JP7483731B2 - 試料の調製及びその試料のリアルタイムアッセイの実施のためのシステム及び方法 - Google Patents

Description

関連出願の相互参照
２０１９年２月１２日に出願された米国仮特許出願第６２／８０５，９０２号及び２０１９年１２月２０日に出願された米国仮特許出願第６２／９５１，３４６号に対する優先権を主張するものであり、これらの出願の全内容が参照により本明細書に組み込まれる。

本開示は、一般的に、アッセイに関し、より具体的には、試料の調製及びその試料のリアルタイムアッセイの実施のためのシステム及び方法に関する。

配列表
本出願は、電子フォーマットの配列表とともに出願されている。「５３６６１＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」という名称のファイルとして提出された配列表は、２０２０年２月１１日に作成され、サイズは２６３，９５９バイトである。電子フォーマットの配列表における情報は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

アッセイは、一般に、薬物、生化学的物質、又は細胞などの分析物の１つ以上の属性を定量化するために実施される。このようなアッセイの一例は、試料の重要品質特性（ＣＱＡ）（目標製品品質プロファイル（ＱＴＰＰ）により特定される）を検出し定量化することができる多属性法（ＭＡＭ）アッセイである（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ ｍｕｌｔｉ－ａｔｔｒｉｂｕｔｅ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ，ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｔｅｓｔｉｎｇ ａｎｄ ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ．Ｒｏｇｅｒｓ ＲＳ，Ｎｉｇｈｔｌｉｎｇｅｒ ＮＳ，Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ Ｂ，Ｃａｍｐｂｅｌｌ Ｐ，Ｂａｉｌｅｙ Ｒ，Ｂａｌｌａｎｄ Ａ．ＭＡｂｓ．２０１５；７（５）：８８１－９０）。ＭＡＭアッセイは、例えば、高分子遊離試験（ＬＭＲＴ）実験室内で実施される手動操作プロセスである。ＭＡＭは、液体クロマトグラフィ（ＬＣ）－質量分析法（ＭＳ）をベースとしたペプチドマッピング法であり、以下の３工程を有する：（１）試料調製（例えば、ポリペプチド変性、還元、アルキル化、及び消化を含み得る）、（２）ＬＣによる消化ポリペプチドの分離及びそれらのＭＳによる検出、並びに（３）目的ＣＱＡに関するデータの分析及び参照基準と比較した場合の新たな信号（すなわち、ピーク）の検出。

ＣＱＡは、特定の値又は範囲値内に存在する化学的、物理的又は生物学的特性である。例えば、ポリペプチド治療的高分子において、物理的属性及びアミノ酸（ポリペプチドの構成単位（ｂｕｉｌｄｉｎｇ ｂｌｏｃｋ））の改変は重要なＣＱＡであり、製造中及び製造後、並びに薬物開発中にモニターされる。ポリペプチド全体又は一部のピークサイズ及びピーク形状の変化を追跡する従来の分析アッセイとは異なり、ＭＡＭはアミノ酸レベルにおける特定のＣＱＡを検出する。

治療用ポリペプチドの糖鎖プロファイルの分析は、多くの場合、ＣＱＡである。これはバイオシミラー製品の場合に特に当てはまり、バイオシミラー製品のグリコシル化プロファイルは、先行製品のグリコシル化プロファイルと同等でなければならない。糖鎖アッセイを実施するための既知のプロセスでは、製品の試料を、分析のために、手動で収集し、試験室に届け、手動で濃縮し、精製し、調製することが必要である。これらの既知の手動操作プロセスの所要時間は、通常、約５日である。この時間経過によりコストがかさむとともに、薬物（先行製品及びバイオシミラー製品）の開発及び最終的な薬物発売が遅延する。薬物開発中、例えば、最適なグリコシル化のための培養条件を最適化するときに、例えば５日の遅れが蓄積し、重要且つ新規なポリペプチド医薬品を患者に届けることを妨げる。さらに、このような遅延により、製造後にプロファイルが決定されることとなり、製造パラメータをリアルタイムで調整することとは対照的に、仕様を満たさない製品を再製造することになる。したがって、このような分析のための試料調製を含め、ＣＱＡ分析を促進するための効率的で且つより迅速な方法が必要とされている。

Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ ｍｕｌｔｉ－ａｔｔｒｉｂｕｔｅ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ，ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｔｅｓｔｉｎｇ ａｎｄ ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ．Ｒｏｇｅｒｓ ＲＳ，Ｎｉｇｈｔｌｉｎｇｅｒ ＮＳ，Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ Ｂ，Ｃａｍｐｂｅｌｌ Ｐ，Ｂａｉｌｅｙ Ｒ，Ｂａｌｌａｎｄ Ａ．ＭＡｂｓ．２０１５；７（５）：８８１－９０

本開示の一態様は、（ａ）分子を含む試料を第１のバイアルから試料ループに移動させる工程と、（ｂ）一定量の試料を試料ループから第１のマルチポートバルブに移動させる工程と、（ｃ）一定量の試料を、第１のマルチポートバルブから、第１のマルチポートバルブに流体連結され、且つ第１のマルチポートバルブの下流に配置された第２のマルチポートバルブに移動させる工程と、（ｄ）第２のマルチポートバルブが第１の位置にあるときに、一定量の試料を第２のマルチポートバルブから捕捉カラムに移動させる工程と、（ｅ）捕捉カラム内の試料中の分子を捕捉し、それによって試料中の分子を試料のマトリックスから分離する工程と、（ｆ）溶出バッファ溶液をバッファ供給源から捕捉カラムに移動させ、それによって捕捉カラムによって捕捉された分子を溶出し、溶出バッファ溶液及び溶出分子を含む溶出／分子混合物を捕捉カラムの下流に配置された第２のバイアルに移動させる工程であって、第２のバイアルは、フロースルーバイアルを含む、移動させる工程と、（ｇ）分子の分析のために、第２のバイアル中の分子を分析デバイスに移動させる工程と、を含む方法を提供する。

本開示の別の態様は、（ａ）ポリペプチドを含む試料を第１のバイアルから試料ループに移動させる工程と、（ｂ）一定量の試料を試料ループから第１のマルチポートバルブに移動させる工程と、（ｃ）一定量の試料を、第１のマルチポートバルブから、第１のマルチポートバルブに流体連結され、且つ第１のマルチポートバルブの下流に配置された第２のマルチポートバルブに移動させる工程と、（ｄ）第２のマルチポートバルブが第１の位置にあるときに、一定量の試料を第２のマルチポートバルブからポリペプチド結合カラムに移動させる工程と、（ｅ）ポリペプチド結合カラム内の試料中のポリペプチドを捕捉し、それによって試料中のポリペプチドを試料のマトリックスから分離する工程と、（ｆ）溶出バッファ溶液をバッファ供給源からポリペプチド結合カラムに移動させ、それによってポリペプチド結合カラムによって捕捉されたポリペプチドを溶出し、溶出バッファ溶液及び溶出ポリペプチドを含む溶出／分子混合物をポリペプチド結合カラムの下流に配置された第２のバイアルに移動させる工程であって、第２のバイアルは、フロースルーバイアルを含む、移動させる工程と、（ｇ）ポリペプチドの分析のために、第２のバイアル中のポリペプチドを分析デバイスに移動させる工程と、を含む方法を提供する。試料が最初に移動される「バイアル」又は「第１のバイアル」は、本明細書で使用される場合、フロースルーバイアル又は非フロースルーバイアルなどの任意の好適なバイアルを含むか又はそれからなり得ることに留意されたい。さらに、非フロースルーバイアル（及びフロースルーバイアル）は、本明細書に記載の方法及びシステムにおいては、それらがシステムの次の処理工程に運ばれる前に、中間／部分的処理された試料のための一時的又は移行容器として使用され得る。

本開示の別の態様は、（ａ）ポリペプチドを含む試料を第１のバイアルから試料ループに移動させる工程と、（ｂ）一定量の試料を試料ループから第１のマルチポートバルブに移動させる工程と、（ｃ）一定量の試料を、第１のマルチポートバルブから、第１のマルチポートバルブに流体連結され、且つ第１のマルチポートバルブの下流に配置された第２のマルチポートバルブに移動させる工程と、（ｄ）一定量の試料を第２のマルチポートバルブからポリペプチド結合カラムに移動させる工程と、（ｅ）一定量の試料中のポリペプチドをポリペプチド結合カラムに結合させ、それによって試料中のポリペプチドを試料のマトリックスから分離する工程と、（ｆ）グリコシダーゼ（グルカナーゼなど）をポリペプチド結合カラムに第２のマルチポートバルブを介して移動させ、結合したポリペプチドからグリカンを放出させる工程と、（ｇ）放出されたグリカンを、ポリペプチド結合カラムから、ポリペプチド結合カラムの下流に配置された第２のバイアルに移動させる工程であって、第２のバイアルは、フロースルーバイアルを含む、工程と、（ｈ）放出されたグリカンとグリカン標識試薬とを第２のバイアル中で混合する工程と、（ｉ）放出されたグリカンとグリカン標識試薬との混合物を第１のマルチポートバルブを介して反応コイルに移動させる工程と、（ｊ）放出されたグリカンとグリカン標識試薬との混合物を反応コイル中でインキュベートし、それによってグリカンを標識する工程と、（ｋ）混合物を反応コイルから第３のバイアルに移動させる工程であって、第３のバイアルもまた、フロースルーバイアルを含む、移動させる工程と、（ｌ）標識されたグリカンの分析のために、第３のバイアル中の標識されたグリカンを分析デバイスに移動させる工程と、
を含む方法を提供する。

本開示の別の態様は、分子を含む試料を収容するようになされた第１のバイアルと、１種以上の変化剤と、第１のバイアルから試料を受容するようになされた試料ループと、試料ループに流体連結され、第１のマルチポートバルブの第１のポートを介して一定量の試料を得るように配置された第１のマルチポートバルブと、第１のマルチポートバルブに流体連結され、第１のマルチポートバルブの下流に配置された第２のマルチポートバルブとを含む閉鎖システムを提供する。閉鎖システムは、第２のマルチポートバルブが第１の位置にあるときに、第２のマルチポートバルブに流体連結されるように配置された捕捉カラムを含む。捕捉カラムは、一定量の試料から分子を捕捉するように構成されている。閉鎖システムはまた、第２のマルチポートバルブが第１の位置とは異なる第２の位置にあるときに、第２のマルチポートバルブに流体連結されるように配置された脱塩カラムを含む。脱塩カラムは、分子の塩濃度を低下させるように構成されている。閉鎖システムはさらに、第１のマルチポートバルブに選択的に流体連結されるように配置された第１の反応コイルを含む。第１の反応コイルは、１種以上の変化剤を受容するように配置され、分子及び１種以上の変化剤をインキュベートして分子を変化させるように構成されている。閉鎖システムはさらに、第２のマルチポートバルブの下流に配置され、第２のマルチポートバルブに流体連結された第２のバイアルを含む。第２のバイアルは、捕捉カラム、脱塩カラム、又は第１の反応コイルから分子を含む混合物を受容するように配置されている。第２のバイアルは、フロースルーバイアルを含む。いくつかの実施例では、フロースルーバイアルは、分子を分析できるように、混合物の残りから分子を分離するように構成されている。

本開示の別の態様は、ポリペプチドを含む試料を収容するようになされた第１のバイアルと、１種以上の変化剤と、第１のバイアルから試料を受容するようになされた試料ループと、試料ループに流体連結され、第１のマルチポートバルブの第１のポートを介して一定量の試料を得るように配置された第１のマルチポートバルブと、第１のマルチポートバルブに流体連結され、第１のマルチポートバルブの下流に配置された第２のマルチポートバルブと、第２のマルチポートバルブが第１の位置にあるときに、第２のマルチポートバルブに流体連結されるように配置された捕捉カラムとを含む、閉鎖システムを提供する。捕捉カラムは、一定量の試料からポリペプチドを捕捉するように構成されている。閉鎖システムはまた、第２のマルチポートバルブが第１の位置とは異なる第２の位置にあるときに、第２のマルチポートバルブに流体連結されるように配置された脱塩カラムを含む。脱塩カラムは、ポリペプチドの塩濃度を低下させるように構成されている。閉鎖システムはさらに、第１のマルチポートバルブに選択的に流体連結されるように配置された第１の反応コイルを含む。第１の反応コイルは、１種以上の変化剤を受容するように配置され、ポリペプチド及び１種以上の変化剤をインキュベートしてポリペプチドを変化させるように構成されている。閉鎖システムはさらに、第２のマルチポートバルブの下流に配置され、第２のマルチポートバルブに流体連結された第２のバイアルを含む。第２のバイアルは、捕捉カラム、脱塩カラム、又は第１の反応コイルからポリペプチドを含む混合物を受容するように配置されている。第２のバイアルは、ポリペプチドを分析できるように、混合物の残りからポリペプチドを分離するように構成されたフロースルーバイアルを含む。

本開示の別の態様は、ポリペプチドを含む試料を収容するようになされた第１のバイアルと、第１のバイアルから試料を受容するようになされた試料ループと、試料ループに流体連結され、第１のマルチポートバルブの第１のポートを介して一定量の試料を得るように配置された第１のマルチポートバルブと、第１のマルチポートバルブに流体連結され、第１のマルチポートバルブの下流に配置された第２のマルチポートバルブと、第２のマルチポートバルブが第１の位置にあるときに、第２のマルチポートバルブに流体連結されるように配置されたポリペプチド結合カラムとを含む、閉鎖システムを提供する。ポリペプチド結合カラムは、試料からポリペプチドを結合するように構成されている。閉鎖システムはまた、ポリペプチド結合カラムの下流に配置された第２のバイアルと、第１のマルチポートバルブに流体連結され、第２のマルチポートバルブが第１の位置にあるとき、第２のマルチポートバルブ及びポリペプチド結合カラムを介して第２のバイアルに溶出バッファ溶液を、この溶出バッファ溶液がポリペプチド結合カラムからポリペプチドの全部を実質的に溶出するようになされるように、供給するように配置されたバッファ供給源とを含む。いくつかの例では、第２のバイアルは、溶出／ポリペプチド混合物から溶出バッファ溶液を第２のバイアルの外へ濾過し、それによって第２のバイアル中に溶出ポリペプチドのみを残すように構成されたフロースルーバイアルを含む。

本開示の別の態様は、ポリペプチドを含む試料を収容するようになされた第１のバイアルと、第１のバイアルから試料を受容するようになされた試料ループと、試料ループに流体連結され、第１のマルチポートバルブの第１のポートを介して一定量の試料を得るように配置された第１のマルチポートバルブと、第１のマルチポートバルブに流体連結され、第１のマルチポートバルブの下流に配置された第２のマルチポートバルブと、第２のマルチポートバルブが第１の位置にあるときに、第２のマルチポートバルブに流体連結されるように配置されたポリペプチド結合カラムとを含む閉鎖システムを提供する。ポリペプチド結合カラムは、試料からポリペプチドを結合するように構成されている。閉鎖システムはまた、ポリペプチド結合カラムの下流に配置された第２のバイアルと（第２のバイアルはフロースルーバイアルを含み、且つグリカン標識試薬を含む）、グリコシダーゼにポリペプチド結合カラムに結合したポリペプチドが入り込むように、第２のマルチポートバルブを介してポリペプチド結合カラムにグリコシダーゼ（グルカナーゼなど）を供給するように配置されたグリコシダーゼ供給源とを含む。閉鎖システムはまた、第２のマルチポートバルブを介してポリペプチド結合カラムにキャリア溶液を供給するように配置されたキャリア溶液供給源を含む。キャリア溶液はポリペプチド結合カラムからグリカンを放出させ、第２のバイアルに運ぶようになされている。閉鎖システムはさらに、第１のマルチポートバルブを介して第２のバイアルから放出されたグリカンとグリカン標識試薬との混合物を受容するように配置された反応コイルを含む。反応コイルは、放出されたグリカンとグリカン標識試薬との混合物をインキュベートして、グリカンを標識するように構成されている。閉鎖システムはさらに、標識されたグリカンとグリカン標識試薬を受容するために反応コイルの下流に配置された第３のバイアルを含む。いくつかの例では、第３のバイアルはまた、第３のバイアルからグリカン標識試薬を実質的に濾過し、それによって第３のバイアル中に標識されたグリカンのみを実質的に残すように構成されたフロースルーバイアルを含む。

本開示の別の態様は、（ａ）分子を含む試料を試料バイアルから試料ループに移動させる工程と、（ｂ）一定量の試料を試料ループから注入バルブに移動させる工程と、（ｃ）一定量の試料を、注入バルブから、注入バルブに流体連結され、且つ注入バルブの下流に配置された第１のマルチポートバルブに移動させる工程と、（ｄ）第１のマルチポートバルブが第２の位置にあるときに、一定量の試料を第１のマルチポートバルブから第２のマルチポートバルブ上の捕捉カラムに移動させる工程と、（ｅ）捕捉カラム内の試料中の分子を捕捉し、それによって試料中の分子を試料のマトリックスから分離する工程と、（ｆ）溶出バッファ溶液をバッファ供給源から捕捉カラムに移動させ、それによって捕捉カラムによって捕捉された分子を溶出し、溶出バッファ溶液及び溶出分子を含む溶出／分子混合物を第２のマルチポートバルブ上の捕捉カラムの下流に配置された第３のマルチポートバルブ上の受容バイアルに移動させる工程であって、受容バイアルは、フロースルーバイアルを含む、移動させる工程と、（ｇ）分子の分析のために、フロースルーバイアル中の分子を分析デバイス（カラムコンパートメント）に移動させる工程と、を含む方法を提供する。

