NO173506B - Fremgangsmaate ved fremtilling av disvovelanaloger av ll-e33288-antitumormidler - Google Patents

Fremgangsmaate ved fremtilling av disvovelanaloger av ll-e33288-antitumormidler Download PDF

Info

Publication number
NO173506B
NO173506B NO88884834A NO884834A NO173506B NO 173506 B NO173506 B NO 173506B NO 88884834 A NO88884834 A NO 88884834A NO 884834 A NO884834 A NO 884834A NO 173506 B NO173506 B NO 173506B
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
formula
ethyl acetate
preparation
analogue
acetonitrile
Prior art date
Application number
NO88884834A
Other languages
English (en)
Other versions
NO884834D0 (no
NO884834L (no
NO173506C (no
Inventor
William James Mcgahren
Martin Leon Sassiver
George A Ellestad
Original Assignee
American Cyanamid Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by American Cyanamid Co filed Critical American Cyanamid Co
Publication of NO884834D0 publication Critical patent/NO884834D0/no
Publication of NO884834L publication Critical patent/NO884834L/no
Publication of NO173506B publication Critical patent/NO173506B/no
Publication of NO173506C publication Critical patent/NO173506C/no

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/20—Carbocyclic rings
    • C07H15/203—Monocyclic carbocyclic rings other than cyclohexane rings; Bicyclic carbocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6807—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
    • A61K47/6809—Antibiotics, e.g. antitumor antibiotics anthracyclins, adriamycin, doxorubicin or daunomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/20—Carbocyclic rings

