Oppfinnelsens område
Foreliggende oppfinnelse angår prodrugs av biologisk aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelser, farmasøytiske preparater omfattende disse prodrugs, og disse prodrugs og preparater for anvendelse i et antall kontekster som terapi eller forebygging av forskjellige sykdommer.
Oppfinnelsens bakgrunn
Fornetning av Fc-reseptorer som høyaffinitetsreseptoren for IgE (FceRI) og/eller høyaffinitetsreseptoren for IgG (FcyRT) aktiverer en signaleringskaskade i mast-, basofil- og andre immunceller som resulterer i frigivning av kjemiske mediatorer som er ansvarlige for tallrike ugunstige evenementer. For eksempel fører slik fornetning til frigivning av på forhånd dannede mediatorer av Type I (umiddelbar) anafylaktiske, hypersensitivitetsreaksjoner som histamin, fra lagringsseter i granuler via degranulering. Det fører også til syntese og frigivning av andre mediatorer inkludert leukotriener, prostaglandiner og plateaktiverende faktorer (PAF'er) som spiller viktige roller i inflammatoriske reaksjoner. Ytterligere mediatorer som syntetiseres og frigis ved fornetning av Fc-reseptorer inkluderer cytokiner og nitrogenoksid.
Signaleringskaskaden(ene) som aktiveres ved fornetning av Fc-reseptorer som FceRI og/eller FcyRI omfatter et mønster av cellulære proteiner. Blant de viktigste intracellulære signalpropagatorer er tyrosinkinasene. Og en viktig tyrosinkinase som er involvert i signaltransduksjonsveiene asosisert med fornetning av FceRI- og/eller FcyRI-reseptorer, så vel som signaltransduksjonskaskader, er Syk-kinase (se Valent et al., 2002, Intl. J. Hematol. 75(4):257-362 når det gjelder en oversikt).
Mediatorene som frigis som et resultat av FceRI- og FcyRI-reseptorfornetning er ansvarlige for, eller spiller en viktig rolle i, manifestering av tallrike, ugunstige evenementer. I den senere tid er forskjellige klasser 2,4-pyrimidindiaminforbindelser oppdaget som inhiberer FceRI- og FcyRI-signalkaskader og som har tallrike terapeutiske anvendelser, se for eksempel USNN 10/355 543 av 31. januar, 2003 (US 2004/0029902A1), internasjonal søknad PCT/US03/03022 av 31. januar, 2003 (WO 03/063794), USSN 10/631 029 av 29. juli, 2003 (US 2007/0060603), internasjonal søknad PCT/US03/24087 (WO 2004/014382), USSN 10/903 263 av 30. juli, 2004 (US 2005/0234049) og internasjonal søknad PCT/US2004/24716 (WO 2005/016893). Mens mange av disse forbindelser viser gode biotilgjengelighetsegenskaper, kan det i enkelte tilfeller være ønskelig å skreddersy deres oppløselighet eller andre egenskaper slik at biotilgjengeligheten via spesifikke administreringsveier optimaliseres.
Oppsummering
Den foreliggende oppfinnelsen tilveiebringer en forbindelse med strukturformel:
eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller hydrat, solvat, eller N-oksid av forbindelsen eller saltet.
Foreliggende beskrivelse beskriver prodrugs av 2,4-pyrimidindaminforbindelser som har tallrike biologiske aktivieter og derfor også terapeutisk anvendelse, preparater omfatter disse prodrugs, metoder og mellomprodukter som er nyttige for syntetisering av disse og metoder for å benytte disse prodrugs i et antall in vitro- og in vivo-kontekster, inkludert i terapi og/eller forebygging av sykdommer i det minste delvis er mediert av aktivering av Fc-reseptorsignalkaskader.
Disse prodrugs omfatter generelt en biologisk aktiv 2,4-pyrimidindiaminforbindelse som er substituert på nitrogenatomet av en eller flere primære eller sekundære amingrupper eller en progruppe R<p>som metaboliseres eller på annen måte transformeres under bruksbetingelser for å gi det aktive 2,4-pyrimidindiamin. I noen utførelsesformer er progruppen R<p>en fosforholdig progruppe. I noen utførelsesformer inkluderer progruppen en gruppe eller en del som metaboliseres under bruksbetingelsene for å gi et ustabilt a-hydroksymmetyl-, a-aminometyl- eller a-tiometylmellomprodukt som så ytterligere metaboliseres in vivo for å gi det aktive 2,4-pyrimidindiamin medikamentet. I noen utførelsesformer inkluderer progruppen en a-hydroksyalkyl-, a-aminoalkyl- eller a-tioalkyldel, for eksempel en a-hydroksymetyl-, a-aminometyl- eller a-tiometyldel som metaboliseres under bruksbetingelsene for å gi det aktive 2,4-pyrimidindiamin medikamentet. For eksempel har i noen utførelsesformen progruppen R<p>formelen - CR<d>R<d->AR<3>, der hver Rd uavhengig av den andre er valgt blant hydrogen, cyano, eventuelt substituert (Cl-C20)alkyl, (Cl-C20)perlfuoralkyl, eventuelt substituert (C7-C30)arylalkyl og eventuelt substituert 6-30-leddet heteroarylalkyl, der hver eventuelle substituent uavhengig av de andre er valgt blant hydrogen, alkyl, aryl, arylalkyl, heteroaryl og heteroalkyl, eller alternativt, de to Rd sammen med karbonatomet hvortil de er bundet danner en sykloalkyl inneholdende fra 3 til 8 karbonatomer; A er valt blant O, S og NR<50>, der R<50>er valgt blant hydrfogen, alkyl, aryl, arylalkyl, heteroaryl, heteroarylalkyl og sykloheteroalkyl, eller alternativt er kombinert med R<3>og, sammen med nitrogenatomet hvortil de er bundet, danner en 3- til 7-leddet ring; og R<3>betyr en gruppe som kan metaboliseres in vivo for å gi en gruppe med formelen -CR<d>R<d>-AH, der Rd og A er som angitt ovenfor.
Identiteten for R<3>er ikke kritisk, forutsatt at den kan metaboliseres under de ønskede bruksbetingelser, for eksempel under de sure betingelser som finnes i magen og/eller ved enzymer som finnes in vivo, for å gi en gruppe med formel -CRdRd-AH, der A og Rd er som definert ovenfor. Således vil fagmannen erkjenne at R<3>kan omfatte så å si enhver kjent eller senere oppdaget hydroksyl-, amin- eller tiolbeskyttende gruppe. Ikke-begrensende eksempler på egnede, beskyttende grupper kan for eksempel finnes i Protective Groups in Organic Synthesis, Greene & Wuts, 2. utg., John Wiley & Sons, New York, 1991 (særlig sidene 10-142 (alkoholer), 277-308 (tioler) og 309-405 (aminer)).
I en spesiell utførelsesform inkluderer R<3>sammen med A en eter-, en tioeter, silyleter-, silyltioeter-, ester-, tioester-, amid-, karbonat-, tiokarbonat-, karbamat-, tiokarbamat-eller en ureabinding, -OCH2SO3R, der R er hydrogen, alkyl, aryl, arylalkyl eller et metallsalt (for eksempel natrium, litium, kalium); -GCH2<+>N(R<51>)3M", der G er fraværende, -OPO3-, OSO3- eller-CO2-, R<51>er hydrogen, alkyl, aryl, arylalkyl, sykloheteroalkyl eller sykloheteroalkylakyl og M- er et motion, vanligvis et halogenidion eller lignende (acetat, sulfat, fosfat osv.). Spesifikke eksempler på utførelsesformer inkluderer, men er ikke begrenset til, progrupper R<p>der R<3>er valgt blant Rf, -C(0)R<f>, -C(0)OR<f>, -C(0)NR<f>R<f>og -SiR<f>R<f>R<f>, der hver Rf uavhengig av de andre er valgt blant hydrogen, eventuelt substituert lavere alkyl, eventuelt substituert lavere heteroalkyl, eventuelt substituert lavere sykloalkyl, eventuelt substituert lavere heterosykloalkyl, eventuelt substituert (C6-C10)aryl, eventuelt substituert 5-10-leddet heteroaryl, eventuelt substituert (C7-C18)arylalkyl og eventuelt substituert 6-18-leddet heteroaryl alkyl. I en spesifikk utførelsesform er hver R den samme.
Identiteten for progruppen(e) R<p>kan velges for å skreddersy vannoppløselighet når andre egenskaper for den underliggende aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelsen som skal optimaliseres for en spesiell administreringsmodul. Den også velges for å tilveiebringe fjerning ved spesifiserte organer og/eller vev i kroppen som for eksempel fordøyelseskanalen, i blod og/eller serum, eller via enzymer som holder til i spesifiserte organer som leveren.
I noen utførelsesformer inkluderer progrupper R<p>som er fosforholdige progrupper fosfatdeler som kan spaltes in vitro av enzymer som estearser, lipaser og/eller fosfataser. Slike enzymer er prevalente i kroppen og holder for eksempel til i mage- og fordøyelseskanalen, blod og/eller serum, og i så å si alt vev og alle organer. Slike fosfatholdige progrupper R<p>vil også lett øke vannoppløselighet for en underliggende aktiv 2,4-pyrimidindiaminforbindelse og gjøre slike fosfatholdige prodrugs ideelt egnet for administreringsmodi der vannoppløselighet er ønskelig, for eksempel oral, bukal, intravenøs, intramuskulær eller okkulær administrering.
I noen utførelsesformer har hver fosfatholdige progruppe R<p>i prodrug formelen -
(CR<d>R<d>)y-0-P(0)(OH)(OH), eller et salt derav, der Rd er som tidligere definert og y er et heltall fra 1 til 3, og særlig 1 eller 2. I en spesifikk utførelsesform er hver Rd uavhengig av de andre valgt blant hydrogen, eventuelt substituert lavere alkyl, eventuelt substituert fenyl, eventuelt substituert metyl og eventuelt substituert benzyl. I en annen spesifikk utførelseform er hver Rd uavhengig av de andre valgt blant hydrogen og usubstituert lavere alkyl. Spesifikke eksempler på fosfatholdige progrupper R<p>inkluderer -CH2-0-P(0)(OH)(OH) og -CH2CH2-0-P(0)(OH)(OH) og/eller de tilsvarende salter.
Uten å ønske å være bundet av noen teori, antas det at når y er 1 i eksempelet på fosfatholdige progrupper R<p>at fosfatholdige prodrugs konverteres in vivo av enzymer som fosfataser, lipaser og/eller estereaser, til de tilsvarende hydroksylmetylaminer som så metaboliseres videre in vivo ved eliminering av formaldehyd for gå aktiv 2,4-pyrimidindiamin medikamentforbindelse. Fosfat- og formaldehydmetabolske biprodukter er uskadelige.
Når y er 2 i eksemplet fosfatholdige prodrugs, antas det at prodrugs er metabolisert til den aktive 2,4-pyrimidindiamin medikamentforbindelse in vivo ved eliminering av enolfosfat som ytterligere metaboliserer til acetaldehyd og fosfat. Fosfat- og acetaldehydmetabolske biprodukter er uskadelige.
Fagfolk på området vil erkjenne at visse typer forløpere kan konverteres in vivo til fosfatgrupper. Ikke forløpere inkluderer, som eksempel og ikke som begrensning, fosfatestere, fosfitter og fosfittestere. For eksempel kan fosfitter oksideres in vivo til fosfater. Fosfatestere kan hydrolyseres in vivo til fosfater. Fosfittestere kan oksideres in vivo til fosfatestere som i sin tur kan hydrolyseres in vivo til fosfater. Som en konsekvens av evnen hos disse fosfatforløpergrupper til å kunne konverteres til fosfater in vivo, kan prodrugs også inkludere progrupper som omfatter slike fosfatforløpere. I noen utførelsesformer kan fosfatforløpergruppene direkte metaboliseres til det aktive 2,4-pyrimidindiamin medikament uten først å konverteres til et fosfatprodrug. I andre utførelsesformer blir prodrugs omfattende progruppen som inkluderer slike fosfatforløpere først metabolisert til det tilsvarende fosfatprodrug som så metaboliseres til det aktive 2,4-pyrimidindiaminmedikament via et hydroksymetylamin, som diskutert ovenfor.
I noen utførelsesformer er slike fosfat forløpergrupper fosfatestere. Fosfatesterne kan være asykliske eller sykliske og kan være fosfattriestere eller fosfatdisetere. Slike estere er generelt mindre vannoppløselige enn de tilsvarende fosfatsyreprodrugs og de tilsvarende aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelser, og er derfor typisk egnet for metoder for avlevering av prodrugs av aktive 2,4-pyrimidindinforbindelse, der lav vannoppløselighet er ønskelig, inkludert, som eksempel med uten begrensning, administrering via inhalering. Oppløseligheten for den angjeldende prodrug kan spesifikt skreddersys for spesifikke metoder for administrering ved egnet valg av antall og identitet(er) for forestringsgruppen i fosfatesteren.
Mekanismen ved hvilken fosfatestergruppen metaboliseres til en tilsvarende fosfatgruppe kan kontrolleres ved egnet valg av forestrinsdel. For eksempel er det velkjent at visse estere er syre- (eller base-)labile og genererer det tilsvarende fosfat under de sure betingelser som finnes i magen og fordøyelseskanalen. I tilfeller der det er ønskelig at det angjeldende fosfatester prodrug metaboliserer til det tilsvarende fosfatprodrug i fordøyelseskanalen (som for eksempel der disse administreres oralt), kan fosfatester progrupper som er syrelabile velges. Andre typer fosfatestere er syre- og basestabile og konverteres til de tilsvarende fosfater via enzymer som finnes i visse vev og organer i kroppen (se for eksempel de forskjellige sykliske fosfatestere som beskrives i Erion et al., 2004, J. Am. Chem. Soc, 126:5154-5163). Der det for eksempel er ønskelig å konvertere et fosfatester prodrug til det tilsvarende fosfat prodrug innen et ønsket målvev eller -sete i kroppen, kan fosfatestere med de ønskede, metabolske egenskaper velges.
I noen utførelsesformer er hver fosfatesterholdig progruppe R<p>i det angjeldende promedikament en asyklisk fosfatester med formelen -(CR<d>R<d>)y-0-P(0)(OH)(OR<c>) eller -(CR<d>R<d>)y-0-P(0)(0R<e>)(0R<e>) eller et galt deraVjh<y>er Re uay^ en^ g av fe m^ e er valgt blant eventuelt substituert lavere alkyl, eventuelt substituert (C6-C14)aryl (for eksempel fenyl, naftyl, 5-lavere alkoksyfenyl, 4-metoksyfenyl), eventuelt substituert (C7-C20)arylalkyl (for eksempel benzyl, 1-fenyletan-l-yl, 2-fenyletan-l-yl), -(CR<d>R<d>)y-OR<f>, -(CR<d>R<d>)y-0-C(0)R<f>, -(CR<d>R<d>)y-0-C(0)OR<f>, -(CF<d>R<d>)y-S-C(0)R<f>, -CR<d>R<d>)y-S-C(0)OR<f>, -(CR<d>R<d>)y-NH-C(0)R<f>, -(CRdR<d>)y-NH-C(0)ORf og -Si(R<d>)3, der Rd, Rf og y er som angitt ovenfor. I en spesifikk utførelsesform er hver Rd valgt blant hydrogen og usubstituert lavere alkyl, og/eller hver Re er usubstituert lavere alkanyl eller benzyl. Spesifikke eksempler på fosfatester progrupper inkluderer, men er ikke begrenset til, - CH2-0-P(0)(OH)(OR<e>), -CH2CH2-0-P(0)(OH)(OR<e>), -CH2-0-P(0)(OR<e>)(OR<e>) og-CH2CH2-0-P(0)(OR<e>)(OR<e>), der Re er valgt fra lavere alkanyl, i-propyl og t-butyl.
I andre utførelsesformer er hver fosfatesterholdig progruppe R<p>en syklisk fosfatester med formelen
der hver R<8>uavhengig av hverandre er valgt blant hydrogen og lavere alkyl; hver Rh uavhengig av de andre er valgt blant hydrogen, eventuelt substituert lavere alkyl, eventuelt substituert lavere sykloheteroalkyl, eventuelt substituert (C6-C14)aryl, eventuelt substituert (C7-C20) arylalkyl og eventuelt substituert 5-14-leddet heteroaryl; z er et heltall i området 0 til 2; og Rd og y er som er angitt tidligere. I en spesifikk utførelsesform er hver fosfatesterholdige progruppe R<p>en syklisk fosfatester med formelen
der Rd, Rh og y er som angitt ovenfor.
Den mekanisme ved hvilken syklisk fosfatester prodrugs, inkludert slike sykliske fosfatester prodrugs som metaboliserer in vivo til den aktive medikamentforbindelse, avhenger delvis av identiteten av Rh<->substituenten. For eksempel blir sykliske fosfatester progrupper hvori hver Rh uavhengig av de andre er valgt blant hydrogen og lavere alkyl, spaltet in vivo av esteraser. I noen utførelsesformer er derfor de sykliske fosfatester progrupper valgt slik at de er spaltbare in vivo av esteraser. Spesifikke eksempler på slike sykliske fosfatester progrupper inkluderer, men er ikke begrenset til grupper valgt blant Alternativt blir sykliske fosfatester prodrugs som har progrupper hvori Rh og substituentene er eventuelt substituerte aryl-, arylalkyl- og heteroarylgrupper, ikke typisk spaltet av esteraser, men i stedet metabolisert til den aktive progdrug av enzymer som cytokrom P45o-enzymer som finnes i leveren. For eksempel er en serie sykliske fosfatester nukleotidprodrugs som undergår en oksidativ spaltingsreaksjon som katalyseres av et cytokrom P45o-enzym (CYP), som overveiende uttrykkes i leveren, beskrevet av Erion et al., 2004, J. Am. Chem. Soc, 126:5154-5163. I noen utførelsesformer velges de sykliske fosfatester progrupper slik at de er spaltbare av CYP-enzymer som uttrykkes i leveren. Spesifikke eksempler på utførelsesformer av slike sykliske, fosfatesterholdige progrupper R<p>inkluderer, men er ikke begrenset til progrupper med formelen
der Rh er valgt fra fenyl, 3-klorfenyl, 4-pyridyl og 4-metoksyfenyl.
Som fagmannen vil erkjenne, kan fosfitter og fosfittestere undergå oksidasjoner in vivo for å gi de tilsvarende fosfat- og fosfatesteranaloger. Slike reaksjoner kan gjennomføres in vivo ved for eksempel oksidaseenzymer, oksoreduktaseenzymer og andre oksidative enzymer. Således kan de fosforholdige progrupper R<p>også inkludere fosfitt og fosfittesteranaloger av en hvilken som helst av de fosfat- og fosfatester progrupper som er beskrevet ovenfor. I noen utførelsesformer inkluderer de fosforholdige progrupper R<p>uten begrensning grupper med formlene -(CR<d>R<d>)y-0-P(OH)(OH), -(CR<d>R<d>)y-0-P(OH)(OR<e>) og -(CR<d>R<d>)y-0-P(OR<e>)(R<e>), eller salter derav, der Rd, Re og y er som angitt ovenfor. Spesifikke eksempler på utførelsesformer inkluderer grupper hvori hver Rd uavhengig av hverandre er valgt blant hydrogen og usubstituert lavere alkyl og/eller hver Re uavhengig av de andre er valgt blant usubstituert lavere alkanyl og benzyl.
Spesifikke eksempler på asykliske fosfitt- og fosfittester progrupper inkluderer, men er ikke begrenset til, -CH2-0-P(OH)(OH), -CH2CH2-0-P(OH)(OH), -CH2-0-P(OH)(OR<e>) og -CH2CH2-0-P(OR<e>)(OR<e>), der hver Re er valgt blant lavere alkanyl, i-propyl og t-butyl. Spesifikke eksempler på syklofosfittester prodrugs er fosfittanaloger av ovenfor beskrevne sykliske fosfatester progrupper. Konseptuelt kan prodrugforbindelser som inkluderer slike fosfitt- og/eller fosfittester progrupper ses på som prodrugs av de tilsvarende fosfat- og fosfatester prodrugs.
Som nevnt ovenfor, antas det at visse fosfatholdige prodrugs metaboliserer in vivo via de tilsvarende hydroksymetylaminer. Selv om disse hydroksymetylaminer metaboliserer in vivo til de tilsvarende aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelser, er de stabile ved pH 7 og kan fremstilles og administreres som hydroksyalkylholdige prodrugs. I noen utførelsesformer har hver hydroksyalkylholdig progruppe R<p>i slike prodrugs formelen -CR<d>R<d>-OH, der Rd er som definert ovenfor. Et spesifikt eksempel på hydroksyalkylholdig progruppe R<p>er -CH2OH.
Så å si en hvilken som helst kjent 2,4-pyrimidindiaminforbindelse som har biologisk og derfor terapeutisk aktivitet, kan beskyttes på et tilgjengelig primært eller sekundært amin med en eller flere progrupper R<p>som beskrevet her. Den aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelser er for eksempel beskrevet i USSN 10/355 543 av 31. jaunar, 2003 (US2004/0029902A1), PCT/US03/03022 av 31. januar, 2003 (WO 03/063794), USSN 10/631 029 av 29. juli, 2003 (US 2007/0060603), PCT/US03/24087 (WO 2004/014382), USSN 10/903 263 av 30. juli, 2004 (US 2005/0234049) og PCT/US2004/24716 (WO 2005/016893. I slike 2,4-pyrimidindiaminforbindelser kan progruppen€ R<p>være festet til et hvilket som helst primært eller sekundært amin, inkludert for eksempel N2-nitrogenatomet i 2,4-pyrimidindiamin delen, N4 nitrogenatomet i 2,4-pyrimidindiamin delen og/eller et primært eller sekundært nitrogenatom inkludert i en substituent på 2,4-pyrimidindiamin forbindelsen. Bruken av fosfatholdige progrupper R<p>er spesielt nyttig for 2,4-pyrimidinamin forbindelser som viser dårlig vannoppløselighet under fysiologiske betingelser (for eksempel oppløselighet eller mindre enn rundt 10 ug/ml). Uten å ønske å være bundet av noen teori, antas det at de fosfatholdige progrupper understøtter oppløselighet av den underliggende aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelsen, som i sin tur øker biotilgjengligheten ved oral administrering. Det antas at fosfat progruppene R<p>metaboliseres av fosfataseenzymer som finnes i fordøyelseskanalen, og dermed tillater opptak av det underliggende, aktive medikament.
Det er funnet at vannoppløselige og den orale biotilgjengelighet for en spesiell, biologisk aktiv 2,4-pyrimidindiaminforbindelse, illustrert nedenfor (Forbindelse 1) øker drastisk når den formuleres for å inkludere en progruppe R<p>med formelen -CH2-0-P(0)(OH)2på ringnitrogenatomet som er merket med en asterisk (Forbindelse 4):
Signifikant er at vannoppløseligheten for det aktive medikament (Forbindelse 1) er i området rundt 1-2 ug/ml i vandig buffer under fysiologiske betingelser, er oppløseligheten for det tilsvarende fosfatprodrug (Forbindelse 4) mer enn 5 mg/ml under de samme betingelser, eller rundt 2000 ganger større. Denne økede vannoppløselighet tillater bedre oppløsning i tarmen og letter derved oral administrering. Andre aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelser med tilsvarende dårlig vannoppløselighet forventes å vise tilsvarende økning av vannoppløselighet og oral biotilgjengelighet ved formulering som fosfat prodrugs.
