JPH0296599A - メチルトリチオ抗腫瘍剤のターゲテッド形態 - Google Patents

メチルトリチオ抗腫瘍剤のターゲテッド形態

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JPH0296599A
JPH0296599A JP63272007A JP27200788A JPH0296599A JP H0296599 A JPH0296599 A JP H0296599A JP 63272007 A JP63272007 A JP 63272007A JP 27200788 A JP27200788 A JP 27200788A JP H0296599 A JPH0296599 A JP H0296599A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ＬＬ−Ｅ３３２８８複合体のＣ１、Ｃ２、Ｃ
３、Ｃ４、β１、β８、γ、およびδ成分のジサルファ
イド類似体ならびにＢＢＭ−１６７５、ＦＲ−９００４
０５、ＦＲ−９００４０６、ＰＤ１１４７５９、ＰＤ　
　１１５０２８、ＣＬ−１５７７Ａ％ＣＬ−１５７７８
．ＣＬ−１５７７Ｄ。
ＣＬ−＋５７７ＥおよびＣＬ１７２４抗腫瘍抗生物質の
ジサルファイド類似体のキャリヤー−薬物接合体を記載
する。接合体のキャリヤ一部分は、モノクローナル抗体
、ポリクローナル抗体、それらの断片、化学的にまたは
遺伝子的に操作された相手、成長因子またはステロイド
である。本発明は、キャリヤー−薬物接合体を使用する
方法ならびにそれらの調製方法を包含する。
ＬＬ−Ｅ３３２８８複合体として集合的に知られている
、抗菌剤および抗唾瘍剤の族は、１９８７年１月３０日
に提出された、同時係属米国特許出照笑００９，３２１
号に記載されており、そして本発明の抗腫瘍剤のターゲ
テッド形態（ｔａｒｇｅｔ６ｄ　［ｉｒｍｓ）のための
出発物質であるニイオウ抗腫瘍剤を調製するために使用
する。米国特許出照笑００９．３２１号は、ＬＬ−Ｅ３
３２８８複合体、その成分、すなわち、ＬＬ−Ｅ　３３
２８８α１″′ＬＬ−Ｅ３３２８８α、’　、ＬＬ−Ｅ
３３２８８α　Ｂｔ、ＬＬ−Ｅ３３２８８α２１、ＬＬ
−Ｅ３３２８８　ａ　＝”、ＬＬ　　Ｅ３３２８８ａ３
’、ＬＬＥ３３２８８α　Ｂ＋、ＬＬ−Ｅ　３３２８８
β　ＢｒＬＬ−Ｅ３３２８８β、’　　ＬＬ−Ｅ３３２
８８β２８・、ＬＬ−Ｅ３３２８８β２’　、ＬＬ−Ｅ
３３２８８１１″′、ＬＬ−Ｅ３３２８８βｌ′および
ＬＬ−Ｅ３３２８８８１′、およびマイクロモノスポラ
・エキノスポラ種カリケンシス（ＭｉｃｒｏｍｏｎｏＳ
ｐｏｒａ　ｅｃｈｉｎｏＳｐｏｒａ　ｓＳｐ　ｃａｌｉ
ｃｈｅｎｓｉｓ）の新規な菌株またはその天然の突然変
異または誘導された突然変異を利用する好気的発酵によ
って、それらを生産する方法を記載する。これらの提案
する構造は、下表１に再び記載する。
ある種の他の抗生物質、すなわち、次のものは本発明に
おいて有用である： １）−［−スベラマイシン（ＥＳｐｅｒａｍａｉｃｉｎ
）　、効力のある抗腫瘍剤の新規なりラス。■、物理化
学的データおよび部分的構造。Ｍ、コニシ（Ｋｎｉｓｈ
ｉ）ら、ジャーナル・オブ・アンチビオチフス（Ｊ。
Ａｎｉｉｂｉｏｔｉｃｓ）、　　３８、１６０５　　（
１９８５）　　。
新規な抗腫瘍抗生複合体。Ｍ、コニシ（Ｋｎｉｓｈｉ）
ら、英国特許臼１１］ＧＢ２，１４１，４２５Ａ、１９
８４年５月１５日。
２）新規な抗腫瘍剤抗生物質、ＦＲ−９００４０５およ
びＦＲ−９００４０６，Ｉ。産生菌株の分類学。Ｍ、イ
ワミ（Ｉｗａｍｉ）ら、ジャーナル・オブ・アンチビオ
チフス（Ｊ　、　Ａｎｌｉｂｉｏｔｉｃｓ）、３８．８
３５　（１９８５）。新規な抗腫瘍剤抗生物質、ＦＲ−
９００４０５およびＦＲ−９００４０６，１１゜産生、
分離、特性づけおよび抗腫瘍活性。Ｓ、キヨト（Ｋｙｏ
ｔｏ）ら、ジャーナル・オブ・アンチビオチフス（Ｊ　
、　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）　％　３旦、３４０　（
１９８５）。
３）ＰＤ　　１１４７５９およびＰＤ　　１１５０２８
、驚くべき効能をもつ抗腫瘍抗生物質。１０分離および
特性づけ。Ｒ，Ｈ，ブンゲ（Ｂｕｎｇｅ）、ら、ジャー
ナル・オブ・アンチビオチフス（Ｊ。
Ａｒ＋Ｌｉｂｉｏｔｉｃｓ）　、３７．１５６６　（１
９８４）。
新規な抗腫瘍抗生物質ＰＤ　　１１４７５９および関連
する誘導体の生物学的および生化学的活性。
Ｄ、Ｗ、フライ（Ｆｒｙ）ら、インベスチゲイショナル
・ニュー−ドラグ（Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ　
Ｎｅｗ　Ｄｒｕｇ）、４．３（１９８６）。
４）ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）
種ＡＴＣＣ３９３６３によって生成される新規な抗生複
合体ＣＬ−１５７７Ａ、ＣＬ−１５７７Ｂ、欧州特許出
願０，１３２，０８２．Ａ２号。
５）ＣＬ−１５７７ＤおよびＣＬ−１５７７Ｅ抗生抗生
化合物、それらの産生および使用。米国特許箱４．５３
９，２０３号。
６）ＣＬ−１７２４抗生抗生化合物、それらの産生およ
び使用。米国特許箱４，５５４，１６２号。
上の引用例に記載されるＢＢＭ−１６７５、ＦＲ−９０
０４０５、ＦＲ−９００４０６、ＰＤ１１４７５９、Ｐ
Ｄ　　１１５０２８、ＣＬ−１５７７Ａ、ＣＬ−１５７
７Ｂ、、ＣＬ−１５７７Ｄ。
ＣＬ−＋５７７ＥおよびＣＬ１７２４に関する情報のす
べては、引用によってここに加える。ニスペラマイシン
（ｅＳｐｅｒａｍｉｃｉｎ）　Ａ　ｒ、Ａ２およびＡ（
＞（ＢＢＭ−１６７５複合体）の完全な構造は報告され
ており、そしてこれらを表１に含める。上に列挙した抗
腫瘍抗生物質の物理的特性は、それらがすべて同一であ
り、それらがすべてがメチルトリチオ官能基を含有する
ことを示す。
上に開示する構造から理解できるように、ＬＬＥ３３２
８８複合体のα１、（ｒ２ｓ’ｌ、ａいβ３、β２、γ
、およびδ成分、ならびにＢＢＭ−１６７５、ＦＲ−９
００４０５、ＦＲ−９００４０６、ＰＤ　　１１４７５
９、ＰＤ　　１１５０２８、ＣＬ−１５７７Ａ、ＣＬ−
１５７７８％ＣＬ　−１５７７Ｄ、ＣＬ−１５７７Ｅお
よびＣＬ１７２４抗生物質の各々は、それらの構造中に
メチルトリチオ上に列挙した抗生物質のメチルトリチオ
部分を、種々のチオール含有有機分子で置換すると、新
規なりラスの抗癌剤および抗菌剤が得られる。
表１に列挙したそして反応図１に示すように化合物のメ
チルトリチオ単位を使用してスペーサー（Ｓ　ｐ　）を
導入することができここでそれを賢明に選択すると、上
に列挙した特許および出題の含有中に標的単位（ｔａｒ
ｇｅＬｉｎｇ　ｕｎｉｔ）を導入できることが、今回、
発見された。
ＣＨ３ＳＳＳ−Ｗ １Ｑ−５ｐ−３Ｈ ↓ Ｑ−９ｐ−５Ｓ−Ｗ 反応図！ 式中、Ｓｐは直鎖状もしくは分枝鎖状の二価の（Ｃ＋　
　Ｃｐｓ）基、二価のアリールまたはヘテロアリール基
、二価の（Ｃｓ　　Ｃｐｓ）シクロアルキルまたはヘテ
ロシクロアルキル基、二価のアリールまたはヘテロアリ
ール−アルキル（Ｃ＋　　Ｃｐｓ）基、二価のシクロア
ルキルアルキルまたはヘテロシクロアルキル−アルキル
（Ｃ＋　　Ｃ１８）基、または二価の（Ｃ２Ｃ１８）不
飽和アルキル基であり、Ｑはハロゲン、アミン、アルキ
ルアミノ、カルボキンル、カルボキシアルデヒド、ヒド
ロキシ、チオール、α−ハロアセチルオキシ、低級アル
キルジカルボキシル Ｏ　　Ｎ　　Ｈ　　Ｎ　　Ｈ　　２、　　　　Ｎ　　Ｈ
　　Ｃ　　Ｓ　　Ｎ　　Ｈ　　Ｎ　　Ｈ　　２、　　−
ＯＮＨ．、ＣＯＮ，、 であるか、あるいは引き続いてそれらに転化でき、そし
てＷは上の表１に示すとおりである。
反応図■からの生成物が標的単位（Ｔｕ）に転化できる
か、あるいは標的単位と直接に反応性である官能基のす
くなくとも１つを含有するかぎり、下の反応図ＩＩに示
すように、上に記載した特許および出願の抗腫瘍抗生物
質のターゲテッド形態発生させることができる： ＣＨ，ＳＳＳ−Ｗ ｌＴｕ−（Ｙ）ｎ ↓ Ｔｕ　−　　（Ｚ−Ｓｐ−ｓｓ−ｗ）ｍ（Ｙ）ｎ−ｍ 反応図ＩＩ 式中、Ｑ，Ｓｐ，およびＷは上に定義したとおりであり
、Ｔｕはモノクローナル抗体、ボタクローナル抗体、そ
の断片、その化学的または遺伝子的に操作された相手、
成長因子、またはステロイドであり、Ｙはタンパク質の
側鎖のアミン、カルボキシ、またはチオール基、炭水化
物残基から誘導されたアルデヒド、またはアミドアルキ
ルチオ基であり、モしてｎは１−１００の整数であり、
ＺはＱおよびＹの共有反応から、直接あるいは還元後、
形成され、そしてＺは一ＣＯＮＨ−　　−Ｃ。
ＮＨＮ＝ＣＨ−　　−ＣＯＮＨＮＨ２Ｈ２−、−Ｎ１−
Ｉ　Ｃ　Ｏ　Ｎ　Ｈ　Ｎ　＝　Ｃ　Ｈ　−　　　−　Ｎ
　Ｈ　Ｃ　Ｏ　Ｎ　Ｈ　Ｎ　Ｈ　Ｃ　Ｈ−ＮＨＣＳＮＨ
Ｎ＝ＣＨ−−ＮＨＣＳＮＨＮＨＣＨ２−　　　−ＯＮ−
ＣＨ−　　　−ＮＨＮ　Ｈ　Ｃ　Ｈ□　−　　−Ｎ＝Ｃ
Ｈ−　　　−Ｃｏ□　−　　−ＮＨ　Ｃ　Ｎ２　　Ｃ　
０２　　　、　　　　Ｓ　Ｓ　ーまたは　　　−ＮＨＣ
ＯＣＨ　ｚ　−ＣＨ−（ＣＨり。、Ｉ ＧＯ．Ｈ であり、そしてｍは０．１〜１５である。
−例として、そして反応図！■を参照すると、ＬＬ−Ｅ
３３２８８１１′の３−メルカプトプロピオン酸誘導体
（Ｑ日Ｃ　Ｏ　ｚＨ　、　Ｓ　ｐ　−　　Ｃ　Ｈ　２Ｃ
　Ｎ２−）は、その活性化されたヒドロキシスクシンイ
ミドの形態（　Ｑ　＝　Ｃ　Ｏ　ｚ　Ｓ　ｕ　１Ｓ　ｐ
　＝Ｃ　Ｈ　ｚ　ＣＨ２−）に転化すると、これを使用
して、リジン残基（例えば、Ｔｕ−モノクローナル抗体
、Ｙ−−ＮＮ２、ここでｎ−５０−１００、利用可能な
りジン残基から）のε−アミン基のあるものと、水性緩
衝液中でｐＨ７．０〜９，５および４°Ｃ〜４０°Ｃの
温度において反応させて、タンパク買主鎖に沿って不規
則に抗生物質のターゲテッド形態（Ｔｕ−モノクローナ
ル抗体、Ｚ　−　−　Ｎ　Ｈお一Ｓｐ＝ーＣＨ，ＣＨ２
−、ｍ＝ｌ”ｌＯ）を生成することができる。この方法
において、利用可能なりジン残基の一部のみが置換され
るだけである。
なぜなら、高い負荷は、一般に、抗体の免疫反応性を保
存することと適合しないからである。同一の不規則に置
換された免疫接合体は、また、他のカルボキシル基活性
化剤、例えば、種々の力〜ポジイミド、または対応する
アシルアジドを使用して、３−メルカプトプロピオン酸
誘導体から調製できる。あるいは、ＬＬ−Ｅ３３２８８
１１′の３メル力プトプロピオニルヒドラジド誘導体（
Ｑ−Ｈ，ＮＮＨＣＯ−、Ｓ　ｐ　−　　Ｃ　Ｈ　２　Ｃ
　Ｈ　２　　）は、ベルオキヂデート酸化抗体（Ｔｕ＝
モノクローナル抗体、Ｙ−−ＣＨＯ，ｎ−１−１５）と
、米国特許ｖｇ４，６７１，９５８号に記載されるよう
に、水性緩衝液中においてｐＨ４〜７５および４°Ｃ〜
４０°Ｃの温度において反応させると、アルデヒド官能
性（抗体のＦｃ部分上に位置する炭水化物残基のｖｉｃ
−ジオールの開裂から誘導される）のみと反応して、タ
ンパク質の主鎖に沿って特異的部位において置換された
薬物を含有する、モノクローナル抗体接合体（Ｔｕ−モ
ノクローナル抗体、Ｚ−−ＣＨ＝ＮＮＨＣＯ−１ＳＩＮ
−−ＣＨ２ＣＨ２ｍ＝０．５〜１０）を生成する。抗体