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører en analogifremgangsmåte for fremstilling av den terapeutisk aktive substituerte disulfidanalogen av et antibiotisk LL-E33288a1-Br, a^-J, a2-Br, a2-J, a3-Br, a3-J, arBr, /3rBr, f3±- J, /32-J, "Yi~Br, "Yx-J, Sx~ 3, med
formelen Q-Sp-SS-W, hvori
W er
Rx er R2 er R3 er H, R* er R5 er
og X er jod eller brom; Sp er en (Cx-C-^) alkylengruppe med rett
eller forgrenet kjede,; Q er hydrogen eller
hvor n er 0 eller 1, eller:
Disse disulfidanalogene er effektive antitumormidler.
Fig. I er ultrafiolett-spektre for LL-E3 3 288-y2-J.
Fig. II er protonmagnetisk resonnansspekteret for LL-E33288"Y2-J.
Fig. III er infrarød spektre for LL-E332888'Y2-J.
Fig. IV er massespekteret for LL-E33288'Y2-J.
Fig. V er protonmagnetisk resonnansspekteret for LL-E33288-Y1-J-
Fig. VI er massespekteret for LL-E33288'Y1-J.
Familien av antibakterielle og antitumormidler kjent som LL-E33288-komplekset er beskrevet i US-patentsøknad serie nr. 009.321, innlevert 30. januar 1987. Disse brukes til å fremstille disvovelantitumormidlene ifølge vår oppfinnelse. Søknaden beskriver LL-E3 3288-komplekset, komponentene derav, nemlig LL-E33288a1-Br, LL-E3 3288a1-J, LL-E33288a2-Br, LL-E33288a2-J, LL-E33288a3-Br, LL-E3 3288a3-J, LL-E33288a4-Br, LL-E33288j31-Br, LL-E33288/3X-J, LL-E33288)32-Br, LL-E33288j32-J, LL-E33288'Y1-Br, LL-E33288-YX-J og LL-E3328851-J, og fremgangsmåter for deres fremstilling ved aerob fermentering ved bruk av en ny stamme av Micromonospora echinospora ssp calichensis eller naturlige eller avledete mutanter derav. Serienr. 009.321 åpenbarer også foreslåtte strukturer for noen av de ovenfor nevnte komponentene. Disse foreslåtte strukturene er reprodusert i tabell I nedenfor, hvori W er resten av det molekylet som er bundet til CH3SSS-.
Disvovelanaloger ifølge oppfinnelsen blir også fremstilt av visse andre antibiotika, nemlig: 1) Esperamicin BBM-1675, a novel class of potent antitumor. I. Physico-chemical data and partial structure. M. Konishi et al., J. Antibiotics, 38., 1605 (1985). A new antitumor antibiotic complex. M. Konishi et al., U.K. Patent Application GB 2.141.425A, May 15, 1984. 2) New antitumor antibiotics, FR-900405 og FR-900406. I. Taxonomy of the producing strain. M. Iwami et al., J. antibiotics 3_8, 835 (1985) . New antitumor antibiotics FR-900405 og FR-900406. II. Production, isolation, characterization and antitumor activity. S. Kiyoto et al., J. Antibiotics, 38, 340 (1985). 3) PD 114759 og PD 115028, Novel antitumor antibiotics with phenomenal potency. I. Isolation and characterization. R.H. Bunge et al., J. Antibiotics, 37, 1566, (1984). Biological and biochemical aktivities of the novel antitumor antibiotic PD 114759 and related derivatives. D.W. Fry et al., Investigational New Drugs, 4., 3 (1986) . 4) New antibiotic complex CL-1577A, CL-1577B produced by Streptom<y>ces sp. ATCC 39363. European Patent Application 0.132.082, A2. 5) CL-1577D og CL-1577E Antibiotic antitumor compounds, their production and use. US-patent 4.539.203. 6) CL-1724 Antibiotic compounds, their production and use. US-patent 4.554.162.
Som det kan sees av strukturene som er vist i tabell I, inneholder alr a2, a3, aUl / 3ll /32, li og 5-komponentene i LL-E33288-komplekset, såvel som de antibiotiske stoffene BBM-1675, FR-900405, FR-900406, PD-114759, PD 115028, CL-1577A, CL-1577B, CL-1577D, CL-1577E og CL-1724 alle sammen en allyl trisulfidgruppe i sin struktur.
Ifølge foreliggende oppfinnelse omsettes
LL-E33288a,Br,
LL-E33288a1-J, som har de følgende Rf-verdier i de etterfølgende løsnings-systemer på TLC på silikagelplater: i) etylacetat mettet med 0,1 M vandig kaliumdihydrogenfosfat, Rf = 0,67;
ii) 3% isopronanol i etylacetat mettet med 0,1M vandig kaliumdihydrogenfosfat, Rf = 0,80 og
iii) etylacetat:metanol (95:5), Rf = 0,80,
med en molekylvekt på 1145;
L-E33288a2-Br med formel
LL33288a2-J, med formel LL-E33288a3-Br, med formel LL-E33288a3-J, med formel LL-E33288a4-Br; LL-E33288/31_Br, med formel LL-E33288/3-L-J, med formel LL-E33288/32-Br, med følgende Rf-verdier i de etterfølgende løsningssystemene på TLC på silikagelplater: a) etylacetat mettet med 0,1M vandig kaliumdihydrogenfosfat, Rf=0,32; b) 3% isopropanol i etylacetat mettet med 0,1M vandig kaliumdihydrogenfostat, Rf=0,41; og c) etylacetat-.metanol (95:5), Rf=0,45;
LL-E33288'Y1-Br, med formel
LL-E33288'Y1-J, med formel og LL-E332886-L-J, med formel
med en tilsvarende substituert merkaptan i acetonitril ved
-10°C til -30°C i 1-48 timer.
Som et eksempel vil reaksjonen av LL-E3 3288'Y1-J med metylmerkaptan i acetonitril frembringe LL-E3328872-J, en ny antitumorforbindelse.
Reaksjonen ovenfor er ikke begrenset til jod-derivatene av LL-E33288 antibiotika. Dersom f. eks. LL-E3 3288"Y1-Br blir brukt, vil produktet være LL-E3 3 288"Y2-Br, og alkyldisulfidbromanalogen av et hvilket som helst LL-E33288 bromantibiotikum vil oppnåes under lignende betingelser.
Den foreslåtte strukturen for de to forannevnte antibiotika etter omsetning med metylmerkaptan er gitt
nedenfor.
Forbindelsene fremstilt ifølge denne oppfinnelsen er, i tillegg til sin anvendelse som antitumor og antibakterielle midler, nyttige til å vurdere nye former for antikreft-aktivitet på cellenivå. De naturlig avledete antibiotika som er beskrevet i de ovenfor nevnte søknadene og patentene, inneholder ikke tilstrekkelig sterke kromofore enheter, slik at deres intracellulære lokalisering kan oppklares tilfreds-stillende. Når de naturlige tritiometylderivatene omsettes med tiolholdige molekyler, som dessuten inneholder en kromofor enhet som absorberer eller emitterer lys i områder av det elektromagnetiske spekteret som ikke formørkes av cellulære kromoforer, kan det frembringes nyttig biokjemisk verktøy for å studere brudd i DNA-dobbelttråden og cellulær lokalisering av denne klassen av forbindelser. Radioaktive grupper kan innføres. Når f.eks. £33288^-3 omsettes med 7-(2-tioetyl-amino)-4-metylcoumarin, oppnås således et derivat som fluorescerer sterkt ved bestråling med ultrafiolett lys, hvilket tillater lokalisering av forbindelsen i cellerommene.
