RU2230784C2 - Способ получения клеток млекопитающих для использования в производстве вирусов - Google Patents
Способ получения клеток млекопитающих для использования в производстве вирусов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2230784C2 RU2230784C2 RU2000119783/13A RU2000119783A RU2230784C2 RU 2230784 C2 RU2230784 C2 RU 2230784C2 RU 2000119783/13 A RU2000119783/13 A RU 2000119783/13A RU 2000119783 A RU2000119783 A RU 2000119783A RU 2230784 C2 RU2230784 C2 RU 2230784C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cells
- production
- series
- cell
- bioreactor
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M3/00—Tissue, human, animal or plant cell, or virus culture apparatus
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Virology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в производстве вирусов. Способ осуществляют в виде повторяющегося прерывистого процесса. Прикрепленные к субстрату клетки млекопитающих культивируют до достижения желательного объема предпроизводственной серии. В ходе процесса приблизительно 80-90% клеток из предпроизводственной серии используют для получения по крайней мере одной производственной серии, а оставшиеся приблизительно 10-20% клеток предпроизводственной серии используют как посев для получения по крайней мере одной последующей предпроизводственной серии. Изобретение позволяет значительно ускорить процедуру получения клеток для производства биопродуктов (вирусов). 3 з.п. ф-лы, 1 ил., 3 табл.
Description
Данное изобретение имеет отношение к методу получения клеток для использования в производстве биопродуктов.
Для производства биопродуктов, например, на клеточных линиях, необходимо получение больших количеств клеток с использованием методик постепенного увеличения в биореакторах.
В патенте США №5017490 описана такая методика постепенного увеличения, которая, в частности, обладает преимуществом низкого риска заражения культуры при пассаже. Однако этот метод неприемлем для якорных клеток (т.е. не годится для клеток, которые растут только после фиксации на субстрате) или клеток, растущих в толще субстрата (например, на пористых носителях).
В патенте США №4644912 описан метод получения якорных клеток для производства биологических продуктов (например, вирусов), начиная с рабочего клеточного посева с последующим пассированием в биореакторах последовательно возрастающих объемов: 1, 5, 25 и 150 л и заканчивая 1000-литровым биореактором или несколькими 150-литровыми биореакторами. В период между такими пассажами клетки освобождают от носителя при помощи разбавленного раствора протеазы. На последнем пассаже осуществляется заражение вирусом.
Принимая длительность среднего клеточного цикла равной приблизительно 20-24 ч, интервал между пассажами может составлять около 3-5 дней. Поэтому, для того чтобы получить значительные количества культивируемых клеток из рабочего клеточного банка производителя (РКБП), метод постепенного увеличения клеточной популяции может занять несколько недель, в зависимости от конечного объема биореактора.
В вышеупомянутых методах получения клеток каждая конечная популяция клеток получается из РКБП. При производстве больших количеств биологических продуктов появится необходимость использования нескольких параллельных культивируемых клеточных линий при наибольших объемах реактора. Такая процедура отнимает много времени и требует значительного количества биореакторов как для получения клеток, так и для производства биопродуктов.
Цель данного изобретения - обеспечение значительно более быстрого получения клеток для производства биопродуктов.
Соответственно, данное изобретение относится к методу получения клеток для использования в производстве биопродуктов путем культивирования клеток до желаемого клеточного объема предпроизводственной серии, где в результате повторяющегося прерывистого процесса:
а) часть клеток из предпроизводственной серии используется для получения по крайней мере одной производственной серии, и
б) оставшаяся часть клеток предпроизводственной серии используется в качестве посева для получения по крайней мере одной последующей предпроизводственной серии.
Более конкретно, данное изобретение относится к методу получения клеток для использования в производстве биопродуктов путем культивирования клеток до желаемого клеточного объема предпроизводственной серии, где в результате повторяющегося прерывистого процесса:
а) часть клеток из предпроизводственной серии переносится для использования в получении по крайней мере одной производственной серии, и
б) оставшаяся часть клеток предпроизводственной серии переносится для использования в качестве посева для получения по крайней мере одной последующей предпроизводственной серии.
