SK285971B6 - Spôsob prípravy buniek na výrobu biologických materiálov - Google Patents
Spôsob prípravy buniek na výrobu biologických materiálov Download PDFInfo
- Publication number
- SK285971B6 SK285971B6 SK965-2000A SK9652000A SK285971B6 SK 285971 B6 SK285971 B6 SK 285971B6 SK 9652000 A SK9652000 A SK 9652000A SK 285971 B6 SK285971 B6 SK 285971B6
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- cells
- production
- cell
- batch
- bioreactor
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M3/00—Tissue, human, animal or plant cell, or virus culture apparatus
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
Spôsob prípravy buniek na použitie pri výrobe biologických materiálov pomocou kultivácie buniek až do požadovaného objemu buniek predprodukčnej dávky, keď sa po opakovanom diskontinuálnom procese: a)časť buniek predprodukčnej dávky použije na prípravu najmenej jednej produkčnej dávky a b) zostávajúca časť buniek predprodukčnej dávky sa použije ako inokulum na prípravu najmenej jednej ďalšej predprodukčnej dávky.
Description
Oblasť techniky
Predložený vynález sa týka spôsobu prípravy buniek na použitie pri výrobe biologických materiálov.
Doterajší stav techniky
Na výrobu biologických materiálov, napríklad bunkových kmeňov, je nevyhnutné nájsť spôsob prípravy veľkých množstiev buniek s použitím postupov zvyšovania množstva v bioreaktoroch.
US patent č. 5 017 490 opisuje taký spôsob zvyšovania množstva, ktorý poskytuje najmä výhodu malého nebezpečia prenosovej kontaminácie. Tento spôsob však nie je vhodný pre bunky závislé od zakotvenia (teda pre bunky, ktoré rastú, len keď sú zakotvené na substráte) alebo bunky usadené v substráte (napríklad v pórovitých nosičoch).
US patent č. 4 644 912 opisuje spôsob prípravy buniek závislých od zakotvenia na prípravu biologických materiálov (to jest vírusov) z inokula a následné pasážovanie uskutočňované pri následne sa zvyšujúcich objemoch bíoreaktorov 1 liter, 5 litrov, 25 litrov, 150 litrov a nakoniec buď v 1000 litrovom bioreaktore alebo vo veľkom počte 150 litrových bioreaktorov. Medzi všetkými týmito pasážovacími krokmi sa bunky uvoľnia z nosičov zriedeným roztokom proteázy. Pri poslednom pasážovaní sa uskutoční naočkovanie vírusom.
Berúc do úvahy priemerné časy bunkového cyklu, asi 20 až 24 hodín sa predpokladajú intervaly pasážovania asi každých 3 až 5 dní. Aby sa bunky z pracovnej banky buniek výrobcu (MWCS) rozšírili do dostatočne veľkého objemu kultúry, môže celý proces rastu trvať niekoľko týždňov v závislosti od konečného objemu bioreaktora.
Pri uvedených spôsoboch prípravy buniek sa každá konečná produkčná dávka musí pripravovať z pracovnej banky buniek výrobcu (MWCS). Na prípravu veľkého množstva biologického materiálu je nevyhnutné použiť niekoľko paralelných kultivačných línií až do najväčších objemov nádob. Tento výrobný postup je časovo veľmi náročný a vyžaduje prácu veľkého počtu bioreaktorov na prípravu buniek, ako aj na výrobu biologického materiálu.
Cieľom predloženého vynálezu je poskytnúť oveľa rýchlejší spôsob prípravy buniek na výrobu biologických materiálov.
Podstata vynálezu
Predložený vynález sa týka spôsobu prípravy buniek na použitie pri výrobe biologických materiálov pomocou kultivácie buniek až do požadovaného objemu buniek predprodukčnej dávky, keď sa pri opakovanom diskontinuálnom procese:
a) časť bunkovej predprodukčnej dávky použije na prípravu najmenej jednej produkčnej dávky, a
b) zostávajúca časť bunkovej predprodukčnej dávky použije ako inokulum na prípravu najmenej jednej ďalšej predprodukčnej dávky.