上の未反応のアルデヒド基を遮断し、こうして架橋を防
止し、ならびに加水分解的に不安定なシップ塩基の結合
を安定化するために、後者の接合体を、例えば、アセチ
ルヒドラジドまたはチロシンヒドラジドと反応させ、次
いでシアノホウ水素化ナトリウムまたはホウ水素化ナト
リウムで還元して、本発明の安定化された構成体（Ｔｕ
−モノクローナル抗体、Ｚ＝−ＣＨ２ＣＨＮＨＣＯ−５
ｐ−−ＣＨ２ＣＨ２、ｍ−Ｑ、〜１０）を生成すること
が好ましい（が必須ではない）。他のアルデヒド反応性
基は、薬物構成体の一部として、本発明の範囲内におい
て、反応図ＩＩの生成物を生成する。このような官能基
は、好ましくは、酸性の水性条件下にアルデヒドと反応
するものであるが、これらに限定されない。塩基性条件
下におけるタンパク質リジンの反応性は十分に大きくて
、それらのアミンは反応図ＩＩの生成物と、モノクロー
ナル抗体の利用可能なアルデヒドについて競争する。別
のアルデヒド反応性基は、例えば、チオセミカルバジド
、および〇−置換ヒドロキシルアミン官能性である。
表Ｉに記載する化合物のターゲテッド形態のアセンブリ
ーは、反応図ＩＩに概略的に示す順序に限定されない。
標的単位（Ｔｕ）を、まず、チオール基を含有するよう
に変性し、次いでこれを表１の化合物と、下の反応図Ｉ
ＩＩに示すように、反応させる： Ｔｕ　　（Ｙ）　　ｎ 十 Ｑ−５ｐ−５−Ｐ ＣＨ，−５ＳＳ−Ｗ ↓ Ｔｕ　　　（Ｚ−’３ｐ　　　ｓｓ−Ｗ）ｍ（Ｙ）ｎ−
ｍ 反応図ＩＩＩ 式中、Ｔｕ、ｙ、Ｑ％　Ｓｌ）％　Ｗｓ　１％およびｍ
は上ｌこ定義したとおりであり、モしてＰは水素または
２−（ピリジルチオ）であるが、ただしＹがＴｕ　（７
）　主Ｈのアミノ酸残基から誘導されたチオールである
とき、Ｚ−３ｐは一緒になって共有結合である。
一例として、そして反応図ＩＩＩを参照すると、モノク
ローナル抗体を３−（２−ジチオピリジル）プロピオン
酸ヒドロキシスクシンイミドニステルト反応させて、リ
ジン残基をとおしてタンパク質を変性することができる
（Ｔｕ＝モノクローナル抗体、Ｙ　＝　Ｎ　Ｈ２、ｎ＝
５Ｏ−１００ＳＱ＝−Ｃ０２Ｓｕ、５ｐ−−ＣＨ’２　
ＣＨ２−Ｐ−２−ピリジルチオ）。例えば、ジチオスレ
イトールで還元した後、中間体が生成しくＴｕ＝モノク
ローナル抗体、Ｚ　＝　　Ｎ　ＨＣＯＳ　ｐ　＝　　Ｃ
Ｈ２ＣＨ２、ｍ　＝　１〜１５）、これは表１の化合物
と反応させて、主題の免疫接合体を生成することができ
る。同様に、２−イミノチオランをモノクローナル抗体
と反応させて、チオール基をタンパク質の表面上に直接
、還元工程を必要とせずに、導入することができる（Ｔ
ｕ＝モノクローナル抗体、Ｚ＝　　ＮＨＣＯ５ｌ）＝　
　（ＣＨ３）３−ｌｍ＝１〜１５）、そしてこの中間体
を前の表１の化合物と反応させることができる。あるい
は、シスチン残基として二量体の形態のモノクローナル
抗体の構造に固有のスルフヒドリル基を使用して、反応
図１■■の反応に直接参加させることができる。
このようなスルフヒドリルは、酵素の消化および自然モ
ノクローナル抗体（Ｔｕ＝Ｆａｂ’断片、Ｚ−３ｐ＝結
合、Ｙ−３Ｈ）に遷移的に暴露されるが、不対シスチン
残基を含有するモノクローナル抗体の遺伝子的に変更さ
れた構成体の使用が同様に考えられる。
本発明の好ましい実施態様は、式 Ｔｕ　−（Ｚ−３ｐ−３Ｓ　−Ｗ）　ｍ（Ｙ）ｎ−ｍ を有し、ＬＬ−Ｅ３３２８８γｌ’（ＣＨ３ＳＳＳ−Ｗ
）と表示する抗腫瘍抗生物質から調製され、ａ）第１図
に示す紫外線スペクトル、 ｂ）第２図に示すプロトン磁気共鳴スペクトル、および Ｃ）第３図に示す赤外スペクトル、 を有し、 前記調製の方法は、ジチオメチル部分を、式Ｑ−３ｐ−
５Ｈ（式中、Ｓｐは直鎖状もしくは分枝鎖状の二価の（
Ｃ２ｃｓ）基または二価のアリールまたはヘテロアリー
ルアルキル（Ｃ２ｃｓ）基であり、そしてＱはカルボキ
シル、低級アルキルジカルボキシル無水物、−ＣＯＮＨ
ＮＨ２、または であるか、あるいは引き続いてそれらに転化できる）の
化合物と置換して、式Ｑ−５ｐ−５５−Ｗ（式中、Ｑ、
ＳｐおよびＷは上に定義したとおりである）の中間体を
生成し、 ｑ−Ｓｐ−ｓｓ−ｗを式Ｔｕ　−（Ｙ）　ｎ　（式中、
Ｔｕはヒト腫瘍関連抗原との優先的反応性を示すモノク
ローナル抗体であり、Ｙは抗体上の側鎖のアミノ基、ま
たは抗体の炭水化物基の酸化によって発生したアルデヒ
ドであり、そして０はｌ−１００の整数である）の分子
と反応させて、式％式％） （式中、Ｔｕ、Ｙ、Ｓｐ、Ｗおよびｎは上に定義したと
おりであり、そして２はＱおよびＹの共有反応から、直
接あるいは還元後、形成され、そしてＺは−ＣＯＮＨ−
−ＣＯＮＨＮ＝ＣＨＣＯＮＨＮＨＣＨ２−１または Ｏ２Ｈ であり、そしてｍはＯ，１−１５である）の化合物を生
成することからなる、ことを特徴とする、タンパク質−
薬物接合体である。
ある数の異なるモノクローナル抗体（ＭｏＡｂ）を使用
して、メチルトリチオ抗癌剤化合物のターゲティングを
例示する。Ｍ　ｏ　Ａ　ｂのＬｙｍ　　ｌおよびＬｙｍ
　　２は、成熟Ｂ−リンパ球およびそれらの産生物リン
パ腫上の異なる抗原を認識する。これらのＭ　ｏ　Ａ　
ｂの産生および特性は、Ａ、Ｌ、ニブスティン（Ｅｐｓ
ｔｅｉｎ）ら、「癌の研究（ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒ
ｃｈ）　、　４７．８３０　（１９８７）に記載されて
いる。ＭｏＡｂ　　Ｂ７２．３は、主として、肺および
結腸の癌を標的にするが、膵臓、卵巣、および肺の癌と
の反応性が、また、認められる。
抗体は、Ｔ、Ｌ、クルング（Ｋｌｕｎｇ）ら、「インタ
ーナショナル・ジャーナル・オブ・キャンサー（Ｉｎｔ
、Ｊ、Ｃａｎｃｅｒ）　、３８．６６１　（１９８６）
に記載された。主として乳癌を認識するＭ　ｏ　Ａ　ｂ
ＣＴ−Ｍ−０１はＥＰＯ出［８６４０１４８２゜４．１
９８６年７月３日提出、に記載され、そしてＭＡＣ−６
８は、ＣＴ−Ｍ−０１を産生するハイプリドーマのサブ
クローンによって産生され、そして肺癌および結腸癌の
両者を認識する。主題の有用な化合物の中間体、および
これらの抗体との接合体は、実験の節に記載されている
。しかしながら、この特許は前述の抗体に限定されない
ことに注意すべきである。その代わり、方法は十分に一
般的であって、それらの部類またはアイソタイプ、それ
らの酵素的に誘導される断片、それらの化学的に操作さ
れかつ安定化された断片、ならびにそれらのそれぞれの
キメラおよび人間化された（　ｈｕｍａｎ　１ｚｅｄ）
相手に無関係に、すべての抗体に適用できる。また、標
的単位はモノクローナル抗体にのみ限定されない。他の
タンパク質、ならびにそのだめの受容体が組織上に存在
する小さい分子は、ターゲティング実在物として本発明
の発見の範囲内に入る。
表１の化合物からモノクローナル抗体接合体を生成する
ために使用した本発明の方法は、次の生体外アッセイに
よって決定して、標的細胞とのすぐれた免疫反応性を保
持する構成体を生ずる：標的細胞 すべての標的細胞は、５％の胎児仔つシ血１１ｖ（Ｆｅ
２）、ＩＴＳ　［コラポレイティブ・リサーチ（Ｃｏ１
１ａｂｏｒａｔｉｖｅ　　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）、Ｃａ　
ｔ＃４０３５１］　、ストレプトマイシン（５０μｇ／
ｍｌ）、ペニシリン（５０単位／　ｍ　ｌ　）、ケンタ
マインン硫酸（５０単位／　ｍ　Ｉ　）およびグルタミ
ン（０，０３％）を補充したＲＰＭＩ１６４０培地中で
維持した。細胞は加湿した５％のＣＯ２中でインキュベ
ーター内で３７°Ｃにおいて維持した。
適当な標的細胞を収穫し、計数し、そしてダルベツコ（
Ｄｕｌｂｅｃｃｏ）のリン酸塩緩衝塩類溶液（Ｄ　Ｐ　
Ｂ　Ｓ）中に、試験する七ツクローナル抗体（ＭｏＡｂ
）のために最適な濃度で、懸濁した。Ｏ，１ｍｌのアリ
コートの細胞を、無菌の組織培養ポリスチレンの９６ウ
エル（ｗｅｌｌ）平板の各ウェルに加えた。平板を１．
００Ｏｒｐｍで５分間遠心し、そして上澄み液を払いの
けｌ：。
平板を一夜空気乾燥し、そして４°Ｃで３力月間まで貯
蔵することができる。
非特異的結合部位を、２００μＱ／ウエルの１％のゼラ
チンをＤＰＢＳ中に添加することによって遮断し、そし
て平板を１時間３７°Ｃにおいて加湿したインキュベー
ター中でインキュベーションした。（すべての引き続く
インキュベーションは同様な条件下に実施する）。平板
は、ダイナチク（Ｄｙｎａｔｅｃｈ）からの自動化ＥＬ
　Ｉ　ＳＡ洗浄システム（Ｕｌ　ｔ　ｒａｗａｓｈ　　
Ｉ　Ｉ）を使用して、２５０μＱのＤＰＢＳ中の０．０
５％のツイーン（ＴＷＥＥＮ）−２０（洗浄溶液）で１
回洗浄した。試験すべき試料を希釈して、０．１％のゼ
ラチン−ＤＰＢＳ中の３μ（２／ｒｎｌのＭ　ｏ　Ａｂ
当量の最終濃度にした。６つの追加の３倍の系統的希釈
物を各３μｇ　／　ｍ　ｌの試料から調製し、そしてｌ
ＯＯμａを３回の反葆実験において適当なウェルに添加
した。ウェルの底の列にのみ、１００μＱの０．１％の
ゼラチンをバックグラウンドとして加えた。平板を４５
分間インキュベーションし、次いで３回洗浄した。アル
カリ性ホスファターゼ接合し、親和精製したヤギ抗マウ
ス免疫グロブリン（Ｃａｐｐｅｌ　　Ｃａｊ＃　　８６
１１−０２５１）を０．１％のゼラチン中で１：１２５
に希釈し、そして１００μＱを各ウェルに添加した。平
板を４５分間インキュベーションし、次いで３回洗浄し
た。２００μＱのｐ−ニトロフェニルホスフェート基質
溶液（下を参照）を各ウェルに添加した。室温において
４５分後、反応を５０μＱの３Ｍ−ＮａＯＨの添加によ
り停止した。ウェルの各々の吸収を４０５ｎｍにおいて
ダイナチク（Ｄｙｎａｔｅｃｈ）からの自動化分光光度
計（ＥＩＡ　　Ａｕｔｏｒｅａｄｅｒ　　＃　　ＥＬ−
３１０）において読んだ。
基質のジェタノールアミン緩衝液（１０％）９７ｍｌの
ジェタノールアミン ８００ｍ１の水 ０．２ｇのＮａＮ。
１００　ｍ　ｇのＭｇＣＩｚ・６Ｈｚ○試薬を連続的に
撹拌しながら溶解し、そしてｐＨが９．８になるまでＩ
Ｍ　　ＨＣＩを添加した。
合計の体積を水で１リツトルにし、そして０．２μのフ
ィルターで滅菌濾過した。緩衝液は４°Ｃで暗所に貯蔵
した。使用直前に、ｐ−ニトロフェニルホスフェート［
シグマ（Ｓ　ｉ　ｇｍａ）　、Ｃａ　ｔ＃　　１０４−
４０）を１０％のジェタノールアミン緩衝剤中に溶解し
て（室温でなくてはならない）ｌ　ｍ　ｇ　／　ｍ　＋
の最終濃度にした。
光学密度（○、Ｄ、）の計算 試料の各々の結合％は、次の等式から計算した：（Ａ−
Ｂ／Ｃ−Ｂ）Ｘ　Ｉ　ＯＯ−結合％Ａ＝試験試料の平均
の光学密度 Ｂ＝バックグラウンドの平均の光学密度Ｃ−３μｇ／ｍ
ｌの非操作Ｍ　ｏ　Ａ　ｂ対照の平均の光学密度 結合％は半対数グラフの非対数目盛り上にプロットし、
そしてＭ　ｏ　Ａ　ｂ濃度を対数目盛り上にブロン）Ｌ
？ユ。試料の各々のＢＤＳＯ（すなわち、５０％の結合
を与えるために必要な抗体の投与量）をグラフから誘導
し、そして免疫活性の保持量を次の等式によって計算し
た： （ＭｏＡｂ対照のＢＤ３．）／（試験試料のＢＤｓ。）
×１００−保持された免疫活性％ 手順２−間接的ＲＩＡ ０．２ｍｌの１０％のＦＣ３培地中の標的細胞の適当量
のアリコートを４ｍｌのポリスチレン管中に入れｌこ。