Den radioaktive markør kan være <3>H, 1AC, 35S, eller 32P.
Forbindelsene fremstilt ifølge denne oppfinnelsen er aktive som antibakterielle midler. Deres in vitro antibakterielle aktivitet ble bestemt mot et spektrum av grampositive og gramnegative bakterier ved en standard agar fortynningsmetode. Mueller-Hinton agar som inneholdt to ganger avtagende konsentrasjon av de antibiotiske stoffene, ble helt i petriskåler. Agaroverflåtene ble inokulert med 1 til 5 x IO<4 >kolonidannende enheter av bakterier ved hjelp av en Steers replikerende anordning. Den laveste konsentrasjonen av en forbindelse som hemmet veksten av en bakteriestamme etter omlag 18 timer inkubering ved omlag 36°C ble registrert som den minimale inhibiterende konsentrasjonen (MIC) for denne stammen. Resultatene er oppstilt i tabell II.
Disulfidanalogene som er beskrevet ovenfor er aktive antitumormidler.
Bestemte in vivo prøvesystemer og forskrifter er blitt utviklet av the National Cancer Institute for testing av forbindelser for å bestemme deres egnethet som antineo-plastiske midler. Disse er rapportert i "Cancer Chemotherapy Reports", del III, vol. 3 nr. 2 (1972), Geran et al. Disse forskriftene har etablert standardiserte screening tester som vanligvis blir fulgt når det gjelder testing av antitumormidler. Av disse systemene er lymfocyttleukemi P388, melanotisk melanom B16, L1210 leukemi og kolon 26 adeno-karsinom spesielt betydningsfulle for den foreliggende oppfinnelsen. Disse neoplasma brukes til testing som transplanterbare tumorer i mus. Signifikant antitumorakti-vitet, uttrykt i disse forskriftene ved en prosentvis økning . av den midlere overlevingstiden for de behandlete dyrene (T) i forhold til kontrolldyrene (C) er vanligvis ensbetydende med lignende resultater ved human leukemi og faste tumorer.
Lymfocyttisk leukemi P388- test
De dyrene som ble brukt var BDFX hunnmus. Det var 5 eller 6 mus pr. testgruppe. Tumortransplanteringen foregikk ved intraperitoneal injisering av 0,5 ml fortynnet ascitisk fluid som inneholdt lxlO<6> celler av lymfocyttisk leukemi P388 på dag null. Testforbindelsene ble administrert intraperitonealt i et volum på 0,5 ml i steril, pyrogenfri saltløsning på dag 1, 5 og 9 (i forhold til tumorinokuleringen) i de indikerte dosene. Musene ble veiet og overlevende registrert på regelmessig måte i løpet av 3 0 døgn. Medianoverlevingstiden og forholdet mellom overlevingstid for behandlete dyr (T) og kontrolldyr (C) ble
beregnet. Resultatene fremstilles i tabell III.
Melanotisk melanom B16 test
De dyrene som ble brukt var BDF1 hunnmus. Det var 5 eller 6 mus pr. testgruppe. En porsjon på 1 g av melanotisk melanom B16 tumor ble homogenisert i 10 ml kald balansert saltløsning, og en 0,5 ml alikvot av homogenatet ble implantert intraperitonealt i hver av testmusene. Testforbindelsene ble administrert intraperitonealt på dag 1 til dag 9 (i forhold til inokuleringen av tumor) i de indikerte dosene. Musene ble veiet, og overlevende registrert på regelmessig måte i løpet av 60 døgn. Medianoverlevingstiden og forholdet mellom overlevingstid for behandlete (T) og kontroll (C) dyr ble beregnet. Resultatene vises i tabell IV.
Oppfinnelsen vil bli ytterligere beskrevet i forbindelse med følgende eksempler.
Eksempel 1
Metyldisulfidanaloqen av LL- E33 288' Y1- J
LL- E332 88- Y,- J
Et tiolreagens ble fremstilt ved å boble metylmerkaptan-gass inn i 10 ml acetonitril inntil den var i det vesentlige mettet. En 108 mg porsjon av LL-E33288'Y1-J ble tilsatt til tiolreagenset, den resulterende suspensjonen ble deretter hvirvel-behandlet for å frembringe en løsning som ble plassert i fryseboks ved -20°C over natten, og deretter ble løsnings-middelet fordampet. Residuet ble tatt opp i et lite volum etylacetat, og denne løsningen ble dryppet ned i 25 ml omrørt heksan, og ga et nesten hvitt bunnfall som ble tørket, og ga 82 mg av delvis renset LL-E3 3 288'Y2-J.
De 82 mg ovenfor ble behandlet med 0,1 ml metanol, og deretter ble tilsatt 1 ml metylenklorid. Denne løsningen ble ledet over 18 g silikagel i en liten kolonne. Mobilfasen som ble brukt var 5% metanol i metylenklorid. Fraksjonene ble undersøkt ved tynnskiktkromatografi på silikagel med et system bestående av 10% isopropanol i etylacetat mettet med fosfat-buffer. Fraksjonene 4-11, inneholdende LL-E33288'Y2-J, ble slått sammen og inndampet. Residuet ble tatt opp i 0,5 ml etylacetat og dryppet ned i 20 ml omrørt heksan. Bunnfallet ble oppsamlet og tørket, og ga 37 mg av LL-E33288"Y2-J med ultrafiolett spektra som vist i fig. I, et protonmagnetisk resonnansspektrum som vist i fig. II, et infrarødt spektrum som vist i fig. III, og et massespektrum som vist i fig. IV.
Eksempel 2
Etvldisulfidanalogen av LL- E33288- Y- J
Reaksjonen beskrevet i eksempel 1 ble gjentatt med bruk av et tiolreagens sammensatt av etylmerkaptan i acetonitril, og ga den ønskete etyldisulfidanalogen av LL-E33288'Y1-J.
Eksempel 3
Propyldisulfidanalogen av LL- E33288~ y1- J
