NL8900574A

NL8900574A - Antivirale en immunostimulerende farmaceutische preparaten en werkwijze voor de bereiding ervan.

Info

Publication number: NL8900574A
Application number: NL8900574A
Authority: NL
Original assignee: Biorex Kft
Priority date: 1988-03-09
Filing date: 1989-03-09
Publication date: 1989-10-02
Also published as: CH678918A5; FI94591C; FR2628324A1; GB2216418A; CA1334576C; FI891145A0; BE1002890A3; KR890014103A; HUT60432A; DE3907649A1; SE8900828L; JPH01316316A; IT1229562B; HU209973B; GB2216418B; FI94591B; IT8919704A0; DE3907649C2; FI891145A; LU87471A1

Description

NL 35.805-Kp/ab

Antivirale en immunostimulerende farmaceutische preparaten en I

werkwijze voor de bereiding ervan I

De onderhavige uitvinding heeft betrekking op I

antivirale en immunostimulerende farmaceutische preparaten. I

Volgens een ander aspect van de uitvinding gaat het I

om een werkwijze voor de bereiding van dergelijke preparaten. I

5 De voordelige antivirale werking van ω-3-meervou- I

dig onverzadigde vetzuren [5,8,11,14,17-eicosapentaancarbon- I

zuur (hierna: EPA) en 4,7,10,13,16,19-docasahexaancarbonzuur I

(hierna: DHA)] hebben speciale aandacht gekregen. Szads I

[Antimicrobial Agents and Chemoterapy 12, 523 (1977)] hebben I

10 in in vitro proeven aangetoond, dat meervoudig onverzadigde I

vetzuren, bijvoorbeeld zowel EPA en DHA, in staat zijn de I

vermenigvuldiging van virussen te remmen. Hetzelfde feit werd I

gesteund door Reinhardt en medewerkers [J. of Virology 25, I

479 (1978) ] die de remming van de vermenigvuldiging van PR 4 I

15 bacteriofage heeft onderzocht. I

De antivirale werking van meervoudig onverzadigde I

vetzuren, hieronder die van EPA en DHA, is uitvoering I

beschreven in het Amerikaanse octrooischrift nr. 4.513.008. I

De invloed van EPA en DHA werd vergeleken bij dierproeven met I

20 muizen en Guinese biggetjes, waarbij Acyclovir [9-(2-hydroxy- I

ethoxy-methyl)guanine] thans het meest gebruikte antivirale I

middel. Gesteld is, dat preparaten met daarin in hoofdzaak DHA, een gunstigere werking hebben tegen herpes virus dan I

acyclovir. I

25 Een aantal artikelen zijn gewijd in de literatuur I

aan de antivirale werking van DHA en EPA, zoals Whitaker en I

medewerkers [Proc. Natl. Acad. Sci. USA 76, 5919 (1979)] I

evenals Goodnight en medewerkers [Arterioschlerosis, 2, 87 I

(1982)] en Yoshiaki [Biochimica et Biophysica Acta 793, 80 I

30 (1984)].

Prickett en medewerkers [Immunology 46, 819 (1982)] I

hebben aangetoond, dat het humorale immune respons gestimuleerd werd door eicosapentaancarbonzuur als een arachidonzuur- 8900574.'' « * - 2 - analoog. Bij een EPA-rijk dieet bleek de specifieke IgG en IgE produktie als een respons op eialbumine te zijn verhoogd in inteelt Sprague-Dawleyratten van 4 tot 8-voudige waarden vergeleken met de controle. Volgens dit artikel werd een 5 verhoogde antilichaamrespons geïnduceerd door het EPA-rijke dieet. Verder werd door onderzoekingen aangetoond, dat EPA een werking heeft via remming van het suppresieve prostaglan-dine systeem, waarbij het in staat is het immune deficiency, die optreedt bij het ouder worden en andere pathologische 10 processen (autoimmuno processen, tumourogenesis), te remmen respectievelijk te corrigeren. Deze constateringen werden ondersteund door de artikelen van Kelley en medewerkers [J. of Immunol. 134, 1914 (1985)] evenals Homey en medewerkers [Clin. Exp. Immunol. 65, 473 (1986)] 15 Het is op basis van de in vivo onderzoekingen van

Pearson en medewerkers [Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 79, 409 (1952)] lang bekend, dat L-lysine een remmende werking heeft op de encefalomyelitis virus. Later heeft Tankersley [J.