Som nevnt ovenfor er esterprodrugs generelt mindre vannoppløselige enn de tilsvarende fosfat prodrugs og er derfor generelt brukbare ved anvendelser der lav vannoppløselighet er ønsket, som for eksempel administrering via inhalering. Det samme gjelder for den relative vannoppløselighet for fosfittester- og fosfitt prodrugs.
I noen utførelsesformer er det her beskrevne prodrugs 2,4-pyrimidindiaminforbindelser som er substituert på N4 nitrogenet av 2,4-pyrimidindiamindelen med en eventuelt substituert, nitrogenholdig bisyklisk ring som inkluderer minst en progruppe R<p>som beskrevet her på en eller flere av: nitrogenatomet/eller atomene i den bisykliske ring, N2 nitrogenet av 2,4-pyrimidindiamindelen og/eller N4 nitrogen av 2,4-pyrimidindiamindelen. I en spesifikk, illustrerende eksempelutførelsesform er det angjeldende prodrug en forbindelse med strukturformel (I):
inkludert salter, solvater, hydrater og N-oksider derav, der:
Y er valgt blant CH2, NR<24>, O, S, S(O) og S(0)2;
Z<1>og Z<2>hver uavhengig av hverandre er valgt blant CH og N;
R<2>er en eventuelt substituert lavere alkyl-, lavere sykloalkyl-, lavere heteroalkyl-, lavere sykloheteroalkyl-, aryl-, fenyl- eller heteroarylgruppe;
R<5>er en elektronegativ gruppe, for eksempel slik som halo-, fluor-, cyano-, nitro-, trihalometyl- eller trifluormetylgruppe;
R<17>er valgt blant hydrogen, halogen, fluor, lavere alkyl og metyl, eller alternativt kan R<17>sammen med R<18>danne en okso (=0)-gruppe eller sammen med karbonatomet hvortil de er festet danne en spirosykel inneholdende fra 3 til 7 karbonatomer;
R<18>er valgt blant hydrogen, halogen, fluor, lavere alkyl og metyl, alterantivt kan R<18>sammen med R<17>danne en okso (=0)-gruppe eller sammen med karbonatomet hvortil de er festet danne en spirosykel inneholdende fra 3 til 7 karbonatomer;
R<19>er valgt blant hydrogen, lavere alkyl og metyl, eller alternativt kan R<19>sammen med R<20>danne en okso (=0)-gruppe eller sammen med karbonatomet hvortil de er festet danne en spirosykel inneholdende fra 3 til 7 karbonatomer; R<20>er valgt blant hydrogen, lavere alkyl og metyl, eller alternativt kan R<20>sammen med R<19>danne en okso (=0)-gruppe eller sammen med karbonatomet hvortil de er festet danne en spirosykel inneholdende fra 3 til 7 karbonatomer;
R ryt , R ryry og R ryy hver uavhengig av hverandre er valgt blant hydrogen og en progruppe R<p>som beskrevet her; og
R<24>er valgt blant hydrogen, lavere alkyl og en progruppe R<p>som beskrevet her,
under den forutsetning at minst en av R rs -i , R rsrs , R /}<3 og R 04 må være progruppen Rp r\. I noen utførelsesformer er hver av R ryt , R ryry og R ryy en av de spesifikke progrupper som er eksemplifisert ovenfor, og R<24>er hydrogen. I noen utførelsesformer er R<21>en av de spesifikke progrupper eksemplifisert ovenfor og R ryry , R ryy og R ry a hver er hydrogen. I noen utførelsesformer er R ryt , R ryry og R ryy hver en av de spesifikke progrupper som er beskrevet ovenfor, og R<24>er lavere alkyl.
I et annet aspekt tilveiebringer foreliggende oppfinnelse et preparat omfattende en forbindelse med strukturformel:
eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller hydrat, solvat, eller N-oksid av forbindelsen eller saltet, og en egnet bærer, eksipient eller diluent. Den nøyaktige art av bærer, eksipient eller diluent vil avhenge av den ønskede bruk for preparatet, og kan spenne over området fra å være egnet eller akseptabelt for veterinær anvendelse til egnet eller aksepterbar for human bruk. Preparatet kan eventuelt inkludere en eller flere ytterligere forbindelser.
Foreliggende beskrivelse beskriver mellomprodukter som er brukbare for syntetisering av de her beskrevne prodrugs. Når det gjelder fosfat- eller fosfittholdige prodrugs, omfatter mellomproduktene generelt prodrugs hvori oksygenatomene i de fosfat-og/eller fosfittholdige progrupper er maskert med beskyttende grupper som selektivt kan fjernes under spesifikke betingelser. I noen utførelsesformer er de beskyttende grupper selektivt fjernbare under mildt sure betingelser. I noen utførelsesformer er mellomproduktene fosfat- eller fosfittestere som i seg selv er prodrugs som kan metaboliseres til aktive 2,4-pyrimdindiaminforbindelser. I en illustrerende utførelsesformer inkluderer mellomproduktene prodrug hvori hver R<p>progruppen uavhengig av de andre har formelen -(CRVVO-PCOXOROCOR<1>), -(CR<d>R<d>)y-0-PCOXOR^OH), -(CRVVO-PCOROCOR<1>) eller-(CRVVO-PCOROCOH), der hver R' uavhengig av de andre er valgt fra eventuelt lavere usubstituert alkanyl, eventuelt substituert fenyl og eventuelt substituert benzyl, og Rd og y er som definert tidligere. I en spesifikk utførelsesform inkluderer mellomproduktet fosfat- og/eller fosfittestere hvori hver R<1>uavhengig av de andre er valgt blant lavere lineær alkanyl, lavere forgrenet alkanyl, i-propyl, t-butyl og lavere syklisk alkanyl.
I noen utførelsesformer omfatter mellomproduktene et aktivt 2,4-pyrimidindiamin som er substituert på et nitrogenatom av en primær eller sekundær amingruppe med en gruppe med formelen -CR<d>R<d>-AH, der Rd og A er som angitt ovenfor.
Det beskrives også fremgangsmåter for syntetisering av mellomproduktene og/eller prodrugs som beskrevet her. Fosfatholdige prodrugs kan syntetiseres ved omsetning av en aktiv 2,4-pyrimidindiaminforbindelse med et fosfatester halogenid, for eksempel et fosfatester halogenid med formelen X-(CR<d>R<d>)y-0-P(0)(OR<j>)(OR.<j>) eller X-(CR<d>R<d>)y-0-P(0)(OR<J>)(OH), der hver RJ uavhengig av de andre er en selektivt fjernbar, beskyttende gruppe; X er et halogenid slik som for eksempel klorid; og Rd og y er som angitt tidligere. I noen utførelsesformer er hver RJ Re, som definert tidligere. Fjerning av de selektivt fjernbare, beskyttende grupper RJ gir fosfat prodrug. I noen utførelsesformer er hver RJ den samme og er valgt blant lavere lineær alkyl, lavere forgrenet alkyl og lavere sykloalkyl. I noen utførelsesformer er hver RJ isopropyl eller t-butyl. I utførelsesformer der blandinger av mellomprodukter oppnås, for eksempel blandinger av mellomprodukter som inneholder forskjellige antall progrupper eller progrupper i forskjellige posisjoner på 2,4-pyrimidindiaminmolekylet, kan det ønskede mellomprodukt isoleres fra blandingen ved bruk av standard separerings- og/eller isoleringsteknikker (for eksempel kolonnekromatografi). Alternativt kan et ønsket prodrug isoleres fra en blanding av forskjellige prodrugs ved bruk av standard separering- og/eller isoleringsteknikker.
Asykliske fosfatester prodrugs kan oppnås på analog måte ved omsetning av det aktive 2,4-pyrimidindiamin med et fosfatester halogenid, for eksempel et fosfatester halogenid med formelen X-(CR<d>R<d>)y-0-P(0)(OH)(OR<e>) eller X-(CR<d>R<d>)y-0-P(0)(OR<e>)(OR<e>), der X, Rd, y og Re er som definert tidligere. I dette tilfellet er fjerning av den forestrede gruppe Re ikke nødvendig.
Asyklisk fosfitt- og fosfittester prodrugs kan fremstilles på analoge måter fra de tilsvarende fosfittesterhalogenider, for eksempel fosfittester halogenider med formelen X-(CRdRd)y-0-P(ORj)(ORj),X-(CRdRd)y-0-P(ORe)(OH),X-(CRdRd)y-0-P(ORe)(ORe), derX,R<d>, y,R<e>ogR<j>er som definert tidligere.
Sykliske fosfatester- og fosfittester prodrugs kan fremstilles ved omsetning av den aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelse med det tilsvarende sykliske fosfatester- eller fosfittester halogenid, for eksempel et syklisk fosfatester halogenid med formelen
eller et syklisk fosfittesterhalogenid med formelen
derX,R<r>,y, z,RgogRh er som definert tidligere.
Utførelsesformer hvori R<p>er -CR<d>R<d->AR<3>kan fremstilles fra det tilsvarende 2,4-pyrimidindiaminmedikament ved bruk av konvensjonelle metoder. Når for eksempel A er O, kan mellomproduktene syntetiseres ved omsetning av en aktiv 2,4-pyrimidindiaminforbindelse med et aldehyd eller keton med formel Rd<->C(0)-Rd, der Rd er som definert tidligere, for å gi et tilsvarende hydroksymetylamin mellomprodukt (der R<p>er -CR<d>R<d->OH). Hydroksymetylamin mellomproduktet kan så konverteres til prodrug ved bruk av standard teknikker. For eksempel har andre medikamentsubstanser inneholdende sekundære aminer vært satt til formaldehyd for å gi de tilsvarende, isolerbare hydroksymetylaminaddukter, se Bansal et al., J. Pharmaceutical Sei., 1981, 70:(8), 850-854; Bansal et al., J. Pharmaceutical Sei., 1981, 70: (8), 855-856; Khan et al., J. Pharmaceutical and Biomedical Analysis 1989, 7 (6), 685-691. Alternativt kan hydroksyalkylholdige prodrugs fremstilles i to trinn ved først å omsette det aktive 2,4-pyrimidindiamin med en bis-funksjonell elektrofil, for eksempel et halogenid med formelen X^CR^-X<2>, der X<1>betyr et første halogenid, X<2>et andre halogenid og Rd er som definert tidligere. I en spesifikk utførelsesform har halogenidet formelen I-CR<d>R<d->Cl. Ikke-omsatt halogenid ble så hydroksylert for å gi det hydroksyalkylholdige prodrug ved bruk av standard teknikker.
Prodrug i hvilke A er O, S eller NR<50>kan syntetiseres fra tilsvarende N-metylfosfatestere. I henhold til denne utførelsesform kan fosfatestergrupper fortrenges med en gruppe med formel R<3->AH, der R<3>og A er som angitt tidligere, for å gi det angjeldende prodrug som diskutert i større detalj nedenfor.
Mange av de her beskrevne prodrugs, særlig prodrugs i henhold til strukturformel (I) metaboliserer for å gi 2,4-pyrimdindiaminforbindelser som er potente inhibitorer av degranulering av immunceller som mast-, basofil-, neutrofil- og/eller eosinofile celler. Ytterligere 2,4-pyrimidindiaminforbindelser som utøver tilsvarende biologiske aktiviteter som kan formuleres som prodrugs, er beskrevet her og benyttet i de forskjellige metoder som er beskrevet i USSN 10/355 543 av 31. januar 2003 (US 2004/0029902A1), PCT/US03/03022 av 31. januar, 2003 (WO 03/063794), USSN 10/631 029 av 29. juli, 2003 (US 2007/0060603), PCT/US03/24087 (WO 2004/014382), USSN 10/903 263 av 30. juli, 2004 (US 2005/0234049) og PCT/US2004/24716 (WO 2005/016893). Således tilveiebringer foreliggende beskrivelse i et annet spekt, metoder for å regulere og særlig inhibere degranulering av slike celler. Metoden involverer generelt å bringe en celle som degranulerer i kontakt med en mengde av et egnet prodrug som beskrevet her, eller et akseptabelt salt, hydrat, solvat, N-oksid og/eller preparat derav, effektivt for å regulere eller inhibere degranulering av celler. Metoden kan gjennomføres i in vzvo-kontekster som en terapeutisk vei mot behandling eller forebygging av sykdommer som karakteriseres ved, forårsaket av eller assosieres med cellulær degranulering.
Uten å ønske å være bundet av noen spesiell teori, bekrefter biokjemiske data at mange av disse aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelsene utøver sin degranuleringsinhibitoriske effekt, i det minste delvis, ved blokkering eller inhibering av
signaltransduksjonskaskaden(e) initiert av fornetningen av høyaffinitets Fc-reseptorer
for IgE ("FceRI") og/eller IgG ("Fc/RT) (se for eksempel USSN 10/631 029 av 29. juli, 2003 (US 2007/0060603), PCT/US03/24087 (WO 2004/014382), USSN 10/903 263 av 30. juli, 2004 (US 2005/0234049) og PCT/US2004/24716 (WO 2005/016893). Således er disse aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelser potente inhibitorer av både FceRI-
mediert og FcyRI-mediert degranulering. Som en konsekvens, kan de her beskrevne prodrugs benyttes for å inhibere disse Fc-reseptor signalkaskader i enhver celletype som uttrykker slike FceRI- og/eller FcyRI-reseptorer inkludert, men ikke begrenset til, makrofager, mast-, basofil-, neutrofil- og/eller eosinofilceller.
Fremgangsmåtene tillater også regulering av, og særlig inhibering av, en nedstrømsprosess som resulterer som en konsekvens av aktivering av en eller flere slike Fc-reseptorsignalkaskader. Ikke nedstrømsprosesser inkluderer, men er ikke begrenset til, FceRI-mediert og/eller FcyRI-mediert degranulering, cytokinproduksjon og/eller produksjon og/eller frigivning av lipidmediatorer som leukotriener og prostaglandiner. Metoden omfatter generelt å bringe en celle som uttrykker en Fc-reseptor, slik som en av celletypene diskutert over i kontakt med en mengde av et prodrug beskrevet heri, eller et akseptabelt salt, hydrat, solvent, N-oksid og/eller sammensetning derav, som er effektiv ved å regulere eller inhibere Fc-reseptorsignalkaskaden og/eller en nedstrøms-prosess påvirket av aktiveringen av denne signalkaskaden. Metoden kan praktiseres i in vitro kontekst forutsatt at kontakten utføres under betingelser under hvilke progruppen(e)metaboliserer for å oppnå den aktive 2,4-primidindiaminforbindelsen eller i in vzvo-kontekst som en terapeutisk tilnærming mot behandling eller hindring av sykdommer kjennetegnet ved, forårsaket av eller forbundet med Fc-reseptorsignalkaskaden, slik som sykdommer påvirket av frigivning av granulspesifikke kjemiske mediatorer ved degranulering, frigivning og/eller syntesen av cytokiner og/eller frigivning og/eller syntesen av lipidmediatorer slik som leukotriner og prostaglandin.
I nok et aspekt tilveiebringer foreliggende beskrivelse metoder for å inhibere en Fc-reseptorsignaltransduksjonkaskade hos et individ, som FceRI- og/eller FcyRI-signalkaskader. Metodene kan praktiseres i dyr i veterinærkontekst, og i forbindelse med mennesker. Metodene involverer generelt administrering til et animalindivid eller et menneske av en mengde av et prodrug som beskrevet her, eller et akseptabelt salt, hydrat, solvat, N-oksid og/eller preparat derav, effektiv for å behandle sykdommen. Som beskrevet tidligere, fører aktivering av FceRI- eller FcyRI-reseptorsinglkaskaden i visse immunceller til frigivning og/eller syntese av et antall kjemiske substanser som er farmakologiske mediatorer av et vidt spektrum sykdommer. Hvilke som helst av disse sykdommer kan behandles eller forhindres ifølge metoden.
I mastceller og basofile celler fører for eksempel FceRI- eller FcyRI-signalkaskaden til den umiddelbare (dvs. innen 1-3 min etter reseptoraktivering) frigivning av et på forhånd dannet mediatorer av atopiske og/eller Type I hypersensitivitetsreaksjoner (for eksempel histamin, proteaser som tryptase osv.) via degranuleringsprosessen. Slike atopiske eller Type I hypersensitivitetsreaksjoner inkluderer, men er ikke begrenset til anafylaktiske reaksjoner på miljø- og andre allergener (for eksempel pollen, insekt-og/eller dyregjft, næringsstoffer, medikamenter, kontrastfargestoffer osv.), anafylaktoid reaksjoner, høysnue, allergisk konjuktivitt, allergisk rhinitt, allergisk astma, atopisk dermatitt, eksem, urtikaria, mukosale forstyrrelser, vevsforstyrrelser og visse gastrointestinale forstyrrelser.
Den umiddelbar frigivning av de på forhand dannede mediatorer via degranulering følges av frigivning og/eller syntese av et antall andre kjemiske mediatorer inkludert, blant annet, plateaktiverende faktor (PAF), prostaglandiner og leukotriener (for eksempel LTC4) og de novo-syntese og frigivning av cytokiner som TNFa, IL-4, IL-5, IL-6, IL-13 osv. Den første av disse to prosesser inntrer rundt 3-30 minutter etter reseptoraktiveiing, den sistenevnte rundt 30 minutter - 7 timer etter reseptoraktiveiing. Disse "sene trinn"-mediatorer antas å være delvis ansvarlige for de kroniske symptomer av de ovenfor angitte atopiske og Type I hypersensitivitetsreaksjoner, og er i tillegg kjemiske mediatorer av inflammasjon og inflammatorisk sykdommer (for eksempel osteoartritt, inflammatorisk tarmsykdom, ulcerativ kolitt, Crohns sykdom, idiopatisk inflammasjon tarmsykdom, irritabel tarmsyndrom, spastisk kolon osv.), lavgrad aning (for eksempel skleroderma, øket fibrose, keloider, postkirurgiske arr, pulmonær fibrose, vaskulære spasmer, migrene, reperfusjonsskade og postmyokardialt infarkt) og sikka kompleks eller -syndrom. Alle disse sykdommer kan behandles eller forhindres i henhold til metoder som beskrevet her. Således tilveiebringer foreliggende oppfinnelse i et annet aspekt en forbindelse med strukturformel:
eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller hydrat, solvat, eller N-oksid av forbindelsen eller saltet, for behandling eller forebygging av en sykdom valgt blant en allergisk sykdom, lavgrad arrdannelse, en sykdom assosiert med vevsdestruksjon, en sykdom assosiert med vevinflammasjon, inflammasjon og arrdannelse.
Ytterligere sykdommer som kan behandles eller forhindres ifølge de her beskrevne metoder, inkluderer sykdommer assosiert med basofile celler- og/eller mastcellepatologj. Eksempler på slike sykdommer inkluderer, men er ikke begrenset til, sykdommer i huden som skleroderma, kardialsykdommer som postyokardialt infarkt, pulmonære sykdommer som pulmonære muskelforandringer eller remodellering og kronisk obstruktiv lungesykdom (KOLS), sykdommer i tarmen som inflammatorisk tarmsyndrom (spastisk kolon), akutt myeloid leukemi (AML) og immuntrombocytopenisk purpura.
Mange av de aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelser er også potente inhibitorer av tyrosinkinase Syk-kinase. Eksempler på slike 2,4-pyrimidindiaminer er beskrevet for eksempel i USSN 10/355 543 av 31. jaunar, 2003 (US 2004/0029902A1), PCT/US03/03022 av 31. januar, 2003 (WO 03/063794), USSN 10/631 029 av 29. juli, 2003 (US 2007/0060603), PCT/US03/24087 (WO 2004/014382), USSN 10/903 263 av 30. juli, 2004 (US 2005/0234049) og PCT/US2004/24716 (WO 2005/016893). Således tilveiebringer foreliggendebeskrivelse, i et ytterligere aspekt, metoder for å regulere og spesielt å inhibere Syk-kinaseaktivitet. Denne metode involverer generelt å bringe en Syk-kinase eller en celle omfattende en Syk-kinase i kontakt med en mengde av et egnet prodrug, eller et akseptabelt salt, hydrat, solvat, N-oksid og/eller et preparat derav, effektivt til å regulere eller inhibere Syk-kinaseaktivitet. I en utførelsesform er Syk-kinasen en isolert eller rekombinant Syk-kinase. I en annen utførelsesform er Syk-kinasen en endogen eller rekombinant Syk-kinase som uttrykkes av en celle, for eksempel mastcelle eller en basofil celle. Metoden kan gjennomføres i in vitro-kontekster, forutsatt at kontakten gjennomføres under betingelser der progruppen(e) metaboliserer for å gi den aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelsen, eller i in vivo-kontekster som terapeutisk vei mot terapi eller forebygging av sykdommer som karakteriseres ved, forårsakes av eller assosiseres med Syk-kinaseaktivitet.
Uten å ønske å være bundet av noen spesiell teori antas det at slike aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelser inhiberer cellulær degranulering og/eller frigivning av andre kjemiske mediatorer primært ved inhibering av Syk-kinase som blir aktivert via y-kjede homodimeren av FcsRI. Denne y-kjede homodimer deles av andre Fc-reseptorer, inkludert FcyRI, FcyRin og FcaRI. For alle disse reseptorer blir signaltransduksjonen mediert av den felles y-kjede homodimer. Binding og aggregering av disse reseptorer resulterer i rekruttering og aktivering av tyrosinkinaser som Syk-kinase. Som en konsekvens av disse felles signaleringsaktiviteter kan prodrugs som beskrives her og som metaboliserer til slike aktive 2,4-pyrimidinaminforbindelser benyttes for å regulere, og særlig inhibere, signaleringskaskadene av Fc-reseptorer med denne y-kjede homodimer som FceRI, FcyRI, FcyRin og FcaRI, så vel som de cellulære responser som elisiteres via disse reseptorer.
Syk-kinase er kjent for å spille en kritisk rolle i andre signalkaskader. For eksempel er Syk-kinase en effektor av B-cellereseptor (BCR) signalering (Turner et al., 2000, Immunology Today, 21:148-154) og er en vesentlig komponent ved integrin P(l)-, P(2)-og P(3)-signalering i neutrofiler (Mocsai et al., 2002, Immunity, 16:547-558). Aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelser som er potente inhibitorer av Syk-kinase kan benyttes for å regulere, og særlig inhibere, enhver signalkaskade der Syk spiller en rolle som for eksempel Fc-reseptor, BCR- og integrin signalkaskaden, så vel som de cellulære responser som elisisteres via disse signalkaskader. Således kan de prodrugs som er beskrevet her og som metaboliserer til slike aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelser benyttes for å regulere slike aktiviteter. Den spesielle, cellulære respons som reguleres eller inhiberes vil delvis avhenge av den spesielle celletype og reseptorsignalkaskaden, som velkjent i teknikken. Ikke-begrensende eksempler på cellulær respons som kan reguleres eller inhiberes med slike prodrugs inkluderer et respiratorisk støt, cellulær adhesjon, cellulær degranulering, cellespredning, cellemigrering, fagocytose (for eksempel i makrofager), kalsiumionefluks (for eksempel i mast-, basofil-, neutrofil-, eosinofil- og B-celler), plateaggregering og cellematurering (for eksempel i B-celler).