En 60 mg porsjon av LL-E3 3288'Y1-J ble løst i 6 ml acetonitril, og 5 ml av en 1 /xmol/ml løsning av propylmerkaptan i acetonitril ble tilsatt. Etter tre timer var reaksjonen i det vesentlige fullstendig, og løsningsmiddelet ble fordampet. Residuet ble tatt opp i 3 ml etylacetat, filtrert og filtratet dryppet ned i 40 ml omrørt heksan. Bunnfallet ble oppsamlet og tørket, og ga 39 mg av propyldisulf idanalogen av LL-E3 3288'y-1-J, med et protonmagnetisk resonnansspektrum som vist i fig. V og et massespektrum som vist i fig. VI.
Eksempel 4
1- metyl- l- propvldisulfidanalogen av LL- E33288' Y1- J
En løsning av 150 jug LL-E33288-Yi-J i 1 ml acetonitril ble behandlet med 50 /il av en 1 jumol/ml løsning av 1-metyl-l-propylmerkaptan. Etter to timer var reaksjonen fullstendig, og ga den ønskete 1-metyl-l-propyldisulfidanalogen av LL-E3328871-3".
Eksempel 5
t- butyldisulfidanalogen av
LL- E3 3 288- YX- J
En 150 Mg porsjon av LL-E33288^1-J i 1 ml acetonitril ble behandlet med 50 /il av en 1 /^mol/ml løsning av t-butylmerkap-tan i acetonitril. Etter 2 1/4 time var reaksjonen fullstendig og ga t-butyldisulfidanalogen av LL-E33288^1-J.
Eksempel 6
t- butoksykarbonyl- t- butylcvsteinvldisulfid-analogen av LL- E33288~ Y1- J
t-butoksykarbonylcystein-t-butylester ble løst i acetonitril ved en konsentrasjon på 10 mg/ml. En 230 fj. g porsjon av LL-E33288'Y1-J i acetonitril ble behandlet med 100 /Lii av amino-syrereagenset. Etter 1 time var reaksjonen fullstendig og ga den ønskete disulfidanalogen av LL-E3 3288'Y1-J.
Eksempel 7
3- merkaptopropionsyredisulfidanalogen av LL- E3 3288" Y1- J
Til en løsning av 90 mg LL-E33288-YX-J i 90 ml acetonitril ble tilsatt 10,6 mg 3-merkaptopropionsyre i 1 ml acetonitril. Løsningen ble vortex-behandlet og deretter lagret ved -20°C i 6 døgn. Løsningsmiddelet ble fjernet in vacuo og residuet kromatografert over 10 ml silikagel i metylenklorid. Kolonnen ble fremkalt med 50 ml metylenklorid, 50 ml 4% metanol i metylenklorid og til slutt 100 ml 8% metanol i metylenklorid. Inndamping av denne siste fraksjonen ga en rest som ble tatt opp i etylacetat ved hjelp av litt aceton og tilsatt dråpevis til et overskudd av heksan. Bunnfallet ble oppsamlet og tørket og ga 39 mg av det ønskete produktet (FABMS, M+H 1394).
Eksempel 8
Omsetning av LL- E33288" Y1- J med p- nitrofenyl-
esteren av 3- merkaptopropionsyre
(A) Fremstilling av p- nitrofenylesteren av 3-merkaptopropionsyre
Kommersiell 3-merkaptopropionsyre i metylenklorid inneholdende en katalytisk mengde av konsentrert svovelsyre ble behandlet med isobutylen i 20 minutter. Løsningen ble deretter ekstrahert med IN natriumbikarbonatløsning, hvoretter metylen-kloridløsningen ble tørket ved bruk av vannfritt magnesiumsulfat. Løsningen ble deretter inndampet til en fargeløs mobil væske, med NMR og massespektrale data som viste at det var 3-t-butylmerkaptopropionsyre, t-butylesteren.
En alikvot av denne esteren ble behandlet med tilbakeløp med 6N saltsyre i dioksan i 2,5 timer. Løsningsmiddelet ble fordampet, etylacetat ble tilsatt og denne løsningen ble ekstrahert med natriumkarbonat. Natriumkarbonatekstraktet ble behandlet med 6N saltsyre inntil pH av suspensjonen var 2,0. Suspensjonen ble deretter ekstrahert med etylacetat, ekstrak-tet tørket over vannfritt magnesiumsulfat, og løsningsmiddelet ble fordampet til en fargeløs væske med ^ NMR og massespektrale data som viste at det var 3-t-butylmerkaptopropionsyre.
Denne forbindelsen ble omdannet til p-nitrofenolesteren ved behandling med ekvimolare mengder av p-nitrofenol og dicyklo-heksylkarbodiimid i tetrahydrofuran i 4 timer. Dicykloheksyl-urea-biproduktet ble fjernet ved filtrering, og filtratet ble inndampet til en olje som ble renset ved å lede den over nøytral silikagel ved bruk av løsningsmiddelsystemet heksan:metylenklorid (50:50). Det rene p-nitrofénylester-derivatet var en svakt gul bevegelig olje.
Den frie merkaptanen ble demaskert ved følgende fremgangsmåte. 3-t-butylmerkaptopropionsyre-p-nitrofenylesteren ble løst i trifluoreddiksyre, og et svakt molart overskudd (10%) av kvikksølv(II)acetat ble tilsatt. Blandingen ble omrørt i 30 minutter, deretter ble trifluoreddiksyren dampet av, og residuet tatt opp i dimetylformamid. Denne løsningen ble behandlet med hydrogensulfidgass i 15 minutter, deretter ble det svarte kvikksølv(II)sulfidet filtrert fra og filtratet inndampet under redusert trykk for å fjerne opp til 99% av dimetylformamidet. Den resulterende svakt brunaktige bevegelige væsken ble renset over nøytral silikagel ved bruk av heksan:metylenklorid (50:50). Det ble vist ved <X>H NMR at hovedkomponenten inneholdt en mindre mengde av t-butyl-merkaptoderivatet. Analytisk HPLC over to Perkin-Elmer Pecosphere C18 kolonner i tandem [4,6 x 33 mm og 4,6 x 83 mm] med et gradientsystem av 37,5/62,5 til 47,5/52,5 av acetonitril og 0,1 molar ammoniumacetatbuffer ved pH 6,5 (eddiksyre) i løpet av en 12 minutters periode indikerte at produktet var 88% av p-nitrofenylesteren av 3-merkaptopropionsyre og 10% av den mindre polare 3-t-butylmerkaptopropionsyre-p-nitrofenylesteren. Det var også en mindre mengde 2fri p_-nitrofenol tilstede.
(B) Omsetning av p- nitrofenvlester av 3-merkaptopropionsyre med LL- E33288" Y1- J
En 100 mg porsjon av LL-E332887i~J ble løst i 50 ml acetonitril. Til denne ble tilsatt en løsning av 25,7 mg p-nitro-fenylesterav 3-merkaptopropionsyre i 1 ml acetonitril. Reaksjonen ble etterlatt ved -20°C i 48 timer. HPLC indikerte at omsetningen var fullstendig. Løsningen ble inndampet til tørrhet, og residuet ble tatt opp i 4-5 ml etylacetat med ultralydbehandling for å løse residuet. Blandingen ble filtrert, og filtratet dryppet ned i 45 ml omrørt heksan. Det resulterende svakt gule faste stoffet ble oppsamlet og tørket under redusert trykk, og ga 93 mg p-nitrofenylesteren av propionsyrederivatet av LL-E33288'Y2"~J som etablert ved <1>H NMR. Ved FABMS fremkom [M+H]-ionet ved M/Z = 1515.
