MXPA05006193A - Materiales basados en gelatina como hisopos. - Google Patents

Abstract

Se ha encontrado que un hisopo que comprende gelatina o colageno, tiene una recuperacion notoriamente alta de microorganismos. Ademas, las muestras, tales como microorganismos, esporas, nucleotidos y otros compuestos biologicamente o bioquimicamente pertinentes, se pueden recuperar completamente a partir del hisopo que comprende colageno o gelatina. Por consiguiente, la invencion proporciona un metodo y un hisopo que tiene una alta recuperacion de un objetivo a partir de una muestra, y ademas una segunda alta recuperacion cuando se transfiere desde el hisopo hasta un medio para su analisis.

Description

MATERIALES BASADOS EN GELATINA COMO HISOPOS CAMPO DE LA INVENCIÓN Se utiliza un material basado en gelatina o en colágeno en la recolección de objetivos tales como células microbiológicas , células de mamífero, nucleótidos, y otras moléculas químicas y biológicas, a partir de un arreglo de medios de recolección. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Se han utilizado esponjas basadas en gelatina como agentes hemostáticos en los procedimientos quirúrgicos . Dean Jr. (Patentes de los Estados Unidos de Norteamérica Números US 4,997,753; US 4,863,856 y US 4,861,714) da a conocer el uso de microesponj as de colágeno ponderadas para inmovilizar los materiales bioactivos . La Patente Europea Número EP 0,702,081 da a conocer una matriz para cultivo de tejido, la cual comprende dos clases de esponjas. La Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número US 5,462,860 da a conocer un medio de cultivo para crecimiento rápido y detección de microbios. Los métodos convencionales para muestrear un área para un área objetiva comprenden el uso de hisopos de algodón. La recuperación de muestras desde la superficie está limitada debido a la baja recuperación a partir del área superficial hasta el hisopo, y luego la baja transferencia desde el hisopo hasta un medio de cultivo. El nivel de recuperación de microorganismos desde las superficies es crítico cuando se cumple con los lineamientos de USP/NF y con los lineamientos de EU-GMP. La presente invención resuelve este problema, y proporciona un dispositivo dramáticamente mejorado para muestreax un área. SUMARIO DE LA INVENCIÓN Se ha encontrado que una esponja basada en gelatina es útil en la recolección de una variedad de materiales, tales como microbios y células de mamífero, pero también tejido de mamífero y diferentes moléculas, incluyendo nucleótidos, a partir de un arreglo de medios de recolección. La esponja se puede utilizar, por ejemplo, para propósitos de muestreo y cultivo. Los presentes inventores, de una manera sorprendente, han encontrado que la esponja tiene un nivel de recuperación del material muestreado dramáticamente más alto que los métodos convencionales. Más aún, el material objetivo enlazado a la esponja se puede transferir desde la esponja hasta otro medio mediante un arreglo de métodos. Un primer objeto de la invención se refiere a un dispositivo que comprende un dispositivo para muestreo o recolección, el cual comprende: i) un hisopo que comprende gelatina o colágeno; y ii) un soporte fijado al hisopo . El dispositivo o la esponja basada en gelatina se puede utilizar para un arreglo de aplicaciones relacionadas con la alta recuperación de objetivos a partir de la esponja. De conformidad con lo anterior, un objeto adicional de la invención se refiere al uso de una esponja basada en gelatina para la recolección de un objetivo a partir de un medio de recolección, el cual comprende hacer contacto entre la esponja basada en gelatina y el medio. Adicionalmente , un objeto de la invención se refiere a un método para reducir la cantidad de un objetivo en un área de muestra, el cual comprende hacer contacto entre una esponja basada en gelatina y cuando menos una porción del área de muestra, de tal manera que el objetivo se adhiera a la esponja. Una utilización importante y adicional de las propiedades sorprendentes de la esponja se refiere a un método para muestrear de una manera cualitativa o cuantitativa un área para determinar el contenido de un objetivo, el cual comprende el uso de una esponja basada en gelatina, y los pasos de: i) muestrear en húmedo utilizando la esponja basada en gelatina; y/o ii) muestrear en seco utilizando la esponja basada en gelatina. Un aspecto similarmente importante de la invención se refiere a un método para cultivar microorganismos o células de mamífero, el cual comprende adherir las células a una esponja basada en gelatina, y cultivar las células en un medio de cultivo. La invención proporciona un hisopo, el cual tiene una alta recuperación de un objetivo a partir de una muestra, y además una segunda alta recuperación cuando se transfiere desde el hisopo hasta un medio para su análisis . DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN En el presente contexto, un objetivo se refiere a cualquier especie que se enlace a la esponja basada en gelatina de la invención. Un medio de recolección se refiere a cualquier medio a partir del cual se puedan recolectar estos objetivos. El término "medio de transferencia" pretende significar un medio al que se transfiere el objetivo recolectado. En el presente contexto, el término "recuperación" pretende significar el rendimiento de recuperación global de un objetivo a partir de un medio de recolección hasta un medio de transferencia. Por consiguiente, la recuperación comprende: i) el rendimiento de recolección de un objetivo en la esponja basada en colágeno de la presente invención, asi como ii) el rendimiento de transferencia a partir de la esponja basada en colágeno hasta un medio de transferencia. En el presente contexto, se considera que un primer medio de transferencia es un medio utilizado en la recolección de un objetivo a partir de la esponja. Los ejemplos adecuados de un primer medio de transferencia incluyen una solución enzimática, o un agente de lavado adecuado, para remover de una manera mecánica o química el objetivo de la esponja y hacia el medio, tal como un medio líquido. Se considera que un segundo medio de transferencia está representado por un segundo medio hacia el cual se transfiere el primer medio o la muestra del primer medio, que incluye al objetivo recolectado. En el presente contexto, se considera que un microorganismo es cualquier organismo seleccionado a partir del grupo que consiste en bacterias, esporas bacterianas, arqueas, levadura, y hongos. Un agente de dispersión, en el presente contexto, se considera como cualquier agente líquido en el cual se pueden dispersar los objetivos en seguida de la recolección. Se considera que un diluyente neutro es un líquido que es neutro en el contexto del proceso de ensayo, es decir, no interfiere con el ensayo de diagnóstico que se esté llevando a cabo. En este contexto, por consiguiente, un diluyente neutro no es necesariamente, pero puede ser, un diluyente con un pH neutro. Los ejemplos adecuados de diluyentes neutros son agua, y soluciones acuosas reguladoras. La solución de inger se refiere a una solución acuosa que comprende agua destilada y cloruro de sodio, cloruro de potasio, y cloruro de calcio, en aproximadamente las mismas concentraciones en las que se presentan en los fluidos corporales. Una "superficie semi-sólida" es una superficie que no es de una naturaleza estrictamente sólida, tal como un tejido de mamífero o cualquier otro tejido natural y/o sintético. Los ejemplos adecuados de superficies semi-sólidas son piel de mamífero u otras superficies cubiertas por tejido conectivo, tales como las superficies de los órganos de mamífero. En el presente contexto, un "detergente" puede ser cualquier compuesto natural o sintético, orgánico o inorgánico, o una mezcla de compuestos utilizados para propósitos de limpieza, tal como para la remoción de impurezas o contaminantes de una superficie. El término "manipular", en el presente contexto, se debe considerar que se relaciona con cualquier dispositivo que se puede utilizar para sujetar, y no se debe interpretar para limitarse a dispositivos especialmente diseñados para actuar como un mango. A manera de un ejemplo, una varilla unida a la esponja basada en gelatina de la invención, por lo tanto, se puede utilizar para manipular la esponja, y por consiguiente, se considera que representa un mango. Más aún, una pinza o lengüeta, que se conecte sólo temporalmente con la esponja, se considera como un mango. En el presente contexto, se considera que un hisopo es cualquier material utilizado para aplicar o remover material de un área o de una superficie. Pasar el hisopo se refiere al método de aplicar o remover el material de un área o superficie utilizando estos hisopos . La presente invención se refiere a espon as basadas en gelatina y a sus propiedades con respecto al enlace de objetivos, tales como microorganismos y células de mamífero, así como especies moleculares tales como nucleótidos, que sean adecuados para enlazarse a las esponjas basadas en gelatina. Las propiedades de enlace de los objetivos anteriormente mencionados son útiles para la recolección de estos objetivos a partir de diferentes medios. Una vez que se recolecta el objetivo, opcionalmente se puede liberar de la esponja mediante procesos mecánicos, enzimáticos, o químicos. El objetivo normalmente se selecciona a partir del grupo que consiste en un virus, un microorganismo, una célula de mamífero, y una molécula orgánica. La molécula orgánica se selecciona a partir del grupo que consiste en un nucleótido, un ácido nucleico, una proteína, o un detergente. El nucleótido es un nucleótido que contiene purina o pirimidina, de preferencia ATP. El microorganismo se selecciona a partir del grupo que consiste en bacterias, arqueas, esporas bacterianas, levadura, y hongos. La célula de mamífero se puede seleccionar a partir del grupo que consiste en células de plasma sanguíneo, leucocitos, eritrocitos, trombocitos, pero también otras células de mamífero, tales como células de piel o cualquier otro tipo de células de mamífero que puedan ser útiles para recolectarse para diferentes propósitos de diagnóstico y/o de limpieza. El alto Indice de recuperación, que resulta del alto rendimiento de recolección de un objetivo al hisopo de la presente invención, y/o el alto rendimiento de transferencia subsecuente a partir del hisopo y hasta un medio de transferencia, requiere, de acuerdo con la presente invención, de i) un hisopo que comprenda gelatina o colágeno. El hisopo normalmente se fija sobre un mango o soporte. En una modalidad particularmente interesante de la invención, el hisopo se puede seleccionar a partir del grupo que consiste en una esponja basada en gelatina, una esponja basada en colágeno, gelatina microfibrilar, o colágeno microfibrilar . De preferencia, el hisopo es una esponja basada en gelatina o una esponja basada en colágeno, más preferiblemente una esponja basada en gelatina. El material de la esponja basada en gelatina o de la esponja basada en colágeno de preferencia está comprendido de cuando menos el 50% de gelatina o colágeno, respectivamente, tal como cuando menos el 60%, tal como cuando menos el 70%, típicamente cuando menos el 75%, de preferencia cuando menos el 80%, más preferiblemente cuando menos el 85%, tal como cuando menos el 90%, adecuadamente cuando menos el 95%, y de una manera muy preferible se selecciona a partir de cuando menos el 96%, 97%, 98%, 99% de gelatina o colágeno, respectivamente, basándose en el peso seco de la esponja. En una modalidad más preferida, el hisopo es una esponja de gelatina o una esponja de colágeno, más preferiblemente ' una esponja de gelatina. Es decir, que el hisopo mismo es una esponja, que comprende normalmente cuando menos el 95%, más preferiblemente se selecciona a partir de cuando menos el 96%, 97%, 98%, 99% de gelatina o colágeno, respectivamente, basándose en el peso seco de la esponja.