Fremgangsmåter for regulering og spesielt inhibering av signaltransduksjonskaskaden der Syk spiller en rolle er beskrevet. Metoden involverer generelt å bringe en Syk-avhengig reseptor eller en celle som uttrykker en Syk-avhengig reseptor i kontakt med en mengde av et egnet prodrug som beskrevet her, eller et akseptabelt salt, hydrat, solvat, N-oksid og/eller preparat derav, som er effektiv for å regulere eller inhibere signaltransduksjonskaskaden. Metoden kan også benyttes for å regulere, og spesielt inhibere, nedstrømsprosesser eller cellulær respons som elisiteres ved aktivering av den spesielle Syk-avhengige signaltransduksjonskaskade. Metodene kan gjennomføres for å regulere enhver signaltransduksjonskaskade der Syk er kjent nå eller senere viser seg å spille en rolle. Metodene kan gjennomføres i in vzZro-kontekster, forutsatt at kontakten gjennomføres under betingelser der progruppen(e) metaboliserer for å gi den aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelse eller in vzvo-kontekster som terapeutisk vei mot terapi eller forebygging av sykdommer som karakteriseres ved, forårsakes av eller assosieres med aktivering av Syk-avhengjg signaltransduksjonskaskade. Ikke-begrensende eksempler på slike sykdommer inkluderer de som er diskutert tidligere.
Nylige studier har vist at aktivering av plater med kollagen medieres via den samme vei som benyttet ved immunreseptorer med en immunreseptor tyrosinkinasedel på FcRy i en avgjørende rolle (Watson & Gibbons, 1998, Immunol. Today, 19:260-264), og også der FcRy spiller en avgjørende rolle ved generering av neointimal hyperplasi etter ballongskade i mus, mest sannsynlig via kollagenindusert aktivering av plater og leukocyttrekruttering (Konishi et al., 2002, Circulation, 105:912-916). Således kan de her beskrevne prodrugs også benyttes for å inhibere kollagenindusert plateaktivering og for terapi eller forebygging av sykdommer assosiert med eller forårsaket av slik plateaktivering som for eksempel intimal hyperplasi og restenose etter vaskulær skade.
Cellulære og animaldata bekrefter også at mange av disse aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelser også kan benyttes for terapi eller forebygging av autoimmune sykdommer og/eller symptomer på slike sykdommer (se for eksempel USSN 10/631 029 av 29. juli, 2003 (US 2007/060603), PCT/US03/24087 (WO 2004/014382), USSN 10/903 263 av 30. juli, 2004 (US 2005/0234049) og PCT/US2004/24716 (WO 2005/016893). Som en konsekvens kan prodrugs av slike aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelser på samme benyttes for terapi eller forebygging av slike autoimmune sykdommer og/eller symptomer. Således tilveiebringer foreliggende oppfinnelse en forbindelse med strukturformel:
eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller hydrat, solvat, eller N-oksid av forbindelsen eller saltet, for behandling eller forebygging av en autoimmunsykdom.
Metodene involverer generelt administrering til et individ som lider av en autoimmun sykdom eller risikerer å utvikle en autoimmun sykdom, av en mengde av et egnet prodrug som beskrevet her, eller et akseptabelt salt, N-oksid, hydrat, solvat eller preparat derav, effektiv for terapi eller forebygging av den autoimmune sykdom og/eller dens assosierte symptomer. Autoimmune sykdommer som kan behandles eller forhindres med prodrugs ifølge oppfinnelsen inkluderer de sykdommer som vanligvis er assosiert med nonanafylaktiske hypersensitivitetsreaksjoner (Type II-, Type III- og/eller Type IV-hypersensitivitetsreaksjoner) og/eller de sykdommer som medierer, i det minste delvis, ved aktivering av FcyR-signalkaskade i monocytte celler. Slike autoimmunsykdommer inkluderer, men er ikke begrenset til, de autoimmune sykdommer som hyppig angis som enkelt organ- eller enkel celletype autoimmunforstyrrelser og de autoimmunsykdommer som hyppig angis som å involvere systemisk autoimmunforstyrrelse. Ikke-begrensende eksempler på sykdommer som hyppig angis som enkelt organ- eller enkel celletype autoimmunforstyrrelse inkluderer: Hashimotos tyroiditt, autoimmun hemolytisk anemi, autoimmun atrofisk gastritt av pernisiøs anemi, autoimmun encefalomyelitt, autoimmun orkitt, Goodpastures sykdom, autoimmun trombocytopeni, sympatetisk oftalami, myastenia gravis, Graves sykdom, primær billiær cirrose, kronisk aggressiv hepatitt, ulcerativ kolitt og membranøs glomerulopati. Ikke-begrensende eksempler på sykdommer som ofte angis som å involvere systemisk autoimmunforstyrrelse inkluderer: systemisk lupus erytematose, reumatoid artritt, Sjøgrens syndrom, Reiters syndrom, polymyositt-dermatomyositt, systemisk sklerose, polyartritt nodosa, multiple sklerose og bulløs pemfigoid. Ytterligere autoimmunsykdommer som kan være P-celle (humorale) basert eller T-cellebasert inkluderer autoimmun alopeci, Type I eller juvenil start diabetes og tyroiditt.
Kort beskrivelse av figurene
Figur 1 viser et skjema som illustrerer metabolske veier for eksempler på fosforholdige prodrugs; Figur 2 viser et skjema som illustrerer en metabolsk vei for et eksempel på en syklisk fosfatesterprodrug; Figur 3 viser et eksempel på syntese av eksempler på syklisk fosfatprodrug; og Figurene 4-11 viser grafer som illustrerer forskjellige farmakokinetiske data for medikamentforbindelse 1 og/eller prodrug forbindelse 4.
Detaljert beskrivelse
1. Definisjoner
Som er benyttet her, skal de følgende uttrykk tolkes til å ha de følgende betyninger: "Alkyl" per se eller som del av en annen subtituent henviser til en mettet eller umettet, rett eller forgrenet eller syklisk enverdi hydrokarbonrest ved det angitte antall karbonatomer (for eksempel betyr C1-C6 1 til 6 karbonatomer) som er oppnådd ved fjerning av et hydrogenatom fra et enkelt karbonatom fra et opphavsalkan, alken eller alkyn. Typiske alkylgrupper inkluderer, men er ikke begrenset til, metyl; etyler som etanyl, etanyl, etynyl; propyler som propan-l-yl, propan-2-yl, syklopropan-l-yl, prop-1-en-l-yl, prop-l-en-2-yl, prop-2-en-l-yl, sykloprop-l-en-l-yl; sykloprop-2-en-l-yl, prop-l-yn-l-yl, prop-2-yn-l-yl osv; butyler som butan-1-yl, butan-2-yl, 2-metylpropan-1-yl, 2-metylpropan-2-yl, syklobutan-l-yl, but-1-en-1-yl, but-l-en-2-yl, 2-metyl-prop-l-en-l-yl, but-2-en-l-yl, but-2-en-2-yl, buta-l,3-dien-l-yl, buta-l,3-dien-2-yl, syklobut-1-en-l-yl, syklobut-l-en-3-yl, syklobuta-l,3-dien-l-yl, but-l-yn-l-yl, but-l-yn-3-yl, but-3-yn-l-yl, etc; og lignende. Der spesifikke nivåer av mettethet er ment benyttes nomenklaturen "alkanyl", "alkenyl" og/eller "alkynyl", som definert nedenfor. Som benyttet her betyr "lavere alkyl" (Cl-C8)alkyl.
"Alkanyl" betyr per se eller som del av en annen substituent en mettet, rett, forgrenet eller syklisk alkyl avledet ved fjerning av et hydrogenatom fra et enkelt karbonatom for opphavsalkan. Typiske alkanylgrupper inkluderer, men er ikke begrenset til metanyl; etanyl; propanyler som propan-l-yl, propan-2-yl (isopropyl), syklopropan-l-yl etc; butanyler som butan-1-yl, butan-2-yl (sec-butyl), 2-metylpropan-l-yl (isobutyl), 2-metylpropan-2-yl (t-butyl), syklobutan-l-yl etc; og lignende. Som benyttet her betyr "lavere alkanyl" (C1-C8) alkanyl.
"Alkenyl" per se eller som en del av en annen substituent henviser til en umettet, rett, forgrenet eller syklisk alkyl med minst en karbon-karbon dobbeltbinding avledet ved fjerning av et hydrogenatom fra et enkelt karbonatom av opphavsalken. Gruppen kan være enten i cis- eller trans-konformasjon rundt dobbeltbindingen(e). Typiske alkenylgrupper inkluderer, men er ikke begrenset til etenyl; propenyler som prop-l-en-1-yl, prop-l-en-2-yl, prop-2-en-l-yl, prop-2-en-2-yl, sykloprop-l-en-l-yl; sykloprop-2-en-l-yl; butenyler som vut-l-en-l-yl, but-l-en-2-yl, 2-metyl-prop-l-en-l-yl, but-2-en-l-yl, but-2-en-2-yl, buta-l,3-dien-l-yl, buta-l,3-dien-2-yl, syklobut-l-en-l-yl, syklobut-1-en-3-yl, syklobuta-l,3-dien-l-yl og lignende. Som benyttet her, betyr "lavere alkenyl"
(C2-C8)alkenyl.
"Alkynyl" betyr per se eller som en del av en annen substituent en umettet, rett, forgrenet eller syklisk alkyl med minst en karbon-karbon trippelbinding avledet ved fjerning av et hydrogenatom fra et enkelt karbonatom i et opphavsalkyn. Typiske alkynylgrupper inkluderer, men er ikke begrenset til, etynyl; propynyler som prop-l-yn-
1-yl, prop-2-yn-l-yl osv.; butynyler som but-1-yl-1-yl, but-l-yn-3-yl, but-2-yn-l-yl osv.; og lignende. Som benyttet her, betyr "lavere alkynyl" (C2-C8) alkynyl.
"Alkyldiyl" betyr per se eller som del av en annen substituent en mettet eller umettet, forgrenet, rett eller syklisk toverdig hydrokarbongruppe med det angitte antall karbonatomer (dvs. C1-C6 betyr fra 1 til 6 karbonatomer) avledet ved fjerning av et hydrogenatom fra hvert av to forskjellige karbonatomer av et opphavsalkan, -alken eller -alkyl, eller ved fjerning av to hydrogenatomer fra et enkelt karbonatom av et opphavsalkan, -alken eller -alkyn. De to monovalente restsentra eller hver valens av det toverdige restsenter kan danne bindinger med samme eller forskjellige atomer. Typiske alkyldiylgrupper inkluderer, men er ikke begrenset til metandiyl; etyldiyler som etan-l,l-diyl, etan-l,2-diyl, eten-l,l-diyl, eten-l,2-diyl; propyldiyler som propan-1,1-diyl, propan-1,2-diyl, propan-2,2-diyl, propan-1,3-diyl, syklopropan-l,l-diyl, syklopropan-l,2-diyl, prop-l-en-1,1 -diyl, prop-l-en-1,2-diyl, prop-2-en-1,2-diyl, prop-1-en-1,3-diyl, sykloprop-l-en-1,2-diyl, sykloprop-2-en-1,2-diyl, sykloprop-2-en-1,1-diyl, prop-1-yn-1,3-diyl osv.; butyldiyler som butan-1,1-diyl, butan-1,2-diyl, butan-1,3-diyl, butan-1,4-diyl, butan-2,2-diyl, 2-metyl-propan-1,1 -diyl, 2-metylpropan-1,2-diyl, syklobutan-1,1-diyl; syklobutan-1,2-diyl, syklobutan-1,3-diyl, but-l-en-1,1-diyl, but-1-en-1,2-diyl, but-l-en-1,3-diyl, but-l-en-1,4-diyl, 2-metyl-prop-l-en-1,1 -diyl, 2-metanylidenpropan-l,l-diyul, buta-l,3-dien-l,l-diyl, buta-l,3-dien-l,2-diyl, buta-1,3-dien-l,3-diyl, buta-l,3-dien-l,4-diyl, syklobut-l-en-1,2-diyl, syklobut-l-en-1,3-diyl, syklobut-2-en-1,2-diyl, syklobuta-l,3-dien-l,2-diyl, syklobuta-l,3-dien-l,3-diyl, but-1-yn-1,3-diyl, but-1-yn-1,4-diyl, buta-1,3-diyn-1,4-diyl, osv.; og lignende. Der spesifikke nivåer av mettethet er ment benyttes nomenklaturen alkanyldiyl, alkenyldieyl og/eller alkynyl diyl. Der det spesifikt er ment at to val enser er på samme karbonatom, benyttes nomenklaturen "alkyliden". I noen utførelsesformer er alkyldiylgruppen (Cl-C8)alkyldiyl. Spesifikke utførelsesformer inkluderer mettede, asykliske alkanyldiylgrupper hvori restsentrene er på terminalkarbonene, for eksempel metandiyl (metano); etan-1,2-diyl (etano); propan-1,3-diyl (propano), butan-1,4-diyl (butano); og lignende (også angitt som alkylenoer, definert nedenfor).
"Alkyleno" henviser per se eller som en del av en annen substituent til en rettkjedet, mettet eller umettet alkyldiylgruppe med to terminale, monovalente radikale sentra oppnådd ved fjerning av et hydrogenatom fra hvert av de to terminal karbonatomene i rettkjedet opphavsalkan, -alken eller -alkyn. Lokasjonen for en dobbeltbinding eller trippelbinding hvis den er tilstede, i en spesiell alkyleno er antydet i firkantparentes. Typiske alkylenogrupper inkluderer, men er ikke begrenset til, metano; etylenoer som
etano, eteno, etyno; propylenoer som propano, prop[l]eno, propa[l,2]dieno, pro[l]yno, osv.; butylenoer som butano, but[l]eno, but[2]eno, buta[l,3]dieno, but[l]yno, but[2]yno, buta[l,3]diyno, osv.; og lignende. Der spesifikke nivåer av mettethet er ment, benyttes nomenklaturen alkano, alkeno og/eller alkyno. I noen utførelsesformer er alkylenogruppene (C1-C8)- eller (Cl-C3)alkyleno. Spesifikke utførelsesformer inkluderer rette, mettede alkanogrupper som metano, etano, propano, butano og lignende.
"Heteroalkyl", "Heteroalkanyl", "Heteroalkenyl", "Heteroalkynyl", "heteroalkyldiyl" og "Heteroalkyleno" henviser per se eller som en del av en annen substituent til alkyl-, alkanyl-, alkenyl-, alkynyl-, alkyldiyl- og alkylenogrupper, der et eller flere av karbonatomene alle uavhengig er erstatte med de samme eller forskjellige heteroatomer eller heteroatomiske grupper. Typiske heteroatomer og/eller heteroatomiske grupper som kan erstatte karbonatomene inkluderer, men er ikke begrenset til -O-, -S-, -S-O-, - NR'-, -PH-, -S(O)-, -S(0)2-, -S(0)NR' -, -S(0)2NR'- og lignende, inkludert kombinasjoner derav, der hver R' uavhengig er hydrogen eller (Cl-C8)alkyl.
"Sykloalkyl" eller "Heterosykloalkyl" henviser begge per se eller som en del av en annen substituent til sykliske versjoner av "alkyl"- henholdsvis "heteroalkyl"-grupper. For heteroalkylgrupper kan et heteroatom oppta den posisjonen som er festet til resten av molekylet. Typiske sykloalkyl grupper inkluderer, men er ikke begrenset til, syklopropyl; syklobutyler som syklobutanyl og syklobutenyl; syklopentyler som syklopentanyl og syklopentenyl; sykloheksyler som sykloheksanyl og sykloheksenyl; og lignende. Typiske heterosykloalkylgrupper inkluderer, men er ikke begrenset til tetrahydrofuranyl (for eksempel tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydrofuran-3-yl osv.), piperidinyl (for eksempel piperidin-l-yl, piperidin-2-yl osv.), morfolinyl (for eksempel morfolin-3-yl, moroflin-4-yl osv.), piperazinyl (for eksempel piperazin-l-yl, piperazin-2-yl osv.) og lignende.
"Asyklisk heteroatomisk bro" henviser til en toverdig bro der skjellettatomene utelukkende er heteroatomer og/eller heteroatomiske grupper. Typiske asykliske, heteroatomiske broer inkluderer, men er ikke begrenset til -O-, -S-, -S-O-, -NR'-, -PH-, -S(O)-, -S(0)2-, -S(0)NR'-, -S(0)2NR'- og lignende, inkludert kombinasjon derav, der hver R' uavhengig er hydrogen eller (Cl-C8)alkyl.
"Aromatisk opphavsringsystem" henviser til et umettet, syklisk eller polysyklisk ringsystem med et konjugert 7i-elektronsystem. Spesifikt inkludert innen definisjonen
av "aromatisk opphavsringsystem" er fuserte ringsystemer der en eller flere av ringene er aromatiske og en eller flere av ringene er mettede eller umettede som for eksempel fluoren, indan, inden, fenalen, tetrahydronaftalen osv. Typiske aromatiske opphavsringsystemer inkluderer, men er ikke begrenset til, aceantrylen, acenaftylen, acefenantrylen, antracen, azulen, benzen, krysen, koronen, fluoranten, fluoren, heksacen, heksefen, heksalen, indacen, s-indacen, indan, inden, naftalen, oktacen, oktafen, oktalen, ovalen, penta-2,4-dien, pentacen, pentalen, pentafen, perylen, fenalen, fenantren, picen, leianden, pyren, pyrantren, rubicen, tetrahydronaftalen, trifenylen, trinaftalen og lignende.
"Aryl" per se eller som del av en annen substituent henviser til en enverdig, aromatisk hydrokarbongruppe med det angitte antall karbonatomer (for eksempel betyr C6-C15 fra 6 til 15 karbonatomer), avledet ved fjerning av et hydrogenatom fra et enkelt karbonatom på et aromatisk opphavsringsystem. Typiske arylgrupper inkluderer, men er ikke begrenset til grupper avledet aceantrylen, acenaftylen, acefenantrylen, antracen, azylen, benzen, krysen, koronen, fluoranten, fluoren, heksace3n, heksafen, heksalen, as-indacen, s-indacen, indan, inden, naftalen, oktacen, oktafen, oktalen, ovalen, pentacen, pentalen, pentafen, perylen, fenalen, fenantren, picen, pleianden, pyren, pyrantren, rubicen, trifenylen, trinaftalen og lignende, så vel som forskjellige hydro-isomerer derav. I foretrukne utførelsesformer er arylgruppen (C6-C15) aryl, mens (C6-C10) er mer typisk. Spesifikke eksempler på aryler er fenyl og naftyl.
"Arylaryl" henviser per se eller som en del av en annen substituent til en enverdig hydrokarbongruppe avledet ved fjerning av et hydrogenatom fra et enkelt karbonatom i et ringsystem der to eller flere identiske eller ikke-identiske, aromatiske opphavsringsystemer er forenet direkte via en enkeltbinding, der antallet av slike direkte bindingsforbindelser er en mindre enn antallet aromatiske opphavsringsystemer som er involvert. Typiske arylarylgrupper inkluderer, men er ikke begrenset til bifenyl, trifenyl, fenylnaftyl, binaftyl, bifenylnaftyl og lignende. Der antallet karbonatomer i en arylarylgruppe er spesifisert, henviser tallet til karbonatomene som omfatter hver aromatiske opphavsring. For eksempel er (C6-C15) arylaryl en arylarylgruppe der hver aromatiske ring omfatter fra 6 til 15 karbonatomer, for eksempel bifenyl, tifenyl, binaftyl, fenylnaftyl osv. I noen utførelsesformer er hver aromatiske opphavsringsystem av en arylarylgruppe uavhengig en (C6-C15) aromatisk, mer spesielt (C6-C10)aromatisk. Spesifikke eksempler på arylarylgrupper inkluderer de der alle de aromatiske opphavsringsystemer er identiske, for eksempel bifenyl, trifenyl, binaftyl, trinaftyl osv.
"Biaryl" per se eller som en del av en annen substituent henviser til en arylarylgruppe med to identiske aromatiske opphavssystemer forenet direkte via en enkeltbinding. Typiske biarylgrupper inkluderer, men er ikke begrenset til bifenyl, binaftyl, biantracyl og lignende. I noen utførelsesformer er de aromatiske ringsystemer (C6-C15) aromatiske ringer, og mer spesielt (C6-C10) aromatiske ringer. Et eksempel på en spesiell biarylgruppe er bifenyl.
"Arylalkyl" per se eller som en del av en annen substituent henviser til en asyklisk alkylgruppe der et av hydrogenatomene som er bundet til et karbonatom, typisk et terminal- eller sp<3->karbonatom, er erstattet med en arylgruppe. Typiske arylalkylgrupper inkluderer, men er ikke begrenset til benzyl, 2-fenyletan-l-yl, 2-fenyleten-l-yl, naftylmeyl, 2-naftyletan-l-yl, 2-naftyleten-l-yl, naftobenzyl, 2-naftofenyletan-l-yl og lignende. Der spesifikke alkyl del er er ment, benyttes nomenklaturen arylalkanyl, arylalkenyl og/eller arylalkynyl. I noen utførelsesformer er arylalkylgruppen (C7-C21)arylalkyl, for eksempel alkanyl-, alkenyl- eller alkynyldelen av arylalkylgruppen (C1-C6) og aryldelen er (C6-C15). I noen spesifikke utførelsesformer er arylalkylgruppen (C7-C13), dvs. at alkanyl-, alkenyl- eller alkynyldelen i arylalkylgruppen er (C1-C3) og aryldelen er (C6-C10).
"Heteroaromatisk opphavsringsystem" henviser til en aromatisk opphavsringsystem der et eller flere karbonatomer hvert uavhengig er erstattet med den samme eller forskjellig heteroatomer eller heteroatomiske grupper. Typiske heteroatomer eller heteroatomiske grupper for å erstatte karbonatomene inkluderer, men er ikke begrenset til N, NH, P, O, S, S(O), S(0)2, Si osv. Spesifikt inkludert innen definisjonen av "heteroaromatisk opphavsringsystem" er fuserte ringsystemer der en eller flere av ringene er aromatiske og en eller flere av ringene er mettet eller umettet, for eksempel benzodioksan, benzofuran, kroman, kromen, indol, indolin, xanten osv. Også inkludert i definisjonen "heteroaromatisk opphavsringsystem" er de velkjente ringer som inkluderer vanlige substituenter som for eksempel benzopyron og 1-metyl-1,2,3,4-tetrazol. Spesifikt utelukket fra definisjonen av "heteroaromatisk opphavsringsystem" er benzenringer fusert til syklilske polyalkylenglykoler som sykliske polyetylenglykoler. Typiske heteroaromatiske opphavsringsystemer inkluderer, men er ikke begrenset til akridin, benzimidazol, benzisoksazol, benzodioksan, benzodioksol, benzofuran, benzopyron, benzotiadiazol, benzotiazol, benzotriazol, benzooksazin, benzooksazol, benzooksazolin, karbazol, P-karbolin, kroman, kromen, cinnolin, furan, imidazol, indazol, indol, indolin, indolizin, isobenzofuran, isokromen, isoindol, isoindolin, isokinolin, isotiazol, isoksazol, naftyridin, oksadiazol, oksazol, perimidin, fenantridin, fenantrolin, fenazin,
ftalazin, pteridin, purin, pyran, pyrazin, pyrazol, pyridazin, pyridin, pyrimidin, pyrrol, pyrrolizin, kinazolin, kinolin, kinolizin, kinoksalin, tetrazol, tiadiazol, tiazol, tiofen, triazol, xanten og lignende.
