NL8900573A

NL8900573A - Nieuwe zout-type verbindingen, farmaceutische preparaten met dergelijke verbindingen erin en werkwijze voor de bereiding ervan.

Info

Publication number: NL8900573A
Application number: NL8900573A
Authority: NL
Original assignee: Biorex Kft
Priority date: 1988-03-09
Filing date: 1989-03-09
Publication date: 1989-10-02
Also published as: FI891144A0; KR890014451A; SE8900827L; IT8919705A0; GB8905384D0; JP2751068B2; IT1229563B; SE8900827D0; CH678851A5; HUT49564A; AT398073B; LU87470A1; FI891144A; GB2216522A; KR0140993B1; GB2216522B; FR2628419B1; DE3907688C2; JPH024746A; FR2628419A1

Description

« I

NL 35.804-Kp/ab x I

*r I

Nieuwe zout-type verbindingen, farmaceutische preparaten met I

dergelijke verbindingen erin en werkwijze voor de bereiding I

ervan I

De onderhavige uitvinding heeft betrekking op I

nieuwe antivirale en immunosysteem-stimulerende zouten en I

farmaceutische preparaten met dergelijke zouten erin. I

Volgens een ander aspect van de uitvinding gaat het I

5 om een werkwijze voor de bereiding van de nieuwe zouten. I

De voordelige antivirale werking vanu -3-meervou- I

dig onverzadigde vetzuren [5,8,11,14,17-eicosapentaancarbon- I

zuur (hierna: EPA) en 4,7,10,13,16,19-docasahexaancarbonzuur I

(hierna: DHA)] hebben speciale aandacht gekregen. Szads I

10 [Antimicrobial Agents and Chemoterapy 12, 523 (1977)] hebben I

in in vitro proeven aangetoond, dat meervoudig onverzadigde I

vetzuren, bijvoorbeeld zowel EPA en DHA, in staat zijn de I

vermenigvuldiging van virussen te remmen. Hetzelfde feit werd I

gesteund door Reinhardt en medewerkers [J. of Virology 25, I

15 479 (1978)] die de remming van de vermenigvuldiging van PR 4 I

bacteriofage heeft onderzocht. I

De antivirale werking van meervoudig onverzadigde I

vetzuren, hieronder die van EPA en DHA, is uitvoering I

beschreven in het Amerikaanse octrooischrift nr. 4.513.008. I

20 De invloed van EPA en DHA werd vergeleken bij dierproeven met I

muizen en Guinese biggetjes, waarbij Acyclovir [9-(2-hydroxy- I

ethoxy-methyl)guanine] thans het meest gebruikte antivirale I

middel. Gesteld is, dat preparaten met daarin in hoofdzaak I

DHA, een gunstigere werking hebben tegen herpes virus dan I

25 acyclovir. I

Een aantal artikelen zijn gewijd in de literatuur I

aan de antivirale werking van DHA en EPA, zoals Whitaker en I

medewerkers [Proc. Natl. Acad. Sci. USA 76, 5919 (1979)] evenals Goodnight en medewerkers [Arterioschlerosis, 2:, 87 I

30 (1982)] en Yoshiaki [Biochimica et Biophysica Acta 793, 80 I

(1984)].

Prickett en medewerkers [Immunology 46, 819 (1982)] I

hebben aangetoond, dat het humorale immune respons gestimuleerd werd door eicosapentaancarbonzuur als een arachidonzuur- 89 00573.' « i - 2 - analoog. Bij een EPA-rijk dieet bleek de specifieke IgG en IgE produktie als een respons op eialbumine te zijn verhoogd in inteelt Sprague-Dawleyratten van 4 tot 8-voudige waarden vergeleken met de controle. Volgens dit artikel werd een 5 verhoogde antilichaamrespons geïnduceerd door het EPA-rijke dieet. Verder werd door onderzoekingen aangetoond, dat EPA een werking heeft via remming van het suppresieve prostaglan-dine systeem, waarbij het in staat is het immune deficiency, die optreedt bij het ouder worden en andere pathologische 10 processen (autoimmuno processen, tumourogenesis), te remmen respectievelijk te corrigeren. Deze constateringen werden ondersteund door de artikelen van Kelley en medewerkers [J. of Immunol. 134, 1914 (1985)] evenals Homey en medewerkers [Clin. Exp. Immunol. 65, 473 (1986)] 15 Het is op basis van de in vivo onderzoekingen van

Pearson en medewerkers [Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 79, 409 (1952)] lang bekend, dat L-lysine een remmende werking heeft op de encefalomyelitis virus. Later heeft Tankersley [J.

