MX2012004792A - Composiciones para el tratamiento de fibrosis quistica y otras enfermedades cronicas. - Google Patents

Composiciones para el tratamiento de fibrosis quistica y otras enfermedades cronicas.

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Abstract

La presente invención se relaciona con composiciones farmacéuticas que comprenden un inhibidor de la actividad del canal de sodio epitelial en combinación con al menos un compuesto de la Fórmula I, la Fórmula II, o la Fórmula III. La invención también se relaciona con formas sólidas y con las formulaciones farmacéuticas de las mismas, y con los métodos para utilizar estas composiciones en el tratamiento de enfermedades producidas por el CFTR, en particular la fibrosis quística utilizando composiciones farmacéuticas combinadas. (ver fórmulas).

Description

COMPOSICIONES PARA EL TRATAMIENTO DE FIBROSIS QÜÍSTICA Y OTRAS ENFERMEDADES CRÓNICAS REFERENCIA CRUZADA CON SOLICITUDES RELACIONADA Esta solicitud reivindica el beneficio de la solicitud de patente provisional de los Estados Unidos No. 61/254,180 presentada el 22 de octubre de 2009. La descripción de la solicitud a la que se hizo referencia anteriormente se incorpora en la presente como referencia en su totalidad.
CAMPO TÉCNICO La presente invención se relaciona con composiciones para el tratamiento de fibrosis quística (FQ) y otras enfermedades crónicas, los métodos para preparar las composiciones y los métodos para utilizar las composiciones para el tratamiento de FQ y otras enfermedades crónicas, incluyendo enfermedades crónicas que implican la regulación de volúmenes de fluidos a través de las membranas epiteliales .
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La fibrosis quística (FQ) es una enfermedad genética recesiva que afecta a aproximadamente 30,000 niños y adultos en los Estados Unidos y aproximadamente 30,000 niños y adultos en Europa. A pesar de los avances en el tratamiento de la FQ, no existe ninguna cura.
La FQ se provoca por mutaciones en el gen regulador de conductancia transmembrana de fibrosis quística (CFTR) que codifica para un canal iónico de cloruro epitelial responsable de ayudar en la regulación de la absorción de sal y agua y la secreción en diversos tejidos. Los fármacos de molécula pequeña, conocidos como potenciadores que aumentan la probabilidad de la abertura del canal del CFTR, representan una estrategia terapéutica potencial para tratar la FQ . Los potenciadores de este tipo se describen en la WO 2006/002421, que se incorpora en la presente como referencia en su totalidad. Otra estrategia terapéutica potencial implica fármacos de molécula pequeña conocidos como correctores de la FQ que aumentan el número y función de los canales del CFTR. Correctores de este tipo se describen en la WO 2005/075435, que se incorpora en la presente como referencia en su totalidad.
Específicamente, el CFTR es un canal aniónico suministrado por cA P/ATP que se expresa en una variedad de tipos de células, que incluye células epiteliales de absorción y de secreción, donde regula el flujo de aniones a través de la membrana, así como la actividad de otros canales iónicos y proteínas. En las células epiteliales, el funcionamiento normal del CFTR es decisivo para el mantenimiento del transporte de electrólitos a través del cuerpo, incluyendo el tejido respiratorio y digestivo. El CFTR se compone de aproximadamente 1480 aminoácidos que codifican para una proteína formada por una repetición en tándem de los dominios transmembrana, conteniendo cada uno seis hélices transmembrana y un dominio de unión de nucleótidos. Los dos dominios transmembrana se enlazan por un gran (R) -dominio regulador, polar, con múltiples sitios de fosforilación que regulan la actividad del canal y el tráfico celular.
Se ha identificado y secuenciado el gen que codifica para el CFTR (Véase, Gregory, R. J. et al. (1990) Nature 347:382-386; Rich, D. P. et al. (1990) Nature 347:358-362), (Riordan, J. R. et al. (1989) Science 245:1066-1073) . Un defecto en este gen provoca mutaciones en el CFTR lo que resulta en la fibrosis quística ("FQ"), la enfermedad genética mortal más común en seres humanos. La fibrosis quística afecta a aproximadamente uno de cada 2,500 niños en los Estados Unidos. Dentro de la población general de los Estados Unidos, hasta 10 millones de personas portan una sola copia del gen defectuoso, sin efectos evidentes de la enfermedad. Por el contrario, los individuos con dos copias del gen asociado con la FQ padecen los efectos debilitantes y fatales de la FQ, incluyendo la enfermedad pulmonar crónica .
En los pacientes con FQ , las mutaciones en el CFTR expresado endógenamente en los epitelios respiratorios llevan a una secreción reducida de aniones apicales provocando un desequilibrio en el transporte de iones y fluidos. La disminución resultante en el transporte de aniones contribuye a una mayor acumulación de moco en los pulmones y las consiguientes infecciones microbianas que por último provocan la muerte en los pacientes con FQ . Además de la enfermedad respiratoria, los pacientes con FQ por lo general padecen de problemas gastrointestinales e insuficiencia pancreática los cuales, si no se tratan, dan por resultado en la muerte. Además, la mayoría de los hombres con fibrosis quística son infértiles y la fertilidad es reducida en las mujeres con fibrosis quística. En contraste con los graves efectos de las dos copias del gen asociado con la FQ, los individuos con una sola copia del gen asociado con la FQ presentan una mayor resistencia al cólera y a la deshidratación resultante de la diarrea -tal vez lo que explica la frecuencia relativamente alta del gen de la FQ en la población .
El análisis de secuencias del gen CFTR de los cromosomas de la FQ ha revelado una variedad de mutaciones que provocan la enfermedad (Cutting, G. R. et al. (1990) Nature 346:366-369 ; Dean, M. et al. (1990) Cell 61:863:870 ; y Kerem, B-S. et al. (1989) Science 245:1073-1080 ; Kerem, B-S et al. (1990) Proc . Nati. Acad. Sci. USA 87:8447-8451). Hasta la fecha, se han identificado más de 1000 mutaciones que provocan la enfermedad en el gen de la FQ . (http://www.genet.sickkids.on.ca/cftr/app) . La mutación más frecuente es una supresión de fenilalanina en la posición 508 de la secuencia de aminoácidos del CFTR, y se denomina comúnmente como AF508-CFTR. Esta mutación se presenta en aproximadamente el 70% de los casos de fibrosis quística y se asocia con una enfermedad grave.
La supresión del residuo 508 en el AF508-CFTR impide que la proteina creciente se pliegue correctamente. Esto da por resultado en la incapacidad de la proteína mutante para salir del ER, y el tráfico hacia la membrana plasmática. Como resultado, el número de canales presentes en la membrana es mucho menor que el observado en las células que expresan el CFTR tipo silvestre. Además del tráfico alterado, la mutación da por resultado en una activación defectuosa de canales. En conjunto, el número reducido de canales en la membrana y la activación defectuosa conducen a un transporte reducido de aniones a través de los epitelios conduciendo a un transporte defectuoso de iones y fluidos. (Quinton, P. M. (1990), FASEB J. 4: 2709-2727) . Sin embargo, los estudios han mostrado que los números reducidos de AF508-CFTR en la membrana son funcionales, aunque menos que los del CFTR tipo silvestre. (Dalemans et al. (1991), Nature Lond . 354: 526-528; Denning et al., supra; Pasyk y Foskett (1995), J. Cell. Biochem. 270: 12347-50) . Además del AF508 - CFTR , otras mutaciones que provocan la enfermedad en el CFTR que dan por resultado en tráfico, síntesis y/o activación de canales defectuosos se podrían sobre- o sub-regular para alterar la secreción de aniones y modificar el progreso y/o gravedad de la enfermedad.
Aunque el CFTR transporta una variedad de moléculas además de aniones, es evidente que esta función (el transporte de aniones) representa un elemento en un importante mecanismo para transporte de iones y agua a través del epitelio. Los otros elementos incluyen el canal de Na+ epitelial ("ENaC"), el co- transportador Na+/2C1"/ +, la bomba de Na+-K+-ATPasa y los canales de la membrana K+ basolateral, que son responsables de la absorción de cloruro en la célula.
Estos elementos trabajan en conjunto para alcanzar el transporte direccional a través del epitelio vía su expresión y localización selectivas dentro de la célula. La absorción de cloruro se lleva a cabo mediante la actividad coordinada del ENaC y el CFTR presentes en la membrana apical y la bomba de Na+ - K+ -ATPasa y los canales de iones Cl expresados en la superficie basolateral de la célula. El transporte activo secundario de cloruro desde el costado luminal conduce a la acumulación de cloruro intrace lular , que luego puede dejar pasivamente a la célula vía los canales de Cl", lo que resulta en un transporte vectorial. La disposición del co-transportador de Na+/2C1"/K+, la bomba de Na+ - K+ -ATPasa y los canales de K+ en la membrana basolateral sobre la superficie basolateral y el CFTR sobre el costado luminal coordinan la secreción de cloruro vía el CFTR sobre el costado luminal. Debido a que probablemente el agua nunca se transportará activamente por sí misma, su flujo a través de los epitelios depende de diminutos gradientes osmóticos transepiteliales generados por el flujo masivo de sodio y cloruro.
Como se mencionó anteriormente, se cree que la supresión del residuo 508 en AF508-CFTR impide que la proteína creciente se pliegue correctamente, lo que da por resultado en la incapacidad de esta proteína mutante para salir de la ER, y el tráfico hacia la membrana plasmática. Como resultado, cantidades insuficientes de la proteína madura se presentan en la membrana plasmática y se reduce significativamente el transporte de cloruro dentro de los tejidos epiteliales. De hecho, se ha mostrado que este fenómeno celular del procesamiento defectuoso de ER de los transportadores de ABC mediante la maquinaria de ER será la base fundamental no sólo para la enfermedad de FQ, sino que también para una amplia gama de otras enfermedades aisladas y hereditarias.
Existe una necesidad por métodos para tratar las enfermedades producidas por el Modulador de FQ/ENaC utilizando estas composiciones de combinación que comprenden al menos un modulador de la actividad del Modulador de FQ y al menos un inhibidor de la actividad del ENaC .
Existe una necesidad por métodos para modular una actividad del Modulador de FQ y/o la actividad del ENaC en una membrana celular ex vivo de un mamí fero .
Existe una necesidad por moduladores de la actividad del CFTR que se puedan utilizar para modular la actividad del CFTR en la membrana celular de un mamífero.
Existe una necesidad por métodos para tratar las enfermedades provocadas por el CFTR utilizando estos moduladores de la actividad del CFTR.
Existe una necesidad por métodos para tratar las enfermedades producidas por el ENaC utilizando estos moduladores, en particular, los inhibidores de la actividad del ENaC.
Existe una necesidad por métodos para modular la actividad del CFTR en una membrana celular ex vivo de un mamífero.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Éstas y otras necesidades se cumplen mediante presente invención que se dirige a una composición farmacéutica que comprende un Compuesto de la Fórmula I, II o III y un inhibidor del ENaC, en donde: A el Compuesto de la Fórmula I es Fórmula I o las sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en donde : Cada uno de WRW2 y WRW4 se selecciona independientemente de CN, CF3í halo, C2-6 alquilo recto o ramificado, cicloalif tico de C3 -i2 miembros, fenilo, un heteroarilo de 5-10 miembros o un heteroc íc 1 ico de 3-7 miembros, en donde el heteroarilo o heterocíc lico tiene hasta 3 heteroátomos seleccionados de O, S, o N, en donde el WRW2 y WRW4 se sustituye independiente y opcionalmente con hasta tres sust ituyentes seleccionados de -OR' , -CF3, -0CF3, SR', S(0)R', S02R' , -SCF3, halo, CN, -COOR' , -COR', - O ( CH2 ) 2N ( R ' ) 2 , - O ( CH ) ( R ' ) 2 / -C0N(R')2, -(CH2)2OR', -(CH2)0R', -CH2CN, fenilo o fenoxi sustituido opcionalmente, -N(R' )2, -NR'C(0)OR', -NR'C(0)R'; - ( CH2 ) 2 ( R ' ) 2 , O - ( CH2 ) N ( R ' ) 2 i WRW5 se selecciona de hidrógeno, -OCF3, -CF3, -OH, -OCH3, -NH2, -CN, -CHF2, -NHR ' , -N(R')2, -NHC(0)R', -NHC(0)OR', -NHS02R', -CH2OH, - CH2N ( R ' ) 2 , -C(0)OR', -SO2NHR' , -S02N(R')2, o -CH2NHC (O) OR' , y Cada R' se selecciona independientemente de un grupo sustituido opcionalmente seleccionado de un grupo Ci-8 alifático, un anillo monocíclico saturado, parcialmente insaturado, o totalmente insaturado de 3-8 miembros que tiene 0-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre , o un sistema de anillo bicíclico saturado, parcialmente insaturado o totalmente insaturado de 8-12 miembros que tiene 0-5 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre; o dos apariciones de R' se toman junto con el átomo o átomos a los que están unidos para formar un anillo monocíclico o bicíclico saturado, parcialmente insaturado, o totalmente insaturado de 3-12 miembros sustituido opcionalmente que tiene 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre; con la condición de que: i) WRW2 y WRW4 no sean ambos -Cl, y WR""" , WR™" y WR™3 no sean -OCH2CH2P ; -OCH2CH2(2-trif luorometil - fenil ) , -OCH2CH2 - (6,7-dimetoxi-l,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-2 - ilo) , o lH-pirazol - 3 - ilo sustituido ; B el compuesto de la Fórmula II es Fórmula II o las sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en donde : T es -CH2-, -CH2CH2-, -CF2-, -C(CH3)2-, O -C(O)-; Ri' es H, Ci-6 alifático, halo, CF3 , CHF2, 0(Ci-6 alifático) , y RD1 o RD2 es ZDR9 en donde : ZD es un enlace, CONH, S02NH, S02N(Ci-6 alquilo), CH2NHS02, CH2N(CH3) S02, CH2NHCO, COO, S02 , O CO ; y R9 es H, Ci-6 alifático, o arilo; C. el Compuesto de la Fórmula III es Fórmula III o las sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en donde : Cada R es independientemente H, OH, OCH3 o dos R tomados juntos forman -OCH20- u -OCF20- ; Cada R4 es independientemente H o alquilo; R5 es H o F; R6 es H o CN; R7 es H, -CH2CH (OH) CH20H, - CH2CH2N+ ( CH3 ) 3 , o-CH2CH2OH; R8 es H, OH, -CH2CH (OH) CH2OH, CH2OH, o R7 y R8 tomados juntos forman un anillo de cinco miembros.
En un aspecto, la composición farmacéutica comprende un inhibidor del ENaC y al menos un compuesto de la Fórmula I, la Fórmula II y la Fórmula III .
En otro aspecto, la composición farmacéutica comprende al menos un compuesto de la Fórmula I, la Fórmula II y la Fórmula III y un inhibidor del ENaC seleccionado de amilorida, benzamil, dimetil-amilorida camostat (un inhibidor de proteasa similar a tripsina), QAU145, 552-02, SG-9411, INO-4995, y aerolí tico .
En otro aspecto, el inhibidor del ENaC es un compuesto de la Fórmula IV Fórmula IV o las sales farmacéuticamente aceptables del mismo.
En otro aspecto, la composición farmacéutica comprende un inhibidor de la actividad del ENaC y el Compuesto 1.
Compuesto 1 En algunas modalidades de este aspecto, el inhibidor del ENaC se selecciona de amilorida, benzamilo, y dimetil-amilorida .
En otro aspecto, la composición farmacéutica comprende un inhibidor de la actividad del ENaC y el Compuesto 2.
Compuesto 2 En algunas modalidades de este aspecto, el inhibidor del ENaC se selecciona de amilorida, benzamilo, y dimetil -amilorida .
En otro aspecto, la composición farmacéutica comprende un inhibidor de la actividad del ENaC y el Compuesto 3.
Compuesto 3 En algunas modalidades de este aspecto, el inhibidor del ENaC se selecciona de amilorida, benzamilo, y dimetil-amilorida .
En otro aspecto, la invención se dirige a una composición, de preferencia una composición farmacéutica que comprende al menos un componente de: Columna A de la Tabla I, o la columna B de la Tabla I , o la columna C de la Tabla I, en combinación con al menos un componente de la Columna D de la Tabla I. Estos componentes se describen en las secciones correspondientes de las siguientes páginas como modalidades de la invención. Por conveniencia, la Tabla I muestra el número de sección y el título correspondiente de las modalidades de los compuestos.
TABLA I .
Por ejemplo, en la sección II. A.1. de esta especificación se describen las modalidades de los compuestos de la Fórmula I.
Para otro ejemplo, en la sección II.B.l de esta especificación se describen las modalidades de los compuestos de la Fórmula II.
Para otro ejemplo, las modalidades de los compuestos de la Fórmula III se describen en la sección II.C.l de esta especificación.
Para otro ejemplo, en la sección II.D.l. de esta especificación se describen ilustrativamente las modalidades de los compuestos del ENaC .
En cualquier modalidad de este aspecto, cualquier modalidad o grupo de modalidades incluidas en la Columna A puede comprender el primer componente, y cualquier modalidad o grupo de modalidades de la Columna D puede comprender el segundo componente.
En una modalidad con base en la Tabla I, el componente de la columna A es el Compuesto 1, el componente de la Columna B es el Compuesto 2, y el componente de la columna C es el Compuesto 3.
En otro aspecto, la invención se dirige a un método para tratar una enfermedad producida por el CFTR en un ser humano que comprende administrar al ser humano una cantidad eficaz de una composición farmacéutica que comprende un componente inhibidor del ENaC de la columna D y un componente modulador de FQ seleccionado de al menos una de las columnas A, B o C de acuerdo con la Tabla I .
Actualmente se ha encontrado que las composiciones farmacéuticamente aceptables de la presente invención incluyen la combinación de un modulador de la actividad del Modulador de FQ o un canal aniónico producido por cAMP/ATP, el Regulador de Conductancia Transmembrana de Fibrosis Quística ("CFTR") y un modulador de la actividad de ENAC .
En otro aspecto, se proporcionan compuestos de combinación para tratar una variedad de enfermedades y trastornos producidos por los Moduladores de FQ y/o ENaC . La composición de combinación puede incluir un modulador de un modulador de FQ correspondiente a una o más de las Fórmulas I, II y III y un inhibidor del ENaC, por ejemplo, los compuestos de la Fórmula IV. Mientras que los métodos para tratar la variedad de enfermedades y trastornos producidos por los Moduladores de FQ y/o ENaC comprenden una combinación de un componente inhibidor del ENaC de la columna D y un componente modulador de FQ seleccionado de al menos una de las columnas A, B o C de acuerdo con la Tabla I, los agentes activos individuales se pueden administrar en una unidad de dosis individual, como unidades de dosificación por separado, administradas simultáneamente, o se pueden administrar secuenc ialmente , opc ionalmente dentro de un período especificado de tiempo de la administración de otros.
En otro aspecto, la invención se dirige a un método para tratar una enfermedad producida por el CFTR en un ser humano que comprende administrar al ser humano una cantidad eficaz de un componente inhibidor del ENaC de la columna D y al menos uno de los Compuestos 1, 2, ó 3 de acuerdo con la Tabla I.
En otro aspecto, la invención se dirige a un método para tratar una enfermedad producida por el CFTR en un ser humano que comprende administrar al ser humano una cantidad eficaz de un componente inhibidor del ENaC de la columna D y al menos un componente sólido de las columnas A, B, o C de acuerdo con la Tabla I.
Se proporcionan los métodos para tratar enfermedades de FQ y otras crónicas producidas por la desregulación o la actividad disfuncional del modulador de FQ o la actividad del canal aniónico y el canal de sodio epitelial (ENaC) suministrada por cAMP/ATP utilizando las composiciones farmacéuticas descritas en la presente.
En otro aspecto, la invención se dirige a un kit para el tratamiento de una enfermedad producida por el CFTR en un ser humano, el kit comprende un componente inhibidor del ENaC de la columna D y un componente modulador de FQ seleccionado de al menos una de las Columnas A, B o C de acuerdo con la Tabla I, y opcionalmente , las instrucciones para preparar y administrar una composición farmacéutica para el tratamiento de la enfermedad.
Se han descrito diversos componentes listados en la Tabla I y se pueden encontrar en la Patente de los Estados Unidos NO. 7,741,321, la patente de los Estados Unidos NO . 7,645,789, la patente de los Estados Unidos NO . 7,495,103, la patente de los Estados Unidos No . 7,495, 103 , la patente de los Estados Unidos No . 7,776,905, la patente de los Estados Unidos No . 7,776,905, la patente de los Estados Unidos No . 7,659,268, las publicaciones de solicitudes de patente de los Estados Unidos US 2007/0244159A1 , US 2008 / 0113985Al , US 2008 / 0019915Al , UA 2008/0306062A1, US 2006 / 0074075Al y US 2009/0131492A1 , el contenido de todas las solicitudes de patente publicadas anteriores y las patentes se incorporan en la presente como referencia en su totalidad.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La invención se relaciona con una combinación, en particular una combinación farmacéutica, tal como una preparación combinada o una composición farmacéutica, respectivamente, que comprende 1) un modulador de uno de los transportadores del Cásete de Unión con ATP ("ABC") o fragmentos del mismo, incluyendo el Regulador de Conductancia Transmembrana de Fibrosis Quística ( " CFTR" ) y 2) un inhibidor del canal de sodio epitelial ("ENaC"), para uso simultáneo, separado o secuencial, especialmente en la prevención, retraso de la progresión o tratamiento de condiciones producidas por el CFTR y el ENAC, las condiciones provodadas directamente por las actividades del modulador de FQ y/o el CFTR y el alivio de los síntomas de las enfermedades no provocadas directamente por las actividades del modulador de FQ y/o el canal aniónico del CFTR. Los ejemplos de enfermedades cuyos síntomas se pueden ver afectados por del Modulador de FQ por ejemplo la actividad del CFTR y/o ENaC incluyen, de manera enunciativa, Fibrosis Quística, Enfisema Hereditario, hemocromatos is Hereditaria, deficiencias de Fibrinólisis por Coagulación, tales como la deficiencia de la Proteína C, angioedema hereditario Tipo 1, deficiencias en el procesamiento de lípidos, tales como hipercolesterolemia familiar, quilomicronemia tipo 1, Abetalipoproteinemia, enfermedades por almacenamiento lisosómico, tales como la enfermedad de células I / Pseudo - Hurler , Mucopolisacaridosis, Sandhof/Tay- Sachs , Crigler-Najjar tipo II, Poliendocrinopatía/Hiperinsulemia, Diabetes mellitus, enanismo de Laron, deficiencia de Mileoperoxidasa , Hipoparat iroidismo primario, Melanoma, Glucanosis CDG tipo 1, Enfisema hereditario, Hipertiroidismo congénito, Osteogénesis imperfecta, Hipof ibrinogenemia hereditaria, deficiencia de ACT, Diabetes insípida (DI), DI neurof isiológica, DI nefrogénica, síndrome de Charcot -Marie Tooth, enfermedad de Pelizeus-Merzbacher, enfermedades neurodegenerativas tales como la enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrófica, parálisis supranuclear progresiva, enfermedad de Pick, diversos trastornos neurológicos por poliglutamina tales como Huntington, ataxia espinocerebelosa tipo 1, atrofia muscular medular y bulbar, atrofia pal idolui s iana dentatorúbrica y distrofia miotónica, así como encefalopatías espongiformes, tales como la enfermedad de Creutzfeldt- Jakob hereditaria, enfermedad de Fabry, síndrome de Straussler-Scheinker, COPD, enfermedad de queratoconj unt ivitis seca, o enfermedad de Sjogren. En algunas modalidades, la presente invención también proporciona el uso de esta combinación de agentes activos, para la preparación de una composición farmacéutica, para la prevención, retraso, de la progresión o tratamiento de estas condiciones, enfermedades y trastornos; y para proporcionar los kits que comprenden estas combinaciones para el tratamiento de un mamífero.
DEFINICIONES En el sentido en que se utilizan en la presente, se deberán aplicar las siguientes definiciones a menos que se indique lo contrario.
El término "transportador de ABC" , en el sentido en que se utiliza en la presente, significa una proteína transportadora de ABC o un fragmento de la misma que comprende al menos un dominio de unión, en donde la proteína o fragmento de la misma está presente in vivo o in vitro. El término "dominio de unión", en el sentido en que se utiliza en la presente, significa un dominio en el transportador de ABC que se puede unir a un modulador. Véase, por ejemplo, Hwang, T.C. et al. , J. Gen. Fisiol. (1998) : 111 (3) , 477-90.
El término "CFTR", en el sentido en que se utiliza en la presente, significa regulador de conductancia transmembrana de fibrosis quística o una mutación del mismo con capacidad para una actividad reguladora, incluyendo de manera enunciativa, AF508 CFTR , R117H CFTR, y G551D CFTR (véase, por ejemplo, http://www.genet.sickkids.on.ca/cftr/, para las mutaciones del CFTR) .
En el sentido en que se utiliza en la presente, el término "ingrediente farmacéutico activo" o "API" se refiere a un compuesto biológicamente activo. Los API ilustrativos incluyen los potenciadores de FQ N- [ 2 , 4 - bis ( 1 , 1 - dimet ile t il ) -5 -hidroxif enil ] -1, 4-dihidro-4- oxoquinolin- 3 -carboxamida (Compuesto 1) y N- (4- ( 7 -azabiciclo [2.2.1] he tan- 7 - i 1 ) - 2 - ( tri f luorometil ) fenil) -4- oxo- 5 - ( trif luorometil ) - 1 , 4 -dihidroquinolin- 3 -carboxamida (Compuesto 2) . Los API ilustrativos también incluyen los correctores de FQ ácido 3 - (6 - (1- (2, 2-Dif luorobenzo [d] [ 1 , 3 ] dioxol - 5 -il) ciclopropancarboxamido) - 3 -met ilpiridin- 2 -il)benzoico (Compuesto 3) y (R) -1- (2,2- dif luorobenzo [d] [1,3] dioxol-5-il) -N- (1- (2,3-dihidroxipropi 1 ) -6-f luoro-2 ( - 1 -hidroxi - 2 -metilpropan-2 - il ) - 1H- indol - 5 - i 1 ) c ic lopropanocarboxamida ( Compuesto 3 ) .
El término "modular" , en el sentido en que se utiliza en la presente, significa aumentar o disminuir una cantidad mensurable.
El término " CFTR normal" o "función del CFTR normal", en el sentido en que se utiliza en la presente, significa el CFTR similar al tipo silvestre sin ningún deterioro debido a factores ambientales tales como tabaquismo, contaminación, o cualquier cosa que produzca inflamación en los pulmones.
El término "CFTR reducido" o "función del CFTR reducido" , en el sentido en que se utiliza en la presente, significa menos que el CFTR normal o menos que la función del CFTR normal.
En el sentido en que se utiliza en la presente, el término "amorfo" se refiere a un material sólido que no tenga un orden de largo alcance en la posición de sus moléculas. Los sólidos amorfos en general son sobreenfriado líquidos en los cuales las moléculas están dispuestas de forma aleatoria de tal forma que no exista una disposición bien definida, por ejemplo, embalaje molecular, y sin un orden de largo alcance. Los sólidos amorfos en general son isotrópicos, es decir, presentan propiedades similares en todas las direcciones y no tienen puntos definidos de fusión. Por ejemplo, un material amorfo es un material sólido que no tiene picos característicos cristalinos definidos en su patrón de difracción de polvo de rayos X (XRPD) (es decir, no es cristalino como se determina mediante XRPD) . En cambio, aparecen uno o varios picos amplios (por ejemplo, halos) en su patrón de XRPD. Los picos amplios son característicos de un sólido amorfo. Véase, la US 2004/0006237 para una comparación de los XRPD de un material amorfo y un material cristalino.
En el sentido en que se utiliza en la presente, el término "sustancialmente amorfo" se refiere a un material sólido que tiene poco o ningún orden de largo alcance en la posición de sus moléculas. Por ejemplo, los materiales sustancialmente amorfos tienen menos de aproximadamente el 15% de cris talinidad (por ejemplo, menos de aproximadamente 10% de cris talinidad o menos de aproximadamente el 5% de cris talinidad) . También se observa que el término 'sustancialmente amorfo' incluye el descriptor, 'amorfo', que se refiere a los materiales que no tienen cristalinidad (0%) .
En el sentido en que se utiliza en la presente, el término "dispersión" se refiere a un sistema de dispersión en el cual una sustancia, la ¦fase dispersa, se distribuye en unidades discretas, a lo largo de una segunda sustancia (la fase continua o vehículo) . El tamaño de la fase dispersa puede variar considerablemente (por ejemplo, las moléculas individuales, las partículas coloidales de dimensión nanométrica, a múltiples mieras de tamaño) . En general, las fases dispersas pueden ser sólidos, líquidos o gases. En el caso de una dispersión de sólidos, las fases dispersas y continuas son ambas sólidas. En aplicaciones farmacéuticas, una dispersión de sólidos puede incluir: un fármaco amorfo en un polímero amorfo; un fármaco amorfo en un polímero cristalino; un fármaco cristalino en un polímero amorfo; o un fármaco cristalino en un polímero cristalino. En esta invención, una dispersión de sólidos puede incluir un fármaco amorfo en un polímero amorfo o un fármaco amorfo en un polímero cristalino. En algunas modalidades, una dispersión de sólidos incluye el polímero que constituye la fase dispersa, y el fármaco constituye la fase continua. 0 bien, una dispersión de sólidos incluye el fármaco que constituye la fase dispersa, y el polímero constituye la fase continua.
En el sentido en que se utiliza en la presente, el término "dispersión de sólidos" se refiere en general a una dispersión de sólidos de dos o más componentes, por lo general uno o más fármacos (por ejemplo, un fármaco (por ejemplo, el Compuesto 1)) y un polímero, aunque posiblemente contenga otros componentes tales como agentes tensioac t ivos u otros excipientes farmacéuticos, donde el fármaco o fármacos (por ejemplo, el Compuesto 1) sea sus tancialmente amorfo (por ejemplo, que tenga aproximadamente 15% o menos (por ejemplo, aproximadamente 10% o menos , o aproximadamente 5% o menos)) del fármaco cristalino (por ejemplo, N-[2,4-bis- (1,1-dimetiletil) -5-hidroxifenil] -1, -di idro- -oxoquinol in- 3 - carboxamida) o amorfo (es decir, que no tenga ningún fármaco cristalino) , y la estabilidad física y/o disolución y/o solubilidad del fármaco sus tanc ialmente amorfo o amorfo se ven reforzadas por los otros componentes. Las dispersiones de sólidos incluyen típicamente un compuesto disperso en un medio portador adecuado, tal como un portador en estado sólido. Por ejemplo, un portador comprende un polímero (por ejemplo, un polímero soluble en agua o un polímero soluble parcialmente en agua) y puede incluir excipientes opcionales, tales como excipientes funcionales (por ejemplo, uno o más tensioactivos) o excipientes no funcionales (por ejemplo, uno o más materiales de relleno) . Otra dispersión de sólidos ilustrativa es un co-precipitado o un co-fundido de N- [ 2 , 4 -bis - ( 1 , 1 -dimetiletil) - 5 -hidroxifenil] - 1 , 4 - dihidro - 4 -oxoquinolin- 3 - carboxamida con al menos un polímero.
Un " co-precipitado" es un producto después de disolver un fármaco y un polímero en un solvente o mezcla de solventes, seguido por el retiro del solvente o la mezcla de solventes. A veces, el polímero puede estar suspendido en el solvente o mezcla de solventes. El solvente o mezcla de solventes incluye solventes orgánicos y fluidos supercríticos . Un "co-fundido" es un producto después de calentar un fármaco y un polímero hasta fundir, opcionalmente en presencia de un solvente o mezcla de solventes, seguido mezclado, retiro de al menos una porción del solvente en su caso, y enfriar a temperatura ambiente a una velocidad seleccionada.
En el sentido en que se utiliza en la presente, "cristalino" se refiere a compuestos o composiciones donde las unidades estructurales están dispuestas en patrones o redes geométricos fijos, de tal forma que los sólidos cristalinos tengan un orden rígido de largo alcance. Las unidades estructurales que constituyen la estructura cristalina pueden ser átomos, moléculas o iones. Los sólidos cristalinos muestran puntos de fusión determinados.
En el sentido en que se utiliza en la presente, la frase "sustancialmente cristalino", significa un material sólido que se organizan en patrones o redes geométricos fijos que tengan un orden rígido de largo alcance. Por ejemplo, los materiales sustancialmente cristalinos tienen más de aproximadamente el 85% de cris talinidad (por ejemplo, más de aproximadamente 90% de cristalinidad o más de aproximadamente 5% de cristalinidad) . También se observa que el término 1 sustancialmente cristalino' incluye el descriptor 'cristalino', que se define en el párrafo anterior.
En el sentido en que se utiliza en la presente, "cristalinidad" se refiere al grado de orden estructural en un sólido. Por ejemplo, el Compuesto 1, que es sustancialmente amorfo, tiene menos de aproximadamente 15% de cristalinidad, o su estructura en estado sólido es menor que aproximadamente 15% cristalino. En otro ejemplo, el Compuesto 1, que es amorfo, tiene cero (0%) de cri s tal inidad .
En el sentido en que se utiliza en la presente, un "excipiente" es un ingrediente inactivo en una composición farmacéutica. Los ejemplos de excipientes incluyen materiales de relleno o diluyentes, tensioact ivos , aglutinantes, agentes de deslizamiento, lubricantes, desintegantes , y lo semej ante .
En el sentido en que se utiliza en la presente, un "desintegrante" es un excipiente que hidrata una composición farmacéutica y ayuda en la dispersión de la tableta. Los ejemplos de desintegrantes incluyen croscarmelosa de sodio y/o glicolato de almidón de sodio.
En el sentido en que se utiliza en la presente, un "diluyente" o "material de relleno" es un excipiente que agrega volumen a una composición farmacéutica. Los ejemplos de materiales de relleno incluyen lactosa, sorbitol, celulosas, fosfatos de calcio, almidones, azúcares (por ejemplo, manitol, sacarosa, o lo semejante) o cualquier combinación de los mismos .
En el sentido en que se utiliza en la presente, un " tensioact ivo" es un excipiente que imparte a las composiciones farmacéuticas solubilidad y/o humectabilidad mejoradas. Los ejemplos de tensioac tivos incluyen lauril sulfato de sodio (SLS), estearil fumarato de sodio (SSF), polioxiet ileno 20 mono-oleato de sorbitán (por ejemplo, TweenMR) , o cualquier combinación de los mismos.
En el sentido en que se utiliza en la presente, un "aglutinante" es un excipiente que imparte a una composición farmacéutica con cohesión mejorada o resistencia a la tracción (por ejemplo, dureza) . Los ejemplos de aglutinantes incluyen fosfato dibásico de calcio, sacarosa, almidón de maíz, celulosa microcri stal ina , y celulosa modificada (por ejemplo, hidroximetil celulosa) .
En el sentido en que se utiliza en la presente, un "agente de deslizamiento" es un excipiente que imparte a las composiciones farmacéuticas con propiedades mejoradas de flujo. Los ejemplos de agentes de deslizamiento incluyen sílice coloidal y/o talco.
En el sentido en que se utiliza en la presente, un "colorante" es un excipiente que imparte a una composición farmacéutica con un color deseado.
Los ejemplos de colorantes incluyen pigmentos disponibles comercialmente , tales como FD&C Blue # 1 Aluminum Lake, FD&C Blue # 2, otros colores FD&C Blue, dióxido de titanio, óxido de hierro y/o combinaciones de los mismos.
En el sentido en que se utiliza en la presente, un "lubricante" es un excipiente que se agrega a las composiciones farmacéuticas que se presionan en tabletas. El lubricante ayuda en la compactación de los gránulos en tabletas y la expulsión de una tableta de una composición farmacéutica de una prensa de troquel. Los ejemplos de lubricantes incluyen estearato de magnesio, ácido esteárico (estearina) , aceite hidrogenado, estearil fumarato de sodio, o cualquier combinación de los mismos .
En el sentido en que se utiliza en la presente, "friabilidad" se refiere a la propiedad de una tableta para permanecer intacta y conservar su forma a pesar de una fuerza externa de presión. La friabilidad se puede cuantificar utilizando la expresión matemática presentada en la ecuación 1: % de friabilidad = 100 x— f— ( 1 ) en donde w0 es el peso original de la tableta y Wf es el peso final de la tableta después de que se ponga a través del medidor de friabilidad.
La friabilidad se mide utilizando un aparato de prueba USP estándar que hace girar las tabletas experimentales a 100 revoluciones. Algunas tabletas de la presente invención tienen una friabilidad menor de aproximadamente 1% (por ejemplo, menor de aproximadamente 0.75%, menor de aproximadamente 0.50%, o menor de aproximadamente 0.30%) .
En el sentido en que se utiliza en la presente, "diámetro medio de partícula" es el diámetro promedio de partícula según se mide utilizando técnicas tales como dispersión de luz láser, análisis de imágenes, o análisis granulornétrico .
En el sentido en que se utiliza en la presente, "densidad de volumen" es la masa de partículas de material dividida entre el volumen total que ocupan las partículas. El volumen total incluye el volumen de las partículas, el volumen vacío entre las partículas y el volumen interno de poro. La densidad de volumen no es una propiedad intrínseca de un material, puede cambiar dependiendo de la forma en que se procese el material .
El término "alifático" o "grupo alif tico", en el sentido en que se utiliza en la presente, significa una cadena recta (es decir, sin ramificar) o una cadena de hidrocarburos ramificada, sustituida o sin sustituir que está totalmente saturada o que contiene una o más unidades de insaturac ión , o un hidrocarburo monocíclico o un hidrocarburo biciclico que está totalmente saturado o que contiene una o más unidades de insaturación , pero que no es aromático (también denominado en la presente como "carbociclo" "cicloalifático" o "cicloalquilo") , que tiene un punto único de unión al resto de la molécula. A menos que se especifique lo contrario, los grupos alifáticos contienen 1-20 átomos de carbono alifáticos. En algunas modalidades, los grupos alifáticos contienen 1-10 átomos de carbono alifáticos. En otras modalidades, los grupos alifáticos contienen 1-8 átomos de carbono alifáticos. Todavía en otras modalidades, los grupos alifáticos contienen 1-6 átomos de carbono alifáticos, y todavía en otras modalidades, los grupos alifáticos contienen 1-4 átomos de carbono alifáticos. En algunas modalidades, "cicloalifático" (o "carbociclo" o "cicloalquilo") se refiere a un C3-C8 hidrocarburo monocíclico o un C8-Ci4 hidrocarburo bicíclico o tricíclico que está totalmente saturado o que contiene una o más unidades de insaturación, pero que no es aromático, que tiene un punto único de unión al resto de la molécula en donde cualquier anillo individual en el sistema de anillo bicíclico tiene 3-7 miembros. Los grupos alifáticos adecuados incluyen, de manera enunciativa, grupos alquilo, alquenilo, alquinilo, sustituidos o sin sustituir, lineales o ramificados, y los híbridos de los mismos, tales como (cicloalquil) alquilo, ( cic loalquenil ) alquilo o (cicloalquil) alquenilo . Los grupos cicloalif ticos adecuados incluyen cicloalquilo , cicloalquilo bicíclico (por ejemplo, decalina) , bicicloalquilo puenteado tal como norbornilo o [2.2.2] biciclo-octilo, o tricíclico puenteado tal como adamantilo.
El término "heteroalif tico" , en el sentido en que se utiliza en la presente, significa grupos alifáticos en donde uno o dos átomos de carbono están sustituidos independientemente por uno o más de oxígeno, azufre, nitrógeno, fósforo, o silicio. Los grupos heteroalifático puede estar sustituidos o sin sustituir, ramificados o si ramificar, ser cíclicos o acíclicos, e incluyen grupos "heterociclo" , "heterociclilo" , "heterocicloalif ticos" , o "he terocíc lieos" .
El término "heterociclo", "heterociclilo", "heterocicloalifático" , o "heterocíclico" , en el sentido en que se utiliza en la presente, significa sistemas de anillos no aromáticos, monocíclicos , bicíclicos, tricíclicos o en los cuales uno o más miembros en el anillo son un heteroátomo seleccionado independientemente. En algunas modalidades, el grupo "heterociclo", "heterociclilo", "heterocicloalifático" , o "heterocíclico" tiene de tres a catorce miembros en el anillo en los cuale uno o más miembros en el anillo es un heteroátomo seleccionado independientemente de oxígeno, azufre, nitrógeno o fósforo, y cada anillo en el sistema contiene 3 a 7 miembros en el anillo.
El término "heteroátomo" significa uno o más de oxígeno, azufre, nitrógeno, fósforo, o silicio (incluyendo, cualquier forma oxidada de nitrógeno, azufre, fósforo, o silicio; la forma cuaternizada de cualquier nitrógeno básico o; un átomo de nitrógeno sustituible de un anillo heterocíclico, por ejemplo, N (como en 3 , 4-dihidro-2H-pirrolilo) , o NH (como en pirrolidinilo) o NR+ (como en pirrol idini lo N-sustituido) ) .
El término " insaturado" , en el sentido en que se utiliza en la presente, significa que una porción tiene una o más unidades de insaturación .
El término "arilo", utilizado solo o como parte de una fracción mayor como en "aralquilo", "aralcoxi" , o "ariloxialquilo" , se refiere a sistemas de anillos monocíclicos , bicíclicos, y triciclicos que tienen un total de cinco a catorce miembros en el anillo, en donde al menos un anillo en el sistema es aromático y en donde cada anillo en el sistema contiene 3 a 7 miembros en el anillo. El término "arilo" se puede utilizar indistintamente con el término "anillo de arilo" . El término "arilo" también se refiere a sistemas de anillos de heteroarilo como se define más adelante.
Un grupo alifático o heteroalif tico , o un anillo heterocíclico no aromático puede contener uno o más sust ituyentes . Los sust ituyentes adecuados en el átomo carbono saturado de un grupo alifático o heteroalifático, o de un anillo heterocíclico no aromático se seleccionan entre los listados anteriormente para el átomo carbono insaturado de un grupo arilo o heteroarilo y adicionalmente incluyen los siguientes: =0, =S, =NNHR* , =NN(R*)2, =NNHC(0)R*, =NNHC02 (alquilo) , =NNHS02 ( alqui lo ) , o =NR* , donde cada R* se selecciona independientemente de hidrógeno o un Ci-6 alifático sustituido opcionalmente . Los sust ituyentes opcionales en el grupo alifático de R* se seleccionan del NH2, NH(Ci-4 alifático)2/ halo, Ci-4 alifático, OH, 0(Ci-4 alifático), N02 , CN, C02H, C02(Ci-4 alifático) , O(halo Ci-4 alifático) , o halo (Ci-4alifático) , en donde cada uno de los grupos Ci-4alifáticos anteriores de R* no está sustituido.
Los sus t ituyentes opcionales en el átomo de nitrógeno de un anillo heterocíclico no aromático se selecciona de -R+, -N(R+)2, -C(0)R+, -C02R+, -C(0)C(0)R+, -C(0)CH2C(0)R+, -S02R+, -S02N(R+)2, -C ( =S) N (R+) 2 , - C ( =NH) - N ( R+ ) 2 / o -NR+S02R+; en donde R+ es hidrógeno, un Ci-6 alifático sustituido opcionalmente, fenilo sustituido opcionalmente, -0 (Ph) sustituido opcionalmente, -CH2(Ph) sustituido opcionalmente, - (CH2) 1-2 (Ph) sustituido opcionalmente -CH=CH(Ph); o un heteroarilo de 5-6 miembros no sustituido o un anillo hterocíclico que tiene de uno a cuatro heteroátomos seleccionados independientemente de oxígeno, nitrógeno o azufre, o, a pesar de la definición anterior, dos apariciones independientes de R+, en el mismo sustituyente o sus t ituyentes diferentes, tomados junto con el átomo o átomos a los cuales cada grupo R+ está unido, forman un anillo de cicloalquilo , heterociclilo , arilo, o heteroarilo de 3 - 8 -miembros que tiene 0-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre. Los susti tuyentes opcionales en el grupo alifático o el anillo de fenilo de R+ se seleccionan de NH2 , NH (C1.4 alifático) , N(Ci- alifático)2, halo, Ci-4 alifático, OH, OH, 0(Ci-4 alifático) , N02, CN, C02H, C02(Ci-4 alifático) , 0(halo Ci-4 alifático) , o halo (Ci-4 alifático) , donde cada uno de los grupos Ci-4 alifáticos anteriores de R+ no está sustituido.
Como se detalló anteriormente, en algunas modalidades, dos sucesos independientes de R' (o cualquier otra variable se define en la presente similarmente ) , se toman junto con el átomo o átomos a los cuales cada variable se une para formar un anillo de cicloalquilo, heterociclilo, arilo, o heteroarilo de 3-8-miembros que tiene 0-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre. Los anillos ilustrativos que se forman cuando dos sucesos independientes de R' (o cualquier otra variable definida en la presente similarmente) se toman junto con el átomo o átomos a los cuales cada variable está unida incluyen, de manera enunciativa los siguientes: a) dos sucesos independientes de R' (o cualquier otra variable definida en la presente similarmente ) que están unidos al mismo átomo y se toman junto con ese átomo para formar un anillo, por ejemplo, N(R)2, donde ambas apariciones de R' se toman junto con el átomo de nitrógeno para formar un grupo piperidin- 1 - ilo , piperazin- 1- ilo, o un morfol in- 4 - il , y b) dos sucesos independientes de R' (o cualquier otra variable definida en la presente similarmente) que están unidos a diferentes átomos y se toman junto con ambos de aquellos átomos para formar un anillo, por ejemplo, donde un grupo fenilo está sustituido con dos apariciones de OR estas dos apariciones de R° se toman junto con los átomos de oxígeno a los cuales están unidos para formar un anillo que contiene oxígeno fusionado de 6 miembros: Se apreciará que se pueden formar una variedad de otros ciclos cuando dos sucesos independientes de R' (o cualquier otra variable definida en la presente similarmente) se toman junto con el átomo o átomos a los cuales cada variable está unida y que los ejemplos detallados anteriormente no se pretende que sean limitantes.
Un enlace sustituyente en, por ejemplo, un sistema de anillo bicíclico, tal como se muestra más adelante, significa que el sustituyente puede estar unido a cualquier átomo de anillo sustituible en cualquier anillo del sistema de anillo bicíclico: El término "grupo protector" (PG) , en el sentido en que se utiliza en la presente, representa aquellos grupos destinados a proteger un grupo funcional, tal como, por ejemplo, un alcohol, amina, carboxilo, carbonilo, etc, contra reacciones indeseables durante los procedimientos sintéticos. Los grupos protectores comúnmente utilizados se describen en Greene y Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3ra. Edición (John Wiley & Sons, New York, 1999), que se incorpora en la presente como referencia. Los ejemplos de grupos protectores de nitrógeno incluyen grupos acilo, aroilo, o carbamilo tales como formilo, acetilo, propionilo, pivaloilo, t-butilacetilo , 2 - c loroacet i lo , 2 -bromoacet i lo , trifluoroacetilo, tricloroacet ilo , ftalilo, o-nitrofenoxiacetilo- , a-clorobutirilo, benzoilo, 4-clorobenzoilo , 4 -bromobenzoilo , 4 -ni trobenzoilo y auxiliares quirales tales como D, L o D, L-aminoácidos protegidos o no protegidos tales como alanina, leucina, fenilalanina y lo semejante; los grupos sulfonilo tales como bencensulfonilo, p-toluensulfonilo y lo semejante; grupos carbamato tales como benc i loxicarboni lo , p-c lorobenc i loxicarboni lo , p-metoxibenc i loxicarboni lo , p-nitrobenciloxicarbonilo , 2-nitrobenc i loxicarboni lo , p-bromobenc i loxicarboni lo , 3 , 4 - dimetoxi enciloxicarboni lo , 3,5-dimetoxibenc iloxicarboni lo , 2,4-dimetoxibenciloxicarbonilo , 4-metoxibenc iloxicarbonilo , 2-nitro-4,5-dimetoxibenciloxicarbonilo , 3,4,5-trimetoxibenciloxicarbonilo, 1- (p-bifenilil ) -1-met i letoxicarbonilo , a,o¡-dimetil-3, 5 -dimetoxibenc iloxicarboni lo , benzhidri loxicarboni lo , t -but iloxicarbonilo , di isopropi lmetoxicarboni lo , i sopro i loxicarboni lo , etoxicarbo i lo , metoxicarbonilo , aliloxicarbonilo , 2,2,2,-tricloroetoxicarbonilo, fenoxicarboni lo , 4-nitrofenoxi carbonilo, f luorenil - 9 -metoxicarboni lo , c ic lopenti loxicarboni lo , adamant i loxicarboni lo , ciclohexiloxicarbonilo, fenilt iocarbonilo y lo semejante, grups arilalquilo tales como bencilo, tri feni lmeti lo , benciloximet ilo y lo semejante y los grupos sililo tales como trimetilsililo y lo seme j ante .
Los grupos ií-protectores preferidos son ter-butiloxicarbonilo (Boc) .
Los ejemplos de grupos protectores útiles para ácidos son alquil ásteres sustituidos tales como 9-f luorenilmetilo, metoximetilo , metil tiometilo, tetrahidropiranilo , tetrahidrofuranilo , metoxietoximet ilo , 2- ( trimet i 1 s i 1 i 1 ) etoximet i lo , benciloximetilo, pivaloiloximetilo, feni lacetoximeti lo , triisopropropilsisililmetilo, cianometilo, acetol, fenacilo, ésteres de fenacilo sustituido, 2 , 2 , 2 - tricloroet ilo , 2-haloetilo, ?-cloroalquilo , 2 - ( trimet il si 1 i 1 ) et i lo , 2-metiltioetilo, t-butilo, 3 -met il - 3 -pent i lo , diciclopropilmetilo, ciclopentilo , ciclohexilo, alilo, metalilo, cinnamilo, fenilo, ésteres de sililo, bencilo y bencil ésteres sustituidos, 2,6-dialqui 1 feni 1 ésteres tales como pentafluorofenilo , 2 , 6 - dialquil feni lo . Los grupos protectores preferidos para ácidos son metil o etil ésteres.
Los métodos de adición (un proceso en general referido como "protección") y retiro (un proceso en general denominado como "desprotección") estos grupos protectores de amina y ácido son bien conocidos en la técnica y están disponibles, por ejemplo en P . J . Koc ienski , Protecting Groups, Thieme, 1994, que se incorporan en la presente como referencia en su totalidad y en Greene y Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3a. Edición (John iley & Sons, New York, 1999) .
A menos que se indique lo contrario, las estructuras que aparecen en la presente también se pretende que incluyan todas las formas isoméricas (por ejemplo, enant ioméricas , diastoméricas , y geométricas (o conformacionales ) ) de la estructura, por ejemplo, las configuraciones R y S para cada centro asimétrico, los isómeros de doble enlace (Z) y (E) , y isómeros conformacionales (Z) y (E) . Por lo tanto, los isómeros estereoquímicos individuales así como las mezclas enantioméricas , diastoméricas , y geométricas (o conformacionales ) de los compuestos de la presente están dentro del alcance de la invención. A menos que se indique lo contrario, todas las formas tautoméricas de los compuestos de la invención están dentro del alcance de la invención.
Adicionalmente , a menos que se indique lo contrario, las estructuras que aparecen en la presente también se pretende que incluyan los compuestos que difieren sólo en la presencia de uno o más átomos enriquecidos isotópicamente. Por ejemplo, los compuestos que tienen las estructuras de la presente, excepto para la sustitución de hidrógeno por deuterio o tritio, o la sustitución de un átomo de carbono por un átomo de carbono 13C o 14C-enriquecido están dentro del alcance de esta invención. Estos compuestos son útiles , por ejemplo, como herramientas o soluciones de ensayo analíticas en ensayos biológicos.
Los ejemplos de solventes adecuados son, de manera enunciativa, agua, metanol, diclorometano (DCM) , acetoni trilo , dimet ilformamida (DMF) , acetato de etilo (EtOAc), alcohol isopropílico (IPA), acetato de isopropilo (IPAc), tetrahidrofurano (THF), metil etil cetona (MEK) , t-butanol y N-metil pirrolidona (NMP) .
COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS En un aspecto, la invención se dirige a una composición farmacéutica que comprende un componente inhibidor del ENaC de la Columna D y al menos un componente de las Columnas En algunas modalidades, la composición farmacéutica incluye una combinación de un componente inhibidor del ENaC de la Columna D y un compuesto de la Fórmula I. En otra modalidad, la composición farmacéutica incluye una combinación de un componente inhibidor del ENaC de la Columna D y un compuesto de la Fórmula II. En otra modalidad, la composición farmacéutica incluye una combinación de un componente inhibidor del ENaC de la Columna D y un compuesto de la Fórmula III.
Fórmula II Fórmula III En otra modalidad, la composición farmacéutica incluye una combinación de un componente inhibidor del ENaC de la Columna D y el Compuesto I. En otra modalidad, la composición farmacéutica incluye una combinación de un componente inhibidor del ENaC de la Columna D y el Compuesto II. En otra modalidad, la composición farmacéutica incluye una combinación de un componente inhibidor del ENaC de la Columna D y el Compuesto III. En otra modalidad, la composición farmacéutica incluye una combinación de un componente inhibidor del ENaC de la Columna D y una forma sólida del Compuesto 1. En otra modalidad, la composición farmacéutica incluye una combinación de un componente inhibidor del ENaC de la Columna D y una forma sólida del Compuesto 2. En otra modalidad, la composición farmacéutica incluye una combinación de un componente inhibidor del ENaC de la Columna D y una forma sólida del Compuesto 3. En otra modalidad, la composición farmacéutica incluye una combinación de un componente inhibidor del ENaC de la Columna D y una formulación del Compuesto 1. En otra modalidad, la composición farmacéutica incluye una combinación de un componente inhibidor del ENaC de la Columna D y una formulación del Compuesto 2. En otra modalidad, la composición farmacéutica incluye una combinación de un componente inhibidor del ENaC de la Columna D y una formulación del Compuesto 3. En otra modalidad, la composición farmacéutica incluye una combinación de un inhibidor del ENaC de la Columna D, al menos un componente de las columnas A, B, o C y al menos un agente terapéutico adicional.
En otra modalidad, al menos un agente terapéutico adicional incluye un modulador del CFTR distinto de los componentes de las Columnas A, B y/o C, es decir, un agente que tenga el efecto de inocular la actividad del CFTR.
II. A.1. COMPUESTOS DE LA FÓRMULA I Fórmula I Los moduladores de la actividad del transportador ABC en la Columna A se describen y ejemplifican totalmente en la Patente de los Estados Unidos 7,495,103 y la Publicación de la solicitud de los Estados Unidos US 2010/0184739 que están cedidas comúnmente al Cesionario de la presente invención. Todos los compuestos citados en las patentes anteriores son útiles en la presente invención y se incorporan a la presente descripción en su totalidad.
En una modalidad, en el compuesto de la Fórmula I de la composición o las sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en donde: Cada uno de WRW2 y WRW4 se selecciona independientemente de CN, CF3, halo, C2-6 alquilo recto o ramificado, cicloalifático de C3-i2 miembros, fenilo, un heteroarilo de 5-10 miembros o heterocíclico 3-7 miembros, en donde el heteroarilo o heterocíclico tiene hasta 3 heteroátomos seleccionados de 0, S, o N, en donde el WRW2 y WRW4 se sustituye independiente y opcionalmente con hasta tres sus t ituyentes seleccionados de -OR' , -CF3, -0CF3, SR' , S(0)R', S02R' , -SCF3, halo, CN, -COOR' , -COR', - O ( CH2 ) 2 ( R ' ) 2 , - O ( CH2 ) ( R ' -CON(R')2, -(CH2)2OR' -(CH2)OR', -CH2CN, fenilo o fenoxi sustituido opcionalmente, -N(R' ) 2/ -NR'C(0)0R', -NR'C(0)R', - ( CH2 ) 2N ( R ' ) 2 , o - ( CH2 ) N ( R ' ) 2 , WR se selecciona de hidrógeno, -OCF3í -CF3/ -OH, -OCH3, -NH2, -CN, -CHF2, -NHR' , -N(R')2, -NHC(0)R', -NHC(0)OR', -NHS02R' , -CH2OH, -CH2N(R')2, -C(0)OR', -S02NHR' , -S02N(R')2, o - CH2NHC ( O ) OR ' , y Cada R' se selecciona independientemente de un grupo sustituido opc ionalmente seleccionado de un grupo C1-8 alifático, un anillo monocíclico de 3-8-miembros saturado, parcialmente insaturado, o totalmente insaturados que tiene 0-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, o un sistema de anillo bicíclico saturado, parcialmente insaturado, o totalmente insaturado de 8-12 miembros que tiene 0-5 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre; o dos apariciones de R' se toman junto con el átomo o átomos a los cuales están unidas para formar un anillo monocíclico o bicíclico saturado, parcialmente insaturado, o totalmente insaturado, sustituido opcionalmente de 3-12 miembros que tiene 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre; con la condición de que: i) WRW2 y WRW4 no sean ambos -Cl; y WRW2, WR 4 y WRW5 no sean -OCH2CH2Ph, -OCH2CH2 (2-trif luorometil-fenilo) , - OCH2CH2 - ( 6 , 7 -dimetoxi - 1 , 2 , 3 , 4 - tetrahidroisoquinolin- 2 - ilo) , o 1?-pirazol - 3 - ilo sustituido.
MODALIDADES DEL COMPUESTO DE LA FÓRMULA I En una modalidad del compuesto de la Fórmula I, o una sal farmacéutica del mismo, donde cada uno de WRW2 y WRW4 se selecciona independientemente de CN, CF3, halo, C2-6 alquilo recto o ramificado, cicloalifático de C3-i2 miembros, o fenilo, en donde el WRW2 y WRW4 se sustituye independiente y opcionalmente con hasta tres sus t i tuyentes seleccionados de -0R' , -CF3, -OCF3, -SCF3, halo, -COOR' , -COR', -0(CH2) 2N(R' ) 2, -0(CH2)N(R' )2, -CON(R')2, -(CH2)2OR' -(CH2)0R', fenilo sustituido opcionalmente, -N(R')2, -NC(0)0R', -NC(0)R', - ( CH2 ) 2N ( R ' ) 2 , o - ( CH2 ) N ( R ' ) 2 ; y WRWS se selecciona de hidrógeno, -OCF3, -CF3;-OH, -OCH3( -NH2, -CN, -NHR ' , -N(R')2/ -NHC(0)R', -NHC(0)0R', -NHS02R' , -CH2OH, -C(0)0R', -S02NHR', o -CH2NHC(0)0- ' ) .
Alternativamente, cada uno de WRW2 y WRW4 se selecciona independientemente de - C , -CF3, C2-6 alquilo recto o ramificado, cicloalif tico de C3 -i2 miembros, o fenilo, en donde cada uno de los WR 2 y WRW4 se sustituye independiente y opcionalmente con hasta tres sus ti tuyentes seleccionados de -OR' , -CF3, -OCF3/ -SCF3, halo, -COOR' , -COR' , - O ( CH2 ) 2N ( R ' ) 2 , -0(CH2)N(R' ) 2, -CON(R')2, -(CH2)2OR', -(CH2)OR' , fenilo sustituido opcionalmente , -N(R' ) 2 , -NC(0)OR', -NC(0)R' , - (CH2) 2N(R' ) 2, o - (CH2)N(R' )a; y WRWS se selecciona de -OH, -CN, -NHR' , -N(R')2, -NHC(0)R', -NHC(0)OR' , -NHS02R' , -CH2OH, -C(0)OR', -S02NHR' , o -CH2NHC (0) O- (R' ) .
En una modalidad adicional, WRW2 es un anillo de fenilo sustituido opcionalmente con hasta tres sus t ituyentes seleccionados de -OR' , -CF3, -OCF3, -SR' , -S(0)R' , -S02R' , -SCF3, halo, -CN, -COOR', -COR' , -0(CH2)2N(R' )2, -0(CH2)N(R' ) 2, -C0N(R')2, -(CH2)2OR' , -(CHa)OR', -CH2CN, fenilo o fenoxi sustituido opcionalmente, -N(R')2, -NR'C(0)0R', -NR'C(0)R' , - (CH2) 2N(R' ) 2, o - ( CH2 ) N ( R ' ) 2 , WRW4 es C2-6 alquilo recto o ramificado; y WRW5 es -OH. En otra modalidad, cada uno de WRW2 y WRW4 es independientemente -CF3, -CN, o un C2-6 alquilo recto o rami f icado .
En otra modalidad, cada uno de WRW2 y WRW4 es C2-6 alquilo recto o ramificado sustituido opcionalmente con hasta tres sust ituyentes seleccionados independientemente entre -OR' , -CF3, -0CF3, -SR' , -S(0)R', -S02R' , -SCF3, halo, -CN, -COOR', -COR' , -O (CH2) 2N (R' ) 2, - O ( CH2 ) N ( R ' ) 2 , -CON(R')2, -(CH2)2OR', -(CH2)OR', -CH2CN, fenilo o fenoxi sustituido opcionalmente, -N(R')2, -NR'C(0)OR', -NR'C(0)R', - (CH2) 2 (R' ) 2, o - ( CH2 ) ( R ' ) 2.
En otra modalidad, cada uno de WRW2 y WRW4 se selecciona independientemente de n-propilo, isopropilo, n-butilo, sec-butilo, t-butilo, 1,1-dimetil-2- hidroxiet i lo , 1, l-dimetil-2- { etoxicarbonil ) etilo, l,l-dimetil-3-(t-butoxicarbonil -amino) propilo, o n-pentilo sustituido opcionalmente.
En otra modalidad, WRW5 se selecciona de -CN, -NHR ' , -N(R')2, -CH2N(R')2, -NHC(0)R', -NHC(0)OR', -OH, C(0)OR', O -S02NHR' .
En otra modalidad, WRW5 se selecciona de -CN, -NH(Ci-46 alquilo), -N(C1-6 alquilo)2, -NHC(0) (C1-6 alquilo), -CH2NHC (O) 0 (C1-6 alquilo), -NHC (0) 0 (Ci-6 alquilo), -OH, -0(Ci-6 alquilo), -C(0)0(Ci-6 alquilo), -CH20(Ci-6 alquilo), o -S02NH2.
En otra modalidad, WRW5 se selecciona de -OH, -CH20H, -NHC(0)OMe, -NHC(0)OEt, -CN, - CH2NHC ( O ) O ( t -butilo), -C(0)0Me, o -S02NH2.
En otra modalidad: WRW2 es C2 -6 alquilo recto o ramificado; WRW4 es C2-6 alquilo recto o ramificado o alifático monocíclico o biciclico, y WR se selecciona de -CN, -NH(Ci_6 alquilo) , -N(C1-6 alquilo)2, -NHC (0) (C1-6 alquilo) , -NHC { O ) 0 ( d- 6 alquilo) , -CH2C (O) O (C1-e alquilo) , -OH, -0(Ci-6 alquilo) , -C(0)0(Ci-6 alquilo), o -S02NH2.
En otra modalidad: WRW2 es C2-6 alquilo, -CF3, - CN , o fenilo sustituido opcionalmente con hasta 3 sustituyentes seleccionados de Ci-4 alquilo, -0(Ci_4 alquilo) , o halo; WRW4 es -CF3, C2_6 alquilo, o C6-io cicloalifático ; y WRW5 es -OH, -NH(Ci_6 alquilo) , o -N(C1-S alquilo ) 2.
En otra modalidad, WRW2 es ter-butilo.
En otra modalidad, WRW4 es ter-butilo.
En otra modalidad, WRW5 es -OH.
I I . A .2. COMPUESTO 1 En otra modalidad, el compuesto de la Fórmula I es el Compuesto 1.
Compuesto 1 El Compuesto 1 se conoce por el nombre de N- [2,4-bis- (1, 1-dimetiletil) -5 -hidroxif enil] -1,4-dihidro - 4 - oxoquinol in- 3 - carboxamida y por el nombre N- (5-hidroxi-2 ,4-di- ter-butil- fenil ) -4-oxo-lH-quinolin-3 -carboxamida.