Bact, 87, 609 (1964)] de aandacht doen vestigen op het feit, 20 dat de vermenigvuldiging van de herpes simplex virus (hierna: HSV) in humane cellen door lysine wordt geremd onder in vitro omstandigheden. Op basis van humane onderzoekingen heeft Kagan gepubliceerd [The Lancet 1, 137 (1974)) dat zowel de orale als genitale HSV-geinduceerde laesies zeer snel 25 verdwenen onder invloed van een behandeling met L-lysine.

Griffith en medewerkers [Dermatologies 156, 257 (1978)] bestudeerden de therapeutische werking van L-lysine op 45 patiënten die zijn geïnfecteerd met HSV I en HSV II in verschillende doseringen bij diverse behandelingsperioden. De 30 leeftijd van de patiënten (voornamelijk vrouwen) varieerde tussen 8 en 60 jaar. Waargenomen werd, dat L-lysine slechts een suppresieve doch niet een genezende werking op HSV had.

De onderhavige uitvinding heeft betrekking op nieuwe farmaceutische preparaten, waarin de gunstige 35 therapeutische werking van ω-3 onverzadigde vetzuren is gecombineerd met die van aminozuren, zoals in het bijzonder lycine, ornithine en histidinen welke preparaten een sterkere werking hebben dan tot nu tot bekende antivirale middelen.

8900574· -3 - *

De uitvinding is gebaseerd op de erkenning, dat de gunstige antivirale werking, die op zichzelf bekend is van ω-3 onverzadigde vetzuren, in het bijzonder EPA en DHA, alsmede van aminozuren, in het bijzonder lysine, synergis-5 tisch toenemen in een daaruit gevormd mengsel, welk mengsel bovendien een immunostimulerende werking heeft.

Dienovereenkomstig heeft de onderhavige uitvinding betrekking op een antiviraal en/of immunostimulerend farmaceutisch preparaat, met het kenmerk, dat daarin als werk-10 zame bestanddelen aminozuren aanwezig zijn, die voorkomen in levende organismen (zoals taurine, cycloserine, homoserine, homcysteine, canavanine, sarcosine, hydroxyproline, hydroxy-lysine, 4-hydroxyfenylalanine, essentiële aminozuren) en/of hun derivaten, waarvan de carboxylgroep is gesubstitueerd 15 door een Cj.^alkylgroep of aminogroep of een alkalimetaal, aardalkalimetaal of ammoniumkation, bij voorkeur de natrium-of kaliumkation; of de hydraten en/of zouten van deze verbindingen te zamen met één of meer Ci8-24”vetzuur (-zuren) die een alkylgroep dragen met ten minste twee dubbele 20 bindingen, eventueel vermengd met dragers en/of toevoegsels en antioxidantia, die in de farmaceutische industrie gewoonlijk worden gebruikt, waarbij de molaire verhouding van het aminozuur tot de vetzuur (-zuren) 1:4 tot 4:1.

c18-24 ω-3-vetzuren met daarin ten minste twee 25 dubbele bindingen en aminozuren, basisch in karakter, worden bij voorkeur gebruikt als bestanddelen van de preparaten volgens de uitvinding. Het is gunstig gebruik te maken van lysine, hystidine of ornithine of hun derivaten als essentiële aminozuren met een basisch karakter.

