NO176480B - Analogifremgangsmåte ved fremstilling av målrettede former av metyltritio-anti-tumormidler - Google Patents
Analogifremgangsmåte ved fremstilling av målrettede former av metyltritio-anti-tumormidler Download PDFInfo
- Publication number
- NO176480B NO176480B NO884833A NO884833A NO176480B NO 176480 B NO176480 B NO 176480B NO 884833 A NO884833 A NO 884833A NO 884833 A NO884833 A NO 884833A NO 176480 B NO176480 B NO 176480B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- formula
- compound
- previously defined
- produce
- monoclonal antibody
- Prior art date
Links
- -1 Methyl Tritio Chemical class 0.000 title claims description 29
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 6
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 title description 5
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 57
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 42
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 23
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 19
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 229910052727 yttrium Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 claims description 7
- 125000002485 formyl group Chemical class [H]C(*)=O 0.000 claims description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims description 7
- 239000003972 antineoplastic antibiotic Substances 0.000 claims description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 6
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 6
- OFLXLNCGODUUOT-UHFFFAOYSA-N acetohydrazide Chemical compound C\C(O)=N\N OFLXLNCGODUUOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims description 4
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims description 4
- BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N sodium cyanoborohydride Chemical compound [Na+].[B-]C#N BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 4
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 claims description 3
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 3
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 2
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 claims description 2
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 27
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 239000000047 product Substances 0.000 description 19
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 13
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 13
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 12
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 11
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 10
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 10
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- DKIDEFUBRARXTE-UHFFFAOYSA-N 3-mercaptopropanoic acid Chemical class OC(=O)CCS DKIDEFUBRARXTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 9
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 8
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 8
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 7
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 239000012591 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Substances 0.000 description 5
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 5
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 5
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 5
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 4
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 4
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 4
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 4
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 4
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 3
- UEEYUKBCSWYSIQ-NSHDSACASA-N CC1=CC(OC2=CC(=CC=C12)NCC(=O)N(N)C([C@@H](N)CS)=O)=O Chemical compound CC1=CC(OC2=CC(=CC=C12)NCC(=O)N(N)C([C@@H](N)CS)=O)=O UEEYUKBCSWYSIQ-NSHDSACASA-N 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 3
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 3
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 3
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 3
- FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M sodium iodide Chemical compound [Na+].[I-] FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 3
- GJCVIQQPJSJYSY-UHFFFAOYSA-N 2-tert-butylsulfanylpropanoic acid Chemical compound OC(=O)C(C)SC(C)(C)C GJCVIQQPJSJYSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KMVPXBDOWDXXEN-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenylhydrazine Chemical compound NNC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 KMVPXBDOWDXXEN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 2
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N cystine group Chemical group C([C@@H](C(=O)O)N)SSC[C@@H](C(=O)O)N LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- 150000002019 disulfides Chemical class 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- WYVSLWNGZYMTPN-ZDUSSCGKSA-N ethyl (2r)-2-[[2-[(4-methyl-2-oxochromen-7-yl)amino]acetyl]amino]-3-sulfanylpropanoate Chemical compound CC1=CC(=O)OC2=CC(NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)OCC)=CC=C21 WYVSLWNGZYMTPN-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 238000004992 fast atom bombardment mass spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CZDYFANOONBAPE-UHFFFAOYSA-N (2,4-dicyclohexylimidazol-1-yl)-imidazol-1-ylmethanone Chemical compound C1(CCCCC1)C=1N=C(N(C(=O)N2C=NC=C2)C=1)C1CCCCC1 CZDYFANOONBAPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OZOLRGZAVBQRBG-UHFFFAOYSA-N (2-methyl-3-nitrophenyl)boronic acid Chemical compound CC1=C(B(O)O)C=CC=C1[N+]([O-])=O OZOLRGZAVBQRBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RDEIXVOBVLKYNT-VQBXQJRRSA-N (2r,3r,4r,5r)-2-[(1s,2s,3r,4s,6r)-4,6-diamino-3-[(2r,3r,6s)-3-amino-6-(1-aminoethyl)oxan-2-yl]oxy-2-hydroxycyclohexyl]oxy-5-methyl-4-(methylamino)oxane-3,5-diol;(2r,3r,4r,5r)-2-[(1s,2s,3r,4s,6r)-4,6-diamino-3-[(2r,3r,6s)-3-amino-6-(aminomethyl)oxan-2-yl]o Chemical compound OS(O)(=O)=O.O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H](CC[C@@H](CN)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N.O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H](CC[C@H](O2)C(C)N)N)[C@@H](N)C[C@H]1N.O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N RDEIXVOBVLKYNT-VQBXQJRRSA-N 0.000 description 1
- NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N (2s)-2,6-diaminohexanoic acid;(2s)-2-hydroxybutanedioic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N 0.000 description 1
- MWIXENPCUPDSOS-QMMMGPOBSA-N (2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanehydrazide Chemical compound NNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 MWIXENPCUPDSOS-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- XCBQVDUZOQKDCX-UHFFFAOYSA-N (4-nitrophenyl) 2-tert-butylsulfanylpropanoate Chemical compound CC(C)(C)SC(C)C(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XCBQVDUZOQKDCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 1,3-dicyclohexylurea Chemical compound C1CCCCC1NC(=O)NC1CCCCC1 ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930189413 Esperamicin Natural products 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- VQTUBCCKSQIDNK-UHFFFAOYSA-N Isobutene Chemical group CC(C)=C VQTUBCCKSQIDNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-N Methanethiol Chemical compound SC LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000187722 Micromonospora echinospora Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N Propionic acid Substances CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000473945 Theria <moth genus> Species 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010564 aerobic fermentation Methods 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- GLNDAGDHSLMOKX-UHFFFAOYSA-N coumarin 120 Chemical compound C1=C(N)C=CC2=C1OC(=O)C=C2C GLNDAGDHSLMOKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- LJQQFQHBKUKHIS-WJHRIEJJSA-N esperamicin Chemical compound O1CC(NC(C)C)C(OC)CC1OC1C(O)C(NOC2OC(C)C(SC)C(O)C2)C(C)OC1OC1C(\C2=C/CSSSC)=C(NC(=O)OC)C(=O)C(OC3OC(C)C(O)C(OC(=O)C=4C(=CC(OC)=C(OC)C=4)NC(=O)C(=C)OC)C3)C2(O)C#C\C=C/C#C1 LJQQFQHBKUKHIS-WJHRIEJJSA-N 0.000 description 1
- 238000010931 ester hydrolysis Methods 0.000 description 1
- YVKSGVDJQXLXDV-BYPYZUCNSA-N ethyl (2r)-2-amino-3-sulfanylpropanoate Chemical compound CCOC(=O)[C@@H](N)CS YVKSGVDJQXLXDV-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- PQJJJMRNHATNKG-UHFFFAOYSA-N ethyl bromoacetate Chemical compound CCOC(=O)CBr PQJJJMRNHATNKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 229940042795 hydrazides for tuberculosis treatment Drugs 0.000 description 1
- IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N hydrazine monohydrate Substances O.NN IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BRWIZMBXBAOCCF-UHFFFAOYSA-N hydrazinecarbothioamide Chemical compound NNC(N)=S BRWIZMBXBAOCCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007857 hydrazones Chemical class 0.000 description 1
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 210000003519 mature b lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- BRMYZIKAHFEUFJ-UHFFFAOYSA-L mercury diacetate Chemical compound CC(=O)O[Hg]OC(C)=O BRMYZIKAHFEUFJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- LDTLDBDUBGAEDT-UHFFFAOYSA-N methyl 3-sulfanylpropanoate Chemical compound COC(=O)CCS LDTLDBDUBGAEDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 150000005599 propionic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- DUIOPKIIICUYRZ-UHFFFAOYSA-N semicarbazide Chemical compound NNC(N)=O DUIOPKIIICUYRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 1
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000009518 sodium iodide Nutrition 0.000 description 1
- 239000012265 solid product Substances 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid Substances OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/20—Carbocyclic rings
- C07H15/203—Monocyclic carbocyclic rings other than cyclohexane rings; Bicyclic carbocyclic ring systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
- A61K47/6807—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
- A61K47/6809—Antibiotics, e.g. antitumor antibiotics anthracyclins, adriamycin, doxorubicin or daunomycin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/20—Carbocyclic rings
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
Denne oppfinnelsen vedrører en analogifremgangsmåte for å fremstille de terapeutisk aktive målrettede derivatene
av forbindelser med formelen CH3SSS-W, hvori CH3SSS-W er et antitumor antibiotikum LL-E33288a1<Br>, a-^, a2Br, a2<J>, a3<Br>, a3<J>,
<* 4Br, Pj<*>, PX<J>, P2<Br>, P2<J>, 7i<Br>, 7i<J>, SX<J>, BBM-1675, FR-900405, FR-900406, PD 114759, PD 115028, CL-1577A, CL-1577B, CL-1577D, CL-1577E eller CL-1724.
