NO329385B1 - Fremgangsmate for opparbeidelse av celler - Google Patents
Fremgangsmate for opparbeidelse av celler Download PDFInfo
- Publication number
- NO329385B1 NO329385B1 NO20003215A NO20003215A NO329385B1 NO 329385 B1 NO329385 B1 NO 329385B1 NO 20003215 A NO20003215 A NO 20003215A NO 20003215 A NO20003215 A NO 20003215A NO 329385 B1 NO329385 B1 NO 329385B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- cells
- production
- production batch
- bioreactor
- batch
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 41
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 69
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 16
- 239000012620 biological material Substances 0.000 claims description 14
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims description 11
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 9
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 8
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 6
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 abstract 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 129
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 24
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 24
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 10
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 9
- 238000013341 scale-up Methods 0.000 description 6
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000013411 master cell bank Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000466177 Cansumys canus Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 241000353621 Eilat virus Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000010924 continuous production Methods 0.000 description 1
- 230000002338 cryopreservative effect Effects 0.000 description 1
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 1
- 229940124642 endogenous agent Drugs 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000013190 sterility testing Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M3/00—Tissue, human, animal or plant cell, or virus culture apparatus
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Description
Den foreliggende oppfinnelsen vedrører en fremgangsmåte for opparbeidelse av celler som kan anvendes ved fremstilling av biologisk materiale.
For produksjonen av biologisk materiale på f.eks. cellelinjer vil det være nødvendig med fremstilling av store mengder celler i bioreaktorer ved bruk av oppskaleringsprosedyrer.
US-patent 5.017.490 angir en slik oppskaleringsprosedyre som har fordelen med spesielt lav risiko for overføring av kontaminering. Denne fremgangsmåten er imidlertid ikke egnet for forankringsavhengige celler (følgelig ikke for celler som kun gror hvis festet på et substrat) eller celler innlemmet i et substrat (f.eks. i porøse bærere).
US-patent 4.664.912 beskriver en fremgangsmåte for tilberedning av forankringsavhengige celler egnet for fremstilling av biologiske materialer (dvs. viruser), som tar utgangspunkt i et cellefungerende såkorn med etterfølgende passasjer effektuert i etterfølgende økende bioreaktorvolum på 1 liter, 5 liter, 25 liter, 150 liter og endelig enten i en 1000 liter bioreaktor eller i et flertall av 150 liter bioreaktorer. I mellom ethvert av disse passasjetrinn frigis cellene fra deres bærer med en fortynnet proteaseoppløsning. I den endelige passasje effektueres inokkulasjonen av viruset. En tilsvarende prosess er også beskrevet i WO8601531.
Hvis man antar en gjennomsnittlig cellesyklustid på omkring 20-24 timer kan passasjeintervallene være omkring hver 3-5 dager. For å utvide cellene til tilstrekkelig store kulturer fra en MWCS (MWCS = Manufacturer's working cell bank, produsentens arbeidende cellebank) kan oppscalleringsprosedyren ta adskillige uker avhengig av volumet til den endelige bioreaktoren.
I fremgangsmåtene for tilberedning av celler ovenfor er hver av de endelige produksjonssatsene blitt fremstilt fra MWCS'en. For fremstilling av store mengder av biologisk materiale vil det være nødvendig å anvende adskillige parallelle dyrkningslinjer opptil det største beholdervolumet. Slike tilberedningsrfemgangsmåter er følgelig meget tidkrevende og krever drift av et meget betydelig antall bioreaktorer for tilberedningen av cellene så vel som fremstillingen av det biologiske materialet.
WO9739000; Cytotechnology, vol. 4, side 271-8; Biotechnology & Bioengineering, vol. 27, side 743-55 og Biotechnology & Bioengineering, vol. 42, side 357-66 beskriver fremgangsmåter for opparbeidelse av celler i suspensjon som kan anvendes ved fremstilling av biologisk materiale. Analog fremgangsmåte egnet for forankringsavhengige celler er ikke omtalt.
Methods in Molecular Biology, 1997, vol. 75, kap. 1, side 1-11 omtaler en prosess hvor forankringsavhengige celler frigjøres fra substratet etterfulgt av et trinn hvor en alikvot av den oppnådde celle suspensjon tilsettes til en ny kulturbrønn inneholdende vekstmedium. Formålet med denne prosessen er å opprettholde transformerte celler.