Presnejšie sa predložený vynález týka spôsobu prípravy buniek na použitie pri výrobe biologického materiálu pomocou kultivácie buniek až do požadovaného objemu buniek predprodukčnej dávky, keď sa pri opakovanom diskontinuálnom procese:
a) časť buniek predprodukčnej dávky prenesie na použitie pri príprave najmenej jednej produkčnej dávky, a
b) zostávajúca časť buniek predprodukčnej dávky pre nesie na použitie ako inokulum na prípravu najmenej jednej následnej predprodukčnej dávky.
Vo výhodnom uskutočnení podľa predloženého vynálezu sa prvá predprodukčná dávka pripraví z pracovného zásobného roztoku buniek pomocou najmenej jedného pasážovacieho kroku.
V ďalšom výhodnom uskutočnení podľa predloženého vynálezu sú pripravované bunky závislé od zakotvenia. V tomto prípade je všeobecne potrebné, aby sa bunky kultivovali na substráte. Je teda vhodné v priebehu opakovaného procesu vždy, keď sa použije časť dávky na prípravu novej dávky, pridať ďalšie množstvo substrátu. Vo výhodnom uskutočnení sa vždy pred pridaním substrátu aspoň časť buniek najskôr uvoľní z ich pôvodného substrátu.
Podľa predloženého vynálezu znamená termín „produkčná dávka“ kultúru buniek, ktorá sa použije na výrobu biologického materiálu.
Podľa predloženého vynálezu znamená termín „predprodukčná dávka“ kultúru buniek, ktorá sa použije pri spôsobe podľa predloženého vynálezu na prípravu najmenej jednej produkčnej dávky (ako je definovaná skôr) a jednej ďalšej predprodukčnej dávky.
Podľa predloženého vynálezu znamená termín „biologický materiál“ akúkoľvek látku alebo organizmus, ktorý sa môže vyrobiť z bunkovej kultúry. Príklady „biologických materiálov“ sú vírusy a proteíny, ako sú enzýmy.
Podľa predloženého vynálezu znamená termín „zásobný roztok inokulačných buniek“ množstvo určitého typu buniek definovaného pôvodu, skladovaných na použitie ako očkovacie médium, z ktorého sa odvodí celá kultúra rovnakého typu buniek.
Podľa predloženého vynálezu znamená termín „bunky závislé od zakotvenia“ bunky, ktoré pre svoj vlastný rast a/alebo rozmnožovanie potrebujú byť pripojené k substrátu, ktorý jc definovaný podľa vynálezu.
Podľa predloženého vynálezu znamená termín „substrát“ akúkoľvek látku vo forme častíc, vhodnú na pripojenie buniek.
Podľa predloženého vynálezu znamená termín „krok pasážovania“ postupnosť činností pri množení a výrobe buniek, zahŕňajúcu prinajmenšom prenos vhodného množstva buniek a vhodného množstva kultivačného média do produkčnej nádoby, inkubáciu nádoby pri podmienkach vhodných na rast a rozmnožovanie buniek na čas, ktorý je dostatočný na účinný rast a rozmnožovanie buniek. Krok pasážovania prípadne zahŕňa oddelenie buniek z kultivačného média a'alebo zo substrátu po čase, ktorý je dostatočný na účinný rast a rozmnožovanie buniek.
Odborníkom pracujúcim v tejto oblasti je zrejmé, že spôsob podľa predloženého vynálezu sa zásadne odlišuje od spôsobov známych podľa stavu techniky, keď sa bunky vyrábajú kontinuálnym spôsobom, skôr ako diskontinuálnym spôsobom podľa predloženého vynálezu. Podľa patentovej prihlášky EP 0417531 a WO 89/08701 sa môže kontinuálny kultivačný systém použiť tiež na výrobu vírusov. Bunky najskôr rastú v prvom bioreaktore a potom, ako sa dosiahne určitá hustota buniek, sa bunky kontinuálne naplnia z uvedeného prvého bioreaktora do druhého bioreaktora. V tomto druhom bioreaktore sa vírusy kultivujú na bunkách a potom sa vírusy kontinuálne odoberú z druhého bioreaktora.
Základným pracovným postupom podľa predloženého vynálezu je použitie materského bioreaktora, z ktorého sa plnia produkčné bioreaktory bunkami. Ak sú bunky závislé od zakotvenia, je po každom kroku pasážovania výhodne potrebné bunky oddeliť od ich substrátov.