В предпочтительном воплощении данного изобретения первая предпроизводственная серия готовится из рабочего посева в результате по крайней мере одного пассажа.
В другом предпочтительном воплощении данного изобретения получаемые клетки являются якорными. В этом случае, как правило, необходимо, чтобы клетки росли на субстрате. Желательно добавление дополнительного количества субстрата в ходе повторяющегося процесса каждый раз, когда часть серии используется для получения новой серии. В предпочтительном воплощении, каждый раз перед добавлением субстрата по крайней мере часть клеток впервые отделяют от первоначального субстрата.
В данном изобретении термин “производственная серия” обозначает клеточную культуру, которая используется для производства биопродуктов.
В данном изобретении термин “предпроизводственная серия” обозначает клеточную культуру, которая используется в ходе процесса согласно данному изобретению для получения по крайней мере одной производственной серии (согласно определению, которое приведено выше) и одной последующей предпроизводственной серии.
В данном изобретении термин “биопродукт” обозначает любое вещество или организм, который может быть получен на клеточной культуре. Примером “биопродукта” служат вирусы или белки, такие как ферменты.
В данном изобретении термин “рабочий посев” обозначает некоторое количество определенного типа клеток известного происхождения сохраняемого для использования в качестве посева, из которого будут получены все культуры того же самого типа клеток.
В данном изобретении термин “якорные клетки” обозначает клетки, для эффективного роста и/или деления которых необходимо прикрепление к субстрату в соответствии с приведенным описанием.
В данном изобретении термин “субстрат” обозначает любое определенное вещество, пригодное для прикрепления клеток.
В данном изобретении термин “пассаж” обозначает последовательность действий для роста и размножения клеток, включающую по крайней мере перенос нужного количества среды культивирования в производственную емкость, инкубирование емкости в условиях, обеспечивающих рост и размножение клеток в течение времени, достаточного для эффективного роста и размножения данного типа клеток. Необязательно, пассаж может включать отделение клеток со среды культивирования и/или с субстрата через промежуток времени, достаточный для эффективного роста и размножения клеток.
Для специалиста очевидно, что метод данного изобретения значительно отличается от известных методов, согласно которым клетки продуцируются в ходе непрерывного процесса, в отличие от данного прерывистого процесса. Согласно патентным публикациям ЕРО 417532 и WО 89/08701, непрерывные системы культивирования могут также использоваться для производства вирусов. Сначала клетки растят в первом биореакторе, затем, по достижении определенной плотности, клетки из указанного первого реактора постоянно переносят во второй биореактор. В этом втором биореакторе на этих клетках растят вирусы с последующим постоянным удалением данных вирусов и этого второго биореактора.
Основной рабочий метод данного изобретения заключается в использовании материнского биореактора, из которого клетки переносят в производственный(е) биореактор(ы). В случае если клетки являются якорными, предпочтительно, чтобы они снимались с субстрата при каждом пассаже.
Для этой цели была разработана методика трипсинизации в больших биореакторах. Клетки, используемые в производстве, определяются согласно специфическому характерному номеру пассажа для так называемого обширного банка клеток (ОБК). Описанный метод обеспечивает высокую производительность, поскольку период постепенного увеличения клеточной популяции из рабочего клеточного посева (РКП) может быть значительно укорочен и требуется значительно меньшее количество биореактора, так как отпадает необходимость ведения параллельных линий продуцентов.
На чертеже представлены различные воплощения данного изобретения.
В предпочтительном воплощении клетки растят из одной ампулы РКБП до уровня первой предпроизводственной серии с использованием одного или более пассажей. Объем биореактора, используемого для предпроизводственной серии, может варьировать от нескольких литров рабочего объема до нескольких сотен литров. Затем, часть, например, 10-20% полученных таким образом клеток (например, пассаж X) используется для повторного внесения в биореактор для получения последующей предпроизводственной серии (которая представляет собой пассаж номер Х+1), в то время как основное количество клеток (пассаж Х или Х+1) переносят в реактор большего объема для того, чтобы непосредственно начать производство или сначала “внести в него” с последующим началом производства.