Eksempel 9
7-( 2- merkaptoetylamino^- 4- metvlcumarin-disulfidanalogen av LL- E3 3 288' y1- J
Til 10 mg 70% ren LL-E332887X-J i 9 ml acetonitril ble tilsatt 1,2 mg 7-(2-tioetylamino)-4-metylcumarin i 1 ml acetonitril. Etter omrøring i 3 6 timer ved 0°C ble løsningsmiddelet strippet av, og produktet ble kromatografert på silikagel med 5% metanol i kloroform for å gi 5 mg av det ønskete produktet. Retensjonstiden på en C-18 revers fase HPLC-kolonne: 5,4 min med 56% acetonitril, 10,1 M vandig ammoniumklorid (LL-E33288A"!-J retensjonstid i det samme systemet er 5,5 min).
Eksempel 10
3- merkaptopropionvlhvdraziddisulfidanalogen
av LL- E33288* ,J
Til 5,4 ml (3 ekvivalenter) av vannfritt hydrazin i 100 ml tilbakeløpende tetrahydrofuran under argon ble tilsatt dråpevis 9,2 ml (83 mmol) metyl-3-merkaptopropionat i 50 ml tetrahydrofuran i løpet av 2 timer. Løsningen ble behandlet med tilbakeløp i ytterligere 2 timer, inndampet og deretter fortynnet og inndampet 2 ganger fra 3 00 ml toluen. Produktet ble påsatt på en plugg av silikagel med 5% etylacetat/kloroform og eluert fra pluggen med 2 0% metanol/kloroform. Det resulterende 3-merkaptopropionylhydrazidet var en svakt lyserød olje som størknet ved avkjøling, men smeltet ved romtemperatur.
Til 50 mg LL-E33288* X<J> i 50 ml acetonitril ved -15°C ble tilsatt 6,6 mg 3-merkaptopropionylhydrazid i 1 ml tetrahydrofuran. Én ekvivalent trietylamin og/eller 1 ekvivalent eddiksyre ble tilsatt som katalysator. Reaksjonen ble omrørt ved 0°C i 1 time, og løsningsmiddelet ble deretter fordampet. Residuet ble kromatografert på silikagel med en gradient på 10-15% metanol i kloroform for å gi 2 6 mg av det ønskete produktet. Retensjonstiden ved revers fase C18 HPLC: 5,0 min i 41% acetonitril/0,IM vandig ammoniumklorid.
Eksempel 11
N- T r( 4- metylcoumarin- 7- vl) aminolacetylIcvstein-hydraziddisulfidanalogen av LL- E332881fr /
En blanding av 1,0 g (5,7 mmol) 4-metyl-7-aminocoumarin, 3,0 ml etylbromacetat (5 ekvivalenter), 90 mg (0,1 ekvivalenter) natriumjodid og 30 ml dimetylformamid ble oppvarmet under argon ved 80°C i 5 timer. Blandingen ble avkjølt, fortynnet med etyleter, vasket tre ganger med 50% saltløsning, tørket med magnesiumsulfat og inndampet til tørrhet. Det rå produktet ble løst i kloroform inneholdende 1% etylacetat og filtrert gjennom en plugg av silikagel. Omkrystallisering fra dietyleter inneholdende spor av kloroform ga rent etyl-N-[(4-metylcoumarin-7-yl)amino]acetat.
Til 1,96 g (7,5 mmol) av esteren ovenfor i 15 ml metanol og 15 ml tetrahydrofuran ble tilsatt 10 ml IN vandig natrium-hydroksyd. Etter 30 min ble tilsatt 4 ml 10% vandig saltsyre. De organiske løsningsmidlene ble fordampet, og det resulterende krystallinske produktet filtrert og vasket med kald etanol og deretter eter. Dette materialet ble løst i 20 ml tetrahydrofuran og 4 ml dimetylformamid. Dicykloheksyl-karbonyldiimidazol (1,3 g, 2,2 ekvivalenter) ble tilsatt, og reaksjonen ble omrørt i 15 min. Cysteinetylesterhydroklorid (1,6 g, 2,5 ekvivalenter) og trietylamin (1,2 ml) ble deretter tilsatt. Etter ytterligere 3 timer ble reaksjonen fortynnet med etyleter inneholdende 5% metylenklorid, og vasket én gang 2med 10% vandig saltsyre og to ganger med saltløsning. Etter tørking med magnesiumsulfat og fordampning av løsningsmidlene, ble det rå produktet krystallisert ved å løse det i kloroform inneholdende en minimal mengde etanol og deretter å tilsette et overskudd av eter. Krystallene ble filtrert og tørket for å gi ren N-[[(4-metylcoumarin-7-yl)amino]acetyl]cysteinetyl-ester.
En blanding av 5 ml kloroform, 2 0 ml metanol og 0,4 ml hydrazinhydrat ble oppvarmet til tilbakeløp under argon. Til dette ble tilsatt 550 mg N-[[(4-metylcoumarin-7-yl)amino]-acetyl]cysteinetylester. Etter 9 timers tilbakeløp ble blandingen avkjølt, og det faste produktet ble filtrert og vasket med kloroform og deretter etyleter. Det rå produktet (som inneholdt tiol og disulfid) ble løst i dimetylformamid som inneholdt ditiotreitil og trietylamin. Etter 30 min ble produktet utfelt med overskudd av etyleter, og oppsamlet ved filtrering. Dette materialet ble renset ytterligere ved omkrystallisering fra avgasset acetonitril som inneholdt ditriotreitil og spor av trietylamin for å gi rent N-[[(4-metylcoumarin-7-yl)amino]acetyl]cysteinhydraz id.
Til 12 mg 70% rent LL-E3 3288'Y1-J i 12 ml acetonitril ved 0°C ble tilsatt 4 mg N-[[(4-metylcoumarin-7-yl)amino]-acetyl]cysteinhydrazid i 1,2 ml dimetylformamid. Etter røring over natten ble tilsatt ytterligere 2 mg av N-[[(4-metyl-cumarin-7-yl)amino]cysteinhydrazid i 0,6 ml dimetylformamid. Reaksjonen ble omrørt i 3 døgn ved 0°C og filtrert. Acetonitrilen ble inndampet, og den resulterende dimetyl-formamidløsningen ble fortynnet med et overskudd av 1:1 heksaner/eter. Produktet ble isolert ved filtrering og ytterligere renset ved kromatografi på silikagel med en 15-20% gradient av metanol i kloroform for å gi 3 mg av det ønskede produktet. Retensjonstiden ved revers fase C18 HPLC: 3,5 minutter ved bruk av 4 5% acetonitril/0,1 M vandig ammoniumklorid.
Eksempel 12
3- merkaptopropionylhvdraziddisulfid-
analog av LL- E33288a^- J
Til 10 mg LL-E33288a3-J i ml acetonitril ved -15°C ble tilsatt 6,6 mg 3-merkaptopropionylhydrazid i 1 ml acetonitril. Én ekvivalent av trietylamin og/eller 1 ekvivalent av eddiksyre ble tilsatt som katalysator. Reaksjonen ble omrørt ved 0°C i 1 time, og løsningsmiddelet ble deretter fordampet. Residuet ble kromatografert på silikagel med en gradient på 10-15% metanol i kloroform for å gi det ønskete produkt. Retensjonstiden ved revers fase C18 HPLC:3,5 min i systemet 4 5% acetonitril 10,1 M vandig ammoniumklorid.