SÍNTESIS DE LOS COMPUESTOS DE LA FÓRMULA I Los compuestos de la Fórmula I se preparan fácilmente al combinar una porción del ácido con una porción de la amina como se describe en la presente, en donde WRW2 , WRW4 , y WRW5 son como se definieron anteriormente. a. SÍNTESIS DE LA PORCIÓN DEL ÁCIDO DE LOS COMPUESTOS DE LA FÓRMULA I El precursor ácido de los compuestos de la Fórmula I, el ácido dihidroquinol in carboxílico, se puede sintetizar de acuerdo con el Esquema 1-1, mediante la adición del conjugado de EtOCH=C ( COOEt ) 2 a anilina, seguida por reordenamiento térmico e hidról i sis.
Esquema 1-1. Sínteis General del Compuesto de la Porción del Ácido de la Fórmula I. a) 140-150°C, b) PPA, P0C13, 70°C o difenil éter, 220°C; c) i) NaOH 2N ii) HC1 2 . b. SÍNTESIS DE LA PORCIÓN DE AMINA DE LOS COMPUESTOS DE LA FÓRMULA I Los precursores de amina de los compuestos de la Fórmula I se preparan como se representa en el Esquema 1-2, en donde WRW2 , WRW4 , Y WRW5 son como se definieron anteriormente. De esta forma, la orto alquilación de benceno para- sustituido en el paso (a) proporciona un intermediario tri - sus t ituido . La protección opcional cuando WR 5 es OH (paso (b) y la nitración (paso c) proporciona el intermediario nitrado trisustituida . La desprotección opcional (paso d) y la hidrogenac ión (paso e) proporcionan la porción de amina deseada.
Esquema 1-2: Síntesis general de la porción de amina. a) WRW4 OH, WRW4 = alquilo, b)ClC02R, TEA, c) HN03 , H2S0 , d) base, e) hidrogenac ión .
C ACOPLAMIENTO DE LA FRACCION DEL ACIDO A LA PORCIÓN DE AMINA PARA FORMAR LOS COMPUESTOS DE LA FÓRMULA I Los compuestos de la Fórmula I se preparan al acoplar una porción del ácido con una porción de amina como se representa en el Esquema 1-3. En general, la reacción de acoplamiento requiere un reactivo de acoplamiento, una base, así como un solvente. Los ejemplos de las condiciones utilizadas incluyen HATU, DIEA, BOP, DIEA, DMF; HBTU , Et3N, CH2C12; PFPTFA, piridina.
Esquema 1-3: Preparación de los Compuestos de la Fórmula I Fórmula 1 2. SINTESIS DEL COMPUESTO 1 El Compuesto 1 se pueden preparar en general como se proporciona en los Esquemas 1-3 hasta 1-6, en donde una porción del ácido está acoplada con una porción de amina n donde V¡RW¿ y WR son t-butilo, y RW5 es OH. Más adelante se proporcionan esquemas y ejemplos más detallados. a. SÍNTESIS DE LA PORCIÓN DEL ÁCIDO DEL COMPUESTO 1 La síntesis de la porción del ácido 4-oxo- 1 , 4 -dihidroquinolin-3 -carboxí lico 26, se resume en el Esquema 1 - 4.
Esquema 1-4: Síntesis del Ácido 4 - oxo -1,4- dihi dro uiñol in- 3 - carboxí lico . 4 -Oxo -1,4- dihidroquinolin- 3 - carboxí lato de etilo (25) .
El Compuesto 23 (4.77 g, 47.7 mmol) se agregó gota a gota al Compuesto 22 (10 g, 46.3 mmol) con el flujo de N2 subsuperf icial para expeler etanol por debajo de 30°C durante 0.5 horas. La solución luego se calentó a 100-110°C y se agitó durante 2.5 horas. Después de enfriar la mezcla se puso por debajo de 60°C, se agregó difenil éter. La solución resultante se agregó gota a gota a difenil éter que se había calentado a 228-232°C durante 1.5 horas con un flujo de N2 subsuperf icial para expeler etanol . La mezcla se agitó a 228-232°C durante otras 2 horas, se enfrió por debajo de 100°C y luego se agregó heptano para precipitar el producto. La suspensión resultante se agitó a 30°C durante 0.5 horas. Los sólidos se filtraron adic ionalmente , y la torta se lavó con heptano y se secó in vacuo para proporcionar el Compuesto 25 como un sólido marrón. 1H NMR (DMS0-d6; 400 Hz) d 12.25 (s), d 8.49 (d), d 8.10 (m) , d 7.64 (m) , d 7.55 (m) , d 7.34 (m) , d 4.16 (q), d 1.23 (t) . Ácido 4 -oxo- 1,4- dihidroquinolin- 3 -carboxílico Método 1 El compuesto 25 (1.0 eq) se suspendió en una solución de HCI (10.0 eq) y H20 (11.6 vol) . La suspensión se calentó a 85-90°C, aunque para este paso de hidrólisis también son adecuadas temperaturas alternativas. Por ejemplo, la hidrólisis, alternativamente se puede realizar a una temperatura entre aproximadamente 75 y 100°C. En algunos casos, la hidrólisis se realiza a una temperatura entre aproximadamente 80 y 95°C. En otras, el paso de hidrólisis se realiza a una temperatura entre aproximadamente 82 y 93°C (por ejemplo, entre aproximadamente 82.5 y 92.5°C o entre aproximadamente 86 y 89°C) . Después de agitar a 85-90°C durante aproximadamente 6.5 horas, la reacción se muestreó para completar la reacción. La agitación se puede realizar bajo cualquiera de las temperaturas adecuadas para la hidrólisis. La solución luego se enfrió a 20-25°C y se filtró. El reactor/ torta se enjuagó con H20 (2 vol x 2) . La torta luego se lavó con 2 vol de H20 hasta el pH = 3,0. La torta se secó bajo vacío a 60°C para proporcionar el Compuesto 26.
Método 2 El compuesto 25 (11.3 g, 52 mmol) se agregó a una mezcla de 10% de NaOH (ac) (10 mi) y etanol (100 mi) . La solución se calentó a reflujo durante 16 horas, se enfrió a 20-25°C y luego se ajustó el pH a 2-3 con 8% de HC1. La mezcla luego se agitó durante 0.5 horas y se filtró. La torta se lavó con agua (50 mi) y luego se secó in vacuo para proporcionar el Compuesto 26 como un sólido marrón. H N R (DMSO-d6; 400 MHz) d 15.33 (s), d 13.39 (s), d 8.87 (s), d 8.26 (m) , d 7.87 (m) , d 7.80 (m) , d 7.56 (m) . b. SÍNTESIS DE LA PORCIÓN DE AMINA DEL COMPUESTO 1 La síntesis de la porción de amina 32, se resume en el Esquema 1-5.
Esquema 1-5: Síntesis del carbonato 5 - amino - 2 , 4 - di -te -but ilfenil metilo (32) .
H2S04, HNO3 31 32 Carbonato de 2 , 4 -di- ter-butilfenil metilo (30) .
Método 1 A una solución de 2 , 4 -di - ter-but il fenol, 29, (10 g, 48.5mmol) en dietiléter (100 mi) y trietilamina (10.1 mi, 72.8 mmol), se agregó c loroformiato de metilo (7.46 mi, 97 mmol) gota a gota a 0°C. La mezcla luego se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 2 horas adicionales. Luego se agregaron 5 mi adicionales de trietilamina y 3.7 mi de cloroformiato de metilo y la reacción se agitó durante la noche. La reacción luego se filtró adicionalmente , el filtrado se enfrió a 0°C, y luego se agregaron 5 mi adicionales de trietilamina y 3.7 mi de cloroformiato de metilo y la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y después se agitó durante una 1 hora adicional. En esta etapa, la reacción fue casi completa y se trató mediante filtrado, luego se lavó con agua (2x), seguida por salmuera. La solución luego se concentró para proporcionar un aceite amarillo y se purificó utilizando cromatografía en columna para proporcionar el Compuesto 30. XH NMR (400 MHz, DMSO-d6) d 7.35 (d, J = 2.4 Hz, 1H) , 7.29 ( dd , J = 8.4, 2.4 Hz , 1H), 7.06 (d, J = 8.4 HZ, 1H) , 3.85 (s, 3H), 1.30 (s, 9H), 1.29 (S, 9H) .
Método 2 A un recipiente de reactor cargado con 4-dimet ilaminopiridina (DMAP, 3.16 g, 25.7 mmol) y 2,4-di- ter-butil-fenol (Compuesto 29, 103.5 g, 501.6 mmol) se agregó cloruro de metileno (415 g, 313 mi ) y la solución se agitó hasta que todos los sólidos se disolvieron. Luego se agregó trietilamina (76 g, 751 mmol) y la solución se enfrió a 0-5°C. Luego se agregó cloroformiato de metilo (52 g, 550.3 mmol) gota a gota durante 2.5-4 horas, mientras se mantuvo la temperatura de la solución entre 0-5°C. La mezcla de reacción luego se lento lentamentemás a 23-28°C y se agitó durante 20 horas. La reacción luego se enfrió a 10-15°C y se cargó con 150 mi de agua. La mezcla se agitó a 15-20°C durante 35-45 minutos y la capa acuosa luego se separó y se extrajo con 150 mi de cloruro de metileno. Las capas orgánicas se combinaron y se neutralizaron con 2.5% de HCl (ac) a una temperatura de 5-20°C para proporcionar un pH final de 5-6. La capa orgánica luego se lavó con agua y se concentró in vacuo a una temperatura por debajo de 20°C a 150 mi para proporcionar el Compuesto 30 en cloruro de metileno.
Carbonato de 5 - ni tro - 2 , 4 - di - ter-but i 1 feni 1 metilo (31) .
Método 1 A una solución agitada del Compuesto 30 (6.77g, 25.6 mmol) se agregaron 6 mi de una mezcla 1:1 de ácido sulfúrico y ácido nítrico a 0°C gota a gota. La mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 1 hora. El producto se purificó utilizando cromatografía líquida (ISCO, 120 g, 0-7% de EtOAc/Hexanos , 38 min) produciendo aproximadamente una mezcla 8:1-10:1 de regioisómeros del Compuesto 31 como un sólido blanco. 1H N R (400 MHz , DMS0-d6) d 7.63 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 3.87 (s, 3H) , 1.36 (s, 9H) , 1.32 (s, 9H ). HPLC tiempo de ret. de 3.92 minutos 10-99% de CH3CN, 5 min de ejecución; ESI-MS 310 m/z (MH)+.
Método 2 Al Compuesto 30 (100g, 378 mmol) se agregó DCM (540 g, 408 mi) . La mezcla se agitó hasta que todos los sólidos se disolvieron, y luego se enfrió a -5-0°C. Luego se agregó gota a gota ácido sulfúrico concentrado (163 g) , mientras que se mantuvo la temperatura inicial de la reacción, y la mezcla se agitó durante 4.5 horas. Luego se agregó gota a gota ácido nítrico (62 g) durante 2-4 horas mientras que se mantuvo la temperatura inicial de la reacción, y luego se agitó a esta temperatura durante un período adicional de 4.5 horas. La mezcla de reacción luego se agregó lentamente a agua fría manteniendo una temperatura por debajo de 5°C. La reacción inactivada luego se calentó a 25°C y la capa acuosa se separó y se extrajo con cloruro de metileno. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua, se secaron utilizando Na2S0 , y se concentraron a 124-155 mi. Se agregó hexano (48 g) y la mezcla resultante se concentró nuevamente a 124-155 mi. Posteriormente se agregó a la mezcla más hexano (160 g) . La mezcla luego se agitó a 23-27°C durante 15.5 horas, y luego se filtró. A la torta del filtro se agregó hexano (115 g) , la mezcla resultante se calentó a reflujo y se agitó durante 2-2.5 horas. La mezcla luego se enfrió a 3-7°C, se agitó durante 1-1.5 horas, y se filtró para proporcionar el Compuesto 31 como un sólido amarillo pálido.
Carbonato de 5 - amino - 2 , 4 - di - t er-but i 1 feni 1 metilo (32) .
Se cargó en un reactor de hidrogenación adecuado carbonato de 2 , 4 -di - er-buti 1 - 5 - nitrofenil metilo (1.00 eq) , seguido por 5% de Pd/C (2.50% en peso de base seca, Johnson-Matthey , Tipo 37) . Se cargó al reactor MeOH(15.0 vol) , y el sistema se cerró. El sistema se purgó con N2 (g) , y luego se presurizó a 2.0 Bar con H2 (g) . La reacción se realizó a una temperatura de reacción de 25°C +/-5°C. Cuando se completó, la reacción se filtró, y el reactor/ torta se lavó con MeOH (4.00 vol) . El filtrado resultante se destiló bajo vacío a no más de 50°C a 8.00 vol. Se agregó agua (2.00 vol) a 45°C +/-5°C. La suspensión resultante se enfrió a 0°C +/-5. La suspensión se mantuvo a 0°C +/-5°C durante no menos de 1 hora, y se filtró. La torta se lavó una vez con 0°C +/-5°C MeOH/H20 (8:02) (2.00 vol) . La torta se secó bajo vacío (-0.90 bar y -0.86 bar) a 35°C-40°C para proporcionar el Compuesto 32. 1H NMR (400 MHz, DMSO-dJ d 7.05 (s, 1H), 6.39 (s, 1H) , 4.80 (s, 2H) , 3.82 (s, 3H) , 1.33 (s, 9H), 1.23 (s, 9H) .
Una vez que la reacción se completó, la mezcla resultante se diluyó con entre aproximadamente 5 y 10 volúmenes de MeOH (por ejemplo, entre aproximadamente 6 y 9 volúmenes de MeOH, entre aproximadamente 7 y 8.5 volúmenes de MeOH, entre aproximadamente 7.5 y 8 volúmenes de MeOH, o aproximadamente 7.7 volúmenes de metanol), se calentó a una temperatura entre aproximadamente 35 ± 5°C, se filtró, se lavó y se secó, como se describió anteriormente . c. ACOPLAMIENTO DE LA PORCIÓN DEL ÁCIDO Y AMINA PARA FORMAR EL COMPUESTO 1 El acoplamiento de la porción del ácido a la porción de amina se resume en el Esquema 1-6.
Esquema 1-6; Síntesis del Compuesto 1 N- ( 2 , 4 - di - fcer-butil - 5 -hidroxi fenil ) - 4 - oxo- 1 , 4 -dihidroquinolin- 3 - carboxamida (1) .
Se cargaron a un reactor ácido 4-oxo-l, 4-dihidroquinolin- 3 - carboxí 1 ico 26 (1.0 eq) y carbonato de 5 - amino - 2 , 4 - di - er-but i 1 feni 1 metilo 32 (1.1 eq) .
Se agregó 2-MeTHF (4.0 vol, en relación con el ácido), seguido por 50% de solución T3P® en 2-MeTHF (1.7 eq) . El recipiente cargado con T3P se lavó con 2-MeTHF (0.6 vol} . Luego se agregó piridina (2.0 eq) , y la suspensión resultante se calentó a 47.5 +/-5.0°C y se mantuvo a esta temperatura durante 8 horas. Se tomó una muestra y se analizó para terminación mediante HPLC. Una vez completa, la mezcla resultante se enfrió a 25.0°C +/-2.5°C. Para diluir la mezcla se agregó 2-MeTHF (12.5 vol) . La mezcla de reacción se lavó con agua (10.0 vol) 2 veces. Se agregó 2-MeTHF para llevar el volumen total de la reacción a 40.0 vol (~16.5 vol cargado) . A esta solución se agregó NaOMe/MeOH (1.7 equiv) para realizar la metanólisis. La reacción se agitó durante no menos de 1.0 hora, y se analizó para terminación mediante HPLC. Una vez completa, la reacción se inactivo con HC1 1 N (10.0 vol) , y se lavó con HC1 0.1 N (10.0 vol) . La solución orgánica se clarificó filtrada para eliminar cualquier partícula y se colocó en un segundo reactor. La solución filtrada se concentró a no más de 35°C (temperatura de la chaqueta) y no menos de 8.0°C (temperatura interna de la reacción) a presión reducida a 20 vol. Se agregó CH3CN a 40 vol y la solución se concentró a no más de 35°C (temperatura de la chaqueta) y no menos de 8.0°C (temperatura interna de la reacción) a 20 vol . La adición de CH3CN y el ciclo de concentración se repitiieron 2 veces más para un total de 3 adiciones de CH3CN y 4 concentraciones a 20 vol. Después de la concentración final a 20 vol, se agregaron 16.0 vol de CH3CN seguidos por 4.0 vol de H20 para proporcionar una concentración final de 40 vol de 10% de H20/CH3CN en relación con el ácido de partida. Esta suspensión se calentó a 78.0°C +/- 5.0°C (reflujo) . La suspensión luego se agitó durante no menos de 5 horas. La suspensión se enfrió a 0.0°C +/- 5°C durante 5 horas, y se filtró. La torta se lavó con 0.0°C +/-5.0°C CH3CN (5 vol) 4 veces. El sólido resultante (Compuesto 1) se secó en un horno de vacío a 50.0°C +/- 5.0°C. XH NMR (400 MHz , DMSO-d6) d 12.8 (s, 1H) , 11.8 (s, 1H) , 9.2 (s, 1H), 8.9 (s, 1H), 8.3 (S, 1H) , 7.2 (S, 1H) , 7.9 (t, 1H), 7.8 (d, 1H), 7.5 (t, 1H) , 7.1 (s, 1H) , 1.4 (s, 9H), 1.4 (s, 9H) .
En el Esquema 1-7 se representa una síntesis alternativa del Compuesto 1-7.
Esquema 1-7; Síntesis alternativa del Compuesto 1.
Se cargaron a un reactor ácido 4-oxo-l, 4-dihidroquinolin- 3 - carboxí lico 26 (1.0 eq) y carbonato de 5 -amino- 2 , 4 -di - ter-but ilfenil metilo 32 (1.1 eq) . Se agregó 2-MeTHF (4.0 vol, en relación con el ácido) , seguido por 50% de solución de T3P® en 2-MeTHF (1.7 eq) . El recipiente cargado T3P se lavó con 2-MeTHF (0.6 vol) . Luego se agregaró piridina (2.0 eq) , y la suspensión resultante se calentó a 47.5 +/- 5.0°C y se mantuvo a esta temperatura durante 8 horas. Se tomó una muestra y se analizó para terminación mediante HPLC. Una vez completa, la mezcla resultante se enfrió a 20°C +/- 5°C. Para diluir la mezcla se agregó 2-MeTHF (12.5 vol) . La mezcla de reacción se lavó con agua (10.0 vol) 2 veces y se cargó al reactor 2-MeTHF (16.5 vol) . Esta solución se cargó con 30% en p/p de NaOMe/MeOH (1.7 equiv) para realizar la metanólisis. La reacción se agitó a 25.0°C +/-5.0°C durante no menos de 1.0 hora, y se analizó para terminación mediante HPLC. Una vez completa, la reacción se inactivo con HC1 1.2 N/H20 (10.0 vol), y se lavó con HC1 0.1 N/H20 (10.0 vol) . La solución orgánica se clarificó filtrada para eliminar cualquier partícula y se colocó en un segundo reactor.
La solución filtrada se concentró a no más de 35°C (temperatura de la chaqueta) y no menos de 8.0°C (temperatura interna de la reacción) a presión reducida a 20 vol. Se agregó CH3CN a 40 vol y la solución se concentró a no más de 35°C (temperatura de la chaqueta) y no menos de 8.0°C (temperatura interna de la reacción) a 20 vol. La adición de CH3CN y el ciclo de concentración se repitieron 2 veces más para un total de 3 adiciones de CH3CN y 4 concentraciones a 20 vol. Después de la concentración final de 20 vol, se cargaron 16.0 vol de CH3CN seguido por 4.0 vol de H20 para proporcionar una concentración final de 40 vol de 10% de H20/CH3CN en relación con el ácido de partida. Esta suspensión se calentó a 78.0°C +/ - 5.00 C ( re f luj o ) . La suspensión luego se agitó durante no menos de 5 horas. La suspensión se enfrió de 20 a 25°C durante 5 horas, y se filtró. La torta se lavó con CH3CN (5 vol) se calentó de 20 a 25°C 4 veces. El sólido resultante (Compuesto 1) se secó en un horno de vacío a 50.0°C +/- 5.0°C. 1H NMR (400 MHz , DMS0-d6) d 12.8 (s, 1H), 11.8 (S, 1H) , 9.2 (S, 1H) , 8.9 (s, 1H), 8.3 (s, 1H), 7.2 (s, 1H) , 7.9 (t, 1H) , 7.8 (d, 1H), 7.5 (t, 1H), 7.1 (s, 1H) , 1.4 (s, 9H) , 1.4 (s, 9H) .
II . B .1. COMPUESTO DE LA FÓRMULA II Fórmula II 1. MODALIDADES DE LOS COMPUESTOS DE LA FÓRMULA II Los moduladores de la actividad del transportador del ABC en la Columna B están totalmente descritos y ejemplificados en las patentes de los Estados Unidos 7,741,321 y 7,659,268, y también en la solicitud de patente de los Estados Unidos Número de Serie 12/114, 935, publicada como US 2008/0306062 Al. Todos los compuestos citados en las publicaciones anteriores son útiles en la presente invención y se incorporan en la presente descripción en su totalidad.
En una modalidad, en el compuesto de la Fórmula II de la composición T es -CH2-, -CH2CH2-, -CF2-, -C(CH3)2-, o - C ( 0 ) - ; Ri' es H , Ci-6 alifático, halo, CF3 CHF2 , 0(Ci-6 alifático), y RD1 o RD2 es ZDR9 en donde : ZD es un enlace, CONH, S02NH, S02N(Ci-6 alquilo), CH2NHS02, CH2 ( CH3 ) S02 , CH2NHC0, C00, S02 , o CO; y R9 es H, Ci-6 alifático6, o arilo.
II. B .2. COMPUESTO 2 En otra modalidad, el compuesto de la Fórmula II es el Compuesto 2, representado más adelante, que también se conoce por su nombre químico ácido 3- (6-(1- (2, 2 -Dif luorobenzo [d] [1,3] dioxol- 5 -il) ciclopropancarboxamido) - 3 -met ilpiridin- 2 -i 1 ) enzoico .
Compuesto 2 1. SÍNTESIS DE LOS COMPUESTOS DE LA FÓRMULA II El compuesto 2 se puede preparar al acoplar porción de cloruro ácido con una porción de amina acuerdo con esquemas siguientes 2-1 a 2-3.
Esquema 2-1; Síntesis de la porción de cloruro ácido.
N El Esquema 2-1 muestra la preparación de cloruro de 1 -( 2 , 2 -dif luorobenzo [d] [ 1 , 3 ] dioxol - 5 -il ) ciclopropanocarbonilo , que se utiliza en el Esquema 2-3 para producir el enlace amida del Compuesto 2.
El material de partida, ácido 2,2-dif luorobenzo [d] [ 1 , 3 ] dioxol - 5 - carboxí 1 ico , está disponible comercialmente en Saltigo (una filial de la Corporación Lanxess) . La reducción de la porción del ácido en el ácido 2,2-dif luorobenzo [d] [ 1 , 3 ] dioxol - 5 - carboxí 1 ico al alcohol primario, seguida por conversión al cloruro correspondiente utilizando cloruro de tionilo (S0C12), proporciona 5 - (clorometil) -2,2-dif luorobenzo [d] [1, 3] dioxol, que posteriormente se convierte a 2 - ( 2 , 2 - di f luorobenzo [d] [ 1 , 3 ] dioxol - 5 -i 1 ) ace toni t rilo utilizando cianuro de sodio. El tratamiento del 2 -( 2 , 2 -dif luorobenzo [d] [1, 3] dioxol-5 - i 1 ) ace toni trilo con ima base y l-bromo-2-cloroetano proporciona el l-(2,2-dif luorobenzo [d] [ 1 , 3 ] dioxol - 5 -i 1 ) c i c lopropancarboni tri lo . La porción de nitrilo en el 1 -( 2 , 2 - di f luorobenzo [d] [ 1 , 3 ] dioxol - 5 -i 1 ) c i c lopropancarboni t ri lo se convierte a un ácido carboxílico utilizando una base para proporcionar el ácido 1- (2 , 2-dif luorobenzo [d] [ 1 , 3 ] dioxol - 5 -il ) ciclopropancarboxí lico , que se convierte al cloruro ácido deseado utilizando cloruro de tionilo.
Esquema 2-2; Síntesis de la porción de amina. urea-peróxido de hidrógeno anhídrido ftálico EtOAc, agua El Esquema 2-2 representa la preparación del 3 - ( 6 - amino - 3 -me t ilpir idin- 2 - il ) benzoato de ter-butilo requerido, que se acopla con cloruro de l- (2,2-dif luorobenzo [d] [1,3] dioxol - 5 - il ) ciclopropancarbonilo en el Esquema 3-3 para proporcionar el Compuesto 2. El acoplamiento catalizado por paladio de 2-bromo-3-met ilpiridina con ácido 3 - (ter-butoxicarbonil ) f enilborónico proporciona el 3- (3-metilpiridin-2 - il ) benzoato de ter-butilo, que pos eriormente se convierte al compuesto deseado.
Esquema 2.3. Formación de una sal ácida del ácido 3-(6- (1- (2,2 -difluorobenzo [d] [1,3] dioxol-5-il) ciclopropancarboxamido) - 3 -met ilpiridin- 2 -il) benzoico .
El Esquema 2-3 muestra el acoplamiento del cloruro de 1 - ( 2 , 2 - di f luorobenzo [ d] [ 1 , 3 ] dioxol - 5 -il) ciclopropancarbonilo con el 3 - ( 6 - amino- 3 -met i lpiridin- 2 - il ) enzoato de ter-butilo utilizando trietil amina y 4 -dimetilaminopiridina para proporcionar inicialmente el éster de ter-butilo del Compuesto 2. El tratamiento del éster ter-butilo con un ácido tal como HC1, proporciona la sal de HC1 del Compuesto 2, que es típicamente un sólido cristalino.
EXPERIMENTOS Vitride® (hidruro de bis (2-metoxietoxi ) aluminio sódico [o NaAlH2 ( OCH2CH2OCH3 ) 2 ] , 65% en pgt de solución en tolueno) se adquirió de Aldrich Chemicals.
El ácido 2 , 2 - di f luoro- 1 , 3 -benzodioxol - 5 -carboxilico se adquirió de Saltigo (una filial de la Corporación Lanxess) . (2,2-Dif luoro- 1 , 3 -benzodioxol - 5 - il ) -metaño1 1. Vitride (2 equiv) PhCH3 (lO vol) Se suspendió en tolueno (10 vol) ácido 2,2-difluoro-1 , 3 -benzodioxol- 5 - carboxí 1 ico (1.0 eq) disponible comercialmente . Se agregó Vitride® (2 eq) vía un embudo de adición a una velocidad para mantener la temperatura a 15-25°C. Al final de la adición, la temperatura se amentó a 40°C durante 2 horas (h) , luego se agregó cuidadosamente 10% (p/p) NaOH acuoso (ac) (4.0 eq) vía un embudo de adición, manteniendo la temperatura a 40-50°C. Luego de agitar durante 30 minutos (min) , las capas se dejaron separar a 40°C. La fase orgánica se enfrió a 20°C, luego se lavó con agua (2 x 1.5 vol) , se secó (Na2S04) , se filtró y se concentró para proporcionar el ( 2 , 2 -dif luoro- 1 , 3 -benzodioxol- 5 - il ) -metanol crudo que se utilizó directamente en el siguiente paso. 5 - clorómet il - 2,2-difluoro-l,3 -benzodioxol 1. SOCl2 (1.5 equiv) DMAP (0.01 equiv) MTBE (5 vol) Se disolvió ( 2 , 2 - di f luoro - 1 , 3 - benzodioxol - 5 -il) -metanol (1.0 eq) en MTBE (5 vol) . Se agregó una cantidad catalítica de 4 - ( , N-dimet il ) aminopiridina (DMAP) (1% molar) y se agregó vía un embudo de adición SOCl2 (1.2 eq) . El SOCl2 se agregó a una velocidad para mantener la temperatura en el reactor a 15-25°C. La temperatura se amentó a 30°C durante 1 h, y luego se enfrió a 20°C. Se agregó agua (4 vol) vía un embudo de adición mientras que se mantuvo la temperatura a menos de 30°C. Luego de agitar durante 30 minutos adicionales, las capas se dejaron separar. La capa orgánica se agitó y se agregó 10% (p/v) de NaOH acuoso (4.4 vol) . Después de agitar durante 15 a 20 minutos, las capas se dejaron separar. La fase orgánica luego se secó (Na2S04), se filtró y se concentró para proporcionar el crudo 5 - cloróme t i 1 - 2.2 - dif luoro- i , 3 -benzodioxol que se utilizó directamente en el siguiente paso. (2, 2-difluoro-l, 3 -benzodioxol - 5-il) -acetonitrilo. 1. NaCN (1.4 equiv) DMSO (3 vol) 30-40 grados C Una solución de 5 - clorómet i 1 - 2 , 2 - di f luoro- 1.3 - benzodioxol (1 eq) en DMSO (1.25 vol) se agregó a una suspensión de NaCN (1.4 eq) en DMSO (3 vol), mientras que se mantuvo la temperatura entre 30-40°C. La mezcla se agitó durante 1 h, y luego se agregó agua (6 vol), seguida por metil ter-butil éter (MTBE) (4 vol) . Después de agitar durante 30 minutos, las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con MTBE (1.8 vol) . Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (1.8 vol) , se secaron (Na2S04) , se filtraron y se concentraron para proporcionar el (2, 2-difluoro-l, 3 -benzodioxol - 5-il) -acetonitrilo crudo (95%) que se utilizó directamente en el siguiente paso.
Una mezcla de ( 2 , 2 -dif luoro- 1 , 3 -benzodioxol -5 - il ) -acetonitrilo (1.0 eq) , 50% en peso de KOH acuoso (5.0 eq) 1 - bromo - 2 - c loroetaño (1.5 eq) , y Oct NBR (0.02 eq) se calentó a 70°C durante 1 h. La mezcla de reacción se enfrió, luego se trató con MTBE y agua. La fase orgánica se lavó con agua y salmuera. El solvente se eliminó para proporcionar (2,2 -di flúoro- 1 , 3 -benzodioxol - 5 - il ) -ciclopropancarbonitrilo . Ácido 1- (2, 2-difluoro-l, 3 -benzodioxol - 5 - il ) -ciclopropancarboxí lico . 1. 6 M NaOH (8 equiv) EtOH (5 vol), 80 grados C 10% de ácido cítrico ac (8 vol) rendimiento del 69% Se hidrolizó (2, 2-difluoro-l, 3-benzodioxol-5 - i 1 ) - c ic lopropancarboni t ri lo utilizando NaOH 6 M (8 equiv) en etanol (5 vol) a 80°C durante la noche . La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y el etanol se evaporó bajo vacío. El residuo se extrajo en agua y MTBE, se agregó HC1 1 M, y las capas se separaron. La capa de MTBE luego se trató con diciclohexilamina (DCHA) (0.97 equivalentes) . La suspensión se enfrió a 0°C, se filtró y se lavó con heptano para proporcionar la sal de DCHA correspondiente. La sal se extrajo en MTBE y 10% de ácido cítrico y se agitó hasta que todos los sólidos se habían disuelto. Las capas se separaron y la capa de MTBE se lavó con agua y salmuera. Un intercambio de solventes para heptano seguido por filtración proporcionó el ácido 1 - ( 2 , 2 - di f luoro -1, 3-benzodioxol-5-il) -ciclopropancarboxilico después de secar en un horno de vacío a 50°C durante la noche.
Cloruro de 1 -( 2 , 2 - di f luoro - 1 , 3 - benzodioxol - 5 -il) -ciclopropancarbonilo.
S0C12, Se suspendió ácido 1 - ( 2 , 2 -difluoro- 1 , 3 -benzodioxol - 5 - i 1 )- c ic lopropancarboxí 1 ico (1.2 eq) en tolueno (2.5 vol) y la mezcla se calentó a 60°C. se agregó S0C12 (1.4 eq) vía un embudo de adición. El tolueno y el S0C12 se destilaron de la mezcla de reacción después de 30 minutos. Se agregó tolueno adicional (2.5 vol) y la mezcla resultante se destiló nuevamente, dejando el producto de cloruro ácido como un aceite, que se utilizó sin purificación adicional. ter-but il - 3- (3-metilpiridin-2-il)benzoato Se disolvió 2 -bromo- 3 -metilpiridina (1.0 eq) en tolueno (12 vol.) se agregó K2C03 (4.8 eq) , seguido por agua (3.5 vol) . La mezcla resultante se calentó a 65°C bajo una corriente de N2 durante 1 hora. Luego se agregaron ácido 3-(t-Butoxicarbonil ) fenilborónico (1.05 eq) y Pd ( dppf ) C12CH2C12 (0.015 eq) y la mezcla se calentó a 80°C. Después de 2 horas, el calentamiento se apagó, se agregó agua (3.5 vol), y las capas se dejaron separar. La fase orgánica luego se lavó con agua (3.5 vol) y se extrajo con 10% de ácido metansulfónico acuoso (2 eq MSOH, 7.7 vol) . La fase acuosa se hizo básica con 50% de NaOH acuoso (2 eq) y se extrajo con EtOAC (8 vol) . La capa orgánica se concentró para proporcionar el ter-buti 1 - 3 - ( 3 -met ilpiridin- 2 - il ) benzoato crudo (82%) que se utilizó directamente en el siguiente paso. 2 - ( 3 - ( ter-butoxicarbonil ) fenil) -3-metilpiridin-i-óxido .
Se disolvió ter-but il - 3 - ( 3 -met ilpiridin- 2 - i 1 ) benzoato (1.0 eq) en EtOAC(6 vol) . Se agregó agua (0.3 vol), seguida por ure - peróxido de hidrógeno (3 eq) . Luego se agregó anhídrido ftálico (3 eq) en porciones a la mezcla como un sólido a una velocidad para mantener la temperatura en el reactor por debajo de 45°C. Después de completar la adición de anhídrido ftálico, la mezcla se calentó a 45°C. Después de agitar durante 4 horas adicionales, el calentamiento se apagó. Se agregó 10% p/p de Na2S03 acuoso (1.5 eq) vía un embudo de adición. Después de la terminación de la adición de Na2S03, la mezcla se agitó durante 30 minutos adicionales y las capas se separaron. La capa orgánica se agitó y 10% peso/peso acuoso. Se agregó Na2C03 (2 eq) . Después de agitar durante 30 minutos, las capas se dejaron separar. La fase orgánica se lavó con 13% p/v de NaCl acuoso. La fase orgánica luego se filtró y se concentró para proporcionar el 2 -( 3 -( ter- utoxicarbonil ) feni 1 )- 3 -metilpiridin-l-óxido (95%) que se utilizó directamente en el siguiente paso. ter-but il - 3 - ( 6 - amino - 3 -met i lpiridin- 2 - i 1 ) benzoato .
Una solución de 2- (3- ( ter-butoxicarboni 1 ) f eni 1 ) - 3 -me t i lpi r idin- 1 - óxido (1 eq) y piridina (4 eq) en acetonitrilo (8 vol) se calentó a 70°C. Una solución de anhídrido metansul fónico (1.5 eq) en MeCN (2 vol) se agregó durante 50 min vía un embudo de adición mientras que se mantuvo la temperatura a menos de 75°C. La mezcla se agitó durante 0.5 horas después de la adición completa. La mezcla luego se dejó enfriar a temperatura ambiente. Se agregó etanolamina (10 eq) vía un embudo de adición. Después de agitar durante 2 horas, se agregó agua (6 vol) y la mezcla se enfrió a 10°C. Después de agitar durante 3 horas, el sólido se extrajo por filtración y se lavó con agua (3 vol) , 2:1 acetonitrilo/agua (3 vol) , y acetonitrilo (2 x 1.5 vol) . El sólido se secó hasta un peso constante (diferencia del <1%) en un horno de vacío a 50°C con una purga de N2 ligero para proporcionar el t er- but i 1 - 3 - ( 6 - amino - 3 -met i lpi ridin- 2 - i 1 ) benzoato como un sólido rojo-amarillo (53% de rendimiento) . 3- (6- (1- (2, 2 -dif luorobenzo [d] [1,3] dioxol-5-il) -ciclopropancarboxamido) - 3 -metilpiridin- 2 - il ) -t-butilbenzoato.
El cloruro ácido crudo descrito anteriormente se disolvió en tolueno (2.5 vol basado en cloruro ácido) y se agregó vía un embudo de adición a una mezcla de ter-buti 1 - 3 - ( 6 - amino- 3 -met ilpiridin- 2 - il ) benzoato (1 eq) , DMAP, (0.02 eq) y trietilamina (3.0 eq) en tolueno (4 vol basado en ter- buti 1 - 3 - ( 6 - amino -3 -met ilpiridin- 2 - il ) benzoato) . Después de 2 horas, a la mezcla de reacción se agregó agua (4 vol basado en ter-butil-3- (6-amino-3 -metilpiridin-2- il) benzoato) . Después de agitar durante 30 minutos, las capas se separaron. La fase orgánica luego se filtró y se concentró para proporcionar un aceite espeso del 3 - ( 6 - ( 1 - ( 2 , 2 - dif luorobenzo [d] [l,3]dioxol-5 - il ) ciclopropancarboxamido) - 3 -met i lpiridin- 2 - il ) -t-but i lbenzoato (rendimiento crudo cuantitativo) . Se agregó acetonitrilo (3 vol basado en el producto crudo) y se destiló hasta que se produjo la cristalización. Se agregó agua (2 vol basado en el producto crudo) y la mezcla se agitó durante 2 h. El sólido se extrajo por filtración, se lavó con 1:1 (en volumen) de acetonitrilo/agua (2 x 1 volúmenes basados en el producto crudo) , y se secó parcialmente en el filtro bajo vacío. El sólido se secó hasta un peso constante (diferencia de <1%) en un horno de vacío a 60°C con una purga de N2 ligero para proporcionar el 3 - ( 6 - ( 1 - ( 2 , 2 -dif luorobenzo [d] [ 1 , 3 ] dioxol - 5 -il) ciclopropancarboxamido) - 3 -met ilpiridin- 2 - i 1 ) -t-but i lbenzoato como un sólido marrón. Ácido 3- (6- (1- (2,2-dif luorobenzo [d] [ 1 , 3 ] dioxol - 5 -il) ciclopropancarboxamido) - 3 -met ilpiridin- 2 - il ) benzoico · sal de HC1.
• HC1 A una suspensión de 3 - ( 6 - ( 1 - ( 2 , 2 -dif luorobenzo [d] [ 1 , 3 ] dioxol - 5 -i 1 ) ciclopropancarboxamido ) -3-metilpiridin-2-il) - 1 -but i lbenzoato (1.0 eq) en MeCN (3.0 vol) se agregó agua (0.83 vol) , seguida por HC1 acuoso concentrado (0.83 vol) . La mezcla se calentó a 45 ± 5°C. Después de agitar durante 24 a 48 h , la reacción se completó, y la mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente. Se agregó agua (1.33 vol) y la mezcla se agitó. El sólido se extrajo por filtración, se lavó con agua (2 x 0.3 vol) , y se secó parcialmente en el filtro bajo vacío. El sólido se secó a un peso constante (diferencia de <1%) en un horno de vacío a 60°C con una purga de N2 ligero para proporcionar el ácido 3 - (6- (1- (2, 2-dif luorobenzo [d] [ 1 , 3 ] dioxol - 5 -i 1 ) c i c lopropancarboxamido ) -3-metilpiridin-2-il) benzoico · HCl como un sólido blanquecino.
La siguiente Tabla 2-1 muestra datos físicos para el compuesto 2.
TABLA 2 - 1.
II . C .1. COMPUESTO DE LA FÓRMULA III Fórmula III Los moduladores de la actividad del transportador del ABC en la Columna C están totalmente descritos y ejemplificados en las Patentes de los Estados Unidos 7,645,789 y 7,776,905, que están cedidas comúnmente al Cesionario de la presente invención. Todos los compuestos citados en las patentes anteriores son útiles en la presente invención y se incorporan en la presente descripción en su totalidad.
I. MODALIDADES DE LOS COMPUESTOS DE LA FÓRMULA III En una modalidad, en el compuesto de la Fórmula III: R es H, OH, 0CH3 o dos R tomados juntos forman -OCH20- u -OCF20-; R4 es H o alquilo; R5 es H o F; R6 es H O CN; R7 es H, -CH2CH (OH) CH20H, - CH2CH2N+ ( CH3 ) 3 , o -CH2CH2OH; R8 es H, OH, -CH2CH (OH) CH2OH, -CH2OH, o R7 y R8 tomados juntos forman un anillo de cinco miembros.
II. C.2. COMPUESTO 3 En otra modalidad, el compuesto de la Fórmula III es el Compuesto 3, que se conoce por su nombre químico ( R) - 1 - ( 2 , 2 -di f luorobenzo [ d] [ 1 , 3 ] dioxol - 5 - i 1 ) -N - ( 1 - ( 2 , 3 -dihidroxipropil ) -6-f luoro-2- ( 1 -hidroxi - 2 -metilpropan-2-il) -lH-indol-5-il) ciclopropancarboxamida.
Compuesto 3 1. SÍNTESIS DE LOS COMPUESTOS DE LA FÓRMULA III a. ESQUEMAS GENERALES El Compuesto 3 se puede preparar al acoplar una porción de cloruro ácido con una porción de amina de acuerdo con los Esquemas 3-1 a 3-3.
Esquema 3-1; Síntesis de la porción de cloruro ácido.
N S0C1, Esquema 3-2; Síntesis de la porción de amina.
Esquema 3-3: Formación del Compuesto 3. b. EJEMPLOS Vitride® (hidruro de bis (2-metoxietoxi) aluminio sódico [o NaAlH2 (OCH2CH2OCH3 ) 2] , 65% pgt de solución en tolueno) se adquirió de Aldrich Chemicals.
El ácido 2 , 2 -dif luoro- 1 , 3 -benzodioxol - 5 -carboxílico se adquirió de Saltigo (una filial de la Corporación Lanxess) .
Síntesis de la porción ácida del Compuesto 3 (2,2 -di f luoro- 1 , 3 -benzodioxol - 5 - il ) -metaño1. 1. Vitride (2 equiv) PhCH3 (lO vol) El ác ido 2,2- di f luoro- 1 , 3 -benzodioxol - 5 -carboxílico (1.0 eq) disponible comercialmente se suspendió en tolueno (10 vol) . Se agregó Vitride® (2 eq) vía un embudo de adición a una velocidad para mantener la temperatura a 15-25°C. Al final de la adición, la temperatura se amentó a 40°C durante 2 horas (h) y luego se agregó cuidadosamente 10% de NaOH ac . (p/p) (4.0 eq) vía un embudo de adición manteniendo la temperatura a 40-50°C. Después de agitar durante 30 minutos (min) adicionales, las capas se dejaron separar a 40 ° C . La fase orgánica se enfrió a 20°C, luego se lavó con agua (2 x 1.5 vol) , se secó (Na2S04) , se filtró y se concentró para proporcionar el ( 2 , 2 -dif luoro- 1 , 3 -benzodioxol - 5 -il)metanol crudo que se utilizó directamente en el siguiente paso. 5 - c 1orómet i 1-2,2 - di f luoro -1,3-benzodioxol. 1. S0C12 (1.5 equiv) DMAP (0.01 equiv) MTBE (5 vol) Se disolvió ( 2 , 2 - di f luoro - 1 , 3 -benzodioxol - 5 -il) -metanol (1.0 eq) en TBE (5 vol) . Se agregó una cantidad catalítica de DMAP (1% molar) y se agregó SOCl2 (1.2 eq) vía un embudo de adición. El SOCl2 se agregó a una velocidad para mantener la temperatura en el reactor a 15-25°C. La temperatura se amentó a 30°C durante 1 hora y luego se enfrió a 20°C, luego se agregó agua (4 vol) vía un embudo de adición manteniendo la temperatura a menos de 30°C. Después de agitar durante 30 minutos adicionales, las capas se dejaron separar. La capa orgánica se agitó y se agregó 10% (p/v) de NaOH ac . (4.4 vol) . Después de agitar durante 15 a 20 minutos, las capas se dejaron separar. La fase orgánica luego se secó (Na2S04) , se filtró y se concentró para proporcionar el 5-c lorometil - 2 , 2 - dif luoro - 1 , 3 -benzodioxol crudo que se utilizó directamente en el siguiente paso. ( 2 , 2 - di f luoro- 1 , 3 -benzodioxol - 5 - il ) - acetoni tri lo . 1. NaCN (1.4 equiv) DMSO (3 vol) 30-40 grados C Una soluc ión de 5 - clorómet il - 2 , 2-difluoro- 1 , 3 -benzodioxol (1 eq) en DMSO (1.25 vol) se agregó a una suspensión de NaCN (1.4 eq) en DMSO (3 vol) manteniendo la temperatura entre 30-40°C. La mezcla se agitó durante 1 hora, luego se agregó agua (6 vol) seguida por MTBE (4 vol) . Después de agitar durante 30 minutos, las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con MTBE (1.8 vol) . Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (1.8 vol) , se secaron (Na2S04), se filtraron y se concentraron para proporcionar el ( 2 , 2 - dif luoro- 1 , 3 -benzodioxol - 5 - il ) -acetonitrilo crudo (95%) que se utilizó directamente en el siguiente paso. 1H NMR (500 MHz, DMSO) d 7.44 (s amplio, 1H) , 7.43 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.22 (dd, J = 8.2, 1.8 Hz, 1H) , 4.07 (s, 2H) . (2, 2 -Dif luoro- 1 , 3-benzodioxol-5-il) -ciclopropancarbonitrilo . 1-bromo-2-cloroetano (1.5 equiv) 50% KOH (5.0 equiv) Una mezcla de ( 2 , 2 -dif luoro - 1 , 3 -benzodioxol -5 - il } -acetonitrilo (1.0 eq) , 50% en peso de KOH acuoso (5.0 eq) 1 -bromo- 2 - cloroetano (1.5 eq) , y Oct4NBr (0.02 eq) se calentó a 70°C durante 1 h. La mezcla de reacción se enfrió, luego se trató con MTBE y agua. La fase orgánica se lavó con agua y salmuera, luego se eliminó el solvente para proporcionar el ( 2 , 2 - di f luoro - 1 , 3 - benzodioxol - 5 - i 1 ) -ciclopropancarbonitrilo. XH NMR (500 MHz, DMSO) d 7.43 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.40 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.30 (dd, J = 8.4, 1.9 Hz, 1H), 1.75 (m, 2H) , 1.53 (m, 2H) . Ácido l-(2,2-difluoro-l,3 -benzodioxol -ciclopropancarboxí lico . 1. 6 M NaOH (8 equiv) EtOH (5 vol), 80 grados C 10% de ácido cítrico ac (8 vol) rendimiento del 69% Se hidrolizó ( 2 , 2 - di f luoro - 1 , 3 - benzodioxol -5 - i 1 ) - c ic lopropancarboni t r i lo utilizando NaOH 6 M (8 equiv) en etanol (5 vol) a 80°C durante la noche. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y el etanol se evaporó bajo vacío. El residuo se extrajo en agua y MTBE, se agregó HC1 1 M y las capas se separaron. La capa de MTBE luego se trató con diciclohexilamina (0.97 equivalentes) . La suspensión se enfrió a 0°C, se filtró y se lavó con heptano para proporcionar la sal de DCHA correspondiente. La sal se extrajo en MTBE y 10% de ácido cítrico y se agitó hasta disolver todos los sólidos. Las capas se separaron y la capa de MTBE se lavó con agua y salmuera. El intercambio de solventes a heptano seguido por filtración proporcionó el ácido 1 - ( 2 , 2 - di f luoro - 1 , 3 -benzodioxol - 5 - i 1 ) - ciclopropancarboxí 1 ico después de secar en un horno de vacío a 50°C durante la noche. ESI-EM m/z cale. 242.04, 241.58 encontrado (M + 1 ) + ; XH N R (500 MHz , DMSO) d 12.40 (s, 1H) , 7.40 (d, J = 1.6 Hz, 1H) , 7.30 (d( J = 8.3 Hz, 1H), 7.17 (ddr J = 8.3, 1.7 Hz, 1H) , 1.46 (m, 2H), 1.17 (m, 2H) .
Síntesis de la porción de amina del Compuesto 3 2 -bromo -5-fluoro-4-nitroanilina.
Se cargó un matraz con 3-fluoro-4-nitroanilina (1.0 equiv) , seguida por acetato de etilo (10 vol) y se agitó para disolver todos los sólidos. Se agregó en porciones N-bromosuccinimida (1.0 equiv) para mantener una temperatura interna de 22°C. Al final de la reacción, la mezcla de reacción se concentró in vacuo en un evaporador giratorio. El residuo se suspendió en agua destilada (5 vol) para disolver y eliminar la succinimida. (La succinimida también se puede eliminar mediante el procedimiento de tratamiento con agua.) El agua se decantó y el sólido se suspendió en 2-propanol (5 vol) durante la noche. La suspensión resultante se filtró y la torta húmeda se lavó con 2 -propanol, se secó en un horno de vacío a 50°C durante la noche con purga de N2 hasta que se alcanzó un peso constante. Se aisló un sólido de color canela amarillento (50% de rendimiento, 97.5% de AUC) . Otras impurezas fueron un bromo-regioisómero (1.4% de AUC) y un aducto de di-bromo (1.1% de AUC) . ? NMR (500 MHz , DMSO) d 8.19 (1H, d, J = 8.1 Hz) , 7.06 (s amplio, 2 H) , 6.64 (d, 1 H, J = 14.3 Hz ) .
Sal de tosilato 4 - amonio- 2 -bromo- 5 fluoranilina benc i lglucos i lado . 1) l ^OBn DCM Un matraz totalmente seco bajo N2 se cargó con lo siguiente: Tamices moleculares 4 Á activados con polvo (50% en peso con base en 2-bromo-5-fluoro-4 -nitroanilina) , 2 - bromo - 5 - f luoro - 4 -nitroanilina (1.0 equiv) , perclorato de zinc dihidratado (20 mol) y tolueno (8 vol) . La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante no más de 30 min. Por último, se agregó en un flujo constante (R) -bencil glicidil éter (2.0 equiv) en tolueno (2 vol) . La reacción se calentó a 80°C (temperatura interna) y se agitó durante aproximadamente 7 horas o hasta que la 2-bromo-5-fluoro-4 -nitroanilina fue <5% de AUC .
La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se agregó Celite® (50% en peso) , seguido por acetato de etilo (10 vol). La mezcla resultante se filtró para eliminar el Celite® y los tamices y se lavó con acetato de etilo (2 vol) . El filtrado se lavó con solución de cloruro de amonio (4 vol, 20% p/v) . La capa orgánica se lavó con solución de bicarbonato de sodio (4 x vol 2.5% p/v) . La capa orgánica se concentró in vacuo en un rotoevaporador. La suspensión resultante se disolvió en acetato de isopropilo (10 vol) y esta solución se transfirió a un hidrogenador Buchi .
El hidrogenador se cargó con 5% en peso de Pt(S)/C (1.5% molar) y la mezcla se agitó bajo N2 a 30°C (temperatura interna) . La reacción se purgó con N2 seguido por hidrógeno. La presión del hidrogenador se ajustó a 1 bar de hidrógeno y la mezcla se agitó rápidamente (>1200 rpm) . Al final de la reacción, el catalizador se filtró a través de una almohadilla de Celite® y se lavó con dic lorometano (10 vol) . El filtrado se concentró in vacuo. Cualquier acetato de isopropilo restante se retiró con dic lorometano (2 vol) y se concentró en un evaporador giratorio a sequedad .
El residuo resultante se disolvió en diclorometano (10 vol) . Se agregó ácido p-toluensul fónico monohidratado (1.2 equiv) y se agitó durante la noche. El producto se filtró y se lavó con diclorometano (2 vol) y se secó por succión. La torta húmeda se transfirió a bandejas de secado y en un horno de vacío y se secó a 45°C con purga de N2 a hasta que se alcancó un peso constante. La sal de tosilato de 4 - amonio- 2 -bromo - 5 - f luorani lina bencilglucosilado se aisló como un sólido blanquee ino . (3-Cloro-3-metilbut-l-inil) trimetilsilano .
Se cargó a un recipiente alcohol propargílico (1.0 equiv) . Se agregó ácido clorhídrico acuoso (37%, 3.75 vol) y comenzó la agitación. Durante la disolución del alcohol sólido, se observó una modesta endoterma (5-6°C) . La mezcla resultante se agitó durante la noche (16 h) , tornándose lentamente a color rojo oscuro. Un recipiente con chaqueta de 30L se cargó con agua (5 vol) que luego se enfrió a 10°C. La mezcla de reacción se transfirió lentamente en el agua por vacío, manteniendo la temperatura interna de la mezcla por debajo de 25°C. Se agregaron hexanos (3 vol) y la mezcla resultante se agitó durante 0.5 h. Las fases dejaron asentar y la fase acuosa (pH <1) se drenó y se desechó. La fase orgánica se concentró in vacuo utilizando un evaporador giratorio suministrando el producto como aceite ro o . (4- (benciloxi) -3,3-dimetilbu -l-inil) trimet ilsilano .
Método A Todos los descriptores de equivalentes y volumen en esta parte se basan en una reacción de 250g. Virutas de magnesio (69.5 g, 2.86 moles, 2.0 equiv) se cargaron a un reactor de 4-cuellos de 3L y se agitaron con un agitador magnético bajo nitrógeno durante 0.5 h. El reactor se sumergió en un baño de agua helada. Una solución de cloruro de propargilo (250 g, 1.43 moles, 1.0 equiv) en THF (1.8 L , 7.2 vol) se agregó lentamente al reactor, con agitación, hasta que se observó una exoterma inicial (aproximadamente 10°C) . La formación del reactivo Grignard se confirmó mediante IPC utilizando espectroscopia 1H-NMR. Una vez que la exoterma disminuyó, el resto de la solución se agregó lentamente, manteniendo la temperatura del lote a <15°C. La adición requirió aproximadamente 3.5 h. La mezcla resultante de color verde oscuro se decantó en un matraz tapado de 2L.
Todos los descriptores de equivalentes y volumen en esta parte se basan en una reacción de 500 g. Un reactor de 22L se cargó con una solución de bencil clorometil éter (95%, 375 g, 2.31 moles, 0.8 equiv) en THF (1.5 L, 3 vol) . El reactor se enfrió en un baño de agua helada. Dos de los cuatro lotes de reactivos de Grignard preparados anteriormente se combinaron y luego se agregaron lentamente a la solución de bencil clorometil éter vía un embudo de adición, manteniendo la temperatura del lote por debajo de 25°C. La adición requirió 1.5 h. La mezcla de reacción se agitó durante la noche (16 h) .
Todos los descriptores de equivalentes y volumen en esta parte se basan en una reacción de 1 kg . Una solución de cloruro de amonio al 15% se preparó en un reactor con chaqueta de 30L (1.5 kg en 8.5 kg de agua, 10 vol) . La solución se enfrió a 5°C. Las dos mezclas de reacción Grignard anteriores se combinaron y luego se transfirieron a la solución de cloruro de amonio vía un recipiente principal. Se observó una exoterma en esta inactivación, que se llevó a cabo a una velocidad tal para mantener la temperatura interna por debajo de 25°C. Una vez que la transferencia se completó, la temperatura de la chaqueta del recipiente se estableció a 25°C. Se agregaron hexanos (8L; 8 vol) yla mezcla se agitó durante 0.5 h . Después de asentar las fases, la fase acuosa (pH 9) se drenó y se desechó. La fase orgánica restante se lavó con agua (2L, 2 vol) . La fase orgánica se concentró in vacuo utilizando un evaporador giratorio de 22L, proporcionando el producto crudo como un aceite naranj a .
Método B Virutas de magnesio (106 g, 4.35 moles, 1.0 eq) se cargaron a un reactor de 22L y luego se suspendieron en THF (760 mi, 1 vol) . El recipiente se enfrió en un baño con agua helada de tal forma que la temperatura del lote alcanzó 2°C. Se agregó lentamente al reactor una solución de cloruro de propargilo (760 g, 4.35 moles, 1.0 equiv) en THF (4.5L, 6 vol) . Después de que se agregaron 100 mi, la adición se detuvo y la mezcla se agitó hasta que se observó una exoterma de 13°C, lo que indica el inicio de reactivo Grignard. Una vez que la exoterma disminuyó, se agregaron lentamente 500 mi adicionales de la solución de cloruro de propargilo, manteniendo la temperatura del lote a <20°C. La formación del reactivo Grignard se confirmó mediante IPC utilizando espectroscopia 1H-NMR . La resto de la solución de cloruro de propargilo se agregó lentamente, manteniendo la temperatura del lote a <20°C. La adición requirió aproximadamente 1.5 h. La solución resultante de color verde oscuro se agitó durante 0.5 h. La formación del reactivo Grignard se confirmó mediante IPC utilizando espectroscopia 1H - N R . Se cargó bencil clorometil éter puro mediante un embudo de adición en el reactor y luego se agregó gota a gota en el reactor, manteniendo la temperatura del lote por debajo de 25°C. La adición requirió 1.0 h. La mezcla de reacción se agitó durante la noche. El tratamieno acuoso y la concentración se llevaron a cabo utilizando el mismo procedimiento y cantidades relativas de los materiales como en el Método A para proporcionar el producto como un aceite naranja.
Benciloxi-3, 3-dimetil ut-l-ino. 2 pasos Un reactor con chaqueta de 30L, se cargó con metanol (6 vol) , el cual luego se enfrió a 5°C. Al reactor se agregó hidróxido de potasio (85%, 1.3 equiv) . Se observó una exoterma a 15-20°C a medida que se disolvió el hidróxido de potasio. La temperatura de la chaqueta se fijó a 25°C. Se agregó una solución de 4 -benciloxi - 3 , 3 -dimetil- 1-t rime t i 1 s i 1 i lbut - 1 - ino (1.0 equiv) en metanol (2 vol) y la mezcla resultante se agitó hasta completar la reacción, según se monitoreó mediante HPLC. Tiempo de reacción típico a 25°C fue de 3-4 h. La mezcla de reacción se diluyó con agua (8 vol) y luego se agitó durante 0.5 h. Se agregaron hexanos (6 vol) y la mezcla resultante se agitó durante 0.5 h. Las fases se dejaron sedimentar y luego la fase acuosa (pH 10-11) se drenó y se desechó. La fase orgánica se lavó con una solución de KOH (85%, 0.4 equiv) en agua (8 vol) seguida por agua (8 vol) . La fase orgánica luego se concentró utilizando un evaporador giratorio, proporcionando el material del título como un aceite amarillo-naranja. La pureza típica de este material estuvo en el intervalo de 80% principalmente con una impureza individual presente. 1H N R (400 MHz, C6D6) d 7.28 (d, 2 H , J = 7.4 Hz) , 7.18 (t, 2 H, 7 = 7.2 Hz) , 7.10 (d, 1H, J = 7.2 Hz) , 4.35 (s, 2 H), 3.24 (s, 2 H) , 1.91 (s, 1 H), 1.25 (s, 6 H) . 4-Amino-2- (4-bencilo i-3, 3-dimetil ut-l-inil) - 5 -fluoranilina bencilglucosilada.
La sal de tosilato de 4 - amonio- 2 -bromo- 5 -f louroanil ina bencilglucosilada se hizo de base libre al agitar el sólido en EtOAC (5 vol) y solución saturada de NaHC03 (5 vol) hasta que se alcanzó una capa orgánica clara. Las capas resultantes se separaron y la capa orgánica se lavó con solución saturada de NaHC03 (5 vol) seguida por salmuera y se concentró in vacuo para obtener la sal de tosilato de 4 -amonio -2 -bromo- 5 - flouroanilina bencilglucosilada como un aceite.
Luego, un matraz se cargó con la sal de tosilato de 4 - amonio - 2 - bromo- 5 - f louroani lina bencilglucosilada (base libre, 1.0 equiv) , Pd(OAc) (4.0% molar ), dppb (6.0% molar ) y K2C03 en polvo (3.0 equiv) y se agitó con acetonitrilo (6 vol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción resultante se desgasificó durante aproximadamente 30 minutos mediante burbujeo en N2 con ventilación. Después de que el 4 -benc iloxi - 3 , 3 - dimet ilbut - 1 - ino (1.1 equiv) se disolvió en acetonitrilo (2 vol) se agregó en una corriente rápida y se calentó a 80°C y se agitó hasta que se alcanzó el consumo completo de la sal de tosilato de 4 - amonio- 2 -bromo- 5 -f louroanilina . La suspensión de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró a través de una almohadilla de Celite® y se lavó con acetonitrilo (2 vol) . El filtrado se concentró in vacuo y el residuo se redisolvió en acetato de etilo (6 vol) . La capa orgánica se lavó dos veces con solución de NH4C1 (20% p/v, 4 vol) y salmuera (6 vol) . La capa orgánica resultante se concentró para proporcionar un aceite de color marrón y se utilizó como está en la siguiente reacción. 5 -Amino- 2 - (2-benciloxi-l,l-dimetiletil) - 6 - f luoroindol N-bencilglucosilado .
El aceite crudo de la 4 - amino - 2 - ( 4 -benci loxi -3,3 -dimet ilbut -1-inil) -5 - f luoranilina bencilglucosilada se disolvió en acetonitrilo (6 vol) y se agregó ( eCN) 2PdCl2 (15% molar) a temperatura ambiente. La mezcla resultante se desgasificó utilizando N2 con ventilación durante aproximadamente 30 min. Luego, la mezcla de reacción se agitó a 80°C bajo una manta de N2 durante la noche. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró a través de una almohadilla de Celite® y se lavó la torta con acetonitrilo (1 vol) . El filtrado resultante se concentró in vacuo y se redisolvió en EtOAc (5 vol). Se agregó Deloxan-Il® THP (5% en peso con base en el rendimiento teórico de 5 - amino- 2 - ( 2 -benciloxi-1, 1-dimetiletil ) - 6 - f luoroindol N-bencilglucosilado) y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla luego se filtró a través de una almohadilla de sílice (filtro de 2.5 pulgadas de profundidad, 6 pulgadas de diámetro) y se lavó con EtOAC (4 vol) . El filtrado se concentró a un residuo marrón oscuro, y se utilizó como está en la siguiente reacción.
Repurif ication del 5-amino-2 - (2-benciloxi-l, 1-dimetiletil) - 6 - f luoroindol N-bencilglucosilado crudo; El 5-amino-2- (2-benciloxi-l, 1-dimetiletil) -6 - f luoroindol N-bencilglucosilado crudo se disolvió en diclorometano (aproximadamente 1.5 vol) y se filtró hasta una almohadilla de sílice utilizando inicialmente 30% de acetato de et ilo/heptano donde las impurezas se desecharon. Luego la almohadilla de sílice se lavó con 50% de EtOAc / heptano para aislar el 5-amino-2- (2-benciloxi-l, 1-dimetiletil) -6 - f luoroindol N-bencilglucosilado hasta que se observó en el filtrado un color débil. Este filtrado se concentró al vacío para proporcionar un aceite de color marrón, que se cristalizó en reposo a temperatura ambiente. 1H NMR (400 MHz , DMSO) 5 7.38-7.34 (m, 4 H) , 7.32-7.23 <m, 6 H) , 7.21 (d, 1 H, J = 12.8 Hz) , 6.77 (d, 1H, J = 9.0 Hz) , 6.06 (s, 1H) , 5.13 (d, 1H, 7 = 4.9 Hz) , 4.54 (s, 2 H) , 4.46 (br. s, 2 H) , 4.45 (s, 2 H) , 4.33 (d, 1H, J = 12.4 Hz) , 4.09-4.04 (m, 2 H) , 3.63 (d, 1H, J = 9.2 Hz) , 3.56 (d, 1H, J = 9.2 Hz) , 3.49 (dd, 1H, J = 9.8, 4.4 Hz) , 3.43 (dd, 1H, J = 9.8, 5.7 Hz) , 1.40 (s, 6 H) .
Síntesis del Compuesto 3.