Na tento cieľ sa vyvinul trypsinizačný postup vo veľ2 kých bioreaktoroch. Pri použití takzvanej rozšírenej banky buniek (ECB, „Extended Celí Bank“) sú vlastnosti produkčných buniek definované do špecifického a charakteristického počtu pasáží. Opísaný spôsob umožňuje vysoko výkonnú výrobu, pretože spôsob zväčšovania množstva z WCS (pracovná banka buniek) na produkčné bunky sa môže veľmi skrátiť aje potrebných oveľa menej bioreaktorov, pretože už nie sú potrebné paralelné výrobné línie.
Na obr. 1 sú zobrazené rôzne uskutočnenia podľa predloženého vynálezu.
Vo výhodnom uskutočnení sa bunky expandujú z jednej ampuly MWCS až na úroveň prvej predprodukčnej dávky prostredníctvom jedného alebo viacerých pasážovacích krokov. Veľkosť bioreaktora používaného na túto predprodukčnú dávku sa môže pohybovať od niekoľkých litrov pracovného objemu do niekoľkých stoviek litrov. Potom sa časť, napríklad 10 až 20 % takto expandovaných buniek (napríklad pasáž X), použije na repopuláciu bioreaktora na prípravu ďalšej predprodukčnej dávky (pasáž číslo X+l), zatiaľ čo sa objem buniek prenesie (pasáž X alebo X+l) do bioreaktora väčšej veľkosti, aby sa priamo začala výroba alebo aby sa najskôr populoval a potom sa začala výroba.
V klasických sériových produkčných líniách je počet zdvojení počtu buniek odvodených z MWCS vo chvíli zberu do určitej miery vopred známy. Maximálny možný počet generácií produkčného systému je nastavený na začiatku.
Pri spôsobe podľa predloženého vynálezu môže byť maximálny počet pasáži buniek definovaný pomocou ECB (rozšírená banka buniek). Počet produkčných pasáží (počet pasáží buniek použitých pred výrobou biologického produktu) je teda v medziach daných ECB irelevantný. V dôsledku toho by sa mal dodržať maximálny počet pasáží vzhľadom na regulačné obmedzenia. Výsledkom je, že príslušná dávka biologického materiálu je výsledným produktom jedného priameho procesu expanzie.
Aby sa mohlo overiť, či špecifikácie buniek v stupni ECB pri výrobe sú podobné MCB (kontrolná bunková banka), je potrebné vykonať špecifické hodnotenie s ohľadom na charakteristiky rastu, uvoľňovanie náhodilých, vonkajších aj vnútorných činidiel v rôznych krokoch, karyologickú izoenzýmovú analýzu a podobne. Keď je taká ECB úplne charakterizovaná, je možné vyrobiť produkt s bunkami pri akejkoľvek pasáži medzi MCB a ECB, pretože je možné predpokladať, že sa bunky neodlišili od svojich parametrov. Z toho vyplýva, že sa testy na MWCS môžu obmedziť na testovanie sterility. Toto je zvláštna výhoda spôsobu podľa predloženého vynálezu.
Pri maximálnom nastavenom počte pasáži je možné použiť bunky v akomkoľvek medzi stupni. Aby sa teda ďalej minimalizoval čas potrebný na expanziu buniek z MWCS do produkčného bioreaktora, môže byť výhodné umožniť hromadné spustenie bunkovej kultúry. Je to možné uskutočniť napríklad nasledujúcim spôsobom:
- bunky sa môžu zastaviť v určitom počte pasáží v priebehu dlhších intervalov pri teplote miestnosti (17 až 32 °C) a previesť do logaritmickej fázy rastu pomocou zvýšenia teploty a zmeny kultivačného média, alebo
- bunky sa môžu zmraziť (teplota menšia ako -80 °C) v určitom objeme a roztopiť pred prevedením do vopred stanoveného objemu bioreaktora, čím sa výrazne obmedzí nevyhnutný postup zväčšovania množstva.
Spôsob podľa predloženého vynálezu sa môže uskutočňovať so živočíšnymi bunkovými kultúrami a najmä s bunkami závislými od zakotvenia. Vhodnými typmi buniek sú napríklad bunky škrečkov (CHO, BHK-1), bunky myší (Vero), hovädzie bunky (MDBK), psie bunky (MDCK), ľudské bunky (CaCo, A431) alebo bunky hydiny (CEF).