Beskrivelse av tegningene
Figur I: Ultrafiolett spekter av det antitumor antibiotikum
som er betegnet som LL-E33288'Y1<J->
Figur II: Protonmagnetiske resonans-spekteret for det antitumor antibiotikum som er betegnet som LL-E33288'Y1<J.>
Figur III:Infrarød spekteret av det antitumor antibiotikum
som er betegnet LL-E3 3288'Y1J.
Familien av antibakterielle og antitumor midler, kollek-tivt kjent som LL-E33 288 komplekset, er beskrevet og krevet i en parallell U.S. patentsøknad, serie nummer 009.321, innlevert 30. januar 1987, og blir brukt til å fremstille de disvovel antitumormidlene som er utgangsmaterialer for målrettede former av antitumor-midlene ifølge vår oppfinnelse.
Søknaden med serienummer 009.321 beskriver LL-E33288 komplekset, komponentene i dette, nemlig LL-E33288a1<Br>, LL-E33288aL<J>, LL-E33288a2<Br>, LL-E33288a2<J>, LL-E33288a3<Br>, LL-E33288a3<J>, LL-E33288a4<Br>, LL-E33288/31<Br>, LL-E33288/31<J>, LL-E33288/32<Br>, LL-E33288/32<J>, LL-E3 3 288-Y]81", LL-E3 3288"i1J og LL-E3328861<J>, og fremgangsmåter for deres fremstilling ved aerob fermentering ved bruk av en ny stamme av Micromonospora echinospora ssp calichensis eller naturlige eller avledete mutanter derav. Serie nr. 009.3 21 åpenbarer også foreslåtte strukturer for noen av de ovenfor navngitte komponenter.
Disse foreslåtte strukturene er gjengitt i tabell 1.
Visse andre antibiotika er nyttige i vår oppfinnelse, nemlig: 1) Esperamicin BBM-1675, en ny klasse av potente antitumor antibiotika. I. Physico-chemical data and partial structure. M. Konishi, et al.. J. Antibiotics, 38, 1605
(1985). A new antitumor antibiotic complex, M. Konishi, et al., U.K. patentsøknad, GB 2.141.425A, 15. mai, 1984. 2) New antitumor antibiotics, FR-900405 og FR-900406.I. Taxonomy of the producing strain. M. Iwami, et al., J.. Antibiotics 38, 835 (1985). New antitumor antibiotics FR-900405 og FR-900406.il. Production, isolation, characterization and antitumor activity. S. Kiyoto, et al., J. Antibiotics, 38, 340 (1985). 3) PD 114759 and PD 115028, novel antitumor antibiotics with phenomenal potency. I. Isolation and characterization. R.H. Bunge, et al., J. Antibiotics, 37, 1566 (1984). Biological and biochemical activities of the novel antitumor antibiotic PD 114759 and related derivativs. D.W. Fry et al., Investigational New Drugs, 4, 3 (1986). 4) New antibiotic complex CL-1577A, CL-1577B produced by Streptomyces sp ATCC 39363. Europeisk patentsøknad 0.132.081, A2 . 5) CL-1577D og CL-1577E Antibiotic antitumor compounds, their production and use. U.S. patent 4.539.203. 6) CL-1724 Antibiotic compounds, their production and use. U.S. patent 4.554.162.
De fullstendige strukturene av esperamicinene Alf A2 og Alb (BBM-1675 komplekset) er blitt rapportert og disse er tatt med i tabell 1. De fysikalske karakteristika for de ovenfor nevnte antitumor antibiotika indikerer at de alle er identiske eller svært like i struktur med esperamicinene, og alle inneholder en metyltritio funksjonell gruppe.
Som det kan sees av strukturene som er åpenbart ovenfor inneholder hvert av de antibiotiske stoffene alf a2, a3, a4, Æl' @2' °9 ^ komponentene av LL-E33288 komplekset, såvel som BBM-1675, FR-900405, FR-900406, PD 114759, PD 115028, CL-1577A, CL-1577B, CL-1577D, CL-1577E og CL-1724 en metyltritio-gruppe i sin struktur. Metyltritiogruppen i de ovenfor nevnte antibiotika er gjenstand for utbytning med flere forskjellige tiol-holdige organiske molekyler, hvilket resulterer i dannelsen av en ny klasse midler mot kreft og mot bakterier.
De følgende fremgangsmåtealternativer karakteriserer oppfinnelsen.
Det er nå blitt oppdaget at utbytningen av metyltritiogruppen i de forbindelsene som er oppført i tabell 1 og som er beskrevet i skjema I, kan anvendes til å introdusere en spacer (Sp) som ved et skjønsomt valg av denne gjør det mulig å innføre målrettende enheter i forbindelsene i de ovenfor nevnte patentene og anvendelsene.
Skjema I
hvori Sp er en toverdig (C1-C10) alkylengruppe med rett eller forgrenet kjede, toverdig aryl eller heteroarylradikal, og Q
er H
i acetonitril i nærvær av en ekvivalent av trietylamin og/eller en ekvivalent eddiksyre ved -10 til -30°C i 1 til 48 timer, å isolere mellomproduktet med formelen Q-Sp-SS-W, hvori Q, Sp og W er som tidligere definert heri, deretter å omsette forbindelsen med formelen Q-Sp-SS-W hvori Sp, Q og W er som tidligere definert heri, med et molekyl med formelen Tu-Y hvori Tu-Y er et mono- eller polyklonalt antistoff, dets fragmenter, dets kjemisk eller genetisk manipulerte motstykker, eller vekstfaktorer; Y er en side-kjede amino eller karboksyfunksjon av antistoffet; n er 1-100, i vandig buffer ved en pH på mellom 6,5 og 9, ved 4 til 40°C enten direkte eller i nærvær av et vannløselig karbodiimid, for å frembringe forbindelsen hvori Tu, Sp, W, n og Y er som tidligere definert heri, m er 1-15 og Z er dannet ved kovalent reaksjon av gruppene Q og Y og er -CONH-, -NH-,
-N=CH-, eller -C02-
eller
å omsette forbindelsen med formelen Q-Sp-SS-W, hvori Sp og W er som tidligere definert heri, og Q er
med et molekyl med formelen Tu-(Y)n,
hvor Tu og n er som tidligere definert heri, og Y er en sidekjede aminogruppe, i en vandig bufret løsning med en pH mellom 6,5 og 9, ved en temperatur på mellom 4 og 4 0°C, innbefattet, for å frembringe forbindelser med formelen :
hvori Tu, Sp, Y og n er som tidligere definert heri, m er 1-15, og Z er dannet ved kovalent reaksjon mellom Q og Y og er definert som -CONH-
eller
å omsette en forbindelse med formelen Q-Sp-SS-W, hvori Sp og W er som tidligere definert heri, og Q er -CONHNH2 med salpeter-syrling i vandig acetonitril for å frembringe en forbindelse med formelen Q-Sp-SS-W, hvori Sp og W er som tidligere definert heri og Q er -CON3 med en forbindelse med formelen Tu-(Y)n,, hvori Tu, Y og n er som tidligere definert heri for å frembringe en forbindelse med formelen
hvori Tu, Z, Sp, W, m, Y og n er som heri definert ovenfor;
eller
å omsette en forbindelse med formelen Q-Sp-SS-W hvori Sp og W er som tidligere definert heri og Q er -CONHNH2, med et molekyl med formelen Tu-(Y)n hvori Tu er som tidligere definert heri, Y er et aldehyd frembragt fra karbohydratresiduer på Tu ved oksydasjon i nærvær av et periodat av et alkalisk jordmetall i en vandig buffer med pH mellom 4,0 og 6,5, ved 4 til og med 4 0°C, og n er 1 til 20 for å frembringe en forbindelse med formelen:
hvori Tu, Sp, W, Y og n er som tidligere definert heri, og Z er laget ved kovalent reaksjon av Q og Y og er -CONHN=CH-, og m er 0,1 til 15; eller å behandle forbindelse umiddelbart ovenfor med formelen: hvori Tu, Z, Sp, W, Y, n og m er som umiddelbart ovenfor definert med acetylhydrazin i en vandig buffer ved pH mellom 4,0 og 6,5, ved 4 til og med 4 0°C, for å frembringe en forbindelse med formelen:
hvori Tu, Z, Sp, W, n og m er som umiddelbart ovenfor definert, og Y er -CH=NNHCOCH3,
og
å omsette denne forbindelsen med natriumcyanborhydrid i en vandig buffer ved pH på 4,0 til 6,5, ved en temperatur på 4 til og med 40°C, for å frembringe en forbindelse med formelen:
hvori Tu, Sp, W, m og n er som tidligere definert heri, Z er
-C0NHNHCH2-, og Y er -CH2NHNHCOCH3.
Som et eksempel kan 3-merkaptopropionsyre-derivatet av E-33288-Y!11 (Q=C02H, Sp=-CH2CH2-) , når det er omdannet til sin aktiverte form hydroksy-ravsyreimid (Q=C02Su, Sp=-CH2-CH2-) brukes til å reagere med noen av e-aminogruppene i lysinrestene (f.eks. Tu=monoklonalt antistoff, Y=-NH2 hvori n=50-100 fra tilgjengelige lysinrester), ved en pH mellom 7,0 og 9,5 i vandige bufrede løsninger ved temperaturer mellom 4 og 40°C for å frembringe målrettede former av de antibiotika som er bundet til vilkårlige seter langs protein-ryggraden (Tu=monoklonalt antistoff, Z=-NHCO-, Sp=-CH2CH2-, irt-1-10) .
