MXPA01011845A - Expresion y exportacion de proteinas de interferon-alfa como proteinas de fusion fc. - Google Patents

Abstract

Se describe secuencias de acido nucleico, por ejemplo, secuencias de ADN o ARN las cuales codifican una proteina de fusion inmunoglobulina Fc-interferon-alfa. Las secuencias de acido nucleico pueden ser insertadas dentro de un vector de expresion adecuado y expresadas en celulas de mamifero. Tambien se describe una familia de proteinas de fusion inmunoglobulina Fc-interferon-alfa que puede ser producida mediante la expresion de dichas secuencias de acido nucleico. Tambien se describen metodos para usar dichas secuencias de acido nucleico y/o proteinas de fusion para el tratamiento de condiciones, por ejemplo, hepatitis, las cuales son aliviadas mediante la administracion de interferon-alfa.

Description

EXPRESIÓN Y EXPORTACIÓN DE PROTEÍ NAS DE INTERFERON-ALFA COMO PROTEÍNAS DE FUSIÓN Fc Solicitudes Relacionadas Esta solicitud reclama la prioridad a la Solicitud Provisional de Patente Norteamericana Serie No. 60/1 34,895, presentada el 1 9 de Mayo de 1 999 cuya descripción se incorpora a la presente como referencia. Campo de la I nvención La invención aq u í descrita se relaciona con sistemas de expresión de la proteína de fusión q ue mejora la prod ucción de miembros de la clase de proteínas interferón-alfa. Más específicamente, la invención se refiere a una expresión de alto nivel y secreción en las células de mam íferos de proteínas de fusión Fc, tales como la inmunog lobulina Fc-I nterferón-alfa , y las diferentes formas estructu rales y usos de la misma. Antecedentes de la Invención La familia de proteínas interferón-alfa (I FN-alfa) a probado ser útil en el tratamiento de una variedad de enfermedades. Por ejemplo, las interferonas alfa 2a y 2b (marcas comerciales Roferon e I ntron A, respectivamente) han sido usadas en el tratam iento de la hepatitis B, C y D crónica (enfermedades virales del h ígado amenazadoras de la vida) , condilomata acuminata (condiloma acumulado) , sarcoma de Kaposi relacionada con el SI DA, leucemia de células velludas, melanoma maligno, carcinoma de la célula basal, mieloma m últiple, carcinoma de la célula renal, herpes I y I I , varicela/herpes zoster, y m icosis fungoides. La eficacia de los reg ímenes de tratamiento que contienen interferona-alfa > para el tratamiento del cáncer de próstata y la leucemia mielogenosa crónica también han sido estudiados. La familia interferón-alfa humana es la familia más grande y compleja de interferonas. Los miembros de la familia interferón-alfa 5 tienen secuencias de aminoácidos similares que las definen como un grupo diferente de otras interferonas; por ejemplo, estas proteínas generalmente tienen por lo menos 35% de identidad de aminoácidos en una alineación típica de secuencia de proteínas. La base de datos SwissProt contiene numerosas proteínas de interferón-alfa humanas, 0 incluyendo las proteínas llamadas alternativamente de interferón-delta e interferón-omega. Estas proteínas generalmente son sintetizadas con una secuencia principal de aproximadamente 23 aminoácidos, y las proteínas maduras generalmente tienen un peso molecular de aproximadamente 19 kD. Debido a que estas proteínas son tan similares, cuando es obtenida 5 la interferón-alfa de un humano u otra fuente de mamíferos y purificada extensamente, se obtienen una mezcla de isoespecies con actividades biológicas variables frecuentemente [Georgiadis et al. , Patente Norteamericana No. 4,732,683]. De un modo similar, los cADNs que codifican estas proteínas tienen tamaños y propiedades lo 0 suficientemente similares para que un solo conjunto de procedimientos pueda ser utilizado para manipularlas con propósitos de construcción de plásmidos. Por consiguiente, sería útil tener un método para producir y purificar de manera eficiente una sola especie de interferón-alfa de una fuente mamífera.

Debido a su tamaño relativamente peq ueño de aproximadamente 1 9 kD (Lawn et al . , (1 981 ) PROC . NATL. ACAD. SCI . E . U .A. 78: página 5435) , la interferón-alfa puede ser filtrada por el riñon . Sin embargo, cuando es filtrada, la proteína interferón-alfa , generalmente es absorbida y metabolizada por las células tubulares del riñon , y por lo tanto , generalmente no es excretada. De acuerdo con la práctica clínica actual, la interferón-alfa form ulada es administrada por medio de inyección intram uscular, después de lo cual los niveles en el suero disminuyen con una vida promedio de aproximadamente 5 horas para la interferón-alfa 2a y de 2 a 3 horas para la interferón-alfa 2b (PHYSICIANS DESK REFERENCE, 50a ed ición, 1 996: páginas 2145-2147 y 2364 a 2373) . Además, debido a su tamaño peq ueño, se requieren de inyecciones m últiples y frecuente de interferón-alfa (generalmente diarias ó 3 veces/semanas) , y puede existir una variación importante en el nivel de interferón-alfa en el paciente. Además, las dosis inyectadas son grandes en u n rango de aproximadamente 50 microgramos por dosis para la leucem ia de célula velluda , a 300 microgramos por dosis para el sarcoma de Kaposi relacionada con el SI DA. Los niveles altos en circu lación de la interferón-alfa, puede dar como resultado efectos colaterales importantes incluyendo, toxicidades de la piel, neurológicas, immunológicas y endocrinas. Se considera que el tamaño pequeño de la interferón-alfa permite que esta pase a través de la barrera sangu ínea del cerebro y entre en el sistema nervioso central , siendo responsable de alg unos de sus efectos colaterales neurológicos. Por consiguiente, sería útil aumentar la potencia y la vida promedio en el suero efectiva en los '-^•dwiía^llH pacientes que están siendo tratados con interferón-alfa, m ientras se miniminiza al mismo tiempo los efectos colaterales. Debido a la dosificación alta, eficacia deficiente, vida promedio en el suero corta, dificultades en la purificación y los efectos colaterales de la interferón-alfa, existe la necesidad en la técn ica de métodos para mejorar la producción y mejorar las propiedades farmacológicas de este agente terapéutico. Sumario de la Invención La presente invención caracteriza métodos y composiciones útiles para hacer y usar proteínas de fusión que contienen interferón-alfa. En particular, la invención caracteriza ácidos nucleicos, por ejemplo, secuencias de ADN , ó ARN , que codifican u na proteína de fusión de inmunoglobulina Fc-interferón-alfa, y métodos para la expresión del ácido nucleico para producir dichas proteínas de fusión . Las proteínas de fusión pueden facilitar la expresión de nivel alto de la interferón-alfa biológicamente activa. La proteína de fusión puede ser combinada con u n veh ículo farmacéuticamente aceptable para la admin istración a un mam ífero, por ejemplo, a un humano. Bajo ciertas circunstancias, la interferón-alfa puede ser disociada de la proteína de fusión antes de la formulación y/o administración. Alternativamente, las secuencias de ácido nucleico q ue codifican la interferón-alfa q ue contienen la proteína de fusión pueden ser combinadas con un vehículo farmacéuticamente aceptable y administradas a un mam ífero . Es un objeto de la invención proporcionar secuencias novedosas de ácido nucleico, por ejemplo, ADNs y ARNs, los cuales faciliten la . l.3i*a producción y secreción de interferón-alfa . En particular, la invención proporciona (i) secuencias de ácido n ucleico las cuales facilitan la producción y secreción eficiente de la interferón-alfa; (ii) construcciones de ácido nucleico para la producción y secreción rápida y eficiente de la interferón-alfa en una variedad de células huésped de mam íferos; y (iii) métodos para la producción , secreción y recolección de variantes de interferón-alfa recombinante d iseñados genéticamente de las mismas, incluyendo proteínas no natu rales, biosintéticas , o de otro modo interferón-alfa artificial tales como las proteínas que han sido creadas por el diseño racional. Otros objetos de la invención son proporcionar secuencias de polinucleótidos los cuales, cuando son fusionadas con un polinucleótido que codifica la interferón-alfa, cod ifican una interferón-alfa que contiene el polipéptido de fusión el cual puede ser purificado utilizando reactivos y técnicas comu nes. Todavía otro objeto es interponer un sitio de d isociación proteolítica entre un cartucho de secreción y la proteína interferón-alfa codificada de modo q ue el cartucho de secreción pueda ser disociado del campo de interferón-alfa de modo que el interferón-alfa pueda ser purificado independientemente. Por consiguiente, en un aspecto, la presente invención proporciona moléculas de ácido n ucleico, por ejemplo, moléculas de ADN o ARN las cuales codifican u na proteína de fusión de inm u nog lobulina de la región Fc-interferón-alfa la molécula de ácido Nnucleico cod ifica en serie en una dirección de 5' a 3' , una secuencia de señal , una región de *»fc» -tj- - ¿m*. inmunoglobulina Fc, y por lo menos una proteína objetivo, en donde la proteína objetivo comprende interferón-alfa. En una modalidad preferida, la reg ión de inmunog lobulina Fc comprende una región de bisagra de inmunog lobulina y de preferencia comprende por lo menos un dominio de región pesada constante de inmunoglobulina , por ejemplo, un campo pesado constante de inm unog lobulina 2 (CH2) , un campo pesado constante de inm unoglobulina 3 (CH3), y dependiendo del tipo de inmu nog lobulina utilizado para generar la región Fc, opcionalmente una región de cadena pesada constante de inmunoglobulina 4 (CH4). En una modalidad más preferida, la región de inmu noglobulina Fc carece por lo menos de un campo pesado constante de inmunog lobulina 1 (CH 1 ) . Au nque las regiones de inmunog lobu lina Fc pueden estar basadas en cualqu ier clase de inmunoglobulina, por ejemplo, IgA, IgD, Ig E, IgG , e IgM , se prefieren las regiones de inm unog lobulina Fc basadas en IgG . El ácido n ucleico de la invención puede ser incorporado en una asociación operativa dentro de un vector de expresión que se puede repetir el cual puede ser entonces introducido dentro de una célula huésped de mamífero competente para producir la proteína de fusión basada en interferón-alfa. La proteína de fusión basada en interferón-alfa resultante es producida de manera eficiente y secretada desde una célula huésped de mamífero. La proteína de fusión basada en interferón-alfa puede ser recolectada de un medio de cultivo sin lisar la célula huésped de mam ífero. El producto de la proteína puede ser probado por su actividad y/o purificado utilizando los reactivos comunes que se deseen , y/o disociada del socio de fusión , todo utilizando técn icas convencionales. En otro aspecto, la presente invención proporciona proteínas de fusión que contienen interferón-alfa . Las proteínas de fusión de la presente invención dem uestran propiedades biológicas mejoradas sobre la proteína interferón-alfa natu ral tales como una solubilidad aumentada, una vida promed io en el suero prolongada, y u n en lace aumentado a su receptor. Estas propiedades pueden mejorar de manera importante la eficacia clínica de la interferón-alfa. En una modalidad preferida, la proteína de fusión comprende, en una dirección terminal de N- a C-, una región de inmunoglobulina Fc e interferón-alfa , mientras q ue las otras porciones, por ejemplo, un sitio de disociación proteolítico, opcionalmente interpuesto entre la reg ión de inmunog lobu lina Fc y la interferón-alfa. La proteína de fusión resultante preferentemente sintetizada en una célula q ue g licosila la región Fc en los sitios normales de g licosilación , por ejemplo, los cuales existen generalmente en anticuerpos de plantilla. En otra modalidad , la proteína de fusión puede comprender una segunda proteína objetivo, por ejemplo, un fragmento maduro, un interferón-alfa de longitud completa, o un fragmento bioactivo de la misma. En este tipo de construcción, la primera y segunda proteínas objetivo pueden ser la misma proteína o diferentes. La primera y la segunda proteína objetivo pueden estar enlazadas ju ntas, ya sea directamente o por medio de un enlazador polipéptido. Alternativamente, ambas proteínas objetivo pueden estar enlazadas ya sea directamente o por medio de un enlazador polipéptido, a la región de inmunoglobulina Fc.

En el último caso, la primera proteína objetivo puede estar en lazada a un extremo term inal N- de la región de inm unoglobulina Fc, en la segu nda proteína objetivo puede estar enlazada al extremo terminal C- de la región de inmunog lobulina Fc. En otra modalidad , las dos proteínas de fusión se pueden asociar, ya sea, covalentemente, por ejemplo, por u n enlace de disulfu ro, un en lace polipéptido, o un agente de reticulación , o de una manera no covalente, para producir u na proteína d imérica . En una modalidad preferida , las dos proteínas de fusión están asociadas covalentemente por medio de por lo menos u no o más y preferentemente dos enlaces de disulfuro intercadena mediante residuos de cisteina, preferentemente localizados dentro de las regiones de bisagra de inmunoglobulina colocadas dentro de las regiones de inmunog lobu lina Fc de cada cadena . Otros objetos de la invención son proporcionar formas multivalentes y multiméricas de proteínas de fusión interferón-alfa y combinaciones de las mismas. En otro aspecto, la invención proporciona métodos de producción de una proteína de fusión que comprende una región de inmunoglobulina Fc y la proteína objetivo. El método comprende los pasos de (a) proporcionar u na célu la de mam ífero que contiene una molécula de ADN que codifica d icha proteína de fusión , ya sea con o sin una secuencia de señal, y (b) cultivar la célula de mam ífero para producir la proteína de fusión . La proteína de fusión resultante puede ser entonces cultivada, re-potenciada, de ser necesario, y purificada utilizando técnicas de purificación convencionales bien conocidas y utilizadas en la materia . j^ Suponiendo q ue la proteína de fusión comprende un sitio de disociación proteolítica colocado entre la región de inm unoglobulina Fc y la proteína objetivo, el objetivo puede ser disociado en la proteína de fusión utilizando enzimas proteolíticas convencionales y de ser necesario, purificada antes de su uso. Todavía en otra modalidad , la invención proporciona métodos para tratar cond iciones aliviadas por la interferón-alfa, o variantes activas de la misma mediante la administración a un mam ífero de una cantidad efectiva de interferón-alfa producida por u n método de la invención y/o u na construcción de fusión de la invención . La invención también proporciona métodos para el tratamiento de condiciones aliviadas por la interferón-alfa y variantes activas de la misma mediante la administración de u n ácido nucleico de la invención , por ejemplo, un "ADN , al natural" o u n vector q ue contiene un ADN o un ARN de la invención , a u n mam ífero que padece de la condición . En una modalidad preferida , las construcciones de la invención pueden ser utilizadas en el tratamiento de un padecimiento del hígado, en donde la interferón-alfa en virtud de la región de inmunoglobulina Fc llega a estar localizada dentro del h ígado. Las construcciones de la invención pueden ser particu larmente útiles en el tratam iento de padecimientos del h ígado los cuales incluyen , pero no están limitados a , enfermedades virales tales como la hepatitis B , hepatitis C o hepatitis D, cáncer del hígado así como otros tipos de cáncer que comprenden metástasis localizadas en el hígado.

