CN111537737B - 降钙素原与c-反应蛋白联合检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种降钙素原与C‑反应蛋白联合检测试剂盒,包括:盒体、制冷机构、控制系统、试剂条、第一探测物、第二探测物、反应缓冲液,盒体沿长度方向分隔为依次设置的第一盒体、第二盒体、第三盒体,试剂条、第一探测物和第二探测物均存放于第一盒体内,反应缓冲液,存放于第三盒体内,并且第一探测物内含有生物素标记的PCT抗体络合物和荧光标记的Anti‑chicken IgY抗体络合物,第二探测物内含有荧光标记的PCT抗体络合物,反应缓冲液内含有荧光标记的CRP抗体络合物和荧光标记的Anti‑chicken IgY抗体络合物。本发明提高了PCT及CRP同时检测时的精密度,改善了检测试剂产品的稳定性。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域。更具体地说,本发明涉及一种降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂盒。
背景技术
降钙素原与C-反应蛋白联合(PCT/CRP)检测对于炎症综合判断具有一定的临床价值。
现有降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂盒包括盒体、设于盒体内的反应缓冲液、试剂条,其中,试剂条包括垫卡、铺设于垫卡上的硝酸纤维素膜、依次间隔设于硝酸纤维素膜上的加样垫、结合垫、质控线、第一检测线、第二检测线以及吸收垫,结合垫上包被有荧光标记的PCT抗体络合物、生物素标记的PCT抗体络合物、荧光标记的CRP抗体络合物以及荧光标记的Anti-chicken IgY抗体络合物。需要检测时,先将待测样本与反应缓冲液均匀混合制得混合液,然后加在试剂条的加样垫上,混合液依次从加样垫流至吸收垫后,使用检测设备对反应后的试剂条上的第一检测线、第二检测线进行检测,即可得出待测样本中PCT以及CRP浓度。
当待测样本流经结合垫时,样本中的抗原与包被的荧光标记的PCT抗体络合物、生物素标记的PCT抗体络合物、荧光标记的CRP抗体络合物和质控络合物反应时间短、可能反应不完全,导致精密度较差;并且降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂盒中的反应缓冲液最适的保存条件为2-8℃,试剂条最适保存条件是18-28℃且空气湿度<10%,而现有技术的盒体只是简单存放反应缓冲液、试剂条的盒子,在运输过程中无法保证反应缓冲液和试剂条的保存环境。
发明内容
本发明的一个目的是解决至少上述问题,并提供至少后面将说明的优点。
本发明还有一个目的是提供一种降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂盒,提高了PCT及CRP同时检测时的精密度,提高了检测试剂的稳定性。
为了实现根据本发明的这些目的和其它优点,提供了一种降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂盒,包括:
盒体,其为长方体形,所述盒体沿长度方向分隔为依次设置的第一盒体、第二盒体、第三盒体,其中,所述第一盒体上盖设第一盒盖;所述第二盒体滑动且密封设有第二盒盖,所述第二盒盖为含铁类的材质制成,所述第二盒体中部敷设有筛网,所述筛网将所述第二盒体分隔为位于所述筛网下方的第一空腔,位于所述筛网上方的第二空腔,所述筛网与所述第二盒盖之间固接有弹簧,当所述弹簧为自然状态时,所述第二盒盖与所述第二盒体密封固接,所述第二盒体其中相对两侧壁的顶端向外延伸设有挡板,所述挡板顶端固接有电磁铁,其中,所述第一空腔内填充有干燥剂,所述第一盒体与所述第二盒体共同的侧壁贯穿设有多个直径小于干燥剂颗粒的穿孔;所述第三盒体上盖设有第三盒盖;
制冷机构,其包括设于所述第一盒体内的第一温度传感器、设于所述第二盒体内的湿度传感器、设于所述第三盒体内的第二温度传感器、嵌于所述第一盒体与所述第二盒体共同侧壁内且制热端朝向所述第二盒体的第一半导体制冷芯片、嵌于所述第三盒体与所述第二盒体共同侧壁内且制热端朝向所述第二盒体侧壁的第二半导体制冷芯片、制冷端固接于所述第三盒体外侧壁的第三半导体制冷芯片;
控制系统,其设于所述盒体外侧,所述控制系统与所述第一温度传感器、所述第一半导体制冷芯片、所述湿度传感器、所述第二温度传感器、所述第二半导体制冷芯片、所述第三半导体制冷芯片及所述电磁铁连接,其中,所述控制系统设置为:当所述第一温度传感器检测所述第一盒体内的温度高于28℃时,所述控制系统控制所述第一半导体制冷芯片对所述第一盒体制冷;当所述湿度传感器检测所述第一盒体和所述第二盒体内的空气湿度大于10%时,所述控制系统控制所述第二半导体制冷芯片对所述第二盒体制热,同时所述控制系统控制所述电磁铁通电以使所述第二盒盖脱离所述第二盒体;当所述第二温度传感器检测所述第三盒体内的温度高于8℃时,所述控制系统控制所述第三半导体制冷芯片制冷,当所述第二温度传感器检测所述第三盒体内的温度低于2℃时,所述控制系统控制所述第三半导体制冷芯片的制冷端制热;
试剂条、第一探测物和第二探测物,试剂条、第一探测物和第二探测物均存放于所述第一盒体内,其中,所述第一探测物内含有生物素标记的PCT抗体络合物和荧光标记的Anti-chicken IgY抗体络合物,所述第二探测物内含有荧光标记的PCT抗体络合物;
反应缓冲液,其内含有荧光标记的CRP抗体络合物和荧光标记的Anti-chickenIgY抗体络合物,存放于所述第三盒体内。