30 Stoffen, die gewoonlijk worden gebruikt in de farmaceutische industrie, zoals lactose, zetmeel of magne-siumstearaat kunnen als dragers dan wel toevoegsels in de preparaten volgens de uitvinding worden gebruikt.

Voor het remmen van de oxidatie van het preparaat 35 is de toepassing van -tocoferol (vitamine E), glutathion of de traditionele antioxidantia, zoals butylhydroxyltolueen geschikt.

Onder de preparaten volgens de onderhavige uitvinding werden de activiteit en eventuele toxiciteit van 8900574.

I · - 4 - de mengsels met daarin een ω-3 onverzadigd vetzuurmengsel (dat 27,6 % EPA en 44,6 % DHA bevat) en L-lysine in een molaire verhouding van 1:1, 1:4 en 4:1 (testpreparaten) bestudeerd op basis van een uitgeoefende werking op de 5 vermenigvuldiging en morfologie van Hep 2 cellen (humane epitheeltumorcellijn). Deze experimenten werden uitgevoerd op een kunststof weefsel-kweekplaat met 6x4 holle gaten erin (holtes met een grondoppervlak van 1,9 cm2).

Een voorraadoplossing met daarin het te onderzoeken 10 preparaat in een concentratie van 10 mg/ml werd bereid in een Eagle MEM medium (geproduceerd door Serva GmbH Co., Heidelberg, Bondsrepubliek Duitsland). Een bepaald deel van de voorraadoplossing werd 10 maal verdund, waarna de verkregen oplossing 2 maal werd verdund en dan door herhaling 2 maal de 15 2-voudige verdunning van de laatste oplossing heeft men oplossingen met achtereenvolgende afnemende concentraties aan het te onderzoeken preparaat (oplossingen nrs. 1 tot 5) bereid. De cellen werden behandeld met 1 ml van een oplossing, waarvan elk het werkzame bestanddeel bevatte in de 20 volgende concentraties:

Oplossing Concentratie van het werkzame bestanddeel nr._y g/rol_ 1 10.000 25 2 1.000 3 500 4 250 5 125 30 De behandeling werd uitgevoerd gedurende 1 uur, waarna de kweken twee keer werden gewassen met een gebufferde natriumchlorideoplossing (fosfaat-gebufferde zoutoplossing, hierna: PBS), waarna aan de kweken een voedingsmedium werd toegevoegd. Na 24 uur en fixatie door methanol werden de 35 kweken gekleurd met een ethanolische Giemsa oplossing (geproduceerd door Reanal, Boedapests, Hongarije), waarna de morfo-ligie van de cellen onder licht microscoop werd geëvalueerd. Vastgesteld kon worden, dat de te onderzoeken verbinding slechts toxisch was boven een concentratie van 1000 yg/ml. De 8900574.