Bact. 87, 609 (1964)] de aandacht doen vestigen op het feit, 20 dat de vermenigvuldiging van de herpes simplex virus (hierna: HSV) in humane cellen door lysine wordt geremd onder in vitro omstandigheden. Op basis van humane onderzoekingen heeft Kagan gepubliceerd [The Lancet 1, 137 (1974)) dat zowel de orale als genitale HSV-geïnduceerde laesies zeer snel 25 verdwenen onder invloed van een behandeling met L-lysine.

Griffith en medewerkers [Dermatologies 156, 257 (1978)] bestudeerden de therapeutische werking van L-lysine op 45 patiënten die zijn geïnfecteerd met HSV I en HSV II in verschillende doseringen bij diverse behandelingsperioden. De 30 leeftijd van de patiënten (voornamelijk vrouwen) varieerde tussen 8 en 60 jaar. Waargenomen werd, dat L-lysine slechts een suppresieve doch niet een genezende werking op HSV had.

De onderhavige uitvinding heeft betrekking op nieuwe therapeutische werkzame zouten en op de toepassing van 35 dergelijke zouten voor de bereiding van farmaceutische preparaten, waarin de gunstige therapeutische werking van de ω-3 verzadigde vetzuren werd gecombineerd met die van de aminozuren, zoals in het bijzonder lycine, ornithine en histidine welke preparaten een sterkere werking hebben dan de tot nu 8900573.

% I

toe bekende antivirale middelen. I

De uitvinding is gebaseerd op de erkenning, dat de I

zouten, verkregen door de zoutvorming van een ω-3 onverzadig- I

de vetzuren, in het bijzonder EPA en DHA, met aminozuren of I

5 hun derivaten, in het bijzonder met lysine, een sterke anti- I

virale en immunostimulerende werking bezitten. I

Dienovereenkomstig heeft de uitvinding betrekking op I

de nieuwe antivirale en immunostimulerende zouten met de I

algemene formule I 1

10 I

R-C00“AH+ (1)

waarin I

R een Ci8-24"alkYl9roeP met tenminste twee dubbele I

15 bindingen voorstelt? terwijl I

WA" een aminozuur voorstelt, dat voorkomt in levende or- I

ganismen en/of een derivaat ervan met een carboxyl- I

groep, die gesubstitueerd is door een Ci_4-alkylgroep I

of een aminogroep of door een alkalimetaalkation. I

20 Volgens de onderhavige uitvinding worden deze nieuwe I

zouten bereid door omzetting van als basiscomponent een I

aminozuur (A), zoals weergegeven door algemene formule 1, I

waarin de substituenten de bovengedefineerde betekenissen I

hebben, met een zuur met de algemene formule (2) I

25 R-COOH (2)

waarin R de bovenvermelde betekenissen heeft, in een polaire I

oplossing. I

30 De verbindingen met de algemene formule (1) zijn bij I

voorkeur zouten, gevormd uit ω-3 onverzadigde vetzuren met I

daarin tenminste twee dubbele bindingen met basische I

aminozuren of hun derivaten. I

De eventuele toxiciteit tegen een celcultuur van de I

35 zoutverbinding volgens de uitvinding werd bestudeerd met een I

zout, gevormd uit een ω-3 meervoudig onverzadigd vetzuur- I

mengsel (met daarin 27,6 % EPA en 44,6 DHA) met L-lysine op I

basis van zijn werking op de vermenigvuldiging en morfology van I

Hep 2 cellen (humane epitheel tumorcellijn). Deze experi- I

8900573.