优选的是,所述试剂条包括垫卡、铺设于所述垫卡上的硝酸纤维素膜、依次间隔设于所述硝酸纤维素膜上的加样垫、质控线、第一检测线、第二检测线、第三检测线以及吸收垫。
优选的是,所述反应缓冲液的pH为7.4,组分为:10mM PBS、200-600mM NaCl、0.01-0.5%NaN3、0.1-3%Tween 20、0.01-0.5%IGEPAL CA-630、1-10ug/mL荧光标记的CRP抗体络合物、0.03-3ug/mL荧光标记的Anti-chicken IgY抗体络合物,其中,所述反应缓冲液体积不小于150μL。
优选的是,所述第一探测物是由pH为7.4的第一液体冷冻干燥制得,所述第一液体的组分为:10mM PBS、0.05-10%BSA、0.05-5%Sucrose、0.01-10ug/mL生物素标记的PCT抗体络合物、0.01-10ug/mL荧光标记的Anti-chicken IgY抗体络合物;
所述第二探测物是由pH为7.4的第二液体冷冻干燥制得,所述第二液体的组分为:10mM PBS、0.05-10%BSA、0.05-5%Sucrose、2-20ug/mL荧光标记的PCT抗体络合物。
优选的是,所述盒体外侧设有容纳腔,所述控制系统设于所述容纳腔内。
优选的是,所述第一盒体与所述第二盒体共同侧壁靠近所述第一盒体的一侧为保温材料,所述第二盒体与所述第三盒体共同侧壁靠近所述第二盒体的一侧为散热材料,远离所述第二盒体的一侧为保温材料,所述第三盒体其余侧壁为保温材料。
优选的是,所述第三半导体制冷芯片制热端固接有散热板。
本发明至少包括以下有益效果:
第一、本发明将包被在试剂条的结合垫上的荧光标记的PCT抗体络合物、生物素标记的PCT抗体络合物以及荧光标记的Anti-chicken IgY抗体络合物做成探测物,将荧光标记的CRP抗体络合物和荧光标记的Anti-chicken IgY抗体络合物加入反应缓冲液中。在检测待测样本中的PCT以及CRP浓度时,先将反应缓冲液与探测物充分混合获得混合试剂,再将待测样本加入混合试剂中,使其充分混合获得样本混合液,再将样本混合液加入到试剂条上,通过此种方式能够让待测样本与荧光标记的PCT抗体络合物、生物素标记的PCT抗体络合物、荧光标记的CRP抗体络合物以及荧光标记的Anti-chicken IgY抗体络合物充分混合,提高了PCT及CRP同时检测时的精密度。
第二、试剂条、第一探测物和第二探测物均存放于第一盒体内,反应缓冲液存放于第三盒体内,当第一温度传感器检测到第一盒体内的温度高于28℃时,控制系统控制第一半导体制冷芯片对第一盒体制冷,当第二温度传感器检测第三盒体内的温度高于8℃时,控制系统控制第三半导体制冷芯片制冷,当第二温度传感器检测第三盒体内的温度低于2℃时,控制系统控制第三半导体制冷芯片的制冷端制热。本发明通过控制系统控制制冷机构,使盒体内的试剂均处于适宜的存放温度内,提高了检测试剂的稳定性。
第三、当湿度传感器检测第一盒体和第二盒体内的空气湿度大于10%时,控制系统控制第二半导体制冷芯片对第二盒体制热,同时控制系统控制电磁铁通电以使第二盒盖脱离第二盒体,从而能够使第二盒体内的水分受热蒸发,以使第一盒体和第二盒体内的湿度降到10%以下,并且干燥剂能够重复多次使用,节省材料。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现,部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
附图说明
图1为本发明的其中一个技术方案所述检测试剂中所述的探测物质与所述反应缓冲液的示意图;
图2为本发明的其中一个技术方案所述的试纸条的结构示意图;
图3为本发明的其中一个技术方案所述盒体剖面图;
图4为本发明的其中一个技术方案的实验系统PCT血清检测值与对照系统PCT血清检测值的相关图;
图5为本发明的其中一个技术方案的实验系统PCT血浆检测值与实验系统PCT血清检测值的相关图;
图6为本发明的其中一个技术方案的实验系统PCT全血检测值与实验系统PCT血清检测值的相关图;
图7为本发明的其中一个技术方案的实验系统CRP血清检测值与对照系统CRP血清检测值的相关图;
图8为本发明的其中一个技术方案的实验系统CRP血浆检测值与实验系统CRP血清检测值的相关图;
图9为本发明的其中一个技术方案的实验系统CRP全血检测值与实验系统CRP血清检测值的相关图。
附图标记:反应缓冲液1、第一探测物2、第二探测物3、垫卡4、硝酸纤维素膜5、加样垫6、质控线7、第一检测线8、第二检测线9、吸收垫10、盒体11、第一盒体12、第一盒盖13、第二盒体14、第二盒盖15、筛网16、第一空腔17、第二空腔18、弹簧19、挡板20、电磁铁21、穿孔22、第三盒体23、第三盒盖24、制冷机构25、第一温度传感器26、湿度传感器27、第二温度传感器28、第一半导体制冷芯片29、第二半导体制冷芯片30、第三半导体制冷芯片31、控制系统32、容纳腔33、散热板34、第三检测线35。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明,以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
需要说明的是,下述实施方案中所述实验方法,如无特殊说明,均为常规方法,所述试剂和材料,如无特殊说明,均可从商业途径获得;在本发明的描述中,指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系,仅是为了便于描述本发明和简化描述,并不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作,因此不能理解为对本发明的限制。