試験すべき試料を、１０％のＦＣ３培地中に２μｇ　／
　ｍ　ｌのＭ　ｏ　Ａ　ｂ当量の濃度に希釈した。５つ
の３倍の系統的希釈物を各２μｇ／ｍ１の試料から調製
し、そして０．２ｍｌを反復実験において容管に添加し
た。バックグラウンドの試料には、細胞および培地のみ
を加えた。細胞を４°Ｃにおいて１時間インキュベーシ
ョンし、次いで２％のＦＣ３培地で２回洗浄した（すべ
てのＲＩＡの洗浄は３ｍｌの体積で実施した）。はば５
００．０００ｃｐｍを含有する０、０５ｍ１のヒツジＦ
（ａｂ’）ｚ抗マウスＩｇＧ　［”！］　　（デュポン
、Ｃａｔ＃　　ＮＥＸ　　１６２　０１４２）を管の各
々に添加した：細胞さらに１時間４°Ｃにおいてインキ
ュベーションし、２％のＦｅ２で１回洗浄し、そしてＰ
ＢＳで２回洗浄した。０．５ｍｌのＰＢＳを管の各々に
添加し、細胞をかきまぜ、清浄な管に移し、そしてバッ
カー１・゛・ガンンマ（Ｐａｃｋａｒｄ　　Ｇａｍｍａ
）５００で１分間計数した。
値の各々の結合％を決定し、そして前のＥＬＩＳＡ等式
のようにグラフにしたが、ただし光学密度の代わりにｃ
ｐｍを使用し、モしてＣ＝ｌμｇ／　ｍ　Ｉの非操作Ｍ
　ｏ　Ａ　ｂ対照の平均のｃｐｍ０試料の各々の保持さ
れた免疫活性％を前述のようにして決定した。
手順２−直接のＲＩＡ １ｍｌの１０％のＦＣ３培地中の標的細胞の適当量のア
リコートを４ｍｌのポリスチレン管に入れ、遠心し、そ
して上澄み液を廃棄し、た。試験すへさ試料を、１０％
ＦＣ３培地中で２００μｇ／ｍ１のＭ　ｏ　Ａ　ｂ当量
の濃度に希釈した。５つの追加の５倍の系統的希釈物を
２００μｇ　／　ｍ　ｌの試料の各々に添加し、０．０
５ｍ１を管の各々に反復実験において添加した。０．０
５ｍ１の１２６　（Ｍ　ｏ　Ａ　ｂを管の各々に添加し
た（最適量は、ＭｏＡｂおよびバッチの各々についてこ
こに決定した）。陽性の対照試料は、細胞、培地および
１２５１−ＭｏＡｂを含有した。バックグラウンドの試
料は、非特異的細胞、培地および１２Ｊ−ＭｏＡｂを含
有した。細胞を１時間４°Ｃにおいてインキュベーショ
ンし、２％のＦＣ５培地で１回、ＰＢＳで２回洗浄し、
前述のように、移し、そして計数し　ｊこ　。
試料の各々の１２Ｊ−ＭｏＡｂ結合阻害％は、次の式に
よって計算した： （Ａ−Ｂ／Ｃ−Ｂ）　Ｘ　ｌ　００＝１２’［−ＭｏＡ
ｂ結合の阻害％ 八−試験試料の平均のｃｐｍ Ｂ−バックグラウンドの平均のｃｐｍ Ｃ＝陽性の対照の平均のｃｐｍ プロットおよび試料の各々が保持した免疫活性％を前の
ように計算したが、ただしＢＤ、。は実際にＢ　ＩＤ５
ｏ（”Ｊ　　ＭＯＡ’ｂの結合の５０％阻害を与えるた
めに必要なＭ　ｏ　Ａ　ｂの投与量）である。
注： １）ＲＩＡにおいて各試薬の添加直後、管は激しくかき
まぜｌ二。
２）非操作ＭｏＡｂ対照の５０％に等しい内部対照試料
を、アッセイの各組に含めて、各手順が接合体の免疫活
性の保持を予測するとき定量的であるかどうかを確認し
た。
これらのアッセイからの結果を下表２に記載する。
表　２　（続き） 表２ ｙｍ　１ ＃ｌ ８７２．３ ＃１ ＃２ ｙｍ　２ Ｂ７２．３ ｙｍ　１ ＣＴ−ＩＪ−Ｏｆ ＡＣ−６８ ｙｍ　１ ＃１ ＃２ 本発明のモノクローナル抗体の接合体は、抗癌剤として
活性である。生体外細胞障害性をアッセイするための下
のアッセイは、非標的細胞と反対に、標的細胞系につい
て構成体の優越性を示し、そしてそれらの非標的相手と
比較して化合物のタケテッド形態の利用の手段を提供す
る。
細胞障害性のアッセイ 生体外 試験すべき試料を０．２または０．０２μｇ／ｍ１のＬ
Ｌ７Ｅ３３２８８γ１′当量の濃度に希釈した（出発濃
度は試験すべき細胞系に依存する）。
３つの追加の５倍の希釈物をもとの試料希釈物の各々か
ら調製し、そして０．２ｍｌを無菌の１５ｍ１のポリス
チレン管に添加した。ＬＬ−Ｅ３３２８８γ１′および
無関係のＭ　ｏ　Ａ　ｂから成る少なくとも１つの同様
な接合体を、アッセイに含めて、関連する接合体の特異
性を決定した。０．２ｍｌのｌＯ％ＦＣ３培地中の１０
’の適当な標的細胞のアリコートを管に入れ、そしてか
きまぜた。さらに、標的として、無関係の細胞を利用し
て同一の試験を実施して、関連する接合体の特異性をさ
らに確認した。Ｍ　ｏ　Ａ　ｂ対照には等しい量のＭＯ
Ａｂのみを与え、そして陽性の対照は１０％のＦＣ５培
地のみを与えた。
細胞は３７°Ｃで７分間インキュベーションし、次いで
４回８ｍｌの２％のＦＣ３培地で洗浄した。
０、２ｍｌのＦｅ２を管の各々に添加し、細胞をかきま
ぜ、そして０．２ｍｌのアリコートを無菌の９６ウエル
のポリスチレン組織培養平板のウェルの各々に添加した
。
平板を２日間加湿した３７℃のインキュベーター内で５
％のＣ０２中においてインキュベーションした。培地の
半分を取り出し、そして２μＣｉ／ｍｌの３Ｈチミジン
（デュポン、ＮＥＮ、Ｃａｔ＃　　ＮＥＮ−０２７）を
含有する新鮮な培地と交換した。インキュベーションは
２４時間実施し、細胞を凍結し、融解し、そしてＰＨＤ
細胞収穫装置で［ケンプリン・ジ・テクノロジー・イン
コーポレーテンド（Ｃａｍｂｒｉｇｅ　　Ｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｙ、Ｉｎｃ、）］　によって収穫した。試料の各
々をベックマン（Ｂｅｃｋｍａｎ）ＬＳ　　５８００／
ンチレーシヨンカウンカー、チャンネル１１で１分間計
数した。
増殖の阻害％は、次のようにして計算した：（試験の値
の平均のｃｐｍ）／（培地対照の平均のｃｐｍ）Ｘ１０
０＝増殖％ １００−増殖％＝阻害％ 阻害％を半対数グラフの非対数目盛り上にプロットし、
そしてＬＬ−Ｅ３３２８８γ１１濃度を対数目盛り上に
プロットした。試料の各々のＩＣｓ。
（５０％の阻害を与えるために必要なＬＬ−Ｅ３３２８
８γ１′の濃度）をグラフから誘導し、そして細胞障害
性の保持量を次の等式によって計算しｌこ　： （ＬＬ−Ｅ３３２８８γ１′のＩＣ５ｏ）／（試験試料
のＩＣ６゜’）Ｘ１００＝保持された細胞障害性％ 生体外細胞障害性のアッセイからの結果を、下表３に記
載する。
接合体 接ａ体 Ｌｙｍ　１ ８７２．３ Ｌｙｍ　１ 表３ ％Ｅ３３２８８γ１ ．９ ．００１ ・・１．４ ％Ｅ３３２８８γ１ の生成物 １１．３ ３．８ の生成物 接合体 接合体 １−１（続き） Ｌｙｍ　１　（＃３非標的細 胞に対する） Ｌｙｍ　２ ８７２．３ ＡＣ−６８ ＴＭ−０１ Ｌｙｍ　ｌ ＃ｌ ＃２ ｉｔ ＋００ 次のアンセイ系を使用して、本発明の接合体の生体内活
性を測定した。
薬物−モツクローナル抗体接合体への抗腫瘍剤の活性に
ついての生体内試験は、無胸腺（ヌード）マウスにおけ
るヒト腫瘍の異種移植片（ｘｅｎ。
ｇｒａｐｈ）を使用して実施した。
パーキット（Ｂｕｒｋｉｔｔｏ）リンパ腫（Ｒａｊｉ）
および骨髄腫（Ｈ３Ｓｕ　Ｉ　ｊ　ａｎ）の細胞を培養
フラスコから収穫し、そして皮下的にマウスに接種した
（≧８０ＸＩＯ’のリンパ腫細胞または４０ＸＩＯ’の
骨髄腫細胞）。充実１１ｆｆｉ　５ｇ１、卵巣腫瘍（Ｃ
Ａ７３．０ｖｃａｒ−３）および乳癌（ＭＸ−１）を無
胸腺マウス中で増殖し、取り出し、２ｍｍ３の断片に切
断し、そして試験マウス中に皮下的に移植した（５〜８
断片／マウス）。
薬物、モノクローナル抗体および薬物−モツクローナル
抗体接合体を、腫瘍移植後、第２．３．４．６．７また
は８日に開始して、３日毎に合計３または５回の注射に
よって腹腔内に投与した。
ｐａ瘍の測定（腫瘍の長さおよび輻）は、腫瘍移植後４
または５週に７日毎に、フオウラー・ウルトラ　　（Ｆ
ｏｗｌｅｒ　　　　　ｕｌｔｒａ）ＣＡＬ　　　　　Ｉ
Ｉ＠子カリカリバーって実施した。腫瘍の質量（ｍｇ）
を次式から推定した： （長さ（ｍｍ）Ｘ幅（ｍｍ））／２ 腫瘍の増殖の阻害は、各試験群について対照の百分率に
基づいて計算した［処置した（Ｔ）ｍｇ／対照（Ｃ）ｍ
ｇＸ　ｌ　００を意味する］　、　Ｔ／Ｃ値≦４２％、
群において、≧６５％の生存動物は活性を立証するため
Ｉこ必要であるき考える。
このアンセイにおける結果を表４に要約する。
表４ 投与量（ｍｃｇ） 腫瘍の大きさ Ｓ／Ｔ Ｍ　ｏ　Ａ　ｂ薬 Ｌｙｍ　　２に接合したＬＬ−Ｅ３３２８８γ、１の３
−メルカプトプロピオン酸ジサルファイド類似体のヒド
ラジド ヒドラジド単独 ＭｏＡｂ　　Ｌｙｍ　　２単独 混合物、ヒドラジド＋Ｍ　ｏ　Ａ　ｂ ｙｍ　　２ １４゜ １４゜ １４゜ ０゜ ０゜ ４／６ ６／６ ５／６ ヒトメラノーマ細胞系Ｈ，Ｓ、５ｕｌｔａｎに対する腹
腔的処置、１１ｆｆｉ瘍移植後第５日に３回注射、測定 は移植後３５日に実施した。
＝１０２０− 表４（続き） 投与量（ｍｃｇ） 腫瘍の大きさ Ｓ／Ｔ Ｍ　ｏ　Ａ　ｂ　　薬物 ＭＡＣ−６８に接合したＬＬ−Ｅ３３２８８γ１′の３
−メルカプトプロピオン酸ジサルファイド類似体のヒド
ラジド ヒドラジド単独 Ｍ　ｏ　Ａ　ｂ　　Ｍ　Ａ　Ｃ−６８単独混合物、ヒド
ラジド＋Ｍ　ｏ　Ａ　ｂ ＡＣ−６８ アメルファラン（Ｍｅ　ｌ　ｐｈａ　Ｉ　ａｎ）（対照
として） １５．５　　０゜ ０／６ ６／６ ０／６ ６／６ ；−卵巣細胞系ＣＡ７３に対する腹腔内処置、腫瘍移殖
後第５日に３回注射、 測定は移植後３５日に実施 し　プこ　。
訂（続き） 投与量（ｍｃｇ） 腫瘍の大きさ Ｓ／Ｔ Ｍ　ｏ　Ａ　ｂ　　薬物 ＣＴ−Ｍ−０１に接合したＬＬ−Ｅ３３２８８γ１′の
３−メルカプトプロピオン酸ジサルファイド類似体のヒ
ドラジド ヒドラジド単独 Ｍ　ｏ　Ａ　ｂ　　ＣＴ　−Ｍ　−０１単独混合物、ヒ
ドラジド＋Ｍ　ｏ　Ａ　ｂ ＣＴ−１１１−０１ ビンクリスチン（Ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）（対照とし
て） ８．７５　　０゜ ０／６ ５／６ ０／６ ４／４ ト乳癌細胞系ＭＫ ■に対する腹腔内処置、 腫瘍移植後第２日に３回注射、 測定は移植後３５日に実施 し　ｔこ　。
表４（続き） 投与量（ｍｃｇ） 腫瘍の大きさ Ｓ／Ｔ ８７２．３に接合したＬＬ−Ｅ３３２８８１１′の３−
メルカプトプロピオン酸ジサルファイド類似体のヒドラ
ジド ヒドラジド単独 ＭｏＡｂ　　Ｂ７２．３単独 混合物、ヒドラジド＋Ｍ　ｏ　Ａ　ｂ ８７２．３ ＬＬ−Ｅ３３２８８γ１ （３回の処置） シス白金（陽性の対照、３回の処置） Ｍ　ｏ　Ａ　ｂ　　薬物 ６．２　　０．１２ ６゜ ６゜ ６／６ ６／６ ５／６ ５／６ ６／６ ヒト卵巣細胞系０ＶＣＡＴ−３に対する腹腔的処置、腫
瘍移植後第５日に４回注射（特記しない限り）測定は移
植後３５日に実施した。
表４（続き） 投与量（ｍｃｇ） 腫瘍の大きさ Ｓ／Ｔ Ｍ　ｏ　Ａ　ｂ　　薬物 Ｌｙｍ　　ｌに接合したＬＬ−Ｅ　３３２８８γ、′の
３−メルカプトプロピオン酸ジサルファイド類似体のヒ
ドラジド ヒドラジド単独 ＭｏＡｂ　　Ｌｙｍ　　１単独 混合物、ヒドラジド＋Ｍ　ｏ　Ａ　ｂ ｙｍ　　１ ２７　　　０゜ ■ ６／６ ６／６ ４／６ ヒトＢｕｒｋｉｔｔリンパ腫細胞系ＲａｊＴＣに対する
腹腔的処置、 腫瘍移植後第７日に３回注射、 測定は移植後２８日に実施した。
−［２２− 本発明を次の実施例によってさらに説明する。
実施例１　。
９０ｍ１のアセトニトリル中の９０ｍｇのＬＬ−Ｅ３３
２８８１１′の溶液に、ｌ　ｍ　ｌのアセトニＩ・ツル