La esponja basada en gelatina o la esponja basada en colágeno se caracteriza por sus propiedades físicas, que en particular se pueden describir por la composición de gelatina o colágeno, tamaño de poros, velocidad de " reconfirmación, absorción de agua, y digestibilidad de la esponja. Sin obligarnos por una teoría en particular, se considera que el tamaño de poros de la esponja tiene influencia, cuando menos en parte, sobre la capacidad de la esponja para recolectar o transferir los objetivos de la invención. Más aún, el tamaño de poros tiene influencia sobre la densidad de la esponja, y también tiene un efecto sobre sus características físicas, tales como los índices de reconfirmación y la absorción de agua . Sin obligarnos por una teoría en particular, la alta recuperación se puede deber en parte a un grado apropiado de rugosidad impartida por la superficie del hisopo, que permite la recolección de las muestras sobre la superficie del hisopo de la invención. Adicionalmente , sin obligarnos por una teoría en particular, las propiedades físicas impartidas por la naturaleza química del colágeno o la gelatina comprendidos en el hisopo, también pueden contribuir, en parte mediante un mecanismo de adhesión, al alto índice de recuperación.

Sin obligarnos por una teoría en particular, se cree que un tamaño de poros apropiado imparte, parcialmente, una mejora a la alta recuperación inicial. La gelatina o el colágeno en la esponja basada en gelatina, la esponja basada en colágeno, la gelatina microfibrilar, y el colágeno microfibrilar, se formarán o tendrán poros con un tamaño de poros promedio de aproximadamente 10 nm a aproximadamente 2 mm. Sin obligarnos por ninguna teoría, en particular en un medio ambiente no anhidro, se puede impartir una alta recuperación a partir del medio de recolección mediante una forma de acción capilar hacia el hisopo. Para la recolección o muestreo de virus, cuando el 10% de los poros pueden tener un tamaño de poros menor a 1,000 nm, tal como menor a 800 nm, tal como menor a 500 nm, tal como menor a 400 nm. Para la recolección o el muestreo de bacterias, cuando menos el 10% de los poros pueden tener un tamaño de poros menor a 100 µp?, tal como menor a 80 µt?, tal como menor a 50 µta, tal como menor a 10 µt?. Para la recolección o el muestreo de hongos o de glóbulos rojos sanguíneos, cuando menos el 10% de los poros pueden tener un tamaño de poros menor a 1000 µp?, tal como menor a 800 µp?, tal como menor a 500 µta, tal como menor a 100 µp?, tal como menor a 50 µp?. Está dentro del conocimiento de la persona experta hacer a la medida la gelatina o el colágeno hasta un tamaño de poros deseado, y está dentro de la experiencia de la persona experta seleccionar el tamaño de poros de acuerdo con el objetivo. En una modalidad típica de la invención, la gelatina o el colágeno de la esponja basada en gelatina o basada en colágeno, es de origen porcino. Se prevé que la invención se puede adaptar para incluir gelatina de otros orígenes, tales como gelatina de bovino, o de cualquier otro mamífero, incluyendo de un mamífero marino, pez, o de cangrejo, o de origen vegetal, e incluyendo gelatina de cualquier otro origen, tal como gelatina de origen orgánico, o de origen sintético o semi-sinté ico . Los índices de reconfirmación representan una medida de la elasticidad de la esponja basada en gelatina o basada en colágeno. En una modalidad de la invención, la esponja basada en gelatina tiene una velocidad de reconfirmación no mayor a 10 segundos, y típicamente no mayor a 5 segundos. Sin embargo, se prevé que las esponjas basadas en gelatina a partir de diferentes fuentes tendrán un intervalo más amplio de reconfirmación. La velocidad de reconfirmación normalmente es determinada mediante un método basado en la velocidad a la cual la esponja vuelve a obtener su tamaño y forma originales, como se describe en el Ejemplo La esponja basada en gelatina de la invención típicamente tiene una capacidad de absorción de agua que está en el intervalo de cuando menos 30 g/g, y más típicamente de cuando menos 40 g/g, como se determina en el Ejemplo 3. Sin embargo, se prevé que la capacidad de absorción de agua de las esponjas basadas en gelatina a partir de diferentes fuentes puede estar en un intervalo más amplio de cuando menos 5 g/g, tal como de cuando menos 10 g/g, o de cuando menos 20 g/g. La determinación de la absorción de agua normalmente se lleva a cabo de acuerdo con los estándares USP. En una modalidad adicional de la invención, el hisopo es un material natural o sintético, tal como un material absorbente que comprende partículas de gelatina o partículas de colágeno, de preferencia partículas de gelatina. El material absorbente natural o sintético es esencialmente cualquier material que pueda contener dentro del mismo o sobre su superficie, partículas de gelatina o cartílago flojamente enlazadas o fijadas. Las partículas de gelatina o colágeno pueden ser atrapadas por el tejido o matriz flojo o apretado del material, o mediante una sustancia adhesiva. Dentro de esta modalidad, las partículas pueden tener un tamaño de partículas en el intervalo de aproximadamente 1 µt? a aproximadamente 2 mm, típicamente de aproximadamente 5 µt? a aproximadamente 1 mm, tal como de aproximadamente 5 /¿m a aproximadamente 0.5 mm, más típicamente de aproximadamente 5 µt a aproximadamente 0.25 mm, de preferencia de aproximadamente 10 µt? a aproximadamente 0.25 mm, tal como de aproximadamente 10 µp? a aproximadamente 0.1 mm. El hisopo tiene un contenido de partículas de gelatina o de partículas de colágeno, de preferencia de partículas de gelatina, que constituye del 1 al 95% en peso/peso, basándose en el peso seco combinado del hisopo y las partículas, tal como del 2 al 90%, típicamente del 5 al 90%. Como lo apreciará la persona experta, el contenido en peso dependerá de la naturaleza del material natural o sintético. Se pretende que el hisopo se utilice en un arreglo de superficies y otros medios de recolección. Dependiendo del uso y del medio de recolección, ya sea maquinaria industrial, paredes, superficies de mesas, ventilas de aire para utilizarse en equipos de laboratorios convencionales o a micro-escala, el tamaño del hisopo variará. Normalmente, el hisopo es del tamaño en el intervalo de aproximadamente 1 cm x 1 cm a aproximadamente 15 cm x 15 cm. Puede ser de cualquier forma, dependiendo de su uso. Es particularmente interesante el uso de las esponjas basadas en colágeno o de las esponjas basadas en gelatina, debido a que son altamente comprimibles, y se pueden forzar o exprimir hacia todas las grietas y orificios. Un aspecto adicional de la invención se refiere a un estuche que comprende: 1) un hisopo que comprende gelatina o colágeno; y ii) un agente seleccionado a partir del grupo que consiste en un diluyente neutro, un agente antimicrobiano, y un agente de dispersión. El hisopo puede ser como se describe en lo anterior. El agente seleccionado a partir del grupo que consiste en un diluyente neutro, un agente antimicrobiano, y un agente de dispersión, está presente con el objeto de asistir en la recolección o muestreo del objetivo. Un aspecto adicional de la invención se refiere al uso de un dispositivo o estuche como se describe en la presente, para la recolección de un objetivo a partir de un medio de recolección, el cual comprende hacer contacto entre el hisopo y el objetivo. Los inventores han encontrado que la esponja basada en gelatina se enlaza a los microorganismos fuertemente, pero de una manera reversible. Por consiguiente, el hisopo se puede utilizar para muestrear la presencia de microorganismos a partir de una muestra, tal como a partir de una superficie. En esta modalidad, el microorganismo se puede transferir desde el hisopo mediante los métodos de la invención. Los microorganismos así recolectados opcionalmente se pueden cultivar de manera adicional, lo cual puede encontrar usos para propósitos específicos, tales como la caracterización detallada de ese microorganismo. De una manera alternativa, el hisopo se puede utilizar para la remoción cuantitativa de microorganismos a partir de una muestra, tal como una superficie. En esta modalidad, se pueden incorporar adecuadamente de manera opcional agentes antimicrobianos o desinfectantes en el hisopo. Además, se prevé que el hisopo se puede adaptar para utilizarse en la recolección de otros tipos de células en adición a microorganismos, tales como células de mamífero. Esta modalidad se puede hacer realidad, por ejemplo, mediante la recolección a partir de superficies de mamífero, tal - como a partir de piel de mamífero o la superficie de cualquier órgano de mamífero. Adicionalmente, el hisopo se puede adaptar para uso interno, tal como durante las operaciones quirúrgicas en un mamífero, y en estas modalidades, se puede utilizar para recolectar objetivos de heridas o de órganos internos de un mamífero, así como de equipo quirúrgico y muebles especializados, paredes o pisos en una clínica de salud o en un hospital, tal como en salas quirúrgicas, o en cualquier otra instalación utilizada para conducir o llevar a cabo procedimientos quirúrgicos. Los inventores han encontrado además que la esponja basada en gelatina se enlaza con ciertas moléculas, tales como nucleótidos o ácidos nucleicos basados en purina o pirimidina, de preferencia ATP, de una forma reversible. Este descubrimiento puede encontrar una aplicación útil, porque se han estimado números bacterianos en los alimentos midiendo la cantidad de trifosfato de adenosina (ATP) bacteriano. Se prevé que el hisopo se puede adaptar de una manera más general para recolectar una variedad de especies moleculares, y por lo tanto, el hisopo puede encontrar un uso general para la recolección de ciertas moléculas. En una modalidad, estas moléculas son nucleótidos basados en purina o pirimidina, tales como ATP. En otra modalidad, estas moléculas son ácidos nucleicos. En todavía otra modalidad, las moléculas son detergentes, que se pueden recolectar de manera conveniente a partir de una muestra, tal como una superficie. En este contexto, los detergentes pueden ser compuestos naturales o sintéticos, orgánicos o inorgánicos, o una mezcla de compuestos utilizados para propósitos de limpieza, tales como para la remoción de impurezas o contaminantes de una superficie. Además, el hisopo se puede adaptar para recolectar una mezcla de microorganismos, células de mamífero, y/o moléculas simultáneamente de una muestra. En ciertas modalidades, puede ser útil configurar la esponja basada en gelatina de tal manera que se recolecte un tipo particular de objetivo. La propiedad deseable del hisopo es que sea capaz de adherirse a un objetivo, tal como a los microorganismos o a las células de mamífero, así como a las especies moleculares, en especial las moléculas orgánicas tales como nucleótidos, habiendo una variedad de aplicaciones útiles posibles. En una modalidad adecuada de la invención, el hisopo se adapta de tal manera que entre en contacto con, o se una a, un soporte. El propósito de un soporte puede ser el de proporcionar una manera de mane r el hisopo sin tocar el material de la esponja mismo, y por lo tanto, evitar la contaminación. Esto puede ser especialmente útil para las modalidades en las cuales la esponja idealmente se esteriliza previamente, es decir, en las modalidades para la recolección o el análisis de microorganismos o de células de mamífero. Un soporte también puede facilitar el uso del hisopo, y permite hacer una recolección conveniente de los objetivos a partir de diferentes muestras. Además, un soporte puede ser invaluable para la recolección de objetivos a partir de muestras que puedan ser difíciles de alcanzar, o para otras aplicaciones en donde el hisopo sea difícil de manipularse sin un soporte. El soporte se puede hacer de cualquier material adecuado para el uso particular, tal como madera, un material polimérico natural o sintético, incluyendo materiales de plástico y hule, o cualquier otro material orgánico o inorgánico adecuado para la modalidad particular . El soporte puede ser de una amplia variedad, tal como convenientemente en la forma de un mango. El mango puede ser corto, tal como en el intervalo de aproximadamente 1 cm a aproximadamente 30 cm, tal como de aproximadamente 3 cm a aproximadamente 20 cm, de preferencia de aproximadamente 5 cm a aproximadamente 15 cm. Para ciertas aplicaciones, un mango puede ser adecuadamente considerablemente más grande, tal como en el intervalo de aproximadamente 30 cm hasta varios metros de longitud. El mango puede ser de cualquier forma conveniente para la modalidad particular, pero típicamente es alargado, opcionalmente doblado, con la esponja basada en gelatina unida en un extremo del mango, mientras que el otro extremo del mango se utiliza para sujetar y aplicar de otra manera la esponja basada en gelatina .