本開示の別の態様は、（ａ）ポリペプチドを含む試料を試料バイアルから試料ループに移動させる工程と、（ｂ）一定量の試料を試料ループから注入バルブに移動させる工程と、（ｃ）一定量の試料を、注入バルブから、注入バルブに流体連結され、且つ注入バルブの下流に配置された第１のマルチポートバルブに移動させる工程と、（ｄ）第１のマルチポートバルブが第２の位置にあるときに、一定量の試料を第１のマルチポートバルブから第２のマルチポートバルブ上のポリペプチド結合カラムに移動させる工程と、（ｅ）ポリペプチド結合カラム内の試料中のポリペプチドを捕捉し、それによって試料中のポリペプチドを試料のマトリックスから分離する工程と、（ｆ）溶出バッファ溶液をバッファ供給源からポリペプチド結合カラムに移動させ、それによってポリペプチド結合カラムによって捕捉されたポリペプチドを溶出し、溶出バッファ溶液及び溶出ポリペプチドを含む溶出／分子混合物をポリペプチド結合カラムの下流に配置された受容バイアルに移動させる工程であって、受容バイアルは、フロースルーバイアルを含む、移動させる工程と、（ｇ）ポリペプチドの分析のために、フロースルーバイアル中のポリペプチドを分析デバイス（カラムコンパートメント）に移動させる工程と、を含む方法を提供する。

本開示の別の態様は、（ａ）ポリペプチドを含む試料を試料バイアルから試料ループに移動させる工程と、（ｂ）一定量の試料を試料ループから注入バルブに移動させる工程と、（ｃ）一定量の試料を、注入バルブから、注入バルブに流体連結され、且つ注入バルブの下流に配置された第１のマルチポートバルブに移動させる工程と、（ｄ）一定量の試料を第１のマルチポートバルブから第２のマルチポートバルブ上のポリペプチド結合カラムに移動させる工程と、（ｅ）一定量の試料中のポリペプチドをポリペプチド結合カラムに結合させ、それによって試料のマトリックスから試料中のポリペプチドを分離する工程と、（ｆ）グリコシダーゼ（グルカナーゼなど）を第２のマルチポートバルブを介してポリペプチド結合カラムに移動させて、結合したポリペプチドからグリカンを放出させる工程と、（ｇ）放出されたグリカンを、ポリペプチド結合カラムから、ポリペプチド結合カラムの下流に配置された受容バイアルに移動させる工程であって、受容バイアルは、フロースルーバイアルである、移動させる工程と、（ｈ）放出されたグリカンとグリカン標識試薬とをフロースルーバイアル中で混合する工程と、（ｉ）放出されたグリカンとグリカン標識試薬との混合物を第１のマルチポートバルブを介して第２のマルチポートバルブ上の反応コイルに移動させる工程と、（ｊ）放出されたグリカンとグリカン標識試薬との混合物を反応コイル中でインキュベートし、それによってグリカンを標識する工程と、（ｋ）混合物を反応コイルからフロースルーバイアルに移動させる工程と、（ｌ）標識されたグリカンの分析のために、フロースルーバイアル中の標識されたグリカンを分析デバイスに移動させる工程と、を含む方法を提供する。

本開示の別の態様は、分子を含む試料を収容するようになされた試料バイアルと、１種以上の変化剤と、試料バイアルから試料を受容するようになされた試料ループと、試料ループに流体連結され、その第２のポートを介して一定量の試料を得るように配置された注入バルブと、注入バルブに流体連結され、注入バルブの下流に配置された第１のマルチポートバルブとを含む閉鎖システムを提供する。閉鎖システムは、第２のマルチポートバルブが第２の位置にあるときに、第２のマルチポートバルブに流体連結されるように配置された捕捉カラムを含む。捕捉カラムは、一定量の試料から分子を捕捉するように構成されている。閉鎖システムはまた、第２のマルチポートバルブが第２の位置とは異なる第３の位置にあるときに、第２のマルチポートバルブに流体連結されるように配置された脱塩カラムを含む。脱塩カラムは、分子の塩濃度を低下させるように構成されている。閉鎖システムはさらに、第２のマルチポートバルブに選択的に流体連結されるように配置された反応コイルを含む。反応コイルは、１種以上の変化剤を受容するように配置され、分子及び１種以上の変化剤をインキュベートして分子を変化させるように構成されている。受容バイアルは、捕捉カラム、脱塩カラム、又は反応コイルから分子を含む混合物を受容するように配置されている。受容バイアルは、分子を分析できるように、残りの混合物から分子を分離するように構成されたフロースルーバイアルを含む。

本開示の別の態様は、ポリペプチドを含む試料を収容するようになされた試料バイアル、１種以上の変化剤、
試料バイアルから試料を受容するようになされた試料ループと、試料ループに流体連結され、その第２のポートを介して一定量の試料を得るように配置された注入バルブと、注入バルブに流体連結され、注入バルブの下流に配置された第１のマルチポートバルブと、第２のマルチポートバルブが第２の位置にあるときに、第２のマルチポートバルブに流体連結されるように配置された捕捉カラムとを含む閉鎖システムを提供する。捕捉カラムは、一定量の試料からポリペプチドを捕捉するように構成されている。閉鎖システムはまた、第２のマルチポートバルブが第２の位置とは異なる第３の位置にあるときに、第２のマルチポートバルブに流体連結されるように配置された脱塩カラムを含む。脱塩カラムは、ポリペプチドの塩濃度を低下させるように構成されている。閉鎖システムはさらに、第２のマルチポートバルブに選択的に流体連結されるように配置された反応コイルを含む。反応コイルは、１種以上の変化剤を受容するように配置され、ポリペプチド及び１種以上の変化剤をインキュベートしてポリペプチドを変化させるように構成されている。閉鎖システムはさらに、第３のマルチポートバルブの下流に配置され、第３のマルチポートバルブに流体連結された受容バイアルを含む。受容バイアルは、捕捉カラム、脱塩カラム、又は反応コイルからポリペプチドを含む混合物を受容するように配置されている。受容バイアルは、ポリペプチドを分析できるように、混合物の残りからポリペプチドを分離するように構成されたフロースルーバイアルを含む。

本開示の別の態様は、ポリペプチドを含む試料を収容するようになされた試料バイアルと、試料バイアルから試料を受容するようになされた試料ループと、試料ループに流体連結され、その第２のポートを介して一定量の試料を得るように配置された注入バルブと、注入バルブに流体連結され、注入バルブの下流に配置された第１のマルチポートバルブと、第２のマルチポートバルブが第２の位置にあるときに、第２のマルチポートバルブに流体連結されるように配置されたポリペプチド結合カラムとを含む閉鎖システムを提供する。ポリペプチド結合カラムは、試料からポリペプチドを結合するように構成されている。閉鎖システムはまた、第２のマルチポートバルブ上のポリペプチド結合カラムの下流に配置された第３のマルチポートバルブ上の受容バイアルと、第１のマルチポートバルブに流体連結され、第２のマルチポートバルブが第２の位置にあるとき、溶出バッファ溶液がポリペプチド結合カラムからポリペプチドの全部を第３のマルチポートバルブ上の受容バイアルに実質的に溶出するようになされるように、第２のマルチポートバルブ及びポリペプチド結合カラムに溶出バッファ溶液を供給するように配置されたバッファ供給源とを含む。受容バイアルは、ポリペプチド結合カラムからの溶出／ポリペプチド混合物から溶出バッファ溶液を迂回させ、それによってフロースルーバイアル中に溶出ポリペプチドのみを残すように、第３のマルチポートバルブと組み合わせて構成されたフロースルーバイアルを含む。

本開示の別の態様は、ポリペプチドを含む試料を収容するようになされた試料バイアルと、試料バイアルから試料を受容するようになされた試料ループと、試料ループに流体連結され、その第２のポートを介して一定量の試料を得るように配置された注入バルブと、注入バルブに流体連結され、注入バルブの下流に配置された第１のマルチポートバルブと、第２のマルチポートバルブが第２の位置にあるときに、第２のマルチポートバルブに流体連結されるように配置されたポリペプチド結合カラムとを含む閉鎖システムを提供する。ポリペプチド結合カラムは、試料からポリペプチドを結合するように構成されている。閉鎖システムはまた、ポリペプチド結合カラムの下流に配置された第３のマルチポートバルブ上の受容バイアルと（受容バイアルはフロースルーバイアルであり、且つグリカン標識試薬を含む）、グリコシダーゼにポリペプチド結合カラムに結合したポリペプチドが入り込むように、第２のマルチポートバルブを介してポリペプチド結合カラムにグリコシダーゼ（グルカナーゼなど）を供給するように配置されたグリコシダーゼ供給源とを含む。閉鎖システムはまた、第２のマルチポートバルブを介してポリペプチド結合カラムにキャリア溶液を供給するように配置されたキャリア溶液供給源を含む。キャリア溶液はポリペプチド結合カラムからグリカンを放出させ、受容バイアルに運ぶようになされている。閉鎖システムはさらに、第１のマルチポートバルブを介してフロースルーバイアルから放出されたグリカンとグリカン標識試薬との混合物を受容するように配置された反応コイルを含む。反応コイルは、放出されたグリカンとグリカン標識試薬との混合物をインキュベートして、グリカンを標識するように構成されている。閉鎖システムは、第２のマルチポートバルブ上の反応コイルの下流に配置された第３のマルチポートバルブ上の同じフロースルーバイアルを使用して、グリカン標識試薬を迂回させ、フロースルーバイアル中の標識されたグリカンを受容する。

本開示の教示に従い組み立てられたオンラインリアルタイムアッセイを実施するためのシステムの一例の概略図である。 図１に示されるシステムのコントローラの概略図である。 図１のシステムを使用して試料のリアルタイムアッセイを実施する方法の一例を示す概略図である。 図１のシステムを使用して試料のリアルタイムアッセイを実施する方法の別の例を示す概略図である。 図１のシステムを使用して試料のリアルタイムアッセイを実施する方法の別の例を示す概略図である。 図１のシステムを使用して試料のリアルタイムアッセイを実施する方法の別の例を示す概略図である。 図１のシステムを使用して試料のリアルタイムアッセイを実施する方法の別の例を示す概略図である。 図１のシステムを使用して試料のリアルタイムアッセイを実施する方法の別の例を示す概略図である。 図１のシステムを使用して試料のリアルタイムアッセイを実施する方法の別の例を示す概略図である。 本開示の教示に従い組み立てられたオンラインリアルタイムアッセイを実施するためのシステムの他の例の概略図である。 図１０のシステムを使用して試料のリアルタイムアッセイを実施する方法の一例を示す概略図である。 図１０のシステムを使用して試料のリアルタイムアッセイを実施する方法の別の例を示す概略図である。 図１０のシステムを使用して試料のリアルタイムアッセイを実施する方法の別の例を示す概略図である。 図１０のシステムを使用して試料のリアルタイムアッセイを実施する方法の別の例を示す概略図である。 図１０のシステムを使用して試料のリアルタイムアッセイを実施する方法の別の例を示す概略図である。 本開示の教示に従い構築され、図１のシステム又は図１０のシステムに使用することができるフロースルーバイアルの一例の斜視図である。 図１６のフロースルーバイアルの部分断面図である。 本開示の教示に従い構築され、図１６の複数のフロースルーバイアルを保持するために図１のシステム又は図１０のシステムに使用することができる、バイアルホルダの一例の斜視図である。 図１のシステム又は図１０のシステムの自動サンプリングシステムに連結され、図１６のフロースルーバイアルの１つを受容するバイアルホルダを示す。 ３つの異なるアッセイ及び９種の異なる分子を用いて、図１のシステムの有効性を実証する研究結果を示す表である。 図１のシステムにより９種の異なる分子のうちの１種を用いて行われた３つの異なるアッセイのうちの１つの結果を示すグラフである。 図２１と同様であるが、従来技術を用いた結果を示す。

図１は、本開示の教示に従い組み立てられたシステム１００の一例の概略図を示す。実験室（例えば、試験実験室）に若しくはその中に位置し得る、又は製造施設に位置し得るシステム１００は、以下にさらに詳細に記載するように、分析対象の分子を含有する製品の試料を自動的に又は実質的に自動的に調製し、その試料のアッセイを自動的に実施するための閉鎖システムである。システム１００を使用して本プロセスを自動化する（又は実質的に自動化する）ことによって、アッセイを、全プロセスを数時間（例えば、２～３時間）で実施することができ且つ所望の結果を得ることができるように、リアルタイムで（又は実質的にリアルタイムで）且つ製造現場で（製造施設で使用する場合）実施することができ、これは従来知られている手動操作プロセスに通常必要な５日に比べると大幅な向上である。さらに、システム１００を用いるプロセスの閉じた性質により滅菌条件を維持する。またさらに、システム１００は、種々の分析のための任意の数の試料（同じ又は異なる）を調製するために使用され得、これらの試料について多くの種々のアッセイを自動的に実施し得、それによって、種々の分析のための種々の試料を調製するために多くの異なるシステムを必要とするのを排除することができる、柔軟なシステムである。同じシステム１００内で多数のアッセイを実行することによって、同じアッセイが多数のシステムで実施された場合（これは、一般に、デッドボリュームとしていくらかの試料の損失をもたらす）よりも必要とする試料の体積を少なくすることができる。したがって、本明細書に記載されるシステム１００は、デッドボリュームを最小限にするか又は回避することによって試料を節約できることが企図される。さらに、本明細書に記載のシステム１００は、各アッセイを個々に実施するように構成された個々のシステムよりも小さい設置面積を維持しながら、複数のアッセイを実施することができる。例えば、バルブ１１２内に捕捉カラム（例えば、プロテインＡカラム）を備えた本明細書に記載のシステムは、大規模な精製の機能を達成することができるが、使用する設置面積は小さくすることができる。

図１に示すシステム１００は一般に、１つ以上の試料バイアル、針、試料ループ、計量装置、針座ポート、第１のカラム、第２のカラム、１つ以上のバッファ供給源、１つ以上の変化試薬供給源、１つ以上のキャリア溶液供給源、第１の反応コイル（図１のコイルＡ）、第２の反応コイル（図１のコイルＢ）、及び１つ以上の受容バイアル、並びに、必要に応じて、システム１００の構成要素間の流体連通を容易にするために、システム１００の各構成要素間に延在する４つのマルチポートバルブ１０４、１０８、１１２、１１６及び導管（例えば、ステンレス鋼導管）を含む。図１に示すシステム１００はまた、分析デバイス、第１のポンプ１２０、及び第２のポンプ１２４を含む。それにもかかわらず、システム１００は上に挙げた構成要素の１つ以上及び／又は追加の構成要素を含まなくてもよいことは理解されよう。第２の反応コイル（例えば、図１のコイルＢ）は、任意選択的にシステム１００から省いてもよい。

１つ以上の試料バイアルの各々は、目的分子を含む試料を収容するようになされている。試料は自動サンプリングシステム（例えば、Ａｇｉｌｅｎｔ １２９０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ ＩＩ製品において使用されるオートサンプラー）を使用して自動的に得る（例えば、送達される）ことが好ましいが、試料は手動でも得ることができる。いくつかの例では、分子は、例えば、治療用ポリペプチド（以下でさらに詳細に説明する）などのポリペプチド及びポリヌクレオチドである。他の例では、分子は小分子である（すなわち、約９００ダルトン以下の分子量を有し、妥当な時間内に細胞膜を透過して拡散することができる）。小分子は、例えば、代謝産物を含むか、実質的に代謝産物からなるか、又は代謝産物からなり得る。１つ以上の試料バイアルの各々は、好ましくは、自動サンプリングシステム自体に収容され、一般に、フロースルーバイアルの形態をとり、その詳細は本明細書においてより詳細に記載されるが、試料バイアルは他のバイアル（例えば、非フロースルーバイアル）であってもよい。いずれにしても、必要に応じて、針は試料バイアルの１つから試料を自動的に取り出し、試料を試料ループに入れるように移動可能である。試料ループは投入された試料のための一時的リザーバ又はバッファゾーンとして働き、同時に、試料が計量装置に入るのを防止する。この例では分析ヘッドの形態をとる計量装置は、針によって取り出され、試料ループに投入された一定量の試料を制御するように配置されている。試料は最終的に、試料ループから針座ポートに押し込まれる。

この例では、マルチポートバルブ１０４は、６ポート注入バルブの形態をとる。マルチポートバルブ１０４は、必要に応じて、針座ポートと流体連通するように移動可能である。次に、試料は、針座ポートからマルチポートバルブ１０４を通って、システム１００の別の下流構成要素（具体的な構成要素は実施されるアッセイによる）に流入する。場合によっては、試料は針座ポートからマルチポートバルブ１０４を通って分析デバイスに流入する。場合によっては、試料は針座ポートからマルチポートバルブ１０４を通ってマルチポートバルブ１０８に流入する。