"Heteroaryl" pr se eller som en del av en annen substituent henviser til en enverdig, heteroaromatisk gruppe med det angitte antallet ringatomer (for eksempel betyr "5-14 leddet" fra 5 til 14 ringatomer), avledet ved fjerning av et hydrogenatom fra et enkelt atom på et heteroaromatisk opphavsringsystem. Typiske heteroarylgrupper inkluderer, men er ikke begrenset til grupper avledet fra akridin, benzimidazol, benzioksazol, benzotioksan, benzodiaksol, benzofuran, benzopyron, benzotiadiazol, benzotiazol, benzotriazol, benzoksazin, benzoksazol, benzoksazolin, karbazol, P-karbolin, kroman, kromen, cinnolin, furan, imidazol, indazol, indol, indolin, indolizin, isobenzofuran, isokromen, isoindol, isoindolin, isokinolin, isiotiazol, ioksazol, naftyridin, oksadiazol, oksazol, perimidin, fenantridin, fenantrolin, fenazin, ftalazin, pteridin, purin, pyran, pyrazin, pyrazol, pyridazin, pyridin, pyrimidin, pyrrol, pyrrolizin, kinazolin, kinolin, kinolizin, kinoksalin, tetrazol, tiadiazol, tiazol, tiofen, triazol, xanten og lignende, så vel som de forskjellige hydroisomerer derav. I foretrukne utførelsesformer er heteroarylgruppen en 5-14-leddet heteroaryl med 5-10-leddet heteroaryl som spesielt foretrukket.
"Heteroaryl-Heteroaryl" betyr per se eller som del av en annen subtituent en enverdig, heteroaromatisk gruppe avledet ved fjerning av et hydrogenatom fra et enkelt atom i et ringsystem hvori to eller flere identiske eller ikke-identiske heteroaromatiske opphavsringsystemer er forenet via enkeltbinding og der antallet av slike direkte ringforbindelser er en mindre enn antallet heteroaromatiske opphavsringsystemer som er involvert. Typiske heteroaryl-heteroarylgrupper inkluderer, men er ikke begrenset til, bipyridyl, tripyridyl, pyridylpurinyl, bipurinyl osv. Der antallet atomer er spesifisert henviser et tall til antallet atomer som utgjør hvert heteroaromatiske opphavsringsystem. For eksempel er en 5-15-leddet heteroaryl-heteroaryl en heteroaryl-heteroarylgruppe der hvert heteroaromatisk opphavsringsystem omfatter fra 5 til 15 atomer, for eksempel bipyridyl, tripuridyl osv. I noen utførelsesformer er hvert heteroaromatiske opphavsringsystem uavhengig en 5-15 leddet heteroaromat, og mer typisk en 5-10-leddet heteroaromat. Spesifikke eksempler på heteroaryl-heteroarylgrupper inkluderer de der alle opphavs heteroaromatiske ringsystemer er identiske.
"Biheteroaryl" henviser per se eller som del av en annen substituent til en heteroaryl-heteroarylgruppe med to identiske heteroaromatiske opphavs ringsystemer forenet direkte via en enkeltbinding. Typiske biheteroarylgrupper inkluderer, men er ikke
begrenset til bipyridyl, bipurinyl, bikinolinyl og lignende. I noen utførelsesformer er de heteroaromatiske ringsystemer 5-15 leddede heteroaromatiske ringer, mer typiske 5-10-leddede heteroaromatiske ringer.
"Heteroarylalkyl" henviser per se eller som del av en annen substituent til en asyklisk alkylgruppe der et av hydrogenatomene som er bundet til et karbonatom, typiske et terminal- eller sp<3->karbonatom er erstattet med en heteroarylgruppe. Der spesifikke alkyldeler er tilsiktet, benyttes nomenklaturen heteroarylalkanyl, heteroaryl alkenyl og/eller heteroarylalkynyl. I noen utførelsesformer er heteroarylalkylgruppen en 6-21-leddet heteroarylalkyl, for eksempel er alkanyl-, alkenyl- eller alkynyldelen av heteroarylalkyl (Cl-C6)alkyl og heteroaryldelen en 5-15-leddet heteroaryl. I noen spesifikke eksempler på utførelsesformer er heteroarylalkyl en 6-13-leddet heteroarylalkyl, for eksempel er alkanyl, alkenyl eller alkynyldelen (Cl-C3)alkyl og heteroaryldelen en 5-10-leddet heteroaryl.
"Halogen" eller "Halo" henviser per se eller som en del av en annen substituent, og hvis ikke annet er sagt, til fluor, klor, brom eller jod.
"Haloalkyl" henviser per se eller som del av en annen substituent til en alkylgruppe hvori et eller flere av hydrogenatomene er erstattet med halogen. Således er uttrykket "haloalkyl" ment å inkludere monohaloalkyler, dihaloalkyler, trihaloalkyler osv. opp til perhaloalkyler. For eksempel inkluderer uttrykket "(Cl-C2)haloalkyl" fluormetyl, difluormetyl, trifluormetyl, 1-fluoretyl, 1,1-difluoretyl, 1,2-difluoretyl, 1,1,1-trifluoretyl, perfluoretyl osv.
De ovenfor definerte grupper kan inkludere prefikser og/eller suffikser slik de vanligvis benyttes i teknikken for å skape ytterligere, vel erkjente substituentgrupper. Som eksempler henviser "alkyloksy" eller "alkoksy" til en gruppe med formel -OR", "alkylamin" henviser til en gruppe med formel -NHR" og "dialkylamin" henviser til en gruppe med formel -NR"R", der hver R" uavhengig er alkyl. Som annet eksempel henviser "haloalkoksy" eller "haloalkyloksy" til en gruppe med formel -OR'" der R'" er haloalkyl.
"Substituert" betyr, ved anvendelse for å modifisere en spesifisert gruppe eller rest, at et eller flere hydrogenatomer på den spesifiserte gruppe eller rest hver var uavhengig av de andre, er erstattet med en eller flere like eller forskjellige substituenter. Substituentgrupper som er nyttige for substituering mot hydrogen på mettede
karbonatomer i de spesifiserte grupper eller rester inkluderer, men er ikke begrenset til - R<60>, halo, -OM+, =0, -OR<70>, -SR<70>, -S<T>V<f>, =S, -NR<80>R<80>, =NR<70>, =N-OR<70>, trihalometyl, -CF3, -CN, -OCN, -SCN, -NO, -N02, =N2, -N3, -S(0)2R<7>°, -SCO^OTVf, - S(0)2OR<70>, -OS(0)2R<70>, -OS(0)2O M<+>, -OS(0)2OR<70>, P(0)(0 )2(M+)2, -P(O)(OR70)O"M<+>, -P(O)(OR<70>)(OR<70>), -C(0)R<70>, -C(S)R<70>, -C(NR<70>)R<70>, -C(0)O M<+>, -C(0)OR<70>, - C(S)OR7<0>, -C(O)NR<80>R<90>, -C(NR<70>)NR<80>R<80>' OC(0)R<70>, -OC(S)R<70>, -00(0)01^, - OC(0)OR<70>, -OC(S)OR<70>, -NR<70>C(O)R<70>, -NR<70>C(S)R<70>, -NR70C(O)O M+, - NR<70>C(O)OR<70>, -NR7<0>C(S)OR<70>, -N<R70>C(O)NR<80>R<80>, -NR<70>C(NR<70>)R70og - NR70C(NR70)NR80R80, der R<60>er valgt fra gruppen bestående av alkyl, sykloalkyl, heteroalkyl, sykloheteroalkyl, aryl, arylalkyl, heteroaryl og heteroarylalkyl; hver R<70>uavhengig er hydrogen eller R ; hver R uavhengig er R eller alternativt to R 'er, tatt sammen med nitrogenatomet hvortil de er bundet under dannelse av en 5-, 6- eller 7-leddet sykloheteroalkyl som eventuelt kan inkludere fra 1 til 4 av de samme eller forskjellige ytterligere heteroatomer valgt fra gruppen bestående av O, N og S; og hver M<1>" er et motion med en positiv ladning, for eksempel en positiv ladning uavhengig valgt blant K<+>, Na<+>,<+>N(R<60>)4og Li<+>, eller to M<1>" som sammen danner et toverdig motion, for eksempel toverdige motioner valgt blant Ca<2+>, Mg<2+>og Ba<2+>. Som spesifikke eksempler er -NR<80>R<80>ment å inkludere -NH2, -NH-alkyl, N-pyrrolidinyl og N-morfolinyl.
Tilsvarende inkluderer substitentgrupper som er nyttige for substituering mot hydrogener på umettede karbonatomer i den spesifiserte gruppe eller rest uten begrensning -R<60>, halo, -0\ M<+>, -OR<70>, -SR<70>, -STVf, -NR<80>R<80>, trihalometyl, -CF3, - CN, -OCN, -SCN, -NO, -N02, -N3, -S(0)2R<70>, -SCO^OTVf, -S(0)2OR<70>, -OS(0)2R<70>, OSCO^OTVf, -OS(0)2OR<7>°, -P(0)(0-)2(M<+>)2, -P(O)(OR70)O M+, -P(O)(OR70)(OR70), - C(0)R<70>, -C(S)R<70>, -C(NR<70>)R<70>, -C(0)O M<+>, -C(0)OR<70>, -C(S)OR<70>, C(O)NR<80>R<80>, - C(NR<70>)NR<80>R<80>, -OC(0)R<70>, -OC(S)R<70>, -OC(0)O M+, -OC(0)OR7<0>, -OC(S)OR<70>, - NR<70>C(O)R<70>, -NR<70>C(S)R<70>, -NR70C(O)O M+, -NR<70>C(O)OR<70>, -NR<70>C(S)OR<70>, - NR<70>C(O)NR<80>R<80>, -NR70C(NR70)R70 og -NR<70>C(NR<70>)NR<80>R<80>, hvor R<6>0, T70, R80 og M<1>" er som angitt ovenfor.
Substituentgrupper forskjellig fra R<p>som er nyttige for substituering mot hydrogener på nitrogenatomer i heteroalkyl- og sykloheteroalkylgrupper inkluderer, men er ikke begrenset til, -R<60>, -OTVf, -OR<70>, -SR<70>, -S"M<+>, -NR<80>R<80>, trihalometyl, -CF3, -CN, -NO,
-N02, -S(0)2R<70>, -S(0)2O M<+>, -S(0)2OR<70>, -OS(0)2R<70>, -OS(0)2O M<+>, -OS(0)2OR<70>, - P(0)(0 )2(M<+>)2, -P(O)(OR70)O M+, -P(O)(OR<70>)(OR<70>), -C(0)R<70>, -C(S)R<70>, - C(NR<70>)R70, -C(0)O<R70>, -C(S)OR<70>, -C(O)NR<80>R80, -C(NR<70>)NR<80>R80, -OC(0)R<70>, -
OC(S)R<70>, -OC(0)OR<70>, -OC(S)OR<70>, -NR<70>C(O)R<70>, -NR<70>C(S)R<70>, -NR<70>C(O)OR<70>, - NR<70>C(S)OR<70>, -NR<70>C(O)NR<80>R<80>, -NR70C(NR<70>)R<70>og-NR<70>C(NR<70>)NR<80>R<80>, der R<6>0,R7<0>, R<80>og M<1>" er som angitt ovenfor.
Substituentgrupper fra listen ovenfor som er nyttige for substituering av andre grupper eller atomer spesifisert som "substituert" vil være åpenbare for fagfolk på området.
"Beskyttende gruppe" henviser til en gruppe av atomer som, når de er festet til en reaktiv, funksjonell gruppe i et molekyl, maskerer, reduserer eller forhindrer
reaktiviteten for den funksjonelle gruppen. Typisk kan en beskyttende gruppe selektivt fjernes etter ønske under en syntese. Eksempler på beskyttende grupper kan finnes hos Greene og Wuts i Protective Groups in Organic Chemistry, 3. utg., 1999, John Wiley & Sons, NY samt hos Harrison et al., Compendium of Synthetic Organic Methods, vol. 1-8, 1971-1996, John Wiley & Son, NY. Representative aminobeskyttende grupper inkluderer, men er ikke begrenset til formyl, acetyl, trifluoracetyl, benzyl, benzyloksykarbonyl ("CBZ"), tert-butoksykarbonyl ("Boe"), trimetylsilyl ("TMS"), 2-trimetylsilyletansulfonyl ("TES"), trityl og substituert tritylgrupper, allyloksykarbonyl, 9-fluorenylmetyloksykarbonyl ("FMOC"), nitroveratryloksykarbonyl ("NVOC") og lignende. Representative hydroksylbeskyttende grupper inkluderer, men er ikke begrenset til, de der hydroksylgruppen enten er acylert eller alkylert som benzyl- og trityletere, så vel som alkyletere, tetrahydropyranyletere, trialkylsilyletere (for eksempel TMS- eller TIPPS-grupper) og allyletere.
"Fc-reseptor" henviser til et medlem av familien av celleoverflatemolekyler som binder Fc-delen (inneholdende det spesifikke, konstante området) av et immunoglobulin. Hver Fc-reseptor binder immunoglobuliner av en spesifikk type. For eksempel binder Fca-reseptoren ("FcaR") IgA, FceR binder IgE og FcyR binder IgG.
FcaR-familien inkluderer den polymere Ig-reseptor som er involvert i epitelial transport av IgA/IgM, den myeloide spesifikke reseptor RcaRI (også kalt CD89), Fca/uR- og minst to alternative IgA-reseptorer (for en nylig oversikt henvises det til Monteiro & van de Winkel, 2003, ANnu. Rev. Immunol., fremsendt e-publikasjon). FcaRI uttrykkes på neutrofiler, eosinofiler, monocytter/makrofater, dendrittiske celler og kufer celler. FcaRI inkluderer en a-kjede og en FcRy-homodimer som bærer en aktiveringsdel (ITAM) i det cytoplasmiske domenet og fosforylerer Syk-kinase. FceR-familien inkluderer to typer, angitt som FceRI og FceRJJ (også kjent som CD23). FceRI er en høyaffinitetsreseptor (binder IgE med en affinitet rundt 10<10>M_<1>) som finnes på mast-, basofil- og eosinofilceller som forankrer monomer IgE til celleoverflaten. FceRI har en a-kjede og en P-kjede og y-kjede homodimeren som er diskutert ovenfor. FceRII er en lav-affinitetsreseptor som uttrykkes på mononuklære fagocytter, B-lymfocytter, eosinofiler og plater. FceRJJ omfatter en enkelt polypeptidkjede og inkluderer ikke y-kjede homodimeren.
FcyR-familien inkluderer tre typer angitt som FcyRI (også kjent som CD64), FcyRII (også kjent som CD32) og FcyRin (også kjent som CD 16). FcyRI er en høyaffinitetsreseptor (binder IgGl med en affinitet på K^M"<1>) og finnes på mast-, basofil-, mononukleær-, neutrofile-, eosinofile-, dendrittiske- og fagocyttceller som forankrer monomerisk IgG til celleoverflaten. FcyRI inkluderer en a-kjede og y-kjededimeren som deles av FcaRI og FceRI.
FcyRII er en lavaffinitetsreseptor som uttrykkes på neutrofiler, monocytter, eosinofiler, plater og B-lymfocytter. FcyRII inkluderer en a-kjede og inkluderer ikke y-kjedehomodimeren som diskutert ovenfor.
FcyRIII er en lavaffinitetreseptor (binder IgGl med en affinitet på 5 x 10<5>M_<1>) uttrykt på NK-, eosinofil-, makrofag-, neutrofil- og mastceller. Den omfatter en a-kjede og y-homodimeren som deles av FcaRI, FceRI og FcyRI.
Fagfolk på området vil erkjenne at subenhetstrukturen og bindingsegenskapene for disse forskjellige Fc-reseptorer, så vel som celletypene som uttrykker disse, ikke er fullstendigkarakterisert. Diskusjonen ovenfor reflekterer kun dagens tilstand hva angår disse reseptorer (se for eksempel Immunobiology: The Immune System in Health & Disease, 5. utgave, Janeway et al., red., 2001, ISBN 0-8153-3642-x, Figur 9.30, s. 371) og er ikke ment å være begrensende med henblikk på det enorme antallet reseptorsignalkaskader som kan reguleres med de prodrugs som er beskrevet her.
"Fc-reseptormediert degranulering" eller "Fc-reseptorindusert degranulering" henviser til degranuerling som skjer via en Fc-reseptorsignaltransduksjonskaskade som initieres ved fornetning av en Fc-reseptor.
"IgE-indusert degranulering" eller "FceRI-mediert degranulering" henviser til degranulering som skjer via IgE-reseptorsignaltransduksjonskaskaden som initieres ved fornetning av FceRI-bundet IgE. Fornetningen kan induseres av et IgE-spesifikt
allergen eller et annet flerverdig bindingsmiddel som et anti-IgE-antistoff. I mast-og/eller basofilceller, kan FceRI-signalkaskaden som fører til degranulering brytes opp i to trinn: oppstrøms og nedstrøms. Oppstrøms trinnet inkluderer alle de prosesser som inntrer før kalsiumionemobilisering. Nedstrøms trinnet inkluderer kalsiumionemobilisering og alle prosesser nedstrøms denne. Forbindelser som inhiberer FceRI-mediert degranulering kan virke på et hvilket som helst punkt langs den FceRI-medierte signaltransduksjonskaskade. Forbindelser som selektivt inhiberer oppstrøms FceRI-mediert degranulering bevirker inhibering som del av FceRI-signalkaskaden oppstrøms det punkt der kalsiumionemobilisering induseres. I cellebaserte analyser inhiberer forbindelser som selektivt inhiberer oppstrøms FceRI-mediert degranulering, degranulering av celler som mast- eller basofilceller som aktiveres eller stimuleres med et IgE-spesifikt allergen eller bindingsmiddel (som et anti-IgE-antistoff), men som ikke i vesentlig grad inhiberer degranulering av celler som aktiveres eller stimuleres med degranuleringsmidler som går forbi FceRI-signalveien, som for eksempel kalsiumionoforene ionomycin og A23187.
"IgG-indusert degranulering" eller "FcyRI-mediert degranulering" henviser til degranulering som skjer via FcyRI-signaltransduksjonskaskaden initieret av fornetning av FcyRI-bundet IgG. Fornetningen kan induseres av et IgG-spesifikt allergen eller et annet flerverdig bindingsmiddel som et anti-IgG- eller fragmentantistoff. På samme måte som for FceRI-signalkaskaden fører i mast- og basofilceller, den FcyRI-signalerende kaskade også til degranulering som kan brytes opp i de samme to trinn: oppstrøms og nedstrøms. På samme måte som FceRI-mediert degranulering virker forbindelser som selektivt inhiberer oppstrøms FcyRI-mediert degranulering oppstrøms det punkt der kalsiumionemobilisering induseres. I cellebaserte analyser inhiberer forbindelser som selektivt inhiberer oppstrøms FcyRI-mediert degranulering, degranuleringen av celler som mast- eller basofilceller som aktiveres eller stimuleres med et IgG-spesifikt allergen eller bindingsmiddel (som et anti-IgG-antistoff eller - fragment), men inhiberer ikke i vesentlig grad degranulering av celler som aktiveres eller stimuleres ved degranuleringsmidler som går forbi FcyRI-signalveien, som for eksempel med kalsiumionoforene ionomycin eller A23187.
"Ionoforindusert degranulering" eller "Ionoformediert degranulering" refererer til degranulering av en celle slik som en mast- eller basofilcelle som opptrer ved eksponering til en kalsiumionofor slik som for eksempel ionomycin eller A23187. (s. 33,1. 28-30)
"Syk-kinase" henviser til en velkjent 72kDa ikke-reseptor (cytoplasmiske) miltproteintyrosinkinase som uttrykkes i B-celler og andre hematopoietiske celler. Syk-kinase inkluderer to konsensus Src-homolgi 2 (SH2)-domener i tandem, som binder til fosforylerte immunoreseptortyrosinbaserte aktiveringsdeler ("ITAMer"), et "linker"-domene og et katalytisk domene (for en oversikt over strukturen og funksjonen for Syk-kinase skal det henvises til Sada et al., 2001, J. Biochem. (Tokyo) 130:177-186); se også Turner et al., 2000, Immunology Today, 21:148-154). Syk-kinase har vært studert ustrakt som en effektor av B-cellereseptor (BCR) signalering (Turner et al., 2000, supra). Syk-kinase er også kritisk for tyrosinfosforylering av multiple proteiner som regulerer viktige veier som fører fra immunoreseptorer som Ca<2+->mobilisering og mitogenaktivert proteinkinase (MAPK)-kaskader og degranulering. Syk-kinase spiller også en kritisk rolle i integrinsignalering i neutrofiler (se for eksempel Mocsai et al., 2002, Immunity, 16:547-558).
Som benyttet her, inkluderer Syk-kinase kinaser fra hvilke som helst spesier av dyr, inkludert men ikke begrenset til homosapiens, simian, bovin, porcin, rodent osv., alle erkjent å høre til Syk-familien. Spesifikt inkludert er isoformer, spleisingsvarianter, alleliske varianter, mutanter, både naturlig forekommende og menneskelagde typer. Aminosyresekvensen for en Syk-kinase er velkjent og tilgjengelig fra GenBank. Spesifikke eksempler på mRNA'er som koder forskjellige isoformer av Syk-kinase kan finnes under GenBank aksessnr. gi|21361552|reflNM_003177.2|, gj|496899|emb|Z29630.1 |HSSYKPTK[496899] og
gj|15030258|gb|BC011399.1|BC011399[15030258], alt ansett som del av beskrivelsen.
Fagmannen på området vil erkjenne at tyrosinkinaser som hører til andre familier kan ha aktive seter eller bindingslommer som er tilsvarende i sin tre-dimensjonale struktur til den til Syk. Som en konsekvens av denne strukturelle likhet er slike kinaser, her angitt som "Syk-mimetika", forventet å katalysere fosforylering av substrater som er fosforylert med Syk. Således vil det erkjennes at slike Syk-mimetika, signaltransduksjonskaskader hvori slike Syk-mimetika spiller en rolle, og biologiske responser påvirket av slike Syk-mimetika og Syk-mimetikumavhengige signalkaskader, kan reguleres og delvis inhiberes med mange av de her beskrevne prodrugs.
"Syk-avhengjg signalkaskader" henviser til en signaltransduksjonskaskade hvori Syk-kinase spiller en rolle. Ikke-begrensende eksempler på slike Syk-avhengjge signalkaskader inkluderer FcaRI-, FceRI-, FcyRI-, FcyRIIJ-, BCR- og integrinsignalkaskader.