El ácido 1 - ( 2 , 2 - di f luoro- 1 , 3 - benzodioxol - 5 -i 1 ) - c ic lopropancarboxí 1 ico (1.3 equiv) se suspendió en tolueno (2.5 vol, con base en el ácido 1- (2, 2-dif luoro-l, 3-benzodioxol-5-il) -ciclopropancarboxílico) y la mezcla se calentó a 60°C. Se agregó S0C12 (1.7 eq) vía un embudo de adición. La mezcla resultante se agitó durante 2 h. El tolueno y el exceso de S0C12 se separaron por destilación utilizando evaporador giratorio. Se agregó tolueno adicional (2.5 vol, con base en el ácido l-(2,2-difluoro-l,3-benzodioxol-5-il)-ciclopropancarboxí lico) y se destiló nuevamente. El cloruro ácido crudo se disolvió en diclorome taño (2 vol) y se agregó vía un embudo de adición a una mezcla de 5 - amino - 2 - ( 2 - benc i loxi - 1 , 1 - dime t i let il ) -6 - f luoroindol N - benc i lglucos i lado (1.0 equiv) , y trietilamina (2.0 equiv) en dic lorometano (7 vol) mientras que se mantuvo a 0-3°C (temperatura interna) . La mezcla resultante se agitó a 0°C durante 4 horas y luego se calentó a temperatura ambiente durante la noche. Se agregó a la mezcla de reacción agua destilada (5 vol) y se agitó durante no menos de 30 min y las capas se separaron. La fase orgánica se lavó con 20% en peso de K2C03 (4 vol x 2) seguido por un lavado con salmuera (4 vol) y se concentró para proporcionar el Compuesto 2 protegido con bencilo crudo como un aceite espeso color marrón, el cual se purificó adicionalmente utilizando filtración en almohadilla de sílice .
Filtración en almohadilla de gel de sílice: El Compuesto 3 protegido con bencilo crudo se disolvió en acetato de etilo (3 vol) en presencia de carbón activado Darco G-(10% en peso, con base en el rendimiento teórico del Compuesto 3 protegido con bencilo 3) y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. A esta mezcla se agregó heptano (3 vol) y se filtró a través de una almohadilla de gel de sílice (2x peso del Compuesto 3 protegido con bencilo crudo) . La almohadilla de sílice se lavó con acetato de etilo/heptano (1:1, 6 vol) o hasta que se detectó en el filtrado algo de color. El filtrado se concentró in vacuo para proporcionar el Compuesto 3 protegido con bencilo como un aceite viscoso de color marrón rojizo, y se utilizó directamente en el siguiente pasó.
Repurif ication : El Compuesto 3 protegido con bencilo se redisolvió en diclorometano (1 vol, con base en el rendimiento teórico del Compuesto 3 protegido con bencilo) y se cargó en una almohadilla de gel de sílice (2x peso de Compuesto 3 protegido con bencilo crudo) . La almohadilla de sílice se lavó con diclorometano (2 vol, con base en el rendimiento teórico del Compuesto 3 protegido con bencilo) y el filtrado se desechó. La almohadilla de sílice se lavó con 30% de acetato de etilo/heptano (5 vol) y el filtrado se concentró in vacuo para proporcionar el Compuesto 3 protegido con bencilo como un aceite viscoso de color naranja rojizo, y se utilizó directamente en el siguiente paso.
Método A Un autoclave de 20L se inundó tres veces con gas nitrógeno y luego se cargó con paladio sobre carbono (Evonik E 101 NN/W, Pd al 5%, 60% en húmedo, 200 g, 0.075 moles, 0.04 equiv) . El autoclave luego se inundó con nitrógeno tres veces. Una solución de Compuesto 3 protegido con bencilo crudo (1.3 kg, aproximadamente 1.9 mol) en THF (8 1, 6 vol) se agregó al autoclave por medio de succión. El recipiente se tapó y luego se inundó tres veces con gas nitrógeno. Con agitación suave, el recipiente se inundó tres veces con gas hidrógeno, evacuando a la atmósfera mediante dilución con nitrógeno. El autoclave se presurizó a 3 Bar con hidrógeno y la velocidad de agitación se aumentó a 800 rpm . Se observó una rápida absorción de hidrógeno (disolución) . Una vez que la absorción disminuyó, el recipiente se calentó a 50°C.
Por razones de seguridad, el termostato se apagó al final de cada jornada de trabajo. El recipiente se presurizó a 4 Bar con hidrógeno y luego aislado del depósito de hidrógeno.
Después de 2 días completos de reacción, se agregó a la mezcla más Pd/C (60 g, 0.023 moles, 0.01 equiv) . Esto se realizó al inundar tres veces con gas nitrógeno y luego al agregar el catalizador a través del puerto para adición de sólidos. La reanudación de la reacción se realizó como antes. Después de 4 días completos, la reacción se consideró completa mediante HPLC por la desaparición de no sólo el material de partida, sino que también el pico correspondiente a un intermediario mono - benc i lado .
La mezcla de reacción se filtró a través de una almohadilla de Celite®. El recipiente y la torta del filtro se lavaron con THF (2 1, 1.5 vol) . La almohadilla de Celite® se luego se humedeció con agua y la torta se desechó de forma adecuada. El filtrado combinado y el lavado con THF se concentraron utilizando un evaporador giratorio proporcionando el producto crudo como un aceite negro, 1 kg .
Los equivalentes y volúmenes en la siguiente purificación se basan en 1 kg de material crudo. El aceite negro crudo se disolvió en 1:1 de acetato de et i lo - heptano . La mezcla se cargó a una almohadilla de gel de sílice (1.5 kg, 1.5 peso equiv) en un embudo fritado que se había saturado con 1 : 1 acetato de et i lo - heptano . La almohadilla de sílice se inundó primero con 1:1 de acetato de etilo-heptano (6 L, 6 vol) y luego con acetato de etilo puro (14 L, 14 vol) . El eluyente se extrajo en 4 fracciones que se analizaron mediante HPLC.
Los equivalentes y volúmenes en la siguiente purificación se basan en 0.6 kg de material crudo. La fracción 3 se concentró mediante evaporación giratoria para proporcionar una espuma marrón (600 g) y luego se redisolvió en MTBE (1.8 L, 3 vol) . La solución de color marrón oscuro se agitó durante la noche a temperatura ambiente, tiempo durante el cual, se produjo la cristalización. Se agregó heptano (55 mi, 0.1 vol) y la mezcla se agitó durante la noche. La mezcla se filtró utilizando un embudo Buchner y la torta del filtro se lavo con 3 : 1 de MTBE - heptano (900 mi, 1.5 vol) . La torta del filtro se secó al aire durante lh y luego se secó al vacío a temperatura ambiente durante 16 h, proporcionando 253 g del Compuesto 3 como un sólido blanquecino.
Los equivalentes y volúmenes para la siguiente purificación se basan en 1.4 kg de material crudo. Las fracciones 2 y 3 de la filtración en gel de sílice anterior, así como el material proveniente de una reacción anterior se combinaron y se concentraron para proporcionar 1.4 kg de un aceite negro. La mezcla se volvió a someter a filtración en gel de sílice (1.5 kg de gel de sílice, se eluyó con 3.5 L, 2.3 vol de 1:1 de acetato de etilo-heptano luego 9 L , 6 vol de acetato de etilo puro) descrito anteriormente, que con la concentración proporcionó un sólido espumoso de color canela (390 g) .
Los equivalentes y volúmenes para la siguiente purificación se basan en 390 g de material crudo. El sólido de color canela fue insoluble en MTBE, por lo que se disolvió en metanol (1.2 L, 3 vol) . Utilizando un reactor Morton de 4 L equipado con un cabezal de destilación de larga trayectoria, la mezcla se destiló hasta 2 vol de MTBE (1.2 L , 3 vol) se agregó y la mezcla se destiló nuevamente a 2 vol. Se agregó una segunda porción de MTBE (1.6 L, 4 vol) y la mezcla se destiló nuevamente a 2 vol. Se agregó una tercera porción de MTBE (1.2 L, 3 vol) y la mezcla se destiló nuevamente a 3 vol.
El análisis del destilado mediante GC reveló que consta de aproximadamente 6% de metanol. El termostato se fijó a 48°C (por debajo de la temperatura de ebullición del azeótropo de MTBE-metanol, la cual es de 52°C) . La mezcla se enfrió a 20°C durante 2 h, tiempo durante el cual se produjo una cristalización relativamente rápida. Después de agitar la mezcla durante 2 horas, se agregó heptano (20 mi, 0.05 vol) y la mezcla se agitó durante la noche (16 h) . La mezcla se filtró utilizando un embudo Buchner y la torta del filtro se lavó con 3:1 de MTBE - heptaño (800 mi, 2 vol) . La torta del filtro se secó al aire durante lh y luego se secó al vacío a temperatura ambiente durante 16 h, proporcionando 130 g del Compuesto 3 como un sólido blanquecino.
Método B El compuesto 3 protegido con bencilo se disolvió y se inundó con THF (3 vol) para eliminar cualquier solvente residual restante. El Compuesto 3 protegido con bencilo se redisolvió en THF (4 vol) y se agregó al hidrogenador que contuvo 5% en peso de Pd/C (2.5% molar, 60% en húmedo, Degussa E5 E101 NN/ ) . La temperatura interna de la reacción se ajustó a 50°C, y se inundió con N2 (x5) , seguido por hidrógeno (x3) . La presión del hidrogenador se ajustó a 3 Bar de hidrógeno y la mezcla se agitó rápidamente (>1100 rpm) . Al final de la reacción, el catalizador se filtró a través de una almohadilla de Celite® y se lavó con THF (1 vol) . El filtrado se concentró in vacuo para obtener un residuo espumoso marrón. El residuo resultante se disolvió en MTBE (5 vol) y se agregaron solución de HC1 0.5 N (2 vol) y agua destilada (1 vol) . La mezcla se agitó durante no menos de 30 min y las capas resultantes se separaron. La fase orgánica se lavó con 10% en peso de solución de K2C03 (2 vol x2) , seguida por un lavado con salmuera. La capa orgánica se agregó a un matraz que contiene gel de sílice (25% en peso) , Deloxan-II® THP (5% en peso, 75% de humedad) , y Na2S04 y se agitó durante la noche. La mezcla resultante se filtró a través de una almohadilla de Celite® y se inundó con 10% de THF/MTBE (3 vol) . El filtrado se concentró in vacuo para proporcionar el Compuesto 3 crudo como una espuma color canela pálido.
Recuperación de licor madre del Compuesto 3; Opción A.
Filtración con almohadilla de gel de sílice: El licor madre se concentró in vacuo para obtener una espuma de color marrón, se disolvió en dic lorome taño (2 vol) , y se filtró a través de una almohadilla de sílice (3x peso del Compuesto 3 crudo) . La almohadilla de sílice se lavó con acetato de et ilo/heptano (1:1, 13 vol) y el filtrado se desechó. La almohadilla de sílice se lavó con THF/acetato de etilo al 10% (10 vol) y el filtrado se concentró in vacuo para proporcionar el Compuesto 3 como una espuma de color canela pálido. El procedimiento de cristalización anterior se siguió para aislar el Compuesto 3 restante.
Opción B.
Cromatografía en columna de gel de sílice: Después de la cromatografía sobre gel de sílice (50% de acetato de et ilo/hexanos al 100% de acetato de etilo) , el compuesto deseado se aisló como una espuma color canela pálido. El procedimiento de cristalización anterior se siguió para aislar el Compuesto 3 restante.
El Compuesto 3 también se puede preparar mediante una de diversas rutas sintéticas descritas en la solicitud de patente publicada de los Estados Unidos US 2009/0131492, incorporada en la presente como referencia.
TABLA 3-1: DATOS FÍSICOS PARA EL COMPUESTO 3.
Comp. LC/MS LC/RT NMR No. M+1 min 1H NMR (400.0 MHz, CD3CN) d 7.69 (d, J 7.7 Hz, 1H) , 7.44 (d, J = 1.6 Hz, 1H) , 7.39 (dd, J = 1.7, 8.3 Hz, 1H) , 7.31 ( s, 1H) , 7.27 (d, J = 8.3 HZ, 1H) , 7.20 (d. J = 12 .0 Hz, 1H) , 6.34 (s, 1H) 4.32 (d, J = 6.8 Hz, 2H) , 4.15 - 4 .09 (m, 1H) , 3. 89 3 521.5 1.69 (dd, J = 6.0, 11. 5 Hz, 1H) , 3.63 - 3. 52 (m, 3H) , 3.42 (d, J = 4.6 Hz, 1H) , 3. 21 (dd, J = 6.2, 7.2 Hz, 1H) , 3.04 (t, J = 5.8 Hz, 1H) , 1.59 (dd, J = 3.8, 6.8 Hz, 2H) , 1.44 (S, 3H) , 1.33 (s, 3H) and 1. 18 (dd, J = 3.7, 6.8 HZ, 2H) ppm.
II.D.l INHIBIDORES DEL ENaC La presente invención se relaciona con composiciones farmacéuticas que comprenden un componente modulador de FQ como se proporciona por las columnas A-C en la Tabla I y al menos un inhibidor del ENaC como se proporciona en la Columna D de la Tabla I. La invención también proporciona los métodos para tratar la FQ y otras enfermedades crónicas enfermedades, los métodos para preparar las composiciones y los métodos para utilizar las composiciones para el tratamiento de la fibrosis quística y otras enfermedades crónicas, incluyendo enfermedades crónicas que implican la regulación de volúmenes de fluidos a través de las membranas epiteliales, utilizando la composiciones que contienen un compuesto del modulador de modulador de FQ y compuestos inhibidores del ENaC.
En otras modalidades, los inhibidores del ENaC de la columna D pueden incluir los inhibidores del ENaC de la Fórmula IV que se están totalmente descritos y ejemplificados en la solicitud de patente Internacional No. PCT/EP2008/067110 presentada el 12/09/2008 y cedida a Novartis AG . Todos los compuestos citados en la PCT/EP2008 / 067110 , son útiles en la presente invención y los compuestos y los métodos para proporcionar estos compuestos se incorporan en la presente descripción en su totalidad .
En algunas modalidades, además de los compuestos de la Fórmula IV, los inhibidores del ENaC también pueden incluir camostat (un inhibidor de proteasa similar a tripsina) , QAU145, 552-02, 9411-GS, INO 4995, compuestos inhibidores aerolíticos, de amilorida, benzamilo, dimetil-amilorida y del ENaC descritos en las solicitudes internacionales: PCT/EP2006 / 003387 presentada el 19 de octubre de 2006; PCT/ EP2006 / 012314 presentada el 28 de junio de 2007 y PCT/EP2006 / 012320 presentada el 28 de junio de 2007. Todas estas descripc ioneds de solicitudes de patente internacionales se incorporan en la presente como referencia en su totalidad. En algunas modalidades, el inhibidor del ENaC es amilorida. Los métodos para determinar si un compuesto es un inhibidor del ENaC se conocen en la técnica y se pueden utilizar para identificar un inhibidor del ENaC que se pueda utilizar en combinación con el componente modulador de FQ descrito en la presente.
II. D.2 compuestos de la Fórmula IV En un aspecto, la invención proporciona compuestos inhibidores del ENaC de acuerdo con la Fórmula IV: Fórmula IV. o los solvatos, hidratos o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde R1 es H, un grupo halógeno, Ci - C8 - alquilo , Ci-C8-haloalquilo, Ci-C8-haloalcoxi, C3C15-carbocíclico, nitro, ciano, un grupo carbocíclico aromático de C6-Ci5 miembros o un Ci-C8-alquilo sustituido por un grupo carbocíclico aromático de C6-Ci5 miembros; R2 , R3 , R4 y R5 son cada uno se seleccionan independientemente de H y Ci-C6 alquilo; R6, R7, R8 , R9, R10 y R11 se seleccionan cada uno independientemente de H; S02R16; arilo sustituido opcionalmente por uno o más grupos Z; un grupo C3-C10 carbocíclico sustituido opcionalmente por uno o más grupos Z; un grupo C3-Ci4 heterocíclico sustituido opcionalmente por uno o más grupos Z; Ci-C8 alquilo sustituido opcionalmente por un grupo arilo que está sustituido opcionalmente por uno o más grupos Z, un grupo C3-C10 carbocíclico sustituido opcionalmente por uno o más grupos Z o un grupo C3-Ci heterocíclico sustituido opcionalmente por uno o más grupos Z, o está representado por la fórmula 2: - (C0-C6 alquileno) -A- (C0-C6 alquileno) -B-(XR12)q-R22, en donde los grupos alquileno están sustituidos opcionalmente por uno o más grupos Z; o R6 y R7 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un grupo heterocíclico de 3 a 10 miembros, el grupo heterocíclico incluye uno o más heteroátomos adicionales seleccionados de N, 0 y S, y la heterocí clico grupo estará sustituido opcionalmente con uno o más grupos Z; S02R16; un grupo C6 - Ci5 - carboc í c 1 ico aromático sustituido opcionalmente con uno o más grupos Z; un grupo C3-Ci0 carbocíclico; un grupo C3-Ci4 heterocíclico sustituido opcionalmente por uno o más grupos Z, o un grupo representado por la fórmula 2 ; o R7 y R8 junto con el átomo de carbono al cual están unidos forman un grupo carbocíclico de 3 a 10 miembros o uno heterocíclico de 3 a 10 miembros, el grupo heterocíclico incluye uno o más heteroátomos seleccionados de N, 0 y S, y los grupos carbocí el icos y heterocíclicos estarán sustituidos opcionalmente por uno o más grupos Z; S02R16 ; un grupo C6-Ci5 carbocíclico aromático sustituido opcionalmente con uno o más grupos Z; un grupo C3-Ci0 carbocíclico; un grupo C3-Ci4 heterocíclico sustituido opcionalmente por uno o más grupos Z, o un grupo representado por la fórmula 2 ; o R9 y R10 junto con el átomo de carbono al cual están unidos forman un grupo carbocíclico de 3 a 10 miembros o uno heterocíclico de 3 a 10-miembros, el grupo heterocíclico incluye uno o más heteroátomos seleccionados de N, O y S, y los grupos carbocíclico y heterocíclico sustituidos opc ionalmente por uno o más grupos Z; S02R ; un grupo C€-Ci5 carbocíclico aromático sustituido opc ionalmente por uno o más grupos Z; un grupo C3-Ci0 carbocíclico; un grupo C3-Ci0 heterocíclico sustituido opc ionalmente por uno o más grupos Z, o un grupo representado por la fórmula 2 ; o R8 y R9 junto con los átomos de carbono al cual están unidos forman un grupo cicloalquilo de 3 a 10 miembros o uno heterocíclico de 3 a 10-miembros, el grupo heterocíclico incluye uno o más heteroátomos seleccionados de N, 0 y S, y los grupos carbocíclico y heterocíclico sustituidos opc ionalmente por uno o más grupos Z; S02R16; C6-Ci5-grupo carbocíclico aromático sustituido opc ionalmente por uno o más grupos Z ; un grupo C3-Cio carbocíclico,- grupo un C3-Ci4 heterocíclico sustituido opc ionalmente por uno o más grupos Z, o un grupo representado por la fórmula 2 ; o R10 y R11 junto con los átomos a los que están unidos forman un grupo heterocíclico de 3 a 10 miembros, el grupo heterocíclico incluye uno o más heteroátomos adicionales seleccionados de N, O y S, y la heterocíclico grupo está sustituido opc ionalmente por uno o más grupos Z; S02Rie; grupo C6-C15-carbocíclico aromático sustituido opc ionalmente por uno o más grupos Z ; un grupo C3-Ci0 carbocí clico ; un grupo C3-C14 heterocíclico sustituido opcionalmente por uno o más grupos Z, o un grupo representado por la fórmula 2 ; A se selecciona de un enlace, -NR13(S02)-, -(S02)NR13-, -(S02)-, -NR13C(0)-, -C(0)NR13-, NR13C (0) NR14- , -NR13C(0)0-, -NR13-, C(0)0, 0C(0), C(0), O y S; B se selecciona de un enlace, -( grupo C2-C4 alquenilo)-, -(grupo C2-C4 alquinilo)-, -NH-, arilo, 0-arilo, NH-arilo, un grupo C3-C14 carbociclico y un grupo de 3 a 14 miembros, el grupo heterocíclico incluye uno o más heteroátomos seleccionados de N, O y S, en donde los grupos arilo, carbocíclicos , y heterocíclicos cada uno se sustituye opcionalmente con uno o más grupos Z ; X se selecciona de un enlace, -NR15 ( S02 ) - , -(S02)NR15-, -(S02)-, -NR15C(0)-, -C(0)NR15-, - NR15C ( 0 ) NR17 - , -NR15C(0)0-, -NR15-, C(0)0, 0C(0) , C(0) , O y S; R12 se selecciona de Ci-C8 alquileno, Cj.-C8 alquenileno, -C3-C8 cicloalquilo , -C1-CB alquileno, C3-C8 cicloalquilo, y arilo, en donde los grupos alquileno, cicloalquilo y arilo están sustituidos opcionalmente por uno o más grupos Z; R , R , R y R cada uno se seleccionan independientemente de H y Ci-C6 alquilo; R16 se selecciona de Ci-C8 alquilo, arilo y un grupo heterocíclico de 3 a 14-miembros, el grupo heterocíclico que incluye uno o más heteroátomos seleccionados de N, O y S ; Z se selecciona independientemente de OH, arilo, O-arilo, C7-Ci aralquilo, 0-C7-Ci aralquilo, Ci-C6 alquilo, Ci-C6 alcoxi, NR19 ( S02 ) R21 , ( S02 ) NR19R21 , (S02)R2°, NR19C(0)R20, C(0)NR19R20, NR19C (O) NR20R18 , NR19C(0) OR20, NR19R21, C(0)OR19, C(0)R19, SR19, OR19, OXO, CN, N02 , y halo, en donde los grupos alquilo, alcoxi, aralquilo y arilo están cada uno sustituidos opcionalmente con uno o más sust ituyentes seleccionados de OH, halógeno, Ci-C4 haloalquilo y Ci-C4 alcoxi; R18 y R20 cada uno se seleccionan independientemente de H y CiC6 alquilo; R19 y R21 se seleccionan cada uno independientemente de H; Ci-C8 alquilo; C3-C8 c i c loalqui lo ; Ci-C4 alcoxi; (C0-C4 alqui 1 ) - ar i lo sustituido opcionalmente por uno o más grupos seleccionados de CX.C6 alquilo, CiC6 alcoxi y halógeno; un grupo heterocíclico (C0-C4 alquilo) de 3 a 14 miembros, el grupo heterocíclico incluye uno o más he teroátomos seleccionados de N, 0 y S, sustituidos opc ionalmente por uno o más grupos seleccionados de halógeno, oxo , CiC6 alquilo y C(0)Ci-C6 alquilo; (C0-C4 alquilo) -O-arilo sustituido opc ionalmente por uno o más grupos seleccionados de Cx-Ce alquilo, Ci-C6 alcoxi y halógeno, y un grupo heterocí clico (C0-C4 alquilo) -0- de 3 a 14-miembros, el grupo heterocí clico incluye uno o más heteroátomos seleccionados de N, 0 y S, sustituidos opc ionalmente por uno o más grupos seleccionados de halógeno, C4-C6 alquilo y C(0)Ci-C6; en donde los grupos alquilo están sustituidos opc ionalmente por uno o más átomos de halógeno, Ci-C4 alcoxi, C(0)NH2, C(0)NHC1-C6 alquilo o C (O) ( Ci - C6) 2 ; o R19 y R20 junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos forman un grupo heterocíclico de 5 a 10- miembros, el grupo heterocíclico incluye uno o más heteroátomos adicionales seleccionados de N, 0 y S, el grupo heterocíclico sustituido opcionalmente por uno o más sustituyentes seleccionados de OH; halógeno, arilo, un grupo heterocíclico de 5 a 10 miembros que incluye uno o más heteroátomos seleccionados de N, 0 y S, S(0)2-arilo, S(0)2-C1-C6; Ci-C6 alquilo sustituido opcionalmente por uno o más átomos de halógeno; Cx-C6 alcoxi sustituido opcionalmente por uno o más grupos OH o Ci-C4 alcoxi, y C(0)OCi-C6, en donde los grupos sus t ituyentes de arilo y heterocíclicos por sí mismos están sustituidos opcionalmente por Ci-C6 alquilo, Ci-C6 haloalquilo o Ci-C6 alcoxi; R22 se selecciona de H, halógeno, Ci-C8 alquilo, Ci-C8 alcoxi, arilo, O-arilo, S(0)2-arilo, S(0)2-Ci-C6 alquilo, S (0) 2NR23R24 , NHS (O) 2NR23R24 , un grupo C3-C14 carboc íc 1 ico , un grupo heteroc íc 1 ico de 3 a 14 miembros, el grupo heterocíclico incluye uno o más heteroátomos seleccionados de N, 0 y S, y 0- (el grupo heterocíclico de 3 a 14-miembros, el grupo heterocíclico que incluye uno o más heteroátomos seleccionados de N, O y S) , en donde los grupos alquilo, arilo, carbocíclicos y heterocíclicos están cada uno sustituidos opcionalmente por uno o más grupos Z; R23 y R24 se seleccionan cada uno independientemente de H, Ci-C8 alquilo y C3-C8 cicloalquilo , o R23 y R24 junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos forman un grupo heterocíclico de 5 a 10 miembros, incluye opcionalmente uno o más heteroátomos adicionales seleccionados de N, O y S, en donde el grupo heterocíclico está sustituido opcionalmente por uno o más grupos Z ; n e s 0 , 1 o 2 ; y p son cada uno son independientemente un número entero de 0 a 6 ; y q es O, 1, 2 o 3 ; con la condición de que cuando n sea 0, al menos uno de R6 , R7 , R8, R9, R10 y R11 es distinto de H.
En una modalidad de la invención, se proporciona un compuesto de acuerdo con la Fórmula IVa : en donde R6, R7, R8, R9 , R10 y R11 se seleccionan cada uno independientemente de H ; S02R16; arilo sustituido opcionalmente por uno o más grupos Z ; un grupo C3-Ci0 carbocíclico sustituido opc onalmente por uno o más grupos Z; un grupo C3-Ci heterocíclico sustituido opcionalmente por uno o más grupos ; Ci-C8 alquilo sustituido opcionalmente por un grupo arilo, un grupo C3-C10 carbocíclico sustituido opcionalmente por uno o más grupos Z o un grupo C3-C14 heterocíclico sustituido opcionalmente por uno o más grupos Z, o está representado por la fórmula 2a: - (CH2) o -A- (CH2) p-B- (XR12)q-R22; o R7 y R8 junto con el átomo de carbono al cual están unidos forman un grupo carbocíclico de 3 a 7 miembros o uno heterocíclico de 3 a 7-miembros, el grupo heterocíclico incluye uno o más heteroátomos seleccionados de N, O y S, y los grupos carbocíclicos y heterocíclicos están sustituidos opcionalmente por uno o más grupos Z ; S02R16; grupo C6-Ci5-carbocíclico aromático sustituido opcionalmente por uno o más grupos Z ; un grupo C3-Ci0 carbocíclico; un grupo C3-C14 heterocíclico sustituido opcionalmente por uno o más grupos Z, o un grupo representado por la fórmula 2a; o R9 y R10 junto con el átomo de carbono al cual están unidos forman un grupo carbocíclico de 3 a 7 miembros o uno heterocíclico de 3 a 7-miembros, el grupo heterocíclico que incluye uno o más heteroátomos seleccionados de N, O y S, y los grupos carbocíclicos y heterocíclicos están sustituidos opcionalmente por uno o más grupos Z ; S02R16; un grupo C6-Ci5-carbocíclico aromático sustituido opcionalmente por uno o más grupos Z; un grupo C3-Ci0 carbocí clico ; un grupo C3-Ci4 heterocíclico sustituido opcionalmente por uno o más grupos Z, o un grupo representado por la fórmula 2a; o R8 y R9 junto con los átomos de carbono a los cuales están unidos forman un grupo cicloalquilo de 3 a 7 miembros o uno heterocíclico de 3 a 7 miembros, el grupo heterocíclico incluye uno o más heteroátomos seleccionados de N, O y S, y los grupos carbocí clicos y heterocí clicos están sustituidos opcionalmente por uno o más grupos Z ; S02R16; un grupo C6-Ci5 carbocíclico aromático sustituido opcionalmente por uno o más grupos Z; un grupo C3-Ci0 carbocíclico; un grupo C3-Ci4 heterocíclico sustituido opcionalmente por uno o más grupos Z, o un grupo representado por la fórmula (IV) 2a; A se selecciona de un enlace, -NR13 (S02) -, - (S02)NR13-, - (S02) -, -NR13C(0) -, - (0)NR13, -NR13C (O) NR14- , -NR13C(0)0-, -NR13-, C(0)0, 0C(0) , C(0) , O y S; B se selecciona de un enlace, arilo, un grupo C3-Ci4 carbocíclico y un grupo C3-Ci4 heterocíclico, en donde los sistemas de anillo están sustituidos opcionalmente por uno o más grupos Z ; X se selecciona de un enlace, -NR (S02)-, -(S02)NR15-, -(S02)-, -NR15C(0)-, -C(0)NR15-, -NR15C (0) NR17- , -NR15C(0)0-, -NR15-, C(0)0, 0C(0) , C(0) , O y S; R12 se selecciona de H, Ci-C8 alquilo, C3-C8 cicloalquilo , Ci-C8 alquil-C3-C8 cicloalquilo , Ci-C8 alquil-arilo y arilo, en donde los grupos alquilo, cicloalquilo y arilo están sustituidos opcionalmente por uno o más grupos Z; R13, 14, R15 y R17 cada uno se seleccionan independientemente de H y Ci-C6 alquilo; R16 se selecciona de un grupo Ci-C8 alquilo, arilo y uno heterocíclico de 3 a 14 -miembros ; Z se selecciona independientemente de OH, arilo, 0-arilo, C7-C14 aralquilo, O-C7-C14 aralquilo, Ci-C6 alquilo, Ci-C6 alcoxi, NR19 (S02)R21, ( S02 ) NR19R21 , (S02)R2°, NR19C(0)R20, C(0)NR19R20, NR19C (O) NR20R18 , NR19C ( 0 ) OR20 , NR19R21, C(0)0R19, C(0)R19, SR19, OR19 , oxo, C , N02 , y halógeno, en donde los grupos alquilo, alcoxi, aralquilo y arilo están cada uno sustituidos opcionalmente por uno o más sust ituyentes seleccionados de OH, halógeno, C1-C4 haloalquilo y Ci-C4 alcoxi; R18, R19 y R20 cada uno se selecciona independientemente de H y Ci-C6 alquilo; R21 se selecciona de un grupo Ci-C8 alquilo, arilo y uno he teroc í c lico de 3 a 14 miembros; R22 se selecciona de H y Ci-C8 alquilo; n e s 0 , 1 ó 2 ; y P cada uno se selecciona independientemente de un número entero de 0 a 6 ; y q es O, 1, 2 o 3 ; con la condición de que cuando n sea 0, al menos uno de R6 , R7 , R8, R9 , R10 y R11 es distinto de H.
En una modalidad adicional de la invención como se define en cualquier parte anterior, R6 se selecciona de H, Ci-C3 alquilo y (CH2) d-f enilo, donde el grupo fenilo está sustituido opcionalmente por OR23; R23 es H o Ci-C6 alquilo; y d es un número entero de 1 a 5 (opcionalmente de 2 a 4) .
Todavía en una modalidad adicional de la invención como se define en cualquier parte anterior, R7 es H o C!-C6; y R8 se selecciona de H, Ci-C6 alquilo; ( CH2 ) ef eni lo , donde el grupo fenilo está sustituido opcionalmente por uno o más grupos seleccionados de halo y O24; ( CH2 ) fCOOR25 ; (CH^gOCx-Ce alquilo, donde el grupo alquilo está sustituido opcionalmente por 1 a 3 grupos seleccionados de OH, C1-C3 alquilo y fenilo; y (CH2)hNHC02 (CH2) ifenilo; R24 es H o Ci-Cg-alquilo, donde el grupo alquilo está sustituido opcionalmente por 1 a 3 grupos seleccionados de OH y OC1-C3 alquilo; R25 es H o Ci-C3 alquilo; e es 0, 1, 2, 3, 4 ó 5 (opcionalmente 0, 1, 2 , 3 Ó 4 ) ; f, g y h cada uno son independientemente un número entero de 1 a 4; e i es 1 ó 2 ; o R7 y R8 junto con el átomo de carbono al cual están unidos forman un sistema de anillo carbocíclico no aromático de 5 o 6-miembros o un sistema de anillo heterocíclico no aromático de 5 o 6-miembros que contiene uno o más heteroátomos seleccionados de N, O y S, los sistemas de anillo están sustituidos opcionalmente por uno o más grupos Z ,- S02R16; un grupo C6-Ci5 carbocíclico aromático sustituido opcionalmente por uno o más grupos Z; un grupo C3-C10 carbocíclico; un grupo C3-C14 heterocíclico sustituido opcionalmente por uno o más grupos Z, o un grupo representado por la fórmula 2 o 2a. Adecuadamente, el sistema de anillo definido por R7 , R8 y el átomo de carbono al cual están unidos, están sustituidos opcionalmente por C1-C3 alquilo, halo o bencilo.
Opcionalmente, f es 2 ó 3. Adicional o alternativamente, g puede ser 2 ó 3. Adicional o alternativamente, h puede ser 2, 3 ó 4. Adicional o alternativamente, i puede ser 1. En las sub-definiciones inmediatamente anteriores de f, g, h e i, cada sub-def inición se puede combinar con otras sub-def iniciones adicionales o se pueden combinar con las definiciones para las variables relevantes determinadas anteriormente.
Todavía en una modalidad adicional de la invención como se define en cualquier parte anterior, R9 es H, Ci-C6 alquilo o fenilo; o R8 y R9 junto con los átomos de carbono a los cuales están unidos forman un sistema de anillo carbocíclico no aromático de 5 , 6 o 7 miembros o un sistema de anillo heterocí clico no aromático de 5, 6 o 7 miembros que contiene uno o más heteroátomos seleccionados de N, 0 y S, los sistemas de anillo está sustituidos opcionalmente por C1-C3 alquilo, halo o bencilo.
En una modalidad adicional de la invención como se define en cualquier parte anterior, R11 es H, S02Ci-C6 o S02fenilo.
En una modalidad adicional de la invención como se define en cualquier parte anterior, R6 y R11 son ambos H.
Una modalidad adicional de la invención proporciona un compuesto de acuerdo con la fórmula IV(lb) : o la fórmula IV(lc) en donde R30 es -A-(C0-C6 alquileno) -B- (XRi1<2:) q- R22 y A, B, X, R12, q y R22 son como se definieron en la presente en cualquier lugar.
Un aspecto adicional de la invención proporciona un compuesto de la Fórmula I (2) Fórmula IV (2) + + + + TABLA II. COMPUESTOS ILUSTRATIVOS DE LA FÓRMULA IV 150 i52 i54 i55 ??? ??? ??? ??? 160 i63 ??? i72 F i83 i84 i85 i86 DEFINICIONES DE LOS TÉRMINOS DE LA FÓRMULA IV, IV(la), IV(1B), IV(1C) y IV (2) Los términos utilizados en la descripción de los compuestos de la Fórmula IV, IV(la) , IV(lb) , IV (le) y IV(2) tienen los siguientes significados: "Sustituido opcionalmente" significa el grupo mencionado que puede ser sustituido en una o más posiciones por cualquiera o cualquier combinación de radicales mencionados en lo sucesivo.
"Sustituido opcionalmente por uno o más grupos Z" denota que el grupo de referencia puede incluir uno o más susti tuyentes , cada uno seleccionado independientemente de los grupos incluidos en la definición de Z . De esta forma, cuando existan dos o más sus tituyentes del grupo Z, éstos pueden ser iguales o diferentes.
"Halo" o "halógeno", en el sentido en que se utiliza en la presente, puede ser flúor, cloro, bromo o yodo .
"Ci-C8-alquilo" , en el sentido en el que se utiliza en la presente, denota alquilo de cadena recta o ramificada que tiene 1-8 átomos de carbono. Si se especifica un número diferente de átomos de carbono, como C6 o C3 , entonces la definición se debe enmendar en consecuencia.
"Ci-C8-alcoxi" , en el sentido en el que se utiliza en la presente, denota alcoxi de cadena recta o ramificada que tiene 1-8 átomos de carbono. Si se especifica un número diferente de átomos de carbono, tal como C6 o C3 , entonces la definición se debe enmendar en consecuencia.
El término "alquileno" denota una cadena recta o una cadena de hidrocarburo ramificado saturado que contiene entre 1 y 8 átomos de carbono. Si se especifica un número diferente de átomos de carbono, tal como C6 o C3 , entonces la definición se debe enmendar en consecuencia.
"Amino- Ci- C8 -alquilo" y "amino-Ci-C8-alcoxi" denotan un amino unido por un átomo de nitrógeno a Cx-Cs-alquilo, por ejemplo, NH2- (Ci-C8) - , o a Ci-C8-alcoxi, por ejemplo, NH2 - ( Ci - C8 ) - 0 - . Si se especifica un número diferente de átomos de carbono, tal como C6 o C3, entonces la definición se debe enmendar en consecuencia.
"Ci-C8-alquilamino" y "di (Ci-C8-alquil ) amino" denotan Ci-C8-alquilo, como se ha definido anteriormente, unido por un átomo de carbono a un grupo amino. Los grupos Ci - C8 - alqui lo en di(Ci-C8-alquil) amino puede ser el mismo o diferente. Si se especifica un número diferente de átomos de carbono, tal como C6 o C3 , entonces la definición se debe enmendar en consecuencia.
"Amino- (hidroxi) -Ci-C8-alquilo" denota un amino unido por un átomo de nitrógeno a Cx - C8 - alqui lo e hidroxi unido por un átomo de oxígeno al mismo Ci-C8-alquilo. Si se especifica un número diferente de átomos de carbono, tal como C6 o C3 , entonces la definición se debe enmendar en consecuencia.
"Cx-Cs-alquilcarbonilo" y ,xCi-C8-alcoxicarbonilo", en el sentido en el que se utilizan en la presente, denotan Ci-C8-alquilo o Ci - C8 - alcoxi , respec ivamente, como se definió anteriormente, unido por un átomo de carbono a un grupo carbonilo. Si se especifica un número diferente de átomos de carbono, tal como C6 o C3 , entonces la definición se debe enmendar en consecuencia.
"C3-C8-cicloalquilcarbonilo" , en el sentido en el que se utiliza en la presente, denota C3-C8-c ic loalqui lo , como se definió anteriormente, unido por un átomo de carbono a un grupo carbonilo. Si se especifica un número diferente de átomos de carbono, tal como C6 o C3 , entonces la definición se debe enmendar en consecuencia.
" C7 - C14 -Aralqui lo" , en el sentido en el que se utiliza en la presente, denota alquilo, por ejemplo, Ci - C4 - alqui lo , como se definió anteriormente, sustituido por un grupo C6-Ci0-carbocíclico aromático, como se define en la presente. Si se especifica un número diferente de átomos de carbono, tal como C6 o C3 , entonces la definición se debe enmendar en consecuencia .
"Grupo C3-Ci5-carbocíclico" , en el sentido en el que se utiliza en la presente, denota un grupo carbocíclico que tiene de 3 a 15 átomos de carbono en el anillo que está saturado o parcialmente saturado, tal como un C3 - C8 - c ic loalqui lo . Los ejemplos de grupos C3-Ci5-carbocíclicos incluyen, de manera enunciativa ciclopropilo , ciclobutilo, ciclopent i lo , ciclohexilo, cicloheptilo o ciclooctilo o un grupo bicíclico, tal como biciclooctilo, bic ic lononi lo incluyendo indanilo e indenilo y biciclodecilo. Si se especifica un número diferente de átomos de carbono, tal como C6, entonces la definición se debe enmendar en consecuencia. "a ilo" o grupo - C15 - c boc ic 1 i co aromático" , en el sentido en el que se utiliza en la presente, denota un grupo aromático que tiene de 6 a 15 átomos de carbono en el anillo. Los ejemplos de grupos C6-Ci5 carbocíclicos aromáticos incluyen, de manera enunciativa, fenilo, fenileno, bencentri i lo , naftilo, naftileno, naf talentriilo o antrileno. Si se especifica un número diferente de átomos de carbono, tal como Ci0, entonces la definición se debe enmendar en consecuencia.
"Grupo heterociclico de 4 a 8 miembros" , "grupo heterociclico de 5 a 6 miembros" , "grupo heterociclico de 3 a 10 miembros", "grupo heterociclico de 3 a 14 -miembros " , "grupo heterociclico de 4 a 14 miembros" y "grupo heterociclico de 5 a 14 -miembros " , se refieren, respectivamente, a anillos heterociclicos de 4 a 8 miembros, 5 a 6 miembros, 3 a 10 miembros, 3 a 14 miembros, 4 a 14 miembros y 5 a 14 miembros que contienen al menos un heteroátomo en el anillo seleccionado del grupo que consiste de nitrógeno, oxígeno y azufre, que puede estar saturado, parcialmente saturado o insaturado (aromático) . El grupo heterociclico incluye los grupos de un solo anillo, los grupos de anillo fusionado y los grupos puenteados . Los ejemplos de estos grupos heterociclicos incluyen, de manera enunciativa, furano, pirrol, pirrolidina, pirazol, imidazol, triazol, isotriazol, tetrazol, tiadiazol, isotiazol, oxadiazol, piridina, piperidina, pirazina, oxazol, isoxazol, pirazina, piridazina, pirimidina, piperazina, pirrolidina, pirrol idinona , morfolina, triazina, oxazina, tet ahidrofurano , tetrahidrotiofeno , tetrahidrot iopirano , tetrahidropirano , 1,4-dioxano, 1,4-oxatiano, indazol, quinolina, indazol, indol, 8 -aza-biciclo [3.2.1] octano o tiazol.
Un segundo aspecto de la presente invención proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula (IV) en cualquiera de las modalidades mencionadas anteriormente, en forma de sal libre o farmacéuticamente aceptable en combinación con al menos un componente de las Columnas A, B o C, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una condición inflamatoria o alérgica, particularmente una enfermedad inflamatoria u obstructiva de las vías respiratorias o idratación de las mucosas .
Una modalidad de la presente invención proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula (IV) en cualquiera de las modalidades mencionadas anteriormente, en forma de sal libre o farmacéuticamente aceptable, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una condición inflamatoria o alérgica seleccionada de fibrosis quística, discinesia ciliar primaria, bronquitis crónica, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, asma, infecciones del tracto respiratorio, carcinoma de pulmón, xerostomía y queratoconj untivitis sire.
Se debe entender que cualquiera y todas las modalidades de la presente invención se pueden tomar junto con cualquier otra modalidad para describir modalidades adicionales de la presente invención. Además, se pretende combinar todos los elementos de una modalidad con cualquiera y todos los demás elementos de cualquiera de las modalidades para describir modalidades adicionales. Se debe entender por aquellos expertos en la técnica que las combinaciones de sustituyentes donde no sea posible no son un aspecto de la presente invención.
A lo largo de esta especificación y en las reivindicaciones que siguen, a menos que el contexto requiera otra cosa, la palabra "comprenden", o variaciones tales como "comprende" o "que comprende", se entenderá que implican la inclusión de un número entero establecido o paso o grupo de números enteros o pasos, pero no la exclusión de cualquier otro número entero o paso o grupo de números enteros o pasos .
En especial los compuestos específicos preferidos de la Fórmula (IV) son aquellos que se describen más adelante en los Ejemplos.
Los compuestos representados por la Fórmula (IV) pueden ser capaces de formar sales de adición de ácidos, particularmente sales de adición de ácidos ácidos farmacéuticamente aceptables. Las sales de de adición de ácidos farmacéuticamente aceptables del compuesto de la Fórmula (IV) incluyen aquellos ácidos inorgánicos, por ejemplo, ácidos hidrohálicos , tales como ácido fluorhídrico, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico o ácido yodhídrico, ácido nítrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, y ácidos orgánicos, por ejemplo, ácidos alifáticos monocarboxí lieos , tales como ácido fórmico, ácido acético, ácido tri f luoroacético , ácido propiónico y ácido butírico, hidroxi ácidos alifáticos, tales como ácido láctico, ácido cítrico, ácido tartárico o ácido málico, ácidos dicarboxí lieos , tales como ácido maleico o ácido succínico; ácidos carboxílicos aromáticos, tales como ácido benzoico, ácido p- clorobenzoico , ácido difeni lacético , ácido para-bifenil benzoico o ácido trifenilacét ico ; hidroxi ácidos aromáticos, tales como ácido o-hidroxibenzoico , ácido p-hidroxibenzoico , ácido 1 -hidroxinaf talen- 2 -carboxílico o ácido 3 - hidroxinaf talen- 2 - carboxí 1 ico ; ácidos cinámicos, tales como ácido 3 - ( 2 -naf talenil ) propenoico, ácido para-metoxi cinámico o ácido para-metil cinámico, y ácidos sulfónicos, tales como ácido metansulfónico o ácido bencensulfónico . Estas sales se pueden preparar a partir de los compuestos de la Fórmula (IV) mediante procedimientos conocidos para formación de sales.
Los compuestos de la Fórmula (IV) que pueden contener ácidos, por ejemplo, los grupos carboxilo, también son capaces de formar sales con bases, en particular, las bases farmacéuticamente aceptables, tales como aquellas bien conocidas en la técnica; las sales adecuadas incluyen sales metálicas, en especial de metales alcalinos o de metales alcalinotérreos , tales como sales de sodio, potasio, magnesio o calcio, o sales con amoníaco o aminas orgánicas o bases farmacéuticamente aceptables heterocíclicas , tales como etanolaminas , bencilaminas o piridina. Estas sales se pueden preparar a partir de los compuestos de la Fórmula (IV) mediante procedimientos conocidos para formación de sales.
Los estereoisómeros son aquellos compuestos donde existe un átomo de carbono asimétrico. Los compuestos existen en formas isoméricas individuales ópticamente activas o como mezclas de las mismas, por ejemplo, como mezclas dias tereoméricas . La presente invención abarca ambos isómeros R y S ópticamente activos individuales, así como las mezclas de los mismos. Los isómeros individuales se pueden separar mediante los métodos bien conocidos por aquellos expertos en la técnica, por ejemplo, cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) quiral.
Los tautómeros son uno de dos o más isómeros estructurales que existen en equilibrio y se convierten fácilmente a partir de una forma isomérica a otra.
Más específicamente, por ejemplo, los compuestos de la Fórmula la donde R6 y/o R11 son hidrógeno pueden existir en una o ambas de las siguientes formas tautoméricas : Los compuestos de acuerdo con la fórmula IV pueden existir en formas tautoméricas correspondientes .
Los ejemplos de tautómeros incluyen de manera enunciativa aquellos compuestos definidos en las reivindicaciones .
Los compuestos de la invención pueden existir en formas tanto no solvatadas como solvatadas. El término "solvato", en el sentido en que se utiliza en la presente para describir un complejo molecular que comprende el compuesto de la invención y una o más moléculas del solvente farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, etanol . El término "hidrato" se emplea cuando el solvente es agua.
Síntesis En general, los compuestos de acuerdo con la fórmula IV se pueden sintetizar mediante las rutas descritas en el Esquema l y los Ejemplos.
Por ejemplo, el intermediario 1 se puede hacer reaccionar con el intermediario 2 en un solvente orgánico para proporcionar el compuesto 3 que se puede aislar como la base libre. La base libre entonces se puede convertir a una forma de sal mediante el tratamiento con un ácido adecuado.
Los intermediarios se pueden preparar a partir de métodos conocidos por aquellos expertos en la técnica o están disponibles comercialmente .
En el Esquema 1, R1, R2 , R3 , R4 , R5, R6 y R11 con como se definieron anteriormente, Y es CR7R8, X es CR9R10; n es 0, y R7 , R8 , R9 y R10 también son como se definieron anteriormente. Para los compuestos donde n es 1 ó 2, entonces los grupos enlazantes de metileno o etileno adecuados se insertan entre X e Y en el reactivo de diamina 2.
Los compuestos de la Fórmula 1 y la Fórmula 2 anteriores se pueden preparar de acuerdo con las rutas convencionales descritas en la bibliografía.
Los compuestos de la Fórmula (IV), en forma libre, se pueden convertir en forma de sal, y viceversa, en una forma convencional entendida por aquellos expertos en la técnica. Los compuestos en forma libre o de sal se pueden obtener en forma de hidratos o solvatos que contienen un solvente utilizado para la cristalización. Los compuestos de la Fórmula (IV) se pueden recuperar a partir de mezclas de reacción y se purifican de una manera convencional. Los isómeros, tales como los estereoisómeros , se pueden obtener de una manera convencional, por ejemplo, mediante cristalización fraccionada o síntesis asimétrica a partir de materiales de partida sustituidos asimétricamente correspondientes, por ejemplo, ópticamente activos.
Los compuestos de la Fórmula (IV) se pueden preparar, por ejemplo, al utilizar las reacciones y técnicas descritas más adelante y en los Ejemplos. Las reacciones se pueden llevar a cabo en un solvente adecuado para los reactivos y materiales empleados y adecuados para las transformaciones que se efectuarán. Se entenderá por aquellos expertos en la técnica de la síntesis orgánica que la funcionalidad presente en la molécula debe ser consistente con las transformaciones propuestas. Esto a veces requerirá un juicio para modificar el orden de los pasos sintéticos o para seleccionar un esquema de proceso particular sobre otro con el fin de obtener un compuesto deseado de la invención.
Los diversos sust ituyentes en los compuestos intermediarios sintéticos y los productos finales mostrados en los siguientes esquemas de reacción pueden estar presentes en sus formas totalmente elaborados, con grupos protectores adecuados donde sea necesario, tal como se debe entender por un experto en la técnica, o en formas precursoras que más tarde se pueden elaborar en sus formas finales mediante los métodos conocidos por un experto en la técnica. Los sust ituyentes también se pueden agregar en diversas etapas durante la secuencia sintética o después de la finalización de la secuencia sintética. En muchos casos, se pueden utilizar manipulaciones de grupos funcionales comúnmente utilizados para transformar un intermediario en otro intermediario, o un compuesto de la Fórmula (IV) en otro compuesto de la Fórmula (IV) . Los ejemplos de estas manipulaciones son la conversión de un éster o una cetona a un alcohol; la conversión de un éster a una cetona; las interconversiones de esteres, ácidos y amidas; la alquilación, acilación y sul foni lac ión de alcoholes y aminas, y muchos otros. También se pueden agregar sust ituyentes utilizando reacciones comunes, tales como alquilación, acilación, halogenación u oxidación. Estas manipulaciones son bien conocidas en la técnica, y muchos trabajos de referencia resumen los procedimientos y los métodos para estas manipulaciones. Algunos trabajos de referencia que proporcionan ejemplos y referencias a la bibliografía primaria de la síntesis orgánica para muchas manipulaciones de grupos funcionales, así como otras transformaciones comúnmente utilizadas en la técnica de la síntesis orgánica son March's Organic Chemistry, 5a. Edición, Wiley and Chichester, Eds . (2001); Comprehensive Organic Transformations , Larock, Ed., VCH (1989); Comprehensive Organic Functional Group Transformat ions , Katritzky et al. (editores de la serie), Pergamon (1995); y Comprehensive Organic Synthesis , Trost and Fleming (editores de la serie) , Pergamon (1991) . También se reconocerá que otra consideración importante en la planificación de cualquier ruta sintética en este campo es la elección juiciosa del grupo protector utilizado para la protección de los grupos funcionales reactivos presentes en los compuestos descritos en esta invención. Se pueden seleccionar múltiples grupos protectores dentro de la misma molécula de tal manera que cada uno de estos grupos protectores ya sea se puedan retirar sin eliminar otros grupos protectores en la misma molécula, o se pueden eliminar diversos grupos protectores utilizando el mismo paso de reacción, dependiendo del resultado deseado. Una cuenta autorizada que describe muchas alternativas para el médico entrenado es Greene y Wuts, Protective Groups in Organic Sinthesis , Wiley and Sons (1999) .
Actividad farmacológica Habiendo considerado el bloqueo del canal de sodio epitelial (ENaC) , los compuestos de la Fórmula (IV) , en forma de sal libre o farmacéuticamente aceptable, en lo sucesivo denominados alternativamente como "agentes de la invención" , en combinación con un modulador del Modulador de FQ de las Columnas A, B o C son útiles en el tratamiento de condiciones que respondan al bloqueo del canal de sodio epitelial, en particular las condiciones que se benefician de la hidratación de las mucosas.
Las enfermedades producidas por el bloqueo del canal de sodio epitelial, incluyen las enfermedades asociadas con la regulación de volúmenes de fluidos a través de las membranas epiteliales. Por ejemplo, el volumen de líquido superficial de las vías respiratorias es un regulador clave del aclaramiento mucociliar y el mantenimiento de la salud pulmonar. El bloqueo del canal de sodio epitelial estimulará la acumulación de fluidos en el costado de las mucosas del epitelio de las vías respiratorias estimulando con esto el retiro de moco y previniendo la acumulación de moco y esputo en los tejidos de las vías respiratorias (incluyendo las vías respiratorias del pulmón) . Esas enfermedades incluyen enfermedades respiratorias, tales como fibrosis quística, discinesia ciliar primaria, bronquitis crónica, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) , asma, infecciones del tracto respiratorio (agudas y crónicas; virales y bacterianas) y carcinoma de pulmón. Las enfermedades producidas por el bloqueo del canal de sodio epitelial también incluyen otras enfermedades distintas a las enfermedades respiratorias que están asociadas con la regulación anormal de fluidos a través de un epitelio, implicando quizás una fisiología anormal de los líquidos superficiales protectores sobre su superficie, por ejemplo, xerostomía (boca seca) o queratoconj unt ivit is sire (ojo seco) . Además, el bloqueo del canal de sodio epitelial en el riñon se podría utilizar para estimular la diuresis y con esto inducir un efecto hipotensor.
El tratamiento de acuerdo con la invención puede ser sintomático o profiláctico.
El asma incluye tanto asma intrínseca (no alérgica) como asma extrínseca (alérgica), asma leve, asma moderada, asma grave, asma bronquial, asma inducida por ejercicio, asma ocupacional y asma inducida después de una infección bacteriana. También se debe entender que el tratamiento del asma abarca el tratamiento de sujetos, por ejemplo, menores de 4 ó 5 años de edad, que exhiben síntomas de sibilancia y diagnosticados o diagnosticables como "niños con sibilancia" , una categoría de pacientes establecidos de preocupación médica importante y a menudo actualmente identificados como asmáticos incipientes o en fase temprana. (Por conveniencia, este estado asmático particular, se denomina como "síndrome del niño con sibilancia" . ) La eficacia profiláctica en el tratamiento del asma se evidenciará por la frecuencia reducida o la gravedad del ataque sintomático, por ejemplo, del ataque asmático agudo o broncoconstric tor , la mejora de la función pulmonar o la hiperreact ividad mejorada de las vías respiratorias. Además, se puede evidenciar por la reducción de las necesidades de otra terapia sintomática, es decir, la terapia destanada a restringir o cancelar el ataque sintomático cuando se produce, por ejemplo, antiinflamatorios (por ejemplo, cort ico-esteroides ) o broncodilatadores . En particular, el beneficio profiláctico del asma puede ser evidente en sujetos propensos a la "inmersión matutina". La "inmersión matutina" es un síndrome asmático reconocido, común para un porcentaje sustancial de asmáticos y se caracteriza por un ataque de asma, por ejemplo, entre las horas de aproximadamente 4-6 horas, es decir, en un tiempo normal y sus tancialmente distante de cualquier terapia para el asma sintomática administrada con anterioridad.
La enfermedad pulmonar obstructiva crónica incluye bronquitis crónica o disnea asociada con la misma, enfisema, así como la exacerbación de la hiperreact ividad de las vías respiratorias como consecuencia de otra terapia con fármacos, en particular otra terapia de fármacos inhalados. La invención también se puede aplicar al tratamiento de la bronquitis de cualquier tipo o génesis incluyendo, por ejemplo, bronquitis aguda, araquídica, catarral, crouposa, crónica o ftinoide.
Los agentes de la invención también pueden ser útiles como bloqueadores del canal iónico sensible a ácidos (ASIC) . De esta forma, los mismos pueden ser útiles en el tratamiento de condiciones que responden al bloqueo del canal iónico sensible a ácidos .
La idoneidad del bloqueador del canal de sodio epitelial como un tratamiento de una enfermedad que se beneficia de la hidratación de mucosas, se puede probar al determinar el efecto inhibidor del bloqueador de canales en el ENaC en un ensayo de base celñular adecuado. Por ejemplo, se pueden utilizar células individuales o epitelios confluentes, que se expresan de forma endógena o por ingeniería para sobre - expresar el ENaC para evaluar la función del canal utilizando técnicas electrof isiológicas o estudios de flujo iónico. Véanse los métodos descritos en: Hirs et al, J. Pharw Exp . Ther (2004); Moody et al, Am J Physiol Cell Physiol (2005) .
Los bloqueadores del canal de sodio epitelial, incluyendo los compuestos de la Fórmula (IV), también son útiles como agentes co - terapéut icos para utilizarse en combinación con otras sustancias farmacológicas, tales como sustancias farmacológicas ant i inflamatorias , broncodi latadoras , antihis tamínicas o antitusivos, en particular en el tratamiento de fibrosis quistica u obstructiva o enfermedades inflamatorias de las vías respiratorias tales como las mencionadas anteriormente, por ejemplo, como potenciadores de la actividad terapéutica de estos fármacos o como un medio para reducir la dosificación requerida o potencial de los efectos secundarios de estos fármacos.
El bloqueador del canal de sodio epitelial se puede mezclar con el agente activo modulador de FQ en una composición farmacéutica fija o se puede administrar por separado, antes de, simultáneamente con o después de la otra sustancia farmacológica.
Por consiguiente, la invención incluye como un aspecto adicional de una combinación del inhibidor del ENaC y un modulador del Modulador de FQ seleccionado de al menos uno de las columnas A, B o C, opcionalmente , con agentes osmóticos (solución salina hipertónica, dextrano, manitol, xilitol ) + modificadores de la función del CFTR, tanto de tipo silvestre como mutantes (correctores + potenciadores) , por ejemplo, aquellos descritos en las patentes O 2007/021982, WO 2006/099256, WO 2006/127588, WO 2004/080972, WO 2005/026137, WO 2005/035514, WO 2005/075435, WO 2004/111014, WO 2006/101740, WO 2004/110352, WO 2005/120497 y la US 2005/0176761, una sustancia farmacológica antiinflamatoria, broncodilatadora , antihistamínica, antitusiva, antibiótica o de DNasa, el bloqueador del canal de sodio epitelial y la sustancia farmacológica están en la misma composición farmacéutica o una diferente . los antibióticos adecuados incluyen antibióticos de macrólido, por ejemplo, tobramicina (TOBIMR) .
La sustancia farmacológica de DNasa adecuada incluye dornasa alfa ( PulmozymeMR) , una solución altamente purificada de desoxirribonuc leasa I humana recombinante (rhDNasar) , que escinde selectivamente el ADN . Dornasa alfa se utiliza para tratar la fibrosis quística.
Otras combinaciones útiles de los inhibidores de ENaC y del modulador del Modulador de FQ seleccionado de al menos uno de las columnas A, B o C incluyen combinaciones con fármacos anti-inflamatorios, por ejemplo, aquellos con los antagonistas de receptores de quimioquinas , por ejemplo, CCR-1, CCR- 2, CCR-3, CCR-4, CCR-5, CCR-6, CCR-7, CCR-8, CCR-9 y CCR10, CXCR1, CXCR2 , CXCR3 , CXCR4 , CXCR5 , en particular, los antagonistas de CCR-5, como los antagonistas de Schering-Plough SC-351125, SCH-55700 y SCH-D; los antagonistas Takeda, tales como cloruro de N- [ [4 - [ [ [ 6 , 7 - dihidro - 2 - ( 4 -metil-fenil) -5H- benzo - c iclohepten- 8 - i 1 ] carbonil] amino] fenil] metil] tetrahidro - N, N-dimet i 1 - 2H- piran- 4 -aminio (TAK-770) ; y los antagonistas CCR-5 descritos en la USP 6,166,037 (en particular, las reivindicaciones 18 y 19) , la WO 00/66558 (en particular la reivindicación 8) , la WO 00/66559 (en particular la reivindicación 9) , la WO 04/018425 y la WO 04/026873.
Los ant i inf lamatorios adecuados incluyen esteroides, en particular, glucocort icoides , tales como budesonida, dipropionato de bec lametasoné , propionato de fluticasona, ciclesonida o furoato de mometasona, o los esteroides descritos en la WO 02/88167, la WO 02/12266, la WO 02/100879, la WO 02/00679 (en especial los Ejemplos 3, 11, 14, 17, 19, 26, 34, 37, 39, 51, 60, 67, 72, 73, 90, 99 y 101), la WO 03/35668, la WO 03/48181, la WO 03/62259, la WO 03/64445, la WO 03/72592, la WO 04/39827 y la WO 04/66920, los agonistas de los receptores de glucocort icoides no esteroideos, tales como aquellos descritos en DE 10261874, la WO 00/00531, la WO 02/10143, la WO 03/82280, la WO 03/82787, la WO 03/86294, la WO 03/104195, la WO 03/101932, la WO 04/05229, la WO 04/18429, la WO 04/19935 y la WO 04/26248, los antagonistas de LTD4 , tales como los inhibidores PDE4 montelukast y zafirlukast, tales como cilomilast (Ariflo® GlaxoSmi thKline ) , Roflumilast (Byk Gulden) , V-11294A (Napp) , BAY19-8004 (Bayer) , SCH-351591 (Schering-Plough) , Arofylline (Almirall Prodesfarma) , PD189659/PD168787 (Parke-Davis) , AWD-12-281 (Asta Medica), CDC-801 (Celgene) , SeICIDMR, CC-10004 (Celgene), VM554/UM565 (vernalis), T-440 (Tanabe) , KW-4490 ( Kyowa Hakko Kogyo) , y aquellos descritos en la WO 92/19594, la WO 93/19749, la WO 93/19750, la WO 93/19751, la WO 98/18796, la WO 99/16766, la WO 01/13953, la WO 03/104204, la WO 03/104205, la WO 03/39544, la WO 04/000814, la WO 04/000839, la WO 04/005258, la WO 04/018450, la WO 04/018451, la WO 04/018457, la WO 04/018465, la WO 04/018431, la WO 04/018449, la WO 04/018450, la WO 04/018451, la WO 04/018457, la WO 04/018465, la WO 04/019944, la WO 04/019945, la WO 04/045607 y la WO 04/037805; los antagonistas de los receptores A2B de adenosina tales como aquellos descritos en la WO 02/42298, y los agonistas beta-2 adrenérgicos , tales como albuterol ( salbutamol ) , metaproterenol , terbutalina, fenoterol salmeterol, procaterol, y en especial, formoterol, carmoterol y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, y los compuestos (en forma libre o de sal o de solvato) de la Fórmula (IV) de la WO 0075114, cuyo documento se incorpora en la presente como referencia, de preferencia los compuestos de los Ejemplos de la misma, en especial un compuesto de la Fórmula: correspondiente a indacaterol y las sales farmacéuticamente aceptables del mismo, así como los compuestos (en forma libre o de sal o de solvato) de Fórmula (IV) de la WO 04/16601, y también los compuestos de la EP 1440966, JP 05025045 , la WO 93/18007 , la WO 99/64035, la USP 2002/0055651, la WO 01/42193 , la WO 01/83462 , la WO 02/66422 , la WO 02/70490, la WO 02/76933 , la WO 03/2- [439 , la WO 03/42160 , la WO 03/42164 , la WO 03/72539 , la WO 03/91204 , la WO 03/99764 , la WO 04/16578 , la WO 04/22547 , la WO 04/32921 , la WO 04/33412 , la WO 04/37768 , la WO 04/37773 , la WO 04/37807 , la WO 04/39762, la WO 04/39766, la WO 04/45618 , la WO 04/46083 , la WO 04/80964 , la WO 04/108765 y la WO 04/108676.
