NO325384B1 - Magnetiske partikler med ytre glassoverflate, fremstilling av partiklene og fremgangsmate for isolering av nukleinsyre ved partiklene - Google Patents
Magnetiske partikler med ytre glassoverflate, fremstilling av partiklene og fremgangsmate for isolering av nukleinsyre ved partiklene Download PDFInfo
- Publication number
- NO325384B1 NO325384B1 NO19975772A NO975772A NO325384B1 NO 325384 B1 NO325384 B1 NO 325384B1 NO 19975772 A NO19975772 A NO 19975772A NO 975772 A NO975772 A NO 975772A NO 325384 B1 NO325384 B1 NO 325384B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- particles
- nucleic acids
- magnetic
- glass
- sample
- Prior art date
Links
- 239000002245 particle Substances 0.000 title claims abstract description 104
- 239000011521 glass Substances 0.000 title claims abstract description 69
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 title claims abstract description 47
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims description 87
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims description 87
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims description 87
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 78
- 238000002955 isolation Methods 0.000 title claims description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 6
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims abstract description 18
- 230000005294 ferromagnetic effect Effects 0.000 claims abstract description 16
- 239000012620 biological material Substances 0.000 claims description 48
- 230000005291 magnetic effect Effects 0.000 claims description 40
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 32
- 239000008279 sol Substances 0.000 claims description 23
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 19
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 18
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 18
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 15
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 14
- JKWMSGQKBLHBQQ-UHFFFAOYSA-N diboron trioxide Chemical compound O=BOB=O JKWMSGQKBLHBQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 claims description 11
- SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N ferrosoferric oxide Chemical compound O=[Fe]O[Fe]O[Fe]=O SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 claims description 10
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 7
- 229910052810 boron oxide Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 7
- 239000002131 composite material Substances 0.000 claims description 6
- 239000010445 mica Substances 0.000 claims description 6
- 229910052618 mica group Inorganic materials 0.000 claims description 6
- FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M sodium iodide Chemical compound [Na+].[I-] FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 5
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 5
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 5
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N titanium dioxide Inorganic materials O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 150000004703 alkoxides Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 4
- 239000000696 magnetic material Substances 0.000 claims description 4
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 claims description 4
- 238000000151 deposition Methods 0.000 claims description 3
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N guanidinium thiocyanate Chemical compound SC#N.NC(N)=N ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 claims description 3
- BAZAXWOYCMUHIX-UHFFFAOYSA-M sodium perchlorate Chemical compound [Na+].[O-]Cl(=O)(=O)=O BAZAXWOYCMUHIX-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 229910001488 sodium perchlorate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- 238000003891 environmental analysis Methods 0.000 claims description 2
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 2
- 238000004186 food analysis Methods 0.000 claims description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 claims description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 claims description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 2
- 235000009518 sodium iodide Nutrition 0.000 claims description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 2
- 229910017356 Fe2C Inorganic materials 0.000 claims 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 claims 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 40
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 28
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 13
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 12
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 10
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 9
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 8
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- BOTDANWDWHJENH-UHFFFAOYSA-N Tetraethyl orthosilicate Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)OCC BOTDANWDWHJENH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- WRECIMRULFAWHA-UHFFFAOYSA-N trimethyl borate Chemical compound COB(OC)OC WRECIMRULFAWHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 5
- 239000005373 porous glass Substances 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- -1 AS2O3 Inorganic materials 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 3
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 101100203596 Caenorhabditis elegans sol-1 gene Proteins 0.000 description 2
- UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N Iron oxide Chemical compound [Fe]=O UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108700038981 SUMO-1 Proteins 0.000 description 2
- 102000051619 SUMO-1 Human genes 0.000 description 2
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 2
- 239000005388 borosilicate glass Substances 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 239000003302 ferromagnetic material Substances 0.000 description 2
- 239000005308 flint glass Substances 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N iron(III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]=O JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007885 magnetic separation Methods 0.000 description 2
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 2
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 2
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GFQYVLUOOAAOGM-UHFFFAOYSA-N zirconium(iv) silicate Chemical compound [Zr+4].[O-][Si]([O-])([O-])[O-] GFQYVLUOOAAOGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 241000537222 Betabaculovirus Species 0.000 description 1
- 108020003215 DNA Probes Proteins 0.000 description 1
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 description 1
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- 241001524679 Escherichia virus M13 Species 0.000 description 1
- 241000941423 Grom virus Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000801481 Homo sapiens Tissue-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical group [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 1
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 229960004198 guanidine Drugs 0.000 description 1
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- YQOKLYTXVFAUCW-UHFFFAOYSA-N guanidine;isothiocyanic acid Chemical compound N=C=S.NC(N)=N YQOKLYTXVFAUCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000009413 insulation Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 238000002826 magnetic-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 230000005415 magnetization Effects 0.000 description 1
- GEYXPJBPASPPLI-UHFFFAOYSA-N manganese(III) oxide Inorganic materials O=[Mn]O[Mn]=O GEYXPJBPASPPLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 239000002324 mouth wash Substances 0.000 description 1
- 229940051866 mouthwash Drugs 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-M perchlorate Inorganic materials [O-]Cl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 1
- 238000011158 quantitative evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N silicic acid Chemical class O[Si](O)(O)O RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005245 sintering Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- IUOAWALEYWGAFR-UHFFFAOYSA-M sodium iodite Chemical compound [Na+].[O-]I=O IUOAWALEYWGAFR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000003980 solgel method Methods 0.000 description 1
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 229910052845 zircon Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000859 α-Fe Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C03—GLASS; MINERAL OR SLAG WOOL
- C03C—CHEMICAL COMPOSITION OF GLASSES, GLAZES OR VITREOUS ENAMELS; SURFACE TREATMENT OF GLASS; SURFACE TREATMENT OF FIBRES OR FILAMENTS MADE FROM GLASS, MINERALS OR SLAGS; JOINING GLASS TO GLASS OR OTHER MATERIALS
- C03C3/00—Glass compositions
- C03C3/04—Glass compositions containing silica
- C03C3/076—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight
- C03C3/11—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing halogen or nitrogen
- C03C3/111—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing halogen or nitrogen containing nitrogen
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B03—SEPARATION OF SOLID MATERIALS USING LIQUIDS OR USING PNEUMATIC TABLES OR JIGS; MAGNETIC OR ELECTROSTATIC SEPARATION OF SOLID MATERIALS FROM SOLID MATERIALS OR FLUIDS; SEPARATION BY HIGH-VOLTAGE ELECTRIC FIELDS
- B03C—MAGNETIC OR ELECTROSTATIC SEPARATION OF SOLID MATERIALS FROM SOLID MATERIALS OR FLUIDS; SEPARATION BY HIGH-VOLTAGE ELECTRIC FIELDS
- B03C1/00—Magnetic separation
- B03C1/005—Pretreatment specially adapted for magnetic separation
- B03C1/01—Pretreatment specially adapted for magnetic separation by addition of magnetic adjuvants
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B82—NANOTECHNOLOGY
- B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
- B82Y25/00—Nanomagnetism, e.g. magnetoimpedance, anisotropic magnetoresistance, giant magnetoresistance or tunneling magnetoresistance
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C03—GLASS; MINERAL OR SLAG WOOL
- C03C—CHEMICAL COMPOSITION OF GLASSES, GLAZES OR VITREOUS ENAMELS; SURFACE TREATMENT OF GLASS; SURFACE TREATMENT OF FIBRES OR FILAMENTS MADE FROM GLASS, MINERALS OR SLAGS; JOINING GLASS TO GLASS OR OTHER MATERIALS
- C03C3/00—Glass compositions
- C03C3/04—Glass compositions containing silica
- C03C3/076—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight
- C03C3/078—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing an oxide of a divalent metal, e.g. an oxide of zinc
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C03—GLASS; MINERAL OR SLAG WOOL
- C03C—CHEMICAL COMPOSITION OF GLASSES, GLAZES OR VITREOUS ENAMELS; SURFACE TREATMENT OF GLASS; SURFACE TREATMENT OF FIBRES OR FILAMENTS MADE FROM GLASS, MINERALS OR SLAGS; JOINING GLASS TO GLASS OR OTHER MATERIALS
- C03C3/00—Glass compositions
- C03C3/04—Glass compositions containing silica
- C03C3/076—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight
- C03C3/083—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing aluminium oxide or an iron compound
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C03—GLASS; MINERAL OR SLAG WOOL
- C03C—CHEMICAL COMPOSITION OF GLASSES, GLAZES OR VITREOUS ENAMELS; SURFACE TREATMENT OF GLASS; SURFACE TREATMENT OF FIBRES OR FILAMENTS MADE FROM GLASS, MINERALS OR SLAGS; JOINING GLASS TO GLASS OR OTHER MATERIALS
- C03C3/00—Glass compositions
- C03C3/04—Glass compositions containing silica
- C03C3/076—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight
- C03C3/083—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing aluminium oxide or an iron compound
- C03C3/085—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing aluminium oxide or an iron compound containing an oxide of a divalent metal
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C03—GLASS; MINERAL OR SLAG WOOL
- C03C—CHEMICAL COMPOSITION OF GLASSES, GLAZES OR VITREOUS ENAMELS; SURFACE TREATMENT OF GLASS; SURFACE TREATMENT OF FIBRES OR FILAMENTS MADE FROM GLASS, MINERALS OR SLAGS; JOINING GLASS TO GLASS OR OTHER MATERIALS
- C03C3/00—Glass compositions
- C03C3/04—Glass compositions containing silica
- C03C3/076—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight
- C03C3/083—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing aluminium oxide or an iron compound
- C03C3/085—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing aluminium oxide or an iron compound containing an oxide of a divalent metal
- C03C3/087—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing aluminium oxide or an iron compound containing an oxide of a divalent metal containing calcium oxide, e.g. common sheet or container glass
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C03—GLASS; MINERAL OR SLAG WOOL
- C03C—CHEMICAL COMPOSITION OF GLASSES, GLAZES OR VITREOUS ENAMELS; SURFACE TREATMENT OF GLASS; SURFACE TREATMENT OF FIBRES OR FILAMENTS MADE FROM GLASS, MINERALS OR SLAGS; JOINING GLASS TO GLASS OR OTHER MATERIALS
- C03C3/00—Glass compositions
- C03C3/04—Glass compositions containing silica
- C03C3/076—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight
- C03C3/089—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing boron
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C03—GLASS; MINERAL OR SLAG WOOL
- C03C—CHEMICAL COMPOSITION OF GLASSES, GLAZES OR VITREOUS ENAMELS; SURFACE TREATMENT OF GLASS; SURFACE TREATMENT OF FIBRES OR FILAMENTS MADE FROM GLASS, MINERALS OR SLAGS; JOINING GLASS TO GLASS OR OTHER MATERIALS
- C03C3/00—Glass compositions
- C03C3/04—Glass compositions containing silica
- C03C3/076—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight
- C03C3/089—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing boron
- C03C3/091—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing boron containing aluminium
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C03—GLASS; MINERAL OR SLAG WOOL
- C03C—CHEMICAL COMPOSITION OF GLASSES, GLAZES OR VITREOUS ENAMELS; SURFACE TREATMENT OF GLASS; SURFACE TREATMENT OF FIBRES OR FILAMENTS MADE FROM GLASS, MINERALS OR SLAGS; JOINING GLASS TO GLASS OR OTHER MATERIALS
- C03C3/00—Glass compositions
- C03C3/04—Glass compositions containing silica
- C03C3/076—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight
- C03C3/102—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing lead
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C03—GLASS; MINERAL OR SLAG WOOL
- C03C—CHEMICAL COMPOSITION OF GLASSES, GLAZES OR VITREOUS ENAMELS; SURFACE TREATMENT OF GLASS; SURFACE TREATMENT OF FIBRES OR FILAMENTS MADE FROM GLASS, MINERALS OR SLAGS; JOINING GLASS TO GLASS OR OTHER MATERIALS
- C03C3/00—Glass compositions
- C03C3/04—Glass compositions containing silica
- C03C3/076—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight
- C03C3/102—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing lead
- C03C3/105—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing lead containing aluminium
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C03—GLASS; MINERAL OR SLAG WOOL
- C03C—CHEMICAL COMPOSITION OF GLASSES, GLAZES OR VITREOUS ENAMELS; SURFACE TREATMENT OF GLASS; SURFACE TREATMENT OF FIBRES OR FILAMENTS MADE FROM GLASS, MINERALS OR SLAGS; JOINING GLASS TO GLASS OR OTHER MATERIALS
- C03C3/00—Glass compositions
- C03C3/04—Glass compositions containing silica
- C03C3/076—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight
- C03C3/102—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing lead
- C03C3/108—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing lead containing boron
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
- C12N15/1006—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers
- C12N15/1013—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers by using magnetic beads
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6804—Nucleic acid analysis using immunogens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6834—Enzymatic or biochemical coupling of nucleic acids to a solid phase
-
- H—ELECTRICITY
- H01—ELECTRIC ELEMENTS
- H01F—MAGNETS; INDUCTANCES; TRANSFORMERS; SELECTION OF MATERIALS FOR THEIR MAGNETIC PROPERTIES
- H01F1/00—Magnets or magnetic bodies characterised by the magnetic materials therefor; Selection of materials for their magnetic properties
- H01F1/0036—Magnets or magnetic bodies characterised by the magnetic materials therefor; Selection of materials for their magnetic properties showing low dimensional magnetism, i.e. spin rearrangements due to a restriction of dimensions, e.g. showing giant magnetoresistivity
- H01F1/0045—Zero dimensional, e.g. nanoparticles, soft nanoparticles for medical/biological use
- H01F1/0063—Zero dimensional, e.g. nanoparticles, soft nanoparticles for medical/biological use in a non-magnetic matrix, e.g. granular solids
-
- H—ELECTRICITY
- H01—ELECTRIC ELEMENTS
- H01F—MAGNETS; INDUCTANCES; TRANSFORMERS; SELECTION OF MATERIALS FOR THEIR MAGNETIC PROPERTIES
- H01F1/00—Magnets or magnetic bodies characterised by the magnetic materials therefor; Selection of materials for their magnetic properties
- H01F1/01—Magnets or magnetic bodies characterised by the magnetic materials therefor; Selection of materials for their magnetic properties of inorganic materials
- H01F1/03—Magnets or magnetic bodies characterised by the magnetic materials therefor; Selection of materials for their magnetic properties of inorganic materials characterised by their coercivity
- H01F1/032—Magnets or magnetic bodies characterised by the magnetic materials therefor; Selection of materials for their magnetic properties of inorganic materials characterised by their coercivity of hard-magnetic materials
- H01F1/10—Magnets or magnetic bodies characterised by the magnetic materials therefor; Selection of materials for their magnetic properties of inorganic materials characterised by their coercivity of hard-magnetic materials non-metallic substances, e.g. ferrites, e.g. [(Ba,Sr)O(Fe2O3)6] ferrites with hexagonal structure
- H01F1/11—Magnets or magnetic bodies characterised by the magnetic materials therefor; Selection of materials for their magnetic properties of inorganic materials characterised by their coercivity of hard-magnetic materials non-metallic substances, e.g. ferrites, e.g. [(Ba,Sr)O(Fe2O3)6] ferrites with hexagonal structure in the form of particles
- H01F1/112—Magnets or magnetic bodies characterised by the magnetic materials therefor; Selection of materials for their magnetic properties of inorganic materials characterised by their coercivity of hard-magnetic materials non-metallic substances, e.g. ferrites, e.g. [(Ba,Sr)O(Fe2O3)6] ferrites with hexagonal structure in the form of particles with a skin
-
- H—ELECTRICITY
- H01—ELECTRIC ELEMENTS
- H01F—MAGNETS; INDUCTANCES; TRANSFORMERS; SELECTION OF MATERIALS FOR THEIR MAGNETIC PROPERTIES
- H01F1/00—Magnets or magnetic bodies characterised by the magnetic materials therefor; Selection of materials for their magnetic properties
- H01F1/01—Magnets or magnetic bodies characterised by the magnetic materials therefor; Selection of materials for their magnetic properties of inorganic materials
- H01F1/03—Magnets or magnetic bodies characterised by the magnetic materials therefor; Selection of materials for their magnetic properties of inorganic materials characterised by their coercivity
- H01F1/12—Magnets or magnetic bodies characterised by the magnetic materials therefor; Selection of materials for their magnetic properties of inorganic materials characterised by their coercivity of soft-magnetic materials
- H01F1/34—Magnets or magnetic bodies characterised by the magnetic materials therefor; Selection of materials for their magnetic properties of inorganic materials characterised by their coercivity of soft-magnetic materials non-metallic substances, e.g. ferrites
- H01F1/36—Magnets or magnetic bodies characterised by the magnetic materials therefor; Selection of materials for their magnetic properties of inorganic materials characterised by their coercivity of soft-magnetic materials non-metallic substances, e.g. ferrites in the form of particles
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S428/00—Stock material or miscellaneous articles
- Y10S428/90—Magnetic feature
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/814—Enzyme separation or purification
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T428/00—Stock material or miscellaneous articles
- Y10T428/29—Coated or structually defined flake, particle, cell, strand, strand portion, rod, filament, macroscopic fiber or mass thereof
- Y10T428/2982—Particulate matter [e.g., sphere, flake, etc.]