如图1-3所示,本发明提供了一种降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂盒,包括:盒体11,其为长方体形,所述盒体11沿长度方向分隔为依次设置的第一盒体12、第二盒体14、第三盒体23,其中,所述第一盒体12上盖设第一盒盖13;所述第二盒体14滑动且密封设有第二盒盖15,所述第二盒盖15为含铁类的材质制成,所述第二盒体14中部敷设有筛网16,所述筛网16将所述第二盒体14分隔为位于所述筛网16下方的第一空腔17,位于所述筛网16上方的第二空腔18,所述筛网16与所述第二盒盖15之间固接有弹簧19,当所述弹簧19为自然状态时,所述第二盒盖15与所述第二盒体14密封固接,所述第二盒体14其中相对两侧壁的顶端向外延伸设有挡板20,所述挡板20顶端固接有电磁铁21,其中,所述第一空腔17内填充有干燥剂,所述第一盒体12与所述第二盒体14共同的侧壁贯穿设有多个直径小于干燥剂颗粒的穿孔22;所述第三盒体23上盖设有第三盒盖24;
制冷机构25,其包括设于所述第一盒体12内的第一温度传感器26、设于所述第二盒体14内的湿度传感器27、设于所述第三盒体23内的第二温度传感器28、嵌于所述第一盒体12与所述第二盒体14共同侧壁内且制热端朝向所述第二盒体14的第一半导体制冷芯片29、嵌于所述第三盒体23与所述第二盒体14共同侧壁内且制热端朝向所述第二盒体14侧壁的第二半导体制冷芯片30、制冷端固接于所述第三盒体23外侧壁的第三半导体制冷芯片31;
控制系统32,其设于所述盒体11外侧,所述控制系统32与所述第一温度传感器26、所述第一半导体制冷芯片29、所述湿度传感器27、所述第二温度传感器28、所述第二半导体制冷芯片30、所述第三半导体制冷芯片31及所述电磁铁21连接,其中,所述控制系统32设置为:当所述第一温度传感器26检测所述第一盒体12内的温度高于28℃时,所述控制系统32控制所述第一半导体制冷芯片29对所述第一盒体12制冷;当所述湿度传感器27检测所述第一盒体12和所述第二盒体14内的空气湿度大于10%时,所述控制系统32控制所述第二半导体制冷芯片30对所述第二盒体14制热,同时所述控制系统32控制所述电磁铁21通电以使所述第二盒盖15脱离所述第二盒体14;当所述第二温度传感器28检测所述第三盒体23内的温度高于8℃时,所述控制系统32控制所述第三半导体制冷芯片31制冷,当所述第二温度传感器28检测所述第三盒体23内的温度低于2℃时,所述控制系统32控制所述第三半导体制冷芯片31的制冷端制热;
试剂条、第一探测物2和第二探测物3,试剂条、第一探测物2和第二探测物3均存放于所述第一盒体12内,其中,所述第一探测物2内含有生物素标记的PCT抗体络合物和荧光标记的Anti-chicken IgY抗体络合物,所述第二探测物3内含有荧光标记的PCT抗体络合物;
反应缓冲液1,其内含有荧光标记的CRP抗体络合物和荧光标记的Anti-chickenIgY抗体络合物,存放于所述第三盒体23内。
在这种技术方案中,降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂盒包括盒体11、试剂条、第一探测物2、第二探测物3、反应缓冲液1、制冷机构25、控制系统32,其中,第一探测物2、第二探测物3、反应缓冲液1均装在相对应的试管内,第一探测物2内含有生物素标记的PCT抗体络合物和荧光标记的Anti-chicken IgY抗体络合物,第二探测物3内含有荧光标记的PCT抗体络合物,反应缓冲液1含有荧光标记的CRP抗体络合物和荧光标记的Anti-chicken IgY抗体络合物。盒体沿长度方向分隔为依次设置的第一盒体12、第二盒体14、第三盒体23。第一盒体12内设有与控制系统32电连接的第一温度传感器26;第一盒体12与第二盒体14共同侧壁内嵌有与控制系统32电连接的第一半导体制冷芯片29,第一半导体制冷芯片29制冷端朝向第一盒体12,制热端朝向第二盒体14;第二盒体14内设有与控制系统32电连接的湿度传感器27;第三盒体23与第二盒体14共同侧壁内嵌有与控制系统32电连接的第二半导体制冷芯片30,第二半导体制冷芯片30制热端朝向第二盒体14,制热端朝向第三盒体23;第三盒体23内设有与控制系统32电连接的第二温度传感器28,并且外侧壁上固设有与控制系统32电连接的第三半导体制冷芯片31。第二盒体14内设置的筛网16将第二盒体14分为位于筛网16下方的第一空腔17,位于筛网16上方的第二空腔18,第一空腔17内放置有干燥剂,由于第一盒体12与第二盒体14的共同侧壁贯穿设有多个直径小于干燥剂颗粒的穿孔22,所以第二盒体14与第一盒体12连通,能够通过干燥剂吸收第一盒体12内的水分,从而使第一盒体12内保持干燥。在第二空腔18内设有弹簧19,弹簧19一端连接筛网16,另一端连接第二盒盖15,弹簧19为自然状态时,第二盒盖15与第二盒体14密封固接,即弹簧19处于自然状态的长度不大于第二空腔18的高度,当第二盒盖15脱离第二盒体14时,弹簧19会产生将第二盒盖15拉回第二盒体14内的拉力,第二盒盖15上空设有与控制系统32电连接的电磁铁21,当电磁铁21通电时,则会产生吸力使第二盒盖15脱离第二盒体14,当电磁铁21断电时,弹簧19则会将第二盒盖15拉回第二盒体14内。