Bare en del av de tilgjengelige lysinrestene blir substituert på denne måten, da et høyt innhold vanligvis ikke blir betraktet som forlikelig med å befare antistoffimmuno-reaktiviteten. De samme vilkårlig substituerte immunokonjugatene kan også fremstilles fra 3-merkaptopropionsyre-derivatet ved bruk av andre karboksylgruppe-aktiverende midler, så som flere forskjellige karbodiimider, eller det tilsvarende acylazidet. Alternativt, et 3-merkaptopropionylhydrazid-derivat av E-33288-Y!<17> (Q=H2NNHCO-, Sp=-CH2CH2-) , når det reageres med et periodatoksydert antistoff (Tu=monoklonalt antistoff, Y=-CHO, n=l-15) som beskrevet i U.S. patent nr. 4.671.958 ved en pH mellom 4 og 7, i en bufret vandig løsning ved en temperatur på mellom 4 og 4 0°C, reagerer bare ved aldehyd-funksjonen (avledet ved spaltning av vic-dioler av karbohydratrester plassert på Fc-delen av antistoffene) for å frembringe monoklonale antistoff-konjugater som inneholder medikamentet substituert på spesifikke seter langs ryggraden av proteinet (Tu=mono-klonalt antistoff, Z=-CH=NNHCO-, SP=-CH2CH-, m=0,5-10). For å blokkere ureagerte aldehyd-grupper på antistoffet, og således unngå tverrbinding, såvel som for å stabilisere de hydrlytisk labile Schiffs base bindingene, foretrekkes det (selvom det ikke er nødvendig) å reagere det sistnevnte konjugatet først med en forbindelse så som acetylhydrazid eller tyrosin-hydrazid, deretter redusere med natrium-cyanborhydrid eller natriumborhydrid for å fremstille de stabiliserte konstruksjonene ifølge denne oppfinnelsen (Tu=monoklonalt antistoff, Z=-CH2NHNHCO-, Sp=-CH2CH2-, m=0,5-10). Andre aldehydreaktive grupper som del av medikament-konstruksjonen er innenfor vår oppfinnelse for å frembringe produktene ifølge skjema II. Slike funksjonelle grupper er fortrinnsvis, skjønt ikke begrenset til, de som reagerer med aldehyder under sure vandige betingelser. Reaktiviteten av proteinlysiner under basiske betingelser er tilstrekkelig stor, slik at deres aminer konkurrerer med produktene ifølge skjema II om tilgjengelige aldehyder i det monoklonale antistoffet. Alternative aldehydreaktive grupper er f.eks. semikarbazidet, tiosemikarbazidet, og de oksygen-
substituerte hydroksy1amin-funksjonene.
Som et annet eksempel kan et monoklonalt antistoff reageres med 3-(2-ditiopyridyl)-propionsyre-hydroksyravsyreimidester for å modifisere proteinet med lysinrester (Tu=monoklonalt antistoff, Y=NH2, n=50-l00, Q=-C02Su, Sp=-CH2-CH2-, P=2-pyridyltio). Etter reduksjon med f.eks. ditiotreitol dannes et mellomprodukt (Tu=monoklonalt antistoff, Z=-NHCO-, Sp=-CH2CH2-, m=l til 15) som kan reageres med forbindelsene i tabell 1 for å frembringe de aktuelle immunokonjugatene. På samme måten kan 2-iminotiolan reageres med et monoklonalt antistoff for å innføre tiolgrupper direkte på overflaten av proteinet, uten at det er nødvendig med et reduksjonstrinn (Tu=monoklonalt antistoff, Z=-NHCO-, SP-(CH2) 3-m=l til 15), og dette mellomproduktet kan reageres med forbindelsene i tabell 1 som tidligere. Alternativt kan sulfhydryl-grupper opp-rinnelig tilstede i strukturen av monoklonale antistoffer i dimer form som cystinrester godt brukes til å delta i reaksjonen ifølge skjema III direkte. Slike sulfhydryler blir tradisjonelt eksponert ved en kombinasjon av enzymatisk spalting og reduksjon av naturlige monoklonale antistoffer Tu=Fab' fragment, Z-Sp=binding, Y=SH), men bruken av genetisk forandrede konstruksjoner av monoklonale antistoffer som inneholder uparrede cystinrester blir også vurdert.
Flere forskjellige monoklonale antistoffer (MoAs'er) blir brukt som eksempler på målretting av metyltritio-forbindelsene mot kreft. MoAs'ene Lym 1 og Lym 2 kan skille mellom forskjellige antigener på modne B-lymfocytter og deres produkt lymfomas. Fremstillingen og karakteristikken av disse MoAs'ene er beskrevet av A.L. Epstein, et al., "Cancer Research" 47, 830 (1987). Man har også bemerket MoAs B72,3 mål først og fremst for karcinom i brystene og kolon, ved reaktivitet med pankreas-ovarie- og lunge-karcinom. Antistoffet er beskrevet av T.L. Klug et al., "Int. J. Cancer" 38, 661, (1986). MoAs CT-M-01, som gjenkjenner først og fremst brysttumorer, er beskrevet i EPO søknad 86 401482.4 innlevert 3. juli 1986, og MAC-68 blir fremstilt ved en sub-klon av hybridoma som frembringer CT-M-01, og gjenkjenner både bryst- og kolon-karcinom. Mellomprodukter for de aktuelle forbindelsene som er nyttige for, og konjugerer med disse antistoffene, er beskrevet i den eksperimentelle delen. Det skal allikevel ikke forstås et dette patentet er begrenset til eller avgrenset ved de foran nevnte antistoffene. I stedet er metodologien tilstrekkelig generell til at det kan anvendes på alle antistoffer, uansett klasse eller isotype, deres enzymatisk avledede fragmenter, deres kjemisk manipulerte og stabiliserte fragmenter, såvel som deres respektive chimere og humaniserte motstykker. Heller ikke er de målrettende enhetene begrenset bare til monoklonale antistoffer. Andre proteiner såvel som små molekyler for hvilket det finnes reseptorer i målvev, er innenfor rammen av vår oppfinnelse som målrettende enheter.
Fremgangsmåtene ifølge denne oppfinnelsen som brukes til å frembringe monoklonale antistoff-konjugater fra forbindelsene i tabell 1, gir konstruksjoner som opprettholder god immunoreaktivitet med målcellelinjer, som bestemt ved de følgende in vitro undersøkelsene:
Målceller
Alle målcellene ble holdt i RPMI 1640 media tilsatt 5 % fetalt kalveserum (FCS), ITS (Collaborative Research, Cat# 40351), streptomycin (50 ug/ ml), penicillin (50 enheter/ml), gentamycinsulfat (50 /-tg/ml) og glutamin (0,03 %) . Cellene ble oppbevart i en fuktig 5 % C02 inkubator ved 37°C.
I. Immunoreaktivitets- undersøkelser
Prosedyre I - Elisa
Egnede målceller ble høstet, tellet og suspendert i Dulbecco's fosfatbufret saltløsning (DPBS) ved optimal konsentrasjon for testing av monoklonalt antistoff (MoAs). 0,1 ml celler ble alkvotert i hver av brønnene med steril vevskultur i en polystyrenplate med 96 brønner. Platene ble sentrifugert i 5 minutter ved 1.000 RPM og supernatanten ble slått vekk. Platene ble lufttørket over natten og kan lagres ved 4°C for opptil 3 måneder.
Ikke-spesifikke bindingsseter ble blokkert ved å tilsette 200 Ml av en 1% gelatin i DPBS pr. brønn, og inkubere platen i 1 time ved 37°C i en fuktig inkubator. (Alle påfølgende inkubasjoner blir utført under lignende betingelser). Platene ble vasket en gang med 250 jxl av 0,05 % TWEEN-20 i DPBS (vaske-løsning) ved å bruke det automatiserte ELISA vaske-systemet fra Dynatech (Ultrawash II). Prøvene som skulle undersøkes ble fortynnet til en endelig konsentrasjon på 3 Mg/ml MoAs ekvivalenter i 0,1 % gelatin-DPBS. Seks ytterligere tre-ganger serie fortynninger ble laget fra hver 3 /xg/ml prøve, og 100 ul ble tilsatt til angjeldende brønner i triplikat. Bare bunnrekken av brønnene fikk 100 /ul av 0,1 % gelatin som bakgrunn. Platene ble inkubert i 45 minutter og deretter vasket tre ganger. Alkalisk fosfatase-konjugerte affinitetsrensede geit anti-mus immunoglobuliner (Cappel Cat# 8611-0231) ble fortynnet 1:125 i 0,1 % gelatin, og 100 ul ble tilsatt til hver brønn. Platene ble inkubert i 45 minutter og deretter vasket tre ganger. 200 fil av p_-nitrofenylfosfat-substratløsning (se nedenfor) ble tilsatt til hver brønn. Etter 45 minutter ved romtemperatur ble reaksjonen stoppet ved tilsetning av 50 fj. 1 3M NaOH. Absorbansen av innholdet av hver brønn ble avlest ved 4 05 nm i det automatiserte spektrofoto-meter fra Dynatech (EIA Autoreader # EL-310).
