NL9401743A

NL9401743A - Zouten van aminoalcoholen en farmaceutische formuleringen die deze bevatten.

Info

Publication number: NL9401743A
Application number: NL9401743A
Authority: NL
Inventors: Tiberio Bruzzese
Original assignee: Prospa Bv
Priority date: 1994-10-20
Filing date: 1994-10-20
Publication date: 1996-06-03
Also published as: JP3801225B2; DE69512929T2; AU2111095A; EP0787119B1; JPH08134026A; EP0787119A1; US5869714A; WO1996012696A1; DE69512929D1

Description

Titel: Zouten van aminoalcoholen en farmaceutische formuleringen die deze bevatten.

De onderhavige uitvinding heeft betrekking op zouten van aminoalcoholen en farmaceutische formuleringen die deze bevatten.

In het bijzonder heeft de onderhavige uitvinding betrekking op zouten van C20‘C22 omega-3-poly-onverzadigde vetzuren met aminoalcoholen, die de algemene formule 1 van het formuleblad hebben, waarin: R staat voor het alkenylradicaal van een C2o‘C22 omega- 3 -poly-onverzadigd vetzuur; R' staat voor een waterstofatoom of een C1-C2 alkylradicaal; R" staat voor R' zoals hierboven gedefinieerd, of een (CH2)n0H hydroxyalkylradicaal waarin n gelijk is aan 2 of 3.

Polyonverzadigde vetzuren met lange ketens, in het bijzonder de omega-3 poly-onverzadigde vetzuren blijken uitermate belangrijk te zijn voor de preventie en behandeling van verschillende ziektevormen, in het bijzonder die welke verbonden zijn aan het cardiocirculaire systeem (plaatjes antiaggregatie actie, trombolytische actie, antiatheromateuze actie enz. - zie A. Leaf and P.C. Weber, New England J.Medicine, 318. 549, 1988), inflammatoire pathologieên (S.M. Prescott, J. Biol. Chem., 259. 7615, 1984) en sommige kankervormen (H.O. Bang et al., Acta Med. Scand., 220, 69, 197 6) . Een aanzienlijke effectiviteit werd ook aangetoond bij de behandeling van hypertriglyceridemie en hyperchol-esterolemie, van psoriasis, van immunologie, leer- en geheugenstoornissen, van centrale en perifere zenuwsysteem-pathologieên etc. Deze activiteiten worden vaak gestimuleerd op een biologisch niveau, door competitie van de zuren in kwestie met arachidonzuur en metabolieten die daarvan afstammen door middel van het effect van cyclo-oxygenase en lipoxygenase enzymen (prostaglandinen, prostacyclinen, tromboxanen en leukotriënen). In andere gevallen wordt het effect eenvoudigweg toegeschreven aan de accumulatie van poly-onverzadigde zuren, waarbij zuren vervangen worden die verzadigd zijn of een kleinere mate van onverzadigdheid vertonen, in verschillende organen en cel-opeenhopingen (plasma, plaatjes en RBC-membraan? zenuwstelsel etc.).

Van de poly-onverzadigde vetzuren zoals hierboven genoemd, zijn 4,7,10,13,16,19-cis-docosahexeenzuur (hierna genoemd DHA) en 5,8,11,14,17-ciseicosapenteenzuur (hierna genoemd EPA) verreweg het meest belangrijk. Deze zuren worden ook gevonden in marine-algen evenals in verschillende miero-organismen, maar boven alles, in visolie die tegenwoordig de commerciële bron van deze poly-onverzadigde verbindingen vormen. Van visoliën is het bekend dat deze DHA en EPA in een mengsel bevatten met verzadigde en niet zo onverzadigde zuren, in de vorm van triglyceriden en het is in deze vorm dat het materiaal tegenwoordig commercieel beschikbaar is voor toepassingen bij diëten en therapieën (zie bijvoorbeeld Maxepa®, Seven Seas Health Care Ltd., Huil, England; R.l. Sterling et al., J. Immunol, 139, 4186, 1987). Het gehalte van EPA en DHA in deze glyceriden is ongeveer 30% uitgedrukt als de totale som van de twee consituenten.

Andere dieet- of therapeutische bereidingen van dha en EPA (w.S. Harris, J. Lipid Res., 30, 785, 1989) werden verkregen door transesterificatie van de triglyceriden met ethanol en vervolgens concentratie door middel van verschillende technieken, en worden daarom toegepast als geconcentreerde mengsels van EPA ethylester en DHA ethylester.

Uit farmaceutisch oogpunt zijn de genoemde poly-onverzadigde vetzuren met lange ketens, evenals, in het algemeen, alle derivaten daarvan waaronder de ethylesters, alle extreem water-onoplosbare oliën, die vaak in een doseringsvorm gedoseerd worden van zachte gelatinecapsules, waarbij het onmogelijk wordt gemaakt om verschillende farmaceutisch geschikte formuleringen te vervaardigen.