Los fármacos broncodilatadores adecuados incluyen los agentes anticol inérgicos o ant imuscarínicos , en particular, bromuro de ipratropio, bromuro de oxitropio, sales de tiotropio y CHF 4226 (Chiesi), y gl icopirrolato , aunque también aquellos descritos en la EP 424021, la USP 3,714,357, la USP 5,171,744, la WO 01/04118, la WO 02/00652, la WO 02/51841, la WO 02/53564, la WO 03/00840, la WO 03/33495, la WO 03/53966, la WO 03/87094, la WO 04/018422 y la WO 04/05285.
Los fármacos anti - inf lamatorios y broncodilatadores duales adecuados incluyen los antagonistas del agonista adrenoreceptor de beta-2 dual /muscarlnicos tales dual como aquellos descritos en la USP 2004/0167167, la WO 04/74246 y la WO 04/74812.
Las sustancias farmacológicas ant ihis tamínicas adecuadas incluyen clorhidrato de cetirizina, acetaminofeno , fumarato de clemastina, prometazina, loratidina, desloratadina , difenhidramina y clorhidrato de fexofenadina , activastina, astemizol, azelastina, ebastina, epinastina, mizolastina y tefenadina, así como aquellos descritos en la JP 2004107299, la WO 03/099807 y la WO 04/026841.
De acuerdo con lo anterior, la invención también proporciona un aspecto adicional de un método para el tratamiento de una condición de respuesta al bloqueo del canal de sodio epitelial, por ejemplo, las enfermedades asociadas con la regulación de volúmenes de fluidos a través de las membranas epiteliales, en particular una enfermedad obstructiva de las vías respiratorias, que comprende administrar a un sujeto, en particular un sujeto humano, en necesidad del mismo un compuesto de la Fórmula (IV) , en forma libre o en forma de una sal farmacéuticamente aceptable.
En otro aspecto, la invención proporciona un compuesto de la Fórmula (IV) , en forma libre o en forma de una sal farmacéuticamente aceptable, para utilizarse en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de una condición de respuesta al bloqueo de los canales de sodio epiteliales, en particular una enfermedad obstructiva de las vías respiratorias, por ejemplo, fibrosis, quística y EPOC .
Los agentes de la invención se pueden administrar mediante cualquier vía adecuada, por ejemplo oralmente, por ejemplo, en forma de una tableta o cápsula,- parenteral, intravenosamente, por ejemplo, mediante inhalación, por ejemplo, en el tratamiento de una enfermedad obstructiva de las vías respiratorias; intranasalmente , por ejemplo, en el tratamiento de rinitis alérgica; tópicamente para la piel, o rectalmente. En un aspecto adicional, la invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la Fórmula (IV), en forma libre o en forma de una sal farmacéuticamente aceptable, opcionalmente junto con un diluyente o portador farmacéuticamente aceptable. La composición puede contener un agente co-terapéutico, tal como un fármaco ant i - inflamatorio , bronco-dilatador , ant ihistamínico o anti-tusivo como se describió anteriormente. Estas composiciones se pueden preparar utilizando diluyentes o excipientes convencionales y técnicas conocidas en la técnica galénica. De esta forma, las formas de dosificación oral pueden incluir tabletas y cápsulas. Las formulaciones para administración tópica pueden tomar la forma de cremas, ungüentos, geles o sistemas de administración transdérmica , por ejemplo, parches. Las composiciones para inhalación pueden comprender formulaciones atomizables en aerosol u otras o formulaciones de polvo seco.
Cuando la composición comprende una formulación en aerosol, que de preferencia contiene, por ejemplo, un propelente de hidro- f luoro-alcano (HFA) , tal como HFA 134a o HFA227 o una mezcla de los mismos, y puede contener uno o más co-solventse conocidos en la técnica, tales como etanol (hasta 20% en peso) , y/o uno o más tens ioac t ivos , tales como ácido oleico o trioleato de sorbitán, y/o uno o más agentes de carga, tales como lactosa. Cuando la composición comprende una formulación de polvo seco, que contiene de preferencia, por ejemplo, el compuesto de la Fórmula (IV) que tiene un diámetro de partícula de hasta 10 mieras, opc ionalmente junto con un diluyente o portador, tal como lactosa, de la distribución deseada de tamaño de partícula y un compuesto que ayuda a proteger contra el deterioro del desempeño del producto debido a la humedad, por ejemplo estearato de magnesio. Cuando la composición comprende una formulación nebulizada, se prefiere que contenga, por ejemplo, el compuesto de la Fórmula (IV) ya sea disuelto o suspendido en un vehículo que contenga agua, un co-solvente, tal como etanol o propilenglicol y un estabilizante, que puede ser un agente tensioactivo .
Otros aspectos de la invención incluyen: un compuesto de la Fórmula (IV) en forma inhalable, por ejemplo, en una composición en aerosol pulverizables o de otro tipo o en partículas inhalables, por ejemplo, en forma micronizada; un medicamento inhalable que comprende un compuesto de la Fórmula (IV) en forma inhalable; un producto farmacéutico que comprende un compuesto de la Fórmula (IV) en forma inhalable en asociación con un dispositivo para inhalación, y un dispositivo para inhalación que contiene un compuesto de la Fórmula IV en forma inhalable.
Las dosificaciones de los compuestos de la Fórmula (IV) empleados en la práctica de la presente invención, por supuesto, variará dependiendo, por ejemplo, de la condición particular que será tratada, el efecto deseado y el modo de administración. En general, las dosis diarias adecuadas para administración mediante inhalación están en el orden de 0.005-10 mg, mientras que para una administración oral, son adecuadas dosis diarias en el orden de 0.05-100 mg.
Uso y ensayo farmacéutico Los compuestos de la Fórmula (IV) y sus sales farmacéuticamente aceptables, en lo sucesivo denominados alternativamente como "agentes de la invención", son útiles como productos farmacéuticos. En particular, los compuestos tienen una buena actividad bloqueadora del ENaC y se puede probar en los siguientes ensayos.
Cultivo celular Las células epiteliales bronquiales (HBEC) humanas (Cambrex) se cultivaron bajo condiciones de interfase aire-líquido para proporcionar un fenotipo mucociliar bien diferenciado.
Las HBEC se cultivaron utilizando una modificación del método descrito por Gray y colaboradores (Gray et al., 1996) . Las células se sembraron en matraces de plástico T-162 y se cultivaron en medio de crecimiento celular bronquial epitelial (BEGM; Cambrex) suplementado con extracto de pituitaria bovina (52 9/??1), hidrocort isona (0.5 µg/ml)< factor de crecimiento epidérmico humano recombinante (0.5 ng/ml), epinefrina (0.5 µ9/p?1), transferrina (10 µg/p?l) , insulina (5 ^g/ml), ácido retinoico (0.1 ^g/ml), triyodot ironina (6.5 /ig/ml), gentamicina (50 g/ml) y anfotericina B (50 ng/ml) . El medio se cambió cada 48 horas hasta que las células tuvieron 90% de confluencia. Las células luego se subcul tivaron y se sembraron (8.25 x 105 células/cásete) en casetes de policarbonato Snapwell (Costar) en medios de diferenciación que contuvieron 50% de DMEM en BEGM con los mismos suplementos anteriores aunque sin triyodot ironina y una concentración final de ácido retinoico 50 n (ácido all - trans - retinoico ) . Las células se mantuvieron sumergidas durante los primeros 7 días en cultivo, después de lo cual se expusieron a una interfase de aire apical durante el resto del período de cultivo. En este momento, los medios se cambiaron a medios DMEM:F12 que contuvieron 2% v/v de Ultroser G para el resto del cultivo. La anfotericina B se retiró de todas las alimentaciones de 3 medios antes de utilizarse en las Cámaras Ussing. Las células se utilizaron entre los días 7 y 21 después del establecimiento de la interfaz apical-aire. En todas las etapas del cultivo, las células se mantuvieron a 37°C en 5% de C02 en una incubadora de aire.
Mediciones de corriente en cortocircuito (ISC) Se montaron casetes bien cerrados en Cámaras de Difusión Vertical (Costar) y se bañaron continuamente con solución de Ringer gasificada (5% de C02 en 02 , pH 7.4) mantenida a 37°C que contiene (en mM) : 120 NaCl, 25 NaHC03 , 3.3 KH2P04, 0.8 K2HP04 , 1.2 CaCl2, 1.2 MgCl2/ and 10 glucosa. La osmolaridad de la solución estuvo entre 280 y 300 de H20 mOsmol/kg para todas las soluciones salinas fisiológicas utilizadas. Las células se nivelaron por voltaje a 0 mV (modelo EVC4000 ; WPI) . La RT se midió mediante la aplicación de un pulso de 1 o 2 mV a intervalos de 30-s y al calcular la RT mediante la la ley de Ohm . Los datos se registraron utilizando una estación de trabajo PowerLab (AD Instruments).
Los compuestos de prueba se prepararon como una solución madre 10 mM en DMSO (95%) . Se prepararon recientemente diluciones en serie de 3 en un vehículo adecuado (H20 destilada o solución de Ringer) . Se agregó la concentración inicial a la cámara apical como un concentrado en lOOOx en 5 µL· , lo que da por resultado en una concentración final lx al volumen de 5 mi de la cámara Ussing. Las adiciones posteriores del compuesto se agregaron en un volumen 3.3 ?? de la solución madre diluido en serie lOOOx. Al término del experimento de respuesta a la concentración, se agregó a la cámara apical amilorida (10 µ ) para permitir que la corriente sensible a la amilorida total sea medida. Al inicio de cada experimento se estableció un control de amilorida IC5o .
Los resultados se expresan como el % de inhibición media de la ISC sensible a amilorida. Las curvas de respuesta a la concentración se trazaron y se generaron los valores IC50 utilizando GraphPad Prism 3.02. Casetes de células se ejecutaron típicamente por duplicado y los IC50 se calcularon sobre los datos de % de inhibición media.
Los compuestos de los Ejemplos, en la presente más adelante, en general tuvieron valores IC50 en las mediciones de datos descritas anteriormente por debajo de 10 µ? . Por ejemplo, los compuestos de los Ejemplos mostrados más adelante tienen los valores IC50 indicados.
La invención se ilustra mediante siguientes Ejemplos.
EJEMPLOS Los compuestos de la Fórmula IV (b) Fórmula IV (b) mostrados en la Tabla II.D-2. Los métodos para preparar estos compuestos se describen enseguida. La tabla también muestra los datos de espectrometría de masas [M+H] + .
TABLA II . D- 2.
Condiciones Generales de Síntesis Las LCMS se registraron utilizando una columna 3 um Phenomenex Gemini 50 mm x 3.0 mm . Los métodos a pH bajo utilizan un gradiente de 5-95% de acetonitrilo en agua -0.1% de TFA, los métodos de pH alto utilizan 5-95% de acetonitrilo en agua -0.1% de NH3. [M+H] + hace referencia a pesos moleculares monoisotópicos . 9-BBN 9 -Borabiciclo [ 3.3.1 ] nonano DBU Diazabiciclo [5.4.0] undec-7-eno D F dimetilformamida D SO sulf óxido de dimetilo DCM dic lorometano DEADdietil azodicarboxilato DIAD azodicarboxilato de diisopropilo DIPEA diisopropiletilamina EDCI l-etil-3- (3' -dimet ilaminopropil ) carbodiimida ErOAc acetato de etilo HATU hexaf luorofosfato de 2 - ( 7 -aza- lH-benzotriazol - 1 -il) -1,1,3,3- te tramet iluronio HPLC cromatografía líquida de alto desempeño IPA Alcohol isopropílico ( isopropanol ) MeOH metanol MEMC1 cloruro de 2- metoxietoximetilo NMR resonancia magnética nuclear PS polímero soportado PPTS para- toluensulfonato de piridinio PEAX intercambio PE- aniónico (por ejemplo, columnas Isolute® PE-AX de Biotage) SCX-2 intercambio catiónico fuerte (por ejemplo columnas Isolute® SCX-2 de Biotage) TEA trietilamina THF tetrahidrofurano TFA ácido trif luoroacético PREPARACION DE LOS EJEMPLOS Para mayor claridad en la descripción, más adelante se describen los Ejemplos. Los Ejemplos 2, 9 y 10 son mezclas racémicas . Los Ejemplos 4, 13 y 29 son mezclas de dias tereómeros . Los Ejemplos 24 y 25 son enantiómeros individuales en donde no está determinada la estereoquímica del estereocentro asignado. Todos los otros ejemplos son enantiómeros individuales de estereoquímica definida.
Donde no se establezca, los compuestos se recuperan a partir de mezclas de reacción y se purifican utilizando técnicas convencionales tales como cromatografía, filtración, recristalización y trituración.
EJEMPLO 1 [4.4 -dimetil -imidazolidin- (2Z) -iliden] -amida del ácido 3,5- diamino -6-cloro-pirazin-2 - carboxí lico Una suspensión de 1 - ( 3 , 5 - diamino- 6 - cloro-pirazin- 2 - carbonil ) - 2 -met il - isot iourea (Intermediario A) (0.2 g, 0.517 mmol) en EtOH(2 mi) se trató con triet ilamina (0.029 mi, 0.258 mmol) seguida por 1,2-diamino-2-metilpropano (0.07 mi, 0.672 mmol) y se agitó a reflujo durante la noche. La suspensión resultante se filtró bajo vacío para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo pálido; [M+H] + 284 EJEMPLO 2 [4 -metil - imidazolidin- (2Z) -iliden] -amida del ácido 3,5- diamino -6-cloro-pirazin-2 - carboxí 1 ico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 1, sustituyendo 1 , 2 - diamino- 2 -met ilpropano con 1 , 2 , diaminopropano ; [M+H] + 270.
EJEMPLO 3 [ 1 -meti 1 - imi dazol i din - ( 2 Z ) - i 1 iden] - amida del ácido 3,5- diamino- 6-cloro-pirazin-2 - carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 1, sustituyendo 1 , 2-diamino-2 -metilpropano con N-met ilenediamina ; [M+H] + 270.
EJEMPLO 4 ( 4 f 5 - di fenil - imidazol idin- 2 - i 1 iden) - amida de ácido 3,5- diamino- 6 -cloro -pirazin-2 - carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 1, sustituyendo 1 , 2 -diamino-2 -metilpropano con 1,2 difeniletileno diamina; [M+H] + 408.
EJEMPLO 5 Bencil éster del ácido ( 4 - ( 2 - [ ( Z ) - 3 , 5 - diamino - 6 -cloro -pirazin-2 - carboni 1 imino] - imidazol idin- - i 1 } -butil) -carbámico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 1, sustituyendo 1 , 2 - diamino - 2 -meti lpropano con bencil éster del ácido ( (S) -5 , 6 -diamino-hexil ) -carbámico (Intermediario B) ; [M+H] + 461.
EJEMPLO 6 [1- [4- ( 4 -metoxi - fenil ) -butil] - imidazolidin- (2Z) -iliden] -amida del ácido 3 , 5-diamino-6-cloro-pirazin-2 - carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 1, sustituyendo 1 , 2-diamino-2 -metilpropano con N*l* - [4- (4 -metoxi - f eni 1 ) -butil ] - e taño- 1,2- diamina (Intermediario C ) , [M+H] + 418.
EJEMPLO 7 [1- [4- (4 -hidroxi - fenil) -butil] -imidazolidin- (2Z) -iliden] -amida del ácido 3 , 5-diamino-6-cloro-pirazin-2 -carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 1, sustituyendo 1 , 2-diamino-2 -metilpropano con 4- [4- ( 2 -amino-etilamino) -butil] -fenol (Intermediario C) ; [M+H] + 404.
EJEMPLO 8 [ (S) -4- ( 4 -metoxi -bencil ) -imidazolidin- (2Z) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 -cloro-pirazin-2 -carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 1, sustituyendo 1 , 2 -diamino- 2 -metilpropano con (S)-3-(4-me oxi-fenil) -propano- 1 , 2 - diamina (Intermediario D) ; [M H +]+ 376.
EJEMPLO 9 [4- (3,4-dicloro-fenil) - imidazolidin- ( 2 Z ) - iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino- 6 - cloro-pirazin-2 -carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 1, sustituyendo 1 , 2 -diamino- 2 -metilpropano con 1 -( 3 , 4 -dicloro - fenil )- e tan- 1 , 2 -diamina (Intermediario E) ; [M+H] + 400.
EJEMPLO 10 Ácido 3 - { 2 - [ (Z) -3, 5 -diamino- 6-cloro-pirazin-2-carbonilimino] - imidazolidin- 4 - il ) -propiónico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 1, sustituyendo 1 , 2-diamino-2 -metilpropano con clorhidrato del ácido 4 , 5 -diaminopentanoico (Intermediario F) ; [M+H] + 328.
EJEMPLOS 2-10 Estos compuestos se recuperaron a partir de mezclas de reacción y se purificaron utilizando técnicas convencionales tales como cromatografía instantánea, filtración, resina para captura-liberación o HPLC preparativa.
EJEMPLO 11 (Octahidro -benzoimidazol - 2 - iliden) - amida del ácido 3,5- diamino- 6-cloro-pirazin-2 - carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 1, sustituyendo 1 , 2 -diamino-2 -met ilpropano con ciclohexano- 1 , 2 -diamina . La reacción se llevó a cabo en propan- 2 - ol ; [M+H] + 310.
EJEMPLO 12 [8-bencil-l, 3, 8-triazaspiro [4.5] -dec- (2Z) - iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - cloro -piraz in- 2 -carboxí lico El 4 - amino -l-bencil-piperidin-4 - carboni tri lo (Intermediario G) (200 mg , 0.91 mmol) en propan-2-ol seco (10 mi) se trató con trietilamina (0.25 mi), seguida por 1 - ( 3 , 5 - diamino - 6 - c loro -piraz in- 2 -carbonil ) - 2 -met il - isotiourea (Intermediario A) (355 mg, 0.91 mmol) . La mezcla se calentó a 70°C durante 5 horas y luego se dejó enfriar a temperatura ambiente. El precipitado se recolectó y se lavó con metanol para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo claro, 190 mg; [M+H] + 415.
EJEMPLO 13 [4- [3- ( 4 -metoxi - fenil ) -propil] -imidazolidin- (2Z) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - cloro -piraz in-2 - carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 12, sustituyendo 4 - amino- 1 - benc i 1 -piperidin- 4 - carbonitrilo (Intermediario G) con 5- (4-metoxi - fenil ) -pentan- 1 , 2 - diamina (Intermediario I); [ +H]+ 404.
EJEMPLO 14 (Tetrahidro-pirimidin-2 - iliden) -amida del ácido 3,5-di mino -6-cloro-pirazin-2 - carboxí 1 ico 1- (3, 5-diamino-6- c loro-piraz in- 2 - carboni 1 ) - 2 -metil- isotiourea (Intermediario A) (1.0 g, 2.58 mmol) se suspendió en propan-2-ol (10 mi) y se agregó 1,3-diaminopropano (0.32 mi, 3.9 mmol) . La mezcla se calentó a 60°C durante 18 horas y luego se dejó enfriar a temperatura ambiente y los sólidos presentes se recolectaron mediante filtración. Los sólidos se lavaron con THF y MeOH para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo; [ +H] + 270.
EJEMPLO 15 3 , 5 - diamino- 6 - cloro-N- ( lH-pirrolo [1,2-c] imidazol-3 (2H 5H, 6H, 7H, 7AH) -iliden) irazin-2 -carboxamida 1 - ( 3 , 5 - diamino -6-cloro -pirazin-2 - carbonil ) - 2 -metil-isotiourea (Intermediario A) (195 mg, 0.5 mmol) se suspendió en propan-2-ol (10 mi) y se agregó (S)-2 -( aminome ti 1 ) pirrolidina (100 mg, 1 mmol) . La mezcla se calentó a 60°C durante 18 horas, se dejó enfriar a temperatura ambiente y el precipitado se separó mediante filtración. El filtrado se concentró in vacuo y el residuo se purificó mediante cromatografía ( Si02 , dCM/MeOH) para proporcionar el compuesto del título como una goma amarilla clara; [M+H] + 296.
EJEMPLO 16 [1, 3 -diaza-spiro [ .4] non- (2Z) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6-cloro -pirazin-2 -carboxílico Una solución de 1 - aminometi 1 - c ic lopent i lamina cruda (Intermedia io J) (80 mg , 0.70 mmol) en propan-2-ol (1.0 mi) se agregó a una suspensión de l-(3,5-diamino -6-cloro -pi razin-2- carbonil ) -2- metil-isotiourea (Intermediario A) (208 mg , 0.54 mmol) en propan-2-ol (1.08 mi) y se calentó a 70°C durante 2 días. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se filtró bajo vacío, y el sólido se enjuagó con MeOH. El filtrado se concentró in vacuo para proporcionar un residuo amarillo brillante que se cargó en un cartucho SCX-2 y se eluyó con 33% de NH3 (4 gotas) en MeOH (5 mi x 2) . Las fracciones de amoníaco metanólico se combinaron y se concentraron in vacuo. La purificación mediante LCMS preparativa masa dirigida eluyendo con 95% de agua + 0.1% de NH3 : 5% de acetonitrilo proporcionó el compuesto del título; [M+H] + 310.
EJEMPLO 17 [ (J¾) -4- [3- ( -hidroxi - fenil ) -propil] - imidazolidin-(2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino - 6 - cloro -pirazin-2- carboxí lico A una solución agitada de (4 - ( (R) -4,5-diamino-pentil )- fenol (intermediario K) (1.5 g, 7.72 mmol) en propan-2-ol (100 mi) a 30°C se agregó en una porción de 1 - ( 3 , 5 -diamino- 6 - cloro-piraz in- 2 -carbonil ) - 2 -metil - isotiourea (Intermediario A) y la reacción se calentó a 30°C durante 18 horas, seguida por 50°C durante 18 horas más. La mezcla de reacción se filtró en caliente y el solvente filtrado se eliminó in vacuo para proporcionór una espuma amarilla. La espuma se purificó mediante cromatografía ( Si02 , dCM/MeOH/ 5 % de NH3 ) para proporcionar el compuesto del título; [M+H] + 390.
EJEMPLO 18 [ (S) -4- [3- (4 -hidroxi - fenil ) -propil] - imidazolidin-(2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 -cloro-pirazin-2- carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga a la del Ejemplo 17 sustituyendo ( 4 - ( ( R) -4 , 5 - diamino-pent il ) - fenol (Intermediario K) con 4- ( (S) -4,5-diamino-pentil ) - fenol (intermediario L; [M+H] + 390.
EJEMPLO 19 [ (R) -4-(3- [4- ( (S) -2,3-dihidroxi-propoxi) -fenil] -propil imidazolidin) - (2Z) - iliden] -amida del ácido 3,5- diamino- 6-cloro-pirazin-2 - carboxí 1 ico A una solución agitada de [ ( R) - 4 - [ 3 - ( 4 -hidroxi-f enil) -propil] - imidazolidin- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 - cloro-piraz in- 2 -carboxílico (Ej . 17) (1.0 g, 2.57 mmol) en 1.4 dioxano (38 mi) a 50°C se agregó en una porción de KOH 0.5 (5.3 mi, 2.7 mmol) seguida por (S) - (-) -Glycidiol (0.170 mi, 2.57 mmol) . La mezcla resultante se calentó a 50°C durante 18 horas y luego se agregó en una porción ( S ) - ( - ) -Glycidiol adicional (0.07 mi, 1.05 mmol) . La mezcla resultante se calentó a 50°C durante 60 horas y luego se dejó enfriar a temperatura ambiente. El solvente se retiró in vacuo para proporcionar un aceite naranja que se disolvió en EtOAc/MeOH 9:1 (100 mi) y se lavó con NaOH 1 M (50 mi) . La capa orgánica se secó sobre Na2S04 y el solvente se retiró in vacuo para proporcionar una espuma marrón/naranja. La purificación mediante cromatografía (Si02, DCM/ eOH/NH3 ) proporcionó el compuesto del título como una espuma amarilla; [M+H] + 464 ; XH NMR (400 MHz , DMS0-d6) : 1.65-1.40 (m, 4H), 2.52 (m, 2H) , 3.13 (dd, J=9.6, 7.1Hz, 1H) , 3.42 (br d, J= 4.7Hz, 2H) , 3.62 ( dd , J=9.6, 9.6Hz, 1H) , 3.76 (m, 1H) , 3.78 (m, 1H) , 3.80 (m, 1H) , 3.94 (dd, J= 9.5, 4.0Hz, 1H) , 4.62 (br s, 1H) , 4.89 (br s, 1H) , 6.68 (br s, 2H) , 6.82 (d, J=8.5Hz, 2H) , 7.09 (d, J= 8.5Hz, 2H) , 7.2-6.0 (br s, 1H) , 8.18 (br s, 1H) , 9.3-7.5 (br s, 1H) .
EJEMPLO 20 [(S)-4-(3-[4-((S) -2, 3 -dihidroxi -propoxi) -fenil] -propil) - imidazolidin- (2Z) -iliden] -amida del ácido 3 / 5 - diamino- 6-cloro-pirazin-2 - carboxí lico A una solución de [ ( S ) - 4 - [ 3 - ( 4 -hidroxi -fenil) -propil] -imidazolidin- (2E) -iliden] -amida del ácido 3,5-diamino-6-cloro-pirazin-2 - car oxí lico (Ejemplo 18) (37.5 mg , 0.09 mmol) en etanol (2 mi) se agregó trietilamina (63 µ? , 0.45 mmol) y (S)-glicidol (6.07 µ? , 0.09 mmol) . La mezcla resultante se calentó a reflujo durante 18 horas y luego se dejó enfriar a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con MeOH(l mi) y se purificó en un sistema de HPLC preparativa Waters 3000, (Microsorb C18 agua, (0.1% de TFA) : MeCN) para proporcionar el compuesto del título; [M+H] + 464.
EJEMPLO 21 [(R) -4-{3- [4-((R) -2 , 3-dihidroxi-propoxi) -fenil] propil) - imidazolidin- (2Z) -iliden] -amida del ácido (3,5 -diamino-6 -cloro-pirazin-2 -carboxí lico A una solución agitada de ( R) - 3 - [ 4 - ( ( R) - 4 , 5 -diamino -pent il ) -fenoxi] -propano-1, 2-diol (Intermediario 0) (32.8 mg , 0.122 mmol) en propan-2-ol (3 mi) se agregó 1- ( 3 , 5 -diamino- 6 -cloro-pirazin- 2 -carbonil) - 2 -metil - isotiourea (Intermediario A) (45.8 mg, 0.122 mmol) y la mezcla de reacción resultante se calentó a 90°C durante 18 h . La reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se diluyó con D SO (1.5 mi) y se purificó en un sistema de HPLC preperativa Waters 3000 (MicrosorbMR C18, Agua (0.1% de TFA) : MeCN) . Las fracciones que contenían el producto se hacen pasar a través de un cartucho 1 g SCX-2 que se eluye con 1:1 AguaiMeCN (20 mi) , MeCN (20 mi) y NH3 7M en MeOH (20 mi) . Las eluciones de amoníaco se concentraron in vacuo para proporcionar el compuesto del título; [M+H] + 464.
EJEMPLO 22 [(S)-4-(3-[4-((R) -2,3-dihidroxi-propoxi) -fenil] propil) -imidazolidin- (2Z) -iliden] -amida trif luoroacetato del ácido 3 , 5 -diamino - 6 - cloro-pirazin-2 -carboxílico Este compuesto se preparó de manera análoga a la del Ejemplo 21 sustituyendo (J?) - 3- [4 - ( (R) -4,5-diamino-pentil ) -fenoxi] -propan-1 , 2-diol (Intermediario 0) con ( R) - 3 - [ 4 - ( ( S ) - 4 , 5 - diamino -pent i 1 ) - f enoxi ] -propan- 1 , 2 -diol (Intermediario P) ; [M+H] + 464.
EJEMPLO 23 [ (R) - 4 - ( 3 - [4- (2 -morfolin- 4 - i 1 - 2 - oxo- etoxi ) - fenil ] -propil) -imidazolidin- (2Z) -iliden] -amida del ácido 3,5- diamino- 6-cloro-pirazin-2 - carboxí 1 ico Este compuesto se preparó de manera análoga a la del Ejemplo 21 sustituyendo (R) -3 - [4- ( (R) -4 , 5- diamino-pentil) -fenoxi] -propan- 1 , 2 -diol (Intermediario 0) con 2 - [4 -( (R) - 4 , 5 -diamino-pen il ) -fenoxi] -1-morfolin-4-il-etanona (Intermediario Q) ; [M+H] + 517.
EJEMPLOS 24 Y 25 Ambos enantiómeros de [4 - [ 3 - ( 4 -metoxi - f eni 1 ) -butil] - imidazolidin- ( 2Z )- iliden] -amida del ácido 3,5-diamino- 6 -cloro-pirazin-2 - carboxí lico El racemato de estos compuestos se prepararon de forma análoga a la del Ejemplo 12 sustituyendo 4-ami o -l-bencil-piperidin-4 - carboni t rilo (Intermediario G) con 5 - ( 4 -metoxi - feni 1 ) -hexan- 1 , 2 -diamina (Intermediario K) . Los enantiómeros se separaron mediante HPLC quiral : Fase móvil: 100% de EtOH (0.2% de IPAm) Columna: Chirapak-AD 25cm x 4.6 mm i.d Magnitud de flujo: lml/min UV 280 nM Concentración mg/mL Vol . de Iny 10 /¿L EJEMPLO 26 [ (S) - 4 - (4-beniloxi-2/ 2 -dimetil -butil - imidazolidin- (2Z) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 -cloro-pirazin-2 -carboxílico Paso 1 DEAD (4.49 mi, 28 mmol) se agregó a una suspensión agitada de ter-butil éster del ácido ( (S) -5-benciloxi-l - hidroximet i 1 -3, -3-dimetil-pentil) -carbámico (preparado como se describe en la EP 0702004 A2 , Rueger et al., 10 g, 0.028 mmol), ftalimida (4.19 g, 0.028 mmol) y PS- trifenilfosfina (29.8 g, 56 mmol) en THF (500 mi), y la reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 3 días. La reacción se filtró para retirar la resina de PS-trifenilfosf ina y la resina se lavó con EtOAc (2 x 50 mi) . El solvente se retiró in vacuo y el residuo se purifica mediante cromatografía instantánea (Si02, EtOAc/iso-hexano) para proporcionar el ter-butil éster del ácido [ ( S) - 5 -benc iloxi - 1 - ( 1 , 3 -dioxo- 1 , 3 - dihidro - isoindo1 - 2-ilmetil)-3,3 -dime i 1 -pentil] -carbámico como un sólido blanco; [M+H] * 481.
Paso 2 Hidrazina (66.6 mi de una solución 1M en THF, 66.6 mmoles) se agregó a una suspensión de ter-butil éster del ácido [ ( S ) - 5 - benciloxi - 1 - ( 1 , 3 -dioxo- 1 , 3 -dihidro- isoindol - 2-ilmetil) -3,3-dimetil-pentil] -carbámico (4 g, 8.32 mmol) en etanol (100 mi) , y la solución resultante se calentó a 40°C durante la noche. Se formó un precipitado blanco espumoso. La reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se agregó dietiléter (100 mi) y la suspensión blanca resultante se enfrió a 0°C durante 30 minutos. El precipitado blanco se retiró mediante filtración y el solvente se eliminó in vacuo. El residuo luego se agitó con dietiléter (100 mi) durante 1 hora, se filtró y el solvente se eliminó in vacuo para proporcionar el ter-butil éster del ácido ((S)-l-aminomet il - 5-benciloxi-3, 3 - dimet il -pent i 1 ) - carbámico como un aceite amarillo pálido; [M+H] + 351.
Paso 3 Yodotrimetilsilano (1.63 mi, 11.94 mmol) se agregó gota a gota a una solución de ter-butil éster del ácido (( S )- 1 - aminome til - 5 -benciloxi - 3 , 3 - dimet il -pentil ) -carbámico (2.79 g, 7.96 mmol) en DCM (30 mi) y la solución amarilla resultante se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. La reacción se filtró y el filtrado se diluyó con DCM (50 mi) y se lavó con NaOH 2 M (100 mi) . La capa acuosa se dejó reposar durante la noche y cualquier producto oleoso de la solución se extrajo en EtOAC(100 mi) . Las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre MgS04 , y el solvente se retiró in vacuo para proporcionar la (S)-benciloxi -4 , 4 -dimetil -hexan- 1 , 2 -diamina como un aceite amarillo pálido; [M+H] + 251.
Paso 4 Una suspensión de 1 - ( 3 , 5 - diamino- 6 - cloro-piraz in- 2 - carboni 1 ) - 2 -met i 1 - isot iourea (Intermediario A) (2.56 g, 6.87 mmol) y ( S ) -benciloxi - 4 , 4 - dimet il -hexan- 1 , 2 -diamina (1.72 g, 6.87 mmol) en propan-2-ol (50 mi) se calentó a 90°C durante 3 horas. La reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente, se filtró para eliminar cualquier material insoluble y el papel de filtro se lavó con MeOH (50 mi) . El filtrado se cargó en un cartucho SCX-2 que se había pre-eluido con MeOH. El cartucho se eluyó con MeOH y luego NH3 7M en MeOH. Al dejar en reposo, se cristalizó un sólido amarillo pálido fuera de la solución de NH3 en MeOH. El sólido se recolectó mediante filtración, se lavó con MeOH (20 mi) y se secó in vacuo a 40°C para proporcionar el compuesto del título. [M+H] + 446.
EJEMPLO 27 [ (S) - 4 - (hidroxilo- 2 ,2-dimetil-butil) -imidazolidin (2Z) -iliden] -amida del ácido 3,5-diamino-6 - cloro -pirazin- 2 - carboxí 1 ico A una suspensión de [ ( S ) - 4 - ( 4 -beniloxi - 2 , 2 -dimetil -butil- imidazolidin- (2Z) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - cloro-piraz in- 2 - carboyxlic (Ej. 26) (100 mg, 0.22 mmol) en DCM (5 mi) se agregó gota a gota yodotrimetilsilano (0.061 mi, 0.448 mmol) . La solución amarilla resultante se calentó a reflujo durante 2 días. La reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y el sólido amarillo que se ha formado se recolectó mediante filtración, se disolvió en MeOH (3 mi) y se cargó en un cartucho SCX-2 10 g que se había pre-eluido con MeOH. El cartucho se eluyó con MeOH (30 mi) y NH3 7M en MeOH (30 mi) . El NH3 7M amarillo pálido en lavado de MeOH se concentró in vacuo para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo. [M+H] + 356.
EJEMPLO 28 [ (S) -4-(4- [4- (S) -2, 3 -dihidroxi -propoxi) -fenil] -2,2-dimetil -butil )- imidazolidin- (2Z) -iliden] -amida del ácido 3 , 5-diamino-6-cloro-pirazin-2-carboxílico Paso 1 (S) -glicidol (0.36 mi, 5.5 mmol) se agregó a una solución de 4-yodofenol (1 g, 4.5 mmol) y trietilamina (31 mi, 0.2 mmol) en etanol (5 mi) y la solución marrón claro resultante se calentó a reflujo durante 15 h. La reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y el solvente se eliminó in vacuo. El residuo se purificó mediante cromatografía (Si02, EtOAc/iso-hexano) para proporcionar el (S)-3-( 4 -yodo- fenoxi ) -propan- 1 , 2 - diol como un aceite incoloro .
Paso 2 2 , 2 - dimetoxipropano (1.94 mi, 15.8 mmol) y PPTS (0.079 mg, 0.32 mmol) se agregaron a una solución de ( S )- 3 -( 4 -yodo- fenoxi ) -propan- 1 , 2 - diol (0.93 g, 3.16 mmol) en DMF (20 mi), y la solución resultante se dejó agitar a temperatura ambiente durante la noche. El solvente se retiró ín vacuo y el residuo se purificó mediante cromatografía (Si02, EtOAc : Iso-hexano) para proporcionar el ( R) - 4 - (4 -yodo -fenoximetil) -2 , 2-dimetil- [1 , 3] dioxolano como un aceite incoloro.
Paso 3 DEAD (0.63 mi, 4 mmol) se agregó a una suspensión de ter-butil éster del ácido ((S)-l-hidroxiime til - 3, 3-dimetil-pent-4-enil) - carbámico ( 1 g, 4 mmol) , ftalimida (588 mg , 4 mmol) y PS-trif enilfosf ina (3.72 g, 8 mmol) en THF (50 mi) y la solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La resina se retiró mediante filtración, y el filtrado se concentró in vacuo. La purificación mediante cromatografía instantánea (Si02, EtOAc/iso-hexano) proporcionó el ter-butil éster del ácido [(S)-l-(l,3- dioxo- 1 , 3 - dihidro- isoindol - 2 -ilme t il ) - 3 , 3 -dimet il -pent - 4 - enil ] - carbámico como un sólido blanco; [M+H-BOC] + 273.
Paso 4 9-BBN (4.63 mi de una solución 0.5 M en THF, 0.23 mmol) se agregó a una solución del ter-butil éster del ácido [ ( S ) - 1 - ( 1 , 3 - dioxo - 1 , 3 - dihidro-isoindol - 2 - i lmet il ) -3, 3-dime til- pent-4-enil] -carbámico (0.43 g, 0.116 mmol) en THF (15 mi) y la solución incolora resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. DMF anhidra (15 mi) se agregó a la solución, seguida por solución acuosa de K3P04 3 M (0.77 mi, 2.3 mmol), (R) -4 - (4 -yodo-fenoximetil) -2 , 2 -dimetil- [1 , 3] dioxolano (267 mg , 0.28 mmol) y Pd ( dppf ) Cl2 - DCM (47 mg, 0.058 mmol) . La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas, 50°C durante 2 horas y luego se dejó enfriar a temperatura ambiente y se filtró a través de una almohadilla de CeliteMR (material de filtro) que se lavó con EtOAC(3 x 50 mi) . Los filtrados combinados se lavaron con solución ac . sat . de NaHC03 (30 mi) , se secaron (MgS04) y el solvente se eliminó in vacuo para proporcionar un aceite negro. La cromatografía múltiple (Si02, EtOAc/iso-hexano) proporcionó el ter-butil éster del ácido [ ( S ) - 5 - [ 4 - ( ( R ) - 2 , 2 - dimet i 1 - [1,3] dioxolan- 4-ilmetoxi) - fenil] -1- (1,3 -dioxo- 1 , 3 -dihidro - isoindol -2-ilmetil) - 3 , 3 - dimeti 1 -pentil] -carbámico como un sólido color crema; [M+H-BOC]+ 481.
Paso 5 Hidrazina (2.2 mi de una solución 1M en THF, 2.2 mmol) se agregó a una solución del ter-butil éster del ácido [ ( S ) - 5 - [4 - ( ( R) - 2 , 2 -dimet il - [ 13 ] dioxolan-4 -ilmetoxi) -fenil] -1- (1, 3 -dioxo- 1 , 3 - dihidro- isoindol - 2-ilmetil) -3,3-dimetil-pentil] -carb mico (0.16 g, 0.28 mmol) en etanol (5 ml) , y la solución incolora resultante se calentó a 45°C durante la noche. La reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente, y se agregó dietiléter (30 ml) y la suspensión blanca resultante se enfrió a 0°C durante 30 minutos. El sólido blanco se retiró mediante filtración, y el solvente se eliminó in vacuo para proporcionar el ter-butil éster del ácido { (S) -l-aminometil-5- [4- ( (R) -2 , 2-dimetil- [1,3] dioxolan-4 -ilmetoxi) -fenil] -3,3 -dimetil-pentil ] -carbámico como un aceite incoloro; [M+H] + 451.
Paso 6 Una solución de ter-butil éster del ácido { ( S ) - 1 - aminomet il -5- [4- ( (R) -2,2- dimet il - [1,3] dioxolan- 4-ilmetoxi) -fenil] -3,3-dimetil-pentil} carbámico (0.13 g, 0.28 mmol) y TFA (1 ml) en DCM (5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, luego se cargó en un cartucho SCX-2 que ha sido pre-eluido con eOH. El cartucho se eluyó con MeOH (2 x 5 ml) , seguido por NH3 7M en MeOH (2 x 5 ml) para proporcionar el ( S ) - 3 - [4 - ( ( S ) - 5 , 6 -diamino- 3 , 3 -dimet i 1 - hexi 1 ) - fenoxi ] - propan- 1 , 2 - diol en 80% de pureza como un aceite incoloro; [M+H] + 311.
Paso 7 Una suspensión de ( S ) - 3 - [ 4 - ( ( S ) - 5 , 6 - diamino-3 , 3 - dimet i 1 - hexil ) - fenoxi ] -propan- 1 , 2 - diol (60 mg, 0.19 mmol) y 1 - ( 3 , 5 - diamino- 6 - cloro - piraz in- 2 -carbonil ) - 2 -metilisot iourea (Intermediario A) (72 mg, 0.19 mmol) en propan-2-ol (3 mi) se calentó a 80°C durante 35 minutos. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se diluyó con MeOH hasta que cualquier sólido se disolvió. La solución se hizo pasar a través de un cartucho SCX-2 que luego se eluyó con MeOH adicional. Las eluciones de metanol combinado se concentraron in vacuo. La cromatografía en fase reversa (IsoluteMR: C18 Water/ CH3CN/ 0.1% de TFA) proporcionó el compuesto del título como un sólido amarillo; [M+H] + 506.
EJEMPLO 29 Clorhidrato de (E ) - 3 , 5 - diamino - 6 - cloro -N- ( 4 - ( 3 - ( 4 -( ( S ) -2,3- dihidroxi ropoxi ) fenil) ropil) -5-propilimidazolidin- 2 - iliden)pirazin-2 - carboxamida Paso 1 Ácido 4 - (4 -metoxifeni 1 ) butírico (25 g, 129 mmol) se disolvió en HBr al 48% (125 mi) y AcOH(125 mi) . La solución resultante se calentó a 150°C durante la noche. La mezcla resultante se concentró in vacuo y el residuo se extrajo en EtOAC(500 mi) . Esta solución se lavó con agua (500 mi) , se secó (MgS0 ) y se concentró para proporcionar ácido 4- (4-hidroxi - fenil) -butírico como un sólido de color canela; JH NMR (d6-DMSO) : 1.72 (2H, tt, J =7.4 y 7.8 Hz) , 2.18 (2H, t, J = 7.4 Hz), 2.45 (2H, t, J = 7.8 Hz) , 6.66 (2H, dd, J = 1.98 y 9.3 Hz), 6.96 (2H, dd, J = 2.8 y 9.3 Hz), 9.12 (1H, s), 12.0 (1H, s) .
Paso 2 Ácido 4 -( -hidroxi - fenil ) -butírico (22.1 g, 123 mmol) se disolvió en THF (750 mi) y se agregó lentamente sulfuro de borano-dimetilo (23.3 mi, 245 mmol) . La suspensión amarilla formada se calentó a reflujo durante 3 horas hasta que se disolvió lentamente la mayoría del sólido. El matraz se retiró de la manta de calefacción, y se agregó lentamente MeOH hasta que cesó burbujeo y el sólido residual se haya disuelto. El matraz se enfrió a temperatura ambiente y se agregó agua (1 L) . El pH corrigió a 3 con AcOH, luego, la mezcla se extrajo con EtOAC(2 x 500 mi) . Los extractos orgánicos se lavaron con salmuera, se secaron (MgS04) y se concentraron. El producto crudo se suspendió con sílice (500 g) en 25% de EtOAc/iso-hexanos (1 L) . Esto se filtró, luego se inundó con 50% de EtOAc /iso-hexanos (2 L) para eluir el producto. Los orgánicos se concentraron para proporcionar el 4- (4-hidroxi -butil )- fenol como un aceite marrón que se cristalizó al dejarlo en reposo; NMR (CDC13) : 1.55-1.72 (4H, m) , 2.58 (2H, t, J = 7.0Hz), 3.1 (2H, br señal), 3.70 (2H, t, J = 6.4Hz), 6.77 (2H, d, J = 8.4Hz), 7.05 (2H, d, J = 8.4Hz).
Paso 3 A 4- (4-hidroxi-butil) -fenol (32.7 g, 197 mmol) en acetona (600 mi) se agregó carbonato de potasio (40.8 g, 295 mmol) seguido por (S)-glicidol (13.7 mi, 207 mmol) . La mezcla se calentó a reflujo durante la noche. Se agregó carbonato de potasio adicional (20 g) , seguido por (S) -glicidol (5 g) y la mezcla se calentó a reflujo durante 72 h. La suspensión se enfrió, se filtró y el filtrado se concentró in vacuo. El residuo se dividió entre EtOAC (500 mi) y 5% de solución de ácido cítrico (500 mi) . Los orgánicos se separaron, se secaron (MgS04) y se concentraron in vacuo para proporcionar el (S)-3- [4 - ( 4 -hidroxi -buti 1 ) - fenoxi] -propan- 1 , 2 - diol como un aceite marrón; 1K NMR (CDC13) : 1.56-1.74 (4H, m) , 2.20 (1H, t, J = 2.46Hz), 2.61 (2H, t, J = 7.6Hz), 3.68 (2H, t, J = 6.2Hz), 3.78 (1H, dd, J = 5.4 y 11.5Hz), 3.86 (1H, dd, J = 3.9 y 11.5Hz), 4.0-4.16 (3H, m) , 6.85 (2H, d, J = 8.6Hz), 7.12 (2H, d, J = 8.6Hz) .
Paso 4 A (S) -3- [4- (4 -hidroxi-butil ) -fenoxi] -propan-1,2-diol (43 g, 179 mmol) en THF (700 ml ) se agregó 2 , 2 - dimetoxipropano (94 ml, mmol 760) seguido por PPTS (4.5 g, 17.9 mmol) . La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La solución se concentró in vacuo y el residuo se recolectó en DCM (500 ml) . Esto se lavó con agua, se secó (MgS04) y se concentró in vacuo. El residuo se purificó a través de un tapón de sílice (300 g) eluyendo con 10%, seguido por 25% de EtOAc/iso-hexanos . Las fracciones deseadas se concentraron para proporcionar el 4 - [4 - ( (R) -2 , 2 -dimetil- [ 1 , 3 ] dioxolan- 4 - i lmetoxi ) - feni 1 ] -butanol - 1 - ol como un aceite Claro; XH NMR (CDC13) : 1.42, (3H, s), 1.48 (3H, S) , 1.53-1.73 (4H, m) , 2.20 (1H, t, J = 2.5Hz), 2.60 (2H, t, J = 7.2Hz), 3.68 (2H, t, J = 6.4Hz), 3.92 (2H, dt, J = 5.8 y 8.5Hz), 4.07 (1H, dd, J = 5.4 y 9.5Hz), 4.19 (1H, dd, J = 6.4 y 8.5Hz), 4.49 (1H, p, J = 5.7Hz) , 6.85 (2H, d, J = 8.7Hz) , 7.11 (2H, d, J = 8.7Hz) .
Paso 5 A 4- [4- ( (R) -2 , 2-dimetil- [1, 3] dioxolan-4-i lme toxi ) - feni 1 ] - butanol - 1 - ol (5.0 g, 17.8 mmol) en DCM ( 180 mi) se agregó peryodinano Dess-Martin (7.56 g, 17.8 mmol) . La solución amarillenta se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La suspensión amarilla resultante se trató con NaOH 1 N (200 mi) y se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La fase orgánica se separó, se secó ( gS0 ) y se concentró para proporcionar el 4 - [4 - ( (R) -2 , 2 -dimetil- [1,3] dioxolan- 4 - ilmetoxi ) -fenil] -but iraldehído como un aceite claro; 1K NMR (CDC13) : 1.42, (3H, s) , 1.48 (3H, s) , 1.95 (2H, dt, J = 7.6 y 14.2Hz) , 2.46 (2H, dt, J = 1.5 y 7.3Hz) , 2.62 (2H, t, J = 7.6Hz) , 3.90-3.96 (2H, m) , 4.07 (1H, dd , J = 5.2 y 9.3Hz) , 4.19 (1H, dd, J = 6.4 y 4.49 (1H, p, J = 5.8Hz) , 6.86 (2H, d, J = 9.4Hz) , 7.10 (2H, d, J = 9.4Hz), 9.77 (1H, t, J = 1.6Hz) .
Paso 6 A 4-[4-((R)-2, 2-dimetil - [1,3] dioxolan- 4 -i lme toxi )- feni 1 ]- but iraldehído (4.28 g, 15.4 mmol) en THF (150 mi) se agregó ter-butil sulf inamida (2.05 g, 16.9 mmol) seguida por etóxido de titanio (6.5 mi, 30.8 mmol) . La solución amarilla formada se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La solución se inactivo con NaOH 1 N (200 mi) y EtOAC (100 mi) y se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente. La mezcla resultante se filtró a través de CeliteMR (material de filtro) y la fase orgánica se retiró y se secó (MgS04) . La concentración in vacuo proporcionó la [4 - [4 - ( (R) - 2 , 2 - dime t il - [ 1 , 3 ] dioxolan-4 - i lmetoxi ) - fenil ] -but - ( E ) - i liden] - amida del ácido 2-metil -propan-2 - sulf ínico como un aceite amarillo; [M+H] + 382.23.
Paso 7 A una solución de [4- [4 - ( (R) -2 , 2-dimetil- [1,3] dioxolan- 4-ilmetoxi) -fenil] -but- (E) -iliden] -amida del ácido 2 -met il -propan- 2 - sulf ínico (4.51 g, 11.8 mmol) en THF (120 mi) a 0°C se agregó bromuro de vini Imagnesio (11.8 mi de una solución 1 M en THF, 11.8 mmoles) gota a gota. Después que se completó la adición, la mezcla se agitó a 0°C durante 30 minutos, luego se inactivo con solución ac . sat. de NH4C1 (20 mi) . Esta mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y se diluyó con agua (50 mi) y EtOAC (50 mi) . La fase orgánica se separó, se secó (MgS04) y se concentró in vacuo. La purificación mediante cromatografía (Si02/ EtOAc / i so - hexano ) proporciono la {4- [4- ( (R) -2,2-dimetil- [1,3] dioxolan- 4 - ilmetoxi ) -feni 1 ]- 1 -vinil -butil } -amida del ácido 2 -metil -propan-2-sulfínico como una mezcla de diastereoisómeros como una goma; [M+H] + 410.39.
Paso 8 Una solución de { 4 - [4 - ( (R) -2 , 2 -dimetil- [1,3] dioxolan- 4-ilmetoxi) -fenil] -1-vinil -butil } -amida del ácido 2-metil-propan-2-sulf ínico (1.0 g, 2.4 mmol) en DCM (25 mi) a -78°C se saturó con oxígeno, luego ozono (generado utilizando el Fischer Technology Ozon Generator 500m) hasta que se obtuvo una solución azul. Luego se agregó sulfuro de dimetilo (1.8 mi, 24 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La solución resultante se lavó con agua (25 mi) y la fase orgánica se concentró bajo alto vacío a baja temperatura para proporcionar la { 4 - [4 - ( (R) - 2 , 2 -dimetil - [1,3] dioxolan -4 - ilmetoxi ) -fenil] -1- formil -butil}-amida del ácido 2 -metil -propan- 2 - sulf ínico como un aceite; [ +H]+ 412.36.
Paso 9 A una solución de la { 4 - [4 - ( ( R) - 2 , 2 - dime t i 1 -[1,3] dioxolan- 4 -ilmeto i) - fenil] -1-formi 1 -but i 1 } -amida del ácido 2 -metil -propan- 2 - sulf ínico en THF (20 mi) se agregó ter-butil éster sulfinamida (323 mg, 2.7 mmol) seguida por etóxido de titanio (1.0 mi, 4.8 mmol) . La solución amarilla formada se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La solución se inactivo con NaOH 1N (50 mi) y EtOAC (50 mi) y se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente. La mezcla resultante se filtró a través de CeliteMR (material de filtro) y la fase orgánica se separó y se secó (MgS04) . La concentración proporcionó la (4- [4- ( (R) -2,2-dimetil- [1,3] dioxolan- 4 -ilmetoxi) -fenil] -1 - { [ ( E ) - 2 -me ti 1 -propan- 2 -sulfinilimino] -met i 1 } -butil) -amida del ácido 2 -me til -propan- 2 - sulf ínico como una mezcla de dias tereoisómeros como un aceite amarillo; [M+H] + 515.38.
Paso 10 A una solución de ( 4 - [ 4 - ( ( R ) - 2 , 2 - dimet i 1 - [1,3] dioxol n- 4 - i lmemoxi ) -fenil] - 1 - { [ (E) -2 -met i 1 -propan- 2 - sulf ini limino] -me t i 1 } -but i 1 ) - amida del ácido 2 -metil -propan- 2 - sulf ínico ( 907 mg, 1.7 mmol) en THF (20 mi) a 0 °C cloruro de n-propilmagnes io (1.76 mi de una solución 2 M en dietiléter, 3.52 mmol) . La solución se agitó a 0°C durante 30 minutos y luego a temperatura ambiente durante 3 h. Una porción adicional de n-propilmagnesio (1.76 mi de una solución 2 M en dietiléter, 3.52 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla resultante se inactivo con solución ac . sat . de NH4C1 (50 mi) y se extrajo con EtOAC (2 x 50 mi) . La fase orgánica se secó (MgS04) y se concentró in vacuo. El residuo se disolvió en EtOAC (10 mi) y se trató con HC1 4 /dioxano (10 mi) . Después de 10 minutos, la solución se concentró in vacuo y el residuo se diluyó con DCM (100 mi) . Esto se trató con solución ac . sat. de NaHC03 (100 mi) y la fase orgánica se retiró y se secó (MgS04) . La solución de DCM se aplicó a un cartucho SCX-2(10 g) y esto se eluyó con DCM y MeOH. El producto se liberó con NH3 2M en MeOH, y la fracción de amoníaco metanólico se concentró para proporcionar el ( S ) - 3 - [4 - (4 , 5 - diamino-oct i 1 ) - fenoxil -propan- 1 , 2 - diol como una mezcla de dias tereoisómeros como una goma; [M+H] + 515.38.
Paso 11 A una solución de ( S ) - 3 - [ 4 - ( 4 , 5 - diamino -octil )- fenoxi] -propan- 1 , 2 - diol (100 mg , 0.32 mmol) en propan-2-ol ( 5 mi) se agregó 1 - ( 3 , 5 - diamino- 6 - cloro-pirazin- 2 - carbonil ) - 2 -meti 1 - isot iourea (Intermediario A) (121 mg, 0.32 mmol) . La suspensión resultante se calentó a 90°C durante 2 horas y luego se enfrió y se concentró in vacuo. El residuo se disolvió en MeOH (20 mi) y se aplicó a un 10 g cartucho SCX-2. Esto se lavó bien con MeOH, agua y MeCN, y luego NH3 2M en MeOH. La fracción de amoníaco metanólico luego se concentró, luego se purificó mediante cromatografía (Si02, 5-10% NH3 2M en MeOH/DCM) . La concentración de las fracciones relevantes proporcionó la base libre en forma de una goma. Esto se disolvió en MeOH (10 mi) y se trató con HC1 1 M en dietiléter (2 mi) . La concentración proporcionó la sal diclorhidratada de (E) -3 , 5 -diamino- 6- cloro-N- (4- (3- (4- ( (S) -2,3-dihidroxipropoxi ) fenil) propil) - 5 -propi 1 imidazol idin-2 - iliden) pirazin- 2 -carboxamida como un sólido amarillo; [M+H] + 506.37, 508.36 para los isótopos de Cl .
EJEMPLO 30 Bencil éster del ácido ( 3 - { ( S ) - 2 - [ ( E) - 3 , 5 -diamino - 6 -cloro-pirazin-2 - carbonilimino] - imidazolidin-4 - i 1 ) -propil) -carbámico 1- (3 , 5 -diamino- 6 -cloro- irazin-2 - carboni 1) -2-metil - isot iourea (Intermediario A) (0.97 g, 3.72 mmol) se agitó en un matraz de tres cuellos de fondo redondo equipado con una trampa de lejía y un condensador y se agregó bencil éster del ácido ((S)-4 , 5 -diamino-pentil ) -carbámico (Intermediario S) (0.85 g, 3.38 mmol) en propan-2-ol (20 mi) . La mezcla de reacción se agitó a 85°C durante 66 hora. La purificación mediante resina de captura y liberación (SCX-2) seguida por elución a través de una almohadilla de sílice inundada con EtOAc, etanol y MeOH proporcionó el compuesto del título como una espuma naranja; [M+H] + 447.1.
Ejemplo 31 [ (S) -4- ( 3 - amino-propil ) - imidazol idin- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 -cloro-pirazin-2 - carbo í 1 ico A una solución de bencil éster del ácido (3-{(S)-2-[(E)-3,5- diamino- 6 -cíoro -pirazin-2-carboni 1 imino] - imidazolidin-4 - il } -propil ) -carbámico (Ej . 30) (0.44 g, 0.98 mmol) en DCM (20 ml ) se agregó yodotrimetilsilano (0.27 ml , 1.96 mmol) gota a gota. La suspensión naranja se agitó a temperatura ambiente durante 65 minutos. La purificación mediante resina de captura y liberación (SCX-2) eluyendo con eOH seguido por NH3 7M en MeOH proporcionó el compuesto del título como una espuma amarilla; [M+H] + 313.1.
Ejemplo 32 [ (S) -4- [3- (3 -bencil -ureido) -propil] - imidazolidin-(2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - cloro -pirazin-2-carboxílico A una solución de [ ( S ) - 4 - ( 3 - amino-propil ) -imidazolidin- (2E) -iliden] -amida del ácido 3,5-diamino- 6 - cloro-piraz in- 2 - carboxí lico (Ej . 31) (0.040 g, 0.128 mmol) en DMF (2 ml) se agregó 1.1'-carbonildiimidazol (0.023 g, 0.141 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. Bencilamina (0.014 ml , 0.128 mmol) y bencilamina se agregó adicional (0.014 ml, 0.128 mmol) a intervalos de una hora para un total de 3 horas. La purificación se realizó al diluir la reacción con NaOH 2N (30 ml) y al extraer el producto en EtOAC (40 ml) . La fase orgánica se lavó con NaOH 2N (30 ml) , se secó sobre MgS0 y el solvente se evaporó in vacuo para proporcionar un aceite amarillo. El aceite se disolvió en metanol (0.75 mi) y dietiléter (5 mi) para triturar un sólido amarillo. Este sólido se retiró mediante filtración y el filtrado formó un precipitado adicional. Este sólido amarillo se recolectó mediante filtración y se lavó con dietiléter para proporcionar el compuesto del título; [M+H] + 446.1.
Ejemplo 33 [ (S) -4- ( 3 - feni lmetansul f onilamino-propil ) -imidazolidin- ( 2E) - iliden] -amida del ácido 3,5-diamino- 6-cloro-pirazin-2- carboxí lico A una solución de [ ( S ) - 4 - ( 3 -amino -propil ) -imidazolidin- ( 2E )- iliden] - amida del ácido 3,5-diamino - 6 - cloro-piraz in- 2 - carboxí lico (Ej. 31) (0.030 g, 0.096 mmol) en DMF (5 mi) a 5°C se agregó cloruro de al fa- toluensul foni lo (0.018 g, 0.096 mmol) y trietilamina (0.013 mi, 0.096 mmol) . La solución se agitó durante 10 minutos. La purificación mediante cromatografía en fase inversa (IsoluteMR C18, 0-100% de MeCN en agua -0.1% de TFA) proporcionó el compuesto del título como un sólido amarillo; [M+H] + 467.0.
EJEMPLO 34 [ (S) -4- (3 - fenilacetilamino-propil) - imidazolidin- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5-diamino-6-cloro-pirazin-2 -carboxí lico A una solución de [ ( S ) - 4 - ( 3 - amino -propi 1 ) -imidazolidin- ( 2E )- iliden] - amida del ácido 3,5-diamino-6-cloro-pirazin-2-carboxílico (Ej . 31) (0.030 g, 0.96 mmol) en D F (2 mi), cloruro de fenilacetilo (0.013 mi, 0.096 mmol) se agregó[sic] . La solución amarilla se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. La purificación mediante resina de captura y liberación (SCX-2) eluyendo con MeOH y NH3 7M en MeOH proporcionó el compuesto del título; [M+H] + 430.98.
EJEMPLO 35 [ (S) -4- ( 4 - fenilmetanesulfonilamino -butil ) -imidazolidin- (2E) -iliden] -amida del ácido 3,5-diamino -6-cloro-pirazin-2- carboxí 1 ico A una suspensión de [ ( S ) - 4 - ( 4 - amino- but i 1 ) -imidazol idin- ( 2E ) - i 1 iden] - amida del ácido 3,5-diamino -6-cloro-pirazin-2- carboxí 1 ico ( Intermediario T) (0.023 g, 0.071 mmol) en DMF (2 mi) se agregó trietilamina (0.010 mi, 0.071 mmol) seguida por cloruro de alfa- toluensulfonilo (0.014 g, 0.071 mmol) . La suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La purificación mediante cromatografía en fase inversa (IsoluteMR C18, 0-100% de MeCN en agua -0.1% de TFA) , seguida por resina de captura y liberación (SCX-2) eluyendo con MeOH y NH3 7M en MeOH proporcionó el compuesto del título como un sólido amarillo, [M+H] + 481.0.
EJEMPLO 36 [ (S) -4- (4-amino feni 1 aceti 1 -buti 1 ) - imidazolidin- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 - cloro -piraz in-2 -carboxí lico A una suspensión de [ ( S ) - 4 - ( 4 - amino-but i 1 ) -imidazolidin- ( 2E) - iliden] -amida del ácido 3,5-diamino- 6 - cloro-piraz in- 2 - carboxí 1 ico (Intermediario T) (0.032 g, 0.098 mmol) en DMF (1 mi) se agregó trietilamina (0.014 mi, 0.098 mmol) seguida por cloruro de fenilacetilo (0.013 mi, 0.098 mmoles) . La suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 90 minutos antes de agregar 0.5 equivalentes adicionales de cloruro de fenilacetilo (0.006 mi, 0.049 mmol) . La reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante 18 horas más. La purificación mediante cromatografía en fase inversa (IsoluteMR de C18, 0-100% de MeCN en agua -0.1% de TFA), seguida por resina de captura y liberación (SCX-2) eluyendo con MeOH y NH3 7M en MeOH proporcionó el compuesto del título como un sólido blanquecino; [M+H] + 445.1.
EJEMPLO 37 Ter-butil éster tri f luoroacetato del ácido 2- [ (E) -3,5- diamino- 6-cloro-pirazin-2 - carbonilimino] -1,3,8-triaza-spiro [4.5] decan- 8 -carboxí lieo Una suspensión de ter-butil éster del ácido 4 -amino - 4 - aminometil -piperidin- 1 - carboxí lico (Intermediario U) (218 g, 0.95 mol) en ter-butanol (6 L) y 1 - ( 3 , 5 - diamino- 6 - c loro-pirazin- 2 -carboni 1 ) - 2 -metil- isotiourea (Intermediario A) (338 g, 0.82 moles) se agitó a 40°C durante la noche. La temperatura luego se aumentó a 85°C y la suspensión se agitó a esta temperatura durante otros 4 días. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y el residuo se extrejo en agua (1 L) , se sometió a ultrasonido y se calentó a 45-50°C. El sólido se recolectó mediante filtración al vacío y se lavó con agua enfriada con hielo, luego se secó bajo vacío a 50°C durante la noche para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo; [M+H] + 425.1.
EJEMPLO 38 [l,3,8-triaza-spiro[4.5]dec- (2E) -iliden] - amida diclorhidratada del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - cloro -pirazin-2- carboxí 1 ico A una solución agitada de HC1 4 M en dioxano (1 L) se agregó ter-butil éster trifluoroacetato del ácido 2- [(E)-3,5-diamino-6-cloro-pirazin-2-carboni limino] -1, 3 , 8-triaza-spiro [ .5] decan- 8 -carboxilico (Ej. 37) (104 g, 193 mmol) . La suspensión espesa resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. El producto se aisló mediante filtración al vacío, enjuagando con dioxano. El sólido se secó bajo vacío a 50°C para proporcionar el compuesto del título como una sal diclorhidratada como un sólido amarillo oscuro; [M+H] + = 325.