En una modalidad adecuada, en donde el hisopo se une a un soporte en la forma de un mango, la esponja basada en gelatina tiene una forma ovalada o alargada de otra manera colocada en el extremo de una varilla, que 5 sirve a la función de un mango. En otra modalidad, la esponja se une a un soporte sólido, tal como un soporte circular o rectangular, el cual a su vez se coloca sobre el extremo de un mango o varilla. Sin embargo, se debe apreciar que el hisopo se puede adaptar para unirse a un l0 soporte en la forma de una varilla o mango en múltiples modalidades diferentes, adecuadamente adaptadas para cualquier uso dado de la esponja basada en gelatina. En otra modalidad, el soporte está opcionalmente en la forma de un recubrimiento. El recubrimiento puede 15 estar comprendido por cualquier material adecuado, por ejemplo un material polimérico o un material de plástico, o cualquier material adecuadamente utilizado para proporcionar un recubrimiento. En una modalidad adecuada, el recubrimiento se aplica a un lado del hisopo de la o invención que se haya adaptado para quedar en una forma plana . En todavía otra modalidad, el soporte es un material sólido que tiene una forma adecuadamente adaptada, tal como la forma de un disco, cubo, esfera, o un bloque. En estas modalidades, la esponja basada en gelatina de preferencia se une a un lado del soporte, pero se puede unir a varias o todas las superficies del soporte en modalidades preferidas. Una modalidad en la que el hisopo es de una forma cúbica, puede ser particularmente útil en una modalidad para la recolección de muestras líquidas o para la recolección a partir de superficies que comprendan un recubrimiento liquido. En estas modalidades, el hisopo se puede unir adecuadamente a un soporte, el cual opcionalraente puede estar en la forma de un mango, o se puede unir adecuadamente a una varilla o a un mango. Se debe apreciar que, debido a la naturaleza del material del hisopo, éste se puede adaptar a una forma para cualquier uso particular. Por consiguiente, las dimensiones y la forma de las modalidades en donde se haga realidad la invención mediante el montaje del hisopo sobre un soporte, se ajustarán como sean idealmente adecuadas para sus usos. El hisopo se puede unir al soporte mediante cualquier método convencional conocido por los expertos en la materia. La naturaleza de estas modalidades dependerá de la forma particular de la modalidad y de su uso pretendido. Además, se prevé que el soporte puede estar en la forma de un recipiente poroso, tal como un crisol u otro material adecuado de otra manera, configurado de tal modo que encierre al hisopo mientras que permita que pasen el líquido y los objetivos a través del material circundante. En estas modalidades, la esponja basada en gelatina encerrada se puede utilizar para recolectar muestras a partir de un líquido. Esta recolección se puede llevar a cabo adecuadamente sumergiendo la esponja encerrada en un medio líquido, permitiendo de esta manera que los objetivos del medio entren en contacto con, y se enlazan a, la esponja basada en gelatina. En las modalidades del hisopo en donde se adapta para recolectar objetivos gaseosos, de preferencia se adapta de tal manera que se maximice el área superficial y/o el tamaño de poros de la esponja. Estas modalidades se pueden hacer realidad de acuerdo con cualquiera de las modalidades dadas a conocer anteriormen e, debido a que la naturaleza de enlace de los objetivos gaseosos sigue los mismos principios que aquélla de los objetivos en un medio líquido. Los objetivos gaseosos pueden ser cualquier especie molecular, que sea gaseosa a la temperatura aplicada durante la recolección, o que sea un compuesto líquido o sólido que tenga una presión de vapor suficientemente alta para que se pueda recolectar el objetivo. En este contexto, se considera que un objetivo gaseoso incluye los objetivos que sean de una naturaleza sólida, incluyendo microorganismos y células de mamífero, pero que sean atrapados en gotas de liquido o en microgotas, o que formen partículas que puedan ser llevadas por gases, tales como la atmósfera ambiental. En un aspecto adicional de la invención, se puede aplicar polvo de gelatina o polvo de colágeno directamente a una muestra para la recolección de objetivos, tal como cuando la muestra es o se encuentra dentro de un líquido o fluido. El polvo de gelatina en estas modalidades se puede recuperar mediante filtración, centrifugación, o por otros medios conocidos en este campo . El polvo de gelatina también puede ser encerrado por un crisol u otro material adecuado configurado de tal manera que encierre al polvo, mientras que permita que pasen los líquidos y los objetivos a través del material circundante. Estas modalidades pueden ser útiles en particular para la recolección a partir de medios líquidos. En todavía otra modalidad, el material circundante es permeable a los objetivos gaseosos, y la recolección de los objetivos se hace realidad colocando el material de gelatina en polvo encerrado en un medio ambiente que contenga estos objetivos gaseosos. Los métodos empleados para recolectar objetivos a partir de una superficie utilizando el hisopo de la presente invención incluyen técnicas tales como técnicas de paso del hisopo, y técnicas Count-Tact . Las técnicas de paso del hisopo implican en principio una limpieza mecánica o paso del hisopo por un objetivo, tal como una superficie, y son bien conocidas por los expertos en la materia. Las técnicas Count-Tact involucran el uso de un instrumento especialmente diseñado, como se da a conocer en el Ej emplo 6. En una modalidad de la invención, la esponja basada en gelatina, opcionalmente unida a un soporte, se utiliza para recolectar objetivos de una muestra. El objetivo se puede seleccionar a partir del grupo que comprende un microorganismo, célula de mamífero, pero también puede ser tejido de mamífero, o de una manera alternativa una especie molecular, tal como un ácido nucleico o un nucleótido basado en purina o pirimidina, de preferencia ATP. El microorganismo se puede seleccionar a partir del grupo que consiste en bacterias, arqueas, esporas bacterianas, levadura, u hongos. La célula de mamífero puede ser cualquier tipo de célula de mamífero, pero en particular se puede seleccionar a partir del grupo que consiste en células de plasma sanguíneo, leucocitos, eritrocitos, trombocitos, células epiteliales, células de piel, o cualquier otro tipo de célula de mamífero que pueda ser útil para recolectarse para diferentes propósitos de diagnóstico y/o de limpieza . En una modalidad preferida, los objetivos se recolectan a partir de una superficie utilizando una combinación de muestreo húmedo y muestreo seco. En este contexto, se considera que el muestreo húmedo comprende el uso de una esponja basada en gelatina de la invención, que opcionalmente se ha unido a un soporte, y se ha humedecido previamente con un diluyente neutro adecuado o con un agente dispersante. Este diluyente o agente de dispersión sirve para el propósito de facilitar la recuperación de los objetivos a partir de la superficie, mientras que no interfiere con el ensayo. Los agentes diluyentes y de dispersión pueden ser cualquier solución acuosa adecuada, incluyendo opcionalmente sales u otros agentes no tóxicos o de otra manera químicamente o biológicamente inocuos para los objetivos que se vayan a recolectar, tales como suero, peptona salina, peptona salina regulada, solución de Ringer, y un regulador orgánico o inorgánico, conteniendo opcionalmente sales inorgánicas. El agente diluyente o de dispersión también puede contener de manera opcional un medio de cultivo adecuado para el microorganismo o el tipo de célula de mamífero que se esté recolectando, para los ensayos dirigidos hacia estos objetivos. La esponja también se puede esterilizar previamente de manera opcional. La recolección de objetivos se hace limpiando la superficie con cuando menos una esponja previamente humedecida, seguido por la limpieza de esta superficie con cuando menos una esponja basada en gelatina seca. El propósito de la limpieza en seco es recuperar tanto como sea posible del líquido y objetivo restante de la superficie. En otras modalidades, la recolección de objetivos se puede llevar a cabo muestreando en húmedo o muestreando en seco solamente. La elección del método a utilizar variará dependiendo del tipo de muestra que se vaya a ensayar, y del tipo de objetivo que se vaya a recolectar . Los objetivos, incluyendo los microorganismos, células de mamífero, y/o moléculas recolectadas en el hisopo, normalmente se transfieren desde el hisopo. La transferencia de estos objetivos recolectados comprende remover o desenlazar estos objetivos de la esponja y hacia un medio adecuado. En una modalidad preferida, esto se lleva a cabo colocando la esponja basada en gelatina en un medio que comprende una solución capaz de digerir la esponja basada en gelatina. La digestión de la esponja se puede realizar mediante métodos químicos y/o enzimáticos, de preferencia utilizando enzimas tales como proteasas, más preferiblemente utilizando proteasas tales como alcalasa o pepsina. La digestión por medios químicos puede comprender la utilización de ácidos minerales o carboxilicos , o bases, en una concentración apropiada que no desnaturalice el objetivo. En una modalidad, la digestión comprende utilizar una mezcla de cuando menos una enzima, y opcionalmente puede incluir un ácido mineral o una base, y opcionalmente sales inorgánicas así como agentes reguladores orgánicos o inorgánicos. La temperatura adecuada para la recuperación de objetivos de la esponja será alta dependiendo del método empleado. En las modalidades en donde la transferencia se realiza utilizando enzimas, la temperatura experimental se ajustará para maximizar la eficiencia de la digestión para la enzima particular en el contexto de la composición del medio de digestión empleado. En general, la transferencia de objetivos a partir de la esponja basada en gelatina de la invención, se puede realizar mediante cualquier técnica conocida en este campo, que libere al objetivo de la esponja. Por consiguiente, esto puede ocurrir mediante cambios en las condiciones tales como el pH o la temperatura, o mediante la adición de sales, agentes caotróficos, o solventes orgánicos. La