在使用过程中,试剂条、第一探测物2和第二探测物3均存放于第一盒体12内,反应缓冲液1存放于第三盒体23内。通过第二盒体14内存放的干燥剂控制第一盒体12内的水分不大于10%,并通过湿度传感器27检测,当湿度超过10%时,湿度传感器27会将电信号传递给控制系统32,控制系统32控制第二半导体制冷芯片30的制热端向第二盒体14加热,并通过控制电磁铁21通电使第二盒盖15脱离第二盒体14,则可使第二盒体14内的水分在加热的情况下蒸发,其中,加热温度32-40℃最佳。当空气湿度小于10%时,控制系统32控制电磁铁21断电,第二盒盖15密封第二盒体14,并且同时第二半导体制冷芯片30停止加热。当第二半导体制冷芯片30在加热时,会将部分热量带入第一盒体12内,当第一温度传感器26检测到第一盒体12内的温度大于28℃时,控制系统32则会控制第一半导体制冷芯片29制冷,从而维持第一盒体12内的温度,在其他情况下,当第一盒体12内的温度大于28℃时,也会给第一盒体12进行制冷的过程。第三盒体23外侧的第三半导体制冷芯片31则起到维持第三盒体23内温度稳定的作用,当第二温度传感器28检测第三盒体23内的温度高于8℃时,控制系统32控制第三半导体制冷芯片31制冷,当第二温度传感器28检测第三盒体23内的温度低于2℃时,控制系统32控制第三半导体制冷芯片31的制冷端制热。
采用这种技术方案,将包被在试剂条的结合垫上的荧光标记的PCT抗体络合物、生物素标记的PCT抗体络合物以及荧光标记的Anti-chicken IgY抗体络合物做成探测物,将荧光标记的CRP抗体络合物和荧光标记的Anti-chicken IgY抗体络合物加入反应缓冲液1中。在检测待测样本中的PCT以及CRP浓度时,先将反应缓冲液1与探测物充分混合获得混合试剂,再将待测样本加入混合试剂中,使其充分混合获得样本混合液,再将样本混合液加入到试剂条上,通过此种方式能够让待测样本与荧光标记的PCT抗体络合物、生物素标记的PCT抗体络合物、荧光标记的CRP抗体络合物以及荧光标记的Anti-chicken IgY抗体络合物充分混合,提高了PCT及CRP同时检测时的精密度;通过控制系统32控制制冷机构25,使盒体11内的试剂均处于适宜的存放环境条件内,提高了检测试剂的稳定性;通过加热给干燥剂脱水,使干燥剂能够重复多次使用,节省材料。
在另一种技术方案中,所述试剂条包括垫卡4、铺设于所述垫卡4上的硝酸纤维素膜5、依次间隔设于所述硝酸纤维素膜5上的加样垫6、质控线7、第一检测线8、第二检测线9、第三检测线35以及吸收垫10,采用这种技术方案,因为将探测物单独做成了固体,所以去掉了试剂条上面的结合垫。
在另一种技术方案中,所述盒体11外侧设有容纳腔33,所述控制系统32设于所述容纳腔33内,起到保护控制系统32的作用。
在另一种技术方案中,所述第一盒体12与所述第二盒体14共同侧壁与所述第一半导体制冷芯片29制热端接触的材质为散热材料,所述第二盒体14与所述第三盒体23共同侧壁与所述第二半导体制冷芯片30制热端接触的材质为散热材料。采用这种技术方案,有利于保护第一半导体制冷芯片29与第二半导体制冷芯片30。
示例性的,第一盒体12与第二盒体14共同侧壁靠近第一盒体12的一侧为保温材料,第二盒体14与第三盒体23共同侧壁远离第二盒体14的一侧为保温材料,第三盒体23其余侧壁也为保温材料。
在另一种技术方案中,所述第三半导体制冷芯片31制热端固接有散热板34,便于第三半导体制冷芯片31散热。
<实施例1>
一种降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂盒试剂条制备方法,包括以下步骤:
S1、筛选抗体、抗原:购买CRP检测抗体、CRP抗原、链霉亲和素和chicken IgY并对其进行配对实验,筛选出特异性高、亲和力好的CRP检测抗体、CRP抗原、链霉亲和素和chicken IgY,用包被稀释液分别将CRP检测抗体、链霉亲和素、chicken IgY和CRP抗原调整至0.01-5mg/mL、1-10mg/mL、0.01-5mg/mL、0.01-5mg/mL;
S2、抗体、抗原包被:准备好硝酸纤维素膜5并正确置于贴膜设备上,通过贴膜设备将硝酸纤维素膜5粘贴在垫卡4上。用喷涂设备将使用包被稀释液调整后的chicken IgY喷涂在硝酸纤维素膜5上形成控制线,将使用包被稀释液调整后的CRP检测抗体、链霉亲和素喷涂在硝酸纤维素膜5上形成第一检测线8,将使用包被稀释液调整后的链霉亲和素喷涂在硝酸纤维素膜5上形成第二检测线9,将使用包被稀释液调整后的CRP抗原喷涂在硝酸纤维素膜5上形成第三检测线35,即可获得包被后试剂条,其中,喷涂设备喷涂量为1μL/cm,喷涂速度为9cm/s,质控线7、第一检测线8、第二检测线9和第三检测线35依次间隔1-2mm。然后将包被后试剂条置于烘箱中,在37℃下烘烤30-120min后取出;
S3、试剂条贴膜及切割;加样垫6与吸收垫10粘贴在硝酸纤维素膜5上并且设置在质控线7、第一检测线8、第二检测线9、第三检测线35和吸收垫10的两侧,加样垫6粘贴在垫卡4较宽的一侧面,并且位于加样垫6下方的硝酸纤维素膜5与垫卡4长边平行的边的长度为2-3mm,吸收垫10粘贴在垫卡4较窄的一侧面,并且位于吸收垫10下方的硝酸纤维素膜5的端部与垫卡4设有吸收垫10一端的距离小于1-2mm。粘贴好吸收垫10以及加样垫6后,使用切割设备将试剂条切割成宽度为3.9mm的试剂条,从而获得切割好的试剂条,将切割好的试剂条放置在压壳设备上压牢,获得试剂条。
<实施例2>