中の１０．６ｍｇの３−メルカプトプロピオン酸を添加
した。この溶液をかきまぜ、次いで一２０°Ｃで６日間
貯蔵した。溶媒を真空除去し、そして残留物をｌｏｍｌ
のシリカゲルのクロマトグラフィーに塩化メチレン中に
おいてかけた。カラムを５０ｍ１の塩化メチレン、塩化
メチレン中の４％のメタノールの５０ｍ１および最後に
塩化メチレン中の８％のメタノールのｌｏｏｍｌで展開
した。この最後の分画を蒸発させると、残留物が得られ
、これを少量のアセトンの助けにより酢酸エチル中に取
り、そして過剰のヘキサン中に滴々添加した。沈澱を集
め、乾燥すると、３９ｍｇの所望の生成物が得られた（
ＦＡＢＭＳ、Ｍ十Ｈ１３９４）。Ｃ１８逆相ＨＰＬＣ上
の保持時間：１８分、５０％のアセトニトリル１０．１
モルの水性塩化アンモニウム。（ＬＬ−Ｅ３３２８８γ
１：８．０分、エステル加水分解生成物：１．５分）実
施例２ 触媒量濃硫酸を含有する塩化メチレン中の商用３−メル
カプトプロピオン酸を、インブチレンで２０分間処理し
た。次いでこの溶液をＩＮ重炭酸ナトリウム溶液で抽出
し、その後、塩化メチレン溶液を無水硫酸マグネシウム
で乾燥する。次いでこの溶液を蒸発させると、無色の移
動性液体が得られ、これはＮＭＲＢよび質量スペクトル
によると、３−ｔ−ブチルメルカプトプロピオン酸、ｔ
ブチルエステルであった。
このエステルのアリコートをジオキサン中の６Ｎ塩酸と
ともに２．５時間還流させた。溶媒を蒸発させ、酢酸エ
チルを添加し、そし゛〔この溶液を炭酸ナトリウムで抽
出した。この炭酸ナトリウム抽出液を６Ｎ塩酸で、懸濁
液のｐＨか２．０になるまで、処理した。次いで懸濁液
を酢酸エチルで抽出し、抽出液を無水硫酸マグネシウム
で乾燥し、溶媒を蒸発させると、無色の液体が得られ、
その’ＨＮＭＲおよび質量スペクトルのデータは３ｔ−
ブチルメルカプトプロピオン酸であることを示した。
この化合物を等モル量のｐ−ニトロフェノールおよびシ
ンクロへキシルカーポジイミドでテトラヒドロフラン中
において４時間処理することによって、ｐ−ニトロフェ
ノールエステルに転化した。
ジシクロヘキシル尿素副生物を濾過により除去し、モし
て濾液を蒸発させると、油が得られ、これを中性シリカ
ゲルに通過させることによって精製し、溶媒系ヘキサン
：塩化メチレン（５０，５０）で溶離した。純粋なｐ−
ニトロフェノールエステル誘導体は、わずかに黄色の移
動注油であった。
遊離のメルカプタンを、次の手順によってアンマスキン
グ（ｕｎｍａｓｋ）した。３−ｔ−ブチルメルカプトプ
ロピオンＭｐ−二トロフェノールエステルをトリフルオ
ロ酢酸中に溶解し、そしてわずかに過剰量の酢酸第二水
銀を添加した。この混合物を３０分間撹拌し、次いでト
リフルオロ酢酸を蒸発させ、そして残留物をジメチルホ
ルムアミド中に取った。この溶液を硫化水素ガスで１５
分間処理し、次いで黒色の硫化第二水銀を濾過し、そし
て濾液を減圧蒸発してジメチルホルムアミドの９９％ま
でを排除した。得られる褐色がかった移動性液体を中性
シリカゲルで精製し、ヘキサン：塩化メチレン（５０：
５０）で溶離した。主要成分は、’ＨＮＭＲにより、少
量のむ一ブチルメルカプト誘導体を含有することが示さ
れた。並列の２つのバーキンーエルマーペコスフエ７−
（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ　　ＰｅｃｏＳｐｈｅｒｅ
）［４，５Ｘ３３ｍｍおよび４−６　Ｘ　８３ｍｍ１の
分析用ＨＰＬＣを用い、ｐＨ６，５（酢酸）においてア
セトニトリルおよびＯ，１Ｍ酢酸アンモニウム緩衝液の
３７−５／６２．５〜４７．５１５２．５の勾配系で１
２分の間隔で溶離すると、生酸物は８８％の３−メルカ
プトプロピオン酸の。
ニトロフェニルエステルおよび１０％の極性に劣る３−
ｔ−ブチルメルカプトプロピオン酸ｐニトロフェニルエ
ステルであった。また、少゛量の遊離のｐ−ニトロフェ
ノールが存在した。
−Ｅ３３２８８１２′のプロピオン酸誘導体のｐニトロ
フェニルエステルが得られ、これはＩＨＮＭＲによって
確立された。ＦＡＢＭＳにより、［Ｍ＋Ｈ］　イオンは
Ｍ／Ｚ＝１５１５に現れた。
実施例３ の反応 ＬＬ−Ｅ３３２８８１１′の１００ｍｇの部分を５０ｍ
ｇのアセトニトリル中に溶解した。これに、１ｍｌのア
セトニトリル中の２５．７ｍｇの３−メルカプトプロピ
オン酸のｐ−ニトロフェニルエステルの溶液を添加した
。この反応を一２０°Ｃで４８時間放置した。ＨＰ　Ｌ
　Ｃは反応が完結したことを示した。この溶液を蒸発乾
固し、そして残留物を４〜５ｍｌの酢酸エチル中に取り
、超音波を使用して溶解を実施した。この混合物を濾過
し、そして濾液を４５ｍ１の撹拌したヘキサン中に滴々
入れた。得られたわずかに黄色の固体を集め、そして減
圧下に乾燥すると、９３ｍｇのＬＬルファイド ０．５ｍｌのテトラヒドロフラン中の実施例１からの５
ｍｇのＬＬ−Ｅ３３２８８γ１１の３−メルカプトプロ
ピオン酸ジサルファイド類似体の溶液に、Ｑ、１ｍｌの
テトラヒドロフラン中の０゜４５ｍｇのＮ−ヒドロキシ
スクシンイミドを添加し、次いでこの反応混合物を室温
において４時間撹拌し、次いで大過剰のヘキサンで急冷
した。固体を濾過により分離し、そして酢酸エチル中に
溶解した。生ずる溶液をブラインで３回洗浄し、硫酸マ
グネシウムで乾燥し、そして５　ｍ　ｇの所望生成物が
黄褐色粉末として得られ、これをそれ以上精製しないで
使用した。Ｃ１８逆相ＨＰＬＣ上の保持時間＝１５分、
４０％のアセ［・ニトリル１０゜１モルの水性塩化アン
モニウム。（出Ｑ物ｆｆ：６゜０分）。
実施例４ アルゴンの下で１００ｍ１の還流するテトラヒドロフラ
ン中の５．４ｍｌ　（３当量）の無水ヒドラジンに、５
０ｍ１のテトラヒドロ７ラン中の９゜２ｍ１（８３ミリ
モル）のメチル３−メルカプトプロピオネ−１・を２時
間かけて滴々添加した。この溶液をさらに２時間撹拌し
、蒸発し、次いで３００ｍ１のトルエンから２回希釈お
よび蒸発した。
生成物をソリ力ゲルのプラグに５％の酢酸エチル／クロ
ロホルムで適用し、そしてプラグから２０％のメタノー
ル／クロロホルムで溶離した。得られる３−メルカプト
グロピオニルヒドラジドはわずかにピンク色の油であり
、これは冷却すると固化するが、室温において溶融した
。
１５°Ｃにおいて５０ｍ１のアセトニトリル中の５０ｍ
ｇのＬＬ−Ｅ３３２８８γ、′に、Ｉ　ｍ　ｌのテトラ
ヒドロフラン中の６．６ｍｇの３−メルカプトグロピオ
ニルヒドラジドを添加した。１当量のトリエチルアミン
および／または１当量の酢酸を触媒として添加した。こ
の反応を０°Ｃにおいて１時間撹拌し、次いで溶媒を蒸
発させた。残留物をシリカゲルのクロマトグラフィーに
かけ、クロロホルム中の１０−１５％のメタノールで溶
離して、逆相Ｃ，，ＨＰＬＣ上の保持時間：４１％のア
セトニトリル１０，１モルの塩化アンモニウム中におい
て５．０分。
実施例５ １．０ｇ　（５，７ミリモル）の４−メチル−７アミノ
クマリン、３．０ｍｌのエチルブロモアセテート（５当
量）、９０μｇ（０，１当量）のヨウ化ナトリウム、お
よび３０　ｍ　ｌのジメチルホルムアミドの混合物をア
ルゴン下に８０°Ｃで５時間加熱した。この混合物を冷
却し、エチルエーテルで希釈し、５０％のブラインで３
回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、そして蒸発乾固
した。
粗製生成物を１％の酢酸エチルを含有するクロロホルム
中に溶解し、そしてシリカゲルのプラグで濾過した。微
量のクロロホルムを含有するジエチルエーテルから再結
晶化すると、純粋なエチル［（４−メチルクマリン−７
−イル）アミノ１アセテートか得られた。
１５ｍ１のメタノールおよび１５ｍ１のテトラヒドロフ
ラン中の１．９６ｇ　（７，５ミリモル）の上のエステ
ルに、１０ｍ１のＩＮ水性水酸化ナトリウムを添加した
。３０分後、４ｍｇの１０％の水性塩酸を添加した。有
機溶媒を蒸発させ、得られる結晶質生成物を濾過し、冷
エタノールで洗浄し、次いでエーテルで洗浄した。この
物質を２０ｍ１のテトラヒドロフランおよび４ｍｇのジ
メチルホルムアミド中に溶解した。シンクロヘキシルカ
ルボニル 当量）を添加し、そして反応混合物を１５分間撹挿した
。次いで、システィンエチルエステル塩酸塩（１−　６
ｇ，２．５当量）およびトリエチルアミン（１．２ｍｇ
）を添加した。さらに４時間後、反応を５％の塩化メチ
レンを含有するエチルエーテルで希釈し、そして１０％
の水性塩酸で１回、そしてプラインで２回洗浄した。硫
酸マグネシウムで乾燥し、そして溶媒を蒸発させた後、
粗製生成物を少量のエタノールを含有するクロロホルム
中に溶解し、次いで過剰のエーテルを添加することによ
って結晶化した。結晶を濾過し、そして乾燥すると、Ｎ
−［［（４−メチル−クマリン−７ーイル）アミノ］ア
セチル１システィンエチルエステルが得られた。
５ｍｇのクロロホルム、２０ｍｇのメタノール、および
０．４ｍｇのヒドラジン水和物の混合物を、アルゴン下
に還流加熱した。これに、５　５　０ｍｇのＮ−［［（
４−メチル−クマリン−７ーイル）アミノコアセチル１
　ンステインエチルエステルを添加した。９時間還流し
た後、混合物を冷却し、固体の生成物を濾過し、そして
クロロホルムで、次いでエチルエーテルで洗浄した。粗
製生成物（これはチオールおよびジサルファイドを含有
する）、ジチオスレイトールおよびトリエチルアミンを
含有するジメチルホルムアミド中に溶解した。３０分後
、生成物を過剰のエチルエーテルで沈澱させ、そして濾
過により集めた。この物質を、さらに、脱気したジチオ
スレイトールおよび微量のトリエチルアミンを含有する
アセトニトリルから再結晶化して、純粋なＮ−［［（４
−メチル−クマリン７ーイル）アミン］アセチル］シス
ティンヒドラジドが得られた。
０°Ｃにおいて１２ｍｇのアセトニトリル中に１２ｍｇ
の７０％の純度のＬＬ−Ｅ３３２８８γ。
に、１．２ｍｇのジメチルホルムアミド中の４ｍｇのＮ
−［［（４−メチル−クマリン−７ーイル）アミノコア
セチル１　システィンヒドラジドを添加した。−夜撹拌
した後、さらに０、６ｍｇのジメチルホルムアミド中の
２ｍｇのＮ−［［（４−メチル−クマリン−７ーイル）
アミノ］アセチル１システィンヒドラジド添加した。こ
の反応混合物を０°Ｃにおいて３日間撹拌し、そして濾
過した。
アセトニトリルを蒸発し、そして得られたジメチルホル
ムアミド溶液を過剰のｌ：Ｉヘキサン／エーテルで希釈
した。生成物を濾過により単離し、そしてさらにシリカ
ゲルのクロマトグラフィーにより精製し、クロロホルム
中のメタノールの１５２０％の勾配で溶離して、３　ｍ
　ｇの所望生成物を得た。逆相Ｃ　、、Ｈ　Ｐ　Ｌ　Ｃ
上の保持時間＝４５％のアセトニトリル１０．１モルの
水性塩化アンモニウムを使用して３．５分。
実施例６ １５℃においてｍｌのアセトニトリル中のｌＱ　ｍ　ｇ
のＬＬ　　Ｅ３３２８８α３’に、ｌ　ｍ　ｌのアセト
ニトリル中の６．６ｍｇの３−メルカプトプロピオニル
ヒドラジドを添加した。■当量のトリエチルアミンおよ
び／または１当量の酢酸を触媒として添加した。この反
応混合物を１〕°ｃにおいて１時間撹拌し、次いで溶媒
を蒸発した。残留物をシリカゲルのクロマトグラフィー
にかけ、クロロホルム中の１０−１５％のメタノールの