Известно, что при классическом производстве клеточных линий количество удвоений клеток, полученных из РКБП, к моменту сбора клеток ограничено определенными пределами. Максимальное допустимое число генераций изначально устанавливается в данной системе производства.
При использовании метода данного изобретения максимальное число клеточных пассажей может быть задано ОБК. Отсюда, число производственных пассажей (число клеточных пассажей используемое до производства биологического продукта) становится неуместным в пределах, установленных ОБК. Как следствие, максимальное число пассажей ограничивается технологическими инструкциями. В результате, определенная серия произведенных биопродуктов является конечным продуктом одного цикла постепенного увеличения клеточной популяции.
Для того чтобы убедиться в том, что клетки на стадии ОБК в ходе производства аналогичны клеткам исходного клеточного банка (ИКБ), необходимо провести специальное исследование в отношении ростовых параметров, отсутствия побочных, дополнительных и эндогенных веществ на различных стадиях, а также кариологический изоферментный анализ и т.д. После того как ОБК полностью охарактеризован, можно получить продукт с клетками при любом номере пассажа между ИКБ и ОБК, поскольку можно утверждать, что клетки остались неизменными в ходе пассирования. В результате, тестирование РКБП можно свести к проверке стерильности. Это является специфическим преимуществом метода данного изобретения.
При установленном максимальном числе пассажей можно использовать клетки на любой стадии в пределах этого числа. Отсюда, для того чтобы еще более уменьшить время, необходимое для увеличения клеточной популяции из РКБП для стадии производственного биореактора, было бы полезно сформировать стартовую популяцию клеток. Это можно осуществить, например, одним из следующих путей:
Клетки можно оставить на определенном номере пассажа в течение более продолжительного периода при комнатной температуре (17-32°С) и затем “оживлены” до логарифмического роста путем повышения температуры и замены культуральной среды, или клетки могут быть заморожены (темп.< -80°С) и затем разморожены перед перенесением в биореактор заранее определенного объема, при этом значительно укорачивается период постепенного увеличения клеточной популяции.
Метод согласно данному изобретению применим для культур клеток животных, в частности, для якорных клеток. Подходящими типами клеток являются, например, клетки хомяка (СНО, ВНК-1), обезьян (Vero), быков (MDBK), собак (MDCK), людей (СаСо, А431) или цыплят (CEF).
В данном изобретении в качестве биореактора может использоваться один или несколько, например, ферментеров с перемешиванием, ферментеров с фиксированной подложкой ферментеров с жидкой (расплавленной) подложкой, ферментеров с аэрированием или реакторов с полыми волокнами.
Клетки вышеупомянутых типов могут, а иногда и требуют, культивирования на твердой подложке, таком как микро- или макроноситель в суспензии, например, на твердой подложке, жидкой подложке или суспензии, или таких как полые волокна. Клетки могут также культивироваться в толще носителя (например, в пористом носителе).
При использовании метода данного изобретения, особенно при использовании твердой подложки, необходимо высвобождать клетки с такой твердой подложки. Это можно осуществить с помощью любого метода снятия клеток с твердой подложки. Преимущество заключается в том, что для этой цели можно применить раствор протеолитического фермента. Необязательно, когда энзиматическому высвобождению предшествует один или более подготовительных этапов, например, обработка клеток ЗФР и/или ЭДТА с тем, чтобы повысить протеолитическую эффективность, и/или для того, чтобы уменьшить необходимое количество протеолитического фермента.
Пример 1
Снятие клеток с их отделением от носителя перед переносом на следующий биореактор
Якорные клетки линии MDCK (Madin Darby Canin Kidney) (клетки почки собаки) культивировали при 37°С на микроносителе Cytodex-3 (Pharmacia, Упсала, Швеция) (5 г носителя/литр) в биореакторе с перемешиванием, объемом 4 л (“материнский биореактор”). Использовали ростовую среду EpiSerf (Life Technologies, Пэсли, Шотландия). Клетки растили до максимума 5×106 клеток/мл культуры.
Клетки снимали с носителя трипсинизацией, используя раствор трипсин-ЭДТА (Life Technologies, Пэсли, Шотландия).