一种降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂盒,反应缓冲液1的pH为7.4,组分为:10mM PBS、200mM NaCl、0.01%NaN3、0.1%Tween 20、0.01%IGEPAL CA-630、1ug/mL荧光标记的CRP抗体络合物、0.03ug/mL荧光标记的Anti-chicken IgY抗体络合物;第一探测物2是由pH为7.4的第一液体冷冻干燥制得,第一液体的组分为:10mM PBS、0.05%BSA、0.05%Sucrose、0.01ug/mL生物素标记的PCT抗体络合物、0.01ug/mL荧光标记的Anti-chickenIgY抗体络合物;第二探测物3是由pH为7.4的第二液体冷冻干燥制得,第二液体的组分为:10mM PBS、0.05%BSA、0.05%Sucrose、2ug/mL荧光标记的PCT抗体络合物;试剂条包括垫卡4、铺设于垫卡4上的硝酸纤维素膜5、依次间隔设于硝酸纤维素膜5上的加样垫6、质控线7、第一检测线8、第二检测线9、第三检测线35以及吸收垫10。
<实施例3>
一种降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂盒,反应缓冲液1的pH为7.4,组分为:10mM PBS、400mM NaCl、0.25%NaN3、1.5%Tween 20、0.25%IGEPAL CA-630、5ug/mL荧光标记的CRP抗体络合物、1.5ug/mL荧光标记的Anti-chicken IgY抗体络合物;第一探测物2是由pH为7.4的第一液体冷冻干燥制得,第一液体的组分为:10mM PBS、5%BSA、2.5%Sucrose、5ug/mL生物素标记的PCT抗体络合物、5ug/mL荧光标记的Anti-chicken IgY抗体络合物;第二探测物3是由pH为7.4的第二液体冷冻干燥制得,第二液体的组分为:10mMPBS、5%BSA、2.5%Sucrose、11ug/mL荧光标记的PCT抗体络合物;试剂条包括垫卡4、铺设于垫卡4上的硝酸纤维素膜5、依次间隔设于硝酸纤维素膜5上的加样垫6、质控线7、第一检测线8、第二检测线9、第三检测线35以及吸收垫10。
<实施例4>
一种降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂盒,反应缓冲液1的pH为7.4,组分为:10mM PBS、600mM NaCl、0.5%NaN3、3%Tween 20、0.5%IGEPAL CA-630、10ug/mL荧光标记的CRP抗体络合物、3ug/mL荧光标记的Anti-chicken IgY抗体络合物;第一探测物2是由pH为7.4的第一液体冷冻干燥制得,第一液体的组分为:10mM PBS、10%BSA、5%Sucrose、10ug/mL生物素标记的PCT抗体络合物、10ug/mL荧光标记的Anti-chicken IgY抗体络合物;第二探测物3是由pH为7.4的第二液体冷冻干燥制得,第二液体的组分为:10mM PBS、10%BSA、5%Sucrose、20ug/mL荧光标记的PCT抗体络合物;试剂条包括垫卡4、铺设于垫卡4上的硝酸纤维素膜5、依次间隔设于硝酸纤维素膜5上的加样垫6、质控线7、第一检测线8、第二检测线9、第三检测线35以及吸收垫10。
<实施例5>
一种降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂盒,实施例4中的反应缓冲液1、第一探测物2和第二探测物3得制备方法,具体步骤如下:
SA、配置反应缓冲液1;在pH为7.4浓度为10mM的PBS中加入NaCl、NaN3、Tween 20、IGEPAL CA-630、荧光标记的CRP抗体络合物、荧光标记的Anti-chicken IgY抗体络合物,至NaCl浓度为600mM,NaN3百分浓度为0.5%,Tween 20百分浓度为3%,IGEPAL CA-630百分浓度为0.5%,荧光标记的CRP抗体络合物的浓度为10ug/mL、荧光标记的Anti-chicken IgY抗体络合物的浓度为3ug/mL,待以上组分完全溶解后,进行过滤获得反应缓冲液1,将反应缓冲液1在2-8°的温度下保存;
SB、制备第一探测物2和第二探测物3:
SB101、配置第一液体:在pH为7.4浓度为10mM的PBS中加入BSA、Sucrose、生物素标记的PCT抗体络合物、荧光标记的Anti-chicken IgY抗体络合物,至BSA百分浓度为10%,Sucrose百分浓度为5%,生物素标记的PCT抗体络合物浓度为10ug/mL,荧光标记的Anti-chicken IgY抗体络合物浓度为10ug/mL;
SB102、配置第二液体:在pH为7.4浓度为10mM的PBS中加入BSA、Sucrose、荧光标记的PCT抗体络合物,至BSA百分浓度为10%,Sucrose百分浓度为5%,荧光标记的PCT抗体络合物浓度为20ug/mL;
SB103、第一液体和第二液体有效性检测:取0.01-1μg第一液体和0.1-3μg第二液体放入同一试管中混合后,再放入适量的反应缓冲液1以及质控品,确认其检测结果是否与预期值相近,若相近则证明制备的第一液体和第二液体有效;
SB104、第一液体和第二液体的分装及冻干:在液体分装机上安装20-80μL移液头,在液体分装机上输入分装次数后开始分装,将第一液体和第二液体分别分装至相应的试管中,通过计算分装后的试管重量和分装前空试管重量的差值对分装的第一液体和第二液体体积进行检测。将分装得到的20-80μL第一液体和20-80μL第二液体分别转移至相对应的不锈钢容器中,然后拿至冷冻干燥机中进行冷冻干燥,制成球状的第一探测物2和第二探测物3,将第一探测物2和第二探测物3放置在18-28℃,湿度<10%条件下保存。
<实施例6>