- Y10T428/2991—Coated
- Y10T428/2993—Silicic or refractory material containing [e.g., tungsten oxide, glass, cement, etc.]
- Y10T428/2996—Glass particles or spheres
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Geochemistry & Mineralogy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Power Engineering (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Soft Magnetic Materials (AREA)
- Paints Or Removers (AREA)
- Developing Agents For Electrophotography (AREA)
- Glass Compositions (AREA)
- Pigments, Carbon Blacks, Or Wood Stains (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Hard Magnetic Materials (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse angår magnetiske partikler
med en glassoverflate, fremgangsmåte for rensing av et biologisk materiale, spesielt nukleinsyrer, ved anvendelse av glass-partiklene i nærvær av chaotropiske salter, fremgangsmåter for isolering av disse biologiske materialer og fremgangsmåter for konsentrering av biologiske materialer og overføring av biologiske materialer fra løsninger med høyere saltkonsentrasjon til løsninger med lavere saltkonsentrasjon.
Mange biologiske materialer, spesielt nukleinsyrer, stiller høye krav med hensyn til deres isolering fra det naturlige miljø. For det første foreligger de ofte i meget lave konsentrasjoner, og for det andre befinner de seg ofte i naboskap med andre faste og oppløste stoffer som har innflyt-else på deres isolering, hhv. bestemmelse.
I den senere tid.har det derfor ikke manglet forslag på forsøk, fremgangsmåter og materialer for isolering av nukleinsyrer fra deres naturlige miljø. Proe. Nati. Acad. USA 76, 615-619 (1979) beskriver bindingen av nukleinsyrer i nærvær av natriumjodid, til oppmalt flintglass.
I Anal Biochem. 121, 382-287 (1982) beskrives rensing av plasmid-DNA fra bakterier på glasstøv i nærvær av natriumperklorat.
I DE-A 37 34 442 beskrives isolering av enkelttrådet M13 fag-DNA på glassfiberfiltere ved utfelling av fagpartiklene ved hjelp av eddiksyre og lyse av fagpartiklene med perklorat. Nukleinsyrene bundet til glassfiberfilteret elueres etter vask med en metanolholdig buffer i tris/EDTA-buffer.
I Anal. Biochem. 175, 196-201 (1988) beskrives en lignende fremgangsmåte for rensing av DNA fra lambda-fag.
De hittil nevnte fremgangsmåter i kjent teknikk har som fellestrekk den selektive binding av nukleinsyrer til glassoverflater i chaotropiske saltløsninger, hvorved nukleinsyrene separeres fra forurensninger som agarose, proteiner eller cellenedbrytningsprodukter. For separering av glasspar-tiklene fra forurensningene anvendes ifølge kjent teknikk enten sentrifugering av partikler eller sugefiltrering av væsker gjennom glassfiberfiltere. Ved dette handler det imidlertid om et begrensende trinn som sterkt hindrer bearbeidelse av store
probeantall.
I Anal. Biochem. 201, 166-169 (1992), hhv. PCT GB91/00212 beskrives anvendelse av magnetpartikler for immobilisering av nukleinsyrer etter utfelling ved tilsetning av salt og etanol. Her foregår en agglutinering av nukleinsyrene under inkludering av magnetpartiklene. Agglutinatet skilles fra det opprinnelige løsningsmiddel ved anleggelse av et magnetfelt, etterfulgt av vask. Etter ett vasketrinn oppløses nukleinsyrene i en tris-buffer. Denne fremgangsmåte har imidlertid den ulempe at utfellingen ikke er selektiv for nukleinsyrer, slik at et stort antall faste og oppløste stoffer agglutineres sammen med nukleinsyrene. Ved denne fremgangsmåte er det således ikke mulig å fjerne eventuelle til-stedeværende inhibitorer for bestemte enzymatiske reaksjoner i tilstrekkelig grad.
I US-A-4 233 169 er det beskrevet et porøst glass som inneholder innleirede magnetpartikler.
På markedet finnes også såkalt magnetisk, porøst glass som inneholder små magnetpartikler i en porøs, partikulær glassmatriks, og hvor overflaten er overtrukket med et streptavidinholdig sjikt. Dette produkt kan anvendes for isolering av biologiske materialer, f.eks. proteiner eller nukleinsyrer, når det modifiseres i et passende preparerings-trinn på en slik måte at det blir bundet kovalent til biotin.
Målet for foreliggende oppfinnelse var å tilveie-bringe bedre materialer for immobilisering av biologiske materialer, og en enkel og egnet fremgangsmåte for rutine-diagnostikk for isolering av biologiske materialer, spesielt nukleinsyrer.
Oppfinnelsen gjelder således magnetiske partikler, kjennetegnet ved at de har en ytre glassoverflate som er vesentlig porefri eller har porer med en diameter mindre enn 10 nm, der glasset inneholder boroksid.
Den gjelder også en fremgangsmåte for isolering av nukleinsyrer, kjennetegnet ved å: - kontakte en prøve som inneholder det biologiske materialet i en væske med partikler ifølge ett av kravene 1-5 ved betingelser der det biologiske
materialet binder direkte til glassoverflaten,
- separere det biologiske materialet fra væsken og en fremgangsmåte for isolering av nukleinsyrer, kjennetegnet ved at den omfatter å: - kontakte en prøve som inneholder nukleinsyren i nativ form i en væske med magnetiske partikler med glassoverflater som er vesentlig porefrie eller som har porer med en diameter på mindre enn 10 nm, ved •betingelser der nukleinsyrene i sin native form kan binde direkte til glassoverflaten og
- separere de bundne nukleinsyrene fra væsken.
I tillegg gjelder oppfinnelsen en prosess for fremstilling av magnetiske glasspartikler med kornstørrelse på mindre enn 100 um, kjennetegnet ved å:
- preparere en magnetisk kjerne og
- omgi den magnetiske kjernen med en vesentlig porefri glassoverflate ved å - deponere en sol, som er dannet av en alkohol-løsning inneholdende alkoksider av nettverksdannende komponenter, på overflaten - konvertere sol-laget til et gel-lag ved hjelp av en spraytørkingsprosess og
- deretter gjøre gelen kompakt.
Oppfinnelsen vedrører også anvendelse av ferromagnetiske partikler som har en ekstern glassoverflate som er vesentlig porefri eller som har porer med en diameter på mindre enn 10 nm for å' isolere nukleinsyrer i nativ form og anvendelse av magnetiske partikler med en ytre glassoverflate, der glasset inneholder boroksid, for å isolere nukleinsyrer i nativ form.
Endelig gjelder oppfinnelsen en fremgangsmåte for isolering av nukleinsyrer kjennetegnet ved at den omfatter å: - bringe en prøve som inneholder nukleinsyrene i nativ form i en væske i kontakt med magnetiske partikler som har en overflate av glass, i nærvær av kaotropiske midler ved betingelser der nukleinsyrene i nativ form kan binde direkte til overflaten og
- separere de bundne nukleinsyrene fra væsken.
En fagperson betegner partikler som faste materialer med liten diameter. Slike partikler betegnes også ofte som pigmenter. Ved foreliggende oppfinnelse er slike partikler spesielt egnede som har en gjennomsnittlig kornstørrelse mindre enn 100 (Jm. Spesielt foretrukket er en gjennomsnittlig kornstørrelse på mellom 10 og 60 |im. Kornstørrelsesfordelingen er fortrinnsvis forholdsvis homogen, spesielt foreligger nesten ingen partikler < 10 |xm eller > 60 |im.
Som magnetiske betegnes materialer som kan tiltrekkes av en magnet, dvs. f.eks. ferromagnetiske eller superparamagnetiske materialer. Som magnetiske skal det også forstås materialer som betegnes som svakt magnetiske materialer, f.eks. ferritt. Spesielt foretrukket ved foreliggende oppfinnelse er ferromagnetiske materialer, spesielt når de ikke er forhåndsmagnetisert. Under forhåndsmagnetisering skal det i denne sammenheng forstås at materialene bringes i kontakt med en magnet, hvorved remanensen forhøyes. Spesielt foretrukket er ferromagnetiske materialer, slik som f.eks. magnetitt (Fe304) eller Fe203.
Ved en ytre overflate av en partikkel skal det forstås en sammenhengende overflate, fra hvilken det kan dannes perpendikulærer i retning mot omgivelsene som ikke skjærer, selve partikkelen én gang til.
Ved en pore forstås en fordypning i den ytre partikkeloverflate som når så langt inn i partikkelen at en tenkt dannet perpendikulær i fordypningen på overflaten i retning av den nærmeste partikkelomgivelse skjærer partikkelen minst én gang. Porer strekker seg dessuten dypere inn i partikkelen enn én poreradius.
Ved et glass skal det ved foreliggende oppfinnelse forstås et silisiumholdig amorft materiale. Glasset kan inneholde ytterligere materialer, f.eks.
I et mindre omfang på 0-5 % kan også mange andre oksider, slik som f.eks. Mn203, Ti02, AS2O3, Fe203, CuO, CoO osv., inneholdes. Overflater med en sammensetning av borsilikatglass, flintglass eller kisel har vist seg som spesielt effektive. Med hensyn til utbytte av nukleinsyrer har spesielt foretrukne borsilikatglass et boroksidinnhold på mer enn 25 %; som spesielt verdifullt anses et glass med sammensetningen Si02/B203 70/30. Spesielt foretrukket ved foreliggende oppfinnelse er glass som dannes ved den såkalte gel-sol-prosess med etterfølgende tørking pg sammenpressing av det dannede sjikt. Denne prosess er kjent i hovedtrekk og er f.eks. beskrevet i C. J. Brinker, G. W. Scherer "Sol Gel science - The physics and chemistry of Sol Gel Processing". Academic Press Inc. 1990 og Sol-Gel Optics, Processing and Applications Lisa C. Klein Ed. Kluwer Academic Publishers 1994, s. 450 ff., samt i DE-A-1941191, DE-A-3719339, DE-A-4117041 og DE-A-4217432. Den er riktignok ikke hittil beskrevet for magnetiske partikler. At det ved denne prosess kunne fremstilles magnetiske partikler som ved isolering av biologiske materialer, spesielt nukleinsyrer, har ganske overraskende egenskaper, kunne ikke forventes. I gel-sol-proses.sen blir alkoksider av. nettverksdannende komponenter, f.eks. Si02, B2O3, AI2O3, Ti02, Zr02, Ge02, sammen med oksider og salter av andre komponenter, f.eks. i alkoholisk løsning, anvendt og hydrolysert. I ligningen er fremstillingen av et natriumboraluminiumsilikat-glass oppført.
Ved tilsetning av vann igangsettes hydrolyseprosessen av utgangskomponentene. Reaksjonen forløper forholdsvis raskt, fordi alkaliionene innvirker katalytisk på hydrolysehastig-heten av kiselsyreesterne. Etter opphør av geldannelsen kan den dannede gel tørkes og fortettes til et glass ved hjelp av en termisk prosess.
Mengdeforholdet sol/pigment har en betydelig innflyt-else på det magnetiske pigment ifølge oppfinnelsen. Det gis her grenser ved at pigmentandelen må være så liten at det fremdeles dannes en pumpe- og sprøyteegnet masse. Ved for liten pigmentandel blir finandelen av f.eks. ikke-magnetisk materiale for stor og forstyrrende. Med henblikk på pigment-utbyttet er mengdeforhold på 10 til 25 g pigment/100 ml sol funnet hensiktsmessige.