Claims (5)

1. Analogifremgangsmåte for fremstilling av den terapeutisk aktive substituerte disulfidanalogen av et antibiotisk LL-E33288a1-Br, ax-J, a2-Br, a2-J, a3-Br, a3-J, a^-Br, /^-Br, j3rj, j82-J, 'Y1-Br, "Yi-J, 6X- J, med formelen Q-Sp-SS-W, hvori
W er
Rx er R2 er R3 er H, R<, er R5 er og X er jod eller brom; Sp er en ( C^ C^) alkylengruppe med rett eller forgrenet kjede,; Q er hydrogen eller hvor n er 0 eller 1, eller: karakterisert ved at den omfatter å omsette LL-E3 32 88a1_Br f LL-E33288a1-J, som har de følgende Rf-verdier i de etterfølgende løsnings-systemer på TLC på silikagelplater: i) etylacetat mettet med 0,1 M vandig kaliumdihydrogenfosfat, Rf = 0,67; ii) 3% isopronanol i etylacetat mettet med 0,1M vandig kaliumdihydrogenfosfat, Rf = 0,80 og iii) etylacetat:metanol (95:5), Rf = 0,80, med en molekylvekt på 1145; LL-E33288a2-Br med formel LL33288a2~J/ med formel LL-E33288a3-Br, med formel LL-E33288a3-J, med formel LL-E33 288a4-Br; LL-E33288/31_Br, med formel LL-E33288/3-L-J, med formel LL-E33288j02-Br, med følgende Rf-verdier i de etterfølgende løsningssystemene på TLC på silikagelplater: a) etylacetat mettet med 0,1M vandig kaliumdihydrogenfosfat, Rf=0,32; b) 3% isopropanol i etylacetat mettet med 0,1M vandig kaliumdihydrogenfostat, Rf=0,41; og c) etylacetat:metanol (95:5), Rf=0,45; LL-E3 3288'Y1-Br, med formel LL-E3328<8>'Yi-J, med formel og LL-E3 3 288 6'1-J, med formel med en tilsvarende substituert merkaptan i acetonitril ved -10°C til -30°C i 1-48 timer.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1 ved fremstilling av etyldisulfidanalogen av LL-E33288'Yi-J, karakterisert ved at man anvender tilsvarende substituerte utgangsmaterialer.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 1 ved fremstilling av propyldisulfidanalogen av LL-E3328871-J, med et protonmagnetisk resonnansspektrum som vist i fig. V og et massespektrum som vist i fig. VI, karakterisert ved at man anvender tilsvarende substituerte utgangsmaterialer.
4. Fremgangsmåte ifølge krav 1 ved fremstilling av 1-metyl-l-propyldisulfidanalogen av LL-E3 3288'Yi-J, karakterisert ved at man anvender tilsvarende substituerte utgangsmaterialer.
5. Fremgangsmåte ifølge krav 1 ved fremstilling av 7-(2-merkaptoetylamino)-4-metylencumarindisulfidanalogen av LL-E33288-YX-J, karakterisert ved at man anvender tilsvarende substituerte utgangsmaterialer.
NO884834A 1987-10-30 1988-10-28 Fremgangsmaate ved fremtilling av disvovelanaloger av ll-E33288-antitumormidler NO173506C (no)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US11494087A 1987-10-30 1987-10-30