一种降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂盒中的试剂对降钙素原与C-反应蛋白进行检测的使用方法,包括以下步骤:
SC、将试剂条水平放置;
SD、取反应缓冲液1 150μL与探测物混合,获得混合试剂;
SE、取35μL待测样本与混合试剂均匀混合,获得样本混合液;
SF、取75μL样本混合液加入到试剂条的加样垫6上,在室温下反应12min,获得反应后的试剂条;
SG、使用检测设备对反应后的试剂条上的第一检测线8、第二检测线9以及第三检测线35进行检测。
(一)<添加公示及ID芯片的制造>
取制备好的试剂条,反应缓冲液1,PCT、CRP校准品进行测试,其中,每个校准品至少有5个不同浓度,每个浓度至少测试5次。将不同浓度校准品面积扫描图的平均值与浓度做标准曲线,得到线性方程,将方程式的数值导入专用软件中,将空白的原始芯片连接至电脑,通过专用软件即可将数值代码导入芯片,贴好芯片标签。
(二)<降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂精密度检测>
检测材料:
降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂:使用实施例2-4任一实施例中制备出的降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂;
荧光免疫分析仪:与本发明降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂配套的荧光免疫分析仪,型号为A2000或A5000;
检测样本:低浓度的PCT质控品和高浓度的PCT质控品,低浓度的CRP质控品和高浓度的CRP质控品,具体信息见下表:
降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂使用方法:与实施例6中的使用方法相同,分别对低浓度的PCT质控品、高浓度的PCT质控品、低浓度的CRP质控品和高浓度的CRP质控品重复检测20次,结果如下表1和表2所示:
表1.PCT检测结果
表2.CRP检测结果
由表1和表2可以看出,通过降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂检测出的PCT质控品的低浓度平均值为1.13ng/mL,标准差为0.06,CV为5.42%,PCT质控品的高浓度平均值为21.17ng/mL,标准差为1.17,CV为5.39%;CRP质控品的低浓度平均值为4.35ng/mL,标准差为0.18,CV为4.08%,CRP质控品的高浓度平均值为152.25ng/mL,标准差为9.02,CV为5.92%,其中,PCT质控品的低浓度与高浓度、CRP质控品的低浓度与高浓度CV值均<10%,表明本发明制备的试剂精密度良好,适用于临床检测。
(三)<降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂准确度检测>
检测材料:
降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂:使用实施例2-4任一实施例中制备出的降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂;
荧光免疫分析仪:与本发明降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂配套的荧光免疫分析仪,型号为A2000或A5000;
检测样本:化学发光法定值PCT的高、中、低三个浓度的人源血清,浓度分别为20.09ng/mL、5.39ng/mL、0.51ng/mL;免疫荧光法定值CRP的高、中、低三个浓度的人源血清,浓度分别为120.34mg/L、8.52mg/L、0.53mg/L;
降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂使用方法:与实施例6中的使用方法相同,每个检测样本重复检测3次,进行PCT检测相对偏差以及CRP检测相对偏差计算,结果如下表3和4:
表3.PCT检测相对偏差
表4.CRP检测相对偏差
由表3和表4可以看出,对PCT、CRP 2个定值人源血清重复测定3次后分别计算相对偏差,所得结果可见本发明的试剂在测定PCT人源血清时相对偏差为-5.88-5.62%;在测定CRP人源血清时相对偏差为-5.14-2.35%。2个项目检测的相对偏差均<10%,表明本发明制备的试剂准确度良好,适用于临床检测。
(四)<降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂一致性检测>
检测材料:
降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂:使用实施例2-4任一实施例中制备出的降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂;
荧光免疫分析仪:与本发明降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂配套的荧光免疫分析仪,型号为A2000或A5000;
检测样本:临床样本由相关医院提供,共300例电化学发光法定值PCT样本,包含100例血清、100例同源血浆和100例同源全血,其中,三个样本的PCT含量分布区间均是0.05-50ng/mL;共300例电化学发光法定值CRP样本,包含100例血清、100例同源血浆和100例同源全血,其中,三个样本的CRP含量分布区间均是0.5-200mg/L。
降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂使用方法:与实施例6中的使用方法相同,对所有检测样本进行检测,每个样本重复检测1次,以对应的血清检测结果为基准,分析各样本类型的相关关系,如图4-9所示;
由附图4和5所示,图4以对照系统PCT血清检测值为X轴,实验系统PCT血清检测值为Y轴,图4以对照系统CRP血清检测值为X轴,实验系统CRP血清检测值为Y轴绘制散点图,进行相关性分析。对100例临床PCT血清样本和100例临床CRP血清样本进行检测,R2≥0.98,斜率在0.9~1.1范围内,表明本发明制备的试剂与电化学发光法试剂在检测PCT、CRP血清时一致性良好,满足临床检测PCT、CRP血清的需要。
由附图6和8所示,图6以对照系统PCT血清检测值为X轴,实验系统PCT血浆检测值为Y轴,图8以对照系统CRP血清检测值为X轴,实验系统CRP血浆检测值为Y轴绘制散点图,进行相关性分析。对100例临床PCT血浆样本和100例临床CRP血浆样本进行检测,R2≥0.98,斜率在0.9~1.1范围内,表明本发明制备的试剂在检测PCT、CRP血清和同源血浆样本时一致性良好,满足临床检测PCT、CRP血浆的需要。
由附图6和图9所示,图6以对照系统PCT血清检测值为X轴,实验系统PCT全血检测值为Y轴,图9以对照系统CRP血清检测值为X轴,实验系统CRP全血检测值为Y轴绘制散点图,进行相关性分析。对100例临床PCT全血样本和100例临床CRP全血样本进行检测,R2≥0.98,斜率在0.9~1.1范围内,表明本发明制备的试剂在检测PCT、CRP血清和同源全血样本时一致性良好,满足临床检测PCT、CRP全血的需要。
(五)<降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂与现有试剂对比试验>
检测材料:
降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂:使用实施例2-4任一实施例中制备出的降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂,其中,荧光免疫分析仪为与本发明降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂配套的荧光免疫分析仪,型号为A2000,使用方法与实施例6中的使用方法相同;
现有降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂:带结合垫的PCT、CRP试剂及荧光免疫分析设备,使用方法为常规现有降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂的使用方法;
检测样本:临床样本由相关医院提供,共40例电化学发光法定值血清样本,PCT含量分布区间是0.05-50ng/mL;40例免疫荧光法定值血清样本,CRP含量分布区间是0.5-200mg/L;
试验方法:降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂分别检测20例电化学发光法定值血清样本、20例免疫荧光法定值血清样本,现有降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂别检测20例电化学发光法定值血清样本、20例免疫荧光法定值血清样本,得出的结果见表5和表6:
表5.PCT检测结果对比
表6.CRP检测结果对比
如表5所示,现有降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂和本发降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂同时检测20例PCT血清样本时,其中,现有降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂在测试PCT血清样本时,个别样本的精密度CV值≥10%,相对偏差≥10%,而本发明降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂在0.05-50ng/mL检测范围内均未出现精密度CV≥10%,相对偏差≥10%的情况,表明本发明降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂性能良好,满足临床检测PCT的需要。
如表6所示,现有降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂和本发降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂同时检测20例CRP血清样本时,其中,现有降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂在测试CRP血清样本时,个别样本的精密度CV值≥10%,相对偏差≥10%,而本发明降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂在0.5-200mg/L检测范围内均未出现精密度CV≥10%,相对偏差≥10%的情况,表明本发明降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂性能良好,满足临床检测CRP的需要。