De toepassing van organische oplosmiddelen om triglyceriden en esters te incorporeren in de waterige fase.

zou als zodanig niet aan te raden zijn vanuit toxicologisch oogpunt en staat in elk geval niet toe dat het preparaat in water wordt verdund tengevolge van de daaruit volgende scheiding van de olie-achtige fase. In het bijzonder leiden de alkali- en aardalkalimetaalzouten tot sterke basische oplossingen, die als gevolg daarvan een slechte tolerantie vertonen, en leiden tot het additionele nadeel van een concentratie-afhankelijke pH en een vaak ongewenste toestroom van metaalionen.

Er is verrassenderwijs gevonden dat grote en onverwachte voordelen op het niveau van farmaceutische technologie evenals biologische en farmacologische voordelen verkregen kunnen worden door toepassing van de zouten van C20-C22 omega-3-poly-onverzadigde vetzuren, zoals DHA en EPA en de mengsels daarvan, met aminoalcoholen met de algemene formule 1 van het formuleblad, waarin: R staat voor het alkenylradicaal van een C20-C22 omega-3 -poly-onverzadigd vetzuur; R' staat voor een waterstofatoom of een C1-C2 alkylradicaal; R" staat voor R' zoals hierboven gedefinieerd, of een (CH2)nOH hydroxyalkylradicaal waarin n gelijk is aan 2 of 3.

De verbindingen die op deze wijze gedefinieerd zijn, zijn vaak aanwezig als dikke oliën als laag-smeltende en nauwlijks kristalliserende vaste stoffen, en zijn sterk water-oplosbaar.

Typische voorbeelden van de zouten, die onderwerp zijn van de onderhavige uitvinding, zijn DHA en EPA zouten met cholinehydroxide (CH3)3 N+-CH2CH-CH20H

0H- en met ethanolamine NH2-CH2-CH2-OH, basis van het fysiologische type, die reeds opgenomen zijn in voedsel, en daardoor absoluut farmacologisch getolereerd worden.

De zouten volgens de onderhavige uitvinding worden bijvoorbeeld bereid door het genoemde poly-onverzadigde zuur in contact te brengen in een waterig medium met ten minste één van de genoemde aminoalcoholen, en uiteindelijk het herwinnen van het gewenste zout door gewone technieken zoals droogdampen bij lage temperatuur en druk of door middel van lyofilisering.

De zouten volgens de onderhavige uitvinding kunnen ook bereid worden door geconcentreerde alcoholische oplossingen van genoemde zouten in contact te brengen met equimolaire hoeveelheden van genoemde aminoalcoholen, en dit te laten volgen door droogdampen van de oplossing of neerslaan van het zout door verdunning met geschikte oplosmiddelen, zoals petroleumether.

De dubbele uitwisselingsreactie tussen het zuur natriumzout en bijvoorbeeld de base hydrochloride is niet zo eenvoudig. Vaak kan salificatie bereikt worden door direkt contact, onder koeling, zodat de twee vloeibare olie-achtige bestanddelen geleidelijk aan verdikken terwijl de reactie zich voortzet, waarbij snel het gewenste zout worden gevormd.

Het oogpunt van de farmaceutische techniek, maakt de verkregen water-oplosbaarheid het mogelijk om verschillende farmaceutische formuleringen te bereiden, die onmogelijk bereid kunnen worden door toepassing van de bekende triglyceriden, ethylesters en de vrije zuren zelf, die allemaal uitermate water-onoplosbaar zijn. In het bijzonder worden monofasische formuleringen in een waterige medium, zoals vloeibare vormen voor orale toepassing, drinkbare vormen, siropen, etc., die anderszins onmogelijk verkregen konden worden, nu gemakkelijk bereikbaar.

De toepassing van de water-oplosbare zouten in kwestie is voor dezelfde reden geschikt voor de bereiding van granules, eventueel in individueel gedoseerde sachets, om toe te passen via de orale weg gevolgd door extempore oplossing: de verbindingen kunnen in feite opgenomen worden in verschillende vaste stoffen, water-oplosbare excipiêntia, (b.v. saccharose) of opgenomen worden in cyclodextrine, vervolgens gegranuleerd, in bruizende vorm of anderszins, en toegepast na oplossing in water, zonder scheiding van de supernatante olie-achtige fasen.

De water-oplosbare zouten kunnen ook toegepast worden in formuleringen voor topicale toepassing, zoals lotions, eveneens als injecteerbare preparaten bedoeld voor parenterale route, waarbij de nodige voorzichtigheid in acht moet worden genomen. In het laatste geval, kan bovendien DHA en EPA salificatie met aminoalcoholen leiden tot wateroplossingen met een neutrale pH, die in het bijzonder geschikt zijn met betrekking tot de lokale en systemische tolerantie van het geneesmiddel.

Het is duidelijk dat de DHA en EPA zouten in kwestie eveneens geformuleerd kunnen worden als de commerciële triglyceriden en ethylesters, die vloeibare, water-onoplosbare oliën zijn, en vaak gedispenseerd worden in doseringsvormen van zachte gelatinecapsules.