この例では、マルチポートバルブ１０８は、６ポート注入バルブの形態をとる。マルチポートバルブ１０８は、試料（及び／又はバッファ溶液供給源からのバッファ、又は変化試薬供給源からの変化試薬）が針座ポートからマルチポートバルブ１０４を介してマルチポートバルブ１０８に流入できるように、マルチポートバルブ１０４と選択的に流体連通している。

この例におけるマルチポートバルブ１１２は、４ポジション１０ポートバルブであり、その位置は、マルチポートバルブ１０８が第１のカラム又は第２のカラム（両方ともマルチポートバルブ１０８の下流にある）のどちらに流体連結されるかを決定する。マルチポートバルブ１１２が第１の位置にあるとき、第１のカラムはマルチポートバルブ１０８（及び、次にマルチポートバルブ１０４）に流体連結され、第２のカラムは、第１のカラムが試料、バッファ、変化試薬、キャリア溶液、又はこれらの組み合わせを受容し得るように、マルチポートバルブ１０８から流体隔離される。逆に、マルチポートバルブ１１２が第１の位置と異なる第２の位置にあるとき、第２のカラムはマルチポートバルブ１０８（及び、次にマルチポートバルブ１０４）に流体連結され、第１のカラムは、第２のカラムが試料、バッファ、変化試薬、及び／又はキャリア溶液を受容し得るように、マルチポートバルブ１０８から流体隔離される。本明細書に記載のシステム及び方法のマルチポートバルブ１１２は、カラムをベースとしたアッセイなどの分析アッセイを実施するように構成し得ることが企図される。本明細書に記載のシステム及び方法において、第１のカラムは、分析カラムを含むか、又は分析カラムからなり得る。例えば、分析カラムは、本明細書中に記載されるようなクロマトグラフィデバイスのカラム、又はインキュベーションカラムであり得る。インキュベーションカラムは、本明細書に記載されるようなＭＡＭに従ってタンパク質消化用に構成され得る。

この例の第１のカラムは、試料から目的分子を捕捉し、それによって、試料中の分子を試料のマトリックス（これは、次に廃棄され得る）から実質的に分離するように構成された捕捉カラムである。場合によっては、捕捉カラムは、（例えば、捕捉カラム中で分子をクラスター化することによって）分子を予備濃縮する役割を果たすこともできるが、この工程は必須ではない。分子がポリペプチドである場合、捕捉カラムは、プロテインＡカラム、プロテインＧカラム、プロテインＡ／Ｇカラム、プロテインＬカラム、アミノ酸カラム、アビジンカラム、ストレプトアビジンカラム、炭水化物結合カラム、炭水化物カラム、グルタチオンカラム、ヘパリンカラム、疎水性相互作用カラム、イムノアフィニティカラム、ヌクレオチド／補酵素カラム、特殊カラム、及び固定化金属アフィニティクロマトグラフィ（ＩＭＡＣ）カラムからなる群から選択されるポリペプチド結合カラムの形態をとる。例えば、サブクラス１、２若しくは４のヒトＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、又はＩｇＥ（並びに、ヒトＶＨ３ファミリーのヒトＦｃ部分及び／又はＦａｂ領域を含む）であるポリペプチドの場合には、プロテインＡカラムが有用である。プロテインＧは、サブクラス１～４のヒトＩｇＧを精製するために使用することができる。組換え融合タンパク質Ａ／Ｇもまた、この融合タンパク質はプロテインＡ及びプロテインＧの結合部位を提供するので、これらのヒト抗体のクラス全てを精製するために使用することができる。したがって、プロテインＡ／Ｇ融合タンパク質は、ヒトＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、及びＩｇＭを精製するために使用することができる。さらに、プロテインＬは、標的抗体が適切なカッパ（κ）サブタイプ軽鎖（すなわち、ＶκＩ、ＶκＩＩＩ、及びＶκＩＶサブタイプ）を有するという条件で、ヒトＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ及びＩｇＤを精製するために使用することができ、またプロテインＬは抗体の可変（Ｖ）鎖に結合するので、適切なκ鎖サブタイプも有するＦａｂフラグメント及びｓｃＦｖフラグメントを精製するためにも使用することができる。しかし、分子が小分子である場合、捕捉カラムは代わりに、逆相カラム、サイズ排除カラム、イオン交換カラム、順相カラム、キラル分離カラム、混合モードカラム、又は疎水性相互作用カラムの形態をとることができる。例えば、分子が代謝産物などの小分子である場合、捕捉カラムは、逆相、カチオン性（カチオン交換）及びアニオン性（アニオン交換）を含む三モード（又は三相）クロマトグラフィカラムの形態をとることができる。分析物は、ｐＨ、イオン強度、及び／又は有機強度勾配によって溶出され得る。小分子（代謝産物など）の分析のための溶出バッファは、水性の低塩揮発性バッファを含み得る。いくつかの例では、低塩揮発性バッファは有機溶媒を含む。有機溶媒のレベルは、ＨＩＬＩＣで使用される有機溶媒レベルより低くてもよい。例として、一般的なＨＩＬＩＣの一般的な出発溶媒は、≧５０％（ｖ／ｖ）の有機物濃度を有し得る。

一方、この例における第２のカラムは、分子の塩濃度を低下させるように構成されるように、バッファ（例えば、タンパク質分解バッファ）で平衡化された脱塩カラムである。したがって、例えば、分子がポリペプチドである場合、脱塩カラムはポリペプチドの塩濃度を低下させる（すなわち、ポリペプチドを脱塩する）ように構成される。第２のカラムは、好ましくは、サイズ排除クロマトグラフィカラムの形態をとるが、代わりに他のクロマトグラフィカラムを使用することもできる。

針はまた、１つ以上のバッファ供給源からバッファ溶液を得て、試料ループ中にバッファ溶液を入れるために移動可能である。次に、バッファ溶液は、（試料の流れに関連して）上述したのと同様の方法で、マルチポートバルブ１０４を介してマルチポートバルブ１０８に流入することができる。バッファ溶液は、その後、システム１００の適切な構成要素に誘導され得る。一例では、バッファ溶液は、溶出バッファ溶液（例えば、揮発性バッファ（例えば、水＋ギ酸などの低塩揮発性バッファ；水及びアセトニトリル＋酢酸アンモニウム；又は水及びアセトニトリル＋重炭酸アンモニウム）、プロテインＡ結合抗体の場合は酸性バッファ、又はプロテインＧ結合抗体の場合は強酸性（ｐＨ３以下）バッファ）であり得、これはマルチポートバルブ１１２が第１の位置にあるとき、最終的に第１のカラムに供給される。溶出バッファ溶液が第１のカラムに流入し通過する際、溶出バッファ溶液は第１のカラムに捕捉された実質的に全ての分子（例えば、ポリペプチド）を溶出する。

針はまた、１つ以上の変化試薬供給源から変化試薬を得て、試料ループ中に変化試薬を入れるために移動可能である。次に、変化試薬は、（試料の流れに関連して）上述したのと同様の方法で、マルチポートバルブ１０４を介してマルチポートバルブ１０８に流入することができる。変化試薬は、その後、望ましい方法で分子を変化させるために、システム１００の適切な構成要素に誘導され得る。

一般的に言えば、変化試薬は、変性試薬、還元試薬、アルキル化試薬、グリコシダーゼ（例えば、グルカナーゼ）を含有する（例えば、それからなる）溶液、グリカン標識試薬、反応停止試薬、酵素、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。

変性試薬を利用して、試料中の分子（例えば、ポリペプチド）を変性させることができる。変化試薬が変性試薬であるか又は変性試薬を含む例では、変性試薬は変性洗浄剤若しくはカオトロープであるか又は変性洗浄剤若しくはカオトロープを含み得る。変性試薬が変性洗浄剤であるか又は変性洗浄剤を含む例では、変性洗浄剤は、硫酸ドデシルナトリウム（ＳＤＳ）、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、グリココール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、タウロデオキシコール酸ナトリウム、Ｎ－ラウロイルサルコシン、ドデシル硫酸リチウム、臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム（ＣＴＡＢ）、及び臭化トリメチル（テトラデシル）アンモニウム（ＴＴＡＢ）からなる群から選択されることが好ましい。より好ましくは、変性洗浄剤はＳＤＳである。変性試薬がカオトロープであるか又はカオトロープを含む変形では、カオトロープは、尿素、ｎ－ブタノール、エタノール、塩化グアニジウム、過塩素酸リチウム、酢酸リチウム、塩化マグネシウム、フェノール、２－プロパノール、及びチオ尿素からなる群から選択されることが好ましい。代替的に又は追加的に、変性試薬は、所定の温度（例えば、約２２℃～約１２０℃）を維持しないにしてもこの温度に到達するのに適した温度を有する加熱流体であるか又はそのような加熱流体を含み得る。

還元試薬は、ジスルフィド結合架橋を切断し、それによって分子（例えば、ポリペプチド）を還元するために利用することができる。還元試薬は、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、グルタチオン、β－メルカプトエタノール（β－ＭＥ）、及びトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）からなる群から選択することができる。ここでは図示しないが、還元試薬は冷却容器（例えば、４℃の温度を有する冷却装置）によって供給することができる。一方、アルキル化剤は、利用した場合、スルフヒドリルをアルキル化し、それによって分子（例えば、ポリペプチド）をアルキル化する。アルキル化剤は、インドール－３－酢酸（ＩＡＡ）などのアルキル化試薬であることが好ましいが、他のアルキル化剤も使用することもできる。

グリコシダーゼを含有する溶液は、第１のカラムによって捕捉された分子（例えば、ポリペプチド）にグリコシダーゼを誘導し、グリコシダーゼを注入するために利用することができ、これは、次に、捕捉された分子（例えば、ポリペプチド）中のグリカンを、捕捉された分子（例えば、ポリペプチド）から溶液中に放出させる。溶液中のグリコシダーゼは、グルカナーゼ、エンドグリコシダーゼ、グリコサミダーゼ（ｇｌｙｃｏｓａｍｉｄａｓｅ）、及びＯ－グリカナーゼ、並びにこれらの組み合わせ（例えば、エンドグリコシダーゼ、グリコサミダーゼ、及びＯ－グリカナーゼ、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択することが好ましい。グリコシダーゼがエンドグリコシダーゼであるか又はエンドグリコシダーゼを含む場合、エンドグリコシダーゼは、エンドグリコシダーゼＤ、エンドグリコシダーゼＦ（エンドグリコシダーゼＦ１、エンドグリコシダーゼＦ２、及びエンドグリコシダーゼＦ３、並びにこれらの組み合わせ）、エンドグリコシダーゼＨ、エンドグリコシダーゼＳ、エンドグリコシダーゼＭ、及びエンドグリコシダーゼＢからなる群から選択することが好ましい。グリコシダーゼがグリコサミダーゼであるか又はグリコサミダーゼを含む場合、グリコサミダーゼは、グリコペプチダーゼ、ペプチドＮ－グリコシダーゼ、ＰＮＧａｓｅ、Ｎ－グリコヒドロラーゼ、及びＮ－グリカナーゼからなる群から選択することが好ましい。グルカナーゼがＰＮＧａｓｅであるか又はＰＮＧａｓｅを含む場合、ＰＮＧａｓｅは、ペプチド：Ｎ－グリコシダーゼＦ（ＰＮＧＦ）を含むことが好ましい。グリコシダーゼがＯ－グリカナーゼであるか又はＯ－グリカナーゼを含む場合、Ｏ－グリカナーゼは、ｅｎｄｏ－ＧａｌＮＡｃ－ａｓｅ Ｄ又はｅｎｄｏＧａｌＮＡｃ－ａｓｅ Ａであることが好ましい。

このようにしてグリカンが溶液中に放出される場合、針はキャリア溶液（例えば、脱イオン（ＤＩ）水）を１つ以上のキャリア溶液供給源から得て、キャリア溶液を試料ループ中に入れるためにさらに移動可能である。次に、キャリア溶液は、（試料の流れに関連して）上述したのと同様の方法で、マルチポートバルブ１０４を介してマルチポートバルブ１０８に流入することができる。キャリア溶液は、例えば、その後、第１のカラムに供給され、第１のカラムを通って、放出されたグリカンを第１のカラムから運ぶ。

次に、グリカン標識試薬を利用して、分子（例えば、ポリペプチド）から放出され、第１のカラムから運び出されたグリカンを標識（例えば、蛍光標識）することができる。グリカン標識試薬は、例えば、フルオロフォア（例えば、２－アミノ安息香酸、８－アミノナフタレン－１，３，６－トリスルホン酸二ナトリウム塩、８－アミノナフタレン－１，３，６－トリスルホン酸三ナトリウム塩、アントラニルアミド、及び４－メトキシベンズアミジンからなる群から選択される）又は発色団（例えば、３－メチル－１－フェニル－２－ピラゾリン－５－オン、又はフェニルヒドラジン）の形態をとることが好ましい。

酵素を利用して、分子（例えば、ポリペプチド）を消化することができる。酵素は、プロテアーゼ、セルラーゼ、リパーゼ、アミラーゼ、グルコアミラーゼ、グルコースイソメラーゼ、キシラナーゼ、フィターゼ、アラビナナーゼ、ポリガラクツロナナーゼ、ヒドロラーゼ、キモシン、ウレアーゼ、ペクチナーゼ、又はβ－グルカナーゼの形態をとることが好ましい。一方、反応停止試薬は、試料のｐＨ条件を変化させることによって反応（例えば、酵素反応）を停止させるために利用することができる。反応停止試薬は、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）の形態をとることが好ましいが、代わりに他の反応停止試薬を利用することもできる。

この例におけるマルチポートバルブ１１６は、４ポジション１０ポートバルブであり、その位置は、マルチポートバルブ１０８が第１の反応コイルと第２の反応コイル（両方ともマルチポートバルブ１０８の下流にある）のどちらに流体連結されるかを決定する。マルチポートバルブ１１６が第１の位置にあるとき、第１の反応コイルはマルチポートバルブ１０８（及びマルチポートバルブ１０４）に流体連結され、第２の反応コイルは、第１の反応コイルが試料若しくはその一部（例えば、試料中のポリペプチドから放出されるグリカン）、バッファ、変化試薬、キャリア溶液、又はこれらの組み合わせを受容し得るように、マルチポートバルブ１０８から流体隔離される。逆に、マルチポートバルブ１１６が第１の位置と異なる第２の位置にあるとき、第２の反応コイルはマルチポートバルブ１０８（及び、次にマルチポートバルブ１０４）に流体連結され、第１の反応コイルは、第２の反応コイルが試料若しくはその一部、バッファ、及び／又は変化試薬を受容し得るように、マルチポートバルブ１０８から流体隔離される。

第１及び第２の反応コイルの各々は、分子（例えば、ポリペプチド）及び１種以上の変化剤をインキュベートして、分子（例えば、ポリペプチド）を変化させるように構成されている。第１又は第２の反応コイルは、例えば、反応停止試薬及びポリペプチドを受容し、ポリペプチドの反応停止を容易にするために反応停止試薬及びポリペプチドをインキュベートすることができる。別の例として、第１又は第２の反応コイルは、変性試薬及びポリペプチドを受容し、ポリペプチドの変性を容易にするために変性試薬及びポリペプチドをインキュベートすることができる。別の例として、第１又は第２の反応コイルは、還元試薬及びポリペプチドを受容し、ポリペプチドの還元を容易にするために還元試薬及びポリペプチドをインキュベートすることができる。さらに別の例として、第１又は第２の反応コイルは、アルキル化試薬及びポリペプチドを受容し、ポリペプチドのアルキル化を容易にするためにアルキル化試薬及びポリペプチドをインキュベートすることができる。さらなる例として、第１又は第２の反応コイルは、放出されたグリカン及びグリカン標識試薬を含む混合物を受容し、放出されたグリカンの標識（例えば、蛍光標識）を容易にするために混合物をインキュベートすることができる。

望ましいインキュベーションを容易にするために、システム１００はさらに、第１及び／又は第２の反応コイルに直接隣接して位置決めされるか、又はさもなければ熱的に連結された加熱要素をさらに含み得る。加熱要素は、例えば、加熱コイル、誘導加熱器、ヒートポンプ、カートリッジヒータ、電気抵抗ワイヤ、又は第１又は第２の反応コイル各々の１つ以上の部分を加熱するのに適した他の要素の形態をとることができる。したがって、システム１００が第１の反応コイルに熱的に連結された加熱要素を含む場合、加熱要素は第１の反応コイルを、用途に応じて、例えば、約３０℃、約４０℃、約８０℃、又は何らかの他のインキュベーション温度とすることができる第１の所定のインキュベーション温度に維持するように構成される。同様に、システム１００が第２の反応コイルに熱的に連結された加熱要素を含む場合、加熱要素は、第２の反応コイルを第１の所定のインキュベーション温度と同じであっても異なっていてもよい第２の所定のインキュベーション温度に維持するように構成される。