Substrat dietanolamin- buffer ( 10 %\
97 ml dietanolamin
800 ml vann
0,2 g NaN3
100 mg MgCl2'6H20
Reagensene ble oppløst ved kontinuerlig omrøring og IM HCl ble tilsatt inntil pH var 9,8. Samlet volum ble gjort opp til 1 liter med vann og filter-sterilisert med et 0,2 nm filter. Bufferen ble lagret i mørke ved 4°C. Umiddelbart før bruk ble p-nitrofenylfosfat (Sigma, Cat# 104-40) løst i den 10 %-ige dietanolamin-bufferen (må være ved romtemperatur) for å gi en endelig konsentrasjon på 1 mg/ml.
Beregning av O. D. verdier
Bindingsprosenten i hver prøve ble beregnet ved følgende
ligning:
A = Gjennomsnittlig O.D. av testprøven
B = Gjennomsnittlig O.D. for bakgrunnen
C = Gjennomsnittlig O.D. av 3 ^g/ml ikke-manipulert MoAs-kontroll
Bindingsprosenten ble avsatt på ikke-log skalaen i et semi-log diagram, og MoAs konsentrasjonen ble avsatt på log-skalaen. BD50 (dvs. den dosen av antistoff som er nødvendig for å gi 50 % binding) av hver testprøve ble tatt ut av diagrammet, og retensjonsmengden av immunoreaktivitet ble beregnet ved følgende ligning:
Prosedyre 2 - indirekte RIA
Høvelige mengder av målceller i 0,2 ml av 10 % FCS media ble alikvotert i 4 ml polystyrenrør. Prøvene som skulle testet ble fortynnet til en konsentrasjon på 2 /xg/ml MoAs ekvivalenter i 10 % FCS media. Fem tre-ganger seriefortynninger ble fremstilt fra hver 2 / iq/ ml prøve og 0,2 ml ble tilsatt til hvert rør i duplikat. Bakgrunnsprøver fikk bare celler og media. Cellene ble inkubert ved 4°C i 1 time, deretter vasket to ganger (alle RIA vaskingene ble utført med et volum på 3 ml) med 2 % FCS media. 0,05 ml av sau F(ab')2 anti-mus IgG [125 J] (DuPont, Cat # NEX 162.0142) som inneholdt om lag 500.000 CPM ble tilsatt til hvert rør; cellene ble inkubert i ytterligere 1 time ved 4°C, vasket en gang med 2 % FCS og 2 ganger med PBS. 0,5 ml PBS ble tilsatt til hvert rør, cellene ble vortex-behandlet, overført til rene rør og tellet i 1 minutt i en Packard Gamma 500.
Bindingsprosenten for hver verdi ble bestemt og grafisk fremstilt som den foregående ELISA ligningen, untatt at CPM ble substituert for O.D. enheter og C = gjennomsnittlig CPM for 1 /ug/ml ikke-manipulert MoAs kontroll. Prosent retensjon av immunoreaktiviteten for hver prove ble beregnet som tidligere diskutert.
Prosedyre 3 - Direkte RIA
Høvelige mengder av målceller i 1 ml 10 % FCS media ble alikvotert i 4 ml polystyren prøverør, sentrifugert og supernatanten kastet. Prøver som skulle testes ble fortynnet til en konsentrasjon på 2 00 jig/ml MoAs ekvivalenter i 10 % FCS media. 5 ytterligere fem-ganger seriefortynninger ble fremstilt fra hver 200 /xg/ml prøve, og 0,05 ml ble tilsatt til hvert rør i duplikat. 0,05 ml av 125J-MoAs ble tilsatt til hvert rør (optimal mengde bestemmes individuelt for hvert MoAs og porsjon). Prøver for positiv kontroll inneholdt celler, media og <125>J-MoAs. Bakgrunnsprøver inneholdt ikke-spesifikke celler, media og <125>J-MoAs. Cellene ble inkubert i 1 time ved 4°C, vasket en gang med 2 % FCS media, to ganger med PBS, overført og tellet som tidligere nevnt.
%125j-MoAs bindingshemmingen for hver prøve ble beregnet ved følgende formel:
A = Gjennomsnittlig CPM for prøven
B = Gjennomsnittlig CPM for bakgrunn
C = Gjennomsnittlig CPM for positiv kontroll
Diagrammet og % retensjon av immunoreaktivitet for hver prøve ble beregnet som tidligere diskutert, untatt at BD50 i virkeligheten er BID50 (dose av MoAs som er nødvendig for å gi 50 % hemming av bindingen av 125J-MoAs) .
Bemerkninger:
1) Rørene ble alltid kraftig vortex-behandlet umiddelbart etter tilsetning av hvert reagens i RIA. 2) En indre kontrollprøve som var lik 50 % av den ikke-manipulerte MoAs kontrollen ble innbefattet i hvert sett undersøkelser for å bekrefte hvorvidt den enkelte prosedyre hva kvantitativt kunne forutsi konjugatets retensjon av immunoreaktivitet.
Resultatene av disse undersøkelsene er opplistet nedenfor i tabell 2.
De monoklonale antistoff-konjugatene fremstilt ifølge denne oppfinnelsen er aktive som midler mot kreft. Undersøkelsen som er beskrevet nedenfor for å bestemme cytotoksisiteten in vitro, viser hvordan konstruksjonene dramatisk foretrekker målcelle-linjene i motsetning til ikke-målcellene, og gir et mål for brukbarheten av målrettede former av forbindelsene sammenlignet med deres ikke-målrettede motstykker.
Undersøkelser av cytotoksisitet In vitro
Prøver som skal undersøkes ble fortynnet til en konsentrasjon på 0,2 eller 0,02 /Ltg/ml av LL-E33288'Y1<J> ekvivalenter (utgangs-konsentrasjonen er avhengig av den cellelinjen som skal testes). Tre ytterligere fem-ganger fortynninger ble fremstilt fra hver opprinnelige prøvefortynning, og 0,2 ml ble tilsatt til sterile 15 ml polystyrenrør. Minst ett lignende konjugat bestående av LL33288'Y1<J> og et irrelevant MoAs ble innbefattet i hver undersøkelse for å bestemme spesifisiteten av det relevante konjugatet. IO<5> høvelige målceller i 0,2 ml av 10 % FCS media ble alikvotert i rørene og vortex-behandlet. I tillegg ble en identisk test utført ved å anvende de irrelevante celler som mål for ytterligere å bekrefte spesifisiteten av relevant konjugat. MoAs kontroller fikk bare ekvivalente mengder av MoAs, og positive kontrollprøver fikk bare 10 % FCS media.
Cellene ble inkubert ved 37°C i 7 minutter, deretter vasket 4 ganger med 8 ml av 2 % FCS media. 0,1 ml av 10 % FCS ble tilsatt til hvert rør, cellene ble vortex-behandlet og 0,2 ml ble alikvotert til hver av brønnene i en steril 96-brønners polystyrenplate med vevskultur.
Platene ble inkubert i to døgn i en fuktig 37°C inkubator med 5 % C02. Halvpartene av mediene ble fjernet og erstattet med friske media inneholdende 2 /LtCi/ml <3>H thymidin (DuPont, NEN, Cat# NET-027). Inkubasjonen ble fortsatt i 24 timer, cellene ble flosset, tint og høstet med en PHD cellehøster (Cambridge Technology, Inc.). Hver prøve ble tellet i 1 minutt i en Beckman LS 5800 scintilasjonsteller på kanal 1.
% veksthemming ble beregnet som følger:
Hemmingsprosenten ble avsatt på ikke-log skalaen i et semi-log diagram og LL-E33288'y1<j> konsentrasjonen ble avsatt på log skalaen. I<C>50 (konsentrasjonen av LL-E33288i1J som er nødvendig for å gi 50 % hemming) av hver testprøve ble tatt ut fra diagrammet, og mengden retensjon av cytotoksisitet ble beregnet ved følgende ligning:
Resultatene av cytotoksisitets-undersøkelsen in vitro er listet opp nedenfor i tabell 3.
Følgende undersøkelses-system ble brukt for å måle in vivo aktiviteten av konjugatene fremstilt ifølge denne oppfinnelsen.
In vivo tester for antitumor aktivitet på medikament-monoklonale antistoff-konjugater ble utført ved å bruke humane tumor xenografer på atymiske (nakne) mus.
Burkitt lymphoma (Raji) og myeloma (HS Sultan) celler ble høstet fra kulturflasker og inokulert subkutant (> 80 x IO<6 >Raji celler eller 40 x IO<6> HS Sultan celler) i forsøksmus. Faste tumorer, ovarie-karcinom (CA73, Ovcar-3) og bryst-karcinom (MX-1) ble frembragt i atymiske mus, fjernet, skåret i 2 mm<3> fragmenter og implantert subkutant i forsøksmus (5-8 fragmenter pr. mus).