For å danne et pulver sprøytes fortrinnsvis oppslemmingen gjennom en dyse og aerosolen tørkes på en fallstrek-ning. Dysen oppvarmes fortrinnsvis for å akselerere tørkingen av oppslemmingen. Avhengig av dysens geometri er dysetemperaturen fortrinnsvis fra ca. 120 til 200 °C. Et kompromiss blir funnet gjennom tilstrekkelig fordampingshastighet, imidlertid med unngåelse av sprut.
Med henblikk på utbyttet må kondensasjonstemperaturen velges høyest mulig. Dersom den imidlertid er for høy kleber partiklene seg sammen og det dannes agglomerater som må siles fra. Etterbehandlingen under luft fører ved for høye tempera-turer til et tap av de magnetiske egenskaper, og høye tempera-turer bør derfor unngås.
Ved en vesentlig porefri overflate forstås en overflate med mindre enn 5 %, fortrinnsvis mindre enn 2 % og spesielt foretrukket mindre enn 0,1 % porer av den ovennevnte definisjon. Dersom slike porer skal foreligge så har disse fortrinnsvis en diameter mindre enn 10, spesielt foretrukket 1 nm.
Spesielt foretrukket ved foreliggende oppfinnelse er partikler som inneholder en kjerne av glimmer belagt med Ti02 hvorpå det er immobilisert magnetittpartikler, hvorved det således dannede forbindelsesstoff er omsluttet av glassjiktet. Både kjernen og også magnetittpartiklene er krystallinske og ikke-porøse. Rommene på overflatene av glimmeret som ikke er opptatt av magnetittpartikler er overtrukket av et tykkere glassjikt enn toppene av magnetpartiklene, slik at det dannes en hovedsakelig ikke-porøs glassoverflate.
Ikke-porøsiteten av den magnetiske partikkel refererer kun til den ytre overflate, ikke det indre av partikkelen, slik at partikkelen kan være porøs i det indre, når overflaten kun er omsluttet av hovedsakelig porefritt glass, eller en glassoverflate med porer med en diameter mindre enn 10 nm.
De magnetiske partikler ifølge oppfinnelsen er overraskende spesielt fordelaktig egnede for isolering av biologiske materialer fra prober. Spesielt blir lange nukleinsyrer ■ meget lite, eller overhode ikke, ødelagt, når de immobiliseres på partiklene. Materialet i kjernen er dessuten en naturlig ressurs og således lite betenkelig i økologisk henseende. Fremstillingen av partiklene ifølge oppfinnelsen er dessuten svært ukomplisert og kostnadsgunstig.
Foreliggende oppfinnelse angår dessuten ferromagnetiske partikler med en glassoverflate. Superparamagnetiske partikler er beskrevet i teknikken. Det har nå vist seg at ferromagnetiske partikler, når de er overtrukket med en glassoverflate, oppviser betydelige fordeler ved isolering av biologiske materialer. Så lenge de ferromagnetiske partikler fremdeles ikke har vært utsatt for noe magnetfelt, sedimen-terer de utelukkende under påvirkning av tyngdekraften. De kan ved omrøring lett og hurtig suspenderes på nytt. Atskillelsen uten magnetfeltinnflytelse forløper derved fortrinnsvis lang-sommere enn immobiliseringen av biologisk materiale på partik-lenes overflate. Dette gjelder spesielt for nukleinsyrer. De ferromagnetiske partikler kan på enkel måte, ved hjelp av en magnet, samles på et bestemt sted i probevæsken for å atskille væsken fra partiklene og følgelig de immobiliserte biologiske materialer.
Glassoverflåtene på de ferromagnetiske partikler ifølge oppfinnelsen kan være porefrie eller også inneholde porer. Ut fra de ovennevnte grunner for de magnetiske partikler ifølge oppfinnelsen, er det foretrukket at den ytre overflate av de ferromagnetiske partikler er vesentlig porefrie eller oppviser porer med en diameter mindre enn 10 nm. De ferromagnetiske partikler ifølge oppfinnelsen har også fortrinnsvis en kornstørrelse mellom 10 og 60 [ im, spesielt foretrukket mellom 20 og 50 (im. Spesielt foretrukket er partikler hvor de eventuelle porer i overflaten har en diameter mindre enn 10 nm, spesielt foretrukket 1 nm. Ett eksempel på en ferromagnetisk partikkel ifølge oppfinnelsen er det ovennevnte sammensatte materiale av glimmer- og magnetittpartikler omsluttet av et glassjikt.
Foreliggende oppfinnelse angår også likeledes en fremgangsmåte for isolering av et biologisk materiale, ved at en probe som inneholder det biologiske materiale i en væske, bringes i kontakt med de magnetiske partikler ifølge oppfinnelsen, eller de ferromagnetiske partikler ifølge oppfinnelsen, under betingelser hvor det biologiske materiale bindes til partikkeloverflaten, og
det biologiske materiale atskilles fra væsken.
Under biologiske materialer skal det forstås materialer på partikulær eller molekylær basis. Til disse hører spesielt celler, f.eks. virus og bakterier, men også celler isolert fra mennesker og dyr, slik som leukocytter, så vel som immunologisk aktive lav- og høymolekylære kjemiske forbindelser som haptener, antigener, antistoffer og nukleinsyrer.
Spesielt foretrukket er nukleinsyrer, f.eks. DNA eller RNA.
Prober ifølge oppfinnelsen er f.eks. kliniske prober som blod, serum, munnutskyllingsvæske, urin, cerebralvæske, spytt, avføring, punktater og benmargsprober. Probene kan også stamme fra områdene miljøanalyse, næringsmiddelanalyse eller den molekylærbiologiske forskning, f.eks. fra bakteriekulturer, faglysater og produkter fra amplifikasjonsfremgangs-måter, f.eks. PCR.
Ifølge oppfinnelsen har de magnetiske partikler en indre kjerne som den ytre glassoverflate er anbrakt på. Kjernen kan bestå av et sammensatt materiale, men også av en enkel jernkjerne. Kjernen kan også bestå av en krystallinsk eller keramisk eller glassaktig struktur som jernoksidet er innesluttet i.
Ved hjelp av den .beskrevne fremgangsmåte kan nativt eller modifisert biologisk materiale isoleres. Under nativt biologisk materiale skal det forstås materiale hvis struktur ikke er irreversibelt forandret i forhold til det naturlig forekommende biologiske materiale. Dette utelukker imidlertid ikke modifisering av andre bestanddeler av proben. Dersom f.eks. celler skal isoleres, så kan mediet som omgir cellene modifiseres, men ikke cellene som sådanne. Dersom nukleinsyrer skal isoleres, så bør også disse modifiseres i nativ form,, dvs. ikke denaturert, spaltet eller ved tilkobling av reaktive grupper. Begrepet native biologiske materialer omfatter derfor spesielt ikke biotinylerte nukleinsyrer. Eksempler på native-biologiske materialer er fag-DNA eller cellulære nukleinsyrer fra blod.
Modifiserte biologiske materialer omfatter materialer som ikke forekommer i naturen, f.eks. nukleinsyrer som er modifisert ved tilkobling av reaktive, påvisbare grupper,eller grupper egnede til immobilisering, f.eks. biotinylerte nukleinsyrer .
I bestemte tilfeller kan proben anvendes uten forhåndsbehandling ved isoleringsfremgangsmåten ifølge oppfinnelsen. I mange tilfeller bør imidlertid proben dekomponeres ved hjelp av en egnet metode og det inneholdte biologiske materiale i proben frigjøres. Fremgangsmåte for dekomponering av prober er kjent for fagfolk og kan være kjemiske, enzymatiske eller fysikalske. Også en kombinasjon av disse fremgangsmåter er mulig. Lyse ved hjelp av ultralyd, høyt trykk eller høy skjærkraft, ved hjelp av alkali, detergenter eller chaotropiske saltløsninger, eller ved innvirkning av proteinaser eller lipaser, skal spesielt nevnes. Spesielt med henblikk på dekomponeringsfremgangsmåtene for isolering av nukleinsyrer skal det refereres til Sambrook et al.: Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2. utgave, Cold Spring Harbour Laboratory Press, Cold Spring Harbour, NY og Ausubel et al.: Current Protocols in Molecular Biology 1987, J. Viley and Sons, NY.
Foruten det biologiske materiale som skal isoleres kan proben inneholde ytterligere bestanddeler, f.eks. celle-nedbrytningsmateriale, proteiner, salt og ytterligere stoffer som ikke skal isoleres, i.en væske. Denne proben, som fortrinnsvis inneholder det biologiske materiale i nativ form, blir under betingelser ved hvilke det ønskede biologiske materiale bindes til partikkeloverflaten, brakt i kontakt med partiklene. Disse betingelser avhenger av beskaffenheten av det biologiske materiale, men er imidlertid prinsipielt
. kjente. De avhenger også av typen av binding som det biologiske materiale er bundet til overflaten med. Dersom immunolog-iske vekselvirkninger f.eks. skal utnyttes for bindingen,. så må det utvelges slike betingelser som er egnede for dannelse av immunkomplekser. For nukleinsyrer er det i tilfelle med modifiserte nukleinsyrer mulig med en binding over gruppene på nukleinsyrene som representerer modifiseringen, f.eks. biotin over bindingen til overflater overtrukket med streptavidin. Spesielt med nukleinsyrer foretrekkes imidlertid den direkte binding av nukleinsyrer til glass, blant annet fordi en modifisering av nukleinsyrene er unødvendig og kun native nukleinsyrer kan bindes. Bindingen av native nukleinsyrer til glasspartikler kan utføres analogt med fremgangsmåter ifølge kjent teknikk. Fortrinnsvis utføres bindingen i nærvær av chaotropiske salter, hvorved konsentrasjonen av disse salter er mellom 2 og 8 mol/l, fortrinnsvis fra 4 til 6 mol/l. Ved chaotropiske salter handler det blant annet om natriumjoditt, natriumperklorat, guanidintiocyanat, guanidinisotiocyanat
eller guanidinhydrokloritt, men saltene er imidlertid ikke begrenset til disse forbindelser.
For å bringe proben i kontakt med partiklene blandes proben med partiklene og inkuberes i en tilstrekkelig tid for binding. Inkubasjonstiden er som regel kjent for en fagperson ut fra behandlingen med ikke-magnetiske partikler, og en opti-malisering er mulig ved gjennomføring av en bestemmelse av mengden av immobilisert biologisk materiale på overflaten til forskjellige tidspunkter. For nukleinsyrer kan inkubasjons-tider mellom 10 sekunder og 30 minutter være formålstjenlige.
Alt etter størrelsen og beskaffenheten av den magnetiske partikkel foregår det allerede under inkubasjonstiden en separasjon av partikkelen fra væsken, eller suspensjonen opprettholdes over lengre tid. Når partiklene oppviser en meget liten kornstørrelse og er superparamagnetiske, opprettholdes suspensjonen over et lengre tidsrom. Dersom det handler om partikler med en større kornstørrelse, inntreffer det allerede under inkubasjonen en langsom separasjon av partiklene fra væsken. Spesielt når det handler om ferromagnetiske partikler danner det seg slike aggregater. I det foretrukne tilfelle at de ferromagnetiske partikler ikke er magnetisert på forhånd, sikres en spesielt skånsom separasjon.
Immobiliseringen finner fortrinnsvis ikke sted ved utfelling gjennom reduksjon av løseligheten av materialene som skal immobiliseres. Immobiliseringen er i steden avhengig av biospesifikke vekselvirkninger (innfangelsesmolekyler) eller - adsorpsjon. Ved dette unngås i stor grad inkorporeringer av forurensninger.
Etter inkubasjonen følger atskillelse av det biologiske materiale fra væsken. Dette oppnås vanligvis ved separasjon av materialet bundet til de magnetiske partikler ved hjelp av et magnetfelt. Magnetpartiklene kan f.eks. trekkes til veggen i beholderen som inkubasjonen ble utført i. Væsken med innholdsstoffene i proben som ikke er blitt bundet til de magnetiske partikler kan deretter fjernes. Denne fjerning avhenger av typen av beholder som inkubasjonen ble utført i. Egnede fremgangsmåtetrinn er avpipettering eller avsuging av væsken.
De magnetiske partikler kan deretter, om ønskelig, renses én eller flere ganger med en vaskeløsning. Vaske-løsningen utvelges slik at det biologiske materiale i størst mulig grad ikke løsner fra partikkeloverflaten, imidlertid mens forurensninger som ikke skal isoleres, vaskes bort i høyest mulig grad. Disse vasketrinn utføres fortrinnsvis ved inkubasjon av vaskeløsningen med partiklene, idet det fortrinnsvis utføres en resuspensjon av partiklene, f.eks. ved omrøring eller pålegging av et magnetfelt som ikke er identisk med det første magnetfelt. Den forurensede vaskeløsning fjernes fortrinnsvis nøyaktig på samme måte som proben under det ovenfor beskrevne trinn for binding av det biologiske materiale.
I forbindelse med det siste vasketrinn kan et utføres et kort tørketrinn for de magnetiske partikler i vakuum, eller ved avdamping av væsken, hvorved også en forhåndsbehandling med aceton er mulig.
Det således rensede biologiske materiale kan, hvis ønsket, fjernes fra de magnetiske partikler. Også dette trinn retter seg etter typen av bindingen av det biologiske materiale til de magnetiske partikler. Når de biologiske materialer er native nukleinsyrer og de magnetiske partikler er glass-belagte partikler, kan nukleinsyrene fjernes fra partiklene ifølge oppfinnelsen ved hjelp av en elueringsbuffer med lavt saltinnhold. Slike buffere er kjent fra DE 3724442 og Analytic Biochemistry 175, 196-201 (1988). Som elueringsbuffer med lavt saltinnhold anvendes spesielt en buffer med et saltinnhold mindre enn 0,2 mol/l. I en spesielt foretrukket utførelsesform inneholder elueringsbufferen tris. I en annen spesiell ut-førelsesform er elueringsbufferen avmineralisert vann.