EJEMPLO 39 [8- [ (S) -3-fenil-2- ( toluen- 4 - sulfoni lamino) -propionil] -1,3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino- 6 - cloro-pirazin- 2 -carboxí lico A una solución de tos i 1 - L - feni lalanina (1.0 g, 3.13 mmol) en DMF (25 mi) se agregó N-metil morfolina (1.033 mi, 9.39 mmol) y [ 1 , 3 , 8 - triaza -spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida diclorhidratada del ácido 3 , 5 -diamino- 6 - c loro-piraz ina- 2 - carboxí lico (Ej. 38) (1.37 g, 3.44 mmol), seguida por HATU (1.31 g, 3.44 mmol) y la solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos. El producto crudo se diluyó con agua (300 mi) y el sólido resultante se aisló. La purificación mediante cromatografía en fase inversa (IsoluteMR C18, 0-100% de MeCN en agua -0.1% de TFA) , seguida por resina de captura y liberación (SCX-2) eluida con MeOH y NH3 7M en MeOH proporcionó un sólido amarillo que es trituró con MeOH y dietiléter para proporcionar el compuesto del título como una base libre. La base libre se agitó en HC1 5M a 100°C durante 30 minutos formando una goma. MeOH (5 mi) se agregó a la goma y luego todo el solvente se retiró in vacuo. El residuo se trituró con MeOH y dietiléter para proporcionar el compuesto del título; [M+H] + 626.4; XH NMR (DMSO-d6) : 1.12-1.71 (4H, m) , 2.36-2.38 (3H, s), 2.59-2.83 (2H, m) , 2.93-3.52 (4H, m) , 3.41-3.60 (2H, m), 4.42 (1H, m) , 7.12 (2H, d, J = 6.9 Hz), 7.17-7.28 (3H, m) , 7.35 (2H, d, J = 7.7 Hz), 7.54-7.37 (2H, br), 7.57 (2H, d, J = 7.7 Hz), 8.12 (1H, d, J = 9.0 Hz), 7.70-8.26 (2H, br) , 9.22 (1H, s) , 9.95 (1H, s), 10.99 (1H, s) .
EJEMPLO 40 [ 8 - ( 1 -bencensul fonil - 1H- indol - 3 - carbonil ) -1,3,8-triaza-spiro [4.5] -dec (2E) -iliden] -amida del ácido 3,5- diamino- 6-cloro-pirazin-2 - carboxí lico A una solución del ácido 1 -( fenilsulfonil ) -lH-indol-3 -carboxílico (1.0 g, 3.32 mmol) en DMF (15 mi) se agregó HATU (1.388 g, 3.65 mmol) y N-metil morfolina (1.095 mi, 9.96 mmol) y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos. [1, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec - (2E) - iliden] - amida dic lorhidratada del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - c loro -pirazin-2-carboxílico (Ej . 38) (1.452 g, 3.65 milimoles) se agregó y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 45 minutos. La mezcla de reacción se diluyó con agua (100 mi) y el precipitado que se formó se aisló mediante filtración. El producto crudo se suspendió en NaOH 2N y se extrajo en EtOAc . La porción orgánica se secó sobre MgS04 y se concentró in vacuo para proporcionar un sólido marrón. El sólido se suspendió en una mezcla 1:1 de agua (+0.1% de TPA) y acetoni trilo . Un sólido marrón fino se retiró mediante filtración y el filtrado amarillo se concentró in vacuo hasta que quedaron 10 mi de solvente y hata que se ha precipitado un sólido amarillo pálido. Este sólido se lavó con NaOH 2N (60 mi) y luego se suspendió en NaOH 2N (100 mi) y se extrajo en EtOAC (2 x 100 mi) . Las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre MgS04 y se concentraron in vacuo para proporcionar un sólido color crema pálido. El sólido color crema se suspendió en una mezcla 1:4 de EtOAc : iso-hexano (100 mi) y el sólido se extrajo por filtración para proporcionar la base libre del compuesto del título, que se suspendió en HC1 5N (20 mi) y se agitó durante 2 horas. MeOH (20 mi) se agregó para disolver todo el sólido y el solvente se concentró in vacuo hasta que se precipitó un sólido amarillo. Este sólido se extrajo por filtración, se lavó con agua y se secó a 40°C durante 18 horas para proporcionar el compuesto del título; [ +H] + 607.42; XH NMR (DMSO-d6) : 1.86-1.92 (4H, m) , 3.42- 3.63 (4H, m) , 3.68 (2H, s), 7.34 (1H, dd, J + 7.5 Hz, J = 7.5 Hz) , 7.43 (1H, dd, J = 7.5 Hz, J = 7.5 Hz), 7.36-7.55 (2H, br) , 7.62 (1H, d, J= 7.5 Hz) , 7.63 (2H, m) , 7.73 (1H, m) , 7.99 (1H, d, J = 7.5 HZ) , 8.06 (2H, obs), 8.07 (1H, s), 7.50-8.16 (2H, br) , 9.18 (1H, s) , 9.77 (1H, s), 11.09 (1H, s) .
EJEMPLO 41 [ 843 - (3 - isopropoxi -propilsul famoil ) -benzoil] -1,3, 8 -triaza- spiro [ .5 ] dec - ( 2 E) - il iden] - amida del ácido 3,5- diamino- 6-cloro-pirazin-2 - carboxí lico A una solución del ácido 3 -( 3 - isopropoxi -propilsulfamoil ) -benzoico (Intermediario V) (1.10 g, 3.65 mmol) en D F (20 mi) se agregó HATU (1.53 g, 4.02 mmol) y N-metil- morfolina (1.204 mi, 10.95 mmol) y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos. [1 , 3 , 8 - triaza- spiro [ .5] dec- (2E) -iliden] -amida diclorhidratada del ácido 3,5-diamino-6-cloro-pirazin-2-carboxílico (Ej . 38) (1.60 g, 4.02 mmol) se agregó y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 45 minutos. La mezcla de reacción se diluyó con NaOH 2N (150 mi) y el producto crudo se extrajo en EtOAC (2 x 250 mi) . La fase orgánica se secó sobre MgS04 y el solvente se evaporó ín vacuo para proporcionar un aceite amarillo. La purificación en una HPLC preparativa Waters Delta 3000 utilizando un gradiente de agua (+0.1% de TFA) y acetonitrilo proporcionó un aceite amarillo. NaOH 2N se agregó al aceite y el producto se extrajo en EtOAC (2 x 400 mi) . Las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre MgS04 y el solvente se concentró in vacuo a un volumen de aproximadamente 150 mi. A esta solución se agregó iso-hexano (400 mi) y se precipitó un sólido amarillo pálido. Este sólido se recolectó mediante filtración y se enjuagó con iso-hexano para proporcionar el compuesto del título; [M+H] + 607.98; XH NMR (DMSO) : 1.00 (6H, d, J = 6.0 Hz) , 1.55 (2H, m), 1.69-1.79 (4H, m), 2.81 (2H, t, 5.9 Hz) , 3.29 (2H, tr, J = 6.0 Hz) , 3.42 (1H, m) , 3.44 (2H, br) , 3.29-3.82 (4H, m) , 6.15-7.30 (3H, br) , 7.66 (1H, d, J = 7.4 Hz) , 7.70 (1H, dd, J= 7.4 Hz, J= 7.4 Hz) , 7.76 (1H, s) , 7.86 (1H, d, J = 7.4 Hz) , 7.44-8.00 (1H, br) , 8.00-9.05 (3H, br) .
EJEMPLO 42 [8 - [2- (5-fenil-4H- [1,2,4] triazol-3-il) -acetil] -1, 3 , 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) - iliden] - amida del ácido 3,5- diamino -6-cloro-pirazin-2 - carboxí lico Ácido (5-f enil-4H [1, 2 , 4] triazol-3-il) acético (0.48 g, 2.364 mmol) , HATU (0.988 g, 2.6 mmol), [1,3, 8-triaza-spiro [4.5] dec - (2E) -iliden] - amida dic lorhidratada del ácido 5 - diamino - 6 - c loro-piraz ina -2 -carboxí lico (Ej. 38) (1.033 g, 2.60 mmol) , DMF (20 mi) y N-metil-morfolina (0.78 mi, 7.08 mmol) se agregaron a un matraz de fondo redondo y se agitaron a temperatura ambiente durante 20 minutos. El producto crudo se precipitó de la mezcla de reacción al agregar agua (200 mi) y se aisló mediante filtración. La purificación mediante cromatografía en fase inversa (IsoluteMR C18, 0-100% de eCN en agua -0.1% de TFA) proporcionó un semisólido amarillo. Esto se disolvió en MeOH(100 mi) y se dejó reposar. Un sólido blanquecino se precipitó y esto se recolectó mediante filtración para proporcionar el compuesto del título; [M+H] + 510.0; 1K NMR (DMS0-de) : 1.78-1.94 (4H, m), 3.67 (2H, s) , 3.30 -3.82 (4H, m) , 4.05-4.08 (2H, m) , 7.45-7.55 (3H m) , 7.01-7.75 (3H, br) , 8.05 (2H, d, J = 7.1 Hz) , 7.78-8.33 (2H, br) , 9.24 (1H, s) , 9.85 (1H, s) , 11.04 (1H, s) .
EJEMPLO 43 [8- [3- (3-isopropil-ureido) -benzoil] -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5 ] dec - ( 2 E ) - il iden] - amida del ácido 3,5-diamino -6-cloro-pirazin-2 - carboxílico Ácido 3- (3-isopropil-ureido) -benzoico (Intermediario ) (1.08 g, 4.86 mmol) y HATU (2.03 g, 5.35 mmol) se agitaron en DMF (25 mi) a temperatura ambiente y se agregó N-metil morfolina (1.60 mi, 14.59 mmol) . La solución se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos y se agregó [1,3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) - iliden] -amida diclorhidratada del ácido 5 - diamino - 6 - c loro -piraz in- 2 - carboxí 1 ico (Ej. 38) (2.13 g, 5.35 mmol) . La solución marrón se agitó a temperatura ambiente durante 45 minutos. El producto crudo se precipitó mediante la adición de NaOH 2N y se recolectó mediante filtración. El sólido se purificó mediante cromatografía en fase inversa (IsoluteMR C18, 0-100% de MeCN en agua -0.1% de TFA) . Las fracciones limpias se concentraron in vacuo a aproximadamente 30 mi y se agregó NaOH 2N. El sólido blanquecino se recolectó mediante filtración y se enjuagó con agua para proporcionar el compuesto del título; [M+H] + 529.05; XH N R (DMSO-d6) : 1.09 (6H, d, J = 6.5 Hz) , 1.67-1.73 (4H, m) , 3.42 (2H, br) , 3.75 (1H, septet, J = 6.5 Hz) , 3.31 -3.79 (4H, br) , 6.15 (1H, d, J = 7.5 Hz) , 6.70 (2H, br) , 6.40-7.01 (1H, br) , 6.86 (1H, d, J = 7.2 Hz) , 7.26 (1H, dd, J = 8.3 Hz, J = 7.2 Hz) , 7.31 (1H, d, J = 8.3 Hz) , 7.53 (1H, s), 8.36 (1H, br), 8.48 (1H, br) , 8.55 (1H, s) , 8.00-9.00 (1H, br) .
EJEMPLO 44 [8- (2-benzo[b]tiofen-3-il-acetil) -1,3,8-triaza-spiro [4.53 dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3,5-diamino -6-cloro-pirazin-2 - carboxílico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 43, sustituyendo el ácido 3 - ( 3 - isopropil -ureido) -benzoico (Intermediario W) con el ácido benzo [b] tiofen-3 -acético . [M-H] + 499.0 ; XH N R (DMSO-d6) : 1.59-1.74 (4H, m) , 3.42 (2H, s), 3.48-3.95 (4H, m) , 3.97 (2H, s) , 6.20-7.11 (3H, br) , 7.38 (1H, m) , 7.39 (1H, m) , 7.50 (1H, s), 7.83 (1H, d, J = 7.3 Hz), 7.97 (1H, d, J = 7.6 Hz), 7.75-9.30 (3H, br) .
EJEMPLO 45 [8- [5-oxo-l- (3 -pirrol - 1 - il -propil) -pirrolidin- 3 -carbonil ] -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) - iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino - 6 - cloro-pirazin-2 -carboxí lico Una solución del ácido 5 - oxo - 1 - ( 3 -pirrol - 1 -il-propil) -pirrolidin-3-carboxílico (Intermediario X) (1.15 g, 4.85 mmol) , HATU (2.03 g, 5.33 mmol), DMF (20 mi) y N-metil morfolina (1.60 mi, 14.54 mmol) se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos antes de agregar la [1, 3 , 8-triaza-spiro [4.5] dec - (2E) -i liden] - amida diclorhidratada del ácido 5-diamino-6-cloro-pirazin- 2 - carboxí lico (Ej. 38) (1.731 g, 5.33 mmol) . Después de agitar durante 60 minutos a temperatura ambiente se agregó EtOAC (200 mi) y la fase orgánica se lavó con NaOH 2N (2 x 100 mi) y salmuera (100 mi) . La fase orgánica se secó sobre MgS04 y el solvente se evaporó in vacuo. La purificación mediante cromatografía en fase inversa (IsoluteMR C18, 0-100% de eCN en agua -0.1% de TFA) , seguida por resina de captura y liberación (SCX-2) eluyendo con MeOH y NH3 7M en eOH proporcionó un aceite amarillo. El aceite se disolvió en DCM (10 mi) y el producto se precipitó fuera de la solución al agregar iso-hexano para proporcionar un sólido amarillo que se filtró y se enjuagó con iso-hexano para proporcionar el producto del título; [M+H] + 542.8; 1H NMR (D SO-d6) : 1.64-1.70 (4H, m) , 1.84-1.89 (2H, m) , 2.43-2.51 (2H, m) , 3.39-3.43 (2H, m), 3.43-3.50 (2H, m) , 3.55 (1H, m) , 3.40-3.69 (4H, m) , 3.84 (2H, m) , 5.97 (2H, m) , 6.65-6.74 (2H, br) , 6.75 (2H, m) , 6.2-7.6 (1H, br), 7.6-9.5 (1H, br) .
EJEMPLO 46 [8 - (6,7,8,9- tetrahidro- 5H-carbazol - 3 -carbonil) -1,3,8-triaza- spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3,5- diamino -6-cloro-pirazin-2 - carboxí 1 ico A una solución agitada del ácido 6,7,8,9-tetrahidro- 5H- carbazol - 3 - carboxí lico (0.05 g, 0.25 mmol) y HATU (0.11 g, 0.28 mmol) en DMF seca (5 mi) se agregó N-metil morfolina (0.08 mi, 0.76 mmol) . Después de 5 minutos de agitación a temperatura ambiente, se agregó la [ 1 , 3 , 8 - 1riaza - spiro [4.5 ] dec - (2E) -iliden] -amida diclorhidratada el ácido 5-diamino-6-cloro-pirazin-2 -carboxílico (Ej. 38 ) (0.10 g, 0.28 mmol) y la reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante 1 hora. La purificación mediante cromatografía en fase inversa (IsoluteMR C18 0-100% de MeCN en agua) proporcionó el compuesto del título como un polvo amarillo; [ +H] + 524.2.
EJEMPLO 47 [8- (lH-indazol-3-carbonil) -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) - ] iliden-amida del ácido 3,5-diamino -6-cloro-pirazin-2- carboxílico A una solución agitada del ácido lH-indazol-3 -carboxílico (0.041 g, 0.25 mmol) y HATU (0.096 g, 0.25 mmol) en DMF seca (4 mi) se agregó N-metil morfolina (0.08 mi, 0.76 mmol) . Después de 5 minutos, se agregó [ 1 , 3 , 8 - 1 riaza- spiro [4.5] dec - ( 2E ) -iliden] -amida diclorhidratada del ácido 5-diamino-6-cloro-pirazin- 2 - carboxílico (Ej. 38) (0.10 g, 0.25 mmol) y la reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante 1 hora. La purificación mediante cromatografía en fase inversa (IsoluteMR C18, 0-100% de MeCN en agua -0.1% de TFA) proporcionó un residuo oleoso que se sometió a ultrasonido en acetonitrilo para proporcionar una suspensión amarillo. El sólido amarillo se recolectó mediante filtración y se enjuagó con acetonitrilo para proporcionar el compuesto del título; [M+H] + 469.17.
EJEMPLO 48 [8- [2 - (2 , 3 -dimetil - 1H - indol - 5 - il ) -acetil] -1,3,8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3,5- diamino- 6-cloro-pirazin-2- carboxí 1 ico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 47, sustituyendo el ácido 1H- indazol - 3 -carboxílico con el ácido 2 - ( 2 , 3 -dimet il - 1H- indol - 5 -iDacétido con el ácido 2 - ( 2 , 3 - dimet i 1 - 1H- indol - 5 -il) cético . [sic] [M+H] + 510.23.
EJEMPLO 49 [8- (1,2,3-trimetil- 1H- indol - 5 -carbonil ) -1,3,8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3,5-diamino -6-cloro-pirazin-2 -carboxílico A una solución agitada del ácido 1,2,3-trimetil-lH-indol-5-carboxílico (0.051 g, 0.25 mmol) y HATU (0.11 g, 0.28 mmol) en DMF seca (5 mi) se agregó N-metil morfolina (0.083 mi, 0.76 mmol) . Después de 5 minutos se agregó [ 1 , 3 , 8 - triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida dic lorhidratada del ácido 5 - diamino - 6 - c loro -piraz in - 2 - carboxí lico (Ej. 38) (0.10 g, 0.28 mmol) y la reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante 1 hora. La purificación mediante cromatografía (Si02, MeOH/DCM ) proporcionó el compuesto del título; [M+H] + 510.1.
EJEMPLO 50 [8- (1-metil- 1H- indazol- 3 - carbonil) -1,3,8-triaza-spiro [4.5] -deC (2E) -iliden] -amida del ácido 3,5-diamino -6-cloro-pirazin-2 - carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 46, sustituyendo el ácido 6,7,8,9-tetrahidro-5H-carbazol-3-carboxílico con el ácido 1-met i 1 - 1H- indazol - 3 - carboxí 1 ico . [M+H] + 483.1.
EJEMPLO 51 [ 8 - ( 4 -bencilo i -benzoil) -1, 3, 8-triaza-spiro [ .5] dec -(2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino - 6 - cloro -pirazin-2- carboxí 1 ico [1, 3 , 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida diclorhidratada del ácido 5 -diamino - 6 - c loro-pirazin-2-carboxílico (Ej . 38) (0.05 g, 0.13 mmol), ácido 4 - (benciloxi ) benzoico (0.029 g, 0.13 mmol), HATU (0.05 g, 0.13 mmol ) , N-metil morfolina (0.041 mi, 0.38 mmol) y DMF (2 mi) se agitaron juntos a temperatura ambiente durante 72 h. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAC (25 mi) y se lavó con agua (25 mi) y NaHC03 sat . (25 mi) . La fase orgánica se secó sobre MgS04 y se evaporó in vacuo para proporcionar un aceite amarillo. El aceite se disolvió en acetato de etilo y se agregaron una gota de metanol e iso-hexano. El sólido amarillo pálido resultante se recolectó mediante filtración para proporcionar el compuesto del título; [M+H] + 535.1.
EJEMPLO 52 [8 - (3-2,3 -dihidro-benzofuran- 5 -il-pro ionil ) -1,3,8-triaza- spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5-diamino- 6 - cloro -piraz in- 2 -carboxílico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 51, sustituyendo el ácido 4- (benciloxi ) benzoico con el ácido 3- (2,3-dihidrobenzofuran- 5 - il) propanoico . [M+H] + 499.1.
EJEMPLO 53 [8- (lH-pirrolo [2,3-b] piridin-4- carbonil ) -1,3,8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3,5- diamino -6-cloro-pirazin-2 - carboxí 1 ico Este compuesto se preparó de manera análog al Ejemplo 47, sustituyendo el ácido lH-indazol-3 carboxílico con el áciod lH-pirrolo [2 , 3 -b] piridin-4 -carboxílico; [ +H] + 469.14.
EJEMPLO 54 [ 8 - [ 3 - (4 -metoxi - fenil ) -propionil ] -1,3,8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3,5-diamino - 6 - cloro -pirazin- 2 - carboxílico [l,3,8-triaza-spiro[4.5]dec- (2E) -iliden] -amida diclorhidratada del ácido 5 -diamino- 6 - clorópirazin- 2 - carboxíl ico (Ej. 38) (0.05 g, 0.13 mmol), ácido 3 - ( 4 -me toxi f enil ) -propiónico (0.023 g, 0.13 mmol) , HATU (0.048 g, 0.13 mmol) , N-metil morfolina (0.041 mi, 0.38 mmol) y DMF (2 mi) se agitaron juntos a temperatura ambiente durante 48 h. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAC (50 mi) y el producto se extrajo en HC1 1M. La fase acuosa se basificó a pH 12 con NaOH 2N y el producto se extrajo en EtOAC (50 mi) . La fase orgánica se secó sobre MgS04 y el solvente se evaporó in vacuo para proporcionar un cristal marrón. El producto se trituró con eOH y EtOAc para proporcionar un sólido marrón pálido como el compuesto del título; [M+H] + 487.0.
EJEMPLO 55 [ 8 - [ 3 - (4 -hidroxi - fenil ) -pro ionil] -1,3,8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3,5-diamino -6-cloro-pirazin-2- carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análog al Ejemplo 49, sustituyendo el ácido 1 , 2 , 3 - trimet il 1H- indol - 5 -carboxí lico con el ácido 13- (4 hidroxif enil ) propiónico ; [M+H] + 472.98.
EJEMPLO 56 [ 8 - ( 1H- indol -2 -carbonil) -1,3, 8-triaza-spiro [4.5] dec - (2E) - ] iliden-amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 -cloro-pirazin-2- carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 46, sustituyendo el ácido 6,7,8,9-tetrahidro - 5H- carbazol - 3 - carboxí lico con el ácido 1H-indol-2-carboxílico; [M+H] + 468.1.
EJEMPLO 57 [8- ( guiñol in- 5 -carbonil) -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec-(2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino - 6 - cloro -pirazin-2- carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análog al Ejemplo 46, sustituyendo el ácido 6,7,8,9 tetrahidro-5H-carbazol-3-carboxílico con el ácido quinolin-5-carboxílico; [M+H] + 480.1.
EJEMPLO 58 [ 8 - ( 4 -metil - 2-fenil-pirimidin-5- carbonil ) -1,3,8-triaza- spiro [4.5 ] dec - (2E) - il iden] - amida del ácido 3 , 5-diamino- 6-cloro-piraziii-2 -carboxílico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 45, sustituyendo el ácido 5-oxo-l- (3-pirrol-l-il-propil) -pirrolidin- 3 -carboxílico (Intermediario X) con el ácido 4-metil-2-f eni lpirimidin- 5 - carboxí 1 ico ; [M+H] + 521.1.
EJEMPLO 59 [8- ( 4 -bencil -morfolin- 2 -carbonil) -1,3,8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3,5-diamino -6-cloro-pirazin-2 - carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 51, sustituyendo el ácdido 4- (benciloxi ) benzoico con el ácido 4-bencil-2-morfolincarboxí lico clorhidratado ; [M+H] + 528.2.
EJEMPLO 60 [8- (1H- irrolo [2 , 3 -b] iridin- 5 -carbonil ) -1,3,8-triaza- spiro [4.5] dec- (2E) - iliden] -amida del ácido 3 , 5-diamino- 6-cloro-pirazin-2 -carboxílico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 47, sustituyendo el ácido 1H- indazol - 3 -carboxílico con el ácido lH-pirrolo [2 , 3 -b] piridin- 5 -carboxílico; [M+H] + 469.1.
EJEMPLO 61 [8- [4- (4,6-dimetoxi-pirimidin-2 - ilmetoxi ) -benzoil] -1,3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3,5- diamino -6-cloro-pirazin-2 - carboxílico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 51, sustituyendo el ácido 4-(benciloxi ) benzoico con el ácido 4 - ( (4, 6-dimetoxipirimidin- 2 - il ) metoxi ) benzoico; [M+H] + 597.07.
EJEMPLO 62 [8 - [2 - (3- i sopro i 1 -ureido ) -piridin- 4 - carbonil ] -1,3,8-triaza- spiro [4.5 ] dec - ( 2 E) - i 1 iden] - amida del ácido 3 , 5-diamino- 6 - cloro-pirazin- 2 -carboxílico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 51, sustituyendo el ácido 4 - (benc i loxi ) benzoico con el ácido 2 - ( 3 - i sopropi 1 - ure ido ) -isonicot ínico (intermediario Y) [M+H] + 530.2; XH NMR (DMS0-d6) : 1.13 (6H, d, J = 6.5), 1.77-1.94 (4H, m) , 3.66 (2H, d, J = 11) , 3.25-3.99 (5H, m) , 6.97 (1H, br m) , 7.50 (1H, br s), 7.31-7.60 (2H, br S) , 7.61 (1H, br s) , 7.74-8.25 (2H, br s) , 8.28 (1H, d, J = 5.5), 9.08-9.21 (1H, br s), 9.60-9.80 (1H, br s) , 9.70-10.25 (1H, br s) , 11.07 (s, 1H) .
EJEMPLO 63 Isopropilamida del ácido 4 - 12 - [ (E) - 3 , 5 - diamino- 6 -cloro-pirazin- 2 - carbonilimino] -1,3,8-triaza-spiro [4.5] decan- 8 - carboni 1 } - indol - 1 - carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 51, sustituyendo el ácido 4- (benciloxi ) benzoico con el ácido 1-i sopropi lcarbamoil - 1H- indol - 4 - carboxí lico (Intermediario z) : [M+H] + 553.5.
EJEMPLO 64 [ 8 - [4 - (3 - i sopropi 1 -ureido) -benzoil] -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3,5-diamino -6-cloro-pirazin-2 - carboxílico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 51, sustituyendo el ácido 4- (benciloxi ) benzoico con el ácido 4 -( 3 - isopropil -ureido) -benzoico (Intermediario AA) ; [M+H] + 529.5.
EJEMPLO 65 [ 8 - [ 6 - ( 3 - i sopropil -ureido) -piridin-3 - carbonil ] -1,3,8-triaza - apiro [4.5 ] dec - ( 2 E) - il iden] - amida del ácido 3,5- diamino -6-cloro-pirazin-2 - carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 51, sustituyendo el ácido 4 - ( benc i loxi ) benzoico con el ácido 6 -( 3 - isopropil -ureido) -nicotínico (Intermediario AB) ; [M+H] + 530.5.
EJEMPLO 66 [8 - [3 - (4-aliloxi-fenil) -propionil] -1,3,8-triaza-apiro [4.5] dec- (2E) -íliden] -amida del ácido 3,5-diamino -6-cloro-pirazin-2 - carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 51, sustituyendo el ácido 4- (benciloxi) benzoico con el ácido 3 -( 4 -aliloxi ) f enil ) propanoico ; [M+H] + 513.4.
EJEMPLO 67 [ 8 - ( 2 - [4- (2-metoxi-etoximetoxi) -fenil] -acetil)-l,3,8-triaza- spiro [4.5] dec- (2E) - iliden] -amida del ácido 3 / 5 - diamino- 6-cloro-pirazin-2 -carboxílico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 51, sustituyendo el ácido 4 - ( benc i loxi ) benzoico con el ácido [4- (2-metoxi-etoximetoxi) -fenil] -acético (Intermediario AC) ; 547.4.
EJEMPLO 68 [ 8 - ( 3 - [4- (2-metoxi-etoximetoxi) - fenil } -propionil } -1,3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) - iliden] - amida del ácido 3,5- diamino - 6 -cloro-pirazin- 2 -carboxílico Este compuesto se preparó de forma análoga al ejemplo mediante la sustitución del ácido 4-(benciloxi ) benzoico con el ácido 3 - [4- (2-metoxi-etoximetoxi) -fenil] -propiónico (Intermediario AD) ; [M+H] + 561.0.
EJEMPLO 69 [8- (3-{4 [2- (tetrahidro-piran-2iloxi) -etoxi] -fenil)-pro ionil) -l,3f8-triaza-Bpiro[4.5]dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - cloro -piraz in- 2 -carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 51, sustituyendo el ácido 4 - ( enc i loxi ) benzoico con el ácido 3 - { 4 - [ 2 - ( te t rahidro-piran- 2 -iloxi ) -etoxi] - fenil } -propiónico (Intermediario AE) ; [M+H] + 601.1.
EJEMPLO 70 [ 8 - { 3 - [4- (piridin-4-ilmetoxi) -fenil] -propionil}-l,3,8-triaza-spiro[4.5]dec- (2E) -iliden] - amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6-cloro-pirazin-2 -carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 51, sustituyendo el ácido 4- (benciloxi ) benzoico con el ácido 3 [4 - (piridin- 4 -ilmetoxi) - fenil] -propiónico (Intermediario AF) ; [M+H] + 564.1.
EJEMPLO 71 ter-butilo del ácido [4 - ( 3 - { 2 - [ ( E) - 3 , 5 -diamino- 6 -cloro -pirazin-2 - carboni 1 imino] -1,3, 8-triaza-spiro [4.5] dec-8-il}-3 -oxo -propil ) - f enoxi ] - acético Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 51, sustituyendo el ácido 4-(benciloxi ) enzoico con el ácido 3-(4-ter-butoxicarbonilmetoxi - feni 1 ) -propiónico (Intermediario AG) ; [M+H] + 587.5.
EJEMPLO 72 [ 8 - [ 3 - (4 - carbamoilmetoxi - fenil ) -pro ionil] -1,3,8-triaza- spiro [4.5] -deC (2E) - iliden] -amida del ácido 3,5- diamino -6-cloro-pirazin-2 - carboxí 1 ico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 51, sustituyendo el ácido 4- (benciloxi ) benzoico con el ácido 3- (4-carbamoilmetoxi - fenil ) -propiónico (Intermediario AH) ; [M+H] + 530.1.
EJEMPLO 73 Etil éster del ácido 1 - [4 - ( 3 - { 2 - [ (E) - 3 , 5 -diamino - 6 -cloro -pirazin-2- carboni 1 imino] -1,3,8-triaza-spiro [4.5 ] - dec - 8 - i 1 ) - 3 - oxo -propi 1 ) - fenoxi ] -ciclobutancarboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 51, sustituyendo el ácido 4-(benciloxi ) benzoico con el etil éster del ácido l- [4-(2-carboxi-etil) -fenoxi] -ciclobutancarboxí lico (Intermediario AI) ; [M+H] + 599.1.
EJEMPLO 74 Ter-butil éster del ácido 2 - [4 - ( 3 - { 2 - [ ( E ) - 3 , 5 -diamino -6-cloro -pirazin-2 - carbonilimino] -1,3/8-triaza-spiro [4.5] - dec -8-il)-3- oxo -propi 1 ) - fenoxi ] - 2 -metil -propiónico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 51, sustituyendo el ácido 4-(benciloxi ) benzoico con el ter-butil éster del ácido 2- [4- ( 2 - carboxi - et il ) -fenoxi] - 2 -metil -propiónico (Intermediario AJ) ; [M+H] + 615.2. 615.2.
EJEMPLO 75 Metil éster del ácido [4 - ( 3 - { 2 - [ ( E ) - 3 , 5 -diamino -6-cloro -pi razin-2 - carbonilimino] -1,3,8- triaza-spiro [4.5] dec-8-il} - 3 - oxo-propi 1 ) -f enoxi] -acético Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 51, sustituyendo el ácido 4-(benciloxi ) enzoico con el ácido 3- (4-metoxicarbonilmetoxi - fenil ) -propiónico (Intermediario AK) ; [M+H] + 545.1.
EJEMPLO 76 Ter-butil áster del ácido 4 - { 2 - [ (E) - 3 , 5 - diamino - 6 -cloro-pirazin-2 - carbonil imino] -1,3,8-triaza-spiro [4.5] decan- 8 - carbonil -benzoico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 51, sustituyendo el ácido 4-(benciloxi ) benzoico con el ácido 4-(ter-butoxicarbonil ) benzoico ; [M+H] + 529.4.
EJEMPLO 77 [ 8 - ( 3 - i sopropil - 2-metil-lH - indo1 - 5 - carbonil ) -1,3,8-triaza- spiro [4? 5] dec- (2?) - iliden] -amida del ácido 3,5- diamino -6-cloro-pirazin-2 - carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 51, sustituyendo el ácido 4- (benciloxi ) benzoico con el ácido 3 - isopropil - 2 -me t il -lH-indol-5-carboxílico; [M+H] + 524.
EJEMPLO 78 Propil éster del ácido 3 - [4 - ( 3 - { 2 - [ (E) - 3 , 5 - diamino- 6 -cloro -pirazin-2 - carbonilimino] -1,3, 8-triaza-spiro [4.5] dec-8-il}-3 -oxo -propil ) - fenil ] -propiónico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 51, sustituyendo el ácido 4-(benciloxi ) benzoico con el ácido 344- (2-propoxicarbonil-etil) -fenil] -propiónico (intermediario AL) ; [M+H] + 571.
EJEMPLO 79 Etil éster del ácido 3 - [4 - ( 3 - ( 2 - [ (E) - 3 , 5 - diamino - 6 -cloro -pirazin-2 - carbonilimino] -1,3,8-triaza-spiro[4.5] - dec -8-il)-3 -oxo -propi 1 ) - fenil ] -propiónico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 51, sustituyendo el ácido 4-(benciloxi ) benzoico con el ácido 344- (2-etoxicarbonil-etil) -fenil] -propiónico (intermediario AM) ; [M+H] + 557.
EJEMPLO 80 Mebil éster del ácido 3 - [4 - ( 3 - (2 - [ (E) - 3 , 5 -diamino - 6 -cloro-pirazin-2 - carboni 1 imino] -1,3, 8-triaza-spiro [4.5] dec-8-il}-3-oxo-propil) -fenil] -pro iónico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 51, sustituyendo el ácido 4- (benciloxi ) enzoico con el ácido 3- [4- (2-metoxicarbonil-etil) -fenil] -propiónico (intermediario AN) ; [M+H] + 543.
EJEMPLO 81 Ácido 3 - [4 - ( 3 - ( 2 - [ (E) -3, 5 -diamino- 6-cloro-pirazin-2-carbonilimino] - 1 , 3 , 8 - triaza- apiro [4.5] -dec - 8 - il } - 3 -oxo-propil) -fenil] -propiónico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 51, sustituyendo el ácido 4- (benciloxi ) benzoico con el ácido 3.3'-(l,4-fenilen) dipropanoico ; [M+H] + 529.
EJEMPLO 82 [8 - [1- (2-fenoxi-etil) - 1H- i dol - 4 - carboni 1] -1,3,8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3,5- diamino -6-cloro-pirazin-2 - carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 51, sustituyendo el ácido 4- (benciloxi ) benzoico con el ácido 1 - ( 2 - fenoxi - e t i 1 ) -1H- indol - 4 - carboxí 1 ico (Intermediario AO) ; [ +H] + 588.
EJEMPLO 83 [8- [1- (2 -p-tolil-etil) 1H- indol - - carboni 1 ] -1,3,8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3,5- diamino -6-cloro-pirazin-2 - carboxí 1 ico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 51, sustituyendo el ácido 4-(benciloxi ) benzoico con el ácido 1 - ( 2 -p - tol i 1 - et i 1 ) -1H- indol -4 -carboxí lico (Intermediario AP) ; [M+H] + 586.
EJEMPLO 84 [ 8 - { 1 - [2- (tetrahidro-piran-2 -iloxi) -etil] - 1H- indol - 4 -carboni 1 } -l,3,8-triaza-spiro[4.5]dec- (2E) - iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - cloro -piraz in- 2 -carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 51, sustituyendo el ácido 4-( benc i loxi ) benzoico con el ácido 1 - [ 2 -( tetrahidro-piran-2 - iloxi ) -etil] - 1H- indol - 4 - carboxí 1 ico (Intermediario AQ) ; [M+H] + 597.
EJEMPLO 85 [ 8 - { 1 - [2- (4 -metoxi - fenoxi) -etil] - 1H- indol - 4 -carbonil) -l,3, 8-triaza-spiro[4.5]dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - cloro -piraz in- 2 -carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 51, sustituyendo el ácido 4-(benciloxi ) enzoico con el ácido 1- [2- (4 -metoxi-fenoxi) -etil] - 1H- indol - 4 - carboxí lico (Intermediario AR) ; [M+H] + 618.
EJEMPLO 86 [8-{l - [2- (4- er-butil-fenoxi) -etil] -lH-indol-4-carbonil } -1,3, 8-triaza-spiro [4.5]dec- (2E) - iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - cloro -piraz in- 2 -carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 51, sustituyendo el ácido 4-(benciloxi ) benzoico con el ácido 1 - [ 2 - ( 4 - fcer-but i 1 -fenoxi )- etil ]- 1H- indol - 4 - carboxí lico (Intermediario AS) ; [M+H] + 644.
EJEMPLO 87 [8-[l- (2-[l,3] dioxan-2-il-etil) - 1H- indol - 4 - carbonil ] - 1 , 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) - il i den] - amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 -cloro -pirazin- 2 - carboxí lico a Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 51, sustituyendo el ácido 4- (benciloxi ) enzoico con el ácido 1 - ( 2 - [ 1 , 3 ] dioxan- 2 -il - e til )- 1H- indol - - carboxí 1 ico (Intermediario AT) ; [M+H] + 582.
EJEMPLO 88 [8- [1- (2-hidroxi-etil) - 2 , 3 -dimetil - 1H- indol - 5 -carboni 1] -1,3, 8-triaza-spiro [4,5] dec - (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 -cloro-pirazin-2 -carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 51, sustituyendo el ácido 4-(benciloxi ) benzoico con el ácido 2 , 3 - dimet i 1 - 1 - [ 2 -( tetrahidro-piran- 2 - iloxi ) -etil] -lH-indol-5-carboxílico (Intermediario UA) ; [M-4-l]+ 540.
EJEMPLO 89 Metil éster del ácido 4 - ( 4 - { 2 - [ (E) - 3 , 5 - diamino- 6 -cloro-pirazin-2 - carboni limino] -1,3,8-triaza-spiro [4.5] decan-8-carbonil}indol-l-il) -butírico Este compuesto se preparó de manera análog al Ejemplo 51, sustituyendo el ácido 4 (benciloxi ) enzoico con el ácido 1 - ( 4 , , - trime toxi but i 1 ) - 1H- indol - 4 - carboxí lico (Intermediario AW) [M+H] + 568 EJEMPLO 90 [ 8 - ( 1 - [2- (2-metoxi-etoximetoxi) -etil] - 1H - indol - 4 -carboni 1 } -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - cloro -piraz in- 2 -carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análog al Ejemplo 51, sustituyendo el ácido 4 (Benciloxi ) benzoico con el ácido 1 - [2 - ( 2 -metoxi etoximetoxi) -etil] - 1H - indol - 4 - carboxí 1 ico (Intermediario AW) ; [M+H] + 600 EJEMPLO 91 [8- ( 1 - diet ilcarbamoilmet il - 1H- indol - 4 - carbonil ) - 1/ 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] - amida del ácido 3,5-diamino-6-cloro-pirazin-2 -carboxílico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 51, sustituyendo el ácido 4- (benciloxi ) enzoico con el ácido l-diet ilcarbamoilmet il - 1H- indol - 4 - carboxí 1 ico (intermediario AX) ; [M+H] + 581 EJEMPLO 92 [8- [1- (2-hidroxi-etil) -1H- indol -4 -carbonil] -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3,5- diamino- 6-cloro-pirazin-2 - carboxí 1 ico Ácido p- toluensul fónico monohidratado (1.6 mg, 0.0084 mmol) se agregó a una solución agitada de la [8 - { 1 - [2 - ( tetrahidro- piran- 2 -iloxi) -etil] - 1H-indol - 4 - carbonil } -1, 3 , 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - c loro - piraz in-2 -carboxí lico (E . 84) (50 mg, 0.084 mmol) en MeOH (3 mi) y la solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas, luego se calentó a 50°C durante 16 horas. El solvente se retiró in vacuo y el residuo se disolvió en MeOH (3 mi) y se cargó en un cartucho de 1 g PEAX que se eluyó con MeOH (20 mi) . El filtrado se concentró ín vacuo para proporcionar el compuesto del título; [M+H] + 512/514 EJEMPLO 93 Una mezcla de la [ 1 , 3 , 8 - triazaspiro [4.5 ] dec - ( 2E] )- il iden] - amida c lorhidratada del diamino-6-cloro-pirazin-2- carboxílico ( E mg, 0.83 mmol ) , ác ido cis- 1 , 4 -ciclohexanodicarboxí lico (72 mg , 0.42 mmol) , N-metil morfolina (0.30 mi, 2.73 mmol) y HATU (315 mg, 0.83 mmol) en DMF anhidra se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y se sometió a cromatografía en columna (alúmina básica, 0-3% de MeOH en DCM) para obtener un sólido blanquecino. El producto se disolvió en DCM y se re-precipitó mediante la adición de dietiléter. La mezcla de solventes y sobrenadante se decantó y el producto se lavó nuevamente con dietiléter y se secó in vacuo para proporcionar el compuesto mostrado como un sólido blanquecino; [M+H] + 785.
EJEMPLO 94 Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 93, sustituyendo el ácido cis-1,4-ciclohexandicarboxí lico ácido con el trans-1,4-ciclohexandicarboxí lico ; [M +2 H] 2+ 393.
EJEMPLO 95 Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 93, sustituyendo el ácido cis-1,4-ciclohexandicarboxí lico con ácido subérico; [M+H] + 787.
EJEMPLO 96 [00515] Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 93, sustituyendo el ácido cis-1,4-ciclohexandicarboxí lico con ácido teref tálico ; [M+H] + 779.
EJEMPLO 97 [ 8 - [ 2 - (4 -benciloxi -fenil) -acetil] -1,3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3,5-diamino -6-cloro-pirazin-2 - carboxí 1 ico Una mezcla de la [ 1 , 3 , 8 - 1riaza - spiro [ 4.5 ] dec -( 2E) - iliden] -amida clorhidratada del ácido 3,5-diamino - 6 - cloro -piraz in- 2 - carboxí 1 ico (Ej. 38) (300 mg , 0.83 mmol), ácido 4 -benciloxifenilacético (200 mg, 0.83 mmol), N-metil morfolina (0.40 mi, 3.64 mmol) y HATU (315 mg , 0.83 mmol) en DMF anhidra (20 mi) se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla de reacción se concentró ín vacuo y se sometió a cromatografía en columna (alúmina básica, 0-3% de MeOH en DCM) para obtener un sólido amarillo pálido. El producto se disolvió en DCM y MeOH y se re-precipitó mediante la adición de dietiléter. La mezcla de solventes y sobrenadante se decantó y el producto se lavó nuevamente con dietiléter y se secó bajo vacío para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo pálido; [M+H] + 549.
EJEMPLO 98 [ 8 - [ 3 - (4 -benciloxi - fenil ) -pro ionil ] -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) - iliden] -amida del ácido 3,5-diamino -6-cloro-pirazin-2- carboxí 1 i co Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 97, sustituyendo el ácido 4-ácido benciloxif enilacético con el ácido 3- (4-benciloxif enil ) propiónico ; [M+H] + 563.
EJEMPLO 99 [ 8 - ( 1H- indol -4 - carbonil ) -1, 3, 8-triaza- apiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - cloro -pirazin-2-carboxílico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 97, sustituyendo el ácido 4-benciloxif enilacético con el ácido indol-4-carboxí lico ; [M+H] + 468.
EJEMPLO 100 [8- ( 1H- indol - 5 - carbonil ) -l,3,8-triaza-spiro[4.5]dec-(2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino - 6 - cloro -pirazin-2- carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 97, sustituyendo el ácido 4-benciloxif enilacético con el ácido indol-5-carboxí lico; [ +H] + 468.
EJEMPLO 101 [8-fenilacetil-l,3,8-triaza-spiro[4.5]dec- (2E) -iliden] - amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - cloro -piraz in-2 -carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 97, sustituyendo el ácido 4-benciloxif enilacético con el ácido fenilacético ; [M+H] + 443.
EJEMPLO 102 [ 8 - { 4 - [6- ( (S) - 2 , 3 - dihidroxi -propoxi ) -naftalen-2-ilmetoxi] -benzoil)-!, 3, 8-triaza-spiro [4, 5] dec- (2E) -iliden] - amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - c loro -piraz in-2 - carboxí 1 ico Paso 1 [8-{4-[6-((R)-2, 2-dimetil- [1,3] dioxolan- 4 -ilmetoxi) - naftalen- 2 - ilmetoxi ] -benzoil- } -1, 3, 8 -triaza- spiro [4 , 5 ] dec - ( 2E ) - i 1 iden] -amida del ácido 3 , 5-diamino-6-cloro-pirazin-2-carboxílico se preparó de manera análoga al Ejemplo 97, sustituyendo el ácido 4 -benciloxifenilacético ácido con el ácido 4-[6- ( (R) -2, 2-dimetil- [1,3] dioxolan- 1 - i lmetoxi ) -naf talen-2 -ilmetoxi] -benzoico (Intermediario AY) ; [M+H] + 715.
Paso 2 ; A una solución de la [ 8 - { 4 - [6 - ( (R) -2,2-dimet il - [1,3] dioxolan-4 -ilmetoxi) -naftalen-2-ilmetoxi] -benzoil}-l, 3, 8-triaza-spiro[4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - c loro -piraz in-2 -carboxí lico (0.16 g, 0.22 mmol) en MeOH(10 mi) se agregó resina SCX-2 (-2 g) , la suspensión resultante se agitó durante 0.5 horas y luego el solvente se retiró in vacuo. La suspensión se cargó en una columna de resina SCX-2 (~3 g) y se eluyó con MeOH y luego con NH3 2 M en MeOH. Las fracciones de amoníaco metanólico se concentraron in vacuo y el residuo se trituró con dietiléter para obtener la [ 8 - { 4 - [ 6 - ( ( S ) -2,3 - dihidroxi -propoxi ) -naftalen- 2 - ilmetoxi] -benzoil} - l,3,8-triaza-spiro[4,5]dec-(2E)-iliden] - amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 - cloro-piraz in- 2 - carboxí lico como sólido amarillo; [M+H] + 675.
EJEMPLO 103 [ 8 - ( - cloro-benzoil ) -l,3,8-triaza-spiro[4,5]dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5-diamino-6-cloro-pirazin-2 -carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 97, sustituyendo el ácido 4-benciloxif enilacético con el ácido p- clorobenzoico ; [M+H] + 463.
EJEMPLO 104 [8- (4-(3- [4-((S) -2, 3 - dihidroxi -propoxi ) -fenil] - ropoxi ) -benzoi 1 ) -1,3 , 8-triaza-spiro [4,5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - cloro -piraz in-2 - carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga a la del Ejemplo 102, sustituyendo el ácido 4-[6-((R)-2,2-dimetil - [1,3] dioxolan- 4 - ilme toxi ) -naftalen-2-ilmetoxi] -benzoico , (Intermediario AY) con el ácido 4-{3 - [4- ( (R) -2,2-dimetil - [1,3] dioxolan- 4 - dioxolan- 4 -ilmetoxi) -fenil] -propoxi} -benzoico (Intermediario AZ) ; [M+H] + 653.
EJEMPLO 105 [8 - [ ( [E] ) - (3 -fenil -acriloil) ] -1,3,8-triaza-spiro [4 , 5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3,5-diamino -6-cloro-pirazin-2 - carboxílico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 97, sustituyendo el ácido 4-benciloxifenilacético con el ácido trans- cinámico ; [M+H] + 455.
EJEMPLO 106 [8-benzoil-l,3 8-triaza-spiro[4.5]dec(2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 -cloro-pirazin-2 -carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 97, sustituyendo el ácido 4-benciloxifenilacético con el ácido benzoico; [M+H] + 429.
EJEMPLO 107 [8- (benzofuran- 5 - carbonil ) -1,3,8-triaza-spiro [ .5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3,5-diamino -6-cloro-pirazin-2- c rboxí 1 i co Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 97, sustituyendo el ácido 4-benciloxif enilacético con el ácido benzofuran- 5 -carboxí lico; [M+H] + 469.
EJEMPLO 108 [ 8 - hexanoi 1 -l,3,8-triaza-spiro[4.5]dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 -cloro-pirazin-2 -carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 97, sustituyendo el ácido 4-benciloxif enilacético con ácido hexanoico; [M+H] + 423.
EJEMPLO 109 [ 8 - ( 3 - feni 1 -pro inoil ) -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec -(2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino - 6 - cloro -pirazin-2 -carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 97, sustituyendo el ácido 4-benciloxif enilacético con ácido f enilpropiólico ; [M+H] + 453.
EJEMPLO 110 [ 8 - ( 1H- imidazol - 2 - carbonil ) -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5 ] dec - ( 2E ) - i 1 iden] - amida del ácido 3,5-diamino -6-cloro-pirazin-2 - carboxí 1 ico Este compuesto se preparó de manera análog al Ejemplo 97, sustituyendo el ácido 4-2 benciloxifenilacético con ácido imidazolcarboxí 1 ico [ +H] + 419.
EJEMPLO 111 [ 8 - i sobutiril - l,3,8-triaza-spiro[4.5]dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino- 6 - cloro-pirazin-2 -carboxí 1 ico Este compuesto se preparó de manera análog al Ejemplo 97, sustituyendo el ácido 4 benciloxifenilacético con ácido isobutérico; [M+H] 395.
EJEMPLO 112 [8- (4 -ciano-benzoil) -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - cloro -piraz in-2 -carboxí 1 ico Este compuesto se preparó de manera análog al Ejemplo 97, sustituyendo el ácido 4 benciloxif enilacético con ácido p- c ianobenzoico ; [M+H] + 454.
EJEMPLO 113 [8- (piridin-3 - carbonil ) -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec -( 2 E ) - i 1 iden] - amida del ácido 3 , 5 -diamino - 6 - cloro -pirazin-2- carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 97, sustituyendo el ácido 4-benciloxif enilacético con ácido nicotínico; [M+H] + 430.
EJEMPLO 114 Metil éster del ácido 4 - ( 2 - [ (?) - 3 , 5 -diamino- 6 - cloro -pirazin-2- carbonilimino] -1,3, 8-triaza-spiro [4.5] decan-8- carbóni 1} -benzoico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 97, sustituyendo el ácido 4-benciloxif enilacético con tereftalato de monometilo; [M+H]+ 487.
EJEMPLO 115 [8- (pirimidin-5-carbonil) -l,3,8-triaza-Bpiro[4.5]dec-(2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 -cloro-pirazin-2-carboxílico Este compuesto se preparó de manera análog al Ejemplo 97, sustituyendo el ácido 4 benciloxif enilacético con ácido pirimidin-5 carboxílico; [M+H] + 431.
EJEMPLO 116 [8- (4-hidroxi-benzoil)-l,3,8-triaza-spiro[4.5]dec- (2E) - iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 -cloro-pirazin-2- carboxílico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 97, sustituyendo el ácido 4-benciloxif enilacético con ácido 4 -hidroxibenzoico ; [M+H] + 445.
EJEMPLO 117 [8 -ciclohexanocarbonil - l,3,8-triaza-s iro[4.5]dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 -cloro-pirazin-2- carboxí 1 ico Este compuesto se preparó de manera análog al Ejemplo 97, sustituyendo el ácido 4 benciloxif enilacético con ácido ciclohexancarboxí lico ; [M+H] + 435.
EJEMPLO 118 [ 8 - (oxazol -4 -carbonil ) -l,3,8-triaza-spiro[4.5]dec-( 2 E ) - il iden] - amida del ácido 3 , 5 -diamino - 6 - cloro -pirazin-2- carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 97, sustituyendo el ácido 4-benciloxif enilacético con ácido oxazol -4 - carboxí 1 ico ; [M+H] + 420.
EJEMPLO 119 [8- (piridin-2 - carbonil ) -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec-(2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 -cloro-pirazin-2- carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 97, sustituyendo el ácido 4-benciloxif enilacético con ácido 2 -picolínico ; [M+H] + 430.
EJEMPLO 120 [8- (piridin-4 - carboni 1) -l,3,8-triaza-spiro[4.5]dec-(2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5-diamino-6-cloro-pirazin-2- carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análog al Ejemplo 97, sustituyendo el ácido 4 benciloxif enilacét ico con ácido isonicot ínico ; [ +H] 430.
EJEMPLO 121 [8- (piperi din- 4 -carbonil) -l,3,8-triaza-spiro[4.5]dec- (2E) -iliden] -amida clorhidrato del ácido 3 , 5 - diamino -6-cloro-pirazin-2 -carboxí lico HC1 4 M en dioxano (5 mi) se agregó a una solución de ter-butil éster del ácido 4 - { 2 - [ ( E ) - 3 , 5 -diamino -6-cloro-pirazin-2- carbonil imino] -1,3,8-triaza-spiro [4.5] decan-8- carbonil } -piperidin-1-carboxílico (Intermediario BA) (0.14 g, 0.26 mmol) en dioxano (10 mi) y la mezcla de reacción se agitó a a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y el sólido amarillo obtenido se trituró con DCM. La capa de DCM se decantó y el compuesto se lavó con MeOH y se secó bajo vacío para proporcionar el compuesto del título como sólido amarillo; [M+H] + 436.
EJEMPLO 122 [8- (lH-imidazol-4 - carbonil ) -1,3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3,5-diamino- 6-cloro-pirazin-2 - carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análog al Ejemplo 97, sustituyendo el ácido 4-4 benciloxif enilacético con ácido imidazolcarboxí lico [M+H]+ 419.
EJEMPLO 123 [ 8 - (tetrahidro -piran- 4 - carbonil ) -1,3,8-triaza-spiro [4.5 ] dec - ( 2E ) - i 1 iden] - amida del ácido 3,5-diamino- 6-cloro-pirazin-2 -carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 97, sustituyendo el ácido 4-benciloxif enilacético con ácido te t rahidropiran- 4 -carboxí lico ; [M+H] + 437.
EJEMPLO 124 [ 8 - (pirimidin- 4 - carbonil - l,3,8-triaza-spiro[4.5]dec- (2E) - iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino - 6 - cloro -pirazin-2- carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análog al Ejemplo 97, sustituyendo el ácido 4 benciloxif enilacét ico con ácido pirimidin- 4 -carboxí lico ; [M+H] + 431.
EJEMPLO 125 [ 8 - (oxazol - 5 -carbonil ) -l,3,8-triaza-spiro[4.5]dec-( E ) - i 1 iden] - amida del ácido 3 , 5 -diamino - 6 - cloro -pirazin-2- carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 97, sustituyendo el ácido 4-benciloxif enilacético con ácido oxazol - 5 - carboxí 1 ico ; [M+H] + 420.
EJEMPLO 126 [8- [3- ( - i aobutoxi -piperidin- 1 - sul fonil ) -benzoil] -l,3,8-triaza-spiro[4.5]dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3,5- diamino -6-cloro -pirazin-2 - carboxí lico Paso 1 Una solución de N, N-diisopropilet ilamina (0.0078ml, 0.045mmol) en THF (1 mi) se agregó a 4-isobutoxi -piperidina (0.008g, 0.05mmol) seguida por una solución de ácido 3 -( clorosul fonil ) benzoico (9.93mg, 0.045mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 48 horas. La solución se evaporó in vacuo para proporcionar el ácido 3 - (4 - isobutoxi -piperidin-1 - sulfonil ) -benzoico que se utiliza sin purificación; [M+H] + 342.00.
Paso 2 El ácido 3 - ( 4 - isobutoxi -piperidin- 1 -sulfonil ) -benzoico (0.03 mmoles, 10.2 mg) se trató con una solución de HATU (11.4 mg, 0.03 mmol) en D F (1 mi) , seguida por una solución de la [ 1 , 3 , 8 - triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida dic lorhidratada del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - cloro - pi raz in- 2 - carboxí 1 ico (Ej. 38) (11.9 mg, 0.03 mmol) y N-metil morfolina (0.010 mi, 0.03 mmol) en DMF (1 mi) y se agitó vigorosamente a temperatura ambiente durante la noche. La solución se evaporó bajo vacío, se redisolvió en DMSO (0.5 mi) y se purificó mediante HPLC preparativa masa-dirigida. Las fracciones purificadas se evaporaron in vacuo para proporcionar el compuesto del título; [M+H] + 648.4.
EJEMPLOS 127-145 Estos compuestos, a saber [8- {3 - [2- (lH-indol-3-il) - etilsulfamoil ] -benzoibenzoi 1 } - 1 , 3 , 8 - triaza- spiro [4.5 ] dec - ( 2E ) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 - cloro-pirazin-2 - carboxí 1 ico (Ej. 127) ; etil éster del ácido l-(3- { 2 - [(E) -3,5-diamino-6-cloro-pirazin-2 - carboni 1 imino] -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5] decan-8 - carbóni 1 } -bencensulfonil ) -piperidin- 3 - carboxi lico (Ej. 128) ; [ 8 - ( 3 - c iclopentilsulfamoil -benzoil ) -1,3,8-triaza- spiro [4.5 ] dec - ( 2E ) - iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - c loro -piraz in- 2 - carboxí 1 ico (Ej. 127); [8- (3- ( 1 -acetil -piperidin- 4 - ilsulfamoil ) -benzoil] -1,3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino- 6 - cloro-piraz in- 2 -carboxílico (Ej . 130); [ 8 - { 3 - [ ( tetrahidro - furan- 2 -ilmetil) -sulfamoil] -benzoibenzoil}-l, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec - ( 2E) - iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino- 6 - cloro -pirazin-2 -carboxí lico (Ej . 131); [8-{3-[(piridin-3- ilmetil ) - sulfamoil] -benzoibenzoil} -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- ( 2E ) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 -cloro-pirazin-2 -carboxí lico (Ej. 132); [8-{3 - [ (2,2-dimetoxi-etil) -metil- sulfamoil ] -benzoibenzoil} -1, 3 , 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino- 6 - c loro-piraz in-2 -carboxí lico (Ej. 133); [8- [3- ( 2 , 4 -dif luoro-bencilsulfamoil ) -benzoil] -1,3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] - amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - c loro - iraz in- 2 -carboxílico (Ej . 134) ; [8- [3- (l-piridin-4-il-etilsulfamoil) -benzoil] -1, 3 , 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - c loro - piraz in- 2 -carboxílico (Ej. 135) ; [8- [3- ( 2 - f eni 1 -morfol in- - sul foni 1 ) -benzoil] -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] - amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 - cloro-pirazin- 2 - carboxílico (Ej. 136) ; [8- [3- ( 3 -dif luorometoxi - benc i 1 sul famoi 1 ) -benzoil] -1,3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - c loro - piraz in- 2 -carboxílico (Ej . 137) ; [8- [3- ( 4 -pirrolidin- 1 - i 1 -piperidin- 1 -sulfonil) -benzoil] -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 -cloro-pirazin-2 -carboxílico (Ej. 138) ; [8-{3 - [ (5-metil-pirazin-2-ilmetil) -sul famoi 1 ] -benzoibenzoil} -1, 3 , 8-triaza-spiro [4.5] dec -( 2E) - iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 -cloro-pirazin- 2 - carboxílico (Ej . 139) ; [8- [3- ( dimet ilcarbamoilmet il - sul famoil ) -benzoil] -1 , 3 , 8-triaza-spiro [4.5] dec - ( 2E ) - i 1 iden] -amida del ácido 3 , 5-diamino-6-cloro-pirazin-2-carboxílico (Ej . 140) ; [8- [3- ( 3 -bencensul fonil -pirrolidin- 1 -sulfoni 1 ) -benzoil] -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino- 6 - cloro -piraz in-2 -carboxí lico (Ej. 141); [8-{3-[([l,3] dioxolan- 2 -ilmetil) - sulfamoil] -benzoibenzoil} -1, 3 , 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 -cloro-pirazin-2 -carboxí lico (Ej. 142); [8-{3 - [2- (piridin-3-iloxi) -propi lsulfamoi 1] -benzoibenzoil}-l,3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -i liden] - amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - c loro -piraz in-2 -carboxí lico (Ej. 143); [8 - { 3 - [4 - (5-trif luoromet i 1 -piridin- 2 - i 1 ) - [1,4] diazepan- 1 - sulfonilFbenzoibenzoil }-l,3,8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3,5-diamino - 6 - cloro-piraz in- 2 - carboxílico (Ej. 144); [ 8 - [ 3 - ( 1 , 1 -dioxo - tetrahidro- llambda* 6 * -tiofen-3- i lsulfamoil ) -benzoil] -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3,5-diamino- 6 - cloro-piraz in- 2 - carboxí lico (Ej. 145); se prepararon de forma análoga a los Ejemplos 126 sustituyendo la 4 - isobutoxi -piperidina en el paso 1 con las aminas adecuadas que están todas disponibles comercialraente . Los compuestos se recuperaron de la mezcla de reacción y se purificaron utilizando técnicas convencionales.
EJEMPLO 146 [8- (3- [3- (4- cloro fenil) - [ 1 , 2 , 4 ] oxadiazol - 5 - il ] -pro ioni 1 }-l,3,8-triaza-spiro[4.5]dec - (2E) - il iden-amida tri f luoroacetato del ácido 3 , 5 - diamino- 6 - cloro -pirazin-2 -carboxílico N-metil morfolina (33 µ?, 0.3 mmol) se agregó al ácido 3 - ( 3 -p- tolil - [1 , 2 , 4 ] oxadiazol - 5 - il ) -propiónico (0.1 mmol), seguido por HATU (41.8 mg, 0.11 mmol) disuelto en DMF grado péptido (250 µ?) y la [l,3,8-triaza-spiro[4.5]dec- (2E)-iliden] - amida diclorhidratada del ácido 3 , 5 - diamino- 6 - cloro -piraz in- 2 - carboxílico (Ej. 38) (40 mg , 0.1 mmol) se disolvió en DMF grado péptido (250 µ?) . La reacción se selló y se agitó vigorosamente durante la noche a temperatura ambiente. La purificación se realizó mediante HPLC preparativa masa- dirigida para proporcionar el compuesto del título; [M+H] + 559.3.
EJEMPLO 147 [8- [1- (toluen-4-sulfonil) - 1H -pirrol - 3 - carboni 1 ] -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3,5- diamino- 6-cloro-pirazin-2 - carboxí lico Una solución del ácido 1 - ( toluen-4 - sulfoni 1 ) - ??-pirrol - 3 - carboxí lico ( 0.023 g, 0.085 mmol) en NMP (850 µ?) se agregó a PS-carbodiimida (190 mg de 1.3 mmol/g de carga, 0.24 mmol) , seguida por una solución de la [ l , 3 , 8 - 1riaza- spiro [4.5 ] dec - ( 2E ) - il iden] - amida dic lorhidratada del ácido 3 , 5 -diamino- 6 -cloro-piraz in- 2 - carboxí lico (Ej . 38) (0.08 mmol) y N-metil morfolina (8 ?, 0.08 mmol) en NMP (1 mi), y la mezcla de reacción resultante se agitó vigorosamente a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se filtró y la resina se lavó con NMP (1 mi) . El filtrado recolectado se concentró in vacuo y los residuos se purificaron mediante HPLC preparativa masa- dirigida . Las fracciones purificadas se evaporaron in vacuo para proporcionar el compuesto del título; [M+H] + 572.08.
EJEMPLO 148 [8 - [1- (3,4-difluoro-bencil) - 6 -oxo -1,6- dihidro -piridin-3 - carbonil ] -1,3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) - iliden] - amida del ácido 3 , 5-diamino-6-cloro-pirazin-2 - carboxí lico Una solución del ácido 1- (3 , 4-dif luoro-bencil) -6- oxo- 1, 6-dihidro-piridin-3- carboxí lico (0.15 mmol) en NMP (0.5 mi) se agregó a una solución de [1, 3 , 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] - amida dic lorhidratada del ácido 3 , 5 -diamino- 6 -cloro-pirazin-2 -carboxílico (Ej . 38) (0.049 g, 0.15 mmol) y N-metil morfolina (0.033 mi, 0.30 mmol) en NMP (1 mi) , seguida por una solución de HATU (0.11 g, 0.3 mmol) en NMP (0.5 mi) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se purificó mediante HPLC preparativa masa- dirigid . Las fracciones que contenían el producto puro se eluyeron a través de cartuchos SCX-2 (Biotage cartucho lg/6ml) , y el cartucho se lavó con MeOH (4 mi) , seguido por NH3 3M en solución de MeOH (4 mi) para proporcionar el compuesto del título; [M H +]+ 572.0.