Ako bioreaktor podľa predloženého vynálezu sa môže použiť jedna jednotka alebo viac jednotiek, napríklad miešaných fermentorov, fermentorov s pevným lôžkom, fermentorov s fluidným lôžkom, fermentorov s prevzdušňovaním alebo reaktorov s dutými vláknami.
Skôr uvedené bunky sa môžu, a niektoré by sa dokonca mali, kultivovať pri upevnení na pevný nosič, ako sú mikronosiče alebo makronosiče v suspenzii, napríklad v pevnom lôžku, fluidnom lôžku alebo v suspenzii, alebo ako sú duté vlákna. Bunky sa môžu tiež usadiť v nosiči (napríklad pórovitom nosiči).
Pri spôsobe podľa predloženého vynálezu, najmä keď sa použije pevný nosič, sa bunky uvoľňujú z tohto pevného nosiča. Uvoľnenie sa môže uskutočniť pomocou akéhokoľvek známeho spôsobu využiteľného na uvoľnenie buniek z pevného nosiča. Výhodne sa uvoľnenie môže uskutočniť pomocou roztoku proteolytického enzýmu. Prípadne sa pred týmto enzymatickým uvoľňovacím krokom môže uskutočniť jeden alebo viac upravovacích krokov, napríklad opracovaním PBS a/alebo EDTA, s cieľom zvýšiť proteolytickú účinnosť a/alebo s cieľom znížiť množstvo potrebného proteolytického enzýmu.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Uvoľnenie buniek a ich odstránenie z nosičov pred prevedením do ďalšieho bioreaktora
Bunky závislé od zakotvenia bunkového kmeňa MDCK sa kultivujú pri 37 °C na mikronosiči Cytodex-3 (Pharmacia Uppsala, Švédsko) (5 g nosiča/1) v miešanom štvorlitrovom reaktore („materský bioreaktor“). Rastovým médiom je EpiSerf (Life Technologies, Paisly, Škótsko). Rast pokračuje do maxima 5x106 buniek/ml kultúry.
Bunky sa uvoľnia z nosiča pomocou trypsinizácie v roztoku Trypsin-EDTA (Life Technologies, Paisly, Škótsko).
Po usadení nosiča sa 80 % uvoľnených buniek prevedie do 3 ďalších bioreaktorov podobnej veľkosti. Všetky tieto „produkčné“ bioreaktory obsahujú nosiče (bunkový substrát), ktoré sa do nich pridajú dopredu. Bunky sa nechajú repopulovať nosič a následne sa použijú na výrobu v týchto bioreaktoroch.
Zvyšok buniek v „materskom bioreaktore“ sa nechá repopulovať zostávajúci nosič Cytodex-3 a kultivujú sa do požadovanej hustoty buniek.
Príklad 2
Uvoľnenie buniek bez oddelenia nosičov pred prevedením do ďalšieho bioreaktora
Kultivácia buniek sa uskutočňuje rovnakým spôsobom, ako je opísané v príklade 1, ale po trypsinizácii sa 80 % uvoľnených buniek vrátane nosičov prevedie do troch produkčných bioreaktorov. Ďalej sa do všetkých bioreaktorov pridajú vhodné nosiče.
Príklad 3
Uvoľnenie buniek bez oddelenia od nosičov po prevedení do ďalšieho bioreaktora
Kultivácia buniek sa uskutočňuje rovnakým spôsobom, ako je opísané v príklade 1, ale 80 % stále zakotvených buniek sa prevedie do bioreaktora podobnej veľkosti, ktorý sa ďalej použije priamo na prípravu produktu.
Zostávajúce bunky na mikronosičoch v materskom fermentore sa potom uvoľnia pomocou trypsinizácie, po3 tom sa pridá ďalší nosič a bunky sa nechajú repopulovať substrát.
Príklad 4
Východiskovým materiálom sú zmrazené zásobné bunky
Pri tomto pokuse sa časť kultúry použije na opätovné dávkovanie materského fermentora a niektorých dcérskych fermentorov a časť kultúry sa použije na zmrazenie buniek do zásoby.
Zmrazené zásobné bunky (celkom 14,4 x 108 buniek) sa naočkujú do východiskovej kultúry v trojlitrovom materskom fermentore obsahujúcom 5 g Cytodexu na liter a médium EpiSerf a potom sa inkubujú pri 37 °C. Zostávajúce ochranné látky pri zmrazení sa odstránia pomocou výmeny média v dni 1.