Methods in Molecular Biology, 1997, second edition, side 59-75 belyser problemene som er assosiert med oppskalering av forankringsavhengige celler kontra celler i suspensjon.
Det er derfor et formål med den foreliggende oppfinnelsen å tilveiebringe et mye raskere gjennomløp i tilberedningen av celler for fremstillingen av biologiske materialer.
Et første aspekt ved den foreliggende oppfinnelsen vedrører en fremgangsmåte for opparbeidelse av celler som kan anvendes ved fremstilling av biologisk materiale, kjennetegnet ved at den omfatter dyrkning av celler opptil et ønsket cellevolum i en pre-produksjonssats, hvoretter i en repetert diskontinuerlig prosess: a) deler av cellene fra pre-produksjonssatsen anvendes for fremstillingen av minst en produksjonssats, og b) den resterende del av cellene fra pre-produksjonssatsen anvendes som såkorn for fremstillingen av minst en etterfølgende pre-produksjonssats,
hvori nevnte celler er forankringsavhengige celler hvor deres vekst og propagering nødvendigjør at cellene er festet til et substrat.
En foretrukket utførelsesform ifølge det første aspekt ved foreliggende oppfinnelse er kjennetegnet ved at i den repeterte diskontinuerlige prosess: a) blir deler av cellene fra pre-produksjonssatsen overført for å bli anvendt for opparbeidelse av minst en produksjonssats, og b) den resterende del av cellene fra pre-produksjonssatsen overføres for å bli anvendt som såkorn for opparbeidelse av minst en etterfølgende
pre-produksjonssats.
En foretrukket utførelsesform er kjennetegnet ved at en første pre-produksjonssats opparbeides fra et arbeidssåkornlager ved minst et passasjetrinn.
En ytterligere foretrukket utførelsesform er kjennetegnet ved at cellene dyrkes på nevnte substrat og før hvert overføringstrinn frigis cellene fra nevnte substrat.
Som anvendt heri betyr uttrykket "produksjonssats" en kultur av celler som anvendes ved fremstillingen av biologisk materiale.
Som anvendt heri betyr uttrykket "pre-produksjonssats" en kultur av celler som anvendes ved prosessen ifølge den foreliggende oppfinnelsen for tilberedning av minst en produksjonssats (som definert ovenfor) og en etterfølgende pre-produksjonssats.
Som anvendt heri betyr uttrykket "biologisk materiale" en hvilken som helst substans eller organisme som kan produseres fra en cellekultur. Eksempler på "biologiske materialer" er vimser og proteiner slik som enzymer.
Som anvendt heri betyr uttrykket "arbeidende sedlager" en mengde av en bestemt type av celler av definert opprinnelse lagret for å bli anvendt som en sed/podningsstoff fra hvilket alle kulturer av den samme typen av celler er avledet.
Som anvendt heri betyr uttrykket "forankrings-avhengige celler" celler som krever å være festet til et substrat som definert heri for passende vekst og/eller propagering.
Som anvendt heri betyr uttrykket "substrat" et hvilket som helst fast materiale nyttig for å feste celler.
Som anvendt heri betyr uttrykket "passasjetrinn" en sekvens av aktiviteter i formeringen og produksjonen av celler omfattende minst overføringen av en betydelig mengde av celler og en betydelig mengde av dyrkningsmedium til en produksjonsbeholder, inkuberingen av beholderen ved betingelser egnet for vekst og formering av cellene over en tid tilstrekkelig til å bevirke vekst og formering av cellene. Eventuelt kan et passasjetrinn omfatte separering av cellene fra dyrkningsmediumet og/eller fra substratet etter en tilstrekkelig tid for effektiv vekst og formering av cellene.
Det vil fremgå klart for en fagperson innen dette felt at fremgangsmåten ifølge den foreliggende oppfinnelsen skiller seg vesentlig fra fremgangsmåter kjent innen teknikken hvor celler produseres i en kontinuerlig prosess snarere enn i den foreliggende diskontinuerlige prosess.