EJEMPLOS 149-213 Estos compuestos, a saber, [8- [4- ( 3 - f enil - isoxazol - 5 - ilo) -butiril] -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec-(2E)-iliden- amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - cloro - piraz in- 2 - carboxi 1 ico (Ej. 149) ; [8 - [4- (5-fluoro-2, 3 -dihidro - indol - 1 i 1 ) -4-oxo-but iril ] -l,3,8-triaza-spiro[4.5]dec- (2E) - iliden-amida del ácido 3 , 5-diamino-6-cloro-pirazin-2-carboxí lico (Ej. 150); [8-{4 - [3- (4-metoxi-fenil) - [1,2,4] oxadiazol-5il] -butiril}-l,3,8-triaza-spiro[4.5]dec- (2E) - iliden-amida del ácido 3 , 5-diamino-6-cloro-pirazin-2-carboxílico (Ej . 151) ; [ 8 - ( 4 - 1H- indazol - 3 - il -butiril ) -1,3,8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden-amida del ácido 3,5-diamino - 6 - cloro -pi raz in- 2 - carboxi 1 ico (Ej. 152); [8 - [4- (5-metansulfonil-2,3 -dihidro- indol -lil ) - 4 -oxo-but iril] -l,3,8-triaza-spiro[4.5]dec- (2E) -iliden-amida del ácido 3 , 5 - diamino- 6 - c loro -pirazin- 2 -carboxílico (Ej . 153); [8- (4-benzotiazol-2-il-butiril) -1,3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden-amida del ácido 3,5-diamino-6-cloro-pirazin-2 -carboxílico (Ej . 154); [8- [4- (5-dimetilsulfamoil-2 , 3 - dihidro - indol -lil ) -4 -oxo-but iril] -l,3,8-triaza-spiro[4.5]dec- (2E) -iliden-amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - c loro -piraz in- 2 -carboxílico (Ej . 155) ; [8- [4- (2-oxo-2 , 3-dihidro-lH-indol-3il) -butiril] -l,3,8-triaza-spiro[4.5]dec- (2E) -iliden-ami del ácido 3 , 5 - diamino- 6 - cloro-pirazin- 2 - carboxí lico da (Ej . 156) ; [8- [4- (6-dimetilamino-9H-purin-8il) -butiril] -l,3,8-triaza-spiro[4.5]dec-(2E)-iliden-amida del ácido 3 , 5 -diamino - 6 - c loro - piraz in- 2 - carboxí1 ico (Ej. 157) ; [ 8 - [ 4 - (2 -oxo- 3 -piridin-3il-2f3 -dihidro-benzoimidazol - 1 - il ) -butiril ] -1,3 , 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) - iliden-amida del ácido 3,5-diamino-6-cloro-pirazin-2-carboxílico (Ej . 158); [ 8 - [ 4 - ( 2 -oxo- 3 -piridin-3ilmetil-2, 3 - dihidro-indol-l-il) -butiril] -l,3,8-triaza-spiro[4.5]dec- (2E) -iliden-amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 -cloro-pirazin- 2 -carboxílico (Ej . 159) ; [8- [4- (9 -oxo -3 , 3a, 4 , 9, 10, 10a - hexahidro - 1H - 2 -aza- benzol [F] azulen- 2 il) -butiril ] -1,3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden-amida del ácido 3,5-diamino - 6 - c loro-piraz in- 2 - carboxí1 ico (Ej. 160); [8 - [4- (6-amino-9H-purin-8il) -butiril] -1,3,8-triaza- spiro [4.5 ] dec - ( 2E ) - il iden-amida del ácido 3,5-diamino - 6 - cloro-piraz in- 2 - carboxí 1 ico (Ej. 161); [ 8 - ( 4 -oxo- 4 -pirrolidin-l-il-butiril) - 1 , 3 , 8 -triaza- spiro [4.5 ] dec - ( 2E) - il iden-amida del ácido 3,5-diamino- 6 - cloro-pirazin- 2 - carboxí lico (Ej. 162) ; [8 - (4 - [1,2,4] triazol-l-il-butiril) -1,3,8-triaza- spiro [4.5] dec- (2E) - iliden-amida del ácido 3,5-diamino - 6 - cloro -piraz in- 2 - carboxí1 ico (Ej. 163); [ 8 - ( 5 -dibencilsulfamoil - l-metil-lH-pirrol-2-carboni 1) -1, 3, 8-triaza-spi o [4.5] dec- (2E) - iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - c loro - iraz in- 2 -carboxílico (Ej . 164); [8-{4 - [3 - (4-cloro-fenil) - [1,2,4] oxadiazol- 5-il] - utiribenzoil} -1,3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino- 6 - c loro-piraz in-2 -carboxí lico (Ej . 165) ; [8-{4-[(naftalen-l-sulfonilamino)-metil]-benzoibenzoil} -1, 3 , 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 - c loro -pirazin-2 -carboxí lico (Ej. 166); [8 - {2 [3 - (4-clorofenil) - [1,2,4] oxadiazol - 5 -ilFacetibenzoil}-l, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden-amida del ácido 3 , 5 - diamino- 6 - cloro -piraz in- 2 -carboxílico (Ej . 167) ; [ 8 - [ 3 - (3 -meto i -propoxi ) -benzoil] -1, 3, 8 -triaza- spiro [ .5] dec- (2E) - iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino- 6 - cloro-piraz in- 2 - carboxí 1 ico (Ej. 168); [8- (2-benzotriazol-2-il-acetil) - 1 , 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3,5-diamino - 6 - cloro-piraz in- 2 - carboxílico (Ej. 169) [8- (2-benzotriazol-2-il-acetil) -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- ( 2E) - iliden] -amida del ácido 3,5-diamino - 6 - cloro-piraz in- 2 - carboxí lico (Ej. 170); [8- [4- ( 2 - isopropoxi -etilamino ) -benzoil] -1, 3 , 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] - amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 - cloro-pirazin- 2 - carboxílico (E . 171) ; [ 8 - [ 6 - oxo- 1 - ( 3 - tri f luoromet i 1 -benc i 1 ) - 1 , 6 -dihidro -piridin- 3 - carbonil ] -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- ( 2E) - iliden] -amida del ácido 3,5-diamino-6-cloro-pirazin-2-carboxílico (Ej . 172); [8- [6- ( 4 -met il -piperaz in- 1 - il ) -piridin-3-carboni 1 ] -1,3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 - cloro-pirazin- 2 -carboxílico (Ej . 173) ; [8- [3- (4-fluoro-fenil) -5-metil-isoxazol-4-carbónil] -1,3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5-diamino-6-cloro-pirazin-2-carboxílico (Ej . 174) ; [8 - {3 - [3- (4-metoxi-fenil) - [1,2,4] oxadiazol - 5 -i 1] -propioni 11 - 1,3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) - iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 -cloro-pirazin-2 - carboxí 1 ico (Ej. 175); [8- [2- ( 4 - 1ri f luorometoxi - fenoxi ) -acetil] -l,3,8-triaza-spiro[4.5]dec-(2E)-iliden]-amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 - cloro-piraz in- 2 - carboxí1 ico (Ej. 176) ; [8 - { 2 - [4 - ( 2 -oxo- imidazolidin-l-il) -fenil] -acetibenzoil}-l, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 -cloro-pirazin-2 -carboxí lico (Ej. 177); [ 8 - [ 3 - (3 - fenil - isoxazol - 5 - il ) -propioni 1 ] -1, 3 , 8-triaza-spiro [4.5] dec - (2E) -iliden] - amida del ácido 3 , 5 -diamino - 6 - cloro - iraz in- 2 - carboxí1 ico (Ej. 178) ; [8- [2- (4-metansulfonil-fenil) -acetil] -1,3,8-triaza- spiro [4.5 ] dec - ( 2E ) - i 1 iden] - amida del ácido 3 , 5-diamino-6-cloro-pirazin-2-carboxílico (Ej. 179); [8- [2- ( 4 -cloro - fenil ) - 1iazol - 4 - carboni 1 ] -1, 3, 8-triaza-spiro [ .5] dec - (2E) -iliden] - amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 - cloro-piraz in- 2 - carboxí1 ico (Ej. 180) ; [8- [2- ( 5 -met il - 3 - trif luorome til -pirazol - 1 -il) -acetil] -1,3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino- 6 - c loro -piraz in- 2 -carboxílico (Ej. 181) ; [8- [5- (piridin- 3 - i loxi ) - furan- 2 - carbonil ] -1, 3 , 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] - amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - cloro - piraz in- 2 - carboxí1 ico (Ej. 182) ; [8 - [3- (4-metil-tiazol-5-il) -propionil] -1,3,8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino- 6 - cloro-piraz in- 2 - carboxí lico (Ej. 183); [8- ( 2 -meti 1 - 5 -propil - 2H-pirazol3 - carboni 1 ) -1,3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - c loro - iraz in- 2 - carboxí1 ico (Ej. 184) ; [8- [ (S) -2-acetilamino-3- (4 - isopropoxi - fenil ) -propionil ] -1, 3 , 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - cloro-piraz in- 2 -carboxílico (Ej . 185); [8- [3- (ciclohexil-metil-sulfamoil) -4-metoxi-benzoil] -1,3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E)-iliden] -amida del ácido 3 , 5-diamino-6-cloro-pirazin-2-carboxílico (Ej . 186) ; [8-{2-[4-(3,5 -dimetil -bencensulfonil ) -piperazin-l-il] - acet ibenzoi 1 } - 1 , 3, 8-triaza-spiro [ 4.5 ] dec -( 2E )- i 1 iden] - amida del ácido 3,5-diamino - 6 - cloro - iraz in- 2 - carboxí1 ico (Ej. 187) ; [ 8 - ( 3 - 1H- indol - 3 - i 1 -propioni 1 ) -1, 3, 8-triaza-spiro [ .5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3,5-diamino - 6 - cloro-piraz in- 2 - carboxilico (Ej. 188); [8-{3 - [4- (4, 6 -dimet il -pirimidin- 2 -i lsul famoi 1 )- feni lcarbamoi 1 ]- ropioni 11 - 1 , 8 -triaza-spiro [4.5 ] dec - ( 2E ) - i 1 iden] - amida del ácido 3,5-diamino - 6 - cloro-piraz in- 2 - carboxílico (Ej . 189); (Ej. 190); [8- [3- (2-oxo-5-trif luorometil-2H-piridin-l-il) -propionil] -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino- 6 - c loro-piraz in-2 -carboxí lico (Ej. 191); [8- [3- ( 4 - sul famoi 1 - feni lcarbamoi 1 ) -pro ioni 1 ] -1,3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) - i1 iden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino- 6 - cloro-piraz in- 2 -carboxílico (Ej . 192) ; [8- ( 1 -benc il - 5 - oxo -pirrolidin- 3 - carbonil ) -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec-(2E)-iliden]- amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - cloro - pi raz in- 2 - carboxil ico (Ej. 193 ) ; [8- [ (R) -2 -acetilamino-3 - ( 1H- indol - 3 - i 1 ) -propioni 1 ] -1, 3 , 8-triaza-spiro [4.5] dec - (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 - cloro-piraz in- 2 -carboxílico (Ej . 194); [8- [4- ( 1 -bencensulfonil - lH-pirrol3 - il ) -4-oxo-but iri 1 ] -1, 3 , 8-triaza-spiro [4.5] dec - ( 2 E ) - i 1 iden- amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 - cloro-piraz in- 2 - carboxí lico (Ej . 195) ; [ 8 - ( 1 - furan- 2 -ilmetil-5- oxo- pirrolidin- 3 -carbónil) -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - c loro -piraz in- 2 -carboxílico (Ej. 196); [8 - (6-pirazol-l-il-piridin-3 -carbonil ) -1,3,8-triaza - spiro [4.5 ] dec - ( 2E ) - i 1 iden] - amida del ácido 3 , 5 - diamino- 6 - cloro-pirazin- 2 - carboxí 1 ico (Ej . 197); [8- (3- ( (R) -1-fenil -etilcarbamoil ) -propionil] -1, 3 , 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) - i1 iden] - amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 - cloro-piraz in- 2 - carboxílico (Ej . 198) ; [8- [1- ( 4 - c loro -benc il ) - 5 - oxo -pirrol idin- 3 -carbóni 1] -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 - cloro-pirazin- 2 -carboxílico (Ej. 199) ; [8- [2- (3 -ter-butil-isoxazol-5-il) -acetil] -l,3,8-triaza-spiro[4.5]dec-(2E)-iliden]-amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 - cloro-pirazin- 2 - carboxílico (Ej . 200) ; [8 - [6- (2,2,2 - trif luoro- etoxi ) -piridin-3-carboni 1 ] -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec - (2E) -iliden] - amida del ácido 3 , 5-diamino-6-cloro-pirazin-2-carboxílico (Ej . 201) ; [8- ( 4 -meti 1 - 2 -piridin- 3 - il - 1 iazol5 - carbonil ) -1, 3 ; 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 - cloro-pirazin- 2 - carboxí lico (Ej . 202) ; [8- (3-piridin-3-il -propioni 1 ) -1, 3, 8-triaza-spiro [ 4.5 ] dec -( 2 E )- il iden] - amida del ácido 3,5-diamino - 6 - cloro -piraz in- 2 - carboxílico (Ej. 203); [ 8 - ( 5 - dimeti lsul famoi 1 -2-metil-furan-3-carboni 1 ) -1,3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5-diamino-6-cloro-pirazin-2-carboxílico (Ej. 204); [8- (l-etil- 7 -met il -4 -oxo- 1 , 4 -dihidro- [1,8] naftiridin-3 - carbonil ) -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec -(2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 -cloro-pirazin-2-carboxílico (Ej . 205); [8- (2-pirazol-l-il-acetil) -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5 ] dec -( 2E )- il iden] -amida del ácido 3,5-diamino- 6 - cloro-pirazin- 2 - carboxí lico (Ej . 206); [8-{3-cloro-5 -metoxi - 4 - [ 2 - (4 -met i 1-piperazin-1-il) -etoxi] -benzoibenzoil}-l, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- ( 2E) - iliden] -amida del ácido 3,5-diamino - 6 - cloro-piraz in- 2 - carboxílico (Ej. 207); [ 8 - ( 3 - imidazol - 1 - il -pro ionil ) -1,3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3,5-diamino-6-cloro-pirazin-2 -carboxílico (Ej. 208); [8- (l-bencil-lH-imid zol-4 - carbonil ) -1,3,8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino- 6 - cloro-piraz in- 2 - carboxí 1 ico (Ej. 209); [8- [2- (1, l-dioxo-llambda*6*-tiomorfolin-4-il) -3-metil-butiril] -l,3,8-triaza-spiro[4.5]dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 -cloro-pirazin-2 - carboxí lico (Ej. 210); [8- [4- ( toluen- 4 - sulfonilamino) -butiril] -l,3,8-triaza-spiro[4.5]dec-(2E)-iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - cloro - iraz in- 2 - carboxí 1 ico (Ej. 211) ; [8-(l,5-dimetil-3 -oxo-2 -fenil-2,3 -dihidro- 1H-pirazol-4-carbonil) -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 -cloro-pirazin-2 -carboxí lico (Ej . 212); [8- (3-hidroxi-piridin-2-carbonil) -1,3,8-t iaza- spiro [ .5 ] dec - ( 2E ) - i 1 iden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino- 6 - cloro -pirazin- 2 - carboxí lico (Ej. 213); se preparan de forma análoga a los Ejemplos 146, 147 o 148 sustituyendo los reactivos de ácido carboxílico con los ácidos carboxílicos adecuados que están todos disponibles comercialmente o se preparan como se describe en la sección "Preparación de compuestos intermediarios" . Los compuestos se recuperaron de la mezcla de reacción y se purificaron utilizando técnicas convencionales.
EJEMPLO 214 Ácido l-(3-(2- [ (E)-3,5- diamino- 6 -cloro -pirazin- 2-carboni 1 imino] - 1 , 3 , 8 - triairaz in- 2 - carboni limino] -1,3,8 - triazenesulfonil ) -piperidin-3-carboxílico El etil éster del ácido 1 - ( 3 - { 2 - [ ( E ) - 3 , 5 -diamino-6-cloro-pirazin-2 - carbóni 1 imino] -1,3,8-triaza-spiro [4.5] decan- 8 - carbóni 1 } -bencensulfonil) -piperidin- 3 - carboxí lico (Ej . 128) (0.29 g, 0.45 mmol) se disolvió en THF (4 mi) y LiOH 2M (0.22 mi, 0.45 mmol) . La solución amarilla se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas. En la concentración in vacuo el sólido amarillo pegajoso resultante se sometió a ultrasonido en agua (15 mi) hasta que se completó la disolución. El pH se ajustó a pH 2 mediante la adición de HC1 1 N. El sólido amarillo resultante se recolectó mediante filtración y se enjuagó con agua para proporcionar el compuesto del título; [M+H]+ 620.1.
EJEMPLO 215 bencilamida del ácido 2 - [ ( E ) - 3 , 5 - diamino - 6 -cloro-pirazin-2 - carboni 1 imino] -1,3, 8-triaza-spiro [4.5] decan- 8 - carboxil ico A una solución de bencilamina (0.017 mi, 0.154 mmol) en DMF (1 mi) se agregó 1,1'-carbonildiimidazol (0.03 g, 0.17 mmol) y la solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 45 minutos. A esto se agregó la [ 1 , 3 , 8 - triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida dic lorhidratada del ácido 5-diamino-6-cloro-pirazin-2-carboxílico (Ej . 38) (0.05 g, 0.15 mmol) y la suspensión amarilla se agitó durante 24 horas. La purificación mediante cromatografía en fase inversa (IsoluteMR C18, 0-100% de MeCN en agua -0.1% de TFA) , seguida por resina de captura y liberación (SCX-2) eluyendo con MeOH y NH3 7M en MeOH proporcionó el compuesto del título como un sólido blanquecino; [M+H] + 458.1.
EJEMPLOS 216-231 Estos compuestos, a saber, Denilamida del ácido 2 - [ ( E ) - 3 , 5 - diamino - 6 -cloro-pirazin-2 - carboni 1 imino] -1,3, 8-triaza-spiro [4.5 ] decan- 8 - carboxí 1 ico (Ej. 216) , ti- ( toluen-4 -sulfonil) - 1H- indol - 5 - i 1 ] -amida del ácido 2 - [ ( E) - 3 , 5 -diamino- 6 - cloro-piraz in- 2 -carbóni 1 im no] -1, 3 , 8-triaza-spiro [4.5] decan-8-carboxilico (Ej . 217); 3 - (4 -cloro-fenoximetil) -bencilamida del ácido 2 - [ ( E ) - 3 , 5 -diamino- 6-cloro-pirazin-2 - carbonilimino] -1 , 3 , 8 - triaza-spiro [4.5] decan- 8 -carboxí lico (Ej . 218) ; [3- (2,4-dicloro-fenil) -propil] -amida del ácido 2 - [ ( E ) - 3 , 5 - diamino - 6 - c loro -pirazin-2-carbonil imino] -1, 3 , 8-triaza-spiro [4.5] decan- 8 -carboxílico (Ej . 219); [2 - ( 3 -benciloxi - fenil ) -etil] amida del ácido 2- [(E) -3,5-diamino-6-cloro-pirazin-2 - carbonilimino] -1 , 3 , 8- triaza-spiro [4.5] decan- 8 -carboxí lico (Ej . 220) ; [2- (5, 6-dimetil-lH-indol-3-il) -etil] amida del ácido 2 - [ ( E ) - 3 , 5 - diamino - 6 - c loro -pirazin-2-carbonil imino] -1, 3 , 8-triaza-spiro [4.5] decan- 8 -carboxílico (Ej . 221); 4 -morfolin- - ilmetil-bencilamida del ácido 2-[ ( E ) - 3 , 5 -diamino- 6 - c loro-piraz in- 2 - carbonilimino] - 1 , 3 , 8 - triaza- spiro [4.5] decan- 8 -carboxí lico (Ej . 222) ; 3 -benciloxi-bencilamida del ácido 2- [(E) -3,5-diamino -6-cloro-pirazin-2- carboni 1 imino] -1,3,8-triaza- spiro [4.5 ] decan- 8 - carboxí lico (Ej . 223); (2 - {442 - (4-fluoro-fenil) -etoxi] -fenil-etil) -amida del ácido 2 - [ ( E) - 3 , 5 -diamino- 6 - c loro -piraz in- 2 -carboni limino] -1, 3 , 8-triaza-spiro [4.5] decan- 8 -carboxilico (Ej . 224) ; [ 2 - ( 3 , 5 -dime toxi - f enil ) - et i 1 ] -amida del ácido 2- [ (E) -3,5-diamino-6-cloro-pirazin-2- carbonilimino] -1 , 3 , 8 - t riaza- spiro [4.5] decan- 8 - carboxí lico (Ej . 225) ; [3- ( 4 -metoxi - af talen- 1 - il ) -propil] -amida del ácido 2 - [ ( E) - 3 , 5 -diamino- 6-cloro-pirazin-2-carboni limino] -1, 3 , 8-triaza-spiro [4.5] decan- 8 -carboxílico (Ej . 226) ; [2- (4 , 6-dimetil-lH-indol-3-il) -etil] amida del ácido 2 - [ (E) - 3 , 5 -diamino- 6-cloro-pirazin-2-carboni limino] -1, 3 , 8-triaza-spiro [ .5] decan- 8 -carboxílico (Ej . 227) ; ( 3 -piridin- 2 - i 1 -propil ) - amida del ácido 2-[ (E) -3,5 - diamino- 6-cloro-pirazin-2- arbonilimino] -1 , 3 , 8 - triaza- spiro [4.5 ] decan- 8 - carboxí lico (Ej . 228) ; {2 - [4- (4-fenil-butoxi) -fenil] -etil} -amida del ácido 2 - [ ( E) - 3 , 5 -diamino- 6 - cloro-piraz in- 2 -carboni limino] -1, 3, 8-triaza-spiro[4.5] decan- 8 -carboxílico (Ej . 229) ; [ 2 - ( 4 - f enoxi - f eni 1 ) -e t il ] - amida del ácido 2- [ ( E ) - 3 , 5 - diamino- 6-cloro-pirazin-2- carboni 1 imino] -1, 3 , 8-triaza-spiro [4.5] decan- 8 -carboxí lico (Ej. 230) ; [2 - ( 4 -benciloxi - fenil ) -etil] -amida del ácido 2 - [ (E) -3,5-diamino-6-cloro-pirazin-2 - carbonilimino] -1 , 3 , 8 - 1riaza - spiro [4.5 ] decan- 8 -carboxl 1 ico (Ej . 231) ; se prepararon mediante un procedimiento análogo al del Ejemplo 215, reemplazando la bencilamina con las aminas adecuadas las cuales ya sea están disponibles comercialmente o se sintetizan como se describe en la sección "Preparación de los compuestos intermediarios" . Los compuestos se recuperaron a partir de mezclas de reacción y se purificaron utilizando técnicas convencionales tales como cromatografía instantánea, filtración, recristalización y trituración.
EJEMPLO 232 [8-f enilmetansulfonil - 1 , 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec-(2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5-diamino-6-cloro-pirazin-2-carboxílico A una solución de la [ 1 , 3 , 8 - triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida diclorhidratada del ácido 5 -diamino- 6 -cloro -pirazin- 2 - carboxí lico (Ej. 38) (0.05 g, 0.15 mmol) en DMF (2 mi) se agregó cloruro de alfa- toluensulfonilo (0.04 g, 0.20 mmol) y trietilamina (0.02 mi, 0.15 mmol) y la solución amarilla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La purificación mediante cromatografía en fase inversa (IsoluteMR C18, 0-100% de eCN en agua -0.1% de TFA) , seguida por resina de captura y liberación (SCX-2) eluyendo con MeOH y NH3 7M en MeOH proporcionó el compuesto del título como un sólido amarillo; [M+H] + 478.98.
EJEMPLOS 233-245 Los siguientes compuestos, a saber [8-bencensulfonil-l, 3 , 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5-diamino-6-cloro-pirazin-2-carboxílico (Ej . 233); [8 - ( 1-metil- 1H- indol-4 - sulfonil) -1,3,8-triaza- spiro [4.5] dec- (2E) - iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino- 6 - cloro-pirazin- 2 - carboxí lico (Ej. 234); [8- ( 1-metil -lH-indol- 5 -sulfonil) -1,3,8-triaza- spiro [4.5 ] dec -( 2E )- iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino- 6 - cloro-pirazin- 2 - carboxí 1 ico (Ej. 235); [8- (7-cloro-benzo [1,2, 5] oxadiazol - 4 -sulfonil) -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - c loro - piraz in- 2 -carboxílico (Ej. 236) ; [8- (2-fenil-etansulfonil) -1, 3, 8-triaza-spiro [ 4.5 ] dec -( 2E )- i 1 iden] - amida del ácido 3,5-diamino - 6 - cloro -piraz in- 2 - carboxí1 ico (Ej. 237); [8- [4- ( 5 -met il - 2 - feni 1 - oxazol - 4 - ilmetoxi ) -bencensulfonil] -l,3,8-triaza-spiro[4.5]dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 -cloro-pirazin-2 -carboxí lico (Ej. 238); [8- (4-fenil-5- trif luoromet il -tiofen-3-sulfonil) -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5-diamino-6-cloro-pirazin-2-carboxílico (Ej . 239); [ 8 - ( 5 - c iano- 2 -metoxi -bencensulfonil ) -1,3,8-triaza - spi ro [4.5 ] dec - ( 2E ) - i 1 iden] - amida del ácido 3 , 5 - diamino- 6 - cloro-piraz in- 2 - carboxí 1 ico (Ej . 240); 3 [8 - [2- (4-cloro-fenil) -etansulfonil] -1,3,8-triaza- spiro [4.5 ] dec - ( 2 E ) - i 1 iden] - amida del ácido 3 , 5-diamino-6-cloro-pirazin-2-carboxílico (Ej. 241); [8- (2-fenil-3H-benzoimidazol-5-sulfonil) -1, 3 , 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] - amida del ácido 3 , 5 -diamino- 6 - cloro-piraz in- 2 - carboxílico (Ej . 242) ; [8 - [2- (2-cloro-fenil) -etansulfonil] -1,3,8-triaza- spiro [4.5 ] dec -( 2E )- iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino- 6 - c loro -piraz in- 2 - carboxí 1 ico (Ej. 243); [8 - [2- (2,2,2-trifluoro-acetil) -1,2,3,4-tetrahidro- isoquinolin- 7 - sul foni 1] -1,3,8-triaza- spiro [ 4.5 ] dec - ( 2E ) - i 1 iden] - amida del ácido 3,5-diamino- 6 - cloro-piraz in- 2 - carboxllico (Ej. 244); [8- [2- (3-cloro-fenil) -etansulfonil] -1,3,8-triaza- spiro [4.5] dec- (2E) - iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino- 6 - cloro-piraz in- 2 - carboxí 1 ico (Ej. 245); se prepararon mediante un procedimiento análogo al del Ejemplo 232, reemplazando el cloruro de alfa- toluensulfonilo con los cloruros de sulfonilo adecuados que están disponibles ya sea comercialmente o se sintetizan como se describe en la sección 1 Preperation de los compuestos intermediarios". Los compuestos se recuperaron a partir de mezclas de reacción y se purificaron utilizando técnicas convencionales tales como cromatografía instantánea, filtración, recristalización y trituración.
EJEMPLO 246 [8- (1-fenil-etil) -l,3,8-triaza-spiro[4.5]dec-( 2E) - iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino- 6 - cloro-piraz in - 2 - carboxí 1 ico Una mezcla de 1 - ( 3 , 5 -diamino- 6 -cloro-pirazin-2 - carboni 1 ) - 2 -met i 1 - i sotiourea (Intermediario A) (1.7 g, 4.54 mmol) y 4-aminometil-l- (1-fenil-etil) -piperidin- 4 - ilamina (Intermediario BM) (1.6 g, 4.59 mmol) en propan-2-ol (50 mi) se agitó a 80°C durante 16 horas. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y se purificó mediante cromatografía en columna (alúmina básica, 0-2% de MeOH en DCM) para obtener un sólido amarillo pálido. El compuesto obtenido se disolvió en MeOH y se precipitó al agregar dietiléter. La mezcla del solvente sobrenadante se decantó y el producto se lavó nuevamente con dietiléter y se secó bajo vacío para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanquecino; [M+H] + 429.
EJEMPLO 247 [ 8 - ( 4 -metoxi -bencil ) -1, 3, 8-triaza-spiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - cloro -pirazin-2 -carboxílico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 246 al reemplazar 4 - aminome t i 1 - 1 - ( 1 - f enil -etil ) -piperidin-4 - ilamina (Intermediario BM) con 4-aminometil - 1 - ( 4 -me toxi - benc i 1 ) -piperidin-4 - ilamina (Intermediario BN) [M+H] + 445.
EJEMPLO 248 [8-piridin-4-ilmetil-l,3,8-triaza-spiro[4.5]dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 - diamino - 6 - cloro -piraz in-2 - carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 246 al reemplazar 4 - aminomet i 1 - 1 - ( 1 - feni 1 -etil ) -piperidin-4 - ilamina (Intermediario BM) con 4-aminomet il - l-piridin-4-i lmet il -piperidin- 4 - ilamina (Intermediario BO) ; [M+H] + = 416.
EJEMPLO 249 [ 8 - ( 3 - fenil -pro il ) -1,3, 8-triaza-apiro [4.5] dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3, 5-diamino-6-cloro-pirazin-2 -carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 246 al reemplazar 4 - aminomet i 1 - 1 - ( 1 - feni 1 -etil ) -piperidin-4 - ilamina (Intermediario BM) con 4-aminomet il - 1 - ( 3 - fenil -propil ) -piperidin- 4 - ilamina (Intermediario BP) [M+H] + 443.
EJEMPLO 250 [8-ciclohexilmetil-l, 3, 8-triaza-spiro[4.5]dec- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 / 5 - diamino - 6 - cloro-piraz in-2 -carboxílico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 246 al reemplazar 4 - aminomet i 1 - 1 - ( 1 - feni 1 -etil ) -piperidin-4 - ilamina (Intermediario BM) con 4-aminome t i 1 - 1 - ciclohexilmetil -piperidin- 4 - ilamina (Intermediario BQ) [ +H] + 421.
EJEMPLO 251 2' - (3, 5- diamino - 6 - cloropiraz in- 2 - carboni 1 imino ) - 8 -azaspiro [biciclo [3.2.1] octan- 3 , 4 ' -imidazolidin] - 8 -carboxilato de (E) - ter-butilo Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 246 al reemplazar 4 - aminomet i 1 - 1 - ( 1 - feni 1 -etil ) -piperidin-4 - ilamina (Intermediario BM) con ter-butil éster del ácido 3 -amino- 3 -aminometil - 8 -aza-biciclo [3.2.1] octan-8 -carboxílico (Intermediario BR) [M+H] + 451.
EJEMPLO 252 (E) -N- (8- (lH-indol-4-carbonil) -8-az aspiro [biciclo [3.2.1] octan- 3,4'- imidazol idin] - 2 ' -iliden)-3,5- di mino- 6 - cloropiraz in- 2 -carboxamida Paso 1 Yodotrimetilsilano (0.23 mi, 1.66 mmol) se agregó a una suspensión de ( E ) - ter-but i 1 - 2 ' - ( 3 , 5 -diamino-6-cloropirazin-2 - carbó i limino ) - 8 -azaspiro [biciclo [3.2.1] octan- 3 , 4 ' - imidazol idin] -8 -carboxilato (Ej . 251) (500 mg, 1.11 mmol ) en DCM (10 mi) . Luego se agregó DMF (5 mi) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se agregó yodotrimetilsilano (0.5 mi) y la mezcla de reacción se concentró in vacuo. El sólido amarillo se suspendió en DCM y se recolectó mediante filtración. El sólido se disolvió en 1:1 MeOH/DCM y se cargó en un cartucho SCX-2 eluido con DCM seguido por MeOH y NH3 /MeOH . Las fracciones de amoníaco metanólico se concentraron in vacuo para proporcionar la ( E ) - 3 , 5 - diamino- 6 - cloro-N- ( 8 -azaspiro [biciclo [3.2.1] octan- 3,4'- imidazol idin] - 2 ' -i 1 iden) piraz in- 2 - carboxamida como una goma amarilla; [M+H] + 351.
Paso 2 (E) -3, 5-diamino-6-cloro-N- ( 8 -azaspiro [biciclo [3.2.1] octan-3 , 4 ' - imidazolidin] - 2 ' -iliden) irazin-2 -carboxamida (170 mg, 0.49 mmol) se disolvió en DMF (10 mi) junto con HATU (184 mg, 0.49 mmol) y ácido 4 - indol - carboxí 1 ico (78 mg , 0.49 mmol) . Se agregó N-metil morfolina (160 mi, 1.45 mmol) y la solución se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla luego se concentró in vacuo. Se agregó EtOAC (100 mi) y la solución se lavó con agua (100 mi) . La fase orgánica se secó ( gS04) y se concentró in vacuo. La purificación mediante cromatografía instantánea ( Si02 , DCM/MeOH) proporcionó el compuesto del título como un sólido amarillo; [M+H] + 494.15, 496.27 para isótopos de Cl.
EJEMPLO 253 (E) -3, 5-diamino-N- (8- (3- (4- (benciloxi) fenil) propanoil) - 8-azaspiro [biciclo [3.2. poetan -3, 4' - imidazolidin] -2 ' -iliden) - 6 - cloropiraz in- 2 - carboxamida (E) -3,5-diamino-6-cloro-N- ( 8 -azaspiro [biciclo [3.2.1] octan-3 , 4 ' -imidazolidin] -2 ' -iliden) pirazin-2 -carboxamida (preparada como se describió para el Ej . 252) (280 mg , 0.798 mmol) se disolvió en DMF (8 mi) junto con HATU (303 mg, 0.798 mmol) y ácido 3 - ( 4 -benc i loxi - fenil ) -propiónico (205 mg, 0.798 mmol) . Se agregó N-metil morfolina (0.263 mi, 2.394 mmol) y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 6 horas. La mezcla se concentró in vacuo. Se agregó EtOAC (100 mi) y la solución se lavó con agua (100 mi) . La fase orgánica se secó ( gS04) y se. concentró. El residuo se disolvió en MeOH (20 mi) y se cargóron en seco sobre sílice (5 g) . La purificación mediante cromatografía instantánea ( Si02 , dCM/MeOH) proporcionó el compuesto del título como un sólido color canela; [M+H] + 589.20, 591.19 para los isótopos de Cl .
Preparación de los compuestos intermediarios Intermediario A Yodhidrato de 1 - (3 , 5 - dia ino - 6 - cloro -pirazin-2 - carboni 1 ) - 2 -met il - isot iourea Método 1 Este compuesto se preparó de acuerdo con Cragoe, Edward J . , Jr . ; oltersdorf, Otto W., Jr . De Solms, Susan Jane. Heterociclic- substituted pyrazinoylguanidines , and a pharmaceut ical composicition containing them. EP 17152 Página 4 Método 2 Paso 1 Una suspensión agitada de metil éster del ácido 3 , 5 -diamino- 6 - cloro-pirazin- 2 - carboxilico (110 g, 542.9 mmol) en MeOH (500 mi) a 5-10°C (baño helado) se trató gota a gota con una suspensión de hidróxido de litio (46.6 g, benzoil }benzoil } mmol) en agua (500 mi) . La mezcla de reacción se calentó a 50°C durante 5 horas, luego se enfrió a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. El precipitado resultante se recolectó mediante filtración y se secó en un horno de vacío para proporcionar el ácido 3,5-diamino - 6 - cloro -piraz in- 2 - carboxí 1 ico como la sal de litio (dihidratada); [M - Li ] 187.
Paso 2 Una suspensión agitada de sulfato de S-metil-iso-tiourea (10 g, 35.9 mmol) en tolueno (75 mi) se trató con NaOH 4 M (15 mi) a temperatura ambiente. A la mezcla bifásica se agregó dicarbonato di-ter butílico (3.27 g, 15 mmol) en una porción. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, luego se calentó a 60°C durante la noche. La porción orgánica se separó, se lavó con solución de salmuera, luego se secó sobre Na2S04, se filtró y se concentró in vacuo a un aceite viscoso, que se cristalizó a alto vacío para proporcionar el amino (metiltio) metilencarbamato de ter-butilo como un sólido incoloro.
Paso 3 Una suspensión agitada del ácido litio 3,5-diamino- 6 - cloro-piraz in- 2 - carboxílico (22.6 g, 98.03 mmol) en DMF (400 mi) se trató en porciones con HATU (41 g, 107.83 mmol) , bajo una atmósfera inerte de nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas y luego se agregó en porciones amino (met iltio) metilencarbamato de ter-butilo (20.5 g, 107.83 mmol) durante un período de 10 minutos. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante otras 1.5 horas y luego se calentó a 50°C y se agitó durante la noche. El precipitado resultante se filtró en caliente, lavando con agua y se secó en un horno de vacío (40°C) durante la noche para proporcionar el (3, 5-diamino-6 - cloropirazin- 2 -carboxamido) (metiltio) met ilen carbamato de ter-butilo; [M+H]+ 361.
Paso 4 (3,5- diamino- 6 - cloropirazin- 2 -carboxamido) (metiltio) metilen carbamato de tejr-butilo (50 g, 139 mmol) se suspendió en DCM (500 mi) . TFA (53.4 mi, 693 mmol) se disolvió en DCM (100 mi) se agregó gota a gota durante 45 minutos para formar una solución color marrón. La solución se agitó a temperatura ambiente durante la noche, después de cuyo tiempo se formó un precipitado amarillo. El sólido se recolectó mediante filtración y se secó in vacuo para proporcionar el compuesto del titulo; [M+H] + 261.1.
Intermediario B Bencil éster del ácido ( ( S ) - 5 , 6 - diamino hexil) -carbámico: Paso 1 Una solución de BOC- lisinol - ( Z ) - OH ( 0.5 g, 1.36 mmol) en THF seco (1 mi) bajo una atmósfera inerte de argón se trató con PS- trifenilfosfina (0.91 g, 3.00mmol/g de carga) . A esta mezcla se agregó ftalimida (0.2 g, 1.36 mmol) y DEAD (0.24 mi, 1.50 mmol) en THF seco (4 mi) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche . La resina se retiró mediante filtración ba o vacío y el filtrado se concentró in vacuo. La purificación del sólido crudo blanco mediante cromatografí sobre sílice eluyendo con 20-50% de EtOAc en iso-hexano (1% TEA) proporcionó el ter-butil éster del ácido [(S)-5-benc iloxicarbóni lamino- 1- (1,3 -dioxo- 1 , 3-dihidro isoindol - 2 - i lmet i 1 ) -pent ibenzoil } - carbámico como un sólido cristalino blanco; [M+H] + 496.
Paso 2 Una solución de ter-butil éster del ácido [ ( S ) - 5 -benci loxicarbonilamino- 1 -(1,3 - dioxo -1,3-dihidro - isoindol - 2-ilmetil) -pentil] -carbámico (0.63 g, 1.27 mmol) en DCM (5.1 mi) y EtOH (5.1 mi) se trató con hidrazina hidratada (0.318 g, 6.35 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se formó un precipitado blanco que se retiró mediante filtración y se lavó con DCM (3 x 10 mi) . El filtrado se concentró in vacuo y se redisolvió en DCM (15 mi) y MeOH (2 mi) . El material no disuelto se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró in vacuo. El sólido amarillo oleoso resultante se purificó mediante cromatografía sobre sílice eluyendo con 10-50% de MeOH en DCM (1% de TEA) para proporcionar el ter-butil éster del ácido ( (S) - 1 - aminome t i 1 - 5 -benc i loxicarboni lamino -pent il ) - carbámico como un aceite claro; [M+H] + 366.
Paso 3 Una solución del ter-butil éster del ácido ( (S) -l-aminometil-5-benciloxicarbonilamino-pentil) -carbámico (0.24 g, 0.657 mmol) en DCM (2.4 mi) se trató gota a gota con TFA (0.6 mi) y se agitó a temperatura ambiente durante 3 días. El solvente se retiró in vacuo para proporcionar el bencil éster ácido ( (S) -5 , 6 -diamino-hexil ) -carbámico como un aceite amarillo; [M+H] + 266.
Intermediario C Una mezcla de 4 - [4 - ( 2 -amino-etilamino) -butil] -fenol y N* 1 * - [4 - ( 4 -me toxi - feni 1 ) -but i 1 ] - e tan-1 , 2 - diamina Paso 1 Una solución de ácido 4 -metoxifenilbutírico (6.99 g, 36 mmol) en THF (70 mi) se trató con EDCI (7.6 g, 36.9 mmol) seguido por N- eti lmorfol ina (9.2 mi, 72 mmol) . Después de agitar a temperatura ambiente durante 1 hora, se agregó N-BOC-etilendiamina (5.84 g, 36 mmol) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se inactivo mediante la adición de solución saturada de bicarbonato de sodio y se extrajo con EtOAc. La porción orgánica se lavó con solución de ácido cítrico, salmuera, se secó (MgS04) y se concentró in vacuo hasta permanecieron 25 mi de solvente. La suspensión se filtró para proporcionar el ter-butil éster del ácido { 2 - [4 - ( 4 -metoxi - feni 1 ) -buti ri lamino] - et i 1 } - carbámico : como un sólido blanco.
Paso 2 Una solución de ter-butil éster del ácido {2- [4- ( 4 -metoxi - fenil ) -butirilamino] - etil }- carbámico (6 g, 17.88 mmol) en THF seco (60 mi) bajo una atmósfera inerte de argón se trató cuidadosamente con borano . El complejo de THF (53.88 mi, Borano 1 M en THF) . La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 2 horas y luego se dejó enfriar a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se inactivo mediante la adición de MeOH y luego se calentó a 70°C durante 2 horas más. Después de enfriar a temperatura ambiente, el solvente se retiró in vacuo para proporcionar el ter-butil éster del ácido {2- [4- (4-metoxi - fenil ) -but i lamino] - et il }- carbámico como un aceite viscoso; [M+H] + 323.
Paso 3 Una suspensión de ter-butil éster del ácido { 2 - [4- (4-metoxi-fenil) -butilamino] -etil} - carbámico (5.85 g, 18.1 mmol) en HBr (30 mi de una solución al 48%) se calentó a reflujo durante 2 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, el solvente se retiró in vacuo. El residuo crudo se suspendió en EtOAc y se filtró para proporcionar un sólido que consistió de una mezcla de 4 - [4 - ( 2 - amino- et ilamino ) -butil] -fenol y N*1*-14- (4-me oxi-fenil) -butil] -etan-1,2 -diamina en una proporción de aproximadamente 1:1; [M+H] + 209 y 223.
Intermediario D (S) -3- (4-metoxi-fenil) -propan-1,2 diamina (S) -2-amino-3- (4-metoxi-fenil) -propionamida se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito en la página 3880, Method 2.1.3 del Journal of Physical Chemistry B, 108 (12) , 3879-3889, 2004 y se redujo de forma análoga al intermediario C.
Intermediario E 1- (3 , 4 -dicloro- fenil) - etan- 1 , 2 - diamina Este compuesto se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito en la página 907, Method 5 en el Journal of Medicinal Chemistry (1973) , 16 (8) , 901-8.
Intermediario F Diclorhidrato del ácido 4 , 5 -diaminopentanoico Este compuesto se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito en x Radiolabel ing chelating compounds comprising sulfur atoms, whit metal radionuclides . ' EP 300431 página 12, Intermedíate 3 Intermediario G 4-amino-l-bencil-piperidin-4- carboni tri lo Paso 1 A una solución de cloruro de amonio (1.73 g, 32.3 mmol) en agua (20 mi) se agregó una solución de amoníaco al 30% (2 mi) seguida por l-bencil-4-piperidona. Después de 20 minutos se agregó en porciones cianuro de sodio (1.47 g, 30 mmol) durante 15 minutos. Después de agitar durante una hora, se agregó agua (50 mi) y los productos se recolectaron con DCM (3 x 50 mi), se secaron (MgS04) se filtraron y se concentraron in vacuo. La purificación mediante cromatografía sobre sílice eluyendo con 50-100% de EtOAc en iso-hexano proporcionó la 4 -aminome t il - 1 -bencil -piperidin-4 - ilamina ; [M+H] + 216.
Paso 2 A una solución de hidruro de litio y aluminio (1 M en THF , 10.4 mi) en dietiléter seco (15 mi), se enfrió a 0°C, bajo una atmósfera de argón se agregó gota a gota 4 - amino-met il - 1 -benc il -piperidin- 4 -ilamina (900 mg, 4.18 mmol) en dietiléter seco (15 mi) . La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 24 horas y luego se enfrió a 0°C. Se agregó agua (0.25 mi) seguida por 15% de NaOH acuosa (0.25 mi) y luego agua (0.7 mi) . Después de calentar a temperatura ambiente se agregó MgS04 (150 mg) y se agitó durante 15 minutos. Los sólidos se retiraron mediante filtración con succión y el filtrado se evaporó para proporcionar un aceite. Los sólidos se extrajeron con dietiléter a reflujo (80 mi) utilizando un extractor Soxhlet durante 14 horas. El dietiléter se eliminó in vacuo y los dos aceites se combinaron y se purificaron utilizando cromatografía sobre sílice eluyendo con 10-25% de solución de amoniaco en metanol 2M en diclorometano para proporcionar el 4 - amino - 1 - benc il -piperidin - 4 -carbonitri lo ; [M+H] + 220 Intermediario H 5-14- ( (R) -2,2-dimetil- [1,3] dioxolan-4 - ilmetoxi) -fenybenzoil) -pentan- 1 , 2 -di amina Paso 1 A 3 - (4 -hidroxifenil) -1-propanol (10 g, 66 mmol) y carbonato de potasio (13.5 g, 100 mmol) en acetona (200 mi) se agregó (S)-glicidol (6.5 mi, 100 mmol) . La mezcla se calentó a reflujo durante 18 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente el solvente se retiró in vacuo y el residuo se dividió entre EtOAc y agua. La capa acuosa se recolectó dos veces más con EtOAc y las porciones orgánicas combinadas se lavaron con agua, salmuera, se secaron (MgS04) , se filtraron y se concentraron in vacuo. El residuo crudo se purificó mediante cromatografía en columna instantánea sobre sílice eluyendo con 1:1 EtOAc/iso-hexano para proporcionar el (S)-3- [4-(3-hidroxi -propil ) - fenoxi] -propan- 1 , 2 - diol como un Sólido blanco;1!! NMR (CDC13) : 1.20 (1H, br) , 1.85 (2H, pent, J = 6.8 Hz), 1.98 (1H, br) , 2.58 (1H, br) , 2.65 (2H, tr, J = 6.9 Hz) , 3.56 (2H, tr, J = 6.8 Hz) , 3.72 (1H, m) , 3.83 (1H, m) , 4.00 (2H, dd , J = 2.1 Hz, J = 6.5 Hz) , 4.09 (1H, br) , 6.82 (2H, d, J = 7.4 Hz) , 7.10 (2H, d, J = 7.4 Hz) .
Paso 2 A (S) -3- [4- ( 3 -hidroxi -propil ) -fenoxi] -propan-1,2-diol (benzoil} .5 g, 50.9 mmol) en DMF seca (150 mi) se agregó p- toluensulfonato de piridinio (1.28 g, 5 mmol) y 2 , 2 - dimetoxipropano (31 mi, 250 mmol) . La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas y luego el solvente se retiró in vacuo. El residuo se disolvió en EtOAC (150 mi) y se lavó con agua, solución acuosa saturada de carbonato ácido de sodio, salmuera, se secó (MgS04) y se concentró in vacuo. El residuo se purificó mediante cromatografía sobre sílice eluyendo con 1:4 EtOAc/iso-hexano a 1:1 EtOAc/ i so- hexano para proporcionar el ( 3 - [ 4 - ( ( R) - 2 , 2 -dime til - [1,3] dioxolan-4 -ilmetoxi) -fenil] -propan- 1 - ol como un aceite incoloro;: 1H N R (CDC13) : 1.25 (1H, br) , 1.39 (3H, s), 1.43 (3H,s), 1.85 (2H, pent , J = 6.9 Hz) , 2.63 (2H, tr, J = 6.9 Hz), 3.63 (2H, tr, J = 6.9 Hz) , 3.90 (2H, m) , 4.02 (1H, m) , 4.12 (1H, m) , 4.50 (1H, pent, J = 6.8 Hz), 6.82 (2H, d, J = 7.4 Hz) , 7.10 (2H, d, J = 7.4 Hz) .
Paso 3 A (3-[4-((R)-2, 2-dimetil- [1,3] dioxolan-4 -ilmetoxi) -fenil] -propan-l-ol (12.2 g, 46 mmol) en éter seco(150 mi) se agregó TEA (12.8 mi, 92 mmol) .
La mezcla se enfrió a 0°C y se trató gota a gota con cloruro de metansulfonilo (5.3 mi, 69 mmol) . La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y luego se continuó la agitación durante 3 horas. La mezcla resultante se lavó con agua (2 x 100 mi) , carbonato ácido de sodio acuoso saturado, salmuera, se secó (MgS04) y se concentró in vacuo para proporcionar el 3 - [4 - ( (R) - 2 , 2 -dimet il - [ 1 , 3 ] dioxolan-4 - ilmetoxi ) - fenil] -propiléster del ácido metansul fónico como un sólido blanco; 1H NMR (CDC13) : 1.39 (3H, s) , 1.43 (3H,s), 2.02 (2H, pent , J = 6.9 Hz) , 2.63 (2H, tr, J = 6.9 Hz), 3.00 (3H,s), 3.90 (2H, m) , 4.05 (1H, m) , 4.14 (3h, m) , 4.46 (1H, pent, J = 6.8 Hz) , 6.82 (2H, d, J = 7.4 Hz), 7.10 (2H, d, J = 7.4 Hz ) .
Paso 4 El 3-[4-((R)-2, 2 -dimetil [1,3] dioxolan-4 -i lmetoxi ) - feni 1 ] -propilés ter del ácido metansul fónico (11.8 g, 34.2 mmol) en acetona (200 mi) se trató con bromuro de litio (8.9 g, 100 mmol) y luego se calentó a reflujo durante 5 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se concentró in vacuo. El residuo resultante se disolvió en EtOAC (150 mi) , se lavó con agua (2 x 50 mi) , salmuera, se secó (MgS04), se filtró y se concentró in vacuo para proporcionar un aceite. La purificación mediante cromatografía sobre sílice eluyendo con 4:1 iso-hexano/EtOAc proporcionó el (R) -4 - [4 - ( 3 -bromo-propi 1 ) - fenoximet i 1 ] - 2 , 2 -dimet il - [ 1 , 3 ] dioxolano como un aceite incoloro que solidificó; 1H NMR (CDC13) : 1.39 (3H, s) , 1.43 (3H,s), 2.02 (2H, pent , J = 6.9 Hz) , 2.63 (2H, tr, J = 6.9 Hz), 3.38 (2H, tr, J = 6.9 Hz) , 3.90 (2H, m) , 4.02 (1H, m) , 4.15 (1H, m), 4.46 (1H, pent, J = 6.9 Hz), 6.82 (2H, d, J = 7.4 Hz), 7.10 (2H, d, J = 7.4 Hz) .
Paso 5 Una solución de N- (difenilmetilen) amino acetonitrilo (5.14 g, 23.4 mmol) en DCM (12 mi) se trató con ( R) - 4 - [4 - ( 3 -bromo -propil ) - fenoximetil ] - 2 , 2 -dimetil - [1 , 3 ] dioxolano (8.1 g, 24 mmol) en DCM (12 mi) y se enfrió a 0°C. Se agregó NaOH acuoso al 48% (20 mi) seguido por cloruro de benciltrietilamonio (530 mg, 2.4 mmol) y la mezcla resultante se dejó calentar a temperatura ambiente. Después de agitar vigorosamente durante 4 horas, la mezcla se diluyó con DCM (100 mi) y la porción acuosa se retiró. La capa orgánica se lavó con agua (2 x 50 mi) , salmuera, se secó (MgS04) , se filtró y se concentró in vacuo.
El producto crudo se purificó mediante cromatografía sobre sílice eluyendo con 15:01 iso-hexano/dietil éter a 4:1 iso-hexano/dietil éter para proporcionar el 2 - (benzhidriliden-amino) -544- ( (R) -2,2-dimetil-[ 1 , 3 ] dioxolan- 4 - ilmetoxi )- fenil] pentanoni trilo como un aceite amarillo; 1H NMR (CDC13) : mezcla de dias tereoisómeros 1.39 (3H, s) , 1.43 (3H,s) , 1.71 (2H, m) , 1.80-1.98 (2H, m) , 2.52 (2H, tr, J = 7.0 Hz)3.90, (2H, m) , 4.02 (1H, m) , 4.10-4.22 (2H, m) , 4.47 (1H, pent, J = 6.9 Hz) , 6.82 (2H, d, J = 7.4 Hz) , 7.05 (2H, d, J = 7.4 Hz) , 7.19 (2H, m) , 7.35 (2H, tr, J = 7.2 Hz) , 7.40-7.50 (4H, m) , 7.60 (2H, d, J = 7.1 Hz ) .
Paso 6 A una solución de 2 - (benzhidri 1 idene - amino ) -5-[4-((R)-2, 2 -dimet il - [1,3] dioxolan- 4 - ilmetoxi ) -f enil] pentanonitrilo (7.2 g, 15.5 mmol) en THF (50 mi) se agregó HC1 2M (ac) (5 mi) . La solución se calentó a 40°C durante 4 horas y luego se dejó enfriar a temperatura ambiente. El pH se ajustó a pH 9-10 utilizando solución acuosa saturada de carbonato ácido de sodio y el solvente orgánico se eliminó in vacuo. El residuo crudo se disolvió en EtOAC (100 mi) y se lavó con agua, salmuera, se secó (MgS0 ) , se filtró y se concentró in vacuo. El residuo resultante se purificaron mediante cromatografía sobre sílice eluyendo con 5:1 a 1:1 iso-hexano/etilo aEtOAc 1% de trietilamina para proporcionar el 2-amino-5-[4-((R)-2(2 -dimetil - [1,3] dioxolan-4 -ilmetoxi )- fenil] -pentanonitrilo como un aceite incoloro que se solidificó; 1H NMR (CDC13) : mezcla de dias tereoisómeros 1.39 (3H, s), 1.43 (3H,s), 1.70-1.87 (4H, m) , 2.60 (2H, tr, J = 7.1 Hz), 3.62 (1H, br) , 3.90 (2H, m) , 4.00-4.18 (2H, m) , 4.48 (1H, pent, J = 6.9 Hz), 6.82 (2H, d, J = 7.4 Hz), 7.10 (2H, d, J = 7.4 Hz) . [M+H] <+ 305.
Paso 7 Una solución de 2-amino-5- [4- ( (R) -2 , 2-dimet il - [1,3] dioxolan-4 -ilmetoxi) -fenil] -pentanonitrilo (1.7 g, 4.28 mmol) en una solución de amoníaco en metanol 2M (50 mi) se hizo pasar a través de un aparato H-CUBE equipado con un Raney nickel CatCart a 500°C y una presión de hidrógeno de 50 Bar y una magnitud de flujo de 1.5 ml/min. Después de 5 horas de ciclo continuo de la solución, la mezcla de reacción se concentró in vacuo para proporcionar la 5- [4- ( (R) -2,2-dimetil- [1,3] dioxolan-4 - ilmetoxi ) -fenil] -pentano- 1 , 2 -diamina como un aceite amarillo claro; [M+H] + 309.
Intermediario I 5- (4-metoxi-fenil) -pentan-1,2 -di ami a Este compuesto se preparó de manera análoga a Intermediario H al reemplazar ( 3 - [4 - ( ( R) - 2 , 2 -dime t il -1 , 3 ] dioxolan-4 - ilme toxi ) - f enil ] -propan- 1 - ol con 4- (4-metoxifenil) -1-butanol.
Intermediario J 1-Aminometil -ciclopenti lamina Paso 1 A una solución enfriada a 0°C de ter-butil éster del ácido ( 1-ciano-ciclopentil) -carbámico (430 mg, 2.04 mmol) en THF seco (4.3 mi) bajo una atmósfera de argón se agregó gota a gota LiAlH4 1.0 M (6.13 mi, 6.13 mmol) . La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 3.5 horas. La mezcla luego se volvió a enfriar a 0°C y se inactivo cuidadosamente con agua (0.4 mi) :15% de NaOH (0.8 mi) : agua (1.2 mi) (1:2:3 eq) . La mezcla resultante se filtró a través de Celite® (material de filtro) para eliminar los sólidos inorgánicos y se enjuagó con MeOH. El filtrado se concentró in vacuo, para proporcionar un sólido blanco, que se purificó mediante cromatografía sobre sílice eluyendo con MeOH al 30% en DCM para proporcionar el ter-butil éster del ácido (1-aminometil-ciclopentil) -carbámico; [M+H] + 215.
Paso 2 Se agregó gota a gota yodotrimetilsilano (0.091 mi, 0.67 mmol) a una solución de ter-butil éster del ácido ( 1-aminometil-ciclopent il ) -carbámico (120 mg, 0.56 mmol) en DCM (2.4 mi) y se dejó agitar durante la noche. La suspensión resultante se inactivo con MeOH (2.4 mi) y se concentró in vacuo para proporcionar 1-aminometil-ciclopentilamina como un aceite oscuro, que se utilizó sin purificación adicional .
Intermediario K (4-((R)-4,5- diamino -pentil ) - fenol Pasos 1 y 2 Se preparó etil éster del ácido (R)-2-fcer-buto i carbóni lamino- 5 - ( 4 - er-butoxi - feni 1 ) -pentanoico de acuerdo con el procedimiento del Ding, Chuanyong . ; Ma, Rujian.; Rong, Guobin. Preparation of w-Phenyl- (2S) -N-Boc-amino Acid Ethyl esters; Chínese Journal of Organic Chemistry Vol 26(12) 2006, 1694 &1695, reemplazando el Boc -L-piroglutamato de etilo con Boc -D-piroglutamato de etilo y Bromometil -benceno con 1 -bromo- 4 - ter-butoxi -benceno en el Ejemplo 2a, empleando los pasos de preparación 2.2, 2.3, y 2.5; [M+H] + 39 .
Paso 3 Etil éster del ácido (R)-2-ter-butoxicarbonilamino- 5 - ( 4 - ter-butoxi - fenil ) -pentanoico (179 g, 460 mmol) se disolvió en NH3 7M en MeOH (400 mi, 2800 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 4 días. La reacción se concentró in vacuo manteniendo la temperatura por debajo de 30°C para proporcionar el ter-butil éster del ácido [(R)-4-(4-ter-butoxi - feni 1 ) - 1 - carbamoi 1 -butil ] -carbámico [M+H] + 364.
Paso 4 Una solución de ter-butil éster del ácido [ (R) -4- ( 4 - ter-butoxi - feni 1 ) - 1 - carbamoi 1 - but il ] -carbámico (167 g, 458 mmol) en HC1 1 M en Et20 (4000 mi) se agitó a temperatura ambiente durante 3 días.
Después de este tiempo, se formó un sólido blanco que se recolectó mediante filtración y se lavó con Et20 para proporcionar la amida del ácido ( R) - 2 - amino - 5 -( 4 - idroxi - f enil ) -pentanoico ; [M+H] + 209.
Paso 5 A una solución agitada de amida del ácido ( R) - 2 - amino- 5 -( 4 - hidroxi - f enil ) - pentanoico (5 g, 24.01 mmol) en THF (250 mi) se agregó imidazol (4.90 g, 72 mmol) , seguido por ter-butildimetilclorosilano (3.98 g, 26.4 mmol) . La solución resultante se calentó a 70°C durante 4 horas y luego se dejó enfriar a temperatura ambiente. La dilución con Et20 (200 mi) lavando con agua (2 xlOO mi) y salmuera (100 mi) , secando con MgS04 , y la concentración in vacuo proporcionó la amida del ácido ( R) - 2 - amino - 5 - [ 4 - ( ter-butil -dimetil- silaniloxi) -fenil] -pentanoico; [M+H] + 323.
Paso 6 Una solución de amida del ácido (R) -2-amino-5 [4- ( t er-but il - dimet i 1 - s i lani loxi ) -fenil] -pentanoico (7.74 g, 24 mmol) en THF se agitó a 5 °C y se agregó borano (96 mi de una solución 1 M en THF, 96 mmoles) . La mezcla se agitó a 5°C hasta obtener una mezcla homogénea y luego se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos y 35 °C durante 3 horas. Después de este tiempo, se agregó borano adicional (24 mi de una solución 1 en THF , 24 mmoles) y la reacción se calentó a 35°C durante 18 horas. Después de este tiempo, se agregó una porción adicional de borano (24 mi de una solución 1 M en THF, 24 mmoles) y la reacción se calentó a 35°C durante otras 24 horas. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a 10°C, y se inactivo mediante la adición gota a gota a MeOH (50 mi) a -5°C. Después de dejar calentar a temperatura ambiente, el solvente se retiró in vacuo para proporcionar un aceite amarillo. El aceite se disolvió en MeOH (250 mi) y se agregó SCX-2 sílice (180 g, 0.63mmol/g, 120 mmol) . La suspensión de sílice se agitó durante 18 horas, la sílice se retiró mediante filtración, se lavó con MeOH (3 x 100 mi), luego se suspendió en NH3 7M en MeOH y se agitó durante 18 horas. La sílice se retiró mediante filtración y el NH3 7M en MeOH se retiró in vacuo para proporcionar el compuesto del título como un aceite amarillo; [M+H] + 195.
Intermediario L 4- ( (S) - 4 , 5 - diamino -penti 1 ) -fenol Este compuesto se preparó de manera análoga al Intermediario K ( NVP -QBM333) , reemplazando el Boc-D-piroglutamato de etilo en el paso 1 con Boc-1-piroglutamato de etilo; [M+H] + 195.
Intermediario M 5 - ( 4 - hidroxi fenil ) pentan- 1 , 2 - diildicarbamate de (R) -ter-butilo A una solución de ( 4 - ( (R) -4 , 5 -diamino-pent il )- fenol (Intermediario K) (775 mg, 1.99 mmol) en DCM (10 mi) se agregó trietilamina (1.14 mi, 8.08 mmol) y una solución de dicarbonato de di - er-butilo (1.33 g, 6.08 mmol) en DCM (10 mi) y la solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. El solvente se eliminó in vacuo y el residuo se purificó mediante cromatografía (Si02, EtOAc/iso-hexano) para proporcionar el compuesto del título; [M+H] + 395.
Intermediario N 5 - (4 -hidroxi fenil ) entan- 1 , 2 - diildicarbamato de (S)-ter-butilo Este compuesto se preparó de manera análoga al Intermediario H, 5 -( 4 -hidroxif eni 1 ) pentan- 1 , 2 -diildicarbamato de (R) - ter-but ilo sustituye al Intermediario K, ( 4 - ( ( R ) - 4 , 5 - diamino -pent i 1 ) - f enol con el Intermediario L, 4 - ( ( S ) - 4 , 5 - diamino-pent i 1 ) -fenol ; [M+H] + 395.
Intermediario 0 (R) -3 - [4- ( (R) -4, 5 -diamino -pentil ) - f enoxi] -propan- 1,2-diol Paso 1 Se agregaron trietilamina (8.37 µ?, 0.06 mmol) y (R) - ( + ) -glicidol (96 µ?, 1.442 mmol) a una solución de 5 -( 4 - hidroxi feni 1 ) pentan- 1 , 2 -diildicarbamato de (R) - ter-Jbut i lo (Intermediario M) (474mg, 1.20 mmol) en EtOH (5 mi) y la solución resultante se calentó a 90°C durante 18 horas. La reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró in vacuo. La purificación mediante cromatografía (Si02, EtOAc/ iso-hexano) proporcionó el ter-butil éster del ácido { (R) -2-ter- butoxicarbónilamino- 5 -[4-((R)-2,3 - dihidroxi -propoxi ) -fenil] -pentil-carbámico} ; [M+H] + 469.