De aminoalcoholzouten die hierin beschreven worden, kunnen in feite gemakkelijk verdund en gesolubiliseerd worden met kleine hoeveelheid van de normale verdunningsmiddelen die toegepast worden in de bereidingstechnologie van zachte gelatinecapsules, zoals triacetine, mengsels van verschillende polyethyleenglycolen (PEG 200-600 + PEG 4000), tween® of tween®/ethanolmengsels, propyleenglycol en verschillende andere. In al deze gevallen, kan het verkregen mengsel vervolgens verder verwerkt worden als normale olie-achtige substantie en geformuleerd worden in zachte capsules.

Naast de hiervoor beschreven informatie die gerelateerd is aan de verbeterde mogelijkheid van formulering door middel van farmaceutische technieken, vertonen de zouten met aminoalcoholen van poly-onverzadigde zuren zoals de hierboven genoemde DHA en EPA, andere fundamentele voordelen van biologische biochemische en farmacologische aard in vergelijking met dezelfde verbindingen indien deze worden toegepast in de vorm van triglyceriden, van ethylesters en ook als natriumzouten.

Verrassenderwijs is gevonden dat deze verbindingen beter worden geabsorbeerd via de orale weg in vergelijking met de referentieprodukten, als gevolg daarvan leidend tot hogere plasmaniveaus dan bijvoorbeeld, een equimolaire dosering van de overeenkomstige ethylester. Betere absorptie van poly-onverzadigde zuurzouten dan bijvoorbeeld esters, is een gevolg van het feit dat de esters op gastrisch en enterisch niveau in de vorm van oliedruppeltjes aanwezig zijn, die alleen in de waterige fase dispergeerbaar zijn na vorming van lokale micro-emulsies, terwijl water-oplosbare zouten in moleculaire vorm dispergeerbaar zijn en daardoor snel absorbeerbaar zijn in de niet-gedissocieerde evenwichtsvorm. Het voordeel dat veroorzaakt wordt door de hogere plasmaniveaus en de daaraan gekoppelde diffusie in de andere gebieden van het organisme, leidt tot hogere concentratisch van het poly-onverzadigde zuur in de hersenen, in het zenuwstelsel in het algemeen, in de retina en in de andere bekende depositie en accumulatie-plaatsen.

In het bijzonder van belang is de verrijking van DHA en EPA in het membraan van rode bloedcellen en plaatjes waaraan de poly-onverzadigde zuren belangrijke hemorheologisch (reductie van bloedviscositeit, toegenomen rode-bloedcel-deformabiliteit etc.) en anti-aggregatie-eigenschappen, respectievelijk, verbinden.

Salificatie met speciale aminoalcoholen zoals ethanol-amine en choline, leidt tot andere gunstige karakteristieken van de nieuwe zouten: deze verbindingen zijn in feite essentiële constituenten van membraanfosfolipiden, bijvoorbeeld, van erytrocieten en plaatjes, in de vorm van fosfatidylethanolamine en fosfatidylcholine en er is gevonden dat zowel het zuur als de base geabsorbeerd kan worden waarbij een toename wordt veroorzaakt, in een "synergystische" manier, van de twee corresponderende fosfolipide sub-klassen zoals hierboven genoemd. Ethanolamine kan bovendien, door endogene methyleringsystemen, gemethyleerd worden om te leiden tot choline en daarbij omvat worden in beide van de hierboven genoemde fosfolipideklassen.

Fosfatidylserine en fosfatidylinositol worden niet significant beïnvloed door de toediening van de zouten volgens de onderhavige uitvinding.

Omdat bekend was dat de fosfolipideklasse van het erytrocytmembraan, tezamen met de mate van onverzadigdheid van de acylketens, de rode-bloedceldeformabiliteit en bloedviscositeit regelt, is er een studie uitgevoerd om de effecten van de zouten in kwestie op erytrocytfosfolipide-samensteling te bekijken, welk onderzoek hieronder uitgebreid wordt beschreven. Acht gezonde vrijwilligers werden uitgekozen en in vier groepen verdeeld, die elk via de orale route behandeld werden, gedurende drie weken, met een dagelijkse hoeveelheid van 1,0 g DHA in de vorm van de ethylester (1,1 g), natriumzout (1,1 g), cholinezout (1,3 g) en ethanolaminezout (1,2 g). voor en na de behandeling werden monsters van veneus bloed verzameld en natriumcitraat werd toegevoegd, vervolgens werden de erytrocieten geïsoleerd, driemaal gewassen met zoutoplossing (0,15 M NaCl, pH 7,4) bij 0°C en opnieuw gesuspendeerd in zoutoplossing. 1-ml monsters van de rode-celsuspensies werden behandeld met 5 ml methanol gedurende 10 minuten, vervolgens met 5 ml chloroform dat 2 mg/100 ml van de antioxidant 2,6-di-tert.butyl-4-methyl-fenol (BHT) bevatte. De organische oplossingen die afkomstig waren van de drie extracties werden tot droog ingedampd en het residu, dat gevormd werd door erytrociet fosfolipiden, werd onderworpen aan bidimensionele chromatografie volgens J.D. Turner en G. Rouser, Anal. Biochem. (Deel 1 - Erythrocyte lipids), 38, 423, 1970 om de verschillende fosfolipideklassen te scheiden: silicagel 60 H (90 g, Merck) plus Fluorisil (7,2 g, BDH Chemicals) plaatjes werden toegepast; de oplos-middelsystemen bestonden uit chloroform:methanol:25% ammonia:water (90:54:5,5:5,5) en chloroform:methanol:aceton:azijnzuur:water (60:20:80:20:10).