4 - 4 - inenten werden uitgevoerd op een kunststof weefsel-kweekplaat met daarin 6x4 holle ruimtes (holtes met een bodemoppervlak van 1,9 cm2 elk).

Een voorraadoplossing met daarin de te onderzoeken 5 verbinding in een concentratie van 10 mg/ml werd bereid in een Eagle HEM medium (geproduceerd door Serva GmbH Co., Heidelberg, Bondsrepubliek Duitsland). Een bepaald deel van de voorraadoplossing werd 10 maal verdund, waarna de verkregen oplossing 2 maal werd verdund en dan door herhaling 2 maal de 10 2-voudige verdunning van de laatste oplossing heeft men oplossingen met achtereenvolgende afnemende concentraties aan de te onderzoeken verbinding (oplossingen nrs. 1 tot 5) bereid. De cellen werden behandeld met 1 ml van een oplossing, waarvan elk het werkzame bestanddeel bevatte in de 15 volgende concentraties:

Oplossing Concentratie van het werkzame bestanddeel nr.__u q/ml_ 1 10.000 20 2 1.000 3 500 4 250 5 125 25 De behandeling werd uitgevoerd gedurende 1 uur, waarna de kweken twee keer werden gewassen met een gebufferde natriumchlorideoplossing (fosfaat-gebufferde zoutoplossing, hierna: PBS), waarna aan de kweken een voedingsmedium werd toegevoegd. Na 24 uur en fixatie door methanol werden de 30 kweken gekleurd met een ethanolische Giemsa oplossing (geproduceerd door Reanal, Boedapests, Hongarije), waarna de morfo-ligie van de cellen onder licht microscoop werd geëvalueerd. Vastgesteld kon worden, dat de te onderzoeken verbinding slechts toxisch was boven een concentratie van 1000 yg/ml. De 35 virus vermenigvuldiging-remmingswerking werd onderzocht op Hep 2 cellen, zoals boven beschreven. Het type I van HSV werd voor infectie gebruikt. De concentratie van de virus bedroeg ca 1000 PFU (plaquevormende eenheid). Oplossingen, die de te onderzoeken verbinding bevatten in een concentratie van 8900573.

tratie van respectievelijk 1000, 500 en 250 ug/ml werden I

gebruikt, terwijl voor de behandeling aan de onverdunde I

virussuspensie 0,1 ml van de oplossing werd toegevoegd. Het I

mengsel werd gedurende 1 uur bij 37°C geïncubeerd. Dan werden I

5 cellen behandeld met de virus, die was pre-geincubeerd met de I

te onderzoeken verbinding, terwijl de ontwikkeling van de I

cytopathalogische (hierna: CP) veranderingen gedurende 7 I

dagen werd geobserveerd. I

Vastgesteld kon worden, dat de virusvermenigvuldi- I

10 ging onmiddellijk wordt geremd door een 500 ug/ml of 250 I

ug/ml dosis aan de te onderzoeken verbinding, terwijl de I

infectieve titerwaarde van de cytopathalogische dosis (neg. I

log. CPD50) 1,75 was, berekend voor 0,1 ml vergeleken met de I

neg. log. CPDso-waarde van 4,5 van de onbehandelde controle I

15 virus kweek. De waarde van de virusremming neemt toe met een I

factor van 2 ten opzichte van de controle. Onder dezelfde I

omstandigheden hadden ΕΡΆ en DHA geen waardevolle virusrem- I

ming, en lysine op zich remde de virusvermenigvuldiging met I

een factor van slechts ca. één keer. I

20 Het vaccin virus werd ook behandeld in een in vitro I

proef, die op de bovenbeschreven wijze werd uitgevoerd. De I

infectieve titerwaarde (neg. log. CPD50) van de te onderzoe- I

ken verbinding, gemeten aan de hand van het vaccinvirus bleek I

1,75 te zijn vergeleken met de 5,5-waarde van de onbehandelde I

25 controlevirus, dat wil zeggen, dat de te onderzoeken verbin- I

ding een virusremmende werking had, die drie keer sterker was I

dan die van de controle. I

De in vitro werking op het immuunsysteem van de ver- I

bindingen volgens de uitvinding werd bestudeerd aan de hand I

30 van de activering van de lymfocyten door polyclonale mitoge-

nen. De blastische transformatie van de lymfocyten werd op I

een manier onderzocht, dat een lyfocytecelpopulatie, verkregen op een Fico Uromiro gradiënt [Scand. J. Clin. Lab.