勾配で溶離して所望生成物を得た。逆相Ｃ、ＨＰ　Ｌ　
Ｃ上の保持時間＝４５％のアセトニトリル／１０．１モ
ルの水性塩化アンモニウムの系中において３．５分。
実施例７ タンパク質への非特異的接合 実施例１に記載するヒドロキシスクンンイミドエステル
を、わずかにアルカリ性条件下に、抗体に共有結合した
。次は表５に記載する抗体接合体をつくるために使用し
た一般手順である。抗体は、０．１モルの塩化ナトリウ
ムを含有するリン酸塩緩極ｊ液、ｐＨ７，５、中におい
て３〜５　ｍ　ｇ　／　ｍの濃度において、５〜２０倍
のモル過剰量の実施例３からの生成物と撹拌しながら、
室温において１〜４時間反応させた。接合したタンパク
質をクロマトグラフィー的に脱塩し、そして凝集したタ
ンパク質を七ツマ−の物質から濾過ＨＰＬＣによって分
離した。七ツマ−の分画をプールし、そして濃縮した。
表５ 実施例３の生成物を使用して調製した非特異的液■ Ｍ　ｏ　Ａ　ｂ　　　　薬物の配合 Ｍ／Ｍ Ｌｙｍ　　　１　　　　　　５．２ Ｂ７２．　３　　　　　　６．　０ Ｂ７２．　３　　　　　　　２．　９ 実施例７ タンパク質への特異的接合 薬物のヒドラジン誘導体を酸化した抗体に結合するため
の一般的方法は、Ｔ、Ｊ、マクカーン（ＭｃＫｅａｒｎ
）ら、米国特許第４．６７１，９５８号に記載されてい
る。この手順は、実施例４および５の生成物から抗体接
合体を、下に記載するように特別の変更を用いて、調製
するために適用した。これらの反応からの生成物および
それらの特性を、表６に要約する。
（Ａ）抗体の酸化 ５−１０ｍｇ／ｍ１１７）ｉａ度において抗体を、０゜
１モルの塩化すｌ・リウムを含有する５０ミリモルの酢
酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ！５．５、の２００倍の体積
に対して一夜透析した。透析後、Ｍ　ｏ　Ａｂを０．２
モルの酢酸ナトリウム中の１５ミリモル〜２００ミリモ
ルの過ヨウ素酸で酸化した。この酸化を暗所で、撹拌し
ながら、４°Ｃにおいて４５分間進行させ、その後酸化
したＭ　ｏ　Ａ　ｂを≧５床体積のセファデックス（Ｓ
ｅｐｈａｄｅｘ）Ｇ２５カラムで脱塩した。抗体の酸化
の程度は、ｐ−ニトロフェニルヒドラジンとの反応およ
び２８０ｍｍにおけるタンパク質の吸収対３９５ｍｍに
おける吸収の吸収の比較によって、評価した。
（Ｂ）薬物ヒドラジド接合 酸化したＭｏＡｂを２５〜２００倍モル過剰量の薬物ヒ
ドラジドと反応させた。ヒドラジドをジメチルホルムア
ミド中に溶解し、そしてＭ　ｏ　Ａ　ｂの水溶液に添加
した。Ｍ　ｏ　Ａ　ｂの沈澱を回避するために、ジメチ
ルホルムアミドの最終体積は合計の反応体積の１０％を
越えなかった。反応を室温において３時間、撹拌しなが
ら、進行させた。未反応のアルデヒドの架橋および引き
続く凝集を防止するため、遮断剤のアセチルヒドラジド
を薬物ヒドラジドの添加後３時間に１００倍モル過剰量
で添加しｔ：。アルデヒドおよび薬物ヒドラジドの間の
シップ塩基（ヒドラゾン）を安定化するため、生成物は
、一般に、ｌＯミリモルのシアノホウ水素化ナトリウム
を添加し、反応をさらに１時間進行させることによって
、アルキルヒドラジンに還元した（合計の接合時間−４
時間）。接合体をクロマトグラフィー的に脱塩し、そし
て貯蔵および試験のため、ｐＨａ、５のリン酸塩緩衝液
中に吸尽的に透析した（最小４８時間）。
接合体は、ゲル濾過ＨＰＬＣによる凝集物の存在および
逆相ＨＰＬＣによる遊離薬物について、分析した。薬物
の配合量は、抗体および薬物の両者の吸光係数を使用し
て、接合体中の薬物のモル濃度を推定することによって
決定した。
表６ 実施例４の生成物から調製したヒ ｏＡｂ ｙｍ ■ 調製 ＃ｌ ＃２ ＃３ ＃４ ＃５ ドラシト接合体 薬物の配合 Ｍ／Ｍ １．４ ２．４ １．０ ６．７ ３．３ ｙｍ ＃　ｌ ＃　２ ＃　３ ＃４ ２．９ １．９ ２．０ ２．８ ８７２、　３ ＃　１ ２．３ ＃２ １．３ 　Ｔ　Ｍ ３．１ ＡＣ−６８ １，７ 実施例５の生成物から調製したヒドラジド接合体Ｌｙｍ
　　ｌ　　　　　　＃ｌ　　　　　　Ｏ，１５＃２　　
　　　０．７６ 本発明の主な特徴及び態様は以下の通りである。
１１式 ％式％） を有し、弐ＣＨ３ＳＳＳ−Ｗの化合物から調製され、こ
こでＣＨ３ＳＳＳ−ＷはＬＬ−Ｅ３３２８８α、゛　　
α１１　　α７Ｍ′、α２１　　σげ゛　α、′、α４
Ｂ′、β、Ｂ゛、β１１、β２１、β２″゛　　γ１８
゛γ１１　　δ、’　、ＢＢｍ−１６７５、ＦＲ−９０
０４０５、ＦＲ−９００４０６、ＰＤ　　１１４７５９
、ＰＤ　　１１５０２８、ＣＬ−１５７７Ａ、ＣＬ−１
５７７８，ＣＬ−１５７７Ｄ％ＣＬ−１５７７Ｅ１また
はＣＬ−１７２４と表示される抗腫瘍抗生物質であり、 前記調製の方法は、ＣＨ３ＳＳＳ−Ｗを一般式Ｑ−５ｐ
−ＳＨ（式中、Ｓｐは直鎖法もしくは分枝鎖状の二価の
（Ｃｌ　　Ｃｌｓ）基、二価のアＩＪ−ルまたはヘテロ
アリール基、二価の（Ｃｌ　　Ｃｌ８）シクロアルキル
またはヘテロシクロアルキル基、二価のアリールまたは
ヘテロアリール−アルキル（Ｃｌ　　Ｃ：１８）基、二
価のシクロアルキルアルキルまたはへテロ７クロアルキ
ルーアルキル（Ｃ＋０１、）基、または二価の（Ｃｚ　
　Ｃｌａ）不飽和アルキル基であり、Ｑはハロゲン、ア
ミノ、アルキルアミ７、カルボキシル、カルボキシアル
デヒド、ヒドロキシ、チオール、σ−ハロアセチルオキ
ン、低級アルキルジカルボキシル、−ＣＯＮＨＮＨ，、
−Ｎ　ＨＣＯＮ　ＨＮ　Ｈ□、−ＮＨＣ３ＮＨＮＨ２、
−０ＮＨ，、−ＣＯＮ、、 であるか、あるいは引き続いてそれらに転化できる）の
化合物と反応させて、式Ｑ−３ｐ−３ＳＷ（式中、Ｑ、
ＳｐおよびＷは上に定義したとおりである）の中間体を
生成し、 ｑ−Ｓｐ−ｓｓ−ｗを式Ｔｕ　−（Ｙ）　ｎ　（式中、
Ｔｕはモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、その
断片、その化学的または遺伝子的に操作された相手、成
長因子、またはステロイドであり、Ｙはタンパク質の側
鎖のアミノ、カルボキシ、またはチオール基、炭水化物
残基から誘導されたアルデヒド、またはアミドアルキル
チオ基であり、そしてｎはｌ−１００の整数である）と
反応させて、式 ％式％） （式中、Ｔｕ、ＹＳＳｐ、Ｗおよびｎは上に定義したと
おりであり、そしてＺはＱおよびＹの共有反応から、直
接あるいは還元後、形成され、そしてＺは−ＣＯＮＨ−
−ＣＯＮＨＮ−ＣＨ−ＣＯＮ　　ＨＮ　　ＨＣＨ２Ｎ　
　ＨＣＯＮ　　Ｉ　　Ｎ　　−ＣＨＮ　ＨＣＯＮ　ＨＮ
　ＨＣＨ２Ｎ　ＨＣＳ　ＮＨＮ　＝　ＣＨ−−Ｎ　ＨＣ
Ｓ　Ｎ　ＨＮ　ＨＣＨ２ＯＮ　＝　ＣＨ−１−ＮＨ−−
ＮＨＣＨ２−−Ｎ＝　ＣＨ−１−ＣＯ□　−−ＮＨＣＨ
２ｃｏｗ　Ｓ または　　　−ＮＨＣＯＣＩＩ　２−Ｃｔ（（ＣＨ２）
。、Ｉ ＣＯ□Ｈ であり、そしてｍは０．１〜１５である）の化合物を生
成することからなる、ことを特徴とする、キャリヤー−
薬物接合体。
２、式 ％式％） −Ｗ）と表示する抗１１瘍抗生物質から調製され、ａ　
）　ｍ　１図に示す紫外線スペクトル、ｂ）第２図に示
すプロトン磁気共鳴スペクトル、および Ｃ）第３図に示す赤外スペクトル、 を有し、 前記調製の方法は、ジチオメチル部分を、式ＱＳｐ−５
Ｈ（式中、Ｓｐは直鎖状もしくは分枝鎖状の二価の（Ｃ
ｚ−ｃｓ）基または二価のアリールまたはヘテロアリー
ルアルキル（Ｃ２−ｃｓ）！であり、そしてＱはカルボ
キシル、低級アルキルジカルポキンル無水物、−ＣＯＮ
　ＨＮ　Ｈ２、または であるか、あるいは引き続いてそれらｌ：転化でさる）
の化合物と置換して、式Ｑ　−Ｓ　ｐ　−Ｓ　Ｓ　−Ｗ
（式中、Ｑ、ＳｐおよびＷは上に定義したとおりである
）の中間体を生成し、 Ｑ−３ｐ−５Ｓ−Ｗを式Ｔｕ　−（Ｙ）　ｎ　（式中、
Ｔｕはヒト腫瘍関連抗原との優先的反応性を示すモノク
ローナル抗体であり、Ｙは抗体上の側鎖のアミノ基、ま
たは抗体の炭水化物基の酸化によって発生したアルデヒ
ドであり、そしてｎは１〜１（〕０の整数である）の分
子と反応させて、式％式％） （式中、Ｔｕ、Ｙ、５ｐＳＷおよびｎは上に定義したと
おりであり、そして２はＱおよびＹの共有反応から、直
接あるいは還元後、形成され、そしでＺは−ＣＯＮ　Ｈ
−−ＣＯＮ　ＨＮ　＝　ＣＨＣＯＮ　＋−（Ｎ　ＨＣＩ
−１２−またはＮ　ＨＣＯＣＨｚ　　　　ＣＨ （ＣＨ２）Ｏ５Ｉ ｏ２Ｈ であり、そしてｍはＯ，１〜１５である）の化合物を生
成することからなる、ことを特徴とする、タンパク質−
薬物接合体。
３、ＣＨｊＳＳＳＷはＬＬ−Ｅ３３２８８γ８であり、
Ｑはカルボキシル基の４−二トロフェニルエステルであ
り、Ｓｐは−ＣＨ２ＣＨ２−であり、Ｔｕはモノクロー
ナル抗体ＣＴ−Ｍ−０１であり、Ｙは−ＮＨ２であり、
Ｚは−ＣＯＮ　Ｈ−であり、モしてｍは０．５〜１５で
ある特許請求の範囲第１項記載の化合物。
４、ＣＨ３５ＳＳＷはＬＬ　　Ｅ３３２８８γであり、
Ｑはカルボキシル基のヒドロキンスクシンイミドエステ
ルであり、Ｓｐは−ＣＨ２ＣＨ２であり、Ｔｕはモノク
ローナル抗体ＭＡＣ−６８であり、Ｙは−ＮＨ２であり
、Ｚは−ＣＯＮＨ−であり、そしてｍは０．５〜１５で
ある特許請求の範囲第１項記載の化合物。
５、ＣＨ３ＳＳＳＷはＬＬ−Ｅ３３２８８γ１であり、
Ｑは−ＣＯＮＨＮ２であり、Ｓｐは−ＣＨ２ＣＨ，−で
あり、Ｔｕはモノクローナル抗体Ｌｙｍｌであり、Ｙは
−ＣＨ０であり、Ｚは−ＣＯＮＨＮＨＣＨ，−であり、
モしてｍは０．１〜ＩＯである特許請求の範囲第１項記
載の化合物。
６、ＣＨ３ＳＳＳＷはＬＬ−Ｅ３３２８８γ１であり、
Ｓｐは であり、Ｔｕはモノクローナル抗体Ｂ７２．３であり、
Ｙは−ＣＨ０であり、２は−ＣＯＮＨＮＨＣＨ，−であ
り、モしてｍは０．１−１０である特許請求の範囲第１
項記載の化合物。
７、ＣＨ３ＳＳＳＷＩｉＬＬ−Ｅ３３２８８γ１であり
、Ｓｐは であり、Ｔｕはモノクローナル抗体ｌ−ｙｍ２であり、
Ｙは−ＣＨ０であり、Ｚは−ＣＯＮＨＮＨＣＨ２−であ
り、モしてｍは０．１−１０である特許請求の範囲第１
項記載の化合物。
８、式ＣＨ３ＳＳＳ−Ｗの化合物のターゲテソド誘導体 Ｔｕ　−（Ｚ−３ｐ−３Ｓ　−Ｗ）　ｍ（Ｙ）　ｎ−ｍ を調製する方法であって、ここでＣＨ３ＳＳＳ−ＷはＬ
Ｌ　　Ｅ３３２８８ｉｒ＋”　　ａ＋’　　ａ□”α２
１　　α、！１′　　α、Ｉ　　α、Ｂ′、β、ｈ′、
β１β２′、β２″′　　γ１″′　　γｌ′　　δｌ
’、ＢＢｍ−１６７５、ＦＲ−９００４０５、ＦＲ−９
００４０６、ＰＤ　　１１４７５９、ＰＤ　　１１５０
２８、ＣＬ−１５７７Ａ、ＣＬ−１５７７Ｂ、ＣＬ−１
５７７Ｄ、ＣＬ−１５７７Ｅ、　またはＣＬ−１７２４
であり、 前記調製の方法は、ＣＨ３ＳＳＳ−Ｗを式Ｑ−３ｐ−５
Ｈ（式中、Ｓｐは直鎖状もしくは分枝鎖状の二価の（ｃ
Ｉ　Ｃ１８）基、二価のアリールまたはヘテロアリール
基、二価の（Ｃ３Ｃ１８）シクロアルキルまたはヘテロ
シクロアルキル基、二価のアリールまたはヘテロアリー
ル−アルキル（ＣＩ−Ｃ＋ｓ）基、二価の／クロアルキ
ルアルキルまたはヘテロシクロアルキル−アルキル（Ｃ
＋Ｃ１８）基、または二価の（Ｃ２Ｃ１８）不飽和アル
キル キルアミノ、カルボキシル、カルボキシアルデヒド、ヒ
ドロキシ、低級アルキルジカルポキンル無水物、−　Ｃ
　Ｏ　Ｎ　Ｈ　Ｎ　Ｈ　２、−　Ｎ　Ｈ　Ｃ　Ｏ　Ｎ　