Medikamenter, monoklonale antistoffer og medikament-monoklonalt antistoff-konjugater ble administrert intra-peritonealt en gang hver tredje dag med tilsammen 3 eller 5 injeksjoner, begynnende på dag 2, 3, 4, 6, 7 eller 8 dager etter tumor-implanteringen. Målinger av tumor (lengden og bredden av tumoren) ble utført ved hjelp av en Fowler ultra CAL II elektronisk caliper hver 7. dag i 4 eller 5 uker etter tumor-implanteringen. Tumormasse i mg ble anslått fra formelen:
Hemmingen av tumorveksten ble beregnet for hver forsøks-gruppe som en prosent av kontrollen (midlere mg av behandlet (T) dividert med midlere mg av kontroll (C) x 100). En T/C verdi < 42 % i grupper med > 65 % overlevede dyr ansees som nødvendig for å demonstrere aktivitet.
Resultatene fra denne undersøkelsen vises i tabell 4.
Oppfinnelsen vil bli ytterligere beskrevet i forbindelse med følgende ikke-begrensende eksempler som omfatter både fremstilling av mellomprodukter og sluttprodukter.
Eksempel 1
3- Merkaptopropionsyre disulfid analog av LL- E33288- Y1J
Til en løsning av 90 mg av LL-E33288'Y;LJ i 90 ml av acetonitril ble tilsatt 10,6 mg av 3-merkaptopropionsyre i 1 ml acetonitril. Løsningen ble vortex-behandlet og deretter lagret ved -2 0°C i 6 døgn. Løsningsmiddelet ble fjernet in vacuo og residuet kromatografert over 10 ml silicagel i metylenklorid. Kolonnen ble utviklet med 50 ml metylenklorid, 50 ml 4 % metanol i metylenklorid og til slutt med 100 ml 8 % metanol i metylenklorid. Inndamping av denne siste fraksjonen ga et residum som ble tatt opp i etylacetat ved hjelp av litt aceton og tilsatt dråpevis til et overskudd av heksan. Bunn-fallet ble oppsamlet og tørket, og ga 39 mg av det ønskede produktet (FABMS, M+H 1394). Retensjonstiden på C18 reversfase HPLC: 18 minutter med 50 % acetonitril/0,1 M vandig ammoniumklorid. (LL-E3 3 2 88'Y1J: 8,0 minutter, esterhydrolyseprodukt: 1,5
minutter).
Eksempel 2
Reaksjon av LL- E33288' Y1 J med p- nitrofenylesteren
av 3- merkaptopropionsyre
(A) Fremstilling av p_-nitrofenylester av 3-merkaptopropionsyre
Kommersiell 3-merkaptopropionsyre i metylenklorid inneholdende en katalytisk mengde av konsentrert svovelsyre ble behandlet med isobutylen i 2 0 minutter. Løsningen ble deretter ekstrahert med IN natriumbikarbonat-løsning, hvoretter metylen-kloridløsningen ble tørket ved bruk av vannfritt magnesiumsulfat. Løsningen ble deretter inndampet til en fargeløs mobil væske, hvis NMR og masse-spektroskopiske data indikerte at det var S-t-butylmerkaptopropionsyren, t-butylesteren.
En alikvot av denne esteren ble oppvarmet med tilbakeløp med 6N saltsyre i dioksan i 2,5 timer. Løsningsmiddelet ble fordampet, etylacetat ble tilsatt og denne løsningen ble ekstrahert med natriumkarbonat. Natriumkarbonat-ekstraktet ble behandlet med 6N saltsyre inntil pH av suspensjonen var 2,0. Suspensjonen ble deretter ekstrahert med etylacetat, ekstraktet tørket over vannfritt magnesiumsulfat og løsnings-middelet inndampet til en fargeløs væske hvis %-NMR og masse-spektroskopiske data indikerte at den var S-t-butyl-merkaptopropionsyre.
Denne forbindelsen ble omdannet til p-nitrofenylesteren ved behandling med ekvimolare mengder av p-nitrofenol og dicykloheksylkarbodiimid i tetrahydrofuran i 4 timer. Dicyklo-heksylure bi-produktet ble fjernet ved filtrering og filtratet ble inndampet til en olje som ble renset ved å passere den over nøytral silicagel ved bruk av løsningsmiddelsystemet heksan: metylenklorid (50:50). Det rene p-nitrofenylester-derivatet var en svakt gul, mobil olje.
Den frie merkaptanen ble demaskert ved følgende fremgangsmåte. S-t-butylmerkaptopropionsyre p-nitrofenylesteren ble løst i trifluoreddiksyre, og et svakt molart overskudd (10 %) av kvikksølv (II) acetat ble tilsatt. Blandingen ble omrørt i 30 minutter, deretter ble trifluoreddiksyren fordampet, og residuet tatt opp i dimetylformamid. Denne løsningen ble behandlet med hydrogensulfidgass i 15 minutter, deretter ble det sorte kvikksølv (II) sulfidet filtrert av, og filtratet inndampet under redusert trykk for å eliminere opptil 99 % av dimetylformamidet. Den resulterende svakt brunaktige mobile væsken ble renset over nøytral silicagel ved å bruke heksan: metylenklorid (50:50). Hovedkomponenten ble vist ved -"-H NMR å inneholde en liten mengde av t-butylmerkapto-derivatet. Analytisk HPLC over to Perkin-Elmer Pecosphere C18 kolonner i tandem (4,6 x 33 mm og 4,6 x 83 mm) og bruk av et gradient-system med 37,5/62,5 til 47,5/52,5 acetonitril og 0,1 M ammoniumacetat buffer ved pH 6,5 (eddiksyre) over en 12 minutters periode indikerte at produktet var 88 % av p-nitrofenylesteren av 3-merkaptopropionsyre og 10 % av den mindre polare S-t-butylmerkaptopropionsyre p-nitrofenylesteren. Det var også en mindre mengde fri p-nitrofenol tilstede.
(B) Reaksjon av p-nitrofenylester av 3-merkaptopropionsyre med LL- E33288- Y1J
En 100 mg porsjon av LL-E33288'Y1<J> ble løst i 50 ml acetonitril. Til denne ble tilsatt en løsning av 25,7 mg p-nitrofenylester av 3-merkaptopropionsyre i en 1 ml acetonitril. Reaksjonen fikk stå ved -20°C i 48 timer. HPLC indikerte at reaksjonen var fullstendig. Løsningen ble inndampet til tørrhet og residuet tatt opp i 4-5 ml etylacetat ved bruk av ultralyd for å bringe dette i løsning. Blandingen ble filtrert og filtratet dryppet inn i 45 ml omrørt heksan. Det resulterende svakt gule faste stoffet ble oppsamlet og tørket under redusert trykk, og ga 93 mg av p-nitrofenylesteren av propionsyre-derivatet av LL-E33288'y1<j> som påvist ved <L>H NMR. Ved FABMS kom [M+H]-ionet tilsyne ved M/Z=1515.
Eksempel 3
N- hvdroksyravsyreimidvl 3- merkaptopropionat disulfid analog av LL- E33288' Y1J
Til en løsning av 5 mg av 3-merkaptopropionsyredisulfid analogen av LL-E33288'Y1<J> fra eksempel 1 i 0,5 ml tetrahydrofuran ble tilsatt 0,45 mg N-hydroksyravsyreimid i 0,1 ml tetrahydrofuran og deretter 1,8 mg av dicykloheksylkarbodiimid i 0,2 ml tetrahydrofuran. Reaksjonen ble omrørt ved romtemperatur i 4 timer og ble deretter stoppet med et stort overskudd av heksaner. Det faste stoffet ble isolert ved filtrering og løst i etylacetat. Den resulterende løsningen ble vasket 3 ganger med saltløsning, tørket med magnesium-sulf at, og inndampet til 5 mg av det ønskede produktet som et brunfarget pulver som ble anvendt uten videre rensning. Retensjonstiden ved revers fase C18 HPLC: 15 minutter med 40 % acetonitril/0,1 M vandig ammoniumklorid (utgangsmateriale: 6,0 minutter).
Eksempel 4
3- merkaptopropionvlhydrazid- disulfid analog LL- E33288- Y1J
Til 5,4 ml (3 ekv.) vannfritt hydrazin i 100 ml tilbake-løpende tetrahydrofuran under argon ble tilsatt dråpevis 9,2 ml (83 mmol) metyl 3-merkaptopropionat i 50 ml tetrohydrofuran i løpet av 2 timer. Løsningen ble oppvarmet med tilbakeløp i ytterligere 2 timer, inndampet, og deretter fortynnet og inndampet 2 ganger fra 300 ml toluen. Produktet ble tilført til en plugg av silicagel med 5 % etylacetat/kloroform og eluert fra pluggen med 20 % metanol/kloroform. Det resulterende 3-merkaptopropionylhydrazidet var en svakt rosa olje som størknet ved avkjøling, men smeltet ved romtemperatur.