Ifølge patentpublikasjoneneEP0417531 og WO89/08701 kan kontinuerlige dyrkningssystemer også anvendes for fremstillingen av virus. Først dyrkes celler i en første bioreaktor og etter at en bestemt celletetthet er nådd, mates cellene kontinuerlig fra den første bioreaktoren inn i en andre bioreaktor. I denne andre bioreaktoren dyrkes virusene på cellene og etterfølgende trekkes disse virus kontinuerlig ut fra denne andre bioreaktoren.
Basisfremgangsmåten ifølge den foreliggende oppfinnelsen er å anvende en moderbioreaktor fra hvilken produksjonsbioreaktoren(e) mates med celler. Når cellene er forankringsavhengige må cellene fortrinnsvis etter hvert passasjetrinn skilles fra deres substrater.
En "trypsinisering" fremgangsmåte på større bioreaktorer er blitt utviklet for dette formål. Produksjonscellene defineres til en spesifikk og karakteriserende passasjetall for en såkalt ECB (ECB = Extended Cell Bank). Den beskrevne fremgangsmåten tillater høy gjennomløpsproduksjon siden oppscalleirngsruten fra WCS til produksjonsceller kan forkortes mye og mange færre bioreaktorer kreves siden parallell produksjonslinjer ikke lengre er nødvendig.
Forskjellige utførselsformer av den foreliggende oppfinnelsen er avbildet på figur 1.
I en foretrukket utførselsform utvides celler fra en ampull til en MWCS opptil nivået for den første pre-produksjonssatsen gjennom et eller flere passasjetrinn. Størrelsen av bioreaktoren anvendt for en slik pre-produksjonssats kan variere fra adskillige liter arbeidsvolum til adskillige hundrede liter. Deretter anvendes en del f.eks. 10-20% av de således ekspanderte cellene (f.eks. passasje X) til å re-populere en bioreaktor for fremstilling av en etterfølgende pre-produksjonssats (værende passasje nr. X+l), mens massen av cellene overføres (passasje X eller X+l) til en større bioreaktorstørrelse for å starte direkte produksjon eller for først å re-populere den og deretter starte produksjon.
I klassiske serieproduksjonslinjer er fordoblingstallet for cellene avledet fra MWCS'en ved høsttidspunktet kjent på forhånd innenfor bestemte grenser. Et maksimalt tillatelig antall generasjoner er fastlagt for produksjonssystemet ved begynnelsen.
I fremgangsmåten ifølge den foreliggende oppfinnelsen kan det maksimale antall av cellepassasjer defineres ved ECB. Produksjonspassasjeantallet (antallet av cellepassasjer anvendt før produksjonen av det biologiske produktet), er følgelig irrelevant innenfor grensene satt av ECB. Som en konsekvens må et slikt maksimalt antall av passasjer følges med hensyn til lovgivningsmessige restriksjoner. Som et resultat er den bestemte satsen av produserte biologiske materialer sluttproduktet fra en direkte oppscalleringsrute.
For å verifisere at spesifikasjonene til cellene ved ECB-trinnet i produksjonen tilsvarer MCB'en (MCB = Master Cell Bank) må en utføre spesifikk evaluering for dette formål med hensyn til vekstkarakteristikk, ytterligere frihet ("freedom of adventitious"), eksogene og endogene midler på forskjellige trinn, karyologi iso-enzymanalyser osv. Når ECB først er fullstendig karakterisert kan man tillate å produsere produktet med celler ved et hvilket som helst passasjenummer mellom MCB og ECB, siden det kan antas at cellene ikke har endret seg i deres spesifikasjoner inn i mellom. Som et resultat kan testene på MWCS'en derfor begrenses til sterilitetstesting. Dette er en spesiell fordel ved fremgangsmåten ifølge den foreliggende oppfinnelsen.
Med det maksimale antall passasjer fastsatt, kan en anvende celler ved et hvilket som helst trinn. For ytterligere å minimere tiden krevet for å ekspandere cellene fra MWCS'en til produksjonsbioreaktoren vil det være en fordel å muliggjøre masseoppstart av celler. Dette kan gjøres for eksempel på en av de følgende måtene: Celler kan parkeres ved et bestemt passasjeantall under lengre intervaller ved
omgivelses temperatur (17-32°C) og gjenopplives til logaritmisk ekspansiv vekst ved å øke temperaturen og endre dyrkningsmediumet, eller
celler kan være frosset (temperatur <-80°C) i masse og tines før overføring
av dem til en forhåndssatt-volum bioreaktor og derved redusere den nødvendige oppskalleringsruten signifikant.