I en ytterligere utførelsesform kan den beskrevne rensings- og isoleringsfremgangsmåte utføres i forbindelse med en immunmagnetisk separasjon av celler (f.eks. viruspartikler eller prokaryote, hhv. eukaryote celler) fra en kroppsvæske eller et vev. Ved denne fremgangsmåte inkuberes proben med magnetiske partikler på hvilket et antistoff mot et antigen på celle er immobilisert, f.eks. under omrøring. Slike partikler kan være partikler ifølge oppfinnelsen, men også kommersielt tilgjengelige (f.eks. MACS Microbeads fra firma Miltenyi Biotec GmbH, Bergisch Gladbach, BRD). Etter påleggelse av et magnetfelt utføres ett eller flere vasketrinn med en saltholdig vaskeløsning. Det erholdes partikler til hvilke de ønskede celler er bundet. Til slutt resuspenderes de bundne celler i en saltholdig buffer. I en foretrukket utførelsesform er den saltholdige buffer en chaotropisk saltløsning, slik at nukleinsyrene i cellene frigjøres fra cellene.
Ved hjelp av kombinasjon av den ovenfor beskrevne isomering av celler med den likeledes beskrevne isolering av nukleinsyrer, fortrinnsvis i deres native form, på de magnetiske partikler ifølge foreliggende oppfinnelse, tilveiebringes en spesielt fordelaktig fremgangsmåte for isolering av nukleinsyrer fra celleinneholdende prober. Fordeler med denne utførelsesform er at den er enkel (enkelbeholdermetode), har høy sensitivitet (spesielt viktig i den medisinske mikro-biologi og onkologi) og lett kan automatiseres.
De biologiske materialer isolert ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen kan anvendes videre på enhver ønsket måte. De kan f.eks. anvendes som substrat for forskjellige enzymatiske reaksjoner. For nukleinsyrer kan det f.eks. nevnes sekvensering, radioaktiv eller ikke-radioaktiv merking, amplifikasjon av én eller flere sekvenser inneholdt i nukleinsyrene, transkripsjon, hybridisering med merkede sondenuklein-syrer, translasjon eller ligering. En fordel med fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen er at atskillelsen av det biologiske materiale fra væsken er meget enkel. Ifølge kjent teknikk ville det for separasjon av glasspartikler fra forurensninger enten anvendes et sentrifugeringstrinn, eller i tilfellet med binding av det biologiske materiale til glassfiberfilter, ville væsken suges gjennom dette filter. Med dette handler det om et begrensende trinn som hindrer bearbeidelse av store probeantall.
Ved hjelp av partiklene ifølge oppfinnelsen mulig-gjøres en effektiv atskillelse av det biologiske materiale fra forurensninger. Inhibitorer av bestemte enzymatiske reaksjoner kan fjernes i spesielt høy grad ved hjelp av foreliggende oppfinnelse. Utbytter av biologisk materiale er forholdsvis høyt. En fraksjonering av lengre nukleinsyrer ble ikke observert. Partiklene ifølge oppfinnelsen er' fortrinnsvis hurtig magneti-serba.re. Figur 1 viser skjematisk isolering av nukleinsyrer fra en celleholdig probe. Figur 2 viser atskillelse av nukleinsyrer isolert ifølge oppfinnelsen på en agarosegel. Figur 3 viser atskillelse av' reaksjonsprodukter etter isolering i-følge oppfinnelsen og PCR-amplifikasjon. Figur 4 viser en gel med resultatene fra eksempel 4. Figur 1 viser skjematisk isolering av nukleinsyrer fra en celleholdig probe. Proben (prøve), som inneholder celler, forhåndsbehandles probespesifikt slik at cellene, hvori nukleinsyrene skal påvises, foreligger i en egnet form. Til dette hører, f.eks. for prober som er uttatt fra kropps-væsker, tilsetning av reagenser for f.eks. oppløsning av viskøse prober, f.eks. spyttprober. Den således bearbeidede probe tilsettes i en beholder til et antistoff bundet til en fast fase, fortrinnsvis til en perle (Bead), som kan gjen-kjenne og binde cellen. Antigener på celleoverflater har spesielt vist seg som egnede partnere for antistoffene. Anti-stoffenes spesifisitet kan justeres etter spesifisiteten av analyseoppgaven som skal løses. Når den faste fase er veggen i beholderen, blir cellene bundet direkte til veggen. Når den faste fase er en perle, separeres denne fra væsken ved hjelp av egnede separasjonsmetoder. Dette kan f.eks. utføres ved filtrering. I tilfelle med magnetiske perler er en atskillelse ved påleggelse av et magnetfelt på den ytre vegg av beholderen mulig. De separerte celler vaskes med en væske for å fjerne forurensninger som vil forstyrre påvisningen, sammen med mediet som omgir cellene. Fortrinnsvis anvendes betingelser ved hvilke cellene verken løses fra den faste fase eller ned-brytes. Nedbrytning av cellene utføres deretter, den såkalte lyse. En mulighet er behandling av cellene med chaotropiske salter. Andre muligheter er anvendelse av proteinaser og detergenter.
I den foretrukne utførelsesform tilsettes partiklene ifølge oppfinnelsen til lyseblandingen. Etter en egnet virke-tid, som kan optimaliseres ved hjelp av belastningen av overflaten med nukleinsyrer, atskilles partiklene fra den omgiv-ende væske som inneholder ytterligere cellebestanddeler som ikke skal påvises. Dette utføres på nytt fortrinnsvis ved anleggelse av et magnetisk felt ved hjelp av en magnet på beholderveggen.
For å fjerne ytterligere forurensninger blir beholderen fortrinnsvis vasket med en væske som er utvalgt slik at nukleinsyrene som skal bestemmes ikke løser seg fra glassoverflaten. For å fjerne nukleinsyrene fra glassoverflaten tilsettes en såkalt elueringsbuffer med reagensbetingelser som medfører at nukleinsyrene løser seg fra glassoverflaten. Disse reagensbetingelser er spesielt lave saltinnhold. Alt etter tilsiktet viderebehandling av nukleinsyrene kan væsken nå atskilles fra partiklene og bearbeides videre. Det er foretrukket at denne atskillelse utføres med det pålagte magnetfelt, slik at partiklene forblir separert.
De følgende eksempler gir en nærmere beskrivelse av foreliggende oppfinnelse.
Eksempel 1
Fremstilling av de magnetiske partikler ifølge oppfinnelsen
Det ble anvendt 6 forskjellige soler. Fremstillingen av solen ble utført etter de følgende skjemaer: Sol 1 ( Si02:B203 = 7:3): Syntesen ble utført i en 250 ml rundkolbe under kontinuerlig omrøring.
86,6 ml tetraetylortosilikat
+7 ml vannfri, udenaturert etanol
+ 14,1 ml 0,15 M HC1.
Det ble dannet en tofaset blanding som ble omrørt ved romtemperatur i så lang tid at den ble enfaset. Deretter ble det dråpevis tilsatt 37,8 ml trimetylborat.
Deretter ble solen oppbevart i 2 timer ved 50 °C. Deretter ble det tilsatt 14,1 ml 0,15 M HC1.
Sol 2 ( Si02:B2O3 = 4:1):
Syntesen ble utført i en 250 ml rundkolbe under kontinuerlig omrøring.
100,5 ml tetraetylortosilikat
+ 7 ml vannfri, udenaturert etanol
+ 16,3 ml 0,15 M HC1.
Det ble dannet en tofaset blanding som ble omrørt ved romtemperatur i så lang tid at den ble enfaset. Deretter ble det dråpevis tilsatt 25,6 ml trimetylborat.
Deretter ble solen oppbevart i 2 timer ved 50 °C. Deretter ble det tilsatt 16,3 ml 0,15 M HC1.
Sol 3 ( SiQ2:B203 = 85:15) : Syntesen ble utført i en 250 ml rundkolbe under kontinuerlig omrøring.
107,8 ml tetraetylortosilikat
+7 ml vannfri, udenaturert etanol
+ 17,5 ml 0,15 M HC1.
Det ble dannet en tofaset blanding som ble omrørt ved romtemperatur i så lang tid at den ble enfaset. Deretter ble det dråpevis tilsatt 19,4 ml trimetylborat.
Deretter ble solen oppbevart i 2 timer ved 50 °C. Deretter ble det tilsatt 17,5 ml 0,15 M HC1.
Sol 4 ( SiQ2:B203 = 4:1, 2 mol% P205) :
Syntesen ble utført i en 250 ml rundkolbe under kontinuerlig omrøring.
100,5 ml tetraetylortosilikat
+7 ml vannfri, udenaturert etanol
+ 16,3 ml 0,15 M HC1.
Det ble dannet en tofaset blanding som ble omrørt ved romtemperatur i så lang tid at den ble enfaset. Deretter ble det dråpevis tilsatt 25,6 ml trimetylborat.
Deretter ble solen oppbevart i 2 timer ved 50 °C. Deretter ble det tilsatt 16,3 ml 0,15 M HC1 + 1,63 g P205.
Sol 5 ( Si02:B2Q3 = 4:1, mol% A1203) :
Syntesen ble utført i en 250 ml rundkolbe under
kontinuerlig omrøring.
100,5 ml tetraetylortosilikat
+7 ml vannfri, udenaturert etanol
+ 16,3 ml 0,15 M HC1.
Det ble dannet en tofaset blanding som ble omrørt ved romtemperatur i så lang tid at den ble enfaset. Deretter ble det dråpevis tilsatt 25,6 ml trimetylborat.
Deretter ble solen oppbevart i 2 timer ved 50 °C. Deretter ble det tildryppet 16,3 ml 0,15 M HC1 + 3,06 g A1203.
Sol 6 ( Si02:B203 = 4 :1, mol% ZrQ2) :
Syntesen ble utført i en 250 ml rundkolbe under kontinuerlig omrøring.
100,5 ml tetraetylortosilikat
+7 ml vannfri, udenaturert etanol
+ 16,3 ml 0,15 M HC1.
Det ble dannet en tofaset blanding som ble omrørt ved romtemperatur i så lang tid at den ble enfaset. Deretter ble det dråpevis tilsatt 25,6 ml trimetylborat + 5,15 ml zircon (IV)-proylat, 70 vekt.% Lsg i 1-propanol.
Deretter ble solen oppbevart i 2 timer ved 50 °C. Deretter ble det tilsatt 16,3 ml 0,15 M HC1.
Etter ytterligere 2 timer ved 50 °C ble det i 150. ml av solen innrørt 22,5 g iriodin 600 (svart mika), og beleggingen ble deretter utført med en sprøytetørker (Biichi 190, Mini Spay Dryer). Dysetemperaturen i sprøytetørkeren var
134 °c.
Det dannede pulver ved sprøytetørkeprosessen ble deretter underkastet en temperaturbehandling under nitrogenatmos-fære (90 liter/time). Oppvarmingshastigheten var 1 °k/minutt og oppholdstiden var 2 timer ved kondensasjonstemperaturen. Denne temperatur var ved beleggingen med sol 1 750 °C, ved beleggingen med sol 2 860 °C og ved de øvrige belegginger 800 °C. Etter sintreringsprosessen ble ovnen skrudd av og pulveret ble avkjølt til romtemperatur. Eventuelt dannet agglomerat ble avsilt med en 50 um sil.
Eksempel 2
Fremstilling av GMP1, GMP2, GMP3 og GMP4
GMP1, GMP2, GMP3 og GMP4 er pigmenter fra forskjellige fremstillingsladninger som ble fremstilt fra sol 1 fra eksempel 1 i en prosess ifølge eksempel 1, under de følgende betingelser:
Eksempel 3
Preparering av PCR- prober fra humant helt blod med magnetiske glasspartikler
Isolering av nukleinsyren
Fra tre glassmagnetpartikkelladninger (GMP2-4) ble det uttatt ca. 10 mg som ble tilsatt til eppendorf-reaksjonskolber. Den nøyaktige innveiing er angitt i tabell 1, det ble utført tre parallelle bestemmelser.
Til 200 ul opptinet helt blod ble det pipettert 40 vil proteinase K (20 mg/ml, fremstilt fra lyofilisat) og umiddel-bart blandet. Deretter ble prøvene tilsatt 200 yl bindings-buffer (6 M guanidin-HCl, 10 mM tris-HCl, 10 mM urea, 30 % tritort X-100, pH 4,4), blandet og inkubert i 10 minutter ved 70 °C. Etter tilsetning av 200 ul i-propanol ble prøvene blandet i 10 sekunder på en Vortex-blander, probene ble inkubert i 20 minutter ved romtemperatur og blandet på nytt i 10 sekunder. Magnetseparasjonen ble utført i minst 30 sekunder i en magnetpartikkelseparator fra Boehringer Mannheim (id. nr. 1 641 794). Supernatantene ble fjernet og analysert som beskrevet nedenfor. Magnetpartiklene ble blandet med 500 ul vaskebuffer (20 mM NaCl, 10 mM tris-HCl, pH 7,5 (25 "C), 80 % etanol) i 10 sekunder, inkubert i 1 minutt ved romtemperatur og vasket i 10 sekunder, og trukket til beholderveggen ved hjelp av magnetpartikkelseparatoren. Supernatanten ble fjernet og kastet. Vaskeprosedyren ble gjentatt inntil vaskesupernatanten var fargeløs (samlet fire vaskinger). Nukleinsyrene ble deretter blandet tre ganger i 10 sekunder med 200 pl eluerings-buf f er (10 mM tris-HCl, pH 8,5) som var forhåndsoppvarmet til 70 °C, inkubert i 10 minutter ved romtemperatur og blandings-eluert i 10 minutter.
Opparbeidelse av supernatant
Supernatanten etter den første binding til de magnetiske glasspartikler ble testet på innhold av nukleinsyrer på følgende måte: Supernatanten ble tilsatt til et filterrør
(Boehringer Mannheim, id. nr. 1744003, f.eks. inneholdt i High Pure PCR Product Purification Kit) og sentrifugert i 1 minutt ved 8 000 rpm i en eppendorf-bordsentrifuge. Gjennomløpet ble
kastet og filterrøret ble vasket to ganger med 500 ul vaskebuffer (sentrifugering som ovenfor). Filterrøret ble kort. tørrsentrifugert og deretter eluert med 2 x 200 ul 1 x eluer-ingsbuf fer forhåndsoppvarmet til 70 °C ved en ny sentrifugering.
Analyse av eluatet og probesupernatanten
50 ul av eluatet, hhv. supernatanten opparbeidet i filterrøret, ble deretter tilsatt 10 pl probebuffer, og av denne ble 45 ul separert elektroforetisk ved 120 V i 90 minutter i en 0,8 % agarosegel.