transferencia desde la esponja también puede incluir opcionalmente una acción mecánica, tal como la generada mediante frotamiento o sacudimiento de la esponja, o por otros medios mecánicos que faciliten el desenlace de los objetivos de la esponja. La transferencia desde la esponja se puede realizar adicionalmente lavando un objetivo desde la esponja basada en gelatina. Se prevé que las modalidades preferidas de la invención incluirán métodos de digestión para liberar los microorganismos y/o las células de mamífero desde la esponja, debido a que los microorganismos y las células de mamífero son en general sensibles a los cambios en las condiciones. Sin embargo, puede haber excepciones a esto, y en particular se prevé que para ciertas aplicaciones, será útil emplear cambios en las condiciones experimentales para la recuperación de ciertos microorganismos o células de mamífero, en particular extremófilos , que son organismos adaptados para soportar condiciones hostiles de pH, sal, temperatura, y/o solventes orgánicos. La recuperación de las moléculas enlazadas a la esponja se puede llevar a cabo mediante cualquiera de las técnicas anteriormente mencionadas, dependiendo de cualquier modalidad dada de la invención, y del tipo de molécula enlazada. Los microorganismos o células de mamífero recuperados a partir de la esponja basada en gelatina, opcionalmente se pueden aislar además utilizando filtración de membrana, en donde el filtro de membrana tenga propiedades tales que permita que pasen el solvente y las moléculas pequeñas a través del filtro, mientras que no pasen las células enteras y los microorganismos. En una modalidad típica, este filtro tiene un tamaño de poros menor a 1 µt?, tal como menor a 0.8 ¿m, tal como menor a 0.6 µp?, típicamente menor a 0.45 µt?, tal como menor a 0.2 µt . En otra modalidad de la invención, la esponja basada en gelatina se utiliza para desinfectar una muestra, tal como una superficie. En esta modalidad, la acción combinada de la esponja, que actúa para remover objetivos, en este caso microorganismos y/o células de mamífero, de una muestra, y opcionalmente un agente antimicrobiano o desinfectante, facilita la remoción objetiva de los microorganismos o de las células de mamífero a partir de la muestra, haciéndola de esta manera estéril. La esponja en estas modalidades de preferencia se esteriliza mediante métodos conocidos en este campo, tales como mediante calor y/o radiación, y de manera opcional se trata previamente con un agente antimicrobiano o desinfectante. Este agente de preferencia es un líquido, tal como un alcohol, una solución acuosa que comprenda un alcohol u otro agente líquido que aniquile a los microorganismos o a las células de mamífero, pero puede ser cualquier compuesto que facilite el procedimiento de esterilización. Las modalidades para la esterilización de las muestras se pueden realizar empacando las esponjas basadas en gelatina individuales, opcionalmente unidas a un soporte, y de manera opcional tratadas previamente con un agente esterilizante, individualmente en paquetes sellados, los cuales se pretenden idealmente para un solo uso. En otra modalidad de la invención, se pueden cultivar microorganismos o células de mamífero viables que se hayan atrapado sobre la esponja basada en gelatina. El cultivo en general requiere de poner en contacto un microorganismo o una célula de mamífero y un medio de cultivo adecuado. El medio de cultivo puede estar en la forma de un líquido; de una manera alternativa, está en la forma de un ágar sólido. El medio de cultivo está comprendido de componentes bien conocidos por los expertos en la materia. La realización de este cultivo se puede llevar a cabo mediante técnicas convencionales, incluyendo: 1. Poner en contacto la esponja basada en gelatina, opcionalmente unida a un soporte, y un medio de cultivo líquido o sólido. En una de estas modalidades, se utiliza una esponja basada en gelatina adecuadamente configurada, colocada en el extremo de una varilla, para recolectar los objetivos desde una superficie, y subsecuentemente se permite que entre en contacto con un medio de cultivo, de tal manera que se transfieran los microorganismos o las células de mamífero recolectados por la esponja hasta el medio de cultivo. 2. Inyectar un medio de cultivo líquido, conteniendo opcionalmente ágar, en la esponja de gelatina, proporcionando de esta manera las condiciones para el crecimiento in situ de los microorganismos o células de mamífero enlazados en la esponja basada en gelatina . 3. Transferir la esponja basada en gelatina a un recipiente con el medio de cultivo líquido, permitiendo de esta manera el cultivo de toda la población de microorganismos o células de mamífero enlazados en este medio de cultivo. Se apreciará que el cultivo de los microorganismos o células de mamífero recolectados puede ser precedido por un pasó en donde las células enlazadas se hayan desenlazado o se hayan liberado de otra manera hacia un medio. En estas modalidades, se considera que este medio es un primer medio de transferencia. El medio puede ser cualquier líquido adecuado para la aplicación, tal como un diluyente neutro, un agente de dispersión, o un medio de cultivo. El desenlace de los microorganismos o células de mamífero enlazados, se puede realizar mediante cualquiera de los métodos descritos en la presente, incluyendo la digestión enzimática y/o química de la esponja basada en gelatina, y pueden incluir transferencia mecánica hacia el primer medio de transferencia. Los microorganismos o células de mamífero así desenlazados, subsecuentemente se transfieren a un segundo medio de transferencia, el cual idealmente está comprendido de un medio de cultivo líquido o sólido. La transferencia hasta un segundo medio de transferencia puede ser parcial, es decir, se transfiere una muestra desde el primer medio de cultivo hasta el segundo medio de transferencia. De una manera alternativa, la transferencia es completa, es decir, se transfiere todo el volumen del primer medio de transferencia hasta el segundo medio de transferencia. El cultivo de microorganismos o células de mamífero recolectados por la esponja basada en gelatina de la invención, puede ser útil en particular para una caracterización adicional o producción de los microorganismos o células de mamífero recolectados. Las modalidades preferidas de la esponja basada en gelatina, por ejemplo, se pueden utilizar para la determinación cualitativa de la composición microbiológica y/o de células de mamífero de una población objetiva recolectada a partir de una muestra. En estas modalidades, la muestra puede ser, por ejemplo, una superficie en una línea de producción de alimentos, tales como las líneas de procesamiento de carne o pescado, o a partir de otras superficies tales como pisos, paredes, o equipo utilizado en estas líneas de procesamiento. De una manera alternativa, la muestra puede ser una superficie del equipo, muebles especializados, o paredes o pisos de una clínica de salud o de hospitales, tales como salas quirúrgicas. La muestra también se puede recolectar a partir de una herida abierta, a partir de la superficie de un órgano interno, o puede estar comprendido de cualquier tejido de mamífero. Sin embargo, en principio, la esponja basada en gelatina se puede adaptar para recolectar y cultivar objetivos de cualquier muestra, de la que sea útil determinar el contenido microbiológico y/o de células de mamífero. En una modalidad, el medio de recolección es una superficie sólida a partir de la cual se pueden recolectar los objetivos. En una segunda modalidad, el medio es un líquido, a partir del cual también se pueden recolectar los objetivos. En esta modalidad, la capacidad de absorción de agua de la esponja basada en gelatina es una característica útil, debido a que permite la recolección de grandes volúmenes de agua. El medio líquido se puede localizar sobre una superficie, por ejemplo en las cavidades sobre la superficie. Por consiguiente, la esponja se puede adaptar para ser útil para la recolección de objetivos a partir de una amplia variedad de fuentes, tales como dispositivos de manufactura en la fabricación de alimentos, plantas de procesamiento para productos de carne y/o pescados, dispositivos médicos, así como para el manejo y limpieza de heridas, tales como heridas quirúrgicas. Además, se prevé que la esponja basada en gelatina se puede adaptar para utilizarse en la recolección de objetivos a partir de otros tipos de muestras de una naturaleza líquida y/o gaseosa. En principio, la recolección se puede hacer desde una superficie sólida, sin importar el material del que esté comprendida la superficie, tal como superficies naturales o sintéticas, de material orgánico o inorgánico. Adicionalmente , los objetivos se pueden recolectar a partir de superficies semi - sol idas , tales como superficies de mamífero y tejido de mamífero, incluyendo piel de mamífero, y la superficie de órganos de mamífero. EJEMPLOS Los siguientes métodos y ejemplos ilustran la manera en que la esponja basada en gelatina de la presente invención se puede adaptar para usos específicos, para la recolección y recuperación de esporas bacterianas a partir de una superficie de acero inoxidable. Los rendimientos de recuperación, es decir, los rendimientos globales para la transferencia desde la superficie hasta la esponja, y la transferencia subsecuente desde la esponja hasta un medio, son muy altos, lo cual es una ilustración de la utilidad de la esponja basada en gelatina para la recolección y transferencia de objetivos a partir de una muestra, tal como una superficie de acero inoxidable. Estos métodos y ejemplos, sin embargo, solamente deben entenderse como ejemplos de las modalidades útiles de la presente invención, y de ninguna manera son limitantes para su adaptación para otro uso. Ejemplo 1. Determinación, del tiempo de reconfirmación de las esponjas basadas en gelatina El propósito de este método es determinar la velocidad de reconfirmación de una esponja basada en gelatina. El método comprende remojar la esponja, y subsecuentemente exprimirla. La apariencia de la forma nativa de la esponja se monitorea como una función del tiempo, y el tiempo que transcurre hasta que la esponja haya alcanzado su forma nativa se denomina como el tiempo de reconfirmación.