Fremgangsmåten ifølge den foreliggende oppfinnelsen kan utføres med dyr-cellekulturer og mer presist med forankringsavhengige celler. Egnede typer av celler er f.eks. hamsterceller (CHO, BHK-1), apeceller (Vero), kvegceller (MDBK), hundeceller (MDCK), menneskelige celler (CaCo, A431) eller kyllingceller (CEF).
Som en bioreaktor ifølge den foreliggende oppfinnelsen kan det anvendes en enkelt enhet av et flertall av enheter for eksempel omrørte fermenteringsreaktorer, fikserte sjiktfermenteirngsreaktorer, fluidiserte sjiktfermenteringsreaktorer, luftluftede fermenteringsreaktorer eller en hullfiberreaktor.
Celler av typen ovenfor kan og noen bør dyrkes festet til et fast understøttelsesmateriale slik som mikrobærer eller makrobærer i suspensjon, f.eks. i et fiksert sjikt, et fluidisert sjikt eller i suspensjon eller som hullfibrer. Celler kan også nedsenkes i en bærer (f.eks. porøse bærer).
I forløpet av fremgangsmåten ifølge den foreliggende oppfinnelsen, spesielt når det anvendes et fast understøttelsesmateriale, kan celler frigis fra dette faste understøttelsesmaterialet. Dette kan utføres ved en hvilken som helst fremgangsmåte nyttig for å fjerne cellene fra et fast understøttelsesmateriale. Fordelaktig til denne ende kan det gjøres bruk av en proteolytisk enzymoppløsning. Eventuelt kan det enzymatiske frigivningstrinnet gjennomføres ved et eller flere pre-kondisjoneringstrinn, f.eks. ved behandling med PBS og/eller EDTA, for å øke den proteolytiske virkningen og/eller for å redusere mengden av proteolytisk enzym som kreves.
Eksempel 1
Cellefrigjøring og adskillelse fra bærer før overføringen til neste bioreaktor
Forankringsavhengige celler fra en MDCK (MDCK = Madin Darby Canine Kidney (cell line) cellelinje ble dyrket ved 37 °C på Cytodex-3 mikrobærer (Pharmacia, Uppsala, Sverige) (5 g bærer/l) i en bioreaktor på 4 liter under omrøring ("moderbioreaktor"). Vekstmediumet var EpiSerf (Life Technologies, Paisly, Scotland). Dyrkning ble fortsatt til et maksimum på 5xl0<6> celler/ml kultur.
Cellene ble frigitt fra bærerne ved trypsinering i en Trypsin-EDTA oppløsning (Life Technologies, Paisly, Scotland).
Etter utfelling av bærer ble 80 % av de frigitte cellene overført til 3 andre bioreaktorer av tilsvarende størrelse. De sistnevnte "produksjons" bioreaktorer fikk alle tilført bærer (cellesubstrat) på forhånd. Cellene ble tillatt å re-populere bærerne og ble deretter anvendt for fremstilling i disse produksjonsbioreaktorene.
Det resterende cellene i "moder bioreaktoren" ble tillatt å re-populere de resterende Cytodex-3 bærerne og ble dyrket til den ønskede celletetthet.
Eksempel 2
Cellefrigivning uten adskillelse fra bærer før overføringen til neste bioreaktor
Dyrkningen av cellene ble utført som beskrevet i eksempel 1, men etter trypsineringen ble 80% av de frigitte cellene, inklusive bærerne, overført til de 3 produksjonsbioreaktorene. I tillegg ble egnede bærere tilført til alle bioreaktorer.
Eksempel 3
Cellefrigivning uten adskillelse fra bærer etter overføringen til neste bioreaktor
Dyrkningen av cellene ble utført som beskrevet i eksempel 1, men 80% av de festede cellene ble overført til en bioreaktor av tilsvarende størrelse som deretter ble anvendt direkte for produktgenerering.
De resterende cellene på mikrobærer i moderfermenteirngsreaktoren ble deretter frigitt ved trypsinering hvoretter nye bærere ble tilsatt og cellene tillatt å re-populere substratene.