Forskjellige fortynninger av eluatet, hhv. de opp-arbeidede supernatanter, ble målt spektroskopisk ved 260 og 280 nm i en Uvikon 710 (Kontron).
To 5 ul aliquoter av eluatet ble testet som dobbelt-bestemmelse ved hjelp av "Expand" Long Template PCR (Boehringer Mannheim, id. nr. 1681834) med spesifikke primere, for det menneskelige tPA-gen (ventet produktlengde 15 kb).
Blanding I ble tilsatt til et tynnvegget PCR-rør og tilsatt 5 pl eluat og blanding II. Porsjonen ble kort blandet og overlagt med 30 ul mineralolje. Porsjonene ble amplifisert i et Perkin-Elmer-termosykliseringsapparat 9600 med det følg-ende program:
50 ul PCR-porsj onene ble tilsatt 10 ul probebuffer og 45 ul av denne blanding ble separert elektroforetisk ved 120 V i 90 minutter i en 0,8 % agarosegel.
Tabell 1: Utbytte av nukleinsyrer med magnetiske glasspartikler fra 200 pl blod.
Det første eluat var fremdeles lett gulfarget og del-vis kontaminert med fine magnetpartikler.
Analysen av eluatet fra agarosegelen (figur 2) viser en god reproduserbarhet med hensyn til utbytte. Magnetpartiklene GMP/2-4 viser ingen signifikante forskjeller. I eluatene 1 (ovenfor) og 2 (nedenfor) forefinnes ca. den samme nukleinsyrekonsentrasjon (vurdert fra gelen). Eluat 3 viser kun en liten nukleinsyrekonsentrasjon. I supernatantene kan det likeledes kun observeres en liten nukleinsyrekonsentrasjon.
"Expand" PCR gir med alle prober, med unntak av mindre avvik (tabell 2), gjennomgående gode og spesifikke amplifikasjonsprodukter. Med de magnetiske glassperler kan nukleinsyrer isoleres fra humane blodprøver, hvilke i en etterfølgende PCR tilveiebringer spesifikk amplifikasjonsprodukter .
Figur 3 viser en gel med reaksjonsproduktene etter PCR-amplifikasjon. MWM III er en molekylvektmarkør (eluat 1,
øverst; eluat 2, nederst).
Eksempel 4
Binding av DNA- lengdestandard til magnetiske glasspartikler
1. Preparering av de magnetiske glasspartikler
Fra glassmagnetladningen GMP4 ble 12 mg tilsatt til Eppendorf-reaksjonskolber.
2. Lyse og binding
I en 1,5 ml Eppendorf-kolbe med 12 mg magnetiske glasspartikler ble det tilsatt 900 pl lyse-buffer (4,6 M GuSCN, 45 mM tris, 20 mM EDTA, pH 7,3) og 100 pl DNA-probe av DNA-léngdestandard III-modellen fra Boehringer Mannheim (katalog nr. 528552), og materialer ble blandet i 2 til 10 sekunder inntil det var dannet en homogen suspensjon. Suspensjonen ble inkubert i 20 minutter ved romtemperatur, hvorav 5 minutter under omrøring.
Magnetseparasjonen ble utført i minst 15 sekunder i en magnetpartikkelseparator. Supernatanten ble avpipettert.
3. Vask og tørking
De magnetiske glasspartikler ble vasket to ganger med vaskebuffer (5,2 M GuSCN, 50 mM tris, pH 6,5), to ganger med 70 % forhåndsavkjølt etanol og én gang med aceton, hvorved magnetfeltet var fjernet, 800 pl løsning ble utpipettert, blandet i 2 sekunder, inkubert i 1 minutt ved romtemperatur, magnetfeltet ble pålagt og supernatanten ble til slutt avpipettert .
Etter fjerning av acetonet ble partiklene tørket i 10 minutter ved 56 °C på et varmeelement.
4. Eluering av DNA
DNA ble eluert med 4 x 50 pl elueringsbuffer (10 mM tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8,0) idet løsningen ble inkubert ved 56 °C med gjentatte omrøringer, og den DNA-inneholdende supernatant ble til slutt overført til en ny Eppendorf-kolbe.
5. Analyse av eluatet
En femtedel av eluatvolumet ble tilsatt probebuffer og DNA ble atskilt på en 1 % agarosegel ved 90 V. For bestemmelse av resultatet ble en fortynningsrekke av DNA-lengdestandard III applisert på den samme gel i mengder som var til-svarende de forventede DNA-mengder i proben.
Den kvantitative evaluering ble utført ved skanning av et polaroidfoto av agarosegelen. Ved dette ble fortynnings-rekken av standarden anvendt som kalibrator.
Utbyttet av DNA med magnetiske glasspartikler er vist i tabell 1.
Agarosegelen som tjente som grunnlag for den kvantitative bestemmelse er vist i figur 4. Det handler om en 1 % etidiumbromidfarget agarosegel. Felt 1 til 10 tilsvarer en fortynningsrekke av DNA-lengdestandard III. 1: 1 ig DNA, 2: 200 ng DNA, 3: 175 ng DNA, 4: 150 ng DNA, 5: 125 ng DNA, 6: 100 ng DNA, 7: 75 ng DNA, 8: 50 ng DNA, 9: 25 ng DNA, 10:
10 ng DNA.
Felt 11 og 12 tilsvarer det eluerte DNA fra de magnetiske glasspartikler ved tilsetning av 200 ng DNA-lengdestandard.
Claims (43)
1. Magnetiske partikler,
karakterisert ved at de har en ytre glassoverflate som er vesentlig porefri eller har porer med en diameter mindre enn 10 nm, der glasset inneholder boroksid.
2. Magnetiske partikler ifølge krav 1, karakterisert ved at de har en gjennomsnittlig kornstørrelse på mindre enn 100 um.
3. Partikler ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at de har en kornstørrelse mellom 10 og 60 um.
4. Partikler ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at eventuelle porer på overflaten har en diameter mindre enn 1 nm.
5. Partikler ifølge ett av kravene 1-4, karakterisert ved at partiklene har en ferromagnetisk kjerne.
6. Partikler ifølge krav 5,
karakterisert ved at kjernen omfatter Fe2C>3 eller Fe304.
7. Partikler ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at partiklene inneholder et sammensatt materiale som omfatter en kjerne av glimmer hvorpå magnetittpartikler er immobilisert, der dette sammensatte materiale er omsluttet av et glassjikt.
8. Partikler ifølge ett av kravene 1-7, karakterisert ved at de kan bli fremstilt ved: - preparering av en magnetisk kjerne, - belegging av den magnetiske kjernen med en
vesentlig porefri glassoverflate ved å deponere en sol, som er dannet av en alkoholløsning
inneholdende alkoksider av nettverksdannende komponenter, på overflaten,
konvertere sol-laget til et gel-lag ved hjelp av en
spraytørkingsprosess og
deretter gjøre gelen kompakt.
9. Partikler ifølge krav 1,
karakterisert ved at de er bygget opp av et sammensatt materiale som består av en kjerne av glimmer belagt med Ti02 hvorpå magnetittpartikler er immobilisert, der det sammensatte materialet er omsluttet av glassjiktet.
10. Fremgangsmåte for. isolering av nukleinsyrer, karakterisert ved å: - kontakte en prøve som inneholder det biologiske materialet i en væske med partikler ifølge ett av kravene 1-5 ved betingelser der det biologiske materialet binder direkte til glassoverflaten, - separere det biologiske materialet fra væsken.
11. Fremgangsmåte ifølge krav 10, karakterisert ved at de magnetiske partiklene ikke er magnetisert på forhånd når de bringes i kontakt med prøven.
12. Fremgangsmåte for isolering av nukleinsyrer, karakterisert ved at den omfatter å: - kontakte en prøve som inneholder nukleinsyren i nativ form i en væske med magnetiske partikler med glassoverflater som er vesentlig porefrie eller som har porer med en diameter på mindre enn 10 nm, ved betingelser der nukleinsyrene i sin native form kan binde direkte til glassoverflaten og - separere de bundne nukleinsyrene fra væsken.
13. Fremgangsmåte ifølge krav 12,
karakterisert ved at de magnetiske partiklene ikke er magnetisert på'forhånd når de bringes i kontakt med prøven.
14. Prosess for fremstilling av magnetiske glasspartikler med kornstørrelse på mindre enn 100 um, karakterisert ved å - preparere en magnetisk kjerne og - .omgi den magnetiske kjernen med en vesentlig porefri glassoverflate ved å - deponere en sol, som er dannét av en alkoholløsning inneholdende alkoksider av nettverksdannende komponenter, på overflaten - konvertere sol-laget til et gel-lag ved hjelp av en spraytørkingsprosess og - deretter gjøre gelen kompakt.
15. Prosess ifølge krav 14,
karakterisert ved at glasset inneholder boroksid.
16. Anvendelse av ferromagnetiske partikler som har en ekstern glassoverflate som er vesentlig porefri eller som har porer med en diameter på mindre enn 10 nm for å isolere nukleinsyrer i nativ form.
17. Anvendelse ifølge krav 16, der glasset inneholder boroksid.
18. Anvendelse av magnetiske partikler med en ytre glassoverflate, der glasset inneholder boroksid, for å isolere nukleinsyrer i nativ form.
19. Fremgangsmåte for isolering av nukleinsyrer karakterisert ved at den omfatter å: - bringe en prøve som inneholder nukleinsyrene i nativ form i en væske i kontakt med magnetiske partikler som har en overflate av glass, i nærvær av kaotropiske midler ved betingelser der nukleinsyrene i nativ form kan binde direkte til overflaten og - separere de bundne nukleinsyrene fra væsken.
20. Fremgangsmåte ifølge krav 19, karakterisert ved at partiklene har en gjennomsnittlig kornstørrelse på mindre enn 100 um.
21. Fremgangsmåte ifølge krav 20, karakterisert ved at det magnetiske materialet er magnetitt (Fe304) eller Fe203.
22. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 19-21, karakterisert, ved at overflaten inneholder andre materialer.
23. Fremgangsmåte ifølge krav 22, karakterisert ved at de andre materialene er valgt fra:
24. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 19-23, karakterisert ved at partiklene omfatter en indre kjerne av magnetisk materiale på hvilken en ytre glassoverflate er påført.
25. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 19-24, karakterisert ved at en klinisk prøve, en prøvetype fra miljøanalyse, matanalyse eller molekylærbiologiforskning blir analysert.
26. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 19-25, karakterisert ved at prøven blir valgt fra blod, serum, orale skyllinger, urin, cerebralvæske, saliva, avføring, biopsiprøver og benmarg.
27. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 19-26, karakterisert ved at prøven blir valgt fra bakteriekulturer, faglysater og produkter av amplifiseringsprosedyrer.
28. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 19-27, karakterisert ved at DNA blir isolert.
29. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 19-27, karakterisert ved at RNA blir isolert.
30. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 19-29, karakterisert ved at prøven blir benyttet uten forbehandling.
31. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 19-30, karakterisert ved at prøven blir lysert ved å benytte en hensiktsmessig fremgangsmåte for å frigjøre det biologiske materialet som finnes i prøven.
32. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 19-31, karakterisert ved at konsentrasjonen av kaotropiske salter er mellom 2 og 8 mol/l, foretrukket mellom 4 og 6 mol/l.
33. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 19-32, karakterisert ved at de kaotropiske saltene er valgt fra natriumjodid, natriumperklorat, guanidiniumtiocyanat, guanidiniumisotiocyanat eller guanidiniumhydroklorid.
34. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 19-33, karakterisert ved at prøven blir inkubert sammen med partiklene i en tidsperiode på mellom 10 sekunder og 30 minutter.
35. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 19-34, karakterisert ved at separasjon av de bundne nukleinsyrene fra væsken blir oppnådd ved å separere nukleinsyrene som er bundet til de magnetiske partiklene ved å benytte et magnetisk felt.
36. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 19-35, karakterisert ved at de magnetiske partiklene blir vasket én eller flere ganger ved å benytte en vaskeløsning.
37. Fremgangsmåte ifølge krav 36, karakterisert ved at vasketrinnet omfatter å inkubere vaskeløsningen med partiklene, hvorved partiklene blir resuspendert.
38. Fremgangsmåte ifølge krav 37, karakterisert ved at resupenderingen blir oppnådd ved å benytte et magnetisk felt som ikke er identisk med det første magnetiske feltet.
39. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 36-38, karakterisert ved at tørketrinnet blir utført etter det siste vasketrinnet.
40. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 19-39, karakterisert ved at de rensede nukleinsyrene blir separert fra de magnetiske partiklene ved å benytte en elueringsbuffer.
41. Fremgangsmåte ifølge krav 40, karakterisert ved at elueringsbufferen har et saltinnhold på mindre enn 0,2 mol/l.
42. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 19-41, karakterisert ved at fremgangsmåten blir gjennomført som en enkeltrørsfremgangsmåte.
43. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 19-42, karakterisert ved at fremgangsmåten blir gjennomført på en automatisert måte.