El método comprende los siguientes pasos : 1. cortar un pedazo adecuado de la esponja basada en gelatina absorbible, de aproximadamente 1 1 era, y remojarla completamente en agua a temperatura ambiente. 2. Remover la muestra del agua, y exprimirla hasta que quede plana y que no se puedan sacar más burbujas de aire o gotas de agua. 3. Colocar la muestra en un vaso de precipitados llenado con agua a temperatura ambiente, y medir el tiempo (en segundos) hasta que la muestra haya alcanzado su tamaño y forma anteriores. 4. Repetir la prueba dos veces, y reportar el resultado como el promedio de tres determinaciones. Ejemplo 2. Determinación de la digestibilidad de las esponjas basadas en gelatina utilizando pepsina Propósito: Determinar el tiempo de digestión de una esponja basada en gelatina por medios enzimáticos utilizando pepsina. Reactivos utilizados en el método: Milli -Q-agua Pepsina (1 : 3000) Ácido clorhídrico diluido, Ph. Eur . Solución de pepsina al 1%: Se pesan exactamente 20.0 g de pepsina, y se disuelven en · 100 mi de ácido clorhídrico diluido, utilizando un matraz volumétrico de 2,000 mi. Se agrega agua hasta el volumen, y se mezcla. Aparato : Canasta de filamento metálico, 6 cm 0, aberturas de 1 mm. Baño de agua con termostato. Método .- 1. Transferir 100 mi de la solución de pepsina (1%) a un vaso de precipitados de 250 mi. Se agrega un imán, y se coloca en vaso de precipitados en un baño de agua, previamente calentado a 37 °C sobre un agitador magnético . 2. Cortar un pedazo de esponja de gelatina absorbible que pese 50 + 5 mg, y colocarla en un vaso de precipitados con agua. Amasar suavemente entre los dedos hasta que se humedezca completamente la esponja de gelatina, y hasta que se haya removido todo el aire, teniendo cuidado de no romper el tejido. 3. Levantar del agua y exprimir suavemente para remover cualquier exceso de agua. 4. Colocar la muestra humedecida en una canasta de filamento metálico en el vaso de precipitados, y hacer funcionar el cronómetro. 5. Observar hasta que se disuelva completamente el pedazo de esponja de gelatina absorbióle, detener el cronómetro, y anotar el consumo de tiempo . 6. Repetir la prueba dos veces - un total de tres veces, y calcular el promedio. Método alternativo para un polvo de gelatina 1. Transferir 100 mi de la solución de pepsina (1%) a un vaso de precipitados de 250 mi. Agregar un imán y colocar el vaso de precipitados en un baño de agua, previamente calentado a 37 °C sobre un agitador magnético. 2. Preparar una muestra que pese aproximadamente 50 mg +_ 5 mg . 3. Colocar la muestra directamente en el vaso de precipitados . 4. Observar hasta que se disuelva completamente el polvo de gelatina absorbible, detener el cronómetro, y anotar el consumo de tiempo. 5. Repetir la prueba dos veces - un total de tres veces, y calcular el promedio de tres determinaciones . Ejemplo 3. Determinación de la absorción de agua de las esponjas basadas en gelatina Propósito: Determinar la cantidad de agua que puede absorber una esponja basada en gelatina. Se espera que la esponja absorba varias veces su propio peso de agua, sobre una base de peso a peso.

Método: De acuerdo con el método USP "Absorable Gelatine Sponge : Water Absorption" (Esponja de Gelatina Absorbible: Absorción de agua) . Se llevan a cabo un total de seis determinaciones sobre seis pedazos diferentes de esponja basada en gelatina. Ejemplo 4. Mediciones de tamaño de una esponja basada en gelatina Propósito : Se miden las dimensiones de peso, altura, longitud, anchura, orificio central, y diámetro de la esponja de gelatina en seis muestras; se realiza una serie de mediciones para cada una de las seis muestras. Se reporta el promedio de las seis mediciones. Se calcula la densidad. Aparate: Un calibre, Mitutoyo Serie-500 o similar . una regla hecha específicamente para la determinación de longitud y anchura de una película de esponja de gelatina absorbible. Balanza, Mettler AK 160, o una balanza con una precisión similar. Método y cálculos : Las mediciones deseadas se hacen con un calibre o con una regla. Se reporta el promedio de seis mediciones realizadas sobre seis muestras (en mm) . Se mide el peso de la esponja. Se reporta el promedio de seis mediciones realizadas en seis muestras (en 0.001 g) . La densidad de la esponja de gelatina absorbible analizada se calcula de la siguiente manera: 4*peso = densidad, mg/mm3 77*longitud* (D2-d2) en donde : D = diámetro de la esponja, d = diámetro del poro en la esponja. Ejemplo 5; Protocolo de muestreo a partir de una superficie de acero inoxidable utilizando muestreo húmedo y muestreo seco. Propósito : Muestrear una superficie de acero inoxidable utilizando una combinación de muestreo húmedo y muestreo seco. Materiales : Una esponja basada en gelatina. Una solución de agua salada-peptona. Solución de alcalasa. Una superficie de acero inoxidable con un área de contacto de 24 cm2. Bolsas estomacales. Método : 1. Frotar las hojas de acero inoxidable horizontalmente de izquierda a derecha, cubriendo el área de contacto de 24 era2 , utilizando un hisopo de esponja de gelatina humedecido con la solución de agua salada-peptona . 2. Frotar las hojas de acero inoxidable verticálmente de arriba hacia abajo, cubriendo el área de contacto de 24 cm2 , utilizando un hisopo de esponja de gelatina humedecido con la solución de agua salada-peptona . 3. Frotar las hojas de acero inoxidable horizontalmente de izquierda a derecha, cubriendo el área de contacto de 24 cm2, utilizando un hisopo de esponja de gelatina seco. 4. Frotar las hojas de acero inoxidable vert icalmente , de arriba hacia abajo, cubriendo el área de contacto de 24 cm2 , utilizando un hisopo de esponja de gelatina seco. 5. Colocar los hisopos en las bolsas estomacales . 6. Agregar la solución de digestión a cada bolsa estomacal . 7. Homogeneizar las bolsas estomacales utilizando un estomacal. 8. Incubar las bolsas estomacales a 36°C hasta que se hayan disuelto los hisopos. 9. Se lleva a cabo la extracción de las esporas utilizando filtración de membrana. Ejemplo 6. Frotamiento mediante el aplicador Count-Tact Introducción . El aplicador Count-Tact estandariza la prueba superficial, mediante la aplicación de una presión uniforme de 500 +_ 50 g durante 10 + 1 segundos (proyecto de Estándar Europeo: CEN/TC 243). Descripción . El aplicador se compone de dos elementos de plástico: La base, que mantiene a la placa Count-Tact en su posición, consistente en un dispositivo de botón de presión montado sobre un resorte calibrado; Una unidad sujetada sobre la base, que contiene el cronómetro electrónico, el mecanismo de bip audible, y las baterías. El método involucra los siguientes pasos: 1. Deslizar la placa Count-Tact hasta su posición (la tapa da hacia afuera) deba o de los dos sujetadores transparentes fijados sobre el fondo de la base . 2. Remover la placa de la tapa Count-Tact. 3. Sostener el aplicador en su posición contra la superficie en la que se vaya a tomar la muestra, sin moverlo (verificar que la superficie no esté húmeda) . 4. Después de 10 segundos de contacto con la superficie, sonará el bip audible. Remover el aplicador de la superficie. Colocar la tapa de regreso sobre la placa, y remover la placa del aplicador (no olvide limpiar la superficie de donde se tomó la muestra, con el objeto de remover cualquier posible traza de ágar) . 5. Para la incubación de las placas, haga referencia a la hoja técnica de Count-Tact y a la hoja de Count-Tact Irradiated. Ejemplo 7. Protocolo de validación a partir de acero inoxidable pulido Introducción. Este protocolo describe la validación de un método que se emplea para el muestreo microbiológico a partir de acero inoxidable pulido, que se ha limpiado con isopropanol al 70%. El protocolo de validación se lleva a cabo con el objeto de definir la exactitud y precisión del método, y el rendimiento de recuperación de microorganismos a partir del tipo de material utilizado en esta prueba, empleando el método de muestreo descrito. Esta prueba actual se aplica siempre que se lleve a cabo el muestreo microbiológico a partir de acero inoxidable pulido limpiado con isopropanol, de acuerdo con los procedimientos de muestreo actuales descritos . Parámetros de validación Selectividad Se utilizan esporas de bacilos como marcadores de la actividad microbiológica sobre el acero inoxidable. Debido a que las esporas se incuban a 55 °C, se considera poco probable que cualquier contaminación microbiológica tenga influencia sobre los resultados durante la prueba de validación. Por consiguiente, no es relevante la selectividad para esta prueba. Precisión (repetibilidad) y exactitud (recuperación) Se accesa mediante extracción replicada y análisis de las muestras del hisopo utilizando el mismo analista, el mismo equipo, y los mismos reactivos en el mismo dia, utilizando: dos niveles de concentración (5 y 25 esporas) un material superficial; dos frotamientos de cada material superficial (reservados en una muestra para el análisis) ; un total de seis réplicas (n = 6) ; por consiguiente, se analiza un total de doce muestras. Linearidad Se establece utilizando una curva de calibración de tres puntos, cubriendo intervalos de 5 a 50 esporas. La prueba se lleva a cabo en seis réplicas, utilizando tres niveles de concentración (5, 25, y 50 esporas), y dos frotamientos de cada material superficial, reservados para el análisis. Precisión intermedia Se establece mediante análisis de réplicas en diferentes días, utilizando los mismos lotes de reactivo, el mismo equipo, y diferentes analistas. Se demuestra utilizando dos niveles de concentración, 5 y 25 esporas, un material superficial, y dos frotamientos (reservados para el análisis) , y seis réplicas por tres analistas en tres días. Por consiguiente, un total de 108 muestras. Equipo Incubadoras, autoclave, espátulas estériles Drigalski, guantes estériles, hisopos de gelatina, mezcladora, equipo de filtración de membrana, contador de colonias, bolsas estomacales estériles. Materiales Suspensión de esporas (1*106 esporas/0.1 mi de etanol) de Bacillus stearothexmophillus en etanol al 40%. Muestras de prueba de material superficial (acero inoxidable pulido) . Plantilla para el área de frotamiento con el hisopo (6 x 4 cm = 24 cm2) . Agar de soya tríptico. Filtro estéril . Jeringa estéril de 50 mi. Puntas de pipetas estériles desechables. Aplicador Count-Tact con placas de contacto conteniendo TSA, Tween, y Lecitina. Productos Químicos Solución de agua salada-peptona .