この例における１つ以上の受容バイアルは、システム１００の他の全ての構成要素の下流に一般に配置されている。１つ以上の試料バイアルと同様に、１つ以上の受容バイアルは一般に、１つ以上のフロースルーバイアルの形態をとるが、他のバイアル（例えば、非フロースルーバイアル）も同様に使用され得る。１つ以上の受容バイアルは一般に、マルチポートバルブ１１２及び／又はマルチポートバルブ１１６に流体連結されている。したがって、１つ以上の受容バイアルは一般に、第１のカラム、第２のカラム、第１の反応コイル、及び第２の反応コイルのうちの１つ以上からの分子（例えば、ポリペプチド）を含む混合物を受容するように配置されている。図示した例では、システム１００は２つのフロースルーバイアル、すなわち、マルチポートバルブ１１２に流体連結された第１のバイアルと、マルチポートバルブ１１６に流体連結された第２のバイアルとを利用する。したがって、第１のフロースルーバイアルは、（どのカラムが使用されているかに応じて）第１のカラム又は第２のカラムから分子を含む混合物を受容するように配置される。混合物は、例えば、第１のカラムからの溶出バッファ溶液及び溶出バッファ溶液によって溶出された分子を含み得る。一方、第２のフロースルーバイアルは、（どのコイルが使用されているかに応じて）第１の反応コイル又は第２の反応コイルから分子を含む混合物を受容するように配置される。混合物は、例えば、第１の反応コイルにおいて変性され還元された分子を含み得る。

いくつかの例では、受容バイアルの各々が、受容した混合物中の分子の通過は実質的に防止するが、混合物の残りは通過させ、各受容バイアルから排出するように、配置され且つサイズ決めされた複数の孔を有し得ることは理解されよう。したがって、受容バイアルの各々における孔は、受容混合物中の分子を残りの混合物から効率的に分離する。分離された分子は、次に、（分子を分析するための）分析デバイスに送られるか、又はさらなる調製のためにシステム１００中の他の構成要素に送ることができる。一方、混合物の残りは、次に、廃棄され得る。代替的に又は追加的に、この分離機能は、マルチポートバルブ１０４、マルチポートバルブ１０８、マルチポートバルブ１１２、及びマルチポートバルブ１１６のうちの１つ以上をタイムリーに移動させることによって行われ得る。

図１に示したものなど、いくつかの例では、システム１００はまた、それぞれが試料中の塩濃度を希釈するように構成された流体を含む１つ以上の中間バイアルを含むことができる。流体は、例えば、水、バッファ（例えば、低塩バッファ）、有機溶媒（例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、アセトン）、又は希釈剤として働く移動相の形態をとることができる。いずれにしても、試料中の塩濃度を希釈する必要がある場合、針は、（ｉ）システム１００中の適切な構成要素から試料を得て、希釈のために各中間バイアルに試料を入れるか、又は（ｉｉ）各中間バイアルから流体を得て、試料を収容したシステム１００の構成要素に流体を入れるために移動可能である。

この例における第１のポンプ１２０は、マルチポートバルブ１０４に流体連結されたバイナリポンプ又はクォータナリポンプの形態をとる。バイナリポンプ又はクォータナリポンプは一般に、材料がマルチポートバルブ１０４を通って、システム１００の他の構成要素に移動するのを助けるように配置される。この例では、ポンプは、必要に応じて、針座ポートから試料を駆動し、移動相を第１のカラム、第２のカラム、又はシステム１００の他の構成要素に駆動するように配置される。

この例における第２のポンプ１２４は、マルチポートバルブ１０８に流体連結されたクォータナリポンプの形態をとる。第２のポンプ１２４は一般に、システム１００の各種構成要素を清浄にするのを助けるように配置される。この例では、第２のポンプ１２４は、第１及び第２のカラムに様々な溶液（例えば、バッファ）を駆動して、これらのカラムを洗浄及び平衡化するように、また、第１及び第２の反応コイルに様々な溶液を駆動して、コイルを洗浄し、試料から試料へのキャリーオーバーを防止するように配置される。例えば、第２のポンプ１２４は、フロースルーバイアルをその場で洗浄するように構成され得、その結果、フロースルーバイアルは洗浄のために除去する必要がなくなり、したがって、システム１００の設計を単純化し、システム１００内の可動部品の数を最小化する。

分析デバイスは一般に、分子（例えば、ポリペプチド）がシステム１００によって調製された後に、分子（例えば、ポリペプチド）を分析するように構成される。分析デバイスは、例えば、液体クロマトグラフィデバイス（例えば、イオン交換クロマトグラフィカラム、陽イオン交換クロマトグラフィカラム、陰イオン交換クロマトグラフィカラム）、高速液体クロマトグラフィデバイス、超高速液体クロマトグラフィデバイス、質量分析デバイス（例えば、高分解能精密質量（ＨＲＡＭ）質量分析計）、分光光度デバイス（例えば、ＵＶ検出器）、グリカン分析デバイス、別のタイプの分析デバイス、又はこれらの組み合わせの形態をとることができる。ＨＲＡＭ質量分析計が本明細書に記載の代謝産物などの小分子の分析に有用であり得ることが意図される。多くの分析デバイスがシステム１００で利用され得ることもまた、理解されるであろう。

図１に示したように、システム１００はまたコントローラを含み、これは、この例においては、システム１００の各種構成要素に通信的に連結又は接続され、システム１００の各種構成要素に信号（例えば、制御信号、データ）を送信し、且つシステム１００の各種構成要素から信号（例えば、データ）を受信することによって、システム１００の上記動作をモニターし、且つ促進又は指示する。コントローラは、システム１００の他の構成要素に直接隣接して（例えば、システム１００と同じ環境内に）配置され得、又はシステム１００の他の構成要素から離れて配置され得る。

本発明で使用する場合、「通信的に連結される（ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｖｅｌｙ ｃｏｕｐｌｅｄ）」及び「接続される（ｃｏｎｎｅｃｔｅｄ）」という句は、直接的に連結若しくは接続される、又は１つ以上の中間構成要素を介して間接的に連結若しくは接続されることを意味すると定義される。このような中間構成要素は、ハードウェア及び／又はソフトウェアベースの構成要素を含むことができる。コントローラは、１つ以上の無線ネットワーク、１つ以上の有線ネットワーク、１つ以上の有線ネットワークと無線ネットワークとの組み合わせ（例えば、携帯電話ネットワーク及び／又は８０２．１１ｘ準拠のネットワーク）を介して、システム１００の各種構成要に通信的に連結又は接続され得るとともに、インターネットなどの公衆アクセス可能ネットワーク、プライベートネットワーク、又はこれらの組み合わせを含むことができると理解される。ネットワークのタイプ及び構成は実装依存であり、現在利用可能な又は後に開発される、コントローラとシステム１００の構成要素との間の記載した通信を促進する任意のタイプの通信ネットワークを使用することができる。

図２に示すように、コントローラは、プロセッサ３５２と、メモリ３５６と、通信インターフェース３６０と、計算論理３６４とを含む。プロセッサ３５２は、汎用プロセッサ、デジタルシグナルプロセッサ、ＡＳＩＣ、フィールドプログラマブルゲートアレイ、グラフィックス処理ユニット、アナログ回路、デジタル回路、又は任意の他の既知の若しくは後に開発されるプロセッサであり得る。プロセッサ３５２はメモリ３５６内の命令に従って動作する。メモリ３５６は揮発性メモリ又は不揮発性メモリであり得る。メモリ３５６は、読み取り専用メモリ（ＲＯＭ）、ランダムアクセスメモリ（ＲＡＭ）、フラッシュメモリ、電子的に消去可能なプログラム読み取り専用メモリ（ＥＥＰＲＯＭ）、又は他の種類のメモリのうちの１つ以上を含むことができる。メモリ３５６は、光、磁気（ハードドライブ）、又は任意の他の形態のデータストレージデバイスを含むことができる。

通信インターフェース３６０は、１つ以上の利用ネットワークを介したコントローラとシステム１００の構成要素との間の電子通信を可能に又は促進するために提供される。通信インターフェース３６０は、例えば、１つ以上のユニバーサルシリアルバス（ＵＳＢ）ポート、１つ以上のイーサネットポート、及び／又は１つ以上の他のポート若しくはインターフェースであるか又はそれらを含み得る。電子通信は、例として、ＵＳＢ、ＲＳ－２３２、ＲＳ－４８５、ＷｉＦｉ、Ｂｌｕｅｔｏｏｔｈ、及び／又は任意の他の好適な通信プロトコルを含む任意の既知の通信プロトコルを介して行うことができる。

論理３６４は一般に、メモリ３５６に記憶されるコンピュータ読み取り可能命令として具現化される１つ以上の制御ルーチン及び／又は１つ以上のサブルーチンを含む。制御ルーチン及び／又はサブルーチンは、ＰＩＤ（比例積分微分）、ファジー論理、非線形、又は任意の他の好適な種類の制御を実施することができる。プロセッサ３５２は一般に、論理３６４を実行し、システム１００の運転に関連するアクションを実施する。

概して、論理３６４は、実行されると、システム１００が本明細書に記載の望ましい方法で動作するように、プロセッサ３５２にシステム１００の構成要素、特に、マルチポートバルブ１０４、１０８、１１２、１１６、針、ポンプ１２０、１２４、及び加熱要素を制御させる。一例として、論理３６４は実行されると、プロセッサ３５２に、マルチポートバルブ１１２及び／又はマルチポートバルブ１１６を、本明細書に記載の位置のいずれかに、又はその間で移動させ、それによって、上述のように、システム１００の各種構成要素を流体連結させることができる。

他の変形においては、論理３６４は、プロセッサ３５２によって実行されると、さらなる、より少ない、及び／又は異なった機能を実施させることができる。さらに、他の変形においては、論理３６４は、本明細書中に記載される順序と異なる順序でプロセッサ３５２によって実行され得る。最後に、システム１００を使用して、（同じ製品及び／又は異なる製品からの）複数の試料のリアルタイム分析を実施することができるため、論理３６４は、任意の異なる回数、プロセッサ３５２によって実行され得ると理解される。

図３は、システム１００を使用して試料の第１のリアルタイムアッセイを自動的に（又は、実質的に自動的に）実施する方法の一例３００を示している。この例では、アッセイは生産力価測定であり、方法３００は一般に、（１）針を移動させて（例えば、自動的に移動させて）、試料バイアルの１つから試料を得、この試料を試料ループに入れることと、（２）試料ループから針座ポートに試料を押し込むことと、（３）試料を針座ポートからマルチポートバルブ１０４を介して分析デバイス（この例では、分光光度検出器の形態をとる）に移動させることと、（４）分析デバイスを使用して試料の力価／濃度を決定することと、を含む。

図４は、システム１００を使用して試料の第２のリアルタイムアッセイを自動的に（又は、実質的に自動的に）実施する方法の別の例４００を示している。この例では、アッセイは凝集の評価であり、方法４００は一般に、（１）針を移動（例えば、自動的に移動）させて、第１のバイアル（試料バイアルの１つ）から試料を得、この試料を試料ループに入れることと、（２）試料ループから針座ポートに試料を押し込むことと、（３）試料を針座ポートからマルチポートバルブ１０４を介してマルチポートバルブ１０８に移動させることと、（４）試料をマルチポートバルブ１０８から第１のカラムにマルチポートバルブ１１２（第１の位置にある）を介して移動させることと、（５）第１のカラム内の試料中の分子を捕捉し、それによって、試料中の分子を試料のマトリックスから分離し、試料のマトリックスは第１のカラムから流出し、第１のカラムに流体連結された第２のバイアル（受容バイアルの１つ）を介して廃棄されることと、（６）溶出バッファ溶液をバッファ供給源から第１のカラムに、針、針座ポート、及びマルチポートバルブ１０４、１０８、及び１１２を介して移動させ、それによって、第１のカラムにより捕捉された分子を溶出することと、（７）溶出バッファ溶液及び溶出された分子を含む溶出／分子混合物を第２のバイアル（受容バイアルの１つ）に移動させ、第２のバイアルは混合物中の分子を混合物の残りから分離させることと、（８）分子を第２のバイアルから分析デバイスに、針、針座ポート、及びマルチポートバルブ１０４を介して移動させることと、（９）分析デバイスを使用して分子中の凝集レベルを定量化することと、を含む。

図５は、システム１００を使用して試料の第３のリアルタイムアッセイを自動的に（又は、実質的に自動的に）実施する方法の別の例５００を示している。この例では、アッセイは電荷変異プロファイルであり、方法５００は一般に、（１）針を移動（例えば、自動的に移動）させて、第１のバイアル（試料バイアルの１つ）から試料を得、この試料を試料ループに入れることと、（２）試料ループから針座ポートに試料を押し込むことと、（３）試料を針座ポートからマルチポートバルブ１０４を介してマルチポートバルブ１０８に移動させることと、（４）試料をマルチポートバルブ１０８から第１のカラムにマルチポートバルブ１１２（第１の位置にある）を介して移動させることと、（５）第１のカラム内の試料中の分子を捕捉し、それによって、試料中の分子を試料のマトリックスから分離し、試料のマトリックスは第１のカラムから流出し、第１のカラムに流体連結された第２のバイアル（受容バイアルの１つ）を介して廃棄されることと、（６）溶出バッファ溶液をバッファ供給源から第１のカラムに、針、針座ポート、及びマルチポートバルブ１０４、１０８、及び１１２を介して移動させ、それによって、第１のカラムにより捕捉された分子を溶出することと、（７）溶出バッファ溶液及び溶出された分子を含む溶出／分子混合物を第２のバイアル（受容バイアルの１つ）に移動させ、第２のバイアルは混合物中の分子を混合物の残りから分離させ、それによって第２のバイアル中に親和性精製試料を生成することと、（８）分子を第２のバイアルから第３のバイアル（中間バイアルの１つ）に移動させて、親和性精製試料を希釈することと、（９）親和性精製試料を第３のバイアルからマルチポートバルブ１０８にニードル、針座ポート、及びマルチポートバルブ１０４を介して移動させることと、（１０）親和性精製試料をマルチポートバルブ１０８から第２のカラムにマルチポートバルブ１１２（第１の位置から第２の位置に移動されている）を介して移動させることと、（１１）親和性精製試料を第２のカラムに適用し、それによって、試料の塩濃度をさらに低下させることと、（１２）このさらに希釈された親和性精製試料を第２のカラムから第２のバイアルに戻すことと、（１３）親和性精製試料を第２のバイアルから分析デバイスに、針、針座ポート、及びマルチポートバルブ１０４を介して移動させることと、（１４）分析デバイス（この例では、イオン交換カラムの形態をとる）を使用して電荷変異評価を実施することと、を含む。

図６は、システム１００を使用して試料の第４のリアルタイムアッセイを自動的に（又は、実質的に自動的に）実施する方法の別の例６００を示している。この例では、アッセイはグリコシル化プロファイリングアッセイであり、方法６００は一般に、（１）針を移動（例えば、自動的に移動）させて、第１のバイアル（試料バイアルの１つ）から試料を得、この試料を試料ループに入れることと、（２）試料ループから針座ポートに試料を押し込むことと、（３）試料を針座ポートからマルチポートバルブ１０４を介してマルチポートバルブ１０８に移動させることと、（４）試料をマルチポートバルブ１０８から第１のカラムにマルチポートバルブ１１２（第１の位置にある）を介して移動させることと、（５）第１のカラム内の試料中の分子を捕捉し、それによって、試料中の分子を試料のマトリックスから分離し、試料のマトリックスは第１のカラムから流出し、第１のカラムに流体連結された第２のバイアル（受容バイアルの１つ）を介して廃棄されることと、（６）グリコシダーゼを含有する溶液（この例では、ＰＮＧａｓｅ－Ｆ）を供給源から第１のカラムに、針、針座ポート、及びマルチポートバルブ１０４、１０８、及び１１２を介して移動させ、それによって、第１のカラムにより捕捉された分子からグリカンを放出させることと、（７）放出されたグリカンを第２のバイアル（受容バイアルの１つ）に移動させることと、（８）グリカン標識試薬（この例では、２－ＡＡ）を供給源から第２のバイアルに針を介して移動させることと、（９）第２のバイアル中でグリカン標識試薬と放出されたグリカンとを混合することと、（１０）放出されたグリカンとグリカン標識試薬との混合物を第２の反応コイル（コイルＢ）に、針、マルチポートバルブ１０４、１０８、及びマルチポートバルブ１１２（第４の位置にある）を介して移動させることと、（１１）第２の反応コイル中の混合物をインキュベートし、それによってグリカンを蛍光標識することと、（１２）混合物を第２の反応コイルから第３のバイアル（受容バイアルの別の１つ）に移動させ、この第３のバイアルは混合物中の標識されたグリカンを混合物の残りから分離することと、（１３）標識されたグリカンを第３のバイアルから分析デバイスに、ニードル、針座ポート、及びマルチポートバルブ１０４を介して移動させることと、（１４）分析デバイスを使用して順相クロマトグラフィ分離及び定量を実施することと、を含む。