Publications (4)

Publication Number Publication Date
NO884834D0 NO884834D0 (no) 1988-10-28
NO884834L NO884834L (no) 1989-05-02
NO173506B true NO173506B (no) 1993-09-13
NO173506C NO173506C (no) 1993-12-22

Family

ID=22358378

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO884833A NO176480C (no) 1987-10-30 1988-10-28 Analogifremgangsmåte ved fremstilling av målrettede former av metyltritio-anti-tumormidler
NO884834A NO173506C (no) 1987-10-30 1988-10-28 Fremgangsmaate ved fremtilling av disvovelanaloger av ll-E33288-antitumormidler

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO884833A NO176480C (no) 1987-10-30 1988-10-28 Analogifremgangsmåte ved fremstilling av målrettede former av metyltritio-anti-tumormidler

Country Status (19)

Country Link
EP (2) EP0313874B1 (no)
JP (2) JP2820256B2 (no)
KR (2) KR0133130B1 (no)
AR (1) AR246083A1 (no)
AT (2) ATE112172T1 (no)
AU (2) AU612714B2 (no)
BR (1) BR1100939A (no)
CA (1) CA1321582C (no)
DE (2) DE3889063T2 (no)
DK (2) DK602488A (no)
ES (2) ES2061586T3 (no)
FI (2) FI95204C (no)
HK (2) HK131897A (no)
IE (2) IE65053B1 (no)
IL (2) IL87947A (no)
NO (2) NO176480C (no)
NZ (2) NZ226727A (no)
PT (2) PT88882B (no)
ZA (2) ZA888123B (no)

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5079233A (en) * 1987-01-30 1992-01-07 American Cyanamid Company N-acyl derivatives of the LL-E33288 antitumor antibiotics, composition and methods for using the same
US5606040A (en) * 1987-10-30 1997-02-25 American Cyanamid Company Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
IL115770A (en) * 1989-04-14 1999-03-12 American Cyanamid Co Substituted disulfides of formula q-sp-ss-w their preparation and use for inhibiting the growth of tumours and for treating bacterial infections
GB9007384D0 (en) * 1990-04-02 1990-05-30 Duncan Ruth Coupling between polymers and other organic molecular entities utilising thiol-specific reactive groups
US5712374A (en) * 1995-06-07 1998-01-27 American Cyanamid Company Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5714586A (en) * 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US20040009535A1 (en) 1998-11-27 2004-01-15 Celltech R&D, Inc. Compositions and methods for increasing bone mineralization
PT2261335T (pt) 1998-11-27 2017-09-08 Ucb Pharma Sa Composições e métodos para aumentar a mineralização óssea
NZ511705A (en) * 2001-05-14 2004-03-26 Horticulture & Food Res Inst Methods and rapid immunoassay device for detecting progesterone and other steroids
MEP2808A (xx) 2003-06-16 2010-02-10 Celltech R & D Inc Antitijela specifična za sklerositin i metode za povećanje mineralizacije kostiju
US8841092B2 (en) * 2006-08-30 2014-09-23 Wisconsin Alumni Research Foundation Reversible natural product glycosyltransferase-catalyzed reactions, compounds and related methods
KR100979928B1 (ko) * 2008-07-16 2010-09-03 한주학 수직축형 부력풍차
SI3066074T1 (sl) * 2013-11-04 2020-03-31 Pfizer Inc. Intermediati in postopki za sintetizacijo derivatov kaliheamicina
EP3573995A1 (en) * 2017-01-24 2019-12-04 Pfizer Inc. Calicheamicin derivatives and antibody drug conjugates thereof
EP3924387A2 (en) * 2019-02-15 2021-12-22 University Of Southern California Lym-1 and lym-2 antibody compositions and improved car constructs

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2430943A1 (fr) * 1978-07-13 1980-02-08 Toyo Jozo Kk Nouveaux derives disulfures
DE3175151D1 (en) * 1980-05-21 1986-09-25 Teijin Ltd Reactive polymer and process for the preparation thereof
US4530835A (en) * 1983-07-08 1985-07-23 Warner-Lambert Company CL-1577 Antibiotic compounds and their production
CA1314245C (en) * 1984-05-23 1993-03-09 Franz Jansen Process for the preparation of conjugates in which a monovalent carboxylic ionophore is associated by means of a covalent bond with a macromolecule, which are useful as immunotoxin potentiators
DE3588213T2 (de) * 1984-11-16 1999-09-30 American Cyanamid Co Antitumorale Antibiotika (Komplex LL-E-33288)
EP0330874A3 (en) * 1988-02-29 1989-10-18 American Cyanamid Company Antibacterial and antitumor agents LL-E33288 epsilon-I and LL-E33288-epsilonBr, with processes and intermediates for producing said agents
EP0342341A3 (en) * 1988-05-17 1991-07-24 American Cyanamid Company Process for producing antitumor antibiotic ll-e33288gamma2