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE19520398A DE19520398B4 (de) | 1995-06-08 | 1995-06-08 | Magnetisches Pigment |
DE19537985A DE19537985A1 (de) | 1995-06-08 | 1995-10-12 | Magnetisches Pigment |
PCT/EP1996/002459 WO1996041811A1 (de) | 1995-06-08 | 1996-06-06 | Magnetisches pigment |
CA002440504A CA2440504C (en) | 1995-06-08 | 1996-06-06 | Magnetic pigment |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO975772D0 NO975772D0 (no) | 1997-12-08 |
NO975772L NO975772L (no) | 1998-02-06 |
NO325384B1 true NO325384B1 (no) | 2008-04-14 |
Family
ID=34426455
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO19975772A NO325384B1 (no) | 1995-06-08 | 1997-12-08 | Magnetiske partikler med ytre glassoverflate, fremstilling av partiklene og fremgangsmate for isolering av nukleinsyre ved partiklene |
NO20072301A NO330520B1 (no) | 1995-06-08 | 2007-05-03 | Reagenspreparat til isolering av nukleinsyrer fra en prove, samt anvendelse av dette for isolering av nukleinsyrer |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO20072301A NO330520B1 (no) | 1995-06-08 | 2007-05-03 | Reagenspreparat til isolering av nukleinsyrer fra en prove, samt anvendelse av dette for isolering av nukleinsyrer |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US6255477B1 (no) |
EP (4) | EP0837871B1 (no) |
JP (2) | JP3950478B2 (no) |
CN (4) | CN1974781B (no) |
AT (3) | ATE368109T1 (no) |
AU (1) | AU707115B2 (no) |
CA (4) | CA2605671C (no) |
DE (5) | DE19520398B4 (no) |
DK (3) | DK1577389T3 (no) |
ES (3) | ES2247236T3 (no) |
HK (2) | HK1051048A1 (no) |
NO (2) | NO325384B1 (no) |
NZ (1) | NZ311648A (no) |
WO (1) | WO1996041811A1 (no) |
Families Citing this family (146)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB9425138D0 (en) | 1994-12-12 | 1995-02-08 | Dynal As | Isolation of nucleic acid |
DE19520398B4 (de) | 1995-06-08 | 2009-04-16 | Roche Diagnostics Gmbh | Magnetisches Pigment |
DE19854973B4 (de) * | 1998-11-30 | 2010-02-04 | Institut Für Neue Materialien Gem. Gmbh | Verfahren zur Reinigung von Nukleinsäuren |
KR100463475B1 (ko) | 1995-06-08 | 2005-06-22 | 로셰 디아그노스틱스 게엠베하 | 자기성피그먼트 |
JP2965131B2 (ja) * | 1995-07-07 | 1999-10-18 | 東洋紡績株式会社 | 核酸結合用磁性担体およびそれを用いる核酸単離方法 |
WO1997005184A1 (en) | 1995-07-28 | 1997-02-13 | The Dow Chemical Company | 2,7-aryl-9-substituted fluorenes and 9-substituted fluorene oligomers and polymers |
DE19622885A1 (de) * | 1996-06-07 | 1997-12-11 | Boehringer Mannheim Gmbh | Reagenzzubereitung enthaltend magnetische Partikel in Form einer Tablette |
US6027945A (en) | 1997-01-21 | 2000-02-22 | Promega Corporation | Methods of isolating biological target materials using silica magnetic particles |
US20050287583A1 (en) * | 1997-01-21 | 2005-12-29 | Promega Corporation | Methods and kits for isolating biological target materials using silica magnetic particles |
GB9709728D0 (en) | 1997-05-13 | 1997-07-02 | Dynal As | Single step method |
DE19743518A1 (de) * | 1997-10-01 | 1999-04-15 | Roche Diagnostics Gmbh | Automatisierbare universell anwendbare Probenvorbereitungsmethode |
WO1999040098A1 (de) * | 1998-02-04 | 1999-08-12 | Merck Patent Gmbh | Verfahren zur isolierung und aufreinigung von nucleinsäuren |
US7078224B1 (en) | 1999-05-14 | 2006-07-18 | Promega Corporation | Cell concentration and lysate clearance using paramagnetic particles |
US6194562B1 (en) | 1998-04-22 | 2001-02-27 | Promega Corporation | Endotoxin reduction in nucleic acid purification |
US5973138A (en) * | 1998-10-30 | 1999-10-26 | Becton Dickinson And Company | Method for purification and manipulation of nucleic acids using paramagnetic particles |
DE19851156C1 (de) | 1998-11-06 | 2000-04-27 | Merck Patent Gmbh | Verfahren zur Isolierung von Plasmid-DNA |
ES2205914T3 (es) * | 1998-11-30 | 2004-05-01 | Roche Diagnostics Gmbh | Particulas magneticas para la purificacion de acidos nucleicos. |
US6310199B1 (en) | 1999-05-14 | 2001-10-30 | Promega Corporation | pH dependent ion exchange matrix and method of use in the isolation of nucleic acids |
US6270970B1 (en) | 1999-05-14 | 2001-08-07 | Promega Corporation | Mixed-bed solid phase and its use in the isolation of nucleic acids |
DE19937607A1 (de) * | 1999-08-09 | 2001-02-15 | Bilatec Ges Zur Entwicklung Bi | Reagenzienkit zur Isolierung von Nukleinsäuren |
WO2001011364A1 (fr) * | 1999-08-09 | 2001-02-15 | Precision System Science Co., Ltd. | Procede d'etiquetage automatique faisant appel a un distributeur automatique, procede de separation automatique d'une substance cible, procede permettant de determiner la sequence de base et systeme de distribution automatique |
CZ20021608A3 (cs) | 1999-11-17 | 2003-06-18 | Roche Diagnostics Gmbh | Magnetické skleněné částice, metody jejich přípravy a použití |
US6936414B2 (en) | 1999-12-22 | 2005-08-30 | Abbott Laboratories | Nucleic acid isolation method and kit |
DE10006662A1 (de) | 2000-02-15 | 2001-08-23 | Antigen Produktions Gmbh | Gefäß zur Nukleinsäureanalytik |
DE10013995A1 (de) | 2000-03-22 | 2001-09-27 | Chemagen Biopolymer Technologi | Magnetische, silanisierte Trägermaterialien auf Basis von Polyvinylalkohol |
US7183002B2 (en) * | 2000-03-24 | 2007-02-27 | Qiagen, Gmbh | Porous ferro- or ferrimagnetic glass particles for isolating molecules |
DE10035953A1 (de) * | 2000-07-21 | 2002-01-31 | Fraunhofer Ges Forschung | Sphärische, magnetische Silica-Partikel mit einstellbarer Teilchen- und Porengröße sowie einstellbarem Magnetgehalt für die Aufreinigung von Nukleinsäuren und anderen Biomolekülen |
US20050239125A1 (en) * | 2000-09-06 | 2005-10-27 | Hodge Timothy A | Methods for genotype screening |
US7494817B2 (en) * | 2000-09-06 | 2009-02-24 | Transnet Yx, Inc. | Methods for genotype screening using magnetic particles |
US7011943B2 (en) * | 2000-09-06 | 2006-03-14 | Transnetyx, Inc. | Method for detecting a designated genetic sequence in murine genomic DNA |
US20050266494A1 (en) * | 2000-09-06 | 2005-12-01 | Hodge Timothy A | System and method for computer network ordering of biological testing |
US20050272085A1 (en) * | 2000-09-06 | 2005-12-08 | Hodge Timothy A | Methods for forensic and congenic screening |
US20040209303A1 (en) * | 2000-10-03 | 2004-10-21 | Martin Mark T. | Methods and compositions for directed microwave chemistry |
US7348182B2 (en) * | 2000-10-03 | 2008-03-25 | Mirari Biosciences, Inc. | Directed microwave chemistry |
AU2002211317A1 (en) * | 2000-10-03 | 2002-04-15 | Mirari Biosciences, Inc. | Methods and compositions for directed microwave chemistry |
DE10129815A1 (de) * | 2001-06-24 | 2003-01-09 | Profos Ag | Verfahren zur Aufreinigung von Bakterienzellen und Zellbestandteilen |
US6921283B2 (en) * | 2001-08-27 | 2005-07-26 | Trompeter Electronics, Inc. | BNC connector having visual indication |
DK1466018T3 (da) | 2002-01-08 | 2008-02-04 | Hoffmann La Roche | Anvendelse af silicamateriale i en amplifikationsreaktion |
CA2473376A1 (en) * | 2002-01-16 | 2003-07-31 | Dynal Biotech Asa | Method for isolating nucleic acids and protein from a single sample |
EP1376129B1 (en) * | 2002-06-27 | 2007-10-10 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | Magnetic carrier for biological substance, production method thereof and isolation method of biological substance using the same |
GB0215185D0 (en) | 2002-07-01 | 2002-08-07 | Genovision As | Binding a target substance |
AU2003236461B2 (en) | 2002-08-29 | 2009-05-28 | Epigenomics Ag | Improved method for bisulfite treatment |
US7560231B2 (en) | 2002-12-20 | 2009-07-14 | Roche Molecular Systems, Inc. | Mannitol and glucitol derivatives |
JP4073323B2 (ja) * | 2003-01-23 | 2008-04-09 | 日立ソフトウエアエンジニアリング株式会社 | 機能性ビーズ、その読み取り方法および読み取り装置 |
DE602004009038T3 (de) | 2003-01-29 | 2015-06-25 | Roche Diagnostics Gmbh | Verbessertes Verfahren zur Behandlung durch Bisulfit |
JP2004000922A (ja) * | 2003-03-26 | 2004-01-08 | Toyobo Co Ltd | 核酸またはタンパク質抽出用シリカ粒子組成物 |
CA2463719A1 (en) | 2003-04-05 | 2004-10-05 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Nucleotide analogs with six membered rings |
US8651113B2 (en) * | 2003-06-18 | 2014-02-18 | Swr&D Inc. | Magnetically responsive nanoparticle therapeutic constructs and methods of making and using |
DE10355409A1 (de) * | 2003-11-25 | 2005-06-30 | Magnamedics Gmbh | Sphärische, magnetische Silicagel-Träger mit vergrößerter Oberfläche für die Aufreinigung von Nukleinsäuren |
EP1692315A1 (en) | 2003-12-02 | 2006-08-23 | Roche Diagnostics GmbH | Improved method for bisulfite treatment |
ES2422583T3 (es) | 2004-02-10 | 2013-09-12 | Hoffmann La Roche | Detección de parvovirus B19 |
US20050287515A1 (en) * | 2004-06-24 | 2005-12-29 | Reinhold Deppisch | Removal of bacterial DNA from therapeutic fluid formulations |
US9267167B2 (en) | 2004-06-28 | 2016-02-23 | Becton, Dickinson And Company | Dissolvable films and methods including the same |
JP4476050B2 (ja) * | 2004-06-30 | 2010-06-09 | 株式会社ニデック | 視野計 |
EP1632578A1 (en) | 2004-09-03 | 2006-03-08 | Roche Diagnostics GmbH | DNA decontamination method |
EP1642648A1 (de) | 2004-09-30 | 2006-04-05 | Roche Diagnostics GmbH | Vorrichtung und Verfahren zum Einstellen einer Temperatur einer Flüssigkeit |
US20060234251A1 (en) * | 2005-04-19 | 2006-10-19 | Lumigen, Inc. | Methods of enhancing isolation of RNA from biological samples |
KR101157174B1 (ko) * | 2005-11-24 | 2012-06-20 | 삼성전자주식회사 | 세포 또는 바이러스의 신속한 파괴 방법 및 장치 |
EP1963526A4 (en) | 2005-12-09 | 2009-11-18 | Promega Corp | PURIFICATION OF NUCLEIC ACID WITH A BINDING MATRIX |
EP1932913B1 (en) | 2006-12-11 | 2013-01-16 | Roche Diagnostics GmbH | Nucleic acid isolation using polidocanol and derivatives |
CN102776173B (zh) | 2006-12-11 | 2014-10-29 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 使用聚多卡醇和衍生物的核酸分离 |
KR100850430B1 (ko) * | 2006-12-11 | 2008-08-05 | (주)바이오니아 | 입자상 물질을 사용하는 핵산 분리 방법 및 핵산 분리용조성물 |
KR101489830B1 (ko) * | 2006-12-18 | 2015-02-04 | 콜로로삐아 이탈리아 에스.피.에이 | 발열요법에 적용하기 위한 자성 나노 입자, 그의 제조 및 약리 적용을 갖는 구조체에의 용도 |
US8535888B2 (en) | 2006-12-29 | 2013-09-17 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Compositions and methods for detecting methicillin-resistant S. aureus |
DE102007035250A1 (de) * | 2007-07-27 | 2009-01-29 | Qiagen Gmbh | Verfahren zum Abtrennen von nicht-proteinhaltigen Biomolekülen, insbesondere Nukleinsäuren aus proteinhaltigen Proben |
EP2067867A1 (en) | 2007-12-03 | 2009-06-10 | Siemens Aktiengesellschaft | Process for concentrating nucleic acid molecules |
EP2108699B1 (en) | 2008-04-08 | 2014-06-25 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Analytical processing and detection device |
EP2138234A1 (en) | 2008-06-24 | 2009-12-30 | F. Hoffmann-Roche AG | Flexible disposable tip interface |
EP2186570A1 (en) | 2008-11-12 | 2010-05-19 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Method and device for separating a component bound to magnetic particles |
US8404347B2 (en) | 2009-01-26 | 2013-03-26 | Hong Kong Polytechnic University | Method of synthesis of amphiphilic magnetic composite particles |
US8911663B2 (en) * | 2009-03-05 | 2014-12-16 | Quebec Metal Powders, Ltd. | Insulated iron-base powder for soft magnetic applications |
EP2244268B1 (en) | 2009-04-23 | 2016-04-13 | Turbobeads GmbH | Process for manufacturing chemically stable magnetic carriers |
US8039613B2 (en) | 2009-08-28 | 2011-10-18 | Promega Corporation | Methods of purifying a nucleic acid and formulation and kit for use in performing such methods |
US8222397B2 (en) * | 2009-08-28 | 2012-07-17 | Promega Corporation | Methods of optimal purification of nucleic acids and kit for use in performing such methods |
US8697435B2 (en) * | 2009-08-31 | 2014-04-15 | Mbio Diagnostics, Inc. | Integrated sample preparation and analyte detection |
TWI407994B (zh) * | 2009-10-22 | 2013-09-11 | Ind Tech Res Inst | 分離核酸的方法、試劑及套組 |
WO2011077333A1 (en) * | 2009-12-23 | 2011-06-30 | Koninklijke Philips Electronics N.V. | Analyte measurement apparatus and method |
US8420801B2 (en) * | 2010-01-08 | 2013-04-16 | Roche Molecular Systems, Inc. | Recovery of nucleic acids from magnetic glass particles |
JP2010123984A (ja) * | 2010-01-12 | 2010-06-03 | Bando Chem Ind Ltd | 磁性粒子及び磁性粒子分散液 |
EP2345719A1 (en) | 2010-01-18 | 2011-07-20 | Qiagen GmbH | Method for isolating small RNA |
CN102363624B (zh) | 2010-06-18 | 2016-03-30 | 香港理工大学 | 使用两亲核-壳型纳米吸附剂对内毒素的去除 |
EP2423688B1 (en) | 2010-06-22 | 2016-03-23 | F. Hoffmann-La Roche AG | Suspension container for binding particles for the isolation of biological material |
EP2407540A1 (en) | 2010-07-15 | 2012-01-18 | Qiagen GmbH | Method for purifying a target nucleic acid |
EP2752671A3 (en) | 2010-07-23 | 2016-08-24 | Beckman Coulter, Inc. | System or method of including analytical units |