Eksempel 4
Oppstart fra frosne bulkceller
I dette eksperiment ble en del av kulturen anvendt til å gjenfylle ("rebatch") moderfermenteirngsreaktoren og noen datterfermenteirngsreaktorer og deler av kulturen ble anvendt til å fryse celler i bulk.
Frossene bulkceller (totalt 14,4 X 10<8> celler) ble inokkulert i en startkultur i en 3 liters moderfermenteringsreaktor inneholdende 5 g Cytodex pr. liter og EpiSerf medium og deretter inkubert ved 37 °C. Rester av kryo-konserveringsmidler ble fjernet ved en mediumutveksling på dag 1.
På dag 2 ble trypsinering utført, 50 % av cellene ble frosset som masse og de resterende cellene ble inokkulert til mikrobærer i en etterfølgende fermenteringsreaktor.
Fra tabell 1 kan det utledes at cellene fortsetter å vokse ved en normal hastighet mellom dag 2 og 3.
På dag 4 ble innholdet av moderfermenteringsreaktoren trypsin-frigitt og gjeninnsatt på nye mikrobærere (10 g/l) i to andre fermenteringsreaktorer ved siden av moderfermenteringsreaktoren.
På dag 5 viste platedyrkningseffektiviteten ("plating efficiency") seg å være omkring 85 %.
Eksempel 5
Overføring fra liten skala moderfermenteringsreaktor til stor skala produksjonsfermenteringsreaktor
Celler ble oppskallert til storskala i 65 liter og 550 liter fermenteringsreaktorer (hhv. 50 liter og 250 liter arbeidsvolumen) ved bruk av en mikrobærertetthet på 5 g cytodeks pr. liter.
Som det kan sees fra tabell 2, overføres 90 % av det totale antall celler til storskala fermenteringsreaktoren fra en 50 liter fermenteringskultur med 800.000 celler/ml i hvilken 69 % viste seg å være levedyktige.
Det samme ble funnet i 50 liter moderfermenteringsreaktoren, omkring 69 % av cellene som igjen formerte seg viste seg å være levedyktige.
Fremgangsmåten var som følger:
På dag 0 ble bærerne tillatt å sedimentere i 50 liter kultur, hvoretter supernatanten (dyrkningsmedium) ble fjernet og erstattet med PBS. Innholdet av fermenteringsreaktoren ble omrørt i 5-15 minutter. Supernatanten ble fjernet etter at bærerne igjen ble sedimentert. Dette trinn ble gjentatt om nødvendig.
Neste trinn ble gjentatt med PBS/EDTA (0,4 gram EDTA/liter PBS). Igjen ble kulturen omrørt i 5-15 minutter. Bærerne ble tillatt å sedimentere og supernatanten ble fjernet, PBS/EDTA trinnet ble gjentatt inntil cellene var blitt avrundet og klar til å bli trypsin-frigitt.
Deretter ble trypsin (0,025 % endelig konsentrasjon) tilsatt til PBS/EDTA'en og inkubert i 5-15 minutter. Deretter ble enten cellene inneholdende supernatant (etter utfelling av nu "nude" bærer) overført (som i eksempel 9) eller blandingen av celler og bærer overført (i alt 80% av den totale blandingen).
Etter overføring av cellene til 550 liter fermenteringsreaktoren ble de resterende cellene (følgelig 10 % av de levedyktige cellene) tillatt å re-populere bærerne som fortsatt er tilstede i fermenteringsreaktoren etter gjenoppfylling av 501 fermenteringsreaktoren med dyrkningsmedium.
Omkring 70 % av cellene viste seg å være levedyktige.
Eksempel 6
Analogt med eksempel 5, men 80 % av kulturen med bærer-bundne celler ble overført fra moderbioreaktoren til produksjonsbioreaktoren. Produksjonen ble startet etter tilsetning av virus. 20 % av cellene og bærerne som forble i moderbioreaktoren ble trypsinert og frigitt og etter tilsetning av nytt substrat til moderbioreaktoren ble de tillatt å re-populere moderbioreaktoren mens produksjonen foregikk i den fysisk adskilte produksjonsbioreaktoren.