Los anteriores y otros objetos, características y ventajas de la invención, podrán ser apreciados a partir de la descripción, los dibujos y las reivindicaciones siguientes. Breve Descripción de los Dibujos Las figuras del 1A al 1C, son ilustraciones esquemáticas de ejemplos no limitativos de las proteínas de fusión construidas de acuerdo con la invención. La figura 2, es una gráfica que muestra las curvas de supervivencia de los grupos de ratones SCID inyectados con suspensiones de células Daudi y luego tratados con huFc-hulFN-alfa. En el día 0, a los ratones se les inyectaron las células Daudi. En los días del 3 al 8, los grupos de 8 ratones fueron inyectados con PBS (diamantes), 30 µg de huFc-hulFN- alfa (cruces), o con 60 µg de huFc-hulFN-alfa (triángulos). La figura 3, es una gráfica que muestra los índices de crecimiento de los tumores subcutáneos de las células Daudi en los ratones SCID tratados con huFc-hulFN-alfa. Aproximadamente cuatro semanas antes del tratamiento, los ratones fueron inyectados subcutáneamente con células Daudi. Cuando habían proliferado las células Daudi inyectadas para formar tumores de 200 a 400 mm3, los ratones fueron clasificados en grupos de ocho y tratados durante seis días con una inyección de PBS (diamantes), 30 µg de huFc-hulFN-alfa en PBS (cuadrado), o 60 µg de huFc-hulFN-alfa en PBS (triángulos). Descripción Detallada de la Invención Muchas condiciones pueden ser aliviadas mediante la administración de interferón-alfa. Por ejemplo, tal y como se explicó anteriormente, las interferonas alfa 2a y 2b (marcas comerciales Roferon e Intron A, respectivamente) son útiles en el tratamiento de la hepatitis B, C y D crónicas, la condilomata acuminata (condiloma acumulado), sarcoma de Kaposi relacionado con el SIDA, leucemia de células velludas, melanoma maligno, carcinoma de célula basal, mieloma múltiple, carcinoma de célula renal, herpes I y II, varicela/herpes zoster, y micosis fungoides. Además, se han realizado estudios para evaluar la eficacia del interferón-alfa en el tratamiento del el cáncer de la próstata, y la leucemia mielógena crónica. Para el tratamiento de la hepatitis, por ejemplo, puede ser particularmente útil tener una forma de interferón-alfa la cual está concentrada en el hígado. De este modo, la concentración de interferón-alfa en otros tejidos puede ser minimizada, reduciendo de este modo los efectos colaterales. El tejido del hígado es el sitio principal para la remoción de los complejos inmunes solubles, y los receptores Fc son abundantes en los macrófagos del hígado (células de Kupffer) (Benacerraf, B. et al., (1959) J. IMMUNOL. 82: página 131; Paul, W.E. (1993) FUNDAMENTALS OF IMMUNOLOGY, 3ra. ed. capítulo 5: páginas 113 a 116). Por consiguiente, fusionando la interferón-alfa a una región de inmunoglobulina Fc, la molécula de interferón-alfa puede ser enviada preferentemente al tejido del hígado en relación con la misma molécula de interferón-alfa que carece de la región de inmunoglobulina Fc. El tipo IgG del anticuerpo que tiene la afinidad más alta para los receptores Fc son los lgG1. Sin embargo, en contraste, por ejemplo el lgG4 tiene una afinidad por aproximadamente 10 veces menor para el receptor 1 de Fc gama (Anderson y Abraham (1980) J. IMMUNOL. 125: página 2735; Woof et al., (1986) Mol. IMMUNOL. 23: página 319). El Fc-gama 1 proveniente del lgG1 cuando es colocado en el término C de un ligante, puede portar la citotoxicidad transportada por la célula dependiente del anticuerpo (ADCC) contra la célula que expresa un receptor para dicho ligante. Además, el Fc-gama 1, cuando se presenta en el término C del ligante, puede portar el enlace C1q del complemento de fijación dirigido contra las células que expresan un receptor para dicho ligante. En contraste, con el lgG1, el lgG4 no fija de manera efectiva el complemento. Esto ha conducido a la propuesta de que un interferón-alfa de terminal N podría ser fusionado como una región Fc de terminal C proveniente del lgG4 (Chang, T. W. et al., Patente Norteamericana No. 5,723,125). Sin embargo, cuando la región Fc del lgG4 está separada de la región Fab, el Fc del lgG4 fija el complemento así como la región Fc del lgG1 (Isenman, D. E. et al., (1975) J. IMMUNOL. 114: página 1726). Basados en este resultado y en el hecho de que las secuencias Fc del lgG1 e lgG4 son bastantes similares, sin desear estar comprometidos por la teoría, se tiene contemplado que la región Fab del lgG4 bloquea estericamente el enlace C1q y complementa la fijación debido a la región de bisagra que conecta el Fab de lgG4 y las regiones Fc es más corta que la bisagra del IgG 1. Si la región Fab voluminosa grande del lgG4 es reemplazada por una molécula pequeña, tal como una interferón-alfa, y el interferón-alfa y la región Fc son conectados por un enlazador flexible, se tiene contemplado que dicha fusión de interferón-alfa-Fc-gama fijaría el complemento cuando está enlazado en las células portadoras de los receptores interferón-alfa. El efecto de citotoxicidad debido a la función de una citocina de la terminal N y u na región Fc de la terminal C es bien conocido. Por ejemplo, la fusión de la citocina de interleukin-2 (I L-2) a una región Fc crea una molécula que es capaz de fijar el complemento y ocasionar la lisis de la célula portadora del receptor I L-2 (Landolfi, N . F . , Patente Norteamericana No. 5,349,053) . Las fusiones en la que una reg ión Fc es colocada en el término N de un ligante (denom inado 'inmunofusinas' de fusiones 'Fc-X' , en donde X es un ligante tal como Interferón-alfa) tienen un número de propiedades biológicas distintivas ventajosas (Lo et al. , Patentes Norteamericanas Nos. 5,726,044 y 5,541 ,087; Lo et al. , (1 998) PROTEI N ENGI N EERI NG 1 1 : página 495) . En particu lar, dichas proteínas de fusión todavía se enlazan con los receptores Fc importantes en la superficie celular. Sin embargo, cuando el ligante se en laza a su receptor en u na superficie celular, la orientación de la región Fc es alterada, y las secuencias q ue transmiten el ADCC y la fijación de complemento parecen ser obstruidas. Como resultado, la región Fc en una molécula Fc-X no transmite el ADCC o la fijación de complemento de manera efectiva. De este modo, las fusiones Fc-X se esperan que tengan las virtudes de la vida promedio en el suero aumentada, la concentración relativa en el h ígado con pocos efectos dañinos del ADCC y la fijación del complemento. Una característica de las construcciones Fc-X de la invención es concentrar la proteína objetivo en este caso la interferón-alfa en el ,» &J l . ^nn hígado. La región Fc de las cadenas gama l y gama3 muestran la afin idad más alta para el receptor de Fc, mostrando la cadena gama4 una afinidad reducida y la cadena gama2 una afinidad extremadamente baja para el receptor Fc. Por consiguiente, las reg iones Fc derivadas de las cadenas gama l o gama3 preferentemente son utilizadas en las construcciones Fc-X de la invención debido a que tiene las afinidades más altas para los receptores Fc y por lo tanto pueden enviar la interferón-alfa de preferencia a los tejidos del hígado. Esto es el contraste con una proteína X-Fc, por ejemplo, una proteína de fusión interferón-alfa-Fc en donde la ventaja potencial de concentraciones del h ígado debe de ser equilibrada por el hecho de que esta proteína de fusión puede transmitir fusiones de realizador, es decir la fijación del complemento y ADCC, dirig idas contra las células portadoras de los receptores para la interferón-alfa. Por lo tanto la invención proporciona las secuencias de ácido nucleico q ue cod ifican y las secuencias de am inoácidos que definen las proteínas de fusión que comprenden u na región de inmunog lobu lina Fc y por lo menos una proteína objetivo, a la que nos referimos en la presente descripción como interferón-alfa. En los dibujos de las fig uras del 1 A al 1 C, se ilustran tres modalidades de ejemplo de las construcciones de proteína que incorporan la invención . Debido a que se prefieren las construcciones diméricas, todas están ilustradas como d ímeros reticulados por un par de enlaces disulfuro entre las cisteinas en las unidades adyacentes. En los dibujos, los enlaces de disulfuro están ilustrados como que enlazan juntas dos reg iones Fc de inmunoglobu lina de cadena pesada med iante una región de bisagra de inmunoglobulina _fc_Éii4tet- dentro de cada cadena pesada , y por lo tanto son características de las formas naturales de estas moléculas. Aunque las construcciones que incluyen la región de bisag ra de Fc son las preferidas y han sido mostradas como prometedoras como agentes terapéuticos, la invención contempla q ue la reticulación en otras posiciones pueden ser seleccionadas según se desee. Además, bajo algunas circunstancias, los d ímeros o multímeros útiles en la práctica de la invención pueden ser producidos por la asociación no covalente, por ejemplo, por interacción hidrófobica. Como las construcciones homod iméricas son modalidades importantes de la invención , los dibujos ilustran dichas construcciones. Sin embargo, deberá apreciarse que las estructu ras heterodiméricas son útiles también en la práctica de la invención . La figura 1 A ilustra una construcción dimérica producida de acuerdo con los principios aqu í establecidos (ver, Ejemplo 1 ) . Cada monómero del homod ímero comprende u na región de inmunog lobulina Fc 1 que incluye una región de bisagra, u n campo CH2 y un campo CH3. Enlazadas directamente, por ejemplo, mediante un enlace de polipéptido, a un término C de la región Fc se encuentra la interferón-alfa 2. Deberá q uedar entendido que la región Fc puede ser enlazada a una proteína objetivo mediante un enlazador polipéptido (no mostrado) . Las figuras 1 B y 1 C ilustran las construcciones de proteína de la invención las cuales incluyen como proteína objetivo proteína de interferón-alfa plurales acomodadas en tándem y conectadas por un en lazador. En la figura 1 B , la proteína objetivo comprende interferón-alfa 2 de longitud total, un enlazador polipéptido hechos de residuos de glicina y serina 4, una variante activa de interferón-alfa 3. La figura 1 C difiere de la construcción de la fig ura 1 B en que la mayor parte del campo de la proteína de la terminal C comprende una segunda copia de longitud total de la interferón-alfa 2. Au nque las figuras del 1 A al 1 C representan construcciones Fc-X, en donde X es la proteína objetivo, está contemplado que las proteínas útiles de la invención también pueden ser ilustradas por la fórmu la X-Fc-X, en donde las X' pueden representar las mismas proteínas objetivo o proteínas objetivo diferentes. Como se usa en la presente descripción , el término "enlazador polipéptido" se entiende que sign ifica una secuencia de polipéptidos q ue en lazan ju ntas dos proteínas que en la natu raleza no están enlazadas juntas de manera natu ral. El enlazador de polipéptido comprende preferentemente u na plu ralidad de aminoácidos tales como alanina, g licina y serina o combinaciones de dichos aminoácidos. De preferencia , el enlazador polipéptido comprende una serie de péptidos de glicina y serina de aproximadamente 1 0 a 1 5 resid uos de longitud . Ver por ejemplo, la Patente Norteamericana, No. 5,258,698. Sin embargo, se tiene contemplado que la longitud óptima del enlazador y la composición de aminoácidos pueden ser determinadas por experimentación de rutina. Como se usa en la presente descripción , el térm ino "multivalentes" se refiere a una molécula recombinante que incorpora dos o más segmentos biológicamente activos. Los fragmentos de proteína que forman la molécula multivalente pueden estar enlazados opcionalmente a través de u n enlazador polipéptido el cual enlaza las partes constituyentes y permite que cada u na funcione de manera independiente. Como se usa en la presente invención , el término "bivalente" se refiere a una molécula recombinante m ultivalente que tiene la config uración Fc-X ó X-Fc, en donde X es la molécula objetivo. Las regiones de inmunoglobulina Fc se pueden asociar, por ejemplo, mediante enlaces intercadena de disulfuro, para producir el tipo de construcciones ilustradas en la fig ura 1 A. Si la construcción de fusión de la invención tiene la configuración Fc-X-X, la molécu la Fc resu ltante se ilustra en la figura 1 C . Las dos proteínas objetivo pueden estar enlazadas a través de un en lazador péptido. Las construcciones del tipo mostrado en la fig ura 1 A pueden aumentar la afinidad aparente de en lace entre la molécula objetivo y su receptor. Como se usa en la presente descripción , el térm ino "multimérico" se refiere a una asociación estable de dos o más cadenas de polipéptidos ya sea covalentemente, por ejemplo, por med io de u na interacción covalente, por ejemplo un enlace de disulfuro, o de una manera no covalente, por ejemplo, por medio de la interacción hidrófobica . El térm ino multímero se pretende que comprenda ambos homomultímeros, en donde las subunidades son las mismas, así como heteromu ltímeros, en donde las subunidades son diferentes. Como se usa en la presente descripción , el término "dimérico" se refiere a una molécula multimérica específica en donde dos cadenas de polipéptidos están asociadas de manera estable a través de interacciones covalentes o no covalentes. Dichas construcciones se muestran esquemáticamente en la figura 1A. Debe quedar entendido, que la región de inmunoglobulina Fc que incluye por lo menos una porción de la región bisagra, un campo CH2 y un campo CH3 generalmente forma un dímero. Se conoce que muchos ligantes de proteínas se enlazan a sus receptores en la forma de un dímero. Si el ligante de proteína X se dimépza de manera natural, la porción X en una molécula Fc-X se dimerizará en un grado mayor, ya que el proceso de dimerización es dependiente de la concentración. La proximidad física de las dos porciones X conectadas por Fc varía la dimepzación un proceso intramolecular, cambiando de manera importante el equilibrio a favor del dímero, mejorando su enlace al receptor. Como se usa en la presente descripción, se entiende que el término "interferón-alfa" significa no solamente la proteína interferón-alfa madura de longitud total, por ejemplo, la interferón-alfa 1 humana (SEQ ID NO: 8), interferón-alfa 