Til 50 mg LL-E33288'Y1<J> i 50 ml acetonitril ved -15°C ble tilsatt 6,6 mg 3-merkaptopropionylhydrazid i 1 ml tetrahydrofuran. En ekvivalent trietylamin og/eller en ekvivalent eddiksyre ble tilsatt som katalysator. Reaksjonen ble omrørt ved 0°C i 1 time og løsningsmiddelet ble deretter fordampet. Residuet ble kromatografert på silicagel med en gradient på 10-15 % metanol i kloroform for å gi 2 6 mg av det ønskede produktet. Retensjonstiden ved revers fase C18 HPLC: 5,0 minutter i 41 % acetonitril/0,1 M vandig ammoniumklorid.
Eksempel 5
N- r r( 4- metyl- coumarin- 7- vl) amino1 acetyl] cysteinhydrazid disulfid analog LL- E33288" Y1J
En blanding av 1,0 g (5,7 mmol) av 4-metyl-7-amino-coumarin, 3,0 ml etylbromacetat (5 ekv.), 90 mg (0,1 ekv.) natriumjodid, og 3 0 ml dimetylformamid ble oppvarmet under argon ved 80°C i 5 timer. Blandingen ble avkjølt, fortynnet med etyleter, vakset tre ganger med 50 % saltløsning, tørket med magnesium-sulf at, og inndampet til tørrhet. Det rå produktet ble løst i kloroform som inneholdt 1 % etylacetat, og filtrert gjennom en plugg av silicagel. Omkrystallisering fra dietyleter som inneholdt spor av kloroform, ga ren etyl N-[(4-metyl-coumarin-7-yl)amino]acetat.
Til 1,96 g (7,5 mmol) av esteren ovenfor i 15 ml metanol og 15 ml tetrahydrofuran ble tilsatt 10 ml IN vandig natrium-hydroksyd. Etter 3 0 minutter ble tilsatt 4 ml 10 % vandig saltsyre. De organiske løsningsmidlene ble fordampet, og det resulterende krystalline produktet ble filtrert og vasket med kald etanol og deretter eter. Dette stoffet ble løst i 20 ml tetrahydrofuran og 4 ml dimetylformamid. Dicykloheksyl-karbonyl-diimidazol (1,3 g, 2,2 ekv.) ble tilsatt og reaksjonen omrørt i 15 minutter. Cysteinetylesterhydroklorid (1,6 g, 2,5 ekv.) og trietylamin (1,2 ml) ble deretter tilsatt. Etter ytterligere 3 timer, ble reaksjonen fortynnet med etyleter inneholdende 5 % metylenklorid og vasket en gang med 10 % vandig saltsyre og 2 ganger med saltløsning. Etter tørking med magnesiumsulfat og fordampning av løsningsmidlene, ble det rå produktet krystallisert ved oppløsning i kloroform inneholdende en minimal mengde etanol og deretter tilsetning av et overskudd av eter. Krystallene ble filtrert og tørket for å gi ren N-[[(4-metyl-coumarin-7-yl)amino]acetyl]-cysteinetylester.
En blanding av 5 ml kloroform, 20 ml metanol, og 0,4 ml hydrazinhydrat ble oppvarmet til tilbakeløp under argon. Til dette ble tilsatt 550 mg N-[[(4-metyl-coumarin-7-yl)amino]-acetyl]-cysteinetylester. Etter 9 timers tilbakeløp ble blandingen avkjølt, og det faste produktet ble filtrert og vasket med kloroform og deretter etyleter. Det rå produktet (som inneholdt thiol og disulfid) ble løst i dimetylformamid inneholdende ditiotreitol og trietylamin. Etter 30 minutter ble produktet utfeldt med overskudd av etyleter og oppsamlet ved filtrering. Dette stoffet ble renset videre ved omkrystallisering fra avgasset acetonitril som inneholdt ditiotreitol og spor av trietylamin for å gi rent N-[[(4-metyl-coumarin-7-yl)amino]-acetyl]cysteinhydrazid.
Til 12 mg 70 % rent LL-E33288-Y1<J> i 12 ml acetonitril ved 0°C ble tilsatt 4 mg N-[[(4-metyl-coumarin-7-yl)amino]acetyl]-cysteinhydrazid i 1,2 ml dimetylformamid. Etter omrøring over natten ble tilsatt ytterligere 2 mg N-[[(4-metyl-coumarin-7-yl)amino]acetyl]cysteinhydrazid i 0,6 ml dimetylformamid. Reaksjonen ble omrørt i 3 døgn ved 0°C og filtrert. Aceton-itrilet ble inndampet, og den resulterende dimetylformamid-løsningen ble fortynnet med overskudd av 1:1 heksaner/eter. Produktet ble isolert ved filtrering og ytterligere renset ved kromatografi på silicagel med en 15-20 % gradient av metanol i kloroform for å gi 3 mg av det ønskede produktet. Retensjonstiden ved revers fase CL8 HPLC: 3,5 minutter ved bruk av 45 %
acetonitril/0,1 M vandig ammoniumklorid.
Eksempel
3- merkaptopropionylhvdrazid disulfid analog LL- E33288a3J
Til 10 mg LL-E33288a3<J> i 9 ml acetonitril ved -15°C ble tilsatt 6,6 mg av 3-merkaptopropionylhydrazid i 1 ml acetonitril. En ekvivalent trietylamin og/eller en ekvivalent eddiksyre ble tilsatt som katalysator. Reaksjonen ble omrørt ved 0°C i 1 time, og løsningsmiddelet ble deretter fordampet. Residuet ble kromatografert på silicagel med en gradient på 10-15 % metanol i kloroform for å gi det ønskede produktet. Retensjonstiden ved revers fase C18 HPLC: 3,5 minutter i systemet 45 % acetonitril/0,1 M vandig ammoniumklorid.
Eksempel 7
Ikke- spesifikk konjugasjon med proteiner Hydroksyravsyreimidesteren beskrevet i eksempel 3 ble kovalent bundet til antistoffer under svakt alkaliske betingelser. Det følgende er en generell fremgangsmåte som brukes for å lage de antistoffkonjugatene som er oppført i tabell 5. Antistoff ved en konsentrasjon på 3-5 mg/ml i fosfatbuffer inneholdende 0,1M natriumklorid, pH 7,5, ble omsatt med et 5-20 ganger molart overskudd av produktet fra eksempel 3 med omrøring, ved romtemperatur i fra 1-4 timer. Det konjugerte proteinet ble avsaltet kromatografisk, og aggregert protein ble separert fra monomert materiale ved gelfiltrering HPLC. Monomere fraksjoner ble oppsamlet og konsentrert.
Eksempel 8
Fremstilling av sete- spesifikt konjugat
Den generelle fremgangsmåten for å binde hydrazid-derivater av medikamenter til oksyderte antistoffer er beskrevet i T.J. McKearn, et al., i U.S. patent Nr. 4.671.958. Fremgangsmåten er blitt anvendt for å fremstille antistoff-konjugater fra produktene i eksemplene 4 og 5 med spesielle modifikasjoner som beskrevet nedenfor. Produktene fra disse reaksjonene og deres karakteristika er sammensatt i tabell 6.
(A) Oksydasjon av antistoff. Antistoff ved en konsentrasjon på 5 til 10 mg/ml ble dialysert over natten mot et 200 gangers
volum av 50 mM natriumacetatbuffer, pH 5,5, inneholdende 0,1 M natriumklorid (buffer A). Etter dialyse ble MoAs oksydert ved 15 mM til 2 00 mM perjodsyre i 0,2 M natriumacetat. Oksyda-
sjonen fikk foregå i mørke under omrøring, ved 4°C i 45 minutter, hvoretter det oksyderte MoAs ble avsaltet på en kolonne med >5 bed volum Sephadex G-25. Oksydasjonsgraden for antistoffet ble bestemt ved å omsette med p-nitrofenylhydrazin og sammenligne absorbansen av proteinet ved 280 nm mot p_-nitrofenylhydrazin ved 395 nm. (B) Medikamenthvdraz id- koniugasi on. Det oksyderte MoAs ble omsatt med 25 til 200 ganger molart overskudd av medikamenthydrazid. Hydrazidene ble løst i dimetylformamid og tilsatt til den vandige løsningen av MoAs. For å unngå utfelling av MoAs overskred ikke det totale tilsatte volumet av dimetylformamid 10 % av det totale reaksjonsvolumet. Reaksjonen fikk foregå i 3 timer ved romtemperatur under røring. For å forhindre tverrbinding av ikke-omsatte aldehyder og påfølgende aggregering, ble tilsatt et blokkeringsmiddel, acetylhydrazid i 100-ganger molart overskudd 3 timer etter tilsetning av medikamenthydrazidet. For å stabilisere Schiffs base-bindingen mellom aldehyd og medikamenthydrazid (et hydrazon), ble produktet vanligvis redusert til et alkylhydrazin ved tilsetning av 10 mM natriumcyanborhydrid, og reaksjonen fikk fortsette i ytterliger en time (samlet konjugeringstid - 4 timer). Konjugatet ble kromatografisk avsaltet og fullstendig dialysert (minimum tid 48 timer) over i pH 6,5 fosfatbuffer for lagring og utprøving.