- 5 - I

virus vermenigvuldiging-remmingswerking werd onderzocht op I

Hep 2 cellen, zoals hoven beschreven. Het type I van HSV werd I

voor infectie gebruikt. De concentratie van de virus bedroeg I

ca 1000 PFU (plaquevormende eenheid). Oplossingen, die de te I

5 onderzoeken verbinding bevatten in een concentratie van I

respectievelijk 1000, 500 en 250 yg/ml werden gebruikt, 1

terwijl voor de behandeling aan de onverdunde virussuspensie I

0,1 ml van de oplossing werd toegevoegd. Het mengsel werd I

gedurende 1 uur bij 37°C geïncubeerd. Dan werden cellen I

10 behandeld met de virus, die was pre-geïncubeerd met het te I

onderzoeken preparaat, terwijl de ontwikkeling van de I

cytopathalogische (hierna: CP) veranderingen gedurende 7 I

dagen werd geobserveerd. Vastgesteld kon worden, dat de I

virusvermenigvuldiging onmiddellijk wordt geremd door een I

15 500 yg/ml of 250 yg/ml dosis aan het te onderzoeken I

preparaat, terwijl de infectieve titerwaarde van de I

cytopathalogische dosis (neg. log. CPD50) 1,75 tot 2,04 was, I

berekend voor 0,1 ml vergeleken met de neg. log. CPD50-waarde I

van 4,5 van de onbehandelde controle virus kweek. De waarde I

20 van de virusremming neemt toe met een factor van 2 ten I

opzichte van de controle. Onder dezelfde omstandigheden I

hadden EPA en DHA geen waardevolle virusremming, en lysine op I

zich remde de virusvermenigvuldiging met een factor van I

slechts ca. één keer. I

25 Het vaccin virus werd ook behandeld in een in vitro I

proef, die op de bovenbeschreven wijze werd uitgevoerd. De I

infectieve titerwaarde (neg. log. CPD50) van het te onderzoe- I

ken preparaat, gemeten aan de hand van het vaccinvirus bleek I

1,75 tot 2,15 te zijn vergeleken met de 5,5-waarde van de I

30 onbehandelde controlevirus, dat wil zeggen, dat het te j

onderzoeken preparaat een virusremmende werking had, die drie I

keer sterker was dan die van de controle. I

De in vitro werking op het immuunsysteem van de pre- I

paraten volgens de uitvinding werd bestudeerd aan de hand I

35 van de activering van de lymfocyten door polyclonale mitoge- I

nen. De blastische transformatie van de lymfocyten werd op I

een manier onderzocht, dat een lyfocytecelpopulatie, I

verkregen op een Fico üromiro gradiënt [Scand. J. Clin. Lab. 1

Invest. 21, 97 (1968)] werd in de holtes van vlakke platen I

8900574.

- 6 - <· gepipetteerd, 25 yg/ml Concanavaline A (hierna: Con A) (vervaardigd door Pharmacia, Uppsala, Zweden) en daarna een oplossing, met daarin de preparaten volgens de uitvinding in een concentratie van respectievelijk 0,1, 1,0 of 5 10 yg/ml, werd toegevoegd aan elk van de parallelle kweken.

Als controle werd een kweek met daarin 25 yg/ml Con A zonder het te onderzoeken preparaat daarin gebruikt. De platen worden onder een luchtatmosfeer met daarin 5 % kooldioxide gehouden bij 37'C gedurende 72 uur, waarbij aan elk monster 5 na 64 uur 0,4 yCi 3H-thymidine werd toegevoegd voorafgaande aan het beëindigen van de kweek. Na 72 uur werden de kweken via glasfilter gefiltreerd, waarna de filters werd overgebracht in een scintillatiecuvet, waarbij de radioactiviteit werd gemeten in 5 ml tolueenoplossing onder gebruikmaking van 10 een beta-telinrichting. De resultaten zijn in de volgende tabel vermeld.

Nr. Verbinding Concentratie van Telling/min Evaluatie naam de actieve bestand- cpm van de 15 _delen yq/g__werking 1. Controle 25 8969+2984 (Con A) 20 2 L-tyrosine 0,1 12915+2045 zwak signifi cante groei 1.0 12313+2003 3. L-lysine 0,1 11063+1528 niet signifi- 25 cant 1.0 11833+1823 zwak signifi cante groei 4. Na-zout van 0,1 12332+2235 niet signifi- 30 ω-3 vetzuur- cant mengsel (zie 1/0 12039+1640 niet signifi- preparaat in cant voorbeeld I) 35 5. controle (Con A) 25 8396+2233 6. Produkt van 0,1 14965+2143 sterk signifi- voorbeeld XVI cant 1.0 12517+2195 niet signifi- 40 cant 7» Produkt van 0,1 15985+2102 sterk signifi- voorbeeld I cante groei 1.0 14068+1665 significante 45 groei 88 00574 ·