図７は、システム１００を使用して試料の第５のリアルタイムアッセイを自動的に（又は、実質的に自動的に）実施する方法の別の例７００を示している。この例では、アッセイはＭＡＭアッセイであり、方法７００は一般に、（１）針を移動（例えば、自動的に移動）させて、第１のバイアル（試料バイアルの１つ）から試料を得、この試料を試料ループに入れることと、（２）試料ループから針座ポートに試料を押し込むことと、（３）試料を針座ポートからマルチポートバルブ１０４を介してマルチポートバルブ１０８に移動させることと、（４）試料をマルチポートバルブ１０８から第１のカラムにマルチポートバルブ１１２（第１の位置にある）を介して移動させることと、（５）第１のカラム内の試料中の分子を捕捉し、それによって、試料中の分子を試料のマトリックスから分離し、試料のマトリックスは第１のカラムから流出し、第１のカラムに流体連結された第２のバイアル（受容バイアルの１つ）を介して廃棄されることと、（６）溶出バッファ溶液をバッファ供給源から第１のカラムに、針、針座ポート、及びマルチポートバルブ１０４、１０８、及び１１２を介して移動させ、それによって、第１のカラムにより捕捉された分子を溶出することと、（７）溶出バッファ溶液及び溶出された分子を含む溶出／分子混合物を第２のバイアル（受容バイアルの１つ）に移動させ、第２のバイアルは混合物中の分子を混合物の残りから分離させ、それによって第２のバイアル中に親和性精製試料を生成することと、（８）針を介して、親和性精製試料を第２のバイアルから第３のバイアル（中間バイアルの１つ）に移動させて、親和性精製試料を希釈することと、（９）希釈された親和性精製試料を第３のバイアルから第２のバイアルに針を介して戻すことと、（１０）変性試薬及び還元試薬を第２のバイアルに針を介して移動させることと、（１１）親和性精製試料、変性試薬、及び還元試薬を第２のバイアルから第１の反応コイル（コイルＡ）に、針、マルチポートバルブ１０４、１０８、及びマルチポートバルブ１１２（第３の位置にある）を介して移動させることと、（１２）第１の反応コイル内で混合物をインキュベートし、それによって分子を変性し、且つ還元することと、（１３）変性され、且つ還元された分子を第１の反応コイルから、第１の反応コイルに流体連結された第４のバイアル（受容バイアルの別の１つ）に移動させることと、（１４）アルキル化試薬を第４のバイアルに針を介して移動させることと、（１５）変性され、且つ還元された分子及びアルキル化試薬を第４のバイアルから第１の反応コイル（コイルＡ）に、針、マルチポートバルブ１０４、１０８、及びマルチポートバルブ１１２（第３の位置にある）を介して移動させることと、（１６）変性され、且つ還元された分子及びアルキル化試薬を第１の反応コイル内でインキュベートし、それによって変性され、且つ還元された分子をアルキル化することと、（１７）変性され、還元され、且つアルキル化された分子を第１の反応コイルから第４のバイアルに移動させることと、（１８）変性され、還元され、且つアルキル化された分子を第４のバイアルから第２のカラムに、針、針座ポート、マルチポートバルブ１０４、１０８、及びマルチポートバルブ１１２（第１の位置から第２の位置に移動されている）を介して移動させること、（１９）変性され、還元され、且つアルキル化された分子を第２のカラムに適用し、それによって分子の塩濃度を低下させることと、（２０）脱塩された分子を第２のカラムから第２のバイアルに戻すことと、（２１）（ステップ（２０）の前又はステップ（２０）の後に）酵素を第２のバイアルに針を介して移動させることと、（２２）脱塩された分子及び酵素を第２のバイアルから第２の反応コイル（コイルＢ）に、針、マルチポートバルブ１０４、１０８及びマルチポートバルブ１１２（第４の位置に移動されている）を介して移動させることと、（２３）脱塩された分子及び酵素を第２の反応コイル内でインキュベートし、それによって分子を消化することと、（２４）消化された分子を第２の反応コイルから第４のバイアルに戻すことと、（２５）消化された分子を第４のバイアルから分析デバイスに、針、針座ポート、及びマルチポートバルブ１０４を介して移動させることと、（２６）分析装置を使用して消化された分子を分析することと、を含む。

図８は、システム１００を使用して試料の第６のリアルタイムアッセイを自動的に（又は、実質的に自動的に）実施する方法の別の例８００を部分的に示している。この例では、アッセイは合成生成物アッセイであり、方法８００は一般に、（１）針を移動（例えば、自動的に移動）させて、第１のバイアル（試料バイアルの１つ）から試料を得、この試料を試料ループに入れることと、（２）試料ループから針座ポートに試料を押し込むことと、（３）試料を針座ポートからマルチポートバルブ１０４を介してマルチポートバルブ１０８に移動させることと、（４）試料をマルチポートバルブ１０８から第１のカラムにマルチポートバルブ１１２（第１の位置にある）を介して移動させることと、（５）第１のカラム内の試料中の分子を捕捉し、それによって、試料中の分子を試料のマトリックスから分離し、試料のマトリックスは第１のカラムから流出し、第１のカラムに流体連結された第２のバイアル（受容バイアルの１つ）を介して廃棄されることと、（６）溶出バッファ溶液をバッファ供給源から第１のカラムに、針、針座ポート、及びマルチポートバルブ１０４、１０８、及び１１２を介して移動させ、それによって、第１のカラムにより捕捉された分子を溶出することと、（７）溶出バッファ溶液及び溶出された分子を含む溶出／分子混合物を第２のバイアル（受容バイアルの１つ）に移動させ、第２のバイアルは混合物中の分子を混合物の残りから分離させ、それによって第２のバイアル中に親和性精製試料を生成することと、（８）反応停止試薬を第２のバイアルに針を介して移動させることと、（９）親和性精製試料及び反応停止試薬を第２のバイアルから第１の反応コイル（コイルＡ）に、針、マルチポートバルブ１０４、１０８、及びマルチポートバルブ１１２（第３の位置にある）を介して移動させること、（１０）親和性精製試料及び反応停止試薬を第１の反応コイル内でインキュベートし、それによって分子の反応を停止させることと、（１１）反応停止した分子を第１の反応コイルから、第１の反応コイルに流体連結された第３のバイアル（受容バイアルの別の１つ）に移動させることと、（１２）反応停止した分子を第３のバイアルから分析デバイスに、ニードル、針座ポート、及びマルチポートバルブ１０４を介して移動させることと、（１３）分析デバイスを使用して反応停止した分子を分析することと、を含む。

図９は、システム１００を使用して試料の第７のリアルタイムアッセイを自動的に（又は、実質的に自動的に）実施する方法の別の例９００を示している。この例では、アッセイは代謝産物分析であり、方法９００は一般に、（１）針を移動（例えば、自動的に移動）させて、第１のバイアル（試料バイアルの１つ）から試料を得（例えば、自動的に得）、この試料を試料ループに入れることと、（２）試料ループから針座ポートに試料を押し込むことと、（３）試料を針座ポートからマルチポートバルブ１０４を介してマルチポートバルブ１０８に移動させることと、（４）試料をマルチポートバルブ１０８から第１のカラム（この例では、三モードクロマトグラフィカラムの形態をとる）にマルチポートバルブ１１２（第１の位置にある）を介して移動させることと、（５）第１のカラム内の試料中の分子を捕捉し、それによって、試料中の分子を試料のマトリックスから分離し、試料のマトリックスは第１のカラムから流出し、第１のカラムに流体連結された第２のバイアル（受容バイアルの１つ）を介して廃棄されることと、（６）バッファ供給源からの溶出バッファ溶液（例えば、低塩揮発性バッファ溶液）と中間バイアルの１つからの有機溶媒の両方を第１のカラムに、針、針座ポート、及びマルチポートバルブ１０４、１０８、及び１１２を介して移動させ、それによって、第１のカラムにより捕捉された分子を溶出し希釈することと、（７）溶出バッファ溶液、有機溶媒及び溶出された分子を含む溶出／分子混合物を第２のバイアル（受容バイアルの１つ）に移動させ、第２のバイアルは混合物中の分子を混合物の残りから分離させることと、（８）分子を第２のバイアルから分析デバイス（この例では、ＨＲＡＭ質量分析計などの質量分析デバイスの形態をとる）に、針、針座ポート、及びマルチポートバルブ１０４を介して移動させることと、（９）分析デバイスを使用して、分子中の代謝産物を分析することと、を含む。この例における第１のカラムは三モードクロマトグラフィカラムであるため、方法９００は、有利なことに差次標識又はイオン対試薬を使用することなく、代謝産物の分析を促進することが理解されよう。また、方法９００は、例えば、アミノ酸（及びロイシン異性体などの高親水性のアミノ酸）、ビタミン、ヌクレオチド－糖、ヌクレオシドアナログ、ケト酸、炭水化物、アミノアルコール、ヌクレオチド、ポリアミン、及びリン脂質を含む、２００を超える様々な代謝産物を分析するために使用され得ることが理解されよう。

図１０は、本開示の教示に従い組み立てられたシステムの別の例１０００の概略図を示す。図１０に示すシステム１０００は、システム１０００がまた、一般に、１つ以上の試料バイアル、針、試料ループ、計量装置、針座ポート、第１のカラム、第２のカラム、１つ以上のバッファ供給源、１つ以上の変化試薬供給源、１つ以上のキャリア溶液供給源、反応コイル、反応コイルに熱的に連結された加熱要素、１つ以上の受容バイアル（例えば、１つ以上のフロースルーバイアル）、並びに４つのマルチポートバルブ１０４、１０８、１１２、１１６、コントローラ、分析デバイス、第１のポンプ１２０、及び図１のシステム１００で使用されている第２のポンプ１２４、並びに、必要に応じて、システム１０００の構成要素間の流体連通を容易にするために、システム１０００の各構成要素間に延在する導管（例えば、ステンレス鋼導管）を含む点で、システム１００と同様である。しかしながら、図１０に示すシステム１０００は、２つの主な点で、図１に示すシステム１００とは異なる。第１に、システム１００とは異なり、システム１０００は第２の反応コイルを含まない。第２に、上述した構成要素のいくつかは、システム１０００では、システム１００における配置とは異なるように配置されている。一例として、システム１０００では、分析装置、第１のポンプ１２０、及び第２のポンプ１２４は、（システム１００にあるような）マルチポートバルブ１０４のポートの代わりに、マルチポートバルブ１０８のポートに流体連結される。別の例として、システム１０００では、反応コイル（及び反応コイルに熱的に連結される加熱要素）は、（システム１００にあるような）マルチポートバルブ１１６のポートの代わりに、マルチポートバルブ１１２のポート（及び、それらのポート間）に流体結合される。したがって、システム１０００では、マルチポートバルブ１０８が反応コイル（及び加熱要素）に流体結合されるかどうかを決定するのは、マルチポートバルブ１１２の位置である（マルチポートバルブ１１６の位置ではない）。

これらの違いにもかかわらず、システム１０００は、システム１００と同様、分析のために分子を含有する製品の試料を自動的に又は実質的に自動的に調製し、その試料のアッセイを自動的に実施するための閉鎖システムである。システム１０００を使用して本プロセスを自動化する（又は実質的に自動化する）ことによって、アッセイを、全プロセスを数時間（例えば、２～３時間）で実施することができ且つ所望の結果を得ることができるように、リアルタイムで（又は実質的にリアルタイムで）且つ製造現場で（製造施設で使用する場合）実施することができ、これは従来知られている手動操作プロセスに通常必要とする数日～数週に比べると大幅な向上である。さらに、システム１０００を用いるプロセスの閉じた性質により滅菌条件を維持する。またさらに、システム１００と同様に、システム１０００は、種々の分析のための任意の数の試料（同じ又は異なる）を調製するために使用され得、これらの試料について多くの種々のアッセイを自動的に実施し得、それによって、種々の分析のための種々の試料を調製するために多くの異なるシステムを必要とするのを排除することができる、柔軟なシステムである。

図１１は、システム１０００を使用して試料の第１のリアルタイムアッセイを自動的に（又は、実質的に自動的に）実施する方法の一例１１００を示している。この例では、アッセイは生産力価測定であり、方法１１００は一般に、（１）針を動かして（例えば、自動的に動かして）、試料バイアルの１つから試料を得、この試料を試料ループに入れることと、（２）試料ループから針座ポートに試料を押し込むことと、（３）試料を針座ポートからマルチポートバルブ１０４及びマルチポートバルブ１０８を介して分析デバイス（この例では、液体クロマトグラフィデバイスの形態をとる）に移動させることと、（４）分析デバイスを使用して試料の力価／濃度を決定することと、を含む。

図１２は、システム１０００を使用して試料の第２のリアルタイムアッセイを自動的に（又は、実質的に自動的に）実施する方法の別の例１２００を示している。この例では、アッセイはサイズ排除クロマトグラフィ（ＳＥＣ）アッセイであり、方法１２００は一般に、（１）針を移動（例えば、自動的に移動）させて、第１のバイアル（試料バイアルの１つ）から分子を含む試料を得、この試料を試料ループに入れることと、（２）試料ループから針座ポートに試料を押し込むことと、（３）試料を針座ポートからマルチポートバルブ１０４を介してマルチポートバルブ１０８に移動させることと、（４）試料をマルチポートバルブ１０８から第１のカラムにマルチポートバルブ１１２（第２の位置にある）を介して移動させることと、（５）第１のカラム内の試料中の分子を捕捉し、それによって、試料中の分子を試料のマトリックスから分離し、試料のマトリックスは第１のカラムから流出し、第１のカラムに流体連結され廃棄されることと、（６）溶出バッファ溶液をバッファ供給源から第１のカラムに、針、針座ポート、及びマルチポートバルブ１０４、１０８、及び１１２を介して移動させ、それによって、第１のカラムにより捕捉された分子を溶出することと、（７）溶出バッファ溶液及び溶出された分子を含む溶出／分子混合物を第２のバイアル（受容バイアルの１つ）に移動させ、第２のバイアルは混合物中の分子を混合物の残りから分離させることと、（８）分子を第２のバイアルから分析デバイスに、針、針座ポート、及びマルチポートバルブ１０４、１０８を介して移動させることと、（９）分析デバイスを使用して分子中の凝集レベルを定量化することと、を含む。

図１３は、システム１０００を使用して試料の第３のリアルタイムアッセイを自動的に（又は、実質的に自動的に）実施する方法の別の例１３００を示している。この例では、アッセイはイオン交換クロマトグラフィ（ＩＥＸ）アッセイであり、方法１３００は一般に、（１）針を移動（例えば、自動的に移動）させて、第１のバイアル（試料バイアルの１つ）から試料を得（ここで、試料は分子を含む）、この試料を試料ループに入れることと、（２）試料ループから針座ポートに試料を押し込むことと、（３）試料を針座ポートからマルチポートバルブ１０４を介してマルチポートバルブ１０８に移動させることと、（４）試料をマルチポートバルブ１０８から第１のカラムにマルチポートバルブ１１２（第２の位置にある）を介して移動させることと、（５）第１のカラム内の試料中の分子を捕捉し、それによって、試料中の分子を試料のマトリックスから分離し、試料のマトリックスは第１のカラムから流出し、第１のカラムに流体連結され廃棄されることと、（６）溶出バッファ溶液をバッファ供給源から第１のカラムに、針、針座ポート、及びマルチポートバルブ１０４、１０８、及び１１２を介して移動させ、それによって、第１のカラムにより捕捉された分子を溶出することと、（７）溶出バッファ溶液及び溶出された分子を含む溶出／分子混合物を第２のバイアル（受容バイアルの１つ）に移動させ、第２のバイアルは混合物中の分子を混合物の残りから分離させ、それによって第２のバイアル中に親和性精製試料を生成することと、（８）分子を第２のバイアルから第３のバイアル（中間バイアルの１つ）に移動させて、親和性精製試料を希釈することと、（９）親和性精製試料を第３のバイアルからマルチポートバルブ１０８にニードル、針座ポート、及びマルチポートバルブ１０４を介して移動させることと、（１０）親和性精製試料をマルチポートバルブ１０８から第２のカラムにマルチポートバルブ１１２（第３の位置に移動されている）を介して移動させることと、（１１）親和性精製試料を第２のカラムに適用し、それによって、試料の塩濃度をさらに低下させることと、（１２）このさらに脱塩された親和性精製試料を第２のカラムから第２のバイアルに戻すことと、（１３）親和性精製試料を第２のバイアルから分析デバイスに、針、針座ポート、及びマルチポートバルブ１０４、１０８を介して移動させることと、（１４）分析デバイス（この例では、イオン交換カラムの形態をとる）を使用して、電荷変異評価を実施することと、を含む。