"Autoimmunsykdom" henviser til de sykdommer som vanligvis assoiseres med ikke-anafylaktiske hypersensitivitetsreaksjoner (Type II-, Type Ul- og/eller Type IV-hypersensitivitetsreaksjoner) som generelt resulterer som en konsekvens av individets egne humorale og/eller cellemedierte immunresponser på en eller flere immunogeniske substanser av endogen og/eller eksogen opprinnelse. Slike autoimmunsykdommer skiller seg fra sykdommen assosiert med anafylaktiske (Type I- eller IgE-medierte) hypersensitivitetsreaksj oner.
2. Prodrugforbindelser
Som beskrevet i oppsummeringen tilveiebringer foreliggende beskrivelse prodrugs av biologisk aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelser som de forskjellige 2,4-pyrimidindiaminforbindelser som er beskrevet i USSN 10/355 543 av 31. januar, 2003 (US2004/0029902A1), PCT/US03/03022 av 31. januar, 2003 (WO 03/063794), USSN 10/631 029 av 29. juli, 2003 (US 2007/0060603), PCT/US03/24087 (WO 2004/014382), USSN 10/903 263 av 30. juli, 2004 (US2005/0234049) og PCT/US2004/24716 (WO 2005/016893. Prodrugs av disse 2,4-pyrimidindiaminforbindelser er av spesiell interesse, da disse forbindelser inhiberer oppstrøms Fc-reseptorsignalkaskader så vel som Syk-kinase og Syk-kinaseavhengige signalkaskader. Disse prodrugs inkluderer generelt slike aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelser der en eller flere tilgjengelige primære eller sekundære amingrupper er maskert med en progruppe R<p>som metaboliserer in vivo for å gi det aktive 2,4-pyrimidindiaminmedikament. Som også diskutert i oppsummeringsdelen og slik det skal diskuteres i større detalj nedenfor, kan arten av progruppe variere, og vil blant andre faktorer avhenge av den ønskede vannoppløselighet for det angjeldende prodrug, den tilsiktede administreringsmåte og/eller den tilsiktede mekanismen eller metabolismesete til aktiv 2,4-pyrimidindiaminforbindelse.
For eksempel er det funnet at et spesifikt, aktivt 2,4-pyrimidindiaminmedikament (Forbindelse 1, nedenfor) viser overlegen vannoppløselighet ved formulering som fosfatprodrug (forbindelse 4, nedenfor):
Denne prordrugforbindelse 4 viser også overlegen biotilgjengelighet sammenlignet med det tilsvarende aktive medikamentforbindelse 1 med administrering oralt til testdyret. Således og til forskjell fra medikamentforbindelse 1, er absorpsjonen av prodrugforbindelse 4 ikke avhengig av formulering. I farmakokinetiske studier som er gjennomført i rotter, ble prodrug 4 absorbert like godt fra oppløsninger (for eksempel PEG-400-oppløsningen og karboksymetylcelluloseoppløsninger) og pulvere (pakket i hårdgelatinkapsler). Unte å ønske å være bundet av en spesiell arbeidsteori, antas det at den forbedrede, orale biotilgjengelighet for prodrugforbindelse 4, så vel som denne formuleringsuavhengige absorpsjon i det minste delvis skyldes den høyere vannoppløselighet. Det er forventet at andre aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelser som har tilsvarende lav vannoppløselighet og således oral biotilgjengelighet, vil vise tilsvarende økning i vannoppløselighet og oral biotilgjengelighet og formulering som fosfatprodrug.
Omvent, det tilsvarende fosfatesterprodrug av aktiv medikamentforbindelse 1 forventes å ha lavere vannoppløselighet enn den aktive forbindelse 1 forbindelse. Således er det ventet at fosfatesterprodrugs av aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelser som har lavere vannoppløselighet enn de tilsvarende aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelser vil være spesielt nyttige ved applikasjoner og formuleringer der lav vannoppløselighet er ønskelige som for eksempel formuleringer tilpasset for avlevering via inhalering.
Det er nylig funnet at et fosfatholdig prodrug ifølge strukturen som vist nedenfor: metaboliserer in vivo til den tilsvarende aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelse (Forbindelse 1) som vist nedenfor: Uten å ønske å være bundet til noen spesiell teori, antas det at dette prodrug metaboliseres til aktiv Forbindelse 1 via det tilsvarende hydroksymetylamin mellomprodukt som er vist nedenfor:
Slike hydroksymetylaminforbindelser er kjent for å være ustabile under fysiologiske betingelser og forskjellige pH-områder der de hydrolyserer in vivo for å gi formaldehyd og aktiv medikamentsubstans. Basert på denne observasjon antas det at prodrugs som inkluderer hydroksyl "beskyttende" grupper som kan metaboliseres in vivo, for eksempel ved syrebetingelser i magen og/eller av enzymer som er tilstede i fordøyelseskanalen, eller andre organer og/eller vev eller fluider i kroppen, for å gi hydorksymetylamin mellomproduktet som vist ovenfor, likeledes vil metaboliseres til det aktive 2,4-pyrimidindiamin medikament.
Videre er det ventet at amino- og tioanalogene av dette hydroksymetylamin mellomprodukt likeledes vil være ustabilt ved fysiologiske betingelser og også hydrolysere in vivo til det aktive 2,4-pyrimidindiaminmedikament. I henhold til dette er det også ventet at de tilsvarende amino- og tioforbindelser, så vel som forbindelser hvori a-amino- og a-tiogruppene er maskert med "beskyttende" grupper som fjernes under fysiologiske betingelser for å gi a-amino- og a-tiogruppene, likeledes vil utgjøre egnede prodrugs.
Da alkaliske fosfataser er rikelige i fordøyelseskanalen hos mennesker, er den fosfatholdige progruppen -CH2-0-P(0)(OH)2som kan spaltes i nærvær av alkaliske fosfater, spesielt egnet for å formulere fosfatholdige prodrugs ment for oral administrering.
Selv om fosfatholdige prodrugs som er egnet for oral administrering er av interesse, vil fagmannen erkjenne at prodrugs som inkluderer fosfatholdige progrupper R<p>kan administreres via andre administreringsveier da fosfataser er fordelt over hele kroppen. For eksempel er eksempelprodrug Forbindelse 4 funnet å metabolisere til det aktive medikament Forbindelse 1 i in vzZro-forsøk som gjennomføres med rotteplasma, så vel som med rottehepatiske og -intestinale mikrosomale preparater, som antyder at fosfater også er tilstede i plasma. Således er det eneste krav at den spesielle, fosfatholdige progruppe R<p>som velges, må kunne fjernes under de tilsiktede bruksbetingelser.
Uten å ønske å være bundet av noen teori antas det at når y er 1, blir fosfatholdige prodrugs som de i henhold til strukturformel (Ia), metabolisert til den aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelsen via det tilsvarende hydroksymetylamin. Denne metabolisme er vist i Fig. IA. Under henvisning til Fig. IA gir fjerning av fosforsyre fra fosfatprodrug 16 via enzymatisk hydrolyse det tilsvarende hydroksymetylaminet 18, som undergår hydrolyse in vivo for å gi formaldehyd og aktivt 2,4-pyrimidindiaminforbindelse 10.
Under henvisning til Fig. IB og når y er 2, antas det at in vzvo-hydrolyse av fosfatprodrug 26 gir aktivt 2,4-pyrimidindiamin 10 og enolfosfat som så hydrolyserer in vivo til acetaldehyd og fosforsyre.
Under henvisning til Fig. IA vil fagmannen erkjenne at mens hydroksymetylamin 18 metaboliserer under fysiologiske betingelser for å gi aktiv 2,4-pyrimidindiaminforbindelse 10, er den stabil ved pH 7 og kan derfor fremstilles og administreres som et hydroksyalkylholdig prodrug av aktiv forbindelse 10. Således er i noen utførelsesformer av prodrugs med formel (I), R<p>en hydroksyalkylholdig progruppe med formel -CR<d>R<d>-OH, der Rd er som angitt tidligere. I en spesifikk eksempelutførelsesform er R<p>-CH2OH.
Under fortsatt henvisning til Fig. IA vil fagmannen også erkjenne at fosfatprodrugs kan genereres ved in vzvo-hydrolyse av fosfatester prodrugs som fosfatester prodrugs 20 og/eller ved in vzvo-oksidasjon av fosfitt prodrugs som fosfitt prodrugs 24. Slike fosfatester- og fosfitt prodrugs kan i sin tid genereres ved enten in vzvo-oksidasjon eller hydrolyse av fosfittesterprodrugs som fosfittester prodrug 22. De tilsvarende fosfatester-, fosfitt- og fosfittester prodrug av fosfat prodrug 26 er vist i Fig. IB som forbindelse 30, 34 henholdsvis 32. Således og slik fagmannen vil se, er prodrugs som inkluderer forløpere av fosfater som kan metabolisere til fosfatgrupper in vivo, også beskrevet.
Egnetheten for enhver spesiell progruppe R<p>for en ønsket administreringsmodus kan bekreftes i biokjemiske analyser. Hvis for eksempel et prodrug skal administreres ved injeksjon inn i et spesielt vev eller et organ, og identitene for de forskjellige fosfataser som utelukkes i vevet eller organet er kjent, kan det spesielle prodrug testes for metabolisme i biokjemiske analyser med den eller de isolerte fosfataser. Alternativt kan den spesielle prodrug testes på metabolisme til den aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelse med vev- og/eller organekstrakter. Bruk av vev- og/eller organekstrakter kan være av spesiell hensiktsmessighet der identiteten(e) for fosfatasene som uttrykkes i målvevet eller organene er ukjent, eller i tilfelle der de isolerte fosfataser ikke hensiktsmessig er tilgjengelige. Fagfolk på området vil være i stand til lett å velge progrupper R<p>med metabolske egenskaper (som kinetikk) og som egner seg for spesielle applikasjoner ved bruk av slike in vzzro-tester. Selvfølgelig kan spesifikke prodrugs også testes på egnet metabolisme i in vzzro-dyremodeller.
Fagmannen på området vil erkjenne at mange av de prodrugs som beskrives her, så vel som forskjellige prodrugsspesier som spesifikt er beskrevet og/eller illustrert her, kan vise tautomeri, konformasjonell isomeri, geometrisk isomeri og/eller optisk isomeri. For eksempel kan disse prodrugs inkludere et eller flere kirale sentra og/eller dobbeltbindinger, og kan som en konsekvens foreligge som stereoisomerer, for eksempel dobbeltbinding isomerer (dvs. geometriske isomerer), enantiomerer og diastereomerer og blandinger derav, som racemiske blandinger. Som et ytterligere eksempel kan disse prodrugs eksistere i flere tautomere former inkludert enolformen, ketoformen og blandinger derav. Av de forskjellige forbindelsesnavn, -formler og - figurer i beskrivelse og krav kun kan representere en av de mulige tautomerer, konformasjonelle isomerer, optiske isomerer eller geometrisk isomere former, skal det være klart at oppfinnelsen omfatter enhver tautomer, konformasjonell isomer, optisk isomer og/eller geometrisk isomer form av prodrugs med et eller flere av de her beskrevne nyttige trekk, så vel som blandinger av disse forskjellige isomere former. Når det gjelder begrenset rotasjon rundt 2,4-pyrimidindiamindelen er atrop-isomerer også mulig og er også spesifikt inkludert i forbindelsene ifølge oppfinnelsen.
De prodrugs som beskrives her kan identifiseres ved enten deres kjemiske struktur eller deres kjemiske navn. Når den kjemiske struktur og det kjemiske navn kommer i konflikt, er den kjemiske struktur determinativ for det spesifikke prodrugs identitet.
Avhengig av arten av de forskjellige substituenter kan de her beskrevne prodrugs foreligge i form av salter. Slike salter inkluderer salter egnet for farmasøytiske anvendelser ("farmasøytisk akseptable salter"), salter egnet for veterinæranvendelse osv. Slike salter kan avledes fra syrer eller baser slik det er velkjent på området.
I en utførelsesform er saltet et farmasøytisk akseptabelt salt. Generelt er farmasøytisk akseptable salter de salter som bibeholder i det vesentlige en eller flere av de ønskede, farmakologiske egenskaper for opphavsforbindelsen, og som er egnet for administrering til mennesker. Farmasøytisk akseptable salter inkluderer syreaddisjonssalter dannet med uorganiske syrer og organiske syrer. Uorganiske syrer som er egnet for å danne farmasøytisk akseptable syreaddisjonssalter inkluderer som ikke begrensende eksempler hydrohalogenidsyrer som salt-, hydrobrom-, hydrojodsyre osv., svovel-, salpeter-, fosforsyre og lignende. Organiske syrer som er egnet for å danne farmasøytisk akseptable syreaddisjonssalter inkluderer som ikke-begrensende eksempler eddik-, trifluoreddik-, propion-, heksan-, syklopentanpropion-, glykol-, oksal-, pyruvin-, melke-, malon-, rav-, eple-, malein-, fumar-, vin-, sitron-, pamitin-, benzo-, 3-(4-hydroksybenzoyl)benzo-, kanle-, mandel-, alkylsulfonsyrer som metansulfon-, etansulfon-, 1,2-etandisulfon- eller 2-hydroksyetansulfonsyre osv., arylsulfonsyrer som benzensulfon-, 4-klorbenzensulfon-, 2-naftalensulfon-, 4-toluensulfon og kamforsulfonsyre etc., 4-metylbisyklo[2.2.2]-okt-2-en-l-karboksylsyre, glukohepton-, 3-fenylpropion-, trimetyleddik-, tert-butyl-eddik-, laurylsvovel-, glukon-, glutamin-, hydroksynafto-, salisyl-, stearin- eller mukonsyre og lignende.
Farmasøytisk akseptable salter inkluderer også salter som dannes når et surt proton som er tilstede i opphavsforbindelsen enten erstattes med et metall (for eksempel et alkalimetallion, et jordalkalimetallion eller et aluminiumion), eller koordinerer med en organisk base som for eksempel etanolamin, dietaylmin, trietanolamin, N-metylglukamin, morfolin, piperidin, dimetylamin, dietylamin osv.
De her beskrevne prodrugs, så vel som saltene derav, kan også foreligge i form av hydrater, solvater og N-oksider slik det er velkjent i teknikken. Hvis ikke annet spesifikt er indikert, er uttrykket "prodrug" ment å omfatte slike salter, hydrater, solvater og/eller N-oksider. Spesifikke eksempler på salter inkluderer, men er ikke begrenset til mono- og di-natriumsalter, mono- og dikaliumsalter, mono- og dilitiumsalter, mono- og dialkylaminosalter, monomagnesiumsalter, monokalsiumsalter og ammoniumsalter.
3. Syntesemetoder
De her beskrevne prodrugs, så vel som mellomprodukter for disse kan syntetiseres via et antall forskjellige synteseveier ved bruk av kommersielt tilgjengelige utgangsmaterialer og/eller utgangsmaterialer som fremstilles ved konvensjonelle syntesemetoder. Egnede eksempler på metoder som rutinemessig kan benyttes og/eller tilpasses for å syntetisere aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelsern kan finnes i US 5 958 935, USSN 10/355 543 av 21. januar, 2003 (US 2004/0029902A1), PCT/US03/0322 av 31. januar, 2003 (WO 03/063794), USSN 10/631 029 av 29. juli, 2003 (US 2007/0060603), PCU/US03/24087 (WO 2004/014382), USSN 10/903 263 av 30. juli, 2004 (US 2005/0234049) og PCT/US2004/24716 (WO 2005/016893), alle ansett som del av foreliggende beskrivelse. Disse aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelser kan benyttes som utgangsmaterialer for å syntetisere de angjeldende prodrugs. Spesifikke eksempler som beskriver syntesen av fosfatprodrug forbindelse 4, så vel som et syntetisk mellomprodukt for denne, er gitt i eksempeldelen. Alle de her beskrevne prodrugs kan syntetiseres ved rutinetilpasning av denne metode.
For eksempel kan noen utførelsesformer av prodrugs i henhold til strukturformel (I) og/eller (Ia) fremstilles ved å omsette det tilsvarende aktive 2,4-pyrimidindiamin (dvs. forbindelser i henhold til strukturformel (I) og/eller (Ia) der hver R<p>er hydrogen) med et aldehyd eller keton for å gi et a-hydroksymetylamin, som så kan omsettes med en elektrofil for å gi et prodrug. Et eksempel på en syntese av denne typen er vist i Skjema (I) nedenfor:
I Skjema (I) er Z<1>,Z<2>,R<2>,R<5>, R<17>, R<18>, R<19>og R<20>som angitt for strukturformel (I) og Y<1>er valgt blant CH2, NR<24>, O, S, S(O) og S(0)2; ogR2<4>er valgt blant hydrogen, lavere alkyl og progruppe R<p>. R<3>og Rd er som angitt i teksten supra. I henhold til Skjema (I) blir 2,4-pyrimidindiamin 10 omsatt med ketonet 12 for å gi en blanding av fire produkter: ikke-omsatt utgangsmateriale 10 (ikke vist) og forbindelser 14a, 14b og 14c. På dette trinn kan produktene isoleres fra hverandre ved bruk av standard kromatografiske teknikker. Omsetningen med elektrofil R<3>gir prodrugs 15a, 15b og 15c.
Som vist ovenfor, kan a-hydroksymetylaminer 14a, 14b og 14c konverteres til et antall forskjellige typer prodrugs 15a, 15b og 15c. For eksempel kan a-hydroksymetylaminer omsettes med en alkohol i nærvær av en sterk, sur katalysator, eller et karbonholdig halogenid (for eksempel CH3Br), for å gi de tilsvarende eterderivater (for eksempel forbindelser der R er R, der R er som definert tidligere).
Omsetning av a-hydroksymetylamin 14a, 14b og 14c med en karboksylsyre i nærvær av en sterk, sur katalysetor eller et karboksylsyreanhydrid eller et karboksylsyre halogenid (for eksempel med en egnet syrefanger) gir de tilsvarende esterderivater (for eksempel forbindelser der R er -C(0)R, der R er som angitt ovenfor).
Omsetning av a-hydroksymetylaminer 14a, 14b og 14c med en haloformatester som Cl-C(0)OCH3gir de tilsvarende karbonatderivater (for eksempel forbindelser der R<3>er - C(0)OR, der R er som angitt ovenfor).
Omsetning av a-hydroksymetylaminer 14a, 14b og 14c med et haloformamid som Cl-C(0)N(CH3)2) gir de tilsvarende karbamat- eller uretanderivater (for eksempel forbindelser der R O er -C(0)NR J? R f , der R f er som angitt ovenfor).
Slik fagmannen vil erkjenne, kan andre hydroksylbeskyttende grupper også benyttes, inkludert for eksempel de forskjellige hydroksylbeskyttende grupper som er beskrevet av Green & Wuts i "Protective Groups in Organic Chemistry", 2. utgave, John Wiley & Sons, New York, s. 10-142.
Alternativt kan prodrugs med formlene (I) og (Ia) syntetiseres ved nukleofil substituering av de tilsvarende fosfatestere. Et eksempel på denne syntesevei er illustrert i Skjema (II) nedenfor:
I henhold til Skjema (II) omsettes aktivt 2,4-pyrimidindiamin 10 med di-tert-butylklormetylfosfat 13 i nærvær av cesiumkarbonat for å gi en blanding av fire produkter: ikke omsatt utgangsmateriale 10 (ikke vist) og fosfatester 17a, 17b og 17c, som i seg selv er et prodrug som beskrevet her. Når R<2>er 3,4,5-trimetoksyfenyl er fosfatesteren 17a hovedproduktet. Omsetningen av denne fosfatester 17a med R<3->AH (der A er O, S eller NR<50>), gir prodruget 19. De mindre fosfatestere 17b og 17c kan på tilsvarende måte omsettes for å gi de tilsvarende prodrugs.
Di-tert-butylklormetylfosfat 13 kan fremstilles fra di-tert-butylfosfat som vist i Skjema ( 111) nedenfor:
I henhold til Skjema ( ISS) oppnås di-tert-butylfosfat 9 fra det tilsvarende di-tert-butylfosfittet 7 som beskrevet av Krise et al., 1999, J. Med. Chem. 42:3094-3100. Omsetning av fosfat 9 med klormetylklorsulfat 11 (tilgjengelig fra Synergetica, Inc., Sickleville, NJ 08081) som beskrevet i Mantyla et al., 2002, Tet. Lett. 43:3793-3794, gir di-tert-butylklormetylfosfat 13, som kan benyttes i Skjema II ovenfor, i uren form uten rensing.
Selv om skjemaene som er vist ovenfor angir syntese av prodrugs som inkluderer en enkelt progruppe, kan prodrugs med et antall progrupper oppnås ved å justere antallet ekvivalenter av benyttet reagens 12 eller 13.
Som et annet alternativ til Skjema ( I) kan hydroksymetylamin 14a fremstilles i en totrinns prosess ved først å omsette aktivt 2,4-pyrimidindiamin 10 med en bisfunksjonell elektrofil som for eksempel klorjodmetan (I-CH2C1), for å gi et klormetyl mellomprodukt som så kan hydrolyseres ved omsetning med basiske hydroksid eller omsettes med forskjellige nukleofile reagenser som alkoksid, aminer eller sulfid for å lage Rp. Spesifikke betingelser for å gjennomføre reaksjonene av denne type kan benyttes for å syntetisere de her beskrevne prodrugs, for eksempel i Bansal et al., 1981, J. Pharm. Sei., 70(8):850-854 og Bansal et al., 1981, J. Pharm. Sei. 70(8):855-857.
Et eksempel på en syntesevei som kan benyttes for å syntetisere et eksempel på fosfatprodrug 16 i henhold til strukturformel (Ia) er vist i Skjema (IV) nedenfor. Denne metode kan rutinemessig tilpasses for å syntetisere det fulle spektrum av fosfatprodrug beskrevet her.
I Skjema (IV) erY<1>,Z<1>,Z<2>,R<2>,R<5>, R<17>, R18,R1<9>og R<20>som angitt for strukturformel (I) eller (Ia). I henhold til Skjema (IV) blir aktiv 2,4-pyrimidindiamin 10 omsatt med di-tert-butylklormetylfosfat 13 i nærvær av cesiumkarbonat for å gi en blanding av fire produkter: ikke-omsatt utgangsmateriale 10 (ikke vist) og forbindelsene 17a, 17b og 17c. Når R<2>er 3,4,5-trimetoksyfenyl, er forbindelse 17a hovedproduktet. På dette trinn kan hovedproduktet isoleres fra de mindre produkter ved bruk av kromatografiske standardteknikker. Fjerning av de tertiære butylgrupper gir en blanding av ønsket produkt 16 og urenheter 18 og 10. Det ønskede produktet 16 kan isoleres ved bruk av standardteknikker.
En alternativ metode for å oppnå fosfatprodrug 16 er vist i Skjema (V) nedenfor:
I henhold til Skjema (V) gir omsetningen av aktivt 2,4-pyrimidindiamin 10 igjen en blanding av fire produkter: ikke-omsatt pyrimidindiamin 10 (ikke vist) hovedprodukt 17a og mindre produkter 17b og 17c. Hovedproduktet 17a kan isoleres via krystallisering (se eksempeldelen for egnede betingelser), oppløst i en blanding av eddiksyre og vann, AcOH:H20 4:1, og varmet opp til 65°C i rundt 3 timer for å gi fosfatprodrug 16 som hovedprodukt.