После оседания частиц носителя, 80% снятых клеток переносили в 3 других биореактора такого же размера. Во все эти “производственные” биореакторы был заранее внесен носитель (клеточный субстрат). В течение некоторого времени клетки “заселяли” носитель, после чего их использовали для производства в данных производственных биореакторах.
Оставшиеся в “материнском биореакторе” клетки заселяли оставшиеся носители Cytodex-3, после чего их культивировали до желательной клеточной плотности.
Пример 2
Снятие клеток без отделения от носителя перед переносом в следующий биореактор
Клетки культивировали, как описано в Примере 1, но после трипсинизации 80% снятых клеток вместе с носителем переносили в 3 производственных биореактора. Кроме того, подходящие носители добавляли во все биореакторы.
Пример 3
Снятие клеток без отделения от носителя после переноса в другой биореактор
Клетки культивировали, как описано в Примере 1, но 80% слипшихся клеток вносили в биореактор такого же размера, который затем использовали непосредственно для получения продукта.
Оставшиеся в материнском ферментере клетки на микроносителе снимали трипсинизацией, затем добавляли новые носители и клетки вновь заселялись на субстрате.
Пример 4
Запуск из замороженных клеток
В данном эксперименте часть культуры использовали для пополнения клеточной популяции в материнском ферментере и в нескольких дочерних ферментерах, а другую часть клеток замораживали.
Замороженные клетки (общее количество 14,4×108 клеток) вносили в исходную среду в материнском ферментере объемом 3 л с носителем Cytodex (5 г/л) в среде EpiSerf и затем инкубировали при температуре 37°С. Остаточные криоконсерванты удаляли сменой среды в первый день культивирования.
На второй день проводили трипсинизацию, 50% клеток замораживали, а оставшиеся клетки вносили в следующий ферментер с микроносителями.
Из таблицы 1 видно, что клетки продолжают расти с нормальной скоростью в течение второго и третьего дня.
На 4 день содержимое материнского ферментера снимали трипсином и переносили на новые микроносители (10 г/л) в двух других ферментерах, следующих за материнским ферментером.
На 5 день эффективность посева составила около 85%.
Пример 5
Перенос из материнского ферментера малого объема в производственный ферментер большого объема
Клеточную популяцию доводили до больших объемов в ферментерах объемом 65 и 550 л (рабочий объем 50 и 250 л, соответственно), используя плотность микроносителя Cytodex в концентрации 5 г/л.
Как видно из таблицы 2, 90% всех клеток переносят в ферментер большого объема из ферментера объемом 50 л, в котором концентрация клеток составляет 800000 клеток/мл, из них жизнеспособными оказались 69%.
Аналогичный результат был получен в материнском ферментере объемом 50 л: приблизительно 69% клеток, используемых для увеличения популяции, были жизнеспособны.
Использовали следующую методику:
В день 0 культивирования носителям позволяли осесть в культуру объемом 50 л, после чего супернатант (куль туральную среду) удаляли и заменяли на ЗФР. Содержимое ферментера перемешивали в течение 5-15 мин. Удаляли супернатант после повторного оседания носителей. При необходимости этот этап может быть повторен.
На следующем этапе использовали ЗФР/ЭДТА (0,4 г ЭДТА/литр ЗФР). Культуру снова перемешивали в течение 5-15 мин, затем дожидались оседания носителя, удаляли супернатант, и этап с использованием ЗФР/ЭДТА повторяли до тех пор, пока клетки не округлялись и были готовы для снятия трипсином.
Затем к ЗФР/ЭДТА добавляли трипсин (конечная концентрация 0,025%) и проводили инкубацию в течение 5-15 мин. После чего переносили либо супернатант с клетками (после осаждения “голых” носителей) (как в примере 9), либо смесь клеток и носителей (80% от общей смеси).
После переноса клеток в ферментер объемом 550 л, оставшиеся клетки (т.е. 10% жизнеспособных клеток) заселяли носители, которые все еще находились в ферментере (50 л) после его заполнения культуральной средой.
Приблизительно 70% клеток были жизнеспособны.
Пример 6
Аналогичен примеру 5, но 80% культуры клеток, связанных с носителем, переносили из материнского биореактора в производственный биореактор. Получение начинали после добавления вируса.