図１４は、システム１０００を使用して試料の第４のリアルタイムアッセイを自動的に（又は、実質的に自動的に）実施する方法の別の例１４００を示している。この例では、アッセイはＭＡＭアッセイであり、方法１４００は一般に、（１）針を移動（例えば、自動的に移動）させて、第１のバイアル（試料バイアルの１つ）から試料を得、この試料を試料ループに入れることと、（２）試料ループから針座ポートに試料を押し込むことと、（３）試料を針座ポートからマルチポートバルブ１０４を介してマルチポートバルブ１０８に移動させることと、（４）試料をマルチポートバルブ１０８から第１のカラムにマルチポートバルブ１１２（第２の位置にある）を介して移動させることと、（５）第１のカラム内の試料中の分子を捕捉し、それによって、試料中の分子を試料のマトリックスから分離し、試料のマトリックスは第１のカラムから流出し、第１のカラムに流体連結され廃棄されることと、（６）溶出バッファ溶液をバッファ供給源から第１のカラムに、針、針座ポート、及びマルチポートバルブ１０４、１０８、及び１１２を介して移動させ、それによって、第１のカラムにより捕捉された分子を溶出することと、（７）溶出バッファ溶液及び溶出された分子を含む溶出／分子混合物を第２のバイアル（受容バイアルの１つ）に移動させ、第２のバイアルは混合物中の分子を混合物の残りから分離させ、それによって第２のバイアル中に親和性精製試料を生成することと、（８）針を介して、親和性精製試料を第２のバイアルから第３のバイアル（中間バイアルの１つ）に移動させて、親和性精製試料を希釈することと、（９）希釈された親和性精製試料を第３のバイアルから第２のバイアルに針を介して戻すことと、（１０）変性試薬及び還元試薬を第２のバイアルに針を介して移動させることと、（１１）親和性精製試料、変性試薬、及び還元試薬を第２のバイアルから反応コイルに、針、マルチポートバルブ１０４、１０８、及びマルチポートバルブ１１２（第４の位置にある）を介して移動させることと、（１２）反応コイル内で混合物をインキュベートし、それによって分子を変性し、且つ還元することと、（１３）変性され、且つ還元された分子を反応コイルから、反応コイルに流体連結された第４のバイアル（受容バイアルの別の１つ）に移動させることと、（１４）アルキル化試薬を第４のバイアルに針を介して移動させることと、（１５）変性され、且つ還元された分子及びアルキル化試薬を第４のバイアルから反応コイルに、針、マルチポートバルブ１０４、１０８、及びマルチポートバルブ１１２（第４の位置にある）を介して移動させることと、（１６）変性され、且つ還元された分子及びアルキル化試薬を反応コイル内でインキュベートし、それによって変性され、且つ還元された分子をアルキル化することと、（１７）変性され、還元され、且つアルキル化された分子を反応コイルから第４のバイアルに移動させることと、（１８）変性され、還元され、且つアルキル化された分子を第４のバイアルから第２のカラムに、針、針座ポート、マルチポートバルブ１０４、１０８、及びマルチポートバルブ１１２（第３の位置に移動されている）を介して移動させること、（１９）変性され、還元され、且つアルキル化された分子を第２のカラムに適用し、それによって分子の塩濃度を低下させることと、（２０）脱塩された分子を第２のカラムから第２のバイアルに戻すことと、（２１）（ステップ（２０）の前又はステップ（２０）の後に）酵素を第２のバイアルに針を介して移動させることと、（２２）脱塩された分子及び酵素を第２のバイアルから反応コイルに、針、マルチポートバルブ１０４、１０８及びマルチポートバルブ１１２（第４の位置に移動されている）を介して移動させることと、（２３）脱塩された分子及び酵素を反応コイル内でインキュベートし、それによって分子を消化することと、（２４）消化された分子を反応コイルから第４のバイアルに戻すことと、（２５）消化された分子を第４のバイアルから分析デバイスに、針、針座ポート、及びマルチポートバルブ１０４、１０８を介して移動させることと、（２６）分析装置を使用して消化された分子を分析することと、を含む。

図１５は、システム１０００を使用して試料の第５のリアルタイムアッセイを自動的に実施する方法の別の例１５００を部分的に示す。この例では、アッセイは非クロマトグラフィアッセイであり、方法１５００は一般に、（１）針を移動（例えば、自動的に移動）させて、第１のバイアル（試料バイアルの１つ）から試料を得、この試料を試料ループに入れることと、（２）試料ループから針座ポートに試料を押し込むことと、（３）試料を針座ポートからマルチポートバルブ１０４を介してマルチポートバルブ１０８に移動させることと、（４）試料をマルチポートバルブ１０８から第２のバイアル（受容バイアルの１つ）にマルチポートバルブ１０８、１１２を介して移動させることと、（５）反応停止試薬を第２のバイアルに針を介して移動させることと、（６）試料及び反応停止試薬を第２のバイアルから反応コイルに、針、マルチポートバルブ１０４、１０８、及びマルチポートバルブ１１２（第４の位置にある）を介して移動させることと、（７）試料及び反応停止試薬を反応コイル内でインキュベートし、それによって試料中の分子の反応を停止させることと、（８）反応停止された分子を反応コイルから、反応コイルに流体連結された第２のバイアル又は第３のバイアル（受容バイアルの別の１つ）に戻すことと、（９）反応停止された分子を第３のバイアルから分析デバイスに、針、針座ポート、及びマルチポートバルブ１０４、１０８を介して移動させることと、（１０）分析デバイスを使用して反応停止された分子を分析することと、を含む。

図１６及び図１７は、システム１００又はシステム１０００の連続流通を可能にするために、システム１００又はシステム１０００で使用することができるフロースルーバイアル１６００の一例を示す。図示するように、この例のフロースルーバイアル１６００は一般に、ベース１６０４と、ベース１６０４に連結されたリップ１６０６と、ベース１６０４及びリップ１６０６の両方に連結され、それらから外向きに延びるガター１６０８とを含む。この例では、ベース１６０４は、第１の実質的に円筒状の部分１６１２と、第１の実質的に円筒状の部分１６１２に連結された第２の実質的に長方形状の部分１６１６により規定されている。第１の実質的に円筒状の部分１６１２は一般に、第１端部１６２０から、第１端部１６２０の反対側の第２端部１６２４まで第１の軸１６２８に沿って延びている。第１の実質的に円筒状の部分１６１２は、その第１端部１６２０と第２端部１６２４の間に形成された実質的に円筒状の穴１６３２を有する。第２の実質的に長方形状の部分１６１６は、第１の実質的に円筒状の部分１６１２から外方向に、第１の軸１６２８に垂直な第２の軸１６３６に沿って伸びている しかしながら、他の例では、フロースルーバイアルの構成要素は異なる形状を有し得る。例えば、ガター１６０８は、円筒状又は他の非長方形状を有していてもよい。別の例として、ベース１６０４は、実質的に円筒状の部分１６１２のみによって規定される円筒状又は実質的に円筒状の形状を有し得る。

この例では、リップ１６０６は、第１の実質的に円筒状の部分１６１２（特に、その第１端部１６２０）と一体に形成され、第１の実質的に円筒状の部分１６１２から第１の軸１６２８に沿って外向きに延びる、実質的に円筒状のリップである。このように配置されると、リップ１６０６は、実質的に円筒状の穴１６３２をガター１６０８に流体接続する。しかしながら、他の例では、リップ１６０６が異なる形状を有することができ、第１の実質的に円筒状の部分１６１２（又は別の部分）に固定的に又は取り外し可能に連結することができ、且つ／又は第１の実質的に円筒状の部分１６１２から外向きに、第１の軸１６２８に対して角度を付けられた軸に沿って延びることができる。さらに他の例では、フロースルーバイアル１６００は、リップ１６０６を全く含まなくてもよく、その場合、ガター１６０８は実質的に円筒状の穴１６３２に直接流体接続される。

この例では、ガター１６０８は、実質的に長方形状のベース１６４０と、長方形状のベース１６４０に連結された竪樋１６４４により規定されている。ガター１６０８の実質的に長方形状のベース１６４０は、ベース１６０４の第２の実質的に長方形状の部分１６１６から、及びリップ１６０６から外向きに、第１の軸１６２８及び第２の軸１６３６の両方に垂直で、且つ水平に対して傾斜している第３の軸１６４８に沿って延びている（図１７を参照）。実質的に長方形状のベース１６４０は、リップ１６０６（及び、それに続く実質的に円筒状の穴１６３２）を竪樋１６４４に流体接続する実質的に長方形状のチャネル１６５２を規定する。この例における竪樋１６４４は、円筒状であり、長方形状のベース１６４０から外向きに（図１６において、下向きに）、第１の軸１６２８に平行で、第２の軸１６３６及び第３の軸１６４８に垂直である第４の軸１６５２に沿って延びている。他の例では、ガター１６０８は、異なる形状のベース１６４０を有することができ（例えば、ベース１６４０は円筒状の形状を有することができ）、且つ／又は竪樋１６４４は異なる形状を有することができる。他の例では、ガター１６０８は竪樋１６４４を含まなくてもよい。

フロースルーバイアル１６００はまた、入口ポート１６６０及び出口ポート１６６４を有する。入口ポート１６６０は、一般に、自動サンプリングシステム、マルチポートバルブ１１２、マルチポートバルブ１１６、又はシステム１００若しくはシステム１０００の他の構成要素から必要に応じて流入流体を受容するように、フロースルーバイアルのベース１６０４に配置される。図１６及び図１７に示すように、この例における入口ポート１６６０は、第２の実質的に長方形状の部分１６１６に形成され、第１の軸１６２８、第２の軸１６３６、第３の軸１６４８、及び第４の軸１６５２の到達に対して傾斜した第５の軸１６６８に沿って延びている。第５の軸１６６８は例えば、第１の軸１６２８に対して約４５度の角度に方向づけられる。一方、出口ポート１６６４は一般に、入口ポート１６６０を介してベース１６０４に流入し、実質的に円筒状の穴１６３２及びガター１６０８のチャネル１６５２を通ってフロースルーバイアル１６００から流出する流体を導くように、フロースルーバイアルのガター１６０８に配置される。この例では、出口ポート１６６４は竪樋１６４４に形成されるが、他の例（例えば、フロースルーバイアル１６００が竪樋１６４４を含まない場合）では、出口ポート１６６４はガター１６０８の異なる部分に形成することができる。

ここでは図示されていないが、導管（図示せず）を使用して、システム１００（例えば、自動サンプリングシステム）又はシステム１０００の所望の構成要素を入口ポート１６６０に流体接続することができることは理解されよう。流体は、次に、システムのその所望の構成要素から、入口ポート１６６０を介してフロースルーバイアル１６００に流入する。流体がフロースルーバイアル１６００を通って流れる際、リップ１６０６が表面張力を防止するのに役立つ。いくつかの例では、導管（図示せず）を使用して、出口ポート１６６４を、システム１００又はシステム１０００内の流体の所望の目的地に流体接続することもできる。一例として、導管を使用して、出口ポート１６６４を、システム１００又はシステム１０００の分析デバイスに流体接続することができる。他の例では、出口ポート１６６４を所望の目的地に流体接続するために、導管を使用しなくてもよい。例えば、システム１００又はシステム１０００の針は、フロースルーバイアル１６００から直接流体を取り出し、その流体をシステム１００の所望の構成要素（例えば、試料ループ）又はシステム１０００の所望の構成要素に入れることができる。別の例として（例えば、フロースルーバイアル１６００を洗浄する必要がある場合）、ガター１６０８を通って流れる流体が廃棄に導かれるように、竪樋１６４４が廃棄物上に直接据えられるようにフロースルーバイアル１６００を位置決めすることができる。いずれにしても、フロースルーバイアル１６００は、流れがその中を容易に連続して流れるように構成され、これにより、例えば、試料バイアルを（特に、異なる試料が試験されている場合に）定期的に交換する必要性が排除される。

図１８及び図１９は、複数のフロースルーバイアル１６００を保持するために、システム１００又はシステム１０００において使用され得るバイアルホルダ１８００を示す。この例では、バイアルホルダ１８００は、自動サンプリングシステム内に配置されるか、又はさもなければ自動サンプリングシステムに連結されるように構成されている。しかし、他の例では、バイアルホルダ１８００は、システム１００又はシステム１０００の別の構成要素に連結することができる。いずれにしても、図１８及び図１９に示すバイアルホルダ１８００は、取り付けフランジ１８０４、及び取り付けフランジ１８０４に連結された複数のバイアルレセプタクル１８０８を含む。図１９に示すように、取り付けフランジ１８０４は、バイアルホルダ１８００（及びバイアルホルダ１８００によって運ばれるフロースルーバイアル１６００）を自動サンプリングシステムに連結するように、自動サンプリングシステムの一部に連結することができる。一方、複数のバイアルレセプタクル１８０８の各々は、フロースルーバイアル１６００の１つを受容するようなサイズとされている。より詳細には、図１９に示すように、複数のバイアルレセプタクル１８０８の各々は、フロースルーバイアル１６００の１つのそれぞれのベース１６０４を受容するようなサイズとされている。次に、そのフロースルーバイアル１６００の各々のガター１６０８は、バイアルホルダ１８００から離れるように外向きに延びている。

治療用ポリペプチド
以下の１つ以上に結合するタンパク質を含むタンパク質は、開示するシステム及び方法に有用であり得る。これらには、受容体結合を妨害するものを含む、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０及びＣＤ３４を含むＣＤタンパク質が含まれる。ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４及びＥＧＦ受容体を含むＨＥＲ受容体ファミリータンパク質。細胞接着分子、例えば、ＬＦＡ－Ｉ、ＭｏＩ、ｐｌ５０、９５、ＶＬＡ－４、ＩＣＡＭ－Ｉ、ＶＣＡＭ、及びアルファｖ／ベータ３インテグリン。増殖因子、例えば、血管内皮増殖因子（「ＶＥＧＦ」）、成長ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、卵胞刺激ホルモン、黄体形成ホルモン、成長ホルモン放出因子、副甲状腺ホルモン、ミュラー管阻害物質、ヒトマクロファージ炎症タンパク質（ＭＩＰ－Ｉ－アルファ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、ＮＧＦ－ベータなどの神経成長因子、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、例えば、ａＦＧＦ及びｂＦＧＦを含む線維芽細胞増殖因子、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、特に、ＴＧＦ－α及びＴＧＦ－β、例えば、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、ＴＧＦ－β３、ＴＧＦ－β４又はＴＧＦ－β５を含むトランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、インスリン様増殖因子Ｉ及びインスリン様増殖因子ＩＩ（ＩＧＦ－Ｉ及びＩＧＦ－ＩＩ）、ｄｅｓ（ｌ－３）－ＩＧＦ－Ｉ（脳ＩＧＦ－Ｉ）、及び骨誘導因子。インスリン及びインスリン関連タンパク質、例えば、インスリン、インスリンＡ鎖、インスリンＢ鎖、プロインスリン、及びインスリン様増殖因子結合タンパク質。特に、第ＶＩＩＩ因子、組織因子、フォン・ヴィレブランド因子、プロテインＣ、アルファ－１－アンチトリプシンなどの凝固及び凝固関連タンパク質、例えば、ウロキナーゼ及び組織プラスミノーゲン活性化因子（「ｔ－ＰＡ」）などのプラスミノーゲン活性化因子、ボンバジン（ｂｏｍｂａｚｉｎｅ）、トロンビン及びトロンボポエチン；（ｖｉｉ）アルブミン、ＩｇＥ及び血液型抗原を含むがそれらに限定されない他の血液タンパク質及び血清タンパク質。以下の、特に、Ｍ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ及びＧ－ＣＳＦ、並びに、ＣＳＦ－１受容体（ｃ－ｆｍｓ）などのそれらの受容体を含む、コロニー刺激因子及びそれらの受容体。例えば、ｆｌｋ２／ｆｌｔ３受容体、肥満（ＯＢ）受容体、ＬＤＬ受容体、成長ホルモン受容体、トロンボポエチン受容体（「ＴＰＯ－Ｒ」、「ｃ－ｍｐｌ」）、グルカゴン受容体、インターロイキン受容体、インターフェロン受容体、Ｔ細胞受容体、ｃ－Ｋｉｔなどの幹細胞因子受容体、及び他の受容体を含む、受容体及び受容体関連タンパク質。例えば、ＯＸ４０受容体のリガンドであるＯＸ４０Ｌを含む、受容体リガンド。骨由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、及びニューロトロフィン－３、－４、－５、又は－６（ＮＴ－３、ＮＴ－４、ＮＴ－５、又はＮＴ－６）を含む神経栄養因子。リラキシンＡ鎖、リラキシンＢ鎖、及びプロリラキシン；例えば、インターフェロン－α、－β、及び－γ、並びにそれらの受容体を含むインターフェロン及びインターフェロン受容体。ＩＬ－１～ＩＬ－３３及びＩＬ－１～ＩＬ－３３受容体、例えば、特に、ＩＬ－８受容体を含む、インターロイキン及びインターロイキン受容体。ＡＩＤＳエンベロープウイルス抗原を含む、ウイルス抗原。リポタンパク質、カルシトニン、グルカゴン、心房性ナトリウム利尿因子、肺サーファクタント、腫瘍壊死因子アルファ及びベータ、エンケファリナーゼ、ＲＡＮＴＥＳ（ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｏｎ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｎｏｒｍａｌｌｙ Ｔ－ｃｅｌｌ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ａｎｄ ｓｅｃｒｅｔｅｄ）、マウスゴナドトロピン関連ペプチド、ＤＮＡｓｅ、インヒビン及びアクチビン。インテグリン、プロテインＡ又はＤ、リウマチ因子、免疫毒素、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、スーパーオキシドディスムターゼ、表面膜タンパク質、崩壊促進因子（ＤＡＦ）、ＡＩＤＳエンベロープ、輸送タンパク質、ホーミング受容体、アドレシン、調節タンパク質、イムノアドヘシン、抗体。ミオスタチン、ＴＡＬＬ－Ｉを含むＴＡＬＬタンパク質、限定されないがアミロイドベータタンパク質を含むアミロイドタンパク質、胸腺間質性リンパ球新生因子（「ＴＳＬＰ」）、ＲＡＮＫリガンド（「ＯＰＧＬ」）、ｃ－ｋｉｔ、ＴＮＦ受容体１型を含むＴＮＦ受容体、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２、アンジオポエチン、及び前述のいずれかの生物活性断片又はアナログ又はバリアント。