Etanol al 96%. Agua Elga. Solución de alcalasa. Preparación de Soluciones de Validación de Prueba Control positivo. Clase A: Se utilizan suspensiones de esporas conteniendo 5 esporas/313 µ?, como un control positivo. Se diluyen 0.100 mi de suspensión de esporas (1.6*106 esporas/0.1 mi) en 9.90 mi de etanol al 40% tres veces, para dar 1.6 esporas/0.1 mi en la suspensión final, que corresponde a 5 esporas/l.6 esporas = 3.125 x 0.1 mi = 0.3125 mi de suspensión de esporas para cada hoja de contacto (24 cm2) . Clase B: Se utilizan suspensiones de esporas conteniendo 25 esporas/63 /¿L como un control positivo. Se diluyen 0.100 mi de suspensión de esporas (1.6*106 esporas/0.1 mi) en 19.90 mi de etanol al 40% dos veces, para dar 40 esporas/0.1 mi en la suspensión final, que corresponde a 25 esporas/40 esporas = 0.625 x 0.1 mi = 0.0625 mi de suspensión de esporas para cada ho a de contacto (24 cm2) . Control negativo Se utiliza etanol estéril como el control negativo Linearidad Para el estudio de linearidad, se utilizarán tres suspensiones de esporas: a) conteniendo 5 esporas, b) conteniendo 25 esporas, y c) conteniendo 50 esporas. a) Se diluyen 0.100 mi de suspensión de esporas (1.6*106 esporas/0.1 mi) en 9.90 mi de etanol al 40% tres veces, para dar 1.6 esporas/0.1 mi en la suspensión final, que corresponde a 5 esporas/1.6 esporas = 3.125 x 0.1 mi = 0.325 mi de suspensión de esporas para cada hoja de contacto (24 cm2) . b) Se diluyen 0.100 mi de suspensión de esporas (1.6*10s esporas/0.1 mi) en 19.90 mi de etanol al 40% dos veces, para dar 40 esporas/0.1 mi en la suspensión final, que corresponde a 25 esporas/40 esporas = 0.625 x 0.1 mi = 0.625 mi de suspensión de esporas para cada hoja de contacto (24 cm2) . c) Se diluyen 0.100 mi de suspensión de esporas (1.6*10s esporas/0.1 mi) en 19.90 mi de etanol al 40% dos veces, para dar 40 esporas/0.1 mi en la suspensión final, que corresponde a 50 esporas/40 esporas = 1.25 x 0.1 mi = 0.125 mi de suspensión de esporas para cada hoja de contacto (24 cm2) . Preparación de la muestra Muestreo empleando la técnica del hisopo. La suspensión de la espora se aplica a cada hoja de acero inoxidable. Se permite que se evapore el etanol de la suspensión de esporas sobre las hojas de acero inoxidable . Se diluye 1.0 mi de solución de alcalasa en 90 mi de solución de agua salada-peptona. Se pone la bolsa estomacal acoplándose con el sujetador de bolsa estomacal. Se frotan las hojas de acero inoxidable horizontalmente de izquierda a derecha, cubriendo el área de contacto de 24 cm2 , utilizando un hisopo humedecido con la solución de agua salada-peptona. Se frotan las hojas de acero inoxidable horizontalmente de arriba hacia abajo, cubriendo el área de contacto de 24 cm2, utilizando un hisopo humedecido con una solución de agua salada-peptona. - se frotan las hojas de acero inoxidable horizontalmente de izquierda a derecha, cubriendo el área de contacto de 24 cm2, utilizando un hisopo seco. Se frotan las hojas de acero inoxidable horizontalmente de arriba hacia abajo, cubriendo el área de contacto de 24 cm2 , utilizando un hisopo seco. Se colocan los hisopos en las bolsas estomacales . Se agrega la solución de alcalasa diluida a cada bolsa estomacal. - Se homogeneizan las bolsas estomacales utilizando un estomacal. Se incuban las bolsas estomacales a 36°C, hasta que se hayan disuelto los hisopos (durante cuando menos una hora y máximo 2.5 horas) . Se lleva a cabo la extracción de las esporas utilizando filtración de membrana. Muestreo utilizando el aplicador Count-Tact. Usar guantes. Se aplica la suspensión de esporas a cada hoja de acero inoxidable. Se permite que se evapore el etanol de la suspensión de esporas sobre las hojas de acero inoxidable . Se utiliza el aplicador Count-Tact sobre las placas de acero inoxidable. También se agregan controles negativos a las hojas de acero inoxidable. No se agregan muestras de control positivas a las hojas de acero inoxidable, pero se agregan directamente a las placas de aplicación Count-Tact . Incubación Todas las muestras se incuban a 55°C +¦ 2°C durante cuando menos un día y hasta un máximo de 7 días . Limpieza del material superficial y de las plantillas. El material superficial y las plantillas se deben limpiar después de cada uso y re-uso: Enjuagar la superficie limpiando con papel de laboratorio que se haya remojado en etanol . Esterilización mediante paso por autoclave a 121 °C durante no menos de 20 minutos. Cálculos % de recuperación = muestra (CFU) *100/esporas agregadas, en donde muestra = número de esporas de Accuracy Test Solutions (Soluciones de Prueba Accuracy) , y Agregado = número de esporas en las Accuracy Control Samples (Muestras de Control Accuracy) . Procedimientos de Validación Recuperación/Precisión/Exactitud Se investigan la recuperación/precisión y exactitud, utilizando acero inoxidable, y se lleva a cabo de acuerdo con los métodos descritos anteriormente. Esta prueba se utilizará para el cálculo de la recuperación microbiológica a partir de las muestras de prueba. No se alterarán los lotes de reactivos y ni el equipo, debido a que se estima que el cambio en 'estos parámetros tiene poca o ninguna influencia sobre los resultados de prueba finales. Procedimiento Un analista contaminará seis placas de acero inoxidable con aproximadamente 5 y 25 esporas de bacilos cada una. Cada hoja de acero inoxidable se frota con el hisopo por cuadruplicado, o se muestrea utilizando el aplicador Count-Tact. Las muestras se incuban a 55 "C +_ 2°C durante cuando menos 1 día y hasta un máximo de 7 días, y se cuentan. Las pruebas se llevarán a cabo de conformidad con el método descrito en lo anterior. Recuperación/Exactitud La recuperación debe ser más alta que el 20%, comparándose con los controles positivos. La recuperación más baja establece el límite (la recuperación promedio más baja en cualquier concentración de esporas dada de -5 a 25 esporas/24 cm2) . Precisión calcular la media y %RSD en los análisis replicados . %RSD debe ser menor al 10%. Linearidad Procedimiento Se preparan seis muestras idénticas utilizando las suspensiones de esporas a) , b) , e) definidas anteriormente. Las muestras se utilizarán para establecer las eficiencias de recuperación para estos niveles de esporas, y se utilizan para la regresión lineal subsecuente . Evaluación La recuperación se calculará para cada nivel de esporas, y se hará la regresión desde 5 hasta 50 esporas . Calcular los parámetros de regresión de las curvas estándares y la inclinación de reporte, la intercepción y el coeficiente de correlación de cada curva . El coeficiente de correlación debe satisfacer el criterio de r2 >0.940. Precisión Intermedia Procedimiento Igual que para la precisión descrita anteriormente a los 3 días siguientes, utilizando tres analistas diferentes. Evaluación calcular la recuperación de esporas. calcular la media y % SD sobre los análisis replicados para cada día. Calcular la media y %RSD utilizando todos los días (precisión intermedia de día 1, día 2, y día 3) . %RSD debe ser menor al 15%. Ejemplo 8. Validación del muestreo a partir del acero inoxidable pulido Proposi to Validar los métodos empleados para el muestreo microbiológico a partir de acero inoxidable pulido que se haya limpiado con isopropanol al 70%, haciendo referencia al protocolo de validación del Ejemplo 7. Introducción El estudio de validación se lleva a cabo con el objeto de definir la exactitud, precisión, y linearidad de los métodos empleados para el muestreo microbiológico desde las superficies, y para estimar la eficiencia de recuperación de microorganismos a partir del tipo de material utilizado en la prueba, empleando los métodos descritos para el muestreo. En el presente estudio, el muestreo se llevó a cabo a partir de acero inoxidable pulido limpiado con isopropanol al 70%. La racionalización para el muestreo es que éste es un material común utilizado para la producción de equipo. El método probado fue el muestreo mediante la técnica de hisopo, y el muestreo mediante la técnica de Count-Tact . El muestreo se llevó a cabo sobre las superficies con un número aplicado de esporas bacterianas igual al lineamiento de USP, NF del equipo de producción clase 10,000, y alineamiento de EU-GMP para la pureza microbiológica del equipo de producción clase 10,000. Resul tados Recuperación El cálculo de la recuperación utilizando la técnica de frotamiento con el hisopo (Tabla 1) mostró variaciones entre los analistas cuando se aplicaron 5 esporas (40% a 175%) , y variaciones cuando se aplicaron 25 esporas (73% a 105%) . La recuperación promedio para todos los analistas utilizando la técnica de frotamiento con el hisopo se calcularon hasta el 80% cuando se aplicaron 5 esporas, y hasta el 91% cuando se aplicaron 25 esporas. El cálculo de la recuperación utilizando la técnica Count-Tact (Tabla 2) mostró variaciones entre los analistas cuando se aplicaron 5 esporas (54% a 88%) , y variaciones cuando se aplicaron 25 esporas (36% a 57%) . La recuperación promedio para todos los analistas utilizando la técnica Count-Tact se calculó hasta el 74% cuando se aplicaron 5 esporas, y hasta el 45% cuando se aplicaron 25 esporas. Precisión Los cálculos de la desviación estándar relativa en porcentaje (RSD %) , cuando se empleó la técnica de frotamiento con hisopo (Tabla 1) mostraron variaciones entre los analistas (34% a 70%) cuando se aplicaron 5 esporas, y variaciones (30% a 57%) cuando se aplicaron 25 esporas. Empleando la técnica Count-Tact (Tabla 2), RSD% fue entre el 41% y el 90% cuando se aplicaron 5 esporas, y entre el 20% y el 65% cuando se aplicaron 25 esporas. Precisión intermedia La precisión intermedia empleando la técnica de frotamiento con hisopo (Tabla 1) fue del 64% cuando se aplicaron 5 esporas, y del 43% cuando se aplicaron 25 esporas. La precisión intermedia empleando la técnica Count-Tact (Tabla 2) fue del 77% cuando se aplicaron 5 esporas, y del 54% cuando se aplicaron 25 esporas.