2 humana (SEQ ID NO: 9), interferón-alfa 4 humana (SEQ ID NO: 10), interferón-alfa 5 humana (SEQ ID NO: 11), interferón- alfa 6 humana (SEQ ID NO: 12), interferón-alfa 7 humana (SEQ ID NO: 13), interferón-alfa 8 humana (SEQ ID NO: 14), interferón-alfa 10 humana (SEQ ID NO: 15), interferón-alfa 14 humana (SEQ ID NO: 16), interferón- alfa 16 humana (SEQ ID NO: 17), interferón-alfa 17 humana (SEQ ID NO: 18), interferón-alfa 21 humana (SEQ ID NO: 19), interferona delta-1 humana (SEQ ID NO: 20), ll-l (interferón omega-1) (SEQ ID NO: 21); e interferón-alfa 1 de ratón (SEQ ID NO: 22), interferón-alfa 2 de ratón (SEQ ID NO: 23), interferón-alfa 4 de ratón (SEQ ID NO: 24), interferón- alfa 5 de ratón (SEQ ID NO: 25), interferón-alfa 6 de ratón (SEQ ID NO: 26), interferón-alfa 7 de ratón (SEQ ID NO: 27), interferón-alfa 8 de ratón (SEQ I D NO: 28) , e interferón-alfa 9 de ratón (SEQ I D NO : 29), pero también las variantes y fragmentos bioactivos de los m ismos. Las secuencias conocidas de interferón-alfa pueden ser encontradas en Gen Bank. El término fragmento bioactivo se refiere a cualq uier fragmento de proteína interferón-alfa que tiene por lo menos un 50%, más preferentemente por lo menos el 70% , y aú n más preferentemente por lo menos el 90% de actividad biológica de la proteína interferón-alfa de plantilla humana de la SEQ I D NO: 2, según sea determ inando utilizando u n ensayo de in hibición de proliferación celular del Ejemplo 4. El término variantes incluye especies y variantes alélicas, así como otras variantes existentes en la naturaleza o que no ocu rren de manera natural , por ejemplo, generados por los protocolos de ingeniería genética que son por lo menos de un 70% similares ó 60% idénticas, más preferentemente por lo menos 75% similares ó 65% idénticas y aún más preferentemente por lo menos 80% similares o 70% idénticas a las proteínas de interferón-alfa h umanas mad uras descritas en la SEQ I D NO . : 2. Para determinar si un polipéptido cand idato tiene una similitud o identidad de porcentaje de requisitos para un polipéptido de referencia, las secuencias de aminoácidos candidato, y las secuencias de aminoácidos de referencias son alineadas primero utilizando el logaritmo de programación dinám ica descrito en la publicación de Sm ith y Waterman (1 981 ) J . MOL. BI OL. 147: pág inas 1 95 a 1 97, en combinación con u na matriz de substitución BLOSU M62 descrita en la figura 2 de Henikoff y Henikoff ( 1 992) , en su publicación "Matrices de substitución de aminoácidos provenientes de bloques de proteína" , ("Amino acid substitution matrices from protein blocks"), PROC. NATL. ACAD. SCI . E . U .A. 89: páginas 1 091 5 a 1 091 9. Para la presente invención , u n valor apropiado o u na penalidad de inserción de abertura es -1 2, y un valor apropiado para la penalidad de extensión de abertura es de -4. Los prog ramas de computo que realizan las alineaciones utilizando el algoritmo de Smith-Waterman y la matriz BLOSU M62 , tales como la suite de programa GCG (Oxford Molecular Group, Oxford , I nglaterra) , se pueden conseguir en el mercado y son utilizados ampliamente por aquellos expertos en la técnica. U na vez que se ha hecho la alineación entre las secuencias candidato y de referencia, se puede calcular u na calificación de porcentaje de similitud. Los aminoácidos individuales de cada secuencia son comparados consecutivamente de acuerdo con su similitud uno con el otro. Si el valor en la matriz BLOSUM62 correspondiente a los dos aminoácidos alineados es cero o un número negativo, la calificación de similitud en forma de pares es cero; por el contrario, la calificación de similitud en forma de pares es 1 .0. La calificación de similitud simple en la suma de las calificaciones de similitud en forma de pares de los am inoácidos alineados. La calificación simple entonces es normalizada dividiéndola entre el número de aminoácidos en la secuencia más pequeña de la secuencia candidato o referencia . La calificación natural normalizada es la similitud del porcentaje. Alternativamente, para calcular una cantidad porcentual, los aminoácidos alineados de cada secuencia % son comparados nuevamente de manera consecutiva . Si los aminoácidos no son idénticos, la calificación de identidad de forma de par es cero; de otro modo, la calificación de identidad en forma de par es 1 .0. La calificación de identidad natural es la suma de los aminoácidos alineados idénticos. La calificación natu ral es normalizada entonces d ividiéndola entre el n úmero de aminoácidos en la secuencia más pequeña de las secuencias candidato o de referencia. La calificación natural normalizada es la identidad porcentual. Las inserciones o eliminaciones son ignoradas para propósitos de cálculo de la similitud e identidad porcentual. Por consig uiente, las penalizaciones de abertura no son usadas en este cálculo, au nq ue son usadas en la alineación in icial. Las variantes también pueden incluir otras proteínas de interferón- alfa mutantes que tienen actividad sim ilar a la interferón-alfa. Las especies y variantes alélicas, incluyen , pero no están limitadas a secuencias de interferón-alfa humana y de ratón . Las variantes de interferón-alfa humanas se ilustran en las SEQ I D NOS : 8-21 , y las variantes de interferón-alfa de ratón se ilustran en las SEQ I D NOS: 22- 29. Además, la secuencia de interferón-alfa puede comprender una porción o toda la secuencia de consenso establecida en la SEQ I D NO: 7, en donde la interferón-alfa tiene por lo menos 50% , más preferentemente por lo menos 70%, y aún más preferente por lo menos 90% de la actividad biológica de la interferón-alfa humana madu ra de la SEQ I D NO: 2 , tal y como se determina utilizando el ensayo de inhibición de proliferación celular del Ejemplo 4.

Estas proteínas tienen propiedades de purificación y otras propiedades biológicas muy similares. En particular, las propiedades de manipulación del ADN, expresión de la proteína de fusión y purificación de la proteína de fusión de las proteínas Fc-lnterferón-alfa son extremadamente similares. Por ejemplo, la interferón-alfa 2a humana y la interferón-alfa 2b humana difieren solamente por un aminoácido, mientras que la interferón-alfa 2a tiene un residuo de lisina en la misma posición que la interferón-alfa 2b tiene un residuo de arginina. La interferón-alfa 2a humana y la interferón-alfa 2b humana tiene propiedades extremadamente similares y son intercambiables para todos los propósitos conocidos. La estructura tri-dimensional de la interferón-alfa ha sido solucionada por cristalografía de rayos X (Ramaswamy et al., (1986) STRUCTURE 4: página 1453). Las secuencias de las proteínas de interferón-alfa son tan similares que la estructura determinada es considerada como una estructura para la familia completa de proteínas. La estructura tri-dimensional de interferón-alfa, como la de interferón-beta, es un dímero con ion de zinc en la interfase del dímero. Sin embargo, en la solución, la interferón-alfa se comporta como un monómero. Se ha propuesto, por analogía con la citocina IL-6 y otros ligantes de proteína, que la interferón-alfa se puede dimerizar en el enlace al receptor (Radhakrishnan, R. et al., (1996) STRUCTURE 4: página 1453; Karpusas, M. et al., (1997) PROC. NAT. ACAD. SCI. E.U.A. 94: página 11813).

La dimerización de un ligante puede aumentar la afinidad de enlace aparente entre el ligante y su receptor. Por ejemplo, si una porción de interferón-alfa de u na proteína de fusión Fc-l nterferón-alfa se puede enlazar a un receptor en u na célula con cierta afinidad , la segu nda 5 porción de interferón-alfa de la misma proteína de fusión Fc-lnterferón- alfa se puede enlazar a un seg undo receptor en la misma célula con una avidez m ucho mayor (afinidad aparente) . Esto puede ocu rrir debido a la proximidad física de la segunda porción de interferón-alfa al receptor después de que la primera porción interferón-alfa ya se ha enlazado. En 10 el caso de un enlace de anticuerpo a un antígeno, la afin idad aparente puede ser aumentada en por lo menos diez mil veces, por ejemplo, 1 04. Cada subun idad de proteína, por ejemplo "X" tienen su propia función independiente de modo que en una molécula multivalente, las funciones de las subunidades de proteína pueden ser aditivas o sinérgicas. De este 15 modo, la fusión de la molécula d imérica Fc normalmente a la interferón- alfa puede aumentar la actividad de la interferón-alfa. Por consiguiente, las construcciones del tipo mostrado en la figura 1 A pueden aumentar la afinidad de enlace aparente entre la interferón-alfa y su receptor. Las proteínas objetivo aqu í descritas son expresadas como 20 proteínas de fusión con una región Fc de una inmu noglobulina. Como es conocido, cada región de cadena pesada constante de inmunoglobulina comprende cuatro o cinco campos. Los campos son denominados consecutivamente de la manera siguiente: CH 1 -bisag ra-CH2-CH3(-CH4) Las secuencias de ADN de los campos de cadena pesada tienen una 25 homología cruzada entre las clases de inmu noglobulina, por ejemplo, el campo CH2 de IgG es homólogo al campo CH2 de IgA e IgD, y para el campo CH3 de IgM e IgE. Como se usa en la presente descripción, el término "región de inmunoglobulina Fc" se entiende que significa la porción de la terminal carboxilo de una región de cadena constante de inmunoglobulina, preferentemente una región de cadena pesada constante de inmunoglobulina, o una porción de la misma. Por ejemplo, una región de inmunoglobulina de Fc puede comprende 1) un campo CH1, un campo CH2, y un campo CH3, 2) un campo CH1 y un campo CH2, 3) un campo CH1, y un campo CH3), 4) un campo CH2, y un campo CH3, ó 5) una combinación de dos o más campos y una región de bisagra de inmunoglobulina. En la modalidad preferida la región de inmunoglobulina Fc comprende por lo menos una región de bisagra de inmunoglobulina del campo CH2 y el campo CH3, y preferentemente carece del campo CH1. La clase de inmunoglobulina actualmente preferida de la cual se deriva la región de cadena pesada constante, es IgG (Ig?) (y las subclases ? 1,2,3, ó 4). Las secuencias de nucleótidos o aminoácidos de la Fc ?-1 humanas se establecen en la SEQ ID NOS: 3 y 4. Se pueden utilizar otras clases de inmunoglobulina IgA (Iga), IgD (Igd), IgE (Ige) e IgM (Igµ). La selección de las regiones constantes de cadena pesada de inmunoglobulina apropiadas se explica con mayor detalle en las Patentes Norteamericanas Nos. 5,541,087, y 5,726,044. La selección de las secuencias de región de cadena pesada constante de inmunoglobulina particulares provenientes de ciertas clases y subclases de inmunoglobulina para lograr un resultado particular se considera que se Bá tftMjk£g^ encuentra dentro del nivel de u n experto en la técn ica, la porción de la construcción de ADN que codifica la región de inmunoglobulina Fc comprende preferentemente por lo menos una porción de un campo bisagra, y preferentemente por lo menos u na porción de u n campo CH3 de Fc? o campos homólogos en cualquiera de IgA, Ig D, Ig E ó IgM . Dependiendo de la aplicación, se pueden utilizar genes de región constante de especies diferentes a los humanos, por ejemplo de ratón ó rata. La región de inmunoglobulina Fc utilizada como un socio de fusión en la construcción de ADN generalmente puede ser proveniente de cualquier especie de mamífero. En donde no se desea producir una respuesta inmunológica en la célula h uésped o el animal contra la reg ión Fc, la región Fc puede ser derivada de las mismas especies que la célula huésped o animal. Por ejemplo, se puede utilizar u na reg ión de inm unog lobulina h umana cuando el animal o célu la huésped es un humano, de modo similar, se puede utilizar una región de inmunoglobulina Fc múrido en donde el animal huésped o célula será un ratón . Las secuencias de ácido nucleico cod ificadoras y las secuencias de aminoácidos que definen una región de inm unoglobulina Fc humana útiles en la práctica de la presente invención , se establecen en las SEQ I D NOS: 3 y 4. Sin embargo, se tiene contemplado que son útiles otra secuencias de la región de inmunoglobulina Fc en la práctica de la invención , y que se pueden encontrar por ejemplo, por aquellas mod ificadas por las secuencias de n ucleótidos descritas en las bases de datos del Genbank y/o EMBL, por ejemplo, AF045536J (Macaca fuscicularis), AF045537.1 (Macaca mulatta), AB016710 (Félix catus), K00752 (Oryctolagus cuniculus), U03780 (Sus scrofa), Z48947 (Camelus dromedarius), X62916 (Bos taurus), L07789 (Mustela vison), X69797 (Ovis aries), U17166 (Cncetulus migratorius), X07189 (Rattus rattus), AF57619J (Trichosurus vulpécula), ó AF035195 (Monodelphis domestica), cuyas descripciones están incorporadas a la presente descripción como referencia. Además, está contemplado que la substitución o la eliminación de aminoácidos dentro de las regiones de cadena pesada constante de inmunoglobulina pueden ser útiles en la práctica de la invención. Un ejemplo puede incluir la introducción de substituciones de aminoácidos en la región CH2 superior para crear una variante Fc con una afinidad reducida para los receptores Fc (Colé et al, (1997) J. IMMUNOL 159: página 3613). Un experto en la técnica puede preparar dichas construcciones utilizando técnicas conocidas en biología molecular. El uso de la Fc?1 humano como la secuencia de la región Fc tiene varias ventajas. Por ejemplo, si la proteína de fusión Fc va a ser usada como un biofarmacéutico, el campo Fc?1 puede conferir las actividades de la función realizadora a la proteína de fusión. Las actividades de la función realizadora incluyen las actividades biológicas tales como transferencia de la placenta y vida promedio en el suero aumentada. La región de inmunoglobulina Fc también proporciona la detección por medio de un ELISA anti-Fc y la purificación a través del enlace a la proteína A de Staphylococcus aureus ("Proteína A"). Sin embargo, en ciertas aplicaciones puede ser deseable eliminar las funciones realizadoras J. 1 t . í específicas de la región de inmunog lobu lina Fc, tales como el enlace al receptor Fc y/o la fijación del complemento. Debe quedar entendido que la presente invención explota las metodolog ías convencionales del ADN recombinante para generar las