例示的なポリペプチド及び抗体としては、Ａｃｔｉｖａｓｅ（登録商標）（アルテプラーゼ）；アリロクマブ、Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標）（ダルベポエチンアルファ）、Ｅｐｏｇｅｎ（登録商標）（エポエチンアルファ、又はエリスロポエチン）；Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）（インターフェロンベータ－Ｉａ）；Ｂｅｘｘａｒ（登録商標）（トシツモマブ）；Ｂｅｔａｓｅｒｏｎ（登録商標）（インターフェロンベータ）；ボコシズマブ（Ｌ１Ｌ３として示される抗ＰＣＳＫ９モノクローナル抗体、米国特許第８０８０２４３号明細書を参照）；Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標）（アレムツズマブ）；Ｄｙｎｅｐｏ（登録商標）（エポエチンデルタ）；Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標）（ボルテゾミブ）；ＭＬＮ０００２（抗α４β７ ｍＡｂ）；ＭＬＮ１２０２（抗ＣＣＲ２ケモカイン受容体ｍＡｂ）；Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標）（エタネルセプト）；Ｅｐｒｅｘ（登録商標）（エポエチンα）；Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）（セツキシマブ）；エボロクマブ；Ｇｅｎｏｔｒｏｐｉｎ（登録商標）（ソマトロピン）；Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラスツズマブ）；Ｈｕｍａｔｒｏｐｅ（登録商標）（ソマトロピン［ｒＤＮＡ由来］注射液）；Ｈｕｍｉｒａ（登録商標）（アダリムマブ）；Ｉｎｆｅｒｇｅｎ（登録商標）（インターフェロンＡｌｆａｃｏｎ－１）；Ｎａｔｒｅｃｏｒ（登録商標）（ネシリチド）；Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標）（アナキンラ）、Ｌｅｕｋｉｎｅ（登録商標）（サルガモスチム）；ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ（登録商標）（エピラツズマブ）；Ｂｅｎｌｙｓｔａ（商標）（ベリムマブ）；Ｍｅｔａｌｙｓｅ（登録商標）（テネクテプラーゼ）；Ｍｉｒｃｅｒａ（登録商標）（メトキシポリエチレングリコールエポエチンベータ）；ＭｙＩｏｔａｒｇ（登録商標）（ゲムツズマブオゾガマイシン）；Ｒａｐｔｉｖａ（登録商標）（エファリズマブ）；Ｃｉｍｚｉａ（登録商標）（セルトリズマブペゴル）；Ｓｏｌｉｒｉｓ（商標）（エクリズマブ）；ペクセリズマブ（抗補体Ｃ５）；ＭＥＤＩ－５２４（Ｎｕｍａｘ（登録商標））；Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標）（ラニビズマブ）；エドレコロマブ（Ｐａｎｏｒｅｘ（登録商標））；Ｔｒａｂｉｏ（登録商標）（レルデリムマブ）；ＴｈｅｒａＣｉｍ ｈＲ３（ニモツズマブ）；Ｏｍｎｉｔａｒｇ（ペルツズマブ、２Ｃ４）；Ｏｓｉｄｅｍ（登録商標）（ＩＤＭ－Ｉ）；ＯｖａＲｅｘ（登録商標）（Ｂ４３．１３）；Ｎｕｖｉｏｎ（登録商標）（ビジリズマブ）；カンツズマブメルタンシン（ｈｕＣ２４２－ＤＭｌ）；ＮｅｏＲｅｃｏｒｍｏｎ（登録商標）（エポエチンベータ）；Ｎｅｕｍｅｇａ（登録商標）（オプレルベキン）；Ｎｅｕｌａｓｔａ（登録商標）（ＰＥＧ化フィルガストリム、ＰＥＧ化Ｇ－ＣＳＦ、ＰＥＧ化ｈｕ－Ｍｅｔ－Ｇ－ＣＳＦ）；Ｎｅｕｐｏｇｅｎ（登録商標）（フィルグラスチム）；Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ ＯＫＴ３（登録商標）（ムロモナブ－ＣＤ３）、Ｐｒｏｃｒｉｔ（登録商標）（エポエチンアルファ）；Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）（インフリキシマブ）、Ｒｅｏｐｒｏ（登録商標）（アブシキシマブ）、Ａｃｔｅｍｒａ（登録商標）（抗ＩＬ６受容体ｍＡｂ）、Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）（ベバシズマブ）、ＨｕＭａｘ－ＣＤ４（ザノリムマブ）、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）（リツキシマブ）；Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標）（エルロチニブ）；Ｒｏｆｅｒｏｎ－Ａ（登録商標）（インターフェロンアルファ－２ａ）；Ｓｉｍｕｌｅｃｔ（登録商標）（バシリキシマブ）；Ｓｔｅｌａｒａ（商標）（ウステキヌマブ）；Ｐｒｅｘｉｇｅ（登録商標）（ルミラコキシブ）；Ｓｙｎａｇｉｓ（登録商標）（パリビズマブ）；１４６Ｂ７－ＣＨＯ（抗ＩＬ１５抗体、米国特許第７１５３５０７号明細書を参照）、Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標）（ナタリズマブ）；Ｖａｌｏｒｔｉｍ（登録商標）（ＭＤＸ－１３０３、抗炭疽菌防御抗原ｍＡｂ）；ＡＢｔｈｒａｘ（商標）；Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標）（パニツムマブ）；Ｘｏｌａｉｒ（登録商標）（オマリズマブ）、ＥＴＩ２１１（抗ＭＲＳＡ ｍＡｂ）、ＩＬ－１ Ｔｒａｐ（ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分及び両ＩＬ－１受容体成分（Ｉ型受容体及び受容体補助タンパク質）の細胞外ドメイン）、ＶＥＧＦ Ｔｒａｐ（ＩｇＧ１ Ｆｃと融合したＶＥＧＦＲ１のＩｇドメイン）、Ｚｅｎａｐａｘ（登録商標）（ダクリズマブ）；Ｚｅｎａｐａｘ（登録商標）（ダクリズマブ）、Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標）（イブリツモマブチウキセタン）、Ｚｅｔｉａ（エゼチマイブ）、アタシセプト（ＴＡＣＩ－Ｉｇ）、抗α４β７ ｍＡｂ（ベドリズマブ）；ガリキシマブ（抗ＣＤ８０モノクローナル抗体）、抗ＣＤ２３ ｍＡｂ（ルミリキシマブ）；ＢＲ２－Ｆｃ（ｈｕＢＲ３／ｈｕＦｃ融合タンパク質、可溶性ＢＡＦＦ拮抗薬）；Ｓｉｍｐｏｎｉ（商標）（ゴリムマブ）；マパツズマブ（ヒト抗ＴＲＡＩＬ受容体－１ ｍＡｂ）；オクレリズマブ（抗ＣＤ２０ヒトｍＡｂ）；ＨｕＭａｘ－ＥＧＦＲ（ザルツムマブ）；Ｍ２００（ボロシキシマブ、抗α５β１インテグリンｍＡｂ）；ＭＤＸ－０１０（イピリムマブ、抗ＣＴＬＡ－４ ｍＡｂ及びＶＥＧＦＲ－Ｉ（ＩＭＣ－１８Ｆ１）；抗ＢＲ３ ｍＡｂ；抗Ｃ．ディフィシル毒素Ａ及び毒素Ｂ Ｃ ｍＡｂ ＭＤＸ－０６６（ＣＤＡ－１）及びＭＤＸ－１３８８）；抗ＣＤ２２ ｄｓＦｖ－ＰＥ３８抱合体（ＣＡＴ－３８８８及びＣＡＴ－８０１５）；抗ＣＤ２５ ｍＡｂ（ＨｕＭａｘ－ＴＡＣ）；抗ＴＳＬＰ抗体；抗ＴＳＬＰ受容体抗体（米国特許第８１０１１８２号明細書）；Ａ５として示される抗ＴＳＬＰ抗体（米国特許第７９８２０１６号明細書）；抗ＣＤ３ ｍＡｂ（ＮＩ－０４０１）；アデカツムマブ（ＭＴ２０１、抗ＥｐＣＡＭ－ＣＤ３２６ ｍＡｂ）；ＭＤＸ－０６０、ＳＧＮ－３０、ＳＧＮ－３５（抗ＣＤ３０ ｍＡｂ）；ＭＤＸ－１３３３（抗ＩＦＮＡＲ）；ＨｕＭａｘ ＣＤ３８（抗ＣＤ３８ ｍＡｂ）；抗ＣＤ４０Ｌ ｍＡｂ；抗Ｃｒｉｐｔｏ ｍＡｂ；抗ＣＴＧＦ特発性肺線維症第１期フィブロゲン（ＦＧ－３０１９）；抗ＣＴＬＡ４ ｍＡｂ；抗エオタキシン１ ｍＡｂ（ＣＡＴ－２１３）；抗ＦＧＦ８ ｍＡｂ；抗ガングリオシドＧＤ２ ｍＡｂ；抗スクレロスチン抗体（米国特許第８７１５６６３号明細書又は米国特許第７５９２４２９号明細書を参照）、Ａｂ－５として示される抗スクレロスチン抗体（米国特許第８７１５６６３号明細書又は米国特許第７５９２４２９号明細書）；抗ガングリオシドＧＭ２ ｍＡｂ；抗ＧＤＦ－８ヒトｍＡｂ（ＭＹＯ－０２９）；抗ＧＭ－ＣＳＦ受容体ｍＡｂ（ＣＡＭ－３００１）；抗ＨｅｐＣ ｍＡｂ（ＨｕＭａｘ ＨｅｐＣ）；ＭＥＤＩ－５４５、ＭＤＸ－１１０３（抗ＩＦＮα ｍＡｂ）；抗ＩＧＦ１Ｒ ｍＡｂ；抗ＩＧＦ－１Ｒ ｍＡｂ（ＨｕＭａｘ－Ｉｎｆｌａｍ）；抗ＩＬ１２／ＩＬ２３ｐ４０ ｍＡｂ（ブリアキヌマブ）；抗ＩＬ－２３ｐ１９ ｍＡｂ（ＬＹ２５２５６２３）；抗ＩＬ１３ ｍＡｂ（ＣＡＴ－３５４）；抗ＩＬ－１７モノクローナル抗体（ＡＩＮ４５７）；抗ＩＬ２Ｒａ ｍＡｂ（ＨｕＭａｘ－ＴＡＣ）；抗ＩＬ５受容体ｍＡｂ；抗インテグリン受容体ｍＡｂ（ＭＤＸ－Ｏｌ８、ＣＮＴＯ９５）；抗ＩＰＩＯ潰瘍性大腸炎ｍＡｂ（ＭＤＸ－１１００）；抗ＬＬＹ抗体；ＢＭＳ－６６５１３；抗マンノース受容体／ｈＣＧβ ｍＡｂ（ＭＤＸ－１３０７）；抗メソテリンｄｓＦｖ－ＰＥ３８抱合体（ＣＡＴ－５００１）；抗ＰＤｌｍＡｂ（ＭＤＸ－１ １０６（ＯＮＯ－４５３８））；抗ＰＤＧＦＲα抗体（ＩＭＣ－３Ｇ３）；抗ＴＧＦβ ｍＡｂ（ＧＣ－１００８）；抗ＴＲＡＩＬ受容体－２ヒトｍＡｂ（ＨＧＳ－ＥＴＲ２）；抗ＴＷＥＡＫ ｍＡｂ；抗ＶＥＧＦＲ／Ｆｌｔ－１ ｍＡｂ；抗ＺＰ３ ｍＡｂ（ＨｕＭａｘ－ＺＰ３）；並びに配列番号８及び配列番号６の配列を含むアミロイドベータモノクローナル抗体（米国特許第７９０６６２５号明細書）が挙げられる。

方法及び医薬製剤に好適な抗体の例としては、表１に示す抗体が挙げられる。好適な抗体のその他の例としては、インフリキシマブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、ラニビズマブ、パリビズマブ、アバゴボマブ、アブシキシマブ、アクトクスマブ、アダリムマブ、アフェリモマブ、アフツズマブ、アラシズマブ、アラシズマブペゴル、ａｌｄ５１８、アレムツズマブ、アリロクマブ、アルツモマブ、アマツキシマブ、アナツモマブマフェナトクス、アンルキンズマブ、アポリズマブ、アルシツモマブ、アセリズマブ、アルチヌマブ（ａｌｔｉｎｕｍａｂ）、アトリズマブ、アトロリムマブ、バピヌズマブ、バシリキシマブ、バビツキシマブ、ベクツモマブ、ベリムマブ、ベンラリズマブ、ベルチリムマブ、ベシレソマブ、ベズロトクスマブ、ビシロマブ、ビバツズマブ、ビバツズマブメルタンシン、ブリナツモマブ、ブロソズマブ、ブレンツキシマブベドチン、ブリアキヌマブ、ブロダルマブ、カナキヌマブ、カンツズマブメルタンシン、カプラシズマブ、カプロマブペンデチド、カルルマブ、カツマキソマブ、ｃｃ４９、セデリズマブ、セルトリズマブペゴル、シタツズマブボガトクス、シクスツムマブ、クラザキズマブ、クレノリキシマブ、クリバツズマブテトラキセタン、コナツムマブ、クレネズマブ、ｃｒ６２６１、ダセツズマブ、ダクリズマブ、ダロツズマブ、ダラツムマブ、デムシズマブ、デノスマブ、デツモマブ、ドルリモマブアリトクス、ドロジツマブ、デュリゴツマブ、デュピルマブ、エクロメキシマブ、エクリズマブ、エドバコマブ、エドレコロマブ、エファリズマブ、エフングマブ、エロツズマブ、エルシリモマブ、エナバツズマブ、エンリモマブペゴル、エノキズマブ、エノチクマブ、エンシツキシマブ、エピツモマブシツキセタン、エピラツズマブ、エルリズマブ、エルツマキソマブ、エタラシズマブ、エトロリズマブ、エボロクマブ、エキシビビルマブ、ファノレソマブ、ファラリモマブ、ファルレツズマブ、ファシヌマブ、ｆｂｔａ０５、フェルビズマブ、フェザキヌマブ、フィクラツズマブ、フィギツムマブ、フランボツマブ、フォントリズマブ、フォラルマブ、フォラビルマブ、フレソリムマブ、フルラヌマブ、フツキシマブ、ガリキシマブ、ガニツマブ、ガンテネルマブ、ガビリモマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、ゲボキズマブ、ギレンツキシマブ、グレムバツムマブベドチン、ゴリムマブ、ゴミリキシマブ、ｇｓ６６２４、イバリズマブ、イブリツモマブチウキセタン、イクルクマブ、イゴボマブ、イムシロマブ、イムガツズマブ、インクラクマブ、インダツキシマブラブタンシン、インテツムマブ、イノリモマブ、イノツズマブオゾガマイシン、イピリムマブ、イラツムマブ、イトリズマブ、イキセキズマブ、ケリキシマブ、ラベツズマブ、レブリキズマブ、レマレソマブ、レルデリムマブ、レキサツムマブ、リビビルマブ、リゲリズマブ、リンツズマブ、リリルマブ、ロルボツズマブメルタンシン、ルカツムマブ、ルミリキシマブ、マパツズマブ、マスリモマブ、マブリリムマブ、マツズマブ、メポリズマブ、メテリムマブ、ミラツズマブ、ミンレツモマブ、ミツモマブ、モガムリズマブ、モロリムマブ、モタビズマブ、モキセツモマブパスドトクス、ムロモナブ－ｃｄ３、ナコロマブタフェナトクス、ナミルマブ、ナプツモマブエスタフェナトクス、ナルナツマブ、ナタリズマブ、ネバクマブ、ネシツムマブ、ネレリモマブ、ネスバクマブ、ニモツズマブ、ニボルマブ、ノフェツモマブメルペンタン、オカラツズマブ、オクレリズマブ、オデュリモマブ、オファツムマブ、オララツマブ、オロキズマブ、オマリズマブ、オナルツズマブ、オポルツズマブモナトクス、オレゴボマブ、オルチクマブ、オテリキシズマブ、オキセルマブ、オザネズマブ、オゾラリズマブ、パジバキシマブ、パニツムマブ、パノバクマブ、パルサツズマブ、パスコリズマブ、パテクリズマブ、パトリツマブ、ペムツモマブ、ペラキズマブ、ペルツズマブ、ペクセリズマブ、ピジリズマブ、ピンツモマブ、プラクルマブ、ポネズマブ、プリリキシマブ、プリツムマブ、ＰＲＯ１４０、クイリズマブ、ラコツモマブ、ラドレツマブ、ラフィビルマブ、ラムシルマブ、ラキシバクマブ、レガビルマブ、レスリズマブ、リロツムマブ、リツキシマブ、ロバツムマブ、ロレデュマブ、ロモソズマブ、ロンタリズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、サマリズマブ、サリルマブ、サツモマブペンデチデ、セクキヌマブ、セビルマブ、シブロツズマブ、シファリムマブ、シルツキシマブ、シムツズマブ、シプリズマブ、シルクマブ、ソラネズマブ、ソリトマブ、ソネプシズマブ、ソンツズマブ、スタムルマブ、スレソマブ、スビズマブ、タバルマブ、タカツズマブテトラキセタン、タドシズマブ、タリズマブ、タネズマブ、タプリツモマブパプトクス、テフィバズマブ、テリモマブアリトクス、テナツモマブ、テネリキシマブ、テプリズマブ、テプロツムマブ、テゼペルマブ、ＴＧＮ１４１２、トレメリムマブ、チシリムマブ、チルドラキズマブ、チガツズマブ、ＴＮＸ－６５０、トシリズマブ、トラリズマブ、トシツモマブ、トラロキヌマブ、トラスツズマブ、ＴＲＢＳ０７、トレガリズマブ、ツコツズマブセルモロイキン、ツビルマブ、ウブリツキシマブ、ウレルマブ、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ、バパリキシマブ、バテリズマブ、ベドリズマブ、ベルツズマブ、ベパリモマブ、ベセンクマブ、ビジリズマブ、ボロシキシマブ、ボルセツズマブマフォドチン、ボツムマブ、ザルツムマブ、ザノリムマブ、ザツキシマブ、ジラリムマブ、ゾリモマブアリトクスが挙げられる。