De verschillende klassen werden geïdentificeerd tegen standaard fosfolipiden (Sigma Chemical). Een monster van totale fosfolipiden en de verschillende geïsoleerde vlekken werden behandeld met 1,5 ml boortrifluoride-methanol gedurende l uur bij 65°C onder stikstof stroom, om de methylesters van de zuren die in de fosfolipiden omvat werd, te bereiden, met als doel gaschromatografie te ondergaan. Om dit doel te bereiken werd een Hewlet-Packard 5890 gaschromtograaf toegepast, gefit met een ionizatievlamdetector en met een HPl-kolom, 25 m lengte en 0,31 mm in interne diameter; helium werd toegepast als dragergas, de injectiepoorttemperatuur was 320°C en de detectortemperatuur 340°C. De kamertemperatuur werd geprogrammeerd gedurende l minuut'op 170°C, en daarna toenemend met 4°C/min tot 250°C en gedurende 15 minuten bij deze temperatuur gehouden.

*

Op deze wijze werd gevonden dat fosfatidylserine en fosfatidylinositol in hun DHA gehalte verschilden met slechts een kleine hoeveelheid in vergelijking met de basislijnomstandigheid (vóór de behandeling), terwijl de bevindingen met betrekking tot fosfatidylcholine, fosfatidylethanolamine en totale fosfolipiden worden gegeven in tabel l.

Tabel 1

Percentagetoename in DHA gehalte van erytrocietfosfolipiden in vergelijking met de basislijnwaarden.

(*) Elke behandeling komt overeen met de toediening van 1 g DHA gedurende 3 weken.

De voorafgaande data tonen aan dat DHA salificatie door middel van choline en ethanolamine de DHA biobeschikbaarheid kan verhogen, evenals de inclusie daarvan in de fosfolipiden van rode-bloedcelmembranen (en vervolgens in andere gebieden van het organisme zoals plasma, plaatjes, zenuwstelsel, etc.). In het bijzonder kan salificatie door middel van de bovengenoemde basen hoofdzakelijk de correspopnderende fosfolipide-klasse verhogen, zoals fosfatidylcholine en fosfatidylethanol-amine.

Deze gunstige karakteristieken van de zouten in kwestie, in termen van absorptie en capaciteit van opname in verschillende fosfolipidesystemen, leidt eveneens tot verrassende resultaten met betrekking tot de farmacologische activiteit, zoals, bijvoorbeeld, tot onverwachte sterke werking op de remming van bloedplaatjesaggregatie in vitro en ex vivo, wat aangetoond wordt door middel van de bekende experimentele modellen. In aanmerking genomen dat deze activiteit geen volledige indicatie is van de mogelijke therapeutische effecten van een geneesmiddel, hebben wij het in vivo effect van de nieuwe zouten in extreem significante testen gemeten, door bijvoorbeeld het effect ervan op de groeisnelheid van een trombus, geïnduceerd door een bekend aggregatiemiddel (adenosinedifosfaat; ADP) in het hamster-microvasculaire systeem (in vivo antitrombotische werking) te bepalen.

Door middel van een verschillend in vivo experimenteel model werd ook het effect op de trombus-vorming en des-aggregatie in de hamster geëvolueerd, volgend op vasculaire schade die aangebracht werd door elektrische stimulatie (trombolytisch actie).

In de loop van een typisch experiment, werden mannelijke hamsters van het Mesocricetus auratus genus, die 95-115 g wogen, gedurende 1 week in het laboratorium geacclimatiseerd voordat de studie werd opgestart, vervolgens werden bij semi-chronisch via de orale weg gedurende 10 achtereenvolgende dagen behandeld met de produkten die bestudeerd werden. Meer in detail, werden de dieren in 4 groepen verdeeld: groep I verkreeg alleen de drager, groep II verkreeg 100 mg/kg DHA ethylester (equivalent aan 92 mg/kg DHA), groep III en groep IV kregen 50 mg/kg DHA in de vorm van ethanolaminezout (59,3 mg/kg) en cholinezout (65,7 mg/kg) respectievelijk.