Invest. 21, 97 (1968)] werd in de holtes van vlakke platen 35 gepipetteerd, 25 ug/ml Concanavaline A (hierna: Con A) I

(vervaardigd door Pharmacia, Uppsala, Zweden) en daarna een oplossing, die een nieuwe verbinding volgens de uitvinding I

bevatte in een concentratie van respectievelijk 0,1, 1,0 of 10 ug/ml, werd toegevoegd aan elk van de parallelle kweken. I

8900573.

- 6 - i

Als controle werd een kweek met daarin 25 ug/ml Con A zonder de te onderzoeken verbinding daarin gebruikt. De platen worden onder een luchtatmosfeer met daarin 5 % kooldioxide gehouden bij 37eC gedurende 72 uur, waarbij aan elk monster 5 na 64 uur 0,4 Ci 3H-thymidine werd toegevoegd voorafgaande aan het beëindigen van de kweek. Na 72 uur werden de kweken via glasfilter gefiltreerd, waarna de filters werd overgebracht in een scintillatiecuvet, waarbij de radioactiviteit werd gemeten in 5 ml tolueenoplossing onder gebruikmaking van 10 een beta-telinrichting. De resultaten zijn in de volgende tabel vermeld.

Nr. Verbinding Concentratie van Telling/min Evaluatie naam de actieve bestand- cpm van de 15 _delen uq/g_werking 1. Controle 25 8969+2984 (Con A) 20 2 L-tyrosine 0,1 12915+2045 zwak signifi cante groei 1.0 12313+2003 3. L-lysine 0,1 11063+1528 niet signifi- 25 cant 1.0 11833+1823 zwak signifi cante groei 4. Na-zout van 0,1 12332+2235 niet signifi- 30 ω-3 vetzuur- cant mengsel (zie 1,0 12039+1640 niet signifi- preparaat in cant voorbeeld I) 35 5. controle (Con A) 25 8396+2233 6. Produkt van 0,1 14965+2143 sterk signifi- voorbeeld XVI cant 1.0 12517+2195 niet signifi- 40 cant 7. Produkt van 0,1 15985+2102 sterk signifi- voorbeeld I cante groei 1.0 14068+1665 significante 45 groei

Uit deze onderzoekingen bleek duidelijk, dat de verbindingen volgens de uitvinding in het bijzonder het zout van 50 lysine of tyrosine, gevormd met een mengsel van meervoudig 8900573,

-Λ I

onverzadigde vetzuren, significante onderzoeksresultaten I

gaven, dat wil zeggen een sterke immunostimulerende werking, I

terwijl de afzonderlijke zoutvormende componenten als zodanig I

bleken geen of slechts een zwakke biologische werking te I

5 hebben. I

Als uitgangsmateriaal van Cig-24 ω ~3 onverzadigde I

vetzuren zijnde één component van de zouten, is het geschikt I

in de eerste plaatst gebruik te maken van alle oliën, die I

verkregen kunnen worden uit vissen van de Noordzee, zoals I

10 zalm, kabeljauw, sardine of oliën afkomstig van hun levers, I

waarbij echter ook oliën afkomstig van zoetwatervissen I

eveneens geschikt zijn. De ω-3 meervoudig onverzadigde I

vetzuren werden uit de bovengenoemde oliën verkregen onder I

toepassing van een bekende methode [J. Am. Chem. Soc. 59, 117 I

15 (1982)].