V dni 2 sa uskutočni trypsinizácia, 50 % buniek sa zmrazí do zásoby a zostávajúce bunky sa inokulujú na mikronosiče v ďalšom fermentore.
Z tabuľky 1 je vidieť, že bunky medzi dňami 2 a 3 pokračujú v raste normálnou rýchlosťou.
V dni 4 sa obsah materského fermentora uvoľní trypsínom a vsadí sa na nové mikronosiče (10 g/1) v dvoch ďalších fermentoroch za materským fermentorom.
V dni 5 jc účinnosť vysiatia asi 85 %.
Tabuľka 1
| deň | 3 litrový mat. fermentor | 3 litrový fermentor | 3 litrový fermentor |
| buniek x 100000/ml | buniek x 100000/ml | buniek x 100000/ml | |
| 0 | NOD | ||
| 1 | 6,6 | ||
| 2 | 14 | ||
| 3 | 15,5 | ||
| 4 | 30 | ||
| 5 | 5,5 | 10 | 10 |
| účinnosť vysiatia | 85 % | 85 % | 85 % |
Príklad 5
Prevedenie z malého materského fermentora do veľkého produkčného fermentora
Bunky sa expandujú do veľkého meradla v 65 litrovom a 550 litrovom fermentore (pracovný objem 50 litrov a 250 litrov) s použitím hustoty mikronosiča 5 g Cytodexu na liter. Ako je vidieť z tabuľky 2, 90 % z celkového množstva buniek sa prevedie do veľkého fermentora z 50 litrového kultivačného fermentora s 800 000 bunkami/ml, z ktorých je 69 % životaschopných.
To isté sa pozorovalo v 50 litrovom materskom fermentore; asi 69 % rozmnožovacích buniek sa ukázalo byť životaschopných.
Postup je nasledujúci:
V dni 0 sa nosiče nechajú usadiť v 50 litroch kultúry, potom sa supernatant (kultivačné médium) odstráni a nahradí sa PBS. Obsah fermentora sa 5 až 15 minút trepe. Supematant sa po usadení nosiča oddelí. Tento krok sa môže v prípade potreby zopakovať.
Potom sa tento krok zopakuje s PBS/EDTA (0,4 g EDTA/liter PBS). Kultivačné médium sa znova trepe 5 až 15 minút, nosiče sa nechajú usadiť, supernatant sa odstráni a opakuje sa krok PBS/EDTA pokiaľ sa bunky nezaoblia a nie sú pripravené na uvoľnenie pomocou trypsínu.
Potom sa k PBS/EDTA pridá trypsín (0,025 % výslednej koncentrácie) a inkubuje sa 5 až 15 minút. Potom sa buď bunky obsahujúce supernatant (po usadení teraz „nahého“ nosiča) prenesú (ako v príklade 9) alebo sa prenesie zmes buniek plus nosičov (celkom 80 % celkovej zmesi).
Po prenose buniek do 550 litrového fermentora sa zvyšok buniek (10 % životaschopných buniek) nechá repopulovať nosič stále prítomný vo fermentore po opätovnom naplnení 50 litrového fermentora kultivačným médiom.
Zistilo sa, že asi 70 % buniek je životaschopných.
Tabuľka 2
| Deň | 50 litrov kultúry | 250 litrov kultúry |
| buniek x 100 000/ml | buniek x 100 000/ml | |
| 0 | 8 (400 x 108 buniek celkom) | 1,1 (275 x 10 s životaschopných buniek) |
| 1 | 0,8 | |
| 2 | 2,9 | |
| 3 | 3,4 | |
| 4 | 8,9 | |
| 5 | 18,0 |
Príklad 6
Zopakuje sa postup opísaný v príklade 5, ale 80 % kultúry buniek viazaných no nosič sa prenesie z materského bioreaktora do produkčného bioreaktora. Produkcia sa zaháji po pridaní vírusu.
% buniek a nosiča zostávajúceho v materskom bioreaktore sa trypsinizuje a uvoľní a po pridaní nového substrátu sa materský bioreaktor nechá repopulovať, zatiaľ čo vo fyzicky oddelenom produkčnom bioreaktore prebieha produkcia.