Eksempel 7
Storscaladyrkning startet med bulk frosne celler
Bulk frosne celler ble tinet og inokkulert i en 10 liter (arbeidsvolum) fermenteringsreaktor (cytodex bærer densitet 5 g/l; dyrkningsmedium EpiSerf) ved en inokkulasjonstetthet på lxlO<6> celler/ml. Etter festing, ble dyrkningsmediumet erstattet for å fjerne rester av kryo-beskyttelsesmidler.
Etter dag 1 var mengden av levedyktige celler festet til bærerne 0,45xl0<6> celler/ml som derfra startet vekst. Ved en tetthet på 2,8x10<6> celler/ml ble cellene frigitt fra deres bærer ved trypsinering og 80 % ble overført til en 50 liters arbeidsvolum fermenteringsreaktor (bærer 5 g/l).
Som det kan utledes fra tabell 3 var mengden av levedyktige celler på dag 1 etter bulk frysning av celler omkring 45 %.
Av det totale antallet av overførte celler var levedyktigheten etter trypsing frigivning 71,4%.
Claims (5)
1.
Fremgangsmåte for opparbeidelse av celler som kan anvendes ved fremstilling av biologisk materiale, karakterisert ved at den omfatter dyrkning av celler opptil et ønsket cellevolum i en pre-produksjonssats, hvoretter i en repetert diskontinuerlig prosess: a) deler av cellene fra pre-produksjonssatsen anvendes for fremstillingen av minst en produksjonssats, og b) den resterende del av cellene fra pre-produksjonssatsen anvendes som
såkorn for fremstillingen av minst en etterfølgende pre-produksjonssats, hvori nevnte celler er forankringsavhengige celler hvor deres vekst og propagering nødvendigjør at cellene er festet til et substrat.
2.
Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at i den repeterte diskontinuerlige prosess: a) blir deler av cellene fra pre-produksjonssatsen overført for å bli anvendt for opparbeidelse av minst en produksjonssats, og b) den resterende del av cellene fra pre-produksjonssatsen overføres for å bli anvendt som såkorn for opparbeidelse av minst en etterfølgende pre-produksjonssats.
3.
Fremgangsmåte ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at en første pre-produksjonssats opparbeides fra et arbeidssåkornlager ved minst et passasjetrinn.
4.
Fremgangsmåte ifølge krav 2, karakterisert ved at cellene dyrkes på nevnte substrat og før hvert overføringstrinn frigis cellene fra nevnte substrat.
5.
Fremgangsmåte ifølge krav 1-4, karakterisert ved at det aktuelle biologiske materialet er et virus.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP97204110 | 1997-12-24 | ||
| PCT/EP1998/008522 WO1999033955A1 (en) | 1997-12-24 | 1998-12-17 | Preparation of cells for production of biologicals |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO20003215D0 NO20003215D0 (no) | 2000-06-21 |
| NO20003215L NO20003215L (no) | 2000-06-21 |
| NO329385B1 true NO329385B1 (no) | 2010-10-11 |
Family
ID=8229133
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO20003215A NO329385B1 (no) | 1997-12-24 | 2000-06-21 | Fremgangsmate for opparbeidelse av celler |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20070148753A1 (no) |
| EP (2) | EP1801201B1 (no) |
| JP (1) | JP4478328B2 (no) |
| KR (1) | KR100683429B1 (no) |
| CN (1) | CN1185339C (no) |
| AT (2) | ATE507284T1 (no) |
| AU (1) | AU758209B2 (no) |
| BR (1) | BR9814490A (no) |
| CA (1) | CA2316739C (no) |
| CZ (1) | CZ299719B6 (no) |
| DE (2) | DE69837287T3 (no) |
| DK (2) | DK1801201T3 (no) |
| ES (2) | ES2281148T5 (no) |
| HK (1) | HK1030628A1 (no) |
| HU (1) | HUP0100538A3 (no) |
| ID (1) | ID26784A (no) |
| IL (1) | IL136736A (no) |
| NO (1) | NO329385B1 (no) |
| NZ (1) | NZ505371A (no) |
| PL (1) | PL196042B1 (no) |
| PT (2) | PT1060241E (no) |
| RU (1) | RU2230784C2 (no) |