proteínas de fusión Fc útiles en la práctica de la m isma. Las construcciones de fusión Fc son generadas preferentemente en el nivel de ADN , y los ADNs resultantes integrados en vectores de expresión y expresados para producir las proteínas de fusión de la invención. Como se usa en la presente descripción el término "vector" se entiende que sig nifica cualquier ácido nucleico que comprende u na secuencia de nucléotidos competente para ser incorporada dentro de una célu la huésped y para ser recombinada con e integrada dentro del genoma de la célula huésped, o para duplicarse de manera autónoma como un episoma. Dichos vectores incluyen ácidos nucleicos lineares, plásmidos, fagémidos, cósmidos, vectores de ARN , vectores virales y sim ilares. Los ejemplos no limitativos de los vectores virales incluyen un retrovirus, un adenovirus, y un virus asociado adeno. Como se usa en la presente descripción el término "expresión del gen" o "expresión" de una proteína objetivo se entiende que significa la transcripción de la secuencia de ADN , la traducción de la transcripción de mARN y la secreción de un prod ucto de la proteína de fusión Fc. Un vector de expresión útil es pdCs útil (Lo et al, (1988) PROTEIN ENG I N EERI NG 1 1 : página 495, en el cual la transcripción del gen Fc-X utiliza un mejorador/promotor del citomegalovirus h umano y la señal de poliadenilación SV40. La secuencia mejoradora o promotora del citomegalovirus humano utilizada fue derivada de los nucléotidos -601 a +7 de la secuencia provista en el artículo de Boshart et al, (1985) CELL 41: página 521. El vector contiene también el gen de reductasa de «&* dihidrofolato mutante como un marcador de selección (Simonsen y # Levinson (1983) PROC. NAT. ACAD. SCI. EUA 80: página 2495). Una célula huésped apropiada puede ser transformada o transfectada con la secuencia de ADN de la invención, y utilizada para la expresión y/o secreción de la proteína objetivo. Las células huésped preferidas actualmente para usarse en la invención incluyen células de 10 hibridoma inmortal, células de mieloma NS/O, células 293, células de ovario de hámster chino, células HELA y células COS. Un sistema de expresión que ha sido utilizado para producir la expresión de alto nivel de las proteínas de fusión en las células de mamíferos es una construcción de ADN que codifica, en la dirección 5' a 15 3' un cartucho de secreción, incluyendo una secuencia de señal y una región de inmunoglobulina Fc, y una proteína objetivo. Se han expresado exitosamente varias proteínas objetivo en dicho sistema e incluyen, por ejemplo, IL2, CD26, Tat, Rev, OSF-2, ßlG-H3, Receptor IgE, PSMA, y gp120. Estas construcciones de expresión se describen en las Patentes 20 Norteamericanas Nos.5,541,087 y 5,726,044 concedidas a Lo et al. Como se usa en la presente descripción, se entiende que el término "secuencia de señal" significa un segmento el cual dirige la secreción de una proteína de fusión interferon alfa y posteriormente es disociado después de la traducción en la célula huésped. La secuencia de 25 señal de la invención, en un polinucleótido el cual codifica una secuencia de aminoácido la cual inicia el transporte de la proteína a lo ancho de la membrana del retículo endoplásmico. La secuencias de señal que son útiles en la invención incluyen secuencias de señal de anticuerpo de cadena ligera , por ejemplo, anticuerpo 14.1 8 (Gillies et al, ( 1 989) J . I MMUNOL. METH . 125: página 191 ), las secuencias de señal de anticuerpo de cadena pesada , por ejemplo, la secuencia de señal de anticuerpo de cadena pesada MOPC 141 (Sakano et al , ( 1 980) NATU RE 286: pág ina 5774) y otras secuencias de señal las cuales son conocidas en la técnica , (ver por ejemplo, la publicación de Watson ( 1 984) N UCLEI C ACI DS RESEARCH 12 : pág ina 5145) . Las secuencias de señal han sido bien caracterizadas en la técnica y es conocido que generalmente contienen de 16 a 30 residuos de aminoácidos y pueden contener residuos de am inoácidos mayores o menores. U n péptido de señal típico consiste de tres regiones: una región básica de terminal N , una región central hidrofóbica y u na región más polar de la terminal C . La región central hidrofóbica contiene de 4 a 1 2 residuos hidrofóbicos que anclan el péptido de la señal a lo ancho de la bicapa lípida de la membrana durante el transporte del polipéptido naciente. Después de la iniciación , el péptido de señal es generalmente disociado dentro del lumen del retículo endoplásmico por enzimas celulares conocidas como peptidasas de señal. Los sitios de disociación potenciales de los péptidos de señal generalmente siguen la "regla (-3, -1 )". De este modo, un péptido de señal tiene resid uos de aminoácidos pequeños neutrales en las posiciones -1 y -3, y carecen de residuos de prolina en esta región . La peptidasa de señal disociará dicho péptido de señal entre los aminoácidos -1 y +1 . De este modo, la secuencia de señal puede ser disociada del término amino de la proteína de fusión du rante la secreción . Esto da como resultado la secreción de una proteína de fusión Fc consistente de la región de inmunoglobulina Fc y la proteína objetivo. U na explicación detallada de las secuencias del péptido de señal es proporcionada por von Heijne (1986) N UCLEIC AC I DS RES. 14: página 4683. Aquellos expertos en la técnica apreciarán , la adaptabilidad de la secuencia de señal particular para usarse en el cartucho de secreción , la cual puede req uerir alguna experimentación de rutina. Dicha experimentación incluirá la determ inación de la habilidad de la secuencia de señal para dirigir la secreción de u na proteína de fusión Fc y también u na determ inación de la configuración óptima, génom ica o cADN de la secuencia para ser usada con el objeto de lograr la secreción eficiente de las proteínas de fusión Fc. Ad icionalmente, un experto en la técnica tiene la capacidad para crear un péptido de señal sintético siguiendo las reglas presentadas por von Heij ne, al que nos referimos anteriormente y probando la eficacia de dicha secuencia de señal sintética por medio de experimentación de rutina. A una secuencia de señal nos podemos referir también como un "péptido de señal", "secuencia principal" o "péptidos principales". En la presente descripción, nos podemos referir algunas veces a la fusión de la secuencia de señal y la reg ión de inmu noglobulina Fc como el cartucho de secreción . U n cartucho de secreción de ejemplo útil en la práctica de la invención , es un polinucleótido que codifica en la dirección 5' a 3' , una secuencia de señal de un gen de inmu noglobu lina de cadena ligera y una región Fc?1 del gen de inmunoglobulina ?1 humano. La región Fc?1 del gen de inm unoglobulina Fc?1 incluye preferentemente por lo menos una porción del campo de bisagra de inmunoglobulina y por lo menos el campo CH3, y más preferentemente por lo menos una porción del campo de bisagra y el campo CH2 y el campo CH3. Como se usa en la presente descripción la "porción" de la reg ión de bisag ra de inmunoglobu lina se entiende que sig nifica una porción de la bisagra de inmunoglobu lina q ue contiene por lo menos uno, y preferentemente dos residuos de cisteína, capaces de formar enlaces de disulfuro intercadena. El ADN que codifica el cartucho de secreción , puede estar en su configuración genómica o en su configu ración de cADN . Bajo ciertas circu nstancias, puede ser provechoso producir la región Fc de secuencias de cadena pesada de inmunoglobulina Fc?2 humana. Aunque las funciones Fc basadas en las secuencias de inmunoglobulina ?1 y ?2 h umana se comportan de u na manera similar en los ratones, las fusiones Fc basadas en las secuencias ?2 pueden mostrar farmacocinéticas superiores en los humanos. En otra modalidad , la secuencia de ADN cod ifica un sitio de disociación proteolítico interpuesto entre el cartucho de expresión y la proteína objetivo. El sitio de disociación , proporciona la disociación proteolítica de la proteína de fusión codificada separando de este modo el campo Fc de la proteína objetivo. Como se usa en la presente descripción "sitio de disociación proteolítica" se entiende q ue significa secuencias de aminoácidos las cuales son preferentemente disociadas por una enzima , J -A. j¡?±. proteolítica u otros agentes de disociación proteolítica. Los sitios de disociación proteolítica útiles incluyen las secuencias de aminoácidos las cuales son reconocidas por las enzimas proteolíticas tales como tripsina, plasmina y enterosinasa K. Muchos pares de sitios de disociación/agentes 5^ de disociación son conocidos (ver por ejemplo, la Patente Norteamericana No. 5,726,044) . X '**- Además , la substitución o eliminación de construcciones de estas regiones constantes, en las cuales uno o más residuos de aminoácidos de los campos de región constantes son substituidos o eliminados, también 10 podrían ser útiles. U n ejemplo sería introducir la substituciones de aminoácido en la región CH2 superior para crear una variante Fc con afinidad reducida para los receptores Fc (Colé et al, (1997) J IMMUNOL. 1 59: PÁG I NA 361 3) . Un experto en la técn ica pod rá preparar dichas construcciones utilizando técnicas de biolog ía molecu lar bien conocidas. 5 En los ejemplos aquí descritos, se produjeron n iveles altos de Fc- interferon-alfa . Los clones iniciales produjeron aproximadamente 50µg/m L de Fc-l nterferon-alfa los cuales podrían ser purificados fácilmente hasta la homogeneidad mediante cromatografía de afinidad de proteína A. Los n iveles de expresión frecuentemente pueden ser aumentados varias 0 potencias med iante la subclonación . Tal y como se manifestó anteriormente, se ha descubierto que cuando la I nterferon-alfa es expresada como moléculas Fc de fusión , se obtienen altos niveles de expresión , presumiblemente debido a que la porción Fc actúa como un vehículo, ayudando al polipéptido en el término C a potencia zarla 5 correctamente para que sea secretada de manera eficiente. Además , la región Fc es g licosilada y cargada ampliamente en el pH fisiológico, por lo tanto la región Fc puede ayudar a solubilizar las proteínas hidrofóbicas. Además de los altos niveles de expresión, las proteínas de fusión Interferon-alfa exhibieron vidas promedio en el suero más largas comparadas con la Interferon-alfa sola debido en parte a sus tamaños moleculares más g randes. Por ejemplo, la Fc-l nterferon-alfa tiene una vida promed io en circulación de 1 9.3 horas en los ratones (ver ejemplo 6) , como fue comparado con la vida promedio de 2 a 5 horas de la I nterferon-alfa (PHYSICIANS DESK REFERENCE , 50ava edición , 1 996: páginas 21 56 a 21 57 y 2364 a 2373) . La I nterferon-alfa, teniendo un peso molecular de aproximadamente 1 9 kD, es lo suficientemente pequeña para ser despejada eficientemente por medio de la filtración renal. En contraste, la Fc-l nterferon-alfa tiene un peso molecular de aproximadamente 1 00 kD ya que existen dos porciones de interferon-alfa enlazadas a cada molécula Fc (por ejemplo, dos interferon-alfas ya q ue el Fc se encuentra en su forma dimérica). Dicha estructura dimérica puede exh ibir una afin idad de enlace más alta al receptor de ¡nterferon-alfa. Como la actividad de la interferon-alfa es transmitida por el receptor, las proteínas de fusión interferon-alfa bivalentes serán potencialmente más eficaces que la interferon-alfa por sí misma. Adicionalmente, se conoce q ue muchos ligantes de proteína se enlazan a sus receptores en la forma de un dímero. Como la interferon-alfa pertenece a u na clase de ligantes de proteína con constantes de dimerización débiles, las restricciones físicas impuestas por el Fc en la interferon-alfa harían de la dimerización un proceso intramolecu lar, cambiando de este modo el equ ilibrio en favor del d ímero y mejorando su enlace a sus receptores. También se pueden introducir residuos de cisteína mediante la tecnolog ía estándar de ADN recombinante al 5 monómero en los lugares apropiados para estabilizar el dímero mediante la formación de un enlace de disulfuro covalente. Las proteínas de fusión de la invención proporcionan varios beneficios clínicos importantes. Tal y como se demostró en las pruebas de la actividad biológica en la célula Daudi y los ensayos de efecto 10 citopático (Ejemplo 4) , la actividad biológ ica de la Fc-l nterferon-alfa es sig nificativamente más alta que la de la interferon-alfa. Otra modalidad de la presente invención proporciona construcciones que tienen varias conformaciones estructurales, por ejemplo, construcciones bivalentes o multivalentes, construcciones 15 diméricas o multiméricas, y combinaciones de las mismas . Dichas conformaciones fu ncionales de las moléculas de la invención permiten el efecto sinérgico de la interferon-alfa y otras proteínas antivirales y anticáncer para que sean exploradas en modelos de an imales. Un aspecto importante de la invención es que las secuencias y 20 propiedades de varias proteínas interferon-alfa y las codificaciones de ADN son bastante similares. En el contexto de las fusiones Fc-X, las propiedades de las proteínas interferon-alfa y la cod ificación de ADN son esencialmente idénticas de modo q ue se pueden utilizar u n conjunto de técnicas comunes para generar cualquier fusión de Fc-l nterferon-alfa 25 ADN , para expresar la fusión , para purificar la proteína de fusión y para , *a*m??