Ｈ　Ｎ　Ｈ　２、Ｎ　　Ｈ　　Ｃ　　Ｓ　　Ｎ　　Ｈ　
　Ｎ　　Ｈ　　２、　　−ＯＮＨ．、　　ま　Ｉこ　（
まＳＳ　　、Ｎ １′−、 １′） である）の化合物と、１当量のトリエチルアミンの存在
下におよび／または１当量の酢酸の存在下にーｌＯ°Ｃ
〜−３０°Ｃにおいて１〜４８時間反応させ、 式Ｑ−Ｓｐ−ＳＳ−Ｗ（式中、Ｑ％ＳｐおよびＷは上に
定義したとおりである）の中間体を単離し、 式Ｑ−Ｓｐ−ｓｓ−ｗ（式中、ＳｐおよびＷは上に定義
したとおりであり、そしてＱはハロゲン、アミノ、アル
キルアミノ、カルボキシル、カルボキンアルデヒド、ヒ
ドロキシ、または低級アルキルジカルボン酸無水物であ
る）の化合物を式Ｔｕ（Ｙ）　ｎ　（式中、Ｔｕはモノ
クローナル抗体、ポリクローナル抗体、その断片、その
化学的または遺伝子的に操作された相手、成長因子、ま
たはステロイドであり、Ｙはタンパク質の側鎖のアミノ
またはカルボキシ官能性であり、モしてｎは１〜＋００
である）と、水性緩衝液中でｐＨ６．５〜９において４
℃〜４０℃において、直接あるいは水溶性カーポジイミ
ドの存在下ｌこ反応させて、式 ％式％） （式中、ＴｕｌＳｌ）％　Ｗ％　ｎおよびＹは上に定義
し！二とおりであり、ｍ（まｌ−１５であり、そしてＺ
はＱおよびＹの共有反応から形成され、そして−ＣＯＮ
Ｈ−　　−ＮＨ− 一ＮＨＣＯＣＨ２　　−ＣＨ （ＣＨ２　）Ｑ、　１ Ｃｏ，Ｈ。
−　Ｎ　＝　Ｃ　Ｈ−または−ＣＯ，−である）の化合
物を生成するか、あるいは 式Ｑ−Ｓｐ−ＳＳ−Ｗ（式中、ＳｐおよびＷは上に定義
したとおりであり、モしてＱはカルボン酸である）の化
合物を、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、２．３．５．
６−チトラフルオロフエノール、ペンタフルオロフェノ
ール、マタは４−二トロフェノールと、カルボキシル活
性化剤、例えば、カーポジイミドの存在下に反応させて
、式Ｑ−５ｐ−５５−Ｗ（式中、ＳｐおよびＷは上に定
義したとおりであり、モしてＱは である）の化合物を生成し、この化合物を式Ｔｕ（Ｙ）
　ｎ　（式中、Ｔｕおよびｎは上に定義したとおりであ
り、モしてＹは側鎖のアミノ基である）の分子と、水性
緩衝液中でｐＨ６，５〜９において４°Ｃ〜４０°Ｃの
温度において、直接あるいは水溶性カーポジイミドの存
在下に反応させて、式％式％） （式中、Ｔｕ％Ｓｐ％Ｙおよびｎは上に定義したとおり
であり、ｍは１−１５であり、そしてＺはＱおよびＹの
間の共有反応から形成され、そして−ＣＯＮＨ−である
）の化合物を生成するか、あるいは 式Ｑ−３ｐ＝ＳＳ−Ｗ（式中、ＳｐおよびＷは上に定義
したとおりであり、そしてＱは−ＣＯＮＨＮＨ，である
）の化合物を、亜硝酸と、水性アセトニトリル中で反応
させて、式Ｑ−５ｐ−３Ｓ−Ｗ（式中、ＳｐおよびＷは
上に定義したとおりであり、そしてＱは−ＣＯＮＩであ
る）の化合物を生成し、この化合物を式Ｔｕ−（Ｙ）ｎ
（式中、Ｔｕ、Ｙおよびｎは上に定義したとおりである
）の化合物と、反応させて、式 ％式％） （式中、Ｔｕ、Ｚ、Ｓｐ、Ｗ、ｍ、Ｙ、およびｎは上に
定義したとおりである）の化合物を生成するか、あるい
は 式Ｑ−９ｐ−９Ｓ−Ｗ（武生、ＳｐおよびＷは上に定義
したとおりであり、モしてＱはヒドロキシルである）の
化合物を、アル７アーハロ酢酸反応させて、Ｑかσ−ハ
ロアセチルオキシである化合物を生成し、モしてａ−ハ
ロアセチルオキシｓ　ｐ　−ｓ　ｓ　−Ｗよｊ−は式Ｑ
−５ｐ−５３−Ｗ（式中、ＳｐおよびＷは上に定義した
とおりであり、そしてＱは ルチオ基であり、モしてｎは１〜１０である）の分子と
、水性緩衝化条件下にｐＨ４，５〜７および４℃〜４０
°Ｃの温度において反応させて、式％式％） （式中、Ｔｕ、Ｓｐ、Ｗおよびｎは上に定義したとおり
であり、そしてＺはＱおよびＹの共有反応から形成され
、そして−８Ｓ である）の化合物をＴｕ−（Ｙ）ｎ（式中、Ｔｕは上に
定義したとおりであり、Ｙはタンパク質の側鎖のチオー
ル、または、試薬、例えば、３−（２ジチオピリジル）
プロピオン酸を使用し、次いで試薬、例えば、ジチオス
レイトールで還元することによってＴｕのアミン上に導
入されたアミドアルキルチオ基、または２−イミノチオ
ランを使用してＴｕのアミン上に導入されたアミドアル
キであり、モしてｍは０．１−１０である）の化合物を
生成するか、あるいは 式Ｑ−５ｐ−５５−ｗ　（式中、ＳｐおよびＷは上に定
義したとおりであり、そしてＱは−Ｎ　Ｈ□、Ｃ０ＮＨ
ＮＨ，、−Ｎ　ＨＣＯＮ　ＨＮ　Ｈ２、ＮＨＣ３ＮＨＮ
ＨＩ、または−〇　Ｎ　Ｈ２である）の化合物を、式Ｔ
ｕ　−（Ｙ）　ｎ　（式中、Ｔｕは上に定義したとおり
であり、Ｙはアルカリ土類過ヨウ素酸塩の存在下に水性
緩衝液中でｐＨ４−０〜６．５および４〜４０°Ｃにお
いて酸化によってＴｕ上の炭水化物残基から発生したア
ルデヒドであり、そしてｎは１〜２０である）と、反応
させて、式％式％） （式中、Ｔｕ、Ｓ　ｐ、Ｗ、Ｙ、およびｎは上ｊこ定義
したとおりであり、そしてＺはＱおよびＹの共有反応か
ら形成され、そして−０Ｎ＝ＣＨＮ＝ＣＨ−−ＣＯＮＨ
ＮＨ２Ｈ−−ＮＨＣ○Ｎ　ＨＮ　＝　ＣＨ−１または−
ＮＨＣ５ＮＨＮ＝ＣＨであり、そしてｍは０．１−１５
である）の化合物を生成するか、あるいは式 ％式％） （式中、Ｔｕ、Ｚ、Ｓｐ、Ｗ、Ｙ、ｎ、およびｍは直ぐ
上に定義したとおりである）の直ぐ上の化合物を、アセ
チルヒドラジンまたはチロシンヒドラジンで、水性緩衝
液中でｐＨ４，０〜６．５および４°Ｃ〜４０°Ｃにお
いて、反応させて、式％式％ （式中、Ｔｕ、Ｚ、Ｓｐ、Ｗ、ｎ、およびｍは直ぐ上に
定義したとおりであり、そしてＹは−ＣＨ＝ＮＮＨＣＯ
ＣＨ，または である）の直ぐ上の化合物を生成するか、そしてこの化
合物をシアノホウ水素化ナトリウムまたはホウ水素化ナ
トリウムと、水性緩衝液中でｐ　Ｈ４，０〜６．５およ
び４°Ｃ〜４０°Ｃの温度において、反応させて、式 ％式％） （式中、Ｔｕ　ｓ　Ｓ　ｐ　ｓ　Ｗ　ｓ　ｍ　％および
ｎは上に定義したとおりであり、Ｚは−ＮＨ−ＣＨ２Ｃ
ＯＮＨＮＨＣＨ，−−ＮＨＣＯＮＨＮＨＣＨ！、または
−Ｎ　ＨＣＳ　Ｎ　ＨＮ　ＨＣＨ２−であり、そしてＹ
は−ＣＨ，ＮＨＮＨＣＯＣＨ，またはである）の化合物
を生成する、ことを特徴とする、前記方法。
９、式 ％式％） を有し、一般弐ＣＨ３５５５−Ｗの化合物から調製され
、ここでＣＨ３ＳＳＳ−ＷはＬＬ−Ｅ３３２８８α１８
′　　α１′　　σ２Ｂ′、α２′　　α３８′α３１
　　α♂゛、β１Ｂ′、β、′　β２１　　β２Ｂ・１
１８゛　　γ、′　δ、’　　ＢＢｍ−１６７５、ＦＲ
９００４０５、ＦＲ−９００４０６、ＰＤ　　１１４７
５９、ＰＤ　　１１５０２８、ｃＬ−１５７７Ａ、ＣＬ
−１５７７Ｂ、ＣＬ−１５７７Ｄ、ＣＬ−１５７７Ｅ、
またはＣＬ−１７２４と表示される抗腫瘍抗生物質であ
り、 前記調製の方法は、ＣＨｌＳＳＳ−Ｗを一般式Ｑ−５ｐ
−３Ｈ（式中、Ｓｐは直鎖状もしくは分枝鎖状の二価の
（Ｃ１Ｃｏｇ）基、二価のアリールまたはヘテロアリー
ル基、二価のＣＣｓ　　Ｃｏｇ）シクロアルキルまたは
ヘテロシクロアルキル基、二価のアリールまたはヘテロ
アリール−アルキル（Ｃｏ　　Ｃｏｇ）基、二価のシク
ロアルキルアルキルまたはヘテロンクロアルキルーアル
キル（ＣＩ０１６）基、または二価の（Ｃ２Ｃｏｇ）不
飽和アルキル基であり、Ｑはハロゲン、アミノ、アルキ
ルアミノ、カルボキシル キシ、低級アルキルジカルボキシル、−ＣＯＮＨＮＨ２
、　Ｎ　Ｈ　Ｃ　Ｏ　Ｎ　Ｈ　Ｎ　Ｈ　２、−ＮＨＣＳ
ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＣＯＮ，、 であるか、あるいは引き続いてそれらに転化できる）の
化合物と反応させて、式Ｑ−５ｐ−５ＳＷ（式中、Ｑｓ
　Ｓ　ｐおよびＷは上に定義したとおりである）の中間
体を生成し、 Ｑ−５ｐ−３Ｓ−Ｗを式Ｔｕ　−（Ｙ）　ｎ　（式中、
Ｔｕはモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、その
断片、その化学的または遺伝子的に操作された相手、成
長因子、またはステロイドであり、Ｙはタンパク質の側
鎖のアミノ、カルボキシ、またはチオール基、炭水化物
残基から誘導されたアルデヒド、またはアミドアルキル
チオ基であり、モしてｎは１〜１００の整数である）と
反応させて、式 ％式％） （式中、Ｔｕ、Ｙ、Ｓ　ｐ、Ｗおよびｎは上に定義した
とおりであり、そしてＺはＱおよびＹの共有反応から、
直接あるいは還元後、形成され、そしてＺは−ＣＯＮＨ
−−ＣＯＮＨＮ調ＣＨＣＯＮＨＮＨＣＨ，−−ＮＨＣＯ
ＮＨＮ＝ＣＨＮＨＣＯＮＨＮＨＣＨ２−−ＮＨＣ３ＮＨ
Ｎ　＝　ＣＨ−−Ｎ　ＨＣＳ　Ｎ　ＨＮ　ＨＣＨ２ＯＮ
　”　ＣＨＮ　ＨＮ　ＨＣＨｚ　　　　　　　Ｎ・＝Ｃ
Ｈ−−Ｃｏ、　　−−ＮＨＣＨ，ＣＯ２Ｓ　Ｓ または　　　−ＮＨＣＯＣＨ２−ＣＨ （ＣＨ２）。、１ Ｃｏ、Ｈ であり、そしてｍはＯ，１−１５である）の化合物を生
成することからなる、生成物の腫瘍細胞崩壊量を哺乳動
物に役かすることを特徴とする哺乳動物における腫瘍の
増殖を抑制する方法。
１０、式 ％式％） Ｗ）と表示する抗腫瘍抗生物質から調製され、ａ）第１
図に示す紫外線スペクトル、 ｂ）第２図に示すプロトン磁気共鳴スペクトル、および ｃ）１３図に示ず赤外スペクトル、 を有し、 前記調製の方法は、ジチオメチル部分を、式ＱＳｐ−３
Ｈ（式中、Ｓｐは直鎖状もしくは分枝鎖状の二価の（Ｃ
２Ｃｓ）基または二価のアリールまたはヘテロアリール
アルキル（Ｃ２Ｃｓ）基であり、そしてＱはカルボキシ
ル、低級アルキルジカルボキシル無水物、−ＣＯＮ　Ｈ
Ｎ　Ｈ２、または であるか、あるいは弓き続いてそれらに転化できる）の
化合物と置換して、一般式Ｑ−３ｐ−３ＳＷ（式中、Ｑ
％ＳｐおよびＷは上に定義したとおりである）の中間体
を生成し、 ＱＳｐ−ｓｓ−Ｗを式Ｔｕ　−（Ｙ）　ｎ　（式中、Ｔ
ｕはヒト腫瘍関連抗原との優先的反応性を示すモノクロ
ーナル抗体であり、Ｙは抗体上の側鎖のアミン基、また
は抗体の炭水化物基の酸化によって発生したアルデヒド
であり、そしてｎは１〜１００の整数である）の分子と
反応させて、式７式％） （式中、Ｔｕ、Ｙ、Ｓｐ、、Ｗおよびｎは上に定義した
とおりであり、そしてＺはＱおよびＹの共有反応から、
直接あるいは還元後、形成され、そしてＺは−ＣＯＮＨ
−−ＣＯＮＨＮ−ＣＨＣＯＮＨＮＨＣＨ２−１または ＮＨＣＯＣＨ２−ＣＨ （ＣＨ，）Ｑ、　ｌ ｏ２Ｈ であり、モしてｍは０．１−１５である）の化合物を生
成することからなる、タンパク質−薬物接合体の有効腫
瘍細胞崩壊量を哺乳動物に投与することを特徴とする、
抗原部位にことを特徴とするを生体内に供給する方法。
【図面の簡単な説明】
第１図は、ＬＬ−Ｅ３３２８８γ１１の紫外線スペクト
ルである。 第２図は、ＬＬ−Ｅ３３２８８γ１′のプロトン磁気共
鳴スペクトルである。 第３図は、ＬＬ−Ｅ３３２８８γ、１の赤外スペクトル
である。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ を有し、式ＣＨ＿３ＳＳＳ−Ｗの化合物から調製され、
    ここでＣＨ＿３ＳＳＳ−ＷはＬＬ−Ｅ３３２８８α＿１