Paso 2 Se agitó ter-butil éster del ácido {(R)-2-ter-Butoxicarbóni lamino -5- [4- ( (R) -2,3- dihidroxi -propoxi) -fenil] -pentilo} -carbámico (94 mg, 0.201 mmol) con una solución de HC1 1 en Et20 (3 mi) durante 18 horas y luego se cargó en un cartucho SCX-2 1 g lavado con MeOH (30 mi) , seguido por NH3 7M en MeOH (30 mi) . La fracción de NH3 se concentró in vacuo para proporcionar el compuesto del título, (R) -3-[4-((R)-4,5- diamino -pent i 1 ) - feno i ] -propan- 1 , 2 - dio1 intermediario H ( R) - 3 - [4 - ( (R) - 4 , 5 - diamino-pent i 1 ) -fenoxi] -propan- 1 , 2 -diol ; [M+H] + 269.
Intermediario P (R) -3 - [4- ( (S) -4,5- diamino -pentil ) - fenoxi ] -propan- 1 , 2 -diol Este compuesto se preparó de manera análoga al Intermediario O reemplazando el 5- (4-hidroxi fenil ) pentan- 1 , 2 - di i ldicarbamato de (R)-fcer-butilo (Intermediario M) con 5- (4-hidroxifenil ) pentan-1 , 2 - di i ldicarbamato de (S)-ter-butilo (Intermediario N) ; [M+H] + 269.
Intermediario Q 2 - [4 - ( (R) - 4,5-diamino-pentil) - fenoxi] - l-morfolin-4-i 1 - etanona 5 - ( 4 - hidroxifenil ) entan - 1 , 2 -dii Idicarbamato de (R) - ter-but ilo (Intermediario ) (446 mg, 0.565 mmol) se disolvió en DMF (10 mi) y Cs2C03 (368 mg, 1.131 mmoles) y 2 -bromo- 1 -morf olinetanone (118 mg, 0.565 mmol) . La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 40 minutos, luego se diluyó con agua (20 mi) y se extrajo con EtOAC (2 x 50 mi) . Las capas orgánicas se secaron sobre MgS0 y el solvente se concentró in vacuo para proporcionar un aceite claro. La purificación mediante cromatografía en un sistema de HPLC preparativa aters 3000 (MicrosorbMR C18 Agua/MeCN +0.1% de TFA) proporcionó un aceite claro, que se disolvió en dioxano (4 mi) y se trató con HC1 4 M en dioxano (4 mi) y se agitó a temperatura ambiente durante 4 días. La concentración in vacuo proporcionó una espuma blanca que se disolvió en eOH (3 mi) y se cargó sobre un cartucho SCX-2 10 g que se lavó con MeOH (60 mi) y NH3 7M en MeOH(60 mi) . Las fracciones de NH3 se combinaron y se concentraron in vacuo para proporcionar el compuesto del título como un aceite incoloro; [M+H] + 322.
Intermediario R 5 - (4 -metoxi - fenil ) -hexan- 1,2- di mina Este compuesto se preparó de manera análoga al Intermediario I sustituyendo 4 - (4-metoxifenil) -1-butanol con 4 - ( 4 -metoxifenil ) - 1 -pentanol .
Intermediario S Bencil éster del ácido ( ( S ) - 4 , 5 - diamino -pentil ) -carbámico Paso 1 Se agregó HC1 concentrado (15 mi) a una suspensión de Na- BOC - 8 - ZL- orni t ina (5.00 g, 13.65 mmol) en 2 , 2 - dimetoxipropano (150 mi) . Se presentó una endoterma y la solución resultante se dejó agitar a temperatura ambiente durante 6 horas . El solvente se redujo entonces in vacuo a aproximadamente 50 mi y se agregó dietiléter (100 mi) para tornar la solución turbia. En agitación se formó una suspensión espesa blanca. El sólido blanco se recolectó mediante filtración y se lavó con dietiléter (100 mi) . El sólido blanco se disolvió en MeOH (30 mi) y se agregó dietiléter (200 mi) para precipitór un sólido blanco que se recolectó mediante filtración y se lavó con dietiléter. El sólido se disolvió en DCM y se lavó con NaOH 2 N (75 mi) . La fase orgánica se secó sobre MgS04 y el solvente se evaporó in vacuo para proporcionar el metil éster de ácido ( S ) - 2 - amino - 5 -benciloxicarbonilamino-pentanoico como un aceite incoloro; [M+H] + 280.78.
Paso 2 Metil éster del ácido ( S ) - 2 - amino - 5 -benciloxicarbonilamino-pentanoico (2.80 g, 9.99 mmol) y NH3 7M en MeOH (20 mi) se agitó a temperatura ambiente durante 72 horas. La mezcla de reacción se evaporó a sequedad in vacuo para proporcionar un sólido blanco. El sólido blanco se suspendió en dietiléter antes de la filtración y secado para proporcionar el bencil éster del ácido ( ( S ) - 4 - amino-4 - carbamoi 1 - but i 1 ) -carbámico.
Paso 3 Bencil éster del ácido ( ( S ) - 4 - amino - 4 -carbamoil-butil) -carbámico (1.87 g, 7.071 mmol) se suspendió en THF seco (40 mi) y se enfrió a 10°C en un baño helado bajo nitrógeno. Se agregó borano (28.3 mi de una solución 1 M en THF, 28.3 mmol) . El baño helado se retiró y la suspensión se calentó a 70°C y luego se dejó agitar a esta temperatura durante 3 horas. Luego se agregó borano adicional (28.3 mi de una solución 1 M en THF , 28.3 mmoles), después de una hora se agregó nuevamente la misma cantidad de borano 1M en THF. Después de una hora final a 70°C, la mezcla de reacción se inactivo con eOH (40 mi) . El solvente se redujo in vacuo y 50 mi. Esto se diluyó con HC1 5 M (100 mi) y se lavó con dietiléter (3 x 100 mi) . La fase acuosa se hizo básica a pH 12 con NaOH 2N y el producto se recolectó en EtOAC (3 x 100 mi) . Las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre MgS04 y el solvente se evaporó in vacuo para proporcionar el compuesto del título como un aceite incoloro.
Intermediario T [ (S) -4- ( 4 - amino -but i 1 ) - imidazolidin- (2E) -iliden] -amida del ácido 3 , 5 -diamino - 6 - cloro -pirazin- 2 -carboxí 1 ico A una suspensión de bencil éster del ácido (4-{ (S) -2 - [(E) -3, 5-diamino -6-c loro -pirazin-2-carboni 1 imino] - imidazol idin- 4 - ibenzoil } -but il ) -carbámico (Ej. 5) (0.110 g, 0.239 mmol) en DCM seco (20 mi) se agregó yodotrimetilsilano (0.130 mi, 0.956 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3.5 horas . Se agregó a la suspensión meOH proporcionando una solución. La purificación mediante resina de captura y liberación (SCX-2) eluyendo con MeOH y NH3 7 M en MeOH proporcionó el compuesto del título como un aceite marrón; [M+H] + 327.1 Intermediario ü ter-butil éster del ácido 4 - mino- 4 - aminometil -piperidin- 1- carboxí lico Paso 1 A una solución de ter-butil éster del ácido 4 - amino - 4 - ciano-piperidin- 1 - carboxí lico (11.5 g, 51.0 mmol) en piridina (20 mi) a 0°C se agregó lentamente anhídrido trif luoroacético (11.0 mi) y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 4 horas. La mezcla de reacción se diluyó con DCM, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2S04 y se concentró in vacuo. El residuo obtenido se disolvió en DCM y se re-precipitó al agregar petróleo éter. La mezcla del solvente sobrenadante se decantó y el producto se lavó nuevamente con petróleo éter y se secó bajo vacío para proporcionar el ter-butil éster del ácido 4-ciano-4- ( 2 , 2 , 2 - tri f luoro- acetilamino) -piperidin- 1 -carboxílico como un aceite; 1H NMR (d<j-DMSO) : 1.40 (9H, s) , 1.81-1.88 (2H, m) , 2.26-2.32 (2H, m) , 2.99-3.15 (2H, m) , 3.793.82 (2H, m) , 10.1 (1H, s) .
Paso 2 A una solución de ter-butil éster del ácido c iano- 4 - (2,2,2-trif luoro- acet i lamino ) -piperidin-1-carboxílico (10.0 g, 31.0 mmol) en EtOH(150 mi) se agregó níquel Raney (-1.5 g) y la mezcla de reacción se agitó bajo una atmósfera de hidrógeno durante 3 días. Se agregó una cantidad adicional de níquel Raney (-1.5 g) y la mezcla de reacción se agitó adic ionalmente durante 2 días. La mezcla de reacción se filtró a través de un tapón de CeliteMR (material de filtro) y el filtrado se concentró in vacuo para obtener el ter-butil éster del ácido 4 -aminomet il - 4 -(2, 2, 2-trif luoro-acetilamino) -piperidin-1 - carboxí lico como un aceite viscoso que se utilizó crudo sin purificación adicional.
Paso 3 Ter-butil éster del áciod 4 - amino- - aminometil -piperidin- 1- carboxí lico A una solución de ter-butil éster del ácido 4 - aminomet il - 4 - (2,2,2 - tri f luoro - acet i lamino ) -piperidin- 1- carboxí lico en MeOH(70 mi) se agregó una solución acuosa al 30% de amoníaco (70 mi) y la mezcla de reacción se agitó a 80°C durante la noche. La mezcla de reacción se concentró ín vacuo al ter-butil éster del ácido 4 -amino-4 -aminometil -piperidin-1-carboxílico como un aceite marrón que se utilizó crudo sin purificación adicional; [M+H] + 230.
Intermediario V Ácido 3- (3 - isopropoxi -propilsulfamoil) -benzoico Se disolvió 3 - isopropoxipropilamina (1.1 eq.) en THF con agitación a temperatura ambiente. Se agregó N, N-diisopropilet i lamina (1 eq.) seguida por ácido metil 3 -( c lorosul foni 1 ) benzoico (1 eq.) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas antes de que el solvente se evaporara in vacuo para proporcionar el producto crudo del título .
Intermediario W Ácido 3- ( 3 - isopropil -ureido) -benzoico Una suspensión de ácido 3 - aminobenzoico (20 g, 145.8 mmol) en THF (300 mi) se calentó a 60°C para formar una solución clara. Se agregó durante 30 minutos i-propilisocianato (14.9 g, 175 mmol) . Durante la adición, el producto comenzó a precipitarse. Después de completar la adición, se agregó tolueno (300 mi) . La mezcla de reacción se agitó a 60°C durante 4.5 horas. El baño de calentamiento se retiró y la mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Por último, la suspensión se filtró y se lavó con una mezcla de 1:1 THF: tolueno (200 mi) . El producto se secó a 60°C durante 18 horas para proporcionar el áciod 3- (3-isopropil -ureido) -benzoico.
Intermediario X Ácido 5-oxo-l- (3-pirrol-l-il-propil) -pirrolidin- 3 -carboxí lico Paso 1 A una solución de metil éster del ácido 5-oxo-pirrolidin- 3 -carboxí lico (1 eq.) en DMF seca se agregó NaH (1.1 eq.) seguida por 1 - ( 3 -bromo - propi 1 ) -??-pirrol (1 eq.) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La purificación se realizó mediante cromatografía de fase normal para proporcionar el metil éster del ácido 5-oxo-l- (3-pirrol-l-il-propil) -pirrolidin- 3 -carboxí lico .
Paso 2 A una solución enfriada (0°C) de metil éster del ácido 5 - oxo- 1 -( 3 -pirrol - 1 - il -propil ) -pirrolidin-3 - carboxí 1 ico en THF, se agregó LiOH 0.2 M y RM se agitó durante 3 horas calentando gradualmente a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se acidificó con HC1 1N y el producto se extrajo en acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y el solvente se evaporó in vacuo para proporcionar el áciod 5-oxo-l- ( 3 -pirrol - 1 - il -propil ) -pirrolidin- 3 -carboxí lico .
Intermediario Y Ácido 2- ( 3 - isopropil -ureido) - isonicotínico Paso 1 A una solución 2 -aminoisonicot inato de etilo (500 mg, 3.01 mmol) en DMF (10 mi) se agregó trietilamina (1.26 mi, 9.03 mmol) y luego isocianato de isopropilo (512 mg, 6.02 mmol) . La mezcla de reacción se calentó en un horno de microondas a 140°C durante 2 horas. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc, se lavó con agua (X5) , salmuera, se secó (MgS0 ) y se concentró in vacuo. La cromatografía (Si02/ MeOH/DC ) proporciono el etil éster del ácido 2 - ( 3 - isopropil -ureido) - isonicot ínico ; [M+H] + 252.
Paso 2 A una solución de etil éster del ácido 2- (3-isopropil-ureido) - i sonicot ínico (130 mg , 0.52 mmol) en MeOH (5 mi) se agregó NaOH 2 M (2.5 mi) y la solución resultante se agitó durante 1.5 horas a temperatura ambiente. El solvente se retiró in vacuo y se agregó solución ac . sat . de NH4C1. El pH de la fase acuosa se ajustó a 1 utilizando HC1 1 M y el producto se extrajo en EtOAc, se secó (MgS04) el solvente se eliminó in vacuo para proporcionar el ácido 2 -( 3 - isopropil -ureido) - isonicot ínico como un sólido blanco; [ M+H] + 224.
Intermediario Z Ácido 1 - isopropilcarbamoil - 1H- indol - 4 - carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Intermediario Y al reemplazar 2-aminoisonicotinato de etilo en el paso 1 con indol-4-carboxilato de metilo; [M+H] + 247.
Intermediario AA Ácido 4- (3 -isopropil-ureido) -benzoico Este compuesto se preparó de manera análoga al Intermediario Y al reemplazar 2-aminoisonicot inato de etilo en el paso 1 con 4-aminobenzoato de metilo; [M+H] + 237.
Intermediario AB Áci do - 6 - ( 3 - i sopropi 1 - ureido ) -nicotínico Este compuesto se preparó de manera análoga al Intermediario Y al reemplazar 2-aminoisonicotinato de etilo en el paso 1 con 6-aminonicot inato de metilo; [M+H] + 224.
Intermediario AC Ácido - [4- (2 -metoxi - etoximetoxi ) -fenil] -acético Paso 1 A una solución de 4 -hidroxif enilacetato de metilo (200 mg , 1.20 mmol) en DCM (5 mi) se agregó DIPEA (0.315 mi, 1.81 mmol) y luego MEMC1 (0.204 mi, 1.81 mmol) , y la mezcla de reacción resultante se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente. Se agregaron una porción adicional de MEMC1 (0.102 mi, 1 mmol) y DIPEA (0.158 mi, 1 mmol) , y la mezcla de reacción se agitó durante otras 16 horas. Se agregaron una porción adicional de MEMC1 (0.102 mi, 1 mmol) y de DI PEA (0.158 mi, 1 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 3 horas. La mezcla de reacción se diluyó con DCM y se lavó con HC1 0.5 M, NaOH 1 M y luego HCl 0.5 M, se secó (MgS0 ) y se concentró in vacuo para proporcionar el metil éster del ácido [4 - ( 2 -me toxi - etoximetoxi ) - f enil] -acético .
Paso 2 A una solución de metil éster del ácido [4-( 2 -metoxi - etoximetoxi )- fenilacét ico (192 mg, 0.76 mmol) en MeOH (3 mi) se agregó NaOH 2 M (3 mi) . La mezcla de reacción se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente. El solvente se eliminó in vacuo y el residuo se disolvió en EtOAc y se lavó con solución de NH4C1, se secó (MgS04) y se concentró in vacuo para proporcionar el ácido [4 - ( 2 -metoxi -etoximetoxi) -fenil] -acético.
Intermediario AD Ácido 3- [4- ( 2 -metoxi - etoximetoxi ) -fenil] -propiónico Este compuesto se preparó de manera análoga al Intermediario CA sustituyendo de 4-hidroxif enilacetato metilo en el paso 1 con metil-3-(4 -hidroxifenil) propionato .
Intermediario AE Ácido 3-{4 [2- (tetrahidro-piran-2 -iloxi) -etoxi] -feni 1 ) -propiónico Paso 1 3 - (4 -hidroxifenil ) propianoato de metilo (0.1 g, 0.55 mmol) se disolvió en DMF (5 mi) y se agregó NaH(0.033 g de una dispersión al 60% en aceite mineral, 0.83 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos, luego se agregó 2 -( 2 -brometoxi ) tetrahidro- 2 -H-piran (0.109 mi, 0.72 mmol) y la mezcla de reacción se dejó agitar durante 18 horas. La dilución con EtOAC (50 mi) , lavando con agua (25 mi) , NaHC03 saturado (25 mi) y salmuera (25 mi) , secando sobre MgS04, y la concentración in vacuo proporcionó el metil éster de ácido 3 - { 442 - ( tetrahidro-piran- 2 - iloxi ) - etoxi ] -fenillpropionic como un aceite incoloro; [M+H] + 309.
Paso 2 Metil éster del ácido 3 - { - [ 2 - ( te t rahidro -piran- 2 - iloxi )- etoxi ] - feni 1 } -propiónico (0.12 g, 0.39 mmol) se disolvió en MeOH (3 mi) y se agregó una solución de NaOH 2M (3 mi) y la solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. La mezcla de reacción se diluyó con solución saturada de cloruro de amonio (20 mi) y se extrajo con EtOAC (100 mi x 2) . Las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre MgS04( el solvente se eliminó in vacuo para proporcionar el compuesto del título como un aceite incoloro; [ +H] + = 295.
Intermediario AF Ácido 3- [4- (piridin-4 -ilmetoxi) -fenil] -propiónico Paso 1 A una solución de 3- (4-hidroxi fenil ) propanoato de metilo (0.5 g, 2.77 mmol) en DMF seca (10 mi) se agregó carbonato de potasio (0.76 g, 5.55 mmol) seguido por bromhidrato de 4-(bromometil) piridina (0.7 g, 2.77 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche, luego se vació en agua (80 mi) y se extrajo con EtOAC (40 mi) . La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó (MgS04) y el solvente se eliminó in vacuo para proporcionar un aceite marrón oscuro. La cromatografía (Si02, EtOAc) proporcionó el metil éster del ácido 3 - [4 - (piridin- 4 - ilmetoxi ) - f eni 1] -propiónico como un aceite incoloro; [M+H] + 272.0.
Paso 2 A una solución de metil éster del ácido 3- [4- (piridin- 4 - ilmetoxi )- fenil ] -propiónico (0.28 g, 1.03 mmol) en THF (5 mi) y MeOH (5 mi) a temperatura ambiente, se agregó LiOH 2N (0.52 mi, 1.032 mmol) y la solución resultante se agitó durante la noche. Además se agregó LiOH 2N (0.103 mi) y la mezcla de reacción se agitó durante 1 hora más. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y el residuo se diluyó con agua (50 mi) seguida por EtOAc . La fase acuosa se acidificó a pH 2 con HC1 1N, y se extrajo con DCM. La fase orgánica se concentró a un tercio de su volumen in vacuo hasta que se precipitó un polvo blanco que se recolectó mediante filtración para proporcionar el compuesto del título; [M+H] + 258.0.
Intermediario AG Ácido 3- (4 - ter-butoxicarbonilmetoxi - fenil) -propiónico Paso 1 A una solución agitada de 3- (4-hidroxif enil ) propanoato de metilo (2 g, 11.10 mmol) en DMF seca (30 mi) se agregó a temperatura ambiente carbonato de potasio (1.53 g, 10 mmol) seguido por 2-bromoacetato de ter-butilo (2.17 g, 11.10 mmol) . La mezcla de reacción se purgó con nitrógeno, luego se tapó y se dejó agitar a temperatura ambiente durante 7 días. La mezcla de reacción se vació en agua (200 mi) y se extrajo con EtOAC (100 mi), se lavó con salmuera, se secó (MgS04) , se filtró y se evaporó in vacuo para proporcionar un aceite amarillo pálido. La cromatografía instantánea (Si02, EtOAc/ iso-hexano) proporcionó metil éster del ácido 3-(4-ter-butoxicarbonilmetoxi - fenil ) -propiónico como un aceite claro .
Paso 2 A una solución de metil éster del ácido 3- (4-ter-Butoxicarbonilmetoxi - fenil) -propiónico (2.70 g, 9.17 mmol) en THF (80 mi) se agregó hidróxido de litio 0.2 N (45.9 mi, 9.17 mmol) a 0°C y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 4.5 horas. Se agregó HC1 1M (15 mi) y el producto se extrajo utilizando EtOAC (x3) . La fase orgánica se secó (Na2S04) y se concentró in vacuo para proporcionar un sólido blanco. La cromatografía instantánea (Si02, EtOAc al 10% en CH2C12, luego 20% de EtOAc en CH2C12) proporcionó el ácido 3 - ( 4 - ter-Butoxicarboni lmetoxi -fenil ) -propiónico como un sólido blanco.
Intermediario AH Ácido 3- (4 - carbamoilmetoxi - fenil ) -propiónico Este compuesto se preparó de manera análoga al Intermediario AG al reemplazar 2 -bromoacetato de ter-butilo en el paso 1 con 2 -bromoacetamida ; [ +H] + 530.1.
Intermediario IA Etil áster del ácido 1- [4- (2-carboxi-etil) -fenoxi] -ciclobutancarboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Intermediario AG al reemplazar de 2 -bromoacetato de ter-butilo en el paso 1 con 1 - bromocic lobutan-carboxilato de etilo; [M+H] + 293.0.
Intermediario AJ Ter-butil éster del ácido 2- [4- (2-carboxi-etil) -fenoxi 1 - 2 -metil -propiónico Este compuesto se preparó de manera análoga al Intermediario AG al reemplazar 2 - bromoacetato de ter-butilo en el paso 1 con 2 -bromoisobutirato de ter-butilo. H NMR (DMSO-d6) : 1.40 (9H, s) , 1.48 (6H, s) , 2.49 (2H, t, J = 7.5) , 2.75 (2H, t, J = 7.5), 6,71 (2H, d, J = 8.5), 7.11 (2H, d, J = 8.50) , 12.10 (1H, s) .
Intermediario AK Ácido 3- (4 -metoxicarbonilmetoxi- fenil) -propiónico Paso 1 A una solución de ácido 3- (4-hidroxi f enil ) propanoico (3.32 g, 20 mmol) en DMF seca (20 mi) se agregó cuidadosamente en porciones 1,1'-carbonildiimidazol (3.24 g, 20 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a 40°C durante 2 horas después de lo cual se agregaron DBU (6.02 mi, 40 mmol) y ter-butanol (4.78 mi, 50 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a 65°C durante 2 días. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se vació en agua (50 mi) y el producto se extrajo con dietiléter (3 x 30 mi) . Los orgánicos se combinaron, se secaron ( gS04) y el solvente se eliminó in vacuo para proporcionar un aceite amarillo. La purificación mediante cromatografía instantánea (Si02, EtOAc/iso-hexano) proporcionó el ter-butil éster del ácido 3- ( 4 - hidroxi - feni 1 )- ropiónico como un aceite incoloro. XK NMR (DMSO-d6) 9.1 (1H, s) , 7.0 (2H, d, J = 8.45), 6.65 (2H, d, J = 8.45), 2.7 (2H, t, J = 7.28), 2.4 (2H, t, J = 7.28) , 1.4 (9H, s) .
Paso 2 A una solución de ter-butil éster del ácido -( 4 - hidroxi - feni 1 ) -propiónico (1 g, 4.50 mmol) en DMF seca (20 mi) a temperatura ambiente bajo argón se agregó carbonato de potasio (0.62 g, 4.50 mmol) seguido por bromoacetato de metilo (0.43 mi, 4.50 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con agua, se secó (MgS04) y se evaporó in vacuo para proporcionar un líquido incoloro claro. La purificación en una Sistema de HPLC preparativa Waters 3000 (C 18, MeCN/agua) proporcionó el ter-butil éster del ácido 3 - ( 4 -metoxicarboni lmetoxi -fenil ) -propiónico como un aceite amarillo pálido.
Paso 3 A ter-butil éster del ácido 3- (4-metoxicarbonilmetoxi - fenil ) -propiónico (0.097 g, 0.33 mmol) se agregó una solución de TFA al 90% en DCM (2 mi) y la solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. El solvente se eliminó in vacuo para proporcionar el ácido 3- (4-metoxicarbonilme toxi - feni 1 ) -propiónico como un polvo blanquecino; [M+H-18]+ 256.0 Intermediario AL Ácido 3- [4- (2-propoxicarbonil-etil) -fenil] -propiónico A una solución del ácido 3 , 3 ' - ( 1 , 4 - f enilen) dipropanoico (250 mg , 1.125 mmol) DCM (15 mi) se agregó 4 -dimet ilaminopiridina (137 mg, 1.125 mmol) y propanol (3 mi, 40.1 mmol) . La solución se enfrió a 0°C y se agregó diciclohexilcarbodiimida (232 mg , 1.125 mmol) y la solución resultante se agitó a 0°C durante 30 minutos y 2 horas a temperatura ambiente. La concentración in vacuo proporcionó un sólido blanco que se suspendió en Et20 (50 mi) y se filtró para eliminar cualquier material insoluble . El filtrado se concentró in vacuo y la purificación mediante cromatografía (Si02, EtOAc/ iso-hexano) proporcionó el compuesto del título.
Intermediario AM Ácido 3- [4- (2-etoxicarbonil-etil) -fenil] -propiónico Este compuesto se preparó de manera análoga al Intermediario AL sustituyendo propanol con etanol .
Intermediario AN Ácido 3-14- (2 -metoxicarbonil -etil) -fenil] -propiónico Este compuesto se preparó de manera análoga al Intermediario AL reemplazando propanol con metanol .
Intermediario AO Ácido 1- (2 - fenoxi - etil ) - 1H- indol -4 - carboxí lico Paso 1 Se agregó NaH (60% de dispersión en aceite mineral, 68.5 mg, 1.71 mmol) a la solución de indol-4 - carboxi lato de metilo (200 mg, 1.142 mmol) en DMF (5 mi) y la suspensión resultante se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos. Después de este tiempo se agregó ( 2 -bromoetoxi ) benceno (298 mg, 1.484 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. La dilución con EtOAC (50 mi) y el lavado con agua (25 mi x 2) , NaHC03 saturado (25 mi) y salmuera (25 mi) , secado sobre MgS04, concentración in vacuo y la purificación mediante cromatografía (Si02, EtOAc/ íso-hexano ) proporcionó el metil éster del ácido 1 - ( 2 - fenoxi - et i 1 ) - 1H - indol - 4 -carboxí lico ; [M+H] + 296.
Paso 2 Se suspendió metil éster del ácido l-(2-f enoxi - et i 1 ) - 1H- indol -4 - carboxí 1 ico (185 mg, 0.626 mmol) en una mezcla de MeOH (3 mi) y NaOH 2 M (2 mi) . La suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, Se agregó THF (1 mi) y la reacción se calentó a 60°C durante 1 hora. La reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se diluyó con solución sat . de NH4C1 (10 mi), se extrajo con EtOAC (10 mi x 3) , se secó sobre MgS04 , y se concentró in vacuo para proporcionar el compuesto del título; [ +H] + 282.
Intermediario AP Ácidol- ( 2 -p- tolil - et il ) - 1H- indol -4 - carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Intermediario AO reemplazando el (2-bromoetoxi ) benceno con bromuro de 4 -metilf enetilo; [M+H] + 280.
Intermediario AQ Ácido 1- [2- ( tetrahidro-piran-2 -iloxi) -etil] -lH-indol-4 - carboxí 1 ico Este compuesto se preparó de manera análoga al Intermediario AO reemplazando el (2-bromoe toxi ) enceno con 2 - ( 2 -bromoetoxi ) tetrahidro-2H-pirano; [M+H] + 290.
Intermediario AR Ácido 1- [2 - (4-metoxi-fenoxi) -etil 1] - 1H- indol - 4 -carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Intermediario AO reemplazando el (2-bromoe toxi ) benceno con 1 - ( 2 -bromoe toxi ) - 4 -metoxibenceno ; [M+H] + 312.
Intermediario AS Ácido 1 [2 - (4 - er-but il - fenoxi ) - eti 1] - 1H- indol - 4 -carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Intermediario AO reemplazando el (2-bromoe toxi ) benceno con 1 -( 2 -bromoetoxi )- 4 - er-but i Ibenceno ; [M+H] + 338.
Intermediario AT Ácido 1- (2- [1# 3] dioxan-2-il-etil) -lH-indol-4-carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Intermediario AO reemplazando el (2-bromoetoxi ) benceno con (2-brometil) 1.3-dioxano; [M+H] + 276.
Intermediario AU Ácido 2,3-Diineti 1 - [ 2 - ( tetrahidro -piran- 2 - iloxi ) -etil] - 1H - indol - 5 - carboxí 1 ico Este compuesto se preparó de manera análoga al Intermediario A reemplazando el (2-bromoe toxi ) benceno con ( 2 -( 2 -bromoetoxi ) tetrahidro-2H-pirano y sustituyendo el indol - 4 - carboxi lato de metilo con 2 , 3 -dimet il - 1H- indol - 5 - carboxilato ; [M+H] + 318.
Intermediario AV Ácido 1- (4 , 4 , 4 - trimetoxi -butil ) - 1H - indol - 4 -carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Intermediario AO ácido 1 - ( 2 - f enoxi - et il ) - 1H - indol -4 - carboxí 1 ico reemplazando el ( 2 -bromoetoxi ) benceno con 4 -bromoortobut irato trimetilo. intermediario AW Ácido 1- [2- ( 2 -metoxi - etoximetoxi ) -etil] - 1H - indo1 - 4 -carboxí lico Paso 1 se agregó NaH (60% de dispersión en aceite mineral, 86 mg , 2.14 mmol) a una solución de indol-4- carboxilato de metilo (250 mg, 1.427 mmol) en DMF (20 mi) y la suspensión resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Después de este tiempo se agregó ( 2 -( 2 -bromoetoxi ) tetrahidro- 2H-pirano (388 mg, 1.86 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 22 horas. La dilución con EtOAC (50 mi), lavando con agua (25 mi x 3), NaHC03 saturado (25 mi x 2) y salmuera (25 mi), secando sobre MgS04, concentración ín vacuo y purificación mediante cromatografía (Si02, dCM/MeOH) proporcionó el metil éster del ácido 1 [2 - ( tetrahidro-piran- 2 - iloxi ) - et il ] -lH-indol-4 - carboxí 1 ico ; [M+H] + 304.
Paso 2 A una solución de metil éster del ácido 1 [2- ( tet ahidro - piran- 2 - i loxi ) -etil] -lH-indol-4-carboxílico (120 mg, 0.396 mmol) en MeOH (10 mi) se agregó ácido p- toluensulfónico monohidratado (7.25 mg, 0.04 mmol) . La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas y el solvente se retiró in vacuo. El residuo se disolvió en MeOH (3 mi) y se cargó en un cartucho PEAX de 1 g lavado con MeOH (20 mi) . El filtrado se concentró in vacuo para proporcionar el metil éster del ácido 1- (2-hidroxi-etil) -lH-indol-4-carboxílico; [M+H] + 220.
Paso 3 A una solución de metil éster del ácido -(2-hidroxi - et il ) - 1H - indol - 4 - carboxí lico en DCM (3 mi) se agregó D I PEA (0.129 mi, 0.739 mmol) y 1 -clorometoxi-2 -me toxi - e taño (0.084 mi, 0.739 mmol) . La solución se agitó a temperatura ambiente durante 72 horas. La reacción se diluyó con DCM (50 mi) y se lavó con HC1 0.5 M (20 mi) , NaOH 1 M (20 mi) y HC1 0.5 M (20 mi) . La capa orgánica se secó sobre MgS04 y el solvente se retiró in vacuo. La purificación mediante cromatografía (Si02, DCM/MeOH) proporcionó el metil éster del ácido 1- [2- ( 2 -metoxi-etoximetoxi ) -etil] -1H-indol - 4 - carboxí lico ; [M+H] + 308.
Paso 4 A una solución de metil éster del ácido 1- [2-( 2 -metoxi - etoximetoxi ) -etil] - 1H- indol - 4 - carboxí lico (69 mg, 0.225 mmol) en MeOH (2 mi) se agregó NaOH 2 M (1 mi) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 19.5 horas, luego, durante 2 horas a 50°C. La reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y el solvente se eliminó in vacuo. Al residuo se agregó NH4C1 sat. (10 mi) , y el producto se extrajo con EtOAC (5 x 25 mi) , se lavó con salmuera (10 mi) , se secó sobre Na2S04, y el solvente se retiró in vacuo, para proporcionar el compuesto del título ácido 1- [2- ( 2 -me toxi - e toximetoxi ) -etil] -lH-indol-4-carboxílico; [ +H] + 294.
Intermediario AX Ácido 1 -diet ilcarbamoilmetil - 1H- indol -4 - carboxí lico Paso 1 Se disolvieron indol - 4 - carboxi lato de metilo (50 mg, 2.85 mmol) y 2 - c loro - , - diet i lace tamida (854 mg, 5.71 mmol) en DMF (10 mi) y a la solución se agregó carbonato de potasio (986 mg, 7.14 mmol) . La reacción se calentó utilizando radiación de microondas a 100°C durante 2 horas, luego se diluyó con DCM (60 mi) y se lavó con agua (5 x 10 mi) . El secado sobre MgS04 , la concentración in vacuo, y la trituración con Et20 proporcionó el metil éster del ácido 1 -diet ilcarbamoilmetil - 1H- indol -4 -carboxí lico ; [M+H] + 289.
Paso 2 A una solución de metil éster del ácido diet ilcarbamoi lme til - 1H- indol - 4 - carboxí 1 ico (480 mg , 1.665 mmol) en MeOH (5 mi) se agregó NaOH 2 M (5 mi) . La reacción se calentó a 50°C durante 20 horas y luego se dejó enfriar a temperatura ambiente. El solvente se retiró in vacuo y el residuo se disolvió en agua (10 mi) . El pH de la solución se ajustó a 5 utilizando HC1 1 M y el sólido resultante se recolectó mediante filtración para proporcionar el compuesto del título ácido 1 -diet ilcarbamoilmet il - 1H-indol-4 -carboxílico; [M+H] + 275.
Intermediario AY Ácido 4 - [6- ((R) -2,2 -dimeti 1 - [1,3] dioxolan- 4 -ilmetoxi) - naftalen- 2 - ilmetoxi ] -benzoico Paso 1 A una solución de 6 - hidroxi - 2 -naf toato de metilo (4.55 g, 22.5 mmol) en acetona anhidra (60 mi) se agregó S - ( - ) - gl ic idol (2.0 g, 27.0 mmol) y K2C03 (9.3 g, 67.3 mmol) . La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 3 días. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite MR (material de filtro) y el filtrado se concentró in vacuo para proporcionar el metil éster del ácido 6 - ( (S) -2 , 3 -dihidroxi -propoxi ) -naf talen- 2 -carboxílico como un blanco sólido; 1H NMR (DMSO-D6) : 3.49 (2H, t, J = 6.0 Hz), 3.85-3.88 (1H, m) , 3.89 (3H, s) , 4.02 (1H, dd, J = 9.9, 6.0 Hz), 4.16 (1H, dd, J = 9.9, 4.0 Hz) , 4.73 (1H, t, J = 6.0 Hz) , 5.04 (ÍH, d, J = 5.2 Hz) , 7.26 (1H, dd, J = 9.0, 2.0 Hz) , 7.41 (1H, d, J = 2.0 Hz) , 7.88-7.94 (2H, m), 8.04 (1H, d, J = 9.0 Hz) , 8.55 (1H, s) .
Paso 2 Al metil éster del ácido 6-((S)-2,3-dihidroxi -propoxi ) - naf talen- 2 - carboxí 1 ico (0.9 g, 3.26 mmol) en DMF anhidra (10 mi) se agregó 2,2-dime toxipropano (2.0 mi, 16.3 mmol) y p-toluensulfonato de piridinio (0.08 g, 0.32 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y el residuo se disolvió en EtOAc . La capa de EtOAc se lavó con 10% de NaHC03, agua y salmuera, se secó sobre Na2S04 anhidro y el solvente se evaporó in vacuo para obtener el metil éster del ácido 6-( ( R) -2,2 -dimet i 1 - [1,3] dioxolan- 4 -ilmetoxi) -naftalen-2 -carboxí lico como un sólido; 1E NMR (D SO-d6) : 1.32 (3H, s) , 1.37 (3H, s) , 3.78-3.82 (1H, m) , 3.88 (3H, s), 4.benzoil} -4.20 (3H, m) , 4.45-4.50 (1H, m) , 7.26 (1H, dd, J = 9.0, 2.0 Hz) , 7.45 (1H, d, J = 2.0 Hz), 7.88 (1H, d, J = 9.0 Hz) , 7.93 (1H, d, J= 9.0 Hz) , 8.04 (1H, d, J = 9.0 Hz) , 8.55 (1H, s) .
Paso 3 A una solución de metil éster del ácido 6-( (R) -2,2-dimetil- [1,3] dioxolan- 4 - ilmetoxi ) - naf talen-2 - carboxí lico (1.0 g, 3.16 mmol) en THF anhidro (20 mi) a 0°C se agregó LÍA1H4 (1.9 mi de una solución 2M en THF, 3.8 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna (Si02,dCM) para proporcionar [ 6 - ( ( R) - 2 , 2 - dime t i 1 - [ 1 , 3 ] dioxolan-4 - i lmetoxi ) -naf talen- 2 - i 1] -MeOH como un aceite viscoso incoloro que se solidificó en reposo; 1H NMR (d5-DMS0) : 1.32 (3H, s) , 1.37 (3H, s) , 3.78 (1H, dd, J = 8.3, 6.0 Hz), 4.01 -4.15 (3H, m) , 4.45-4.48 (1H, m) , 4.60 (2H, d, J = 6.0 Hz) , 5.24 (1H, t, J = 6.0 Hz) , 7.14 (1H, dd, J = 8.5, 2.5 Hz) , 7.32 (1H, d, J = 2.5 Hz) , 7.41 (1H, dd, J = 8.5, 1.5 Hz) , 7.33-7.80 (3H, m) .
Paso 4 Una mezcla de 4 -hidroxibenzoato de metilo (0.5 g, 3.28 mmol) , [ 6 - ( ( R ) - 2 , 2 - dime t i 1 - [1,3] dioxolan- 4 - i lmetoxi ) - naf talen- 2 - i 1 ] -me taño1 (0.9 g, 3.12 mmol) y trif enilfosf ina (0.83 g, 3.16 mmol) en DCM (20 mi) se enfrió a 0°C. Se agregó gota a gota azodicarboxi lato de dietilo (0.5 mi, 3.17 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y se purificó mediante cromatografía en columna (Si02, EtOAc/iso-hexano) para obtener un sólido blanco. El producto obtenido se purificó nuevamente mediante cromatografía en columna (alúmina neutra, EtOAc/petróleo éter) para obtener el metil éster del ácido 4 - [6- ( (R) -2,2 - dimet i 1 - [1,3] dioxolan -4 - ilmetoxi )- naftalen- 2 - ilmetoxi ] -benzoico como un Sólido blanco; ?? NMR (de-DMS0) : 1.32 (3H, s), 1.38 (3H, s) , 3.77-3.82 (4H, m) , 4.08-4.16 (3H, m) , 4.46-4.49 (1H, m) , 5.30 (2H, s), 7.15-7.21 (3H, m), 7.37 (1H, d, J = 2.0 Hz) , 7.53 (1H, dd, J = 8.50, 1.5 Hz), 7.83 (2H, dd, J = 9.0, 6.0 Hz), 7.92 (3H, m) .
Paso 5 A una solución de metil éster del ácido 446-( ( R) -2,2 - dimet il - [1,3] dioxolan- 4 -ilmetoxi) -naftalen-2 -ilmetoxi] -benzoico (0.46, 1.09 mmol) en THF/agua (10 mi de una mezcla 1:1) se agregó hidróxido de litio (0.15 g, 3.57 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche, luego a 70°C durante 24 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se neutralizó con HC1 1.5 M y el sólido blanco obtenido se recolectó mediante filtración al vacio, se lavó con agua y se secó bajo vacío para proporcionar el ácido 4-6 [ - ( (R) -2,2-dimetil - [1,3] dioxolan- 4 - ilmetoxi ) -naf talen- 2 -ilmetoxi] -benzoico . [M] " 407.
Intermediario AZ Ácido 4-(3-[4-((R)-2, 2-dimetil- [1,3] dioxolan- 4-ilmetoxi) -fenil] -propoxi } -benzoico Este compuesto se preparó de manera análoga al intermediario AY al reemplazar el [6- ( (R) -2,2-dimetil- [1,3] dioxolan-4 - i 1metoxi ) -naftalen-2-il] -metanol en el Paso 4 con 3 - [4 - ( (R) - 2 , 2 - dimet il - [ 1 , 3 ] dioxolan- 4 - ilmetoxi )- fenil] -propan- 1 -ol ; 1H NMR (DMSOd6) : 1.30 (3H, s), 1.35 (3H, s), 1.97-2.01 (2H, m) , 2.68 (2H, t, J = 7.5 Hz), 3.72-3.75 (1H, m), 3.93-4.00 (4H, m) , 4.06-4.10 (1H, m) , 4.38 (1H, dd, J = 6.0, 5.0), 6.87 (2H, d, J = 9.0 Hz), 6.92 (2H, d, J = 9.0 Hz) , 7.14 (2H, d, J =, 9.0 Hz), 7.84 (2H, d, J = 9.0 Hz) .
Intermediario BA ter-butil éster del ácido 4 - { 2 - [ ( E) - 3 , 5 - diamino - 6 -cloro-pirazin-2 - carbonilimino] -1,3/8-triaza-spiro [ .5] decan- 8 - carbóni 1 }-piperidin-l - carboxí 1 ico Este compuesto se preparó de manera análoga al Ejemplo 97, sustituyendo el ácido 4-benciloxif enilacético con ácido l-Boc-piperidin-4-carboxílico; [M+H] + 536.
Intermediario BB Ácido 4- [ (naftalen- 1- sulfonilamino) -metil] -benzoico Se agregó una solución de NaOH 4 N (30 mi) a una suspensión de ácido 4 -( aminome til ) benzoico (5.01 g, 31.82 mmol) en acetona (100 mi) . Se agregó tolueno (100 mi) y la reacción se calentó a 40°C para obtener una disolución. La solución se enfrió a 0°C y se trató con cloruro de 1-naf talen sulfonilo (12 g, 51.35 mmol) en acetona (100 mi) y la mezcla de reacción resultante se agitó durante 3 horas. La reacción se acidificó utilizando ácido cítrico y se concentró in vacuo. El residuo se extrajo en EtOAc y se lavó con agua. La capa acuosa se extrajo con EtOAc y las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua, salmuera, se secaron (Na2S04) y el solvente se eliminó in vacuo para proporcionar un sólido marrón claro. La trituración con Et20 proporcionó el compuesto del título.
Intermediario BC Ácido 3- (ciclohexil -metil - sulfamoil ) -4-metoxi-benzoico Paso 1 Una solución de 3- (clorosulfonil ) -4-me toxibenzoato de metilo (2.0 g, 7.56 mmol) y diisopropiletilamina (1.94 mi, 11.34 mmol) en DCM (50 mi) se trató con N-metil ciclohexilamina (0.70 mi, 9.07 mmol) a 0°C. La solución se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas y se agregó N-metil ciclohexilamina (0.70 mi, 9.07 mmol) . La solución se dividió entre DCM (250 mi) y HC1 0.5 N (100 mi) . La capa orgánica se lavó con HC1 0.5 N (2 x 100 mi) , NaHC03 (2 x 100 mi) y agua (100 mi), se secó sobre MgS0 , y el solvente se eliminó in vacuo para proporcionar un aceite amarillo. La cristalización ( iPr20/EtOAc ) proporcionó el metil éster del ácido 3- ( cic lohexi 1 -me t i 1 - sul famoi 1 ) - 4 -m etoxi - benzoico como cristales amarillos; [M+H] + 342.
Paso 2 Una solución de metil éster del ácido 3-( cic lohexi 1 -me t il - sul famoi 1 ) - 4 -metoxi -benzoico (1.50 g, 4.39 mmol) en 1,4 dioxano (40 mi) se trató con NaOH 2 N (10 mi) y la solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 21 horas. El solvente se retiró in vacuo y se agregó HC1 2 N enfriado con hielo (25 mi) y el sólido blanco que se formó se extrajo en DC (150 mi) . La capa orgánica se lavó con agua, se secó (MgS04) y el solvente se eliminó in vacuo para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco; [m-l]~ 326.
Intermediario BD Ácido 3 - cloro- 5 -metoxi - 4 2 - (4-metil-piperazin-l-il) -etoxi] -benzoico Paso 1 Una mezcla de ácido 5-cloro vanílico (5.0 g, 24.6 mmol) y HC1 conc . (5 mi) en MeOH (100 mi) se calentó a reflujo durante 48 horas. El solvente se eliminó in vacuo y se agregó agua al residuo para proporcionar un precipitado blanco, que se recolectó mediante filtración, se lavó con agua, y luego se disolvió en Et20. La solución se secó (Na2S04) y el solvente se eliminó in vacuo para proporcionar el metil éster del ácido 3 -cloro-4 -hidroxi- 5 -metoxi-benzoico como un sólido blanco.
Paso 2 Se agregaron trifenilfosf ina (6.4 g, 24.4 mmol) y DIAD (4.8 mi, 202.2 mmol) a una solución de metil éster del 3 - cloro- 4 - hidroxi - 5 -metoxi -benzoico (2.5 g, benzoilo} .5 mmol) en THF (40 mi) a 0°C y la solución resultante se agitó durante 2 horas a 0°C y 16 horas a temperatura ambiente. El solvente se eliminó in vacuo, y se agregó agua al residuo. El producto se extrajo en EtOAc, se secó (Na2S04) y el solvente se eliminó in vacuo para proporcionar un aceite amarillo. La cromatografía instantánea (S1O2, EtOAc/MeOH) proporcionó el metil éster del ácido 3-cloro- 5 -metoxi -4 - [2- ( 4 -me t i 1 - piperaz in- 1 - i 1 ) -etoxi] -benzoico como un sólido naranja.
Paso 3 Una solución de metil éster del ácido 3-cloro- 5 -metoxi -4 - [2- ( -me t i 1 -piperaz in- 1 - i 1 ) -etoxi] -benzoico (3.7 g, 10.7 mmol) en NaOH 2 N (20 mi) y THF (40 mi) se calentó a reflujo durante 1 hora. La mezcla de reacción se lavó con Et20. La fase acuosa se concentró in vacuo, y se agregó agua (50 mi) . El pH se ajustó a 3-4 utilizando HC1 2N. A esta solución se agregó DO EX 50WX4 (lavado anteriormente con MeOH, HC1 2N y agua) , y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La resina se filtró, se lavó con agua, y el producto se liberó de la resina mediante lavado con MeOH/ H4OH . La solución se concentró in vacuo, se diluyó con DCM y MeOH, se secó (Na2S04) y el solvente se eliminó in vacuo para proporcionar el compuesto del título como un sólido color crema claro.
Intermediario BE Paso 1 A una solución agitada de dietil amina (500 mi, 4.8 mol) en Et20 (1200 mi) se agregó cloruro de sulfurilo (177.3 mi, 2.19 mol) durante 80 minutos a -15°C. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2.5 horas. Se agregó Et20 (1000 mi) y el sólido blanco presente se retiró mediante filtración y se lavó con Et20 (2000 mi) . Los filtrados combinados se concentraron a presión reducida para proporcionar un aceite incoloro.
A una solución agitada de ácido trans- - (aminometil) -ciclohexan carboxílico (10 g, 63.6 mmol) en NaOH 1 N (153 mi) se agregó (10.91 g, 63.6 mmol) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas. La reacción se enfrió a 10°C y se agregó una solución conc . de HC1 (15 mi) y la mezcla se agitó durante 10 minutos a esta temperatura. Los cristales blancos formados se aislaron mediante filtración y se lavaron con Et20 (40 mi) para proporcionar el compuesto del título.
Intermediario BF Ácido 3- ( 3 - f enil - i soxazol - 5 - il ) -propiónico Este compuesto se preparó como se describe por GS d ' Alcontres ; C Caristi; A Ferlazzo; M Gattuso, J. Chem. Soc. Perkin 1, (1976) 16, 1694.
Intermediario BG 3- (4 -cloro-f enoximetil) -bencilamina Este compuesto se preparó como se describe en la US 2008200523.
Intermediario BH 2 - { - [2- ( -Fluoro- fenil) -etoxi] - fenil -etilamina} Paso 1 Una suspensión de cianuro de 4 -hidroxibencilo (7.9 g, 59.57 mmol) , 1 - ( 2 -bromo - et i 1 ) - 4 - f luoro -benceno (17.4 g, 71.48 mmol) , carbonato de potasio (19.8 g, 143 mmol) y yoduro de sodio (2.68 g, 17.87 mmol) en acetonitrilo (120 mi) se calentó a reflujo durante 44 horas. La mezcla de reacción se enfrió y se filtró y el solvente se eliminó in vacuo para proporcionar un aceite marrón oscuro. La cromatografía instantánea (Si02/ EtOAc/iso-hexano) proporcionó el { 442 - ( 4 - f luoro- feni 1 ) -etoxi } - fenil } -acetonitrilo como un aceite amarillo.
Paso 2 Se agregó una solución de NaOH 2N (45 0.2 mi, 90.3 mmol) a una solución de { 4 - [ 2 - ( 4 - f luoro- fenil ) -etoxi] - fenil } -acetonitrilo (3.29 g, 12.9 mmol) en EtOH (45.2 moles) seguida por aleación de Al-Ni (2.5 g) y la mezcla de reacción resultante se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se filtró y el EtOH se eliminó in vacuo. El producto se extrajo en DC (2 x 80 mi) , se secó (MgS04) y el solvente se eliminó in vacuo para proporcionar el compuesto del título como un aceite amarillo.
Intermediario BI 2 - (4,6 -Dimet il - 1H- indol - 3 - il ) - et ilamina Este compuesto se preparó como se describe en la EP 620222.
Intermediario BJ 2- [4- (4 - feni 1 -butoxi ) -fenil] -etilamina Este compuesto se preparó como se describe en la WOP 2004016601.
Intermediario BK Cloruro de 4 - ( 5 -metil - 2 - fenil -oxazol - 4 - ilmetoxi ) -bencensul fonilo Este compuesto se preparó como se describe en la WO 200502613 .
Intermediario BL Cloruro de 2 - fenil - 3H-benzoimidazol - 5 - sulfonilo Este compuesto se preparó como se describe en la EP 1205475.
Intermediario BM 4 - aminometil - 1 - ( 1 - fenil - etil ) -piperidin- 4 - ilamina Paso 1 1 -( 1 - f enil -e ti 1 ) -piperidin- 4 - ona se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito en la página 525 de J. Org.Chem. 1991, 55(2), 513-528.
A una mezcla de 1- ( 1 - feni 1 - e t i 1 ) -piperidin- 4 -ona (10.9 g, 53.6 mmol) , cloruro de amonio (4.3 g, 80.4 mmol) y 30% de solución acuosa de amoníaco (30 mi) en agua (30 mi) a temperatura ambiente se agregó en porciones cianuro de sodio (4.0 g, 81.6 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas, luego se diluyó con agua y se recolectó con DCM. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2S04, se filtró y se concentró in vacuo para obtener 4 - amino- 1 - ( 1 - f eni 1 -e t i 1 ) -piperidin- 4 - carboni t ri lo como un aceite marrón; [M+H] + 230.
Paso 2 4 - aminomet il - 1 - ( 1 - f enil - et il ) -piperidin- -ilaminan se preparó de manera análoga al Intermediario U al reemplazar ter-butil éster del ácido 4 -amino-4 -ciano-piperidin-l-carboxílico en el paso 1 con 4 - amino- 1 -( 1 - fenil - et i 1 ) -piperidin- 4 -carbonitrilo ; [M+H ]+ 234.
Intermediario BN 4 -Aminometil - 1 - (4 -metoxi -bencil ) -piperidin - 4 - ilamina Este compuesto se preparó de manera análoga al Intermediario BM al reemplazar 1 - ( 1 - f eni 1 - et i 1 ) -piperidin- 4 - ona con 1 - ( 4 -me toxibenc i 1 ) piperidin- 4 - ona en el paso 2, 1K NMR (DMSO- d6) : 1.46-1.64 (4H, m) , 2.38-2.55 (4H, m) , 2.67 (2H, s), 3.26 (2H, s) , 4.08 (3H, s) , 6.87 (2H, d, J = 8.2 Hz), 7.18 (2H, d, J = 8.2 HZ) .
Intermediario BO 4 -Aminomet il - l-piridin-4-i lmetil -piperidin- 4 - i lamina Paso 1 A una solución de ter-butil éster del ácido 4 - aminomet i 1-4 - (2,2,2-trifluoro-acetilamino) piperidin- 1 - carboxí 1 ico (Intermediario U, Paso 2) (5.0 g, 15.4 mmol) en DCM (50 mi) a 0°C se agregó piridina (10 mi) seguida por anhídrido trif luoroacético (3.5 mi, 25.3 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla de reacción se diluyó con DCM, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2S04 y se concentró in vacuo. El residuo obtenido se disolvió en dietiléter y se re-precipitó al agregar petróleo éter. La mezcla de solventes se decantó y el sólido se secó bajo vacío para proporcionar el ter-butil éster del ácido 4 - ( 2 , 2 , 2 - trif luoro- acet i lamino ) - 4 - [(2,2,2- trif luoroacetilamino ) -metil] -piperidin-1-carboxílico; [M+H] + 420.
Paso 2 A una solución de ter-butil éster del ácido 4- (2, 2, 2-trifluoro-acetilamino) -4 - [ (2, 2,2-trifluoro-acet i lamino ) -met i 1 ] -piperidin- 1 - carboxí 1 ico (5.25 g, 12.5 mmol) en dioxano (50 mi) se agregó HCl 4 M en dioxano (15 mi) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y el sólido blanquecino obtenido se disolvió en una cantidad mínima de MeOH y se re-precipitó al agregar dietiléter. La mezcla del solvente sobrenadante se decantó y el producto se lavó nuevamente con dietiléter y se secó bajo vacío para proporcionar el clorhidrato de 2 , 2 , 2 - trif luoro-N- { 4 - [ ( 2 , 2 , 2 -trifluoro- acet i lamino ) -metil] -piperidin-4-il}-acetamida; [M+H] + 322.
Paso 3 A una suspensión de NaH (170 mg de una dispersión al 60% en aceite mineral, 4.25 mmol) en DMF anhidra (20 mi) se agregó clorhidrato de 2,2,2-trifluoro-W-{4- [ (2, 2, 2 - tri f luoro - acet i lamino) -metil] -pipe idin- 4 - il } - acetamida (500 mg, 1.4 mmol) seguido por bromhidrato de 4 -bromometilpiridina (350 mg , 1.4 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla de reacción se inactivo con solución sat . de NH C1 y se concentró in vacuo. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (alúmina básica, MeOH/DCM) para obtener la 2,2,2 - trif luo o -N- [ 1 - iridin- 4 - i lmet i 1 - 4 - (2,2,2-trif luoro-acetilamino) -piperidin-4 - ilmetil] -acetamida como un sólido blanquecino; [M+H] + 413.
Paso 4 A una solución de 2 , 2 , 2-trif luoro-N- [1-piridin-4-ilmetil-4- (2,2,2-trifluoro-acetilamino) -piperidin- 4 - ilmet i 1 ]- acetamida (200 mg, 0.49 mmol) en MeOH (10 mi) se agregó solución acuosa al 30% de amoníaco (10 mi) y la mezcla de reacción se agitó a 60°C durante 3 horas. La mezcla de reacción se concentró in vacuo para obtener la 4-aminometil-l-piridin- 4 - ilmet i 1 -piperidin- 4 - ilamina como un aceite incoloro gomoso que se utilizó sin purificación adicional; XH NMR (D SO-de) : 1.63-1.77 (4H, m) , 2.45-2.54 (4H, m) , 2.49 (2H, s) , 3.57 (3H, s) , 7.30 (2H, d, J = 5.5 Hz) , 8.68 (2H, d, J = 5.5 Hz) .
Intermediario BP 4 -Aminomet il - 1 - ( 3 - fenil -propi 1 ) -piperidin- 4 - ilamina Este compuesto se preparó de manera análoga al Intermediario BO sustituyendo bromhidrato de bromomet ilpiridina (Paso 3) con l-bromo-3-fenilpropano ; [M+H] + 248.
Intermediario BQ 4 -Aminomet il - 1 - ciclohexi lmet i 1 -piperidin- 4 - i lamina Este compuesto se preparó de manera análoga al Intermediario BO sustituyendo bromhidrato de -bromometilpiridina (Paso 3) con ciclohexilmetilbromuro. Este intermediario se utilizó crudo en la preparación del Ejemplo 250.
Intermediario BR Ter-butil éster del ácido 3-amino-3-aminomet il - 8 -aza-biciclo [3.2.1] octan- 8 - carboxí lico Este compuesto se preparó de manera análoga al Intermediario BM al reemplazar 1- (1-fenil-etil) -piperidin- 4 - ona (Paso 1) con N-Boc - ñortropinona ; 1H NMR (DMSO-d6) : 1.40 (9H, s), 1.63 -1.85 (8H, m) , 2.79 (2H, s) , 4.06 (2H, s) .
IV. FORMULACIONES En un aspecto, la invención muestra una formulación farmacéutica que comprende un inhibidor de la actividad del ENaC como se proporciona en la Columna D y un modulador de la actividad del Modulador de FQ como se proporciona en las columnas A, B o C de acuerdo con la Tabla I. En algunas modalidades, el modulador de la actividad del Modulador de FQ puede incluir un compuesto de la Fórmula I, o un compuesto de la Fórmula II, o un compuesto de la Fórmula III, o combinaciones de los mismos de acuerdo con la Tabla I. En algunas modalidades, el modulador de la actividad del Modulador de FQ puede incluir el Compuesto 1, o el Compuesto 2, o el Compuesto 3 o combinaciones de los mismos de acuerdo con la Tabla I .
La Tabla I se reproduce aquí por conveniencia .
TABLA TABLA De acuerdo con la Tabla I, la composición farmacéutica comprende al menos un componente de la Columna D de la Tabla I, y al menos un componente de las Columnas A, B o C de la Tabla 1. En un aspecto, el Compuesto 1 es el componente de la Columna A, el Compuesto 2 es el componente de la Columna B, y el Compuesto 3 es el componente de la Columna C.
En una modalidad, la composición comprende una mezcla homogénea que comprende una composición de acuerdo con la Tabla I. En otra modalidad, la composición comprende una mezcla no homogénea que comprende una composición de acuerdo con la Tabla 1.
La composición farmacéutica de la Tabla I se puede administrar en un vehículo o por separado. En otro aspecto, la composición de la combinación farmacéutica que comprende un inhibidor de la actividad del ENaC como se ejemplifica en la Columna D de la Tabla I, se puede formular en una unidad de dosificación unitaria, por ejemplo, una tableta, una cápsula, una suspensión o solución líquida para la administración al mamífero que necesita del mismo. El inhibidor del ENaC puede incluir una forma amorfa, una forma sustancialmente amorfa o una forma cristalina del compuesto del ENaC. Alternativamente, cada agente activo se puede formular por separado como una sola unidad de dosificación para ser administrada con el otro agente activo de la combinación simultánea o secuenc ialmente , es decir, antes de, o después de la otra, o dentro de períodos de tiempo predeterminados separados, por ejemplo, dentro de 5 minutos, de 30 minutos, de 1 h. , de 2 horas, dentro de 3 horas, de 6 horas, o de 12 horas desde la administración del otro agente activo. En algunas modalidades, el período de tiempo puede ser de 24 horas o más. Por ejemplo, el primer agente activo (inhibidor del ENaC o el modulador del Modulador de FQ) se administra en el día 1, y el segundo agente activo de la combinación se administra al día siguiente. El régimen de administración secuencial se destina para ejemplificar sólo una de un número de posibilidades de administración retardada del segundo agente activo desde el primer agente activo y se podría determinar fácilmente por un experto en la técnica, por ejemplo, un médico que prescribe .
Las composiciones farmacéuticas descritas en la presente pueden abarcar un agente activo o dos agentes activos diferentes seleccionados de la Tabla I, con el entendimiento de que si la formulación incluye dos agentes activos, uno de los agentes activos es un inhibidor de la actividad del ENaC como se ejemplifica por los componentes de la Columna D y el otro agente activo es un modulador de la actividad del Modulador de FQ ejemplificado por los componentes de las columnas A-C. En algunas modalidades, la composición farmacéutica puede contener más de un modulador del Modulador de FQ como se proporciona en las columnas A-C.
En algunas modalidades, la composición farmacéutica comprende opcionalmente un portador, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable. En ciertas modalidades, estas composiciones comprenden además opcionalmente uno o más agentes terapéuticos adic ionales .
También se debe apreciar que ciertos de los compuestos de la presente invención pueden existir en forma libre para el tratamiento, o cuando sea adecuado, como un derivado, enantiómero, tautómero farmacéuticamente aceptable o un profármaco del mismo. De acuerdo con la presente invención, un derivado farmacéuticamente aceptable o un profármaco incluye, de manera enunciativa, sales farmacéuticamente aceptables, ésteres, sales de estos ésteres, o cualquier otro aducto o derivado que con la administración a un paciente que necesite del mismo, sea capaz de proporcionar, directa o indirectamente, un Compuesto como se describe de otra manera en la presente, o un metabolito o residuo del mismo .
En el sentido en que se utiliza en la presente, el término "sal farmacéuticamente aceptable" hace referencia a aquellas sales que son, dentro del alcance del criterio médico, adecuadas para utilizarse en contacto con los tejidos de huaianos y anioiales inferiores sin toxicidad, irritación, respuesta alérgica y lo semejante, indebidas, y están de acuerdo con una proporción beneficio/riesgo razonable. Una "sal farmacéuticamente aceptable" significa cualquier sal no tóxica o sal de un éster de un Compuesto de esta invención que, cuando se administra a un recipiente, sea capaz de proporcionar, ya sea directa o indirectamente, un Compuesto de esta invención o un metabolito inhibidoramente activo o residuo del mismo .
Las sales farmacéuticamente aceptables son bien conocidas en la técnica. Por ejemplo, S. M. Berge, et al. describen sales farmacéuticamente aceptables con detalle en J. Pharmaceutical Sciences , 1977, 66, 1-19, incorporado en la presente como referencia. Las sales farmacéuticamente aceptables de los Compuestos de esta invención incluyen aquellas adecuadas derivadas de ácidos y bases inorgánicas y orgánicas. Los ejemplos de sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables, no tóxicas son sales de un grupo amino formado con ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico y ácido perclórico o con ácidos orgánicos tales como ácido acético, ácido oxálico, ácido maleico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico o ácido malónico o al utilizar otros métodos utilizados en la técnica tales como intercambio iónico. Otras sales farmacéuticamente aceptables incluyen adipato, alginato, ascorbato, aspartato, bencensul fonato , benzoato, bisulfato, borato, butirato, canforato, canforsul fonato , citrato, ciclopentanpropionato, digluconato, dodecilsulfato, etansulfonato , formiato, fumarato, glucoheptonato , gl icerofosfato , gluconato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, yodhidrato, 2-hidroxi -etansulfonato , lactobionato , lactato, laurato, laurilsulfato , malato, maleato, malonato, metansul fonato , 2 -naftalensulfonato, nicotinato, nitrato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, pectinato, persulfato, 3 - feni lpropionato , fosfato, picrato, pivalato, propionato, estearato, succinato, sulfato, tartrato, tiocianato, p - toluensul fonato , undecanoato, sales de valerato, y lo semejante. Las sales derivadas de bases adecuadas incluyen sales de metal alcalino, de metal alcalinotérreo , de amonio y N+ ( Ci_4alqui lo ) 4. La presente invención también contempla la quaternización de cualesquiera grupos que contienen nitrógeno básico de los Compuestos descritos en la presente. Los productos solubles o dispersables en agua o aceite se pueden obtener mediante esta quaternización. Las sales representativas de metal alcalino o alcalinotérreo, incluyen sodio, litio, potasio, calcio, magnesio, y lo semejante. Las sales farmacéuticamente aceptables adicionales incluyen, cuando sea adecuado, cationes no tóxicos adecuados de amonio, de amonio cuaternario y de amina formados utilizando contraiones tales como haluro, hidróxido, carboxilato, sulfato, fosfato, nitrato, sulfonato de alquilo inferior y sulfonato de arilo .