Eén uur na de laatste dosering werden de dieren geanestheti-seerd met natriumpentabarbiton (90 mg/kg, i.p.), de wangzak werd met behulp van een katoenen lap "bud" binnenstebuiten gekeerd en de bovenste laag en het onderliggende avasculaire verbindende weefsel werd door middel van ofthalmische scharen verwijderd om de lager liggende vasculaire laag bloot te leggen, die daarna gespoeld werd met zoutoplossing en onder een Leitz Dialux microscoop (vergroting 250 x) werd bestudeerd.

De evaluatie van de antitrombotische activiteit noodzaakt het meten van de groeisnelheid van een trombus (wit lichaam) in de microcirculatie, geïnduceerd door de iontoforese van ADP van een micropipet door de bloedvatwal. Een micropipet met een diameter van 1-2 μΐη werd gevuld met een 10“2M oplossing van ADP, verbonden met een zilver/zilverchloride referentie-elektrode die in de bek van het dier werd geplaats en aangesloten op een venule met een diameter van 16-40 μΐη. Door een negatieve potentiaal op de micropipet toe te passen, werd ADP (2x10'14 mol/sec) geïnjecteerd wat leidde tot de vorming van een wit lichaam (bloedplaatjes trombus) die gradueel groeide op de wand van de venule. De groeisnelheid van de trombus werd bepaald door de tijd die nodig was om 30%, 50% en 90% van het witte lichaam te vormen, waarbij 100% betrekking heeft op de totale afsluiting van het bloedvat met stasis. Na het afzetten van de stroom, loste het witte lichaam snel op en werden geen nieuwe witte lichamen gevormd totdat de stroom opnieuw werd aangezet. De remming van de trombus-groeisnelheid werd berekend door de metingen in de behandelde dieren ter vergelijking met die verkregen uit de controlegroep (Tabel 2).

Voor de evaluering van de trombolytisch activiteit werd een micropipet gevuld met 1,0 M kaliumchloride, aangebracht aan een arteriool met een diameter 40-60 μπι en verbonden aan een referentie-elektrode die in de bek van het dier werd geplaatst. Gedurende 5 seconden werd een negatieve potentiaal aangebracht, onder toepassing van een Grass S48 stimulator die een stroom van 20-30 μΑ produceerde. Een tweede micropipet die ΙΟ'2 Μ ADP bevatte werd op de plaats van de elektrische schade aangebracht en gedurende 3 seconden werd een negatieve potentiaal toegepast. Nadat de stroom werd afgeschakeld, werd de tijd, die nodig was voor de resulterende trombus om te vormen en te desaggregeren (ongeveer 40 seconden) onder toepassing van een stopwatch gemeten. Het proces van de ADP stimulatie op de beschadigde plaats van de arteriool werd enkele malen herhaald, en het gemiddelde van de waarden die verkregen werden gedurende l uur werd bepaald en vergeleken met die van de controledieren.

Het percentage verandering in de persistentie van de trombus die zich vormde op de beschadigde plaats in de behandelde en onbehandelde dieren is daardoor een mate van de trombolytische activiteit van het geneesmiddel (Tabel 3).

Tabel 2

Percentage reductie, vergeleken met de controle, van de trombus-groeisnelheid geïnduceerd door ADP na orale toediening van DHA ethylester, cholinezout en ethanolaminezout gedurende 10 dagen.

Tabel 3

Percentage reductie, vergeleken met de controle, van de arteriolaire trombus-desaggregatietijd, na orale toediening van DHA ethylester, cholinezout en ethanolaminezout gedurende 10 dagen.

De voornoemde data tonen aan dat de DHA ethylester een gemiddelde activiteit vertoont als anti-trombotisch middel in het experimentele model dat toegepast is, terwijl DHA choline en ethanolaminezouten een hoge activiteit vertonen (Tabel 1), met een percentagereductie in de ADP-geïnduceerde trombus-groeisnelheid in de orde van maximaal 33-34%.

Aan de andere kant vertoont de DHA ethylester een hoge activiteit als trorribolytisch middel, waarbij een percentagereductie in arteriolaire trombus-desaggregatietijd werd gemeten die equivalent is aan 36,2% (Tabel 2). Hoewel DHA choline en ethanolaminezouten een reductie in desaggregatie-tijd vertonen die in dezelfde ordegrootte ligt (37-38%), zijn dit data die gemeten worden na toediening van aanzienlijk lagere doseringen, en deze zouten worden dan ook geacht een aanzienlijk grotere activiteit te vertonen, indien zij met dezelfde dosering worden toegediend, zelfs in deze test.