    ＾Ｂ＾ｒ、α＿１＾Ｉ、α＿２＾Ｂ＾ｒ、α＿２＾Ｉ、
    α＿３＾Ｂ＾ｒ、α＿３＾Ｉ、α＿４＾Ｂ＾ｒ、β＿１
    ＾Ｂ＾ｒ、β＿１＾Ｉ、β＿２＾Ｉ、β＿２＾Ｂ＾ｒ、
    γ＿１＾Ｂ＾ｒ、γ＿１＾Ｉ、δ＿１＾Ｉ、ＢＢｍ−１
    ６７５、ＦＲ−９００４０５、ＦＲ−９００４０６、Ｐ
    Ｄ１１４７５９、ＰＤ１１５０２８、ＣＬ−１５７７Ａ
    、ＣＬ−１５７７Ｂ、ＣＬ−１５７７Ｄ、ＣＬ−１５７
    ７Ｅ、またはＣＬ−１７２４と表示される抗腫瘍抗生物
    質であり、 前記調製の方法は、ＣＨ＿３ＳＳＳ−Ｗを一般式Ｑ−Ｓ
    ｐ−ＳＨ（式中、Ｓｐは直鎖状もしくは分枝鎖状の二価
    の（Ｃ＿１−Ｃ＿１＿８）基、二価のアリールまたはヘ
    テロアリール基、二価の（Ｃ＿３−Ｃ＿１＿８）シクロ
    アルキルまたはヘテロシクロアルキル基、二価のアリー
    ルまたはヘテロアリール−アルキル（Ｃ＿１−Ｃ＿１＿
    ８）基、二価のシクロアルキルアルキルまたはヘテロシ
    クロアルキル−アルキル（Ｃ＿１−Ｃ＿１＿８）基、ま
    たは二価の（Ｃ＿２−Ｃ＿１＿８）不飽和アルキル基で
    あり、Ｑはハロゲン、アミノ、アルキルアミノ、カルボ
    キシル、カルボキシアルデヒド、ヒドロキシ、チオール
    、α−ハロアセチルオキシ、低級アルキルジカルボキシ
    ル、−ＣＯＮＨＮＨ＿２、−ＮＨＣＯＮＨＮＨ＿２、−
    ＮＨＣＳＮＨＮＨ＿２、−ＯＮＨ＿２、−ＣＯＮ＿３、 ▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化学式、
    表等があります▼、▲数式、化学式、表等があります▼
    、▲数式、化学式、表等があります▼、 ▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化学式、
    表等があります▼、 ▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化学式、
    表等があります▼ であるか、あるいは引き続いてそれらに転化できる）の
    化合物と反応させて、式Ｑ−Ｓｐ−ＳＳ−Ｗ（式中、Ｑ
    、ＳｐおよびＷは上に定義したとおりである）の中間体
    を生成し、Ｑ−Ｓｐ−ＳＳ−Ｗを式Ｔｕ−（Ｙ）ｎ（式
    中、Ｔｕはモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、
    その断片、その化学的または遺伝子的に操作された相手
    、成長因子、またはステロイドであり、Ｙはタンパク質
    の側鎖のアミノ、カルボキシ、またはチオール基、炭水
    化物残基から誘導されたアルデヒド、またはアミドアル
    キルチオ基であり、そしてｎは１〜１００の整数である
    ）と反応させて、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｔｕ、Ｙ、Ｓｐ、Ｗおよびｎは上に定義したと
    おりであり、そしてＺはＱおよびＹの共有反応から、直
    接あるいは還元後、形成され、そしてＺは−ＣＯＮＨ−
    、−ＣＯＮＨＮ＝ＣＨ−、−ＣＯＮＨＮＨＣＨ＿２−、
    −ＮＨＣＯＮＨＮ＝ＣＨ−、−ＮＨＣＯＮＨＮＨＣＨ＿
    ２−、−ＮＨＣＳＮＨＮ＝ＣＨ−、−ＮＨＣＳＮＨＮＨ
    ＣＨ＿２−、−ＯＮ＝ＣＨ−、−ＮＨ−、−ＮＨＣＨ＿
    ２−、−Ｎ＝ＣＨ−、−ＣＯ＿２−、−ＮＨＣＨ＿２Ｃ
    Ｏ＿２−、−ＳＳ−、 ▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化学式、
    表等があります▼、▲数式、化学式、表等があります▼ または▲数式、化学式、表等があります▼　 であり、そしてｍは０．１〜１５である）の化合物を生
    成することからなる、ことを特徴とする、キャリヤー−
    薬物接合体。 ２、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ を有し、ＬＬ−Ｅ３３２８８γ＿１＾Ｉ（ＣＨ＿３ＳＳ
    Ｓ−Ｗ）と表示する抗腫瘍抗生物質から調製され、ａ）
    第１図に示す紫外線スペクトル、 ｂ）第２図に示すプロトン磁気共鳴スペクトル、および ｃ）第３図に示す赤外スペクトル、 を有し、 前記調製の方法は、ジチオメチル部分を、式Ｑ−Ｓｐ−
    ＳＨ（式中、Ｓｐは直鎖状もしくは分枝鎖状の二価の（
    Ｃ＿２−Ｃ＿５）基または二価のアリールまたはヘテロ
    アリールアルキル（Ｃ＿２−Ｃ＿５）基であり、そして
    Ｑはカルボキシル、低級アルキルジカルボキシル無水物
    、−ＣＯＮＨＮＨ＿２、または ▲数式、化学式、表等があります▼ であるか、あるいは引き続いてそれらに転化できる）の
    化合物と置換して、式Ｑ−Ｓｐ−ＳＳ−Ｗ（式中、Ｑ、
    ＳｐおよびＷは上に定義したとおりである）の中間体を
    生成し、 Ｑ−Ｓｐ−ＳＳ−Ｗを式Ｔｕ−（Ｙ）ｎ（式中、Ｔｕは
    ヒト腫瘍関連抗原との優先的反応性を示すモノクローナ
    ル抗体であり、Ｙは抗体上の側鎖のアミノ基、または抗
    体の炭水化物基の酸化によって発生したアルデヒドであ
    り、そしてｎは１〜１００の整数である）の分子と反応
    させて、式▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｔｕ、Ｙ、Ｓｐ、Ｗおよびｎは上に定義したと
    おりであり、そしてＺはＱおよびＹの共有反応から、直
    接あるいは還元後、形成され、そしてＺは−ＣＯＮＨ−
    、−ＣＯＮＨＮ＝ＣＨ−、−ＣＯＮＨＮＨＣＨ＿２−、
    または ▲数式、化学式、表等があります▼ であり、そしてｍは０．１〜１５である）の化合物を生
    成することからなる、ことを特徴とする、タンパク質−
    薬物接合体。 ３、式ＣＨ＿３ＳＳＳ−Ｗの化合物のターゲテッド誘導
    体 ▲数式、化学式、表等があります▼ を調製する方法であって、ここでＣＨ＿３ＳＳＳ−Ｗは
    ＬＬ−Ｅ３３２８８α＿１＾Ｂ＾ｒ、α＿１＾Ｉ、α＿
    ２＾Ｂ＾ｒ、α＿２＾Ｉ、α＿３＾Ｂ＾ｒ、α＿３＾Ｉ
    、α＿４＾Ｂ＾ｒ、β＿１＾Ｂ＾ｒ、β＿１＾Ｉ、β＿
    ２＾Ｉ、β＿２＾Ｂ＾ｒ、γ＿１＾Ｂ＾ｒ、γ＿１＾Ｉ
    、δ＿１＾Ｉ、ＢＢｍ−１６７５、ＦＲ−９００４０５
    、ＦＲ−９００４０６、ＰＤ１１４７５９、ＰＤ１１５
    ０２８、ＣＬ−１５７７Ａ、ＣＬ−１５７７Ｂ、ＣＬ−
    １５７７Ｄ、ＣＬ−１５７７Ｅ、またはＣＬ−１７２４
    であり、 前記調製の方法は、ＣＨ＿３ＳＳＳ−Ｗを式Ｑ−Ｓｐ−
    ＳＨ（式中、Ｓｐは直鎖状もしくは分枝鎖状の二価の（
    Ｃ＿１−Ｃ＿１＿８）基、二価のアリールまたはヘテロ
    アリール基、二価の（Ｃ＿３−Ｃ＿１＿８）シクロアル
    キルまたはヘテロシクロアルキル基、二価のアリールま
    たはヘテロアリール−アルキル（Ｃ＿１−Ｃ＿１＿８）
    基、二価のシクロアルキルアルキルまたはヘテロシクロ
    アルキル−アルキル（Ｃ＿１−Ｃ＿１＿８）基、または
    二価の（Ｃ＿２−Ｃ＿１＿８）不飽和アルキル基であり
    、Ｑはハロゲン、アミノ、アルキルアミノ、カルボキシ
    ル、カルボキシアルデヒド、ヒドロキシ、低級アルキル
    ジカルボキシル無水物、−ＣＯＮＨＮＨ＿２、−ＮＨＣ
    ＯＮＨＮＨ＿２、−ＮＨＣＳＮＨＮＨ＿２、−ＯＮＨ＿
    ２、または▲数式、化学式、表等があります▼ である）の化合物と、１当量のトリエチルアミンの存在
    下におよび／または１当量の酢酸の存在下に−１０℃〜
    −３０℃において１〜４８時間反応させ、 式Ｑ−Ｓｐ−ＳＳ−Ｗ式中、Ｑ、ＳｐおよびＷは上に定
    義したとおりである）の中間体を単離し、 式Ｑ−Ｓｐ−ＳＳ−Ｗ式中、ＳｐおよびＷは上に定義し
    たとおりであり、そしてＱはハロゲン、アミノ、アルキ
    ルアミノ、カルボキシル、カルボキシアルデヒド、ヒド
    ロキシ、または低級アルキルジカルボン酸無水物である
    ）の化合物を式Ｔｕ−（Ｙ）ｎ（式中、Ｔｕはモノクロ
    ーナル抗体、ポリクローナル抗体、その断片、その化学
    的または遺伝子的に操作された相手、成長因子、または
    ステロイドであり、Ｙはタンパク質の側鎖のアミノまた
    はカルボキシ官能性であり、そしてｎは１〜１００であ
    る）と、水性緩衝液中でｐＨ６．５〜９において４℃〜
    ４０℃において、直接あるいは水溶性カーポジイミドの
    存在下に反応させて、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｔｕ、Ｓｐ、Ｗ、ｎおよびＹは上に定義したと
    おりであり、ｍは１〜１５であり、そしてＺはＱおよび
    Ｙの共有反応から形成され、そして−ＣＯＮＨ−、−Ｎ
    Ｈ−、 ▲数式、化学式、表等があります▼ −Ｎ＝ＣＨ−または−ＣＯ＿２−である）の化合物を生
    成するか、あるいは 式Ｑ−Ｓｐ−ＳＳ−Ｗ（式中、ＳｐおよびＷは上に定義
    したとおりであり、そしてＱはカルボン酸である）の化
    合物を、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、２、３，５，
    ６−テトラフルオロフェノール、ペンタフルオロフェノ
    ール、または４−ニトロフェノールと、カルボキシル活
    性化剤、例えば、カーポジイミドの存在下に反応させて
    、式Ｑ−Ｓｐ−ＳＳ−Ｗ式中、ＳｐおよびＷは上に定義
    したとおりであり、そしてＱは ▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化学式、
    表等があります▼、▲数式、化学式、表等があります▼
    、 または▲数式、化学式、表等があります▼ である）の化合物を生成し、この化合物を式Ｔｕ−（Ｙ
    ）ｎ（式中、Ｔｕおよびｎは上に定義したとおりであり
    、そしてＹは側鎖のアミノ基である）の分子と、水性緩
    衝液中でｐＨ６．５〜９において４０Ｃ〜４０℃の温度
    において、直接あるいは水溶性カーポジイミドの存在下
    に反応させて、式▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｔｕ、Ｓｐ、Ｙおよびｎは上に定義したとおり
    であり、ｍは１〜１５であり、そしてＺはＱおよびＹの
    間の共有反応から形成され、そして−ＣＯＮＨ−である
    ）の化合物を生成するか、あるいは 式Ｑ−Ｓｐ−ＳＳ−Ｗ（式中、ＳｐおよびＷは上に定義
    したとおりであり、そしてＱは−ＣＯＮＨＮＨ＿２であ
    る）の化合物を、亜硝酸と、水性アセトニトリル中で反
    応させて、式Ｑ−Ｓｐ−ＳＳ−Ｗ（式中、ＳｐおよびＷ
    は上に定義したとおりであり、そしてＱは−ＣＯＮ＿３
    である）の化合物を生成し、この化合物を式Ｔｕ−（Ｙ
    ）ｎ（式中、Ｔｕ、Ｙおよびｎは上に定義したとおりで