Оставшиеся 20% клеток и носителей в материнском биореакторе снимали трипсинизацией; при добавлении нового субстрата в материнский биореактор они заселяли материнский биореактор, в то время как получение биопродукта протекало в физически отделенном производственном биореакторе.
Пример 7
Культура большого объема, полученная из замороженных клеток
Замороженные клетки оттаивали и вносили в 10-литровый (рабочий объем) ферментер (концентрация носителя Cytodex 5 г/л, культуральная среда EpiSerf), плотность внесения составила 1×106 клеток/мл. После прикрепления клеток заменяли культуральную среду с тем, чтобы удалить остаточные криоконсерванты.
После первого дня культивирования, количество жизнеспособных клеток прикрепленных к носителю, составило 0,45×106 клеток/мл, из этих клеток начался рост популяции. При плотности 2,8×106 клеток/мл клетки снимали с носителя трипсинизацией и 80% переносили в ферментере рабочего объема 50 л (концентрация носителя - 5 г/л).
Как видно из таблицы 3, на первый день количество жизнеспособных клеток после замораживания клеток составило приблизительно 45%.
Жизнеспособность от общего количества перенесенных клеток после трипсинизации составила 71,4%. 
Claims (4)
1. Способ получения клеток млекопитающих для использования в производстве вирусов путем культивирования клеток млекопитающих, прикрепленных к субстрату, до достижения желательного объема предпроизводственной серии, когда в ходе повторяющегося прерывистого процесса а) приблизительно 80-90% клеток из предпроизводственной серии используется для получения по крайней мере одной производственной серии, и б) приблизительно 10-20% клеток предпроизводственной серии используется как посев для получения по крайней мере одной последующей предпроизводственной серии.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в ходе повторяющегося прерывистого процесса а) приблизительно 80-90% клеток из предпроизводственной серии переносится для использования в получении по крайней мере одной производственной серии, и б) приблизительно 10-20% клеток предпроизводственной серии переносится для использования в качестве посева для получения по крайней мере одной последующей предпроизводственной серии.
3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что первая предпроизводственная серия получена из рабочего посева в результате по крайней мере одного пассажа.
4. Способ по п.2, отличающийся тем, что перед каждым переносом клетки отделяют от их субстрата.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP97204110 | 1997-12-24 | ||
| EP97204110.7 | 1997-12-24 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2000119783A RU2000119783A (ru) | 2002-09-10 |
| RU2230784C2 true RU2230784C2 (ru) | 2004-06-20 |
Family
ID=8229133
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2000119783/13A RU2230784C2 (ru) | 1997-12-24 | 1998-12-17 | Способ получения клеток млекопитающих для использования в производстве вирусов |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20070148753A1 (ru) |
| EP (2) | EP1801201B1 (ru) |
| JP (1) | JP4478328B2 (ru) |
| KR (1) | KR100683429B1 (ru) |
| CN (1) | CN1185339C (ru) |
| AT (2) | ATE507284T1 (ru) |
| AU (1) | AU758209B2 (ru) |
| BR (1) | BR9814490A (ru) |
| CA (1) | CA2316739C (ru) |
| CZ (1) | CZ299719B6 (ru) |
| DE (2) | DE69837287T3 (ru) |
| DK (2) | DK1801201T3 (ru) |
| ES (2) | ES2281148T5 (ru) |
| HK (1) | HK1030628A1 (ru) |
| HU (1) | HUP0100538A3 (ru) |
| ID (1) | ID26784A (ru) |
| IL (1) | IL136736A (ru) |
| NO (1) | NO329385B1 (ru) |
| NZ (1) | NZ505371A (ru) |
| PL (1) | PL196042B1 (ru) |
| PT (2) | PT1060241E (ru) |
| RU (1) | RU2230784C2 (ru) |
| SK (1) | SK285971B6 (ru) |
| TR (1) | TR200001960T2 (ru) |