WO2012013733A1 (en) * | 2010-07-29 | 2012-02-02 | F. Hoffmann - La Roche Ag | Generic sample preparation |
DE102010034083A1 (de) | 2010-08-12 | 2012-02-16 | Süd-Chemie AG | Magnetische Glaspartikel zum Einsatz in Biogasanlagen, Fermentations- und Separationsprozessen |
EP2535712A1 (en) | 2011-06-15 | 2012-12-19 | F. Hoffmann-La Roche AG | Analytical system for the preparation of biological material |
GB201113698D0 (en) * | 2011-08-09 | 2011-09-21 | Wirtz Ralf M | Matrix and method for purifying and/or isolating nucleic acids |
WO2013024072A1 (en) | 2011-08-12 | 2013-02-21 | Qiagen Gmbh | Method for isolating nucleic acids |
ES2844324T3 (es) | 2011-11-07 | 2021-07-21 | Beckman Coulter Inc | Brazo robótico |
CN103975245A (zh) | 2011-11-07 | 2014-08-06 | 贝克曼考尔特公司 | 用于试样输送系统的磁阻尼 |
JP6062449B2 (ja) | 2011-11-07 | 2017-01-18 | ベックマン コールター, インコーポレイテッド | 標本コンテナ検出 |
JP6320926B2 (ja) | 2011-11-07 | 2018-05-09 | ベックマン コールター, インコーポレイテッド | 遠心分離機システムおよびワークフロー |
WO2013070756A2 (en) | 2011-11-07 | 2013-05-16 | Beckman Coulter, Inc. | System and method for processing samples |
JP6190380B2 (ja) | 2011-11-07 | 2017-08-30 | ベックマン コールター, インコーポレイテッド | 等分機システムおよびワークフロー |
EP2776152B1 (en) * | 2011-11-09 | 2018-03-28 | The Regents of The University of California | Superparamagnetic colloids with enhanced charge stability for high quality magnetically tunable photonic structures |
TWI575062B (zh) | 2011-12-16 | 2017-03-21 | 拜歐菲樂Ip有限責任公司 | 低溫注射組成物,用於低溫調節導管中流量之系統及方法 |
EP2607904B1 (en) | 2011-12-21 | 2020-01-15 | Roche Diagnostics GmbH | Method for disposing of a liquid within an automated analytical system, tip rack assembly and analytical system |
EP2634254A1 (en) | 2012-02-29 | 2013-09-04 | QIAGEN GmbH | Method for isolating nucleic acids from a food sample |
ES2567091T3 (es) | 2012-04-05 | 2016-04-19 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Compuestos de amina para la preparación selectiva de muestras biológicas |
CN104321443A (zh) | 2012-04-18 | 2015-01-28 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | Hev测定 |
DE102012210155A1 (de) * | 2012-06-15 | 2013-12-19 | Siemens Aktiengesellschaft | Verfahren zur Extraktion spezifischer Blutbestandteile und Kit zur Durchführung dieses Verfahrens |
US10233508B2 (en) | 2012-08-21 | 2019-03-19 | Qiagen Gmbh | Virus particle stabilisation and method for isolating viral nucleic acids |
EP2888363B1 (en) | 2012-08-21 | 2018-06-06 | Qiagen GmbH | Method for isolating nucleic acids from a formaldehyde releaser stabilized sample |
EP2893015B1 (en) | 2012-09-03 | 2018-05-02 | Qiagen GmbH | Method for isolating rna including small rna with high yield |
US20140322706A1 (en) | 2012-10-24 | 2014-10-30 | Jon Faiz Kayyem | Integrated multipelx target analysis |
CA2889415C (en) | 2012-10-24 | 2020-06-02 | Genmark Diagnostics, Inc. | Integrated multiplex target analysis |
US9938520B2 (en) | 2012-12-11 | 2018-04-10 | Qiagen Gmbh | Preparation of silica particles |
US10745686B2 (en) | 2013-02-08 | 2020-08-18 | Qiagen Gmbh | Method for separating DNA by size |
CN105120986B (zh) | 2013-03-15 | 2019-03-12 | 雅培分子公司 | 用于核酸纯化的一步程序 |
EP2969217A2 (en) | 2013-03-15 | 2016-01-20 | Genmark Diagnostics Inc. | Systems, methods, and apparatus for manipulating deformable fluid vessels |
US9409148B2 (en) | 2013-08-08 | 2016-08-09 | Uchicago Argonne, Llc | Compositions and methods for direct capture of organic materials from process streams |
CN105874258B (zh) | 2013-09-13 | 2018-01-02 | 生物膜Ip有限责任公司 | 用于调节导管中流体流动的磁性‑低温阀,系统和方法 |
US9498778B2 (en) | 2014-11-11 | 2016-11-22 | Genmark Diagnostics, Inc. | Instrument for processing cartridge for performing assays in a closed sample preparation and reaction system |
USD881409S1 (en) | 2013-10-24 | 2020-04-14 | Genmark Diagnostics, Inc. | Biochip cartridge |
US9663780B2 (en) | 2014-10-15 | 2017-05-30 | Alpaqua Engineering, LLC | Solid-core ring-magnet |
US10005080B2 (en) | 2014-11-11 | 2018-06-26 | Genmark Diagnostics, Inc. | Instrument and cartridge for performing assays in a closed sample preparation and reaction system employing electrowetting fluid manipulation |
US9598722B2 (en) | 2014-11-11 | 2017-03-21 | Genmark Diagnostics, Inc. | Cartridge for performing assays in a closed sample preparation and reaction system |
EP3059312A1 (en) | 2015-02-20 | 2016-08-24 | QIAGEN GmbH | Nucleic acid extraction method |
CN107614458B (zh) | 2015-05-01 | 2021-05-11 | 百进生物科技公司 | 稳定的纳米磁性颗粒分散体 |
WO2016193282A1 (en) | 2015-06-01 | 2016-12-08 | Qiagen Gmbh | Electrophoresis assisted method for purifying a target nucleic acid using a delayed elution approach |
US10794859B2 (en) | 2015-06-01 | 2020-10-06 | Qiagen Gmbh | Electrophoresis assisted method and device for purifying a charged target molecule from a sample |
WO2016193490A1 (en) | 2015-06-05 | 2016-12-08 | Qiagen Gmbh | Method for separating dna by size |
ES2785607T3 (es) | 2016-01-05 | 2020-10-07 | Hoffmann La Roche | Captura sucesiva de ácido nucleico mediante partículas de vidrio magnético |
US20190127697A1 (en) | 2016-04-30 | 2019-05-02 | BioLegend, Inc. | Compositions and methods for performing magnetibuoyant separations |
CA3023621C (en) | 2016-05-13 | 2021-07-27 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Protein-based sample collection matrices and devices |
CN106268649A (zh) * | 2016-08-11 | 2017-01-04 | 北京蛋白质组研究中心 | 一种磁性纳米材料及其在磷酸肽富集中的应用 |
CN109661467A (zh) | 2016-09-12 | 2019-04-19 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于纯化双链核酸的方法和组合物 |
CN106984280A (zh) * | 2017-03-16 | 2017-07-28 | 东华大学 | 一种用细菌纤维素球制备磁性金属吸附材料的方法 |
US11725200B2 (en) | 2017-09-27 | 2023-08-15 | Qiagen Gmbh | Method for isolating RNA with high yield |
EP3470141B1 (en) | 2017-10-11 | 2024-04-24 | F. Hoffmann-La Roche AG | Apparatus and method for processing a biological sample with magnetic particles |
EP4269582A3 (en) | 2017-12-21 | 2024-01-24 | F. Hoffmann-La Roche AG | Target enrichment by unidirectional dual probe primer extension |
CN107955810A (zh) * | 2017-12-25 | 2018-04-24 | 宁波卡尔新材料科技有限公司 | 一种新型动物肝脏核酸提取试剂盒及提取方法 |
EP3520893B1 (en) | 2018-02-02 | 2020-07-22 | F. Hoffmann-La Roche AG | System for the thermally controlled processing of a biological sample |
ES2936478T3 (es) | 2018-02-05 | 2023-03-17 | Hoffmann La Roche | Generación de moldes de ADN circular monocatenario para secuenciación de molécula individual |
CN111936635A (zh) | 2018-03-02 | 2020-11-13 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于单分子测序的单链环状dna模板的产生 |
EP3824484A1 (en) * | 2018-07-19 | 2021-05-26 | Beckman Coulter Inc. | Magnetic particles |
US11242519B2 (en) | 2018-08-23 | 2022-02-08 | Alpaqua Engineering, LLC | Discontinuous wall hollow core magnet |
CN109337309B (zh) * | 2018-08-30 | 2021-01-29 | 英芮诚生化科技(上海)有限公司 | 储水多孔二氧化硅磁性颗粒及其制备工艺与应用 |
EP3853362A1 (en) | 2018-09-21 | 2021-07-28 | F. Hoffmann-La Roche AG | System and method for modular and combinatorial nucleic acid sample preparation for sequencing |
US11591591B2 (en) | 2019-08-21 | 2023-02-28 | New England Biolabs, Inc. | Isolation of high molecular weight DNA using beads |
WO2021053008A1 (en) | 2019-09-20 | 2021-03-25 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Immune repertoire profiling by primer extension target enrichment |
CN112176029B (zh) | 2020-06-12 | 2021-05-14 | 中山大学达安基因股份有限公司 | 一种拭子核酸样本释放剂及其应用 |
EP4179113A1 (en) | 2020-07-08 | 2023-05-17 | F. Hoffmann-La Roche AG | Targeted depletion of non-target library molecules using poison primers during target capture of next-generation sequencing libraries |
US20220177950A1 (en) | 2020-12-03 | 2022-06-09 | Roche Sequencing Solutions, Inc. | Whole transcriptome analysis in single cells |
WO2024013241A1 (en) | 2022-07-14 | 2024-01-18 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Variant allele enrichment by unidirectional dual probe primer extension |
Family Cites Families (100)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US2913419A (en) | 1956-04-18 | 1959-11-17 | Du Pont | Chemical process and composition |
US2885366A (en) | 1956-06-28 | 1959-05-05 | Du Pont | Product comprising a skin of dense, hydrated amorphous silica bound upon a core of another solid material and process of making same |
DE2313331C2 (de) * | 1973-03-17 | 1986-11-13 | Merck Patent Gmbh, 6100 Darmstadt | Eisenoxidhaltige Glimmerschuppenpigmente |
US3945862A (en) * | 1973-06-26 | 1976-03-23 | Merck & Co., Inc. | Coated ferrous substrates comprising an amorphous magnesia-silica complex |
DE2625106C2 (de) | 1976-06-04 | 1982-03-11 | Bayer Ag, 5090 Leverkusen | Eisenoxidschwarz-Pigmente mit verbesserter Oxidationsbeständigkeit und Verfahren zu ihrer Herstellung |
US4126437A (en) | 1976-12-02 | 1978-11-21 | Xerox Corporation | Magnetic glass carrier materials |
US4124385A (en) | 1976-12-02 | 1978-11-07 | Xerox Corporation | Magnetic glass carrier materials |
US4124735A (en) | 1976-12-02 | 1978-11-07 | Xerox Corporation | Magnetic glass carrier materials |
DE2810995C2 (de) * | 1977-03-15 | 1985-02-14 | Hitachi, Ltd., Tokio/Tokyo | Magnetisches Adsorbens und Verfahren zu seiner Herstellung |
US4223169A (en) * | 1978-02-03 | 1980-09-16 | Ferro Corporation | Process for polybrominating bisphenoxyalkanes |
US4297337A (en) † | 1979-04-13 | 1981-10-27 | Corning Glass Works | Solid-phase immunoassays using magnetic glass |
US4233169A (en) * | 1979-04-13 | 1980-11-11 | Corning Glass Works | Porous magnetic glass structure |
US4395271A (en) | 1979-04-13 | 1983-07-26 | Corning Glass Works | Method for making porous magnetic glass and crystal-containing structures |
JPS5676510A (en) | 1979-11-28 | 1981-06-24 | Tdk Corp | Manufacture of magnetic recording material |
JPS56105337A (en) | 1980-01-28 | 1981-08-21 | Tdk Corp | Magnetic recording medium and its production |
US4280918A (en) | 1980-03-10 | 1981-07-28 | International Business Machines Corporation | Magnetic particle dispersions |
US4360441A (en) | 1981-06-25 | 1982-11-23 | Corning Glass Works | Glass-encapsulated magnetic materials and methods for making them |
US4448884A (en) * | 1982-03-03 | 1984-05-15 | Kms Fusion, Inc. | Glass-surface microcarrier for growth of cell cultures |
DE3211309A1 (de) | 1982-03-26 | 1983-09-29 | Metin Dipl.-Ing. 6100 Darmstadt Colpan | Chromatographisches verfahren zur isolierung von makromolekuelen |
US4628037A (en) | 1983-05-12 | 1986-12-09 | Advanced Magnetics, Inc. | Binding assays employing magnetic particles |
US4695393A (en) | 1983-05-12 | 1987-09-22 | Advanced Magnetics Inc. | Magnetic particles for use in separations |
US4554088A (en) * | 1983-05-12 | 1985-11-19 | Advanced Magnetics Inc. | Magnetic particles for use in separations |
US4695392A (en) | 1983-05-12 | 1987-09-22 | Advanced Magnetics Inc. | Magnetic particles for use in separations |
US4672040A (en) | 1983-05-12 | 1987-06-09 | Advanced Magnetics, Inc. | Magnetic particles for use in separations |
US4698302A (en) | 1983-05-12 | 1987-10-06 | Advanced Magnetics, Inc. | Enzymatic reactions using magnetic particles |
GB8401636D0 (en) | 1984-01-21 | 1984-02-22 | British Petroleum Co Plc | Coating process |
US5236623A (en) | 1984-07-11 | 1993-08-17 | Rhone-Poulenc Chimie | Process for the production of a silica colloid |
US4824712A (en) * | 1984-07-16 | 1989-04-25 | Ppg Industries, Inc. | Treatment of glass to reduce venting during thermal treatment and a glass article made thereby |
DE3603061A1 (de) * | 1985-03-01 | 1986-09-04 | Bbc Brown Boveri Ag, Baden, Aargau | Verfahren zur herstellung eines weichmagnetischen verbundwerkstoffes mit geringen wirbelstromverlusten auf der basis eines weichmagnetischen, metallischen werkstoffs und danach hergestellter verbundwerkstoff |
US4683195A (en) | 1986-01-30 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences |
US4683202A (en) | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
US5512332A (en) | 1985-10-04 | 1996-04-30 | Immunivest Corporation | Process of making resuspendable coated magnetic particles |
US5597531A (en) | 1985-10-04 | 1997-01-28 | Immunivest Corporation | Resuspendable coated magnetic particles and stable magnetic particle suspensions |
US5076950A (en) | 1985-12-20 | 1991-12-31 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Magnetic composition for particle separation |
US5206568A (en) | 1986-03-26 | 1993-04-27 | Beckman Instruments, Inc. | Coordinated control of stepper motors |
US4751211A (en) | 1986-08-07 | 1988-06-14 | Aluminum Company Of America | Composite adsorbent for removing acids from organophosphate functional fluids |
JPS63109105A (ja) | 1986-10-25 | 1988-05-13 | Chisso Corp | 強磁性金属微粒子の製造方法 |
DE3639949A1 (de) | 1986-11-22 | 1988-06-09 | Diagen Inst Molekularbio | Verfahren zur trennung von langkettigen nukleinsaeuren |