De totale gegevens die hierboven beschreven zijn, maken het duidelijk dat de aminoalcoholzouten van omega-3-poly-onverzadigde vetzuren, die onderwerp zijn van de onderhavige uitvinding, ongetwijfeld toegepast kunnen worden als geneesmiddelen met alle therapeutische indicaties die reeds in de literatuur beschreven zijn inzoverre het de poly-onverzadigde constituent daarvan betreft (vet-verlagend, cholesterolverlagend, antihypertensief, ontstekingsremmend en anti-tumoraal; behandeling van psoriasis, van pathologieën van de retina, van geheugen en leerprocessen en immunologische ziekten, en van verschillende aandoeningen van het centrale en perifere zenuwstelsel), maar in het bijzonder kunnen zij toegepast worden als plaatjesaggregatieremmers (anti-trombotische en trombolytische werking) en bij de behandeling van daaraan verwante pathologieën.

in de verschillende farmaceutische formuleringen die overwogen worden, en gedeeltelijk reeds beschreven zijn, worden de verbindingen volgens de onderhavige uitvinding - toegepast als individueel actieve ingrediënten of als een mengsel daarvan, of in combinatie met andere geneesmiddelen -toegepast in doseringen van 50 mg tot 1 g, bij voorkeur van 100 mg tot 500 mg, met betrekking tot de poly-onverzadigde constituent, één of meerdere keren per dag toe te dienen.

Toediening is mogelijk via elke route, waaronder de topicale en parenterale routes, maar wordt meestal via de orale weg gedaan. De zouten volgens de uitvinding worden daarom opgenomen, ofwel onafhankelijk ofwel verdund met geschikte dragers of excipiêntia, in zachte gelatinecapsules of - na adsorptie op verschillende materialen - in capsules, granules, tabletten of siropen, druppels en andere vloeibare vormen of zelfs in lotions en crèmes voor topicale toepassing, in overeenstemming met de suggesties van de algemene farmaceutische technologie.

Voorbeelden van chemische bereidingen en van verschillende formuleringen zullen hierna gegeven worden met als doel de uitvinding in meer detail te beschrijven, maar zonder deze op enige wijze te beperken.

Voorbeeld l 32,8 g van 4,7,10,13,16,19-cis-docosahexeenzuur (DHA, zuiverheid > 90%) werd gesuspendeerd in 140 ml gedestilleerd water en onder roeren bij kamertemperatuur gehouden. 24,2 g van een 50 gew.%-ige cholinehydroxide wateroplossing werden daarna onder koelen toegevoegd, en het roeren wordt gedurende 10 minuten gecontinueerd om de oplossing te vervolledigen. De oplossing wordt met 50 ml petroleumether gewassen en tot droog gedampt onder verminderde druk en temperatuur. Op deze wijze wordt het DHA cholinezout verkregen met een bijna theoretische opbrengst.

De elementaire analyse van het produkt (C,H,N,0) en de zure en basische zuiverheid komen overeen met de te verwachten waarden.

IR spectrum: carboxylaationpiek bij 1560 cm'1 en 1395 cm'1 1H-NMR spectrum (DMSO-dg): δ 5,32 (m, 12H, alkenisch H), 3,40 (m,2H,CH2N+) , 3,10 (s, 9H(CH3)3N+), 2,80 (m,12H,6-,9-,12-,15-,18-CH2; CH2-0), 2,14 (m,2H,3-CH2), 2,02 (m,2H,21-CH2), 1,91 {t,2H,2-CH2) , 0,90 (t,3H,22-CH3)

Voorbeeld 2 16,4 g DHA in ethanoloplossing werd behandeld met 12,1 g van een 50 gew.%-ige cholinehydroxide-ethanoloplossing onder roeren bij kamertemperatuur, vervolgens wordt de oplossing ontkleurd met kool en vervolgens tot droog gedampt bij verminderde temperatuur en druk.

Het residu wordt met 50 ml petroleumether (kookpunt 40-70°C) gewassen en vacuümgedroogd, op deze wijze leidend tot het DHA cholinezout met een bijna theoretische opbrengst.

De fysicochemische en analytische karakteristieken van het produkt komen overeen met die gegeven in voorbeeld l.

Voorbeeld 3 16,4 g DHA werd behandeld onder roeren met 6,0 g cholinehydroxide terwijl gekoeld werd tot 0°C. Het reactie-mengsel verdikt gradueel terwijl de salificatie verder gaat en na 10 minuten isoleert het DHA cholinezout, daarbij dezelfde karakteristieken vertonend als die van het produkt verkregen in de voorafgaande voorbeelden.

Voorbeeld 4 32,8 g DHA (zuiverheid > 90%) werd gesuspendeerd in 160 ml gedestilleerd water en onder roeren behandeld met 6,1 g ethanolamine. De oplossing werd gedurende 10 minuten onder roeren gehouden, daarna gewassen met 50 ml petroleumether en tot droog gedampt bij verminderde temperatuur en druk: 38,5 g DHA ethanolaminezout werd verkregen.

De elementaire analyse van het produkt en de zure en basische zuiverheid komen overeen met de verwachte waarden.