Príklad 7
Kultivácia vo veľkom množstve začaná zo zásobných zmrazených buniek
Zmrazené zásobné bunky sa roztopia a naočkujú sa do 10 litrového (pracovný objem) fermentora (hustota nosiča Cytodex 5 g/1; kultivačné médium Epi Šerí) pri očkovacej hustote 1 x 106 buniek/ml. Po pripojení sa kultivačné médium vymení, aby sa odstránili zvyšky činidiel ochraňujúcich pri zmrazení.
Po dni 1 je množstvo životaschopných buniek viazaných na nosiče 0,45xl06 buniek/ml, ktoré potom začínajú rásť. Pri hustote 2,8x106 buniek/ml sa bunky uvoľnia z nosičov pomocou trypsinizácie a 80 % sa prevedie do fermentora s pracovným objemom 50 litrov (nosiče 5 g/1).
Ako je možné vidieť z tabuľky 3 je v dni 1 množstvo životaschopných buniek po zmrazení zásobných buniek asi 45 %.
Z celkového množstva prenesených buniek je životaschopnosť po uvoľnení trypsinom 71,4 %.
Tabuľka 3
| deň | hustota buniek (x 10s/l) v: | |
| 10 litrovom fermentore | 50 litrovom fermentore | |
| 0 | 1,0 | |
| 1/, | 0,45 | |
| % | 1,3 | |
| 5 | 2,6 | |
| 6 | 2,8 (280 x 108 celkom) | |
| 6 | 0,6 (60 x 108 celkom) | 0,28 (140 x l()8 celkom) |
| 7 | 0,4 (200 x 108 celkom) |
Claims (6)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Spôsob prípravy buniek na použitie pri výrobe biologických materiálov pomocou kultivácie buniek až do požadovaného objemu buniek predprodukčnej dávky, v y 4 značujúci sa tým, že sa pri opakovanom diskontinuálnom procese:- časť buniek predprodukčnej dávky použije na prípravu najmenej jednej produkčnej dávky, a- zostávajúca časť buniek predprodukčnej dávky sa použije ako inokulum na prípravu najmenej jednej ďalšej predprodukčnej dávky.
- 2. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že sa pri opakovanom diskontinuálnom procese:a) časť buniek predprodukčnej dávky prenesie na použitie pri príprave najmenej jednej produkčnej dávky, ab) zostávajúca časť buniek predprodukčnej dávky sa prevedie na použitie ako inokulum na prípravu najmenej jednej ďalšej predprodukčnej dávky.
- 3. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 alebo 2, vyznačujúci sa tým, že prvá predprodukčná dávka sa pripraví z pracovného zásobníka buniek pomocou najmenej jedného pasážovacieho kroku.
- 4. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 3, vyznačujúci sa tým, že bunky sú bunky závislé od zakotvenia a pre svoj rast a/alebo rozmnožovanie potrebujú byť pripojené k substrátu.
- 5. Spôsob podľa nároku 2, vyznačujúci sa tým, že bunky sú bunky závislé od zakotvenia a pre svoj rast a/alebo rozmnožovanie potrebujú byť pripojené k substrátu, bunky sa pestujú na substráte a pred každým krokom prenosu sa bunky uvoľnia zo substrátu.