Tabla 1. Resultados de muestreo empleando la técnica con hisopo .

Ensayo (esporas/24 cm2) Esporas aplicadas (calculado, no real)1' 5 25 50 Media (cfu/24 cm2) Analista 13) 5 21 2) Precisión (RSD%) 42 57 Recuperación (%) 175 105 Media (cfu/24 cm2) Analista 23> 3 15 2) Precisión (RSD%) 70 30 Recuperación (%) 59 73 Media (cfu/24 cm2) Analista 33) 2 17 29 Precisión (RSD%) 34 32 39 Recuperación (%) 40 94 95 Media (cfu/24 cm2) Analista 1,2,3 3 18 2) Precisión (RSD%) 64 43 Recuperación (%) 80 91 ""¦'El número de esporas aplicadas se calculó como de 5 , 25, ó 50. Se utilizó la cantidad real de esporas aplicadas para calcular las recuperaciones. 2)Un analista solamente llevó a cabo el muestreo a partir de superficies con 50 esporas aplicadas, con el único propósito de investigar la linearidad. 3) Cada analista realizó el muestreo y el análisis en seis réplicas . Linearidad de 5 a 50 esporas: Coeficiente de correlación (R) - 0.9995; R2 = 0.9990; Intercepción = -2.3; Inclinación = 1.0. Linearidad La linearidad se calculó mediante regresión entre las concentraciones de esporas aplicadas de 5, 25 y 50 esporas por un analista. El nivel definido de aceptación fue R2 >0.9400. El R2 calculado fue de 0.9990 cuando se utilizó la técnica de frotamiento con hisopo, y de 0.9989 cuando se utilizó la técnica Count-Tact.

Tabla 2. Resultados del muestreo empleando la técnica Count-Tact . ?? número de esporas aplicadas se calculó como de 5, 25, ó 50. Se utilizó la cantidad real de esporas aplicadas para calcular las recuperaciones. 2)Un analista solamente llevó a cabo el muestreo a partir de superficies con 50 esporas aplicadas, con el único propósito de investigar la linearidad. 3)Cada analista realizó el muestreo y el análisis en seis réplicas . Linearidad de 5 a 50 esporas: Coeficiente de correlación (R) = 0.9989; R2 = 0.9979; Intercepción = -2.4; Inclinación = 0.4. Discusión Recuperación El nivel de recuperación de microorganismos a partir de las superficies es critico cuando se cumple con los lineamientos de USP/NF y con los lineamientos de EU-GMP . La recuperación bacteriana empleando tanto la técnica de frotamiento con hisopo como la técnica Count-Tact como se describe en el protocolo, fue mejor que la anticipada cuando se recuperaron microorganismos a partir de las muestras con una contaminación microbiológica conocida igual al lineamiento USP/NF y al lineamiento EU-GMP . La recuperación más baja promedio (para todos los analistas) fue del 80% para la técnica de frotamiento con hisopo, y del 45% para la técnica Count-Tact. Para el método de muestreo seleccionado empleado sobre acero inoxidable, esta recuperación se debe utilizar para estimar la cantidad real de microorganismos sobre la superficie. Precisión La desviación estándar relativa (%RSD) sobre los análisis replicados (para un solo analista) fue mayor de lo que se anticipó al principio. La comparación de %RSD para los controles positivos y el ensayo, sin embargo, mostró que un alto %RSD es causado principalmente por el análisis de las muestras y no por el uso de la técnica Count-Tact o de frotamiento con hisopo. Se debe haber esperado no alcanzar un %RSD correspondiente al análisis químico, debido a que en general se sabe que el %RSD es mucho mayor para el análisis microbiológico que para el análisis químico. Precisión Intermedia La desviación estándar relativa (%RSD) sobre los análisis replicados (entre los analistas) fue mayor de lo que se anticipó al principio. La comparación del %RSD para los controles positivos y el ensayo, sin embargo, mostró que el alto %RSD es principalmente causado por el análisis de las muestras, y no por la técnica de frotamiento con hisopo o Count-Tact empleada. Se debe haber esperado no alcanzar un %RSD correspondiente al análisis químico, debido a que se sabe en general que el %RSD es mucho mayor para el análisis microbiológico que para el análisis químico. El % SD promedio calculado para las recuperaciones más bajas dadas anteriormente fue del 64% para la técnica de frotamiento con hisopo, y del 54% para el método Count-Tact . Para corregir las grandes variaciones sobre el análisis, se debe tomar en cuenta el %RSD cuando se estime el número real de microorganismos sobre una superficie. Conclusiones Los resultados muestran que los métodos descritos anteriormente se pueden emplear para muestrear microorganismos a partir de acero inoxidable pulido de una manera satisfactoria global, y muestran que no hay razón para no esperar que el método sea adecuado para todas las superficies. El nivel de recuperación de microorganismos a partir de las superficies es crítico cuando se cumple con los lineamientos de USP/NF y con los lineamientos de EU-GMP. La recuperación bacteriana empleando tanto la técnica de frotamiento con hisopo como el aplicador Count-Tact, como se describe en el protocolo, fue mejor que lo anticipado, cuando se recuperan microorganismos a partir de muestras con una contaminación microbiológica conocida igual al lineamiento de USP/NF y al lineamiento de EU-GMP.

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES 1. Un dispositivo para muestrear o recolectar, el cual comprende: i) un hisopo que es un material absorbente natural o sintético, el cual comprende partículas de gelatina o partículas de colágeno; y ii) un soporte fijado al hisopo. 2. Un dispositivo de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 1, caracterizado porque el hisopo comprende partículas de gelatina. 3. El dispositivo de conformidad con lo reclamado en cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque la gelatina o el colágeno son de origen natural o sintético, tal como a partir de un mamífero, tal como un mamífero marino, porcino, bovino, o de peces, cangrejos, o vegetales. 4. El dispositivo de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 3, caracterizado porque la gelatina o el colágeno son de origen porcino. 5. El dispositivo de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 2, caracterizado porque las partículas tienen un tamaño de partículas en el intervalo de aproximadamente 1 µt a aproximadamente 1 mm, típicamente de aproximadamente 5 µt? a aproximadamente 0.5 mm, más típicamente de aproximadamente 5 /xm a aproximadamente 0.25 miti, de preferencia de aproximadamente 10 µt? a aproximadamente 0.25 mm, tal como de aproximadamente 10 µtt? a aproximadamente 0.1 mm. 6. El dispositivo de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 1, caracterizado porque el hisopo tiene un contenido de partículas de gelatina o de partículas de colágeno, de preferencia de partículas de gelatina, del 1 al 95% en peso/peso, basándose en el peso seco combinado del hisopo y las partículas, tal como del 2 al 90%, típicamente del 5 al 90%. 7. El dispositivo de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 1, caracterizado porque el hisopo es de un tamaño en el intervalo de aproximadamente 1 cm x 1 cm a aproximadamente 15 cm x 15 cm. 8. Un estuche que comprende: i) un hisopo que es un material absorbente natural o sintético, el cual comprende partículas de gelatina o partículas de colágeno, y en donde se fija un soporte al hisopo; y ii) un agente seleccionado a partir del grupo que consiste en un diluyente neutro, un agente antimicrobiano, y un agente de dispersión. 9. El estuche de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 8, caracterizado porque el diluyente neutro se selecciona a partir del grupo que consiste en suero, peptona salina, peptona salina regulada, solución de Ringer, y un regulador orgánico o inorgánico. 10. Un estuche de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 8, caracterizado porque el hisopo comprende partículas de gelatina. 11. El estuche de conformidad con lo reclamado en cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, caracterizado porque la gelatina o el colágeno son de origen natural o sintético, tal como de un mamífero, tal como de mamíferos marinos, porcinos, bovinos, o de peces, cangrejos, o vegetales. 12. El estuche de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 11, caracterizado porque la gelatina o el colágeno son de origen porcino. 13. El estuche de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 10, caracterizado porque las partículas tienen un tamaño de partículas en el intervalo de aproximadamente 1 µp? a aproximadamente 1 mm, típicamente de aproximadamente 5 µp? a aproximadamente 0.5 mm, más típicamente de aproximadamente 5 µp? a aproximadamente 0.25 mm, de preferencia de aproximadamente 10 im a aproximadamente 0.25 mm, tal como de aproximadamente 10 /¿m a aproximadamente 0.1 mm. 14. El estuche de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 10, caracterizado porque el hisopo tiene un contenido de partículas de gelatina o de partículas de colágeno, de preferencia de partículas de gelatina, del 1 al 95% en peso/peso, basándose en el peso seco combinado del hisopo y las partículas, tal como del 2 al 90%, típicamente del 5 al 90%. 15. El uso de un dispositivo como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, para la recolección de un objetivo a partir de un medio de recolección, el cual comprende hacer contacto entre el hisopo y el obj etivo . 16. El uso de un dispositivo como se define en cualquiera de las reivindicaciones í ! a 14, para la recolección de un objetivo a partir de un medio de recolección, el cual comprende hacer contacto entre el hisopo y el obj etivo . 17. El uso de un dispositivo como se define en cualquiera de las reivindicaciones 15 a 16, caracterizado porque la recolección es de un medio de recolección seleccionado a partir del grupo que consiste en una superficie sólida o semi-sólida, un líquido, un gas, y combinaciones de los mismos. 18. El uso de un dispositivo como se define en cualquiera de las reivindicaciones 15 a 16, caracterizado porque el objetivo se selecciona a partir del grupo que consiste en un virus, un microorganismo, una célula de mamífero, y una molécula orgánica. 19. El uso de un dispositivo como se define en cualquiera de las reivindicaciones 15 a 16, caracterizado porque la molécula orgánica se selecciona a partir del grupo que consiste en un nucleótido, un ácido nucleico, una proteína, o un detergente. 20. El uso de conformidad con lo reclamado en cualquiera de las reivindicaciones 15 a 16, caracterizado porque el nucleótido es un nucleótido que contiene purina o pirimidina, de preferencia ATP. 21. El uso de conformidad con lo reclamado en cualquiera de las reivindicaciones 15 a 16, caracterizado porque el microorganismo se selecciona a partir del grupo que consiste en bacterias, arqueas, esporas bacterianas, levadura, y hongos. 22. El uso de conformidad con lo reclamado en cualquiera de las reivindicaciones 15 a 21, caracterizado porque además comprende el paso de transferir el objetivo desde el hisopo hasta un primer medio de transferencia. 