(vervolg tabel) I

8. Produkt van 0,1 12661+1548 significante I

voorbeeld III groei I

5 1,0 12420+1452 significante I

groei I

9. Produkt van 0,1 11920+2005 significante I

voorbeeld IV groei I

10 1,0 12240+1950 significante I

groei I

Uit deze onderzoekingen bleek duidelijk, dat de pre- I

15 paraten volgens de uitvinding in het bijzonder het meervoudig I

onverzadigd vetzuurmengsel gebruikt te zamen met lysen en I

tyrosine, significante onderzoeksresultaten gaven, dat wil I

zeggen een sterke immunostimulerende werking, terwijl de I

afzonderlijke zoutvormende componenten als zodanig bleken I

20 geen of slechts een zwakke biologische werking te hebben. I

Als uitgangsmateriaal van Cis-24 ω-3 onverzadigde I

vetzuren zijnde één component van de zouten, is het geschikt I

in de eerste plaatst gebruik te maken van alle oliën, die I

verkregen kunnen worden uit vissen van de Noordzee, zoals I

25 zalm, kabeljauw, sardine of oliën afkomstig van hun levers, I

waarbij echter ook oliën afkomstig van zoetwatervissen I

eveneens geschikt zijn. De ω-3 meervoudig onverzadigde I

vetzuren werden uit de bovengenoemde oliën verkregen onder I

toepassing van een bekende methode [J. Am. Chem. Soc. 59, 117 I

30 (1982)]. Deze vetzuren zijn onderhevig aan de oxidatie. Voor I

de remming van de oxidatie is het nuttig gebruik te maken van I

antioxidatie zoals b.v. vitamine E. I

De werkzame verbindingen met de algemene formule 1 I

kunnen overgebracht worden in capsules, tabletten, dragees en I

35 andere farmaceutische preparaten, die op op zichzelf bekende

wijze worden samengesteld. I

De belangrijkste voordelen van de farmaceutische preparaten volgens de uitvinding kunnen als volgt worden samengevat: 40 a) De antivirale therapeutische werking van de

werkzame bestanddelen van het preparaat is synergistisch toegenomen. I

b) Het preparaat kan worden gebruikt tegen acute 8900574.

t - 8 - virusinfecties, in het bijzonder tegen herpus virusinfecties, voor het onderdrukken van de infectie in een beginstadium.

c) Tengevolge van de immunostimulerende werking kan het preparaat bij voorkeur worden gebruikt tegen retrovirus- 5 sen, in het bijzonder tegen immunodeficiencysyndromen (bijv. Aids) geïnduceerd door HTLV III en IV type virussen.

d) Het bevat uitsluitend werkzame bestanddelen van natuurlijke oorsprong, die essentieel zijn vanuit biologisch oogpunt? het preparaat is derhalve geschikt voor profylac- 10 tische, lang-durige, curatiefachtige behandeling in geval van gevaar voor virusinfectie alsmede bij ziekten van het immuno-systeem.

e) Het preparaat werkt ook inwendig, hetgeen betekent, dat de ongemakkelijke uitwendige behandeling, die 15 gewoonlijk bij de antiviaaltherapie wordt toegepast, achterwege kan blijven.

De preparaten volgens de uitvinding worden nader geïllustreerd door middel van de volgende niet-limitatieve voorbeelden.

20 VOORBEELD I

164 g (1 mol) L-lysinemonohydraat en 320 g (ca. 1 mol) van een ω-3 meervoudig onverzadigd vetzuurmengsel (met daarin 27,6 % EPA en 44,6 % DHA) werden bij kamertemperatuur met elkaar vermengd. Het aldus verkregen homogene mengsel 25 werd onder gebruikmaking van een bekende incapsulerings-methode overgebracht in harde gelatinecapsules, die 500 mg van het werkzame bestanddeel konden bevatten.

VOORBEELD II

155 g (1 mol) L-histidine werd gemengd met 320 g 30 (ca. 1 mol) van een ω-3 meervoudig onverzadigd vetzuurmengsel (met daarin 27,6 % EPA en 44,6 % DHA). Voorts werd de in voorbeeld 1 beschreven procedure gevolgd.