| SK (1) | SK285971B6 (no) |
| TR (1) | TR200001960T2 (no) |
| UA (1) | UA72732C2 (no) |
| WO (1) | WO1999033955A1 (no) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011077035A1 (fr) | 2009-12-23 | 2011-06-30 | Sanofi Pasteur | Procede de culture de cellules adherentes |
| WO2019139891A1 (en) | 2018-01-09 | 2019-07-18 | Synthetic Biologics, Inc. | Alkaline phosphatase agents for treatment of neurodevelopmental disorders |
| EP3773686B1 (en) | 2018-03-20 | 2023-06-07 | Theriva Biologics, Inc. | Alkaline phosphatase agents for treatment of radiation disorders |
| EP3768302A4 (en) | 2018-03-20 | 2021-12-15 | Synthetic Biologics, Inc. | INTESTINAL ALKALINE PHOSPHATASE FORMULATIONS |
| US20190367858A1 (en) * | 2018-06-01 | 2019-12-05 | Lonza Ltd. | Midscale Model For Organic Growth and Phasing |
| US20220259554A1 (en) * | 2019-07-16 | 2022-08-18 | Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. | Cell culture method and application thereof based on high-density and continuous inoculation |
| EP4339274A1 (en) | 2022-09-13 | 2024-03-20 | Sartorius Stedim Biotech GmbH | Method for operating a bioprocess installation for production of a bioproduct |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60151458A (ja) | 1984-01-20 | 1985-08-09 | Nippon Piston Ring Co Ltd | カムシヤフト |
| US4664912A (en) * | 1984-10-01 | 1987-05-12 | Wiktor Tadeusz J | Process for the large scale production of rabies vaccine |
| DE3833925A1 (de) * | 1988-03-11 | 1989-09-21 | Inst Angewandte Biotechnologie | Verfahren und herstellung von virus und viralem antigen und vorrichtung hierzu |
| US5017490A (en) | 1989-03-10 | 1991-05-21 | Baxter International Inc. | Method for in vitro reproduction and growth of cells in culture medium |
| DE3930140A1 (de) * | 1989-09-09 | 1991-03-21 | Bayer Ag | Verfahren zur herstellung von biologischen materialien in zellkulturen und vorrichtungen |
| WO1992010564A1 (en) * | 1990-12-13 | 1992-06-25 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, U.S. Department Of Commerce | Sustained and continuous production of high titers of recombinant viral vectors and transduced target cells for use in gene therapy |
| DE19612966B4 (de) | 1996-04-01 | 2009-12-10 | Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh & Co. Kg | MDCK-Zellen und Verfahren zur Vermehrung von Influenzaviren |
| US8188315B2 (en) * | 2004-04-02 | 2012-05-29 | Samsung Mobile Display Co., Ltd. | Organic light emitting device and flat panel display device comprising the same |
| KR100573137B1 (ko) * | 2004-04-02 | 2006-04-24 | 삼성에스디아이 주식회사 | 플루오렌계 화합물 및 이를 이용한 유기 전계 발광 소자 |
| KR100787425B1 (ko) * | 2004-11-29 | 2007-12-26 | 삼성에스디아이 주식회사 | 페닐카바졸계 화합물 및 이를 이용한 유기 전계 발광 소자 |
| KR100669716B1 (ko) * | 2004-07-14 | 2007-01-16 | 삼성에스디아이 주식회사 | 페닐카르바졸 화합물 및 이를 이용한 유기 전계 발광 소자 |
| JP4184332B2 (ja) * | 2004-11-22 | 2008-11-19 | 本田技研工業株式会社 | 可変気筒式内燃機関の制御装置 |
-
1998
- 1998-12-17 IL IL13673698A patent/IL136736A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-12-17 PT PT98966693T patent/PT1060241E/pt unknown
- 1998-12-17 DE DE69837287T patent/DE69837287T3/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-17 HU HU0100538A patent/HUP0100538A3/hu not_active Application Discontinuation
- 1998-12-17 AT AT07103139T patent/ATE507284T1/de active
- 1998-12-17 UA UA2000074455A patent/UA72732C2/uk unknown
- 1998-12-17 CZ CZ20002343A patent/CZ299719B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-12-17 ES ES98966693T patent/ES2281148T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-17 CA CA2316739A patent/CA2316739C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-12-17 KR KR1020007007068A patent/KR100683429B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-12-17 SK SK965-2000A patent/SK285971B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1998-12-17 DK DK07103139.7T patent/DK1801201T3/da active