抗体としてはまた、アダリムマブ、ベバシズマブ、ブリナツモマブ、セツキシマブ、コナツムマブ、デノスマブ、エクリズマブ、エレヌマブ、エボロクマブ、インフリキシマブ、ナタリズマブ、パニツムマブ、リロツムマブ、リツキシマブ、ロモソズマブ、テゼペルマブ、及びトラスツズマブ、並びに表１から選択される抗体が挙げられる。

前述の記載に基づき、本明細書中に記載されるデバイス、システム、及び方法は、分析のための分子を含有する製品の試料の自動的な（又は実質的に自動的な）調製、及びその試料のアッセイの自動的な（又は実質的に自動的な）実施を容易にすることは認識されよう。本明細書で使用される場合、「自動的な」は、本開示を考慮して当業者によって理解されるであろうその通常の慣習的な意味を有する。これは、プロセス中に人の介入なしにプロセスを実行することを指す。自動プロセスは、１つ以上の機械によって実行されてもよい。本明細書で使用される場合、「実質的に自動的な」は、本開示を考慮して当業者によって理解されるであろうその通常の慣習的な意味を有する。これは、人が介入するよりも人の介入なしでより能動的なステップが実行されるプロセスを実行することを指す。追加の数値情報が重要であれば、プロセスステップの少なくとも５１％、６０％、７０％、８０％、又は９０％が人の介入なしで実行されるプロセスは、「実質的に自動的」であるとみなすことができる。例えば、１日の間に実行され、１日の間に０．５～１時間の「スタッフハンドタイム（ｓｔａｆｆ ｈａｎｄ ｔｉｍｅ）」を伴うプロセスは、実質的に自動であるとみなすことができる。本明細書で使用される場合、「連続的な」は、本開示を考慮して当業者によって理解されるであろうその通常の慣習的な意味を有する。これは、中断することなく、プロセスを少なくとも２サイクル実行することを指す。少なくとも２サイクルは、連続して行われても（例えば、互いに後に続いて実行されても）、重なって行われてもよい。したがって、調製及び分析を実質的にリアルタイムで実施することができる。換言すると、全プロセスを従来のプロセスにより現在可能とされているものよりもはるかに迅速に実施することができる。

さらに、本出願人は、本明細書に記載のシステム及び方法を使用して実施されるアッセイが、従来技術を使用して実施されるアッセイによってもたらされる結果に匹敵する結果をもたらし、それによって本明細書に記載のシステム及び方法の有効性が確認されることを見出した。具体的には、本出願人は、本明細書に記載のシステム及び方法と従来技術の両方を使用して、９つの異なる分子（分子ｍＡｂ１、ｍＡｂ２、ｍＡｂ３、ＢｉＴＥ１、ＢｉＴＥ２、二重特異性１、融合、二重特異性２、及びｘｍＡｂ）の各々を用いて、３つの異なるアッセイ（サイズ排除クロマトグラフィ（ＳＥＣ）アッセイ、カチオン交換クロマトグラフィ（ＣＥＸ）アッセイ、及び還元キャピラリー電気泳動（ｒＣＥ）アッセイ）を行った。試料親和性精製のための多くの従来技術（例えば、ＰｈｙＮｅｘｕｓ Ｐｈｙ Ｔｉｐｓ、ＧＥ ＰｒｅＤｉｃｔｏｒプレート、Ｈａｍｉｌｔｏｎ Ｌｅａｐオートサンプラー、及びＴｅｃａｎ－Ａｔｏｌｌ）が存在するが、本実施例ではＴｅｃａｎ－Ａｔｏｌｌ精製を従来技術として用いた。これは、従来技術の代表であると考えられる。図２０に示すように、本出願人は、２７の異なるアッセイのうちの２５の結果が、２５の異なるチェックマークによって示すように、従来技術を使用して実施された同じ２７のアッセイの結果に匹敵することを見出した。残りの２つのアッセイは、従来技術からの結果が得られなかったため、比較することができなかった。本明細書で使用される場合、「匹敵する」は、本開示を考慮して当業者によって理解されるであろうその通常の慣習的な意味を有する。例えば、本明細書では、開示したシステム及び方法によって実施された各種アッセイによって得られた主なピークは、従来の技術を使用して実施された各種アッセイによって得られた主なピークの５％以内であったことが観察されており、これは従来の技術に「匹敵する」結果が得られると理解されるであろう。

図２１及び図２２は、出願人の研究結果をサポートする結果のいくつかを示すグラフである。具体的には、図２１及び２２はそれぞれ、本明細書に記載のシステム及び方法、並びに従来の技術を使用して、二重特異性１分子を用いて実施されたｒＣＥアッセイの結果を示すグラフである。図示するように、本明細書に記載のシステム及び方法を使用し、二重特異性１分子を用いて実施されたｒＣＥアッセイは、１５．４５０のピークＡ値及び１９．６５８のピークＢ値を生じ、一方、従来の技術を使用し、二重特異性１分子を用いて実施されたｒＣＥアッセイは、１５．１８３のピークＡ値及び１９．４５８のピークＢ値を生じた。

本開示を実施するために本発明者が知る最良のモードを含む本開示の好適な実施形態が本明細書に記載されている。本明細書中に多くの例が示され、説明されているが、当業者であれば、各種実施形態の詳細は相互排他的である必要はないことは容易に理解するであろう。それどころか、本明細書の教示を読めば、当業者は、一実施形態の１つ以上の特徴を残りの実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせることができるであろう。さらに、図示した実施形態は単なる例示であり、本開示の範囲を限定するものと解釈すべきでないことも理解するであろう。本明細書に記載される全ての方法は、本明細書に別段の指示がない限り又は文脈と明確に矛盾しない限り、任意の適切な順序で実施することができる。本明細書に記載される一切の例又は例示的な語（例えば、「などの」）の使用は、本開示の例示的実施形態の態様又は実施形態をより明らかにすることを単に意図したものであり、本開示の範囲を限定するものではない。明細書中のいずれの語も、任意の請求されない要素を本開示の実施に必須であるものとして示すと解釈されるべきではない。

Claims (21)

1. （ａ）分子を含む試料を第１のバイアルから試料ループに自動的に移動させる工程と；
   （ｂ）一定量の前記試料を前記試料ループから第１のマルチポートバルブに移動させる工程と；
   （ｃ）前記一定量の試料を、前記第１のマルチポートバルブから、前記第１のマルチポートバルブに流体連結され、且つ前記第１のマルチポートバルブの下流に配置された第２のマルチポートバルブに移動させる工程と；
   （ｄ）前記第２のマルチポートバルブが第１の位置にあるときに、前記一定量の試料を前記第２のマルチポートバルブから捕捉カラムに移動させる工程と；
   （ｅ）前記捕捉カラム内の前記試料中の前記分子を捕捉し、それによって前記試料中の前記分子を前記試料のマトリックスから分離する工程と；
   （ｆ）溶出バッファ溶液をバッファ供給源から前記捕捉カラムに移動させ、それによって前記捕捉カラムによって捕捉された分子を溶出し、前記溶出バッファ溶液及び前記溶出分子を含む溶出／分子混合物を前記捕捉カラムの下流に配置された第２のバイアルに移動させる工程であって、前記第２のバイアルは、フロースルーバイアルを含む、工程と；
   （ｇ）前記分子の分析のために、前記第２のバイアル中の前記分子を分析デバイスに自動的に移動させる工程と
   を含む方法。
2. （ｆ）の後且つ（ｇ）の前に、
   前記第２のバイアル内の前記溶出分子を希釈して、前記分子の塩濃度を低下させることと；
   前記第２のマルチポートバルブを前記第１の位置とは異なる第２の位置に移動させることと；
   前記第２のマルチポートバルブが前記第２の位置にあるとき、前記溶出分子を脱塩カラムに、前記第１のマルチポートバルブ及び前記第２のマルチポートバルブを介して移動させ、前記溶出分子を前記脱塩カラムに適用し、それによって前記塩濃度を低下させることと
   をさらに含む、請求項１に記載の方法。
3. （ｆ）の後且つ（ｇ）の前に、
   反応停止試薬を前記第２のバイアル内の前記溶出分子に添加することと；
   前記反応停止試薬及び前記溶出分子を前記第２のバイアルから反応コイルに移動させることと；
   前記溶出分子を前記反応停止試薬とともに前記反応コイル内でインキュベートし、それによって前記分子の反応を停止させることと；
   前記反応停止させた分子を前記反応コイルから前記第２のバイアルに移動させることと
   をさらに含む、請求項１又は２に記載の方法。
4. （ｇ）は、
   変性試薬及び還元試薬を前記第２のバイアルに添加することと；
   前記溶出分子、前記変性試薬、及び前記還元試薬を前記第２のバイアルから第１の反応コイルに前記第１のマルチポートバルブを介して移動させることと；
   前記溶出分子を前記変性試薬及び前記還元試薬とともに前記反応コイル内でインキュベートして、変性及び還元された分子を生じさせることと；
   前記変性及び還元された分子を第３のバイアルに移動させることであって、前記第３のバイアルもまたフロースルーバイアルを含む、移動させることと；
   前記第３のバイアル内の前記変性及び還元された分子を前記分析デバイスに移動させることと
   を含む、請求項１に記載の方法。
5. 前記第３のバイアル内の前記変性及び還元された分子を前記分析デバイスに移動させる前に、
   アルキル化剤を前記第３のバイアルに添加することと；
   前記変性及び還元された分子と前記アルキル化試薬とを前記第３のバイアルから前記第１の反応コイルに前記第１のマルチポートバルブを介して移動させることと；
   前記変性及び還元された分子を前記アルキル化試薬とともに前記第１の反応コイル内でインキュベートし、それによって前記変性及び還元された分子をアルキル化することと；
   前記変性、還元及びアルキル化された分子を前記第１の反応コイルから前記第２のバイアルに移動させることと；
   前記変性、還元及びアルキル化された分子を脱塩カラムに、前記第１のマルチポートバルブ及び前記第２のマルチポートバルブを介して移動させることと；
   前記変性、還元及びアルキル化された分子を前記脱塩カラムに適用し、それによって脱塩分子を生じさせることと；
   前記脱塩分子を前記第２のバイアルに移動させることと；
   前記脱塩分子を酵素と混合することと；
   前記脱塩分子及び前記酵素を第２の反応コイルに移動させることと；
   前記脱塩分子及び前記酵素を前記第２の反応コイル内でインキュベートし、それによって前記分子を消化することと；
   前記消化された分子を前記第３のバイアルに移動させることと；
   前記消化分子の分析のために、前記消化分子を前記第３のバイアルから前記分析デバイスに移動させる工程と
   をさらに含む、請求項４に記載の方法。
6. （ａ）は、前記試料を前記第１のバイアルから前記試料ループに針で自動的に移動させることを含み、（ｇ）は、前記分子の分析のために、前記第２のバイアル内の前記分子を前記分析デバイスに針で自動的に移動させることを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
7. （ａ）～（ｇ）の１つ以上は、コントローラを使用して自動的に実施される、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
8. （ａ）～（ｇ）は、閉鎖システム内で実施される、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
9. 前記分子はポリペプチドを含み、前記捕捉カラムはポリペプチド結合カラムを含み、（ｅ）は、前記試料中の前記ポリペプチドを前記ポリペプチド結合カラムに結合させ、それによって前記試料中の前記ポリペプチドを前記試料のマトリックスから分離することを含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
10. 分子を含む試料を収容するようになされた第１のバイアルと；
    前記第１のバイアルから前記試料を受容するようになされた試料ループと；
    前記試料ループに流体連結され、第１のマルチポートバルブの第１のポートを介して一定量の前記試料を得るように配置された第１のマルチポートバルブと；
    前記第１のマルチポートバルブに流体連結され、且つ前記第１のマルチポートバルブの下流に配置された第２のマルチポートバルブと；
    前記第２のマルチポートバルブが第１の位置にあるときに、前記第２のマルチポートバルブに流体連結されるように配置され、前記試料から前記分子を捕捉するように構成された捕捉カラムと；
    前記捕捉カラムの下流に配置された第２のバイアルと；
    前記第１のマルチポートバルブに流体連結され、前記第２のマルチポートバルブが前記第１の位置にあるとき、前記第２のマルチポートバルブを介して前記第２のバイアル及び前記捕捉カラムに溶出バッファ溶液を、前記溶出バッファ溶液が前記捕捉カラムから前記分子の全部を実質的に溶出するようになされるように、供給するように配置されたバッファ供給源と；
    分析デバイスと；
    前記第１のバイアルから前記試料を得るように構成され、かつ、前記第２のバイアル内の前記分子を前記第２のバイアルから前記分析デバイスに自動的に移動させるように構成された、自動サンプリングシステムと；
    を含み、
    前記第２のバイアルは、前記溶出／分子混合物から前記溶出バッファ溶液を前記第２のバイアルの外へ濾過し、それによって前記第２のバイアル内に前記溶出された分子のみを残すように構成されたフロースルーバイアルを含む、
    閉鎖システム。
11. 前記自動サンプリングシステムは、前記試料を前記第１のバイアルから自動的に取り出し、前記試料を前記試料ループに入れるように構成された針を含む、請求項１０に記載の閉鎖システム。
12. 前記第１のマルチポートバルブによって得られる前記一定量の試料を制御するために、前記試料ループ及び前記針に流体連結された計量装置をさらに含む、請求項１１に記載の閉鎖システム。
13. 前記分子はポリペプチドを含み、前記捕捉カラムはポリペプチド結合カラムを含む、請求項１０～１２のいずれか一項に記載の閉鎖システム。
14. 前記ポリペプチド結合カラムは、前記捕捉カラムから実質的に全ての前記分子を溶出する前に前記ポリペプチドを濃縮するようにさらに構成されている、請求項１３に記載の閉鎖システム。
15. 前記第２のマルチポートバルブが前記第１の位置とは異なる第２の位置にあるときに、前記第２のマルチポートバルブに流体連結されるように配置された脱塩カラムをさらに含み、前記第２のマルチポートバルブが第２の位置にあるとき、前記脱塩カラムは前記第２のバイアル内の前記溶出分子を受容するように配置され、且つ前記溶出分子の塩濃度を低下させるように構成されている、請求項１０～１４のいずれか一項に記載の閉鎖システム。
16. 前記フロースルーバイアルは、ベースと、前記ベースに連結され、且つ前記ベースから外向きに延びるガターと、前記ベースに形成された入口ポートと、前記ガターに形成された出口ポートとを含み、前記入口ポートは入口軸に沿って伸び、前記出口ポートは出口軸に沿って伸びている、請求項１０～１５のいずれか一項に記載の閉鎖システム。
17. 前記フロースルーバイアルは、前記ベースと前記ガターとの間に配置されたリップをさらに含み、前記リップは前記フロースルーバイアルを流れる流体の表面張力を低下させるように構成されている、請求項１６に記載の閉鎖システム。
18. 前記ベースは、前記入口軸及び前記出口軸の各々に対して傾斜している縦軸に沿って延びている、請求項１６又は１７に記載の閉鎖システム。
19. 前記ガターは竪樋を含み、前記出口ポートは前記竪樋に形成されている、請求項１６～１８のいずれか一項に記載の閉鎖システム。
20. 前記フロースルーバイアルを受容し保持するように構成されたバイアルホルダをさらに含み、前記バイアルホルダは、複数のフロースルーバイアルを受容し保持するように構成された複数のレセプタクルを含む、請求項１６～１９のいずれか一項に記載の閉鎖システム。
21. 前記出口軸が、入口軸に対して傾斜している、請求項１６～２０のいずれか一項に記載の閉鎖システム。

Images