23. El uso de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 22, caracterizado porque la transferencia comprende la digestión de la gelatina o del colágeno . 24. El uso de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 22, caracterizado porque la transferencia comprende la transferencia mecánica del objetivo desde la gelatina o el colágeno hasta un segundo medio de transferencia. 25. El uso de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 22, caracterizado porque la transferencia comprende lavar el objetivo a partir de la gelatina o del colágeno. 26. El uso de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 23, caracterizado porque la digestión comprende el uso de un agente seleccionado a partir del grupo que consiste en una enzima, un ácido mineral, un ácido carboxílico, una base, y combinaciones de los mismos . 27. El uso de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 26, caracterizado porque la enzima es una proteasa, tal como una alcalasa o pepsina. 28. El uso de conformidad con lo reclamado en cualquiera de las reivindicaciones 22 a 27, caracterizado porque además comprende el paso de extraer el objetivo mediante filtración de membrana. 29. Un método para reducir la cantidad de un objetivo en un área de muestra, el cual comprende hacer contacto entre un hisopo que comprende gelatina o colágeno, y cuando menos una porción del área de muestra, hasta un grado tal que el objetivo se adhiera al hisopo. 30. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 29, caracterizado porgue el medio de recolección se selecciona a partir del grupo que consiste en una superficie sólida o semi-sólida, un líquido, un gas, y combinaciones de los mismos. 31. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 29, caracterizado porque el objetivo se selecciona a partir del grupo que consiste en un virus, un microorganismo, una célula de mamífero, y una molécula orgánica. 32. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 31, caracterizado porque el objetivo molecular es un nucleótido, un ácido nucleico, una proteína, o un detergente. 33. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 32, caracterizado porque el nucleótido es un nucleótido que contiene purina o pirimidina, de preferencia ATP. 34. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 31, caracterizado porque el microorganismo se selecciona a partir del grupo que consiste en bacterias, arqueas, esporas bacterianas, levadura, y hongos. 35. El método de conformidad con lo reclamado en cualquiera de las reivindicaciones 29 a 34, caracterizado porque además comprende el paso de transferir el objetivo desde la esponja hasta un primer medio de transferencia. 36. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 35, caracterizado porque la transferencia comprende la digestión de la gelatina o del colágeno . 37. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 35, caracterizado porque la transferencia comprende la transferencia mecánica del objetivo desde la gelatina o el colágeno hasta un segundo medio de transferencia. 38. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 35, caracterizado porque la transferencia comprende lavar un objetivo a partir de la gelatina o del colágeno. 39. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 29, caracterizado porque el hisopo es como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7. 40. El método de conformidad con lo reclamado en cualquiera de las reivindicaciones 29 a 39, caracterizado porque además comprende el uso de un agente seleccionado a partir del grupo que consiste en un diluyente neutro, un agente antimicrobiano, un agente desinfectante, y un agente de dispersión. 41. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 40, caracterizado porque el agente antimicrobiano o desinfectante es un alcohol. 42. Un método para muestrear de una manera 5 cualitativa o cuantitativa un área para determinar el contenido de un objetivo, el cual comprende el uso de una esponja basada en gelatina, y los pasos de-, i) muestrear en húmedo utilizando un hisopo que comprenda gelatina o colágeno; y/o ii) muestrear en seco utilizando un hisopo 0 que comprenda gelatina o colágeno. 43. Un método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 42, caracterizado porque el hisopo se selecciona a partir del grupo que consiste en una esponja basada en gelatina, una esponja basada en 5 colágeno, gelatina microfibrilar, o colágeno microfibrilar . 44. Un método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 43, caracterizado porque el hisopo es una esponja basada en gelatina. o 45. Un método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 43, caracterizado porque el hisopo es una esponja de gelatina o una esponja de colágeno, de preferencia una esponja de gelatina. 46. Un método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 42, caracterizado porque el hisopo es un material absorbente natural o sintético que comprende partículas de gelatina o partículas de colágeno, de preferencia partículas de gelatina. 47, El método de conformidad con lo reclamado 5 en cualquiera de las reivindicaciones 42 a 46, caracterizado porque la gelatina o el colágeno son de origen natural o sintético, tal como de un mamífero, tal como de mamíferos marinos, porcinos, bovinos, o de peces, cangrejos, o vegetales. 0 48. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 47, caracterizado porque la gelatina o el colágeno son de origen porcino. 49. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 43, caracterizado porque la esponja 5 basada en gelatina o basada en colágeno tiene una reconfirmación no mayor a 10 segundos, típicamente no mayor a 5 segundos, como se determina mediante el método del Ej emplo 1. 50. El método de conformidad con lo reclamado o en la reivindicación 43, caracterizado porque la esponja basada en gelatina tiene una capacidad de absorción de agua de cuando menos 30 g/g, típicamente de cuando menos 40 g/g, como se determina mediante el método del Ejemplo 3. 51. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 43, caracterizado porque la esponja basada en gelatina está constituida por cuando menos el 50% de gelatina, tal como cuando menos el 60%, tal como cuando menos el 70%, típicamente cuando menos el 75% de gelatina, de preferencia cuando menos el 80%, más preferiblemente cuando menos el 85% de gelatina, tal como cuando menos el 90% de gelatina, adecuadamente cuando menos el 95% de gelatina, más preferiblemente seleccionado a partir de cuando menos el 96%, 97%, 98%, 99% de gelatina, basándose en el peso seco de la esponja. 52. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 43, caracterizado porque la esponja basada en gelatina, la esponja basada en colágeno, la gelatina microfibrilar , y el colágeno microfibrilar , tienen poros con un tamaño de poros promedio de aproximadamente 10 nm a aproximadamente 2 mm. 53. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 46, caracterizado porque las partículas tienen un tamaño de partículas en el intervalo de aproximadamente 1 µp? a aproximadamente 1 mm, típicamente de aproximadamente 5 µt? a aproximadamente 0.5 mm, más típicamente de aproximadamente 5 µt? a aproximadamente 0.25 mm, de preferencia de aproximadamente 10 µt? a aproximadamente 0.25 mm, tal como de aproximadamente 10 /xm a aproximadamente 0.1 mm. 54. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 46, caracterizado porque el hisopo tiene un contenido de partículas de . gelatina o de partículas de colágeno, de preferencia de partículas de gelatina, del 1 al 95% en peso/peso, basándose en el peso seco combinado del hisopo y las partículas, tal como del 2 al 90%, típicamente del 5 al 90%. 55. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 42, caracterizado porque el hisopo es de un tamaño en el intervalo de aproximadamente 1 cm x 1 cm a aproximadamente 15 cm x 15 cm. 56. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 42, caracterizado porque el área se selecciona a partir del grupo que consiste en una superficie sólida o semi-sólida, un líquido, un gas, y combinaciones de los mismos . 57. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 42, caracterizado porque el objetivo se selecciona a partir del grupo que consiste en un virus, un microorganismo, una célula de mamífero, y una molécula orgánica. 58. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 57, caracterizado porque el objetivo molecular es un nucleótido, un ácido nucleico, una proteína, o un detergente. 59. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 58, caracterizado porque el nucleótido es un nucleótido que contiene purina o pirimidina, de preferencia ATP. 60. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 57, caracterizado porque el microorganismo se selecciona a partir del grupo que consiste en bacterias, arqueas, esporas bacterianas, levadura, y hongos. 61. El método de conformidad con lo reclamado en cualquiera de las reivindicaciones 42 a 60, caracterizado porque además comprende el paso de transferir el objetivo desde la esponja hasta un primer medio de transferencia. 62. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 61, caracterizado porque la transferencia comprende la digestión de la gelatina o del colágeno . 63. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 61, caracterizado porque la transferencia comprende la transferencia mecánica del objetivo desde la gelatina o el colágeno hasta un segundo medio de transferencia. 64. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 61, caracterizado porque la transferencia comprende lavar el objetivo de la gelatina o del colágeno. 65. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 42, caracterizado porgue se fija un soporte al hisopo. 66. Un método para cultivar microorganismos o células de mamífero recolectados, el cual comprende adherir las células a una esponja basada en gelatina, y cultivar las células en un medio de cultivo. 67. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 66, caracterizado porgue el medio de cultivo se agrega a la esponja basada en gelatina. 68. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 66, caracterizado porgue la espon a basada en gelatina se incuba en un medio de cultivo 1íquido . 69. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 66, caracterizado porque además comprende el paso de digerir la esponja basada en gelatina . 70. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 66, caracterizado porque la digestión comprende el uso de un agente seleccionado a partir del grupo que consiste en una enzima, un ácido mineral, un ácido carboxílico, una base, y combinaciones de los mismos . 71. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 70 , caracterizado porque la enzima es una proteasa. 72. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 71, caracterizado porque la proteasa es alcalasa o pepsina.