*im ..... ... administrar la proteína de fusión para propósitos terapéuticos. La presente invención proporciona también métodos para la prod ucción de interferon-alfa de especies no h umanas como proteínas de fusión Fc. Las proteínas de fusión interferon-alfa no humanas son útiles para estud ios preclínicos de la interferon-alfa debido a la eficacia y los estudios de toxicidad de un fármaco de proteína deben de ser realizados en sistemas de modelos animales antes de probarlos en seres humanos. U na proteína humana puede no funcionar en un modelo de ratón ya que la proteína puede producir una respuesta inm unológ ica y/o exhibir farmacocinéticas diferentes, alterando los resultados de la prueba. Por lo tanto, la proteína de ratón equ ivalente es el mejor subrogado para la proteína humana para las pruebas en un modelo de ratón . La presente invención proporciona métodos de tratamiento para diferentes cánceres, enfermedades virales, otras enfermedades, cond iciones relacionadas y causadas por las m ismas mediante la administración de ADN , ARN o proteínas de la invención a un mam ífero que padece dicha condición . Las condiciones relacionadas pueden incluir, pero no están limitadas a hepatitis B , hepatitis C , hepatitis D, condiloma acuminado, leucemia de célula velluda, sarcoma de Kaposi relacionada con el S I DA, melanoma , cáncer de próstata y otras formas de enfermedades virales y cáncer. En vista de los roles amplios que juegan las interferon-alfa en la modulación de las respuesta inm unológicas, la presente invención proporciona también métodos para tratamiento de cond iciones aliviadas por la administración de la interferon-alfa . Estos métodos incluyen la administración a un mamífero que padece al í I condición , la cual puede estar o no directamente relacionada con una infección viral o cáncer, de u na cantidad efectiva de u na composición de la invención . Las proteínas de la invención no solamente son útiles como agentes terapéuticos, sino un experto en la técnica reconoce que las proteínas son útiles en la producción de anticuerpos para uso de diagnósticos. De un modo similar, la adm inistración apropiada del ADN ó ARN , por ejemplo en un vector u otro sistema de adm inistración para dichos usos , está inclu ida en los métodos de uso de la presente invención . Como proteína de fusión con la inmunoglobu lina Fc, la Fc- I nterferon-alfa puede tener u na d istribución muy favorable en el tejido y un modo ligeramente diferente de acción para lograr la eficacia clínica, especialmente en virtud de su vida promedio larga en el suero y la dosificación alta de proteína soluble que puede ser administrada . En particular, existe un nivel alto de receptor Fc gama en el h ígado , el cual es un sitio de infección por los víruses que causan la hepatitis B y la hepatitis D. Los efectos colaterales neurológ icos de la interferon-alfa se considera que ocurre debido a que el tamaño peq ueño de la interferon- alfa permite q ue esta cruce la barrera de sang re del cerebro. El tamaño m ucho más grande de la Fc-l nterferon-alfa reduce de manera importante el grado hasta el cual esta proteína cruza la barrera de sangre del cerebro. Las composiciones de la presente invención pueden ser administradas por cualquier ruta que sea compatible con las moléculas particulares. Está contemplado que las composiciones de la presente invención pueden ser administradas a un animal por cualquier medio adecuado directamente (por ejemplo, localmente, como por medio de inyección, implante o administración tópica a un lugar del tejido) o sistémicamente (por ejemplo, por ruta parenteral u oral). En donde la composición va a ser adm in istrada parenteralmente, tal como mediante una inyección intravenosa, subcutánea o por la ruta oftálm ica, intraperitoneal, intramuscular, bucal, rectal, vaginal , intraorbital, intracerebral, intracraneal , intraespinal, intraventricular, intraraqu ídea , intracisternal, intracapsular, intranasal o por adm inistración en aerosol , la composición comprende preferentemente parte de u na suspensión o solución fluida acuosa fisiológicamente compatible. De este modo, el transportador o veh ícu lo es aceptable fisiológ icamente de modo que además de administrar la composición deseada al paciente, ésta no afecta adversamente de otro modo a los electrólitos del paciente y el equilibrio de volumen . El medio fluido para este agente por lo tanto puede comprender solución salina fisiológ ica normal. Las construcciones de ADN (o construcciones de genes) de la invención pueden ser utilizadas también como una parte de un protocolo de terapia de genes para adm inistrar ácidos n ucleicos que codifican la interferon-alfa, o una construcción de proteína de fusión de la misma. La invención caracteriza vectores de expresión para la transfección y expresión in vivo de la interferon-alfa o una construcción de proteína de fusión de la misma en tipos particu lares de célu las como para reconstituir o suplementar la fu nción de la interferon-alfa. Las construcciones de , vil. . expresión de la interferon-alfa, o las construcciones de la proteína de fusión de la misma, pueden ser administradas en cualqu ier veh ículo biológicamente efectivo, por ejemplo, cualquier form ulación o composición con capacidad de administrar de manera efectiva el gen de ¡nterferon-alfa o la construcción de proteína de fusión de la m isma a las células in vivo. Los métodos incluyen la inserción del gen sujeto en vectores virales que incluyen retroviruses recombinantes, adenovirus, virus asociados adeno, virus del herpes simplex-1 , o bacteriales recombinantes o plásmidos eucarióticos. Las dosificaciones preferidas por adm inistración de ácidos nucleicos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención se encuentran dentro del rango de 1 µg/m2 a 1 00 µg/m2, más preferentemente de 20 µg/m2 a 1 0 mg/m2 , y aún más preferentemente de 400 µg/m2 a 4 mg/m2. Está contemplado que la dosificación óptima y el modo de administración pueden ser determinados por experimentación de rutina que se encuentra dentro del nivel de los expertos en la técnica. Las dosificaciones preferidas de la proteína de fusión por adm in istración se encuentran dentro del rango de 0.1 mg/m2 a 1 00 mg/m2, más preferentemente de 1 mg/m2 a 20 mg/m2, y aún más preferentemente de 2 mg/m2 a 6 mg/m2. Está contemplado, sin embargo, que la dosificación óptima , también depende de la enfermedad que está siendo tratada, y de la existencia de efectos colaterales. Sin embargo, las dosificaciones óptimas pueden ser determinadas utilizando experimentación de rutina . La administración de las proteínas de fusión puede ser mediante inyecciones de bolo periódicas, o mediante la administración intravenosa o intraperitoneal continua desde u n recipiente externo (por ejemplo, de una bolsa intravenosa) o interno (por ejemplo, a partir de un implante biodegradable). Además, está contemplado que las proteínas de fusión de la invención también pueden ser administradas al receptor pretend ido junto con una plu ralidad de moléculas d iferentes activas biológicamente. Sin embargo, está contemplado que la combinación óptima de proteína de fusión y otras moléculas, modos de administración , dosificaciones pueden ser determinados por experimentación de rutina que se encuentra dentro del n ivel de los expertos en la técnica . La presente invención se ilustra de manera adicional por medio de los siguientes ejemplos no limitativos. EJEMPLOS Ejemplo 1 . Expresión de huFc-huInterferon-alfa (huFc-IFN-alfa) Se preparó el mARN proveniente de células monon ucleares sangu íneas periféricas humanas y se transcribieron de manera inversa con transcriptasa inversa. El cADN resultante fue utilizado como plantilla para las reducciones de cadena de polimerasa (PCR) para clonar y adaptar el cADN de interferon-alfa h umano para la expresión como una proteína de fusión h u Fc-I nterferon-alfa (huFc-I FN-alfa) . El preparador delantero fue de 5' C CCG GG T AAA TGT GAT CTG CCT CAG AC (SEQ I D NO: 5), en donde la secuencia codifica CCCGGG (sitio de restricción Xmal) TAAA el término carboxi de la cadena pesada de inmunoglobu lina, seguido por la secuencia (en negritas) q ue codifica el término N de la interferon-alfa. El preparador inverso fue 5' C7"C GA G TCA ATC CTT CCT CCT TAA TC (SEQ I D NO: 6) , el cual codifica la secuencia de terminal carboxi (anti-sentido) de interferon-alfa con su codón de traducción STOP (anticodón, TCA) y esto fue seguido por un sitio Xhol (CTCGAG). El producto PCR basado en el par 517 fue clonado y se generó la secuencia. El análisis de secuencia confirmó que el producto PCR codifica la interferon-alfa madura adaptada para la expresión, por ejemplo, con un Xmal en el extremo 5' y un sitio Xhol en el extremo 3'. Se construyó el vector de expresión pdCs-huFc-IFN-alfa de la manera siguiente. El fragmento de restricción Xmal-Xhol que contenía el cADN de la interferon-alfa humana fue ligado al fragmento Xmal-Xhol del vector pdCs-huFc de acuerdo con Lo et al, (1998) Protein Engineering 11: página 495. El huFc es el fragmento Fc humano de la inmunoglobulina gama 1 humana. El vector resultante, pdCS-huFc-IFN-alfa, fue utilizado para transfectar células de mamífero para la expresión de la huFc-IFN-alfa. Ejemplo 2. Transfección v Expresión de la Proteína Para la transfección transitoria, se introdujo el plásmido pdCs-huFc-IFN-alfa en las células 293 del riñon humano mediante la coprecipitación del ADN plásmido con fosfato de calcio (Sambrook et al, eds. (1989) "MOLECULAR CLONING-A LABORATORY MANUAL", Cold Spring Harbor Press, NY) o mediante la lipofección utilizando lipofectamina plus (Life Technologies, Gaithersburg, MD) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Con el objeto de obtener clones transfectados de manera estable, se introdujo el ADN plásmido dentro de las células de mieloma NS/0 de ratón mediante electroporación. Brevemente, se cultivaron las células NS/O en u n medio Eagle modificado con Dulbecco suplementado son suero fetal bovino al 1 0% , 2 m M de g lutamina y pen icilina/estreptomicina . Se lavaron las células aproximadamente 5x1 06 una vez con solución salina regu lada por fosfato (PBS) y se volvieron a suspender en 0.5 mL de PBS . Posteriormente se incubaron 1 0 µg del ADN plásm ido linealizado con las célu las en una cubeta pulsadora de genes (apertura de electrodo 0.4 cm , BioRad) en hielo durante 1 0 minutos. La electroporación se realizó utilizando el Pulsador de Genes (BioRad , Hercules, CA) con colocaciones en 0.25 V y 500 µF. Se permitió que las células se recuperaran du rante 1 0 minutos sobre hielo, y después de esto se volvieron a suspender en un medio de proliferación y luego fueron colocadas en placas sobre dos placas de 96 depósitos. Los clones transfectados de manera estable fueron seleccionados por su proliferación en la presencia de 1 00 nM de metotrexato (MTX), el cual se introdujo dos días posteriores a la transfección. Las células fueron alimentadas cada tres días por dos o tres veces más, y aparecieron los clones resistentes al MTX en un período de dos a tres semanas. Los sobrenadantes de los clones fueron sometidos a la prueba anti-Fc ELISA (ver Ejemplo 3) para identificar los prod uctores altos. Los clones de alta prod ucción fueron aislados y propagados en el medio de proliferación en u n contenido de 1 00 n M de MTX. Para la caracterización de rutina por electroforesis de gel, las proteínas de fusión Fc en el medio condicionado fueron enlazadas a la Sefarosa de Proteína A (Repligen, Cambridge, MA) y luego se eluyeron a partir de la Sefarosa de Proteína A por med io de ebullición en un . « ui k m.*.**. regulador de m uestras de proteína estándar con o sin 2-mercaptoetanol. Después de la electroforesis sobre una electroforesis de gel de sulfato de poliacrilamida dodecilo de sod io (SDS-PAGE) , las bandas de proteína fueron visualizadas por tinción azul Coomassie. Por el SDS-PAGE, la huFc-hu I nterferon-alfa ten ía un MW aparente de aproximadamente 52 kD . Para la pu rificación , las proteínas de fusión en lazadas a la Sefarosa de Proteína A fueron eluidas en un regu lador de fosfato de sodio ( 1 00 m M NaH2PO4, pH 3, y 1 50 mM NaCI) . El eluido entonces fue neutralizado inmediatamente con OJ volúmenes de clorhidrato-tris 2 M , pH 8. Ejemplo 3. Procedimientos ELISA La concentración de los productos que contienen proteína Fc humana en los sobrenadantes de los clones resistentes al MTX y otras muestras de pruebas se determinaron mediante el anti-huFc ELISA. Los procedim ientos se describen a detalle a continuación . A. Recubrimiento de placas Las placas ELISA fueron recubiertas con IgG anti-humano (H + L) AffiniPure Goat (Jackson I mmuno Research Laboratories, West Grove, PA) en 50 µg/mL en PBS, y 1 00 µL/depósito en placas de 96 depósitos (placa Nunc-I nmuno Maxisorp). Las placas recubiertas se cubrieron y se incubaron a una temperatura de 4°C d urante la noche. Posteriormente las placas fueron lavadas 4 veces con Tween (Tween 20) al 0.05% en PBS, y bloqueadas con 1 % de BSA/suero de cabra al 1 % en PBS , 200 µL/depósito. Después de la incubación con el reg ulador de bloqueo a u na temperatura de 37°C durante 2 horas, las placas fueron lavadas 4 veces S at .1 . con Tween al 0.05% en PBS, y se secaron sobre toallas de papel. B. Incubación con muestras de prueba y anticuerpo secundario Las muestras de prueba fueron diluidas de la manera correcta en un regulador de muestra (1% BSA/1% suero de cabra/0.05% Tween en PBS). Se preparó una gráfica estándar utilizando el anticuerpo quimérico (con un Fc humano) cuya concentración era conocida. Para preparar una gráfica estándar, se hicieron diluciones en serie en el regulador de muestra para producir una gráfica estándar en un rango de 125 ng/mL a 3.9 ng/ml. Las muestras diluidas y los estándares fueron agregados a la placa, 100 µL/depósito y la placa fue incubada a una temperatura de 37°C durante 2 horas. Después de la incubación, la placa fue lavada 8 veces con Tween al 0.05% en PBS. Entonces se le agregó a cada uno de los depósitos 100 µL de anticuerpo secundario, el IgG anti-humano conjugado con peroxidasa de rábano (Jackson Immuno Research) diluyó alrededor de 1:120,000 en el regulador de la muestra. La dilución exacta del anticuerpo secundario deberá ser determinada por cada lote del conjugado de HRP-lgG anti-humano. Después de la incubación a una temperatura de 37°C durante 2 horas, la placa fue lavada 8 veces con Tween al 0.05% en PBS. C. Desarrollo La solución del substrato fue agregada a la placa en 100 µL/depósito. La solución del substrato fue preparada disolviendo 30 mg de OPD (diclorhidrato de o-fenilendiamina (OPD), (1 tableta) en 15 mL de ácido cítrico 0.025 M/regulador Na2HPO , pH 5, el cual contenía el 0.03% de peróxido de hidrógeno agregado recientemente. Se permitió que se desarrollara el color durante 30 minutos a temperatura ambiente en la obscuridad. El tiempo de desarrollo está sujeto a cambios dependiendo de la variabilidad de lote a lote de las placas recubiertas, el anticuerpo secundario, etc. La reacción se detuvo agregando ácido sulfúrico 4N, 100 µL/depósito. La placa fue leída por un lector de placa, el