De werkzame verbindingen met de algemene formule 1 I

kunnen overgebracht worden in capsules, tabletten, dragees en I

andere farmaceutische preparaten, die op op zichzelf bekende I

wijze worden samengesteld onder gebruikmaking van de dragers I

20 en/of toevoegsels, zoals lactose, zetmeel, magnesiumstearaat I

en dergelijke, die gewoonlijk in de farmaceutische industrie I

worden toegepast. I

Voor het remmen van de oxidatie van het preparaat I

is de toepassing van ω-tocoferol (vitamine E), glutathion of I

25 de traditionele antioxidantia, zoals butylhydroxytolueen, I

wenselijk. I

De belangrijkste voordelen van de verdunning I

volgens de uitvinding en van de farmaceutische preparaten, I

bereid daaruit, kunnen als volgt worden samengevat. I

30 l.Ze kunnen gebruikt worden tegen acute virus I

infecties; ze zijn in het bijzonder geschikt in de herpus virus infectie voor het onderdrukken van de infectie in een beginstadium. I

2. Ten gevolge van hun immunostimulerende werking 35 kunnen ze bij voorkeur worden gebruikt tegen retrovirussen, in het bijzonder tegen de immunodeficiency syndromen (bijv.

Aids) geïnduceerd door HTLV III en HTLV IV type virussen.

3. Ze bevatten uitsluitend natuurlijke werkzame middelen, die uit biologisch oogpunt essentieel zijn. Ze zijn 8900573.

* , - 8 - derhalve geschikt voor een profylactische, langdurige, genezende bevorderende behandeling in geval van een gevaar van virusinfectie alsmede bij ziekten van het immunosysteem.

4. Zij verken ook inwendig. Zo kan derhalve de 5 ongemakkelijke uitwendige behandeling, die gewoonlijk in de antivirale therapie wordt toegepast, achterwege worden gelaten.

De verbindingen en preparaten volgens de uitvinding en hun werkwijze voor de bereiding ervan worden hierna aan de 10 hand van de volgende niet-beperkende voorbeelden nader toegelicht.

VOORBEELD I

Aan 164 g (l mol) L-lysine monohydraat, opgelost in 500 ml water bij kamertemperatuur werd 320 g (ca 1 mol) van 15 een ω-3 meervoudig onverzadigd vetzuurmengsel (bestaande uit 27,6 % EPA, 44,6 % DHA en 0,1 % vitamine E) toegedruppeld.

Het mengsel werd onder zacht verwarmen (bij 40°C) en onder stikstofatmosfeer gedurende 3 uur geroerd en vervolgens onder verminderde druk (4 tot 5,3 kPa) ingedampt onder oplevering 20 van 465 g van een kristallijn zout, smeltpunt 188-195eC

(onder ontleding), waarbij de onverzadigde vetzuursamenstelling identiek is aan die van het uitgangsmengsel.

VOORBEELD II

Er werd 155 g (1 mol) L-histidine opgelost in 450 25 ml water bij kamertemperatuur, waarbij 320 g (ongeveer 1 mol) van een ω-3 meervoudig onverzadigd vetzuurmengsel (bestaande uit 27,6 % EPA en 44,6 % DHA) druppelsgewijs aan de oplossing gedurende 5 min werd toegevoegd. Voorts werd de procedure van voorbeeld I gevolgd onder oplevering van 471 g van een 30 kristallijne stof, smeltpunt: 192-200°C (onder ontleding).

VOORBEELD III

De in voorbeeld II beschreven werkwijze werd opgevolgd, behalve dat 133 g L(+)-ornithine werd gebruikt in plaats van L-histidine onder oplevering van 449 g van een 35 kristallijn produkt, smeltpunt: 189-195°C (onder ontleding).

VOORBEELD IV

Na oplossen van 1,64 g (0,01 mol) L-lysine monohydraat in 5 ml water bij kamertemperatuur werd aan de oplossing 3,02 g (0,01 mol) eicosapentaancarbonzuur [gepro- 8900573.