- 6. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 5, vyznačujúci sa tým, že príslušným biologickým materiálom je vírus.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP97204110 | 1997-12-24 | ||
| PCT/EP1998/008522 WO1999033955A1 (en) | 1997-12-24 | 1998-12-17 | Preparation of cells for production of biologicals |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK9652000A3 SK9652000A3 (en) | 2000-12-11 |
| SK285971B6 true SK285971B6 (sk) | 2007-12-06 |
Family
ID=8229133
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK965-2000A SK285971B6 (sk) | 1997-12-24 | 1998-12-17 | Spôsob prípravy buniek na výrobu biologických materiálov |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20070148753A1 (sk) |
| EP (2) | EP1801201B1 (sk) |
| JP (1) | JP4478328B2 (sk) |
| KR (1) | KR100683429B1 (sk) |
| CN (1) | CN1185339C (sk) |
| AT (2) | ATE507284T1 (sk) |
| AU (1) | AU758209B2 (sk) |
| BR (1) | BR9814490A (sk) |
| CA (1) | CA2316739C (sk) |
| CZ (1) | CZ299719B6 (sk) |
| DE (2) | DE69837287T3 (sk) |
| DK (2) | DK1801201T3 (sk) |
| ES (2) | ES2281148T5 (sk) |
| HK (1) | HK1030628A1 (sk) |
| HU (1) | HUP0100538A3 (sk) |
| ID (1) | ID26784A (sk) |
| IL (1) | IL136736A (sk) |
| NO (1) | NO329385B1 (sk) |
| NZ (1) | NZ505371A (sk) |
| PL (1) | PL196042B1 (sk) |
| PT (2) | PT1060241E (sk) |
| RU (1) | RU2230784C2 (sk) |
| SK (1) | SK285971B6 (sk) |
| TR (1) | TR200001960T2 (sk) |
| UA (1) | UA72732C2 (sk) |
| WO (1) | WO1999033955A1 (sk) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011077035A1 (fr) | 2009-12-23 | 2011-06-30 | Sanofi Pasteur | Procede de culture de cellules adherentes |
| WO2019139891A1 (en) | 2018-01-09 | 2019-07-18 | Synthetic Biologics, Inc. | Alkaline phosphatase agents for treatment of neurodevelopmental disorders |
| EP3773686B1 (en) | 2018-03-20 | 2023-06-07 | Theriva Biologics, Inc. | Alkaline phosphatase agents for treatment of radiation disorders |
| EP3768302A4 (en) | 2018-03-20 | 2021-12-15 | Synthetic Biologics, Inc. | INTESTINAL ALKALINE PHOSPHATASE FORMULATIONS |
| US20190367858A1 (en) * | 2018-06-01 | 2019-12-05 | Lonza Ltd. | Midscale Model For Organic Growth and Phasing |
| US20220259554A1 (en) * | 2019-07-16 | 2022-08-18 | Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. | Cell culture method and application thereof based on high-density and continuous inoculation |
| EP4339274A1 (en) | 2022-09-13 | 2024-03-20 | Sartorius Stedim Biotech GmbH | Method for operating a bioprocess installation for production of a bioproduct |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60151458A (ja) | 1984-01-20 | 1985-08-09 | Nippon Piston Ring Co Ltd | カムシヤフト |
| US4664912A (en) * | 1984-10-01 | 1987-05-12 | Wiktor Tadeusz J | Process for the large scale production of rabies vaccine |
| DE3833925A1 (de) * | 1988-03-11 | 1989-09-21 | Inst Angewandte Biotechnologie | Verfahren und herstellung von virus und viralem antigen und vorrichtung hierzu |
| US5017490A (en) | 1989-03-10 | 1991-05-21 | Baxter International Inc. | Method for in vitro reproduction and growth of cells in culture medium |
| DE3930140A1 (de) * | 1989-09-09 | 1991-03-21 | Bayer Ag | Verfahren zur herstellung von biologischen materialien in zellkulturen und vorrichtungen |
| WO1992010564A1 (en) * | 1990-12-13 | 1992-06-25 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, U.S. Department Of Commerce | Sustained and continuous production of high titers of recombinant viral vectors and transduced target cells for use in gene therapy |
| DE19612966B4 (de) | 1996-04-01 | 2009-12-10 | Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh & Co. Kg | MDCK-Zellen und Verfahren zur Vermehrung von Influenzaviren |
| US8188315B2 (en) * | 2004-04-02 | 2012-05-29 | Samsung Mobile Display Co., Ltd. | Organic light emitting device and flat panel display device comprising the same |
| KR100573137B1 (ko) * | 2004-04-02 | 2006-04-24 | 삼성에스디아이 주식회사 | 플루오렌계 화합물 및 이를 이용한 유기 전계 발광 소자 |
| KR100787425B1 (ko) * | 2004-11-29 | 2007-12-26 | 삼성에스디아이 주식회사 | 페닐카바졸계 화합물 및 이를 이용한 유기 전계 발광 소자 |
| KR100669716B1 (ko) * | 2004-07-14 | 2007-01-16 | 삼성에스디아이 주식회사 | 페닐카르바졸 화합물 및 이를 이용한 유기 전계 발광 소자 |
| JP4184332B2 (ja) * | 2004-11-22 | 2008-11-19 | 本田技研工業株式会社 | 可変気筒式内燃機関の制御装置 |
-
1998
- 1998-12-17 IL IL13673698A patent/IL136736A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-12-17 PT PT98966693T patent/PT1060241E/pt unknown