cual fue colocado tanto en 490 como en 650 nm y programado para restar el fondo OD en 650 nm del OD en 490 nm. Ejemplo 4. Bioensavos La bioactividad de la huFc-hulFN-alfa fue comparada con la de la alfa interferona humana (hu-IFN-alfa) interferona de leucocito humano proveniente de Sigma, St. Louis, MO) utilizando dos ensayos diferentes. El primer ensayo determina la inhibición de la proliferación de la línea celular B linfoblastoide humana Daudi (ATCC CCL 213). El segundo ensayo mide la inhibición del efecto citopático del virus de encefalomiocarditis (EMCV) en la línea celular A549 del carcinoma de pulmón humano (ATCC CCL 185). La interferon-alfa inhibe la proliferación de las células Daudi (linfoma humano de Burkett). Las células Daudi fueron lavadas dos veces con RPMI 1640 libre de suero, y se volvieron a suspender en el medio de proliferación consistente de RPMI 1640 y suero fetal bovino al 20%, inactivado por calor (56°C). Entonces las células se colocaron en placas en 1x105 células/mL/depósito en una placa de 24 depósitos en la presencia de concentraciones diferentes de alFH (2.1 x 106 unidades internacionales/mg) y huFc-hulFN-alfa. Después de 3 a 4 días se descubrió que el 50 pg/mL de IFN-alfa en la forma de huFc-hulFN-alfa fue tan efectivo como el 750 pg/mL de hulFN-alfa para lograr una inhibición de la proliferación de células Daudi del 50 al 100%, como control el interferón gama (PharmingenJSan Diego, CA) en 100 ng/mL no mostró actividad en este ensayo. Esto demuestra que la inhibición es específica del interferón-alfa. Ejemplo 5. Medición de la actividad antiviral La proliferación viral en los cultivos celulares frecuentemente da como resultado la citotoxidad. Un efecto conocido como el efecto citopático (CPE). Las interferonas pueden inducir una condición antiviral en los cultivos celulares y proteger las células de dicho CPE. La IFN-alfa de actividad antiviral puede ser cuantificada por ensayos de reducción de efecto citopático (CPER) tal y como lo describieron en "Lymphokines and Interferons: A Practical Approach," editada pr M.J. Clemens, A.G Morris y A.J.H Gearing, I. R.L. Press, Oxford, 1987 .Las actividades antivirales de la huFc-hulFN-alfa y hulFN-alfa fueron comparadas utilizando la línea celular de carcinoma de pulmón humano A549 (ATCC CCL 185) y virus de encefalomiocarditis (ATCC VR 129B) de acuerdo con el protocolo CPER descrito en la referencia anterior. La dosis efectiva para obtener el 50% de CPER (por ejemplo, una protección al 50% ) se descubrió que era de 570 pg/mL (basada en la cantidad de IFN-alfa) para la huFc-hulFN-alfa y 500 pg/mL para la hulFN-alfa. Por consiguiente, la IFN-alfa en la huFc-hulFN-alfa y hulFN-alfa tienen una actividad antiviral substancialmente equivalente. Ejemplo 6. Farmacocinética La farmacocinética de la huFc-hulFN-alfa fue determinada en un grupo de 4 ratones Balb/c. Se inyectaron veinticinco miligramos de huFc-hulFM-alfa en la vena de la cola de cada ratón. Se obtuvo la sangre mediante un sangrado retro-orbital inmediatamente después de la inyección (por ejemplo, en t=0 min) y en 0.5, 1, 2, 4, 8 y veinticuatro horas posteriores a la inyección. Las muestras de sangre se recolectaron en tubos que contenían heparina para evitar la coagulación. Las células fueron removidas por centrifugación en una microcentrífuga de alta velocidad Eppendorf durante 4 minutos. La concentración de huFc-uhlFN-alfa en el plasma fue medida mediante el análisis de la prueba de ELISA anti-huFc y el análisis de mancha del Oeste con el anticuerpo anti- huFc, el cual también mostró que la huFc-hulFN-alfa permaneció intacta en la circulación (banda de 52 kD para la huFc-hulFN-alfa). No se pudieron detectar productos de degradación algunos (banda 32 kD para huFc). La vida promedio en circulación de la huFc-hulFN-alfa fue determinada en 19.3 horas las cual es significativamente más larga que la vida promedio en la circulación reportada para la IFN-alfa de aproximadamente 2 a 5 horas (Physicians Desk Reference, 50a edición, 1996: páginas 2145 a 2147 y 2364 a 2373). Ejemplo 7. Tratamiento de proliferación diseminada del linfoma de Burkitt humano en un ratón especie SCID. Se cultivaron células de Daudi (linfoma humano de Burkitt) en los ratones C.B-17 SCID (Deficiencia Inmunológica Severa Combinada) en la forma de tumores diseminados (Ghetieet al. (1990) Intl. J. Cáncer: 45 página 481). Los ratones SCID de 6 a 8 semanas fueron inyectados de . i.. manera intravenosa con células de Daudi de aproximadamente de 5x106 de una suspensión de células simples en 0.2 mL de PBSB. Tres días después, los ratones se seleccionaron al azar en tres grupos de 8 y recibieron inyecciones intráperitoniales diarias de 0.2 mL de PBS, 30 µg de huFc-hulFN-alfa (con un contenido de aproximadamente 12µg de IFN-alfa ) en PBS, o 60µg de huFc-hulFN-alfa en PBS. Los ratones se monitorearon diariamente. Los resultados se presentaron en la figura 2. Para el día 28, después de la inyección de células Daudi, todos los ratones en el grupo de control de PBS (diamante) habían desarrollado parálisis en las patas traseras. Los ratones en este grupo de control PBS comenzaron a morir en el día 38 y para el día 61, todos los ratones del grupo de control habían muerto. En contraste, los ratones del grupo de tratamiento sobrevivieron mucho más, de una manera dependiente de la dosis. Para el grupo que recibió 30µg de huFc-hulFN-alfa (cruces) la primera muerte ocurrió en el día 70, y todos los ratones murieron para el día 134. Para el grupo que recibió 60µg de huFc-hulFN-alfa triángulos, la primera muerte no ocurrió hasta el día 126, y murieron cuatro ratones en el día 153. El resto de los ratones estuvieron enfermos y se eutanizaron. Ejemplo 8. Tratamiento de crecimiento localizado de linfoma humano de Burkett en ratones SCID. En este modelo, se cultivaron células de Daudi en los ratones C.B-17 SCID en la forma de tumores subcutáneos (Ghetie et al (1990) Int. J. Cáncer: páginas 45 a 481) a los ratones SCID de seis a ocho semanas de edad, se les inyectaron subcutáneamente las células de Daudi de 6x106 de una sola suspensión celular en 0.1 mL de PBS. El tratamiento inició cuando el tamaño del tumor alcanzo de 200 a 400 mm3, lo cual se llevo aproximadamente cuatro semanas. Los ratones fueron seleccionados al azar en tres g rupos de 8, habiendo cada grupo recibido seis inyecciones intraperitoniales diarias de 0.2 mL de PBS, 30µg de huFc-h u l FN-alfa en PBS, o 60µg de hu Fc-hu l FN-alfa en PBS . Los resultados se mostraron en la figura 3. El tamaño de los tumores fue medido dos veces a la semana . Los tumores de los ratones del g rupo de control (diamantes) crecieron rápidamente a u n volumen promedio de 5602 mm3 (rango: 4343 a 6566 mm3) para el d ía 35, después de lo cual todos los ratones del grupo fueron eutanizados. En contraste, el crecimiento de los tumores en los ratones del grupo de tratamiento fue elim inado de una manera depend iente de la dosis. Los grupos q ue recibieron 30µg y 60µg de h uFc-hul FN-alfa tuvieron volúmenes promedio de tumores de 214 y 1 70 mm3, respectivamente, en el día 35, los cuales fueron menores que 268 y 267 mm3 antes del tratamiento. De hecho, los tumores subcutáneos se habían encogido completamente en cinco de cada ocho ratones del grupo que recibieron 30µg h u Fc-hu l FN-alfa y cuatro de ocho ratones del grupo que recibió 60µg de hu Fc-hu l FN-alfa . Sin embargo, sin tratamiento adicional algu no de los tumores reg resaron y crecieron . No obstante, dos ratones del grupo permanecieron libres de tumores hasta el d ía 205, cuando termino el experimento. Ejem plo 9. Tratamiento de enfermedad del hígado con Fc-lnterferón alfa. Se tiene contemplado que una enfermedad del hígado, por ejemplo, la hepatitis o metástasis del h ígado, pueden ser tratados más efectivamente con Fc-interferón-alfa que con interferón-alfa o interferón -alfa-Fe . Por ejemplo, se tiene contemplado que la Fc-interferón-alfa puede ser efectiva para el tratamiento de un modelo de ratón en el cual las células tumorales crearon metástasis en el h ígado, los ratones son anestesiados mediante la inyección intraperitonial de 80 mg/kg de quetamina y 5mg/ kg de xilazina en 0.2 ml de PBS aproximadamente 5 m inutos antes de la cirugía. Luego se realizaron los pasos sigu ientes en una campana de flujo laminal para asegurar la esterilidad . La piel de cada ratón se limpio con betadina y las células tumorales con etanol, de modo que las célu las Daudi fueron inyectadas en 1 00 microlitros de un medio RPM I 1 640 sin suplemento más allá de la cápsu la esplénica por un período de aproximadamente 1 minuto utilizando una aguja de calibre 27. Después de 2 minutos , el pedículo esplénico es ligado con una sutu ra de seda 4.0 y el vazo es removido. Algu nas células se llevaron del sitio de inyección hacia dentro del h ígado, en donde pueden formar tumores metastáticos. Los ratones con tumores metastáticos en el hígado fueron tratados posteriormente con Fc-interferón-alfa . Se tiene contemplado que los ratones tratados con Fc-interferón-alfa muestran u na reducción importante en el crecimiento del tumor en relación con los ratones tratados con una cantidad eq uimolar de interferón-alfa o proteína de fusión interferón-alfa-Fc. Además, está contemplado que el efecto específico de la Fc-interferón-alfa es más pronunciado en el tratam iento de enfermedades del hígado que en el tratamiento de padecimientos localizados en otros tejidos en donde no está concentrada la Fc-interferón-alfa .

Equivalentes La presente invención puede ser incorporada en otras formas específicas sin salirse del espíritu o características esenciales de la misma. Las modalidades anteriores por lo tanto deberán de ser consideradas en todos los aspectos como ilustrativas en vez de limitativas de la invención aquí descrita. El alcance de la invención por lo tanto es ind icado por las reivindicaciones adj untas en vez de por la descripción anterior, y todos los cambios q ue se encuentren dentro del sig nificado y rango de equivalencia de las reivindicaciones se pretende que estén incorporados dentro de las mismas. I ncorporación para referencia La descripción de cada uno de los artículos científicos y documentos de patentes a las que se hizo referencia anteriormente se encuentran incorporados a la presente descripción como referencia . u <110> Lo, Kin-Ming Sun, Yaping Gillies, Stephen D. Lexigen Pharmaceuticals Corp. <120> Expresión y Exportación de proteinas como Proteinas de Fusión Fc <130> LEX-009 PC <140> <141> <1S0> US 60/134,895 <151> 1999-05-19 <160> 29 <170> Patentln Ver. 2.0 <210> 1 10 <211> 498 <212> ADN <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1) .. (498) <223> Secuencia de ADN IFN Alfa Humana <400> 1 tgt gat ctg ect cag acc cae age ctg ggt aat agg agg gcc ttg ata 48 Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Asn Arg Arg Ala Leu lie 1 5 10 15 15 ctc ctg gea caá atg gga aga ate tet ect tte tec tgc ctg aag gac 96 Leu Leu Ala Gln Met Gly Arg lie Ser Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp 20 25 30 aga cat gac ttt gga tte ccc cag gag gag ttt gat ggc aac cag tte 144 Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe 35 40 45 cag aag gct caá gcc ate ect gtc ctc cat gag atg ate cag cag acc 192 Gln Lye Ala Gln Ala lie Pro Val Leu His Glu Met He Gln Gln Thr 50 55 60 20 tte aat ctc tte age acá aag gac tea tet gct act tgg gaa cag age 240 Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Aep Ser Ser Ala Thr Trp Glu Gln Ser 65 70 75 80 ctc cta gaa aaa ttt tec act gaa ctt aac cag cag ctg aat gac ctg 288 Leu Leu Glu Lys Phe Ser Thr Glu Leu Asn Gln Gln Leu Aen Asp Leu 85 90 95 gaa gcc tgc gtg ata cag gag gtt ggg gtg gaa gag act ccc ctg atg 336 Glu Ala Cys Val He Gln Glu Val Gly Val Glu Glu Thr Pro Leu Met 100 105 110 25 liilíi-MillllUíiilii lii '- - - - - ..- -J -f^fj* «¿¿. ......A,*,.. aat gtg gac tec ate ctg gct gtg aag aaa tac tte caá aga ate act 384 Asn Val Asp Ser He Leu Ala Val Lys LyS Tyr Phe Gln Arg He Thr 115 120 125 ctt tat ctg acá gag aag aaa tac age ect tgt gcc tgg gag gtt gtc 432 Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val 130 135 140 aga gea gaa ate atg aga tec tte tet tta tea aaa att ttt caá gaa 480 Arg Ala Glu He Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Lys He Phe Gln Glu 145 150 155 160 aga tta agg aag aag gat 498 Arg Leu Arg Lys Lys Asp 165 <210> 2 <211> 166 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Asn Arg Arg Ala Leu He 1 5 10 15 Leu Leu Ala Gln Met Gly Arg He Ser Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp 20 25 30 Arg His Aep Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe 35 40 45 Gln Lys Ala Gln Ala He Pro Val Leu Hie Glu Met He Gln Gln Thr 50 55 60 Phe Aen Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Thr Trp Glu Gln Ser 65 70 75 80 Leu Leu Glu Lye Phe Ser Thr Glu Leu Asn Gln Gln Leu Asn Asp Leu 85 90 95 Glu Ala Cys Val He Gln Glu Val Gly Val Glu Glu Thr Pro Leu Met 100 105 110 Asn Val Asp Ser He Leu Ala Val Lys Lys Tyr Phe Gln Arg He Thr 115 120 125 Leu Tyr Leu Thr Glu Lye Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val 130 135 140 Arg Ala Glu He Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Lys He Phe Gln Glu 145 150 155 160 Arg Leu Arg Lys Lys Asp 165 <210> 3 <211> 696 <212> ADN <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1) .. (696) <2 3> Secuencia Humana Fc de ADN <400> 3 gag ccc aaa tet tet gac aaa act cae acá tgc cea ccg tgc cea gea 48 Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 1 5 10 15 ect gaa ctc ctg ggg gga ccg tea gtc tte ctc tte ccc cea aaa ccc 96 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 20 25 30 aag gac acc ctc atg ate tec cgg acc ect gag gtc acá tgc gtg gtg 144 Lys Asp Thr Leu Met He Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 35 40 45 gtg gac gtg age cae gaa gac ect gag gtc aag tte aac tgg tac gtg 192 Val Asp Val Ser His Glu Aep Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 50 55 60 gac ggc gtg gag gtg cat aat gcc aag acá aag ccg cgg gag gag cag 240 Asp Gly Val Glu Val Has Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 65 70 75 80 tac aac age aeg tac cgt gtg gtc age gtc ctc acc gtc ctg cae cag 288 Tyr Aen Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 85 90 95 gac tgg ctg aat ggc