Also Published As

Publication number Publication date
HK131897A (en) 1997-10-03
NO176480C (no) 1995-04-12
EP0313874A3 (en) 1990-05-09
IE883261L (en) 1989-04-30
AU2449488A (en) 1989-05-04
NO176480B (no) 1995-01-02
FI884983A0 (fi) 1988-10-28
JP2720933B2 (ja) 1998-03-04
NO884834D0 (no) 1988-10-28
NO884833D0 (no) 1988-10-28
FI91262B (fi) 1994-02-28
KR970011385B1 (ko) 1997-07-10
DK602488D0 (da) 1988-10-28
ATE104309T1 (de) 1994-04-15
JP2820256B2 (ja) 1998-11-05
NO884834L (no) 1989-05-02
NO173506C (no) 1993-12-22
ZA888127B (en) 1989-07-26
DE3889063T2 (de) 1994-12-01
ATE112172T1 (de) 1994-10-15
IL87946A0 (en) 1989-03-31
DE3851682T2 (de) 1995-05-04
AR246083A1 (es) 1994-03-30
PT88882B (pt) 1993-01-29
KR890006245A (ko) 1989-06-12
DK602588A (da) 1989-05-01
IL87947A (en) 1995-05-26
FI884984A0 (fi) 1988-10-28
IE883262L (en) 1989-04-30
DK602588D0 (da) 1988-10-28
IL87947A0 (en) 1989-03-31
CA1321582C (en) 1993-08-24
IL87946A (en) 1995-06-29
AU612714B2 (en) 1991-07-18
FI95204B (fi) 1995-09-29
HK131997A (en) 1997-10-03
JPH01193282A (ja) 1989-08-03
DE3889063D1 (de) 1994-05-19
EP0313873B1 (en) 1994-09-28
DK174739B1 (da) 2003-10-13
AU618763B2 (en) 1992-01-09
AU2448988A (en) 1989-05-04
EP0313874A2 (en) 1989-05-03
NZ226726A (en) 1991-08-27
PT88881B (pt) 1993-01-29
NZ226727A (en) 1991-12-23
IE65989B1 (en) 1995-11-29
FI884984A (fi) 1989-05-01
ZA888123B (en) 1989-07-26
EP0313874B1 (en) 1994-04-13
ES2061586T3 (es) 1994-12-16
FI884983A (fi) 1989-05-01
DE3851682D1 (de) 1994-11-03
ES2059464T3 (es) 1994-11-16
DK602488A (da) 1989-05-01
FI95204C (fi) 1996-01-10
EP0313873A1 (en) 1989-05-03
KR0133130B1 (ko) 1998-04-17
KR890006244A (ko) 1989-06-12
FI91262C (fi) 1994-06-10
BR1100939A (pt) 1999-08-31
IE65053B1 (en) 1995-10-04
JPH0296599A (ja) 1990-04-09
NO884833L (no) 1989-05-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5606040A (en) Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
NO173506B (no) Fremgangsmaate ved fremtilling av disvovelanaloger av ll-e33288-antitumormidler
CA1117046A (en) Organic compounds
NO178339B (no) Stabile salter av 4&#39;&#39;-deoksy-4&#39;&#39;-epi-metylaminoavermectin B1a/Blb med egenskaper som landbruksinsekticid og preparater inneholdende et slikt salt
Danko et al. Structure and biological activity of a host-specific toxin produced by the fungal corn pathogen Phyllosticta maydis
EP0852233A1 (en) Cyclosporin phosphate derivatives and medicinal composition
AU634247B2 (en) Antitumor substance be-13793c
Shenbagamurthi et al. Design of anticandidal agents: synthesis and biological properties of analogs of polyoxin L
SU1586521A3 (ru) Способ получени производных гликопептидов
NO164904B (no) Analogifremgangsmaate til fremstilling av terapeutisk aktive griseolsyrederivater.
RU2032693C1 (ru) N-алкилпроизводные антибиотиков или их фармацевтически приемлемые соли, обладающие противогрибковой активностью, соединение в качестве промежуточного соединения в синтезе n-алкилпроизводных антибиотиков и способ получения n-алкилпроизводных антибиотика или их фармацевтически приемлемых солей
FI67403B (fi) Foerfarande foer framstaellning av antibiotfoereningar med antitumoereffekt
US5527820A (en) Antibiotics having immunosuppressive activity, delaminomycins and processes for the production of the same
CA1165709A (en) Antitumor antibacterial agents
EP0133098B1 (fr) Nouveaux dérivés de synergistines et leur préparation
AU614698B2 (en) Alkoxymethylidene epipodophyllotoxin glucosides
EP0171677A1 (en) Novel anthracycline antibiotics
EP0206138A1 (en) Anthracycline compounds, a process for their preparation and their use as medicaments
EP0271550A1 (en) Benzopyran and benzothiopyran derivatives and compositions containing them
KR900005957B1 (ko) 물질 4181-2 및 그의 유도체
JP2971204B2 (ja) 新規物質ｗｋ−２９５５およびその製造法
JPS6342640B2 (no)
CS252605B1 (cs) 2a,3a,17/?-trihydroxy-5a-androstan-6-on a způsob jeho přípravy
GB1591933A (en) Cyclosporin derivatives
JPS58126863A (ja) 新抗生物質ピロロマイシンｆおよびその製法

Legal Events

Date Code Title Description
MK1K Patent expired