- 9 -

duceerd door Sigma Co. st. Louis, USA onder catalogus nr. I

E-7006 (1987)] in Kleine porties toegevoegd. Het mengsel werd I

gedurende 3 uur bij 40eC onder stikstof bewaard, vervolgens I

onder een druk van 4-5,3 kPa ingedampt onder oplevering van I

5 4,9 g van een geel-bruin kristallijn zout, smeltpunt I

194-196*C (onder ontleding). I

VOORBEELD V I

De in voorbeeld IV beschreven werkwijze werd I

opgevolgd, behalve dat in plaats van het eicosapentaancarbon- I

10 zuur 3,28 g (0,01 mol) docohexacarbonzuur [geproduceerd door I

Sigma Co., St. Louis, USA, onder catalogusnr. D-6508 (1987)] I

werd gebruikt onder oplevering van 4,85 g van een kristallijn I

zout, smeltpunt! 195-198eC (onder ontleding). I

VOORBEELD VI

15 De in voorbeeld IV beschreven werkwijze werd I

opgevolgd, behalve dat 1,55 g (0,01 mol) L-histidine werd I

gebruikt in plaats van L-lysinemonohydraat onder vorming van I

4,8 g kristallijn zout, smeltpunt 196-200°C (onder ontleding). I

VOORBEELD VII I

20 ! De in voorbeeld IV beschreven werkwijze werd I

herhaald, behalve dat in plaats van L-lysinemonohydraat 1,55 I

g (0,01 mol) L-histidine werd gebruikt en in plaats van EPA I

3,28 g (0,01 mol) DHA onder oplevering van 3,78 g van een I

kristallijn zout, smeltpunt: 196-199eC (onder ontleding). I

25 VOORBEELD VIII

De in voorbeeld IV beschreven werkwijze werd I

herhaald, behalve dat in plaats van L-lysinemonohydraat 1,32 I

g (0,01 mol) L(+)-ornithine werd gebruikt onder oplevering I

van 4,6 g van een kristallijn zout, smeltpunt! 190-193°c I

30 (onder ontleding). I

VOORBEELD IX

De in voorbeeld IV beschreven werkwijze werd I

herhaald, behalve dat in plaatst L-lysinemonohydraat 1,32 g I

(0,01 mol) L(+)-ornithine werd gebruikt en in plaats van EPA 35 3,28 g (0,01 mol) DHA onder oplevering van 4,55 g van een

kristallijn zout, smeltpunt: 191-195eC (onder ontleding). I

VOORBEELD X

Er werd 2 g (22 mmol) L-alanine werd opgelost in de oplossing van 0,88 g (22 mmol) natriumhydroxide in 20 ml 8900573.

♦ - 10 - water onder roeren bij kamertemperatuur, waarna 7,5 g (22 mmol) van een ω-3 meervoudig onverzadigd vetzuurmengsel (met daarin 27,6 % EPA, 44,6 % DHA en 0,1 % vitamine E) aan de bovengenoemde oplossing druppelsgewijs werd toegevoegd bij 5 40®C. Het mengsel werd gedurende 2 uur onder stikstof bij 40CC geroerd, waarna het oplosmiddel werd afgedestilleerd onder verminderde druk van 4 tot 5 kPa onder oplevering van 10,4 g van een lichtbruin pasta-achtig vast produkt, smeltpunt: 210-220eC.

10 In de volgende voorbeelden XI-XIV werden de in voorbeeld X beschreven processen opgevolgd, behalve dat de in plaats van L-alanine het overeenkomstige aminozuur werd gebruikt.

VOORBEELD XI

15 L-proline 1,5 g (13,0 mmol) water 40,0 ml natriumhydroxide 0,52 g (13,0 mmol) ω-3 vetzurenmengsel (volgens 4,35 g (13,0 mmol) voorbeeld X) 20 Een bruin olie-achtig produkt werd verkregen in een opbrengst van 6,3 g.

VOORBEELD XII

L-leucine 1,0 g (7,6 mmol) water 5,0 ml 25 natriumhydroxide 0,3 g (7,6 mmol) ω-3-vetzuur 2,54 g (7,6 mmol)

Een bruin kristallijn produkt werd verkregen in een opbrengst van 3,70 g, dat aan de lucht vervloeit.