| UA (1) | UA72732C2 (ru) |
| WO (1) | WO1999033955A1 (ru) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011077035A1 (fr) | 2009-12-23 | 2011-06-30 | Sanofi Pasteur | Procede de culture de cellules adherentes |
| WO2019139891A1 (en) | 2018-01-09 | 2019-07-18 | Synthetic Biologics, Inc. | Alkaline phosphatase agents for treatment of neurodevelopmental disorders |
| EP3773686B1 (en) | 2018-03-20 | 2023-06-07 | Theriva Biologics, Inc. | Alkaline phosphatase agents for treatment of radiation disorders |
| EP3768302A4 (en) | 2018-03-20 | 2021-12-15 | Synthetic Biologics, Inc. | INTESTINAL ALKALINE PHOSPHATASE FORMULATIONS |
| US20190367858A1 (en) * | 2018-06-01 | 2019-12-05 | Lonza Ltd. | Midscale Model For Organic Growth and Phasing |
| US20220259554A1 (en) * | 2019-07-16 | 2022-08-18 | Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. | Cell culture method and application thereof based on high-density and continuous inoculation |
| EP4339274A1 (en) | 2022-09-13 | 2024-03-20 | Sartorius Stedim Biotech GmbH | Method for operating a bioprocess installation for production of a bioproduct |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60151458A (ja) | 1984-01-20 | 1985-08-09 | Nippon Piston Ring Co Ltd | カムシヤフト |
| US4664912A (en) * | 1984-10-01 | 1987-05-12 | Wiktor Tadeusz J | Process for the large scale production of rabies vaccine |
| DE3833925A1 (de) * | 1988-03-11 | 1989-09-21 | Inst Angewandte Biotechnologie | Verfahren und herstellung von virus und viralem antigen und vorrichtung hierzu |
| US5017490A (en) | 1989-03-10 | 1991-05-21 | Baxter International Inc. | Method for in vitro reproduction and growth of cells in culture medium |
| DE3930140A1 (de) * | 1989-09-09 | 1991-03-21 | Bayer Ag | Verfahren zur herstellung von biologischen materialien in zellkulturen und vorrichtungen |
| WO1992010564A1 (en) * | 1990-12-13 | 1992-06-25 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, U.S. Department Of Commerce | Sustained and continuous production of high titers of recombinant viral vectors and transduced target cells for use in gene therapy |
| DE19612966B4 (de) | 1996-04-01 | 2009-12-10 | Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh & Co. Kg | MDCK-Zellen und Verfahren zur Vermehrung von Influenzaviren |
| US8188315B2 (en) * | 2004-04-02 | 2012-05-29 | Samsung Mobile Display Co., Ltd. | Organic light emitting device and flat panel display device comprising the same |
| KR100573137B1 (ko) * | 2004-04-02 | 2006-04-24 | 삼성에스디아이 주식회사 | 플루오렌계 화합물 및 이를 이용한 유기 전계 발광 소자 |
| KR100787425B1 (ko) * | 2004-11-29 | 2007-12-26 | 삼성에스디아이 주식회사 | 페닐카바졸계 화합물 및 이를 이용한 유기 전계 발광 소자 |
| KR100669716B1 (ko) * | 2004-07-14 | 2007-01-16 | 삼성에스디아이 주식회사 | 페닐카르바졸 화합물 및 이를 이용한 유기 전계 발광 소자 |
| JP4184332B2 (ja) * | 2004-11-22 | 2008-11-19 | 本田技研工業株式会社 | 可変気筒式内燃機関の制御装置 |
-
1998
- 1998-12-17 IL IL13673698A patent/IL136736A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-12-17 PT PT98966693T patent/PT1060241E/pt unknown
- 1998-12-17 DE DE69837287T patent/DE69837287T3/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-17 HU HU0100538A patent/HUP0100538A3/hu not_active Application Discontinuation
- 1998-12-17 AT AT07103139T patent/ATE507284T1/de active
- 1998-12-17 UA UA2000074455A patent/UA72732C2/uk unknown
- 1998-12-17 CZ CZ20002343A patent/CZ299719B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-12-17 ES ES98966693T patent/ES2281148T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-17 CA CA2316739A patent/CA2316739C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-12-17 KR KR1020007007068A patent/KR100683429B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-12-17 SK SK965-2000A patent/SK285971B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1998-12-17 DK DK07103139.7T patent/DK1801201T3/da active