Selv om Skjemaene ( SV) og (V) illustrerer syntesen av et fosfatprodrug, der fosfatprogruppen er-CH2-0-P(0)(OH)2, vil fagmannen erkjenne at fosfatprodrugs, som inkluderer andre fosfatprogrupper lett kan oppnås i henhold til de samme metoder ved å benytte den egnede reagens 13. Fosfatesterprodrugs, fosfittprodrugs og fosfittesterprodrugs kan også syntetiseres via rutinetilpasning av de metoder som benyttes for den egnede fosfatester, fosfitt og fosfittesterhalogenidet 13. Eksempelmetoder for syntetisering av syklisk fosfatesterp prodrugs og som kan benyttes som prodrugs i de forskjellige metoder som beskrevet her, eller konverteres til fosfat prodrugs, er vist i Fig. 3. Videre og mens Skjemaene ( S) og ( ISS) angir forbindelse 16 som det ønskede produkt, kan prodrugs med progruppen ved andre posisjoner innen prodrug molekylet lett oppnås ved isolering, for eksempel det mindre produkt 17a eller 17b og/eller ved å justere antall ekvivalenter i reagens 13 som benyttes.
Under henvisning til Fig. 3 blir diolene 21 konvertert til de tilsvarende sykliske fosfater 23 ved bruk av litteraturprosedyrer som angitt. Sykliske fosfater 23 konverterer til de tilsvarende klormetylfosfatestere 25 på en hvilken som helst av de tre angitte måter. Forbindelse 1 konverteres til syklisk fosfatesterderivat 27, 29 og 31 via addisjon av 25 under betingelser som beskrevet tidligere for syntese av forbindelsene 17a-c. Sykliske fosfatesterderivater 27, 29 og 31 konverteres til de tilsvarende fosfatderivater via behandling under sure betingelser som beskrevet for syntese av forbindelse 16, eller via hydrogenering ved bruk av for eksempel palladiumkatalysator.
Fagfolk på området vil erkjenne at i enkelte tilfeller kan de aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelser som benyttes som utgangsmaterial inkludere funksjonelle grupper som krever beskyttelse under syntese. Den nøyaktige identitet for enhver beskyttende gruppe vil avhenge av identiteten for den funksjonelle gruppe som beskyttes, og vil være åpenbar for fagmannen på området. Retningslinjer for valg av egnede beskyttende grupper, så vel som syntesestrategjer for deres festing og fjerning kan for eksempel finnes hos Greene & Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3. utgave, John Wiley & Sons, Inc., New York (1999) og i de der angitte referanser (heretter "Greene & Wuts"). 4.
Inhibering av Fc-reseptor signalkaskader
Mange av de her beskrevne prodrugs, og særlig prodrugs ifølge strukturformlene ( I) og (Ia), metaboliserer til aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelser som inhiberer Fc-reseptorsignalkaskader som blant annet fører til degranulering av celler. Som et spesifikt eksempel inhiberer disse aktive forbindelser FceRI og/eller FcyRI-signalkaskadene som hører til degranulering av immunceller som neutrofil-, eosinofil-, mast- og/eller basofilceller. Både mast- og basofilceller spiller en sentral rolle i allergeninduserte forstyrrelser, inkludert for eksempel allergisk rhinitt og astma. Ved eksponering til allergener som blant andre ting kan være pollen eller parasitter, allergenspesifikke IgE-antistoffer syntetisert av B-celler aktivert av IL-4 (eller IL-13) og andre meddelere for å koble til IgE klassespesifikk antistoffsyntese. Disse allergenspesifikke IgE'er binder til høyaffinitets FceRI. Ved binding av antigen blir FceRI-bundne IgE'er fornettet og IgE-reseptorsignaltransduksjonsveien aktivert, noe som fører til degranulering av cellene og som en konsekvens frigivning og/eller syntese av en vert for kjemiske mediatorer, inkludert histamin, proteaser (for eksempel tryptase og kymase), lipidmediatorer som leukotriener (for eksempel LTC4), plateaktiverende faktor (PAF) og prostaglandiner (for eksempel PGD2) og en serie cytokiner inkludert TNF-a, IL-4, IL-13, IL-5, IL-6, IL-8, GMCSF, VEGF og TGF-p. Frigivningen og/eller syntesen av disse metiatorer fra mast- og/eller andre basofilceller består for tidlig- og sentrinnsresponsene som induseres av allergener og er direkte forbundet til nedstrøms evenementer som fører til vedvarende inflammatorisk tilstand.
De molekylære evenementer i FceRI-signaltransduksjonsveien som fører til frigivning av på forhand dannede mediatorer via degranulering og frigivning og/eller syntese av andre kjemiske mediatorer, er velkjent. FceRI er en heterotetramer reseptorforbindelse av en IgE-bindende a-subenhet, en P-subenhet og to y-subenheter (y-homodimerer). Fornetning av FceRI-bundet IgE ved multivalente bindingsmidler (inkludert for eksempel IgE-spesifikke allergener eller anti-IgE-antistoffer eller fragmenter) induserer en hurtig assosiasjon og aktivering av Src-frigitte kinase Lyn. Lyn fosforylerer immunoreseptor tyrosinbaserte aktiveringsdeler (ITAMS) på de intracellulære P- og y-subenheter som fører til rekruttering av ytterligere Lyn til P-subenheten og Syk-kinase til y-homodimeren. Disse reseptorassosierte kinaser som aktiveres av intra- og intermolekylær fosforylering, fosforylerer andre komponenter på veien som Btk-kinase, LAT og fosfolipase C-y (PLC-y). Aktivert PLC-y initierer veier som fører til proteinkinase C-aktivering og Ca<2+->mobilisering, begge nødvendig for degranulering. FceRI-fornetning aktiverer også de tre hovedklasser av mitogenaktiverte protein
(MAP)-kinaser, dvs. ERKl/2, JNK1/2 og p38. Aktivering av disse veier er viktige ved den transkripsjonelle regulering av proinflammatoriske mediatorer som TNF-a og IL-6, så vel som lipidmediatoren leukotrien C4 (LTC4).
FcyRI-signalkaskaden antas å dele visse felleselementer med FceRI-signalkaskaden. Viktig er, at på samme måte som FceRI, inkluderer FcyRI en y-homodimer som er fosforylert og rekruterer Syk og på samme måte fører, som FceRI, aktivering av FcyRI-signalkaskaden til blant andre ting degranulering. Andre Fc-reseptorer som deler y-homodimeren og som kan rekutreres av det aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelser inkluderer, men er ikke begrenset til, FcaRI og FcyRUI.
In vitro- og cellulære analyser som egnet for å bekrefte aktiviteten for en spesiell 2,4-pyrimidindiaminforbindelse er beskrevet i detalj i USSN 10/355 543 av 31. januar, 2003 (US2004/0029902A1), PCT/US03/03022 av 31. januar, 2003 (WO 03/063794), USSN 10/631 029 av 29. juli, 2003 (US 2007/0060603), PCT/US03/24087 (WO 2004/014382), USSN 10/903 263 av 30. juli, 2004 (US 2005/0234049) og PCT/JS2004/24716 (WO 2005/016893).
Evnen for et spesielt prodrug til å metabolisere til en aktiv 2,4-pyrimidindiaminforbindelse under de ønskede bruksbetingelser kan bekreftes i in vitro-og/eller in vzvo-analyse som beskrevet tidligere.
5. Bruk og preparater
Som diskutert tidligere metaboliserer de her beskrevne prodrug som prodrugs i henhold til strukturformlene (I) og (Ia), når de administreres til dyr og mennesker, til aktive forbindelser som inhiberer Fc-reseptorsignalkaskader, og særlig de Fc-reseptorer som inkluderer en y-homodimer som FceRI- og/eller FcyRI-signalkaskadene, og som fører til, blant annet, frigivning og/eller syntese av kjemiske mediatorer fra celler, enten via degranulering eller andre prosesser. Som også diskutert er de aktive forbindelser også potente inhibitorer av Syk-kinase. Som en konsekvens for disse aktivieter kan prodrugs av disse aktive forbindelser benyttes i et antall in vitro-, in vivo- og vo-kontekster for å regulere eller inhibere Syk-kinase, signalkaskader der Syk-kinase spiller en rolle, Fc-reseptor signalkaskader og de biologiske responser som skjer ved slike signalkaskader. For eksempel kan de angjeldende prodrugs benyttes for å inhibere Syk-kinase, enten in vitro eller in vivo, i så å si enhver celletype som uttrykker Syk-kinase. De kan også benyttes for å regulere signaltransduksjonskaskade, hvori Syk-kinase spiller en rolle. Slike Syk-avhengjge signaltransduksjonskaskader inkluderer, men er ikke begrenset til, FceRI-, FcyRI-, FcyRIJI-, BCR- og integrin signaltransduksjonskaskadene. Angjeldende prodrugs kan også benyttes in vitro eller in vivo for å regulere, og spesielt å inhibere, cellulære eller biologiske responser som skjer ved slik Syk-avhengjg signaltransduksjonskaskaden Slike cellulære eller biologiske responser inkluderer, men er ikke begrenset til respiratoriske støt, cellulær adhesjon, cellulær degranulering, cellespredning, cellemigrering, celleaggregering, fagocytose, cytokinsyntese og - frigivning, cellematurering og Ca<2+->fluks. Viktig er at disse prodrugs skal benyttes for å inhibere Syk-kinase in vivo som en terapeutisk vei mot terapi eller forebygging av sykdommer som medierer enten helt eller delvis av en Syk-kinaseaktivitet. Ikke-begrensende eksempler på Syk-kinasemedierte sykdommer som kan behandles eller forhindres med prodrugs er de som er beskrevet i større detalj nedenfor.
De angjeldende prodrugs kan benyttes for å regulere eller inhibere Fc-reseptor signalkaskadene og/eller FceRI- og/eller FcyRI-mediert degranulering som en terapeutisk vei mot terapi eller forebygging av sykdommer som karakteriseres ved og forårsakes av og/eller assosieres med frigivning eller syntese av kjemiske mediatorer som Fc-reseptor signalkaskader eller degranulering. Slike behandlinger kan administreres til dyr i veterinærkontekster og til mennesker. Sykdommer som karakteriseres ved, forårsakes av eller assosieres med slike mediatorfrigivning, -syntese eller -degranulering, og som derfor kan behandles eller forhindres med aktive forbindelser inkluderer som eksempel og uten begrensning, atopi eller anafylaktisk hypersensitivitet eller allergiske reaksjoner, allergier (for eksempel allergisk konjuktivitt, allergisk rhinitt, atopisk astma, atopisk dermatitt og næringsallergier), lavgrad aning (for eksempel etter skleroderma, øket fibrose, keloider, postkirurgjske arr, pulmonær fibrose, vaskulære spasmer, migrene, perfusjonsskade og postmyokardialt infarkt), sykdommer assosiert med vevdestruering (for eksempel etterKOLS, kardiobronkitt og postmyokardialt infarkt), sykdommer assosiert med vevinflammasjon (for eksempel irritabel tarmsyndrom, spastisk kolon og inflammatorisk tarmsykdom), inflammasjon og arrdannelse.
Nylige studier har vist at aktivering av plater med kollagen medieres via den samme vei som benyttes av immunreseptorer der en immunoreseptortyrosinkinasedel på FcRy spiller en avgjørende rolle (Watson & Gibbons, 1998, Immunol. Today, 19:260-264), og også at FcRy spiller en avgjørende rolle ved generering av neointimal hyperplasi etter ballongskade i mus, mest sannsynlig på grunn av kollagenindusert aktivering av plater og leukocyttrekruttering (Konishi et al., 2002, Circulation, 105:912-916). Således kan de her beskrevne prodrugs også benyttes for å inhibere kollagenindusert plateaktivering og behandle eller forhindre sykdommer assosiert med eller forårsaket av slik plateaktivering som for eksempel intimal hyperplasi og restenose etter vaskulær skade.
I tillegg til det store antall sykdommer som er diskutert ovenfor, bekrefter cellulære og dyreempiriske data at de aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelser som er beskrevet i USSN 10/631 029 av 29. juli, 2003 (US 2007/0060603), PCT/US03/24087 (WO 2004/014382), USSN 10/903 263 av 30. juli, 2004 (US 2005/0234049) og PCT/US2004/24716 (WO 2005/016893) også er brukbare for terapi eller forebygging av autoimmune sykdommer, så vel som de forskjellige symptomer assosiert med slike sykdommer. Således er prodrugs av disse aktive forbindelser brukbare for terapi eller forebygging av slike sykdommer og/eller symptomer. Typene av autoimmune sykdommer som kan behandles eller forhindres i slike prodrugs inkluderer generelt med de mangler som involverer vevsskade, som inntrer som et resultat av humoral og/eller cellemediert respons på immunogener eller antigener av endogen og/eller eksogen opprinnelse. Slike sykdommer angis hyppig som sykdommer som involverer de nonanafylaktiske (dvs. Type II, Type Ul og/eller Type IV) hypersensitivitetsreaksjoner.
Som diskutert tidligere er Type I hypersensitivitetsreaksjoner generelt resultater av
frigivning av farmakologisk aktive stoffer som histamin, fra mast- og/eller basofilceller etter kontakt med et spesifikt, eksogent antigen. Som nevnt ovenfor spiller slik Type I-reaksjoner en rolle i tallrike sykdommer, inkludert allergisk astma, allergisk rhinitt osv.
Type II-hypersensitivitetsreaksjoner (også angitt som cytotoksiske, cytolytiske
kompiementavhengige eller cellestimulerende hypersensitivitetsreaksjoner) oppstår når immunoglobuliner reagerer med antigeniske komponenter i celler eller vev, eller med et antigen eller hapten som er blitt intimt koblet til celler eller vev. Sykdommer som vanligvis er assosiert med Type U-hypersensitivitet inkluderer, men er ikke begrenset til autoimmun, hemolyttisk anemi, erytroblastosis fetalis og Goodpastures sykdom.
Type III hypersensitivitetsreaksjoner (også angitt som toksiske kompleks, oppløselig kompleks eller immunkompleks hypersensitivitetsreaksjoner) er resultatet av avsetning av oppløselige, sirkulerende antigene immunoglobulinkomplekser i kar eller i vev med ledsagende akutte inflammatoriske reaksjoner på setet for immunkompleks avsetning. Disse begrensende eksempler på prototypiske Type Ul reaksjonssykdommer inkluderer Arthus-reaksjon, reumatoid artritt, serumsykdom, systemisk lupus erytematose, visse typer glomerulonefritt, multiple sklerose og bulløs pemfingoid.
Type IV hypersensitivitetsreaksjoner (hyppig kalt cellulære, cellemedierte, forsinkede eller tuberkulintype hypersensitivitetsreaksjoner) forårsakes av sensitiserte T-lymfocytter som resultat av kontakt med et spesifikt antigen. Ikke-begrensende eksempler på sykdommer angitt som å involvere Type IV-reaksjoner er kontaktdermatitt og allograft rejeksjon.
Autoimmunsykdommer som er assosiert med hvilke som helst av de ovenfor angitte non-anafylaktiske hypersensivititetsreaksjoner kan behandles eller forhindres med prodrugs i forhold til strukturformel (I) og (Ia). Særlig kan metodene benyttes for å behandle eller forhindre autoimmune sykdommer som hyppig karakteriseres som enkelte organ- eller enkelt celletype autoimmunsykdommer som inkluderer, men ikke er begrenset til: Hashimotos tyroiditt, autoimmun hemolytisk anemi, autoimmun atrofisk gastritt av perniciøs anemi, autoimmun encefalomyelitt, autoimmun orkitt, Goodpastures sykdom, autoimmun trombocytopeni, sympatetisk oftalmi, myastenia gravis, Graves sykdom, primær biliær cirrose, kronisk aggresiv hepatitt, ulcerativ kolitt og membranøs glomerulopati, så vel som de autoimmunsykdommer som hyppig karakteriseres til å involvere systemiske autoimmune forstyrrelser og som inkluderer, men ikke er begrenset til: systemisk lupus erytematose (SLE), reumatoid artritt, Sjøgrens syndrom, Reiters syndrom, polymyositt-dermatomyositt, systemisk sklerose, polyarteritis nodosa, multiple sklerose og bulløs pemfigoid.
Det vil erkjennes avfagmannen på området at mange av de ovenfor angitte autoimmunsykdommer er assosiert med alvorlige symptomer hvis lindring eller forbedring vil gi en signifikant terapeutisk fordel, selv i tilfeller der den underliggende, autoimmune sykdom ikke behøver å lindres. Mange av disse symptomer, så vel som de underliggende sykdomstilstander har resultat som en konsekvens av aktivering av FcyRI-signaleringskaskaden i monocyttceller. Da prodrugs med strukturformlene (I) og (Ia) metaboliserer til 2,4-pyrimidindiaminforbindelser som er potente inhibitorer av slik FcyRI-signalering i monocytter og andre celler, finner de bruk ved terapi og/eller forebygging av tallrike, ugunstige symptomer assosiert med de ovenfor oppførte autoimmunsykdommer.
Som et spesifikt eksempel resulterer reumatoid artritt (RA) typisk i svelling eller opphovning, smerte, tap av bevegelse og ømhet i målledd over hele kroppen. RA karakteriseres ved kronisk betent synovium som er tett fylt med lymfocytter. Synovialmembranen som typisk er et cellesjikt tykt blir intenst cellulært og antar en form tilsvarende lymfoidvev, inkludert dendrittiske celler, T-, B- og NK-celler, makrofater og clustere av plasmaceller. Denne prosess, så vel som en pletora av immunopatologiske mekanismer inkluderer dannelsen av antigen-immunoglobulinkomplekser resulterer til slutt i destruksjon av leddets integritet, resulter i deformitet, permanent tap av funksjon og/eller benerosjon ved eller nær leddet. Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan benyttes for å behandle eller lindre enhver, flere eller alle disse symptomer på RA. Således er metodene innen RA-kontekst ansett for å gi terapeutisk fordel (diskutert mer generelt nedenfor) når en reduksjon eller en lindring av hvilke som helst av symptomene som vanligvis assosieres med RA oppnås, uansett hvorvidt behandlingen resulterer i en samtidig behandling av den underliggende RA og/eller en reduksjon i mengden sirkulerende reumatoid faktor ("RF").
The American College of Theumatology (ACR) har utviklet kriterer for å definere forbedring og klinisk remisjon når det gjelder RA. En slik parameter, ACR20 (ACR-kriterium for 20% klinisk forbedring) krever en 20% forbedring i antall ømme og svellede ledd, så vel som en 20% forbedring i 3 av de følgende 5 parametere: pasientens totale bedømmelse, legens totale bedømmelse, pasientens bedømmelse av smerte, disabilitetsgrad og nivå av akutt fasereaktant. Disse kriterier er utvidet for 50% og 70% i ACR50, henholdsvis ACR70. Andre kriterier inkluderer Paulus-kriterier og radiografisk progresjon (for eksempel Sharp bedømmelse).
I enkelte utførelsesformer oppnås terapeutiske fordeler i pasienter som lider av RA når pasienten viser en ACR20. I spesifikke utførelsesformer kan det oppnås ARC-verdier for ARC50 eller sågar ARC70.
Systemiske lupus erytematose ("SLE") er typisk assosiert med symptomer som feber, leddsmerte (artralgjas), artritt og serositt (pleurisy eller perikarditt). Innen SLE-kontekst anses metodene å tilveiebringe terapeutisk fordel når det oppnås en reduksjon eller lindring av et hvilket som helst av symptomene som vanligvis assoiseres med SLE, uansett hvorvidt behandlingen resulterer i en samtidig behandling av en underliggende
SLE.
Multiple sklerose ("MS") forkrøpler pasienten ved å forstyrre visuell akuitet; stimulerer dobbeltsyn; forstyrrer motorfunksjoner og påvirker gange og bruk av hendene; gir tarm-og blæreinkontinens; spastisitet; og sensoriske defekter (berøring-, smerte- og temperatursensitivitet). Innen MS-kontekst anses metodene å gi terapeutisk fordel når en forbedring eller reduksjon i progresjonen av en hvilken som helst en eller flere av de forkrøplende effekter som vanligvis assosieres med MS, oppnås, uansett hvorvidt behandlingen resulterer i samtidig behandling av den underliggende MS.
Benyttet for å behandle eller forhindre slike sykdommer, kan de prodrugs som foreskrives her administreres enkeltvis, som blandinger av et eller flere prodrugs eller en blanding eller kombinasjon med andre midler som er nyttige for behandling av slike sykdommer eller symptomene assosiert med slike sykdommer. Disse prodrugs kan også administreres i blanding eller i kombinasjon med midler som er nyttige for å behandle andre forstyrrelser eller sykdommer som steroider, membranstabilisatorer, 5LO-inhibitorer, leukotriensyntese- og -reseptorinhibitorer, inhibitorer av IgE-isotype med skifting eller IgE-syntese, IgG-isotypeskifting eller IgG-syntese, P-agonister, tryptaseinhibitorer, aspirin, COX-inhibitorer, metotreksat, anti-TNF-medikamenter, retuksin, PD4-inhibitorer, p38-inhibitorer, PDE4-inhibitorer og antihistaminer, for å nevne noen. De angjeldende prodrugs kan administreres i form av forbindelsene per se, eller som farmasøytiske preparater omfattende et prodrug.
Farmasøytiske preparater omfattende et eller flere av disse prodrugs kan fremstilles ved hjelp av konvensjonelle blandinger, oppløsning, granulering, drageefremstilling, levigatering, emulgering, innkapsling, innfanging eller lyofilisering. Preparatene kan formuleres på konvensjonell måte ved bruk av en eller flere fysiologisk akseptable bærere, diluenter, eksi pi enter eller hjelpestoffer som letter prosessering av disse prodrugs til preparater som kan benyttes farmasøytisk.
Slike prodrugs kan formuleres i farmasøytiske preparater per se eller i form av et hydrat, solvat, N-oksid eller farmasøytisk akseptabelt salt som beskrevet tidligere. Typiske er slike salter mer oppløselige i vandige oppløsninger enn de tilsvarende frie syrer og baser, men salter med lavere oppløselighet enn de tilsvarende frie syrer og baser kan også dannes.
Farmasøytiske preparater kan ha en form som er egnet for så å si en hvilken som helst administreringsmodus, inkludert for eksempel topisk, okkulær, oral, bukal, systemisk, nasal, injeksjons-, transdermal, rektal eller vaginal administrering eller administrering av en form egnet for inhalering eller insuflering.
For topisk administrering kan dette eller disse prodrugs formuleres som oppløsninger, geler, salver, kremer, suspensjoner osv. som velkjent i teknikken.
Systemiske formuleringer inkluderer de som er tildannet for administrering ved injeksjon, for eksempel subkutan, intravenøs, intramuskulær, intratekal eller intraperitoneal injeksjon, så vel som de som er ment for transdermal, transmukosal, oral eller pulmonær administrering.
Brukbare injiserbare preparater inkluderer sterile suspensjoner, oppløsninger eller emulsjoner av den eller de aktive forbindelser i vandige eller oljevehikler. Preparatene kan også inneholde formlueringsmidler som suspendering-, stabiliserings- og/eller dispergeringsmidler. Formuleringene for injeksjon kan presenteres i enhetsdoseform, for eksempel i ampuller eller i multidosebeholdere, og kan inneholde tilsatte preserveringsmidler.