尽管本发明的实施方案已公开如上,但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用,它完全可以被适用于各种适合本发明的领域,对于熟悉本领域的人员而言,可容易地实现另外的修改,因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下,本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。
Claims (7)
1.降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂盒,其特征在于,包括:
盒体,其为长方体形,所述盒体沿长度方向分隔为依次设置的第一盒体、第二盒体、第三盒体,其中,所述第一盒体上盖设第一盒盖;所述第二盒体滑动且密封设有第二盒盖,所述第二盒盖为含铁类的材质制成,所述第二盒体中部敷设有筛网,所述筛网将所述第二盒体分隔为位于所述筛网下方的第一空腔,位于所述筛网上方的第二空腔,所述筛网与所述第二盒盖之间固接有弹簧,当所述弹簧为自然状态时,所述第二盒盖与所述第二盒体密封固接,所述第二盒体其中相对两侧壁的顶端向外延伸设有挡板,所述挡板顶端固接有电磁铁,其中,所述第一空腔内填充有干燥剂,所述第一盒体与所述第二盒体共同的侧壁贯穿设有多个直径小于干燥剂颗粒的穿孔;所述第三盒体上盖设有第三盒盖;
制冷机构,其包括设于所述第一盒体内的第一温度传感器、设于所述第二盒体内的湿度传感器、设于所述第三盒体内的第二温度传感器、嵌于所述第一盒体与所述第二盒体共同侧壁内且制热端朝向所述第二盒体的第一半导体制冷芯片、嵌于所述第三盒体与所述第二盒体共同侧壁内且制热端朝向所述第二盒体侧壁的第二半导体制冷芯片、制冷端固接于所述第三盒体外侧壁的第三半导体制冷芯片;
控制系统,其设于所述盒体外侧,所述控制系统与所述第一温度传感器、所述第一半导体制冷芯片、所述湿度传感器、所述第二温度传感器、所述第二半导体制冷芯片、所述第三半导体制冷芯片及所述电磁铁连接,其中,所述控制系统设置为:当所述第一温度传感器检测所述第一盒体内的温度高于28℃时,所述控制系统控制所述第一半导体制冷芯片对所述第一盒体制冷;当所述湿度传感器检测所述第一盒体和所述第二盒体内的空气湿度大于10%时,所述控制系统控制所述第二半导体制冷芯片对所述第二盒体制热,同时所述控制系统控制所述电磁铁通电以使所述第二盒盖脱离所述第二盒体;当所述第二温度传感器检测所述第三盒体内的温度高于8℃时,所述控制系统控制所述第三半导体制冷芯片制冷,当所述第二温度传感器检测所述第三盒体内的温度低于2℃时,所述控制系统控制所述第三半导体制冷芯片的制冷端制热;
试剂条、第一探测物和第二探测物,试剂条、第一探测物和第二探测物均存放于所述第一盒体内,其中,所述第一探测物内含有生物素标记的PCT抗体络合物和荧光标记的Anti-chicken IgY抗体络合物,所述第二探测物内含有荧光标记的PCT抗体络合物;
反应缓冲液,其内含有荧光标记的CRP抗体络合物和荧光标记的Anti-chicken IgY抗体络合物,存放于所述第三盒体内。
2.如权利要求1所述的降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂盒,其特征在于,所述试剂条包括垫卡、铺设于所述垫卡上的硝酸纤维素膜、依次间隔设于所述硝酸纤维素膜上的加样垫、质控线、第一检测线、第二检测线、第三检测线以及吸收垫。
3.如权利要求1所述的降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂盒,其特征在于,所述反应缓冲液的pH为7.4,组分为:10mM PBS、200-600mM NaCl、0.01-0.5%NaN3、0.1-3%Tween20、0.01-0.5%IGEPAL CA-630、1-10ug/mL荧光标记的CRP抗体络合物、0.03-3ug/mL荧光标记的Anti-chicken IgY抗体络合物,其中,所述反应缓冲液体积不小于150μL。
4.如权利要求1所述的降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂盒,其特征在于,所述第一探测物是由pH为7.4的第一液体冷冻干燥制得,所述第一液体的组分为:10mM PBS、0.05-10%BSA、0.05-5%Sucrose、0.01-10ug/mL生物素标记的PCT抗体络合物、0.01-10ug/mL荧光标记的Anti-chicken IgY抗体络合物;
所述第二探测物是由pH为7.4的第二液体冷冻干燥制得,所述第二液体的组分为:10mMPBS、0.05-10%BSA、0.05-5%Sucrose、2-20ug/mL荧光标记的PCT抗体络合物。
5.如权利要求1所述的降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂盒,其特征在于,所述盒体外侧设有容纳腔,所述控制系统设于所述容纳腔内。
6.如权利要求1所述的降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂盒,其特征在于,所述第一盒体与所述第二盒体共同侧壁与所述第一半导体制冷芯片制热端接触的材质为散热材料,所述第二盒体与所述第三盒体共同侧壁与所述第二半导体制冷芯片制热端接触的材质为散热材料。
7.如权利要求1所述的降钙素原与C-反应蛋白联合检测试剂盒,其特征在于,所述第三半导体制冷芯片制热端固接有散热板。
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