US4767670A (en) | 1987-01-21 | 1988-08-30 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Chromatographic supports for separation of oligonucleotides |
NO162946C (no) | 1987-08-21 | 1990-03-14 | Otto Soerensen | Anordning for magnetisk separasjon av celler. |
CA1339446C (en) † | 1987-03-02 | 1997-09-09 | Norman C. Nelson | Polycationic supports for nucleic acid purification, separation and hybridization |
DE3724442A1 (de) * | 1987-07-23 | 1989-02-02 | Europ Lab Molekularbiolog | Verfahren und vorrichtung zur reinigung von m-13-phagen-dna |
EP0343934B1 (en) * | 1988-05-24 | 1995-01-25 | Anagen (U.K.) Limited | Magnetically attractable particles and method of preparation |
US5312485A (en) | 1988-08-05 | 1994-05-17 | J. M. Huber Corporation | Precipitated encapsulated paper pigments and methods |
US5075430A (en) | 1988-12-12 | 1991-12-24 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Process for the purification of DNA on diatomaceous earth |
NL8900725A (nl) * | 1989-03-23 | 1990-10-16 | Az Univ Amsterdam | Werkwijze en combinatie van middelen voor het isoleren van nucleinezuur. |
US5234809A (en) | 1989-03-23 | 1993-08-10 | Akzo N.V. | Process for isolating nucleic acid |
US5352645A (en) * | 1989-04-14 | 1994-10-04 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Silica microspheres, method of improving attrition resistance and use |
US5055194A (en) | 1989-07-28 | 1991-10-08 | University Of Pennsylvania | Support for high performance liquid chromatography in a magnetically stabilized fluidized bed |
US5698271A (en) | 1989-08-22 | 1997-12-16 | Immunivest Corporation | Methods for the manufacture of magnetically responsive particles |
US5279936A (en) | 1989-12-22 | 1994-01-18 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Method of separation employing magnetic particles and second medium |
US5523231A (en) | 1990-02-13 | 1996-06-04 | Amersham International Plc | Method to isolate macromolecules using magnetically attractable beads which do not specifically bind the macromolecules |
GB9003253D0 (en) * | 1990-02-13 | 1990-04-11 | Amersham Int Plc | Precipitating polymers |
US5236783A (en) | 1990-02-21 | 1993-08-17 | Toda Kogyo Corp. | Superparamagnetic fine particles of iron oxide and magnetic recording media containing said particles |
US5316699A (en) | 1990-03-28 | 1994-05-31 | The United States Of America As Repesented By The Secretary Of Commerce | Process for the controlled preparation of a composite of ultrafine magnetic particles homogeneously dispersed in a dielectric matrix |
EP0478753B1 (en) | 1990-04-06 | 1997-07-02 | The Perkin-Elmer Corporation | Automated molecular biology laboratory |
US5763173A (en) | 1990-06-11 | 1998-06-09 | Nexstar Pharmaceuticals, Inc. | Nucleic acid ligand inhibitors to DNA polymerases |
US5693502A (en) | 1990-06-11 | 1997-12-02 | Nexstar Pharmaceuticals, Inc. | Nucleic acid ligand inhibitors to DNA polymerases |
US5210015A (en) | 1990-08-06 | 1993-05-11 | Hoffman-La Roche Inc. | Homogeneous assay system using the nuclease activity of a nucleic acid polymerase |
US5217804A (en) | 1990-11-06 | 1993-06-08 | Eastman Kodak Company | Magnetic particles |
US5155018A (en) | 1991-07-10 | 1992-10-13 | Hahnemann University | Process and kit for isolating and purifying RNA from biological sources |
US5395498A (en) | 1991-11-06 | 1995-03-07 | Gombinsky; Moshe | Method for separating biological macromolecules and means therfor |
US5734020A (en) | 1991-11-20 | 1998-03-31 | Cpg, Inc. | Production and use of magnetic porous inorganic materials |
US5610274A (en) † | 1991-11-20 | 1997-03-11 | Cpg, Inc. | Production and use of magnetic porous inorganic materials |
US5346994A (en) | 1992-01-28 | 1994-09-13 | Piotr Chomczynski | Shelf-stable product and process for isolating RNA, DNA and proteins |
EP0555798B1 (en) | 1992-02-13 | 1999-05-06 | Becton, Dickinson and Company | Hydrated celite and purification of DNA |
US5389482A (en) | 1992-04-23 | 1995-02-14 | Toda Kogyo Corp. | Magnetic particle powder included in magnetic toners for magnetic image character recognition |
TW221381B (no) | 1992-04-28 | 1994-03-01 | Du Pont | |
IT1256064B (it) * | 1992-07-28 | 1995-11-27 | Donegani Guido Ist | Metodo per la preparazione di geli porosi contenenti boro |
CA2107524C (en) | 1992-10-06 | 1999-01-19 | Hiromitsu Misawa | Iron oxide particles and process for producing the same |
US5578238A (en) | 1992-10-30 | 1996-11-26 | Lord Corporation | Magnetorheological materials utilizing surface-modified particles |
AU669398B2 (en) | 1992-11-13 | 1996-06-06 | Becton Dickinson & Company | Boron silicates aluminum silicates phosphosilicates and purification of DNA |
DE4307262A1 (de) * | 1993-03-02 | 1994-09-08 | Christian Bergemann | Magnetisches polymeres Siliciumdioxid |
US5648170A (en) | 1993-04-27 | 1997-07-15 | Toda Kogyo Corporation | Coated granular magnetite particles and process for producing the same |
AU7375794A (en) * | 1993-07-28 | 1995-02-28 | Akzo Nobel N.V. | Process for isolating nucleic acid from gram positive microorganisms |
WO1995006652A1 (en) * | 1993-08-30 | 1995-03-09 | Promega Corporation | Nucleic acid purification compositions and methods |
US5503816A (en) * | 1993-09-27 | 1996-04-02 | Becton Dickinson And Company | Silicate compounds for DNA purification |
US5438127A (en) | 1993-09-27 | 1995-08-01 | Becton Dickinson And Company | DNA purification by solid phase extraction using a PCl3 modified glass fiber membrane |
US5599627A (en) | 1993-10-08 | 1997-02-04 | Toda Kogyo Corporation | Magnetic particles comprising magnetite core and process for producing the same |
EP0775150B1 (de) | 1994-02-07 | 1999-04-28 | QIAGEN GmbH | Verfahren zur abreicherung oder entfernung von endotoxinen |
US5990301A (en) | 1994-02-07 | 1999-11-23 | Qiagen Gmbh | Process for the separation and purification of nucleic acids from biological sources |
GB9411572D0 (en) | 1994-06-09 | 1994-08-03 | Amersham Int Plc | Magnetic bead precipitation method |
EP0772776B1 (de) | 1994-07-27 | 2000-03-22 | Herbert Dr. Pilgrimm | Superparamagnetische teilchen, verfahren zur herstellung und deren verwendung |
US5582988A (en) | 1994-09-15 | 1996-12-10 | Johnson & Johnson Clinical Diagnostics, Inc. | Methods for capture and selective release of nucleic acids using weakly basic polymer and amplification of same |
US5705628A (en) | 1994-09-20 | 1998-01-06 | Whitehead Institute For Biomedical Research | DNA purification and isolation using magnetic particles |
US5660984A (en) | 1994-12-09 | 1997-08-26 | Davis; Thomas E. | DNA isolating apparatus comprising a non-porous DNA binding, anion exchange resin and methods of use thereof |
FR2732116B1 (fr) | 1995-03-21 | 1997-05-09 | Bio Merieux | Procede et dispositif pour la determination qualitative et/ou quantitative d'un analyte, notamment d'une bacterie, dans un echantillon, par voie magnetique |
US5683875A (en) | 1995-05-04 | 1997-11-04 | Hewlett-Packard Company | Method for detecting a target nucleic acid analyte in a sample |
IN188702B (no) | 1995-06-01 | 2002-10-26 | Degussa | |
DE19520964A1 (de) | 1995-06-08 | 1996-12-12 | Inst Neue Mat Gemein Gmbh | Beschichtete anorganische Pigmente, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung |
DE19520398B4 (de) | 1995-06-08 | 2009-04-16 | Roche Diagnostics Gmbh | Magnetisches Pigment |
JP2965131B2 (ja) | 1995-07-07 | 1999-10-18 | 東洋紡績株式会社 | 核酸結合用磁性担体およびそれを用いる核酸単離方法 |
US5783686A (en) | 1995-09-15 | 1998-07-21 | Beckman Instruments, Inc. | Method for purifying nucleic acids from heterogenous mixtures |
US5904848A (en) | 1996-02-21 | 1999-05-18 | Cpg, Inc. | Controlled pore glass-synthetic resin membrane |
US5972721A (en) | 1996-03-14 | 1999-10-26 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Air Force | Immunomagnetic assay system for clinical diagnosis and other purposes |
DE19622885A1 (de) | 1996-06-07 | 1997-12-11 | Boehringer Mannheim Gmbh | Reagenzzubereitung enthaltend magnetische Partikel in Form einer Tablette |
US6027945A (en) | 1997-01-21 | 2000-02-22 | Promega Corporation | Methods of isolating biological target materials using silica magnetic particles |
ATE229371T1 (de) | 1997-01-21 | 2002-12-15 | Grace W R & Co | Siliciumdioxidadsorbent auf magnetischem träger |
US5990479A (en) | 1997-11-25 | 1999-11-23 | Regents Of The University Of California | Organo Luminescent semiconductor nanocrystal probes for biological applications and process for making and using such probes |
US6368366B1 (en) * | 1999-07-07 | 2002-04-09 | The Lubrizol Corporation | Process and apparatus for making aqueous hydrocarbon fuel compositions, and aqueous hydrocarbon fuel composition |
-
1995
- 1995-06-08 DE DE19520398A patent/DE19520398B4/de not_active Revoked
- 1995-10-12 DE DE19537985A patent/DE19537985A1/de not_active Ceased
-
1996
- 1996-06-06 DK DK05004214T patent/DK1577389T3/da active
- 1996-06-06 AT AT05004214T patent/ATE368109T1/de active
- 1996-06-06 AT AT96921935T patent/ATE239031T1/de active
- 1996-06-06 ES ES02016299T patent/ES2247236T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-06 DE DE59610405T patent/DE59610405D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-06 ES ES05004214T patent/ES2290803T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-06 JP JP50259397A patent/JP3950478B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-06 DK DK02016299T patent/DK1281714T3/da active
- 1996-06-06 CN CN2006101016360A patent/CN1974781B/zh not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-06 AU AU63007/96A patent/AU707115B2/en not_active Expired
- 1996-06-06 CA CA2605671A patent/CA2605671C/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-06 CA CA002607563A patent/CA2607563A1/en not_active Abandoned
- 1996-06-06 WO PCT/EP1996/002459 patent/WO1996041811A1/de active IP Right Grant
- 1996-06-06 US US08/952,969 patent/US6255477B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-06 CA CA002223821A patent/CA2223821C/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-06 NZ NZ311648A patent/NZ311648A/xx not_active IP Right Cessation
- 1996-06-06 AT AT02016299T patent/ATE301665T1/de active
- 1996-06-06 EP EP96921935A patent/EP0837871B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-06 EP EP05004214.2A patent/EP1577389B2/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-06 DK DK96921935T patent/DK0837871T3/da active
- 1996-06-06 EP EP02016299A patent/EP1281714B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-06 CA CA002440504A patent/CA2440504C/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-06 EP EP05004213A patent/EP1602724A1/de not_active Withdrawn
- 1996-06-06 DE DE59611258T patent/DE59611258D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-06 DE DE59611440T patent/DE59611440D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-06 ES ES96921935T patent/ES2197947T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-06 CN CN96195985A patent/CN1106401C/zh not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-12-08 NO NO19975772A patent/NO325384B1/no not_active IP Right Cessation
-
1999
- 1999-06-06 CN CNA200610093596XA patent/CN1891833A/zh active Pending
-
2001
- 2001-01-10 US US09/756,743 patent/US6870047B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2002
- 2002-07-23 US US10/202,618 patent/US20030135038A1/en not_active Abandoned
-
2003
- 2003-02-27 CN CNB031066364A patent/CN1267447C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2003-05-07 HK HK03103250A patent/HK1051048A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2005
- 2005-08-29 JP JP2005248331A patent/JP4456046B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2005-10-14 HK HK05109110A patent/HK1075065A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-05-03 NO NO20072301A patent/NO330520B1/no not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
NO325384B1 (no) | Magnetiske partikler med ytre glassoverflate, fremstilling av partiklene og fremgangsmate for isolering av nukleinsyre ved partiklene | |
US7371830B2 (en) | Method for separating biological material from a fluid using magnetic particles | |
US6562568B1 (en) | Method, kit and apparatus comprising magnetic glass particles for the isolation of biomolecules | |
CA2287730C (en) | Method for purification and manipulation of nucleic acids using paramagentic particles | |
JPH11509742A (ja) | シリカ磁気粒子を使用する生物学的目標物質の分離法 | |
DE19549875B4 (de) | Verwendung von magnetischen Partikeln zur Isolierung von Nukleinsäuren | |
MXPA00003007A (en) | Automatable method for preparing samples which can be universally applied | |
MXPA98007681A (en) | Methods of isolating biological target materials using silica magnetic particles |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MK1K | Patent expired |