- 1998-12-17 TR TR2000/01960T patent/TR200001960T2/xx unknown
- 1998-12-17 ID IDW20001431A patent/ID26784A/id unknown
- 1998-12-17 PL PL98341401A patent/PL196042B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1998-12-17 PT PT07103139T patent/PT1801201E/pt unknown
- 1998-12-17 AU AU24179/99A patent/AU758209B2/en not_active Ceased
- 1998-12-17 AT AT98966693T patent/ATE356197T1/de active
- 1998-12-17 EP EP07103139A patent/EP1801201B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-17 WO PCT/EP1998/008522 patent/WO1999033955A1/en active IP Right Grant
- 1998-12-17 RU RU2000119783/13A patent/RU2230784C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-12-17 BR BR9814490-1A patent/BR9814490A/pt not_active IP Right Cessation
- 1998-12-17 JP JP2000526613A patent/JP4478328B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1998-12-17 DE DE69842245T patent/DE69842245D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-17 ES ES07103139T patent/ES2365631T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-17 DK DK98966693.8T patent/DK1060241T4/da active
- 1998-12-17 NZ NZ505371A patent/NZ505371A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-12-17 CN CNB988126354A patent/CN1185339C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-12-17 EP EP98966693A patent/EP1060241B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2000
- 2000-06-21 NO NO20003215A patent/NO329385B1/no not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-03-06 HK HK01101591A patent/HK1030628A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-01-18 US US11/654,556 patent/US20070148753A1/en not_active Abandoned
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ФРЕШНИ Р. и др. Культура животных клеток. Методы. - М.: Мир, 1989, с.81. ПЕРТ С. ДЖ. Основы культивирования микроорганизмов и клеток. - М.: Мир, 1978, с.249. ЛЕЖНЕВ Э.И. и др. Управляемое культивирование клеток. - М.: Наука, 1974, с.5. МЕЖИНЯ Г.Р. и др. Теория и практика непрерывного культивирования микроорганизмов. - М., 1974, с.28-31. * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EA022219B1 (ru) | Способ получения полипептида или вируса, представляющих интерес, в непрерывной клеточной культуре | |
| US4024020A (en) | Method of cell culture on polyacrylonitrile surface | |
| Wang et al. | Bead-to-bead transfer of Vero cells in microcarrier culture | |
| US20070148753A1 (en) | Preparation of cells for production of biologicals | |
| KR101835100B1 (ko) | 부착성 세포를 배양하는 방법 | |
| CN1250712C (zh) | 哺乳动物配子和胚胎培养基添加剂及其使用方法 | |
| JP2003506077A (ja) | 組換え安定細胞クローン、その産生およびその使用 | |
| CN115261302B (zh) | 一种基质胶及其制备方法和应用 | |
| CN107858322B (zh) | 一种海马原代细胞培养体系的建立方法 | |
| CN110387058A (zh) | 一种促进细胞在水凝胶上面正常生长的方法 | |
| CN114276986A (zh) | 一种分离纯化水牛原代成肌细胞的方法及其应用 | |
| JPH07313151A (ja) | 多孔質担体を用いた動物細胞の逐次培養方法 | |
| CN1847393A (zh) | 添加剂，制剂和培养基 | |
| CN117511860A (zh) | 一种利用生物反应器大规模连续流培养细胞的方法和应用 | |
| Lee et al. | Monoclonal antibody production using free-suspended and entrapped hybridoma cells | |
| CN113913382A (zh) | 一种金钱鱼脑细胞的体外培养方法 | |
| CN115948334A (zh) | 一株鳜鱼脑细胞克隆细胞株及其应用 | |
| MXPA00006339A (en) | Preparation of cells for production of biologicals | |
| Yu et al. | Reproduction of Strain Sof'in Forest-Spring Encephalitis in Vero Cell Line Cultured on Microcarrier under Pseudo-submerged Conditions | |
| Kennard et al. | Harvesting GPI-Anchored Proteins From CHO Cells |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC4A | Invention patent assignment |
Effective date: 20100720 |
|
| PD4A | Correction of name of patent owner | ||
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20131218 |