Alternativt kan den injiserbare formulering tilveiebringes i pulverform for rekonstituering med en egnet vehikkel, inkludert men ikke begrenset til, sterilt, pyrogenfritt vann, buffer, dekstroseoppløsning osv., før bruk. For dette formål kan den eller de aktive forbindelser tørkes ved i og for seg kjente teknikker som ved ly ofili sering, og så rekonstitueres før bruk.
For transmukosal administrering blir penetranter som er egnet for den barriere som skal permeeres benyttet i formuleringen. Slike penetranter er velkjente på området.
For oral administrering kan det farmasøytiske preparat ha form av for eksempel lozenger, tabletter eller kapsler fremstilt ved konvensjonelle midler med farmasøytisk akseptable eksipienter som bindemidler (for eksempel pregelatinisert maisstivelse, polyvinylpyrrolidon eller hydroksypropylmetylcellulose); fyllstoffer (for eksempel laktose, mikrokrystallinsk cellulose eller kalsiumhydrogenfosfat); lubrikanter (for eksempel magnesiumstearat, talkum eller silika); disintegranter (for eksempel potetstivelse eller natriumstivelsesglykolat); eller fuktere (for eksempel natriumlaurylsulfat). Tablettene kan være belagte ved i og for seg kjente metoder, for eksempel med sukker, film eller enterisk belegg. Fosfatprodrugs der den eller de tilstedeværende progrupper har formelen -(CR<d>R<d>)y-0-P(0)(OH)2, der hver Rd uavhengig av de andre er valgt blant hydrogen og lavere alkyl og y er 1 eller 2, og som viser en vannoppløselighet i området rundt 0,1 til 1000 mg/ml ved fysiologisk pH-verdi er spesielt egnet for oral administrering via tabletter og kapsler. Ved administrering til Sprague-Dawley rotter oralt fra kapsler viste prodrugforbindelser 4 en biotilgjengelighet av medikamentforbindelse 1 på rundt 30% (se Fig. 5), med absorpsjonen nær identisk den til aktivt medikament 1 (se Fig. 6). Andre fosfatprodrugs med vannoppløselige egenskaper tilsvarende de til prodrugforbindelsen 4 er ventet å vise tilsvarende farmakokinetiske egenskaper.
Et spesifikt eksempel på en tablettformulering for prodrugforbindelse 4 (så vel som andre fosfatholdige prodrugs) inneholder rundt 50-400 mg prodrugforbindelse (eller et salt derav), rundt 0,05 til 0,5 vekt% kolloid silisiumdioksid, rundt 0,5 til 5,0 vekt% kroskarmellosenatrium, rundt 0,25 til 5,0 vekt% magnesiumstearat og rundt 20 til 80 vekt% mikrokrystallinsk cellulose. Hvis ønskelig kan tablettene belegges med en film, for eksempel som en hypromellosefilm, karboksymetylcellulose eller fruktose, som eventuelt kan inneholde fargestoffer som for eksempel FD&C blå nr. 1, PD&C grønn nr. 3, FD&C gul nr. 6 og titandioksid.
Flytende preparater for oral administrering kan ha form av for eksempel eliksirer, oppløsninger, siruper eller suspensjoner, eller de kan presenteres som et tørt produkt for konstituering med vann eller andre egnede vehikler før bruk. Slike flytende preparater kan fremstilles ved konvensjonelle midler med farmasøytisk akseptable additiver som suspenderingsmidler (for eksempel sorbitol sirup, cellulosederivater eller hydrogenerte spiselige fett); emulgeringsmidler (for eksempel lecitin eller akasia); ikke-vandige vehikler (for eksempel mandel olje, oljeester, etylalkohol, cremophore™ eller fraksjonerte vegetabilske oljer); og preserveringsmidler (for eksempel metyl- eller propyl-p-hydr9oksybenzoater eller sorbinsyre). Preparatene kan også inneholde buffersalter, preserveringsmidler, smaksstoffer, fargestoffer og søtnere etter behov.
Preparater for oral administrering kan hensiktsmessig formuleres for å gi kontrollert frigivning av den angjeldende prodrug som i og for seg er kjent.
For bukal administrering kan preparatene ha form av tabletter eller lozenger formulert på i og for seg kjent måte.
For rektal og vaginal administrering kan de angjeldende prodrugs formuleres som oppløsninger (for retensjonsenemaer), suppositorier eller salver inneholdende konvensjonelle suppositoriebaser som kakaosmør eller andre glyserider.
For nasal administrering eller administrering ved inhalering eller insufflering kan de angjeldende prodrugs hensiktsmessig avgis i form av en aerosolspray fra trykksatte pakker eller en forstøver ved bruk av et egnet drivmiddel, for eksempel diklordifluormetan, triklorfluormetan, diklortetrafluoretan, fluorkarboner, karbondioksid eller en annen egnet gass. Når det gjelder en trykksatt aerosol, kan doseringsenheten bestemmes ved å tilveiebringe en ventil for å avgi en tilmålt mengde. Kapsler og patroner for bruk i en inhalator eller insuflator (for eksempel kapsler og patroner bestående av gelatin), kan formuleres til å inneholde en pulverblanding av forbindelsen og en egnet pulverbase som laktose eller stivelse.
For okkulær administrering kan de angjeldende prodrugs formuleres som oppløsning, emulsjon, suspensjon osv., hensiktsmessig for administrering til øyet. Et antall vehikler som er egnet for administrering av forbindelser til øyet er velkjent i teknikken. Spesifikke, ikke-begrensende eksempler er beskrevet i US 6 261 547, 6 197 934, 6 056 950, 5 800 807, 5 776 445, 5 698 219, 5 521 222, 5 403 841, 5 077 033,
4 882 150 og 4 738 851. For forlenget avlevering kan de angjeldende prodrugs formuleres som depotpreparat for administrering med implantering eller intramuskulær injeksjon. De angjeldende prodrugs kan formuleres med egnede polymere eller hydrofobe materialer (for eksempel som en emulsjon i en aksepterbar olje) eller ionebytteharpiks, eller som lite oppløselige derivater, for eksempel et lite oppløselig salt. Alternativt kan det benyttes transdermale avleveringssystemer som er fremstilt som en adhesiv skive eller pute som langsomt frigir de angjeldende prodrugs for perkutan absorpsjon. For dette formål kan permeeringsforsterkere benyttes for å lette den transdermale penetrering av disse prodrugs. Egnede transdermalputer er beskrevet for eksempel i US 5 407 713, 5 352 456, 5 332 213, 5 336 168, 5 290 561, 5 254 346, 5 164 189, 5 163 899, 5 088 977, 5 087 240, 5 008 110 og 4 921 475.
Alternativt kan andre farmasøytiske avleveringssystemer benyttes. Liposomer og emulsjoner er velkjente eksempler på avleveringsvehikler som kan benyttes for å avlevere prodrugs. Visse organiske oppløsningsmidler som dimetylsulfoksid (DMSO) kan også benyttes, selv om det vanligvis er på bekostning av en høyere toksisitet.
De farmasøytiske preparater kan hvis ønskelig presenteres i en pakke- eller dispenserinnretning som kan inneholde en eller flere enhetsdoseringsformer inneholdende disse prodrugs. Pakken kan for eksempel bestå av en metall- eller plastfolie, for eksempel en blisterpakke. Pakken eller dispenserinnretningen kan være fulgt av administreringsinstruksjoner.
6. Effektive doser
De prodrugs som beskrives her, eller preparater derav, vil generelt benyttes i en mengde effektiv for å oppnå det tilsiktede resultat, for eksempel i en mengde som er effektiv for å behandle eller forhindre den spesielle sykdom som behandles. Disse prodrugs kan administreres terapeutisk for å oppnå terapeutisk fordel eller profylaktisk for å oppnå profylaktisk fordel. Med terapeutisk fordel menes fjerning eller lindring av den underliggende forstyrrelse som behandles og/eller fjerning eller lindring av et eller flere av symptomene assosiert med den underliggende forstyrrelse slik at pasienten rapporterer en forbedring i følelse eller tilstand, uansett om pasienten fremdeles er påvirket av den underliggende forstyrrelse. For eksempel gir administrering av en forbindelse til en pasient som lider av en allergi, en terapeutisk fordel, ikke bare når den underliggende allergiske respons er fjernet eller forbedret, men også når pasienten rapporterer en reduksjon i alvorligheten eller varigheten av symptomene som er assosiert med allergien etter eksponering til allergenet. Som et annet eksempel inkluderer en terapeutisk fordel innen astmakonteksten en forbedring i respirasjon etter begynnelsen av det astmatiske angrep eller en reduksjon i frekvensen eller alvoret av astmatiske episoder. Terapeutisk fordel innen konteksten RA inkluderer også ACR20 eller ACR50 eller ACR70 som beskrevet tidligere. Terapeutiske fordeler inkluderer generelt også stans eller reduksjon av progresjon av sykdommen, uansett hvordan forbedringen realiseres.
For profylaktisk administrering kan de angjeldende prodrugs administreres til en pasient som risikerer å utvikle en av de tidligere beskrevne sykdommer. Hvis det for eksempel er ukjent hvorvidt en pasient er allergisk mot et spesielt medikament kan prodrugs administreres før administrering av medikamentet ved å unngå eller å bøte på en allergisk respons mot medikamentet. Alternativt kan profylaktisk administrering benyttes for å unngå begynnelsen av symptomene hos en pasient som er diagnostisert med den underliggende forstyrrelse. For eksempel kan slike prodrugs administreres til en som lider av allergi før den ventede eksponering til allergiene. Prodrugs kan også administreres profylaktisk til friske individer som gjentatte ganger eksponeres til midler som er kjent for å henge sammen med en av de ovenfor beskrevne sykdommer for å forhindre starten av forstyrrelsen. For eksempel kan prodrugs administreres til et friskt individ som gjentatte ganger eksponeres til et allergen som er kjent for å indusere allergier som lateks, i et forsøk på å forhindre individer fra å utvikle en allergi. Alternativt kan prodrugs administreres til en pasient som lider av astma før deltagelse i aktiviteter som utløser astmaangrep for derved å redusere alvoret av eller sågar helt og holdent å forhindre en astmatisk episode.
Mengden av prodrugs som administreres vil avhenge av et antall faktorer inkludert for eksempel den spesielle indikasjon som behandles, administreringsmodus, hvorvidt den ønskede fordel er profylaktisk eller terapeutisk, alvor av indikasjonen som behandles og pasientens alder og vekt, biotilgjengeligheten for det eller de spesielle prodrugs, konverteringshastighet og effektivitet til aktiv medikamentforbindelse under den valgte administreringsvei osv. Bestemmelse av en effektiv dose av prodrugs for en spesiell anvendelse og administreringsmåte ligger godt innenfor kunnskapen til fagmannen på området.
Effektive doser kan estimeres i utgangspunktet fra in vzZro-aktivitet og - metabolismeanalyser. For eksempel kan en initial dose av prodrug for bruk i dyr formuleres for å gi en sirkulerende blod- eller serumkonsentrasjon av den metabolittaktive forbindelse som er ved eller over en ICso-verdi for den spesielle forbindelse målt som en in v/7/*o-analyse, slik som i in vitro CFIMC- eller -BMMC- og andre in vzZro-analyser som beskrevet i USSN 10/355 543 av 31. januar, 2003 (US204/0029902A1), PCT/US03/03022 av 31. januar, 2003 (WO 03/0163794), USSN 10/631 029 av 29. juli, 2003 (US 2007/0060603), PCT/US03/24087 (WO2004/014382), USSN 10/903 263 av 30. juli, 2004 (US2005/0234049) og PCT/US2004/24716 (WO 2005/016893). Beregning av doser for å oppnå slike sirkulerende blod- eller serumkonsentrasjoner som tar med i beregningen biotilgjengligheten for det spesielle prodrug via den ønskede administreringsvei, ligger godt innenfor fagmannens kunnskapsområde. For retningslinjer henvises det til Fingel & Woodbury, "Generell Principles", i: Goodman and Gilman's The Pharmaceutical Basis of Therapeutics, kapitel 1, s. 1-46, siste utgave, Pagamonon Press, og i der angitte referanser.
Initialdoser av prodrug kan også estimeres fra in v/7ro-data som dyremodeller. Dyremodeller som er nyttige for å teste effektiviteten av de aktive metabolitter for terapi eller forebygging av de forskjellige sykdommer som er beskrevet ovenfor er velkjente i teknikken. Egnede dyremodeller på hypersensitivitet eller allergiske reaksjoner er beskrevet hos Foster, 1995, Allergy 50(21 Supl):6-9, diskusjon 34-38 og Tumas et al., 2001, J. Allergy Clin. Immunol. 107(6): 1025-1033. Egnede dyremodeller på allergisk rhinitt er beskrevet i Szelenyi et al., 2000, Arzneimittelforschung 50(11): 1037-42; Kawaguchi et al., 1994, Clin. Exp. Allergy 24(3):238-244 og Sugjmoto et al., 2000, Jmmunopharmacology 48(1): 1-7. Egnede dyremodeller på allergisk konjunktivitt er beskrevet hos Carrereas et al., 1993, Br. J. Ophtalmol. 77(8):509-514; Saiga et al., 1992, Ophthalmic Res. 24(l):45-50; og Kunert et al., 2001, Invest. Ophthalmol. Vis. Sei.
42(11):2483-2489. Egnede dyremodeller på systemisk mastocytose er beskrevet hos 0'Keefe et al., 1987, J. Vet. Intern. Med. l(2):75-80 og Bean-Knudsen et al., 1989, Vet. Pathol. 26(l):90-92. Egnede dyremodeller på hyper IgE-syndrom er beskrevet hos Claman et al., 1990, Clin. Immunol. Immunopathol. 56(l):46-53. Egnede dyremodeller på B-cellelymfom er beskrevet hos Hough et al., 1998, Proe. Nati. Acad. Sei., USA 95:13853-13858 og Hakim et al., 1996, J. Immunol. 157(12):5503-5511. Egnede dyremodeller på atopiske forstyrrelser som atopisk dermatitt, atopisk eksem og atopisk astma er beskrevet hos Chan et al., 2001, J. Invest. Dermatol. 117(4):977-983 og Suto et al., 1999, Int. Arch. Allergy Immunol. 120(Suppl l):70-75. Dyremodeller som er egnet for testing av biotilgjengelighet og/eller metabolisme for prodrugs til aktive metabolitter et også velkjent. Fagfolk på området kan rutinemessig tilpasse slik informasjon for å bestemme doser av spesielle prodrugs som er egnet for human administrering. Ytterligere egnede dyremodeller er beskrevet i eksempeldelen.
Dosemengder vil typisk ligge i området fra rundt 0,0001 mg/kg/dag, 0,001 mg/kg/dag eller 0,01 mg/kg/dag til rundt 100 mg/kg/dag, men kan være høyere eller lavere, avhengig av, blant andre faktorer, aktiviteten for den aktive metabolittforbindelse, biotilgjengeligheten for det angjeldende rodrug, dets metabolismekinetikk og andre farmakokinetiske egenskaper, administreringsmodus og forskjellige andre faktorer som diskutert ovenfor. Dosemengder og -intervall kan justeres individuelt for å gi plasmanivåer for de angjeldende prodrugs og/eller aktive metabolittforstyrrelser som er tilstrekkelig til å opprettholde terapeutisk eller profylaktisk effekt. For eksempel kan prodrugs administreres en gang per uke, flere ganger per uke (for eksempel hver annen dag), en gang per dag eller flere ganger per dag, blant annet avhengig av administreringsmodus, den spesifikke indikasjon som behandles og den behandlende leges bedømmelse. Når det gjelder lokal administrering eller selektivt opptak som lokal, topisk administrering, behøver den effektive, lokale konsentrasjon av prodrug og/eller aktiv metabolittforbindelse ikke å være relatert til plasmakonsentrasjon. Fagmannen vil være i stand til å optimalisere effektivt lokale doser uten urimelig eksperimentering.
Fortrinnsvis vil med disse prodrugs metabolisere til aktive forbindelser som gir terapeutisk eller profylaktisk fordel uten å forårsake vesentlig toksisitet. Toksisitet av den aktive og andre metabolitter, så vel som ikke-metaboliserte prodrugs, kan bestemmes ved bruk av den farmasøytiske standardprosedyre. Doseforholdet mellom toksisk og terapeutisk (eller profylaktisk) effekt er den terapeutiske indeks. Prodrugs som viser høy terapeutisk indeks er foretrukket.
Oppfinnelsen er nå beskrevet og de følgende eksempler skal illustrere den uten begrensing.
Eksempler
1. Syntese av prodrugforbindelse 4
1.1 N4-(2,2-dimetyl-4-[(di-tert-butylfosfonoksy)metyl]-3-okso-5-pyrido[l,4]oksazin-6-yl)-5-fluor-N2-(3,4,5-trimetoksyfenyl)-2,4-pyrimidindiamin (Forbindelse 3)
N4-(2,2-dimetyl-3-okso-4H-5-pyrido[l,4]oksazin-6-yl)-5-fluor-N2-(3,4,5-trimetoksyfenyl)-2,4-pyrimidindiamin (1, 1,0 g, 2,12 mmol), CS2CO3(1,0 g, 3,07 mmol) og di-tert-butylklormetylfosfat (2, 0,67 g, 2,59 mmol) i 20 ml aceton ble omrørt ved romtemperatur under nitrogen. Reaksjonsforløpet ble fulgt ved LC/MS. Uren reaksjonsblanding viste tre produkttopper med nær hverandre liggende retensjonstider med M<+>+H 693 (minor-1), 693 (major; 3) og 477 (minor-2) ved siden av utgangsmaterialet (Forbindelse 1). Etter omrøring av innholdet i 4 dager (70% forbruk) ble reaksjonsblandingen konsentrert og fortynnet med vann. Det resulterende, blekgule presipitat som ble dannet, ble samlet ved filtrering og tørket. Det urene faststoff ble renset over silikagel (forbehandlet med 10% NEt3:CH2Cl2, fulgt av eluering med heksaner) kolonnekromatografi med gradienteluering med 70% EtOAc/heksaner-100% EtOAc). Fraksjoner inneholdende Forbindelse 1 og M<+>+H 693 ble samlet og konsentrert. Det resulterende, urene hvite faststoff ble underkastet ny rensing på tilsvarende måte som beskrevet tidligere ved eluering med 30%-50%-75%-100% EtOAc:heksaner. Major (hoved) produkttoppen med M^+H 693 ble samlet som et hvitt faststoff (270 mg, 18%) og blekarakterisertsom N4-(2,2-dimetyl-4-[(di-tert-butylfosfonoksy)metyl]-3-okso-5-pyrido[l,4]oksazin-6-yl)-5-fluor-N2-(3,4,5-trimetoksyfenyl)-2,4-pyrimidindiamin (Forbindelse 3).
*H NMR (DMSO-d6): 8 9,21 (s, 1H), 9,17 (s, 1H), 8,16 (d, 1H), J=2,6 Hz), 7,76 (d, 1H, J=8,5 Hz), 7,44 (d, 1H, J=8,5 Hz), 7,02 (s, 2H), 5,78 (d, 1H, J<3>PH= 6,1 Hz), 3,64 (s, 6H), 3,58 (s, 3H), 1,45 (s, 6H), 1,33 (s, 9H).
LCMS: rettid: 14,70 min; renhet: 95%;
MS (m/e): 693 (MH<+>);
<31>P NMR (DMSO-d6): -11,36.
1.2 N4-(2,2-dimetyl-4-[(dihydrogenfosfonoksy)metyl]-3-okso-5-pyrido[l,4]oksazin-6-yl)-5-fluor-N2-(3,4,5-trimetoksyfenyl)-2,4-pyrimidindiamin (Forbindelse 4)
1,5 ml trifluoreddiksyre ble dråpevis tilsatt som ren forbindelse i 5 minutter til N4-(2,2-dimetyl-4-[(di-tert-butylfosfonoksy)metyl]-3-okso-5-pyrido[l,4]oksazin-6-yl)-5-fluor-N2-(3,4,5-trimetoksyfenyl)-2,4-pyrimidindiamin (Forbindelse 3, 120 mg, 0,173 mmol), oppløst i 10 ml CH2CI2, ved 0°C og under nitrogen. Innholdet ble omrørt i 1,5 time. Reaksjonsforløpet ble fulgt ved LC/MS. Etter ferdig forbrukt utgangsmateriale ble reaksjonsblandingen konsentrert, tørket og triturert med eter. Etersjiktet ble dekantert og tørket for å gi det urene faststoff. LC/MS-analyse av råproduktet viste tre topper med M<+>+H 581, 471 og 501. Toppen tilsvarende M^+H 581 ble samlet ved preparativ HPLC-kromatografisk rensing. Fraksjonene ble lyofilisert og tørket, og man oppnådde 53 mg (52%) av et hvitaktig, fluffy faststoff, og dette blekarakterisertsom N4-(2,2-dimetyl-4-[(dihydrogenfosfonoksy)metyl]-3-okso-5-pyrido[l,4]oksazin-6-yl)-5-fluor-N2-(3,4,5-trimetoksyfenyl)-2,4-pyrimidindiamin (Forbindelse 4).
*H NMR (DMSO-d6): 8 9,21 (br s, 2H), 8,16 (d, 1H; J=2,6 Hz), 7,93 (d, 1H, J=8,5 Hz), 7,39 (d, 1H, J=8,5 Hz), 7,05 (s, 2H), 5,79 (d, 1H, J<3>PH=6,6 Hz), 3,67 (s, 6H), 3,59 (s, 3H), 1,44 (s, 6H).
LCMS: ret.tid: 8,52 min; renhet: 95%;
MS (m/e): 581 (MH<+>);
31P NMR (DMS0-d6): -2,17.
2. Alternativ syntese av prodrugforbindelse 4
En alternativ metode for syntetisering av prodrugforbindelse 4 som bøter på behovet for kolonnekromatografi og HPLC-rensing er gitt nedenfor.
2.1 Syntese av N4-(2,2-dimetyl-4-[(di-tert-butylfosfonoksy)metyl]-3-okso-5-pyrido[l,4]oksazin-6-yl)-5-fluor-N2-(3,4,5-trimetoksyfenyl)-2,4-pyrimidindiamin (Forbindelse 3)
N4-(2,2-dimetyl-3-okso-4H-5-pyrido[l,4]oksazin-6-yl)-5-fluor-N2-(3,4,5-trimetoksyfenyl)-2,4-pyrimidindiamin (Forbindelse 1, 19,73 g, 41,97 mmol), CS2CO3(15,04 g, 46,16 mmol) og di-tert-butylklormetylfosfat (13,0 g, 50,38 mmol) i 100 ml DMF ble omrørt ved romtemperatur under nitrogen. Reaksjonsforløpet ble fulgt ved "in process" LC/MS. Den urene reaksjonsblanding viste to produkttopper i forholdet 1:6,5 med nær hverandre liggende retensjonstider som viste M^+H 693 (minor) og 693 (major) ved siden av utgangsmaterialet (Forbindelse 1). Den gule utgangsreaksjonsblanding ble olivengrønn etter hvert som reaksjonen skred frem. Opparbeiding ble gjennomført som følger: 1.) Etter omrøring av innholdet i 30 timer (92% forbruk) ble reaksjonsblandingen helt på 400 ml is:vann og innholdet omrørt ved tilsetning av 200 ml brine. Et fint gult, gyllent faststoff dannet seg og dette ble filtrert, vasket med vann og tørket over natten. 2. ) 35 g faststoff ble oppløst i 500 ml MTBE og vasket med 400 ml vann. Det vandige sjikt ble ekstrahert med 2 x 350 ml MTBE inntil fravær av UV på TLC. De kombinerte organiske sjikt ble tørket over vannfri Na2SC>4 og dekantert.
Merk: Trinn 2 kan gjennomføres direkte, imidlertid før DMF-ekstrahering ble tilbake i oppløsning til vanskelighet i krystalliseringstrinnet. 3. ) Den mørkerøde, klare oppløsning ble behandlet med 10 g aktivt kull, oppvarmet til koking og filtreres. 4. ) Den mørkerøde, klare oppløsningen ble konsentrert ved normal oppvarming i 400 ml av sitt volum og satt hen for krystallisering. Faststoffet som krystalliserte som granuler ble filtrert knust til pulver, vasket med 400 ml MTBE og tørket under høyvakuum. Se trinn 7 for opparbeiding av moderluten. Vekten av faststoffet: 17 g; renet: 90% (Forbindelse 3), 6,26% (Forbindelse 1), 1,8%
(minor M+ 693).
5. ) På dette trinn ble faststoff tatt opp i 500 ml etyleter og varmet til koling. Avkjølt og filtrert for fjerning av uoppløst materiale. Filtratet ble konsentrert. 6. ) Konsentratet ovenfor ble underkastet krystallisering i 300 ml MTBE. Det dannede hvite faststoff ble filtrert, vasket med 100 ml MTBE og tørket under høyvakuum og gir det ønskede N4-(2,2-dimetyl-4-[(di-tert-butylfosfonoksy)metyl]-3-okso-5-pyrido[l,4]oksazin-6-yl)-5-fluor-N2-(3,4,5-trimetoksyfenyl)-2,4-pyrimidindiamin (Forbindelse 3) i en renhet på 97%.
*H NMR (DMSO-d6): 8 9,21 (s, 1H), 9,17 (s, 1H), 8,16 (d, 1H, J=2,6 Hz), 7,76 (d, 1H, J=8,5 Hz), 7,44 (d, 1H, J=8,5 Hz), 7,02 (s, 2H), 5,78 (d, 1H, J<3>PH= 6,1 Hz), 3,64 (s, 6H), 3,58 (s, 3H), 1,45 (s, 6H), 1,33 (s, 9H).
LCMS: rettid: 14,70 min; renhet: 95%;
MS (m/e): 693 (MH4);
<31>P NMR (DMSO-d6): -11,36.
Vekten av faststoffet var 15,64 g i et utbytte på 55%; renhet: 97% (R935787), 3% (Forbindelse 1).
7.) Moderluten ble konsentrert og trinnene 5 og 6 gjentatt for å gi forbindelse 2.
2.2 Syntese av N4-(2,2-dimetyl-4-[(dihydrogenfosfonoksy)metyl]-3-okso-5-pyrido[l,4]oksazin-6-yl)-5-fluor-N2-(3,4,5-trimetoksyfenyl)-2,4-pyrimidindiamin (Forbindelse 4)
N4-(2,2-dimetyl-4-[(di-tert-butylfosfonoksy)metyl]-3-okso-5-pyrido[l,4]oksazin-6-yl)-5-fluor-N2-(3,4,5-trimeotksyfenyl)-2,4-pyrimidindiamin (Forbindelse 3), (15,0 g, 21,67 mmol) oppløst i 225 ml AcOH:H20 4:1, ble varmet opp til 65°C (oljebad temperatur). Reaksjonsforløpet ble fulgt ved "in process" LC/MS. Reaksjonsblandingen gikk over til et lys, gyllent, hvitt faststoff etter 1 times oppvarming. På dette tidspunkt av mesteparten av Forbindelse 3 konvertert til mono-des-t-butylprodukt. Etter 3 timers oppvarming ble forbruk av SM og fullstendig konvertering av mellomprodukt (mono-des-t-butylert) til produkt, observert.
Reaksjonsblandingen ble avjkølt, helt i 200 ml isvann, omrørt i 20 min og filtrert. Den klare hvite filterkake ble vasket med 600 ml vann og 200 ml aceton, tørket i 2 timer, fulgt av tørking under høyvakuum over P2O5i en desikkator. Vekten av faststoffet var 12,70 g, renheten 97% (Forbindelse 3) og 3% (Forbindelse 1). *H NMR indikerte nærvær av eddiksyre (1:1).
For å fjerne eddiksyren ble faststoffet tatt opp i 300 ml acetonitril og konsentrert på en rotasjonsfordamper under vakuum. Denne prosess ble gjentatt to ganger med acetonitril og toluen (3 x 300 ml). Det oppnådde faststoff ble tørket under høyvakuum ved 50°C.
Til slutt ble faststoffet tatt opp i 400 ml aceton, filtrert og tørket og man oppnådde N4-(2,2-dimetyl-4-[(dihydrogenfosfonoksy)metyl]-3-okso-5-pyrido[l,4]oksazin-6-yl)-5-fluor-N2-(3,4,5-trimetoksyfenyl)-2,4-pyrimidindiamin (Forbindelse 4).
*H NMR (DMSO-d6): 8 9,21 (br s, 2H), 8,16 (d, 1H, J=2,6 Hz), 7,93 (d, 1H, J=8,5 Hz), 7,39 (d, 1H), J=8,5 Hz), 7,05 (s, 2H), 5,79 (d, 1H, J<3>PH= 6,6 Hz), 3,67 (s, 6H), 3,59 (s, 3H), 1,44 (s, 6H).
LCMS: rettid: 8,52 min; renhet: 95%;
MS (m/e): 581 (MH<+>);
31P NMR (DMS0-d6): -2,17.
3. Syntese av N4-(2,2-dimetyl-4-[(dihydrogenfosfonoksy)metyl]-3-okso-5-pyrido[l,4]oksazin-6-yl)-5-fluor-N2-(3,4,5-trimetoksyfenyl)-2,4-pyrimidindiamin-monokalsiumsalt (Forbindelse 6)
10 ml vandig NaHC03-oppløsning (0,17 g, 2,02 mmol) ble dråpevis satt til en suspensjon avN4-(2,2-dimetyl-4-[(dihydrogenfosfonoksy)metyl]-3-okso-5-pyrido[l,4]oksazin-6-yl)-5-fluor-N2-(3,4,5-trimetoksyfenyl)-2,4-pyrimidindiamin (0,5 g, 0,86 mmol) i 5 ml vann ved romtemperatur under omrøring av innholdet. Den dannede klare oppløsning ble behandlet med 10 ml CaCb (0,11 g, i 10 ml vann, 0,99 mmol), dåråpevis ved romtemperatur. Tilsetningen resulterte i presipitering av et hvitt faststoff fra reaksjonsblandingen. Etter ferdig tilsetning ble innholdet omrørt i et tidsrom på 30 minutter, filtrert, vasket med 40 ml vann og tørket. Det klare, hvite faststoff ble tatt opp i 30 ml vann og varmet opp på en omrøringsplate til koking. Oppløsningen ble avkjølt, filtrert og tørket. Det hvite faststoff ble samlet og tørket videre under høyvakuum ved 80°C i 32 timer for å gi 0,41 g (83%) N4-(2,2-dimetyl-4-[(dihydrogenfosfonoksy)metyl]-3-okso-5-pyrido[l,4]oksazin-6-yl)-5-fluor-N2-(3,4,5-trimetoksyfenyl)-2,4-pyrimidindiamin-monocesiumsalt (Forbindelse 6). 4. Syntese av prodrugforbindelse 8
N4-(2,2-dimetyl-4-[(di-tert-butylfosfonoksy)metyl]-3-okso-5-pyirdo[l,4]oksazin-6-yl)-5-fluor-N2-(3,4,5-trimetoksyfenyl)-2,4-pyrimidindiamin (fremstilt som beskrevet ovenfor) (0,2 g, 0,29 mmol) ble satt til en blanding av 5 ml MeOH og 5 ml Et20. 2N vandig NaOH (0,023 g, 0,58 mmol) ble tilsatt på en gang under omrøring av innholdet ved romtemperatur. Reaksjonsforløpet ble fulgt ved LC/MS. Etter 8 timers omrøring ble det presipiterte faststoff filtrert og tørket for å gi N4-(2,2-dimetyl-4-metoksymetyl-3-okso-5-pyrido[l,4]oksazin-6-yl)-5-fluor-N2-(3,4,5-trimetoksyfenyl)-2,4-pyrimidindiamin (Forbindelse 8) som et hvitt faststoff (0,11 g, 74%).
*H NMR (DMSO-d6): dHNMR (DMSO-d6): d 9,47 (s, 1H), 9,15 (s, 1H); 8,16 (d, 1H, J=3,8 Hz), 7,87 (d, 1H, J=8,5 Hz), 7,37 (d, 1H, J=8,5 Hz), ,7,03 (s, 2H), 5,40 (s, 2H), 3,66 (s, 6H), 3,59 (s, 3H), 3,27 (s, 3H), 1,44 (s, 6H).
LCMS: rettid.: 12,88 min; renhet: 92%;
MS(m/e):515(MH<+>).
5. De aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelser tolereres i dyr Evnen hos tallrike biologisk aktive 2,4-pyrimidindiaminforbindelser til å utøve sin
aktivitet ved doser under de som viser toksisitet i dyr er påvist tidligere, se for eksempel USSN 10/355 543 av 31. januar, 2003 (US2004/0029902A1), PCT/US03/03022 av 31. januar, 2003 (WO 03/063794), USSN 10/631 029 av 29. juli, 2003 (US 2007/0060603), PCT/US03/24087 (WO 2004/014382), USSN 10/903 263 av 30. juli, 2004 (US 2005/0234049) og PCT/US2004/24716 (WO 2005/016893).
Sikkerhetsfarmakologien for aktiv Forbindelse 1 er studert i et kjernebatteri av studier (respiratorisk, CNS, kardiovaskulært og HERG). En lett reduksjon i hjertehastighet og økning i RR-intervall ble notert ved 50 mg/kg i den kardiovaskulære studie og en lett effekt på noen få oppførselsparametere ved 50 mg/kg ble også notert i CNS (Irwin)- studien. Ellers bestemte sikkerhetsfarmakologistudiene at Forbindelse 1 er godt tolerert. GLP-toksikologistudier inkluderte negativ mutagenisitet- og klastogenisitetsstudier (Ames, kromosomal aberrasjon og musemikronukleus). 128-dagers toksisitetsstudier i rotter og aper hadde høyere doser tegn på en reversibel effekt på hematologi, lever transaminase (mild effekt kun i rotter), milt og tymusstørrelse (kun rotte) og benmarg cellularitet (rotte og ape). Immunofenotyping i rottestudien viste en signifikant reduksjon i prosentandel CD3+-celler i høydose-rotter mens en signifikant økning i CD45RA+-celler ble notert etter restitusjon. Histopatologien var merkbar kun for milde reduksjoner i margcellularitet ved høye doser. Det var ingen tegn på spesielle effekter på humoral immunitet i anti-KLH-antistoffbedømmelsen. "No Observed Adverse Effect Level" (NOAEL) er 10-30 mg/kg/dag for rotter og 100 mg/kg/dag for aper. 6. Medikamentforbindelse 1 er biologisk aktive i in vifrø-analyser Forbindelse 1 blokkerer FceRI-avhengig aktivering av "Cord-Blood Derived Primary Human Mast Cells" (CHMC) på doseavhengig måte med en EC50på rundt 43 nm var bedømt ved måling av aktiviteten av tryptase som frigis før degranulering. Forbindelse 1 inhiberte ikke-ionomycinindusert degranulering av CHMC'er. Ionomycin er en kalsiumionoform som induserer CHMC-degranulering som går forbi tidlig FcR-signalering og indikerer derfor at Forbindelse 1 er spesifikk for FcR-signalering og ikke degranulering per se. Forbindelse 1 inhiberer også FcsRI-avhengig produksjon og frigivning av LTC4 (EC50= 39 nM) og alle testede cytokiner (EC50i området 158 nM-462 nM). 7. Medikamentforbindelse 1 er effektiv i dyremodeller på reumatoid artritt Den biologiske aktivitet for Forbindelse 1 i IC-mediert vaskulær ødem (Arthus-reaksjon i rotter) i kollagen antistoffindusert artritt i mus, og i en rottemodell på kollagenindusert artritt.
7.1 Arthus-reaksjon
IC-mediert akutt inflammatorisk vevskade er impliktert i et antall human autoimmunsykdommer, inkludert vaskulitt, serumsykdom, systemisk lupus erytematose, RA og glomerulonefritt. Den klassiske forsøksmodell for IC-mediert vevskade er den "Reverse Passive Arthus" (RPA)-reaksjonen. Intravenøs injeksjon av antigen (ovalbumin, OVA) etter intradermal injeksjon av antistoffer som er spesifikke for OVA (kanin anti-OVA IgG) resulterer i en perivaskulær avsetning av IC og en hurtig inflammatorisk responskarakterisert vedødem, neutrofil infiltrering og hemorragj på injeksjonsseter (Szalai, et al., 2000, J. Immunol. 164(l):463-468).
En enkelt oral behandling av rotter med Forbindelse 1 1 time før antigen/antistoffadministrering reduserte den kutane RPA-reaksjon og inflammatorisk ødem på doseavhengig måte. Administrering av 10 mg/kg oral Forbindelse 1 inhiberte ekstravaskulær lekkasje av Evans blått fargestoff (OD6io) fra vevsbiopsier ved 80% sammenlignet med vehikkelkontroll.
7.2 Kollagenantistoffindusert artritt
Den antiinflammatoriske aktivitet for Forbindelse 1 ble evaluert i musekollagenantistoffindusert artritt (CAIA)-modellen hvori en anti-type U kollagen antistoffcocktail tilføres for å indusere artritt (Teroto et al., 1992, J. Immunol. 148(7):2103-2108; McCoy et al., 2002, J. Clin. Invest. 110(5):651-658; Kagari et al., 2002, J. Immunol. 169(3): 1459-1466). Denne passive modell skiller seg fra den tradisjonelle gnagerkollagenindusert artritt (CIA) idet at sykdomssymptomene inntrer hurtig (utvikles innen 24-48 timer etter en IV-injeksjon av antistoffer), artritt kan induseres i både CIA-mottagelige og CIA-resistente musestammer og tillater evaluering av inflammasjon som er uavhengig av antistoffproduksjon.
CAIA ble indusert i Balb/c-mus ved intravenøs injeksjon av Arthrogen-CIA® monoklonal antistoffblanding (Chemicon International, Inc., Temecula, CA) via halevenen, 2 dager senere fulgt av en intraperitoneal injeksjon av LPS. Oral Forbindelse 1-behandling ble startet innen 4 timer etter antistoff administrering (Dag 0). Alvoret av artritt i bakpotene ble notert daglig (en skala på 0-4 per pote, med sum av bedømmelse for begge bakpoter). På Dag 5 nådde begge kontrollgrupper, saltoppløsning og vehikkel, sine kliniske toppbedømmelser med en sykdomsinsidens på 100%.
Redusert inflammasjon og svelling var åpenbar i dyr testet med Forbindelse 1 og artritten skred langsommere frem. Behandling med Forbindelse 1 (b.i.d.) reduserte signifikant klinisk artritt (p < 0,05) sammenlignet med dyr behandlet kun med vehikkel, mens lavere dosenivåer av Forbindelse 1 viste en trend mot redusert artrittalvor, sykdomsinsidens og tiden for begynnelse; imidlertid var forskjellene ikke signifikante (P>0,05).
7.3 Kollagenindusert artritt
En av forsøksmodellene for IC-mediert vevskade er CIA i gnagere (Kleinau et al., 2000, J. Exp. Med., 191:1611-1616). Injeksjon av type II kollagen (CU) til gnagere gir en immunreaksjon som karakteristisk involverer inflammatorisk destruksjon av brusk og ben i de distale ledd ved samtidig svelling av omgivende vevet. CIA i rotter benyttes vanligvis for å evaluere forbindelser som kan være av potensiell nytte som medikamenter for behandling av reumatoid artritt og andre kronisk inflammatoriske tilstander og induseres i mottagelige stammer av enten mus eller rotter ved injeksjon av CU i ufullstendig Freunds adjuvans (TFA). Administrering av denne emulsjon gir opphav til polyartritt som karakteriseres ved synovial hyperplasi, infiltrering av mononukleære celler, pannus-dannelse og destruering av brusk og ben. Det er tidligere godt dokumentert at antistoffer til CU er et prerekvisitt for CIA i mus, da B-celledefektive mus ikke utvikler artritt (Svensson et al., 1998, Clin. Exp. Immunol., 111:521-526).
Syngeniske LOU-rotter ble immunisert på Dag 0 med nativ kylling CII/IFA. Oral behandling begynte ved starten av artrittsymptomene (Dag 10). Til sammen 59 rotter ble behandlet med enten en vehikkelkontroll eller Forbindelse I ved et av fire dosenivåer (1, 3, 10 henholdsvis 30 mg/kg q,d. ved p.o. tvangsforing). Baklemmene ble bedømt daglig og klinisk artrittalvor ved bruk av en standardisert metode basert på graden av leddinflammasjon. Høyoppløsnings digital radiografer av baklemmene ble oppnåd ved studieslutt (Dag 28). Disse lemmer ble også analysert for histopatologiske forandringer. IgG-antistoffer mot nativ CU ble målt i kvadruplikat ved ELISA. Det var en signifikant reduksjon (p < 0,05) i artrittalvor som var åpenbar innen 7 dager etter initiering av terapi i høydose (30 mg/kg) gruppen som fortsatte å bli bedre i studieforløpet. Ved Dag 28 var den kliniske bedømmelse i dyr som var behandlet med vehikkel alene 6,08 + 0,67 sammenlignet med 2,54 + 0,98 i Forbindelse 1 30 mg/kg gruppen (p < 0,001). Blindradiografer ved studieslutt (Dag 28) viste en signifikant reduksjon i leddskade: 3,66 + 0,71 (vehikkel) vs. 1,63 + 0,67 (Forbindelse 1) (p < 0,02)
(E. Brahn, 2004). Blindkompositt histopatologiske studier bekrefter regresjon av pannus og erosjoner: Midlere modifisert Mankin-bedømmelse var 11,8 + 0,9 (vehikkel) vs. 3,7 + 0,9 (30 mg/kg Forbindelse 1) (p < 0,001). Antistoffer mot nativ CU ble ikke redusert i Forbindelse 1-behandlede rotter.
8. Prodrugforbindelsen er oralt biotilgjengelige
Prodrugforbindelse 4 ble testet på oral biotilgjengelighet. For denne studie ble en prodrug oppløst i forskjellige vehikler (for eksempel PEG 400-oppløsning og CMC- suspensjon) for intravenøs og oral dosering til rotter. Der indikert, ble den aktive metabolittforbindelse 1 forbindelse (medikament) formulert og administrert i den samme vehikkel. Etter administrering av prodrug og/eller medikament ble plasmaprøver oppnådd og ekstrahert. Plasmakonsentrasjoner for prodrug og/eller medikament ble bestemt ved HPLC/tandem massespektrometri (LC/MS/MS)-metoder. Farmakokinetiske analyser ble gjennomført basert på plasmakonsentrasjonsdata. De farmakokinetiske parametere av interesse inkluderte Klaring (CL), Fordelingsvolum ved stabil tilstand (Vss), terminal halveringstid (ti/2) og oral biotilgjengelighet (%F).
Resultatene av disse forskjellige farmakokinetiske forsøk er vist i Figurene 4-12.
Under henvisning til Fig. 4 vises PK-profiler for IV- og PO-administrering i Sprague-Dawley-rotter. For IV-administrering ble Forbindelse 4 oppløst i PEG-400 og administrert en dose på 1 mg/kg. Hurtig forsvinning av prodrugforbindelse 4 ble observert og medikamentforbindelse 1 funnet i plasmaprøver oppnådd fra jugularvenen. Gitt oralt i den samme vehikkel var intet prodrugforbindelse 4 tilstede systemisk, men høye nivåer av medikamentmetabolittforbindelse 1 ble observert. Figur 5 oppsummerer PK-parameterne for studien som beskrevet i Fig. 4. Prodrugforbindelse 4 klares hurtig og konverteres delvis til medikamentforbindelse 1. Gitt oralt ved en dose på 4 mg/kg ble biotilgjengeligheten bestemt til å være 29,9%. Biotilgjengelighetstaller er basert på data oppnådd fra en tidligere studie (data ikke vist), der medikamentforbindelse 1 ble administrert som en IV-bolusdose ved 1 mg/kg. Figur 6 sammenligner medikamentforbindelse 1-eksponering i Sprague-Dawley-rotter etter oral administrering av enten medikamentforbindelse 1 (2,5 mg/kg i PEG-400) eller prodrugforbindelse 4 (4 mg/kg i PEG-400). Verdiene for AUC-doser er så å si identiske og indikerer at prodrugforbindelse 4 absorberes like godt som medikamentforbindelse 1. Figur 7 viser et plott av cLogD vs pH beregnet ved bruk av in situ-prediksjoner for både Forbindelse 1 og Forbindelse 4. Forbindelse 1 er sterkt lipofylisk og kun svakt ioniserbar (målt oppløselighet er mindre enn 1 ug/ml i fosfatbuffer ved pH = 7,5, data ikke vist). På den annen side er Forbindelse 4 meget polar ved nøytral pH-verdi. Målte oppløselighetsverdier er konsistente med de predikterte cLogD-verdier ved pH = 7,5. Figur 8 viser at prodrugforbindelse 4 er stabil under sure og nøytrale betingelser ved 37°C. Figur 9 viser konvertering av prodrugforbindelse 4 til medikamentforbindelse 1 i mikrosompreparater. Prodrugforbindelse 4 konverterte ikke til medikamentforbindelse 1 i mikrosomale preparater oppnådd fra Xenotech. I oppfølgningsstudier ved bruk av intestinal- og hepatiske mikrosomer oppnådd fra en annen kilde ble konvertering av Forbindelse 4 til Forbindelse 1 observert (data ikke vist). Figur 10 viser at prodrugforbindelse 4 er ustabil i rotteplasma - hydrolyse til medikamentforbindelse 1 observert og konvertering til Forbindelse 1 antas å bli katalysert av fosfataseenzymer. Nærværet av fosfataseaktivitet i rotteplasma ble bekreftet ved bruk av p-nitrofenylfosfat, et kjent substrat for fosfatase. Figur 11 viser absorpsjon av prodrugforbindelse 4 fra forskjellige vehikler. Forskjell fra medikamentforbindelse 1 er absorpsjon av prodrugforbindelse 4, ikke avhengig av formulering. Prodrugforbindelse 4 absorberes like godt i oppløsningsformuleringer (PEG-400 og karboksymetylcellulose (CMC)) og som pulver i hårdgelatinkapsler.
Basert på de farmakokinetiske data ble den orale biotilgjengelighet (%F) for prodrugforbindelse 4 fra alle tre testede vehikler (PEG-400-oppløsning; CMC-oppløsning; og pulver i kapsler) bestemt til å være rundt 30%.