VOORBEELD III

41,0 g (0,25 mol) L-lysinemonohydraat werd vermengd 35 met 320 g (ca. 1 mol) van een ω-3 meervoudig onverzadigd vetzuurmengsel (met daarin ca. 90 % EPA en 0,1 % vitamine E), waarna de in voorbeeld I beschreven procedure werd gevolgd.

VOORBEELD IV

De in voorbeeld III beschreven werkwijze werd 8900574.

- 9 - ί herhaald, behalve dat 164 g (1 mol) L-lysinemonohydraat werd gebruikt en als meervoudig onverzadigd vetzuur 328 g (1 mol) docosahexacarbonzuur (DHA) [geproduceerd door Sigma, st.

Louis, USA onder het katalogusnr. D-6508 (1987)] werd I

5 gebruikt. I

VOORBEELD V

De in voorbeeld I beschreven werkwijze werd her- I

haald, behalve dat 181 g (1,0 mol) L-tyrosine werd gebruikt I

in plaats van L-lysine. I

10 VOORBEELD VI

De in voorbeeld I beschreven werkwijze werd her- I

haald, behalve dat 120 g (1,0 mol) L-threonine werd gebruikt I

in plaats van L-lysine. I

VOORBEELD VII

15 De in voorbeeld III beschreven werkwijze werd her- I

haald, behalve dat 164 g (1 mol) L-lysinemonohydraat en 80 g I

(ca. 0,25 mol) van een ω-3 meervoudig onverzadigd vetzuur- I

mengsel (met daarin 90,0 % DHA en 0,1 vitamine E) werden I

gebruikt. I

20 VOORBEELD VIII

De in voorbeeld III werkwijze werkwijze werd her- I

haald, behalve dat 164 g (1 mol) L-lysinemonohydraat werd I

gebruikt, en in plaats van een meervoudig onverzadigd vet- I

zuurmengsel 302 g (1 mol) eicosapentacarbonzuur (EPA) [ge- I

25 produceerd door Sigma, St. Louis, USA onder het katalogus- I

nr. E-7006 (1987)] werden gebruikt. I

VOORBEELD IX

De in voorbeeld I beschreven werkwijze werd her- I

haald, behalve dat 132 g (1,0 mol) L-ornithine werd gebruikt I

30 in plaats van L-lysine. I

VOORBEELD X

De in voorbeeld III beschreven werkwijze werd her- I

haald, behalve dat in plaats van L-lysine 33 g (0,25 mol) I

L-ornithine werd gebruikt. I

35 VOORBEELD XI

De in voorbeeld IV beschreven werkwijze werd herhaald, behalve dat in plaats van L-lysine 132 g (1,0 mol) L-ornithine werd gebruikt.

8900574 ·.

' - 10 - [ *>

VOORBEELD XII

De in voorbeeld I beschreven werkwijze werd herhaald, behalve dat in plaats van L-lysine 133 g (1,0 mol) L-asparinezuur werd gebruikt.

5 VOORBEELD XIII

De in voorbeeld I beschreven werkwijze werd herhaald, behalve dat in plaats van L-lysine 211 g (1,0 mol) L-argininehydrochloride werd gebruikt.

VOORBEELD XIV

10 De in voorbeeld I beschreven werkwijze werd her haald, behalve dat in plaats van L-lysine 105 g (1,0 mol) L-serine werd gebruikt.

VOORBEELD XV

De in voorbeeld I beschreven werkwijze werd her-15 haald, behalve dat in plaats van L-lysine 145 g (1,0 mol) L-glutamine werd gebruikt.