Konjugatene ble analysert på tilstedeværelse av aggregater ved gelfiltrering HPLC og på fritt medikament ved revers fase HPLC. Medikamentinnholdet ble bestemt spektroskopisk ved bruk av ekstinksjons-koeffisienter for både antistoffet og medikamentet for å bestemme molare konsentrasjoner av medikament i konjugatene.
Claims (6)
1. Analogifremgangsmåte for å fremstille de terapeutisk aktive målrettede derivatene
av forbindelser med formelen CH3SSS-W, hvori CH3SSS-W er et antitumor antibiotikum LL-E33288a1<Br>, a ± J , a2<Br>, a2<J>, a3<Br>, a3<J>, a4<Br>, P^ r, PX<J>, ( 32Br, ( 32J, nfiB<r>, "Yi<J>, 6^, BBM-1675, FR-900405, FR-900406, PD 114759, PD 115028, CL-1577A, CL-1577B, CL-1577D, CL-1577E eller CL-1724,
karakterisert ved at den omfatter
å omsette CH3SSS-W med en forbindelse med formelen Q-Sp-SH, hvori Sp er en toverdig Ci~ C10 alkylengruppe med rett eller forgrenet kjede, og Q er H
i acetonitril i nærvær av en ekvivalent av trietylamin og/eller en ekvivalent eddiksyre ved -10 til -30°C i 1 til 48 timer,
å isolere mellomproduktet med formelen Q-Sp-SS-W, hvori Q, Sp og W er som tidligere definert heri, deretter
å omsette forbindelsen med formelen Q-Sp-SS-W hvori Sp, Q og W er som tidligere definert heri, med et molekyl med formelen Tu-Y hvori Tu-Y er et mono- eller polyklonalt antistoff, dets fragmenter, dets kjemisk eller genetisk manipulerte motstykker, eller vekstfaktorer; Y er en side-kjede amino eller karboksyfunksjon av antistoffet; n er 1-100, i vandig buffer ved en pH på mellom 6,5 og 9, ved 4 til 40°C enten direkte eller i nærvær av et vannløselig karbodiimid, for å frembringe forbindelsen
hvori Tu, Sp, W, n og Y er som tidligere definert heri, m er 1-15 og Z er dannet ved kovalent reaksjon av gruppene Q og Y og er -CONH-, -NH-, -N=CH-, eller -C02-eller
å omsette forbindelsen med formelen Q-Sp-SS-W, hvori Sp og W
er som tidligere definert heri, og Q er
med et molekyl med formelen Tu-(Y)n.
hvor Tu og n er som tidligere definert heri, og Y er en sidekjede aminogruppe, i en vandig bufret løsning med en pH mellom 6,5 og 9, ved en temperatur på mellom 4 og 40°C, innbefattet, for å frembringe forbindelser med formelen :
hvori Tu, Sp, Y og n er som tidligere definert heri, m er 1-15, og Z er dannet ved kovalent reaksjon mellom Q og Y og er definert som -CONH-
eller
å omsette en forbindelse med formelen Q-Sp—SS-W, hvori Sp og W er som tidligere definert heri, og Q er -CONHNH2 med salpeter-syrling i vandig acetonitril for å frembringe en forbindelse med formelen Q-Sp-SS-W, hvori Sp og W er som tidligere definert heri og Q er -CON3 med en forbindelse med formelen Tu-(Y)n,, hvori Tu, Y og n er som tidligere definert heri for å frembringe en forbindelse med formelen
hvori Tu, Z, Sp, W, m, Y og n er som heri definert ovenfor;
eller
å omsette en forbindelse med formelen Q-Sp-SS-W hvori Sp og W er som tidligere definert heri og Q er -CONHNH2, med et molekyl med formelen Tu-(Y)n hvori Tu er som tidligere definert heri, Y er et aldehyd frembragt fra karbohydratresiduer på Tu ved oksydasjon i nærvær av et periodat av et alkalisk jordmetall i en vandig buffer med pH mellom 4,0 og 6,5, ved 4 til og med 40°C, og n er 1 til 20 for å frembringe en forbindelse med formelen:
hvori Tu, Sp, W, Y og n er som tidligere definert heri, og Z er laget ved kovalent reaksjon av Q og Y og er -C0NHN=CH-, og m er 0,1 til 15; eller å behandle forbindelse umiddelbart ovenfor med formelen:
hvori Tu, Z, Sp, W, Y, n og m er som umiddelbart ovenfor definert med acetylhydrazin i en vandig buffer ved pH mellom 4,0 og 6,5, ved 4 til og med 40°C, for å frembringe en forbindelse med formelen:
hvori Tu, Z, Sp, W, n og m er som umiddelbart ovenfor definert, og Y er -CH=NNHCOCH3,
og
å omsette denne forbindelsen med natriumcyanborhydrid i en vandig buffer ved pH på 4,0 til 6,5, ved en temperatur på 4 til og med 40°C, for å frembringe en forbindelse med formelen:
hvori Tu, Sp, W, m og n er som tidligere definert heri, Z er -CONHNHCH2-, og Y er -CH2NHNHCOCH3.
2. Fremgangsmåte ved fremstilling av derivatene ifølge krav 1, hvori CH3SSSW er LL-E33288'y1<j>, Q er 4-nitrofenylesteren av en karboksylgruppe, Sp er -CH2CH2-, Tu er det monoklonale antistoffet CT-M-01, Y er -NH2, Z er -CONH-, og m er 0,5 til 15,
karakterisert ved at man anvender tilsvarende substituerte utgangsmaterialer.
3. Fremgangsmåte ved fremstilling av derivatene ifølge krav 1, hvori CH3SSSW er LL-E33288'Y1<J>, Q er hydroksyravsyreimidesteren av en karboksylgruppe, Sp er -CH2CH2-, Tu er det monoklonale antistoffet MAC-68, Y er -NH2, Z er -CONH-, og m er 0,5 til 15, karakterisert ved at man anvender tilsvarende substituerte utgangsmaterialer.
4. Fremgangsmåte ved fremstilling av derivatene ifølge krav 1, hvori CH3SSSW er LL-E33288'y1<J>, Q er -CONHNH2, Sp er - CH2CH2-, Tu er det monoklonale antistoffet Lym 1, Y er -CHO, Z er -CONHNHCH2, og m er 0,1 til 10,
karakterisert ved at man anvender tilsvarende substituerte utgangsmaterialer.
5. Fremgangsmåte ved fremstilling av derivatene ifølge krav 1, hvori CH3SSSW er LL-E33288'Y1<J>, SpQ er
Tu er det monoklonale antistoffet B72,3, Y er -CHO, Z er -C0NHNHCH2-, og m er 0,1 til 10,
karakterisert ved at man anvender tilsvarende substituerte utgangsmaterialer.