IR spectrum: carboxylaationpiek bij 1550 cm'1 en 1400 cm'1 i-H-NMR spectrum (DMSO-dg): δ 5,32 (m,12H, alkenisch H), 3,48 (t,2H,CH2N+) , 2,80/2,71 (m,12H,6-,9-,l2-,15-,18-CH2; CH20), 2,18 (m,2H,3-CH2), 2,00 (m,4H,2-CH2 en 21-CH2), 0,90 (t,3H,22-CH3)

Voorbeeld 5 38,2 g DHA werd onder langzaam roeren gehouden en druppelsgewijs werd 6,1 g ethanolamine toegevoegd, waarbij gekoeld werd tot 0°C. Het olie-achtige mengsel dikt langzaam in met de daaropvolgende vorming van het corresponderende zout. Na 10 minuten onder roeren, is de homogene reactiemassa totaal water-oplosbaar en komt deze overeen, voor zover het de analyse betreft, aan het DHA ethanolaminezout beschreven in voorbeeld 4.

Voorbeeld 6 30.2 g van 5,8,11,14,17-cis-eicosapenteenzuur (EPA, zuiverheid > 90%) werd behandeld met 12,1 g cholinehydroxide volgens één van de werkwijzen beschreven in de voorbeelden 1-3. Na koolbehandeling, werd het EPA cholinezout op deze wijze verkregen met een bijna theoretische opbrengst. Het produkt is water-oplosbaar en de fysicochemische en analytische karakteristieken komen overeen met de verwachte waarden.

Voorbeeld 7 30.2 g EPA wordt behandeld met 6,1 g ethanolamine volgens de werkwijze beschreven in de voorbeelden 4 en 5. 36,2 g EPA ethanolaminezout werd verkregen dat sterk water-oplosbaar is en vrijwel puur is na analyse.

Voorbeeld 8 0,1 mol DHA werd behandeld met cholinehydroxide (0,05 mol) en met ethanolamine (0,05 mol) volgens één van de voorafgaande voorbeelden. Een DHA gemengd zout van choline en ethanolamine werd op deze wijze verkregen met een hoge opbrengst.

Yaorbseld 9 0,5 mol DHA en 0,05 mol EPA werden gereageerd met 0,1 mol choline, volgens één van de voorafgaande voorbeelden.

Een hoge opbrengst van DHA en EPA gemengd cholinezout werd verkregen.

Voorbeeld 10

Door te werk te gaan volgens één van de werkwijzen beschreven in de voorgaande voorbeelden, maar door het geschikte zuur en de gechikte basen te gebruiken, werden de volgende zouten verkregen: DHA propanolaminezout DHA N,N-dimethylethanolaminezout DHA diëthanolaminezout DHA triëthanolaminezout EPA N,N-dimethylethanolaminezout EPA diëthanolaminezout EPA triëthanolaminezout

Voorbeeld 11

Formulering in aelatinecapsules DHA cholinezout (394,2 mg) equivalent aan DHA 300 mg

Triacetine 100 mg

Gelatine 127 mg

Glycerol 62 mg

Ethyl p-hydroxybenzoaatnatrium 0,58 mg

Propyl p-hydroxybenzoaatnatrium 0,29 mg

Vitamine E 1 mg

Voorbeeld 12

Formulering in qelatinecapsules DHA cholinezout (131,4 mg) equivalent aan DHA 100 mg

Triacetine 40 mg

Gelatine 65 mg

Glycerol 32 mg

Ethyl p-hydroxybenzoaatnatrium 0,3 mg

Propyl p-hydroxybenzoaatnatrium 0,15 mg

Vitamine E 0,5 mg

Voorbeeld 13

Formulering in qelatinecapsules EPA cholinezout (402,3 mg) equivalent aan EPA 300 mg

Triacetine 90 mg

Gelatine 127 mg

Glycerol 62 mg

Ethyl p-hydroxybenzoaatnatrium 0,58 mg

Propyl p-hydroxybenzoaatnatrium 0,29 mg

Vitamine E 3,00 mg

Voorbeeld 14

Formulering in gelatinecapsules DHA ethanolaminezout (592,9 mg) equivalent aan DHA 500 mg

Polyethyleenglycol 300 200 mg

Gelatine 17o mg

Glycerol 83 mg

Ethyl p-hydroxybenzoaatnatrium 1 mg

Propyl p-hydroxybenzoaatnatrium 0,5 mg

Vitamine E 1 mg

Ascorbylpalmitaat 2,5 mg

Voorbeeld 15

Fonmlering-iiL-gelatinesapsvAles EPA ethanolaminezout (360,6 mg) equivalent aan EPA 300 mg

Polyethyleenglycol 300 130 mg

Gelatine 127 mg

Glycerol 62 mg

Ethyl p-hydroxybenzoaatnatrium 0,58 mg

Propyl p-hydroxybenzoaatnatrium 0,29 mg

Vitamine E l mg

Voorbeeld 16

Formulering in gelatinecapsules DHA cholinezout (197,1 mg) equivalent aan DHA 150 mg DHA ethanolaminezout (177,9 mg) equivalent aan DHA 150 mg

Polyethyleenglycol 120 mg

Gelatine 130 mg

Glycerol 64 mg

Ethyl p-hydroxybenzoaatnatrium 0,6 mg

Propyl p-hydroxybenzoaatnatrium 0,3 mg

Vitamine E 1 mg

Voorbeeld 17

Formulering in aelatinecapsules DHA ethanolaminezout (177,9 mg) equivalent aan DHA 150 mg EPA ethanolaminezout (180,3 mg) equivalent aan EPA 150 mg