aag gag tac aag tgc aag gtc tec aac aaa gee 336 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lye Cye Lys Val Ser Asn Lys Ala 100 105 110 ctc cea gcc ccc ate gag aaa acc ate tec aaa gcc aaa ggg cag ccc 384 Leu Pro Ala pro Ile Glu LYS thr Ile Ser LYS Ala Lys Gly Gln Pro 115 120 125 cga gaa cea cag gtg tac acc ctg ccc cea tea cgg gag gag atg acc 432 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr 130 135 140 aag aac cag gtc age ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc tte tat ccc age 480 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cye Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 145 150 155 160 gac ate gcc gtg gag tgg gag age aat ggg cag ccg gag aac aac tac 528 Aep He Ala Val Glu Trp Glu Ser Aen Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 165 170 175 aag acc aeg ect ccc gtg ctg gac tec gac ggc tec tte tte ctc tat 576 Lye Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 180 185 190 age aag ctc acc gtg gac aag age agg tgg cag cag ggg aac gtc tte 624 Ser Lye Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 195 200 205 tea tgc tec gtg atg cat gag gct ctg cae aac cae tac aeg cag aag 672 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 210 215 220 age ctc tec ctg tec ccg ggt aaa 696 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 225 230 c210> 4 <211> 232 c212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 1 5 10 15 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 20 25 30 Lye Aep Thr Leu Met He Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 35 40 45 Val Aep Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 50 55 60 Aep Gly Val Glu Val Hie Aen Ala Lye Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 65 70 75 80 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 85 90 95 Asp Trp Leu Aen Gly Lys Glu Tyr Lys Cye Lye Val Ser Asn Lye Ala 100 105 110 Leu Pro Ala Pro He Glu Lys Thr He Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 115 120 125 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr 130 135 140 Lys Aen Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 145 150 155 160 Asp He Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Aen Asn Tyr 165 170 175 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 180 185 190 Ser Lys Leu Thr Val Aep Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 195 200 205 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 210 215 220 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 225 230 <210> 5 <211> 27 ¿ . . ... 1, , í . <212> ADN <213> Homo sapiens <220> <223> Preparador PCR Delantero <400> 5 cccgggtaaa tgtgatctgc ctcagac 27 <210> 6 <211> 26 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 6 ctcgagtcaa tccttcctcc ttaatc 26 <210> 7 <211> 162 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Secuencia de consenso de IFN Alfa, en donde, Xaa en cualquier porcisición 24, 31, 70 y 129 representa cualquier aminoácido <220> c223> Xaa24 can be He or Leu, Xaa31 can be Lys or Gln, Xaa70 can be Thr cr Ser and Xaa 129 can be Leu or Val. <400> 7 Cys Aep Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Met Xaa Xaa Xaa Ser Pro Xaa Xaa Cys Leu Xaa Xaa 20 25 30 Arg Xaa Asp Phe Xaa Xaa Pro Xaa Glu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gln Xaa 35 40 45 Xaa Xaa Xaa Gln Ala Xaa Xaa Val Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Gln Gln Xaa 50 55 60 Xaa Xaa Leu Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Ser Ala Xaa Trp Xaa Xaa Thr 65 70 75 80 Leu Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Gln Gln Leu Xaa Asp Leu 85 90 95 Xaa Xaa Cye Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Xaa 100 105 110 Xaa Val Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Val Xaa Xaa Tyr Phe Xaa Xaa He Xaa 115 120 125 Xaa Tyr Leu Xaa Xaa Lys Xaa Xaa Ser Xaa Cys Ala Trp Glu Xaa Xaa 130 135 140 Xaa Xaa Xaa Xaa Met Arg Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Xaa 145 150 155 160 Arg Leu <210> 8 <211> 166 <212> PRT <213> Ho o sapiens <220> «223 > Proteina Humana Alfa-1 IFN <400> 8 Cye Asp Leu Pro Glu Thr Hxe Ser Leu Aep Asn Arg Arg Thr Leu Met 1 5 10 15 Leu Leu Ala Gln Met Ser Arg He Ser Pro Ser Ser Cys Leu Met Asp 20 25 30 Arg Hie Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe 35 40 45 Gln Lye Ala Ero Ala He Ser Val Leu His Glu Leu He Gln Gln He 50 55 60 Phe Aen Leu Phe Thr Thr Lys Aep Ser Ser Ala Ala Trp Aep Glu Asp 65 70 75 80 Leu Leu Asp Lys Phe Cys Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu 85 90 95 Glu Ala Cys Val Met Gln Glu Glu Arg Val Gly Glu Thr Pro Leu Met 100 105 110 Asn Ala Aep Ser He Leu Ala Val Lys Lye Tyr Phe Arg Arg He Thr 115 120 125 Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val 130 135 140 Arg Ala Glu He Met Arg Ser Leu Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu 145 150 155 160 Arg Leu Arg Arg Lys Glu 165 <210> 9 <211> 165 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Proteina Humana Alfa-2 IFN <400> 9 Cys Aep Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met I ii. 10 15 Leu Leu Ala Gln Met Arg Lys He Ser Leu Phe Ser Cys Leu Lys Asp 20 25 30 Arg Has Aep Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln 35 40 45 Lys Ala Glu Thr He Pro Val Leu His Glu Met He Gln Gln He Phe 50 55 60 Aen Leu Phe Ser Thr Lye Aep Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu 65 70 75 80 Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu 85 90 95 Ala Cys Val He Gln Gly val Gly Val Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys 100 105 110 Glu Asp Ser He Leu Ala Val Arg Lye Tyr Phe Gln Arg He Thr Leu 115 120 125 Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg 130 135 140 Ala Glu He Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser 145 150 155 160 Leu Arg Ser Lye Glu 165 <210> 10 <211> 166 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Proteina Humana Alfa-4 IFN <400> 10 Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Asn Arg Arg Ala Leu He 1 5 10 15 Leu Leu Ala Gln Met Gly Arg He Ser His Phe Ser Cys Leu Lys Asp 20 25 30 Arg His Aep Phe Gly Phe Pro Glu Glu Glu Phe Asp Gly His Gln Phe 35 40 45 Gln Lys Thr Gln Ala He Ser Val Leu His Glu Met He Gln Gln Thr 50 55 60 Phe Asn Leu Phe Ser Thr Glu Asp Ser Ser Ala Ala Trp Glu Gln Ser 65 70 75 80 Leu Leu Glu Lys Phe Ser Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu 85 90 95 Glu Ala Cys Val He Gln Glu Val Gly Val Glu Glu Thr Pro Leu Met 100 105 110 Asn Val Asp Ser He Leu Ala Val Arg Lye Tyr Phe Gln Arg He Thr 115 120 125 Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val 130 135 140 Arg Ala Glu He Met Arg Ser Leu Ser Phe Ser Thr Asn Leu Gln Lys 145 150 155 160 ;?É?¡P Arg Leu Arg Arg Lys Asp 165 <210> 11 <211> 166 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Proteina Humana Alfa-5 IFN 10 <400> 11 Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Ser Asn Arg Arg Thr Leu Met 1 5 10 15 He Met Ala Gln Met Gly Arg He Ser Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp 20 25 30 Arg His Aep Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe 35 40 45 Gln Lys Ala Gln Ala He Ser Val Leu Hie Glu Met He Gln Gln Thr 50 55 60 15 Phe Aen Leu Phe Ser Thr Lye Aep Ser Ser Ala Thr Trp Asp Glu Thr 65 70 75 80 Leu Leu Aep Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Aep Leu 85 90 95 Glu Ala Cys Met Met Gln Glu Val Gly Val Glu Asp Thr Pro Leu Met 100 105 110 Asn Val Aep Ser He Leu Thr Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg He Thr 115 120 125 20 Leu Tyr Leu Thr Glu Lye Lye Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val 130 135 140 Arg Ala Glu He Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Ala Aen Leu Gln 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Proteina Humana Alfa-7 IFN <400> 13 Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Arg Asn Arg Arg Ala Leu He 1 5 10 15 Leu Leu Ala Gln Met Gly Arg He Ser Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp 20 25 30 Arg His Glu Phe Arg Phe Pro Glu Glu Glu Phe Asp Gly His Gln Phe 35 40 45 Gln Lys Thr Gln Ala He Ser Val Leu His Glu Met He Gln Gln Thr 50 55 60 *^?-Phe Aen Leu Phe Ser Thr Glu Asp Ser Ser Ala Ala Trp Glu Gln Ser 65 70 75 80 Leu Leu Glu Lys Phe Ser Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu 85 90 95 Glu Ala Cys Val He Gln Glu Val Gly Val Glu Glu Thr Pro Leu Met 100 105 110 Asn Glu Aep Fhe He Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg He Thr 115 120 125 Leu Tyr Leu Met Glu Lye Lys Tyr Ser Pro Cye Ala Trp Glu Val Val 130 135 140 Arg Ala Glu He Met Arg Ser Phe Ser Phe Ser Thr Asn Leu Lys Lys 145 150 155 160 Gly Leu Arg Arg Lys Asp 165 <210> 14 <211> 166 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Proteina Humana Alfa-8 IFN <400> 14 Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Asn Arg Arg Ala Leu He 1 5 10 15 Leu Leu Ala Gln Met Arg Arg He Ser Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp 20 25 30 Arg Has Aep Phe Glu Phe Pro Gln Glu Glu Phe Aep Asp Lys Gln Phe 35 40 45 Gln Lys Ala Gln Ala He Ser Val Leu His Glu Met He Gln Gln Thr 50 55 60 Phe Aen Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Leu Asp Glu Thr 65 70 75 80 Leu Leu Asp Glu Phe Tyr He Glu Leu Asp Gln Gln Leu Asn Asp Leu 85 90 95 Glu Val Leu Cys Asp Gln Glu Val Gly Val He Glu Ser Pro Leu Met 100 105 110 Tyr Glu Aep Ser He Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg He Thr 115 120 125 Leu Tyr Leu Thr Glu Lye Lys Tyr Ser Ser Cys Ala Trp Glu Val Val 130 135 140 Arg Ala Glu He Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser He Asn Leu Gln Lys 145 150 155 160 .Li.. s¿^_, .*r¿*~ *??* Arg Leu Lys Ser Lys Glu 165 <210> 15 <211s. 166 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Proteína Humana Alfa-10 IFN <400> 15 Cys Aep Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Aen Arg Arg Ala Leu He 1 5 10 15 Leu Leu Gly Gln Met Gly Arg He Ser Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp 20 25 30 Arg Has Aep Phe Arg He Pro Gln Glu Glu Phe Aep Gly Asn Gln 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Ser Ser Ala Ala 65 70 75 80 Trp Aep Glu Thr Leu Leu Glu Lys Phe Tyr He Glu Leu Phe Gln Gln 85 90 95 Met Asn Aep Leu Glu Ala Cys Val He Gln Glu Val Gly Val Glu Glu 100 105 110 Thr Pro Leu Met Asn Glu Asp Ser He Leu Ala Val Lys Lys Tyr Phe 115 120 125 Gln Arg He Thr Leu Tyr Leu Met Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala 130 135 140 Trp Glu Val Val Arg Ala Glu He Met Arg Ser Phe Ser Phe Ser Thr 145 150 155 160 Asn Leu Gln Lys Arg Leu Arg Arg Lys Asp 165 170 <210> 17 <211> 166 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Proteína Humana Alfa-16 IFN <400> 17 Cys Aep Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Asn Arg Arg Ala Leu He 1 5 10 15 Leu Leu Ala Gln Met Gly Arg He Ser His Phe Ser Cys Leu Lys Asp 20 25 30 Arg Tyr Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Val Phe Asp Gly Asn Gln Phe 35 40 45 Gln Lys Ala Gln Ala He Ser Ala Phe His Glu Met He Gln Gln Thr 50 55 60 Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lye Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr 65 70 75 80 Leu Leu Asp Lys Phe Tyr He Glu Leu Phe Gln Gln Leu Asn Asp Leu 85 90 95 Glu Ala Cys Val Thr Gln Glu Val Gly Val Glu Glu He Ala Leu Met 100 105 110 Asn Glu Asp Ser He Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg He Thr 115 120 125 .

\ Leu Tyr Leu Met Gly Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val 130 135 140 Arg Ala Glu He Met Arg Ser Phe Ser Phe Ser Thr Asn Leu Gln Lys 145 150 155 160 Gly Leu Arg Arg Lys Aep 165 ^ <210> 18 <211> 166 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Proteína Humana Alfa-17 IFN <400> 18 Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Asn Arg Arg Ala Leu He 1 5 10 15 Leu Leu Ala Gln Met Gly Arg He Ser Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp 20 25 30 Arg His Asp Phe Gly Leu Pro Gln Glu Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe 35 40 45 Gln Lys Thr Gln Ala He Ser Val Leu His Glu Met He Gln Gln Thr 50 55 60 Phe Aen Leu Phe Ser Thr Glu Asp Ser Ser Ala Ala Trp Glu Gln Ser 65 70 75 80 Leu Leu Glu Lys Phe Ser Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asn Leu 85 90 95 Glu Ala Cys Val He Gln Glu Val Gly Met Glu Glu Thr Pro Leu Met 100 105 110 Asn Glu Asp Ser He Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg He Thr 115 120 125 Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val 130 135 140 Arg Ala Glu He Met Arg Ser Leu Ser Phe Ser Thr Asn Leu Gln Lys 145 150 155 160 He Leu Arg Arg Lys Asp 165 <210> 19 <211> 166 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Proteína Humana Alfa-21 IFN <400> 19 Cys Aep Leu Pro Gln Thr Hie Ser Leu Gly Asn Arg Arg Ala Leu He 1 5 10 15 Leu Leu Ala Gln Met Gly Arg He Ser Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp 20 25 30 Arg Hie Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe 35 40 45 Gln Lys Ala Gln Ala He Ser Val Leu His Glu Met He Gln Gln Thr 50 55 60 Phe Aen Leu Phe Ser Thr Lys Aep Ser Ser Ala Thr Trp Glu Gln Ser 65 70 75 80 Leu Leu Glu Lys Phe Ser Thr Glu Leu Asn Gln Gln Leu Asn Asp Leu 85 90 95 Glu Ala Cys Val He Gln Glu Val Gly Val Glu Glu Thr Pro Leu Met 100 105 110 Asn Val Asp Ser He Leu Ala Val Lys Lys Tyr Phe Gln Arg He Thr 115 120 125 Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val val 130 135 140 Arg Ala Glu He Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Lys He Phe Gln Glu 145 150 155 160 Arg Leu Arg Arg Lys Glu 165 <210> 20 <211> 172 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Proteína Humana Delta-1 IFN <400> 20 Cye Asp Leu Ser Gln Aen His Val Leu Val Gly Arg Lys Aen Leu Arg 1 5 10 15 Leu Leu Asp Glu Met Arg Arg Leu Ser Pro His Phe Cys Leu Gln Asp 20 25 30 Arg Lys Asp Phe Ala Leu Pro Gln Glu Met Val Glu Gly Gly Gln Leu 35 40 45 Gln Glu Ala Gln Ala He Ser Val Leu Has Glu Met Leu Gln Gln Ser 50 55 60 Phe Asn Leu Phe His Thr Glu His Ser Ser Ala Ala Trp Aep Thr Thr 65 70 75 80 Leu Leu Glu Pro Cys Arg Thr Gly Leu Has Gln Gln Leu Asp Asn Leu 85 90 95 Asp Ala Cys Leu Gly Gln Val Met Gly Glu Glu Aep Ser Ala Leu Gly 100 105 110 Arg Thr Gly Pro Thr Leu Ala Leu Lys Arg Tyr Phe Gln Gly He His 115 120 125 Val Tyr Leu Lye Glu Lys Gly Tyr Ser Asp Cys Ala Trp Glu Thr Val 130 135 140 Arg Leu Glu He Met Arg Ser Phe Ser Ser Leu He Ser Leu Gln Glu 145 150 155 160 Arg Leu Arg Met Met Asp Gly Asp Leu Ser Ser Pro 165 170 e210> 21 <211> 172 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Proteína Humana Omega-1 IFN <400> 21 Cys Asp Leu Pro Gln Asn His Gly Leu Leu Ser Arg Asn Thr Leu Val 1 5 10 15 Leu Leu Hie Gln Met Arg Arg He Ser Pro Phe Leu Cys Leu Lys Asp 20 25 30 Arg Arg Asp Phe Arg Phe Pro Gln Glu Met Val Lys Gly Ser Gln Leu 35 40 45 Gln Lys Ala His Val Met Ser Val Leu His Glu Met Leu Gln Gln He 50 55 60 Phe Ser Leu Phe His Thr Glu Arg Ser Ser Ala Ala Trp Asn Met Thr 65 70 75 80 Leu Leu Asp Gln Leu His Thr Gly Leu Hie Gln Gln Leu Gln His Leu 85 90 95 Glu Thr Cys Leu Leu Gln Val Val Gly Glu Gly Glu Ser Ala Gly Ala 100 105 110 He Ser Ser Pro Ala Leu Thr Leu Arg Arg Tyr Phe Gln Gly He Arg 115 120 125 Val Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Asp Cys Ala Trp Glu Val Val 130 135 140 Arg Met Glu He Met Lys Ser Leu Phe Leu Ser Thr Asn Met Gln Glu 145 150 155 160 Arg Leu Arg Ser Lys Asp Arg Asp Leu Gly Ser Ser 165 170 < - . , <210> 22 <211> 166 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <223> Proteína de Ratón Alfa-1 IFN <400> 22 Cye Aep Leu Pro Gln Thr Has Aen Leu Arg Asn Lys Arg Ala Leu Thr 1 5 10 15 Leu Leu Val Gln Met Arg Arg Leu Ser Pro Leu Ser Cys Leu Lys Asp 20 25 30 Arg Lys Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Lys Val Asp Ala Gln Gln He 35 40 45 Lys Lys Ala Gln Ala He Pro Val Leu Ser Glu Leu Thr Gln Gln He 50 55 60 Leu Asn He Phe Thr Ser Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asn Ala Thr 65 70 75 80 10 Leu Leu Aep Ser Phe Cys Asn Asp Leu Has Gln Gln Leu Asn Asp Leu 85 90 95 Gln Gly Cys Leu Met Gln Gln Val Gly Val Gln Glu Phe Pro Leu Thr 100 105 110 Gln Glu Aep Ala Leu Leu Ala Val Arg Lye Tyr Phe Kas Arg He Thr 115 120 125 Val Tyr Leu Arg Glu Lys Lys His Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val 130 135 140 15 Arg Ala Glu Val Trp Arg Ala Leu Ser Ser Ser Ala Asn Val Leu Gly 145 150 155 160 Arg Leu Arg Glu Glu Lys 165 <210> 23 <211> 167 <212> PRT <213> Mus musculus 20 <220> <223> Proteína de Ratón Alfa-2 IFN <400> 23 Cys Asp Leu Pro His Thr Tyr Asn Leu Arg Asn Lys Arg Ala Leu Lys 1 5 10 15 Val Leu Ala Gln Met Arg Arg Leu Pro Phe Leu Ser Cys Leu Lys Asp 20 25 30 Arg Gln Asp Phe Gly Phe Pro Leu Glu Lys Val Asp Asn Gln Gln He 35 40 45 25 •^.^?i&*& ¿JkU ?j ., t ¿ .. A ^^ate Gln Lys Ala Gln Ala He Pro Val Leu Arg Asp Leu Thr Gln Gln Thr 50 55 60 Leu Asn Leu Phe Thr Ser Lys Ala Ser Ser Ala Ala Trp Asn Ala Thr 65 70 75 80 Leu Leu Aep Ser Phe Cys Asn Asp Leu His Gln Gln Leu Aen Asp Leu 85 90 95 Gln Thr Cys Leu Met Gln Gln Val Gly Val Gln Glu Pro Pro Leu Thr 5 100 105 110 Gln Glu Asp Ala Leu Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe His Arg He Thr 115 120 125 Val Tyr Leu Arg Glu Lys Lys Has Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val 130 135 140 Arg Ala Glu Val Trp Arg Ala Leu Ser Ser Ser Val Asn Leu Leu Pro 145 150 155 160 Arg Leu Ser Glu Glu Lys Glu 10 165 <210> 24 <211> 162 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <223> Proteína de Ratón Alfa-4 IFN <400> 24 •JE Cys Aep Leu Pro His Thr Tyr Asn Leu Gly Asn Lys Arg Ala Leu Thr 1 5 10 15 Val Leu Glu Glu Met Arg Arg Leu Pro Pro Leu Ser Cys Leu Lys Asp 20 25 30 Arg Lys Asp Phe Gly Phe Pro Leu Glu Lys Val Asp Asn Gln Gln He 35 40 45 Gln Lys Ala Gln Ala He Leu Val Leu Arg Asp Leu Thr Gln Gln He 50 55 60 20 Leu Asn Leu Phe Thr Ser Lys Asp Leu Ser Ala Thr Trp Asn Ala Thr 6S 70 75 80 Leu Leu Asp Ser Phe Cys Asn Asp Leu His Gln Gln Leu Asn Asp Leu 85 90 95 Lys Ala Cys Val Met Gln Glu Pro Pro Leu Thr Gln Glu Asp Ser Leu 100 105 110 Leu Ala Val Arg Thr Tyr Phe His Arg He Thr Val Tyr Leu Arg Lys 115 120 125 Lye Lys His Ser Leu Cys Ala Trp Glu Val He Arg Ala Glu Val Trp 25 130 135 140 Arg Ala Leu Ser Ser Ser Thr Asn Leu Leu Ala Arg Leu Ser Glu Glu 145 150 155 160 Lys Glu <210> 25 <211> 166 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <223> Proteína de Ratón Alfa-5 IFN <400> 25 Cys Asp Leu Leu Gln Thr His Aen Leu Arg Asn Lys Arg Ala Leu Thr 1 5 10 15 Leu Leu Val Lys Met Arg Arg Leu Ser Pro Leu Ser Cys Leu Lys Asp 20 25 30 Arg Lye Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Lys Val Gly Ala Gln Gln He 35 40 45 Gln Glu Ala Gln Ala He Pro Val Leu Ser Glu Leu Thr Gln Gln Val 50 55 60 Leu Aen He Phe Thr Ser Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asn Ala Thr 65 70 75 80 Leu Leu Aep Ser Phe Cys Asn Glu Val His Gln Gln Leu Asn Asp Leu 85 90 95 Lye Ala Cye Val Met Gln Gln Val Gly Val Gln Glu Ser Pro Leu Thr 100 105 110 Gln Glu Aep Ser Leu Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe His Arg He Thr 115 120 125 Val Tyr Leu Arg Glu Lye Lys His Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val 130 135 140 Arg Ala Glu Val Trp Arg Ala Leu Ser Ser Ser Val Aen Leu Leu Ala 145 150 155 160 Arg Leu Ser Lys Glu Glu 165 <210> 26 <211> 166 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <223> Proteína de Ratón Alfa-6 IFN <400> 26 Cys Asp Leu Pro Gln Thr Hie Asn Leu Arg Asn Lys Arg Ala Leu Thr 1 5 10 15 sk i Leu Leu Val Lys Met Arg Arg Leu Ser Pro Leu Ser Cys Leu Lys Asp 20 25 30 Arg Lys Aep Phe Gly Phe Pro Gln Glu Lys Val Gly Ala Gln Gln He 35 40 45 Gln Glu Ala Gln Ala He Pro Val Leu Thr Glu Leu Thr Gln Gln He 50 55 60 Leu Thr Leu Fhe Thr Ser Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Aen Ala Thr 65 70 75 80 Leu Leu Aep Ser Phe Cys Asn Aep Leu His Gln Leu Leu Aen Asp Leu 85 90 95 Gln Gly Cys Leu Met Gln Gln Val Glu He Gln Ala Leu Pro Leu Thr 100 105 110 Gln Glu Asp Ser Leu Leu Ala Val Arg Thr Tyr Phe His Arg He Thr 115 120 125 Val Phe Leu Arg Glu Lys Lys His Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val 130 135 140 Arg Ala Glu Val Trp Arg Ala Leu Ser Ser Ser Ala Lys Leu Leu Ala 145 150 155 160 Arg Leu Asn Glu Asp Glu 165 <210> 27 <211> 167 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <223> Proteína de Ratón Alfa-7 IFN <400> 27 Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Aen Leu Arg Asn Lys Arg Ala Leu Thr 1 5 10 15 Leu Leu Val Lye Met Arg Arg Leu Ser Pro Leu Ser Cys Leu Lys Asp 20 25 30 Arg Lys Asp Phe Gly Phe Pro Gln Ala Lys Val Asp Ala Gln Gln He 35 40 45 Gln Glu Ala Gln Ala He Pro Val Leu Ser Glu Leu Thr Gln Gln He 50 55 60 Leu Asn He Phe Thr Ser Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asn Ala Thr 65 70 75 80 Leu Leu Asp Ser Val Cys Asn Asp Leu His Gln Gln Leu Asn Asp Leu 85 90 95 Gln Gly Cys Leu Met Gln Glu Val Gly Val Gln Glu Leu Ser Leu Thr 100 105 110 Gln Glu Aep Ser Leu Leu Ala Val Arg Lye Tyr Phe Has Arg He Thr 115 120 125 Val Phe Leu Arg Glu Lys Lys Hie Ser Pro Cye Ala Trp Glu Val Val 130 135 140 Arg Ala Glu He Trp Arg Ala Leu Ser Ser Ser Ala Asn Leu Leu Ala 145 150 155 160 Arg Leu Ser Glu Lys Lys Glu 165 <210> 28 <211> 166 <212> PRT <213> Mus mueculus <220> 223> Proteína de Ratón Alfa-8 IFN <400> 28 Cys Aep Leu Pro Gln Thr His Aen Leu Arg Aen Lys Arg Ala Leu Thr 1 5 10 15 Leu Leu Val Lys Met Arg Arg Leu Ser Pro Leu Ser Cys Leu Lys Asp 20 25 30 Arg Lye Aep Phe Gly Phe Pro Gln Glu Lye Val Gly Ala Gln Gln He 35 40 45 Gln Glu Ala Gln Ala He Pro Val Leu Thr Glu Leu Thr Gln Gln He 50 55 60 Leu Ala Leu Phe Thr Ser Lye Aep Ser Ser Ala Ala Trp Aen Ala Thr 65 70 75 80 Leu Leu Aep Ser Phe Cys Aen Aep Leu His Gln Leu Leu Asn Asp Leu 85 90 95 Gln Gly Cys Leu Met Gln Gln Val Glu He Gln Ala Leu Pro Leu Thr 100 105 110 Gln Glu Aep Ser Leu Leu Ala Val Arg Thr Tyr Phe His Arg He Thr 115 120 125 Val Phe Leu Arg Glu Lye Lys His Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val 130 135 140 Arg Ala Glu Val Trp Arg Ala Leu Ser Ser Ser Ala Lys Leu Leu Ala 145 150 155 160 Arg Leu Asn Glu Asp Glu 165 <210> 29 <211> 167 <212> PRT <213> Mus musculus i z t. ^ . . -., . *. i.... 1 ^^^^^ <220> <223> Proteína de Ratón Alfa-9 IFN <400> 29 Cys Aep Leu Pro Gln Thr Has Asn Leu Arg Asn Lys Lys He Leu Thr 1 5 10 15 Leu Leu Ala Gln Met Arg Arg Leu Ser Pro Leu Ser Cys Leu Lys Asp 20 25 30 Arg Lys Aep Fhe Gly Phe Pro Gln Glu Lys Val Aep Ala Gln Gln He 35 40 45 Gln Glu Ala Gln Ala He Pro Val Leu Ser Glu Leu Thr Gln Gln He 50 55 60 Leu Thr Leu Phe Thr Ser Lye Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asn Ala Thr 65 70 75 80 Leu Leu Aep Ser Phe Cys Thr Gly Leu Has Gln Leu Leu Asn Asp Leu 85 90 95 Gln Gly Cys Leu Met Gln Leu Val Gly Met Lys Glu Leu Pro Leu Thr 100 105 110 Gln Glu Aep Ser Gln Leu Ala Met Lys Lys Tyr Phe His Arg He Thr 115 120 125 Val Tyr Leu Arg Glu Lys Lys Has Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val 130 135 140 Arg Ala Glu Val Trp Arg Ala Leu Ser Ser Ser Val Asn Leu Leu Ala 145 150 155 160 Arg Leu Ser Glu Glu Lys Glu 165

Claims (29)

1. ->*»•
2. REIVI NDICACIONES 1 . Una molécula de ácido nucleico que codifica una proteína de fusión el cual comprende: (a) u na secuencia de señal ; 5 (b) una región de inmunoglobulina Fe; y (c) u na secuencia de proteína objetivo que comprende interferón- alfa, donde la secuencia de señal, la reg ión de inmu nog lobulina Fe y la secuencia de la proteína objetivos son codificados en serie en una 10 d irección 5 ' a 3 ' 2. El ácido nucleico tal y como se describe en la reivindicación 1 , en donde la región de inm unoglobulina Fe comprende una región de bisagra de inm unoglobulina.
3. 3. El ácido nucleico tal y como se describe en la reivindicación 1 , en 15 donde la región de inmunoglobulina Fc comprende una región de bisagra de inmu noglobulina y un campo de región de cadena pesada constante de inmunoglobu lina.
4. 4. El ácido n ucleico tal y como se describe en la reivindicación 1 , en donde la región de inmunoglobulina Fc comprende u na región de bisagra 20 de inmunog lobulina, y un campo de inmunoglobu lina CH3.
5. 5. El ácido nucleico tal y como se describe en la reivindicación 1 , en donde la región de inmunog lobulina Fc comprende u na región de bisagra, un campo CH2 y un campo CH3.
6. 6. El ácido nucleico tal y como se describe en la reivindicación 5, en donde la región de inmunoglobulina Fc comprende una porción de una secuencia de inmunoglobulina gama.
7. 7. El ácido nucleico tal y como se describe en la reivindicación 6, en donde la inmunoglobulina gama es inmunoglobulina gama humana 1.
8. 8. Un vector de expresión que se puede duplicar para transfectar una célula de mamífero, comprendiendo el vector el ácido nucleico tal y como se describe en la reivindicación 1.
9. 9. El vector de expresión se puede duplicar tal y como se describe en la reivindicación 8, en donde el vector es un vector viral .
10. 10. Una célula de mamífero que elabora un puente del ácido nucleico tal y como se describe en la reivindicación 1.
11. 11. Una proteína de fusión que comprende en una terminal amino a la dirección terminal carboxi una región de inmunoglobulina Fc, y una proteína objetiva que comprende interferón-alfa.
12. 12. La proteína de fusión tal y como se describe en la reivindicación 11, en donde la interferona-alfa comprende una secuencia de aminoácidos establecida en la SEQ. ID. NO.: 2, 7 o del 8 al 21, en una especie variante alelica de la misma.
13. 13. La proteína de fusión tal y como se describe en la reivindicación 11, en donde la proteína objetivo comprende por lo menos dos moléculas de interferón-alfa enlazadas por un enlazador polipéptido.
14. 14. La proteína de fusión tal y como se describe en la reivindicación 13, la cual comprende además un enlazador polipéptido que enlaza la región de inmunoglobulina Fc a la proteína objetivo. • - -Om*^«^¡1III
15. 15. La proteína de fusión tal y como se describe en la reivindicación 11, en donde la región de inmunoglobulina Fc comprende una región de bisagra de inmunoglobulina, y un campo de región de cadena pesada constante de inmunoglobulina.
16. 16. La proteína de fusión tal y como se describe en la reivindicación 15, en donde el campo de región de cadena pesada constante comprende un campo CH3.
17. 17. La proteína de fusión tal y como se describe en la reivindicación 11, en donde la región de inmunoglobulina Fc comprende una región de bisagra un campo CH2 y un campo CH3.
18. 18. Una proteína multimérica que comprende al menos dos proteínas de fusión tal y como se describe en la reivindicación 11, enlazadas por medio de un enlace covalente.
19. 19. La proteína de fusión tal y como se describe en la reivindicación 18, en donde el enlace covalente es un enlace de dísulfuro.
20. 20. Un método para producir una proteína de fusión el cual comprende los pasos de: (a) proporcionar una célula de mamífero tal y como se describe en la reivindicación 10; y (b) cultivar la célula de mamífero para producir la proteína de fusión.
21. 21. El método tal y como se describe en la reivindicación 20, el cual comprende el paso adicional de recolectar la proteína de fusión.
22. 22. El método tal y como se describe en la reivindicación 20, el cual comprende el paso adicional de purificar la proteína de fusión. »j — «• •JSPT *3*
23. 23. El método tal y como se describe en la reivindicación 20, el cual comprende el paso adicional de disociar como una enzima proteolítica la región de inmunoglobulina Fc de la proteína objetivo en un sitio de disociación proteolítico colocado entre la región de inmuno globulina Fc y 5 la proteína objetivo.
24. 24. Un método de tratamiento de u na condición aliviada mediante la administración de interferón-alfa el cual comprende el paso de adm inistrar el ácido nucleico tal y como se describe en la reivindicación 1 , a un mamífero que padece de dicha condición . 10
25. 25. U n método de tratamiento de u na condición aliviada mediante la administración de interferón-alfa el cual comprende el paso de la adm in istración del vector tal y como se describe en la reivindicación 8, a un mam ífero que padece dicha condición .
26. 26. U n método de tratamiento de una condición aliviada mediante la 15 administración de interferón-alfa el cual comprende el paso de adm inistración de la proteína de fusión tal y como se describe en la reivindicación 1 1 , a un mam ífero que padece la cond ición .
27. 27. Un método de tratamiento de una condición aliviada mediante la administración de interferón-alfa q ue comprende el paso de 20 administración de la proteína tal y como se describe en la reivindicación 18, a un mamífero que padece dicha condición.
28. 28. El método tal y como se describe en la reivindicación 26, en donde la condición es un padecimiento del hígado.
29. 29. El método tal y como se describe en la reivindicación 28, en donde 25 el padecim iento del h ígado es hepatitis.