    ある）の化合物と、反応させて、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｔｕ、Ｚ、Ｓｐ、Ｗ、ｍ、Ｙ、およびｎは上に
    定義したとおりである）の化合物を生成するか、あるい
    は 式Ｑ−Ｓｐ−ＳＳ−Ｗ式中、ＳｐおよびＷは上に定義し
    たとおりであり、そしてＱはヒドロキシルである）の化
    合物を、アルファ−ハロ酢酸反応させて、Ｑがα−ハロ
    アセチルオキシである化合物を生成し、そしてα−ハロ
    アセチルオキシ−Ｓｐ−ＳＳ−Ｗまたは式Ｑ−Ｓｐ−Ｓ
    Ｓ−Ｗ式中、ＳｐおよびＷは上に定義したとおりであり
    、そしてＱは ▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化学式、
    表等があります▼または▲数式、化学式、表等がありま
    す▼ である）の化合物をＴｕ−（Ｙ）ｎ（式中、Ｔｕは上に
    定義したとおりであり、Ｙはタンパク質の側鎖のチオー
    ル、または、試薬、例えば、３−（２−ジチオピリジル
    ）プロピオン酸を使用し、次いで試薬、例えば、ジチオ
    スレイトールで還元することによってＴｕのアミン上に
    導入されたアミドアルキルチオ基、または２−イミノチ
    オランを使用してＴｕのアミン上に導入されたアミドア
    ルキルチオ基であり、そしてｎは１〜１０である）の分
    子と、水性緩衝化条件下にｐＨ４．５〜７および４℃〜
    ４０℃の温度において反応させて、式▲数式、化学式、
    表等があります▼ （式中、Ｔｕ、Ｓｐ、Ｗおよびｎは上に定義したとおり
    であり、そしてＺはＱおよびＹの共有反応から形成され
    、そして−ＳＳ−、 ▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化学式、
    表等があります▼または▲数式、化学式、表等がありま
    す▼ であり、そしてｍは０．１〜１０である）の化合物を生
    成するか、あるいは 式Ｑ−Ｓｐ−ＳＳ−Ｗ式中、ＳｐおよびＷは上に定義し
    たとおりであり、そしてＱは−ＮＨ＿２、−ＣＯＮＨＮ
    Ｈ＿２、−ＮＨＣＯＮＨＮＨ＿２、−ＮＨＣＳＮＨＮＨ
    ＿２、または−ＯＮＨ＿２である）の化合物を、式Ｔｕ
    −（Ｙ）ｎ（式中、Ｔｕは上に定義したとおりであり、
    Ｙはアルカリ土類過ヨウ素酸塩の存在下に水性緩衝液中
    でｐＨ４．０〜６．５および４〜４０℃において酸化に
    よってＴｕ上の炭水化物残基から発生したアルデヒドで
    あり、そしてｎは１〜２０である）と、反応させて、式
    ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｔｕ、Ｓｐ、Ｗ、Ｙ、およびｎは上に定義した
    とおりであり、そしてＺはＱおよびＹの共有反応から形
    成され、そして−ＯＮ＝ＣＨ−、−Ｎ＝ＣＨ−、−ＣＯ
    ＮＨＮ＝ＣＨ−、−ＮＨＣＯＮＨＮ＝ＣＨ−、または−
    ＮＨＣＳＮＨＮ＝ＣＨ−であり、そしてｍは０．１〜１
    ５である）の化合物を生成するか、あるいは式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｔｕ、Ｚ、Ｓｐ、Ｗ、Ｙ、ｎ、およびｍは直ぐ
    上に定義したとおりである）の直ぐ上の化合物を、アセ
    チルヒドラジンまたはチロシンヒドラジンで、水性緩衝
    液中でｐＨ４．０〜６．５および４０Ｃ〜４０℃におい
    て、反応させて、式▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｔｕ、Ｚ、Ｓｐ、Ｗ、ｎ、およびｍは直ぐ上に
    定義したとおりであり、そしてＹは−ＣＨ＝ＮＮＨＣＯ
    ＣＨ＿３または ▲数式、化学式、表等があります▼ である）の直ぐ上の化合物を生成するか、そしてこの化
    合物をシアノホウ水素化ナトリウムまたはホウ水素化ナ
    トリウムと、水性緩衝液中でｐＨ４．０〜６．５および
    ４℃〜４０℃の温度において、反応させて、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｔｕ、Ｓｐ、Ｗ、ｍ、およびｎは上に定義した
    とおりであり、Ｚは−ＮＨ−ＣＨ＿２−、−ＣＯＮＨＮ
    ＨＣＨ＿２−、−ＮＨＣＯＮＨＮＨＣＨ＿２−、または
    −ＮＨＣＳＮＨＮＨＣＨ＿２−であり、そしてＹは−Ｃ
    Ｈ＿２ＮＨＮＨＣＯＣＨ＿３または▲数式、化学式、表
    等があります▼ である）の化合物を生成する、ことを特徴とする、前記
    方法。 ４、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ を有し、一般式ＣＨ＿３ＳＳＳ−Ｗの化合物から調製さ
    れ、ここでＣＨ＿３ＳＳＳ−ＷはＬＬ−Ｅ３３２８８α
    ＿１＾Ｂ＾ｒ、α＿１＾Ｉ、α＿２＾Ｂ＾ｒ、α＿２＾
    Ｉ、α＿３＾Ｂ＾ｒ、α＿３＾Ｉ、α＿４＾Ｂ＾ｒ、β
    ＿１＾Ｂ＾ｒ、β＿１＾Ｉ、β＿２＾Ｉ、β＿２＾Ｂ＾
    ｒ、γ＿１＾Ｂ＾ｒ、γ＿１＾Ｉ、δ＿１＾Ｉ、ＢＢｍ
    −１６７５、ＦＲ−９００４０５、ＦＲ−９００４０６
    、ＰＤ１１４７５９、ＰＤ１１５０２８、ＣＬ−１５７
    ７Ａ、ＣＬ−１５７７Ｂ、ＣＬ−１５７７Ｄ、ＣＬ−１
    ５７７Ｅ、またはＣＬ−１７２４と表示される抗腫瘍抗
    生物質であり、 前記調製の方法は、ＣＨ＿３ＳＳＳ−Ｗを一般式Ｑ−Ｓ
    ｐ−ＳＨ（式中、Ｓｐは直鎖状もしくは分枝鎖状の二価
    の（Ｃ＿１−Ｃ＿１＿８）基、二価のアリールまたはヘ
    テロアリール基、二価の（Ｃ＿３−Ｃ＿１＿８）シクロ
    アルキルまたはヘテロシクロアルキル基、二価のアリー
    ルまたはヘテロアリール−アルキル（Ｃ＿１−Ｃ＿１＿
    ８）基、二価のシクロアルキルアルキルまたはヘテロシ
    クロアルキル−アルキル（Ｃ＿１−Ｃ＿１＿８）基、ま
    たは二価の（Ｃ＿２−Ｃ＿１＿８）不飽和アルキル基で
    あり、Ｑはハロゲン、アミノ、アルキルアミノ、カルボ
    キシル、カルボキシアルデヒド、ヒドロキシ、チオール
    、α−ハロアセチルオキシ、低級アルキルジカルボキシ
    ル、−ＣＯＮＨＮＨ＿２、−ＮＨＣＯＮＨＮＨ＿２、−
    ＮＨＣＳＮＨＮＨ＿２、−ＯＮＨ＿２、−ＣＯＮ＿３、 ▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化学式、
    表等があります▼、▲数式、化学式、表等があります▼
    、▲数式、化学式、表等があります▼、 ▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化学式、
    表等があります▼、 ▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化学式、
    表等があります▼ であるか、あるいは引き続いてそれらに転化できる）の
    化合物と反応させて、式Ｑ−Ｓｐ−ＳＳ−Ｗ（式中、Ｑ
    、ＳｐおよびＷは上に定義したとおりである）の中間体
    を生成し、Ｑ−Ｓｐ−ＳＳ−Ｗを式Ｔｕ−（Ｙ）ｎ（式
    中、Ｔｕはモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、
    その断片、その化学的または遺伝子的に操作された相手
    、成長因子、またはステロイドであり、Ｙはタンパク質
    の側鎖のアミノ、カルボキシ、またはチオール基、炭水
    化物残基から誘導されたアルデヒド、またはアミドアル
    キルチオ基であり、そしてｎは１〜１００の整数である
    ）と反応させて、▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｔｕ、Ｙ、Ｓｐ、Ｗおよびｎは上に定義したと
    おりであり、そしてＺはＱおよびＹの共有反応から、直
    接あるいは還元後、形成され、そしてＺは−ＣＯＮＨ−
    、−ＣＯＮＨＮ＝ＣＨ−、−ＣＯＮＨＮＨＣＨ＿２−、
    −ＮＨＣＯＮＨＮ＝ＣＨ−、−ＮＨＣＯＮＨＮＨＣＨ＿
    ２−、−ＮＨＣＳＮＨＮ＝ＣＨ−、−ＮＨＣＳＮＨＮＨ
    ＣＨ＿２−、−ＯＮ＝ＣＨ−、−ＮＨ−、−ＮＨＣＨ＿
    ２−、−Ｎ−ＣＨ−、−ＣＯ＿２−、−ＮＨＣＨ＿２Ｃ
    Ｏ＿２−、−ＳＳ−、 ▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化学式、
    表等があります▼、▲数式、化学式、表等があります▼ または　▲数式、化学式、表等があります▼ であり、そしてｍは０．１〜１５である）の化合物を生
    成することからなる、生成物の腫瘍細胞崩壊量を哺乳動
    物に投与することを特徴とする哺乳動物における腫瘍の
    増殖を抑制する方法。 ５、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ を有し、ＬＬ−Ｅ３３２８８γ＿１＾Ｉ（ＣＨ＿３ＳＳ
    Ｓ−Ｗ）と表示する抗腫瘍抗生物質から調製され、ａ）
    第１図に示す紫外線スペクトル、 ｂ）第２図に示すプロトン磁気共鳴スペクトル、および ｃ）第３図に示す赤外スペクトル、 を有し、 前記調製の方法は、ジチオメチル部分を、式Ｑ−Ｓｐ−
    ＳＨ（式中、Ｓｐは直鎖状もしくは分枝鎖状の二価の（
    Ｃ＿２−Ｃ＿５）基または二価のアリールまたはヘテロ
    アリールアルキル（Ｃ＿２−Ｃ＿５）基であり、そして
    Ｑはカルボキシル、低級アルキルジカルボキシル無水物
    、−ＣＯＮＨＮＨ＿２、または ▲数式、化学式、表等があります▼ であるか、あるいは引き続いてそれらに転化できる）の
    化合物と置換して、一般式Ｑ−Ｓｐ−ＳＳ−Ｗ（式中、
    Ｑ、ＳｐおよびＷは上に定義したとおりである）の中間
    体を生成し、 Ｑ−Ｓｐ−ＳＳ−Ｗを式Ｔｕ−（Ｙ）ｎ（式中、Ｔｕは
    ヒト腫瘍関連抗原との優先的反応性を示すモノクローナ
    ル抗体であり、Ｙは抗体上の側鎖のアミノ基、または抗
    体の炭水化物基の酸化によって発生したアルデヒドであ
    り、そしてｎは１〜１００の整数である）の分子と反応
    させて、式▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｔｕ、Ｙ、Ｓｐ、Ｗおよびｎは上に定義したと
    おりであり、そしてＺはＱおよびＹの共有反応から、直
    接あるいは還元後、形成され、そしてＺは−ＣＯＮＨ−
    、−ＣＯＮＨＮ＝ＣＨ−、−ＣＯＮＨＮＨＣＨ＿２−、
    または ▲数式、化学式、表等があります▼ であり、そしてｍは０．１〜１５である）の化合物を生
    成することからなる、タンパク質−薬物接合体の有効腫
    瘍細胞崩壊量を哺乳動物に投与することを特徴とする、
    抗原部位にことを特徴とするを生体内に供給する方法。
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