Polyethyleenglycol 130 mg

Gelatine 130 mg

Glycerol 64 mg

Ethyl p-hydroxybenzoaatnatrium 0,6 mg

Propyl p-hydroxybenzoaatnatrium 0,3 mg

Vitamine E 0,3 mg BHT 0,15 mg

Voorbeeld 18

Formulering in siroopvorm DHA cholinezout (3,94 g) equivalent aan DHA 3 g

Saccharose 50 g

Methyl p-hydroxybenzoaat 0,075 g

Ethyl p-hydroxybenzoaat 0,029 g

Propyl p-hydroxybenzoaat 0,021 g

Natriumascorbaat 0,100 g

Sinaasappelsmaakstof 0,250 g

Gezuiverd water q.s. tot 100 ml

Voorbeeld 19

Formulering in druppels DHA ethanolaminezout (35,58 g) equivalent aan DHA 30 g

Methyl p-hydroxybenzoaat 0,090 g

Ethyl p-hydroxybenzoaat 0,035 g

Propyl p-hydroxybenzoaat 0,025 g

Natriummetabisulfiet 0,300 g

Sinaasappelsmaakstof 2 g

Gezuiverd water q.s. tot 100 ml

Voorbeeld 20

Formulering in lotion DHA cholinezout {13,14 g) 10 g

Ethanol 3 0 g

Natriummetabisulfiet 0,3 g

Pouce perfume 0,6 g

Gezuiverd water q.s. tot 100 ml ,

Voorbeeld 21

Formulering in orale individueel-gedoseerde granules (extemoore oplossing! DHA ethanolaminezout (1185,8 mg) equivalent aan DHA 1000 mg

Geprepiciteerd silica 50 mg

Citroensmaakstof 100 mg

Sorbitol q.s. tot 5 g

Voorbeeld 22

Formulering in tabletten voor orale toepassing DHA ethanolaminezout (296,5 mg) equivalent aan DHA 250 mg

Geprecipiteerd silica 50 mg

Microkristallijn cellulose 100 mg

Talk 10 mg

Magnesiumstearaat 5 mg

Lactose 133,5 mg

Claims

1. Zouten van C20-C22 omega-3-poly-onverzadigde vetzuren met aminoalcoholen, met de algemene formule 1 van het formuleblad waarin: R staat voor het alkenylradicaal van een C2Q-C22 omega- 3 -poly-onverzadigd vetzuur; R' staat voor een waterstofatoom of een C1-C2 alkylradicaal; R" staat voor R’ zoals hierboven gedefinieerd, of een (CH2)n0H hydroxyalkylradicaal waarin n gelijk is aan 2 of 3.

2. Zout volgens conclusie l, waarin het poly-onverzadigde vetzuur 4,7,10,13,16,19-cis-docosahexeenzuur (DHA), 5,8,11,14,17-ciseicosapenteenzuur (EPA), of een mengsel daarvan is.

3. Zout volgens conclusie 1, waarin het aminoalcohol ethanolamine, N-methylethanolamine, N,N-dimethylethanolamine, Ν,Ν,Ν-trimethylethanolamine (choline), diethanolamine, triëthanolamine, propanolamine, dipropanolamine of een mengsel daarvan is.

4. Zout volgens één van de conclusies 1-3, met het kenmerk, dat het het DHA cholinezout is.

5. Zout volgens één van de conclusies 1-3, met het kenmerk, dat het het DHA ethanolaminezout is.

6. Zout volgens één van de conclusies 1-3, met het kenmerk, dat het het EPA cholinezout is.

7. Zout volgens één van de conclusies 1-3, met het kenmerk, dat het het EPA ethanolaminezout is.

8. Zout volgens één van de conclusies 1-3, met het kenmerk, dat het het gemengde zout is van DHA met choline en ethanolamine.

9. Zout volgens conclusie 8, waarin de verhouding choline tot ethanolamine varieert tussen 2:8 en 8:2, op moleculaire basis.

10. Zout volgens één van de conclusies 1-3, met het kenmerk, dat het het DHA en EPA gemengde cholinezout is.

11. zout volgens een van de conclusies 1-3, met het kenmerk, dat het het DHA en EPA gemengde ethanolaminezout is

12. Zout volgens conclusie 10 of ll, waarin de verhouding DHA tot EPA varieert tussen 2:8 en 8:2, op moleculaire basis.

13. Werkwijze voor de bereiding van een farmaceutisch aanvaardbaar zout volgens conclusie 1, waarin ten minste één van de genoemde poly-onverzadigde zuren wordt gereageerd met ten minste één van de genoemde aminoalcoholen en het zout wordt gewonnen op voor analoge verbindingen bekende wijze.

14. Farmaceutische formulering die als actieve verbinding een therapeutisch effectieve hoeveelheid van ten minste één van de zouten volgens conclusie 1 omvat.