6. Fremgangsmåte ved fremstilling av derivatene ifølge
krav 1, hvori CH3SSSW er LL-E3 3 288'Y1J, SpQ er
Tu er det monoklonale antistoff Lym 2, Y er -CHO, Z er -CONHNHCH2-, og m er 0,1 til 10,
karakterisert ved at man anvender tilsvarende substituerte utgangsmaterialer.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US11494087A | 1987-10-30 | 1987-10-30 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO884833D0 NO884833D0 (no) | 1988-10-28 |
| NO884833L NO884833L (no) | 1989-05-02 |
| NO176480B true NO176480B (no) | 1995-01-02 |
| NO176480C NO176480C (no) | 1995-04-12 |
Family
ID=22358378
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO884833A NO176480C (no) | 1987-10-30 | 1988-10-28 | Analogifremgangsmåte ved fremstilling av målrettede former av metyltritio-anti-tumormidler |
| NO884834A NO173506C (no) | 1987-10-30 | 1988-10-28 | Fremgangsmaate ved fremtilling av disvovelanaloger av ll-E33288-antitumormidler |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO884834A NO173506C (no) | 1987-10-30 | 1988-10-28 | Fremgangsmaate ved fremtilling av disvovelanaloger av ll-E33288-antitumormidler |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (2) | EP0313874B1 (no) |
| JP (2) | JP2820256B2 (no) |
| KR (2) | KR0133130B1 (no) |
| AR (1) | AR246083A1 (no) |
| AT (2) | ATE112172T1 (no) |
| AU (2) | AU612714B2 (no) |
| BR (1) | BR1100939A (no) |
| CA (1) | CA1321582C (no) |
| DE (2) | DE3889063T2 (no) |
| DK (2) | DK602488A (no) |
| ES (2) | ES2061586T3 (no) |
| FI (2) | FI95204C (no) |
| HK (2) | HK131897A (no) |
| IE (2) | IE65053B1 (no) |
| IL (2) | IL87947A (no) |
| NO (2) | NO176480C (no) |
| NZ (2) | NZ226727A (no) |
| PT (2) | PT88882B (no) |
| ZA (2) | ZA888123B (no) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5079233A (en) * | 1987-01-30 | 1992-01-07 | American Cyanamid Company | N-acyl derivatives of the LL-E33288 antitumor antibiotics, composition and methods for using the same |
| US5606040A (en) * | 1987-10-30 | 1997-02-25 | American Cyanamid Company | Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group |
| IL115770A (en) * | 1989-04-14 | 1999-03-12 | American Cyanamid Co | Substituted disulfides of formula q-sp-ss-w their preparation and use for inhibiting the growth of tumours and for treating bacterial infections |
| GB9007384D0 (en) * | 1990-04-02 | 1990-05-30 | Duncan Ruth | Coupling between polymers and other organic molecular entities utilising thiol-specific reactive groups |
| US5712374A (en) * | 1995-06-07 | 1998-01-27 | American Cyanamid Company | Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates |
| US5714586A (en) * | 1995-06-07 | 1998-02-03 | American Cyanamid Company | Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates |
| US20040009535A1 (en) | 1998-11-27 | 2004-01-15 | Celltech R&D, Inc. | Compositions and methods for increasing bone mineralization |
| PT2261335T (pt) | 1998-11-27 | 2017-09-08 | Ucb Pharma Sa | Composições e métodos para aumentar a mineralização óssea |
| NZ511705A (en) * | 2001-05-14 | 2004-03-26 | Horticulture & Food Res Inst | Methods and rapid immunoassay device for detecting progesterone and other steroids |
| MEP2808A (xx) | 2003-06-16 | 2010-02-10 | Celltech R & D Inc | Antitijela specifična za sklerositin i metode za povećanje mineralizacije kostiju |
| US8841092B2 (en) * | 2006-08-30 | 2014-09-23 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Reversible natural product glycosyltransferase-catalyzed reactions, compounds and related methods |
| KR100979928B1 (ko) * | 2008-07-16 | 2010-09-03 | 한주학 | 수직축형 부력풍차 |
| SI3066074T1 (sl) * | 2013-11-04 | 2020-03-31 | Pfizer Inc. | Intermediati in postopki za sintetizacijo derivatov kaliheamicina |
| EP3573995A1 (en) * | 2017-01-24 | 2019-12-04 | Pfizer Inc. | Calicheamicin derivatives and antibody drug conjugates thereof |
| EP3924387A2 (en) * | 2019-02-15 | 2021-12-22 | University Of Southern California | Lym-1 and lym-2 antibody compositions and improved car constructs |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2430943A1 (fr) * | 1978-07-13 | 1980-02-08 | Toyo Jozo Kk | Nouveaux derives disulfures |
| DE3175151D1 (en) * | 1980-05-21 | 1986-09-25 | Teijin Ltd | Reactive polymer and process for the preparation thereof |
| US4530835A (en) * | 1983-07-08 | 1985-07-23 | Warner-Lambert Company | CL-1577 Antibiotic compounds and their production |
| CA1314245C (en) * | 1984-05-23 | 1993-03-09 | Franz Jansen | Process for the preparation of conjugates in which a monovalent carboxylic ionophore is associated by means of a covalent bond with a macromolecule, which are useful as immunotoxin potentiators |
| DE3588213T2 (de) * | 1984-11-16 | 1999-09-30 | American Cyanamid Co | Antitumorale Antibiotika (Komplex LL-E-33288) |
| EP0330874A3 (en) * | 1988-02-29 | 1989-10-18 | American Cyanamid Company | Antibacterial and antitumor agents LL-E33288 epsilon-I and LL-E33288-epsilonBr, with processes and intermediates for producing said agents |
| EP0342341A3 (en) * | 1988-05-17 | 1991-07-24 | American Cyanamid Company | Process for producing antitumor antibiotic ll-e33288gamma2 |
-
1988
- 1988-10-03 DE DE3889063T patent/DE3889063T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-10-03 EP EP88116339A patent/EP0313874B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-10-03 ES ES88116339T patent/ES2061586T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-10-03 ES ES88116338T patent/ES2059464T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-10-03 EP EP88116338A patent/EP0313873B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-10-03 AT AT88116338T patent/ATE112172T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-10-03 AT AT88116339T patent/ATE104309T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-10-03 DE DE3851682T patent/DE3851682T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-10-06 IL IL8794788A patent/IL87947A/en active Protection Beyond IP Right Term
- 1988-10-06 IL IL8794688A patent/IL87946A/en active Protection Beyond IP Right Term
- 1988-10-26 NZ NZ226727A patent/NZ226727A/en unknown
- 1988-10-26 NZ NZ226726A patent/NZ226726A/xx unknown
- 1988-10-27 AR AR88312321A patent/AR246083A1/es active
- 1988-10-28 DK DK602488A patent/DK602488A/da not_active Application Discontinuation
- 1988-10-28 IE IE326188A patent/IE65053B1/en not_active IP Right Cessation
- 1988-10-28 CA CA000581590A patent/CA1321582C/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-10-28 NO NO884833A patent/NO176480C/no not_active IP Right Cessation
- 1988-10-28 FI FI884984A patent/FI95204C/fi not_active IP Right Cessation
- 1988-10-28 AU AU24494/88A patent/AU612714B2/en not_active Expired
- 1988-10-28 PT PT88882A patent/PT88882B/pt not_active IP Right Cessation
- 1988-10-28 ZA ZA888123A patent/ZA888123B/xx unknown
- 1988-10-28 FI FI884983A patent/FI91262C/fi not_active IP Right Cessation
- 1988-10-28 DK DK198806025A patent/DK174739B1/da not_active IP Right Cessation
- 1988-10-28 IE IE326288A patent/IE65989B1/en not_active IP Right Cessation
- 1988-10-28 PT PT88881A patent/PT88881B/pt not_active IP Right Cessation
- 1988-10-28 AU AU24489/88A patent/AU618763B2/en not_active Expired
- 1988-10-28 NO NO884834A patent/NO173506C/no not_active IP Right Cessation
- 1988-10-28 ZA ZA888127A patent/ZA888127B/xx unknown
- 1988-10-29 JP JP63272007A patent/JP2820256B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1988-10-29 JP JP63272006A patent/JP2720933B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1988-10-30 KR KR1019880014246A patent/KR0133130B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1988-10-30 KR KR1019880014245A patent/KR970011385B1/ko not_active IP Right Cessation
-
1997
- 1997-05-14 BR BR1100939-0A patent/BR1100939A/pt active IP Right Grant
- 1997-06-26 HK HK131897A patent/HK131897A/xx not_active IP Right Cessation
- 1997-06-26 HK HK131997A patent/HK131997A/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5053394A (en) | Targeted forms of methyltrithio antitumor agents | |
| US5770701A (en) | Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents | |
| EP0428534B1 (en) | Coupling agents and sterically hindered disulfide linked conjugates prepared therefrom | |
| RU2753416C2 (ru) | Новые конъюгаты аманитина | |
| JP3234980B2 (ja) | 新規な二官能性化合物を含むコンジュゲートの製法 | |
| US5869045A (en) | Antibody conjugates reactive with human carcinomas | |
| NO176480B (no) | Analogifremgangsmåte ved fremstilling av målrettede former av metyltritio-anti-tumormidler | |
| CZ393997A3 (cs) | Způsoby přípravy monomerních konjugátů nosiče a derivátu calicheamicinu | |
| PL172837B1 (pl) | Preparat farmaceutyczny zawierajacy koniugaty tioeterowe PL PL PL PL PL | |
| DK159277B (da) | Analogifremgangsmaade til fremstilling af produkter, der er anvendelige til behandling af melanomer | |
| HU206377B (en) | Process for producing cytotoxic vinc-dimer conjugates and pharmaceutical compositions comprising same | |
| US5241078A (en) | Coupling agents and sterically hindered disulfide linked conjugates prepared therefrom | |
| CS235525B2 (en) | Method of conjugate preparation containing immunoglobulin or immunoglobulin's fragment | |
| EP0392384B1 (en) | Targeted forms of methyltrithio antitumor agents | |
| KR930003333B1 (ko) | 탄수화물 단위가 변형된 리보솜을 비활성화시키는 당단백질 성분을 함유하는 지속-작용성 면역독소의 제조방법 | |
| CA1314245C (en) | Process for the preparation of conjugates in which a monovalent carboxylic ionophore is associated by means of a covalent bond with a macromolecule, which are useful as immunotoxin potentiators | |
| CA1341315C (en) | Targeted forms of methyltrithio antitumor agents | |
| CA2014459C (en) | Targeted forms of methyltrithio antitumor agents | |
| JPS62175500A (ja) | 修飾糖タンパク質、当該修飾糖タンパク質の製造方法、当該修飾糖タンパク質を含む免疫毒素および当該免疫毒素を有効成分として含む抗ガン剤組成物 | |
| KR0159767B1 (ko) | 메틸-트리티오기를 갖는 화합물로 부터 제조된 항종양항균 물질인 치환 디설파이드, 그의 목적 형태및 그의 제조 방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK1K | Patent expired |