- 1998-12-17 TR TR2000/01960T patent/TR200001960T2/xx unknown
- 1998-12-17 ID IDW20001431A patent/ID26784A/id unknown
- 1998-12-17 PL PL98341401A patent/PL196042B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1998-12-17 PT PT07103139T patent/PT1801201E/pt unknown
- 1998-12-17 AU AU24179/99A patent/AU758209B2/en not_active Ceased
- 1998-12-17 AT AT98966693T patent/ATE356197T1/de active
- 1998-12-17 EP EP07103139A patent/EP1801201B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-17 WO PCT/EP1998/008522 patent/WO1999033955A1/en active IP Right Grant
- 1998-12-17 RU RU2000119783/13A patent/RU2230784C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-12-17 BR BR9814490-1A patent/BR9814490A/pt not_active IP Right Cessation
- 1998-12-17 JP JP2000526613A patent/JP4478328B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1998-12-17 DE DE69842245T patent/DE69842245D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-17 ES ES07103139T patent/ES2365631T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-17 DK DK98966693.8T patent/DK1060241T4/da active
- 1998-12-17 NZ NZ505371A patent/NZ505371A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-12-17 CN CNB988126354A patent/CN1185339C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-12-17 EP EP98966693A patent/EP1060241B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2000
- 2000-06-21 NO NO20003215A patent/NO329385B1/no not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-03-06 HK HK01101591A patent/HK1030628A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-01-18 US US11/654,556 patent/US20070148753A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Schimmer | [52] Adrenocortical Y1 cells | |
| AT407255B (de) | Rekombinanter zellklon mit erhöhter stabilität in serum- und proteinfreiem medium und verfahren zur gewinnung des stabilen zellklons | |
| CN1970080A (zh) | 用悬浮的Vero细胞生产病毒疫苗的方法 | |
| US20070148753A1 (en) | Preparation of cells for production of biologicals | |
| CN102782121A (zh) | 用于培养贴壁细胞的方法 | |
| JP2003506077A (ja) | 組換え安定細胞クローン、その産生およびその使用 | |
| CN102453700A (zh) | 悬浮培养mdck细胞及利用其生产病毒疫苗的方法 | |
| Bhatia et al. | Introduction to animal tissue culture science | |
| CN109207422B (zh) | 一种欧洲鳗鲡肾脏细胞系ek及其应用 | |
| CN102453699A (zh) | 悬浮培养敏感细胞及利用其生产蓝耳病疫苗的方法 | |
| CN112608947B (zh) | 一种永生化人皮脂腺细胞系的构建方法及其应用 | |
| CN102453698A (zh) | 悬浮培养传代细胞及利用其生产猪瘟疫苗的方法 | |
| CN102453697A (zh) | 悬浮培养Vero细胞及利用其生产病毒疫苗的方法 | |
| Shapiro et al. | Growth of Heliothis zea (Lepidoptera: Noctuidae) cells adapted to various culture media | |
| CN106967686B (zh) | 软骨细胞体外端粒延长增殖培养的方法及人源组织工程化再生软骨 | |
| MXPA00006339A (en) | Preparation of cells for production of biologicals | |
| JP6097725B2 (ja) | 組換え安定細胞クローン、その産生およびその使用 | |
| CN116948975A (zh) | Ifnar1基因敲除的mdck细胞株及其构建方法和应用 | |
| JP2011004754A (ja) | 組換え安定細胞クローン、その産生およびその使用 | |
| CN1563361A (zh) | 成年关中奶山羊皮肤表皮干细胞系的建立 | |
| JP2016178932A (ja) | 組換え安定細胞クローン、その産生およびその使用 | |
| JP2010099093A (ja) | 組換え安定細胞クローン、その産生およびその使用 | |
| TW200540271A (en) | A method for cultivating primordial germ cells of fowl, a method for preparing the culture medium and products thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| CHAD | Change of the owner's name or address (par. 44 patent law, par. patentforskriften) |
Owner name: ABBOTT BIOLOGICALS BV, NL |
|
| MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |