácido ascórbico Beta-glicerofosfato PenStrepGlutamina 100x Dimetilsulfóxido (DMSO) Soro fetal bovino (FBS)
Gibco-Invitrogen Sigma Sigma Gibco-Invitrogen Sigma Cansera ou Soro fetal bovinoTerraCell Int. (FBS) 12571-048 A4544 G6376 10378-016 D5879 ou D2650 CS-C08-500 (lote SF50310) CS-C08-1000A (lote SF-20308) ##
Alfa-MEM é geralmente fabricado com uma data de validade de 1 ano. Foi utilizado Alfa-MEM que não tinha mais de 6 meses pós-fabrico para a cultura de células.
Meio de expansão (Alfa-MEM/FBS a 10%/PenStrepGlu) foi preparado como se segue:
Uma garrafa de 500 ml de FBS foi descongelada e esterilizada por filtração através de um filtro de 0,22 micrómetros. 100 ml deste FBS foram adicionados a 1 litro de Alfa-MEM, seguido da adição de 10 ml de PenStrepGlutamina 100x. O FBS não utilizado foi aliquotado e recongelado para posterior utilização.
Meio de Diferenciação (Alfa-MEM/FBS a 10%/PenStrepGlu, + ácido ascórbico a 50 pg/ml, + beta-glicerofosfato 10 mM) foi preparado como se segue: 100 ml de Meio de Diferenciação foi preparado através da suplementação de 100 ml de Meio de Expansão, com ácido ascórbico e beta-glicerofosfato como se segue:
Cone. de reserva Volume Cone. Final Ácido ascórbico (ver abaixo) 10 mg/ml 0,5 ml 100 pg/ml (50 β-glicerofosfato 1 M 1,0 ml pg/ml + 50 pg/ml) 10 mM 170 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ Ο Meio de Diferenciação foi feito através da suplementação do Meio de Expansão apenas no dia em que o meio de diferenciação iria ser utilizado para a cultura celular. A concentração final de ácido ascórbico no Meio de Diferenciação é de 100 pg/ml porque Alfa-MEM contém já 50 pg/ml de ácido ascórbico. A solução de reserva de ácido ascórbico (10 mg/ml) foi feita e aliquotada para congelamento a -80°C. Cada aliquota foi utilizada apenas uma vez (i.e. não recongelada). A solução de reserva de beta-glicerofosfato (1 M) foi feita e aliquotada para congelação a -20°C. Cada aliquota foi congelada e descongelada um máximo de 5 vezes antes de ser descartada.
Cultura Celular para expansão de células MC3T3-E1-BF. A cultura celular foi efectuada a 37°C e CO2 a 5%. Um banco celular foi gerado para fins de pesquisa de anticorpos neutralizadores de esclerostina. O banco de células foi criado como se segue:
Um frasco de células MC3T3-E1-BF congeladas foi descongelado através de agitação num banho de água a 37°C. As células descongeladas foram colocadas em 10 ml de Meio de Expansão (Alfa-MEM/FBS a 10%/PenStrepGlu) num tubo de 50 ml e centrifugado suavemente durante 5 minutos. As células foram então ressuspensas em 4 ml de Alfa-MEM/FBS a 10%/PenStrepGlu. Após determinar o número de células utilizando azul tripano e hemacitómetro, lxlO6 células foram plaqueadas em 50 ml de meio Alfa-MEM/FBS a 10%/PenStrepGlu num frasco T175.
Quando esta passagem estava confluente (após aproximadamente 7 dias), as células foram tripsinizadas com tripsina/EDTA (tripsina a 0,05%; EDTA 0,53 mM), centrifugadas suavemente durante 5 minutos e, em seguida, ressuspensas em 5 ml de Alfa-MEM/FBS a 10%/PenStrepGlu. Após determinação do número de células utilizando azul tripano e hemacitómetro, as células foram plaqueadas a 1*106 células em 50 ml de meio Alfa-MEM/FBS a 10%/PenStrepGlu por frasco T175. O número de frascos T175 utilizados para plaqueamento neste ponto depende do número total de células disponível e do número desejado de frascos a levar para a próxima passagem. As células extras 171 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ foram congeladas até 1-2χ106 células vivas/ml em FBS a 90%/DMSO a 10%.
Quando esta passagem estava confluente (cerca de 3-4 dias), as células foram tripsinizadas com tripsina/EDTA (Tripsina a 0,05%; EDTA 0,53 mM) , centrifugadas suavemente durante 5 minutos e, em seguida, ressuspensas em 5 ml de Alfa-MEM/FBS a 10%/PenStrepGlu. Após determinação do número de células utilizando azul tripano e hemacitómetro, as células foram plaqueadas a ΙχΙΟ6 células em 50 ml de meio Alfa-MEM/FBS a 10%/PenStrepGlu por frasco T175. O número de frascos T175 utilizados para plaqueamento neste ponto depende do número total de células disponíveis e do número desejado de frascos a levar para a passagem seguinte. As células extra foram congeladas a 1-2χ106 células vivas/ml em FBS a 90%/DMSO a 10%.
Quando esta passagem estava confluente (cerca de 3-4 dias), as células foram tripsinizadas com tripsina/EDTA (Tripsina a 0,05%; EDTA 0,53 mM) , centrifugadas suavemente durante 5 minutos e, em seguida, ressuspensas em 5 ml de Alfa-MEM/FBS a 10%/PenStrepGlu. Após determinação do número de células utilizando azul tripano e hemacitómetro, as células foram plaqueadas a ΙχΙΟ6 células em 50 ml de meio Alfa-MEM/FBS a 10%/PenStrepGlu por frasco T175. O número de frascos T175 utilizados para plaqueamento neste ponto depende do número total de células disponíveis e do número desejado de frascos a levar para a passagem seguinte. As células extra foram congeladas a 1-2χ106 células vivas/ml em FBS a 90%/DMSO a 10%.
Quando esta passagem estava confluente (cerca de 3-4 dias), as células foram tripsinizadas com tripsina/EDTA (Tripsina a 0,05%; EDTA 0,53 mM) , centrifugadas suavemente durante 5 minutos e, em seguida, ressuspensas em 5 ml de Alfa-MEM/FBS a 10%/PenStrepGlu. Após determinação do número de células utilizando azul tripano e hemacitómetro, as células foram congeladas a 1-2χ106 células vivas/ml em FBS a 90%/DMSO a 10%. Esta "passagem final" de células congeladas foi a passagem que foi utilizada para o ensaio de pesquisa.
Cultura Celular para mineralização de células MC3T3-E1-BF. 172 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ A cultura celular foi efectuada a 37°C e CO2 a 5%. É desejável minimizar as flutuações de temperatura e da % de CO2 durante o processo de cultura de células de mineralização. Isto pode ser conseguido minimizando o tempo que as placas passam fora da incubadora durante a alimentação e também através da minimização do número de vezes que a porta da incubadora é aberta e fechada durante o processo de cultura celular de mineralização. A este respeito, pode ser útil ter uma incubadora de cultura de tecidos que seja dedicada exclusivamente à cultura de células de mineralização (e, portanto, não sendo aberta e fechada mais do que é necessário).
Um número apropriado de frascos de "passagem final" preparados tal como descrito acima foram descongelados por agitação num banho-maria a 37°C. As células descongeladas foram colocadas em 10 ml de Meio de Expansão (Alfa-MEM/FBS a 10%/PenStrepGlu) num tubo de 50 ml e centrifugadas suavemente durante 5 minutos. As células foram então ressuspensas em 4 ml de Alfa-MEM/FBS a 10%/PenStrepGlu. Após determinação do número de células através de azul tripano e hemacitómetro, 2500 células foram plaqueadas em 200 microlitros de Meio de Expansão por poço em placas de 96 poços revestidas a colagénio I (Becton Dickinson Labware, cat# 354407).
Para evitar um efeito de mineralização no bordo da placa, as células não foram plaqueadas na fila/coluna externa a toda a volta da placa. Em vez disso foram adicionados 200 microlitros de PBS a estes poços.
Procedimento exemplar de cultura de células
No procedimento seguinte, o dia de inicio do plaqueamento das células está indicado para ser uma Quarta-feira. Se for utilizado um dia da semana diferente como dia de inicio para o plaqueamento das células, esse dia desencadeará a programação diária para a remoção e adição de meio durante todo o processo, tal como indicado abaixo. Por exemplo, se as células forem plaqueadas numa Terça-feira, o meio não deve ser removido e adicionado na primeira Sexta-feira e Sábado, nem na segunda Sexta-feira e Sábado. Com o 173 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ início a uma Terça-feira, as placas seriam preparadas para o ensaio de cálcio no Domingo final.
As células foram plaqueadas numa Quarta-feira a 2500 células em 200 μΐ de Meio de Expansão.
Na Quinta-feira todo o Meio de Expansão foi removido e foram adicionados 200 μΐ de Meio de Diferenciação.
Na Sexta-feira foram removidos 100 μΐ do meio e foram adicionados 100 μΐ de Meio de Diferenciação fresco.
Na Segunda-feira foram removidos 100 μΐ do meio e foram adicionados 100 μΐ de Meio de Diferenciação fresco.
Na Terça-feira foram removidos 100 μΐ do meio e foram adicionados 100 μΐ de Meio de Diferenciação fresco.
Na Quarta-feira foram removidos 100 μΐ do meio e foram adicionados 100 μΐ de Meio de Diferenciação fresco.
Na Quinta-feira foram removidos 100 μΐ do meio e foram adicionados 100 μΐ de Meio de Diferenciação fresco.
Na Sexta-feira foram removidos 100 μΐ do meio e foram adicionados 100 μΐ de Meio de Diferenciação fresco.
Na Segunda-feira seguinte as placas foram preparadas para o ensaio do cálcio tal como se segue:
As placas foram lavadas uma vez com Tris-HCl 10 mM, pH 7-8.
Trabalhando sob uma hote, foram adicionados 200 μΐ por poço de HC1 0,5 N. As placas foram então congeladas a -80°C.
Imediatamente antes da medição do cálcio, as placas foram congeladas-descongeladas duas vezes, e em seguida foi utilizada trituração com uma pipeta multicanal para dispersar o conteúdo da placa. O conteúdo da placa foi então deixado em repouso a 4°C durante 30 minutos, altura em que foi removida uma quantidade apropriada de sobrenadante para a medição de 174 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ cálcio utilizando um estojo de cálcio comercialmente disponível. Um estojo exemplar e não limitante é Calcium (CPC) Liquicolor, No. de Cat. 0150-250, Stanbio Laboratory, Boerne, TX.
Neste ensaio baseado em células, a esclerostina inibe um ou mais dos eventos de uma sequência que conduz até à e incluindo a deposição mineral (i.e. a esclerostina inibe a mineralização). Assim, em experiências em que a esclerostina foi incluída na experiência de cultura celular particular, a esclerostina recombinante foi adicionada ao meio a partir da primeira Quinta-feira e a cada dia de alimentação seguinte. Nos casos em que um anticorpo monoclonal anti-esclerostina (Mab) estava a ser testado quanto à capacidade para neutralizar a esclerostina, i.e. permitir a mineralização através da neutralização da capacidade da esclerostina de inibir a mineralização, o Mab foi adicionado ao meio a partir da primeira Quinta-feira e a cada dia de alimentação seguinte. De acordo com o protocolo, isto foi realizado como se segue: o Mab foi pré-incubado com a esclerostina recombinante em Meio de diferenciação durante 45-60 minutos a 37°C e depois este meio foi utilizado para alimentar as células.
Descrito acima está um protocolo de mineralização de 12 dias para células MC3T3-E1-BF. Utilizando os mesmos reagentes e protocolo de alimentação, as células MC3T3-E1 originais (Sudo, H., Kodama, H-A, Amagai, Y., Yamamoto, S., Kasai, S. 1983. "In vitro differentiation and calcification in a new clonal osteogenic cell line derived from newborn mouse calvaria". J. Cell. Blol. 96: 191-198) que obtivemos a partir de RIKEN Cell Bank (RCB 1126, RIKEN BioResource Center 3-1-1 Koyadai, Tsukuba-shi, Ibaraki 305-0074 Japão) levaram mais tempo a mineralizar (total de 20 dias para a mineralização) do que as células MC3T3-E1-BF. A mineralização das células MC3T3-E1 originais foi inibida pela esclerostina recombinante e esta inibição foi bloqueada utilizando um anticorpo de neutralização da esclerostina. 175 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ EXEMPLO 9
Ο ANTICORPO ANTI-ESCLEROSTINA PROTEGE DE PERDA ÓSSEA INDUZIDA POR INFLAMAÇÃO NO MODELO DE TRANSFERÊNCIA DE CD4 CD45RBHI DE
COLITE EM RATINHOS SCID
Sumário do modelo A injecção do subconjunto CD45RBhigh de células T CD4+ em ratinhos C.B-17 scid resulta em inflamação intestinal crónica com caracteristicas semelhantes às da doença inflamatória do intestino humano (IBD). A diarreia e a doença emaciante é notada 3-5 semanas após a transferência de células com infiltração grave de leucócitos no cólon acompanhada por hiperplasia de células epiteliais e formação de granulomas. Os ratinhos C.B-17 scid que recebem o subconjunto reciproco de células CD4 + , as quais expressam CD45RBlow, não apresentam colite e tem um ganho de peso indistinguível dos ratinhos scid não injectados. Além dos sintomas de colite, o modelo de transferência de células T CD4+ CD45RBhigh de colite é acompanhado por uma redução na densidade mineral óssea (DMO), que se pensa ser primariamente através de mecanismos inflamatórios em vez de má absorção dietética (Byrne, FR et al., Gut 54: 78-86, 2005).
Indução de colite e perda de massa óssea induzida por inflamação
Os baços foram retirados de fêmeas de ratinhos balb/c desfeitos através de um filtro de células de 70 pm. A população CD4+ foi então enriquecida através de selecção negativa com Dynabeads utilizando anticorpos contra B220, MAC-1, CD8 e I-Ad. A população enriquecida foi então corada com anti-CD4 conjugado com FITC e PE conjugado com anti-CD45RB e fraccionada em populações CD4+CD45RBhigh e CD4+CD45RBlow através de separação de duas cores num Moflo (Dakocytomation) . As populações CD45RBhigh e CD45RBlow foram definidas como a coloração 40% mais brilhante e a coloração 20% mais baça de células CD4 + , respectivamente. 5><105 células foram então injectadas i.p. em ratinhos C.B-17 scid no dia 0 e o desenvolvimento de colite foi monitorizado através do surgimento de fezes moles ou diarreia e perda de peso. 176 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Medidas de densidade mineral óssea foram tomadas no final do estudo (dia 88).
Efeito do tratamento anti-Esclerostina sobre os sintomas de colite e DMO A IgG Ab-A foi administrada em doses de 10 mg/kg s.c. desde o dia anterior à transferência de células CD4+ CD45RBhigh e comparada com ratinhos que receberam o anticorpo de controlo negativo 101.4 também administrado a uma dose de 10 mg/kg s.c. Os anticorpos foram doseados semanalmente dai em diante. Um grupo de ratinhos que recebeu células CD4+ CD45RBlow não patogénicas e ao qual foi administrado 101.4 a 10 mg/kg foi estudado como controlo. No final do estudo (dia 88) a densidade mineral óssea foi medida e foram tomadas seções do cólon para análise da infiltração de células e avaliação das lesões histológicas. a) Nenhum efeito nos sintomas da colite
Os sintomas de colite típicos, tais como perda de peso e infiltração de células inflamatórias no cólon, não foram afectados pelo tratamento com Ab-A. De modo semelhante, não houve melhoria das lesões histológicas do cólon após o tratamento com Ab-A. b) Inibição da perda de densidade mineral óssea induzida por inflamação.
No dia 88 após a transferência de células para ratinhos C.B-17 scid, a densidade mineral óssea foi medida (DMO total, DMO das vértebras e DMO do fémur). Em comparação com ratinhos de controlo que receberam células CD4+CD45RB10" não patogénicas, os ratinhos que receberam células T CD4+ CD45RBhigh e o anticorpo de controlo negativo 101.4 tiveram uma densidade mineral óssea reduzida, tal como mostrado na Figura 25. Em contraste, não foi observada qualquer redução da DMO após tratamento com Ab-A. As medições da DMO total, das vértebras e do fémur foram significativamente maiores nos ratinhos que receberam células T CD4+CD45RBhigh e tratados com Ab-A que nos ratinhos que receberam células T CD4+ CD45RBhigh 177 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ e tratados com 101.4 (P<0,001 através do teste de comparação múltipla de Bonferroni). EXEMPLO 10
DETERMINAÇÃO BASEADA EM KINEXA DA AFINIDADE (KD) DE ANTICORPOS ANTI-ESCLEROSTINA PARA A ESCLEROSTINA HUMANA A afinidade de vários anticorpos anti-esclerostina para a esclerostina humana foi avaliada através de uma análise de ligação de equilíbrio em solução utilizando KinExA®3000 (Sapidyne Instruments Inc., Boise, ID) . Para estas medições, contas Reacti-Gel βχ (Pierce, Rockford, IL) foram pré-revestidas com esclerostina humana a 40 yg/ml em Na2C03 50 mM, pH 9,6 a 4°C de um dia para o outro. As contas foram então bloqueadas com BSA a 1 mg/ml em Tris-HCl 1 M, pH 7,5 a 4°C durante duas horas. 10 pM, 30 pM, ou 100 pM do anticorpo foram misturados com várias concentrações de esclerostina humana, variando na concentração de 0,1 μΜ até 1 nM, e equilibrados à temperatura ambiente por mais de 8 horas em PBS com BSA a 0,1 mg/ml e P20 a 0,005%. As misturas foram então passadas sobre as contas revestidas de esclerostina humana. A quantidade de anticorpo anti-esclerostina ligado a contas foi quantificada utilizando anticorpos de cabra anti-IgG de ratinho marcados com Cy5 fluorescente ou de cabra anti-IgG humana marcados com Cy5 fluorescente (Jackson Immuno Research, West Grove, PA) para as amostras de anticorpo de ratinho ou humano, respectivamente. A quantidade de sinal fluorescente medida foi proporcional à concentração do anticorpo anti-esclerostina livre em cada uma das misturas reaccionais em equilíbrio. A constante de dissociação em equilíbrio (KD) foi obtida a partir de regressão não linear das curvas de competição, utilizando um modelo de ligação homogénea no local de curva n proporcionado no software KinExA Pro. Os resultados dos ensaios KinExA para os anticorpos seleccionados estão resumidos na tabela abaixo. 178 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Anticorpos Antigénio KD (pM) Intervalo de confiança de 95% Ab-13 Esclerostina Humana 0, 6 0,4-0,8 pM Ab-4 Esclerostina Humana 3 1,8-4 pM Ab-19 Esclerostina Humana 3 1,7-4 pM Ab-14 Esclerostina Humana 1 0,5-2 pM Ab-5 Esclerostina Humana 6 4,3-8 pM Ab-23 Esclerostina Humana 4 2,1-8 pM EXEMPLO 11 MÉTODO BIACORE PARA DETERMINAÇÃO DA AFINIDADE DE ANTICORPOS ANTI-ESCLEROSTINA HUMANIZADOS PARA ESCLEROSTINA HUMANA. A tecnologia BIAcore monitoriza a ligação entre biomoléculas em tempo real e sem a necessidade de marcação. Um dos interactuantes, denominado o ligando, ou é imobilizado directamente ou é capturado na superfície imobilizada, enquanto o outro, denominado o objecto de análise, flui em solução sobre a superfície capturada. 0 sensor detecta a variação da massa na superfície do sensor à medida que o objecto de análise se liga ao ligando para formar um complexo sobre a superfície. Isto corresponde ao processo de associação. 0 processo de dissociação é monitorizado quando o objecto de análise é substituído por tampão. No ensaio de afinidade BIAcore, o ligando é o anticorpo anti-esclerostina e o objecto de análise é a esclerostina.
Instrumento
Biacore® 3000, Biacore AB, Uppsala, Suécia Chip sensor CM5 (grau de investigação) Número de Catálogo: BR-1001-14, Biacore AB, Uppsala, Suécia. Os chips foram armazenados a 4 °C. 179 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Solução de BIAnormalização
Glicerol a 70% (p/p). Parte do Estojo BIAmaintenance Número de Catálogo: BR-1002-51, Biacore AB, Uppsala, Suécia. O estojo BIAmaintenance foi armazenado a 4°C.
Estojo de Ligação de Aminas Número de Catálogo: BR-1000-50, Biacore AB, Uppsala,
Suécia.
Cloridrato de etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC) · Composto por 75 mg/ml, em água destilada e armazenado em aliguotas de 200 μΐ a -70°C. N-hidroxissuccinimida (NHS). Composto por 11,5 mg/ml, em água destilada e armazenado em aliquotas de 200 μΐ a -70°C.
Cloridrato de etanolamina-NaOH 1 M pH 8,5. Armazenado em aliquotas de 200 μΐ a -70°C.
Tampões O tampão de corrida para imobilização de anticorpo de captura: HBS-EP (sendo HEPES 0,01 M, pH 7,4, NaCl 0,15 M, EDTA 3 mM, Tensioactivo P20 a 0,005%). O número de Catálogo: BR-1001-88, Biacore AB, Uppsala, Suécia. Tampão armazenado a 4 °C.
Tampão de imobilização: Acetato 5,0 (sendo acetato de sódio 10 mM pH 5,0). Número de catálogo: BR-1003-51, Biacore AB, Uppsala, Suécia. Tampão armazenado a 4°C.
Tampão de corrida para ensaio de ligação: HBS-EP (sendo HEPES 0,01 M, pH 7,4, NaCl 0,15 M, EDTA 3 mM, Tensioactivo P20 a 0,005%, Número de Catálogo: BR-1001-88, Biacore AB, Uppsala, Suécia) com CM-Dextran adicionado a 1 mg/ml (Número de Catálogo 27560, Fluka BioChemika, Buchs, Suiça). Tampão armazenado a 4°C. 180 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Captura do ligando
Fragmento F(ab')2 de cabra anti-IgG humana Affinipure, fragmento Fc especifico. Jackson ImmunoResearch Inc (Pennsylvania, USA) Número de catálogo: 109-006-098. Reagente armazenado a 4°C.
Ligando
Anticorpos anti-esclerostina humana humanizados Ab5, Abl4 e Ab2 0.
Objecto de análise
Esclerostina humana recombinante. As alíquotas foram armazenadas a -70°C e descongeladas apenas uma vez para cada ensaio.
Solução de Regeneração HC1 40 mM, preparada por diluição com água destilada a partir de uma solução de reserva 11,6 M (BDH, Poole, Inglaterra. Número de catálogo: 101254H).
NaOH 5 mM preparada através de diluição com água destilada a partir de uma solução de reserva 50 mM. Número de catálogo: BR-1003-58, Biacore AB, Uppsala, Suécia. Método de Ensaio O formato do ensaio foi captura do anticorpo anti-esclerostina através de Fc anti-IgG humana imobilizado depois titulação da esclerostina sobre a superfície capturada.
Um exemplo do procedimento é apresentado abaixo: BIA (Análise de Interacção Biamolecular) foi realizada utilizando um BIAcore 3000 (BIAcore AB). Fragmento F(ab')2 de cabra anti-IgG humana Affinipure, o fragmento Fc específico (Jackson ImmunoResearch) foi imobilizado num Chip Sensor CM5 através de química de ligação de aminas a um nível da captura de *4000 unidades de resposta (RU). O tampão HBS-EP (HEPES 10 181 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ mM ρΗ 7,4, NaCl 0,15 Μ, EDTA 3 mM, Tensioactivo Ρ20 a 0,005%, BIAcore AB) contendo CM-Dextrano a 1 mg/ml foi utilizado como tampão de corrida com um caudal de 10 ml/min. Uma injecção de 10 μΐ do anticorpo anti-esclerostina a «5 pg/ml, foi utilizada para captura do Fc anti-IgG humana imobilizado. Os niveis de captura do anticorpo foram tipicamente de 100-200 RU. A esclerostina foi titulada sobre o anticorpo anti- esclerostina capturado a várias concentrações a um caudal de 30 μΐ/min. A superfície foi regenerada através de duas injecções de 10 μΐ de HC1 40 mM, seguido de uma injecção de 5 μΐ de NaOH 5 mM a um caudal de 10 μΐ/min.
As curvas de ligação com subtracção do fundo foram analisadas utilizando o software BIAevaluation (versão 3.2), seguindo procedimentos padrão. Os parâmetros cinéticos foram determinados a partir do algoritmo de ajuste.
Os dados cinéticos e as constantes de dissociação calculadas são dados na Tabela 2. TABELA 2: Afinidade de anticorpos anti-esclerostina para esclerostina
Anticorpo ka (1/Ms) kd (1/s) Kd (pM) Ab-5 1,78E+06 1,74E-04 97,8 Ab-14 3,3 0E + 0 6 4,87E-06 1,48 Ab-2 0 2,62E+06 4,16E-05 15, 8 EXEMPLO 12
TESTES IN VIVO DE ANTICORPOS MONOCLONAIS ANTI-ESCLEROSTINA EM
MACACOS CINOMOLGOS
Trinta e três fêmeas de macacos cinomolgos (Macaca fascicularis) com aproximadamente 3-5 anos de idade foram utilizadas neste estudo de 2 meses. O estudo continha 11 grupos:
Grupo 1: veículo (N=4)
Grupo 2: Ab-23 (N=2, dose de 3 mg/kg)
Grupo 3: Ab-23 (N=3, dose de 10 mg/kg)
Grupo 4: Ab-23 (N=3, dose de 30 mg/kg) 182 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Grupo 5: Ab-5 (Ν=3, dose de 3 mg/kg)
Grupo 6: Ab-5 (N=3, dose de 10 mg/kg)
Grupo 7: Ab-5 (N=3, dose de 30 mg/kg)
Grupo 8: Ab-14 (N=3, dose de 3 mg/kg)
Grupo 9: Ab-14 (N=3, dose de 10 mg/kg)
Grupo 10: Ab-14 (N=3, dose de 30 mg/kg)
Grupo 11: Hormona Paratiróide (1-34) (PTH (1-34)) (N=3, dose de 10 pg/kg)
Todas as dosagens foram subcutâneas. A PTH (1-34) foi administrada todos os dias, os anticorpos monoclonais (Mab) foram administrados duas vezes (a primeira dose no inicio do estudo e a segunda dose no ponto temporal de um mês). Para a avaliação dos parâmetros ósseos (p. ex., densidade mineral óssea) pQCT (tomografia computorizada quantitativa periférica) e varrimentos DXA (absorciometria de raios X de dupla energia) foram realizados antes do inicio do estudo (para obter valores limiares) e após um mês (antes da segunda dose de Mab) e finalmente no final do estudo (ponto temporal dos 2 meses) no ponto a que os macacos foram necropsiados para posterior análise (p. ex., análise histomorfométrica). Os animais foram marcados com fluorocromo (dias 14, 24, 47 e 57) para histomorfometria dinâmica. Recolheu-se soro em vários momentos durante o estudo (dia 1 pré-dose (dia da primeira dose de Mab), dia 1 12 horas após a dose, dia 2, dia 3, dia 5, dia 7, dia 14, dia 21, dia 28, dia 29 12 horas após a dose (o dia 29 foi o dia da segunda e última dose de Mab), dia 30, dia 31, dia 33, dia 35, dia 42, dia 49 e dia 56).
Três biomarcadores séricos relacionados com osso foram medidos utilizando estojos comercialmente disponíveis:
Osteocalcina (OC) (DSL Osteocalcin Radioimmunoassay Kit; Diagnostic Systems Laboratories, Inc., Webster, TX, USA) Propéptido N-terminal de Procolagénio de Tipo I (P1NP) (P1NP Radioimmunoassay Kit; Orion Diagnostica, Espoo, Finlândia) Fragmentos C-telopeptídicos de cadeias al de colagénio de tipo I (sCTXI) (Serum CrossLaps® ELISA; Nordic Bioscience Diagnostics A/S, Herlev, Dinamarca).
Varrimentos de pQCT e DXA produziram dados sobre vários parâmetros ósseos (incluindo densidade mineral óssea (DMO) e 183 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ teor mineral ósseo) através de vários locais do esqueleto (incluindo metáfise e diáfise da tibia, metáfise e diáfise do rádio, colo do fémur, vértebras lombares). A análise destes dados ósseos (percentagem de variação do limiar para cada animal) e os dados do biomarcador sérico anabólico (OC, P1NP) (variação percentual do limiar para cada animal) revelou aumentos estatisticamente significativos, versus o grupo do veiculo, em alguns parâmetros, em algum dos momentos e doses para cada Mab. Estes dados dos parâmetros ósseos, dados de biomarcadores séricos, bem como os dados histomorfométricos, indicaram que cada um dos três Mab (Ab-23, Ab-5 e Ab-14) foi capaz de neutralizar esclerostina em macacos cinomolgos. Esta actividade foi muito robusta para Ab-23 e Ab-5, particularmente à dose mais elevada (30 mg/kg), com um claro aumento na formação de osso (efeito anabólico) bem como ganhos líquidos em osso (p. ex. DMO) . Aumentos estatisticamente significativos nos parâmetros ósseos e parâmetros histomorfométricos anabólicos foram também verificados para o grupo de controlo positivo (PTH (1-34)).
Os marcadores de formação de osso (P1NP, osteocalcina) estavam aumentados (p<0,05 vs veículo (VEH)) a vários momentos e doses, mas particularmente nos grupos de 30 mg/kg para Ab-23 e Ab-5. A análise histomorfométrica revelou aumentos dramáticos (p<0,05 vs VEH) nas taxas de formação de osso em osso esponjoso nas vértebras lombares e tíbia proximal (aumento de até 5 vezes), bem como na superfície endocortical da parte média femural (aumento de até 10 vezes) nas doses mais elevadas de Ab-23 e Ab-5. A espessura trabecular aumentou com a dose mais elevada de Ab-23 e Ab-5 nas vértebras lombares (>60%, p<0,05 vs VEH). No final do estudo (2 meses), a DMO areal, como percentagem de alteração a partir do limiar, foi aumentada (p<0,05 vs VEH) no colo do fémur, o raio ultra-distal (Ab-23, 30 mg/kg), e as vértebras lombares (Ab-5, 30 mg/kg) . Os aumentos na DMO areal nas vértebras lombares foram acompanhados por aumentos na força vertebral (aumento de 97% na carga máxima vertebral para Ab-23, 30 mg/kg; p<0,05 vs VEH); valores basais para a DMO lombar areal antes da administração do Mab foram estatisticamente semelhantes em todos os grupos. Em resumo, a administração a curto prazo de Mab neutralizadores de esclerostina em macacos cinomolgos resultou, em parte, em aumentos na formação de osso, DMO e resistência vertebral óssea. 184 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
LISTAGEM DAS SEQUÊNCIAS <110> UCB S.A. Amgen, Inc. <120> Agentes de Ligação <130> 60117-225 <150> <151> 2006-04-25 <150> <151> 2006-04-17 <150> 60/782,244 <151> 2006-03-13 <150> 60/776,847 <151> 2006-02-24 <150> 60/667,583 <151> 2005-05-03 <160> 396
Versão 4.0
Asp Ala Thr Glu Ile Ile Pro Glu 10 15 Pro Glu Leu Glu Asn Asn Lys Thr 25 30 Arg pro Pro HÍS His Pro Phe Glu Cys Arg Glu Leu fifl HÍS Phe Thr Arg Ser Ala Lys ou Pro val Thr Glu Leu 75 80 Ala Arg Leu Leu Pro Asn Ala Ile 90 95 Ser Gly Pro Asp Phe Arg Cys lie 105 110 Val Gin Leu Leu Cys pro Gly Gly 125 Arg Leu Val Ala Ser cys Lys cys 140 Gin Ser Gl u Leu Lys Asp Phe Gly 155 160 Gly Arg 1 7Π Lys Pro Arg Pro Arg 175 Ala Glu l/U Leu Glu Asn Ala Tyr 185 190 <170> FastSEQ para Windows
<210> 1 <211> 190 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1
Gin Gly Trp Gin Ala Phe Lys Asn 1 5 Glu Leu Gly Glu Tyr Pro pro Pro 20 Gly 40 ser Met Asn Arg 35 Thr Lys Asp Ala Glu Asn Gly Val ser Glu Tyr 50 55 T^r Vai Thr Asp Gly Pro 70 cys Arg val cys Ser Gly Gin 85 Trp Cys Gly Pro Gly Arg Gly Lys 100 Tyr Trp Arg pro Pro Asp Arg 115 Glu Ala Pro 130 Arg Ala Gin Arg 120 val Arg Ala Arg & Lys Arg Leu Thr Arg Phe HlS Asn 145 150 Thr Glu Ala Ala Arg Pro Gin Lys 165 Arg Ser Ala Lys Ala Asn Gin Ala 180 185 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
<210> 2 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <4Ο0> 2
Asp Vai ser Glu Tyr ser cys Arg Glu Leu His Phe Thr Arg 1 5 10
<210> 3 <211> 18 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 ser Ala Lys Pro Vai Thr Glu Leu vai cys Ser Gly Gin Cys Gly Pro 15 10 15
Ala Arg
<210> 4 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4
Trp Trp Arg pro ser Gly Pro Asp Phe Arg cys Ile Pro Asp Arg Tyr 15 10 15
<210> 5 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5
Leu vai Ala ser Cys Lys cys Lys Arg Leu Thr Arg 1 5 10
<210> 6 <211> 26 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6
Cys Gly Pro Ala Arg Leu Leu Pro Asn Ala ile Gly Arg Gly Lys Trp 15 10 15
Trp Arg Pro ser Gly Pro Asp Phe Arg cys 20 25
<210> 7 <211> 214 <212> PRT <213> Mus musculus 186 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <400> 7 ASp vai Gin Met ile Gin ser pro Ser ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 ASp ile Vai Thr Met Thr cys Gin Ala ser Gin Gly Thr Ser ile Asn 20 25 30 Ile Leu Asn Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Gly Tyr Gly Ser ser Asn Leu Glu Asp Gly val pro Ser Arg Phe ser 50 55 60 ser Arg Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile ser Ser Leu Gl u Asp 65 70 Phe Gin 75 80 Glu ASp Leu Ala Thr Tyr Cys Leu His ser Tyr Leu pro Tyr 85 90 95 Ala Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu ile Lys Arg Ala Asp Ala 100 105 110 Pro Thr val Ser ile Phe pro Pro ser Ser Glu Gin Leu Thr Ser Gly 115 120 125 Gly Ala Ser Val val cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile 130 135 140 Asn val Lys Trp Lys lie ASp Gly Ser GlU Arg Gin Asn Gly val Leu 145 150 155 160 Asn ser Trp Thr Asp Gin ASp Ser Lys ASp ser Thr Tyr ser Met Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg HiS Asn ser Tyr 180 185 190 Thr cys Glu Ala Thr His Lys Thr ser Thr ser Pro ile val Lys Ser 195 200 205 Pbe Asn Arg Asn Glu cys 210
<210> 8 <211> 645 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 8 gatgtccaga tgattcagtc atgacttgcc aggcaagtca gggaaggctc ctaagctcct aggttcagtg gcagtagata gaagatctgg caacttattt gggaccaagc tggaaataaa tccagtgagc agttaacatc cccaaagaca tcaacgtcaa aacagttgga ctgatcagga ttgaccaagg acgagtatga tcaacttcac ccattgtcaa tccatcctcc gggcactagc gatctatggt tgggacagat ctgtctacaa acgggctgat tggaggtgcc gtggaagatt cagcaaagac acgacataac gagcttcaac ctgtctgcat attaatttaa tcaagcaact ttcactctca catagttatc gctgcaccaa tcagtcgtgt gatggcagtg agcacctaca agctatacct aggaatgagt ctttgggaga actggtttca tggaagatgg ccatcagcag tcccgtacac ctgtatccat gcttcttgaa aacgacaaaa gcatgagcag gtgaggccac gttag catagtcacc 60 gcaaaaacca 120 ggtcccatca 180 cctggaggat 240 gttcggaggg 300 cttcccacca 360 caacttctac 420 tggcgtcctg 480 caccctcacg 540 tcacaagaca 600 645
<210> 9 <211> 236 <212> PRT <213> Mus musculus 187 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <400> 9
Met Asn Thr Arg Ala pro Ala Glu Phe Leu Gly Phe Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15 Phe Leu cly Ala Arg cys Asp Val Gin Met Ile Gin Ser Pro Ser Ser 20 25 30 Leu Ser Ala Ser Leu Gly ASp Ile Val Thr Met Thr cys Gin Ala ser 35 40 45 Gin Gly Thr Ser Ile Asn Leu Asn Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys 50 55 60 Val Ala pro Lys Leu Leu lie Tyr Gly Ser Ser Asn Leu Glu Asp Gly 65 70 75 80 Pro Ser Arg Phe Ser Gly ser Arg Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 85 90 95 Gin lie ser Ser Leu Glu Asp Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Phe cys Leu 100 105 110 His Ser Tyr Leu pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie 115 120 125 Lys Arg Al.a Asp Ala Ala Pro Thr val ser He phe Pro Pro Ser ser 130 135 140 Glu Gin Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn 145 150 155 160 Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys lie Asp Gly ser Glu 165 170 175 ΔΓΠ r:ln Asn Glv val Leu Asn Ser Trp 185 Leu Thr Asp Gin Asp Ser 190 Asp Lys Asp Thr Thr Leu Thr Lys Glu Tyr 200 205 Cys Glu Ala Thr HlS Lys Thr Ser Thr 210 215 220 Ser Pro lie val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 225 230 235
<210 > 10 <211> 711 <212> ADN <213> Mus musculus <4 0 0> 10 atgaacacga agatgtgatg gtcaccatga aaaccaggga ccatcaaggt gaggatgaag ggagggggga ccaccatcca ttctacccca gtcctgaaca ctcacgttga aagacatcaa gggcccctgc tccagatgat cttgccaggc aggctcctaa tcagtggcag atctggcaac ccaagctgga gtgagcagtt aagacatcaa gttggactga ccaaggacga cttcacccat tgagttcctt tcagtctcca aagtcagggc gctcctgatc tagatatggg ttatttctgt aataaaacgg aacatctgga tgtcaagtgg tcaggacagc gtatgaacga tgtcaagagc gggttcctgt tcctccctgt actagcatta tatggttcaa acagatttca ctacaacata gctgatgctg ggtgcctcag aagattgatg aaagacagca cataacagct ttcaacagga tgctctggtt ctgcatcttt atttaaactg gcaacttgga ctctcaccat gttatctccc caccaactgt tcgtgtgctt gcagtgaacg cctacagcat atacctgtga atgagtgtta tttaggtgcc 60 gggagacata 120 gtttcagcaa 180 agatggggtc 240 cagcagcctg 300 gtacacgttc 360 atccatcttc 420 cttgaacaac 480 acaaaatggc 540 gagcagcacc 600 ggccactcac 660 g 711
<210> 11 <211> 443 <212> PRT <213> Mus musculus 188 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <400> 11 Glu 10 Val Glu 1 vai Gin Leu Gin 5 Gin ser Gly Pro Leu Thr Pro Gly 15 Ala j. ser vai Lys ile 20 ser cys Lys Ala Ser 25 Gly Tyr Thr Phe Thr 30 ASp His ryr Met ser 35 Trp val Lys Gin ser 40 His Gly Lys Ser Leu 45 Glu Trp Ile Gly Asp 50 Ile Asn Pro Tyr Ser 55 Gly Glu Thr Thr Tyr 60 Asn Gin Lys Phe Lys 65 Gly Thr Ala Thr Leu 70 Thr val Asp Lys Ser 75 Ser Ser Ile Ala Tyr 80 Met Glu ile Arg Gly 85 Leu Thr ser GlU Asp 90 Ser Ala val Tyr Tyr 95 Cys Ala Arg Asp Asp 100 Tyr Asp Ala ser Pro 105 Phe Ala Tyr Trp Gly 110 Gin Gly Thr Leu Vai Thr val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser val Tyr 115 120 Gin Thr 125 pro Leu Ala Pro Gly ser Ala Ala Asn Ser Met Val Thr Leu 130 135 Glu 140 Gly Cys Leu val Lys Gly Tyr Phe pro Pro Val Thr val Thr Trp 145 150 Val His 155 160 Asn ser Gly Ser Leu Ser ser Gly Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 Val 175 Gin Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Thr val Pro ser Ser 180 ’ 185 Val 190 Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Ala His Pro Ála Ser 195 200 val 205 ser Thr Lys val ASp Lys Lys Ile Pro Arg Asp cys Gly cys Lys 210 215 220 Pro Cys ile Cys Thr val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro 225 230 Ile 235 240 Pro Lys Pro Lys Asp val Leu Thr Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr 245 250 255 cys vai vai val ASp Ile ser Lys ASp Asp Pro Glu val Gin Phe Ser ?go val 265 270 His Thr Ala Gin Thr Gin Pro Arg 280 285 Phe Arg Ser Val ser Glu Leu ΡΓΟ Ile 300 Met His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg val Asn 305 Ala 310 ile 315 320 Ser Pro Phe Pro Ala Pro Glu Lys Thr ile Ser Lys Thr Lys Gly 325 330 335 Arg pro Lys Ala Pro Gin val Tyr Thr Ile Pro Pro pro Lys Glu Gin Ala 340 345 350 Met Lys Asp Lys val ser Leu Thr Cys Met ile Thr Asp Phe Phe 355 360 365 pro 370 Glu ASP ile Thr Val 375 Glu Trp Gin Trp Asn 380 Gly Gin Pro Ala Glu 385 Asn Tyr Lys Asn Thr 390 Gin pro ile Met ASp 395 Thr Asp Gly ser Tyr 400 Phe lie Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gin Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe 405 410 415 Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu 420 425 430 Lys 435 Ser Leu Ser His ser 440 Pro Gly Lys
<210> 12 <211> 1332 <212> ADN <213> Mus musculus 189 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <400> 12 gaggtccagc tgcaacagtc tggacctgaa ctggtgacgc ctggggcttc agtgaagata 60 tcttgtaagg cttctggata cacattcact gaccactaca tgagctgggt gaagcagagt 120 catggaaaaa gccttgagtg gattggagat attaatccct attctggtga aactacctac 180 aaccagaagt tcaagggcac ggccacattg actgtagaca agtcttccag tatagcctac 240 atggagatcc gcggcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagagatgat 300 tacgacgcct ctccgtttgc ttactggggc caagggactc tggtcactgt ctctgcagcc 360 aaaacgacac ccccatctgt ctatccactg gcccctggat ctgctgccca aactaactcc 420 atggtgaccc tgggatgcct ggtcaagggc tatttccctg agccagtgac agtgacctgg 480 aactctggat ccctgtccag cggtgtgcac accttcccag ctgtcctgca gtctgacctc 540 tacactctga gcagctcagt gactgtcccc tccagcacct ggcccagcga gaccgtcacc 600 tgcaacgttg cccacccggc cagcagcacc aaggtggaca agaaaattgt gcccagggat 660 tgtggttgta agccttgcat atgtacagtc ccagaagtat catctgtctt catcttcccc 720 ccaaagccca aggatgtgct caccattact ctgactccta aggtcacgtg tgttgtggta 780 gacatcagca aggatgatcc cgaggtccag ttcagctggt ttgtagatga tgtggaggtg 840 cacacagctc agacgcaacc ccgggaggag cagttcaaca gcactttccg ctcagtcagt 900 gaacttccca tcatgcacca ggactggctc aatggcaagg agttcaaatg cagggtcaac 960 agtccagctt tccctgcccc catcgagaaa accatctcca aaaccaaagg cagaccgaag 1020 gctccacagg tgtacaccat tccacctccc aaggagcaga tggccaagga taaagtcagt 1080 ctgacctgca tgataacaga cttcttccct gaagacatta ctgtggagtg gcagtggaat 1140 gggcagccag cggagaacta caagaacact cagcccatca tggacacaga tggctcttac 1200 ttcatctaca gcaagctcaa tgtgcagaag agcaactggg aggcaggaaa tactttcacc 1260 tgctctgtgt tacatgaggg cctgcacaac caccatactg agaagagcct ctcccactct 1320 cctggtaaat ga 1332
<210> 13 <211> 462 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 13
Met Arg cys Arg Trp ile Phe Leu Phe Leu Leu ser Gly Thr Ala Gly 1 5 10 15 Vai Leu ser Glu Vai Gin Leu Gin Gin Ser Gly pro Glu Leu val Thr 20 25 30 Pro Gly Ala ser Vai Lys ile Ser Cys Lys Ala ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr ASp HÍS Tyr Met Ser Trp Vai Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu 50 55 60 Glu Trp Ile Gly Asp ile Asn Pro Tyr Ser Gly Glu Thr Thr Tyr Asn 65 70 Thr 75 80 Gin Lys Phe Lys Gly Thr Ala Leu Thr Vai Asp Lys ser Ser Ser 85 90 95 190 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Ile Ala Tyr Met 100 Cys Ala 115 Gly Thr Glu lie Arg Gly Leu 105 Asp Thr Ser Glu Asp ser 110 Ala Ala Val Tyr Tyr Arg Asp Asp Tyr 120 Val Ala ser Pro Phe 125 Thr Tyr Trp Gly Gin Leu val Thr Ser Ala Ala Lys Thr Pro Pro 130 Ala 135 140 ser vai Tyr Pro Leu Pro Gly ser Ala Ala Gin Thr Asn Ser Met 145 150 Val 155 160 vai Thr Leu Gly Cys Leu Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro val Thr 165 170 175 Vai Thr Trp Asn ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro 180 185 190 Ala vai Leu Gin Ser Asp Leu Tyr Thr Leu ser Ser Ser Val Thr val 195 200 205 Pro Ser ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr cys Asn Val Ala His 210 215 220 Pro Ala ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys ile Val Pro Arg ASp cys 225 230 235 240 Gly cys Lys Pro cys ile Cys Thr val Pro Glu Val Ser ser Val Phe 245 250 255 Ile Phe pro pro Lys pro Lys ASp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro 260 265 270 Lys Vai Thr cys val val Val ASP Ile ser Lys Asp Asp Pro Glu val 275 280 285 Glr Phe Ser Trp Phe val Asp Asp val Glu Val HIS Thr Ala Gin Thr 290 295 300 Gin pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn ser Thr Phe Arg Ser val Ser Glu 305 310 315 320 Leu pro ile Met His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys 325 Phe 330 335 Arg Vai Asn Ser Pro Ala Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 340 345 350 Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gin val Tyr Thr Ile Pro Pro 355 360 365 Pro Lys 370 ASp Glu Gin Met Ala Lys 375 Asp Asp Lys val Ser Leu 380 Trp Thr cys Met ile Thr Phe Phe Pro Glu Ile Thr val Glu Gin Trp Asn Gly 385 390 395 400 Gin Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin Pro Ile Met Asp Thr Asp 405 410 415 Gly Ser Tyr Phe Ile Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gin Lys Ser Asn Trp 420 425 430 Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr cys Ser val Leu His Glu Gly Leu His 435 440 445 Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu ser His Ser Pro Gly Lys 450 455 460
<210 > 14 <211> 1389 <212> ADN <213> Mus musculus <4 0 0> 14 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 atgagatgca ggtggatctt tctctttctc ctgtcaggaa ctgcaggtgt cctctctgag gtccagctgc aacagtctgg acctgaactg gtgacgcctg gggcttcagt gaagatatct tgtaaggctt ctggatacac attcactgac cactacatga gctgggtgaa gcagagtcat ggaaaaagcc ttgagtggat tggagatatt aatccctatt ctggtgaaac tacctacaac cagaagttca agggcacggc cacattgact gtagacaagt cttccagtat agcctacatg gagatccgcg gcctgacatc tgaggactct gcagtctatt actgtgcaag agatgattac gacgcctctc cgtttgctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc tgcagccaaa acgacacccc catctgtcta tccactggcc cctggatctg ctgcccaaac taactccatg gtgaccctgg gatgcctggt caagggctat ttccctgagc cagtgacagt gacctggaac tctggatccc tgtccagcgg tgtgcacacc ttcccagctg tcctgcagtc tgacctctac actctgagca gctcagtgac tgtcccctcc agcacctggc ccagcgagac cgtcacctgc aacgttgccc acccggccag cagcaccaag gtggacaaga aaattgtgcc cagggattgt ggttgtaagc cttgcatatg tacagtccca gaagtatcat ctgtcttcat cttcccccca aagcccaagg atgtgctcac cattactctg actcctaagg tcacgtgtgt tgtggtagac 191 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ atcagcaagg atgatcccga. ggtccagttc agctggtttg tagatgatgt ggaggtgcac 900 acagctcaga cgcaaccccg ggaggagcag ttcaacagca ctttccgctc agtcagtgaa 960 cttcccatca tgcaccagga ctggctcaat ggcaaggagt tcaaatgcag ggtcaacagt 1020 ccagctttcc ctgcccccat cgagaaaacc atctccaaaa ccaaaggcag accgaaggct 1080 ccacaggtgt acaccattcc acctcccaag gagcagatgg ccaaggataa agtcagtctg 1140 acctgcatga taacagactt cttccctgaa gacattactg tggagtggca gtggaatggg 1200- cagccagcgg agaactacaa gaacactcag cccatcatgg acacagatgg ctcttacttc 1260 atctacagca agctcaatgt gcagaagagc aactgggagg caggaaatac tttcacctgc 1320 tctgtgttac atgagggcct gcacaaccac catactgaga agagcctctc ccactctcct 1380 ggtaaatga 1389
<210> 15 <211> 218 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 15 ASp lie Val Leu Thr Gin ser Pro Ala Ser Leu Thr val ser Leu Gly 1 5 10 15 Leu Arg Ala Thr Ile Ser cys Lys Ala Ser Gin Ser val Asp Tyr ASp 20 25 30 Gly Asp ser a 5 Tyr Met Asn Trp Tyr 40 Gin Gin Lys pro Gly 45 Gin pro Pro Lys Leu j a Leu lie Tyr Ala Ala ser Asn Leu Glu Ser *1 J Gly ile pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Asn Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His 65 70 75 80 Pro vai Glu Glu Glu Asp Ala val Thr Tyr Tyr cys Gin Gin Ser Asn 85 90 95 Glu Asp Pro Trp Thr phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu ile Lys Arg 100 105 110 Gin Ala Asp Ala Ala Pro Thr val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu 115 120 125 Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Glu Gin Pro Lys Asp Ile Asn val Lys Trp Lys ile Asp Gly Ser Arg 145 150 155 160 Asn Gly Val Leu Asn ser Trp Thr ASp Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr ser Met Ser ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg 180 185 190 His Asn Ser Tyr Thr cys Glu Ala Thr ΗΊ5 Lys Thr Ser Thr Ser Pro 195 200 205 He vai Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu cys 210 215
<210> 16 <211> 657 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 16 gacattgtgc atctcctgca cagcagaaac gggatcccag cctgtggagg acgttcggtg atcttcccac aacaacttct aatggcgtcc agcaccctca actcacaaga tgacccaatc aggccagcca caggacagcc ccaggtttag aggaggatgc gaggcaccaa catccagtga accccaaaga tgaacagttg cgttgaccaa catcaacttc tccagcttct ttgactgtgt ctctaggcct gagggccacc 60 aagtgttgat tatgatggtg atagttatat gaactggtac 120 acccaaactc ctcatctatg ctgcatccaa tctagaatct 180 tggcaatggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240 tgtaacctat tactgtcaac aaagtaatga ggatccgtgg 300 gctggaaatc aaacgggctg atgctgcacc aactgtatcc 360 gcagttaaca tctggaggtg cctcagtcgt gtgcttcttg 420 catcaatgtc aagtggaaga ttgatggcag tgaacgacaa 480 gactgatcag gacagcaaag acagcaccta cagcatgagc 540 ggacgagtat gaacgacata acagctatac ctgtgaggcc 600 acccattgtc aagagcttca acaggaatga gtgttag 657
<210> 17 <211> 238 <212> PRT <213> Mus musculus 192 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <400> 17
Met Glu Thr Asp Thr Ile Leu Leu Trp val Leu Leu Leu Trp val Pro 1 5 10 Ala 15 Gly Ser Thr Gly Asp Ile vai Leu Thr Gin ser pro Ser Leu Thr 20 25 Ala 30 Vai ser Leu Gly Leu Arg Ala Thr ile ser cys Lys Ser Gin ser 35 40 45 vai Asp Tyr Asp Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 50 55 Ala Ala 60 Gly Gin Pro Pro Lys Leu Leu ile Tyr Ser Asn Leu Glu ser 65 70 75 80 Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Asn Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 85 90 Thr 95 Leu Asn ile His Pro vai Glu Glu Glu Asp Ala Val Tyr Tyr Cys 100 105 110 Gin Gin ser Asn Glu Asp Pro Trp Thr phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu 115 120 125 Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser ile Phe Pro Pro 130 135 140 val Ser Ser Glu Gin Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Cys Phe Leu 145 150 Val 170 155 ile 160 Asn Asn Phe Tyr Pro 1 r·; Lys Asp Ile Asn Lys Trp Lys Ϊ7Ϊ Gly Ser Glu Arg Gin luj Asn Gly Vai Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gin Asp Ser 180 185 Thr 190 Lys Asp ser Thr Tyr Ser Met ser Ser Thr Leu Leu Thr Lys Asp 195 200 205 Thr Glu Tyr Glu Arg HÍS Asn ser Tyr Thr cys Gl u Ala Thr His Lys 210 215 220 Glu Ser Thr ser Pro ile Vai Lys Ser Phe Asn Arg Α5Π Cys 225 230 235
<210> 18 <211> 717 <212> ADN <213> Mus musculus
Glu Vai Gin Leu Gin Gin 5er Gly Pro Glu Leu 1 5 10 Ser vai Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 20 25 Tyr Met Asn Trp vai Lys Glr Ser His Gly Lys 35 40 Gly Asp ile Asn Pro Phe Asn Gly Gly Thr Thr 50 55 gggttccagg ctccactggt 60 ctctaggcct gagggccacc 120 atagttatat gaactggtac 180 ctgcatccaa tctagaatct 240 acttcaccct caacatccat 300 aaagtaatga ggatccgtgg 360 atgctgcacc aactgtatcc 420 cctcagtcgt gtgcttcttg 480 ttgatggcag tgaacgacaa 540 acagcaccta cagcatgagc 600 acagctatac ctgtgaggcc 660 acaggaatga gtgttag 717 <4 Ο 0> 18 atggagacag acacaatcet gacattgtgc tgacccaatc atctcctgca aggccagcca cagcagaaac caggacagcc gggatcccag ccaggtttag cctgtggagg aggaggatgc acgttcggtg gaggcaccaa atcttcccac catccagtga aacaacttct accccaaaga aatggcgtcc tgaacagttg agcaccctca cgttgaccaa actcacaaga catcaacttc
<210> 19 <211> 449 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 19 gctatgggtg ctgctgctct tccagcttct ttgactgtgt aagtgttgat tatgatggtg acccaaactc ctcatctatg tggcaatggg tctgggacag tgtaacctat tactgtcaac gctggaaatc aaacgggctg gcagttaaca tctggaggtg catcaatgtc aagtggaaga gactgatcag gacagcaaag ggacgagtat gaacgacata acccattgtc aagagcttca vai Lys Pro Gly Thr
Thr Phe Thr Asp cys 30
Ser Leu Glu Trp ile 45
Tyr Asn Gin Lys Phe 60 193 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 val 80 Met Gin Leu Asn Ser Leu Thr Ser ASp ASp Ser Ala Tyr cys 85 90 95 Ala Arg ser His Tyr Tyr Phe Asp Gly Arg Val pro Trp Asp Ala Met 100 105 110 Thr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys 115 120 125 Ala Gin Thr Thr pro Pro ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly ser Ala 130 135 140 phe Glu Α5Π Ser Met val Thr Leu Gly cys Leu Val Lys Gly Tyr pro 145 150 155 Gly Val 160 ΡΓΟ Vai Thr Val Thr Trp Asn ser Gly Ser Leu Ser Ser His 165 170 175 Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser ser 180 185 190 Vai Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr cys Asn 195 200 205 Vai Ala HlS pro Ala Ser ser Thr Lys val Asp Lys Lys Ile val Pro 210 215 220 Glu Arg Asp cys Gly Cys Lys Pro cys ile cys Thr val Pro val Ser 225 230 235 Ile 240 Ser val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys ASp Val Leu Thr Thr 245 250 255 Leu Thr pro Lys val Thr cys Val Val Val ASp Ile Ser Lys ASp Asp 260 265 270 Pro Glu val Gin Phe ser Trp Phe Val Asp ASp Val Glu Val HÍS Thr 275 280 285 Ala Gin Thr Gin Pro Arg Glu Glu Gin Phe ASO ser Thr Phe Arg Ser 290 295 300 vai ser Gl U Leu Pro ile Met His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Phe Lys cys Arg val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gin Val Tyr Thr 340 345 350 Thr He Pro pro Pro Lys Glu Gin Met Ala Lys ASp Lys val ser Leu 355 360 365 cys Met lie Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gin 370 375 380 Trp Asn Gly Gl n Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin Pro ile Met 385 390 395 400 Asp Thr Asp Gly ser Tyr phe xle Tyr Ser Lys Leu Asn val Gin Lys 405 410 415 ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr cys Ser Val Leu His Glu 420 425 430 Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys ser Leu Ser Hi s ser Pro Gly 435 440 445 Lys
<210> 20 <211> 1350 <212> ADN <213> Mus musculus <4Ο0> 20 gaggtccagc tgcaacaatc tggacctgag ctggtgaagc ctgggacttc agtgaagatg 60 tcctgtaagg cttctggata cacattcact gactgctaca tgaactgggt gaagcagagc 120 catgggaaga gccttgaatg gattggagat attaatcctt tcaacggtgg tactacctac 180 aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca aatcctccag cacagcctac 240 atgcagctca acagcctgac atctgacgac tctgcagtct attactgtgc aagatcccat 300 tattacttcg atggtagagt cccttgggat gctatggact actggggtca aggaacctca 360 gtcaccgtct cctcagccaa aacgacaccc ccatctgtct atccactggc ccctggatct 420 gctgcccaaa ctaactccat ggtgaccctg ggatgcctgg tcaagggcta tttccctgag 480 ccagtgacag tgacctggaa ctctggatcc ctgtccagcg gtgtgcacac cttcccagct 540 gtcctgcagt ctgacctcta cactctgagc agctcagtga ctgtcccctc cagcacctgg 600 194 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ cccagcgaga ccgtcacctg caacgttgcc cacccggcca gcagcaccaa ggtggacaag 660 aaaattgtgc ccagggattg tggttgtaag ccttgcatat gtacagtccc agaagtatca 720 tctgtcttca tcttcccccc aaagcccaag gatgtgctca ccattactct gactcctaag 780 gtcacgtgtg ttgtggtaga catcagcaag gatgatcccg aggtccagtt cagctggttt 840 gtagatgatg tggaggtgca cacagctcag acgcaacccc gggaggagca gttcaacagc 900 actttccgct cagtcagtga acttcccatc atgcaccagg actggctcaa tggcaaggag 960 ttcaaatgca gggtcaacag tgcagctttc cctgccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020 accaaaggca gaccgaaggc tccacaggtg tacaccattc cacctcccaa ggagcagatg 1080 gccaaggata aagtcagtct gacctgcatg ataacagact tcttccctga agacattact 1140 gtggagtggc agtggaatgg gcagccagcg gagaactaca agaacactca gcccatcatg 1200 gacacagatg gctcttactt catctacagc aagctcaatg tgcagaagag caactgggag 1260 gcaggaaata ctttcacctg ctctgtgtta catgagggcc tgcacaacca ccatactgag 1B20 aagagcctct cccactctcc tggtaaatga 1350
<210> 21 <211> 468 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 21
Met Gly Trp Asn Trp ile Phe Leu Phe Leu Leu ser Gly Thr Ala Gly 1 5 10 15 Val Tyr Ser Glu val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu val Lys 20 25 30 Pro Gly Thr ac Ser Val Lys Met Ser ΔΠ Cys Lys Ala Ser Gly 45 Tyr Thr Phe rhr Asp 3 J Cys Tyr Met Asn Trp val Lys Gin Ser His *t3 Gly Lys ser Leu 50 55 60 Glu Trp Ile Gly Asp Ile Asn Pro Phe Asn Gly Gly Thr Thr Tyr Asn 65 70 75 80 Gin Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr val Asp Lys Ser ser Ser 85 90 95 val Thr Ala Tyr Met Gin Leu Asn Ser Leu Thr ser Asp Asp Ser Ala 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser His Tyr Tyr Phe Asp Gly Arg val Pro Trp 115 120 125 Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Ser val Thr val ser Ser 130 135 140 Gly Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Ser Ala 145 150 155 Gly 160 Ala Gin Thr Asn ser Met val Thr Leu Gly cys Leu val Lys Tyr 165 170 175 Phe Pro Glu Pro 180 val Thr val Thr Trp 185 Asn ser Gly Ser Leu 190 Ser Ser Gly val HÍS Thr Phe Pro Ala val Leu Gin Ser Asp Leu Tyr Thr Leu 195 200 205 Glu Thr val ser Ser ser val Thr val Pro ser Ser Thr Trp pro ser 210 215 220 val Thr cys Asn val Ala His Pro Ala Ser ser Thr Lys Asp Lys Lys 225 230 235 240 Ile val Pro Arg Asp cys Gly Cys Lys pro cys Ile cys Thr Val Pro 245 250 255 Glu val Ser Ser Val Phe ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu 260 265 270 Ile Thr ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr cys val val val Asp Ser 275 280 285 val Glu Lys Asp Asp Pro Glu val Gin Phe Ser Trp Phe val ASP Asp 290 295 300 Phe val His Thr Ala Gin Thr Gin Pro Arg Glu Glu Gl n Asn ser Thr 305 310 315 320 Phe Arg Ser val Ser Glu Leu Pro Ile Met HIS Gin Asp Trp Leu Asn 325 330 Phe 335 Gly Lys Glu Phe Lys cys Arg val Asn Ser Ala Ala Pro Ala Pro 340 345 350 Gin ile Glu Lys Thr ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro 355 360 365 val val Tyr Thr lie Pro Pro Pro Lys Glu Gin Met Ala Lys Asp Lys 370 375 380 195 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Ser Leu Thr cys Met Ile Thr ASp phe Phe pro Glu Asp ile 385 Gin 390 395 Glu Trp Trp Asn 405 Gly Gin Pro Ala Glu 410 Asn Tyr Lys Asn Pro ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe ile Tyr ser Lys Vai Gin 420 425 430 Lys ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr cys 435 Gly 440 445 Leu His Glu Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu 450 Gly 455 460 Ser Pro Lys 465
Thr vai 400 Thr Gin 415 Leu Asn ser vai ser His
<210> 22 <211> 1407 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 22 atgggatgga actggatctt tctcttcctc ttgtcaggaa ctgcaggtgt ctactctgag 60 gtccagctgc aacaatctgg acctgagctg gtgaagcctg ggacttcagt gaagatgtcc 120 tgtaaggctt ctggatacac attcactgac tgctacatga actgggtgaa gcagagccat 180 gggaagagcc ttgaatggat tggagatatt aatcctttca acggtggtac tacctacaac 240 cagaagttca agggeaaggc cacattgact gtagacaaat cctccagcac agcctacatg 300 cagctcaaca gcctgacatc tgacgactct gcagtctatt actgtgcaag atcccattat 360 tacttcgatg gtagagtccc ttgggatgct atggactact ggggtcaagg aacctcagtc 420 accgtctcct cagccaaaac gacaccccca tctgtctatc cactggcccc tggatctgct 480 gcccaaacta actccatggt gaccctggga tgcctggtca agggctattt ccctgagcea 540 gtgacagtga cctggaactc tggatccctg tccagcggtg tgcacacctt cccagctgtc 600 ctgcagtctg acctctacac tctgagcagc tcagtgactg tcccctccag cacctggccc 660 agcgagaccg tcacctgcaa cgttgcccac ccggccagca gcaccaaggt ggacaagaaa 720 attgtgccca gggattgtgg ttgtaagcct tgcatatgta cagtcccaga agtatcatct 780 gtcttcatct tccccccaaa gcccaaggat gtgctcacca ttactctgac tcctaaggtc 840 acgtgtgttg tggtagacat cagcaaggat gatcccgagg tccagttcag ctggtttgta 900 gatgatgtgg aggtgcacac agctcagacg caaccccggg aggagcagtt caacagcact 960 ttccgctcag tcagtgaact tcccatcatg caccaggact ggctcaatgg caaggagttc 1020 aaatgcaggg tcaacagtgc agctttccct gcccccatcg agaaaaccat ctccaaaacc 1080 aaaggcagac cgaaggctcc acaggtgtac accattccac ctcccaagga gcagatggcc 1140 aaggataaag teagtctgac ctgcatgata acagacttct tccctgaaga cattactgtg 1200 gagtggcagt ggaatgggca gccagcggag aactacaaga acactcagcc catcatggac 1260 acagatggct cttacttcat ctacagcaag ctcaatgtgc agaagagcaa ctgggaggca 1320 ggaaatactt tcacctgctc tgtgttacat gagggcctgc acaaccaçca tactgagaag 1380 agcctctccc actctcctgg taaatga 1407
<210> 23 <211> 217 <212> PRT <213> Quimera Coelho-Ratinho <400> 23
Ala Gin vai Leu Thr Gin Thr Pro Ala Ser vai Ser Ala Ala vai Gly 1 5 10 15
Gly Thr vai Thr lie Asn Cys Gin Ser Ser Gin Ser Vai Tyr Asp Asn 20 25 30
Asn Trp Leu Ala Tro Phe Gin Gin Lys Pro Gly Gin Pro Pro Lys Leu 35 40 45
Leu rle Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Vai Pro ser Arg Phe 50 55 60
Ser Gly ser Gly Ser Gly Thr Gin Phe Thr Leu Thr ile ser Gly vai 65 70 75 80
Gin cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr cys Gin Gly Ala Tyr Asn Asp 85 90 95
Vai ile Tyr Ala phe Gly Gly Gly Thr Glu vai vai Vai Lys Arg Thr 100 105 110
Asp Ala Ala Pro Thr Vai Ser lie Phe Pro pro Ser Ser Glu Gin Leu 115 120 125
Thr Ser Gly Gly Ala ser vai vai Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro 196 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ 130 135 140 Lys Asp 11 e Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gin Asn 145 150 155 160 Gly val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr 165 170 175 ser Met Ser ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His 180 185 190 Asn ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr ser Thr Ser Pro ile 195 200 205 val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 210 215
<210> 24 <211> 654 <212> ADN <213> Quimera Coelho-Ratinho <400> 24 gcgcaagtgc tgacccagac tccagcctcc gtgtctgcag ctgtgggagg cacagtcacc 60 atcaattgcc agtccagtca gagtgtttat gataacaact ggttagcctg gtttcagcag 120 aaaccagggc agcctcccaa gctcctgatt tatgatgcat ccgatctggc atctggggtc 180 ccatcgcggt tcagtggcag tggatctggg acacagttca ctctcaccat cagcggcgtg 240 cagtgtgccg atgctgccac ttactactgt caaggcgctt ataatgatgt tatttatgct 300 ttcggcggag ggaccgaggt ggtggtcaaa cgtacggatg ctgcaccaac tgtatccatc 360 ttcccaccat ccagtgagca gttaacatct ggaggtgcct cagtcgtgtg cttcttgaac 420 aacttctacc ccaaagacat caatgtcaag tggaagattg atggcagtga acgacaaaat 480 ggcgtcctga acagttggac tgatcaggac agcaaagaca gcacctacag catgagcagc 540 accctcacgt tgaccaagga cgagtatgaa cgacataaca gctatacctg tgaggccact 600 cacaagacat caacttcacc cattgtcaag agcttcaaca ggaatgagtg ttag 654
<210> 25 <211> 239 <212> PRT <213> Quimera Coelho-Ratinho <400> 25
Met Asp Thr Arg Ala pro Thr Gin Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15 Leu Pro Gly Ala Thr Phe Ala Gin Val Leu Thr Gin Thr Pro Ala ser 20 25 30 Val Ser Ala Ala Val Gly Gly Thr val Thr Ile Asn cys Gin Ser ser 35 40 45 Gin Gin Ser val Tyr Asp Asn Asn Trp Leu Ala Trp Phe Gin Lys ΡΓΟ 50 55 60 Ala Gly Gin pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr ASp Ala ser Asp Leu Ser 65 70 75 80 Gly val pro Ser Arg phe ser Gly Ser Gly ser Gly Thr Gin Phe Thr 85 90 95 Leu Thr Ile Ser Gly val Gin cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr cys 100 105 110 Gin Gly Ala Tyr Asn Asp Val Ile Tyr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu 115 Thr 120 125 Ile Val val val Lys Arg Asp Ala Ala pro Thr Val Ser Phe Pro 130 135 140 val Pro Ser ser Glu Gin Leu Thr ser Gly Gly Ala Ser Val cys Phe 145 150 155 ile 160 Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys ASp 165 170 175 Gly Ser GlU Arg Gin Asn Gly val Leu Asn ser Trp Thr Asp Gin ASP 180 185 190 Thr ser Lys ASp ser Thr Tyr Ser Met Ser ser Thr Leu Thr Leu Lys 195 200 205 Thr Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn ser Tyr Thr Cys Glu Ala His Lys 210 ile 215 220 Glu Thr Ser Thr Ser pro Val Lys ser phe Asn Arg Asn cys 225 230 235 197 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
<210> 26 <211> 720 <212> ADN <213> Quimera Coelho-Ratinho <400> 26 atggacacga gggcccccac tcagctgctg acatttgcgc aagtgctgac ccagactcca gtcaccatca attgccagtc cagtcagagt cagcagaaac cagggcagcc tcccaagctc ggggtcccat cgcggttcag tggcagtgga ggcgtgcagt gtgccgatgc tgccacttac tatgctttcg gcggagggac cgaggtggtg tccatcttcc caccatccag tgagcagtta ttgaacaact tctaccccaa agacatcaat caaaatggcg tcctgaacag ttggactgat agcagcaccc tcacgttgac caaggacgag gccactcaca agacatcaac ttcacccatt
<210> 27 <211> 433 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Anticorpo humanizado gggctcctgc tgctctggct cccaggtgcc 60 gcctccgtgt ctgcagctgt gggaggcaca 120 gtttatgata acaactggtt agcctggttt 180 ctgatttatg atgcatccga tctggcatct 240 tctgggacac agttcactct caccatcagc 300 tactgtcaag gcgcttataa tgatgttatt 360 gtcaaacgta cggatgctgc accaactgta 420 acatctggag gtgcctcàgt cgtgtgcttc 480 gtcaagtgga agattgatgg cagtgaacga 540 caggacagca aagacagcac ctacagcatg 600 tatgaacgac ataacagcta tacctgtgag 660 gtcaagagct tcaacaggaa tgagtgttag 720 <400> 27
Gin Ser Leu GlU GlU ser Gly Gly Arg Leu val Thr Pro Gly Thr Pro 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala ser Gly Phe ser Leu Ser ser Tyr Trp 20 25 30 Met Asn Trp Val Arg Gin Ala pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile Gly 35 40 45 Thr ile ASp ser Gly Gly Arg Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr 11 e Ser Arg Thr ser Thr Thr Met Asp Leu Lys Met Thr 65 70 75 80 Ser Leu Thr Thr Gly qc ASp Thr Ala Arg Tyr Qft Phe Cys Ala Arg Asn QC Trp Asn Leu Trp Gly OJ Gin Gly Thr Leu val Z7V Thr val Ser Ser Ala ser Thr 100 105 110 Lys Gly pro Ser val Tyr Pro Leu Ala pro Gly ser Ala Ala Gin Thr 115 120 125 Asn Ser Met Val Thr Leu Gly cys Leu val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu 130 135 140 Pro val Thr val Thr Trp Asn ser Gly ser Leu Ser Ser Gly val His 145 150 155 160 Thr Phe Pro Ala val Leu Gin ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser 165 170 175 Vai Thr Val Pro 5er ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr cys Asn 180 185 190 val Ala His Pro Ala ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile val Pro 195 200 205 Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro cys ile cys Thr Val Pro Glu val Ser 210 215 220 Ser val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr ile Thr 225 230 235 240 Leu Thr Pro Lys Val Thr cys val Val val Asp Ile Ser Lys Asp Asp 245 250 255 o t- 0. Glu Val Gin Phe ser Trp Phe Val ASp ASp val Glu val HÍS Thr 260 265 270 Ala Gin Thr Gin Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg ser 275 280 285 Glu val ser Glu Leu Pro Ile Met HÍS Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 290 295 300 198 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ phe Lys cys Arg Vai Asn Ser Ala Ala Phe pro Ala Pro Ile Glu Lys 305 310 315 Gin 320 Thr He ser Lys Thr Lys Gly Arg pro Lys Ala Pro Val Tyr Thr 325 Ala 330 Val 335 Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gin Met Lys Asp Lys Ser Leu Thr 340 345 350 Cys Met ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu ASp ile Thr Vai Glu Trp Gin 355 360 365 Trp Asn Gly Gin Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin Pro ile Met 370 375 380 Asn Thr Asn Gly Ser Tyr phe Vai Tyr ser Lys Leu Asn Val Gin Lys 385 390 395 400 Sçr Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr cys Ser val Leu His GlU 405 410 415 Gly Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys ser Leu ser His Ser Pro 420 425 430
Lys
<210> 28 <211> 1302 <212> ADN <213> Sequência Artificial <220> <223> Anticorpo humanizado <400> 28 cagtcgctgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60 tgcacagcct ctggattctc cctcagtagt tattggatga actgggtccg ccaggctcca 120 ggggaggggc tggaatggat cggaaccatt gattctggtg gtaggacgga ctacgcgagc 180 tgggcaaaag gccgattcac catctccaga acctcgacta cgatggatct gaaaatgacc 240 agtctgacga ccggggacac ggcccgttat ttctgtgcca gaaattggaa cttgtggggc 300 caaggcaccc tcgtcaccgt ctcgagcgct tctacaaagg gcccatctgt ctatccactg 360 gcccctggat ctgctgccca aactaactcc atggtgaccc tgggatgcct ggtcaagggc 420 tatttccctg agccagtgac agtgacctgg aactctggat cectgtccag cggtgtgcac 480 accttcccag ctgtcctgca gtctgacctc tacactctga gcagctcagt gactgtcccc 540 tccagcacct ggcccagcga gaccgtcacc tgcaacgttg cccacccggc cagcagcacc 600 aaggtggaca agaaaattgt gcccagggat tgtggttgta agccttgcat atgtacagtc 660 ccagaagtat catctgtctt catcttcccc ccaaagccca aggatgtgct caccattact 720 ctgactccta aggtcacgtg tgttgtggta gacatcagca aggatgatcc cgaggtccag 780 ttcagctggt ttgtagatgâ tgtggaggtg cacacagctc agacgcaacc ccgggaggag 840 cagttcaaca gcactttccg ctcagtcagt gaacttccca tcatgcacca ggactggctc 900 aatggcaagg agttcaaatg cagggtcaac agtgcagctt tccctgcccc catcgagaaa 960 accatctcca aaaccaaagg cagaccgaag gctccacagg tgtacaccat tccacctccc 1020 aaggagcaga tggccaagga taaagtcagt ctgacctgca tgataacaga cttcttccct 1080 gaagacatta ctgtggagtg gcagtggaat gggcagccag cggagaacta caagaacact 1140 cagcccatca tggacacaga tggctcttac ttcgtctaca gcaagctcaa tgtgcagaag 1200 agcaactggg aggcaggaaa tactttcacc tgctctgtgt tacatgaggg cctgcacaac 1260 caccatactg agaagagcct ctcccactct cctggtaaat ga 1302
<210> 29 <211> 452 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Anticorpo humanizado <400> 29
Met Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Vai Ala Vai Leu Lys Gly 1 5 10 15 vai His cys Gin ser Leu Glu Glu ser Gly Gly Arg Leu vai Thr Pro 20 25 30
Gly Thr Pro Leu Thr Leu Thr cys Thr Ala Ser Gly Phe ser Leu ser 35 40 45 ser Tyr Trp Met Asn Trp Vai Arg Gin Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu 199 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ 50 55 60 Trp rle Gly Thr Ile Asp Ser Gly Gly Arg Thr Asp Tyr Ala ser Trp 65 70 75 80 Ala Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Thr Ser Thr Thr Met ASp Leu Thr 85 Thr 90 95 Lys Met Ser 100 Asn Leu Thr Gly Asp 105 Gly Thr Ala Arg Tyr phe 110 val cys Ala Arg Asn Trp Leu Trp Gly Gin Thr Leu val Thr Ser Ser 115 Gly 120 125 Ala Ser Thr Lys Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala pro Gly Ser Ala 130 135 140 Ala Gin Thr Asn Ser Met val Thr Leu Gly cys Leu val Lys Gly Tyr 145 150 155 160 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser 165 170 175 Gly Vai His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Asp Leu Tyr Thr Leu 180 185 190 Ser Ser Ser val Thr val Pro Ser ser Thr Trp Pro ser Glu Thr val 195 Ala His 200 205 Thr Cys Asn Val Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys 210 215 220 lie val Pro Arg Asp cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro 225 230 235 240 Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro pro Lys Pro Lys Asp val Leu 245 250 255 Thr He Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr cys val val val Asp Ile ser 260 265 270 Lys Asp Asp Pro Glu val Gin Phe Ser Trp phe val Asp Asp val Glu 275 280 285 vai His Thr Ala Gin Thr Gin Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn ser Thr 290 Glu 295 300 Phe Arg Ser val Ser Leu Pro Ile Met His Gin Asp Trp Leu Asn 305 310 val 315 320 Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Asn Ser Ala Ala Phe pro Ala Pro 325 330 335 Ile Glu Lys Thr 340 Ile Ile Ser Lys Thr Lys 345 Glu Gly Arg Pro Lys Ala 350 Asp Pro Gin Vai Tyr Thr Pro Pro Pro Lys Gin Met Ala Lys Lys val 355 360 365 ser Leu Thr cys Met Ile Thr Asp Phe phe Pro Glu Asp ile Thr val 370 375 380 Glu Trp Gin Trp Asn Gly Gin pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin 385 390 Gly 395 400 Pro Ile Met Asn Thr Asn Ser Tyr phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn 405 410 415 vai Gin Lys ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr phe Thr cys ser Val 420 425 430 Leu His GlU Gly Leu HÍS Asn His His Thr Glu Lys ser Leu ser His 435 440 445 ser Pro Gly Lys 450
<210> 30 <211> 1359 <212> ADN <213> Sequência Artificial <220> <223> Anticorpo humanizado <400> 30 atggagactg ggctgcgctg gcttctcctg gtcgctgtgc tcaaaggtgt ccactgtcag 60 tcgctggagg agtccggggg tcgcctggtc acgcctggga cacccctgac actcacctgc 120 acagcctctg gattctccct cagtagttat tggatgaact gggtccgcca ggctccaggg 180 gaggggetgg aatggatcgg aaccattgat tctggtggta ggacggacta cgcgagctgg 240 gcaaaaggcc gattcaccat ctccagaacc tcgactacga tggatctgaa aatgaccagt 300 ctgacgaccg gggacacggc ccgttatttc tgtgccagaa attggaactt gtggggccaa 360 200 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ ggcaccctcg tcaccgtctc gagcgcttct cctggatctg ctgcccaaac taactccatg ttccctgagc cagtgacagt gacctggaac ttcccagctg tcctgcagtc tgacctctac agcacctggc ccagcgagac cgtcacctgc gtggacaaga aaattgtgcc cagggattgt gaagtatcat ctgtcttcat cttcccccca actcctaagg tcacgtgtgt tgtggtagac agctggtttg tagatgatgt ggaggtgcac ttcaacagca ctttccgctc agtcagtgaa ggcaaggagt tcaaatgcag ggtcaacagt atctccaaaa ccaaaggcag accgaaggct gagcagatgg ccaaggataa agtcagtctg gacattactg tggagtggca gtggaatggg cccatcatgg acacagatgg ctcttacttc aactgggagg caggaaatac tttcacctgc catactgaga agagcctctc ccactctcct
<210> 31 <211> 213 <212> PRT <213> Mus musculus acaaagggcc catctgtcta tccactggcc 420 gtgaccctgg gatgcctggt caagggctat 480 tctggatccc tgtccagcgg tgtgcacacc 540 actctgagca gctcagtgac tgtcccctcc 600 aacgttgccc acccggccag cagcaccaag 660 ggttgtaagc cttgcatatg tacagtccca 720 aagcccaagg atgtgctcac cattactctg 780 atcagcaagg atgatcccga ggtccagttc 840 acagctcaga cgcaaccccg ggaggagcag 900 cttcccatca tgcaccagga ctggctcaat 960 gcagctttcc ctgcccccat cgagaaaacc 1020 ccacaggtgt acaccattcc acctcccaag 1080 acctgcatga taacagactt cttccctgaa 1140 cagccagcgg agaactacaa gaacactcag 1200 gtctacagca agctcaatgt gcagaagagc 1260 tctgtgttac atgagggcct gcacaaccac 1320 ggtaaatga 1359 <400> 31
Gin Ile Vai Leu Thr Gin Ser Pro 1 5 Glu Lys vai Thr 20 Gin Leu Ile Cys Ser Asp Trp Phe Gin Lys Pro Gly 35 40 Arg Thr ser Asn Leu Gly Phe Gly 50 55 Gly ser Gly Thr Ser His Ser Leu 65 70 Asp Ala Ala Thr Tyr 85 Thr Tyr Cys Gin Phe Gly Ala Gly Lys Leu Glu 100 Thr Vai Ser Ile Phe Pro Pro Ser 115 120 Ala Ser vai vai cys Phe Leu Asn 130 135 Vai Lys Trp Lys ile Asp Gly Ser 145 150 Ser Trp Thr Asp Gin 165 Thr Asp Ser Lys Thr Leu Thr Leu Lys Asp Glu 180 cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser 195 200 Asn Arg Asn Glu cys 210
Thr Ile val Ser Ala ser pro Gly 10 15 Ala Ser Ser Ser Val ser phe Val 25 30 Thr Ser Pro Lys Arg AC Trp ile Tyr Val Pro Ala Arg *T J phe Ser Gly Gly 60 Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala Glu 75 80 Gin Arg Ser Thr Tyr Pro pro Thr 90 95 Leu Lys Arg Ala ASp Ala Ala Pro 105 110 Ser Glu Gin Leu Thr Ser Gly Gly Asn phe Tyr Pro J Lys Asp ile Asn 140 Glu Arg Gin Asn Gly val Leu Asn 155 160 Asp ser Thr Tyr ser Met ser Ser 170 175 Tyr Glu Arg His Asn ser Tyr Thr 185 190 Thr Ser Pro ile val Lys ser Phe 205
<210> 32 <211> 642 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 32 caaattgttc tcacccagtc tccaacaatc ctaatctgca gtgccagttc aagtgtaagt acttctccca aacgctggat ttacagaaca ttcagtggcg gtggatctgg gacctctcac gatgctgcca cttattactg ccagcaaagg accaagctgg aactgaaacg ggctgatgct agtgagcagt taacatctgg aggtgcctca aaagacatca atgtcaagtg gaagattgat agttggactg atcaggacag caaagacagc accaaggacg agtatgaacg acataacagc acttcaccca ttgtcaagag cttcaacagg gtgtctgcat ctccagggga gaaggtcacc 60 ttcgtggact ggttccagca gaagccaggc 120 tccaacctgg gttttggagt ccctgctcgc 180 tctctcacaa tcagccgaat ggaggctgaa 240 agtacttacc cacccacgtt cggtgctggg 300 gcaccaactg tatccatctt cccaccatcc 360 gtcgtgtgct tcttgaacaa cttctacccc 420 ggcagtgaac gacaaaatgg cgtcctgaac 480 acctacagca tgagcagcac cctcacgttg 540 tatacctgtg aggccactca caagacatca 600 aatgagtgtt ag 642 201 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
<210> 33 <211> 235 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 33
Met His phe Gl n val Gin Ile Phe ser Phe Leu Leu ile ser Ala ser 1 5 Gin 10 15 val Xle val Ser Arg Gly ile Val Leu Thr Gin Ser pro Thr Ile 20 Gly Glu 25 30 val Ser Ala Ser Pro Lys val Thr Leu Ile Cys Ser Ala Ser 35 40 45 Ser Ser Val Ser Phe val Asp Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Thr Ser 50 55 60 Pro Lys Arg Trp Ile ryr Arg Thr Ser Asn Leu Gly Phe Gly Val pro 65 70 75 80 Ala Arg phe Ser Gly oe Gly Gly Ser Gly Thr Qfi Ser His ser Leu Thr ας Ile Ser Arg Met Glu O J Ala Glu ASp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Arg 100 105 110 Ser Thr Tyr Pro Pro Thr phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 115 120 125 Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr val ser ile Phe Pro Pro ser ser Glu 130 135 140 Gin Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser val val Cys Phe Leu Asn Asn Phe 145 150 Val 155 160 Tyr pro Lys Asp Ile Asn Lys Trp Lys 170 Ile Asp Gly Ser Glu 175 Arg Gl n Asn Gly val Au J Leu Asn ser Trp Thr X/ w Asp Gin Asp ser Lys Asp Ser 180 185 190 Glu Thr Tyr ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr 195 200 205 Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr ser Thr Ser 210 215 220 Pro Ile val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 225 230 235
<210> 34 <211> 708 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 34 atgcattttc aagtgcagat tttcagcttc ctgctaatca gtgcctcagt catagtgtcc 60 agagggcaaa ttgttctcac ccagtctcca acaatcgtgt ctgcatctcc aggggagaag 120 gtcaccctaa tctgcagtgc cagttcaagt gtaagtttcg tggactggtt ccagcagaag 180 ccaggcactt ctcccaaacg ctggatttac agaacatcca acctgggttt tggagtccct 240 gctcgcttca gtggcggtgg atctgggacc tctcactctc tcacaatcag ccgaatggag 300 gctgaagatg ctgccactta ttactgccag caaaggagta cttacccacc cacgttcggt 360 gctgggacca agctggaact gaaacgggct gatgctgcac caactgtatc catcttccca 420 ccatccagtg agcagttaac atctggaggt gcctcagtcg tgtgcttctt gaacaacttc 480 taccccaaag acatcaatgt caagtggaag attgatggca gtgaacgaca aaatggcgtc 540 ctgaacagtt ggactgatca ggacagcaaa gacagcacct acagcatgag cagcaccctc 600 acgttgacca aggacgagta tgaacgacat aacagctata cctgtgaggc cactcacaag 660 acatcaactt cacccattgt caagagcttc aacaggaatg agtgttag 708
<210> 35 <211> 449 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 35
Gin Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly lie Leu Gin Pro Ser Gin 202 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ 1 5 phe 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr cys ser Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 20 Ile 25 30 Gly Met Gly Val Gly Trp Arg 40 ASp His Pro Ser Gly Lys 45 Tyr Asn Leu Glu Trp Leu Ala His ile Trp Trp Asp val Lys Arg Asn Pro Val 50 Thr 55 60 Leu Lys Ser Arg Leu Ile Ser Lys Asp Thr Ser Asn Ser Gin Val 65 Ile Ala 70 75 80 Phe Leu Lys Asn Val Asp Thr Ala 90 Asp Asp Thr Ala Thr Tyr 95 Ala Tyr cys Ala Arg ile U J Glu Asp phe Asp Tyr Glu Glu Tyr Tyr Met 100 Gin Gly 105 110 Asp Tyr Trp Gly Thr Ser Val Ile Val Ser Ser Ala Lys Thr 115 Val 120 125 Thr Pro pro ser Tyr pro Leu Ala ΡΓΟ Gly ser Ala Ala Gin Thr 130 Thr 135 140 Asn Ser Met val Leu Gly cys Leu val Lys Gly Tyr Phe pro Glu 145 Val Thr 150 155 160 Pro Vai Thr Trp Asn ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Ala 165 170 175 Thr Phe pro val Leu Gin ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser 180 185 190 Vai Thr val Pro Ser Ser Thr Trp Pro ser Glu Thr val Thr cys Asn 195 200 205 Vai Ala His Pro Ala Ser ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro 210 215 220 Arq ASP Cys Gly Cys Lys pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser 225 230 235 240 Ser val phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys ASP val Leu Thr Ile Thr 245 250 255 Leu Thr pro Lys val Thr Cys Val val Val Asp Ile Ser Lys ASP Asp 260 265 270 Pro Glu val Gin Phe Ser Trp Phe val Asp Asp val Glu val His Thr 275 280 285 Ala Gl n Thr Gin Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser 290 295 300 Vai Ser Glu Leu Pro Ile Met HÍS Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Phe Lys cys ,Arg val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys 340 Pro Thr Lys Gly Arg Pro 345 Ala Lys Ala Pro Gin val 350 Ser Tyr Thr Xle Pro pro Lys Glu Gin Met Lys Asp Lys val Leu Thr 355 360 365 Cys Met Ile Thr Asp Phe phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gin 370 375 380 Gin Trp Asn Gly Gin Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Pro Ile Met 385 390 395 400 Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gin Lys 405 410 415 Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu 420 425 430 Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys ser Leu ser His ser pro Gly 435 440 445 l ys
<210> 36 <211> 1350 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 36 caggttactc tgaaagagtc tggccctggg atattgcagc cctcccagac cctcagtctg 60 acttgttctt tctctgggtt ttcactgagc acttctggta tgggtgtagg ctggattcgt 120 cacccatcag ggaagaatct ggagtggctg gcacacattt ggtgggatga tgtcaagcgc leu 203 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ tataacccag ttcctcaaga gaggactttg gtcatcgtct gctgcccaaa ccagtgacag gtcctgcagt cccagcgaga aaaattgtgc tctgtcttca gtcacgtgtg gtagatgatg actttccgct ttcaaatgca accaaaggca gccaaggata gtggagtggc gacacagatg gcaggaaata aagagcctct <210> 37 <211> 468 <212> PRT <213> Mus musculus tcctgaagag tcgccaatgt attacgacga cctcagccaa ctaactccat tgacctggaa ctgacctcta ccgtcacctg ccagggattg tcttcccccc ttgtggtaga tggaggtgca cagtcagtga gggtcaacag gaccgaaggc aagtcagtct agtggaatgg gctcttactt ctttcacctg cccactctcc ccgactgact ggacactgca ggagtattat aacgacaccc ggtgaccctg ctctggatcc cactctgagc caacgttgcc tggttgtaag aaagcccaag catcagcaag cacagctcag acttcccatc tgcagctttc tccacaggtg gacctgcatg gcagccagcg cgtctacagc ctctgtgtta tggtaaatga atctccaagg gatactgcca gctatggact ccatctgtct ggatgcctgg ctgtccagcg agctcagtga cacccggcca ccttgcatat gatgtgctca gatgatcccg acgcaacccc atgcaccagg cctgccccca tacaccattc ataacagact gagaactaca aagctcaatg catgagggcc atacctccaa catactactg actggggtca atccactggc tcaagggcta gtgtgcacac ctgtcccctc gcagcaccaa gtacagtccc ccattactct aggtccagtt gggaggagca actggctcaa tcgagaaaac cacctcccaa tcttccctga agaacactca tgcagaagag tgcacaacca cagccaggta 240 tgctcgaata 300 aggaacctca 360 ccctggatct 420 tttccctgag 480 cttcccagct 540 cagcacctgg 600 ggtggacaag 660 agaagtatca 720 gactcctaag 780 cagctggttt 840 gttcaacagc 900 tggcaaggag 960 catctccaaa 1020 ggagcagatg 1080 agacattact 1140 gcccatcatg 1200 caactgggag 1260 ccatactgag 1320 1350 <400> 37
Met 1 Gly Arg Leu Thr 5 ser ser phe Vai Leu ser Gin 20 val Thr Leu Lys Pro Ser Gin 35 Thr Leu ser Leu Thr 40 ser Thr 50 Ser Gly Met Gly val 55 Gly Asn 65 Leu Glu Trp Leu Ala 70 His Ile Asn Pro Val Leu Lys 85 Ser Arg Leu Ser Gin val Phe 100 Leu Lys Ile Ala Thr Tyr Tyr 115 Cys Ala Arg Ile Glu 120 Tyr Ala 130 Met Asp Tyr Trp Gly 135 Gin Ala 145 Lys Thr Thr Pro pro 150 ser val Ala Gin Tl·· r> 1 1 1 1 Asn ser 165 val Val Thr Phe Pro Glu pro 180 Thr Val Thr Gly Vai His 195 Thr Phe pro Ala Val 200 Ser Ser 210 Ser val Thr Val pro 215 Ser Thr 225 Cys Asn val Ala His 230 pro Ala Ile val Pro Arg Asp 245 cys Gly Cys Glu vai Ser ser 260 Val Phe Ile Phe Thr Ile Thr 275 Leu Thr Pro Lys Val 280 Lys Asp 290 Asp Pro Glu val Gin 295 Phe Vai 305 Hi S Thr Ala Gin Thr 310 Gin Pro Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro
Leu Leu Leu Ile val pro Ala Tyr 10 ile 15 Gin GlU ser Gly Pro Gly Leu 25 30 cys Ser Phe ser Gly Phe Ser Leu 45 Gly Trp Ile Arg His 60 ASp pro ser Lys Trp Trp Asp val Lys Arg Tyr 75 80 Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Asn 90 95 Ala Asn Val Asp Thr Ala Asp Thr 105 110 Glu Asp Phe Asp Tyr Asp Glu Tyr 125 Gly Thr ser val Ile val Ser ser 140 Ala Tyr pro Leu Ala pro Gly ser 155 160 !_on Gly 170 cys Leu val Lys Gly 175 Tyr Trp Asn Ser Gly ser Leu ser Ser 185 190 Thr Leu Gin ser Asp Leu Tyr Leu 205 Val Ser Thr Trp pro ser Glu Thr 220 Val ser Ser Thr Lys Asp Lys Lys 235 240 Lys Pro Cys Ile cys Thr Val Pro 250 255 Pro Pro Lys pro Lys Asp Val Leu 265 270 Thr Cys val Val val Asp ile Ser 285 Glu ser Trp Phe val Asp Asp Val 300 Thr Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser 315 320 ile Met His Gin Asp Trp Leu Asn 204 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ 325 330 Phe 335 Gly Lys Glu Phe Lys cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Pro Ala pro 340 345 350 Gin Ile Glu Lys Thr ile ser Lys Thr Lys Gly Arg pro Lys Ala Pro 355 360 365 Val Vai Tyr Thr ile Pro Pro Pro Lys Glu Gin Met Ala Lys Asp Lys 370 375 380 ile Thr val Ser Leu Thr cys Met Ile Thr Asp Phe Phe pro Glu ASp 385 390 395 Thr 400 Glu Trp Gin Trp Asn Gly Gin Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Gin 405 410 415 pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn 420 425 Thr 430 vai Gin Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr phe cys ser val 435 440 445 His Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu ser 450 455 460 Ser Pro Gly Lys 465
<210> 38 <211> 1407 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 38 atgggcaggc ttacttcttc attcctgcta ctgattgtcc ctgcatatgt cctgtcccag 60 gttactctga aagagtctgg ccctgggata ttgcagccct cccagaccct cagtctgact 120 tgttctttct ctgggttttc actgagcact tctggtatgg gtgtaggctg gattcgtcac 180 ccatcaggga agaatctgga gtggctggca cacatttggt gggatgatgt caagcgctat 240 aacccagtcc tgaagagccg actgactatc tccaaggata cctccaacag ccaggtattc 300 ctcaagatcg ccaatgtgga cactgcagat actgccacat actactgtgc tcgaatagag 360 gactttgatt acgacgagga gtattatgct atggactact ggggtcaagg aacctcagtc 420 atcgtctcct cagccaaaac gacaccccca tctgtctatc cactggcccc tggatctgct 480 gcccaaacta actccatggt gaccctggga tgcctggtca agggctattt ccctgagcca 540 gtgacagtga cctggaactc tggatccctg tccagcggtg tgcacacctt cccagctgtc 600 ctgcagtctg acctctacac tctgagcagc tcagtgactg tcccctccag cacctggccc 660 agcgagaccg tcacctgcaa cgttgcccac ccggccagca gcaccaaggt ggacaagaaa 720 attgtgccca gggattgtgg ttgtaagcct tgcatatgta cagtcccaga agtatcatct 780 gtcttcatct tccccccaaa gcccaaggat gtgctcacca ttactctgac tcctaaggtc 840 acgtgtgttg tggtagacat cagcaaggat gatcccgagg tccagttcag ctggtttgta 900 gatgatgtgg aggtgcacac agctcagacg caaccccggg aggagcagtt caacagcact 960 ttccgctcag tcagtgaact tcccatcatg caccaggact ggctcaatgg caaggagttc 1020 aaatgcaggg tcaacagtgc agctttccct gcccccatcg agaaaaccat ctccaaaacc 1080 aaaggcagac cgaaggctcc acaggtgtac accattccac ctcccaagga gcagatggcc 1140 aaggataaag tcagtctgac ctgcatgata acagacttct tccctgaaga cattactgtg 1200 gagtggcagt ggaatgggca gccagcggag aactacaaga acactcagcc catcatggac 1260 acagatggct cttacttcgt ctacagcaag ctcaatgtgc agaagagcaa ctgggaggca 1320 ggaaatactt tcacctgctc tgtgttacat gagggcctgc acaaccacca tactgagaag 1380 agcctctccc actctcctgg taaatga 1407
<210> 39 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 39
Asp His Tyr Met Ser
<210> 40 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus 205 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <400> 40
Asp ile Asn Pro Tyr ser Gly Glu Thr Thr Tyr Asn Gin Lys phe Lys 15 10 15
Gly
<210> 41 <211> 10 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 41
Asp Asp Tyr Asp Ala ser Pro Phe Ala Tyr 1 5 10
<210> 42 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 42
Gin Ala ser Gin Gly Thr ser ile Asn Leu Asn 1 5 10
<210> 43 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 43
Gly ser ser Asn Leu Glu Asp 1 5
<210> 44 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 44
Leu Gin His Ser Tyr Leu Pro Tyr Thr 1 5
<210> 45 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 45
Asp cys Tyr Met Asn 1 5
<210> 46 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus 206 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <400> 46
Asp ile Asn ργο Phe Asn Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gin Lys Phe Lys 15 10 15
Gly
<210> 47 <211> 16 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 47
Ser His Tyr Tyr phe Asp Gly Arg vai Pro Trp Asp Ala Met Asp Tyr 15 10 15
<210> 48 <211> 15 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 48
Lys Ala ser Gin Ser Vai Asp Tyr Asp Gly Asp Ser Tyr Met Asn 15 10 15
<210> 49 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 49
Ala Ala ser Asn Leu Glu Ser 1 5
<210> 50 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 50
Gin Gin Ser Asn Glu Asp Pro Trp Thr 1 5
<210> 51 <211> 5 <212> PRT <213> Quimera Coelho-Ratinho <400> 51
Ser Tyr Trp Met Asn 1 5
<210> 52 <211> 16 <212> PRT <213> Quimera Coelho-Ratinho 207 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <400> 52
Thr ile Asp ser Gly Gly Arg Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 15 10 15
<210> 53 <211> 4 <212> PRT <213> Quimera Coelho-Ratinho <400> 53 Asn Trp Asn Leu 1
<210> 54 <211> 13 <212> PRT <213> Quimera Coelho-Ratinho <400> 54
Gin Ser Ser Gin Ser Vai Tyr Asp Asn Asn Trp Leu Ala 1 5 10
<210> 55 <211> 7 <212> PRT <213> Quimera Coelho-Ratinho <400> 55
Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser 1 5
<210> 56 <211> 10 <212> PRT <213> Quimera Coelho-Ratinho <400> 56
Gin Gly Ala Tyr Asn Asp Vai Ile Tyr Ala 1 5 10
<210> 57 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 57
Thr ser Gly Met Gly vai Gly 1 5
<210> 58 <211> 16 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 58
His Ile Trp Trp Asp Asp Vai Lys Arg Tyr Asn Pro Vai Leu Lys Ser 15 10 15 208 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
<210> 59 <211> 14 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 59
Glu Asp phe Asp Tyr Asp Glu Glu Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr 15 10
<210> 60 <211> 10 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 60
Ser Ala Ser Ser Ser Vai Ser Phe vai Asp 15 10
<210> 61 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 61
Arg Thr ser Asn Leu Gly Phe 1 5
<210> 62 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 62
Gin Gin Arg ser Thr Tyr Pro Pro Thr 1 5
<210> 63 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 63 cys Gly Pro Ala Arg Leu Leu Pro Asn Ala lie Gly Arg Gly Lys Trp 15 10 15
Trp Arg Pro Ser 20
<210> 64 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 64
Gly Pro Ala Arg Leu Leu Pro Asn Ala lie Gly Arg Gly Lys Trp Trp 15 10 15
Arg Pro Ser Gly 20 209 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
<210> 65 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 65
Pro Ala Arg Leu Leu pro Asn Ala Ile Gly Arg Gly Lys Trp Trp Arg 15 10 15
Pro ser Gly Pro 20
<210> 66 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 66
Ala Arg Leu Leu pro Asn Ala ile Gly Arg Gly Lys Trp Trp Arg Pro 15 10 15 ser Gly Pro Asp 20
<210> 67 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 67
Arg Leu Leu Pro Asn Ala ile Gly Arg Gly Lys Trp Trp Arg pro Ser 15 10 15
Gly Pro Asp Phe 20
<210> 68 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 68
Leu Leu Pro Asn Ala ile Gly Arg Gly Lys Trp Trp Arg Pro ser Gly 15 10 15 pro Asp Phe Arg 20
<210> 69 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 69
Leu pro Asn Ala Ile Gly Arg Gly Lys Trp Trp Arg Pro Ser Gly Pro 1 5 10 15
Asp Phe Arg cys 20
<210> 70 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens 210 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <400> 70
Ser Ala Lys Pro vai Thr Glu Leu vai cys ser Gly Gin cys 1 5 10
<210> 71 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 71
Leu vai Ala ser Cys Lys cys 1 5 <210> 72 <211> 8
<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 72
Cys Arg Glu Leu His Phe Thr Arg 1 5
<210> 73 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 73 cys lie Pro Asp Arg Tyr Arg 1 5
<210> 74 <211> 399 <212> ADN <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado tcagctgctg gggctcctgc ccagagtcca agcagtctct tagtcagagc gtgtatgata cccgaagctg ctcatctatg tggcagtggc agcggtactg cgccacttac tattgtcaag taaagtagaa atcãaacgt <400> 74 atggacacga gggcccccac acatttgctc aagttctgac gtgactatta cctgtcaatc cagcaaaaac cgggcaaagc ggtgtgccaa gccgtttcag tctctccagc cggaagattt tatgccttcg gtcagggcac tgctctggct cccaggtgcc 60 ccgccagcgt aggcgatcgt 120 acaattggct ggcgtggtac 180 acgcgtccga tctggctagc 240 actttaccct cacaatttcg 300 gtgcttacaa cgatgtgatt 360 399
<210> 75 <211> 133 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado 211 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <4Ο0> 75
Met 1 Asp Thr Arg Ala 5 Pro Thr Gin Leu Leu 10 Gly Leu Leu Leu Leu 15 Trp Leu Pro Gly Ala 20 Thr Phe Al a Gl π Val 25 Leu Thr Gin Ser pro 30 Ser Ser Leu ser Ala 35 Ser Val Gly Asp Arg 40 Val Thr Ile Thr ss Gin Ser Ser Gin ser val 50 Lys Ala Tyr Asp Asn Asn Trp 55 Leu Ile Leu Ala Trp Tyr 60 Ser Gin Gin Lys Pro Gly 65 Pro Lys Leu 70 Tyr Asp Ala 75 Asp Leu Ala Ser 80 Gly val Pro Ser Arg 85 Phe Ser Gly Ser Gly 90 Ser Gly Thr Asp Phe 95 Thr Leu Thr ile Ser 100 Ser Leu Gin pro Glu 105 ASp phe Ala Thr Tyr 110 Tyr cys Gin val Gly Ala 115 Glu lie 130 Tyr Lys Asn Arg Asp val ile 120 Tyr Ala Phe Gly Gin 125 Gly Thr Lys
<210> 76 <211> 393 <212> ADN <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado ccactgtgag 60 gcgtctctct 120 gcaggcacct 180 ctacgcgtct 240 gtacctccag 300 ctggaatctg 360 393 <400> 76 atggagactg gtgcagctgt tgtgcagcaa gggaagggcc tgggcaaagg atgaactctc tggggtcaag ggctgcgctg tggagtctgg gcggcttcag tggagtgggt gccgtttcac tccgcgcaga gtactcttgt gcttctcctg aggcgggctt cttatcctct gggcaccatt catttcccgc ggacacagca aacagtctcg gtcgctgtgc gtccagcctg tactggatga gattccggag gacaactcca cgttattact age tcaaaggtgt gagggagcct attgggtgcg gccgtacaga aaaataccat gtgcacgcaa
<210> 77 <211> 131 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado <400> 77 Met Glu Thr 1 vai Hi s cys
Gly Leu 5 Glu vai 20 Ser Leu
Arg Trp Leu Leu Gin Leu Leu Glu 25 Arg Leu ser Cys 40
Pro Gly Gly 35 Ser Ser Tyr Trp Met Asn Trp Val Arg 50 55 Glu Trp val Gly Thr ile Asp Ser Gly 65 70 Trp Ala Lys Gly Arg cc Phe Thr Ile ser Met Tyr Leu Gin OJ Met Asn Ser Leu Arg 100 105 Tyr cys Ala Arg Α5Π Trp Asn Leu Trp 115 120 val Ser Ser
Leu vai 10 Ser Gly Ala Ala Gin Ala Gly Arg 75 Arg Asp 90 Ala Glu Gly Gin
Ala Val Gly Gly Ser Gly 45 Pro Gly 60 Thr Asp Asn ser Asp Thr Gly Thr 125
Leu Lys Gly 15 Leu val Gin 30 Phe ser Leu Lys Gly Leu Tyr Ala Ser 80 Lys Asn Thr 95 Ala Arg Tyr 110 Leu val Thr 130 212 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ 212 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <210> 78 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 78 Arg Ala 1 . Ser Gin Asp lie 5 Ser Asn <210> 79 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 79 Tyr Thr 1 Ser Arg Leu Leu 5 Ser <210> 80 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 80 Gin Gin Gly 1 Asp Thr Leu 5 pro Tyr <210> 81 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 81 Arg Ala 1 . ser Gin Asp ile 5 ser Asn <210> 82 <211> 24 <212> PRT <213> Rattus norvegícus <400> 82 Gin Gly Trp 1 Leu Arg Glu Gin Ala Phe 5 Tyr Pro Glu 20 Lys Asn pro Pro <210> 83 <211> 20 <212> PRT <213> Rattus norvegícus <400> 83 Thr Glu 1 lie Ile Pro Gly ς Leu Arg J. Leu Glu Asn j Asn Tyr Leu Asn 10 Tyr Leu Asn 10
Asp Ala Thr Glu lie lie pro Gly 10 15
Glu Tyr Pro Glu Pro Pro Gin Glu 10 15 20 213 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
<210> 84 <211> 20 <212> PRT <213> Rattus norvegicus <400> 84
Gin Thr Met Asn Arg Ala 15
Pro Glu ργο Ργο Gin Glu Leu Glu Asn Asn 1 5 10
Glu Asn Gly Gly 20
<210> 85 <211> 20 <212> PRT <213> Rattus norvegicus <400> 85
Glu Asn Gly Gly Arg Pro Pro Hís His Pro Tyr aso Thr Lys Asp vai 1 5 10 P 15 ser Glu Tyr ser 20
<210> 86 <211> 14 <212> PRT <213> Rattus norvegicus <400> 86
Cys Arg Glu Leu His Tyr Thr Arg Phe vai Thr asp Gly Pro 1 5 10
<210> 87 <211> 25 <212> PRT <213> Rattus norvegicus <400> 87
Cys Arg Glu Leu His Tyr Thr Arg Phe vai Thr Asp Gly Pro ser Arg 15 10 15
Ser Ala Lys Pro Vai Thr Glu Leu Vai 20 25
<210> 88 <211> 23 <212> PRT <213> Rattus norvegicus <400> 88
Cys Arg ser Ala Lys Pro vai Thr Glu Leu vai Ser ser Gly Gin ser 15 10 15
Gly Pro Arg Ala Arg Leu Leu 20
<210> 89 <211> 25 <212> PRT <213> Rattus norvegicus 214 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <4Ο0> 89 cys Gly pro Ala Arg Leu Leu Pro Asn Ala lie Gly Arg vai Lys Trp 15 10 15
Trp Arg Pro Asn Gly Pro Asp Phe Arg 20 25
<210> 90 <211> 20 <212> PRT <213> Rattus norvegícus <400> 90
Arg Ala Gin Arg vai Gin Leu Leu Cys Pro Gly Gly Ala Ala Pro Arg 15 10 15
Ser Arg Lys Vai 20
<210> 91 <211> 16 <212> PRT <213> Rattus norvegícus <400> 91
Pro Gly Gly Ala Ala Pro Arg Ser Arg Lys Vai Arg Leu vai Ala Ser 15 10 15
<210> 92 <211> 23 <212> PRT <213> Rattus norvegícus <400> 92
Lys Arg Leu Thr Arg Phe His Asn Gin Ser Glu Leu Lys Asp Phe Gly 1 5 10 15
Pro Glu Thr Ala Arg Pro Gin
<210> 93 <211> 16 <212> PRT <213> Rattus norvegícus <400> 93 lie Pro Asp Arg Tyr Ala Gin Arg vai Gin Leu Leu Ser Pro Gly Gly 15 10 15
<210> 94 <211> 24 <212> PRT <213> Rattus norvegícus <400> 94
Ser Glu Leu Lys Asp Phe Gly Pro Glu Thr Ala Arg Pro Gin Lys Gly 15 10 15
Arg Lys Pro Arg Pro Arg Ala Arg 20 215 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
<210> 95 <211> 23 <212> PRT <213> Rattus norvegicus <400> 95
Lys Gly Arg Lys Pro Arg pro Arg Ala Arg Gly Ala Lys Ala Asn Gin 15 10 15
Ala Glu Leu Glu Asn Ala Tyr 20
<210> 96 <211> 18 <212> PRT <213> Rattus norvegicus <400> 96 pro Asn Ala lie Gly Arg Vai Lys Trp Trp Arg Pro Asn Gly Pro Asp 15 10 15
Phe Arg
<210> 97 <211> 22 <212> PRT <213> Rattus norvegicus <400> 97
Lys Trp Trp Arg Pro Asn Gly Pro Asp phe Arg Cys lie Pro Asp Arg 15 10 15
Tyr Arg Ala Gin Arg Vai 20
<210> 98 <211> 213 <212> PRT <213> Rattus norvegicus <400> 98
Met Gin Leu Ser Leu Ala O O. Cys Leu Ala Cys Leu Leu Val HlS Ala 1 5 10 15 Ala Phe vai Ala vai Glu Ser Gin Gly Trp Gin Ala Phe Lys Asn Asp 20 25 30 Ala Thr Glu Ile ile Pro Gly Leu Arg GlU Tyr Pro Glu Pro pro Gin 35 40 45 GlU Leu GlU Asn Asn Gin Thr Met Asn Arg Ala Glu Asn Gly Gly Arg 50 55 60 pro Pro HÍS HÍS Pro Tyr Asp Thr Lys ASp val Ser Glu Tyr Ser cys 65 70 75 80 Arg Glu Leu His Tyr Thr Arg Phe val Thr Asp Gly Pro cys Arg ser 85 90 95 Ala Lys Pro vai Thr Glu Leu Val cys Ser Gly Gin cys Gly pro Ala 100 Ala Ile Gly l?n 105 110 Arg Leu Leu 11C Pro Asn Arg Val Lys Trp Trp Arg Pro Asn Gly Pro 1±J Asp Phe Arg Cys Ile Pro Asp Arg Tyr Arg Ala Gin Arg val 130 135 140 Gin 145 Leu Leu cys Pro Gly 150 Gly Ala Ala Pro Arg 155 Ser Arg Lys val Arg 160 Leu vai Ala ser cys Lys cys Lys Arg Leu Thr Arg Phe His Asn Gin 165 170 175 Ser Glu Leu Lys Asp Phe Gly pro Glu Thr Ala Arg Pro Gin Lys Gly ISO Ala 185 190 Arg Lys Pro Arg Pro Arg Arg Gly Ala Lys Ala Asn Gin Ala Glu 195 200 205 Leu Glu Asn Ala Tyr 210 216 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
<210> 99 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <4Ο0> 99
Tyr Thr ser Arg Leu His Ser 1 5
<210> 100 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 100
Gin Gin Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr 1 5
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Arg Ala Ser Gin vai ile Thr Asn Tyr Leu Tyr 1 5 10
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Tyr Thr Ser- Arg Leu His Ser 1 5
<210> 103 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 103
Gin Gin Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr 1 5
<210> 104 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 104
Arg Ala ser Gin Asp ile ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 217 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
<210> 105 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 105
Tyr Thr Ser Arg Leu Leu Ser 1 5
<210> 106 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 106
Gin Gin Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr 1 5
<210> 107 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 107
Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10
<210> 108 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 108
Tyr Thr ser Arg Leu Phe ser 1 5
<210> 109 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 109
Gin Gin Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr 1 5
<210> 110 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 110
Arg Ala ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10
<210> 111 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus 218 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <400> 111 Tyr Thr 1 Ser Arg Leu Leu 5 <210> 112 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 112 Gin Gin 1 Gly Asp Thr Leu 5 <210> 113 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 113
Arg Ala ser Gin Asp Ile ser Asn Tyr Leu Asn 15 10 <210> 114 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 114 Tyr Thr Ser Thr Leu Gin Ser 1 5
<210> 115 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 115
Gin Gin Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr <210> 116 <211> 12 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 116 Ser Vai Ser Ser Ser Ile Ser Ser Ser Asn Leu His 1 5 10 <210> 117 <211> 213 <212> PRT <213> Mus musculus 219 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <4 Ο 0> 117
Gin Ile val Leu Ser Gin Ser Pro Ala ile Leu Ser Thr Ser pro Gly 1 vai 5 10 15 G1 u Lys Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser ser Ser val Tyr Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr 35 Gin Gin Lys Pro Gly A(\ ser Ser Pro Lys Pro AC Trp Ile Tyr Ala Thr Ser Asn Leu Ala ser 4U Gly val Pro Val Arg phe Ser Gly ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Ser Tyr ser Leu Thr Ile Thr Arg val Glu Ala Glu 65 Ala a1 a Thr 70 75 80 ASp Tyr qc Tyr cys Gin Gin Trp ser ser Asp Pro Leu QC Thr Phe Gly Ala Gly O 9 Thr Lys Leu Glu Leu yu Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro vai 100 105 110 Thr Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gin Leu Thr Ser Gly Gly 115 120 125 Ala Ser val val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn 130 135 140 Vai Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gin Asn Gly Val Leu Asn 145 150 155 160 Ser Trp Thr ASP Gin ASp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met ser Ser 165 170 175 Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr 180 185 190 cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser Phe 195 200 205 Asn Arg Asn Glu Cys 210
<210> 118 <211> 642 <212> ADN <213> Mus musculus <4 0 0> 118 caaattgttc tctcccagtc tccagcaatc ctgtctacat ctccagggga gaaggtcaca 60 atgacttgca gggccagctc aagtgtatat tacatgcact ggtaccagca gaagccagga 120 tcctccccca aaccctggat ttatgccaca tccaacctgg cttctggagt ccctgttcgc 180 ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcaccagagt ggaggctgaa 240 gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg agtagtgacc cactcacgtt cggtgctggg 300 accaagctgg agctgaaacg ggctgatgct gcaccaactg tatccatctt cccaccatcc 360 agtgagcagt taacatctgg aggtgcctca gtcgtgtgct tcttgaacaa cttctacccc 420 aaagacatca atgtcaagtg gaagattgat ggcagtgaac gacaaaatgg cgtcctgaac 480 agttggactg atcaggacag caaagacagc acctacagca tgagcagcac cctcacgttg 540 accaaggacg agtatgaacg acataacagc tatacetgtg aggccactca caagacatca 600 acttcaccca ttgtcaagag cttcaacagg aatgagtgtt ag 642
<210> 119 <211> 235 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 119
Met Asp Phe Gin Vai Gin ile Phe ser Phe Leu Leu ile ser Ala ser 1 5 10 15 vai lie Met ser Arg Gly Gin ile Vai Leu Ser Gin ser Pro Ala Ile 20 25 30
Leu Ser Thr ser Pro Gly Glu Lys Vai Thr Met Thr cys Arg Ala ser 35 40 45 220 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Ser Ser 50 val Tyr Tyr Met His 55 Trp Tyr Gin Gin Lys 60 pro Gly Ser Ser Pro Lys pro Trp Ile Tyr Ala Thr ser Asn Leu Ala Ser Gly val pro 65 phe Gly 70 75 80 vai Arg Ser Ser Gly ser Gly Thr ser Tyr ser Leu Thr ile Thr val 85 90 95 Arg Glu Ala Glu ASp Ala Ala Thr Tyr Tyr cys Gin Gin Trp 100 105 110 Ser Ser Asp Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Ala 115 Ala Ala 120 125 Arg ASp Pro Thr Val ser Ile Phe ΡΓΟ pro Ser ser Glu Gin 130 Thr 135 140 Leu Ser Gly Gly Ala ser val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe 145 150 155 160 Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys ile Asp Gly Ser Glu Arg Gin Gly 165 170 175 Asn Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gin A5p Ser Lys Asp Ser Thr 180 185 190 Tyr ser Met Ser ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu 195 200 205 Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr HÍS Lys Thr Ser Thr Ser 210 215 220 Pro lie Val Lys ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 225 230 235
<210> 120 <211> 708 <212> ADN <213> Mus musculus <4 0 0 > 120 atggattttc aagtgcagat tttcagcttc aggggacaaa ttgttctctc ccagtctcca gtcacaatga cttgcagggc cagctcaagt ccaggatcct cccccaaacc ctggatttat gttcgcttca gtggcagtgg gtctgggacc gctgaagatg ctgccactta ttactgccag gctgggacca agctggagct gaaacgggct ccatccagtg agcagttaac atctggaggt taccccaaag acatcaatgt caagtggaag ctgaacagtt ggactgatca ggacagcaaa acgttgacca aggacgagta tgaacgacat acatcaactt cacccattgt caagagcttc ctgctaatca gtgcttcagt cattatgtcc 60 gcaatcctgt ctacatctcc aggggagaag 120 gtatattaca tgcactggta ccagcagaag 180 gccacatcca acctggcttc tggagtccct 240 tcttactctc tcacaatcac cagagtggag 300 cagtggagta gtgacccact cacgttcggt 360 gatgctgcac caactgtatc catcttccca 420 gcctcagtcg tgtgcttctt gaacaacttc 480 attgatggca gtgaacgaca aaatggcgtc 540 gacagcacct acagcatgag cagcaccctc 600 aacagctata cctgtgaggc cactcacaag 660 aacaggaatg agtgttag 708
<210> 121 <211> 445 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 121
Ser Gly Pro GlU 10 Leu Val Lys Pro Gly 15 Ala Thr Ala Ser 25 Gly Phe Asn Ile Lys 30 ASP Tyr Gin Arg Pro 40 GlU Gin Gly Leu 45 Glu Trp ile ASP 55 Gly Glu ser ASp Tyr 60 Ala Pro Lys Phe Thr Ala Asp Thr Ser 75 Ser Asn Thr Ala Tyr 80 Thr Ser Glu ASP 90 Thr Thr Ala Ile Tyr Tyr 95 Trp Cys Gly Thr Tyr 105 Phe Phe Pro Tyr 110 Gly val ser Ala 120 Ala Lys Thr Thr 125 Pro Pro ser Gly Ser Ala Ala Gin Thr Asn Ser Met val
Glu vai Gin vai Gin Gin 1 5
Ser vai Lys Leu Ser Cys 20
Phe xle His Trp vai Lys 35
Gly Arg Leu Asp Pro Glu 50
Gin Asp Lys Ala ile Met 65 70
Leu Gin Leu Arg ser Leu 85
Glu Arg Glu Asp Tyr Asp 100
Gin Gly Thr Leu Vai Thr 115 vai Tyr Pro Leu Ala Pro 221 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ 130 Gly 135 140 , Thr Leu Cys Leu Vai Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser ser Gly val His Thr Phe Pro Ala Gin 165 170 175 Vai Leu Ser Asp Leu Tyr Thr Leu ser ser Ser Val Thr val Pro Thr 180 185 190 Ser ser Trp Pro Ser Glu Thr Vai Thr Cys Asn Val Ala His Pro 195 200 205 Ala Ser Ser Thr Lys vai Asp Lys Lys ile val Pro Arg Asp Cys Gly 210 215 220 Cys Lys Pro Cys ile cys Thr vai Pro Glu val Ser Ser val Phe Ile 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Vai Leu Thr Ile Thr Leu Thr pro Lys 245 250 255 vai Thr cys Vai Vai Vai Asp Ile Ser Lys ASp Asp pro Glu Val Gin 260 265 270 Phe ser Trp Phe vai Asp Asp Vai Glu val His Thr Al a Gin Thr Gin 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu 290 295 300 Pro Ile Met His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys cys Arg 305 310 315 320 Vai Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro ile Glu Lys Thr Ile ser Lys 325 330 335 Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gin Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro 340 345 350 Lys Glu Gin ocr Met Ala Lys Asp Lys Vai ser Leu Thr cys Met Ile Thr Asp Phe sJ JJ Phe Pro Glu Asp ile 30U Thr vai Glu Trp Gin ju j Trp Asn Gly Gin 370 375 380 Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin pro Ile Met Asp Thr Asp Gly 385. 390 395 400 Ser Tyr Phe ile Tyr ser Lys Leu Asn val Gin Lys Ser Asn Trp Glu 405 410 415 Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Vai Leu His Glu Gly Leu His Asn 420 425 430 His His Thr Glu Lys ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys 435 440 445
<210> 122 <211> 1338 <212> ADN <213> Mus musculus <4 Ο 0> 122 gaggttcagg tgcagcagtc tgggccagaa cttgtgaagc caggggcctc agtcaagttg 60 tcctgcacag cttctggctt caacattaaa gactacttta tacactgggt gaagcagagg 120 cctgaacagg gcctggagtg gattggaagg cttgatcctg aggatggtga aagtgattat 180 gccccgaagt tccaggacaa ggccattatg acagcagaca catcatccaa cacagcctat 240 cttcagctca gaagcctgac atctgaggac actgccatct attattgtga gagagaggac 300 tacgatggta cctacacctt ttttccttac tggggccaag ggactctggt cactgtctct 360 gcagccaaaa cgacaccccc atctgtctat ccactggccc ctggatctgc tgcccaaact 420 aactccatgg tgaccctggg atgcctggtc aagggctatt tccctgagcc agtgacagtg 480 acctggaact ctggatccct gtccagcggt gtgcacacct tcccagctgt cctgcagtct 540 gacctctaca ctctgagcag ctcagtgact gtcccctcca gcacctggcc cagcgagacc 600 gtcacctgca acgttgccca cccggccagc agcaccaagg tggacaagaa aattgtgccc 660 agggattgtg gttgtaagcc ttgcatatgt acagtcccag aagtatcatc tgtcttcatc 720 ttccccccaa agcccaagga tgtgctcacc attactctga ctcctaaggt cacgtgtgtt 780 gtggtagaca tcagcaagga tgatcccgag gtccagttca gctggtttgt agatgatgtg 840 gaggtgcaca cagctcagaç gcaaccccgg gaggagcagt tcaacagcac tttccgctca 900 gtcagtgaac ttcccatcat gcaccaggac tggctcaatg gcaaggagtt caaatgcagg 960 gtcaacagtg cagctttccc tgcccccatc gagaaaacca tctccaaaac caaaggcaga 1020 ccgaaggctc cacaggtgta caccattcca cctcccaagg agcagatggc caaggataaa 1080 gtcagtctga cctgcatgat aacagacttc ttccctgaag acattactgt ggagtggcag 1140 tggaatgggc agccagcgga gaactacaag aacactcagc ccatcatgga cacagatggc 1200 tcttacttca tctacagcaa gctcaatgtg cagaagagca actgggaggc aggaaatact 1260 ttcacctgct ctgtgttaca tgagggcctg cacaaccacc atactgagaa gagcctctcc 1320 cactctcctg gtaaatga 1338
<210> 123 <211> 464 <212> PRT <213> Mus musculus 222 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <400> 123
Met Lys cys Ser Trp Val Ile Phe Phe Leu Met Ala Val Val Thr Gly 1 5 10 15 Vai Asn ser Glu val Gin val Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu val Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn ile 35 40 45 Gin Lys ASP 50 Trp Tyr Phe ile His Trp 55 ASp Val Lys Gin Arg Pro 60 Glu Glu Gly Leu Glu ile Gly Arg Leu pro Glu Asp Gly Ser Asp Tyr Ala 65 70 75 80 ΡΓΟ Lys Phe Gin Asp Lys Ala ile Met Thr Ala Asp Thr ser Ser Asn 85 90 Thr 95 Thr Ala Tyr Leu Gin Leu Arg Ser Leu Thr ser Glu Asp Ala ile 100 105 110 Tyr Tyr cys 115 Glu Arg Glu Asp Tyr 120 Asp Gly Thr Tyr Thr 125 Phe Phe Pro Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr val Ser Ala Ala Lys Thr Thr 130 135 140 Gin Pro Pro Ser val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Thr Asn 145 150 155 160 Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro 165 170 Val 175 Val Thr val Thr Trp Asn Ser Gly ser Leu ser ser Gly His Thr 180 185 190 Phe pro Ala Val Leu Gin Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val 195 200 205 Thr val Pro ser ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr cys Asn val 210 215 220 val Ala His Pro Ala Ser ser Thr Lys val Asp Lys Lys ile Pro Arg 225 230 235 val 240 ASP cys Gly cys Lys pro Cys Ile Cys Thr Val Pro GlU Ser Ser 245 250 255 Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys ASp Val Leu Thr ile Thr Leu 260 265 270 Thr Pro Lys Val Thr cys Val val val Asp Ile ser Lys Asp Asp Pro 275 280 285 Glu Val Gin Phe Ser Trp Phe Val Asp ASp Val Glu Val His Thr Ala 290 295 300 Gin Thr Gin Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg ser val 305 310 315 320 Ser Glu Leu Pro Ile wet His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe 325 330 Glu 335 Lys Cys Arg val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala pro ile Lys Thr 340 345 350 He Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gin Val Tyr Thr ile 355 Glu Gin 360 365 Thr cys Pro Pro Pro Lys Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu 370 375 380 Met Xle Thr ASp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr val Glu Trp Gin Trp 385 Ala 390 395 400 Asn Gly Gin Pro Glu Asn Tyr Lys ASn Thr Gin pro Ile Met Asp 405 410 415 Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Ile Tyr ser Lys Leu Asn Val Gin Lys Ser 420 425 430 Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly His 435 His 440 445 Gly Lys Leu Asn His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His ser Pro 450 455 460
<210 > 124 <211> 1395 <212> ADN <213> Mus musculus 223 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <400> 124 atgaaatgca gctgggtcat cttcttcctg gttcaggtgc agcagtctgg gccagaactt tgcacagctt ctggcttcaa cattaaagac gaacagggcc tggagtggat tggaaggctt ccgaagttcc aggacaaggc cattatgaca cagctcagaa gcctgacatc tgaggacact gatggtacct acaccttttt tccttactgg gccaaaacga cacccccatc tgtctatcca tccatggtga ccctgggatg cctggtcaag tggaactctg gatccctgtc cagcggtgtg ctctacactc tgagcagctc agtgactgtc acctgcaacg ttgcccaccc ggccagcagc gattgtggtt gtaagccttg catatgtaca cccccaaagc ccaaggatgt gctcaccatt gtagacatca gcaaggatga tcccgaggtc gtgcacacag ctcagacgca accccgggag agtgaacttc ccatcatgca ccaggactgg aacagtgcag ctttccctgc ccccatcgag aaggctccac aggtgtacac cattccacct agtctgacct gcatgataac agacttcttc aatgggcagc cagcggagaa ctacaagaac tacttcatct acagcaagct caatgtgcag acctgctctg tgttacatga gggcctgcac tctcctggta aatga
<210> 125 <211> 215 <212> PRT <213> Mus musculus atggcagtgg ttacaggggt caattcagag 60 gtgaagccag gggcctcagt caagttgtcc 120 tactttatac actgggtgaa gcagaggcct 180 gatcctgagg atggtgaaag tgattatgcc 240 gcagacacat catccaacac agcctatctt 300 gccatctatt attgtgagag agaggactac 360 ggccaaggga ctctggtcac tgtctctgca 420 ctggcccctg gatctgctgc ccaaactaac 480 ggctatttcc ctgagccagt gacagtgacc 540 cacaccttcc cagctgtcct gcagtctgac 600 ccctccagca cctggcccag cgagaccgtc 660 accaaggtgg acaagaaaat tgtgcccagg 720 gtcccagaag tatcatctgt cttcatcttc 780 actctgactc ctaaggtcac gtgtgttgtg 840 cagttcagct ggtttgtaga tgatgtggag 900 gagcagtcca acagcacttt ccgctcagtc 960 ctcaatggca aggagttcaa atgcagggtc 1020 aaaaccatct ccaaaaccaa aggcagaccg 1080 cccaaggagc agatggccaa ggataaagtc 1140 cctgaagaca ttactgtgga gtggcagtgg 1200 actcagccca tcatggacac agatggctct 1260 aagagcaact gggaggcagg aaatactttc 1320 aaccaccata ctgagaagag cctctcccac 1380 1395 <400> 125
Glu Xle val Leu Thr Gin 5er Pro Ala Leu Met Ala Ala ser Pro Gly 1 5 10 15 Gl u Lys vai Thr Ile Thr Cys Ser Val Ser Ser Thr ile ser Ser Ásn 20 Gin Gin 25 30 HiS Leu His Trp phe Lys ser Asp Thr Ser Pro Lys pro Trp 35 40 45 lie Tyr Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser ser Met Glu 65 70 75 80 Ala Glu ASp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Trp Ser ser Tyr Pro 85 90 95 Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Arg Arg Ala Asp Ala 100 ile Phe 105 110 Ala Pro Thr val Ser Pro pro ser ser Glu Gin Leu Thr Ser 115 120 125 Gly Gly 130 Ala Ser Val Val ai Phe Leu Asn Asn Phe 140 Tyr Pro Lys Asp ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gin Asn Gly val 145 Thr 150 Gin 155 160 Leu Asn Ser Trp ASp Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr ser Met 165 Thr 170 175 Ser Ser Thr Leu Thr Leu Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Thr 180 Thr His 185 190 Tyr Cys Glu Ala Lys Thr Ser Thr ser Pro Ile Val Lys 195 Glu 200 205 Ser Phe Asn Arg Asn Cys 210 215
<210> 126 <211> 648 <212> ADN <213> Mus musculus 224 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <4 Ο 0> 126 gaaattgtgc tcacccagtc atcacctgca gtgtcagttc tcagacacct cccccaaacc gttcgcttca gtggcagtgg gctgaggatg ctgccactta gctgggacca agctggagct ccatccagtg agcagttaac taccccaaag acatcaatgt ctgaacagtt ggactgatca acgttgacca aggacgagta acatcaactt cacccattgt tccagcactc atggctgcat aactataagt tccaaccact ctggatttat ggcacatcca atctgggacc tcttattctc ttactgtcaa cagtggagta gagacgggct gatgctgcac atctggaggt gcctcagtcg caagtggaag attgatggca ggacagcaaa gacagcacct tgaacgacat aacagctata caagagcttc aacaggaatg ctccggggga gaaggtcacc 60 tgcactggtt ccagcagaag 120 acctggcttc tggagtccct 180 tcacaatcag cagcatggag 240 gttacccact cacgttcggc 300 caactgtatc catcttccca 360 tgtgcttctt gaacaacttc 420 gtgaacgaca aaatggcgtc 480 acagcatgag cagcaccctc 540 cctgtgaggc cactcacaag 600 agtgttag 648
<210> 127 <211> 237 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 127
Met ASp Phe His val Gin Ile Phe Ser Phe Met Leu ile Ser val Thr 1 5 10 15 val Ile Leu ser ser Gly Glu ile Val Leu Thr Gin ser pro Ala Leu 20 25 30 Met Ala Ala ser Pro Gly Glu Lys val Thr Ile Thr cys Ser Val Ser 35 40 45 Ser Thr ile ser ser Asn HIS Leu His Trp Phe Gin Gin Lys Ser Asp 50 55 60 Thr ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr Gly Thr ser Asn Leu Ala ser Gly 65 70 75 80 Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu 85 90 95 Thr He ser Ser Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin 100 105 110 Gin Trp Ser ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu 115 120 125 Leu Arg Arg Ala Asp Ala Ala pro Thr Val Ser ile Phe Pro Pro Ser 130 135 140 Ser Glu Gin Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn 145 150 155 160 Asn Phe Tyr Pro Lys 1 RS Asp Ile Asn Val Lys 170 Trp Lys Ile Asp Gly 17S Ser Glu Arg Gin Asn XOJ Gly Val Leu Asn ser Trp Thr Asp Gin Asp Ser Lys 180 185 190 ASp ser Thr Tyr ser Met ser ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp GlU 195 200 205 Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser 210 215 220 Thr ser Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 225 230 235
<210> 128 <211> 714 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 128 atggattttc atgtgcagat tttcagcttc atgctaatca gtgtcacagt cattttgtcc 60 agtggagaaa ttgtgctcac ccagtctcca gcactcatgg ctgcatctcc gggggagaag 120 gtcaccatca cctgcagtgt cagttcaact ataagttcca accacttgca ctggttccag 180 cagaagtcag acacctcccc caaaccctgg atttatggca catccaacct ggcttctgga 240 gtccctgttc gcttcagtgg cagtggatct gggacctctt attctctcac aatcagcagc 300 atggaggctg aggatgctgc cacttattac tgtcaacagt ggagtagtta cccactcacg 360 ttcggcgctg ggaccaagct ggagctgaga cgggctgatg ctgcaccaac tgtatccatc 420 ttcccaccat ccagtgagca gttaacatct ggaggtgcct cagtcgtgtg cttcttgaac 480 aacttctacc ccaaagacat caatgtcaag tggaagattg atggcagtga acgacaaaat 540 ggcgtcctga acagttggac tgatcaggac agcaaagaca gcacctacag catgagcagc 600 accctcacgt tgaccaagga cgagtatgaa cgacataaca gctatacctg tgaggccact 660 cacaagacat caacttcacc cattgtcaag agcttcaaca ggaatgagtg ttag 714 225 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
<210> 129 <211> 449 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 129
Glu vai Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu Leu val Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Leu Vai Lys Leu Ofi ser Cys Thr Ala Ser ASp Phe Asn ile Lys 3Ω ASp Phe Tyr Leu His bU Trp Met Arg Gin Arg pro GlU Gin Gly Leu Jv ASP Trp ile Gly 35 40 45 Arg Ile Asp Pro Glu Asn Gly ASp Thr Leu Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gin Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Thr ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gin Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Thr Thr Ala val Tyr Tyr cys 85 90 95 ser Arg Glu Ala ASP Tyr Phe His Asp Gly Thr Ser Tyr Trp Tyr Phe 100 105 110 Asp Vai Trp Gly Ala Gly Thr Thr Ile Thr val Ser ser Ala Lys Thr 115 120 125 Thr Pro Pro Ser Val Tyr pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gin Thr 130 135 140 Asn ser Met Val Thr Leu Gly cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu 145 150 155 160 Pro val Thr val Thr Trp Asn Ser Gly ser Leu Ser ser Gly val His 165 170 Thr 175 Thr Phe Pro Ala val Leu Gin Ser Asp Leu Tyr Leu Ser ser Ser 180 185 190 val Thr val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr val Thr Cys Asn 195 200 205 vai Ala His pro Ala ser ser Thr Lys val Asp Lys Lys Ile Val Pro 210 215 220 Arg Asp Cys Gly cys Lys «r» Pro cys Ile cys Thr 73C Val Pro Glu Val Ser J ser val Phe Ile phe ΡΓΟ pro Lys Pro Lys Asp val Leu Thr Ile tHU Thr 245 250 255 Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val val ASP Ile Ser Lys ASp Asp 260 265 Glu 270 Pro Glu val Gin Phe ser Trp Phe Val ASp ASP Val val His Thr 275 280 285 Ala Gin Thr Gin Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn ser Thr Phe Arg ser 290 295 300 Gly Glu vai Ser Glu Leu Pro ile Met His Gin Asp Trp Leu Asn Lys 305 310 315 Ile 320 Phe Lys Cys Arg val Asn ser Ala Ala Phe pro Ala pro Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gin val Tyr Thr 340 345 350 ile pro pro pro Lys Glu Gin Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr 355 360 365 cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp ile Thr val Glu Trp Gin 370 375 380 Gin Trp Asn Gly Gin Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Pro ile Met 385 390 395 400 Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe ile Tyr Ser Lys Leu Asn val Gin Lys 405 410 val 415 Glu Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr cys ser Leu His 420 425 430 Gly Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser pro 435 440 445
Lys <210> 130 <211> 1350
<212> ADN <213> Mus musculus 226 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <400> 130 gaggttcagc tgcagcagtc tggggctgaa tcctgcacag cttctgactt caacattaaa cctgaacagg gcctggactg gattggaagg gacccgaagt tccaggacaa ggccactctt ctgcagctca gcggcctgac atctgagacc gattatttcc acgatggtac ctcctactgg atcaccgtct cctcagccaa aacgacaccc gctgcccaaa ctaactccat ggtgaccctg ccagtgacag tgacctggaa ctctggatcc gtcctgcagt ctgacctcta cactctgagc cccagcgaga ccgtcacctg caacgttgcc aaaattgtgc ccagggattg tggttgtaag tctgtcttca tcttcccccc aaagcccaag gtcacgtgtg ttgtggtaga catcagcaag gtagatgatg tggaggtgca cacagctcag actttccgct cagtcagtga acttcccatc ttcaaatgca gggtcaacag tgcagctttc accaaaggca gaccgaaggc tccacaggtg gccaaggata aagtcagtct gacctgcatg gtggagtggc agtggaatgg gcagccagcg gacacagatg gctcttactt catctacagc gcaggaaata ctttcacctg ctctgtgtta aagagcctct cccactctcc tggtaaatga
<210> 131 <211> 468 <212> PRT <213> Mus musculus cttgtgaggc caggggcctt agtcaagttg 60 gacttctatc tacactggat gaggcagcgg 120 attgatcctg agaatggtga tactttatat 180 acaacagaca catcctccaa cacagcctac 240 actgccgtct attactgttc tagagaggcg 300 tacttcgatg tctggggcgc agggaccaca 360 ccatctgtct atccactggc ccctggatct 420 ggatgcctgg tcaagggcta tttccctgag 480 ctgtccagcg gtgtgcacac cttcccagct 540 agctcagtga ctgtcccctc cagcacctgg 600 cacccggcca gcagcaccaa ggtggacaag 660 ccttgcatat gtacagtccc agaagtatca 720 gatgtgctca ccattactct gactcctaag 780 gatgatcccg aggtccagtt cagctggttt 840 acgcaacccc gggaggagca gttcaacagc 900 atgcaccagg actggctcaa tggcaaggag 960 cctgccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020 tacaccattc cacctcccaa ggagcagatg 1080 ataacagact tcttccctga agacattact 1140 gagaactaca agaacactca gcccatcatg 1200 aagctcaatg tgcagaagag caactgggag 1260 catgagggcc tgcacaacca ccatactgag 1320 <400> 131
Met Lys cys Ser Trp val Ile Phe Phe Leu Met Ala val val Thr Gly 1 5 10 15 vai Asn ser Glu Vai Gin Leu Gin Gin ser Gly Ala Glu Leu val Arg 20 25 30 Pro Gly Ala Leu vai Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Asp Phe Asn Ile 35 40 45 Gin Lys ASD Phe Tyr Leu His Trp Met Arg Gin Arg Pro Glu Gly Leu 50 55 60 Asp 65 ΡΓΟ Trp ile Gly Arg lie 70 Lys Asp Pro Glu Asn Gly 75 Thr Thr Asp Thr Leu Tyr Asp 80 Asn Lys phe Gin Asp Ala Thr Leu Asp Thr Ser Ser 85 90 Thr 95 Thr Ala Tyr Leu Gin Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Thr Ala Val 100 105 Gly 125 Thr 110 Tyr Tyr cys 115 phe Ser Arg Glu Ala Asp 120 Ala Tyr Phe His Asp Thr ser Tyr Trp ASp vai Trp Gly 135 Gly Thr Thr Ile 140 val ser ser Ala Lys Thr Thr Pro pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly ser Ala 145 150 155 Val 160 Ala Gin Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Lys Gly Tyr 165 170 175 Phe Pro Glu pro val Thr Val Thr Trp Asn ser Gly Ser Leu ser Ser 180 185 190 Gly vai His Thr Phe pro Ala Val Leu Gin Ser Asp Leu Tyr Thr Leu 195 200 205 Glu Thr ser Ser Ser vai Thr val pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Val 227 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ 210 215 220 Thr Cys Asn val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys val Asp Lys Lys 225 230 Gly 235 240 ile Vai Pro Arg Asp cys Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu 245 250 255 val Ser Ser val Phe Ile phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp val Leu Thr 260 265 270 lie Thr Leu Thr Pro Lys val Thr cys Val Val val ASp ile Ser 275 Glu val Gin 280 285 Lys ÃSp ASp Pro Phe Ser Trp Phe Val ASp Asp Val Glu 290 295 300 Vai His Thr Ala Gin Thr Gin pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr 305 310 315 320 Phe Arg Ser Val ser Glu Leu Pro ile Met His Gin Asp Trp Leu Asn Glu 325 330 335 Gly Lys Phe Lys cys Arg val Asn Ser Ala Ala Phe pro Ala Pro 340 345 350 lie Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gin 355 360 365 vai Tyr Thr ile Pro Pro ,pro Lys Glu Gin Met Ala Lys Asp Lys Val 370 375 380 Ser Leu Thr cys Met ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp ile Thr Val 385 390 395 400 Glu Trp Gin Trp Asn Gly Gin Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin 405 Gly 410 415 Pro Ile Met Asp Thr Asp ser Tyr Phe Ile Tyr ser Lys Leu Asn 420 425 430 vai Gin Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser val 435 440 445 Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys ser Leu Ser His 450 455 460 ser Pro Gly Lys 465 <210> 132 <211> 1407
<212> ADN <213> Mus musculus <4 0 0> 132 atgaaatgca gctgggtcat cttcttcctg atggcagtgg ttacaggggt caattcagag 60 gttcagctgc agcagtctgg ggctgaactt gtgaggccag gggccttagt caagttgtcc 120 tgcacagctt ctgacttcaa cattaaagac ttctatctac actggatgag gcagcggcct 180 gaacagggcc tggactggat tggaaggatt gatcctgaga atggtgatac tttatatgac 240 ccgaagttcc aggacaaggc cactcttaca acagacacat cctccaacac agcctacctg 300 cagctcagcg gcctgacatc tgagaccact gccgtctatt actgttctag agaggcggat 360 tatttccacg atggtacctc ctactggtac ttcgatgtct ggggcgcagg gaccacaatc 420 accgtctcct cagccaaaac gacaccccca tctgtctatc cactggcccc tggatctgct 480 gcccaaacta actccatggt gaccctggga tgcctggtca agggctattt ccctgagcca 540 gtgacagtga cctggaactc tggatccctg tccagcggtg tgcacacctt cccagctgtc 600 ctgcagtctg acctctacac tctgagcagc tcagtgactg tcccctccag cacctggccc 660 agcgagaccg tcacctgcaa cgttgcccac ccggccagca gcaccaaggt ggacaagaaa 720 attgtgccca gggattgtgg ttgtaagcct tgcatatgta cagtcccaga agtatcatct 780 gtcttcatct tccccccaaa gcccaaggat gtgctcacca ttactctgac tcctaaggtc 840 acgtgtgttg tggtagacat cagcaaggat gatcccgagg tccagttcag ctggtttgta 900 gatgatgtgg aggtgcacac agctcagacg caaccccggg aggagcagtt caacagcact 960 ttccgctcag tcagtgaact tcceatcatg caccaggact ggcteaatgg caaggagttc 1020 aaatgcaggg tcaacagtgc agctttccct gcccccatcg agaaaaccat ctccaaaacc 1080 aaaggcagac cgaaggctcc acaggtgtac accattccac ctcccaagga gcagatggcc 1140 aaggataaag tcagtctgac ctgcatgata acagacttct tccctgaaga cattactgtg 1200 gagtggcagt ggaatgggca gccagcggag aactacaaga acactcagcc catcatggac 1260 acagatggct cttacttcat ctacagcaag ctcaatgtgc agaagagcaa ctgggaggca 1320 ggaaatactt tcacctgctc tgtgttacat gagggcctgc acaaccacca tactgagaag 1380 agcctctccc actctcctgg taaatga 1407
<210> 133 <211> 214 <212> PRT <213> Mus musculus 228 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <4 Ο 0> 133 ASP Ile Gin Met Thr Gin Ile Thr ser ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg val Ser 21e Ser cys Arg Ala ser Gin Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro ASp Gly Thr Phe Lys Leu Leu Ile Phe 35 40 45 Tyr Thr ser Arg Leu Leu ser Gly Val Pro ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Tyr Asn Leu Glu Gin 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr phe cys Gin Gin Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala 100 105 110 Pro Thr Val Ser lie Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gin Leu Thr Ser Gly 115 120 125 ile Gly Ala Ser val Val cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp 130 135 140 Gly Asn val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gin Asn Val Leu 145 150 155 160 Asn Ser Trp Thr Asp Gin ASp Ser Lys Asp ser Thr Tyr ser Met Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr 1 RO Leu Thr Lys Asp Glu 1 oc Tyr Glu Arg His Asn 1 QO Ser Tyr Thr cys Glu xou Ala Thr His Lys Thr Ioj Ser Thr Ser pro Ile Val Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Asn Glu cys 210
<210> 134 <211> 645 <212> ADN <213> Mus musculus <4 0 0> 134 gatatccaga tgacacagat tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagggtctcc 60 atcagttgca gggcaagtca agacattagc aattatttaa actggtatca gcagaaacca 120 gatggaactt ttaaactcct tatcttctac acatcaagat tactctcagg agtcccatca 180 aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctetca ccatttacaa cctggagcaa 240 gaagattttg ccacttactt ttgccaacag ggagatacgc ttccgtacac tttcggaggg 300 gggaccaagc tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 360 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 420 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggçagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 480 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 540 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 600 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gttag 645
<210> 135 <211> 234 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 135
Met 1 Met ser ser Ala Gin 5 Phe Leu Gly Leu 10 Leu Leu Leu Cys Phe 15 Gin Gly Thr Arg Cys 20 Asp ile Gin Met Thr 25 Gin Ile Thr Ser Ser 30 Leu Ser Ala Ser Leu 35 Asn Gly Asp Arg val Ser 40 Tyr ile Ser cys Arg Ala 45 Asp ser Gin Asp ile ser 50 Tyr Leu Asn Trp 55 Gin Gin Lys Pro 60 Gly Thr Phe Lys 65 Leu Leu Ile Phe Tyr 70 Thr Ser Arg Leu Leu 75 ser Gly Val Pro Ser 80 229 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Arg Phe ser Gly Ser Gly Ser Gly Tnr Asp Tyr ser Leu Thr Ile Tyr 85 Thr 90 95 Asn Leu GlU Gin Glu ASp Phe Ala Tyr Phe cys Gin Gin Gly Asp 100 105 110 Thr Leu pro Tyr Thr phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu ile Lys Arg 115 120 125 Ala Asp Ala Ala Pro Thr Vai Ser Ile Phe pro pro Ser ser Glu Gin 130 135 140 Leu Thr ser Gly Gly Ala Ser Vai Val cys phe Leu Asn Α5Π phe Tyr 145 150 ile 155 160 Pro Lys Asp ile Asn vai Lys Trp Lys ASp Gly Ser Glu Arg Gin 165 Thr 170 175 Asn Gly vai Leu Asn ser Trp Asp Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr 180 185 Thr 190 Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Lys Asp Glu Tyr Glu Arg 195 200 205 His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro 210 215 220 Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 225 230
<210 > 136 <211> 705 <212> ADN <213> Mus musculus < 4 Ο Ο > 136 atgatgtcct ctgctcagtt ccttggtctc ctgttgctct gttttcaagg taccagatgt 60 gatatccaga tgacacagat tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagggtctcc 120 atcagttgca gggcaagtca agacattagc aattatttaa actggtatca gcagaaacca 180 gatggaactt ttaaactcct tatcttctac acatcaagat tactctcagg agtcccatca 240 aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccatttacaa cctggagcaa 300 gaagattttg ccacttactt ttgccaacag ggagatacgc ttccgtacac tttcggaggg 360 gggaccaagc tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 420 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 480 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 540 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 600 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 660 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gttag 705
<210> 137 <211> 447 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 137
Glu Val Gin Leu Gin Gin ser Gly Pro Glu Leu Met Lys pro Gly Ala 1 5 10 Thr Phe Thr 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Asp Tyr 20 25 Thr 30 Asn Met HIS Trp Val Lys Gin Asn Gin Gly Lys Leu Glu Trp Ile 35 40 Gly 45 Gin Phe Gly Glu Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Tyr Asn Lys 50 55 60 Thr Thr Lys 65 Gly Lys Ala Thr Leu 70 Thr val Asp Lys Ser 75 Ser Ala Tyr 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu ASp ser Ala Val Tyr CyS 85 90 Phe 95 val Ala Arg Leu Gly Tyr Asp Asp Ile Tyr ASp Asp Trp Tyr Asp 100 105 Ala 110 Trp Gly Ala 115 Gly Thr Thr val Thr 120 val ser ser Lys 125 Thr Thr Pro Pro ser val Tyr pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gin Thr Asn Ser 130 135 140 Glu val Met Val Thr Leu Gly cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Pro 145 150 155 Val 160 Thr val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly His Thr Phe 230 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ 165 170 175 ΡΓΟ Ala Vai Leu Gin ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr 180 185 Thr 190 Ala vai pro Ser Ser Thr Trp Pro ser Glu Val Thr Cys Asn Val 195 200 205 His pro Ala Ser Ser Thr Lys Vai Asp Lys Lys Ile val pro Arg A5P 210 215 220 Cys Gly cys Lys Pro cys Ile Cys Thr vai Pro Glu Val ser Ser val 225 230 235 240 Phe ile Phe pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr 245 250 255 Glu ΡΓΟ Lys vai Thr >ÍA cys Vai Vai Vai Asp ile Ser Lys Asp Asp 17(1 Pro vai Gin Phe Ser Trp Phe Vai Asp Asp val Glu Val HIS tf U Thr Ala Gin 275 280 285 Thr Gin Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn ser Thr Phe Arg Ser Val Ser 290 295 300 Glu Glu Leu Pro 11 e Met His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Phe Lys 305 310 315 320 Cys Arg Vai Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 ser Lys Thr Lys Gly Arg pro Lys Ala Pro Gin Val Tyr Thr Ile Pro 340 345 350 Pro Pro Lys Glu Gin Met Ala Lys Asp Lys val Ser Leu Thr cys Met 355 360 365 lie Thr Asp Phe Phe pro Glu ASp ile Thr val Glu Trp Gin Trp Asn 370 375 380 Gly Gin Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin Pro ile Met ASp Thr 385 390 395 Val Gin 400 ASp Gly ser Tyr Phe Ile Tyr ser Lys Leu Asn Lys ser Asn 405 410 415 Trp Glu Ala Gly 420 Asn Thr Phe Thr 4Ϊ5 ser val Leu His Gl u 430 Gly Leu His Asn His HiS Thr Glu Lys Ser Leu ser His Ser pro Gly Lys 435 440 445 <210 > 138 <211> 1344 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 138 gaggtccaac tcctgcaagg caaggaaaga aaccagaagt atggagctcc tacgatgata gtctcctcag caaactaact acagtgacct cagtctgacc gagaccgtca gtgcccaggg ttcatcttcc tgtgttgtgg gatgtggagg cgctcagtca tgcagggtca ggcagaccga gataaagtca tggcagtgga gatggctctt aatactttca ctctcccact tgcaacagtc cttctggata ccctagagtg tcaagggcaa gcagcctgac tctacgacga ccaaaacgac ccatggtgac ggaactctgg tctacactct cctgcaacgt attgtggttg ccccaaagcc tagacatcag tgcacacagc gtgaacttcc acagtgcagc aggctccaca gtctgacctg atgggcagcc acttcatcta ectgctctgt ctcctggtaa tggacctgaa tacattcact gataggagaa ggccacattg atctgaggac ctggtacttc acccccatct cctgggatgc atccctgtcc gagcagctca tgcccacccg taagccttgc caaggatgtg caaggatgat tcagacgcaa catcatgcac tttccctgcc ggtgtacacc catgataaca agcggagaac cagcaagctc gttacatgag atga ctaatgaagc ctggggcttc agtgaagatg 60 gactacaaca tgcactgggt gaagcagaac 120 attaatccta acagtggtgg tgctggctac 180 actgtagaca agtcctccac cacagcctac 240 tctgcagtct attactgtgc aagattgggc 300 gatgtctggg gcgcagggac cacggtcacc 360 gtctatccac tggcccctgg atctgctgcc 420 ctggtcaagg gctatttccc tgagccagtg 480 agcggtgtgc acaccttccc agctgtcctg 540 gtgactgtcc cctccagcac ctggcccagc 600 gccagcagca ccaaggtgga caagaaaatt 660 atatgtacag tcccagaagt atcatctgtc 720 ctcaccatta ctctgactcc taaggtcacg 780 cccgaggtcc agttcagctg gtttgtagat 840 ccccgggagg agcagttcaa cagcactttc 900 caggactggc tcaatggcaa ggagttcaaa 960 cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa 1020 attccacctc ccaaggagca gatggccaag 1080 gacttcttcc ctgaagacat tactgtggag 1140 tacaagaaca ctcagcccat catggacaca 1200 aatgtgcaga agagcaactg ggaggcagga 1260 ggcctgcaca accaccatac tgagaagagc 1320 1344 <210> 139 <211> 466 <212> PRT <213> Mus musculus 231 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <4 Ο 0> 139
Met 1 Gly Trp Ser Vai Leu Ser Glu 20 Pro Gly Ala 35 Tyr Ser Thr Asp 50 Trp Asn Glu 65 Gin 11 e Gly Lys Phe Lys Thr Ala Tyr Met 100 Tyr Tyr Cys 115 val Ala Phe Asp 130 Trp Thr 145 Thr Pro Pro Thr Asn Ser Met Glu pro val Thr 180 His Thr Phe 195 Pro Ser vai 210 Thr Val Asn 225 val Ala His Pro Arg Asp cys Ser Ser val Phe 260 Thr Leu Thr 275 Pro Asp Pro 290 Glu Val Thr 305 Ala Gin Thr Ser Val ser Glu Glu Phe Lys Cys 340 Lys Thr ile 355 Ser Thr Ile 370 pro Pro Thr 385 Cys Met ile Gin Trp Asn Gly Met Asp Thr Asp 420 Lys Ser Asn 435 Trp Glu Gly 465 Gly 450 Lys Leu His
Trp 5 Thr Phe Leu val Gin Leu Gin val Lys Met ser 40 Met His Trp 55 val Glu ile 70 Asn Pro Gly 85 Lys Ala Thr Glu Leu Arg Ser Arg Leu Gly Tyr 120 Thr Gly Ala Gly 135 ser val 150 Tyr Pro val 165 Thr Leu Gly val Thr Trp Asn Ala val Leu Gin 200 Pro Ser Ser 215 Thr pro Ala 230 ser Ser Gly 245 Ile cys Lys Pro Phe Pro Pro Lys Val Thr Cys 280 Gin Phe ser 295 Trp Gin Pro 310 Pro Arg Glu Leu 325 ile Met Arg, Val Asn ser Lys Thr Lys Gly 360 Pro Lys GlU 375 Gin Thr Asp 390 Phe Phe Gin 405 Pro Ala Glu Gly Ser Tyr Phe Glu Ala Gly Asn 440 Asn His His 455 Thr
Phe Leu 10 Leu Ser Gin 25 Ser Gly Pro Cys Lys Ala Ser Lys Gin Asn Gin 60 Asn Ser Gly 75 val Gly Leu Thr 90 Thr ASp Leu 105 ser Glu Asp Asp Ile Tyr Thr val Thr Val 140 Leu Ala Pro 155 Gly Cys Leu 170 Val Lys ser 185 Gly Ser Leu Ser ASp Leu Tyr Trp Pro Ser Glu 220 Thr Lys Val 235 Cys Asp Cys Ile 250 Thr Lys 265 Pro Lys Asp Val Val Val Asp Phe val Asp Asp 300 Glu Gin Phe 315 Asn His Gin 330 Asp Trp Ala 345 Ala Phe Pro Arg Pro Lys Ala Met Ala Lys Asp 380 Pro Glu ASP 395 ile Asn Tyr 410 Lys Asn Ile 425 Tyr Ser Lys Thr Phe Thr Cys Glu Lys Ser Leu 460
Gly Thr Ala 15 Gly Glu Leu 30 Met Lys Gly 45 Tyr Thr Phe Gly Lys Thr Leu Ala Gly Tyr Asn 80 Lys ser ser 95 Thr ASp ser 110 Ala Val Asp 125 Asp Trp Tyr Ser ser Ala Lys Ser Ala Ala Gin 160 Gly Tyr phe 175 Pro ser ser 190 Gly val Thr 205 Leu Ser Ser Thr val Thr Cys Lys Lys Ile Val 240 val Pro Glu 255 val val Leu 270 Thr ile ile 285 Ser Lys Asp val Glu Val His Ser Thr Phe Arg 320 Leu Asn Gly 335 Lys Ala Pro 350 Ile Glu Pro 365 Gin Val Tyr Lys Val Ser Leu Thr Val Glu Trp 400 Thr Gin Pro 415 Ile Leu Asn 430 val Gin ser 445 val Leu His Ser His ser Pro
<210> 140 <211> 1401 <212> ADN <213> Mus musculus 232 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <400> 140 atgggatgga gctggacctt gtccaactgc aacagtctgg tgcaaggctt ctggatatac ggaaagaccc tagagtggat cagaagttca agggcaaggc gagctccgca gcctgacatc gatgatatct acgacgactg tcctcagcca aaacgacacc actaactcca tggtgaccct gtgacctgga actctggatc tctgacctct acactctgag accgtcacct gcaacgttgc cccagggatt gtggttgtaa atcttccccc caaagcccaa gttgtggtag acatcagcaa gtggaggtgc acacagctca tcagtcagtg aacttcccat agggtcaaca gtgcagcttt agaccgaagg ctccacaggt aaagtcagtc tgacctgcat cagtggaatg ggcagccagc ggctcttact tcatctacag actttcacct gctctgtgtt tcccactctc ctggtaaatg tctcttcctc ctgtcaggaa acctgaacta atgaagcctg attcactgac tacaacatgc aggagaaatt aatcctaaca cacattgact gtagacaagt tgaggactct gcagtctatt gtacttcgat gtctggggcg cccatctgtc tatccactgg gggatgcctg gtcaagggct cctgtccagc ggtgtgcaca cagctcagtg actgtcccct ccacccggcc agcagcacca gccttgcata tgtacagtcc ggatgtgctc accattactc ggatgatccc gaggtccagt gacgcaaccc cgggaggagc catgcaccag gactggctca ccctgccccc atcgagaaaa gtacaccatt ccacctccca gataacagac ttcttccctg ggagaactac aagaacactc caagctcaat gtgcagaaga acatgagggc ctgcacaacc a ctgcaggtgt cctctctgag 60 gggcttcagt gaagatgtcc 120 actgggtgaa gcagaaccaa 180 gtggtggtgc tggctacaac 240 cctccaccac agcctacatg 300 actgtgcaag attgggctac 360 cagggaccac ggtcaccgtc 420 cccctggatc tgctgcccaa 480 atttccctga gccagtgaca 540 ccttcccagc tgtcctgcag 600 ccagcacctg gcccagcgag 660 aggtggacaa gaaaattgtg 720 cagaagtatc atctgtcttc 780 tgactcctaa ggtcacgtgt 840 tcagctggtt tgtagatgat 900 agttcaacag cactttccgc 960 atggcaagga gttcaaatgc 1020 ccatctccaa aaccaaaggc 1080 aggagcagat ggccaaggat 1140 aagacattac tgtggagtgg 1200 agcccatcat ggacacagat 1260 gcaactggga ggcaggaaat 1320 accatactga gaagagcctc 1380 1401
<210> 141 <211> 214 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado <400> 141 ASp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr lie Thr cys Arg Ala ser Gl n Asp Ile ser Asn Tyr 20 25 30 Ile Leu ASfl Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Phe Gly Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Leu Ser Gly val Pro Ser Arg Ser 50 55 60 Gin Ser Gly ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr ile Ser Ser Leu pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr at Tyr Tyr Cys Gin Gin on Gly Asp Thr Leu Pro 95 Tyr Thr Phe Gly Gly O 3 Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr val Ala Ala 10O 105 110 Gly ΡΓΟ ser val phe He Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys ser 115 120 125 Glu Ala Thr Ala Ser val Val cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg 130 135 140 Gin Lys val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin ser Gly Asn ser 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gin ASP Ser Lys ASp ser Thr Tyr Ser Leu ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 ser Ala Cys GlU val Thr His Gin Gly Leu Ser ser Pro val Thr Lys 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210
<210> 142 <211> 642 <212> ADN <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado 233 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <400> 142 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctctccgcat ccgtaggcga ccgcgtaacc 60 ataacatgta gagcatctca agatatttcc aactatttga attggtacca acaaaaaccc 120 ggcaaagcac ctaaactcct catttactat acatcaagac tcctctccgg cgttccatca 180 cgattctcag gctccggctc cggcacagat ttcacactca ctatttcctc cctccaacca 240 gaagattttg caacctatta ctgtcaacaa ggcgatacac tcccatacac attcggcggc 300 ggcacaaaag ttgaaattaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcecag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 143 <211> 236 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado <400> 143
Met ASp Met Arg vai Pro Ala Gin Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15 Leu Arg Gly Ala Arg Cys Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro ser Ser 20 25 30 Ala Leu Ser Ala Ser vai Gly Asp Arg Vai Thr Ile Thr Çys Arg Ser 35 40 45 Gly Gin ASp lie ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Lys 50 55 60 Gly Val Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Leu Ser 65 70 75 80 Pro ser Arg phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 85 90 95 Gin He Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr cys Gin 100 105 110 Ile Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys val Glu 115 120 125 Lys Arg Thr Vai Ala Ala pro Ser Vai Phe He Phe pro pro ser Asp 130 135 140 Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser vai Vai Cys Leu Leu Asn Asn 145 ISO 155 Ala 160 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys vai Gin Trp Lys vai Asp Asn Leu 165 170 175 Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser vai Thr GlU Gin Asp ser Lys Asp 180 185 190 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 195 200 205 Gly Glu Lys His Lys vai Tyr Ala cys Glu vai Thr His Gin Leu ser 210 215 220 Ser Pro Vai Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235
<210> 144 <211> 708 <212> ADN <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado 234 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <400> 144 atggacatga gggtccccgc tcagctcctg gggctcctgc tactctggct ccgaggtgcc agatgtgaca tccagatgac ccagtctcca tcctccctct ccgcatccgt aggcgaccgc gtaaccataa catgtagagc atctcaagat atttccaact atttgaattg gtaccaacaa aaacccggca aagcacctaa actcctcatt tactatacat caagactcct ctccggcgtt ccatcacgat tctcaggctc cggctccggc acagatttca cactcactat ttcctccctc caaccagaag attttgcaac ctattactgt caacaaggcg atacactccc atacacattc ggcggcggca caaaagttga aattaaacgt acggtggctg caccatctgt cttcatcttc ccgccatctg atgagcagtt gaaatctgga actgcctctg ttgtgtgcct gctgaataac ttctatccca gagaggccaa agtacagtgg aaggtggata acgccctcca atcgggtaac tcccaggaga gtgtcacaga gcaggacagc aaggacagca cctacagcct cagcagcacc ctgacgctga gcaaagcaga ctacgagaaa cacaaagtct acgcctgcga agtcacccat cagggcctga gctcgcccgt cacaaagagc ttcaacaggg gagagtgt
<210> 145 <211> 449 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado <400> : 145 Glu Val Gin Leu val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser val Lys val 20 Trp ser Cys cys Ala ser 25 Pro Gly Tyr Thr Phe Thr 30 Glu ASp Tyr Asn Met His val Arg Gin Ala Gly Gin Gly Leu Trp Met 35 40 45 Gly Glu Ile Asn pro Asn ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser 85 Leu Arg ser ASp Asp 90 Thr Ala val Tyr ST Cys Ala Arg Leu Gly 100 Gly U J Tyr Asp Asp ile Tyr 105 val j yj ASp Asp Trp Tyr Phe 110 Thr ASP Val Trp Gly Gin Thr Thr val Thr Ser Ser Ala Ser Lys Gly 115 Ala 120 125 pro Ser val Phe Pro Leu pro cys Ser Arg ser Thr ser GlU Ser 130 135 val 140 Thr Ala Ala LeU Gly Cys Leu Lys ASp Tyr Phe pro GlU Pro Val 145 ISO Gly Ala 155 160 Thr val Ser Trp Asn Ser Leu Thr Ser Gly val Hl S Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gin ser ser Gly Leu Tyr ser Leu ser ser val val 180 185 190 Thr val Pro Ser ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val 195 Thr 200 val 205 Asp Hi s Lys Pro ser Asn Lys Asp Lys Thr val Glu Arg Lys 210 215 220 Cys Cys val Glu cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro val Ala Gly Pro 225 Phe 230 235 240 Ser val Phe Leu Pro Pro Lys Pro Lys ASp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu val Thr Cys val Val val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu val Gin phe Asn Trp Tyr val Asp Gly val Glu val Hl S Asn 275 Glu 280 Gin 285 Ala Lys Thr Lys pro Arg Glu Phe Asn Ser Thr Phe Arg val 290 295 Gin 300 Val Ser Val Leu Thr Val Val His Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 Gly 315 320 Tyr Lys Cys Lys val Ser Asn Lys Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 235 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Thr Ile ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Vai Tyr Thr 340 Glu 345 350 Leu Pro pro ser Arg GlU Met Thr Lys Asn Gin Vai ser Leu Thr 355 360 365 cys Leu vai Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Vai Glu Trp Glu 370 Gin 375 380 Ser Asn Gly Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu 385 Gly 390 Phe 395 400 Asp ser Asp Ser Phe Leu Tyr ser Lys Leu Thr vai Asp Lys Gin 405 vai 410 415 Ser Arg Trp Gin Gly Asn Phe Ser cys ser vai Met His Glu Ala His 420 Thr Gin 425 430 Leu Asn His Tyr Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Giy 435 440 44S
Lys
<210> 146 <211> 1347 <212> ADN <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado tggtgcagag caagcggata gattggaatg tcaaagggag gatcacttag tatatgatga cctccaccaa gcacagcggc ggaactcagg gactctactc acacctgcaa aatgttgtgt tcttcccccc tggtggtgga tggaggtgca tggtcagcgt aggtctccaa agccccgaga aggtcagcct agagcaatgg gctccttctt tcttctcatg ccctgtctcc <400> 146 gaggtgcagc tcttgtaaag ccaggacaag aatcaaaaat atggaactgc tatgatgata gtctctagtg acctccgaga acggtgtcgt cagtcctcag acccagacct gttgagcgca tcagtcttcc gtcacgtgcg gtggacggcg acgttccgtg tacaagtgca accaaagggc accaagaacc gtggagtggg gactccgacg caggggaacg aagagcctct cggcgccgag tacatttaca gatgggcgaa agttacaatg aagcgacgat ctggtatttc gggcccatcg cctgggctgc cgctctgacc cctcagcagc cgtagatcac cgagtgccca aaaacccaag cgtgagccac taatgccaag cctcaccgtt caaaggcctc accacaggtg gacctgcctg gcagccggag cctctacagc ctccgtgatg gggtaaa gtaaaaaaac gattacaaca attaacccta acaacagaca acagctgtat gatgtttggg gtcttccccc ctggtcaagg agcggcgtgc gtggtgaccg aagcccagca ccgtgcccag gacaccctca gaagaccccg acaaagccac gtgcaccagg ccagccccca tacaccctgc gtcaaaggct aacaactaca aagctcaccg catgaggctc caggagcaag tgcattgggt atagtggagg caagcacttc actattgcgc gccagggaac tggcgccctg actacttccc acaccttccc tgccctccag acaccaaggt caccacctgt tgatctcccg aggtccagtt gggaggagca actggctgaa tcgagaaaac ccccatcccg tctaccccag agaccacacc tggacaagag tgcacaacca cgttaaagtt 60 aagacaagcg 120 agcaggctac 180 aacagcatat 240 acgacttggg 300 aacagttacc 360 ctccaggagc 420 cgaaccggtg 480 agctgtccta 540 caacttcggc 600 ggacaagaca 660 ggcaggaccg 720 gacccctgag 780 caactggtac 840 gttcaacagc 900 cggcaaggag 960 catctccaaa 1020 ggaggagatg 1080 cgacatcgcc 1140 tcccatgctg 1200 caggtggcag 1260 ctacacgcag 1320 1347
<210> 147 <211> 468 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado <400> 147
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Vai Ala Ala Ala Thr Gly 1 5 10 15 '
Ala His ser Glu Vai Gin Leu Vai Gin Ser Gly Ala Glu Vai Lys Lys 20 25 30
Pro Gly Ala Ser Vai Lys vai Ser cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 „
Thr Asp Tyr Asn Met His Trp vai Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu 50 55 60 236 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Glu Trp Met Gly 65 Gin Lys Phe Lys Thr Ala Tyr Met 100 Tyr Tyr cys Ala 115 phe Asp 1 3Π Val Trp Thr IjU Lys Gly Pro 145 Ser Glu Ser Thr Glu Pro Val Thr 180 His Thr Phe Pro 195 ser val Val Thr 210 Cys Asn Val Asp 225 Glu Arg Lys Cys Ala Gly Pro Ser ile 260 Met Ser Arg Glu 275 His ASp Pro 290 Val His Asn Ala 305 Phe Arg val val Gl y Lys Glu Tyr 340 Ile Glu Lys Thr 355 val Tyr Thr Leu 370 ser Leu Thr Cys 385 Glu Trp Glu Ser Pro Met Leu Asp 420 Val Asp Lys Ser 435 Met His Glu Ala 450 Ser pro Gly Lys 465 <21 o> : 148 <21 i> : 140' 1 <212> ADN <213> Mus musculus
Glu ile 70 Asn pro Asn Gly 85 Arg Val Thr Met Glu Leu Arg Ser Leu 105 Arg Leu Gly Tyr 120 Thr Asp Gly Gin Gly 135 Phe Thr ser val 150 pro Leu Ala 165 Ala Leu Gly Cys val ser Trp Asn Ser 185 Ala Val Leu Gin 200 ser val Pro ser 215 ser Asn His Lys 230 Pro ser Asn cys 245 val Glu cys Pro Val Phe Leu Phe Pro 265 Thr Pro Glu val 280 Thr Glu val Gin 295 Phe Asn Lys Thr 310 Lys Pro Arg Ser 325 Val Leu Thr Val Lys Cys Lys Val Ser 345 Ile ser Lys Thr 360 Lys Pro Pro Ser 375 Arg Glu Leu val 390 Lys Gly Phe Asn 405 Ser Gly Gin Pro Glu Asp Gly ser Phe 425 Gly Arg Trp Gin Gin 440 Leu His Asn 455 His Tyr
Ser Gly 75 Thr Gly Ala Thr 90 Arg Asp Thr Ser Asp Asp ASp Ile Tyr Asp 125 ser Val Thr Val 140 Ala pro 155 cys Ser Leu 170 val Lys Asp Gly Ala Leu Thr Ser Gly Leu Tyr 205 Phe Gly Thr 220 Gin Thr Lys 235 val Asp pro 250 Cys Pro Ala pro Lys pro Lys cys val Val val 285 Trp Tyr Val 300 Gin Asp Glu Glu 315 Phe val 330 His Gin Asp Asn Lys Gly Leu Gly Gin Pro Arg 365 Lys Glu Met Thr 380 Tyr pro 395 ser Asp Asn 410 Asn Tyr Lys Phe Leu Tyr Ser Asn val Phe ser 445 Thr Gin Lys 460 Ser
Gly Tyr Asn Ser Thr 80 Ser Thr 95 Ala Val 110 Asp Trp Tyr ser Ala Ser Arg Ser Thr Tyr Phe 160 Pro ser 175 Gly val 190 Ser Leu Ser Thr Tyr Thr Lys Thr val Pro pro 240 Val Asp 255 Thr Leu 270 ASp val Ser Gly val Glu Asn ser Thr Trp Leu 320 Asn Pro 335 Ala Pro 350 GlU pro Gin Asn Gin val ile Ala val Thr Thr 400 Pro Lys 415 Leu Thr 430 Cys ser Val Leu Ser Leu <400> 148 atggactgga cctggaggat cctcttcttg gtggcagcag gtgcagctgg tgcagagcgg cgccgaggta aaaaaaccag tgtaaagcaa gcggatatac atttacagat tacaacatgc ggacaaggat tggaatggat gggcgaaatt aaccctaata caaaaattca aagggagagt tacaatgaca acagacacaa gaactgcgat cacrtagaag cgacgataca gctgtatact gatgatatat atgatgactg gtatttcgat gtttggggcc tctagtgcct ccaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg ccacaggagc gagcaagcgt attgggtaag gtggaggagc gcacttcaac attgcgcacg agggaacaac cgccctgctc ccactccgag 60 taaagtttct 120 acaagcgcca 180 aggctacaat 240 agcatatatg 300 acttgggtat 360 agttaccgtc 420 caggagcacc 480 237 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ cagcggccct actcaggcgc tctactccct cctgcaacgt gttgtgtcga tccccccaaa tggtggacgt aggtgcataa tcagcgtcct tctccaacaa cccgagaacc tcagcctgac gcaatgggca ccttcttcct tctcatgctc tgtctccggg tccgagagca gtgtcgtgga tcctcaggac cagacctaca gagcgcaaat gtcttcctct acgtgcgtgg gacggcgtgg ttccgtgtgg aagtgcaagg aaagggcagc aagaaccagg gagtgggaga tccgacggct gggaacgtct agcctctccc gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 540 tctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccagc tgtcctacag 600 cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcaa cttcggcacc 660 agatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagacagtt 720 gtgcccaccg tgcccagcac cacctgtggc aggaccgtca 780 acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 840 gagccacgaa gaccccgagg tccagttcaa ctggtacgtg 900 tgccaagaca aagccacggg aggagcagtt caacagcacg 960 caccgttgtg caccaggact ggctgaacgg caaggagtac 1020 aggcctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaaacc 1080 acaggtgtac accctgcccc catcccggga ggagatgacc 1140 ctgcctggtc aaaggcttct accccagcga catcgccgtg 1200 gccggagaac aactacaaga ccacacctcc catgctggac 1260 ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 1320 cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 1380 taaa 1404
<210> 149 <211> 214 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 149
Asp 1 Ile Gin Met Thr c Gin Thr Thr JL Asp Arg val Thr 20 Ile ser cys Arg 1 Leu Asn Trp 35 Thr Phe Gin Gin Lys pro 40 Ser Phe Tyr 50 Gly Ser Arg Leu Hi S 55 Tyr ser 65 Glu Ser Gly Thr Asp 70 Tyr ser Asp ile Ala Thr 85 Gly Phe Cys Thr Phe Gly Gly 100 Thr Lys Leu pro Thr val 115 ser Ile Phe pro pro 120 Gly Ala 130 Ser val val cys Phe 135 Leu Asn 145 vai Lys Trp Lys Ile 150 ASp Gly Asn Ser Trp Thr ASp 165 Leu Gin Asp Ser Ser Thr Leu Thr 180 Ala Asn Thr Lys Asp Thr Phe cys Asn 210 Glu 195 Arg Thr Glu His cys Lys Thr 200
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 10 15 Ala Ser Gin Asp Ile ser Asn Tyr 25 30 Asp Gly Thr Leu Lys as Leu Leu Xle Gly val Pro Ser fifl Arg Phe Ser Gly Leu Thr Ile OU Ser Asn Leu Glu Gin 75 80 Gin Gin Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 90 95 Glu Ile Arg Arg Ala Asp Ala Ala 105 110 ser ser GlU Gin Leu Thr ser Gly 125 Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile 140 ser Glu Arg Gin Asn Gly val Leu 155 Thr 160 Lys Asp Ser Tyr Ser Met ser 170 Glu 175 Glu Tyr Arg His Asn ser Tyr 185 190 Ser Thr Ser Pro ile val Lys ser 205
<210> 150 <211> 645 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 150 gatatccaga tgacacagac tacatcctcc atcagttgca gggcaagtca ggacattagc gatggaactc ttaaactcct gatcttctac aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat gaagatattg ccacttactt ttgccaacag gggaccaagc tggaaataag acgggctgat tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac ttgaccaagg acgagtatga acgacataac tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc 60 aattattcaa actggtttca gcagaaacca 120 acatcaagat tacactcagg agttccatca 180 tattctctca ecattagcaa cctggagcaa 240 ggtgatacgc ttccgtacac gttcgggggg 300 gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 360 tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 420 gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 480 agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 540 agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 600 aggaatgagt gttag 645 238 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
<210 > 151 <211> 234 <212> PRT <213> Mus musculus <4 Ο 0> 151
Met Met ser Ser Al a Gin Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu cys Phe Gin 1 5 10 15 Gly Thr Arg Cys ASp ile Gin Met Thr ος Gin Thr Thr Ser ser 30 Leu Ser Ala Ser Leu ZU Gly ASP Arg Val Thr xle ser Cys Arg Ala ser Gin Asp 35 40 45 Gly Thr lie Ser Asn Tyr Leu Asn Trp phe Gin Gin Lys Pro Asp Leu 50 55 60 val Lys cc Leu Leu xle Phe Tyr ?n Thr ser Arg Leu His 7 C ser Gly pro Ser OJ Arg Phe ser Gly ser f\) Gly Ser Gly Thr Asp Tyr ser Leu Thr ile u u Ser 85 90 Gin 95 Asn Leu Glu Gin Glu Asp lie Ala Thr Tyr phe cys Gin Gly Asp 100 105 110 Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Arg Arg 115 120 125 Glu Ala Asp Ala Ala Pro Thr val ser ile Phe pro Pro Ser ser Gin 130 135 140 Phe Leu Thr Ser Gly Gly Ala ser val Val Cys phe Leu Asn Asn Tyr 145 150 155 Glu 160 Pro Lys Asp lie Asn val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Arg Gin 165 170 175 Asn Gly val Leu Asn ser Trp Thr Asp Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr 180 185 190 Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr LeU Thr Lys Asp GlU Tyr GlU Arg 195 Glu 200 205 Thr HÍS Asn Ser Tyr Thr cys Ala Thr His Lys Thr Ser Ser Pro 210 215 220 lie val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 225 230
<210 > 152 <211> 705 <212> ADN <213> Mus musculus <4 Ο 0> 152 taccagatgt 60 cagagtcacc 120 gcagaaacca 180 agttccatca 240 cctggagcaa 300 gttcgggggg 360 cttcccacca 420 caacttctac 480 tggcgtcctg 540 caccctcacg 600 tcacaagaca 660 705 atgatgtcct ctgctcagtt ccttggtctc ctgttgctct gttttcaagg gatatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga atcagttgca gggcaagtca ggacattagc aattatttaa actggtttca gatggaactc ttaaactcct gatcttctac acatcaagat tacactcagg aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccattagcaa gaagatattg ccacttactt ttgccaacag ggtgatacgc ttccgtacac gggaccaagc tggaaataag acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gttag
<210> 153 <211> 447 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 153
Glu val Gin Leu Gin Gin ser Gly Pro Glu Leu Met Lys pro Gly Ala 15 10 15 239
ΕΡ 1 891 101/PT ser vai Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Asn Met His Trp vai Lys Gin Asn Gin Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asn Pro Asn ser Gly Gly Ser Gly Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60 Ala Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val ASP Lys ser ser ser Thr Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr ser Glu Asp ser Ala val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Leu vai 1 ΠΩ Tyr Asp Gly ser Tyr ιης Glu Asp Trp Tyr Phe i i/ι ASp Val Trp Gly Ala xuu Gly Thr Thr val Thr Xw i7 Val Ser Ser Ala Lys j»lv Thr Thr Pro 115 120 125 Pro ser vai Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gin Thr Asn Ser 130 135 140 Met vai Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 Thr 160 Thr vai Thr Trp Asn ser Gly Ser Leu Ser ser Gly Val His Phe 165 170 175 Pro Ala vai Leu Gin ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser val Thr 180 185 190 Vai Pro ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr val Thr Cys Asn Val Ala 195 200 205 His Pro Ala Ser Ser Thr Lys val Asp Lys Lys ile val pro Arg Asp 210 215 220 cys Gly cys Lys Pro cys ile Cys Thr val Pro Glu val Ser Ser Val 225 230 235 240 Phe ile phe pro Pro Lys pro Lys Asp val Leu Thr ile Thr Leu Thr 245 250 255 Pro Lys Vai Thr Cys val val val Asp JCC Ile Ser Lys Asp Asp 77(\ pro Glu vai Gin Phe ser Trp Phe Val Asp CUJ ASp val Glu val His H\j Thr Ala Gin 275 280 285 Thr Gin pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn ser Thr Phe Arg ser Val Ser 290 295 300 Glu Leu Pro Ile Met His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys 305 310 315 320 cys Arg vai Asn ser Ala Ala Phe Pro Ala pro ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Thr Lys Gly Arg pro Lys Ala 34c Pro Gin Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gin Met Ala Lys JTJ Asp Lys val Ser Leu 3 jU Thr Cys Met 355 360 365 Ile Thr Asp phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val GlU Trp Gin Trp Asn 370 375 380 Gly Gin pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin pro Ile Met Asp Thr 385 390 395 400 ASP Gly Ser Tyr Phe ile Tyr ser Lys Leu Asn val Gin Lys ser Asn 405 410 415 Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr cys Ser Val Leu HÍS Glu Gly Leu 420 Thr Glu 425 430 His Asn Hi s His Lys Ser Leu ser His Ser Pro Gly Lys 435 440 445
<210 > 154 <211> 1344 <212> ADN <213> Mus musculus <4 0 0> 154 gaggtccagc tgcaacagtc tggacctgaa ctaatgaagc ctggggcttc agtgaagatg 60 tcctgcaagg cttctggata cacattcact gactacaaca tgcactgggt gaaacagaac 120 caaggaaaga gcctagagtg gataggagaa attaatccta acagtggtgg tagtggctac 180 aaccaaaagt tcaaaggcaa ggccacattg actgtagaca agtcttccag cacagcctac 240 atggagctcc gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagattggtc 300 tacgatggca gctacgagga etggtacttc gatgtctggg gcgcagggac cacggtcacc 360 240 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ gtctcctcag ccaaaacgac caaactaact ccatggtgac acagtgacct ggaactctgg cagtctgacc tctacactct gagaccgtca cctgcaacgt gtgcccaggg attgtggttg ttcatctrcc ccccaaagcc tgtgttgtgg tagacatcag gatgtggagg tgcacacagc cgctcagtca gtgaacttcc tgcagggtca acagtgcagc ggcagaccga aggctccaca gataaagtca gtctgacctg tggcagtgga atgggcagcc gatggctctt acttcatcta aatactttca cctgctctgt ctctcccact ctcctggtaa acccccatct gtctatccac cctgggatgc ctggtcaagg atccctgtcc agcggtgtgc gagcagctca gtgactgtcc tgcccacccg gccagcagca taagccttgc atatgtacag caaggatgtg ctcaccatta caaggatgat cccgaggtcc tcagacgcaa ccccgggagg catcatgcac caggactggc tttccctgcc cccatcgaga ggtgtacacc attccacctc catgataaca gacttcttcc agcggagaac tacaagaaca cagcaagctc aatgtgcaga gttacatgag ggcctgcaca atga tggcccctgg atctgctgcc 420 gctatttccc tgagccagtg 480 acaccttccc agctgtcctg 540 cctccagcac ctggcccagc 600 ccaaggtgga caagaaaatt 660 tcccagaagt atcatctgtc 720 ctctgactcc taaggtcacg 780 agttcagctg gtttgtagat 840 agcagttcaa cagcactttc 900 tcaatggcaa ggagttcaaa 960 aaaccatctc caaaaccaaa 1020 ccaaggagca gatggccaag 1080 ctgaagacat tactgtggag 1140 ctcagcccat catggacaca 1200 agagcaactg ggaggcagga 1260 accaccatac tgagaagagc 1320 1344
<210> 155 <211> 466 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 155
Met Gly Trp Ser Trp Thr Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly 1 5 10 15 Vai Leu ser Glu val Gin Leu Gin Gin ser Gly Pro Glu Leu Met Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 Gin ao 45 Thr Asp cri Tyr Asn Met His Trp c c val Lys Gin ΑΞΠ Gly Lys Ser Leu Glu jU Trp ile Gly Glu ile 3 3 Asn pro Asn Ser Gly OU Gly Ser Gly Tyr Asn 65 70 75 80 Gin Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu ASp Ser Ala val 100 105 Glu 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Leu val Tyr ASp Gly Ser Tyr ASp Trp Tyr 115 120 125 Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr val Ser ser Ala Lys 130 135 140 Thr Thr Pro pro Ser val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gin 145 150 155 160 Thr Asn ser Met val Thr Leu Gly cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro 165 170 175 Glu Pro val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly val 180 185 190 His Thr Phe Pro Ala val Leu Gin Ser ASp Leu Tyr Thr Leu Ser ser 195 200 205 val ser vai Thr val Pro ser ser Thr Trp pro Ser Glu Thr Thr Cys 210 215 220 Asn Vai Ala His pro Ala ser ser Thr Lys val Asp Lys Lys Ile val 225 230 235 Val 240 pro Arg ASP cys Gly Cys Lys Pro Cys ile Cys Thr Pro Glu val Ser ser val Phe ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys ASp Val Leu Thr Ile 260 265 ile 270 Thr Leu Thr Pro Lys val Thr cys val val Val ASp Ser Lys Asp 275 280 285 Glu Asp Pro Glu val Gin Phe Ser Trp Phe val Asp Asp Val Val HiS 290 295 300 Thr Thr Ala Gin Thr Gin Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Phe Arg 305 310 315 320 Ser Val ser Glu Leu Pro Ile Met His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 325 330 335 Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu 340 345 350 241 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gin val Tyr 360 365 Lys Glu Gin Met Ala Lys Asp Lys Vai Ser Leu 375 380 Asp phe Phe Pro Glu Asp ile Thr Vai Glu Trp 390 395 400 Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin Pro Ile 410 415 ser Tyr Phe lie Tyr ser Lys Leu Asn val Gin 425 430 Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser val Leu His 440 Glu 445 His His Thr Lys ser Leu Ser His Ser ΡΓΟ 455 460
Lys Thr lie ser Lys 355
Thr Ile Pro Pro Pro 370
Thr Cys Met ile Thr 385
Gin Trp Asn Gly Gin 405
Met Asp Thr Asp Gly 420
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Glu Gly Leu His Asn 450 Gly Lys 465 <210> 156 <211> 1401 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 156 atgggatgga gctggacctt tctcttcctc ctgtcaggaa ctgcaggtgt cctctctgag 60 gtccagctgc aacagtctgg acctgaacta atgaagcctg gggcttcagt gaagatgtcc 120 tgcaaggctt ctggatacac attcactgac tacaacatgc actgggtgaa acagaaccaa 180 ggaaagagcc tagagtggat aggagaaatt aatcctaaca gtggtggtag tggctacaac 240 caaaagttca aaggcaaggc cacattgact gtagacaagt cttccagcac agcctacatg 300 gagctccgca gcctgacatc tgaggactct gcagtctatt actgtgcaag attggtctac 360 gatggcagct acgaggactg gtacttcgat gtctggggcg cagggaccac ggtcaccgtc 420 tcctcagcca aaacgacacc cccatctgtc tatccactgg cccctggatc tgctgcccaa 480 actaactcca tggtgaccct gggatgcctg gtcaagggct atttccctga gccagtgaca 540 gtgacctgga actctggatc cctgtccagc ggtgtgcaca ccttcccagc tgtcctgcag 600 tctgacctct acactctgag cagctcagtg actgtcccct ccagcacctg gcccagcgag 660 accgtcacct gcaacgttgc ccacccggcc agcagcacca aggtggacaa gaaaattgtg 720 cccagggatt gtggttgtaa gccttgcata tgtacagtcc cagaagtatc atctgtcttc 780 atcttccccc caaagcccaa ggatgtgctc accattactc tgactcctaa ggtcacgtgt 840 gttgtggtag acatcagcaa ggatgatccc gaggtccagt tcagctggtt tgtagatgat 900 gtggaggtgc acacagctca gacgcaaccc cgggaggagc agttcaacag cactttccgc 960 tcagtcagtg aacttcccat catgcaccag gactggctca atggcaagga gttcaaatgc 1020 agggtcaaca gtgcagcttt ccctgccccc atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggc 1080 agaccgaagg ctccacaggt gtacaccatt ccacctccca aggagcagat ggccaaggat 1140 aaagtcagtc tgacctgcat gataacagac ttcttccctg aagacattac tgtggagtgg 1200 cagtggaatg ggcagccagc ggagaactac aagaacactc agcccatcat ggacacagat 1260 ggctcttact tcatctacag caagctcaat gtgcagaaga gcaactggga ggcaggaaat 1320 actttcacct gctctgtgtt acatgagggc ctgcacaacc accatactga gaagagcctc 1380 tcccactctc ctggtaaatg a 1401
<210> 157 <211> 214 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 157
Asp ile Gin Met Thr Gin Thr Thr ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 Thr 5 10 15 ASp Arg val Ile Cys Cys Arg Ala Ser Gin Val ile Thr Asn Tyr 20 Gin 25 30 Leu Tyr Trp Tyr Gin Lys Pro Asp Gly Thr Phe Lys Leu Leu ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr ser Arg Leu His ser Gly val pro Ser Arg phe Ser Gly 50 Gly 55 60 ser Gly Ser Thr Asp Tyr Ser Leu Thr ile Ser Asn Leu Glu Gin 65 He Ala 70 75 80 Glu Asp Thr Tyr Phe Cys Gin Gin Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr phe 85 90 95 Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala 242 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ 100 Ser ile Phe Pro pro 105 Ser ser Glu Gin Leu 110 Thr ser Gly Vai Val cys Phe 135 120 Leu Asn Asn Phe Tyr 140 Gin 125 Pro Lys ASP lie Trp Lys lie Asp Gly Ser Glu Arg Asn Gly Val Leu Thr Asp 150 Gin A5p ser Lys Asp 155 ser Thr Tyr Ser Met 160 Ser Thr 165 Leu Thr Lys ASp Glu 170 Tyr Glu Arg His Asn 175 Ser Tyr 180 Ala Thr His Lys Thr 185 Ser Thr Ser Pro Π e 190 val Lys Ser Asn Glu cys 200 205
Pro Thr vai 115
Gly Ala ser 130
Asn vai Lys 145
Asn ser Trp
Ser Thr Leu
Thr cys Glu 195
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<210> 159 <211> 234 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 159
Met Met ser ser Ala Gin Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu cys phe Gin 1 5 10 15 Gly Thr Arg cys Asp Ile Gin Met Thr Gin Thr Thr ser ser Leu Ser 20 25 30 val Ala ser Leu Gly Asp Arg val Thr Ile cys cys Arg Ala Ser Gin 35 40 45 Ile Thr Asn Tyr Leu Tyr Trp CC Tyr Gin Gin Lys Pro Asp Gly Thr Phe Lys JU Leu Leu Ile Tyr Tyr 7fV j j Thr ser Arg Leu His 7C ou Ser Gly Val pro Ser RD O J Arg Phe Ser Gly Ser 1 u Gly Ser Gly Thr Asp / J Tyr Ser Leu Thr Ile ou Ser 85 90 95 Asn Leu Glu Gin Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe cys Gin Gin Gly Asp Thr 100 105 110 Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala 115 120 125 GlU Gin Asp Ala Ala Pro Thr val ser Ile Phe Pro pro ser Ser 130 135 140 Leu Thr ser Gly Gly Ala Ser val val cys Phe Leu Asn Asn Phe jvr 145 150 155 Glu 160 Pro Lys ASp ile Asn Val Lys Trp Lys ile Asp Gly Ser Arg Gin 165 170 175 Thr Asn Gly val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gin Asp Ser Lys Asp Ser 180 185 190 Glu Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Arg 195 Thr 200 205 Thr His Asn Ser Tyr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Ser Pro 210 Phe 215 220 rle Val Lys Ser Asn Arg Asn Glu Cys 225 230 243 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <210> 160 <211> 702
<212> ADN <213> Mus musculus <400> 160 atgatgtcct ctgctcagtt ccttggtctc ctgttgctct gttttcaagg taccagatgt 60 gatatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc 120 atctgttgca gggcaagtca ggtcattacc aattatttat actggtatca gcagaaacca 180 gatggaactt ttaaactcct gatctactac acatcaagat tacactcagg agtcccatca 240 aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccattagcaa cctggaacag 300 gaagatattg ccacttactt ttgccaacag ggtgatacgc ttccgtacac gttcggaggg 360 gggaccaagc tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 420 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 480 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 540 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 600 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 660 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gt 702
<210> 161 <211> 447 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 161
Glu vai Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala 1 5 10 Thr 15 Ser Val Lys Met 20 Trp ser cys Lys Ala Ser 25 Gin Gly Tyr Phe Thr 30 Glu Asp Tyr Asn Met HIS Met Lys Gin Asn Gly Lys Ser Leu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu lie Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gin Gin Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser ser Arg Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg ser Leu Thr Ser Glu ASP Ser Ala val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Leu Gly Tyr Val Gly Asn Tyr Glu Asp Trp Tyr Phe Asp Val 100 105 110 Trp Gly Ala Gly Thr Thr val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro 115 120 125 Pro Ser val Tyr pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gin Thr Asn Ser 130 135 140 Met val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro val 145 150 155 160 Thr val Thr Trp Asn Ser Gly ser Leu ser ser Gly val His Thr Phe 165 170 175 ΡΓΟ Ala Val Leu Gin Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr 180 185 190 vai Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr val Thr Cys Asn Val Ala 195 200 205 His pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile val Pro Arg Asp 210 215 Thr 220 cys Gly Cys Lys pro Cys Ile Cys Val Pro Glu val Ser Ser val 225 230 235 240 Phe lie Phe pro pro Lys pro Lys Asp Val Leu Thr ile Thr Leu Thr 245 val 250 255 Pro Lys val Thr cys Val val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu 260 265 270 Vai Gin Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gin 275 280 285 Thr Gin pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser val Ser 290 295 300 244 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ gIu Leu Pro lie Met His Gin ASP Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys 305 310 315 Thr 320 Cys Arg vai Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Ile 325 330 335 ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gin Vai Tyr Thr Ile Pro 340 345 350 pro Pro Lys Glu Gin Met Ala Lys ASp Lys Vai Ser Leu Thr Cys Met 355 360 365 He Thr Asp phe Phe Pro Glu Asp ile Thr Vai Glu Trp Gin Trp Asn 370 375 380 Thr Gly Gin Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin pro Ile Met Asp 385 390 395 400 Asp Gly ser Tyr Phe Ile Tyr Ser Lys Leu Asn vai Gin Lys Ser Asn 405 410 415 Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser vai Leu His Glu Gly Leu 420 425 430 HiS Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys 435 440 445
<210 > 162 <211> 1341 <212> ADN <213> Mus musculus <4 Ο 0> 162 gaggtccagc tgcaacagtc tggacctgaa tcctgcaagg cttctggata cacattcact caaggaaaga gcctagaatg gataggagaa aaccagcagt tcaaaggcaa ggccacattg atggagctcc gcagcctgac atctgaggac tacgttggta attacgagga ctggtacttc gtctcctcag ccaaaacgac acccccatct caaactaact ccatggtgac cctgggatgc acagtgacct ggaactctgg atccctgtcc cagtctgacc tctacactct gagcagctca gagaccgtca cctgcaacgt tgcccacccg gtgcccaggg attgtggttg taagccttgc ttcatcttcc ccccaaagcc caaggatgtg tgtgttgtgg tagacatcag caaggatgat gatgtggagg tgcacacagc tcagacgcaa cgctcagtca gtgaacttcc catcatgcac tgcagggtca acagtgcagc tttccctgcc ggcagaccga aggctccaca ggtgtacacc gataaagtca gtctgacctg catgataaca tggcagtgga atgggcagcc agcggagaac gatggctctt acttcatcta cagcaagctc aatactttca cctgctctgt gttacatgag ctctcccact ctcctggtaa a
<210> 163 <211> 466 <212> PRT <213> Mus musculus ctaatgaagc ctggggcttc agtgaagatg 60 gactacaaca tgcactggat gaagcagaac 120 attaatccta acagtggtgg tgctggctac 180 actgtagaca agtcctccag gacagcctac 240 tctgcagtct attactgtgc aagattgggc 300 gatgtctggg gcgcagggac cacggtcacc 360 gtctatccac tggcccctgg atctgctgcc 420 ctggtcaagg gctatttccc tgagccagtg 480 agcggtgtgc acaccttccc agctgtcctg 540 gtgactgtcc cctccagcac ctggcccagc 600 gccagcagca ccaaggtgga caagaaaatt 660 atatgtacag tcccagaagt atcatctgtc 720 ctcaccatta ctctgactcc taaggtcacg 780 cccgaggtcc agttcagctg gtttgtagat 840 ccccgggagg agcagttcaa cagcactttc 900 caggactggc tcaatggcaa ggagttcaaa 960 cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa 1020 attccacctc ccaaggagca gatggccaag 1080 gacttcttcc ctgaagacat tactgtggag 1140 tacaagaaca ctcagcccat catggacaca 1200 aatgtgcaga agagcaactg ggaggcagga 1260 ggcctgcaca accaccatac tgagaagagc 1320 1341 <400> 163
Met Gly Trp ser Trp Thr Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly 1 5 10 15 Vai Leu Ser Glu vai Gin Leu Gin Gin ser Gly Pro Glu Leu Met Lys Gly 20 25 30 Pro Ala ser Vai Lys Met ser cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr Asp Tyr Asn Met His Trp Met Lys Gin Asn Gin Gly Lys Ser Leu 50 55 60 Glu Trp Ile Gly Glu ile Asn Pro Asn ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn 65 70 75 80 Gin Gin Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Vai Asp Lys ser Ser Arg 85 90 95 245 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala val 100 Gly 105 110 Tyr Tyr cys Ala Arg Leu Tyr Val Gly Asn Tyr Glu ASp Trp Tyr 115 120 125 Phe Asp vai Trp Gly Ala G]y Thr Thr val Thr val Ser ser Ala Lys 130 val 135 140 Thr Thr Pro Pro Ser Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gin 145 150 Gly 155 160 Thr Asn ser Met val Thr Leu Cys Leu val Lys Gly Tyr Phe Pro 165 Thr 170 175 Glu Pro vai Thr val Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly val 180 185 190 His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser ser 195 200 205 Ser vai Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr val Thr cys 210 215 220 Asn val Ala His Pro Ala Ser ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile val 225 230 235 240 pro Arg Asp cys Gly cys Lys pro cys ile cys Thr val pro Glu Val 245 Phe 250 255 Ser Ser Val Phe ile Pro pro Lys pro Lys Asp Val Leu Thr Ile 260 265 270 Thr Leu Thr Pro Lys val Thr cys val val val Asp ile ser Lys Asp 275 280 285 Asp Pro Glu val Gin Phe ser Trp Phe val Asp Asp Val Glu val His 290 295 300 Thr Ala Gin Thr Gin Pro Arg Glu Gl u Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg 305 310 315 320 Ser Val Ser Glu Leu pro ile Met His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 325 330 335 Glu Phe Lys Cys Arg val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu 340 345 350 Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gin val Tyr 355 Glu 375 Phe 360 365 Thr lie Pro 370 Cys Met Pro Pro Lys Gin Met Ala Lys Asp 380 Ile Lys val Ser Leu Thr Ile Thr Asp Phe Pro GlU ASp Thr val Glu Trp 385 390 395 400 Gin Trp Asn Gly Gin Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin Pro lie 405 410 415 Met Asp Thr ASP Gly Ser Tyr Phe Ile Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gin 420 425 430 Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser val Leu HiS 435 Hi s His 440 445 Glu Gly Leu Hi S Asn Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro 450 455 460
Gly Lys 465
<210 > 164 <211> 1398 <212> ADN <213> Mus musculus <4 Ο 0> 164 atgggatgga gctggacctt tctcttcctc gtccagctgc aacagtctgg acctgaacta tgcaaggctt ctggatacac attcactgac ggaaagagcc tagaatggat aggagaaatt cagcagttca aaggcaaggc cacattgact gagctccgca gcctgacatc tgaggactct gttggtaatt acgaggactg gtacttcgat tcctcagcca aaacgacacc cccatctgtc actaactcca tggtgaccçt gggatgcctg gtgacctgga actctggatc cctgtccagc tctgacctct acactctgag cagctcagtg accgtcacct gcaacgttgc ccacccggcc ctgtcaggaa ctgcaggtgt cctctctgag 60 atgaagcctg gggcttcagt gaagatgtcc 120 tacaacatgc actggatgaa gcagaaccaa 180 aatcctaaca gtggtggtgc tggctacaac 240 gtagacaagt cctccaggac agcctacatg 300 gcagtctatt actgtgcaag attgggctac 360 gtctggggcg cagggaccac ggtcaccgtc 420 tatccactgg cccctggatc tgctgcccaa 480 gtcaagggct atttccctga gccagtgaca 540 ggtgtgcaca ccttcccagc tgtcctgcag 600 actgtcccct ccagcacctg gcccagcgag 660 agcagcacca aggtggacaa gaaaattgtg 720 246 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ cccagggatt gtggttgtaa atcttccccc caaagcccaa gttgtggtag acatcagcaa gtggaggtgc acacagctca tcagtcagtg aacttcccat agggtcaaca gtgcagcttt agaccgaagg ctccacaggt aaagtcagtc tgacctgcat cagtggaatg ggcagccagc ggctcttact tcatctacag actttcacct gctctgtgtt tcccactctc ctggtaaa gccttgcata tgtacagtcc ggatgtgctc accattactc ggatgatccc gaggtccagt gacgcaaccc cgggaggagc catgcaccag gactggctca ccctgccccc atcgagaaaa gtacaccatt ccacctccca gataacagac ttcttccctg ggagaactac aagaacactc caagctcaat gtgcagaaga acatgagggc ctgcacaacc cagaagtatc tgactcctaa tcagctggtt agttcaacag atggcaagga ccatctccaa aggagcagat aagacattac agcccatcat gcaactggga accatactga atctgtcttc 780 ggtcacgtgt 840 tgtagatgat 900 cactttccgc 960 gttcaaatgc 1020 aaccaaaggc 1080 ggccaaggat 1140 tgtggagtgg 1200 ggacacagat 1260 ggcaggaaat 1320 gaagagcctc 1380 1398
<210> 165 <211> 214 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 165
Asp Ile Gin Met Thr Gin Thr Thr Ser Ser Leu Ser Al a Ser Leu Gly 1 5 10 rle 15 ASp Arg vai ser Ile ser cys Arg Ala Ser Gin ASp Ser Asn Tyr 20 25 30 Ile Leu Asn Trp PC Tyr Gin Gin Lys Pro an Asp Gly Thr Phe Leu Leu Phe Tyr 3 j Thr Ser Arg Leu Leu ser Gly Vai Pro Ser Arg phe Ser Gly 50 55 60 Glu Gin Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr 5er Leu Thr ile Tyr Asn Leu 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe cys Gin Gin Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu 11 e Lys Arg Ala ASp Ala Ala 100 105 110 Pro Thr vai Ser ile Phe Pro Pro Ser ser Glu Gin Leu Thr ser Gly 115 120 125 Gly Ala Ser Vai Vai Cys phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile 130 135 140 Asn vai Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gin Asn Gly Val Leu 145 150 155 160 Asn ser Trp Thr Asp Gin Asp Ser Lys Asp Ί7Π ser Thr Tyr ser Met 17<; Ser Ser Thr Leu Thr XDJ Leu Thr Lys Asp Glu 1/ u Tyr Glu Arg His Asn JL/ J Ser Tyr 180 185 190 Thr cys Glu Ala Thr HlS Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile val Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Asn Glu cys 210
<210> 166 <211> 645 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 166 gatatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagggtctcc 60 atcagttgca gggcaagtca agacattagc aattatttaa actggtatca gcagaaacca 120 gatggaactt ttaaactcct tatcttctac acatcaagat tactctcagg agtcccatca 180 aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccatttacaa cctggagcaa 240 gaagattttg ccacttactt ttgccaacag ggagatacgc ttccgtacac tttcggaggg 300 gggaccaaac tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 360 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 420 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 480 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 540 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 600 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gttag 645
<210> 167 <211> 234 <212> PRT <213> Mus musculus 247 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <4 Ο 0> 167
Met Met Ser Ser Ala Gin Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu cys phe Gin 1 Thr 5 10 15 Gly Arg Cys Asp Ile Gin Met Thr Gin Thr Thr Ser ser Leu ser Ala 20 25 30 Ser Leu Gly Asp Arg Val Ser Ile ser cys Arg Ala ser Gin Asp lie 35 40 45 Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys pro Asp Gly Thr Phe 50 55 60 Lys Leu Leu ile Phe Tyr Thr ser Arg Leu Leu Ser Gly Val Pro ser 65 Phe 70 75 80 Arg Ser Gly Ser 85 Glu Gly Ser Gly Thr Asp 90 Tyr Tyr Ser Leu Thr Ile 95 Gly Tyr Asn Leu Glu Gin Asp Phe Ala Thr Phe Cys Gin Gin Asp 100 105 110 Thr Leu Pro 115 Ala Tyr Thr Phe Gly Gly 120 Ser Gly Thr Lys Leu Glu 125 Ser Ile Lys Arg Ala Asp Ala Pro Thr val ile Phe Pro Pro ser Glu Gin 130 135 140 Leu Thr ser Gly Gly Ala Ser Val val Cys Phe Leu Asn Asn phe Tyr 145 150 155 Glu 160 Pro Lys Asp Ile Asn val Lys Trp Lys ile Asp Gly Ser Arg Gin 165 170 175 Thr Asn Gly val Leu 180 Ser Asn ser Trp Thr Asp 185 Leu Gin Asp Ser Lys Asp 190 Tyr Ser Tyr Ser Met Ser Thr Leu Thr Thr Lys Asp Glu GlU Arg 195 200 205 Thr His Asn Ser Tyr Thr cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Ser Pro 210 215 220 il e val Lys ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 225 230
<210> 168 <211> 705 <212> ADN <213> Mus musculus <4 Ο 0> 168 atgatgtcct ctgctcagtt ccttggtctc ctgttgctct gttttcaagg taccagatgt 60 gatatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagggtctcc 120 atcagttgca gggcaagtca agacattagc aattatttaa actggtatca gcagaaacca 180 gatggaactt ttaaactcct tatcttctac acatcaagat tactctcagg agtcccatca 240 aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccatttacaa cctggagcaa 300 gaagattttg ccacttactt ttgccaacag ggagatacgc ttccgtacac tttcggaggg 360 gggaccaaac tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 420 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 480 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 540 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 600 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 660 tcaaçttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gttag 705
<210> 169 <211> 447 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 169
Glu val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Met Lys pro Gly Ala 15 10 15
Ser val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 _ 30
Asn Met His Trp val Lys Gin Asn Gin Gly Lys Thr Leu Asp Trp ile 35 40 45 248 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Gly Glu ile Asn Pro Asn ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gin Lys Phe 50 Ala Thr 55 Val 60 Lys Gly Lys Leu Thr Asp Lys ser ser Thr Thr Ala Tyr 65 70 Glu 75 80 Met Glu Leu Arg ser 85 Tyr Leu Thr ser ASp 90 Asp ser Ala val Tyr Tyr 95 Asp Cys Ala Arg Leu Gly 100 Gly Asp Asp Ile Tyr 105 val Asp Trp Tyr Phe 110 Thr Val Trp Gly Ala Thr Thr val Thr Ser Ser Ala Lys Thr Pro 115 120 125 ΡΓΟ ser val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gin Thr Asn Ser 130 Gly 135 Val 140 Met Val Thr Leu Cys Leu Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly ser Leu ser Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gin Ser ASp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser val Thr 180 185 190 vai Pro ser ser Thr Trp Pro ser Glu Thr Val Thr Cys Asn val Ala 195 200 205 His Pro Ala ser Ser Thr Lys val Asp Lys Lys Ile val Pro Arg Asp 210 215 220 cys Gly cys Lys Pro Cys Ile cys Thr val pro Glu val Ser Ser Val 225 Phe 230 235 240 Phe Ile pro Pro Lys pro Lys ASp val Leu Thr ile Thr Leu Thr 245 250 255 Pro Lys Val Thr Cys val val val Asp ile ser Lys Asp ASP pro Glu 260 265 270 Val Gin Phe ser Trp Phe Val Asp Asp val Glu val Hi S Thr Ala Gin 275 280 285 Thr Gin Pro Arg Glu Glu Gin phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser val Ser 290 295 300 Glu Leu pro ile Met His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys 305 310 315 320 Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gin Val Tyr Thr Ile Pro 340 345 350 Pro Pro Lys Glu Gin Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met 355 360 365 xle Thr 370 Gin Asp Phe Phe Pro Glu 375 Tyr Asp ile Thr val Glu 380 Pro Trp Gin Trp Asn Gly pro Ala Glu Asn Lys Asn Thr Gin Ile Met Asp Thr 385 390 395 400 Asp Gly ser Tyr Phe ile Tyr Ser Lys Leu Asn val Gin Lys Ser Asn 405 410 415 Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu 420 425 430 His Asn His HÍS Thr Glu Lys Ser Leu Ser HÍS Ser Pro Gly Lys 435 440 445
<210> 170 <211> 1344 <212> ADN <213> Mus musculus < 4 0 0 > 170 gaggtccaac tgcaacagtc tggacctgaa ctaatgaagc ctggggcttc agtgaagatg 60 tcctgcaagg cttctggata tacattcact gactacaaca tgcactgggt gaagcagaac 120 caaggaaaga ccctagactg gataggagaa attaatccta acagtggtgg tgctggctac 180 aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca agtcctccac cacagcctac 240 atggagctcc gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagattgggc 300 tacgatgata tctacgacga ctggtacttc gatgtctggg gcgcagggac cacggtcacc 360 gtctcctcag ccaaaacgac acccccatct gtctatccac tggcccctgg atctgctgcc 420 caaactaact ccatggtgac cctgggatgc ctggtcaagg gctatttccc tgagccagtg 480 acagtgacct ggaactctgg atccctgtcc agcggtgtgc acaccttccc agctgtcctg 540 cagtctgacc tctacactct gagcagctca gtgactgtcc cctccagcac ctggcccagc 600 249 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ gagaccgtca cctgcaacgt gtgcccaggg attgtggttg ttcatcttcc ccccaaagcc tgtgttgtgg tagacatcag gatgtggagg tgcacacagc cgctcagtca gtgaacttcc tgcagggtca acagtgcagc ggcagaccga aggctccaca gataaagtca gtctgacctg tggcagtgga atgggcagcc gatggctctt acttcatcta aatactttca cctgctctgt ctctcccact ctcctggtaa tgcccacccg gccagcagca taagccttgc atatgtacag caaggatgtg ctcaccatta caaggatgat cccgaggtcc tcagacgcaa ccccgggagg catcatgcac caggactggc tttccctgcc cccatcgaga ggtgtacacc attccacctc catgataaca gacttcttcc agcggagaac tacaagaaca cagcaagctc aatgtgcaga gttacatgag ggcctgcaca atga ccaaggtgga tcccagaagt ctctgactcc agttcagctg agcagttcaa tcaatggcaa aaaccatctc ccaaggagca ctgaagacat ctcagcccat agagcaactg accaccatac caagaaaatt 660 atcatctgtc 720 taaggtcacg 780 gtttgtagat 840 cagcactttc 900 ggagttcaaa 960 caaaaccaaa 1020 gatggccaag 1080 tactgtggag 1140 catggacaca 1200 ggaggcagga 1260 tgagaagagc 1320 1344 <210> 171 <211> 466 <212> PRT <213> Mus musculus
Phe Leu Phe Leu 10 Leu Leu Gin Gin 25 Ser Gly Met Ser 40 Cys Lys Ala Trp 55 Asn val Lys Gin Asn pro Asn ser Gly 75 Ala Thr Leu Thr 90 Val Arg Ser Leu 105 Thr Ser Gly Tyr 120 Thr Asp Asp ile Gly 135 Thr val Thr Tyr Pro Leu Ala Pro 155 Leu Gly Cys Leu 170 Val Trp Asn ser 185 Gly Ser Leu Gin 200 Ser Asp Leu Ser 215 Thr Trp Pro Ser Ser Ser Thr Lys val 235 Lys Pro Cys ile 250 cys pro pro Lys 265 Pro Lys Thr cys 280 Trp Val val val Ser 295 Phe val Asp Arg Glu Glu Gin Phe 315 Ile Met His Gin 330 ASp Asn Ser Ala 345 Ala Phe Lys Gly 360 Arg Pro Lys Glu 375 Gin Met Ala Lys ser Gly Thr Ala 15 Met Gly pro Glu Leu 30 Lys ser Gly 45 Tyr Thr Phe Gin 60 Gly Lys Thr Leu Gly Ala Gly Tyr Asn 80 Asp Lys Ser Ser 95 Ala Thr Glu Asp Ser 110 Val Tyr ASP 125 Ser ASp Trp Tyr val 140 Ser Ala Lys Gly ser Ala Ala Gin 160 Lys Gly Tyr Phe 175 Gly pro Leu ser Ser 190 Val Tyr Thr 205 Leu Ser Ser Glu 220 Thr val Thr Cys ASp Lys Lys 11 e Val 240 Thr val Pro Glu 255 val Asp val Leu 270 Thr Ile Asp ile 285 val ser Lys ASP ASp 300 Glu Val HÍS Asn ser Thr Phe 328 Trp Leu Asn Gly 335 ile Lys Pro Ala Pro 350 Glu Ala Pro 365 Gin val Tyr Asp 380 Lys val ser Leu <400> 171 Met 1 Gly Trp ser Trp 5 Thr vai Leu ser Glu 20 Val Gin Pro Gly Ala 35 Ser Val Lys Thr A5D 50 Trp Tyr Asn Met His Asp 65 ile Gly Glu Ile 70 Gin Lys Phe Lys Gly 85 Glu Lys Thr Ala Tyr Met 100 Leu Tyr Tyr cys 115 Val Ala Arg Leu Phe Asp 130 Trp Gly Ala Thr 145 Thr Pro Pro Ser val 150 Thr Asn ser Met val 165 Thr Glu pro val Thr 180 Val Thr His Thr Phe 195 Pro Ala Val Ser val 210 Thr Val Pro Ser Asn 225 Val Ala HiS Pro Ala 230 Pro Arg ASp cys Gly Cys ser Ser Val Phe 260 Ile Phe Thr Leu Thr 275 Pro Lys val Asp Pro 290 Glu val Gin Phe Thr 305 Ala Gin Thr Gin Pro 310 Ser Val Ser Glu Leu 325 Pro Glu Phe Lys Cys 340 Ser Arg val Lys Thr lie 355 pro Lys Thr Thr lie 370 pro Pro Lys 250 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Thr Cys Met lie Thr Asp Phe phe 385 Gly 390 Gin Trp Asn Gin Pro Ala Glu Thr 405 Met A5P Asp 47Π Gly Ser Tyr phe Lys Ser Asn *1&U Trp Glu Ala Gly Asn 435 440 Glu Gly Leu HTS Asn His His Thr 450 455
Gly Lys 465
Pro Glu Asp lie Thr Val Glu Trp 395 400 Asn Tyr Lys Asn Thr Gin Pro Ile 410 415 He Tyr ser Lys Leu Asn val Gin 425 430 Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu HiS 445 Glu Lys Ser Leu ser His ser Pro 460
<210 > 172 <211> 1401 <212> ADN <213> Mus musculus <4 0 0> 172 atgggatgga gctggacctt gtccaactgc aacagtctgg tgcaaggctt ctggatatac ggaaagaccc tagactggat cagaagttca agggcaaggc gagctccgca gcctgacatc gatgatatct acgacgactg tcctcagcca aaacgacacc actaactcca tggtgaccct gtgacctgga actctggatc tctgacctct acactctgag accgtcacct gcaacgttgc cccagggatt gtggttgtaa atcttccccc caaagcccaa gttgtggtag acatcagcaa gtggaggtgc acacagctca tcagtcagtg aacttcccat agggtcaaca gtgcagcttt agaccgaagg ctccacaggt aaagtcagtc tgacctgcat cagtggaatg ggcagccagc ggctcttact tcatctacag actttcacct gctctgtgtt tcccactctc ctggtaaatg tctcttcctc ctgtcaggaa acctgaacta atgaagcctg attcactgac tacaacatgc aggagaaatt aatcctaaca cacattgact gtagacaagt tgaggactct gcagtctatt gtacttcgat gtctggggcg cccatctgtc tatccactgg gggatgcctg gtcaagggct cctgtccagc ggtgtgcaca cagctcagtg actgtcccct ccacccggcc agcagcacca gccttgcata tgtacagtcc ggatgtgctc accattactc ggatgatccc gaggtccagt gacgcaaccc cgggaggagc catgcaccag gactggctca ccctgccccc atcgagaaaa gtacaccatt ccacctccca gataacagac ttcttccctg ggagaactac aagaacactc caagctcaat gtgcagaaga acatgagggc ctgcacaacc a ctgcaggtgt cctctctgag 60 gggcttcagt gaagatgtcc 120 actgggtgaa gcagaaccaa 180 gtggtggtgc tggctacaac 240 cctccaccac agcctacatg 300 actgtgcaag attgggctac 360 cagggaccac ggtcaccgtc 420 cccctggatc tgctgcccaa 480 atttccctga gccagtgaca 540 ccttcccagc tgtcctgcag 600 ccagcacctg gcccagcgag 660 aggtggacaa gaaaattgtg 720 cagaagtatc atctgtcttc 780 tgactcctaa ggtcacgtgt 840 tcagctggtt tgtagatgat 900 agttcaacag cactttccgc 960 atggcaagga gttcaaatgc 1020 ccatctccaa aaccaaaggc 1080 aggagcagat ggccaaggat 1140 aagacattac tgtggagtgg 1200 agcccatcat ggacacagat 1260 gcaactggga ggcaggaaat 1320 accatactga gaagagcctc 1380 1401
<210> 173 <211> 214 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 173 ASp 1 Ile Gin Met Thr 5 Gin ile Thr ASp Arg val ser 20 Ile Ser Cys Arg Leu Asn Trp 35 Tyr Gin Gin Lys Pro 40 Phe Tyr 50 Thr Ser Arg Leu Phe 55 ser Ser 65 Gly Ser Gly Thr Asp 70 Tyr Ser Glu Asp Phe Ala Thr 85 Tyr Phe Cys Thr phe Gly Gly 100 Ser Gly Thr Lys Val Pro Thr val 115 Ile Phe Pro Pro 120 Gly Ala Ser val Val Cys Phe Leu ser ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 10 Gin 15 Ala Ser Asp Ile Ser Asn Tyr 25 30 Asp Gly Thr Phe Lys Leu Leu He 45 Gly Val Pro Ser fin Arg Phe ser Gly Leu Thr ile Tyr Asn Leu Glu Gin 75 80 Gin Gin Gly Asp Thr Leu pro Tyr 90 95 Glu Ile Lys Arg Ala ASp Ala Ala 105 110 Ser Ser Glu Gin Leu Thr Ser Gly Phe 125 Asn Asn Tyr Pro Lys ASP He 251 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ 130 135 140
Asn vai Lys Trp Lys Ile Asp Gly ser Glu Arg Gin Asn Gly vai Leu 145 150 155 160
Asn Ser Trp Thr Asp Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser 165 170 175 ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn ser Tyr 180 185 190
Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr ser pro ile vai Lys Ser 195 200 205
Phe Asn Arg Asn Glu cys 210
<210> 174 <211> 642 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 174 cagggtctcc 60 gcagaaacca 120 agtcccatca ISO cctggagcaa 240 tttcggaggg 300 cttcccacca 360 caacttctac 420 tggcgtcctg 480 caccctcacg 540 tcacaagaca 600 642 gatatccaga tgacacagat tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga atcagttgca gggcaagtca agacattagc aattatttaa attggtatca gatggaactt ttaaactcct tatcttctac acatcaagat tattttcagg aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccatttacaa gaagattttg ccacttactt ttgccaacag ggagatacgc ttccgtacac gggaccaagg tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gt
<210> 175 <211> 234 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 175
Met Met Ser Ser Ala Gin Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu cys Phe Gin 1 5 10 15 Gly Thr Arg cys Asp ile Gin Met Thr Gin Ile Thr Ser ser Leu Ser 20 25 Ala 30 Gin Ala Ser Leu JC Gly ASP Arg vai Ser ΛΛ Ile Ser cys Arg Ser Asp Ile ser 55 Asn Tyr Leu Asn Trp HU Tyr Gin Gin Lys Pro *T J Asp Gly Thr Phe 50 55 60 Gly Lys Leu Leu Ile Phe Tyr Thr ser Arg Leu phe Ser vai Pro Ser 65 70 75 80 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Tyr 85 90 95 Asn Leu Glu Gin Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gin Gin Gly Asp 100 105 Glu 125 110 Thr Leu Pro 11 C Tyr Thr Phe Gly Gly 1 OCi Gly Thr Lys vai Ile Lys Arg Ala Asp 11 j Ala Ala Pro Thr vai J.£U ser Ile Phe pro Pro Ser Ser Glu Gin 130 135 140 phe Leu Thr Ser Gly Gly Ala ser vai vai Cys Phe Leu Asn Asn Tyr 145 150 155 Glu 160 Pro Lys Asp Ile Asn Vai Lys Trp Lys ile Asp Gly ser Arg Gin 165 170 175 Thr Asn Gly Vai Leu Asn ser Trp Thr Asp Gin Asp Ser Lys Asp ser 180 185 Glu 190 Glu Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Tyr Arg 195 200 205 Thr HIS Asn Ser Tyr Thr Cys GlU Ala Thr His Lys Thr ser Ser Pro 210 215 220 Ile vai Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu cys 225 230
<210> 176 <211> 702 <212> ADN <213> Mus musculus 252 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <400> 176 atgatgtcct ctgctcagtt ccttggtctc ctgttgctct gttttcaagg taccagatgt 60 gatatccaga tgacacagat tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagggtctcc 120 atcagttgca gggcaagtca agacattagc aattatttaa attggtatca gcagaaacca 180 gatggaactt ttaaactcct tatcttctac acatcaagat tattttcagg agtcccatca 240 aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccatttacaa cctggagcaa 300 gaagattttg ccacttactt ttgccaacag ggagatacgc ttccgtacac tttcggaggg 360 gggaccaagg tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 420 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 480 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 540 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 600 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 660 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gt 702
<210> 177 <211> 450 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 177
Glu Vai Gin Leu Gin Gin Ser Gly pro GlU Leu Met Lys Pro Gly Thr 1 5 10 Thr 15 Ser Vai Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe ASp Tyr 20 25 30 lie Asn Met HÍS Trp Val Lys Gin Thr Gin Gly Lys Thr Leu Glu Trp 35 40 45 Phe Gly Gl u Ile Asn Pro Asn ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gin Lys 50 55 60 Thr Thr Ala Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr val Asp Lys Ser Ser Tyr 65 70 75 Ala val 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr ser GlU ASp ser Tyr Tyr Cys 85 90 95 val Ala Lys Leu Gly Tyr ASp Asp ile Tyr ASp Asp Trp Tyr Phe Asp 100 105 110 Ala Trp Gly Ala Gly Thr Thr val Thr Val ser ser Ala Lys Thr Thr 115 120 125 Thr Gly Pro ser val Tyr pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr ser 130 135 140 val ser Vai Thr Leu Gly cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu pro 145 150 155 Thr 160 Thr Leu Thr Trp Asn ser Gly Ser Leu ser ser Asp val His Phe 165 170 175 Thr Pro Ala Leu Leu Gin ser Gly Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val 180 185 190 vai Thr Thr Trp Pro ser Gin Thr lie Thr cys Asn val Ala His Pro 195 200 205 Gly Ala ser Ser Thr Lys val Asp Lys Lys ile Glu Pro Arg Ser pro 210 215 220 Gly Gly 240 Thr 225 HÍS Lys Pro cys pro 230 pro cys pro Ala Pro 235 Asn Leu Leu pro Ser val Phe ile Phe pro Pro Lys ile Lys Asp val Leu Met lie 245 250 255 Ser Leu Ser Pro Met val Thr Cys Val val val Asp Val Ser Glu Asp 260 265 270 Val Asp pro Asp Val HÍS val Ser Trp Phe val Asn Asn val Glu His 275 280 285 xle Thr Ala Gin Thr Gin Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Arg 290 295 300 Gly vai val ser Ala Leu pro lie Gin His Gin Asp Trp Met Ser Lys 305 310 315 320 Glu phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu 325 330 335 253 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Pro Val Arg Ala Pro Gin a cri Val Tyr Vai Leu Pro D*r\J Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gl η á!>U Val Thr Leu 355 360 365 Thr çys Met Ile Thr Asp phe Met Pro Glu ASp Ile Tyr val Glu Trp Thr 370 375 380 Asn Asn Gly Gin Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg val Glu 405 410 415 lys Lys Asn Trp val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser cys ser val val His 420 425 430 Glu Gly Leu HÍS Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe ser Arg Thr Pro 435 440 445
Gly Lys 450
<210 > 178 <211> 1350 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 178 gaggtccaac tgcaacagte tcctgcaagg cttctggata caaggaaaga ccctagagtg aaccagaagt tcaagggcaa atggagctcc gcagcctgac tacgatgata tctacgacga gtctcctcag ccaaaacaac acaactggct cctcggtgac accttgacct ggaactctgg cagtctggcc tctacaccct atcacctgca atgtggccca agagggtccc caacacataa ccatccgrct tcatcttccc atggtcacgt gtgtggtggt ttcgtgaaca acgtggaagt agtactatcc gggtggtcag gagttcaaat gcaaggtcaa aaacccaaag ggccagtaag atgactaaga aacaggtcac tacgtggagt ggaccaacaa ctggactctg atggttctta gtggaaagaa atagctactc actaagagct tctcccggac tggacctgaa ctaatgaagc tacattcaet gactacaaca gataggagaa attaatccta ggccacattg actgtagaca atctgaggac tctgcagtct ctggtatttc gatgtctggg agccccatcg gtctatccac tctaggatgc ctggtcaagg atccctgtcc agtgatgtgc cagcagctca gtgactgtaa cccggcaagc agcaccaaag accctgtcct ccatgcccag tccaaagatc aaggatgtac ggatgtgagc gaggatgacc acacacagct cagacacaaa tgccctcccc atccagcacc caacaaagcc ctcccagcgc agctccacag gtatatgtct tctgacctgc atgatcacag cgggcaaaca gagctaaact cttcatgtac agcaagctga ctgttcagtg gtccacgagg tccgggtaaa ctgggacttc agtgaagatg 60 tgcactgggt gaagcagacc 120 acagtggtgg tgctggctac 180 agtcctccac cacagcctac 240 attactgtgc aaaattgggc 300 gcgcagggac cacggtcacc 360 tggcccctgt gtgtggagat 420 gttatttccc tgagccagtg 480 acaccttccc agctctcctg 540 ccacctggcc cagccagacc 600 tggacaagaa aattgagccc 660 ctcctaacct cttgggtgga 720 tcatgatctc cctgagcccc 780 cagatgtcca tgtcagctgg 840 cccatagaga ggattacaac 900 aggactggat gagtggcaag 960 ccatcgagag aaccatctca 1020 tgcctccacc agaagaagag 1080 acttcatgcc tgaagacatt 1140 acaagaacac tgaaccagtc 1200 gagtggaaaa gaagaactgg 1260 gtctgcacaa tcaccacacg 1320 1350
<210> 179 <211> 469 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 179
Met Gly Trp Ser Trp Thr phe Leu Phe Leu Leu ser Gly Thr Ala Gly 1 5 10 Glu 15 val Leu Ser Glu val Gin Leu Gin Gin Ser Gly pro Leu Met Lys 20 25 30 Phe pro Gly Thr Ser val Lys Met ser cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr 35 40 45 Thr Thr A5p Tyr Asn Met His Trp Val Lys Gin Thr Gin Gly Lys Leu 50 55 60 Ala Gly Glu Trp lie Gly Glu ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Tyr Asn 65 70 75 80 Gin Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Thr 85 90 95 val Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu ASp Ser Ala 100 105 110 254 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Tyr Tyr cys 11 ς Ala Lys Leu Gly Tyr 120 Asp Asp ile Tyr Asp 1 7ς ASp Trp Tyr Phe Asp val Trp Gly Ala Gly Thr Thr val Thr Val Ser ser Ala Lys 130 13b Ala 140 Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr pro Leu pro val cys Gly Asp Thr 145 150 Gly 155 160 Thr Gly ser Ser Val Thr Leu Cys Leu val Lys Gly Tyr Phe Pro 165 170 175 Glu Pro val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu ser ser ASp Val 180 Gin 185 190 His Thr Phe Pro Ala Leu Leu Ser Gly Leu Tyr Thr Leu Ser ser 195 200 205 Ser Val Thr Val Thr Thr Trp Pro Ser Gin Thr Ile Thr Cys Asn val 210 215 val 220 Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arq 225 230 235 240 Gly ser Pro Thr His Lys pro cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Asn Leu 245 Ile 250 255 Leu Gly Gly Pro Ser val Phe phe Pro Pro Lys ile Lys Asp val 260 265 270 Leu Met Ile ser Leu Ser pro Met Val Thr cys Val val val Asp val 275 280 285 Ser Glu ASD Asp pro ASp val His val ser Trp Phe Val Asn Δ.ςη val 290 295 Gin 300 Glu val His Thr Ala Gin Thr Thr Hi s Arg Glu Asp Tyr Asn ser 305 310 Ile 33η 315 320 Thr ile Arg val val 3 3 C ser Ala Leu Pro Gin His Gin Asp Trp 3 3 C Met Ser Gly tys Glu Phe Lys cys Lys Val ASn Asn Lys Ala Leu pro Ala 340 345 350 Pro ile Glu 3 C C Arg Thr ile ser Lys Pro Lys Gly pro Val Arg Ala Pro Gin val a/ J J Tyr Val Leu pro pro pro Glu Glu Glu Met j j Thr Lys Lys Gin 370 375 Thr Phe 380 Val Thr Leu Thr cys Met Ile Asp Met pro Glu ASp ile Tyr 385 390 Gin Thr Glu 395 400 Val Glu Trp Thr Asr* Asn Gly Leu Asn Tyr Lys Asn Thr 405 Gly 410 415 Glu Pro val Leu Asp ser ASP Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu 420 425 430 Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser cys ser 435 440 44b Val val His Glu Gly Leu HIS Asn His His Thr Thr Lys Ser phe Ser 450 455 460 Arg Thr pro Gly Lys 465
<210> 180 <211> 1407 <212> ADN <213> Mus musculus <4 0 0> 180 atgggatgga gctggacctt tctcttcctc ctgtcaggaa ctgcaggtgt cctctctgag 60 gtccaactgc aacagtctgg acctgaacta atgaagcctg ggacttcagt gaagatgtcc 120 tgcaaggctt ctggatatac attcactgac tacaacatgc actgggtgaa gcagacccaa 180 ggaaagaccc tagagtggat aggagaaatt aatcctaaca gtggtggtgc tggctacaac 240 cagaagttca agggcaaggc cacattgact gtagacaagt cctccaccac agcctacatg 300 gagctccgca gcctgacatc tgaggactct gcagtctatt actgtgcaaa attgggctac 360 gatgatatct acgacgactg gtatttcgat gtctggggcg cagggaccac ggtcaccgtc 420 tcctcagcca aaacaacagc cccatcggtc tatccactgg cccctgtgtg tggagataca 480 actggctcct cggtgactct aggatgcctg gtcaagggtt atttccctga gccagtgacc 540 ttgacctgga actctggatc cctgtccagt gatgtgcaca ccttcccagc tctcctgcag 600 tctggcctct acaccctcag cagctcagtg actgtaacca cctggcccag ccagaccatc 660 acctgcaatg tggcccaccc ggcaagcagc accaaagtgg acaagaaaat tgagcccaga 720 gggtccccaa cacataaacc ctgtcctcca tgcccagctc ctaacctctt gggtggacca 780 tccgtcttca tcttccctcc aaagatcaag gatgtactca tgatctccct gagccccatg 840 255 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ gtcacgtgtg tggtggtgga gtgaacaacg tggaagtaca actatccggg tggtcagtgc ttcaaatgca aggtcaacaa cccaaagggc cagtaagagc actaagaaac aggtcactct gtggagtgga ccaacaacgg gactctgatg gttcttactt gaaagaaata gctactcctg aagagcttct cccggactcc tgtgagcgag gatgacccag cacagctcag acacaaaccc cctccccatc cagcaccagg caaagccctc ccagcgccca tccacaggta tatgtcttgc gacctgcatg atcacagact gcaaacagag ctaaactaca catgtacagc aagctgagag ttcagtggtc cacgagggtc gggtaaa atgtccatgt cagctggttc 900 atagagagga ttacaacagt 960 actggatgag tggcaaggag 1020 tcgagagaac catctcaaaa 1080 ctccaccaga agaagagatg 1140 tcatgcctga agacatttac 1200 agaacactga accagtcctg 1260 tggaaaagaa gaactgggtg 1320 tgcacaatca ccacacgact 1380 1407
<210> 181 <211> 214 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 181 ASP Ile Gin Met Thr Gin Thr Thr Ser ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile ser cys Arg Ala ser Gin ASp Ile ser Asn Tyr 20 25 30 ile Leu Asn Trp ac Tyr Gin Gin Lys Pro 40 Ser Asp Gly Thr Phe Lys 45 Arg Leu Leu Phe Tyr J J Thr ser Arg Leu Leu Gly Val Pro ser Phe ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr ser Leu Thr Ile Tyr Asn Leu Glu Gin 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 85 Gly Thr Phe Cys Gin Gin 90 ile Gly Asp Thr Leu pro 95 Ala Tyr Thr Phe Gly Gly Lys Leu Glu Lys Arg Ala ASP Ala 100 Phe 105 110 Pro Thr val ser ile Pro Leu Ser ser Glu Gin Leu Thr Ser Gly 115 120 125 Gly Ala Ser Val Val Cys phe Leu Asn Asn phe Tyr Pro Lys Asp Ile 130 ile 135 140 Asn val Lys Trp Lys Asp Gly Ser Glu Arg Gin Asn Gly val Leu 145 150 155 160 Asn ser Trp Thr Asp 165 Leu Gin Asp Ser Lys Asp 170 Tyr Ser Thr Tyr Ser Met 175 ser ser ser Thr Leu Thr Thr Lys ASp Glu Glu Arg His Asn Tyr 180 ΗΪ S 185 190 Thr cys GlU Ala Thr Lys Thr ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser 195 200 205 phe Asn Arg Asr» Glu Cys 210
<210> 182 <211> 645 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 182 gatatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagggtctcc 60 atcagttgca gggcaagtca agacattagc aattatttaa actggtatca gcagaaacca 120 gatggaactt ttaaactcct tatcttctac acatcaagat tactctcagg agtcccatca 180 aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccatttacaa cctggagcaa 240 gaagattttg ccacttactt ttgccaacag ggagatacgc ttccgtacac tttcggaggg 300 gggaccaaac tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacta 360 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 420 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 480 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 540 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 600 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gttag 645
<210> 183 <211> 234 <212> PRT <213> Mus musculus 256 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <4 Ο 0> 183
Met 1 Met ser Ser Ala 5 Gin Phe Leu Gly Thr Arg cys 20 Asp Ile Gin Met Ala ser Leu 35 Asn Gly Asp Arg Val Ser 40 Tyr lie Ser 50 Tyr Leu Asn Trp 55 Lys 65 Leu Leu Ile Phe Tyr 70 Thr Ser Arg Phe Ser Gly Ser 85 Glu Gly ser Gly Asn Leu Glu Gin 100 Asp Phe Ala Thr Leu Pro 115 Tyr Thr Phe Gly Gly 120 Ala Asp 130 Ala Ala Pro Thr val 135 Ser Leu 145 Thr Ser Gly Gly Ala 150 Ser Val Pro Lys Asp ile Asn 165 Asn Val Lys Trp Asn Gly val Leu 180 Ser Ser Trp Thr Tyr Ser Met 195 Ser Thr Leu Thr 200 His Asn 210 ser Tyr Thr Cys Glu 215 Ala He 225 Val Lys ser Phe Asn 230 Arg Asn
Gly Leu 10 Leu Leu Leu Cys Phe 15 Gin Thr 25 Gin Thr Thr ser Ser 30 Leu Ser Ile Ser Cys Arg Al a 45 Ser Gin ASP Gin Gin Lys Pro 60 Ser Asp Gly Thr Phe Arg Leu Leu 75 Gly val Pro Ser 80 Thr Asp 90 Tyr Ser Leu Thr Ile 95 Tyr Thr 105 Tyr Phe Cys Gin Gin 110 Gly Asp dy Thr Lys Leu Glu 125 Ile Lys Arg Ile Phe Pro Leu 140 Ser Ser Glu Gin val Cys Phe 155 Leu Asn Asn Phe Tyr 160 Lys Ile 170 Asp Gly Ser Glu Arg 175 Gin ASP 185 Gin Asp ser Lys Asp 190 Ser Thr Leu Thr Lys Asp Glu 205 Ser Tyr Glu Arg Thr Glu His Cys Lys Thr 220 Thr Ser Pro
<210> 184 <211> 705 <212> ADN <213> Mus musculus <4 0 0> 184 atgatgtcct ctgctcagtt ccttggtctc gatatccaga tgacacagac tacatcctcc atcagttgca gggcaagtca agacattagc gatggaactt ttaaactcct tatcttctac aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat gaagattttg ccacttactt ttgccaacag gggaccaaac tggaaataaa acgggctgat tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac ttgaccaagg acgagtatga acgacataac tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac ctgttgctct gttttcaagg taccagatgt 60 ctgtctgcct ctctgggaga cagggtctcc 120 aattatttaa actggtatca gcagaaacca 180 acatcaagat tactctcagg agtcccatca 240 tattctctca ccatttacaa cctggagcaa 300 ggagatacgc ttccgtacac tttcggaggg 360 gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacta 420 tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 480 gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 540 agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 600 agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 660 aggaatgagt gttag 705
<210> 185 <211> 447 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 185
Pro Glu Leu Met Lys pro Gly Ala 10 15 ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 25 30 Gin Gly Lys Thr Leu Glu Trp ile 45 Gly Ala Gly Tyr Asn Gin Lys Phe 60
Glu val Gin Leu Gin Gin Ser Gly 1 5 Ser Vai Lys Met Ser Cys Lys Ala 20
Asn Met His Trp Vai Lys Gin Asn 35 40
Gly Glu lie Asn Pro Asn Ser Gly 50 55 257 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr val Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr 65 70 Thr 75 80 Met Glu Leu Arg ser Leu ser Glu Asp Ser Ala val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Leu Gly Tyr ASp ASp ile Tyr me ASp Asp Trp Tyr Phe 11 Λ ASp val Trp Gly Ala •LUU Gly Thr Thr Val Thr val Ser Ser Ala Lys XJ.U Thr Thr Pro 115 Ala 120 125 Pro ser val Tyr Pro Leu Pro Gly Ser Al a Al a Gin Thr Asn Ser 130 135 140 Val Met Val Thr Leu Gly Cys Leu val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro 145 150 Gly 155 160 Thr Val Thr Trp Asn ser ser Leu Ser ser Gly val His Thr Phe 165 170 175 Thr Pro Ala Val Leu Gin Ser Asp Leu Tyr Thr Leu ser Ser Ser Val 180 185 190 val Pro Ser ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr val Thr cys Asn val Ala 195 200 205 His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys ile Val Pro Arg Asp 210 215 220 val Cys Gly cys Lys Pro cys ile cys Thr val Pro Glu Val Ser ser 225 230 235 240 Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp val Leu Thr Ile Thr Leu Thr 245 250 255 Glu Pro Lys val Thr Cys val Val val Asp ile Ser Lys Asp Asp Pro 260 265 270 Ala Gin val Gin Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp val Glu Val His Thr 275 280 285 val Thr Gin Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn ser Thr Phe Arg ser ser 290 295 300 Glu Phe Glu Leu Pro lie Met His Gin ASp Trp Leu Asn Gly Lys Lys 305 310 315 Thr 320 Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Ile 325 330 335 Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gin Val Tyr Thr Ile Pro 340 345 350 Pro Pro Lys Glu Gin Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met 355 360 365 Gin Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu ASp ile Thr val Glu Trp Trp Asn 370 375 380 Gly Gin pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin Pro Ile Met Asp Thr 385 390 395 400 Asp Gly Ser Tyr Phe Ile Tyr Ser Lys Leu Asn val Gin Lys Ser Asn 405 410 415 Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys ser val Leu His Glu Gly Leu 420 425 430 His Asn HiS HiS Thr Glu Lys Ser Leu ser His Ser Pro Gly Lys 435 440 445
<210 > 186 <211> 1344 <212> ADN <213> Mus musculus <4 0 0> 186 gaggtecaac tgcaacagtc tggacctgaa tcctgcaagg cttctggata tacattcact caaggaaaga ccctagaatg gataggagaa aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg atggagctcc gcagcctgac atctgaggac tacgatgata tctacgacga ctggtacttc gtctcctcag ccaaaacgac acccccatct caaactaact ccatggtgac cctgggatgc acagtgacct ggaactctgg atccctgtcc cagtctgacc tctacactct gagcagctca gagaccgtca cctgcaacgt tgcccacccg gtgcccaggg attgtggttg taagccttgc ctaatgaagc ctggggcttc agtgaagatg 60 gactacaaca tgcactgggt gaagcagaac 120 attaatccta acagtggtgg tgctggctac 180 actgtagaca agtcctccac cacagcctac 240 tctgcagtct attactgtgc aagattgggc 300 gatgtctggg gcgcagggac cacggtcacc 360 gtctatccac tggcccctgg atctgctgcc 420 ctggtcaagg gctatttccc tgagccagtg 480 agcggtgtgc acaccttccc agctgtcctg 540 gtgactgtcc cctccagcac ctggcccagc 600 gccagcagca ccaaggtgga caagaaaatt 660 atatgtacag tcccagaagt atcatctgtc 720 258 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ ttcatcttcc ccccaaagcc tgtgttgtgg tagacatcag gatgtggagg tgcacacagc cgctcagtca gtgaacttcc tgcagggtca acagtgcagc ggcagaccga aggctccaca gataaagtca gtctgacctg tggcagtgga atgggcagcc gatggctctt acttcatcta aatactttca cctgctctgt ctctcccact ctcctggtaa caaggatgtg ctcaccatta caaggatgat cccgaggtcc tcagacgcaa ccccgggagg catcatgcac caggactggc tttccctgcc cccatcgaga ggtgtacacc attccacctc catgataaca gacttcttcc agcggagaac tacaagaaca cagcaagctc aatgtgcaga gttacatgag ggcctgcaca atga ctctgactcc taaggtcacg 780 agttcagctg gtttgtagat 840 agcagttcaa cagcactttc 900 tcaatggcaa ggagttcaaa 960 aaaccatctc caaaaccaaa 1020 ccaaggagca gatggccaag 1080 ctgaagacat tactgtggag 1140 ctcagcccat catggacaca 1200 agagcaactg ggaggcagga 1260 accaccatac tgagaagagc 1320 1344
<210> 187 <211> 466 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 187
Met Gly Trp Ser Trp Thr Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly 1 5 10 15 Vai Leu ser GlU val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Met Lys 20 25 30 Thr ΡΓΟ Gly Ala 35 Tyr Ser val Lys Met ser 40 Val Cys Lys Ala ser Gly 45 Gly Tyr phe Thr Asp Asn Met His Trp Lys Gin Asn Gin tys Thr Leu 50 55 60 Gly Glu 65 Gin Trp Ile Gly Glu Ile 70 Lys Asn Pro Asn Ser Gly 75 Val Gly Ala Tyr Asn 80 Thr Lys Phe Lys Gly Ala Thr Leu Thr Asp Lys ser ser 85 90 95 Val Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu ASp ser Ala 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Leu Gly Tyr Asp Asp ile Tyr ASp Asp Trp Tyr 115 120 125 Phe Asp val Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser ser Ala Lys 130 135 140 Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gin 145 150 155 160 Thr Asn Ser Met val Thr Leu Gly Cys Leu val Lys Gly Tyr phe Pro 165 170 175 Glu Pro val Thr val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu ser ser Gly val 180 185 190 His Thr Phe pro Ala Val Leu Gin Ser ASp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser 195 200 205 Ser vai Thr val Pro Ser Ser Thr Trp ΡΓΟ Ser Glu Thr val Thr Cys 210 215 220 Asn Vai Ala HlS Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys ile Val 225 230 235 240 Pro Arg ASP cys Gly 245 Ile cys Lys Pro Cys Ile 250 Pro Cys Thr val pro Glu 255 Thr Val Ser ser val phe Phe Pro Pro Lys Lys Asp val Leu Ile 260 Thr 265 270 Thr Leu Thr pro Lys val Cys Val Val val Asp Ile ser Lys Asp 275 280 285 A5p Pro Glu val Gin phe ser Trp Phe val Asp Asp Val Glu Val His 290 295 300 Thr Ala Gin Thr Gin pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg 305 310 315 320 Ser vai Ser Glu Leu pro ile Met His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 325 330 335 Glu Phe Lys cys Arg val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala pro ile Glu 340 345 350 Lys Thr lie ser Lys Thr Lys Gly Arg pro Lys Ala Pro Gin Val Tyr 355 Glu 360 365 Thr ile Pro Pro ΡΓΟ Lys Gin Met Ala Lys Asp Lys val ser Leu 370 375 380 Thr cys Met ile Thr ASp Phe Phe Pro Glu ASp ile Thr val Glu Trp 385 390 395 400 259 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Gin Trp Asn Gly Gin Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin Pro ile 405 410 415
Met Asp Thr Asp Gly ser Tyr phe He Tyr ser Lys Leu Asn vai Gin 420 425 430
Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser vai Leu His 435 440 445
Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His' Ser pro 450 455 460
Gly Lys 465 <210> 188 <211> 1401 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 188 atgggatgga gctggacctt tctcttcctc ctgtcaggaa ctgcaggtgt cctctctgag 60 gtccaactgc aacagtctgg acctgaacta atgaagcctg gggcttcagt gaagatgtcc 120 tgcaaggctt ctggatatac attcactgac tacaacatgc actgggtgaa gcagaaccaa 180 ggaaagaccc tagaatggat aggagaaatt aatcctaaca gtggtggtgc tggctacaac 240 cagaagttca agggcaaggc cacattgact gtagacaagt cctccaccac agcctacatg 300 gagctccgca gcctgacatc tgaggactct gcagtctatt actgtgcaag attgggctac 360 gatgatatct acgacgactg gtacttcgat gtctggggcg cagggaccac ggtcaccgtc 420 tcctcagcca aaacgacacc cccatctgtc tatccactgg cccctggatc tgctgcccaa 480 actaacteca tggtgaccet gggatgcctg gtcaagggct atttccctga gccagtgaca 540 gtgacctgga actctggatc cctgtccagc ggtgtgcaca ccttcccagc tgtcctgcag 600 tctgacctct acactctgag cagctcagtg actgtcccct ccagcacctg gcccagcgag 660 accgtcacct gcaacgttgc ccacccggcc agcagcacca aggtggacaa gaaaattgtg 720 cccagggatt gtggttgtaa gccttgcata tgtacagtcc cagaagtatc atctgtcttc 780 atcttccccc caaagcccaa ggatgtgctc accattactc tgactcctaa ggtcacgtgt 840 gttgtggtag acatcagcaa ggatgatccc gaggtccagt tcagctggtt tgtagatgat 900 gtggaggtgc acacagctca gacgcaaccc cgggaggagc agttcaacag cactttccgc 960 tcagtcagtg aacttcccat catgcaccag gactggctca atggcaagga gttcaaatgc 1020 agggtcaaca gtgcagcttt ccctgccccc atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggc 1080 agaccgaagg ctccacaggt gtacaccatt ccacctccca aggagcagat ggccaaggat 1140 aaagtcagtc tgacctgcat gataacagac ttcttccctg aagacattac tgtggagtgg 1200 cagtggaatg ggcagccagc ggagaactac aagaacactc agcccatcat ggacacagat 1260 ggctcttact tcatctacag caagctcaat gtgcagaaga gcaactggga ggcaggaaat 1320 actttcacct gctctgtgtt acatgagggc ctgcacaacc accatactga gaagagcctc 1380 tcccactctc ctggtaaatg a 1401
<210> 189 <211> 213 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 189
Gin ile vai Leu Ser Gin Ser Pro Ala Phe Leu ser Vai ser pro Gly 1 5 10 Ile 15 Ile Asp Lys vai Thr Met Thr Cys Arg Ala ser Ser Ser ser Tyr 20 25 30 Ile HIS Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Ser ser Pro Arg ser Trp Tyr 35 40 45 Gly Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Vai Pro Gly Arg Phe Ser Ser 50 55 60 Glu Ala Glu 80 Gly 65 ser Gly Thr Ser Tyr 70 ser Leu Thr Ile Ser 75 Arg Vai Asp Ala Ala Thr Tyr 85 Tyr cys Gin Gin Trp 90 ser ser Asp pro Leu 95 Thr Phe Gly Ala Gly 100 Thr Lys Leu Glu Leu 105 Lys Arg Ala Asp Ala 110 Ala Pro Thr vai ser Ile Phe Pro pro Ser ser GlU Gin Leu Thr ser Gly Gly 115 120 125 He Asn Ala ser Vai vai Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr pro Lys Asp 130 135 140 vai Asn Vai Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gin Asn Gly Leu 260 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ 145 Thr 150 155 160 Ser Trp Asp Gin Asp ser Lys Asp Ser 17Λ Thr Tyr Ser Met Ser 1 7* Ser Thr Leu Thr Leu iv) 3 Thr Lys Asp Glu Tyr X/ u Glu Arg His Asn Ser J-f D Tyr Thr 180 185 ile val 190 cys GlU Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser pro Lys ser Phe 195 Glu 200 205 Asn Arg Asn cys 210
<210> 190 <211> 642 <212> ADN <213> Mus musculus <4 0 0> 190 caaattgttc tctcccagtc tccagcattc atgacttgca gggccagctc aagtataagt tcctccccca gatcctggat ttatgccaca ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg accaagctgg agctgaaacg ggctgatgct agtgagcagt taacatctgg aggtgcctca aaagacatca atgtcaagtg gaagattgat agttggactg atcaggacag caaagacagc accaaggacg agtatgaacg acaraacagc acttcaccca ttgtcaagag cttcaacagg ctgtctgtat ctccagggga taaggtcaca 60 tacatacact ggtttcagca gaagccagga 120 tccaacctgg cttctggagt ccctggtcgc 180 tctctcacaa tcagcagagt ggaggctgag 240 agtagtgacc cactcacgtt cggtgctggg 300 gcaccaactg tatccatctt cccaccatcc 360 gtcgtgtgct tcttgaacaa cttctacccc 420 ggcagtgaac gaeaaaatgg cgtcctgaac 480 acctacagca tgagcagcac cctcacgttg 540 tatacctgtg aggccactca caagacatca 600 aatgagtgtt ag 642
<210> 191 <211> 235 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 191 ile Phe Ser Phe Leu Leu Ile Ser Ala Ser 10 15 Gin Ile val Leu ser Gin Ser Pro Ala Phe 25 30 Asp Lys 40 val Thr Met Thr r Pro Arg Ala Ser His “V Trp Phe Gin Gin Lys Gly ser ser 55 60 Ala Thr ser Asn Leu Ala Ser Gly val Pro 75 80 Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile 90 95 Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Trp 105 Gly 110 Phe Gly Ala Thr Lys Leu Glu Leu Lys 120 125 Thr Val ser ile Phe Pro Pro Ser ser Glu 135 val 140 Ala Ser Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe 155 160 val Lys Trp Lys ile Asp Gly ser Glu Arg 170 175 Ser Trp Thr Asp Gin Asp Ser Lys A5P Ser Thr 185 190 Leu Thr Leu Thr Lys ASP Glu Tyr Glu 200 Ala Thr 205 cys Glu His Lys Thr Ser Thr Ser 215 Glu 220 Asn Arg Asn Cys 235
Met Asp Phe Gin vai Gin 1 5
Vai ile Met Ser Arg Gly 20
Leu Ser Vai Ser Pro Gly 35
Ser Ser Ile Ser Tyr lie 50
Pro Arg Ser Trp Ile Tyr 65 70
Gly Arg Phe ser Gly Ser 85
Ser Arg Vai Glu Ala Glu 100
Ser ser Asp Pro Leu Thr 115
Arg Ala Asp Ala Ala Pro 130
Gin Leu Thr ser Gly Gly 145 150
Tyr Pro Lys Asp Ile Asn 165
Gin Asn Gly Vai Leu Asn 180
Thr Tyr ser Met Ser Ser 195
Arg His Asn Ser Tyr Thr 210
Pro ile Vai Lys Ser Phe 225 230
<210> 192 <211> 708 <212> ADN <213> Mus musculus 261 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <4 Ο 0> 192 atggattttc aagtgcagat tttcagcttc ctgctaatca gtgcttcagt cataatgtcc agaggacaaa ttgttctctc ccagtctcca gcattcctgt ctgtatctcc aggggataag gtcacaatga cttgcagggc cagctcaagt ataagttaca tacactggtt tcagcagaag ccaggatcct cccccagatc ctggatttat gccacatcca acctggcttc tggagtccct ggtcgcttca gtggcagtgg gtctgggacc tcttactctc tcacaatcag cagagtggag gctgaggatg ctgccactta ttactgccag cagtggagta gtgacccact cacgttcggt gctgggacca agctggagct gaaacgggct gatgctgcac caactgtatc catcttccca ccatccagtg agcagttaac atctggaggt gcctcagtcg tgtgcttctt gaacaacttc taccccaaag acatcaatgt caagtggaag attgatggca gtgaacgaca aaatggcgtc ctgaacagtt ggactgatca ggacagcaaa gacagcacct acagcatgag cagcaccctc acgttgacca aggacgagta tgaacgacat aacagctata cctgtgaggc cactcacaag acatcaactt cacccattgt caagagcttc aacaggaatg agtgttag
<210> 193 <211> 445 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 193
GlU Val Gin Leu Gin Gin ser Gly Ala Asp Leu val Gin Pro Gly Ala 1 5 10 Ile 15 Ser Vai Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asp Lys Asp Tyr 20 25 30 Ile Tyr Ile His 3 C Trp Met Lys Gin Arg ΛΠ Pro Asp Gin Gly Leu 45 Glu Trp Gly Arg J J val ASp Pro ASp Asn Gly Glu Thr Glu Phe Ala Pro Lys Phe 50 55 60 Thr Ala pro Gly Lys Ala Thr Phe Thr Thr Asp Thr ser Ser Asn Tyr 65 70 75 ile 80 Leu Gin Leu Arg Gly Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Tyr Cys 85 90 95 Gly Arg Glu Asp Tyr Asp Gly Thr Tyr Thr Trp Phe Pro Tyr Trp Gly 100 105 Thr 110 Gin Gly Thr Leu Val Thr Val ser Ala Ala Lys Thr Pro Pro Ser 115 120 125 val Vai Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gin Thr Asn Ser Met 130 135 140 Thr val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe pro Glu Pro val 145 150 155 Phe 160 Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr pro Ala 165 170 Thr 175 Vai Leu Gin ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val val Pro 180 185 190 Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr cys Asn Val Ala hí s pro 195 200 205 Gly Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys· ile Val Pro Arg ASp cys 210 215 220 val Cys Lys pro cys ile cys Thr Val Pro Glu val Ser Ser phe Ile 225 230 235 Thr 240 Phe pro Pro Lys Pro Lys Asp val Leu Thr ile Thr Leu pro Lys 245 250 Glu 255 vai Thr Cys val Val val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Val Gin 260 265 Ala 270 Phe ser Trp Phe Val ASp Asp val Glu val HÍS Thr Gin Thr Gin 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn ser Thr phe Arg ser Val ser Glu Leu 290 295 300 Phe Pro Ile Met His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Lys cys Arg 305 310 315 Thr ile 320 Vai Asn ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro ile Glu Lys Ser Lys 325 330 Ile 335 Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala pro Gin Val Tyr Thr Pro Pro Pro 340 345 350 Lys GlU Gin Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr cys Met ile Thr 355 360 365 ASp Phe phe pro Glu Asp ile Thr Val Glu Trp Gin Trp Asn Gly Gin 370 375 380 Gly Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin Pro ile Met ASP Thr ASp 385 390 395 400 ser Tyr phe ile Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gin Lys ser Asn Trp Glu 405 410 Gly 415 Ala Gly Asn Thr phe Thr cys ser val Leu His Glu Leu His Asn 420 425 430 His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys 435 440 445 262 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
<210 > 194 <211> 1338 <212> ADN <213> Mus musculus <4 Ο 0> 194 gaagttcagc tgcaacagtc tcctgcacag cttctggctt cctgaccagg gcctggagtg gccccgaagt tcccgggcaa ctacaactca gaggcctgac tacgatggta cctacacctg gcagccaaaa cgacaccccc aactccatgg tgaccctggg acctggaact ctggatccct gacctctaca ctetgagcag gtcacctgca acgttgccca agggattgtg gttgtaagcc ttccccccaa agcccaagga gtggtagaca tcagcaagga gaggtgcaca cagctcagac gtcagtgaac ttcccatcat gtcaacagtg cagctttccc ccgaaggctc cacaggtgta gtcagtctga cctgcatgat tggaatgggc agccagcgga tcttacttca tctacagcaa ttcacctgct ctgtgttaca cactctcctg gtaaatga tggggcagac cttgtgcagc cgacattaag gactactata gattggaagg gttgatcctg ggccactttt acaacagaca atctgaggac actgccatct gtttccttat tggggccaag atctgtctat ccactggccc atgcctggtc aagggctatt gtccagcggt gtgcacacct ctcagtgact gtcccctcca cccggccagc agcaccaagg ttgcatatgt acagtcccag tgtgctcacc attactctga tgatcccgag gtccagttca gcaaccccgg gaggagcagt gcaccaggac tggctcaatg tgcccccatc gagaaaacca caccattcca cctcccaagg aacagacttc ttccctgaag gaactacaag aacactcagc gctcaatgtg cagaagagca tgagggcctg cacaaccacc caggggcctc agtcaaggtg 60 tacactggat gaaacagagg 120 acaatggtga gactgaattt 180 catcctccaa cacagcctac 240 attactgtgg gagagaagac 300 ggactctggt cactgtctct 360 ctggatctgc tgcccaaact 420 tccctgagcc agtgacagtg 480 tcccagctgt cctgcagtct 540 gcacctggcc cagcgagacc 600 tggacaagaa aattgtgccc 660 aagtatcatc tgtcttcatc 720 ctcctaaggt cacgtgtgtt 780 gctggtttgt agatgatgtg 840 tcaacagcac tttccgctca 900 gcaaggagtt caaatgcagg 960 tctccaaaac caaaggcaga 1020 agcagatggc caaggataaa 1080 acattactgt ggagtggcag 1140 ccatcatgga cacagatggc 1200 actgggaggc aggaaatact 1260 atactgagaa gagcctctcc 1320 1338
<210> 195 <211> 464 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 195
Met Lys cys ser Trp vai lie Phe Phe Leu Met Ala vai Vai Thr Gly 1 5 10 15 Vai Asn ser Glu vai Gin Leu Gin Gin ser Gly Ala Asp Leu vai Gin 20 25 30 lie O tu α Gly Ala ser Vai Lys vai ser Cys Thr Ala ser Gly phe Asp 35 40 45 Gly Lys Asp Tyr Tyr Xle His Trp Met Lys Gin Arg Pro Asp Gin Leu Glu 50 55 60 Ala Trp lie Gly Arg vai Asp Pro Asp Asn Gly Glu Thr Glu phe 65 70 75 80 Pro Lys phe Pro Gly Lys Ala Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser ser Asn 85 90 95 Thr Ala Tyr Leu Gin Leu Arg Gly Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Ile 100 105 110 Phe Tyr Tyr cys Gly Arg Glu Asp Tyr ASp Gly Thr Tyr Thr Trp Pro 115 120 125 Thr Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Vai Thr vai Ser Ala Ala Lys Thr 130 135 140 263 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Pro Pro ser Vai Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gin Thr Asn 145 vai Thr 150 155 160 Ser Met Leu 165 Trp Gly cys Leu val Lys 170 Leu Gly Tyr phe Pro Glu 175 His Pro Vai Thr vai Thr Asn ser Gly ser ser Ser Gly Val Thr 180 185 190 Val Phe Pro Ala val Leu Gin ser A5p Leu Tyr Thr Leu ser Ser Ser 195 200 205 Val Thr Vai ΡΓΟ Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr val Thr Cys Asn 210 Ala 215 220 Ala His pro ser Ser Thr Lys val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg 225 230 235 240 Asp Cys Gly cys Lys pro cys ile Cys Thr Val pro Glu val ser Ser 245 250 255 Vai Phe ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr ile Thr Leu 260 265 270 Thr Pro Lys Vai Thr Cys Val Val Val Asp Ile ser 8! Asp Asp Pro 275 280 Glu vai Gin Phe Ser Trp phe Val Asp Asp Val Glu val His Thr Ala 290 295 300 val Gin Thr Gin pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn ser Thr Phe Arg ser 305 310 315 Glu 320 Ser Glu Leu pro Ile Met His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Phe 325 330 335 Lys cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro ile Glu Lys Thr 340 345 350 ile lie Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala pro Gin val Tyr Thr 355 360 365 Thr pro Pro pro Lys Glu Gin Met Ala Lys Asp Lys Val ser Leu cys 370 375 380 Gin Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu A5P ile Thr Val Glu Trp Trp 385 390 395 400 Asn Gly Gl Π Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin pro ile Met Asp 405 410 415 Thr asp Gly Ser Tyr Phe lie Tyr ser Lys Leu Asn val Gin Lys Ser 420 425 430 Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly 435 440 445 Gly Leu His Asn His Hi S Thr Glu Lys ser Leu ser His ser Pro Lys 450 455 460
<210 > 196 <211> 1395 <212> ADN <213> Mus musculus <4 0 0> 196 atgaaatgca gctgggtcat cttcttcctg atggcagtgg ttacaggggt caattcagaa 60 gttcagctgc aacagtctgg ggcagacctt gtgcagccag gggcctcagt caaggtgtcc 120 tgcacagctt ctggcttcga cattaaggac tactatarac actggatgaa acagaggcct 180 gaccagggcc tggagtggat tggaagggtt gatcctgaca atggtgagac tgaatttgcc 240 ccgaagttcc cgggcaaggc cacttttaca acagacacat cctccaacac agcctaccta 300 caactcagag gcctgacatc tgaggacact gccatctatt actgtgggag agaagactac 360 gatggtacct acacctggtt tccttattgg ggccaaggga ctctggtcac tgtctctgca 420 gccaaaacga cacccccatc tgtctatcca ctggcccctg gatctgctgc ccaaactaac 480 tccatggtga ccctgggatg cctggtcaag ggctatttcc ctgagccagt gacagtgacc 540 tggaactctg gatccctgtc cagcggtgtg cacaccttcc cagctgtcct gcagtctgac 600 ctctacactc tgagcagctc agtgactgtc ccctccagca cctggcccag cgagaccgtc 660 acctgcaacg ttgcccaccc ggccagcagc accaaggtgg acaagaaaat tgtgcccagg 720 gattgtggtt gtaagccttg catatgtaca gtcccagaag tatcatctgt cttcatcttc 780 cccccaaagc ccaaggatgt gctcaccatt actctgactc ctaaggtcac gtgtgttgtg 840 gtagacatca gcaaggatga tcccgaggtc cagttcagct ggtttgtaga tgatgtggag 900 gtgcacacag ctcagacgca accccgggag gagcagttca acagcacttt ccgctcagtc 960 agtgaacttc ccatcatgca ccaggactgg ctcaatggca aggagttcaa atgcagggtc 1020 aacagtgcag ctttccctgc ccccatcgag aaaaccatct ccaaaaccaa aggcagaccg 1080 aaggctccac aggtgtacac cattccacct cccaaggagc agatggccaa ggataaagtc 1140 agtctgacct gcatgataac agacttcttc cctgaagaca ttactgtgga gtggcagtgg 1200 aatgggcagc cagcggagaa ctacaagaac actcagccca tcatggacac agatggctct 1260 tacttcatct acagcaagct caatgtgcag aagagcaact gggaggcagg aaatactttc 1320 acctgctctg tgttacatga gggcctgcac aaccaccata ctgagaagag cctctcccac 1380 tctcctggta aatga 1395 264 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
<210> 197 <211> 214 <212> PRT <213> Mus musculus <4 Ο 0> 197 ASp Leu Gin Met Thr Gin Thr Thr Ser ser Leu ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 Ile 15 Tyr ASp Arg val Thr 20 Tyr lie ser Cys Arg Ala 25 Asp Ser Gin Asp Ser 30 Asn Leu Asn Trp Gin Gin Lys pro Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Gly Phe Tyr Thr ser Thr Leu Gin Ser Gly val ΡΓΟ ser Arg Phe ser 50 55 60 Glu Gin Ser Gly ser Gly Thr Asn Tyr Ser Leu Thr ile Thr Asn Leu 65 70 75 Thr 80 Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Phe cys Gin Gin Gly ASp Leu Pro Tyr 85 90 95 Ala Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala 100 105 Gin 110 Gly Pro Thr val Ser Ile Phe Pro pro ser Ser Glu Leu Thr Ser 115 120 125 Ile Gly Ala ser Val val cys phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp 130 135 140 Asn Vai Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gin Asn Gly Val Leu 145 150 155 Thr 160 Asn Ser Trp Thr Asp Gin ASP Ser Lys Asp ser Tyr Ser Met Ser 165 170 His 175 ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys ASp Glu Tyr Glu Arg Asn ser Tyr 180 185 190 Thr Cys Glu 195 Arg Ala Thr His Lys Thr 200 Ser Thr Ser Pro Ile 205 Val Lys Ser Phe Asn Asn Glu cys 210
<210 > 198 <211> 645 <212> ADN <213> Mus musculus <4 Ο 0> 198 cagagtcacc 60 gcagaaacca 120 agtcccatcg 180 cctggagcaa 240 gttcggaggg 300 cttcccacca 360 caacttctac 420 tggcgtcctg 480 caccctcacg 540 tcacaagaca 600 645 gatctccaga atcagttgca gatggaactg aggttcagtg gatgatgctg gggaccaagc tccagtgagc cccaaagaca aacagttgga ttgaccaagg tcaacttcac tgacacagac gggcaagtca ttaagctcct gcagtgggtc ccacttactt tggaaataaa agttaacatc tcaatgtcaa ctgatcagga acgagtatga ccattgtcaa tacttcctcc ggacattagc gatcttctac tggaacaaat ttgccaacag acgggctgat tggaggtgcc gtggaagatt cagcaaagac acgacataac gagcttcaac ctgtctgcct aattatttaa acatcaacat tattctctca ggtgatacgc gctgcaccaa tcagtcgtgt gatggcagtg agcacctacaagctatacct aggaatgagt ctctgggaga actggtatca tacagtcagg ccattaccaa ttccgtacac ctgtatccat gcttcttgaa aacgacaaaa gcatgagcag gtgaggccac gttag
<210> 199 <211> 234 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 199
Met Met Ser Ser Ala Gin Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu Cys Phe Gin 15 10 IS
Gly ser Arg Cys Asp Leu Gin Met Thr Gin rhr Thr ser ser Leu ser 265 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ 20 25 30 Gin Ala Ser Leu Gly Asp Arg Vai Thr lie ser Cys Arg Ala Ser ASP 35 40 45 Thr Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Asp Gly Val 50 55 60 val Lys Leu Leu Ile Phe Tyr Thr Ser Thr Leu Gin ser Gly Pro Ser 65 70 75 Ile 80 Arg Phe Ser Gly ser Gly Ser Gly Thr Asn Tyr ser Leu Thr Thr 85 90 95 Asn Leu Glu Gin Asp ASp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Gin Gin Gly Asp 100 105 110 Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 115 120 125 Glu Gin Ala Asp Ala Ala Pro Thr val Ser Ile Phe Pro Pro Ser ser 130 135 140 Phe Leu Thr ser Gly Gly Ala ser Val Val cys Phe Leu Asn Asn Tyr 145 150 155 Glu 160 Pro Lys Asp Ile Asn Vai Lys Trp Lys ile Asp Gly Ser Arg Gin 165 170 175 Thr Asn Gly vai Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gin Asp Ser Lys Asp Ser 180 185 190 Glu Tyr ser Met Ser ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Arg 195 200 205 Thr His Asn ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Ser Pro 210 215 220 lie Vai Lys Ser Phe Asn Arg Asn GlU cys 225 230
<210> 200 <211> 705 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 200 atgatgtcct ctgctcagtt ccttggtctc ctgttgctct gttttcaagg ttccagatgt 60 gatctccaga tgacacagac tacttcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc 120 atcagttgca gggcaagtca ggacattagc aattatttaa actggtatca gcagaaacca 180 gatggaactg ttaagctcct gatcttctac acatcaacat tacagtcagg agtcccatcg 240 aggttcagtg gcagtgggtc tggaacaaat tattctctca ccattaccaa cctggagcaa 300 gatgatgctg ccacttactt ttgccaacag ggtgatacgc ttccgtacac gttcggaggg 360 gggaccaagc tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 420 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 480 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 540 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 600 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 660 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gttag 705
<210> 201 <211> 447 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 201 Glu vai Gin Leu Gin Gin 1 5 Ser vai Lys Met Ser cys 20 Asn Met His Trp Met Lys 35 Gly Glu lie Asn Pro Asn 50 Lys Gly Lys Ala Thr Leu 65 70 Met Glu Leu Arg Ser Leu 85 Ala Arg Leu Gly Tyr Tyr 100 ser Gly Pro Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala 10 15
Lys Ala ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 25 30
Gin Asn Gin Gly Lys Ser Leu Glu Trp ile 40 , 45 ,
Ser Gly Gly Ser Gly Tyr Asn Gin Lys Phe 55 50
Thr Vai Asp Lys ser Ser Ser Thr Ala Tyr 75 80
Thr ser Glu Asp Ser Ala Vai Tyr Tyr Cys 90 95
Gly Asn Tyr Glu Asp Trp Tyr Phe Asp vai 105 HO 266 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr 115 Ala 120 Pro Ser val Tyr Pro Leu Pro 130 135 Val Met Vai Thr Leu Gly cys Leu 145 150 Gly Thr val Thr Trp Asn ser Ser 165 ΡΓΟ Ala val Leu Gin ser Asp Leu 180 vai pro Ser Ser Thr Trp Pro ser 195 200 His Pro Al a Ser Ser Thr Lys Val 210 215 Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile cys 225 230 phe ile Phe pro Pro Lys Pro Lys 245 ΡΓΟ Lys val Thr Cys Val Val val 260 vai Gin Phe ser Trp Phe val Asp 275 280 Thr Gin pro Arg Glu Glu Gin Phe 290 295 Glu Leu Pro ile Met His Gin Asp 305 310 Cys Arg val Asn Ser Ala Alã Phe 325 ser Lys Thr Lys Gly Arg pro Lys 340 Ala pro Pro S! Glu Gin Met Lys 360 Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu ASp 370 375 Gly Gin pro Ala Glu Asn Tyr Lys 385 390 Asp Gly ser Tyr Phe 405 Asn ile Tyr ser Trp Glu Ala Gly Thr Phe Thr 420 Hi s Asn His His Thr Glu Lys Ser 435 440
Val Ser ser Ala Lys 17C Thr Thr Pro Gly ser Ala Ala Gin Thr Asn ser 140 val Lys Gly Tyr phe Pro Glu pro 155 160 Leu ser Ser Gly Val His Thr Phe 170 175 Tyr Thr Leu Ser Ser Ser val Thr 185 190 Glu Thr val Thr cys Asn val Ala 205 Asp Lys Lys Ile val Pro Arg Asp 220 val Thr val Pro Glu Val Ser Ser 235 240 Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr 250 255 Glu Asp Ile Ser Lys Asp Asp pro 265 270 ASp val Glu Val His Thr Ala Gin 285 Asn Ser Thr Phe Arg Ser val ser 300 Glu Phe Trp Leu Asn Gly Lys Lys 315 320 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 330 335 Ala pro Gin Val Tyr Thr ile Pro 345 350 ASp Lys val ser Leu Thr cys Met 365 Ile Thr val Glu Trp Gin Trp Asn 380 Asn Thr Gin Pro Ile Met Asp Thr 395 400 Lys Leu Asn val Gin Lys ser Asn 410 415 Cys Ser val Leu His Glu Gly Leu 425 430 Leu Ser Hi s Ser Pro Gly Lys 445 <210> 202 <211> 1344 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 202 gaggtccagt tcctgcaagg caaggaaaga aaccagaagt atggagctcc tactatggta gtctcctctg caaactaact acagtgacct cagtctgacc gagaccgtca gtgcccaggg ttcatcttcc tgtgttgtgg gatgtggagg cgctcagtca tgcagggtca ggcagaccga gataaagtca tggcagtgga gatggctctt aatactttca ctctcccact rgcaacagtc cttctggata gcctagagtg tcaaaggcaa gcagcctgac actacgagga ccaaaacgac ccatggtgac ggaactctgg tctacactct cctgcaacgt attgtggttg ccccaaagcc tagacatcag tgcacacagc gtgaacttcc acagtgcagc aggctccaca gtctgacctg atgggcagcc acttcatcta cctgctctgt ctcctggtaa tggacctgaa cacattcact gataggagag ggccacattg atctgaggac ctggtatttc acccccatct cctgggatgc atccctgtcc gagcagctca tgcccacccg taagccttgc caaggatgtg caaggatgat tcagacgcaa catcatgcac tttccctgcc ggtgtacacc catgataaca agcggagaac cagcaagctc gttacatgag atga ctaatgaagc ctggggcttc agtgaagatg 60 gactacaaca tgcactggat gaagcagaac 120 attaatccta acagtggtgg ttctggttac 180 actgtagaca agtcctccag cacagcctac 240 tctgcagtct attactgtgc aagattgggc 300 gatgtctggg gcgcagggac cacggtcacc 360 gtctatccac tggcccctgg atctgctgcc 420 ctggtcaagg gctatttccc tgagccagtg 480 agcggtgtgc acaccttccc agctgtcctg 540 gtgactgtcc cctccagcac ctggcccagc 600 gccagcagca ccaaggtgga caagaaaatt 660 atatgtacag tcccagaagt atcatctgtc 720 ctcaccatta ctctgactcc taaggtcacg 780 cccgaggtcc agttcagctg gtttgtagat 840 ccccgggagg agcagttcaa cagcactttc 900 caggactggc tcaatggcaa ggagttcaaa 960 cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa 1020 attccacctc ccaaggagca gatggccaag 1080 gacttcttcc ctgaagacat tactgtggag 1140 tacaagaaca ctcagcccat catggacaca 1200 aatgtgcaga agagcaactg ggaggcagga 1260 ggcctgcaca accaccatac tgagaagagc 1320 1344 267 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
<210> 203 <211> 466 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 203
Met Gly Trp 5er Trp Thr Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ser Gly 1 5 10 Glu 15 Vai Leu Ser Glu val Gin Leu Gl n Gin ser Gly Pro Leu Met Lys 20 25 30 Thr Phe Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Asp Tyr Asn Met Hi S Trp Met Lys Gin Asn Gin Gly Lys Ser Leu 50 55 60 Gly Glu Trp ile Gly Glu ile Asn Pro Asn ser Gly Gly Ser Tyr Asn 65 70 75 80 Gin Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys ser Ser ser 85 90 95 val Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp ser Ala 100 105 Glu 110 Tyr Tyr cys Ala Arg Leu Gly Tyr Tyr Gly Asn Tyr Asp Trp Tyr 115 120 125 Ala phe Asp 130 Vai Trp Gly Ala $ Thr Thr val Thr val 140 Ser ser Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala pro Gly Ser Ala Ala Gl n 145 150 155 Gly Phe 160 Thr Asn Ser Met val Thr Leu Gly cys Leu val Lys Tyr Pro 165 170 175 Glu Pro Vai Thr val Thr Trp Asn ser Gly ser Leu ser ser Gly Val 180 185 Thr 190 Hi s Thr Phe Pro Ala val Leu Gin ser ASp Leu Tyr Leu Ser Ser 195 200 205 val Thr Ser Vai Thr vai pro Ser ser Thr Trp pro ser GlU Thr cys 210 215 220 val Asn Vai Ala His Pro Ala Ser ser Thr Lys val Asp Lys Lys Ile 225 230 235 240 Pro Arg Asp cys Gly Cys Lys Pro Cys ile Cys Thr val Pro Glu Val 245 250 255 Ser ser vai phe Ile phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp val Leu Thr Ile 260 265 270 Thr Leu Thr •37c pro Lys val Thr Cys val val val Asp ile 7RC Ser Lys ASp Asp Pro £ /J Glu val Gin Phe ser lOU Trp phe val ASp Asp Val Glu val His 290 295 300 Thr Ala Gin Thr Gin Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg 305 310 Gin 315 320 Ser vai ser Glu Leu pro ile Met His ASp Trp Leu Asn Gly Lys 325 330 335 Glu Phe Lys Cys Arg val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro ile Glu 340 345 350 Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gin val Tyr 355 360 365 Thr lie pro Pro Pro Lys Glu Gin Met Ala Lys Asp Lys val ser Leu 370 375 380 Thr cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr val Glu Trp 385 390 395 400 Gin Trp Asn Gly Gin Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin Pro ile 405 410 415 Met Asp Thr Asp Gly ser Tyr Phe ile Tyr ser Lys Leu Asn val Gin 420 Gly 425 430 Lys Ser Asn Trp Glu Ala Asn Thr Phe Thr Cys ser Val Leu His 435 440 445 Glu Gly Leu His Asn His HIS Thr Glu Lys ser Leu Ser His ser pro 450 455 460
Gly Lys 465
<210> 204 <211> 1401 <212> ADN <213> Mus musculus 268 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <400> 204 atgggatgga gctggacctt tctcttcctc gtccagttgc aacagtctgg acctgaacta tgcaaggctt ctggatacac attcactgac ggaaagagcc tagagtggat aggagagatt cagaagttca aaggcaaggc cacattgact gagctccgca gcctgacatc tgaggactct tatggtaact acgaggactg gtatttcgat tcctctgcca aaacgacacc cccatctgtc actaactcca tggtgaccct gggatgcctg gtgacctgga actctggatc cctgtccagc tctgacctct acactctgag cagctcagtg accgtcacct gcaacgttgc ccacccggcc cccagggatt gtggttgtaa gccttgcata atcttccccc caaagcccaa ggatgtgctc gttgtggtag acatcagcaa ggatgatccc gtggaggtgc acacagctca gacgcaaccc tcagtcagtg aacttcccat catgcaccag agggtcaaca gtgcagcttt ccctgccccc agaccgaagg ctccacaggt gtacaccatt aaagtcagtc tgacctgcat gataacagac cagtggaatg ggcagccagc ggagaactac ggctcttact tcatctacag caagctcaat actttcacct gctctgtgtt acatgagggc tcccactctc ctggtaaatg a
<210> 205 <211> 215 <212> PRT <213> Mus musculus ctgtcaggaa cttcgggtgt cctctctgag 60 atgaagcctg gggcttcagt gaagatgtcc 120 tacaacatgc actggatgaa gcagaaccaa 180 aatcctaaca gtggtggttc tggttacaac 240 gtagacaagt cctccagcac agcctacatg BOO gcagtctatt actgtgcaag attgggctac 360 gtctggggcg cagggaccac ggtcaccgtc 420 tatccactgg cccctggatc tgctgcccaa 480 gtcaagggct atttccctga gccagtgaca 540 ggtgtgcaca ccttcccagc tgtcctgcag 600 actgtcccct ccagcacctg gcccagcgag 660 agcagcacca aggtggacaa gaaaattgtg 720 tgtacagtcc cagaagtatc atctgtcttc 780 accattactc tgactcctaa ggtcacgtgt 840 gaggtccagt tcagctggtt tgtagatgat 900 cgggaggagc agttcaacag cactttccgc 960 gactggctca atggcaagga gttcaaatgc 1020 atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggc 1080 ccacctccca aggagcagat ggccaaggat 1140 ttcttccctg aagacattac tgtggagtgg 1200 aagaacactc agcccatcat ggacacagat 1260 gtgcagaaga gcaactggga ggcaggaaat 1320 ctgcacaacc accatactga gaagagcctc 1380 1401 <400> 205
Gin Ile vai Leu Thr Gin ser Pro Ala ile Met Ser Ala Ser Pro Gly 1 5 10 Thr 15 Glu Lys vai Thr Met Thr cys Arg Ala ser Ser Ser Val ser Ser 20 Gin Gin 25 30 Tyr Leu ASM Trp Tyr Lys Pro Gly ser Ser pro Lys Leu Trp 35 40 45 Phe lie Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly val Pro Ala Arg Ser 50 55 60 Val Glu çly ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser ser 65 70 75 Phe 80 Ala Glu ASp Ala Ala OÇ Thr Tyr Tyr Cys Gin QA Gin Tyr Asp phe Pro Ser Thr Phe Gly 02 Gly Gly Thr Lys Leu yu Glu ile Lys Arg Ala ASp Ala 100 105 110 Thr Ala Pro Thr Vai Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gin Leu ser 115 120 12 S Gly Gly Ala Ser Vai Vai Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr pro Lys Asp 130 135 140 Gly val lie ASM vai Lys Trp Lys ile Asp Gly Ser Glu Arg Gin Asn 145 150 155 160 Leu Asn Ser Trp Thr ASp Gin ASp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr ser Met 165 Thr 170 175 Ser Ser Thr Leu Thr Leu Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn ser 180 185 190 Val Tyr Thr cys Glu Ala Thr Hl S Lys Thr Ser Thr ser Pro ile Lys 195 200 205 ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 210 215
<210> 206 <211> 645 <212> ADN <213> Mus musculus 269 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <4Ο0> 206 cagattgttc tcacccagtc tccagcaatc atgacctgca gggccagctc aagtgtaact ccaggatctt cccccaaaet ctggatttat gctcgcttca gtggcagtgg gtctgggacc gctgaggatg ctgccactta ttactgccag ggaggcacca agctggaaat caagcgggct ccatccagtg agcagttaac atctggaggt taccccaaag acatcaatgt caagtggaag ctgaacagtt ggactgatca ggacagcaaa acgttgacca aggacgagta tgaacgacat acatcaactt cacccatcgt caagagcttc
<210> 207 <211> 237 <212> PRT <213> Mus musculus atgtctgcat ctccagggga gaaggtcacc 60 tccagttact tgaactggta ccagcagaag 120 agcacatcca acctggcttc aggagtccca 180 tcttactctc tcacaatcag cagtgtggag 240 cagtatgatt ttttcccatc gacgttcggt 300 gatgctgcac caactgtatc catcttccca 360 gcctcagtcg tgtgcttctt gaacaacttc 420 attgatggca gtgaacgaca aaatggcgtc 480 gacagcacct acagcatgag cagcaccctc 540 aacagctata cctgtgaggc cactcacaag 600 aacaggaatg agtgt 645 <400> 207
Met ASP ser Gin Vai Gin Ile Phe Ser Phe Leu Leu ile Ser Ala Leu 1 5 10 15 vai Lys Met ser Arg Gly Gin ile Val Leu Thr Gin Ser pro Ala Ile 20 25 30 Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr cys Arg Ala Ser 35 40 45 Gly ser Ser vai Thr Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys pro 50 55 60 Ala Ser Ser pro Lys Leu Trp Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu ser Gly 65 70 75 80 Vai Pro Ala Arg Phe Ser Gly ser Gly ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu 85 90 95 Thr Ile Ser Ser vai Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr cys Gin 100 105 110 Gin Tyr Asp Phe Phe Pro Ser Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu 115 120 125 11 e Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr val Ser Ile Phe Pro Pro Ser 130 135 140 Ser Glu Gin Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val val Cys Phe Leu Asn 145 150 155 160 Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser 165 170 175 Glu Arg Gin Asn Gly Vai Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gin Asp Ser Lys 180 185 190 Asp ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu 195 200 205 Tyr Glu Arg His Asn ser Tyr Thr cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser 210 vai 215 220 Thr ser pro Ile Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu cys 225 230 235
<210> 208 <211> 711 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 208 atggattctc aagtgcagat tttcagcttc cttctaatca gtgccttagt caaaatgtcc 60 agaggacaga ttgttctcac ccagtctcca gcaatcatgt ctgcatctcc aggggagaag 120 gtcaccatga cctgcagggc cagctcaagt gtaacttcca gttacttgaa ctggtaccag 180 cagaagccag gatcttcccc caaactctgg atttatagca catccaacct ggcttcagga 240 gtcccagctc gcttcagtgg cagtgggtct gggacctctt actctctcac aatcagcagt 300 gtggaggctg aggatgctgc cacttattac tgccagcagt atgatttttt cccatcgacg 360 ttcggtggag gcaccaagct ggaaatcaag cgggctgatg ctgcaccaac tgtatccatc 420 ttcccaccat ccagtgagca gttaacatct ggaggtgcct cagtcgtgtg cttcttgaac 480 aacttctacc ccaaagacat caatgtcaag tggaagattg atggcagtga acgacaaaat 540 ggcgtcctga acagttggac tgatcaggac agcaaagaca gcacctacag catgagcagc 600 accctcacgt tgaccaagga cgagtatgaa cgacataaca gctatacctg tgaggccact 660 cacaagaeat caacttcacc catcgtcaag agcttcaaca ggaatgagtg t 711 270 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
<210> 209 <211> 445 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 209
Glu Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro S!y Ala 1 5 10 Thr Phe Thr 15 Ser val Lys Met ser cys Lys Ala ser Gly Tyr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Lys Gin Ser His Gly Glu Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 Thr 45 Phe Gly Asp 50 ile Asn Pro Tyr Asn 55 ASP Asp Thr ar Asn HÍS Lys Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr val Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 Ala val 80 Met Gin Leu Asn ser Leu Thr ser Glu A5p ser Tyr Tyr cys 85 90 Ala 95 Ala Arg Glu Thr Ala Val ile Thr Thr Asn Met Asp Tyr Trp Gly íoo 105 Thr 110 Gin Gly Thr Ser val Thr Val ser Ser Ala Lys Thr Pro pro Ser 115 120 Gin 125 val vai Tyr Pro Leu Ala pro Gly ser Ala Ala Thr Asn Ser Met 130 135 140 Thr Leu Gly cys Leu val Lys Gly Tyr phe pro Glu Pro Val Thr val 145 150 155 160 Thr Trp Asn ser Gly ser Leu ser Ser Gly val Hi s Thr Phe pro Ala 165 170 175 vai Leu Gin Ser ASp Leu Tyr Thr Leu Ser ser Ser val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Thr Trp Pro ser Glu Thr Val Thr cys Asn val Ala His Pro 195 200 205 Gly Ala ser οι n Ser Thr Lys val Asp ο-ι κ Lys Lys Ile val Pro Arg Asp cys cys Lys pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val LfcV Ser Ser Val Phe ile 225 230 235 240 Phe Pro pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys 245 250 255 val Thr cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp ΡΓΟ Glu Val Gin Phe 260 265 270 ser Trp Phe val Asp ASp val Glu Val HÍS Thr Ala Gin Thr Gin 275 280 285 Pro Arg 290 Glu Glu Gin Phe Asn 295 ser Thr Phe Arg Ser 300 val Ser Glu Leu pro Ile Met His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys cys Arg 305 310 315 320 Val Asn Ser Ala Al a Phe Pro Ala Pro ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr 325 330 335 Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gin Val Tyr Thr Ile Pro pro Pro 340 345 350 Lys Glu Gin Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Phe 355 360 365 Asp Phe Pro Glu ASP Ile Thr Val Glu Trp Gin Trp Asn Gly Gin 370 375 380 Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin Pro ile Met Asp Thr Asp Gly 385 390 395 400 ser Tyr Phe Ile Tyr 405 Ser Lys Leu Asn Val 410 Gin Lys Ser Asn Tft Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr cys Ser Val TJ.W Leu His Gl U Gly Leu His Asn Thr 435 420 425 430 HÍ5 His GlU Lys ser Leu ser 440 HÍS Ser Pro Gly Lys 445 <211 D> 2 210
<211> 1335 <212> ADN <213> Mus musculus 271 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <400> 210 gaggtccagc tgcaacaatc tggacctgag tcctgtaagg cttctggata cacattcact catggagaga gccttgagtg gattggagat aaccacaagt tcaagggcaa ggccacattg atgcagctca acagcctgac atctgaggac gccgttatta ctacgaatgc tatggactac tcagccaaaa cgacaccccc atctgtctat aactccatgg tgaccctggg atgcctggtc acctggaact ctggatccct gtccagcggt gacctctaca ctctgagcag ctcagtgact gtcacctgca acgttgccca cccggccagc agggattgtg gttgtaagcc ttgcatatgt ttccccccaa agcccaagga tgtgctcacc gtggtagaca tcagcaagga tgatcccgag gaggtgcaca cagctcagac gcaaccccgg gtcagtgâac ttcccatcat gcaccaggac gtcaacagtg cagctttccc tgcccccatc ccgaaggctc cacaggtgta caccattcca gtcagtctga cctgcatgat aacagacttc tggaatgggc agccagcgga gaactacaag tcttacttca tctacagcaa gctcaatgtg ttcacctgct ctgtgttaca tgagggcctg cactctcctg gtaaa
<210> 211 <211> 464 <212> PRT <213> Mus musculus ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagatg 60 gactactaca tgaactgggt gaagcagagc 120 attaatcctt acaacgatga tactacctac 180 actgtagaca aatcctccaa cacagcctac 240 tctgcagtct attactgtgc aagagagacg 300 tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc 360 ccactggccc ctggatctgc tgcccaaact 420 aagggctatt tccctgagcc agtgacagtg 480 gtgcacacct tcccagctgt cctgcagtct 540 gtcccctcca gcacctggcc cagcgagacc 600 agcaccaagg tggacaagaa aattgtgccc 660 acagtcccag aagtatcatc tgtcttcatc 720 attactctga ctcctaaggt cacgtgtgtt 780 gtccagttca gctggtttgt agatgatgtg 840 gaggagcagt tcaacagcac tttccgctca 900 tggctcaatg gcaaggagtt caaatgcagg 960 gagaaaacca tctccaaaac caaaggcaga 1020 cctcccaagg agcagatggc caaggataaa 1080 ttccctgaag acattactgt ggagtggcag 1140 aacactcagc ccatcatgga cacagatggc 1200 cagaagagca actgggaggc aggaaatact 1260 cacaaccacc atactgagaa gagcctctcc 1320 1335 <400> 211
Met 1 Gly Trp Asn Trp 5 ile Phe Leu phe Leu 10 Leu Ser Gly Thr Ala 15 Gly Vai Tyr Ser Glu 20 val Gin Leu Gin Gin 25 Ser Gly Pro Glu Leu 30 Val Lys Pro Gly Ala 35 Ser val Lys Met ser 40 Cys Lys Ala Ser Gly 45 Tyr Thr Phe Thr Asp 50 Tyr Tyr Met Asn Trp 55 Val Lys Gl n Ser His 60 Gly Gl u Ser Leu Glu 65 Trp ile Gly Asp ile 70 Asn Pro Tyr Asn ASp 75 Asp Thr Thr Tyr Asn 80 His Lys Phe Lys Gly 85 Lys Ala Thr Leu Thr 90 val ASP Lys Ser ser 95 Asn \ Thr Ala Tyr Met 100 Gin Leu Asn Ser Leu 105 Thr Ser Glu Asp Ser 110 Ala Val Tyr Tyr cys 115 Ala Arg Glu Thr Ala 120 val Ile Thr Thr Asn 125 Ala Met Asp Tyr Trp 130 Gly Gin Gly Thr Ser 135 val Thr val ser ser 140 Ala Lys Thr Thr Pro 145 Pro ser Val Tyr Pro 150 Leu Ala Pro Gly Ser 155 Ala Ala Gl n Thr Asn 160 Ser Met vai Thr Leu 165 Gly cys Leu val Lys 170 Gly Tyr Phe pro Glu 175 Pro vai Thr val Thr 180 Trp Asn ser Gly Ser 185 Leu Ser Ser Gly Val 190 His Thr 272 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Phe ΡΓΟ Ala 195 Vai Leu Gin Ser Asp 200 Thr Vai 210 Pro Ser Ser Thr Trp 215 Pro Ala 225 His Pro Ala Ser Ser 230 Thr Lys Asp cys Gly Cys Lys 245 pro Pro Cys Ile Vai Phe Ile Phe 260 pro Lys Pro Thr Pro Lys 275 vai Thr Cys val Val 280 Glu vai 290 Gin Phe Ser Trp Phe 295 val Gin 305 Thr Gin Pro Arg Glu 310 Glu Gin Ser Glu Leu Pro ile 325 Met His Gin Lys cys Arg val 340 Thr Asn Ser Ala Ala Ile Ser Lys 355 Lys Gly Arg pro 360 Pro Pro 370 Pro Lys Glu Gin Met 375 Ala Met 385 Ile Thr ASp Phe Phe 390 Pro Glu Asn Gly Gin Pro Ala 405 Glu Asn Tyr Thr Asp Gly Ser 420 Tyr Phe ile Tyr Asn Trp Glu 435 Ala Gly Asn Thr Phe 440 Leu His 450 Α5Π His His Thr Gl u 455 Lys
Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser val 205 val ser Glu Thr val Thr Cys Asn 220 val Asp Lys Lys ile val Pro Arg 235 240 cys Thr Val Pro Glu val Ser ser 250 255 Lys Asp Val Leu Thr ile Thr Leu 265 270 val Asp ile Ser Lys Asp Asp pro 285 Asp Asp val Glu Val His Thr Ala 300 Phe Asn ser Thr Phe Arg ser Val 315 320 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe 330 335 Phe Pro Ala Pro ile Glu Lys Thr 345 3 50 Lys Ala pro Gin val Tyr Thr Ile Lys Asp Lys Val 3 Ό3 Ser Leu Thr cys 380 Asp ile Thr Val Glu Trp Gin Trp 395 400 Lys Asn Thr Gin Pro Ile Met Asp 410 415 Ser Lys Leu Asn Val Gin Lys Ser 425 430 Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly 445 ser Leu Ser His ser Pro Gly Lys 460
<210> 212 <211> 1392 <212> ADN <213> Mus musculus < 4 0 0 > 212 atgggatgga actggatctt tctcttcctc gtccagctgc aacaatctgg acctgagctg tgtaaggctt ctggatacac attcactgac ggagagagcc ttgagtggat tggagatatt cacaagttca agggcaaggc cacattgact cagctcaaca gcctgacatc tgaggactct gttattacta cgaatgctat ggactactgg gccaaaacga cacccccatc tgtctatcca tccatggtga ccctgggatg cctggtcaag tggaactctg gatccctgtc cagcggtgtg ctctacactc tgagcagctc agtgactgtc acctgcaacg ttgcccaccc ggccagcagc gattgtggtt gtaagccttg catatgtaca cccccaaagc ccaaggatgt gctcaccatt gtagacatca gcaaggatga tcccgaggtc gtgcacacag ctcagacgca accccgggag agtgaacttc ccatcatgca ccaggactgg aacagtgcag ctttccctgc ccccatcgag aaggctccac aggtgtacac cattccacct agtctgacct gcatgataac agacttcttc aatgggcagc cagcggagaa ctacaagaac tacttcatct acagcaagct caatgtgcag acctgctctg tgttacatga gggcctgcac tctcctggta aa ttgtcaggaa ctgcaggtgt ctactctgag 60 gtgaagcctg gggcttcagt gaagatgtcc 120 tactacatga actgggtgaa gcagagccat 180 aatccttaca acgatgatac tacctacaac 240 gtagacaaat cctccaacac agcctacatg 300 gcagtctatt actgtgcaag agagacggcc 360 ggtcaaggaa cctcagtcac cgtctcctca 420 ctggcccctg gatctgctgc ccaaactaac 480 ggctatttec ctgagccagt gacagtgacc 540 cacaccttcc cagctgtcct gcagtctgac 600 ccctccagca cctggcccag cgagaccgtc 660 accaaggtgg acaagaaaat tgtgcecagg 720 gtcccagaag tatcatctgt cttcatcttc 780 actctgactc ctaaggtcac gtgtgttgtg 840 cagttcagct ggtttgtaga tgatgtggag 900 gagcagttca acagcacttt ccgctcagtc 960 ctcaatggca aggagttcaa atgcagggtc 1020 aaaaccatct ccaaaaccaa aggcagaccg 1080 cccaaggagc agatggccaa ggataaagtc 1140 cctgaagaca ttactgtgga gtggcagtgg 1200 actcagccca tcatggacac agatggctct 1260 aagagcaact gggaggcagg aaatactttc 1320 aaccaccata ctgagaagag cctctcccac 1380 1392
<210> 213 <211> 215 <212> PRT <213> Sequência Artificial 273 ΕΡ 1 891 101/PT <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado <400> 213 ASp Ile Gin Leu Thr Gin Ser Pro Ser Phe Leu ser Ala ser val Gly 1 Vai Thr 5 Thr 10 15 ASp Arg Ile Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Thr ser Ser 20 Gin Gin 25 30 Tyr Leu Asrt Trp Tyr Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 Thr 40 45 ile Tyr Ser Ser Asn Leu Ala Ser Gly val Pro Ser Arg phe ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gin 65 Ala 70 75 80 Pro Glu Asp phe Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr ASp Phe Phe Pro Gly 85' Gly 90 95 Ser Thr phe Gly Thr Lys val GlU ile Lys Arg Thr val Ala 100 Phe Ile 105 110 Ala Pro Ser Val Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser 115 Val val 120 125 Gly Thr Ala Ser Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 Gin 135 140 Ala Lys Vai Trp Lys val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser 145 val Thr IfiS 150 155 160 Gin Glu ser Glu Gin ASP Ser Lys 1 7 Λ Asp ser Thr Tyr ser 1 7C Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala J./U Asp Tyr Glu Lys His 1/ D Lys Val 180 185 190 Tyr Ala Gys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 Gly 200 205 Ser Phe Asn Arg Glu cys 210 215
<210> 214 <211> 645 <212> ADN <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado <400> 214 gacatccagc tgacccagag ccccagcttc ctttccgcat ccgttggtga ccgagtaaca 60 atcacatgcc gcgcctcatc ttcagttaca tcttcttatc ttaattggta tcaacaaaaa 120 ccaggaaaag cacctaaact tcttatatac tctacatcta atctcgcatc aggagttccc 180 tctcgatttt caggatctgg atcaggcaca gaatttacac ttactatatc atcactccaa 240 ccagaagact tcgccactta ttactgccaa caatacgatt tttttccaag cacattcgga 300 ggaggtacaa aagtagaaat caagcgtacg gtggctgcac catctgtctt catcttcccg 360 ccatctgatg agcagttgaa atctggaact gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc 420 tatcccagag aggccaaagt acagtggaag gtggataacg ccctccaatc gggtaactcc 480 caggagagtg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcctcag cagcaccctg 540 acgctgagca aagcagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag 600 ggcctgagct cgcccgtcac aaagagcttc aacaggggag agtgt 645
<210> 215 <211> 237 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado 274 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <400> : 215 Met Asp Met Arg vai Pro Ala Gin Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15 Leu Pro Gly Ala Arg cys Asp Ile Gin Leu Thr Gin Ser Pro ser Phe 20 25 30 Leu Ser Ala ser Vai Gly Asp Arg Val Thr ile Thr Cys Arg Ala ser 35 40 45 ser Ser Vai Thr Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly 50 55 60 Lys Ala Pro Lys Leu Leu 11 e Tyr ser Thr Ser Asn Leu Ala ser Gly 65 70 75 80 Vai Pro Ser Arg Phe 85 Leu Ser Gly Ser Gly Ser 90 Phe Gly Thr Glu Phe Thr 95 Tyr Cys Leu Thr 11 e Ser Ser Gin Pro Glu Asp Ala Thr Tyr Gin Gin 100 105 110 Tyr Asp 115 Arg Phe Phe Pro Ser Thr 120 Pro Phe Gly Gly Gly Thr 125 Phe Lys val Glu lie Lys Thr vai Ala Ala Ser val Phe Ile Pro pro Ser 130 135 140 Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala ser Val Val Cys Leu Leu Asn 145 150 155 160 Asn Phe Tyr pro Arg 165 Asn Glu Ala Lys Val Gin 170 Val Trp Lys val Asp Asn 175 Asp ser Ala Leu Gin Ser Gly ser Gin Glu Ser Thr Glu Gin Lys 180 185 190 Asp Ser Thr Tyr ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp 195 200 205 Tyr Glu Lys His Lys vai Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu 210 215 220 Ser Ser Pro Vai Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235
<210> 216 <211> 711 <212> ADN <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado <400> 21í atggacatga agatgtgaca gtaacaatca caaaaaccag gttccctctc ctccaaccag ttcggaggag ttcccgccat aacttctatc aactcccagg accctgacgc catcagggcc gggtccccgc tccagctgac catgccgcgc gaaaagcacc gattttcagg aagacttcgc gtacaaaagt ctgatgagca ccagagaggc agagtgtcac tgagcaaagc tgagctcgcc tcagctcctg ccagagcccc ctcatcttca taaacttctt atctggatca cacttattac agaaatcaag gttgaaatct caaagtacag agagcaggac agactacgag cgtcacaaag gggctcctgc agcttccttt gttacatctt atatactcta ggcacagaat tgccaacaat cgtacggtgg ggaactgcct tggaaggtgg agcaaggaca aaacacaaag agcttcaaca tactctggct ccgcatccgt cttatcttaa catctaatct ttacacttac acgatttttt ctgcaccatc ctgttgtgtg ataacgccct gcacctacag tctacgcctg ggggagagtg cccaggtgcc 60 tggtgaccga 120 ttggtatcaa 180 Cgcatcagga 240 tatatcatca 300 tccaagcaca 360 tgtcttcatc 420 cctgctgaat 480 ccaatcgggt 540 cctcagcagc 600 cgaagtcacc 660 t 711
<210> 217 <211> 447 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado <400> 217
Glu Vai Lys Lys pro Gly Ala 10 15 Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 30 Gly Gin Arg Leu Glu Trp Met
Glu Vai Gin Leu Vai Gin Ser Gly Ala 1 5
Ser vai Lys vai Ser cys Lys Ala Ser 20 25
Tyr Met Asn Trp Vai Arg Gin Ala Pro 275 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ 35 40 Thr 45 Gly Asp 50 Lys Gly lie Asn Pro Tyr Asn ÇÇ Asp ASP Thr Tyr Asn cn Hi s Lys Phe Arg Val Thr Ile Thr Arg ASP Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg ser Glu Asp Thr Ala val Tyr Tyr cys 85 90 95 Ala Arg Glu Thr Ala Val Ile Thr Thr Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 Val 105 110 Gin Gly Thr Thr Val Thr Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro ser 115 120 Thr 125 vai Phe Pro Leu Ala Pro cys Ser Arg Ser Ser Glu ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu pro val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Gin 165 170 175 vai Leu Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser val val Thr val 180 185 190 Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn val ASp His 195 200 Val 205 Lys Pro ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Glu Arg Lys cys Cys 210 215 220 Vai Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 phe Leu Phe Pro pro Lys pro Lys Asp Thr Leu Met ile Ser Arg Thr 245 250 255 pro Glu val Thr cys Val val val ASp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 val Gin Phe Asn Trp Tyr val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295 300 val Leu 305 Cys Lys Thr val Val His 310 Lys Gin Asp Trp Leu Asn 315 pro Gly Lys Glu Tyr Lys 320 ile Val Ser Asn Gly Leu pro Ala ile GlU Lys Thr 325 330 Gin 335 Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu pro Val Tyr Thr Leu pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin val ser Leu Thr cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Ϊ7Λ Phe Tyr Pro Ser 375 Tyr Asp Ile Ala val Glu 380 Pro Trp Glu Ser Asn Gly Gin pro GlU Asn Asn Lys Thr Thr Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr ser Lys Leu Thr val ASp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser cys Ser val Met His GlU Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gin Lys ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 218 <211> 1341 <212> . ADN <213> Sequência Artificial <220> Λ ND ND OJ V Sequência de anticorpo humanizado <400> 218 gaggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtcaagaaac ctggagcaag cgtaaaggtt 60 agttgcaaag catctggata cacatttacc gactactaca tgaattgggt acgacaagcc 120 cctggacaaa gacttgaatg gatgggagac attaaccctt ataacgacga cactacatac 180 aatcataaat ttaaaggaag agttacaatt acaagagata catccgcatc aaccgcctat 240 atggaacttt cctcattgag atctgaagac actgctgttt attactgtgc aagagaaact 300 gccgttatta ctactaacgc tatggattac tggggtcaag gaaccactgt taccgtctct 360 276 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ agtgcctcca ccaagggccc atcggtcttc gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc tcaggactct actccctcag cagcgtggtg acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc cgcaaatgtt gtgtcgagtg cccaccgtgc ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag cgtgtggtca gcgtcctcac cgttgtgcac tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccagcc gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag ctctccctgt ctccgggtaa a cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420 aaggactact tccccgaaec ggtgacggtg 480 gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 540 accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 600 agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 660 ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc 720 ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg 780 cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggac 840 ccacgggagg agcagttcaa cagcacgttc 900 caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 960 cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa 1020 ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080 ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 1140 tacaagacca cacctcccat gctggactcc 1200 accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260 gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320 1341
<210> 219 <211> 466 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220> humanizado
Leu 10 val Ala Ala Ala Thr 15 Gly Ser Gly Ala Glu val 30 Tyr Lys Lys Lys Ala Ser Gly 45 Thr Phe Gin Ala pro 60 ASp Gly Gin Arg Leu Asn Asp 75 Thr Thr Tyr Asn 80 Thr 90 Arg Asp Thr Ser Ala 95 ser Arg ser Glu Asp Thr 110 Ala Ala Val lie Thr Thr Asn 125 Met Asp Val ser ser 140 Ala ser Thr Lys Cys ser 155 Arg Ser Thr Ser GlU 160 Lys 170 Acn rw μ Tyr Dha f~nc Pro Glu 175 Dr»n Γ 1 V Leu Thr ser Gly val 190 His Thr Leu Tyr Ser Leu 205 Ser ser Val Thr Gin Thr 220 Lys Tyr Thr cys Asn val Asp 235 Thr val Glu Arg 240 pro 250 Ala Pro Pro val Ala 255 Gly Pro Lys Asp Thr Leu 270 Met Ile val val Asp Val 285 Ser HÍS Glu val Asp Gly 300 Asn Val Glu Val Hi s Gin Phe 315 ser Thr Phe Arg 320 Gl n ASp Trp Leu Asn Gly Lys <223> Sequência de anticorpo <400> 219 Met 1 Asp Trp Thr Trp 5 Arg ile Leu Phe Ala His Ser Glu 20 vai Gl n Leu vai Gin 25 Pro Gly Ala 35 ser Vai Lys Vai Ser 40 Cys Thr Asp 50 Tyr Tyr Met Asn Trp 55 vai Arg Glu 65 Trp Met Gly ASp ile 70 Asn pro Tyr His Lys Phe Lys Gly 85 Glu Arg Vai Thr Ile Thr Ala Tyr Met 100 Leu Ser Ser Leu 105 Tyr Tyr cys 115 Ala Arg Glu Thr Ala 120 val Tyr Trp 130 Gly Gin Gly Thr Thr 135 Vai Thr Gly 145 Pro Ser vai Phe Pro 150 Leu Ala Pro Ser Thr Ala Ala Leu 165 Gly Cys LcLi Val Vai Thr vai Ser 180 Vai Trp Asn Ser Gly Ala 185 Gly Phe Pro Ala 195 Leu Gin Ser ser 200 Vai Thr 210 Vai Pro Ser Ser Asn 215 phe Gly Vai 225 Asp His Lys pro Ser 230 Asn Thr Lys Lys cys Cys vai Glu 245 Leu Cys Pro Pro Cys Pro Ser Vai Phe 260 Phe Pro Pro Lys 265 ser Arg Thr 275 Glu Pro Glu Vai Thr Cys 280 Trp val Asp pro 290 Vai Gin Phe Asn 295 Tyr Asn 305 Ala Lys Thr Lys Pro 310 Arg Glu Glu vai vai Ser Vai Leu Thr Vai Vai His 277 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ 325 330 Ala 335 Glu xyr Lys cys Lys Val ser Asn Lys Gly Leu Pro Pro ile Gl u 340 Gly 345 350 Lys Thr ile ser Lys Thr Lys Gl n Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 355 360 365 Thr Leu Pro Pro ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin val Ser Leu 370 375 380 Thr cys Leu val Lys Gly Phe Tyr Pro ser ASp ile Ala Val Glu Trp 385 390 Glu 395 Thr 400 Glu ser Asn Gly Gin pro Asn Asn Tyr Lys Thr Pro Pro Met 405 , Phe Phe 410 415 Leu Asp Ser Asp Gly ser Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 420 Gly 425 430 Lys ser Arg Trp Gin Gin Asn val Phe ser cys Ser val Met His 435 440 Gin 445 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 450 455 460 Gly AC C Lys
<210> 220 <211> 1398 <212> ADN <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado <400> 220 atggactgga cctggaggat cctcttcttg gtggcagcag ccacaggagc ccactccgag 60 gtgcagctgg tgcagagcgg cgccgaggtc aagaaacctg gagcaagcgt aaaggttagt 120 tgcaaagcat ctggatacac atttaccgac tactacatga attgggtacg acaagcccct 180 ggacaaagac ttgaatggat gggagacatt aacccttata acgacgacac tacatacaat 240 cataaattta aaggaagagt tacaattaca agagatacat ccgcatcaac cgcctatatg 300 gaactttcct cattgagatc tgaagacact gctgtttatt actgtgcaag agaaactgcc 360 gttattacta ctaacgctat ggattactgg ggtcaaggaa ccactgttac cgtctctagt 420 gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcgccct gctccaggag cacctccgag 480 agcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 540 tggaactcag gcgctctgac cagcggcgtg cacaccttcc cagctgtcct acagtcctca 600 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcaacttcgg cacccagacc 660 tacacctgca acgtagatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagac agttgagcgc 720 aaatgttgtg tcgagtgccc accgtgccca gcaccacctg tggcaggacc gtcagtcttc 780 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacgtgc 840 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagacccc gaggtccagt tcaactggta cgtggacggc 900 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagcca cgggaggagc. agttcaacag cacgttccgt 960 gtggtcagcg tcctcaccgt tgtgcaccag gactggctga acggcaagga gtacaagtgc 1020 aaggtctcca acaaaggcct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggg 1080 cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggaggagat gaccaagaac 1140 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1200 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacac ctcccatgct ggactccgac 1260 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1320 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1380 tccctgtctc cgggtaaa 1398
<210> 221 <211> 215 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado <400> 221
Asp ile Gin Met Thr Gin ser Pro ser ser Leu ser Ala ser vai Gly 15 10 15
Asp Arg Vai Thr Ile Thr cys Ser vai Ser Ser Thr Ile Ser Ser Asn 20 25 30 278 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ HÍS Leu HiS 35 Gly Trp phe Gin Gin Lys 40 Ala lie Tyr 50 Thr ser Asn Leu 55 Gly 65 ser Gly ser Gly Thr 70 Asp Phe pro GlU Asp Phe Ala 85 Gly Thr Tyr Tyr Leu Thr Phe Gly 100 val Gly Thr Lys Ala Pro Ser 115 phe lie phe Pro 120 Gly Thr 130 Ala Ser val val Cys 135 Leu Ala 145 Lys val Gin Trp Lys 150 val Asp Gin Glu ser Val Thr 165 Glu Gin Asp ser Ser Thr Leu 180 Thr Leu Ser Lys Tyr Ala cys 195 Glu val Thr His Gin 200 Ser Phe 210 Asn Arg Gly Glu cys 215 pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu ser Gly val Pro cn Ser Arg Phe ser Thr Leu Thr ou ile Ser Ser Leu Gin 75 80 cys Gin Gin Trp Ser Ser Tyr Pro 90 95 Val Glu He Lys Arg Thr Val Ala 105 110 Pro ser Asp Glu Gin Leu Lys ser 125 Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 140 Asn Ala Leu Gin ser Gly Asn ser 155 160 Ser Lys Asp ser Thr Tyr ser Leu 170 175 Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys val 185 190 Gly Leu ser ser Pro Val Thr Lys 205 <210> 222 <211> 645 <212> ADN <213> Sequência Artificial <220> humanizado ccgtaggcga tagagttaca 60 ttcattggtt ccaacagaaa 120 atctcgcatc aggcgttcct 180 ttacaatatc ctccctccaa 240 catatccact cacatttggc 300 catctgtctt catcttcccg 360 tgtgcctgct gaataacttc 420 ccctccaatc gggtaactcc 480 acagcctcag cagcaccctg 540 cctgcgaagt cacccatcag 600 agtgt 645 <223> Sequência de anticorpo tccatcctcc ctctcagcat aactatatca tcaaatcatc acttatatac ggcacatcaa ctcaggcacc gactttactc ttactgtcaa caatggtcct taaacgtacg gtggctgcac atctggaact gcctctgttg acagtggaag gtggataacg ggacagcaag gacagcacct cgagaaacac aaagtctacg aaagagcttc aacaggggag <400> 222 gacatccaga tgacccagtc ataacatgca gcgtatcatc cccggcaaag cacctaaatc tcaagatttt caggctctgg cccgaagact tcgcaaccta ggcggcacaa aagtagaaat ccatctgatg agcagttgaa tatcccagag aggccaaagt caggagagtg tcacagagca acgctgagca aagcagacta ggcctgagct cgcccgtcac <210> 223 <211> 237 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo <400> 223
Met Asp Met Arg vai Pro Ala Gin 1 5
Leu Arg Gly Ala Arg Cys Asp lie 20
Leu Ser Ala Ser Vai Gly ASp Arg 35 . 40
Ser Thr xle Ser Ser Asn His Leu 50 ^ Lys Ala Pro Lys Ser Leu IIe Tyr 65 70
Vai pro ser Arg Phe Ser Gly Ser 85 humanizado
Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 10 15 Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser ser 25 30 val Thr lie Thr Cys Ser Val ser 45 His Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly 60 Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly 75 80 Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu 90 95 279 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Thr rle Ser ser Leu Gin Pro Glu ASp Phe Ala Thr Tyr Tyr cys Gin 100 105 110 Gin Trp ser Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys val Glu 115 120 125 Xle Lys Arg Thr Val Ala Ala pro ser val Phe ile Phe Pro Pro ser 130 135 140 ASp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val val cys Leu Leu Asn 14S 150 155 160 Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys val Asp Asn Ala 165 170 175 Leu Gin ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp ser Lys 180 185 190 Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala ASp 195 200 205 Tyr Glu Lys His Lys val Tyr Ala Cys GlU val Thr His Gin Gly Leu 210 215 220 Ser Ser Pro Val Thr Lys ser Phe Asn Arg Gly Glu cys 225 230 235 <210> 224 <211> 711 <212> ADN <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado <4Ο0> 224 atggacatga gggtccccgc tcagctcctg agatgtgaca tccagatgac ccagtctcca gttacaataa catgcagcgt atcatcaact cagaaacccg gcaaagcacc taaatcactt gttccttcaa gattttcagg ctctggctca ctccaacccg aagacttcgc aacctattac tttggcggcg gcacaaaagt agaaattaaa ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct aacttctatc ccagagaggc caaagtacag aactcccagg agagtgtcac agagcaggac accctgacgc tgagcaaagc agactacgag catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag gggctcctgc tactctggct ccgaggtgcc 60 tcctccctct cagcatccgt aggcgataga 120 atatcatcaa atcatcttca ttggttccaa 180 atatacggca catcaaatct cgcatcaggc 240 ggcaccgact ttactcttac aatatcctcc 300 tgtcaacaat ggtcctcata tccactcaca 360 cgtacggtgg ctgcaccatc tgtcttcatc 420 ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat 480 tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt 540 agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc 600 aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc 660 agcttcaaca ggggagagtg t 71Í
<210> 225 <211> 451 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado <400> 225
Glu vai Gin Leu vai Gin Ser Gly Ala Glu vai Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15
Ser vai Lys Vai ser cys Lys Ala ser Asp phe Asn ile Lys Asp Phe 20 25 30
Tvr Leu His Trp vai Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp ile 35 40 45
Gly Ara lie Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Leu Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60
Gin asp Lys Vai Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala vai Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Ala Asp Tyr Phe His Asp Gly Thr Ser Tyr Trp Tyr Phe 100 105 110
Asp val Trp Gly Arg Gly Thr Leu vai Thr Vai Ser Ser Ala Ser Thr
Lys Gly Pro ser Val Phe pro Leu Ala Pro cys ser Arg ser Thr ser 280 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ 130 135 val 140 Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly cys Leu Lys Asp Tyr Phe pro Glu 145 150 155 Thr 160 Pro Vai Thr val Ser Trp Asn ser Gly Ala Leu Ser Gly val His 165 170 175 Thr Phe pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu ser Ser 180 185 190 Vai Vai Thr val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr cys 195 200 205 Asn val ASp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys val Asp Lys Thr Val Glu 210 215 220 Arg Lys cys cys val Glu Cys Pro Pro cys pro Ala Pro Pro Val Ala 225 230 Phe 235 240 Gly Pro ser Val Phe Leu Pro pro Lys pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu val Thr cys Val Val val Asp val ser HÍS 260 265 270 Glu Asp Pro 275 Ala Glu Val Gin Phe Asn 280 Arg Trp Tyr Val Asp Gly 285 Asn Val Glu val His Asn Lys Thr Lys Pro Glu Glu Gin Phe Ser Thr Phe irtn 295 300 Arg val val Ser val Leu Thr Val val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys cys Lys val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin val ser 355 360 365 Leu Thr 370 Glu cys Leu Val Lys Gly 375 Pro Phe Tyr Pro Ser Asp 380 Lys Ile Al a val Glu Trp ser Asn Gly Gin Glu Asn Asn Tyr Thr Thr pro Pro 385 390 Phe 395 400 Met Leu Asp ser Asp Gly ser Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser cys Ser Val Met 420 425 430 HiS Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly Lys 450
<210> 226 <211> 1353 <212> ADN <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado <400> 226 gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctgactt caacattaaa gacttctatc tacactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gattggaagg attgatcctg agaatggtga tactttatat 180 gacccgaagt tccaggacaa ggtcaccatg accacagaca cgtccaccag cacagcctac 240 atggagctga ggagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagaggcg 300 gattatttcc acgatggtac ctcctactgg tacttcgatg tctggggccg tggcaccctg 360 gtcaccgtct ctagtgcctc caccaagggc ccatcggtct tccccctggc gccctgctcc 420 aggagcacct ccgagagcac agcggccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa 480 ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgct ctgaccagcg gcgtgcacae cttcccagct 540 gtcctacagt cctcaggact ctactccctc agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcaac 600 ttcggcaccc agacctacac ctgcaacgta gatcacaagc ccagcaacac caaggtggac 660 aagacagttg agcgcaaatg ttgtgtcgag tgcccaccgt gcccagcacc acctgtggca 720 ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780 cctgaggtca cgtgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accccgaggt ccagttcaac 840 tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccacggga ggagcagttc 900 aacagcacgt tccgtgtggt cagcgtcctc accgttgtgc accaggactg gctgaacggc 960 aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa ggcctcccag cccccatcga gaaaaccatc 1020 tccaaaacca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag 1080 gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta ccccagcgac 1140 atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacacctccc 1200 atgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260 tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320 acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa 1353 281 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
<210> 227 <211> 470 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado <400> : 227 Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu phe Leu val Ala Ala Ala Thr Gly 1 5 10 Glu val Ala His ser Glu val Gin Leu Val Gin ser Gly Ala Lys Lys 20 25 Ala 30 ile Pro Gly Ala Ser Val Lys val Ser Cys Lys Ser ASp Phe Asn 35 40 45 Gin Lys Asp 50 Trp Phe Tyr Leu His Trp 55 Asp Val Arg Gin Ala Pro 60 Gly Gly Leu Glu Ile Gly Arg ile Pro Glu Asn Gly W ASp Thr Leu Tyr Asp 65 70 75 Thr 80 Pro Lys Phe Gin Asp Lys val Thr Met Thr Thr Asp Thr ser ser 85 90 Thr 95 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg ser Leu Arg ser Asp Asp Ala Val 100 105 Gly 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Ala Asp Tyr Phe His Asp Thr ser Tyr 115 120 125 Trp Tyr Phe Asp val Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr val Ser ser 130 135 140 Ala ser Thr Lys Gly Pro ser Val Phe pro Leu Ala Pro cys Ser Arg 160 145 150 155 val Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Lys Asp Tyr 165 170 175 Phe pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn ser Gly Ala Leu Thr Ser 180 185 Gly 190 Gly Vai His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin ser ser Leu Tyr Ser 195 200 205 Gin Leu Ser Ser val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Thr 210 215 220 Val Tyr Thr cys Asn Val A5P HiS Lys Pro Ser Asn Thr Lys Asp Lys 225 230 235 Ala 240 Thr Vai Glu Arg Lys Cys cys Val Glu Cys Pro Pro cys Pro Pro 245 250 255 Pro Vai Ala Gly Pro Ser val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 260 265 270 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu val Thr Cys Val Val Val Asp 275 280 285 Vai ser His Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 290 295 300 vai Glu vai His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn 305 310 315 320 Ser Thr phe Arg Val val Ser val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp 325 330 335 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala 340 345 350 Pro ile 355 Val Glu Lys Thr Ile ser 360 Pro Lys Thr Lys Gly Gin 365 Met pro Arg Glu Pro Gin Tyr Thr Leu Pro ser Arg Glu Glu Thr Lys Asn Gin 370 375 Phe 380 val Ser Leu Thr CVS Leu val Lys Gly Tyr Pro Ser ASp ile 385 390 395 400 Ala Vai Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 405 Gly 425 410 Phe 415 Thr Pro pro Met 420 Leu Asp Ser Asp ser Phe Leu Tyr 430 ser Lys Leu Thr val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn val Phe Ser cys 435 440 His 445 Ser Vai Met His Glu Ala Leu His Asn Tyr Thr Gin Lys ser Leu 450 455 460 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 465 470 282 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <210> 228 <211> 1410 <212> ADN <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado <400> 228 atggactgga gtgcagctgg tgcaaggctt ggacaagggc ccgaagttcc gagctgagga tatttccacg accgtctcta agcacctccg gtgacggtgt ctacagtcct ggcacccaga acagttgagc ccgtcagtct gaggtcacgt tacgtggacg agcacgttcc gagtacaagt aaaaccaaag atgaccaaga gccgtggagt ctggactccg cagcagggga cagaagagcc cctggaggat tgcagtctgg ctgacttcaa ttgagtggat aggacaaggt gcctgagatc atggtacctc gtgcctccac agagcacagc cgtggaactc caggactcta cctacacctg gcaaatgttg tcctcttccc gcgtggtggt gcgtggaggt gtgtggtcag gcaaggtctc ggcagccccg accaggtcag gggagagcaa acggctcctt acgtcttctc tctccctgtc cctcttcttg ggctgaggtg cattaaagac tggaaggatt caccatgacc tgacgacacg ctactggtac caagggccca ggccctgggc aggcgctctg ctccctcagc caacgtagat tgtcgagtgc cccaaaaccc ggacgtgagc gcataatgcc cgtcctcacc caacaaaggc agaaccacag cctgacctgc tgggcagccg cttcctctac atgctccgtg tccgggtaaa gtggcagcag ccacaggagc ccactccgag 60 aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc 120 ttctatctac actgggtgcg acaggcccct 180 gatcctgaga atggtgatac tttatatgac 240 acagacacgt ccaccagcac agcctacatg 300 gccgtgtatt actgtgcgag agaggcggat 360 ttcgatgtct ggggccgtgg caccctggtc 420 tcggtctucc ccctggcgcc ctgctccagg 480 tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg 540 accagcggcg tgcacacctt cccagctgtc 600 agcgtggtga ccgtgcectc cagcaacttc 660 cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag 720 ccaccgtgcc cagcaccacc tgtggcagga 780 aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 840 cacgaagacc ccgaggtcca gttcaactgg 900 aagacaaagc cacgggagga gcagttcaac 960 gttgtgcacc aggactggct gaacggcaag 1020 ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1080 gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 1140 ctggtcaaag gcttctaccc cagcgacatc 1200 gagaacaact acaagaccac acctcecatg 1260 agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1320 atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1380 1410 <210> 229 <211> 213 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> ; Sequênc :ia de ant: icorpo humani zado <400> : 229 ASp lie Gin Leu Thr Gin ser pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser val Gly 1 Val Thr 5 10 15 ASp Arg ile Thr cys Arg Ala Ser Ser Ser ile Ser Tyr ile 20 Gin 25 30 H1S Trp Tyr Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 35 40 45 Ala Thr ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe ser Gly ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu 65 Phe 70 75 80 ASp Ala Thr Tyr Tyr cys Gin Gin Trp Ser Ser Asp Pro Leu Thr Gly Gly 85 90 95 Phe Gly Thr Lys val Glu 11 e Lys Arg Thr val Ala Ala Pro 100 105 110 Ser vai Phe ile Phe Pro pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr 115 val 120 125 Ala Ser Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 val 135 140 Vai Gin Trp Lys Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn ser Gin Glu 145 val Thr Glu Gin 150 155 160 Ser Asp Ser Lys Asp ser Thr Tyr Ser Leu ser ser Thr 165 170 175 Thr teu Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys HÍ 5 Lys Val Tyr Ala val 180 185 190 cys Glu Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys ser phe 195 Glu 200 205 Asn Arg Gly Cys 210 283 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
<210> 230 <211> 639 <212> ADN <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado <400> 230 gacatccagt tgacccagtc tccatccttc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgca gggccagctc aagtataagt tacatacact ggtatcagca aaaaccaggg 120 aaagccccta agctcctgat ctatgccaca tccaacctgg cttctggggt cccatcaagg 180 ttcagcggca gtggatctgg gacagaattc actctcacaa tcagcagcct gcagcctgaa 240 gattttgcaa cttattactg tcagcagtgg agtagtgacc cactcacgtt cggcggaggg 300 accaaggtgg agatcaaacg tacggtggct gcaecatctg tcttcatctt cccgccatct 360 gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc 420 agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag 480 agtgtcacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg 540 agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg 600 agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgt 639
<210> 231 <211> 235 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado <400> 231
Met Asp Met Arg val Pro Ala Gin Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15 Leu Pro Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gin Leu Thr Gin Ser Pro Ser Phe 20 25 30 Ala Leu Ser Ala Ser val Gly ASp Arg val Thr lie Thr Cys Arg Ser 35 lie His 40 45 ser ser Xle Ser Tyr Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala 50 55 60 Pro Lys Leu Leu lie Tyr Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 65 70 75 Thr 80 ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Ile 85 90 95 Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Trp 100 105 110 Ser Ser Asp Pro Leu Thr phe Gly Gly Gly Thr Lys val Glu ile Lys 115 120 Phe Ile Phe 125 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Pro Pro Ser Asp Glu 130 135 140 Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser val val cys Leu Leu Asn Asn Phe 145 150 155 Ala 160 Tyr pro Arg Glu Ala Lys val Gin Trp Lys Val Asp Asn Leu Gin 165 3.70 175 Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser val Thr Glu Gin Asp ser Lys ASp Ser 180 185 Ala 190 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Asp Tyr Glu 195 200 His Gin 205 Lys His Lys Val Tyr Ala cys Glu Val Thr Gly Leu Ser Ser 210 215 Gly Glu 220 Pro val Thr Lys ser phe Asn Arg Cys 225 230 235
<210> 232 <211> 705 <212> ADN <213> Sequência Artificial 284 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado <400> 232 atggacatga gggtccccgc tcagctcctg gggctcctgc tgctctggct cccaggtgcc 60 agatgtgaca tccagttgac ccagtctcca tccttcctgt ctgcatctgt aggagacaga 120 gtcaccatca cttgcagggc cagctcaagt ataagttaca tacactggta tcagcaaaaa 180 ccagggaaag cccctaagct cctgatctat gccacatcca acctggcttc tggggtccca 240 tcaaggttca gcggcagtgg atctgggaca gaattcactc tcacaatcag cagcctgcag 300 cctgaagatt ttgcaactta ttactgtcag cagtggagta gtgacccact cacgttcggc 360 ggagggacca aggtggagat caaacgtacg gtggctgcac catctgtctt catcttcccg 420 ccatctgatg agcagttgaa atctggaact gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc 480 tatcccagag aggccaaagt acagtggaag gtggataacg ccctccaatc gggtaactcc 540 caggagagtg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcctcag cagcaccctg 600 acgctgagca aageagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag 660 ggcctgagct cgcccgtcac aaagagcttc aacaggggag agtgt 705
<210> 233 <211> 447 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado <400> 233 Glu Vai Gin 1 Leu vai 5 Gin Ser Gly Ala Glu 10 val Lys Lys Pro Gly 15 Ala ser Vai Lys val ser 20 Trp val cys Lys Ala Ser 25 Pro Gly phè ASp ile Lys 30 Asp Tyr Tyr lie His 35 Arg Gin Ala 40 Gly Gin Gly Leu 45 Glu Trp lie Gly Arg vai 50 Pro Gly Lys 65 Asp Pro Asp Asn 55 Thr Gly Glu Thr Glu Phe 60 He Ala Pro Lys phe val Thr Met 70 Thr Asp Thr ser 75 ser Thr Ala Tyr 80 Met Glu Leu Ser Arg 85 Leu Arg Ser Asp Asp 90 Thr Ala val Tyr Tyr 95 cys Ala Arg Glu Asp Tyr 100 ASp Gly Thr Tyr 105 Thr Trp Phe pro Tyr 110 Trp Gly Gin Gly Thr 115 Leu val Thr val Ser 120 Ser Ala Ser Thr Lys 125 Gly Pro ser Vai Phe pro 130 Leu Ala pro Cys 135 Ser Arg Ser Thr ser 140 Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly 145 Cys Leu val 150 Lys Asp Tyr Phe Pro 155 Glu pro Val Thr val 160 Ser Trp Asn Ser Gly 165 Ala Leu Thr ser Gly 170 Val His Thr Phe Pro 175 Ala Vai Leu Gin Ser ser 180 Gly Leu Tyr ser 185 Leu Ser Ser Val Val 190 Thr val Pro Ser ser 195 Asn Phe Gly Thr Gin 200 Thr Tyr Thr Cys Asn 205 Val Asp His Lys Pro ser Asn Thr Lys val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys cys 285 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ 210 215 220 Gly Pro val vai Glu cys Pro pro Cys pro Ala Pro Pro Val Ala Ser 225 230 Thr 235 ile ser Arg 240 Phe Leu Phe Pro pro Lys Pro Lys Asp Leu Met Thr 245 250 GlU 255 Glu pro Glu Vai Thr cys Vai Vai Val Asp Val Ser His Asp Pro 260 Val 265 270 Ala vai Gin Phe Asn Trp Tyr Asp Gly Val Glu Val His Asn Lys 275 280 285 Val Val Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser 290 295 300 Glu vai Leu Thr vai vai His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Tyr Lys 305 310 315 Glu Thr 320 Cys Lys Vai ser Asn Lys Gly Leu pro Ala Pro Ile Lys Ile 325 330 Thr 335 Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin val Tyr Leu Pro 340 345 350 Pro ser Arg Glu GlU Met Thr Lys Asn Gin Val ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Glu vai Lys Gly Phe Tyr Pro ser Asp lie Ala Val Glu Trp Ser Asn 370 375 Thr 380 Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr ser Lys Leu Thr val Asp Lys Ser Arg 405 410 . Glu 430 415 Trp Gin Gin Gly 420 Asn vai Phe Ser S! Ser Val Met His Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu ser Leu ser pro Gly Lys 435 440 445
<210> 234 <211> 1341 <212> ADN <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado <400> 234 gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggatt cgacattaag gactactata tacactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatcggaagg gttgatcctg acaatggtga gactgaattt 180 gccccgaagt tcccgggcaa ggtcaccatg accacagaca cgtccatcag cacagcctac 240 atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagaagac 300 tacgatggta cctacacctg gtttccttat tggggccaag ggactctggt caccgtctct 360 agtgcctcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420 gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480 tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 540 tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 600 acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 660 cgcaaatgtt gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc 720 ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacceç tgaggtcacg 780 tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggac 840 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccacgggagg agcagttcaa cagcacgttc 900 cgtgtggtca gcgtcctcac cgttgtgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 960 tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa 1020 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 1140 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cacctcccat gctggactcc 1200 gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320 ctctccctgt ctccgggtaa a 1341
<210> 235 <211> 466 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado 286 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <4Ο0> 235
Met ASp Trp Thr Trp 5 Arg ile Leu Ala His Ser Glu 20 val Gin Leu val Pro Gly Ala 35 Tyr ser val Lys Val ser 40 val Lys Asp 50 Tyr Ile Hi S Trp 55 Glu 65 Trp Ile Gly Arg val 70 ASP Pro Pro Lys Phe Pro Gly 85 Lys val Thr Thr Ala Tyr Met 100 Glu Leu Ser Arg Tyr Tyr Cys 115 Gly Ala Arg Glu Asp 1Ϊ0 Tyr Trp 130 Gin Gly Thr Leu 135 Val Gly 145 Pro Ser Val Phe Pro 150 Leu Ala Ser Thr Ala Ala Leu 165 Gly Cys Leu Vai Thr val ser 180 Trp Asn Ser Gly phe pro Ala 195 val Leu Gin Ser ser 200 Val Thr 210 Val Pro ser ser Asn 215 Phe Vai 225 Asp His Lys Pro Ser 230 Asn Thr Lys cys cys val Glu 245 Leu cys pro pro Pro Ser val Phe 260 Phe Pro pro ser Arg Thr 275 Pro Glu val Thr cys 280 ASp Pro 290 Glu val Gin Phe Asn 295 Trp Asn 305 Ala Lys Thr Lys Pro 310 Arg Glu val val Ser val Leu 325 Thr Val Val Glu Tyr Lys cys 340 Lys val Ser Asn Lys Thr ile 355 Ser Lys Thr Lys Gly 360 Thr Leu 370 Pro Pro Ser Arg Glu 375 Glu Thr 385 Cys Leu val Lys 'Gly 390 Phe Tyr Glu Ser Asn Gly Gin 405 Pro Glu Asn Leu Asp Ser Asp 420 Trp Gly Ser phe phe Lys ser Arg 435 Gin Gin Gly Asn 440 Glu Gly 465 Ala 450 Lys Leu Hi s Asn His Tyr 455 Thr
Phe Leu val Ala Ala Ala Thr Gly 10 15 Gin Ser Gly Ala Glu val Lys Lys 25 30 cys Lys Ala ser Gly 45 Phe Asp Ile Arg Gin Ala pro *T J Gly Gin Gly Leu 60 Asp Asn Gly Glu Thr Glu Phe Ala 75 80 Met Thr Thr Asp Thr ser ile Ser 90 95 Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val 105 110 Asp Gly Thr Tyr Thr 1 7ζ Trp Phe Pro Thr Val ser Ser i an Xa j Ala Ser Thr Lys Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu 155 160 val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 170 175 Ala Leu Thr ser Gly Val His Thr 185 190 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 205 Gly Thr Gin Thr 7 *>Λ Tyr Thr Cys Asn Lys Val Asp LC\J Lys Thr val Glu Arg 235 240 Cys pro Ala pro pro val Ala Gly 250 255 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 265 270 val val val Asp Val Ser His Glu 285 Tyr Val Asp Gly Val Glu val His 300 Glu Gin phe Asn ser Thr Phe Arg 315 320 His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 330 335 Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu 345 350 Gin Pro Arg Glu Pro Gin val Tyr 365 Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu 380 pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 395 400 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met 410 415 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 425 430 val Phe ser Cys ser val Met His 445 Gin Lys ser Leu ser Leu Ser Pro 460 <210> 236 <211> 1398 <212> ADN <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado 287 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <400> 236 atggactgga gtgcagctgg tgcaaggctt ggacaagggc ccgaagttcc gagctgagca gatggtacct gcctccacca agcacagcgg tggaactcag ggactctact tacacctgca aaatgttgtg ctcttccccc gtggtggtgg gtggaggtgc gtggtcagcg aaggtctcca cagccccgag caggtcagcc gagagcaatg ggctccttct gtcttctcat tccctgtctc cctggaggat tgcagtctgg ctggattcga ttgagtggat cgggcaaggt ggctgagatc acacctggtt agggcccatcccctgggctg gcgctctgac ccctcagcag acgtagatca tcgagtgccc caaaacccaa acgtgagcca ataatgccaa tcctcaccgt acaaaggcct aaccacaggt tgacctgcct ggcagccgga tcctctacag gctccgtgat cgggtaaa cctcttcttg ggctgaggtg cattaaggac cggaagggtt caccatgacc tgacgacacg tccttattgg ggtcttcccc cctggtcaag cagcggcgtg cgtggtgacc caagcccagc accgtgccca ggacaccctc cgaagacccc gacaaagcca tgtgcaccag cccagccccc gtacaccctg ggtcaaaggc gaacaactac caagctcacc gcatgaggct gtggcagcag ccacaggagc ccactccgag 60 aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc 120 tactatatac actgggtgcg acaggcccct 180 gatcctgaca atggtgagac tgaatttgcc 240 acagacacgt ccatcagcac agcctacatg 300 gccgtgtatt actgtgcgag agaagactac 360 ggccaaggga ctctggtcac cgtctctagt 420 ctggcgccct gctccaggag cacctccgag 480 gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 540 cacaccttcc cagctgtcct acagtcctca 600 gtgccctcca gcaacttcgg cacccagacc 660 aacaccaagg tggacaagac agttgagcgc 720 gcaccacctg tggcaggacc gtcagtcttc 780 atgatctccc ggacccctga ggtcacgtgc 840 gaggtccagt tcaactggta cgtggacggc 900 cgggaggagc agttcaacag cacgttccgt 960 gactggctga acggcaagga gtacaagtgc 1020 atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggg 1080 cccccatccc gggaggagat gaccaagaac 1140 ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1200 aagaccacac ctcccatgct ggactccgac 1260 gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1320 ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1380
<210> 237 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 237
Gly Thr ser Asn Leu Ala ser 1 5
<210> 238 <211> 8 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 238
Gin Gin Trp Thr Thr Thr Tyr Thr 1 5
<210> 239 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 239
Arg Ala Ser Gin Asp lie ser Ser Tyr Leu Asn 1 5 10
<210> 240 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 240 ser Thr ser Arg Leu Asn ser 1 5 288 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <210> 241 <211> 8 <212> PRT <213> Mus musculus <400> Gin Gl 241 n Asp Ile Lys His Pro Thr 1 5 <210> 242 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 242 Lys Ala Ser Gin Asp Vai Phe Thr Ala Vai Ala 1 5 10 <210> 243 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 243 Trp Ala Ser Thr Arg His Thr 1 5 <210> 244 <211> 9 <212> PRT <213> Mus muscul us <400> 244 Gin Gin Tyr Ser Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 245 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 245 Asp Ty r Asn Met His 1 5 <210> 246 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <4Ο0> 246
Glu lie Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gin Lys Phe Lys 15 10 15
Gly 289 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
<210> 247 <211> 14 <212> PRT <213> Mus musculus <4Ο0> 247
Leu Gly Tyr Asp Asp lie Tyr Asp Asp Trp Tyr Phe Asp vai 1 5 10
<210> 248 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 248
Asp Tyr Asn Met His 1 5
<210> 249 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 249
Glu lie Asn Pro Asn Ser Gly Gly ser Gly Tyr Asn Gin Lys Phe Lys 15 10 15
Gly
<210> 250 <211> 14 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 250
Leu Vai Tyr Asp Gly Ser Tyr Glu Asp Trp Tyr Phe Asp vai 1 5 10
<210> 251 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 251 Asp Tyr Asn Met His 1 5
<210> 252 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 252
Glu Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gin Gin Phe Lys 15 10 15
Gly 290 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
<210> 253 <211> 14 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 253
Leu Gly Tyr Vai Gly Asn Tyr Glu Asp Trp Tyr Phe Asp vai 1 5 10
<210> 254 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 254 Asp Tyr Asn Met His 1 5
<210> 255 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 255
Glu ile Asn Pro Asn ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gin Lys Phe Lys 15 10 15
Gly
<210> 256 <211> 14 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 256
Leu Gly Tyr Asp Asp Ile Tyr Asp Asp Trp Tyr Phe Asp vai 1 5 10
<210> 257 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 257 Asp Tyr Asn Met His 1 5
<210> 258 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 258
Glu ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gin Lys Phe Lys 15 10 15
Gly 291 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
<210> 259 <211> 14 <212> PRT <213> Mus musculus <4Ο0> 259
Leu Gly Tyr Asp Asp Ile Tyr Asp Asp Trp Tyr Phe Asp vai 1 5 10
<210> 260 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 260 Asp Tyr Asn Met His 1 5
<210> 261 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 261
Glu ile Asn Pro Asn ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gin Lys Phe Lys 15 10 15
Gly
<210> 262 <211> 14 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 262
Leu Gly Tyr Asp Asp ile Tyr Asp Asp Trp Tyr phe Asp Vai 15 10
<210> 263 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 263 Asp Tyr Asn Met His 1 5
<210> 264 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 264
Glu rle Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Gly Tyr Asn Gin Lys Phe Lys 15 10 15
Gly 292 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
<210> 265 <211> 14 <212> PRT <213> Mus musculus <4Ο0> 265
Leu Gly Tyr Tyr Gly Asn Tyr Glu Asp Trp Tyr Phe Asp Vai 15 10
<210> 266 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 266 Asp Tyr Tyr Ile His 1 5
<210> 267 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 267
Arg ile Asp Pro Asp Asn Gly Glu ser Thr Tyr vai Pro Lys Phe Gin 1 5 10 15
Gly
<210> 268 <211> 13 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 268
Glu Gly Leu Asp Tyr Gly Asp Tyr Tyr Ala Vai Asp Tyr 1 5 10
<210> 269 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 269 Asp Tyr ile Met His 1 5
<210> 270 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 270
Tyr ile Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Glu Tyr Asn Glu Lys phe Lys 15 10 15
Gly 293 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <210> 271 <211> 11 <212> PRT <213> Mus <400> 271 Ser II 1 e Tyr <210> 272 <211> 5 <212> PRT <213> Mus <400> 272 Asp Tyr Tyr 1 <210> 273 <211> 17 <212> PRT <213> Mus <400> 273 Arg ll e Asp Gly <210> 274 <211> 10 <212> PRT <213> Mus <400> 274 Asp Al a Gly 1 <210> 275 <211> 10 <212> PRT <213> Mus <400> 275 Arg Al a Ser 1 <210> 276 <211> 7 <212> PRT <213> Mus <400> 276 Ala Thr Ser musculus musculus Met His 5 musculus musculus musculus musculus
Tyr Tyr Asp Ala Pro Phe Ala Tyr 5 10
Pro Glu Asn Gly Asp lie lie Tyr Asp Pro Lys 5 - 10
Phe Gin 15
Asp Pro Ala Trp phe Thr Tyr 5 10 ser Ser vai Tyr Tyr Met His 5 10
Asn Leu Ala Ser 5 1 294 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
<210> 277 <211> 9 <212> PRT <213> Mus muscul us <4 0 0> 277 Gin Gin 1 Trp Ser Ser S Asp Pro Leu Thr <210 > 278 <211> 12 <212> PRT <213> Mus muscul us < 4 0 0 > 278 Ser vai Ser Ser Thr lie Ser Ser Asn His Leu Bis 1 S 10 <210> 279 <211> 7 <212> PRT <213> Mus muscul us <4 0 0> 279 Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 280 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 280 Gin Gl n Trp Ser Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 281 <211> 10 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 281 Arq Ala Ser Ser Ser ile Ser Tyr Ile His 1 5 10 <210> 282 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 282 Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 295 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <210> 283 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 283 Gin Gin Trp Ser Ser Asp Pro Leu Thr 1 5 <210> 284 <211> 12 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 284 Arg Ala Ser Ser ser vai Thr Ser ser 1 5 <210> 285 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 285 Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 286 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 286 Gin Gin Tyr Asp Phe Phe Pro Ser Thr 1 5 <210> 287 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 287 Asp Tyr 1 Phe ile His 1 5 <210> 288 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <4Ο0> 288
Arg Leu Asp pro Glu Asp Gly Glu Ser Asp Tyr Ala Pro Lys phe Gin 15 10 15
Asp 296 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <210> 289 <211> 12 <212> PRT <213> Mus musculus <4Ο0> 289 Glu Asp Tyr Asp Gly Thr Tyr Thr Phe Phe Pro Tyr 15 10 <210> 290 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 290 Asp Phe Tyr Leu His 1 5 <210> 291 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 291 Arg ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Leu Tyr Asp Pro Lvs 1 5 10 Asp <210> 292 <211> 16 <212> PRT <213> Mus musculus phe Gin 15 <400> 292 Glu Ala Asp Tyr phe His Asp Gly Thr Ser Tyr Trp Tyr Phe 15 10 <210> 293 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus
Asp Vai 15 <400> 293 Asp Tyr Tyr ile His 1 5 <210> 294 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 294 Arg vai Asp pro Asp Asn Gly Glu Thr Glu Phe Ala Pro Lys 15 10 Gly
Phe Pro 15 297
ΕΡ 1 891 101/PT
<210> 295 <211> 12 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 295
Glu Asp Tyr Asp Gly Thr Tyr Thr Trp Phe Pro Tyr 1 5 10
<210> 296 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 296 Asp Tyr Tyr Met Asn 1 5
<210> 297 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 297
Asp Ile Asn Pro Tyr ASn Asp Asp Thr Thr Tyr Asn His Lys Phe Lys 15 10 15
Gly
<210> 298 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 298
Glu Thr Ãla Vai Ile Thr Thr Asn Ala Met Asp 1 5 10
<210> 299 <211> 130 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 299
Met Asp Phe Gin vai Gin ile Phe ser Phe Met Leu ile ser vai Thr 15 10 15 vai ile Leu ser ser Gly Glu ile vai Leu Thr Gin ser Pro Ala Leu 20 25 30
Met Ala Ala Ser Pro Gly Glu Lys vai Thr Ile Thr Cys Ser vai ser 35 40 45 ser ser ile ser Ser ser Asn Leu His Trp ser Gin Gin Lys Ser Gly 50 55 60
Thr ser Pro Lys Leu Trp ile Tyr Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly 65 70 75 80
Vai Pro Vai Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu 85 90 95
Thr ile ser Ser Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin 100 105 110
Gin Trp Thr Thr Thr Tyr Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Leu K 115 120 125
Lys Arg i 130 298 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
<210> 300 <211> 390 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 300 atggattttc aggtgcagat tttcagcttc atgctaatca gtgtcacagt catattgtcc 60 agtggagaaa ttgtgctcac ccagtctcca gcactcatgg ctgcatctcc aggggagaag 120 gtcaccatca cctgcagtgt cagctcgagt ataagttcca gcaacttaca ctggtcccag 180 cagaagtcag gaacctcccc caaactctgg atttatggca catccaacct tgcttctgga 240 gtccctgttc gcttcagtgg cagtggatct gggacctctt attctctcac aatcagcagc 300 atggaggctg aagatgctgc cacttattac tgtcaacagt ggactactac gtatacgttc 360 ggatcgggga ccaagctgga gctgaaacgt 390
<210> 301 <211> 141 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 301
Met Gly Trp Asn Trp ile Ile Phe Phe Leu Met Ala val val Thr Gly 1 5 10 15 vai Asn Ser Glu Vai Gin Leu Arg Gin Ser Gly Ala > (/! XI Leu val Lys 20 25 30 Pro Gly Ala ser Val Lys Leu ser cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile 35 40 45 Lys Asp Tyr Tyr Ile His Trp val Lys Gl n Arg Pro Glu Gin Gly Leu 50 55 60 Glu Trp lie Gly Arg Ile 7 Λ ASp Pro Asp Asn Gly 7ς Glu Ser Thr Tyr val U J Pro Lys Phe Gin Gly i \j Lys Ala Thr Ile Thr t D Ala Asp Thr Ser ser Asn 85 90 95 Thr Ala Tyr Leu Gin Leu Arg ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Ile 100 105 110 Tyr Tyr Cys Gly Arg Glu Gly Leu Asp Tyr Gly Asp Tyr Tyr Ala Val 115 120 125 Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Ser Val Thr Val ser Ser 130 135 140
<210> 302 <211> 423 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 302 atgggatgga actggatcat cttcttcctg atggcagtgg ttacaggggt caattcagag 60 gtgcagttgc ggcagtctgg ggcagacctt gtgaagccag gggcctcagt caagttgtcc 120 tgcacagctt ctggcttcaa cattaaagac tactatatac actgggtgaa gcagaggcct 180 gaacagggcc tggagtggat tggaaggatt gatcctgata atggtgaaag tacatatgtc 240 ccgaagttcc agggcaaggc cactataaca gcagacacat catccaacac agcctaccta 300 caactcagaa gcctgacatc tgaggacact gccatctatt attgtgggag agaggggctc 360 gactatggtg actactatgc tgtggactac tggggtcaag gaacctcggt cacagtctcg 420 age 423
<210> 303 <211> 130 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado 299 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <400> 303 Met Asp Met 1 Leu ργο Gly Leu ser Ala 35 ser Ser lie 50 Lys Ala Pro 65 vai Pro ser Thr Ile Ser Gin Trp Thr 115
Gly Leu Leu Leu Leu Trp 15 Thr Gin Ser Pro Ser Phe 30 Ile Thr cys ser vai ser 45 Tyr Gin Gin Lys Pro Gly 60 ser Asn Leu Ala ser Gly 75 80 Gly Thr Glu Phe Thr Leu 95 Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin 110 Gly Thr Lys Leu Glu ile 125
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Lys Arg
<210> 304 <211> 390 <212> ADN <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado <400> 304 atggatatgc gcgtgccggc gcagctgctg ggcctgctgc tgctgtggct gccgggcgcg 60 cgctgcgata ttcagctgac ccagagcccg agctttctga gcgcgagcgt gggcgatcgc 120 gtgaccatta cctgcagcgt gagcagcagc attagcagca gcaacctgca ttggtatcag 180 cagaaaccgg gcaaagcgcc gaaactgctg atttatggca ccagcaacct ggcgagcggc 240 gtgccgagcc gctttagcgg cagcggcagc ggcaccgaat ttaccctgac cattagcagc 300 ctgcagccgg aagattttgc gacctattat tgccagcagt ggaccaccac ctataccttt 360 ggccagggca ccaaactgga aattaaacgt 390
<210> 305 <211> 141 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado Trp ser Ile Leu Phe Leu val Ala Ala Pro Thr Gly 5 10 15 Vai Gin Leu vai Gin Ser Gly Ala Glu val Lys Lys Vai 25 30 Lys vai ser cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile ile 40 45 His Trp val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Ile 55 60 Arg Asp Pro Asp Asn Gly Glu ser Thr Tyr Val Gly 70 75 80 Arg Vai Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser 85 90 95 Glu Leu Arg ser Leu Arg ser Asp Asp Thr Ala val Glu Gly 105 110 Arg Leu 1 Asp Tyr Gly ASP Tyr 1 "> C Tyr Ala val Gin Gly Thr Leu val Thr val Ser 1c !> ser 135 140 <400> : 305 Met Ί Asp Trp Thr Ala HÍS Ser Glu 20 Pro Gly Ala ser 35 Lys Asp Tyr Tyr 50 Glu Trp Met Gly U J Pro Lys Phe Gin Thr Ala Tyr Met Tyr 100 Tyr Cys Ala 115 Asp Tyr 130 Trp Gly 300 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
<210> 306 <211> 423 <212> ADN <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado <400> 306 gcatagcgaa 60 gaaagtgagc 120 ccaggcgccg 180 cacctatgtg 240 cgcgtatatg 300 cgaaggcctg 360 gaccgtctcg 420 423 atggattgga cctggagcat tctgtttctg gtggcggcgc cgaccggcgc gtgcagctgg tgcagagcgg cgcggaagtg aaaaaaccgg gcgcgagcgt tgcaaagcga gcggctttaa cattaaagat tattatattc attgggtgcg ggccagggcc tggaatggat gggccgcatt gatccggata acggcgaaag ccgaaatttc agggccgcgt gaccatgacc accgatacca gcaccagcac gaactgcgca gcctgcgcag cgatgatacc gcggtgtatt attgcgcgcg gattatggcg attattatgc ggtggattat tggggccagg gcaccctggt age
<210> 307 <211> 127 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 307
Met Met Ser Ser Ala Gin Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu cys phe Gin 1 5 10 15 Gly Thr Arg cys Asp Ile Gin Met Thr Gin Thr Thr ser ser Leu Ser 20 25 30 Ala Ser Leu Gly Asp Arg val Asn Ile Ser cys Arg Ala ser Gin Asp 35 40 45 Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro ASp Gly Thr val 50 55 60 Val tys Leu Leu Ile Tyr Ser Thr ser Arg Leu Asn Ser Gly Pro Ser 65 70 75 Ile 80 Arg Phe ser Gly ser Gly ser Gly Thr Asp Tyr ser Leu Thr Ser 85 90 95 Asn Leu Ala Gin Glu Asp ile Ala Thr Tyr Phe cys Gin Gin ASp ile 100 105 110 Lys His Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg 115 120 125
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Met Met Ser ser Ala Gin Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu cys Phe Gin 1 5 10 15 Gly Thr Arg cys ASp ile Gin Met Thr Gin ser pro Ser ser Leu ser 20 25 30 Ala Ser val Gly ASp Arg val Thr Ile Thr cys Arg Ala ser Gin Asp 35 40 45 Ile Ser ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys pro Gly Lys Ala Pro 50 55 60 Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Thr ser Arg Leu Asn Ser Gly val Pro Ser 65 70 75 80 Arg Phe ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile ser 85 90 95 Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr cys Gin Gin Asp Ile 100 105 110 Lys HÍS Pro Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 115 120 125
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ΕΡ 1 891 101/PT <400> 315
Met Lys ser Gin Thr Gin Val Phe Val Tyr Met Leu Leu Trp Leu ser 1 5 Ile 10 15 Gly vai Glu Gly Asp Val Met Thr Gin Ser His Lys Phe Met Ser 20 25 30 Thr ser val Gly ASp Arg Val Thr ile Thr Cys Lys Ala ser Gin ASp 35 val Ala 40 45 Vai Phe Thr Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro 50 55 60 Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala ser Thr Arg HÍS Thr Gly val Pro Asp 65 70 75 80 Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr ile ser 85 90 95 Asn val Gl π ser Glu ASp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gin Gin Tyr ser 100 Thr Phe 105 110 Ser Tyr Pro Leu Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg 115 120 125
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<210> 317 <211> 138 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 317
Met Gly Trp Asn Trp Ile Ile Phe Phe Leu Met Ala val Val Thr Gly 1 5 10 15 Val Asn Ser Glu val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu Leu val Arg 20 25 30 Pro Gly Ala Leu val Lys Leu Ser A(\ Cys Lys Ala ser Gly AC Phe Asn ile Lys Asp J J Tyr Tyr Met HÍS Trp val Lys Gin Arg pro *tí Glu Gin Gly Leu 50 55 60 Glu Trp ile Gly Arg ile Asp Pro Glu Asn Gly ASp Ile ile Tyr Asp 65 70 75 80 Pro Lys Phe Gin Gly Lys Ala ser Ile Thr Thr Asp Thr ser Ser Asn Thr Ala 85 90 95 Tyr Leu Gin Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu ASp Thr Ala val 100 105 110 Tyr Tyr cys Ala Tyr ASP Ala Gly Asp Pro Ala Trp Phe Thr Tyr Trp 115 120 125 Gly Gin Gly Thr Leu val Thr val Ser Ser 130 135
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<210> 319 <211> 130 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado <400> 319
Met Asp Met Arg Vai Pro Ala Gin Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15 Leu Arg Gly Ala Arg cys Asp ile Gin Met Thr Gin ser pro Ser Ser 20 25 30 Leu Ser Ala Ser Vai Gly Asp Arg val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser 35 40 45 Gin Asp Vai Phe Thr Ala Vai Ala Trp Tyr Gin Gin Lys pro Gly Lys 50 55 60 Ala Pro Lys Leu Leu ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Hl S Thr Gly Val 65 70 75 80 Pro ser Arg phe Ser Gly ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 85 90 95 ile ser ser Leu Gin pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr cys Gin Gin 100 105 110 Tyr ser ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys val Glu He 115 120 125
Lys Arg 130
<210> 320 <211> 390 <212> ADN <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado <400> 320 atggatatgc gcgtgccggc gcagctgctg ggcctgctgc tgctgtggct gcgcggcgcg 60 cgctgcgata tccagatgac ccagagcccg agcagcctga gcgcgagcgt gggcgatcgc 120 gtgaccatta cctgcaaagc gagccaggat gtgtttaccg cggtggcgtg gtatcagcag 180 aaaccgggca aagcgccgaa actgctgatt tattgggcga gcacccgcca taccggcgtg 240 ccgagtcgct ttagcggcag cggcagcggc accgatttta ccctgaccat tagcagcctg 300 cagccggaag attttgcgac ctattattgc cagcagtata gcagctatcc gctgaccttt 360 ggcggcggca ccaaagtgga aattaaacgt 390
<210> 321 <211> 138 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado 305 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <400> 321
Met Asp Trp Thr Trp Ser Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Pro Thr Gly 1 5 10 15 Ala His Ser Glu val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu val Lys Lys 20 25 30 ile pro Gly Ala Ser val Lys val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn 35 40 45 Lys Asp Tyr Tyr Met HiS Trp Val Arg Gin Ala pro Gly Gin Gly Leu 50 55 60 ile Glu T^P He Gly Arg lie ASp pro Glu Asn Gly Asp ile Tyr Asp 65 70 75 80 Pro Lys phe Gin Gly 85 Glu Arg val Thr Met Thr 90 Arg Thr Asp Thr Ser Thr 95 Ala ser Thr Ala Tyr Met Leu Arg Ser Leu ser ASp ASp Thr Val 100 105 110 Tyr Tyr cys Ala Tyr Asp Ala Gly ASp pro Ala Trp phe Thr Tyr Trp 115 120 125 Gly Gin Gly Thr Leu val Thr val ser ser 130 135 <210> 322 <211> 414 <212> ADN <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado <400> 322 atggattgga cctggagcat tctgtttctg gtggcggcgc cgaccggcgc gcatagcgaa 60 gtgcagctgg tgcagagcgg cgcggaagtg aaaaaaccgg gcgcgagcgt gaaagtgagc 120 tgcaaagcga gcggctttaa cattaaagat tattatatgc attgggtgcg ccaggcgccg 180 ggccagggcc tggaatggat cggccgcatt gatccggaaa acggcgatat tatttatgat 240 ccgaaatttc agggccgcgt gaccatgacc accgatacca gcaccagcac cgcgtatatg 300 gaactgcgca gcctgcgcag cgatgatacc gcggtgtatt attgcgcgta tgatgcgggc 360 gatccggcgt ggtttaccta ttggggccag ggcaccctgg tgaccgtctc gagc 414
<210> 323 <211> 106 <212> PRT <213> . Mus muscul us <400> 323 Thr ASp Ala Ala Pro Thr val Ser Ile Phe pro pro ser ser GlU Gin 1 5 10 15 Leu Thr ser Gly Gly Ala Ser val Val cys phe Leu Asn Asn Phe Tyr 20 Val 25 30 Pro Lys Asp Ile Asn Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gin 35 40 45 Asn Gly Val Leu Asn ser Trp Thr Asp Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr 50 55 60 Tyr ser Met ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg 65 Thr 70 Glu Thr 75 80 His Asn Ser Tyr cys Ala His Lys Thr Ser Thr Ser Pro 85 90 95 Ile val Lys ser phe Asn Arg Asn Glu Cys 100 105
<210> 324 <211> 324 <212> PRT <213> Mus musculus 306 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <400> 324 Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser val Tyr pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala 1 5 10 15 Ala Gin Thr Asn Ser Met val Thr Leu Gly cys Leu val Lys Gly Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu pro Val Thr Val Thr Trp Asn ser Gly Ser Leu ser Ser 35 40 45 Gly vai His Thr Phe Pro Ala val Leu Gin ser ASp Leu Tyr Thr Leu 50 55 60 ser ser ser val Thr Val Pro ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr val 65 70 75 80 Tbr cys Asn val Ala His pro Ala Ser ser Thr Lys val Asp Lys Lys 85 90 95 ile Val Pro Arg 100 Asp Cys Gly cys Lys 105 Pro cys ile Cys Thr 110 val pro Glu vai Ser ser val Phe Ile phe Pro Pro Lys pro Lys Asp val Leu 115 120 125 Thr ile Thr Leu Thr Pro Lys val Thr cys Val val Val Asp ile ser 130 135 140 Lys ASP Asp Pro Glu Val Gin Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu 145 150 155 160 Vai His Thr Ala Gin Thr Gin pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn ser Thr 165 170 175 Phe Arg Ser val Ser Glu Leu pro ile Met His Gin Asp Trp Leu Asn 180 185 190 Gly Lys Glu phe Lys cys Arg val Asn ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro 195 200 205 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gin 210 215 220 Vai Tyr Thr ile Pro Pro pro Lys Glu Gin Met Ala Lys Asp Lys Val 225 230 235 ile 240 Ser Leu Thr cys Met Ile Thr ASp Phe Phe Pro Glu Asp Thr val 245 250 255 Glu Trp Gin Trp Asn Gly Gin Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin 260 265 270 Pro ile Met Asp Thr Asp Gly ser Tyr Phe val Tyr ser Lys Leu Asn 275 280 285 Vai Gin Lys ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val 290 295 300 Leu His Glu Gly Leu HiS Asn His HiS Thr Glu Lys Ser Leu Ser His 305 310 315 320 ser Pro Gly Lys <21 0> 325 <21 1> 106 <212> PRT <213> . Homo sapiens <400> 325 Thr val Ala Ala Pro Ser val Phe ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin 1 5 10 15 Leu Lys Ser Gly Thr Ala ser val val cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 20 25 30 Pro Arg Glu Ala Lys val Gin Trp Lys val Asp Asn Ala Leu Gin ser 35 40 45 Gly Asn ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp ser Thr 50 55 60 Glu Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu ser Lys Ala ASp Tyr Lys 65 70 75 80 His Lys val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser ser Pro 85 90 95 Vai Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105
<210> 326 <211> 327 <212> PRT <213> Homo sapiens 307 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <4 0 0> 326 Ala Ser Thr Lys Gly Pro ser val Phe Pro Leu Ala pro Cys Ser Arg 1 5 10 Val 15 Ser Thr ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Lys ASp Tyr 20 25 30 Thr Phe Pro Glu pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu ser 35 40 45 Gly Val Hi 5 Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Gly Thr Leu ser Ser val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Lys Thr 65 70 75 val 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp Hi s Lys pro Ser Asn Thr Lys Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly pro pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 val Val Asp Thr Leu Met ile Ser Arg Thr Pro GlU Val Thr cys Val 130 135 140 val Asp Val Ser Gin Glu Asp pro Glu val Gin Phe Asn Trp Tyr Asp 145 150 155 Glu Glu 160 Gly val Glu val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Gin Phe 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205 Pro Ser Ser ile Glu Lys Thr Ile ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys 225 230 val 235 240 Asn Gin val ser Leu Thr Cys Leu Lys Gly Phe Tyr pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Gl u Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr pro pro Val Leu Asp Ser ASp Gly ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Arg Leu Thr Val Asp Lys ser Arg Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser val Met HÍS Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser 305 310 315 320 Leu ser Leu ser Leu Gly Lys 325 <21 0> 327 <21 1> 120 <212> PRT <213> Mus muscul us <400> 327 Glu val Gin Leu Gin Gin ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 Ala 10 15 Ser val Lys Met Ser Cys Lys Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 ile Met HÍS Trp val Lys Gin Lys Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Ile Gly 35 40 Thr Glu 45 Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Tyr fín Asn Glu Lys Phe Lys j w Gly Lys Ala Thr Leu J J Thr Ser Asp Lys ser OU ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 Glu 75 80 Met ASp Leu ser ser 85 Leu Thr Ser Gly 90 ser Ala Val Tyr Tyr 95 Cys Ala Arg Ser Ile 100 Tyr Tyr Tyr Asp Ala 105 Pro Phe Ala Tyr Trp 1 η Λ Gly Gin Gly Thr Leu val Thr val ser Ser 115 120 <210> 328 <211> 120 <212> PRT <213> Mus muscul ' us 308 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Gly Thr Leu vai Thr Vai Ser Ser y 115 120
<210> 329 <211> 120 <212> PRT
Glu Val Gin Leu val Gin Ser Gly Ala GlU val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 Thr Phe Thr 30 15 Ser Vai Lys Val 20 Ser Cys Lys Ala Ser 25 Gly phe Asp Tyr lie Met His Trp val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 Glu 45 Glu Gly Tyr ile Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Tyr Asn Lys Phe 50 55 60 Thr Ala Lys 65 Gly Arg val Thr Ile 70 Thr Ala Asp Lys Ser 75 Thr Ser Tyr 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Ile Tyr Tyr Tyr Asp Ala pro phe Ala Tyr Trp Gly Gin 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <213> Mus musculus <400> 329
<210> 330 <211> 226 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 330
Glu Vai Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu vai Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser vai Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 lie Met His Trp Vai Lys Gin Lys Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp He 35 40 45
Gly Tyr lie Asn Pro Tyr Asn Asp Aso Thr Glu Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 309 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Lys 65 Met Gly Lys Ala Thr Leu 70 Leu Thr Ser Asp Leu Ser Ser Thr Ser Ile 100 85 Ala Arg Ser Tyr Tyr Tyr Asp Gly Thr Leu Vai Thr Val Ser Ser 115 120 Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin 130 135 vai 145 Lys cys Leu Leu Asn Asn 150 Leu Phe Tyr vai Asp Asn Ala 165 Lys Gin Ser Glu Gin Asp ser Asp Ser Thr 180 Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 195 Gly 200 Thr Hi S Gin Leu Ser ser Pro 210 215 Glu Cys 225 <210> 331 <211> 447 <212> PRT <213> . Mus muscul us <400> 331 Glu vai Gin Leu vai Gin ser Gly 1 5 Ser Vai Lys vai 20 Trp Ser cys Lys Ala Ile Met HÍS val Arg Gin Ala 35 40 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp 50 55 Lys 65 Met Gly Arg vai Thr ile 70 Leu Thr Ala Glu Leu Ser Ser Arg Ser 85 Ala Arg Ser Ile 100 Vai Tyr Tyr Tyr Asp Gly Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 120 Phe pro Leu Ala Pro Cys ser Arg 130 135 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 145 150 Trp Asn ser Gly Ala 165 Gly Leu Thr Ser Leu Gin ser Ser Leu Tyr ser 180 Ser ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 195 200 Pro Ser Asn Thr Lys val Asp Lys 210 215 pro Cys Pro Pro cys Pro Ala Pro 225 230 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 245 Pro Glu Vai Thr Cys Val Val val | 260 Vai Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp 275 280 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe 290 295
Asp Lys Ser 75 ser Ser Thr Ala Tyr 80 Glu Gly 90 Ser Ala val Tyr Tyr 95 Gly Cys Ala 105 pro Phe Ala Tyr Trp 110 Gin Thr val Ala Ala Pro 125 ser Val Phe Leu Lys Ser Gly 140 Thr Ala Ser Val O L. Cl Arg Glu 155 Ala Lys val Gin Trp 160 Gly Asn 170 Ser Gin Glu Ser val 175 Thr Tyr 185 Ser Leu ser Ser Thr 190 Leu Thr His Lys Val Tyr Ala 205 Cys Glu val Val Thr Lys ser 220 Phe Asn Arg Gly
Ala GlU 10 val Lys Lys pro Gly Ser 15 Ser 25 Pro Gly Phe Thr Phe Thr 30 Glu Asp Tyr Gly Gin Gly Leu 45 Trp Met Asp Thr Glu Tyr 60 Thr Asn Glu Lys Phe Asp Lys ser 75 Thr ser Thr Ala Tyr 80 Tyr cys 95 Gly Gin Glu ASp 90 Pro Ala val Tyr Ala 105 Phe Ala Tyr Trp 110 Ala Ser Thr Lys Gly 125 Pro Ser val Ser Thr ser Glu 140 ser Thr Ala Ala Phe Pro Glu 155 Pro Val Thr Val ser 160 Gly Val 170 His Thr Phe Pro Ala Val 175 Leu 185 ser Ser val val Thr 190 Val Pro Tyr Thr cys Asn Val 205 Lys Asp His Lys Arg val Glu ser 220 Tyr Gly pro Glu Phe Leu 235 Gly Gly Pro ser val 240 Asp Thr 250 Leu Met ile ser Arg Thr 255 Asp 265 Val ser Gin Glu Asp 270 Pro Glu Gly Val Glu val His 285 Asn Ala Lys Asn Ser Thr Tyr 300 Arg val Val Ser 310 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ val Leu Thr vai Leu His Gin ASp Trp Leu Asn Gly Lys GlU Tyr Lys 305 vai 310 315 320 Cys Lys Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser ser Ile Glu Lys Thr ile 325 330 Thr 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Glu Vai Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp ile Ala Val Glu Trp Ser Asn 370 375 380 Val Gly Gin pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr ser Arg Leu Thr val Asp Lys Ser dl s Arg Trp Gin Glu Gly *rUj Asn val Phe ser cys H--LU ser val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu ser Leu ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 332 <211> 107 <212> PRT <213> Mus muscul us <400> 332 Asp ile Gin Met Thr Gin Ile Thr Ser ser Leu ser Ala ser Leu Gly 1 5 10 15 ASP Arg vai ser 7(1 ile ser cys Arg Ala Ser Gin Asp ile ser 30 Asn Tyr Leu Asn Trp LU Tyr Gin Gin Lys Pro L· J Asp Gly Thr Phe Lys Jv Leu Leu Ile 35 40 45 Phe Phe Tyr Thr Ser Arg Leu Leu Ser Gly val Pro Ser Arg ser Gly 50 55 60 Glu Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr il.e Tyr Asn Leu Gin 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gin Gin Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <21 0> 333 <21 1> 324 <212> PRT <213> . Mus muscul us <400> 333 Ala Lys Thr Thr Pro pro Ser val Tyr Pro Leu Ala pro Gly ser Ala 1 5 10 15 Ala Gin Thr Asn ser Met val Thr Leu Gly cys Leu Val Lys Gly Tyr 20 25 30 phe Pro Glu Pro Val Thr val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser ser 35 40 45 Thr Gly vai His Thr Phe pro Ala val Leu Gin Ser Asp Leu Tyr Leu 50 55 60 ser Ser Ser vai Thr Val Pro ser Ser Thr Trp pro Ser Glu Thr val 65 70 75 80 Thr Cys Asn vai Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys 85 90 Thr 95 Ile vai Pro Arg Asp cys Gly Cys Lys Pro cys Ile Cys Val Pro 100 105 110 Glu vai ser ser Val phe ile Phe pro Pro Lys pro Lys Asp Val Leu 115 120 125 Ile Thr ile Thr Leu Thr Pro Lys val Thr Cys Val val val Asp Ser 130 135 140 Val uys Asp Asp pro Glu val Gin Phe ser Trp Phe Val ASP ASp Glu 145 150 155 160 311 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Vai His Thr Ala Gin Thr Gin Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe 165 170 175 Arg Ser Val ser Glu Leu Pro ile Met His Gin Asp Trp Leu Asn Gly 180 185 190 Lys Glu phe Lys cys Arg Val Asn ser Ala Ala phe pro Ala Pro lie 195 200 Gly 205 Glu Lys Thr Ile ser Lys Thr Lys Arg Pro Lys Ala Pro Gin Vai 210 215 220 Tyr Thr lie Pro pro Pro Lys GlU Gin Met Ala Lys Asp Lys val 225 230 Thr 235 240 Ser Leu Thr cys Met Ile Asp phe phe Pro Glu Asp ile Thr val Glu 245 Gin 250 255 Trp Gin Trp Asn Gly Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin 260 Gly 265 270 Pro 11 e Met A5p Thr Asp Ser Tyr Phe Ile Tyr ser Lys Leu Asn 275 Glu 280 285 Vai Gin Lys Ser Asn Trp Ala Gly Asn Thr Phe Thr cys Ser Val 290 295 300 Leu His GlU Gly Leu His Asn His HÍS Thr Glu Lys ser Leu ser His 305 310 315 320 Ser Pro Gly Lys <210> 334 <21 1> 213 <212> PRT <213> Mus muscul us <400> 334 Asp rle Gin Met Thr Gin Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Asn Ile ser Cys Arg Ala ser Gin Asp Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Thr ser Arg Leu Asn ser Gly val pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile ser Asn Leu Ala Gin 65 70 75 80 Glu Asp ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gin Gin ASp ile Lys His Pro Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Asp Ala Ala pro 100 105 110 Thr val ser Tle phe pro Pro Ser Ser Glu Gin Leu Thr ser Gly eiy 115 120 125 Al a Ser val Val cys phe Leu Asn Asn phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn 130 135 Gin 140 Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Asn Gly val Leu Asn 145 150 155 160 Ser Trp Thr Asp Gin Asp ser Lys Asp Ser Thr Tyr ser Met Ser ser 165 170 175 Thr Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr 180 185 190 phe cys Glu Ala Thr His Lys Thr ser Thr ser Pro Ile Val Lys ser 195 200 205 Asn Arg Asn Glu Cys 210 <21 0> 335 <21 1> 444 <212> PRT <213> Mus muscul us <4Ο0> 335
Glu val Gin Leu Gin Gin ser Gly Pro Glu Leu vai Lys pro Gly Ala 15 10 15 312 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly phe Thr Phe Thr Asp Tyr Met His 20 Gin 25 Gly 30 ile Trp Val Lys Lys Pro Gly Gin Leu Glu Trp ile 35 40 45 Gly Tyr ile 50 Gly Lys Asn Pro Tyr Asn 55 Thr ASP Asp Thr Glu Tyr 60 Ser Asn Glu Lys Phe Lys 65 Met Ala Thr Leu 70 Leu Ser Asp Lys Ser 75 Ser Ser Thr Ala Tyr 80 Tyr Cys 95 Gly Gin Asp Leu Ser Ser 85 Tyr Thr Ser Glu Gly 90 Pro Ala val Tyr Ala Arg ser ile Tyr Tyr Asp Ala Phe Ala Tyr Trp 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser val 115 120 125 Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gin Thr Asn Ser Met Val Thr 130 135 140 Leu Gly cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr val Thr 245 150 155 160 Trp Asn ser Gly Ser Leu ser Ser Gly val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 Thr 175 Leu Gin Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser ser Ser val val Pro Ser 180 185 190 ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr cys Asn val Ala His pro Ala 195 200 205 Ser Ser Thr Lys val ASP Lys Lys Ile val pro Arg ASP Cys Gly cys 210 215 220 Lys pro cys lie Cys Thr val Pro Glu Val Ser Ser val Phe ile Phe 225 230 235 240 Pro pro Lys Pro Lys Asp val Leu Thr Ile Thr Leu Thr pro Lys val 245 250 255 Thr Cys val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu val Gin phe 260 265 270 Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu val His Thr Ala Gin Thr Gin Pro 275 280 285 Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg ser Val ser Glu Leu pro 290 295 300 val lie Met His Gin ASP Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys cys Arg 305 310 315 320 Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro ile Glu Lys Thr Ile ser Lys Thr 325 330 335 Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gin val Tyr Thr Ile Pro pro pro Lys 340 345 350 Glu Gin Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr ASp 355 360 365 Gly Phe phe Pro Glu Asp ile Thr Val Glu Trp Gin Trp Asn Gin Pro 370 375 380 Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin Pro Ile Met ASp Thr ASp Gly ser 385 390 395 Glu 400 Tyr Phe val Tyr ser Lys Leu Asn val Gin Lys Ser Asn Trp Ala 405 410 HIS 415 His Gly Asn Thr Phe Thr Cys ser Val Leu His Glu Gly Leu Asn 420 425 430 His Thr Glu Lys ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys 435 440 <210> 336 <211> 108 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 336 Asp ile Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser ser Leu Ser Ala Ser val Gly 1 5 10 15 ASP Arg val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Glr» Asp Val Phe Thr Ala 20 25 30 Ile val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Tyr Trp Ala 50 Ser Thr Arg His 55 Thr Gly val Pro ser 60 Arg Phe ser Gly ser 65 Gly ser Gly Thr Asp 70 Phe Thr Leu Thr Ile 75 Ser ser Leu Gin Pro 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 85 Gly Gly Thr Tyr cys Gin Gin 90 Ile Tyr ser ser Tyr Pro 95 Leu Thr Phe Gly Lys val Glu Lys Arg 100 105 313 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
<210> 337 <211> 324 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 337 gatatccaga attacctgca ggcaaagcgc cgctttagcg gaagattttg ggcaccaaag tgacccagag aagcgagcca cgaaactgct gcagcggcag cgacctatta tggaaattaa cccgagcagc ggatgtgttt gatttattgg cggcaccgat ttgccagcag acgt ctgagcgcga accgcggtgg gcgagcaccc tttaccctga tatagcagct gcgtgggcga tcgcgtgacc cgtggtatca gcagaaaccg gccataccgg cgtgccgagt ccattagcag cctgcagccg atccgctgac ctttggcggc 60 120 180 240 300 324
<210> 338 <211> 119 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 338
Glu Vai Gin Leu Val Gin ser Gly Ala Glu val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met His 35 Gly Arg Ile Trp Val Arg Gin Ala 40 Gly Pro Gly Gin Gly Leu 45 Asp Glu Trp Ile Asp Pro Glu Asn Asp Ile Ile Tyr Pro Lys Phe 50 55 60 Gin Gly Arg val Thr Met Thr Thr Asp Thr ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 Ala val 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser ASp Asp Thr Tyr Tyr cys 85 90 95 Ala Tyr Asp Ala Gly Asp pro Ala Trp Phe Thr Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 339 <211> 357 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 339 gaagtgcagc agctgcaaag ccgggccagg gatccgaaat atggaactgc ggcgatccgg tggtgcagag cgagcggctt gcctggaatg ttcagggccg gcagcctgcg cgtggtttac cggcgcggaa taacattaaa gatcggccgc cgtgaccatg cagcgatgat ctattggggc gtgaaaaaac gattattata attgatccgg accaccgata accgcggtgt cagggcaccc cgggcgcgag tgcattgggt aaaacggcga ccagcaccag attattgcgc tggtgaccgt cgtgaaagtg gcgccaggcg tattatttat caccgcgtat gtatgatgcg ctcgagc 60 120 180 240 300 357
<210> 340 <211> 1395 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 340 60 120 atggactgga cctggaggat cctcttcttg gtggcagcag ccacaggagc ccactccgag gtgcagctgg tgcagtctgg ggctgaggtg aagaaqcctg ggtcctcggt gaaggtctcc 314 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ tgcaaggctt ctggttttac cttcaccgac tatattatgc actgggtgcg tcaggcccct 180 ggtcaagggc ttgagtggat gggctatatc aacccttata atgatgacac cgaatacaac 240 gagaagttca agggccgtgt cacgattacc gcggacaaat ccacgagcac agcctacatg 300 gagctgagca gcctgcgctc tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgcg ttcgatttat 360 tactacgatg ccccgtttgc ttactggggc caagggactc tggtcaccgt ctctagtgcc 420 tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcgccctgct ccaggagcac ctccgagagc 480 acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 540 aactcaggcg ctctgaccag cggcgtgcac accttcccag ctgtcctaca gtcctcagga 600 ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca acttcggcac ccagacctac 660 acctgçaacg tagatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagacagt tgagcgcaaa 720 tgttgtgtcg agtgcccacc gtgcccagca ccacctgtgg caggaccgtc agtcttcctc 780 ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg 840 gtggtggacg tgagccacga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggacggcgtg 900 gaggtgcata atgccaagac aaagccacgg gaggagcagt tcaacagcac gttccgtgtg 960 gtcagcgtcc tcaccgttgt gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 1020 gtctccaaca aaggcctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaaac caaagggcag 1080 ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg aggagatgac caagaaccag 1140 gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1200 agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacacctc ccatgctgga ctccgacggc 1260 tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc 1320 ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc 1380 ctgtctccgg gtaaa 1395
<210> 341 <211> 213 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 341 ASp lie Gin Met Thr Gin ser pro ser Ser Leu Ser Ala Ser val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp 35 Thr Tyr Gin Gin Lys Pro 40 Ser Gly Lys Ala Pro Lys 45 Arg Leu Leu ile Tyr ser Ser Arg Leu Asn Gly Val Pro Ser phe ser Gly 50 55 60 ser Gly ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gin pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr 85 Thr Tyr Tyr cys Gin Gin 90 Lys Asp Ile Lys His Pro 95 Ala Thr Phe Gly Gin Gly Lys val Glu Ile Arg Thr Val Ala Pro 100 105 Gin 110 Thr Ser vai Phe Ile Phe Pro ΡΓΟ ser Asp Glu Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Glu Ala Ala ser val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Lys 130 135 140 Glu Vai Gin Trp Lys val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 145 150 155 160 ser Vai Thr Glu Gin Asp ser Lys Asp ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175 Thr Leu Thr Leu ser Lys Ala ASp Tyr Glu Lys His Lys val Tyr Ala 180 185 190 cys Glu Val Thr his Gin Gly Leu Ser Ser pro val Thr Lys Ser Phe 195 200 205 Asn Arg Gly Glu Cys 210
<210> 342 <211> 639 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 342 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggtga ccgtgtcacc 60 atcacttgcc gcgcaagtca ggatattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctattct acttcccgtt tgaatagtgg ggtcccatca 180 315 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ cgcttcagtg gcagtggctc gaagattttg caacttacta accaaggtgg agatcaaacg gatgagcagt tgaaatctgg agagaggcca aagtacagtg agtgtcacag agcaggacag agcaaagcag actacgagaa agctcgcccg tcacaaagag tgggacagat ttcactctca ctgtcaacag gatattaaac tacggtggct gcaccatctg aactgcctct gttgtgtgcc gaaggtggat aacgccctcc caaggacagc acctacagcc acacaaagtc tacgcctgcg cttcaacagg ggagagtgt ccatcagcag tctgcaacct 240 accctacgtt cggtcaaggc 300 tcttcatctt cccgccatct 360 tgctgaataa cttctatccc 420 aatcgggtaa ctcccaggag 480 tcagcagcac cctgacgctg 540 aagtcaccca tcagggcctg 600 639
<210> 343 <211> 235 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 343
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gin Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15 Leu Arg Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser ser 20 25 ile Thr 30 Ala Leu Ser Ala Ser val Gly Asp Arg Val Thr Cys Arg ser 35 40 Gin 45 Gly Gin Asp lie ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Lys Pro Lys 50 55 60 Gly val Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr Ser Thr Ser Arg Leu Asn Ser 65 70 75 80 Pro Ser Arg phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 85 90 95 Gin lie Ser ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr cys Gin 100 Thr 105 110 Asp rle Lys 115 vai HiS Pro Phe Gly 120 val Gin Gly Thr Lys Val 125 Pro Glu Ile Lys Arg Thr Ala Ala Pro Ser Phe Ile Phe Pro ser Asp Glu 130 135 140 Gin Leu Lys ser Gly Thr Ala ser val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 145 150 155 160 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys val Gin Trp Lys val Asp Asn Ala Leu Gin 165 170 175 Ser Gly Asn ser Gin GlU ser val Thr Glu Gin Asp Ser Lys ASp ser 180 185 190 Glu Thr Tyr ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala ASp Tyr 195 200 205 Lys His Lys vai Tyr Ala cys Glu val Thr His Gin Gly Leu ser Ser 210 215 220 Pro Vai Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235
<210> 344 <211> 705 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 344 atggacatga gggtgcccgc tcagctcctg gggctcctgc tgctgtggct gagaggtgcc 60 agatgtgaca tccagatgac ccagtctcca tcctccctgt ctgcatctgt aggtgaccgt 120 gtcaccatca cttgccgcgc aagtcaggat attagcagct atttaaattg gtatcagcag 180 aaaccaggga aagcccctaa gctcctgatc tattctactt cccgtttgaa tagtggggtc 240 ccatcacgct tcagtggcag tggctctggg acagatttca ctctcaccat cagcagtctg 300 caacctgaag attttgcaac ttactactgt caacaggata ttaaacaccc tacgttcggt 360 caaggcacca aggtggagat caaacgtacg gtggctgcac catctgtctt catcttcccg 420 ccatctgatg agcagttgaa atctggaact gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc 480 tatcccagag aggccaaagt acagtggaag gtggataacg ccctccaatc gggtaactcc 540 caggagagtg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcctcag cagcaccctg 600 acgctgagca aagcagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag 660 ggcctgagct cgcccgtcac aaagagcttc aacaggggag agtgt 705
<210> 345 <211> 446 <212> PRT <213> Mus musculus 316 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <400> 345
Glu val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser vai Lys val Ser cys Lys Ala ser Gly Phe Thr phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Ile Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu GlU Trp Met 35 40 Thr Glu 45 Gly Tyr ile Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu ser ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala val Tyr Tyr cys 85 90 95 Ala Arg Ser Ile Tyr Tyr Tyr Asp Ala Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gin 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro ser val 115 120 125 Phe ΡΓΟ Leu Ala Pro Cys ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr ser Gly val His Thr Phe Pro Ala val 165 170 175 Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser val val Thr val Pro 180 185 190 Ser ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr cys Asn val Asp His Lys 195 200 205 Pro ser 210 Asn Thr Lys val Asp 215 Lys Thr Val Glu ÍS8 Lys Cys Cys val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser val Phe 225 230 235 ile Thr 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ser Arg pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val val Asp val Ser His Glu Asp Pro Glu val 260 265 270 Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 val Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg val val Ser 290 Val 295 300 Glu Leu Thr val His Gin ASP Trp Leu Asn Gly Lys Tyr Lys cys 305 310 315 320 Lys val Ser Asn ϊϊί Gly Leu Pro Ala Pro 330 Ile Gl u Lys Thr Ile 335 Ser Lys Thr Lys Gly· Gin Pro Arg Glu Pro Gin val Tyr Thr Leu pro pro 340 345 350 val ser Arg Glu GlU Met Thr Lys Asn Gin val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Gly Lys Gly 270 phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala val Glu Trp ISO Glu Ser Asn Gin J/ U Pro Glu Asn Asn Tyr 0 / j Lys Thr Thr pro Pro O Ov Met Leu ASp ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr ser Lys Leu Thr val ASp Lys ser Arg Trp 405 410 415 Gin Gin Gly Asn val Phe ser Cys Ser val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gin Lys ser Leu Ser Leu ser pro Gly Lys 435 440 445
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<210> 347 <211> 465 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 347
Met ASp Trp Thr Trp Arg lie Leu Phe Leu val Ala Ala Ala Thr Gly 1 5 io val 15 Ala Hi S ser Glu vai Gin Leu Vai Gin ser Gly Ala GlU Lys Lys 20 25 30 Pro Gly ser Ser Vai Lys vai Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr phe 35 40 45 Thr Asp 50 Trp Tyr lie Met His Trp 55 Asn Vai Arg Gin Ala Pro 60 ASP Gly Gin Gly Leu Glu Met Gly Tyr ile Pro Tyr Asn Asp Thr Glu Tyr Asn 65 70 75 80 Glu Lys Phe Lys Gly 85 Glu Arg Vai Thr Ile Thr 90 Arg Ala Asp Lys Ser Thr 95 Ala Ser Thr Ala Tyr Met Leu Ser Ser Leu ser Glu Asp Thr Val 100 lie 105 no Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Tyr Tyr Tyr Asp Ala Pro Phe Ala Tyr 115 120 125 Trp Gly Gin Gly Thr Leu vai Thr Val Ser Ser Ala ser Thr Lys Gly 130 135 140 Pro Ser vai Phe Pro Leu Ala pro Cys Ser Arg ser Thr Ser Glu Ser 145 150 155 160 Thr Ala Ala Leu !S cys Leu Val Lys Asp 170 Tyr Phe Pro Glu Pro 175 Val Thr vai ser Trp Asn ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly val HiS Thr Phe 180 185 190 Pro Ala vai Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser val Val 195 200 205 Thr vai Pro Ser ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr cys Asn Val 210 215 220 Asp His Lys Pro ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr val Gl u Arg Lys 225 230 235 240 Cys cys vai Glu cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro val Ala Gly Pro vai 245 250 255 Ser Phe Leu Phe Pro pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 260 265 270 Arg Thr Pro Glu vai Thr Cys val val val Asp Val ser His Glu Asp 275 280 285 Pro Glu Vai Gin phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly val Glu Val His Asn 290 295 300 318 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
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<210> 348 <211> 1395 <212> ADN <213> Mus musculus <4Ο0> 348 atggactgga cctggaggat cctcttcttg gtggcagcag ccacaggagc ccactccgag €0 gtgcagctgg tgcagtctgg ggctgaggtg aagaagcctg ggtcctcggt gaaggtctcc 120 tgcaaggctt ctggttttac cttcaccgac tatattatgc actgggtgcg tcaggcccct 180 ggtcaagggc ttgagtggat gggctatatc aacccttata atgatgacac cgaatacaac 240 gagaagttca agggccgtgt cacgattacc gcggacaaat ccacgagcac agcctacatg 300 gagctgagca gcctgcgctc tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgcg ttcgatttat 360 tactacgatg ccccgtttgc ttactggggc caagggactc tggtcaccgt ctctagtgcc 420 tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcgccctgct ccaggagcac ctccgagagc 480 acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 540 aactcaggcg ctctgaccag cggcgtgcac accttcccag ctgtcctaca gtcctcagga 600 ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca acttcggcac ccagacctac 660 acctgcaacg tagatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagacagt tgagcgcaaa 720 tgttgtgtcg agtgcccacc gtgcccagca ccacctgtgg caggaccgtc agtcttcctc 780 ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg 840 gtggtggacg tgagccacga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggacggcgtg 900 gaggtgcata atgccaagac aaagccacgg gaggagcagt tcaacagcac gttccgtgtg 960 gtcagcgtcc tcaccgttgt gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 1020 gtctccaaca aaggcctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaaac caaagggcag 1080 ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg aggagatgac caagaaccag 1140 gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1200 agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacacctc ccatgctgga ctccgacggc 1260 tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc 1320 ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc 1380 ctgtctccgg gtaaa 1395
<210> 349 <211> 417 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 349 atggaatgga tctggatatt gtgcagctgg tgcagtctgg tgcaaggctt ctggttttac ggtcaagggc ttgagtggat gagaagttca agggccgtgt gagctgagca gcctgcgctc tactacgatg ccccgtttgc tctcttcctc ctgtcaggaa ggctgaggtg aagaagcctg cttcaccgac tatattatgc gggctatatc aacccttata cacgattacc gcggacaaat tgaggacacg gccgtgtatt ttactggggc caagggactc ctgcaggtgt ccactctgag 60 ggtcctcggt gaaggtctcc 120 actgggtgcg tcaggcccct 180 atgatgacac cgaatacaac 240 ccacgagcac agcctacatg 300 actgtgcgcg ttcgatttat 360 tggtcacagt ctcgagc 417 319 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
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Asp Ile val Leu Thr Gin Ser Pro Ala Ser Leu Ala val Ser Leu Gly 1 5 Ala 10 15 Gin Arg Ala Thr Ile Cys Lys Ala Ser Gin ser val Asp Tyr ASp 20 25 30 Gly Thr ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Pro pro 35 Ala Ala 40 45 Ala Lys Leu Leu ile Tyr ser Asn Leu Glu ser Glu Ile pro 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Thr ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile HiS 65W 70 Ile Thr 75 80 Pro val Glu Glu Glu Asp Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin ser Asn 85 90 95 Glu Asp Pro phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Gin Ala Asp Ala Ala Pro Thr val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu 115 Ala 120 125 Leu Thr ser Gly Gly ser Val Val cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr 130 val 150 135 140 Gin 160 Pro 145 Lys ASp ile Asn Lys Trp Lys ile ÍS Gly Ser Glu Arg Asn Gly val Leu Asn IfiC Ser Trp Thr Asp Gin 1 7fl ASP Ser Lys Asp ser 1 7ζ Thr Tyr ser Met ser ser Thr Leu Thr Leu 1/U Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg 180 185 190 His Asn ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro 195 200 205 Ile val Lys ser Phe Asn Arg Asn Glu cys 210 215
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Lys Ala ser Gin Ser vai Asp Tyr Asp Gly Thr ser Tyr Met Asn 15 10 15
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Ala Ala ser Asn Leu Glu Ser 1 5
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Gin Gin ser Asn Glu Asp Pro phe Thr 1 5 320 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
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caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatg ctgcatccaa tctagaatct ISO gagatcccag ccaggtttag tggcactggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240 cctgtggagg aggaggatat cacaacctat tactgtcagc aaagtaatga ggatccgttc 300 acgttcggag gggggaccaa gttggaaata aaacgggctg atgctgcacc aactgtatcc 360 atcttcccac catccagtga gcagttaaca tctggaggtg cctcagtcgt gtgcttcttg 420 aacaacttct accccaaaga catcaatgtc aagtggaaga ttgatggcag tgaacgacaa 480 aatggcgtcc tgaacagttg gactgatcag gacagcaaag acagcaccta cagcatgagc 540 agcaccctca cgttgaccaa ggacgagtat gaacgacata acagctatac ctgtgaggcc 600 actcacaaga catcaacttc acccattgtc aagagcttca acaggaatga gtgttag 657
<210> 355 <211> 238 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 355
Met Glu Thr Asp Thr ile Leu Leu Trp val Leu Leu Leu Trp Val Pro 1 5 10 15 Ala Gly ser Thr Gly Asp ile vai Leu Thr Gin ser Pro Ala Ser Leu 20 25 30 vai ser Leu Gly Gin Arg Ala Thr Ile Ala Cys Lys Ala Ser Gin Ser 35 40 45 vai Asp Tyr A5P Gly Thr ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gin Gin Lys pro 50 55 60 Gly Gin pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu ser 65 70 75 80 Glu Ile Pro Ala Arg Phe ser Gly Thr Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 85 90 95 Leu Asn lie HlS Pro Vai Glu Glu Glu Asp Ile Thr Thr Tyr Tyr Cys 100 105 110 Gin Gin Ser Asn Glu ASP Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu 115 120 125 Glu lie Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe pro Pro 130 135 140 Ser ser Glu Gin Leu Thr Ser Gly Gly Ala ser Val val cys phe Leu 145 150 155 160 Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp ile Asn val Lys Trp Lys Ile Asp Gly 165 170 175 Ser Glu Arg Gin Asn Gly Vai Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gin ASp Ser 180 185 190 Lys Asp ser Thr Tyr ser Met ser ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp 195 200 205 Glu Tyr Glu Arg His Asn ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr 210 215 220 Ser Thr Ser Pro Ile vai Lys ser Phe Asn Arg Asn Glu cys 225 230 235
<210> 356 <211> 717 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 356 arggagacag acacaatcct gctatgggtg ctgctgctct gggttccagg ctccactggt 60 gacattgtgt tgacccagtc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc 120 atcgcctgca aggccagcca aagtgttgat tatgatggta ctagttatat gaattggtac 180 caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatg ctgcatccaa tctagaatct 240 gagatcccag ccaggtttag tggcactggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 300 cctgtggagg aggaggatat cacaacctat tactgtcagc aaagtaatga ggatccgttc 360 acgttcggag gggggaccaa gttggaaata aaacgggctg atgctgcacc aactgtatcc 420 321 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ atcttcccac catccagtga gcagttaaca tctggaggtg cctcagtcgt gtgcttcttg 480 aacaacttct accccaaaga catcaatgtc aagtggaaga ttgatggcag tgaacgacaa 540 aatggcgtcc tgaacagttg gactgatcag gacagcaaag acagcaccta cagcatgagc 600 agcaccctca cgttgaccaa ggacgagtat gaacgacata acagctatac ctgtgaggcc 660 actcacaaga catcaacttc acccattgtc aagagcttca acaggaatga gtgttag 717
<210> 357 <211> 442 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 357
Gin val Gin Leu Gin Gin pro Gly Thr Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser val Lys Leu ser Cys Lys Ala ser Gly Tyr Ile Phe Thr Thr Tyr 20 25 30 Trp Met Asn 7 r Trp val Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp ile Gly Met J J ile His pro ser Ala ‘fU ser Glu Ile Arg Leu Ί J Asp Gin Lys Phe 50 55 60 Lys cc Asp Lys Ala Thr Leu 7 Λ Thr Leu Asp Lys Ser 75 Ser Ser Thr Ala ST OJ Met Hl S Leu Ser Gly Pro Thr Ser val Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg ser Gly Glu Trp Gly ser Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110 Ser val Thr Val ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro pro Ser Val Tyr pro 115 120 125 Leu Ala Pro Gly ser Ala Ala Gin Thr Asn ser Met Val Thr Leu Gly 130 135 140 Cys Leu val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro val Thr Val Thr Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ser Leu ser Ser Gly Val His Thr phe Pro Ala val Leu Gin 165 170 175 Ser ASp Leu Tyr Thr Leu ser ser ser val Thr val Pro ser ser Thr 180 185 190 rrp Pro ser Glu Thr Val Thr cys Asn val Ala His Pro Ala ser Ser 195 200 205 Thr Lys 51 λ val Asp Lys Lys lie val Pro Arg ASp Cys Gly cys Lys pro cys C -LU lie Cys Thr Val Pro tlJ Glu Val Ser Ser Val CLU Phe ile Phe Pro Pro 225 230 235 240 Lys Pro Lys ASP val Leu Thr ile Thr Leu Thr pro Lys val Thr cys 245 250 255 val val val Asp lie ser Lys Asp Asp Pro Glu val Gin Phe ser Trp 260 265 270 Phe val Asp ASP Val Glu val His Thr Ala Gin Thr Gin Pro Arg Glu 275 280 285 Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser val Ser Glu Leu pro ile Met 290 295 300 His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser 305 310 315 320 Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly 325 330 335 Arg Pro Lys Ala Pro Gin Val Tyr Thr ile pro Pro Pro Lys Glu Gin 340 345 350 Met Ala Lys ASP Lys val Ser Leu Thr cys Met lie Thr Asp Phe Phe 355 360 365 pro Glu ASp ile Thr val Glu Trp Gin Trp Asn Gly Gin pro Ala Glu 370 375 380 Asn Tyr Lys Asn Thr Gin Pro lie Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe 385 390 395 400 ile Tyr ser Lys Leu Asn val Gin Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn 405 410 415 Thr Phe Thr cys Ser val Leu His Glu Gly Leu His Asn HiS His Thr 420 425 430 Glu Lys ser Leu ser His Ser Pro Gly Lys 435 440
<210> 358 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus 322 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <4Ο0> 358 Thr Tyr Trp Met Asn 1 5
<210> 359 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 359
Met ile His Pro ser Ala Ser Glu ile Arg Leu Asp Gin Lys Phe Lys 1 5 10 15 ASp
<210> 360 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 360
Ser Gly Glu Trp Gly Ser Met Asp Tyr 1 5
<210> 361 <211> 1329 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 361 caggtccaac tacagcagcc tgggactgag ctggtgaggc ctggaacttc agtgaagttg 60 tcctgtaagg Cttctggcta catcttcacc acctactgga tgaactgggt gaaacagagg 120 cctggacaag gccttgagtg gattggcatg attcatcctt ccgcaagtga aattaggttg 180 gatcagaaat tcaaggacaa ggccacattg actcttgaca aatcctccag cacagcctat 240 atgcacctca gcggcccgac atctgtggat tctgcggtet attactgtgc aagatcaggg 300 gaatgggggt ctatggacta ctggggtcaa ggaacctcag tcaccgtctc ctcagccaaa 360 acgacacccc catctgtcta tccactggcc cctggatctg ctgcccaaac taactccatg 420 gtgaccctgg gatgcctggt caagggctat ttccctgagc cagtgacagt gacctggaac 480 tctggatccc tgtecagcgg tgtgcacacc ttcccagctg tcctgcagtc tgacctetac 540 actctgagca gctcagtgac tgtcccctcc agcacctggc ccagcgagac cgtcacctgc 600 aacgttgccc acccggccag cagcaccaag gtggacaaga aaattgtgcc cagggattgt 660 ggttgtaagc cttgcatatg tacagtccca gaagtatcat ctgtcttcat cttcccccca 720 aagcccaagg atgtgctcac cattactctg actcctaagg tcacgtgtgt tgtggtagac 780 atcagcaagg atgatcccga ggtccagttc agctggtttg tagatgatgt ggaggtgcac 840 acagctcaga cgcaaccccg ggaggagcag ttcaacagca ctttccgctc agtcagtgaa 900 cttcccatca tgcaccagga ctggctcaat ggcaaggagt tcaaatgcag ggtcaacagt 960 gcagctttcc ctgcccccat cgagaaaacc atctccaaaa ccaaaggcag accgaaggct 1020 ccacaggtgt acaccattcc acctcccaag gagcagatgg ccaaggataa agtcagtctg 1080 acctgcatga taacagactt cttccctgaa gacattactg tggagtggca gtggaatggg 1140 cagccagcgg agaactacaa gaacactcag cccatcatgg acacagatgg ctcttacttc 1200 atctacagca agctcaatgt gcagaagagc aactgggagg caggaaatac tttcacctgc 1260 tctgtgttac atgagggcct gcacaaccac catactgaga agagcctctc ccactctcct 1320 ggtaaatga 1329
<210> 362 <211> 461 <212> PRT <213> Mus musculus 323 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <400> 362
Met Gly Trp ser Ser Ile ile Leu Phe Leu val Ala Thr Ala Thr Gly 1 5 10 15 val His Ser Gin val Gin Leu Gin Gin Pro Gly Thr Glu Leu val Arg Gly 20 Val 25 30 ΡΓΟ Thr Ser Lys Leu ser cys Lys Ala Ser Gly Tyr ile Phe 35 40 45 Thr Thr Tyr Trp Met Asn Trp val Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu J w Trp Ile Gly Met Ile J J His Pro Ser Ala Ser OU Glu Ile Arg Leu ASp 65 70 Ala 75 80 Gin Lys Phe Lys ASP Lys Thr Leu Thr Leu Asp Lys ser ser ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met HÍS Ley Ser Gly Pro Thr Ser val Asp Ser Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr cys Ala Arg Ser Gly Glu Trp Gly ser Met ASp Tyr Trp Gly 115 Thr 120 125 Gin Gly Thr ser val val ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro pro ser 130 135 140 vai Tyr Pro Leu Ala pro Gly Ser Ala Ala Gin Thr Asn Ser Met Val 145 150 155 160 Thr Leu Gly cys Leu val Lys Gly Tyr Phe pro Glu Pro Val Thr val 165 170 175 Ala Thr Trp Asn ser Gly ser Leu ser Ser Gly val His Thr Phe Pro 180 185 190 val vai Leu Gin Ser Asp Leu Tyr Thr Leu ser Ser Ser val Thr pro 195 200 205 Ala Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn val His pro 210 215 220 Gly Ala ser Ser Thr Lys val Asp Lys Lys ile Val Pro Arg Asp cys 225 230 235 240 Cys Lys pro Cys ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser ser Val Phe Ile 245 250 Thr 255 Phe Pro Pro Lys pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Pro Lys 260 265 270 Val Gin val Thr Cys Val val val Asp Ile ser Lys Asp Asp Pro Glu 275 280 285 Gin Thr Gin Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu val His Thr Ala 290 295 300 Val Glu Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Ser Leu 305 310 315 Phe 320 Pro lie Met His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Lys Cys Arg 325 330 Ile 335 Val Asn Ser Ala Ala phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ser Lys 340 345 Ile 350 Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala pro Gin val Tyr Thr Pro Pro pro 355 360 365 Ile Thr Lys Glu Gin Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr cys Met 370 375 380 Gly Gin Asp Phe Phe Pro Glu Asp ile Thr Val Glu Trp Gin Trp Asn 385 390 395 Thr 400 Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin Pro Ile Met Asp Asp Gly 405 410 415 Glu Ser Tyr Phe ile Tyr ser Lys Leu Asn val Gin Lys Ser Asn Trp 420 425 Glu Gly 430 Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu Hl s Leu His Asn 435 440 Gly 445 His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Lys 450 455 460
<210> 363 <211> 1386 <212> ADN <213> Mus musculus 324 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <400> 363 atgggatgga gctctatcat cctcttcttg gtagcaacag ctacaggtgt ccactcccag 60 gtccaactac agcagcctgg gactgagctg gtgaggcctg gaacttcagt gaagttgtcc 120 tgtaaggctt ctggctacat cttcaccacc tactggatga actgggtgaa acagaggcct 180 ggacaaggcc ttgagtggat tggcatgatt catccttccg caagtgaaat taggttggat 240 cagaaattca aggacaaggc cacattgact cttgacaaat cctccagcac agcctatatg 300 cacctcagcg gcccgacatc tgtggattct gcggtctatt actgtgcaag atcaggggaa 360 tgggggtcta tggactactg gggtcaagga acctcagtca ccgtctcctc agccaaaacg 420 acacccccat ctgtctatcc actggcccct ggatctgctg cccaaactaa ctccatggtg 480 accctgggat gcctggtcaa gggctatttc cctgagccag tgacagtgac ctggaactct 540 ggatccctgt ccagcggtgt gcacaccttc ccagctgtcc tgcagtctga cctctacact 600 ctgagcagct cagtgactgt cccctccagc acctggccca gcgagaccgt cacctgcaac 660 gttgcccacc cggccagcag caccaaggtg gacaagaaaa ttgtgcccag ggattgtggt 720 tgtaagcctt gcatatgtac agtcccagaa gtatcatctg tcttcatctt ccccccaaag 780 cccaaggatg tgctcaccat tactctgact cctaaggtca cgtgtgttgt ggtagacatc 840 agcaaggatg atcccgaggt ccagttcagc tggtttgtag atgatgtgga ggtgcacaca 900 gctcagacgc aaccccggga ggagcagttc aacagcactt tccgctcagt cagtgaactt 960 cccatcatgc accaggactg gctcaatggc aaggagttca aatgcagggt caacagtgca 1020 gctttccctg cccccatcga gaaaaccatc tccaaaacca aaggcagacc gaaggctcca 1080 caggtgtaca ccattccacc tcccaaggag cagatggcca aggataaagt cagtctgacc 1140 tgcatgataa cagacttctt ccctgaagac attactgtgg agtggcagtg gaatgggcag 1200 ccagcggaga actacaagaa cactcagccc atcatggaca cagatggctc ttacttcatc 1260 tacagcaagc tcaatgtgca gaagagcaac tgggaggcag gaaatacttt cacctgctct 1320 gtgttacatg agggcctgca caaccaccat actgagaaga gcctctccca ctctcctggt 1380 aaatga 1386
<210> 364 <211> 106 <212> PRT <213> Mus muscul us <400> 364 Asp Xle Gin Met Thr Gin ser pro Ser Ser Leu ser Ala Ser val Gly 1 5 10 15 Asp Arg val Thr Ile Thr cys Arg Ala Ser Gin Asp Ile ser ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu ile 35 40 45 Phe Tyr Ser Thr Ser Arg Leu Asn Ser Gly val pro Ser Arg ser Gly 50 55 60 Gin Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Al a Thr Tyr Tyr cys Gin Gin Asp Ile Lys His Pro Thr 85 90 95 Phe Gly Gin Gly Thr Lys val Glu ile Lys 100 105 <210> 365 <211> 318 <212> ADN <213> Mus muscul us <400> 365 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc atcacttgcc gcgcaagtca ggatattagc gggaaagccc ctaagctcct gatctattct cgcttcagtg gcagtggctc tgggacagat gaagattttg caacttacta ctgtcaacag accaaggtgg agatcaaa ctgtctgcat ctgtaggtga ccgtgtcacc 60 agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120 acttcccgtt tgaatagtgg ggtcccatca 180 ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gatattaaac accctacgtt cggtcaaggc 300 318
<210> 366 <211> 120 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 366
Glu vai Gin Leu Vai Gin Ser Gly Ala Glu Vai Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15 325 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ ser vai Lys vai 20 Ser Cys Lys Ala Ser 25 Gly phe Thr Phe Thr 30 Asp Tyr Ile Met His 35 Trp Val Arg Gin Ala 40 Pro Gly Gin Gly Leu 45 Glu Trp Met Gly Tyr ςη Ile Asn Pro Tyr Asn ASp Asp Thr Glu Tyr 60 Asn Glu Lys Phe Lys 65 Ju Gly Arg vai Thr ile 70 J J Thr Ala Asp Lys ser 75 wv Thr Ser Thr Ala Tyr ΟΛ Met Glu Leu Ser Ser 85 Leu Arg ser Glu Asp 90 Thr Ala val Tyr Tyr 95 ou cys Ala Arg ser ile 100 Tyr Tyr Tyr Asp Ala 105 pro Phe Ala Tyr Trp 110 Gly Gin Gly Thr Leu val Thr val ser Ser 115 120
<210> 367 <211> 360 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 367 gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggttt taccttcacc gactatatta tgcactgggt gcgtcaggcc 120 cctggtcaag ggcttgagtg gatgggctat atcaaccctt ataatgatga caccgaatac 180 aacgagaagt tcaagggccg tgtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgcg ctctgaggac acggccgtgt attactgtgc gcgttcgatt 300 tattactacg atgccccgtt tgcttactgg ggccaaggga ctctggtcac cgtctctagt 360
<210> 368 <211> 108 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 368 ASp ile Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser val Gly 1 Thr 5 Thr 10 15 Asp Arg Val ile cys Lys Ala ser Gin Asp Val Phe Thr Ala val Ala 20 Gin Gin 25 30 Trp Tyr Lys pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu ile 35 40 45 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly val Pro Ser Arg Phe ser Gly 50 55 60 Ser Gly ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr ile ser Ser Leu Gin Pro 65 Ala Thr 70 75 80 Gl u ASp Phe Tyr Tyr cys Gin Gin Tyr Ser ser Tyr ΡΓΟ Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105
<210> 369 <211> 324 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 369 gatatccaga tgacccagag cccgagcagc ctgagcgcga gcgtgggcga tcgcgtgacc 60 attacCtgca aagcgagcca ggatgtgttt accgcggtgg cgtggtatca gcagaaaccg 120 ggcaaagcgc cgaaactgct gatttattgg gcgagcaccc gccataccgg cgtgccgagt 180 cgctttagcg gcagcggcag cggcaccgat tttaccctga ccattagcag cctgcagccg 240 gaagattttg cgacctatta ttgccagcag tatagcagct atccgctgac ctttggcggc 300 ggcaccaaag tggaaattaa acgt 324
<210> 370 <211> 119 <212> PRT <213> Mus musculus 326 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <400> 370
Glu Vai Gin Leu val Gin Ser Gly Ala Glu val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 ser vai Lys val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn He Lys Asp Tyr 20 25 Gin Gly 30 Ile Tyr Met His Trp val Arg Gin Ala Pro Gly Leu Glu Trp 35 40 He 45 Phe Gly Arg cfi lie Asp pro Glu Asn c c Gly Asp ile Tyr 60 Asp Pro Lys Gin jU Gly Arg val Thr Met j j Thr Thr Asp Thr Ser W Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Q C Leu Arg ser Asp Asp Thr Ala val Tyr Tyr 95 Cys Ala Tyr Asp Ala 1 ΠΛ 07 Gly Asp Pro Ala Trp 105 Phe Thr Tyr Trp Gly 110 Gin Gly Thr Leu vai XUU Thr val Ser Ser 115
<210> 371 <211> 357 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 371 gaagtgcagc tggtgcagag cggcgcggaa agetgcaaag cgagcggctt taacattaaa ccgggccagg gcctggaatg gatcggccgc gatccgaaat ttcagggccg cgtgaccatg atggaactgc gcagcctgcg cagcgatgat ggcgatccgg cgtggtttac ctattggggc gtgaaaaaac cgggcgcgag cgtgaaagtg 60 gattattata tgcattgggt gcgccaggcg 120 attgatccgg aaaacggcga tattatttat 180 accaccgata ccagcaccag caccgcgtat 240 accgcggtgt attattgcgc gtatgatgcg 300 cagggcaccc tggtgaeegt ctcgagc 357
<210> 372 <211> 108 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 372 ASp ile Gin Leu Thr Gin Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser val Gly 1 5 10 15 ASp Arg val Thr Ile Thr Cys Ser val ser Ser Ser ile Ser Ser Ser 20 25 Ala 30 Asn Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Phe Ile Tyr Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly val Pro Ser Arg ser 50 55 60 Gly Ser Gly ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala oc Thr Tyr Tyr Cys Gin on Gin Trp Thr Thr Thr 95 Tyr Thr Phe Gly Gin O J Gly Thr Lys Leu Glu ile Lys Arg 7 7 100 105
<210> 373 <211> 324 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 373 gatattcagc tgacccagag cccgagcttt ctgagcgcga gcgtgggcga tcgcgtgacc 60 attacctgca gcgtgagcag cagcattagc agcagcaacc tgcattggta tcagcagaaa 120 ccgggcaaag cgccgaaact gctgatttat ggcaccagca acctggcgag cggcgtgccg 180 agccgcttta gcggcagcgg cagcggcacc gaatttaccc tgaccattag cagcctgcag 240 ccggaagatt ttgcgaccta ttattgccag cagtggacca ccacctatac ctttggccag 300 ggcaccaaac tggaaattaa acgt 324 327 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
<210> 374 <211> 122 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 374
Glu val Gin Leu Vai Gin ser Gly Ala Glu vai Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15 ser Val Lys val Ser Cys Lys Ala Ser Gly phe Asn Ile Lys Asp Tyr 20 25 30
Tyr ile His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Arg ile Asp Pro Asp Asn Gly Glu Ser Thr Tyr val Pro Lys Phe 50 55 60
Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr cys 85 90 95
Ala Arg Glu Gly Leu Asp Tyr Gly Asp Tyr Tyr Ala val Asp Tyr Trp 100 105 110
Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser ser 115 120
<210> 375 <211> 366 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 375 gaagtgcagc tggtgcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcgcgag cgtgaaagtg 60 agctgcaaag cgagcggctt taacattaaa gattattata ttcattgggt gcgccaggcg 120 ccgggccagg gcctggaatg gatgggccgc attgatccgg ataacggcga aagcacctat 180 gtgccgaaat ttcagggccg cgtgaccatg accaccgata ccagcaccag caccgcgtat 240 atggaactgc gcagcctgcg cagcgatgat accgcggtgt attattgcgc gcgcgaaggc 300 ctçgattatg gcgattatta tgcggtggat tattggggcc agggcaccct ggtgaccgtc 360 tcgagc 366
<210> 376 <211> 107 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 376
Asp Ile Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr ile Thr cys Arg Ala Ser Gin Asp Ile Ser Asn Tyr 20 Gin Gin 25 30 ile Leu Asn Trp Tyr Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Leu Ser Gly Val Pro ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser ser Leu Gin Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Gly Asp Thr Leu pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys val Glu Ile Lys 100 105
<210> 377 <211> 321 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 377 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctctccgcat ccgtaggcga ccgcgtaacc 60 328 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ ataacatgta gagcatctca agatatttcc aactatttga attggtacca acaaaaaccc 120 ggcaaagcac ctaaactcct catttactat acatcaagac tcctctccgg cgttccatca 180 cgattctcag gctccggctc cggcacagat ttcacactca ctatttcctc cctccaacca 240 gaagattttg caacctatta ctgtcaacaa ggcgatacac tcccatacac attcggcggc 300 ggcacaaaag ttgaaattaa a 321
<210> 378 <211> 123 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 378
Glu vai Gin Leu Val c Gin Ser Gly Ala Glu 1Λ val Lys Lys Pro Gly t ς Ala X Ser Val Lys Val J Ser Cys Lys Ala ser XU Gly Tyr Thr Phe Thr ASp Tyr 20 25 30 Asn Met His Trp Val Arg Gin Ala A(\ Pro Gly Gin Gly Leu Aí GlU Trp Met Gly Glu 3 3 rle Asn Pro Asn Ser HSJ Gly Gly Ala Gly Tyr Α5Π Gin Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg val Thr Met Thr Thr ASp Thr ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser 85 Leu Arg Ser Asp Asp 90 Thr Ala val Tyr W cys Ala Arg Leu Gly Tyr Asp Asp Ile Tyr Asp Asp Trp Tyr phe ASp val 100 105 110 Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 379 <211> 369 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 379 cgttaaagtt 60 aagacaagcg 120 agcaggctac 180 aacagcatat 240 acgacttggg 300 aacagttacc 360 369 gaggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtaaaaaaac caggagcaag tcttgtaaag caagcggata tacatttaca gattacaaca tgcattgggt ccaggacaag gattggaatg gatgggcgaa attaacccta atagtggagg aatcaaaaat tcaaagggag agttacaatg acaacagaca caagcacttc atggaactgc gatcacttag aagcgacgat acagctgtat actattgcgc tatgatgata tatatgatga ctggtatttc gatgtttggg gccagggaac gtctctagt
<210> 380 <211> 108 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 380 ser Pro ser Phe Leu Ser Ala ser val __1 10 15 cys Arg Ala Ser ser Ser Val Thr Ser Ser 25 30 Gin Lys pro Gly Lys Ala Pro Aí Lys Leu Leu Leu HO Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 55 60 Glu Phe Thr Leu Thr Ile ser ser Leu Gin 75 80 Tyr Tyr cys Gin Gin Tyr Asp Phe Phe Pro 90 95 Thr Lys val Glu Ile Lys 105
Asp Ile Gin Leu Thr Gin 1 5
Asp Arg vai Thr Xle Thr 20
Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin 35 ile Tyr ser Thr ser Asn 50
Gly Ser Gly ser Gly Thr 65 70
Pro Glu Asp Phe Ala Thr 85
Ser Thr phe Gly Gly Gly 100 329 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
<210> 381 <211> 324 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 381 gacatccagc tgacccagag ccccagcttc atcacatgcc gcgcctcatc ttcagttaca ccaggaaaag cacctaaact tcttatatac tctcgatttt caggatctgg atcaggcaca ccagaagact tcgccactta ttactgccaa ggaggtacaa aagtagaaat caag
<210> 382 <211> 121 <212> PRT <213> Mus musculus ctttccgcat ccgttggtga ccgagtaaca 60 tcttcttatc ttaattggta tcaacaaaaa 120 tctacatcta atctcgcatc aggagttccc 180 gaatttacac ttactatatc atcactccaa 240 caatacgatt tttttccaag cacattcgga 300 324 <400> 382 Glu val Gin Leu val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys pro Gly Ala 1 5 10 15 ser •vai Lys Val Ser cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr ASp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn 0 r Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Arg Leu 4 c Glu Trp Met Gly Asp j D Ile Asn Pro Tyr Asn ASp ASp Thr Thr Tyr Asn His Lys Phe 50 55 60 Ala Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr ser Ala ser Thr Tyr 65 70 75 Ala Val 80 Met Glu Leu Ser Ser 85 Leu Arg ser Glu Asp 90 Thr Tyr 5Γ cys Ala Arg Glu Thr Ala Val Ile Thr Thr Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gin Gly Thr Thr val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 383 <211> 363 <212> ADN <213> Mus muscul us <400> 383 gaggtgcagc tggtgcagag agttgcaaag catctggata cctggacaaa gacttgaatg aatcataaat ctaaaggaag atggaacttt cctcattgag gccgttatta ctaccaacgc agt cggcgccgag gtcaagaaac cacatttacc gactactaca gatgggagac attaaccctt agttacaatt acaagagata atctgaagac actgctgttt ratggattac tggggtcaag ctggagcaag cgtaaaggtt 60 tgaattgggt acgaeaagcc 120 ataacgacga cactacatac 180 catecgcatc aaccgcctat 240 attactgtgc aagagaaact 300 gaaccactgt taccgtctct 360 363
<210> 384 <211> 108 <212> PRT <213> Mus musculus 330 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <400> 384 ASP lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Vai Thr Ile Thr cys ser vai Ser ser Thr ile ser Ser Asn 20 25 30 His Leu His Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala pro Lys Ser Leu 35 40 45 lie Tyr Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly val Pro Ser Arg phe ser 50 55 60 Gin Gly ser Çly Ser Gly Thr ASp Phe Thr Leu Thr Ile ser Ser Leu 65 70 75 80 ΡΓΟ Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gl n Trp ser Ser Tyr Pro 85 90 95 Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys vai Glu Ile Lys 100 105
<210> 385 <211> 324 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 385 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctctcagcat ccgtaggcga tagagttaca 60 ataacatgca gcgtatcatc aactatatca tcaaatcatc ttcattggtt ccaacagaaa 120 cccggcaaag cacctaaatc acttatatac ggcacatcaa atctcgcatc aggcgttcct 180 tcaagatttt caggctctgg ctcaggcacc gactttactc ttacaatatc ctccctccaa 240 cccgaagact tcgcaaccta ttactgtcaa caatggtcct catatccact cacatttggc 300 ggcggcacaa aagtagaaat taaa 324
<210> 386 <211> 125 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 386
Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu 10 ASP val Lys Lys Pro Gly 15 Asp Ala X Ser Val Lys Val j Ser Cys Lys Ala Ser Phe Asn Ile Lys Phe 20 25 30 Tyr Leu His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg ile ASp Pro Glu Asn 55 Thr Gly ASp Thr Leu Tyr 60 Thr Asp pro Lys Phe Gin Asp Lys Val Thr Met Thr Asp Thr Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg ser 85 A5p Leu Arg Ser Asp Asp 90 Gly Thr Ala val Tyr Tyr 95 Tyr cys Ala Arg Glu Ala 100 Gly Tyr Phe His Asp 105 val Thr ser Tyr Trp 110 Phe ASp val Trp Arg Gly Thr Leu Thr val ser ser 115 120 125
<210> 387 <211> 375 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 387 gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctgactt caacattaaa gacttctatc tacactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gattggaagg attgatcctg agaatggtga tactttatat 180 gacccgaagt tccaggacaa ggtcaccatg accacagaca cgtccaccag cacagcctac 240 atggagctga ggagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagaggcg 300 gattatttcc acgatggtac ctcctactgg tacttcgatg tctggggccg tggcaccctg 360 gtcaccgtct ctagt 375 331 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
<210> 388 <211> 106 <212> PRT <213> Mus musculus
Leu Thr Gin ser pro Ser phe Leu ser Ala Ser Val Gly 5 10 15 Thr Ile Thr cys Arg Ala ser ser Ser Ile ser Tyr ile 20 25 30 Gin Gin Lys pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 40 45 Asn Leu Ala ser Gly Val pro Ser Arg Phe Ser Gly 5er 55 60 Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gin Pro Glu 70 Gin Gin 75 80 Thr Tyr Tyr cys Trp Ser ser Asp Pro Leu Thr 85 90 95 Gly Thr Lys val Glu Ile Lys 100 105 <400> 388 Asp lie Gin 1
Asp Arg vai
His Trp T^r
Ala Thr Ser 50
Gly ser Gly 65
Asp Phe Ala phe Gly Gly
<210> 389 <211> 318 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 389 gacatccagt tgacccagtc tccatccttc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgca gggccagctc aagtataagt tacatacact ggtatcagca aaaaccaggg 120 aaagccccta agctcctgat ctatgccaca tccaacctgg cttctggggt cccatcaagg 180 ttcagcggca gtggatctgg gacagaattc actctcacaa tcagcagcct gcagcctgaa 240 gattttgcaa cttattactg tcagcagtgg agtagtgacc cactcacgtt cggcggaggg 300 accaaggtgg agatcaaa 318
<210> 390 <211> 121 <212> PRT <213> Mus musculus
Leu val Gin Ser Gly Ala Glu val Lys Lys Pro Gly Ala 5 10 15 Val 20 Trp Ser Cys Lys Ala Ser 25 Pro Gly Phe Asp ile Lys 30 Glu Asp Tyr val Arg Gin Ala 40 Gly Gly Gin Gly Leu 45 Trp Ile Asp Pro Asp Asn 55 Glu Thr Glu Phe 60 Ala Pro Lys Phe Val Thr Met Thr Thr ASP Thr Ser ile Ser Thr Ala Tyr 70 75 Ala 80 ser Arg 85 Leu Arg ser Asp ASp 90 Thr val Tyr Tyr 95 cys Asp Tyr ASp Gly Thr Tyr Thr Trp Phe Pro Tyr Trp Gly 100 105 110 Leu Val Thr val Ser Ser 120 musculus <400> 390 Glu vai Gin 1
Ser vai Lys
Tyr lie His 35
Gly Arg vai 50
Pro Gly Lys 65
Met Glu Leu Ala Arg Glu
Gin Gly Thr 115 <210> 391 <211> 363 <212> ADN <213> Mus 332 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <400> 391 gaggtgcagc tggtgcagtc tcctgcaagg cttctggatt cctggacaag ggcttgagtg gccccgaagt tcccgggcaa atggagctga gcaggctgag tacgatggta cctacacctg agt tggggctgag gtgaagaagc cgacattaag gactactata gatcggaagg gttgatcctg ggtcaccatg accacagaca atctgacgac acggccgtgt gtttccttat tggggccaag ctggggcctc agtgaaggtc 60 tacactgggt gcgacaggcc 120 acaatggtga gactgaattt 180 cgtccatcag cacagcctac 240 attactgtgc gagagaagac 300 ggactctggt caccgtctct 360
<210> 392 <211> 448 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado <400> ; 392 Glu 1 Vai Gin Leu val 5 Gin Ser Gly Ala Glu 10 Val Lys Lys pro Gly 15 Ala ser Vai Lys Val 20 Trp Ser cys Lys Ala Ser 25 Pro Gly Tyr Thr Phe Thr 30 Glu Asp Tyr Asn Met HlS 35 Ile Val Arg Gin Ala 40 Gly Gly Gin Gly Leu 45 Asn Trp Met Gly Glu 50 Asn pro Asn Ser 55 Gly Ala Gly Tyr 60 Gin Lys Phe Lys 65 Gly Arg val Thr Met 70 Thr Thr Asp Thr Ser 75 Thr Ser Thr Ala Tyr 80 Met Glu Leu Arg Ser 85 Leu Arg ser Asp Asp 90 Thr Ala val Tyr Tyr 95 cys Ala Arg Leu Gly 100 Gly Tyr Asp Asp Ile Tyr 105 Val A5p Asp Trp Tyr Phe 110 Thr Asp val Trp Gly Gin 115 Thr Thr val Thr 120 Ser Ser Ala Ser 125 Lys Gly Pra Ser 130 Val Phe pro Leu Ala 135 pro cys Ser Arg Ser 140 Thr ser Glu Ser Thr 145 Ala Ala Leu Gly cys 150 Leu val Lys Asp Tyr 155 Phe Pro Glu Pro Val 160 Thr val Ser Trp Asn 165 Ser Gly Ala Leu Thr 170 Ser Gly val HÍS Thr 175 Phe Pro Ala val Leu 180 Gin Ser Ser Gly Leu 185 Tyr Ser Leu Ser Ser 190 Val Val Thr Val pro 195 ser ser Asn Phe Gly 200 Thr Gin Thr Tyr Thr 205 cys Asn Val Asp Hl S 210 Lys Pro ser Asn Thr 215 Lys Val Asp Lys Thr 220 Val Glu Arg Lys Cys 225 cys Val Glu cys Pro 230 Pro cys pro Ala Pro 235 Pro Val Ala Gly Pro 240 Ser val Phe Leu phe 245 Pro Pro Lys Pro Lys 250 Asp Thr Leu Met ile 255 ser Arg Thr Pro Glu 260 Val Thr cys Val val 265 val Asp val Ser Hi s 270 Glu Asp Pro Glu Val 275 Gin Phe Asn Trp Tyr 280 Val Asp Gly val Glu 285 val His Asn Ala Lys 290 Thr Lys Pro Arg Glu 295 Glu Gin Phe Asn ser 300 Thr Phe Arg Val vai 305 ser val Leu Thr val 310 Val His Gin Asp Trp 315 Leu Asn Gly Lys Glu 320 Tyr Lys Cys Lys Val 325 Ser Asn Lys Gly Leu 330 Pro Ala Pro ile Gly 335 Lys Thr lie ser Lys 340 Thr Lys Gly Gin Pro 345 Arg Glu pro Gin val 350 Tyr Thr Leu Pro Pro 355 Ser Arg Glu Glu Met 360 Thr Lys Asn Gin Val 365 ser Leu Thr Cys Leu 370 Val Lys Gly Phe Tyr 375 Pro ser Asp Ile Ala 380 Val Glu Trp Glu Ser 385 Asn Gly Gin pro Glu 390 Asn Asn Tyr Lys Thr 395 Thr Pro pro Met Leu 400 Asp Ser Asp Gly Ser 405 Phe Phe Leu Tyr Ser 410 Lys Leu Thr val Asp 415 Lys Ser Arg Trp Glri 420 Gin Gly Asn val Phe 425 ser Cys Ser val Met 430 His Glu Ala Leu HlS 435 Asn His Tyr Thr Gin 440 Lys Ser Leu ser Leu 445 ser Pro Gly 333 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
<210> 393 <211> 446 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado <400> 393
Glu Vai Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys pro Gly Ala 1 5 10 Thr 15 Ser Vai Lys val ser cys Lys Ala ser Gly Tyr Thr Phe Asp Tyr 20 25 Gin 30 Tyr Met Asn Trp val Arg Gin Ala Pro Gly Arg Leu Glu Trp Met 35 40 Thr' 45 Gly Asp CA Ile Asn Pro Tyr Asn cc Asp Asp Thr Tyr 60 Asn His Lys Phe Lys MJ Gly Arg Val Thr Ile J J Thr Arg Asp Thr ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 Ala Val 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Gly Ala Arg Glu Thr Ala Val Ile Thr Thr Asn Ala Met Asp Tyr Trp 100 105 110 Gin Gly Thr Thr Val Thr val ser Ser Ala ser Thr Lys Gly pro ser 115 120 Thr 125 Thr Ala Vai Phe Pro Leu Ala Pro cys Ser Arg ser Ser Glu Ser 130 135 140 Ala Leu Gly cys Leu val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val HiS Thr Phe Pro Ala 165 170 175 vai Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys cys cys 210 215 220 vai Glu cys Pro Pro cys Pro Ala Pro Pro val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu phe Pro Pro Lys pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu vai Thr cys val val val Asp val ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 vai Gin phe Asn Trp Tyr val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys pro Arg GlU Glu Gin Phe Asn ser Thr Phe Arg val val Ser 290 295 300 vai Leu Thr val Val Hi s Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys val ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr ile 325 Gin 330 335 ser Lys Thr Lys Gly Pro Arg Glu Pro Gin val Tyr Thr acn Leu Pro Pro Ser Arg j*tw Glu Glu Met Thr Lys 3*tJ Asn Gin Val ser Leu jjU Thr Cys Leu 355 360 365 vai Lys Gly Phe Tyr pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gin pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro ΡΓΟ Met Leu Asp Ser 385 Gly Phe 390 395 400 Asp Ser phe Leu Tyr ser tys Leu Thr val Asp Lys Ser Arg 405 Val 410 415 Trp Gin Gin Gly Asn Phe Ser Cys ser val Met His Glu Ala Leu 420 Gin 425 430 His Asn His Tyr Thr Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 <21 0> 394 <21 1> 450 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado 334 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ
<400> : 394 Glu Vai Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 ile 15 Phe ser vai Lys val ?n Ser cys Lys Ala Ser Asp Phe Asn w Asp Tyr Leu His Trp Val Arg Gin Ala £ J Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp ile 35 40 45 phe Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Leu Tyr Asp pro Lys 50 55 60 Thr Ala Gin Asp Lys Val Thr Met Thr Thr Asp Thr ser Thr ser Tyr 65 70 75 Val 80 Met GlU Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp ASp Thr Ala Tyr IV Cys 85 90 95 phe Ala Arg Glu Ala 1ΠΛ Asp Tyr Phe His Asp Gly Thr ser Tyr Trp 110 Tyr Asp Vai Trp J.UU Gly Arg Gly Thr Leu iVJ j val Thr val Ser Ser XpLV Ala ser Thr 115 120 125 Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro cys Ser Arg ser Ser 130 135 140 Phe Glu Glu ser Thr Ala Ala Leu Gly cys Leu Val Lys Asp Tyr Pro 145 150 155 Gly val 175 160 Pro Vai Thr Val Ser 1 fiç Trp Asn ser Gly Ala 1 7 fi Leu Thr ser His Thr phe Pro Ala ±o> Val Leu Gin Ser Ser J,/ V Gly Leu Tyr ser Leu Ser ser 180 185 190 Thr Vai vai Thr val Pro ser ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr cys 195 200 205 val Glu Asn vai ASp His Lys Pro ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr 210 215 220 Val Ala Arg Lys cys Cys Val Glu Cys Pro Pro cys Pro Ala Pro pro 225 230 235 Thr 240 Gly Pro ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Leu Met 245 250 255 ile ser Arg Thr pro Glu Val Thr Cys val val Val Asp val ser His 260 265 270 Glu val Glu Asp pro GlU val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 275 280 Glu Gin 285 Thr Phe His Α5Π Ala Lys Thr Lys pro Arg Glu Phe Asn ser 290 295 300 Gly Arg val val ser Val Leu Thr val Val His Gin Asp Trp Leu Asn 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys cys Lys val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile 325 330 335 Glu Lys Thr xle ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu pro Gin val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val ser 355 360 365 Leu Thr cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser ASP Ile Ala Val Glu 370 375 380 Thr Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Pro pro 385 390 395 400 Met Leu Asp Ser Asp Gly ser phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr val 405 410 415 Asp Lys ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 Gin 430 His Glu Ala Leu His Asn HÍS Tyr Thr Lys ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly 450 <2io> : 395 <211> ' 446 <212> : PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado 335 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <400> 395
Glu 'val Gin Leu val Gin Ser Gly Ala Glu val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 lie 15 Ser val Lys val Ser cys Lys Ala Ser Gly Phe Asp Lys Asp Tyr HÍS 35 Val 20 25 30 Tyr lie Trp val Arg Gin Ala 40 Gly Pro Gly Gin Gly Leu 45 Ala Glu Trp xle Gly Arg Asp pro ASp Asn Glu Thr Glu phe Pro Lys Phe 50 55 60 Pro 65 Met Gly Lys Val Thr Met 70 Leu Thr Thr Asp Thr ser 75 Thr lie Ser Thr Ala Tyr 80 Tyr Cys 95 Glu Leu Ser Arg 85 Tyr Arg Ser Asp Asp 90 Thr Ala val Tyr Ala Arg Glu Asp Asp Gly Thr Tyr Trp Phe Pro Tyr Trp Gly 100 105 110 Gin Gly Thr Leu val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Thr val Ala Leu Gly Cys Leu val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr ser Gly val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser ser val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn val ASp HÍS 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys 210 21S 220 val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro ser Val 225 230 235 xle 240 Phe Leu phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ser Arg Thr 245 250 Glu 255 Pro Glu val Thr Cys val val val Asp val Ser His Asp Pro Glu 260 265 270 val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu val His ASn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val ser 290 295 300 Val Leu Thr val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 Glu 320 Cys Lys val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala pro 11 e Lys Thr Xle 325 330 Gin Val 335 ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 pro ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 val Glu 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp xle Ala Trp Glu Ser Asn 370 375 Thr 380 Gly Gin pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 val 400 Asp Gly ser Phe Phe 405 Asn Leu Tyr Ser Lys Leu 410 ser Thr Asp Lys Ser Arg 415 Ala Leu Trp Gin Gin Gly val Phe Ser Cys val Met His Glu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445
<210> 396 <211> 445 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Sequência de anticorpo humanizado 336 ΕΡ 1 891 101/ΡΤ <4Ο0> 396
Glu Vai Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser vai Lys val 20 Trp Ser cys Lys Ala Ser 25 Pro Gly Phe Thr Phe Thr 30 Glu ASp Tyr Ile Met His Val Arg Gin Ala Gly Gin Gly Leu Trp Met 35 40 45 Gly Tyr 50 Gly lie Asn Pro Tyr Asn 55 Thr Asp Asp Thr Glu Tyr 60 Thr Asn Glu Lys Phe Lys Arg val Thr Ile Ala ASp Lys Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 Glu 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Asp Thr Ala val Tyr Tyr cys 85 90 95 Ala Arg Ser Ile Tyr Tyr Tyr Asp Ala Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gin 100 105 110 Gly Thr Leu val Thr val ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro cys ser Arg Ser Thr Ser GlU ser Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro val Thr val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala val 165 170 175 Leu Gin Ser ser Gly Leu Tyr ser Leu Ser Ser Val val Thr vai Pro 180 185 190 Ser ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr cys Asn val Asp His Lys 195 200 205 Pro ser Asn Thr Lys val Asp Lys Thr val Glu Arg Lys Cys cys Val 210 215 220 Glu cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro val Ala Gly Pro Ser Val Phe 225 2 30 235 240 Leu Phe pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu vai Thr cys val val Val ASp val Ser His Glu Asp pro Glu val 260 265 270 Gin Phe Asn Trp Tyr val Asp Gly val Glu Val Hi S Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg val Val Ser vai 290 295 300 Leu Thr val val HiS Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 3S 305 310 315 Lys vai Ser Asn 3ΪΙ Gly Leu Pro Ala Pro 330 Ile Glu Lys Thr Ile 335 ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro pro 340 345 350 ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin val Ser Leu Thr Cys Leu val 355 360 365 Lys Gly phe Tyr Pro ser Asp Ile Ala val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr ΡΓΟ Pro Met Leu Asp ser Asp 385 390 395 400 Gly ser phe Phe Leu Tyr ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met Hi s Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu ser Pro Gly 435 440 445
Lisboa, 2013-07-31

Claims (33)

  1. ΕΡ 1 891 101/ΡΤ 1/7 REIVINDICAÇÕES 1. Anticorpo de ligação a esclerostina compreendendo as seguintes sequências de CDR: CDR-H1: DYNMH (SEQ ID NO:245); CDR-H2: EINPNSGGAGYNQKFKG (SEQ IDNO:246); CDR-H3: LGYDDIYDDWYFDV (SEQ IDNO:247); CDR-L1: RASQDISNYLN (SEQ ID NO:78); CDR-L2: YTSRLLS (SEQ ID NO:79); e CDR-L3: QQGDTLPYT (SEQ ID NO:80).
  2. 2. Anticorpo de ligação a esclerostina da reivindicação 1 compreendendo uma cadeia pesada compreendendo uma sequência polipeptídica possuindo pelo menos 85% de identidade com a sequência de SEQ ID NO:378.
  3. 3. Anticorpo de ligação a esclerostina da reivindicação 1 ou 2 compreendendo uma cadeia leve compreendendo uma sequência polipeptidica possuindo pelo menos 85% de identidade com a sequência de SEQ ID NO:376.
  4. 4. Anticorpo de ligação a esclerostina de qualquer uma das reivindicações 1 a 3 compreendendo tanto uma cadeia pesada compreendendo uma sequência polipeptidica possuindo pelo menos 85% de identidade com a sequência de SEQ ID NO:378 como uma cadeia leve compreendendo uma sequência polipeptidica possuindo pelo menos 85% de identidade com a sequência de SEQ ID NO:376.
  5. 5. Anticorpo de ligação a esclerostina de qualquer uma das reivindicações 1 a 4, que compreende uma região constante de cadeia leve e/ou de cadeia pesada.
  6. 6. Anticorpo de ligação a esclerostina da reivindicação 5, que é uma IgG.
  7. 7. Anticorpo de ligação a esclerostina da reivindicação 5, que compreende a IgG4 humana ou a região constante da IgG2 humana. ΕΡ 1 891 101/ΡΤ 2/7
  8. 8. Anticorpo de ligação a esclerostina da reivindicação 1 possuindo as cadeias pesadas de SEQ ID NO:137 e as cadeias leves de SEQ ID NO:133.
  9. 9. Anticorpo de ligação a esclerostina da reivindicação 1 possuindo as cadeias pesadas de SEQ ID NO:145 ou 392 e as cadeias leves de SEQ ID NO:141.
  10. 10. Anticorpo de ligação a esclerostina de qualquer uma das reivindicações 1 a 4, em que o referido anticorpo é um fragmento de anticorpo de ligação a esclerostina compreendendo as seis CDR expostas na reivindicação 1.
  11. 11. Anticorpo de ligação a esclerostina de qualquer uma das reivindicações 1 a 9, que é um anticorpo completo.
  12. 12. Anticorpo de ligação a esclerostina da reivindicação 10, em que o referido anticorpo é um fragmento F(ab')2, Fab, Fab' ou Fv.
  13. 13. Anticorpo de ligação a esclerostina de qualquer uma das reivindicações 1 a 7, que é um anticorpo humanizado ou um anticorpo quimérico.
  14. 14. Anticorpo de ligação a esclerostina de qualquer uma das reivindicações anteriores, em que o referido anticorpo tem uma constante de dissociação para a esclerostina humana medida através de ressonância de plasmão de superfície de menos de ou igual a ΙχΙΟ-9 M, menos de ou igual a 1x10 “10 M, menos de ou igual a ΙχΙΟ-11 M, ou menos de ou igual a 1χ10~12 M.
  15. 15. Anticorpo de ligação a esclerostina de qualquer uma das reivindicações anteriores ao qual está ligada uma ou mais moléculas efectoras ou repórter.
  16. 16. Anticorpo de ligação a esclerostina de qualquer uma das reivindicações anteriores, em que o referido anticorpo pode aumentar pelo menos um de formação de osso, densidade mineral óssea, teor mineral ósseo, massa óssea, qualidade óssea e resistência óssea num mamífero. ΕΡ 1 891 101/ΡΤ 3/7
  17. 17. Anticorpo de ligação a esclerostina de qualquer uma das reivindicações anteriores, em que o referido anticorpo pode bloquear o efeito inibidor da esclerostina num ensaio de mineralização baseado em células.
  18. 18. Sequência polinucleotídica isolada codificando o anticorpo de ligação a esclerostina de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17.
  19. 19. Vector de clonagem ou expressão compreendendo uma ou mais sequências polinucleotidicas de acordo com a reivindicação 18.
  20. 20. Vector da reivindicação 19, em que o vector compreende pelo menos uma sequência dada em SEQ ID NO: 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148 e 379.
  21. 21. Célula hospedeira compreendendo um ou mais vectores de clonagem ou expressão de acordo com a reivindicação 19 ou a reivindicação 20.
  22. 22. Processo para a produção do anticorpo de ligação a esclerostina de qualquer uma das reivindicações 1 a 17, compreendendo a cultura da célula hospedeira da reivindicação 21 e o isolamento do anticorpo de ligação a esclerostina.
  23. 23. Composição farmacêutica compreendendo um anticorpo de ligação a esclerostina de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17 em combinação com um ou mais excipientes, diluentes e transportadores farmaceuticamente aceitáveis.
  24. 24. Composição farmacêutica da reivindicação 23, compreendendo adicionalmente outros ingredientes activos.
  25. 25. Anticorpo de ligação a esclerostina de qualquer uma das reivindicações 1 a 17 ou a composição farmacêutica da reivindicação 23 ou reivindicação 24, para utilizar no método de tratamento de um distúrbio ósseo associado a pelo menos um de baixa formação de osso, baixa densidade mineral óssea, baixo teor mineral ósseo, baixa massa óssea, baixa qualidade óssea e baixa resistência óssea num sujeito mamífero, método ΕΡ 1 891 101/ΡΤ 4/7 que compreende ο proporcionar a um sujeito a necessitar de tal tratamento de uma quantidade do referido anticorpo suficiente para aumentar pelo menos um de formação de osso, densidade mineral óssea, teor mineral ósseo, massa óssea, qualidade óssea e resistência óssea.
  26. 26. Anticorpo ou composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 25 para a referida utilização, em que o distúrbio ósseo é osteopenia, osteoporose, perda óssea ou crescimento anormal ou desenvolvimento de osso causado por pelo menos um de acondroplasia, disostose cleidocraniana, encondromatose, displasia fibrosa, Doença de Gaucher, raquitismo hipofosfatémico, sindroma de Marfan, várias exotoses hereditárias, neurofibromatose, osteogénese imperfeita, osteopoiquilose, lesões escleróticas, pseudoartrose, osteomielite piogénica, doença periodontal, perda óssea induzida por fármacos antiepilépticos, hiperparatiroidismo primário e secundário, síndromas de hiperparatiroidismo familiar, perda óssea induzida por falta de peso, osteoporose em homens, perda óssea na pós-menopausa, osteoartrite, osteodistrofia renal, distúrbios infiltrativos de osso, perda óssea oral, osteonecrose da mandíbula, doença juvenil de Paget, melorreostose, doenças ósseas metabólicas, mastocitose, anemia/doença falciforme, perda óssea relacionada com transplante de órgãos, perda óssea relacionada com transplante renal, lúpus eritematoso sistémico, espondilite anquilosante, epilepsia, artrites juvenis, talassemia, mucopolissacaridoses, Doença de Fabry, Síndroma de Turner, Síndroma de Down, Síndroma de Klinefelter, lepra, Doença de Perthes, escoliose idiopática do adolescente, doença inflamatória de múltiplos sistemas com início na infância, Síndroma de Winchester, Doença de Menkes, Doença de Wilson, doença óssea isquémica (tal como doença de Legg-Calve-Perthes, osteoporose migratória regional), estados anémicos, condições causadas por esteróides, perda óssea induzida por glucocorticóides, perda óssea induzida pela heparina, distúrbios da medula óssea, escorbuto, má nutrição, deficiência de cálcio, alcoolismo, doença crónica do fígado, estado de pós-menopausa, condições inflamatórias crónicas, artrite reumatóide, doença inflamatória do intestino, colite ulcerativa, colite inflamatória, doença de Crohn, oligomenorreia, amenorreia, gravidez, diabetes mellitus, ΕΡ 1 891 101/ΡΤ 5/7 hipertiroidismo, distúrbios da tiróide, distúrbios da paratiróide, doença de Cushing, acromegalia, hipogonadismo, imobilização ou inactividade, síndroma de distrofia simpática de reflexo, osteoporose regional, osteomalacia, perda óssea associada a substituição de articulação, perda óssea associada a HIV, perda óssea associada a perda da hormona do crescimento, perda óssea associada a fibrose cística, perda óssea associada a quimioterapia, perda óssea induzida por tumor, perda óssea relacionada com cancro, perda óssea ablativa de hormona, mieloma múltiplo, perda óssea induzida por fármacos, anorexia nervosa, perda óssea facial associada a doença, perda óssea craniana associada a doença, perda óssea da mandíbula associada a doença, perda óssea do crânio associada a doença, perda óssea associada ao envelhecimento, perda óssea facial associada ao envelhecimento, perda óssea craniana associada ao envelhecimento, perda óssea da mandíbula associada ao envelhecimento, perda óssea do crânio associada ao envelhecimento e perda óssea associada a viagens espaciais.
  27. 27. Anticorpo ou composição farmacêutica da reivindicação 25 para a referida utilização, em que o distúrbio ósseo é osteoporose.
  28. 28. Anticorpo de qualquer uma das reivindicações 1 a 17 ou composição farmacêutica da reivindicação 23 ou 24, para utilização num método para melhorar o resultado num mamífero submetido a um ou mais de um procedimento ortopédico, procedimento dentário, cirurgia de implante, substituição de articulação, enxerto ósseo, cirurgia plástica óssea e reparação óssea, tal como cicatrização de fractura, cicatrização de não união, cicatrização de união retardada e reconstrução facial, o referido método compreendendo a administração do referido anticorpo ou composição ao referido mamífero antes, durante e/ou após o referido procedimento, substituição, enxerto, cirurgia ou reparação.
  29. 29. Estojo de diagnóstico compreendendo o anticorpo de qualquer uma das reivindicações 1 a 17.
  30. 30. Utilização do anticorpo de qualquer uma das reivindicações 1 a 17 para o fabrico de um medicamento para ΕΡ 1 891 101/ΡΤ 6/7 tratamento de um distúrbio ósseo associado a pelo menos um de baixa formação de osso, baixa densidade mineral óssea, baixo teor mineral ósseo, baixa massa óssea, baixa qualidade óssea e baixa resistência óssea num sujeito mamifero.
  31. 31. Utilização da reivindicação 30, em que o distúrbio ósseo é osteopenia, osteoporose, perda óssea ou crescimento anormal ou desenvolvimento de osso causado por pelo menos um de acondroplasia, disostose cleidocraniana, encondromatose, displasia fibrosa, Doença de Gaucher, raquitismo hipofosfatémico, síndroma de Marfan, várias exotoses hereditárias, neurofibromatose, osteogénese imperfeita, osteopetrose, osteopoiquilose, lesões escleróticas, pseudoartrose, osteomielite piogénica, doença periodontal, perda óssea induzida por fármacos antiepilépticos, hiperparatiroidismo primário e secundário, síndromas de hiperparatiroidismo familiar, perda óssea induzida por falta de peso, osteoporose em homens, perda óssea na pós-menopausa, osteoartrite, osteodistrofia renal, distúrbios infiltrativos de osso, perda óssea oral, osteonecrose da mandíbula, doença juvenil de Paget, melorreostose, doenças ósseas metabólicas, mastocitose, anemia/doença falciforme, perda óssea relacionada com transplante de órgãos, perda óssea relacionada com transplante renal, lúpus eritematoso sistémico, espondilite anquilosante, epilepsia, artrites juvenis, talassemia, mucopolissacaridoses, Doença de Fabry, Síndroma de Turner, Síndroma de Down, Síndroma de Klinefelter, lepra, Doença de Perthes, escoliose idiopática do adolescente, doença inflamatória de múltiplos sistemas com início na infância, Síndroma de Winchester, Doença de Menkes, Doença de Wilson, doença óssea isquémica (tal como doença de Legg-Calve-Perthes, osteoporose migratória regional), estados anémicos, condições causadas por esteróides, perda óssea induzida por glucocorticóides, perda óssea induzida pela heparina, distúrbios da medula óssea, escorbuto, má nutrição, deficiência de cálcio, alcoolismo, doença crónica do fígado, estado de pós-menopausa, condições inflamatórias crónicas, artrite reumatóide, doença inflamatória do intestino, colite ulcerativa, colite inflamatória, doença de Crohn, oligomenorreia, amenorreia, gravidez, diabetes mellitus, hipertiroidismo, distúrbios da tiróide, distúrbios da paratiróide, doença de Cushing, acromegalia, hipogonadismo, ΕΡ 1 891 101/ΡΤ 7/7 imobilização ou inactividade, síndroma de distrofia simpática de reflexo, osteoporose regional, osteomalacia, perda óssea associada a substituição de articulação, perda óssea associada a HIV, perda óssea associada a perda da hormona do crescimento, perda óssea associada a fibrose cística, perda óssea associada a quimioterapia, perda óssea induzida por tumor, perda óssea relacionada com cancro, perda óssea ablativa de hormona, mieloma múltiplo, perda óssea induzida por fármacos, anorexia nervosa, perda óssea facial associada a doença, perda óssea craniana associada a doença, perda óssea da mandíbula associada a doença, perda óssea do crânio associada a doença, perda óssea associada ao envelhecimento, perda óssea facial associada ao envelhecimento, perda óssea craniana associada ao envelhecimento, perda óssea da mandíbula associada ao envelhecimento, perda óssea do crânio associada ao envelhecimento e perda óssea associada a viagens espaciais.
  32. 32. Utilização da reivindicação 30, em que o distúrbio ósseo é osteoporose.
  33. 33. Utilização do anticorpo de qualquer uma das reivindicações 1 a 17 para o fabrico de um medicamento para melhoria do resultado num mamífero submetido a um ou mais de um procedimento ortopédico, procedimento dentário, cirurgia de implante, substituição de articulação, enxerto ósseo, cirurgia plástica óssea e reparação óssea, tal como cicatrização de fractura, cicatrização de não união, cicatrização de união retardada e reconstrução facial, em que o medicamento é para administração ao referido mamífero, antes, durante e/ou após o referido procedimento, substituição, enxerto, cirurgia ou reparação. Lisboa, 2013-07-31
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