VOORBEELD XVI

Bereiding van tabletten

Uit het in voorbeeld I beschreven mengsel werden 20 tabletten bereid waarvan elk de volgende bestanddelen bevatten: mg mengsel volgens voorbeeld I 500 25 lactose 120 zetmeel 63 polyvinylpyrrolidon 3,5 magnes iumstearaat 3,5

Desgewenst werden tabletten bekleed met een 30 suikerlaag onder gebruikmaking van een geëigende machine daarvoor.

8900574.

Claims

11. I CONCLUSIES I

1. Een antiviraal en immunostimulerend farmaceu- I tisch preparaat, met het kenmerk, dat dit als I werkzame bestanddelen de volgende stoffen bevat: aminozuren, I die voorkomen in levende organismen en/of hun derivaten, I 5 waarin de carboxylgroep gesubstitueerd is door een 4- I alkylgroep of aminogroep of door een alkalimetaal, aardalka- I limetaal of ammoniumkation; of de hydraten en/of zouten van j deze verbindingen te zamen met één of meer Cig-24“vetzuur I (-zuren) met een alkylgroep, die ten minste twee dubbele I 10 bindingen heeft, eventueel vermengd met dragers en/of toe- I voegsels en antioxidantia, die gewoonlijk in de farmaceu- I tische industrie worden gebruikt, waarbij de molaire ver- I houding van het aminozuur en het vetzuur (-zuren) 1:4 tot 4:1 I bedraagt. I

2. Preparaat volgens conclusie 1, met het I kenmerk, dat de vetzuren de onverzadigde vetzuren I zijn, verkregen zijn uit de oliën van vissen. I

3. Preparaat volgens conclusie 1, m e t h e t I kenmerk, dat als werkzame bestanddelen dit preparaat I 20 eicosapentacarbonzuur (EPA) en L-lysine bevat. I

4. Preparaat volgens conclusie 1, m e t h e t I kenmerk, dat de werkzame bestanddelen in dit prepa- I raat docosahexacarbonzuur (DHA) en L-lysine zijn. I

5. Preparaat volgens conclusie 1, met het I 25 kenmerk, dat de werkzame bestanddelen in dit prepa- I raat docosahexacarbonzuur, eicosapentacarbonzuur en L-lysine I zijn. I

6. Werkwijze voor de bereiding van een antiviraal I immunostimulerend farmaceutisch preparaat, m e t h e t I 30kenmerk, dat als werkzame bestanddelen met elkaar I worden gemengd: aminozuren, die in levende organismen I voorkomen en/of hun derivaten, waarin de carboxylgroep I gesubstitueerd is door een Ci_4-alkylgroep of aminogroep door I een alkalimetaal, aardalkalimetaal of ammoniunkation; of de I 35 hydraten en/of zouten van de verbindingen te zamen met één of I meer C^g-24-vetzuur (-zuren) met een alkylgroep, die ten I minste twee dubbele bindingen heeft, eventueel met dragers I 8900574.' r ' - 12 - 4» en/of toevoegsels en antioxidantia, die in de farmaceutische industrie gewoonlijk worden gebruikt, waarna dit wordt omgezet tot een farmaceutisch preparaat, waarin de molaire verhouding van het aminozuur en de vetzuren (-zuur) 1:4 tot 4:1 5 bedraagt.

7. Werkwijze volgens conclusie 6, met het kenmerk, dat als onverzadigde vetzuren vetzuren worden gebruikt, die afkomstig zijn van oliën van vissen.

8. Werkwijze volgens conclusie 6, met het 10 k e n m e r k, dat als werkzame bestanddelen eicosapenta- carbonzuur (EPA) en L-lysine worden gebruikt.

9. Werkwijze volgens conclusie 6, met het kenmerk, dat als werkzame bestanddelen decosahexacar-bonzuur (DHA) en L-lysine worden gebruikt.

10. Werkwijze volgens conclusie 6, met het kenmerk, dat als werkzame bestanddelen docosahexa-carbonzuur, eicospentacarbonzuur en L-lysine worden gebruikt. 8300574·