- 1998-12-17 DE DE69837287T patent/DE69837287T3/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-17 HU HU0100538A patent/HUP0100538A3/hu not_active Application Discontinuation
- 1998-12-17 AT AT07103139T patent/ATE507284T1/de active
- 1998-12-17 UA UA2000074455A patent/UA72732C2/uk unknown
- 1998-12-17 CZ CZ20002343A patent/CZ299719B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-12-17 ES ES98966693T patent/ES2281148T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-17 CA CA2316739A patent/CA2316739C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-12-17 KR KR1020007007068A patent/KR100683429B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-12-17 SK SK965-2000A patent/SK285971B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1998-12-17 DK DK07103139.7T patent/DK1801201T3/da active
- 1998-12-17 TR TR2000/01960T patent/TR200001960T2/xx unknown
- 1998-12-17 ID IDW20001431A patent/ID26784A/id unknown
- 1998-12-17 PL PL98341401A patent/PL196042B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1998-12-17 PT PT07103139T patent/PT1801201E/pt unknown
- 1998-12-17 AU AU24179/99A patent/AU758209B2/en not_active Ceased
- 1998-12-17 AT AT98966693T patent/ATE356197T1/de active
- 1998-12-17 EP EP07103139A patent/EP1801201B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-17 WO PCT/EP1998/008522 patent/WO1999033955A1/en active IP Right Grant
- 1998-12-17 RU RU2000119783/13A patent/RU2230784C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-12-17 BR BR9814490-1A patent/BR9814490A/pt not_active IP Right Cessation
- 1998-12-17 JP JP2000526613A patent/JP4478328B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1998-12-17 DE DE69842245T patent/DE69842245D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-17 ES ES07103139T patent/ES2365631T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-17 DK DK98966693.8T patent/DK1060241T4/da active
- 1998-12-17 NZ NZ505371A patent/NZ505371A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-12-17 CN CNB988126354A patent/CN1185339C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-12-17 EP EP98966693A patent/EP1060241B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2000
- 2000-06-21 NO NO20003215A patent/NO329385B1/no not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-03-06 HK HK01101591A patent/HK1030628A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-01-18 US US11/654,556 patent/US20070148753A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AT407255B (de) | Rekombinanter zellklon mit erhöhter stabilität in serum- und proteinfreiem medium und verfahren zur gewinnung des stabilen zellklons | |
| Lydersen et al. | Ceramic matrix for large scale animal cell culture | |
| US11629338B2 (en) | Method for acclimating and suspending Vero and second order production process for virus | |
| US20070148753A1 (en) | Preparation of cells for production of biologicals | |
| AU5363699A (en) | Recombinant stable cell clone, its production and use thereof | |
| Bhatia et al. | Introduction to animal tissue culture science | |
| CN110387058A (zh) | 一种促进细胞在水凝胶上面正常生长的方法 | |
| SK659090A3 (en) | Serumfree cell cultures useful for antigens preparation and process for producing flavivirus/virus antigen or arenavirus/virus antigen | |
| Lazar et al. | An immobilized hybridoma culture perfusion system for production of monoclonal antibodies | |
| MXPA00006339A (en) | Preparation of cells for production of biologicals | |
| Katinger et al. | Long-term stability of continuously perfused animal cells immobilized on novel macroporous microcarriers | |
| SU872547A1 (ru) | Способ культивировани клеток | |
| Lee et al. | Monoclonal antibody production using free-suspended and entrapped hybridoma cells | |
| JP2011004754A (ja) | 組換え安定細胞クローン、その産生およびその使用 | |
| Ripley et al. | Cost Effective High Density Mammalian Cell Culture | |
| Fujii et al. | Citric Acid Fermentation by Immobilized Aspergillus niger in Cellulose Carrier | |
| JP2014223078A (ja) | 組換え安定細胞クローン、その産生およびその使用 | |
| JP2010099093A (ja) | 組換え安定細胞クローン、その産生およびその使用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| TC4A | Change of owner's name |
Owner name: ABBOTT BIOLOGICALS B.V., CP WEESP, NL Effective date: 20120830 |
|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of maintenance fees |
Effective date: 20131217 |