VOORBEELD XIII

30 L-treonine 0,5 g (4,2 mmol) water 10,0 ml natriumhydroxide 0,16 g (4,2 mmol) ω-3 vetzuur 2,5 g (7,5 mmol)

Een geel kristallijne produkt werd verkregen in een 35 opbrengst van 1,95 g, smeltpunt: 204-213°C (onder ontleding) .

VOORBEELD XIV

L-aspartinezuur 1,0 g (7,5 mmol) water 40,0 ml 8900573· 4 - 11 - natriumhydroxide 0,6 g (15,0 mmol) ] ω-3 vetzuur 2,5 g (7,5 mmol).

Een geel kristallijn zout werd verkregen in een I

opbrengst van 3,97 g, smeltpunt: 200°C (onder ontleding). I

5 VOORBEELD XV I

7,1 mmol natriummetaal werd opgelost in 20 ml I

watervrij ethanol, waarna de oplossing werd af gekoeld tot een I

temperatuur van tussen 0 tot 10“C, gevolgd door toevoeging I

van 1,5 g (7,1 mmol) L-arginine hydrochloride. Na roeren bij I

10 kamertemperatuur gedurende 20 minuten werd het mengsel I

af gefiltreerd, waarna het filtraat onder verminderde druk I

werd ingedampt. Het ingedampte residu werd opgelost in de I

oplossing van 0,28 g (7,1 mmol) natriumhydroxide in 15 ml I

water, waarna men 2,37 g (7,1 mmol) van een ω-3 meervoudig I

15 onverzadigd vetzuurmengsel (met daarin 27,6 % EPA, 44,6 % DHA I

en 0,1 % vitamine E) werd toegevoegd. I

Het mengsel werd vervolgens gedurende 2 uur onder I

stikstof bij 40eC geroerd, waarna het oplosmiddel werd af- I

gedestilleerd onder verminderde druk van 4-5,3 kPa onder I

20 oplevering van 4,05 g van een geel kristallijn zout, I

smeltpunt: 207-211'C (onder ontleding). I

VOORBEELD XVI I

2,0 g (11,0 mmol) L-tyrosine werd opgelost in ëen I

oplossing van 0,44 g (11,0 mmol) natriumhydroxide in 20 ml I

25 water en 20 ml methanol op kamertemperatuur, waarna 3,68 g I

(11,0 mmol) van een ω-3 meervoudig onverzadigd vetzuurmeng- I

sel (met dezelfde samenstelling als in voorbeeld I) aan de I

bovengenoemde oplossing bij 40eC werd toegedruppeld. Na I

roeren van het reactiemengsel onder stikstof bij 40ec I

30 gedurende 2 uur werden de oplosmiddelen onder verminderde I

druk van 4-5,3 kPa ingedampt onder oplevering van een geel, I

vast poeder-achtig kristallijn zoutresidu in een opbrengst I

van 6,18 g, smeltpunt: 150°C (bij gedeeltelijke ontleding). I

In de volgende voorbeelden XVII en XVIII werd de in I

35 voorbeeld XVI beschreven procedure gevolgd, behalve dat het I

zout is gevormd door gebruikmaking van het overeenkomstige I

aminozuur in plaats van L-tyrosine. I

VOORBEELD XVII

L-serine 1,0 g (9,5 mmol) I

8900573.

4 - 12 - methanol 10,00 ml water 15,0 ml natriumhydroxide 0,38 g (9,5 mmol) ω-3 vetzuurmengsel (volgens 3,17 g (9,5 mmol) 5 voorbeeld I)

Na indampen werd een lichtbruin kristallijn produkt verkregen in een opbrengst van 4/5 g, dat bij een temperatuur boven 175°C werd ontleed.

VOORBEELD XVIII

10 glutamine 2,0 g (13,77 mmol) methanol 20,0 ml water 105,0 ml natriumhydroxide 0,55 g (13,77 mmol) ω-3 vetzuurmengsel 4,60 g (13,77 mmol) 15 Een bruin poederachtig kristallijn zout werd

verkregen in een opbrengst 7,11 g, smeltpunt; 181-190°C. VOORBEELD XIX

Bereiding van een farmaceutisch preparaat in capsulevorm 20 Een zoutmengsel, bereid volgens voorbeeld I, werd onder gebruikmaking van een bekende encapsuleringsmethode overgebracht in harde gelatinecapsules, die geschikt waren voor het ontvangen van 500 mg werkzaam bestanddeel.

VOORBEELD XX

25 Bereiding van tabletten

Uit het zoutmengsel, dat werd verkregen in voorbeeld I, werden tabletten bereid, waarvan elk de volgende bestanddelen bevatte; zoutmengsel volgens voorbeeld I 500 mg 30 lactose 120 mg zetmeel 63 mg polyvinylpyrrolidon 3,5 mg magnesiumstearaat 3,5 mg

Desgewenst kunnen tabletten worden bekleed met een 35 suikerlaag onder toepassing van een geëigende machine daarvoor.

8900573.

Claims

1. Nieuwe antivirale en immunostimulerende zouten I met de algemene formule (1) I R-COO-AH+ (1) I

2. Zout volgens conclusie 1, met het ken- I 15. e r k, dat als zuurcomponent eicosapentacarbonzuur (EPA) I bevat, als basiscomponent L-lysine. I

3. Zout volgens conclusie 1, met het ken- I merk, dat als zuurcomponent docosahexacarbonzuur (DHA) I bevat en als basiscomponent L-lysine. I

4. Zout volgens conclusie 1, met het ken- I merk, dat dit een mengsel is van docosahexacarbonzuur en I eicosapentacarbonzuur als zuurcomponent en L-lysine als basis- I component. I

5. Antiviraal en immunostimulerend farmaceutisch 1 25 preparaat, met het kenmerk, dat dit een zout I met algemene formule 1 bevat, waarin de substituenten de die I in conclusie 1 gedefinieerde betekenis hebben, vermengd met I de dragers en/of toevoegsels en eventueel antioxidantia, die I gewoonlijk in de farmaceutische industrie worden gebruikt. I

5 I waarin I R een Ci8_24_alkylgroep ten minste twee dubbele I bindingen voorstelt? terwijl I "A" een aminozuur dat in levende organismen voorkomt I 10 voorstelt en/of een derivaat ervan met daarin een I carboxylgroep gesubstitueerd door een Ci_4*-alkyl- I groep of een aminogroep of door een alkalimetaal- I tion. I

6. Werkwijze voor de bereiding van de nieuwe zouten I met algemene formule (1) I R-C0CTAH+, (1) 35 waarin R en A de in conclusie 1 gedefinieerde betekenissen hebben, met het kenmerk, dat als basiscomponent een aminozuur, waarin de substituenten de in conclusie 1 8900573. - 14 - vermelde betekenissen hebben, worden omgezet met een zuur met de algemene formule (2) R-COOH, (2) 5 waarin R de in conclusie 1 gedefinieerde betekenissen heeft, in een polair oplosmiddel.

7. Werkwijze volgens conclusie 6, met het kenmerk, dat eicosapentacarbonzuur wordt omgezet met

8. Werkwijze volgens conclusie 6, met het kenmerk, dat docosahexacarbonzuur wordt omgezet met L-lysine.

9. Werkwijze volgens conclusie 6, met het 15 kenmerk, dat een mengsel van docosahexacarbonzuur en eicosapentacarbonzuur wordt omgezet met L-lysine.

10. Werkwijze voor de bereiding van farmaceutische preparaten met antivirale en immunostimulerende werking, met het kenmerk, dat een zout met algemene 20 formule (1), bereid volgens de werkwijze van conclusie 6, wordt gemengd met dragers en/of hulpstoffen en eventueel met antioxidantia, die gewoonlijk in de farmaceutische industrie worden gebruikt, gevormd door het omzetten van het aldus verkregen mengsel in de vorm van tabletten, dragees, 25 capsules, suppositoria enz. in farmaceutische preparaten.

10 L-lysine.

11. Toepassing van zouten met algemene formule (1) volgens conclusie 1 voor de bereiding van farmaceutische preparaten en met antivirale en immunostimulerende werking. 8900573.