Como se describió anteriormente, las composiciones farmacéuticamente aceptables de la presente invención comprenden adic ionalment e un portador, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable, el cual, en el sentido en que se utiliza en la presente, incluye cualquiera y todos los solventes, diluyentes, u otro vehículo líquido, auxiliares de dispersión o suspensión, agentes tensoac t vos , agentes isotónicos, agentes espesantes o emulsionantes, conservadores, aglutinantes sólidos, lubricantes y lo semejante, según sea adecuado para la forma de dosificación particular deseada. Remington' s Pharmaceut ical Sciences, Décima Sexta Edición, E. w. Martin (Mack Publishing Co . , Easton, Pa. , 1980) expone diversos portadores utilizados para formular las composiciones farmacéuticamente aceptables y las técnicas conocidas para la preparación de los mismos. Excepto en la medida en que el medio portador convencional sea incompatible con los Compuestos de la invención, tal como al producir cualquier efecto biológico indeseable o de otra manera interactúe de una forma perjudicial con cualesquiera otros componentes de la composición farmacéuticamente aceptable, se contempla que su uso queda dentro del alcance de esta invención. Algunos ejemplos de materiales que pueden servir como portadors farmacéuticamente aceptables incluyen, de manera enunciativa, intercambiadores iónicos, alúmina, estearato de aluminio, lecitina, proteínas séricas, tales como albúmina de suero humano, sustancias tampón, tales como fosfatos, glicina, ácido sórbico, o sorbato de potasio, mezclas de glicérido parcial de ácidos grasos vegetales saturados, agua, sales o electrólitos, tales como sulfato de protamina, fosfato dibásico de sodio, fosfato dibásico de potasio, cloruro de sodio, sales de zinc, sílice coloidal, trisilicato de magnesio, pol ivini lpirrol idona , poliacrilatos , ceras, polímeros en bloque de polietileno-polioxietileno, grasa de lana, azúcares tales como lactosa, glucosa y sacarosa, almidones tales como almidón de maíz y almidón de papa, celulosa y sus derivados tales como carboximet ilcelulosa de sodio, etil celulosa y acetato de celulosa, tragacanto en polvo, malta, gelatina, talco, excipientes tales como manteca de cacao y ceras para supositorio, aceites tales como aceite de cacahuate, aceite de semilla de algodón, aceite de cártamo, aceite de ajonjolí; aceite de oliva, aceite de maíz y aceite de soya, glicoles; tales como propilen glicol o polietilen glicol; ásteres tales como oleato de etilo y laurato de etilo; agar; agentes tampón; tales como hidróxido de magnesio e hidróxido de aluminio; ácido algínico; agua libre de pirógenos; solución salina isotónica; solución de Ringer; alcohol etílico, y soluciones amortiguadoras de fosfato, así como otros lubricantes compatibles no tóxicos tales como lauril sulfato de sodio y estearato de magnesio, así como agentes colorantes, agentes de desmoldeo, agentes de recubrimiento, agentes edulcorantes, saborizantes y aroma izantes, también pueden estar presentes en la composición conservadores y antioxidantes, de acuerdo con el criterio del formulador.
Las composiciones farmacéuticamente aceptables de esta invención se pueden administrar a seres humanos y otros animales oral, rectal, parenteral, intrae i sternal , int avaginal , intraperi toneal , tópica (como mediante polvos, pomadas, o gotas), bucalmente, como un aerosol oral o nasal, o lo semejante, dependiendo de la gravedad de la infección que será tratada. En ciertas modalidades, los compuestos de la invención se pueden administrar oral o parenteralmente , en donde el compuesto inhibidor del ENaC y/o el modulador del modulador de FQ esté/estén presentes independientemente en la composición administrada a niveles de dosificación entre aproximadamente 0.01 mg/kg y 50 mg/kg y de preferencia entre aproximadamente 1 mg/kg a 25 mg/kg de peso corporal del sujeto al día, una o más veces al día, para obtener el efecto terapéutico deseado.
Las formas líquidas de dosificación para administración oral incluyen, de manera enunciativa, emulsiones, microemulsiones , soluciones, suspensiones, jarabes y elixires farmacéuticamente aceptables. Además de los Compuestos activos, las formas líquidas de dosif icacións pueden contener diluyentes inertes utilizados comúnmente en la técnica, tales como, por ejemplo, agua u otros solventes, agentes solubilizantes y emulsionantes tales como alcohol etílico, alcohol isopropí 1 ico , carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, propi lengl icol , 1,3-butilenglicol , dimet ilformamida , aceites (en particular, aceites de semilla de algodón, de nuez molida, de maíz, de germen, de oliva, de ricino y de ajonjolí), glicerol, alcohol tetrahidrofurfurí lico, polietilenglicoles y ásteres de sorbitán con ácido graso, y mezclas de los mismos. Además de los diluyentes inertes, las composiciones orales también pueden incluir adyuvantes tales como agentes humectantes, agentes emulsionantes y de suspensión, agentes edulcorantes, saborizantes y aromatizantes.
Las preparaciones inyectables, por ejemplo, las suspensiones acuosas u oleaginosas inyectables estériles se pueden formular de acuerdo con la técnica conocida utilizando agentes dispersantes o humectantes y agentes de suspensión adecuados. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución, suspensión o emulsión inyectable estéril en un diluyente o solvente no tóxico parenteralmente aceptable, por ejemplo, como una solución en 1,3-butandiol. Entre los vehículos y solventes aceptables que se pueden emplear se encuentran agua, solución de Ringer, U.S.P. y solución isotónica de cloruro de sodio. Además, se emplean convencionalmente aceites grasos estériles como un medio solvente o de suspensión. Para este fin se puede emplear cualquier aceite graso insípido incluyendo mono o diglicéridos sintéticos. Además, en la preparación de soluciones inyectables se utilizan ácidos grasos tales como ácido oleico.
Las formulaciones inyectables se pueden esterilizar, por ejemplo, mediante filtración a través de un filtro para retención de bacterias, o incorporar agentes esterilizantes en forma de composiciones sólidas estériles que se se pueden disolver o dispersar en agua estéril u otro medio inyectable estéril antes de utilizarse.
Con el fin de prolongar el efecto de una composición de la presente invención, con frecuencia es conveniente reducir la absorción de la composición de la inyección subcutánea o intramuscular. Esto se puede alcanzar mediante el uso de una suspensión líquida de material cristalino o amorfo con poca solubilidad en agua. La velocidad de absorción de la composición entonces depende de su velocidad de disolución lo cual, a su vez, puede depender del tamaño del cristal y la forma cristalina. Alternativamente, la absorción retardada de una forma de la composición administrada parenteralmente se lleva a cabo al disolver o suspender la composición en un vehículo oleoso. Las formas inyectables de depósito se producen al formar matrices microencapsuladas de la composición en polímeros biodegradables tales como poliláctido-poliglicólido . Dependiendo de la proporción de la composición a polímero y la naturaleza del polímero particular empleado, se puede controlar la velocidad de liberación del compuesto. Los ejemplos de otros polímeros biodegradables incluyen poli (ortoésteres) y pol i ( anhídridos ) . Las formulaciones de depósito inyectables también se preparan al atrapar la composición en liposomas o microemulsiones que sean compatibles con los tejidos corporales.
Las composiciones para administración rectal o vaginal de preferencia son supositorios que se pueden preparar al mezclar los Compuestos de esta invención con excipientes o portadores no irritantes adecuados, tales como manteca de cacao, polietilenglicol o una cera para supositorio que sean sólidos a temperatura ambiente pero líquidos a la temperatura corporal y por lo tanto se funden en el recto o la cavidad vaginal y liberan el compuesto activo.
Las formas sólidas de dosificación para administración oral incluyen cápsulas, tabletas, mini - tabletas , micro- tabletas , macropart ículas , micro y nano-partículas , pildoras, polvos y gránulos . En estas formas sólidas de dosificación, el Compuesto activo o la combinación del inhibidor del ENaC y los Compuestos del Modulador de FQ se mezcla con al menos un excipiente o portador inerte, farmacéuticamente aceptable, tal como citrato de sodio o fosfato dicálcico y/o a) materiales de relleno o expansores tales como almidones, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol, y ácido silícico, b) aglutinantes tales como, por ejemplo, carboximetilcelulosa , alginatos, gelatina, polivinilpirrolidinona, sacarosa, y acacia, c) humectantes tales como glicerol, d) agentes disgregantes tales como agar-agar, carbonato de calcio, almidón de papa o tapioca, ácido algínico, ciertos silicatos, y carbonato de sodio, e) agentes retardantes de solución tales como parafina, f) aceleradores de absorción tales como compuestos de amonio cuaternario, g) agentes humectantes tales como, por ejemplo, alcohol cetílico y monoestearato de glicerol, h) absorbentes tales como caolín y arcilla de bentonita, e i) lubricantes tales como talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles sólidos, lauril sulfato de sodio, y mezclas de los mismos. En el caso de las cápsulas, tabletas y pildoras, la forma de dosificación también puede comprender agentes amortiguadores.
Las composiciones sólidas de un tipo similar también se pueden emplear como material de relleno en cápsulas rellenas de gelatina suave y dura al utilizar excipientes como lactosa o azúcar láctea, así como polietilenglicoles de alto peso molecular y lo semejante. Las formas sólidas de dosificación de las cápsulas, tabletas, mini - tabletas , micro-tabletas, macropartículas , micro y nano-part ículas , pildoras, y granulos se pueden preparar con recubrimientos y cubiertas tales como recubrimientos entéricos y otros recubrimientos bien conocidos en la técnica de la formulación farmacéutica. Los mismos opcionalmente pueden contener agentes opacif icantes y también pueden ser de una composición que los mismos liberen los ingredientes activos únicamente, o de preferencia, en una cierta parte del tracto intestinal, opcionalmente, de una manera retardada. Los ejemplos de composiciones de inclusión que se pueden utilizar incluyen sustancias poliméricas y ceras. Las composiciones sólidas de un tipo similar también se pueden emplear como materiales de relleno en cápsulas rellenas de gelatina suave y dura, al utilizar excipientes tales como lactosa o azúcar láctea, así como polietilenglicoles de alto peso molecular y lo semejante.
El Compuesto activo o la combinación de Compuestos también pueden estar en forma microencapsulada con uno o más excipientes como se señaló anteriormente. Las formas sólidas de dosificación de las tabletas, mini - tabletas , micro-tabletas, macropartículas , micro y nano-part ículas , pildoras y granulos se pueden preparar con recubrimientos y cubiertas tales como recubrimientos entéricos, recubrimientos para control de liberación y otros recubrimientos bien conocidos en la técnica de la formulación farmacéutica. En estas formas sólidas de dosificación el Compuesto activo o la combinación de compuestos se pueden mezclar con al menos un diluyente inerte tal como sacarosa, lactosa o almidón. Estas formas de dosificación también pueden comprender, como es la práctica normal, sustancias adicionales distintas de los diluyentes inertes, por ejemplo, lubricantes para formación de tabletas y otros auxiliares para formación de tabletas tales como estearato de magnesio y celulosa microcristalina . En el caso de las cápsulas, tabletas y pildoras, las formas de dosificación también pueden comprender agentes amortiguadores. Los mismos opcionalmente pueden contener agentes opacif icantes y también pueden ser de una composición que los mismos liberen los ingredientes activos únicamente, o de preferencia, en una cierta parte del tracto intestinal, opcionalmente, de una manera retardada. Los ejemplos de composiciones de inclusión que se pueden utilizar incluyen sustancias poliméricas y ceras.
Las formas de dosificación para la administración tópica o transdérmica de un Compuesto o combinación de Compuestos de esta invención incluyen ungüentos, pastas, cremas, lociones, geles, polvos, soluciones, aerosoles, inhalantes o parches.
El componente activo se mezcla en condiciones estériles con un portador farmacéuticamente aceptable y cualesquiera conservadores o tampones necesarios según se pueda requerir. También se contemplan dentro del alcance de esta invención formulaciones oftálmicas, gotas para los oídos y gotas para los ojos. Adicionalmente , la presente invención contempla el uso de parches transdérmicos , que tienen la ventaja agregada de proporcionar un suministro controlado de un Compuesto al cuerpo. Estas formas de dosificación se preparan al disolver o suministrar el Compuesto en el medio adecuado. También se pueden utilizar intensif cadores de absorción para aumentar el flujo del Compuesto a través de la piel. La velocidad se puede controlar ya sea al proporcionar una membrana para control de la velocidad o al dispersar el Compuesto en una matriz polimérica o gel .
También se apreciará que las composiciones expuestas en la presente se pueden administrar concurrentemente con, antes o después de uno o más de otros procedimientos terapéuticos o médicos deseados. La combinación particular de terapias (terapias o procedimientos) para emplear en un régimen de combinación tomará en cuenta la compatibilidad de los terapéuticos y/o procedimientos deseados y el efecto terapéutico deseado que se alcanzará. También se apreciará que las terapias empleadas pueden alcanzar un efecto deseado para el mismo trastorno (por ejemplo, un Compuesto o combinación de Compuestos de la invención se pueden administrar concurrentemente con otro agente utilizado para tratar el mismo trastorno) , o pueden alcancar distintos efectos (por ejemplo, el control de cualesquiera efectos adversos) . En el sentido en que se utiliza en la presente, los agentes terapéuticos adicionales que se administran normalmente para tratar o prevenir una enfermedad o condición particular, se conocen como "adecuados para la enfermedad o condición que se está tratando." En una modalidad, el agente adicional se selecciona de un agente mucolítico, un broncodi latador , un antibiótico, un agente antiinfeccioso, un agente ant i - inf lamatorio , un modulador del CFTR que sea distinto de un Compuesto de la presente invención, o un agente nutricional.
En una modalidad, el agente adicional es un antibiótico. Los antibióticos útiles ilustrativos en la presente incluyen tobramicina, incluyendo polvo de tobramicina inhalada (TIP) , azitromicina , aztreonam, incluyendo la forma en aerosol de aztreonam, amikacina, incluyendo las formulaciones liposomales de los mismos, ciprofloxacina , incluyendo las formulaciones de la misma, adecuadas para administración mediante inhalación, levof laxacina , incluyendo las formulaciones en aerosol de la misma, y combinaciones de dos antibióticos, por ejemplo, fosfomicina y tobramicina.
En otra modalidad, el agente adicional es un mucolítico. Los mucolíticos ilustrativos útiles en la presente incluyen Pulmozyme®.
En otra modalidad, el agente adicional es un broncodilatador . Los broncodxaltores ilustrativos incluyen albuterol, sulfato de metaprotenerol , acetato de pirbuterol, salmeterol, o sulfato de tetrabulina .
En otra modalidad, el agente adicional es eficaz para restaurar el líquido superficial de las vías respiratorias del pulmón. Estos agentes mejoran el movimiento de la sal dentro y fuera de las células, permitiendo que la mucosidad en las vías respiratorias del pulmón sea más hidratada y, por tanto, se limpie más fácilmente. Los agentes ilustrativos incluyen solución salina hipertónica, denufosol tetrasódico (fosfato ácido de [[(3S,5R)-5- ( - amino- 2 -oxopirimidin- 1 - il ) - 3 -hidro ioxolan- 2 -il] metoxi -hidroxifosforil] [ [ [ (2R,3S,4R, 5R) -5- (2,4-dioxo irimidin- 1 - i 1 ) -3,4 - dihidroxioxolan- 2 - il ] meto i -hidroxifosforil] oxi -hidroxifosforilo] ) , o bronquitol (formulación inhalada de manitol) .
En otra modalidad, el agente adicional es un agente anti - inflamatorio , es decir, un agente que puede reducir la inflamación en los pulmones. Los agentes ilustrativos útiles en la presente incluyen ibuprofeno, ácido docosahexanoico (DHA) , sildenafil, glutatión inhalado, pioglitazona , hidroxicloroquina , o simavastatina .
En otra modalidad, el agente adicional es un modulador del CFTR distinto de los componentes descritos en las Columnas A-D, es decir, un agente que tiene el efecto de modular la actividad del CFTR. Estos agentes ilustrativos incluyen ataluren ("PTC 124®", ácido 3 - [5- (2- f luorofenil) - 1 , 2 , 4 -oxadiazol - 3 -il] benzoico) , sinapultide, lancovutide, depelestat (un inhibidor de neutrófilo elastasa recombinante humana), cobiprostona (ácido 7-{(2R, 4aR, 5R, 7aR)-2- [ (3S) -1, l-difluoro-3-metilpentil] - 2 -hidroxi - 6 -oxooctahidrociclopenta [b] piran- 5 - il } heptanoico) , o ácido (3- (6- (1- (2 , 2-dif luorobenzo [d] [ 1 , 3 ] dioxol - 5 - i 1 ) ciclopropancarboxamido) - 3 -met i lpiridin- 2 - i 1 ) benzoico .
En otra modalidad, el agente adicional es ácido (3-(6- (1- (2 , 2 -dif luorobenzo [d] [1,3] dioxol-5-il) ciclopropancarboxamido) - 3 -met i lpiridin- 2 -i 1 ) enzoico .
En otra modalidad, el agente adicional es un agente nutricional. Estos agentes ilustrativos incluyen pancrelipasa (reemplazo de la enzima pancreat izante ) , incluyendo Pancrease®, Pancreacarb® , Ultrase®, o Creon®, Liprotomase® (anteriormente Trizytek®) , Aquadeks®, o inhalación de glutatión. En una modalidad, el agente nutricional adicional es pancrelipasa .
La cantidad del agente terapéutico adicional presente en las composiciones de esta invención no será mayor que la cantidad que normalmente se podría administrar en una composición que comprende ese agente terapéutico como el único agente activo. De preferencia, la cantidad del agente terapéutico adicional en las composiciones actualmente descritas variará entre aproximadamente 50% y 100% de la cantidad normalmente presente en una composición que comprende el agente como el único agente terapéuticamente activo.
Una composición de la invención como se describe en la presente también se puede incorporar en las composiciones para el recubrimiento de un dispositivo médico implantable, tal como prótesis, válvulas artificiales, injertos vasculares, endoprótesis y catéteres. Por consiguiente, la presente invención, en otro aspecto, incluye una composición para el recubrimiento de un dispositivo implantable que comprende una composición como se describe en la presente o una composición farmacéuticamente aceptable de la misma, y en las clases y subclases en la presente, y un portador adecuado para el recubrimiento del dispositivo implantable. Todavía en otro aspecto, la presente invención incluye un dispositivo implantable recubierto con una composición que comprende una composición como se describe en la presente o una composición farmacéuticamente aceptable de la misma, y un portador adecuado para recubrir el dispositivo implantable. Los recubrimientos adecuados y la preparación general de los dispositivos implantables recubiertos se describen en las patentes de los Estados Unidos 6,099,562, 5,886,026, y 5,304,121. Los recubrimientos típicamente son materiales poliméricos biocompat ibles tales como un polímero de hidrogel, polimetildis iloxano , pol icaprolactona , polietilenglicol , ácido poliláctico, acetato etilen vinllico y mezclas de los mismos. Los recubrimientos opc ionalmente se pueden recubrir adi c ionalmene por una capa adecuada de f luorosilicona, pol isacáridos , polietilenglicol, fosfolípidos o combinaciones de los mismos para impartir características de liberación controlada en la composición.
Con el fin de que la invención descrita en la presente se pueda comprender mejor, se exponen los siguientes ejemplos. Se debe entender que estos ejemplos son sólo para fines ilustrativos y no se deben considerar como limitantes de la invención de ninguna forma.
Sólo para fines ilustrativos, las formulaciones IV. A, B y C, que incluyen los moduladores del Modulador de FQ se mencionan ya sea como formulaciones de componentes individuales, o formulaciones que contengan la combinación del componente modulador del Modulador de FQ de las columnas A, B, o C y un componente inhibidor del ENaC de la columna D.
V. MÉTODOS DE ÜSO En otro aspecto, la presente invención proporcionó un método para tratar una condición, enfermedad o trastorno implicado por la disfunción del CFTR y/o ENaC, el método comprende administrar una composición farmacéutica a un sujeto, de preferencia un mamífero, que necesita del mismo, la composición que comprende un componente de la Columna D (que incluye un inhibidor del ENaC, de preferencia un inhibidor del ENaC que es un compuesto de la Fórmula IV) y al menos un componente de las Columnas A, B y C de acuerdo con la Tabla I. En una modalidad, la composición farmacéutica comprende un inhibidor del ENaC de la Columna D y un Compuesto de la Fórmula I. En una modalidad, la composición farmacéutica comprende un inhibidor del ENaC de la Columna D y un compuesto de la Fórmula II. En una modalidad, la composición farmacéutica comprende un inhibidor del ENaC de la Columna D y un compuesto de la Fórmula III. En otra modalidad, la composición farmacéutica comprende un inhibidor del ENaC de la Columna D y el Compuesto 1. En otra modalidad, la composición farmacéutica comprende un inhibidor del ENaC de la Columna D y el Compuesto 2. En otra modalidad, la composición farmacéutica comprende un inhibidor del ENaC de la Columna D y el Compuesto 3. En una modalidad adicional, la composición farmacéutica comprende un inhibidor del ENaC de la Columna D y una formulación del Compuesto 1. En una modalidad adicional, la composición farmacéutica comprende un inhibidor del ENaC de la Columna D y una formulación del Compuesto 2. En una modalidad adicional, la composición farmacéutica comprende un inhibidor del ENaC de la Columna D y una formulación del Compuesto 3.
En diversas modalidades, la administración de los agentes activos combinados se puede realizar mediante la administración cada agente activo de la combinación como unidades de dosificación por separado o como una sola unidad de dosificación. Al administrar los dos agentes activos por separado, cada uno de los agentes activos se pueden administrar concurrentemente, o un agente activo se puede administrar antes o después del otro.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona un método para tratar una condición, enfermedad o trastorno implicado por una deficiencia de la actividad del CFTR, el método comprende administrar la composición farmacéutica de la invención a un sujeto, de preferencia un mamífero, que necesite del mismo.
Todavía en otro aspecto, la presente invención proporciona un método para tratar, o disminuir la gravedad de una condición, enfermedad o trastorno implicado por la mutación del gen CFTR. En ciertas modalidades, la presente invención proporciona un método para tratar una condición, enfermedad o trastorno implicado por una deficiencia de la actividad del CFTR, el método comprende administrar la composición farmacéutica de la invención a un sujeto, de preferencia un mamífero, que necesite de la misma.
En otro aspecto, la invención también proporciona un método para tratar o disminuir la gravedad de una enfermedad en un paciente que comprende administrar al paciente la composición farmacéutica de la invención a un sujeto, de preferencia a un mamífero, que necesite de la misma, y la enfermedad se selecciona de fibrosis quística, asma, COPD inducida por tabaquismo, bronquitis crónica, rinosinusitis , estreñimiento, pancreatitis, insuficiencia pancreática, infertilidad masculina provocada por ausencia bilateral congénita de los conductos deferentes (CBAVD), enfermedad pulmonar leve, pancreatitis idiopática, aspergilosis broncopulmonar alérgica (ABPA) , enfermedad hepática, enfisema hereditario, hemocromatosis hereditaria, deficiencias de fibrinolisis en la coagulación, tales como deficiencia de la proteína C, angioedema hereditario Tipo 1, deficiencias en el procesamiento de lípidos, tales como hipercolesterolemia familiar, quilomicronemia Tipo 1, abetal ipoproteinemia , enfermedades por depósito lisosomal, tales como la enfermedad por células I/pseudo-Hurler , mucopolisacaridosis , Sandhof/Tay- Sachs , Crigler- Naj j ar tipo II, poliendocrinopatía/hiperinsulemia, diabetes mellitus, enanismo Laron, deficiencia de mileoperoxidasa , hipoparat iroidismo primario, melanoma, glucanosis CDG tipo 1, hipert iroidismo congénito, osteogénesis imperfecta, hipof ibrinogenemia hereditaria, deficiencia de ACT, Diabetes insípida (DI), DI neurofiseal, DI neprogénica, síndrome de Charcot -Marie Tooth, enfermedad Perlizaeus -Merzbacher , enfermedades neurodegenerativas tales como la enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrófica, plasy supranuclear progresiva, enfermedad de Pick, diversos trastornos neurológicos por pol iglutamina tales como Huntington, ataxia espinocerebelosa tipo I, atrofia muscular espinal y bulbar, palidoluisiana dentatorúbrica , y distrofia miotónica, así como encefalopatías espongiformes, tales como enfermedad de Creutz feldt - Jakob hereditaria (debida a un defecto en el procesamiento de la proteína prión) , enfermedad de Fabry, síndrome de Straussler-Scheinker , COPD, enfermedad de queratoconj unt ivit is seca o enfermedad de Sjogren, osteoporos is , osteopenia, curación ósea y crecimiento óseo (incluyendo reparación de huesos, regeneración ósea, reducir la resorción ósea y aumentar la deposición ósea) , Síndrome de Gorham, canalopatías de cloruro tales como miotonía congénita (formas Tomson y Becker) , síndrome de Bartter tipo III, enfermedad de Dent, hiperekplexia, epilepsia, hiperekplexia, enfermedad de depósito lisosómico, síndrome de Angelman, y discinesia ciliar primaria (DCP) , un término para los trastornos hereditarios de la estructura y/o función de los cilios, incluyendo PCD con situs inversus (también conocido como síndrome de Kartagener) , PCD, sin situs inversus y aplasia ciliar .
En algunas modalidades, el método incluye tratar o disminuir la gravedad de la fibrosis quística en un paciente que comprende administrar a este paciente una de las composiciones tal como se define en la presente. En ciertas modalidades, el paciente posee las formas mutantes del CFTR humano. En otras modalidades, el paciente posee una o más de las siguientes mutaciones AF508, R117H, y G551D del CFTR humano. En una modalidad, el método incluye tratar o disminuir la gravedad de la fibrosis quística en un paciente que posee la mutación ??508 del CFTR humano que comprende administrar al paciente una de las composiciones tal como se define en la presente. En una modalidad, el método incluye tratar o disminuir la gravedad de la fibrosis quística en un paciente que posee la mutación G551D del CFTR humano que comprende administrar al paciente una de las composiciones tal como se define en la presente. En una modalidad, el método incluye tratar o disminuir la gravedad de la fibrosis quística en un paciente que posee la mutación AF508 del CFTR humano en al menos un alelo que comprende administrar al paciente una de las composiciones tal como se define en la presente. En una modalidad, el método incluye tratar o disminuir la gravedad de la fibrosis quística en un paciente que posee la mutación AF508 del CFTR humano en ambos alelos que comprende administrar al paciente una de las composiciones tal como se define en la presente. En una modalidad, el método incluye tratar o disminuir la gravedad de la fibrosis quística en un paciente que posee la mutación G551D del CFTR humano en al menos un alelo que comprende administrar al paciente una de las composiciones tal como se define en la presente. En una modalidad, el método incluye tratar o disminuir la gravedad de la fibrosis quística en un paciente que posee la mutación G551D del CFTR humano en ambos alelos que comprende administrar al paciente una de las composiciones tal como se define en la presente.
En algunas modalidades, el método incluye disminuir la gravedad de la fibrosis quística en un paciente que comprende administrar al paciente una de las composiciones tal como se define en la presente. En ciertas modalidades, el paciente posee las formas mutantes del CFTR humano. En otras modalidades, el paciente posee una o más de las siguientes mutaciones ??508, R117H, y G551D del CFTR humano. En una modalidad, el método incluye disminuir la gravedad de la fibrosis quística en un paciente que posee la mutación AF508 del CFTR humano que comprende administrar al paciente una de las composiciones tal como se define en la presente. En una modalidad, el método incluye disminuir la gravedad de la fibrosis quística en un paciente que posee la mutación G551D del CFTR humano que comprende administrar al paciente una de las composiciones tal como se define en la presente. En una modalidad, el método incluye disminuir la gravedad de la fibrosis quística en un paciente que posee la mutación AF508 del CFTR humano en al menos un alelo que comprende administrar al paciente una de las composiciones tal como se define en la presente. En una modalidad, el método incluye disminuir la gravedad de la fibrosis quística en un paciente que posee la mutación AF508 del CFTR humano en ambos alelos que comprende administrar al paciente una de las composiciones tal como se define en la presente. En una modalidad, el método incluye disminuir la gravedad de la fibrosis quística en un paciente que posee la mutación G551D del CFTR humano en al menos un alelo que comprende administrar al paciente una de las composiciones tal como se define en la presente. En una modalidad, el método incluye disminuir la gravedad de la fibrosis quística en un paciente que posee la mutación G551D del CFTR humano en ambos alelos que comprende administrar al paciente una de las composiciones tal como se define en la presente .
En algunos aspectos, la invención proporciona un método para tratar o disminuir la gravedad de la osteoporosis en un paciente que comprende administrar al paciente una composición como se define en la presente .
En ciertas modalidades, el método para tratar o disminuir la gravedad de la osteoporosis en un paciente comprende administrar al paciente una composición farmacéutica como se describe en la presente.
En algunos aspectos, la invención proporciona un método para tratar o disminuir la gravedad de la osteopenia en un paciente que comprende administrar al paciente una composición como se define en la presente .
En ciertas modalidades, el método para tratar o disminuir la gravedad de la osteopenia en un paciente comprende administrar al paciente una composición farmacéutica como se describe en la presente .
En algunos aspectos, la invención proporciona un método para curación de huesos y/o reparación ósea en un paciente que comprende administrar al paciente una composición como se define en la presente.
En ciertas modalidades, el método para curación de huesos y/o reparación ósea en un paciente comprende administrar al paciente una composición farmacéutica como se describe en la presente.
En algunos aspectos, la invención proporciona un método para reducir la resorción ósea en un paciente que comprende administrar al paciente una composición como se define en la presente.
En algunos aspectos, la invención proporciona un método para aumentar la deposición ósea en un paciente que comprende administrar al paciente una composición como se define en la presente.
En ciertas modalidades, el método para aumentar la deposición ósea en un paciente comprende administrar al paciente una composición como se define en la presente.
En algunos aspectos, la invención proporciona un método para tratar o disminuir la gravedad de la EPOC en un paciente que comprende administrar al paciente una composición como se define en la presente.
En ciertas modalidades, el método para tratar o disminuir la gravedad de la EPOC en un paciente comprende administrar al paciente una composición como se define en la presente.
En algunos aspectos, la invención proporciona un método para tratar o disminuir la gravedad de la COPD inducida tabaquismo en un paciente que comprende administrar al paciente una composición como se define en la presente.
En ciertas modalidades, el método para tratar o disminuir la gravedad de la COPD inducida por tabaquismo en un paciente comprende administrar al paciente una composición como se define en la presente.
En algunos aspectos, la invención proporciona un método para tratar o disminuir la gravedad de la bronquitis crónica en un paciente que comprende administrar al paciente una composición como se describe en la presente.
En ciertas modalidades, el método para tratar o disminuir la gravedad de la bronquitis crónica en un paciente comprende administrar al paciente una composición como se define en la presente.
De acuerdo con una modalidad alternativa, la presente invención proporciona un método para tratar la fibrosis quística que comprende el paso de administrar al mamífero de una composición como se define en la presente.
De acuerdo con la invención una "cantidad eficaz" de la composición es aquella cantidad eficaz para tratar o disminuir la gravedad de una o más de las enfermedades, trastornos o condiciones como se citaron anteriormente.
Otro aspecto de la presente invención proporciona un método para administrar una composición farmacéutica mediante administración oral a un paciente al menos una vez al día de la composición como se describe en la presente. En una modalidad, el método comprende administrar una composición al paciente como se define en la presente de la Tabla I una vez cada 24 horas. En otra modalidad, el método comprende administrar al paciente una composición como se define en la presente cada 12 horas. En una modalidad adicional, el método comprende administrar al paciente una composición como se define en la presente tres veces al día. Todavía en una modalidad adicional, el método comprende administrar al paciente una composición como se define en la presente.
Las composiciones, de acuerdo con el método de la presente invención, se pueden administrar utilizando cualquier cantidad y cualquier vía de administración eficaz para tratar o disminuir la gravedad de una o más de las enfermedades, trastornos o condiciones como se citaron anteriormente.
En ciertas modalidades, las composiciones de la presente invención son útiles para tratar o disminuir la gravedad de la fibrosis quística en pacientes que exhiben la actividad residual del CFTR en la membrana apical de los epitelios respiratorios y no respiratorios. La presencia de la actividad residual del CFTR en la superficie epitelial se puede detectar fácilmente utilizando métodos conocidos en la técnica, por ejemplo, técnicas electrof isiológicas estándar, bioquímicas o histoquímicas . Estos métodos identifican la actividad del CFTR utilizando técnicas electrof isiológicas in vivo o ex vivo, medición de las concentraciones de Cl" en sudor o salivales, o técnicas bioquímicas o histoquímica ex vivo para controlar la densidad de la superficie celular. Utilizando estos métodos, la actividad residual del CFTR se puede detectar fácilmente en pacientes homocigotos o heteroc igotos para una variedad de diferentes mutaciones, incluyendo pacientes homocigotos o heterocigotos para la mutación más común, AF508.
En otra modalidad, las composiciones de la presente invención son útiles para tratar o disminuir la gravedad de la fibrosis quística en pacientes que tienen una actividad residual del CFTR inducida o aumentada utilizando métodos farmacológicos o de terapia génica. Estos métodos aumentan la cantidad del CFTR presente en la superficie celular, induciendo con esto una actividad hasta ahora ausente del CFTR en un paciente o aumentando el nivel existente de la actividad residual del CFTR en un paciente .
En una modalidad, una composición como se define en la presente puede ser útil para tratar o disminuir la gravedad de la fibrosis quística en pacientes dentro de ciertos genotipos que exhiben una actividad residual del CFTR, por ejemplo, las mutaciones clase III (una regulación o activación deficiente), mutaciones clase IV (conductancia alterada) o las mutaciones clase V (síntesis reducida) (Lee R. Choo-Kang, Pamela L., Zeitlin, Type I, II, III, IV, and V cystic fibrosis Tansmembrane Conductance Regulator Defects and Opportunities of Therapy; Current Opinión in Pulmonary Medicine 6:521-529, 2000) . Otros genotipos de pacientes que exhiben actividad residual del CFTR incluyen pacientes homocigotos para una de estas clases o heterocigotos con cualquier otra clase de mutaciones, incluyendo las mutaciones clase I, las mutaciones clase II, o una mutación que carece de clasificación.
En una modalidad, una composición como se define en la presente puede ser útil para tratar o disminuir la gravedad de la fibrosis quística en pacientes dentro de ciertos fenotipos clínicos, por ejemplo, un fenotipo clínico moderado a leve que se correlaciona típicamente con la cantidad de la actividad residual del CFTR en la membrana apical de los epitelios. Estos fenotipos incluyen pacientes que exhiben insuficiencia pancreática o pacientes con diagnóstico de pancreatitis idiopática y ausencia bilateral congénita de los conductos deferentes, o enfermedad pulmonar leve.
La cantidad exacta requerida variará de un sujeto a otro, dependiendo de la especie, edad y estado general del sujeto, la gravedad de la infección, el agente particular, su modo de administración, y lo semejante. Las composiciones de la invención se formulan de preferencia en forma de dosis unitaria para facilitar la administración y uniformidad de la dosis. La expresión "forma de dosificación unitaria" , en el sentido en que se utiliza en la presente, se refiere a una unidad físicamente discreta de un agente adecuado para el paciente que será tratado. Sin embargo, se debe entender que el uso diario total de los compuestos y composiciones de la presente invención se decidirá por el médico tratante dentro del alcance del criterio médico. El nivel específico de dosis efectiva para cualquier paciente u organismo particular dependerá de una variedad de factores, incluyendo el trastorno que será tratado y la gravedad del trastorno, la actividad de la composición específica empleada; la duración del tratamiento; los fármacos utilizados en combinación o coindicencia con la composición específica empleada y los factores bien conocidos en las técnicas médicas. El término "paciente" , en el sentido en que se utiliza en la presente, significa un animal, de preferencia un mamífero, y de mayor preferencia un ser humano.
VI. ANÁLISIS A. PROTOCOLO 1 Análisis para Detectar y Medir las Propiedades Potenciación del AF508-CFTR de los Compuestos Métodos ópticos para el potencial de membrana para analizar las propiedades de modulación del AF508 -CFTR de los compuestos El análisis utiliza tintes fluorescentes para detección de voltaje para medir los cambios en el potencial de membrana con un lector de placas fluorescentes (por ejemplo, FLIPR III, Molecular Devices, Inc.) , como una lectura para aumentar ek AF508-CFTR funcional en las células NIH 3T3. La fuerza impulsora para la respuesta es la creación de un gradiente de iones cloruro junto con la activación del canal por un paso único de adición de liquido después de que las células se hayan tratado anteriormente con los compuestos y se hayan cargado posteriormente con un colorante para detección de voltaj e .
Identificación de los compuestos potenciadoras Para identificar los potenc iadores del AF508-CFTR , se desarrolló un formato de análisis HTS de doble adición. Este análisis HTS utiliza tintes fluorescentes para detección de voltaje para medir los cambios en el potencial de membrana en el FLIPR III como una medida para aumentar la compuerta (conductancia) del AF508 CFTR en las células NIH 3T3 del AF508 CFTR con temperatura corregida. La fuerza impulsora para la respuesta es un gradiente iónico Cl" en combinación con la activación del canal con forskolina en un paso único de adición de líquido utilizando un lector de placas fluorescentes tal como FLIPR III después de que las células se hayan tratado anteriormente con compuestos potenciadores (o un control con vehículo DMSO) y posteriormente se cargó con un colorante de redistribución.
Soluciones Solución de baño #1: (en mM) NaCl 160, KC1 4.5, CaCl2 2, MgCl2 1, HEPES 10, pH 7.4 con NaOH .
Solución del baño libre de cloruro: las sales de cloruro en la solución de baño #1 (anterior) se sustituyen con sales de gluconato.
Cultivo Celular Se utilizaron fibroblastos de ratón NIH3T3 que expresan establemente AF508-CFTR para las mediciones ópticas del potencial de membrana. Las células se mantuvieron a 37°C en C02 al 5% y humedad al 90% en medio de Eagle modificado con Dulbecco y suplementado con glutamina 2 mM, 10% de suero fetal de bovino, 1 X NEAA , ß-??, 1 X penicilina/estreptomicina, y HEPES 25 mM en matraces para cultivo de 175 cm2. Para todos los análisis ópticos, las células se sembraron a ~20 , 000 /cavidad en placas recubiertas con matrigel de 384 cavidades y se cultivaron durante 2 horas a 37°C antes de cultivar a 27°C durante 24 horas, para el análisis intensif icador . Para los análisis de corrección, las células se cultivaron a 27°C o 37°C con y sin los compuestos durante 16-24 horas. Los análisis electrof isiológicos para analizar las propiedades de modulación del AF508-CFTR de los compuestos.
Análisis en Cámara Ussing Se llevaron a cabo experimentos en cámara Ussing sobre células epiteliales polarizadas de las vías respiratorias que expresan el AF508-CFTR para caracterizar adic ionalmente los moduladores del AF508-CFTR identificados en los análisis ópticos. Los epitelios de las vías respiratorias sin FQ y con FQ se aislaron del tejido bronquial, se cultivaron como se describió anteriormente (Galietta, L.J.V., Lantero, S., Gazzolo, A., Sacco, 0., Romano, L., Rossi, G.A., & Zegarra Moran, O. (1998) Jn Vitro Cell. Dev. Biol. 34, 478-481), y se colocaron en placas en filtros Costar® Snapwell R que se pre-recubrieron con medio acondicionado con NIH3T3. Después de cuatro días, los medios apicales se retiraron y las células se desarrollaron en una interfaz de aire-líquido durante >14 días antes de utilizarse. Esto dio por resultado en una monocapa de células columnares totalmente diferenciadas que fueron ciliadas, rasgos que son característicos de los epitelios de las vías respiratorias. Los HBE sin FQ se aislaron de los no fumadores que no tuvieron ninguna enfermedad pulmonar conocida. Los HBE con FQ se aislaron de los pacientes homocigotos para el AF508-CFTR.
Los HBE desarrollados en insertos de cultivos celulares Costar® Snapwell™ se montaron en una cámara Ussing (Physiologic Instruments, Inc., San Diego, CA) , y se midieron la resistencia transepi telial y corriente en corto circuito en presencia de un gradiente de Cl" basolateral a apical dsc) utilizando un sistema para fijación de voltaje (Department of Bioengineering , University of Iowa, IA) . En resumen, los HBE se examinaron bajo las condiciones de registro para la fijación de voltaje (Vhoid = 0 mV) a 37°C. La solución basolateral contuvo (en mM) NaCl 145, K2HP04 0.83, KH2P04 3.3, MgCl2 1.2, CaCl2 1.2, glucosa 10, HEPES 10 (pH ajustado a 7.35 con NaOH) y la solución apical contuvo (en mM) NaGluconato 145, MgCl2 1.2, CaCl2 1.2, glucosa 10, HEPES 10 (pH ajustado a 7.35 con NaOH) .
Identificación de los compuestos potenciadores El protocolo típico utilizó un gradiente de concentración Cl" basolateral en la membrana apical.
Para ajustar este gradiente, se utilizaron soluciones normales de ringer sobre la membrana basolateral, mientras que el NaCl apical se reemplazó por gluconato de sodio equimolar (titulado a pH 7.4 con NaOH) para proporcionar un mayor gradiente de concentración de Cl" a través del epitelio. Se agregaron Forskolina (10 µ?) y todos los compuestos de prueba al costado apical de los insertos de cultivo celular. La eficacia de los supuestos intensif icadores del AF508-CFTR se comparó con la del intens i f icador conocido de genisteína.
Registros de la Fijación de Parches La corriente de Cl" total total en las células del AF508-NIH3T3 se supervisó utilizando la configuración de registro de un parche perforado como se describió anteriormente (Rae, J . , Cooper, K., Gates, P., & Watsky, M. (1991) J. Neurosci . Methods 37, 15-26) . Los registros para fijación de voltaje se realizaron a 22°C utilizando un amplificador para fijación de parche Axopatch 200B (Axon Instruments Inc. , Foster City, CA) . La solución en la pipeta contuvo (en mM) iV-metil -D-glucamina (NMDG) -Cl 150, MgCl2 2, CaCl2 2, EGTA 10, HEPES 10, y 240 Mg/ml de anfotericina-B (pH ajustado a 7.35 con HC1) . El medio extracelular contuvo (en mM) NMDG-C1 150, MgCl2 2, CaCl2 2, HEPES 10 (pH ajustado a 7.35 con HCl) . La generación de pulsos, la obtención de datos y los análisis se realizaron utilizando una PC equipada con una interfaz Digidata 1320 A/D junto con Clampex 8 (Axon Instruments Inc.) . Para activar el AF508-CFTR, se agregaron al baño 10 µ? de forskolina y 20 µ? de genisteína y la proporción de corriente -voltaj e se supervisó cada 30 segundos.
Identificación de los Compuestos Intensificadores También se investigó la capacidad de los intensificadores del AF508-CFTR para aumentar la corriente Cl" del AF508-CFTR (IAFSSOS) macroscópico en células ???3?3 que expresan establemente el AF508-CFTR utilizando técnicas de registro en parche perforado. Los intensificadores identificados a partir de los análisis ópticos provocaron un aumento dependiente de la dosis en IAFSOS con potencia y eficacia similares observadas en los análisis ópticos. En todas las células examinadas, el potencial inverso antes y durante la aplicación del intensif icador fue de aproximadamente -30 mV, el cual es el Eci calculado (-28 mV) .
Cultivo celular Se utilizaron fibroblastos de ratón NIH3T3 que expresan establemente el AF508-CFTR para los registros de células enteras. Las células se mantuvieron a 37°C en C02 al 5% y humedad al 90% en medio de Eagle modificado con Dulbecco suplementado con glutamina 2 mM, 10% de suero fetal de bovino, 1 X NEAA, ß- ?, IX de penici 1ina/ es treptomic ina , y HEPES 25 mM en matraces para cultivo de 175 cm2. Para los registros de células enteras, se sembraron en cubreobjetos de vidrio recubiertos con pol i - L - 1 i s ina 2,500-5,000 células y se cultivaron durante 24-48 horas a 27°C antes de utilizarse para probar la actividad de los intensificadores; y se incubaron con o sin el compuesto de corrección a 37°C para medir la actividad de los correctores.
Registros en canal individual Se observó la actividad de activación del CFTR tipo silvestre y el AF508-CFTR con temperatura corregida expresado en las células NIH3T3 utilizando los registros del parche extirpada dentro-fuera de la membrana como se describió anteriormente (Dalemans, W., Barbry, P., Champigny, G., Jallat, S., Dott, K., Dreyer, D., Crystal, R.G., Pavirani, A., Lecocq, J- P., Lazdunski, M. (1991) Nature 354, 526-528) utilizando un amplificador para fijación de parches Axopatch 200B (Axon Instruments Inc.) . La pipeta contuvo (en mM) : NMDG 150, ácido aspártico 150, CaCl2 5, MgCl2 2, y HEPES 10 (pH ajustado a 7.35 con base Tris) . El baño contuvo (en mM) : NMDG- Cl 150, MgCl2 2, EGTA 5, TES 10, y base Tris 14 (pH ajustado a 7.35 con HCl) . Después de la excisión, se activaron tanto el AF508-CFTR como el AF508-CFTR tipo silvestre mediante la adición de Mg -ATP 1 mM, 75 nM de la subunidad catalítica de la proteína quinasa dependiente de cAMP ( PKA ; Promega Corp. Madison, WI) , y NaF 10 mM para inhibir las fosfatasas proteínicas, lo que impidió la reducción de corriente. El potencial de la pipeta se mantuvo a 80 mV . La actividad del canal se analizó a partir de los parches de membrana que contuvieron =2 canales activos. El número máximo de aberturas simultáneas determinó el número de canales activos en el curso de un experimento. Para determinar la amplitud de corriente de un solo canal, los datos registrados de 120 segundos de la actividad del AF508-CFTR se filtraron "fuera de línea" a 100 Hz y luego se utilizaron para constituir los histogramas de amplitud de todos los puntos que se ajustaron con funciones mult igausianas utilizando el software para análisis Bio-Patch (Bio-Logic Comp . Francia) . La corriente microscópica total y la probabilidad de abertura (P0) se determinaron a partir de los 120 segundos de la actividad del canal. La P0 se determinó utilizando el software Bio-Patch o a partir de la relación P0 = E/i(N), en donde I = corriente media, i = amplitud de corriente del canal individual, y N = número de canales activos en el parche.
Cultivo Celular Los fibroblastos de ratón NIH3T3 que expresan establemente el AF508-CFTR se utilizaron para los registros para fijación de parche de la membrana extirpada. Las células se mantuvieron a 37°C en CO2 al 5% y humedad al 90% en medio de Eagle modificado con Dulbecco suplementado con glutamina 2 mM, 10% de suero fetal de bovino, 1 X NEAA, ß-??, 1 X de penicilina/estreptomicina, y HEPES 25 mM en matraces para cultivo de 175 era2. Para los registros de canal individual, se sembraron 2,500-5,000 células sobre cubreobjetos de vidrio recubiertos con poli -L- lisina y se cultivaron durante 24-48 horas a 27°C antes de utilizarse .
Actividad del compuesto 1 Los compuestos de la invención son útiles como moduladores de transportadores de ATP con cásete de unión. La Tabla 1-3 más adelante ilustra el EC50 y la eficacia relativa de ciertas modalidades en la Tabla l. En la Tabla 1-3 más adelante, se aplican los siguientes significados. EC50: "+++" significa <10 um; "++" significa entre lOuM a 25 uM, "+" significa entre 25uM a 60uM. % de eficacia: "+" significa <25%; "++" significa entre 25% a 100%; "+++" significa >100%.
B. PROTOCOLO 2 Análisis para detectar y medir las propiedades de potenciación del AF508-CFTR de los compuestos Métodos ópticos del potencial de membrana para analizar las propiedades de modulación del AF508-CFTR de los compuestos El análisis utiliza tintes fluorescentes para detección de voltaje para medir los cambios en el potencial de membrana con un lector de placas fluorescentes (por ejemplo, FLIPR III, Molecular Devices, Inc.) como una lectura para aumento en el AF508-CFTR funcional en células NIH 3T3. La fuerza de impulso para la respuesta es la creación de un gradiente iónico de cloruro junto con la activación del canal mediante un paso único de adición de liquido después de que las células se hayan tratado previamente con los compuestos y posteriormente cargadas con un tinte para detección de voltaje.
Identificación de Compuestos Intensificadores Para identificar los intensif icadores de AF508-CFTR, se desarrolló un formato de análisis HTS de doble adición. Este análisis HTS utiliza tintes fluorescentes para detección de voltaje para medir los cambios en el potencial de membrana en el FLIPR III como una medición para el aumento en la activación (conductancia) del ??508 CFTR en células NIH 3T3 del AF508 CFTR con temperatura corregida. La fuerza conductora para la respuesta es un gradiente iónico de Cl" junto con la activación del canal con forskolina en un paso único de adición de líquido utilizando un lector de placas fluorescentes tal como FLIPR III después de que las células se hayan tratado previamente con compuestos intensif icadores (o un control para vehículo DMSO) y posteriormente cargadas con un tinte de redistribución.
Soluciones Solución para el baño #1: (en mM) NaCl 160, KC1 4.5, CaCl2 2, MgCl2 1, HEPES 10, pH 7.4 con NaOH .
Solución para el baño sin cloruro: Las sales de cloruro en la solución para el baño #1 se sustituyen con sales de gluconato.
Cultivo celular Se utilizaron fibroblastos de ratón NIH3T3 que expresan establemente el AF508-CFTR para mediciones ópticas del potencial de membrana. Las células se mantuvieron a 37°C en C02 al 5% y humedad al 90% en medio de Eagle modificado con Dulbecco suplementado con glutamina 2 mM, 10% de suero fetal de bovino, 1 X NEAA, ß-??, 1 X penicilina/estreptomicina, y HEPES 25 mM en matraces para cultivo de 175 cm2. Para todos los análisis ópticos, las células se sembraron a -20 , 000/cavidad en placas recubiertas con matrigel de 384 cavidades y se cultivaron durante 2 horas a 37°C antes de cultivar a 27°C durante 24 horas, para el análisis intensif icador . Para los análisis de corrección, las células se cultivaron a 27°C o 37°C con y sin los compuestos durante 16-24 horas.
Análisis electrof isiológicos para analizar las propiedades de modulación del AF508-CFTR de los compuestos .
Análisis en Cámara Ussing Se llevaron a cabo experimentos en cámara Ussing sobre células epiteliales polarizadas de las vías respiratorias que expresan el AF508-CFTR para caracterizar adicionalmente los moduladores del AF508-CFTR identificados en los análisis ópticos. Los epitelios de las vías respiratorias sin FQ y con FQ se aislaron del tejido bronquial, se cultivaron como se describió anteriormente (Galietta, L.J.V., Lantero, S., Gazzolo, A., Sacco, 0., Romano, L., Rossi, G.A., & Zegarra Moran, O. (1998) In Vitro Cell. Dev . Biol. 34, 478-481) , y se colocaron en placas en filtros Costar® SnapwellMR que se pre-recubrieron con medio acondicionado con NIH3T3. Después de cuatro días los medios apical se retiraron y las células se desarrollaron en una interfaz de aire-líquido durante >14 días antes de utilizarse. Esto dio por resultado en una monocapa de células columnares totalmente diferenciadas que fueron ciliadas, rasgos que son característicos de los epitelios de las vías respiratorias. Los HBE sin FQ se aislaron de los no fumadores que no tuvieron ninguna enfermedad pulmonar conocida. Los HBE con FQ se aislaron de los pacientes homocigotos para el AF508-CFTR.
Los HBE desarrollados en insertos de cultivos celulares Costar® Snapwell™ se montaron en una cámara Ussing (Physiologic Instruments, Inc., San Diego, CA) , y se midieron la resistencia transepitelial y corriente en corto circuito en presencia de un gradiente de Cl" basolateral a apical (Isc) utilizando un sistema para fijación de voltaje (Department of Bioengineering , University of Iowa, IA) . En resumen, los HBE se examinaron bajo las condiciones de registro para la fijación de voltaje (Vhoid = 0 mV) a 37°C. La solución basolateral contuvo (en mM) NaCl 145, K2HP04 0.83, KH2PO4 3.3, MgCl2 1.2, CaCl2 1.2, glucosa 10, HEPES 10 (pH ajustado a 7.35 con NaOH) y la solución apical contuvo (en mM) NaGluconato 145, MgCl2 1.2, CaCl2 1.2, glucosa 10, HEPES 10 (pH ajustado a 7.35 con NaOH) .
Identificación de los compuestos intensi ficadores El protocolo típico utilizó un gradiente de concentración de Cl" basolateral a la membrana apical. Para ajustar este gradiente, se utilizaron soluciones normales de ringer sobre la membrana basolateral, mientras que el NaCl apical se reemplazó por gluconato de sodio equimolar (titulado a pH 7.4 con NaOH) para proporcionar un mayor gradiente de concentración de Cl" a través del epitelio. Se agregaron Forskolina (10 µ?) y todos los compuestos de prueba al costado apical de los insertos de cultivo celular. La eficacia de los supuestos intensificadores del AF508-CFTR se comparó con la del intensif icador conocido, genisteína.
Registros de la Fijación de Parches La corriente total de Cl" en las células del AF508-NIH3T3 se supervisó utilizando la configuración de registro de un parche perforado como se describió anteriormente (Rae, J. , Cooper, K. , Gates, P. , & Watsky, M. (1991) J. Neurosci. Methods 37, 15-26) . Los registros para fijación de voltaje se realizaron a 22°C utilizando un amplificador para fijación de parche Axopatch 200B (Axon Instruments Inc. , Foster City, CA) . La solución en la pipeta contuvo (en mM) iV-metil-D-glucamina (NMDG)-Cl 150, MgCl2 2, CaCl2 2, EGTA 10, HEPES 10, y 240 g/ml de anfotericina-B ( H ajustado a 7.35 con HC1) . El medio extracelular contuvo (en mM) NMDG-C1 150, MgCl2 2, CaCl2 2, HEPES 10 (pH ajustado a 7.35 con HC1) . La generación de pulsos, la obtención de datos y los análisis se realizaron utilizando una PC equipada con una interfaz Digidata 1320 A/D junto con Clampex 8 (Axon Instruments Inc.) . Para activar el AF508-CFTR, se agregaron al baño 10 µ? de forskolina y 20 µ? de genisteína y la proporción de corriente -voltaj e se supervisó cada 30 segundos.
Identificación de los Compuestos Intensificadores También se investigó la capacidad de los intensif icadores del AF508-CFTR para aumentar la corriente de Cl" del AF508-CFTR macroscópico (IAFSSOS) en células NIH3T3 que expresan establemente el ??508-CFTR utilizando técnicas de registro en parche perforado. Los intensif icadores identificados a partir de los análisis ópticos provocaron un aumento dependiente de la dosis en ???508 con potencia y eficacia similares observadas en los análisis ópticos. En todas las células examinadas, el potencial inverso antes y durante la aplicación del intensif icador fue de aproximadamente -30 mv, el cual es el ECi calculado (-28 mV) .
Cultivo celular Se utilizaron fibroblastos de ratón NIH3T3 que expresan establemente el AF508-CFTR para los registros de células enteras. Las células se mantuvieron a 37°C en C02 al 5% y humedad al 90% en medio de Eagle modificado con Dulbecco suplementado con glutamina 2 mM, 10% de suero fetal de bovino, 1 X NEAA, ß-??, IX de penicilina/estreptomicina, y HEPES 25 mM en matraces para cultivo de 175 cm2. Para los registros de células enteras, se sembraron en cubreobjetos de vidrio recubiertos con poli-L- lisina 2,500-5,000 células y se cultivaron durante 24-48 horas a 27°C antes de utilizarse para probar la actividad de los intensif cadores ; y se incubaron con o sin el compuesto de corrección a 37°C para medir la actividad de los correctores.
Registros en canal individual Se observó la actividad de activación del CFTR tipo silvestre y el AF508-CFTR con temperatura corregida expresado en las células NIH3T3 utilizando los registros del parche extirpado dentro-fuera de la membrana como se describió anteriormente (Dalemans, W., Barbry, P., Champigny, G., Jallat, S., Dott, K., Dreyer, D., Crystal, R.G., Pavirani, A., Lecocq, J-P., Lazdunski, M . (1991) Wature 354, 526-528) utilizando un amplificador para fijación de parches Axopatch 200B (Axon Instruments Inc.) . La pipeta contuvo (en mM) : NMDG 150, ácido aspártico 150, CaCl2 5, MgCl2 2, y HEPES 10 (pH ajustado a 7.35 con base Tris) . El baño contuvo (en mM) : NMDG- Cl 150, MgCl2 2, EGTA 5, TES 10, y base Tris 14 (pH ajustado a 7.35 con HC1) . Después de la excisión, se activaron tanto el AF508-CFTR como el AF508-CFTR tipo silvestre mediante la adición de Mg - ATP 1 mM, 75 nM de la subunidad catalítica de la proteína quinasa dependiente de cAMP (PKA; Promega Corp. Madison, WI) , y NaF 10 mM para inhibir las fosfatasas proteínicas, lo que impidió la reducción de corriente. El potencial de la pipeta se mantuvo a 80 mV . La actividad del canal se analizó a partir de los parches de membrana que contuvieron =2 canales activos. El número máximo de aberturas simultáneas determinó el número de canales activos en el curso de un experimento. Para determinar la amplitud de corriente de un solo canal, los datos registrados de 120 segundos de la actividad del AF508-CFTR se filtraron "fuera de línea" a 100 Hz y luego se utilizaron para constituir los histogramas de amplitud de todos los puntos que se ajustaron con funciones mult igausianas utilizando el software para análisis Bio-Patch (Bio-Logic Com . Francia) . La corriente microscópica total y la probabilidad de abertura (P0) se determinaron a partir de los 120 segundos de la actividad del canal. La P0 se determinó utilizando el software Bio-Patch o a partir de la relación P0 = E/i(N) , en donde I = corriente media, i = amplitud de corriente del canal individual, y N = número de canales activos en el parche .
Cultivo celular Los fibroblastos de ratón NIH3T3 que expresan establemente el AF508-CFTR se utilizaron para los registros para fijación de parche de la membrana extirpada. Las células se mantuvieron a 37°C en C02 al 5% y humedad al 90% en medio de Eagle modificado con Dulbecco suplementado con glutamina 2 mM, 10% de suero fetal de bovino, 1 X NEAA, ß-??, 1 X de penicilina/estreptomicina, y HEPES 25 mM en matraces para cultivo de 175 cm2. Para los registros de canal individual, se sembraron 2,500-5,000 células sobre cubreobjetos de vidrio recubiertos con poli-L-lisina y se cultivan durante 24-48 horas a 27°C antes de utilizarse .
Ejemplos; Actividad de los compuestos de la Fórmula II Los compuestos de la Fórmula II son útiles como moduladores de los transportadores con cassete de unión con ATP. Los ejemplos de las actividades y eficacias de los compuestos de la Fórmula II se muestran más adelante en la Tabla 2-15.
La actividad del compuesto se ilustra con "++ + " si la actividad se midió para ser menor a 2.0 µ?, " + + " si la actividad se midió para ser de 2 µ a 5.0 µ?, " + " si la actividad se midió para ser mayor que 5.0 µ?, y "-" si no se dispone de datos. La eficacia se ilustra con "+++" si la eficacia se calculó para ser mayor que 100%, " + + " si la eficacia se calculó que será del 100% al 25%, "+" si la eficacia se calculó para ser inferior al 25 %, y "-" si no se dispone de datos. Cabe señalar que el 100% de eficacia es la respuesta máxima obtenida con 4-metil-2- (5-fenil-lH-pirazol-3-il) fenol.
TABLA 2-15 C. PROTOCOLO 3 Análisis para detectar y medir las propiedades de corrección del AF508-CFTR de los compuestos Métodos ópticos del potencial de membrana para analizar las propiedades de modulación del AF508-CFTR de los compuestos El análisis del potencial de membrana óptica utiliza detectores FRET sensibles al voltaje descritos por González y Tsien (Véase, Gonz lez, J. E. y R. Y. Tsien (1995) "Voltage sensing by fluorescence resonance energy transfer in single cells." Biophys J 69(4) : 1272-80, y González, J. E. y R. Y. Tsien (1997); "Improved indicators of cell membrane potential that use fluorescence resonance energy transfer" Chem Biol 4(4) : 269-77) en combinación con la instrumentación para medir los cambios de fluorescencia tales como el Lector de Soluciones de Ensayo Voltaje/Ion (VIPR) (Véase, González, J. E., K. Oades, et al. (1999) "Cell-based assays and ins trumentation for screening ion-channel targets" Drug Discov Today 4(9): 431-439) .
Estos análisis sensibles al voltaje se basan en el cambio en la transferencia de energía resonante de fluorescencia (FRET) entre el tinte sensible al voltaje, soluble en la membrana, DiSBAC2(3), y un fosfolípido fluorescente, CC2-DMPE, que se une a la laminilla externa de la membrana plasmática y actúa como un donador de FRET . Los cambios en el potencial de la membrana (Vm) provocan que el DiSBAC2(3) con carga negativa se redistribuya a través de la membrana plasmática y por consiguiente cambia la cantidad de transferencia de energía desde CC2-DMPE. Los cambios en la emisión de fluorescencia se pueden supervisar utilizando VIPR™ II, que es un controlador integrado de líquidos y detector de fluorescencia diseñado para llevar a cabo selecciones de base ceular en placas microt ituladoras de 96 o 384 cavidades .
Identificación de los compuestos de corrección Para identificar pequeñas moléculas que corrigen el defecto de tráfico asociado con el AF508-CFTR, se desarrolló un formato de análisis HTS de una sola adición. Las células se incubaron en medio libre de suero durante 16 horas a 37°C en presencia o ausencia (control negativo) del compuesto de prueba. Como un control positivo, las células colocadas en placas de 384 cavidades se incubaron durante 16 horas a 27 °C "a la temperatura correcta" AF508-CFTR. Las células posteriormente se enjuagaron 3X con solución de Ringer Krebs y se cargaron con los tintes sensibles al voltaje. Para activar el AF508-CFTR, se agregaron 10 µ? de forskolina y el potenciador del CFTR, genisteína (20 µ?) , junto con medio libre de Cl" a cada cavidad. La adición de medio libre de Cl" estimuló la descarga de Cl" en respuesta a la activación del AF508-CFTR y la despolarización de membrana resultante se monitoreó ópticamente utilizando los tintes detectores de voltaje a base de FRET.
Identificación de Compuestos Intensificadores Para identificar los intensificadores de AF508-CFTR, se desarrolló un formato de análisis HTS de doble adición. Durante la primera adición, a cada cavidad se agregó un medio libre de Cl- con o sin el compuesto de prueba. Después de 22 segundos, se agregó una segunda adición de medio libre Cl" que contuvo 2-10 µ? de forskolina para activar el AF508-CFTR. La concentración de Cl" extracelular después de las dos adicioneds fue de 28 m , lo cual estimuló la descarga de Cl" en respuesta a la activación del AF508-CFTR y la despolarización de membrana resultante se monitoreó ópticamente utilizando los tintes detectores de voltaje a base de FRET.
Soluciones Solución del baño #1: (en mM) NaCl 160, KC1 4.5, CaCl2 2, MgCl2 1, HEPES 10, pH 7.4 con NaOH .
Solución del baño libre de cloruro: Las sales de cloruro en la solución del baño #1 (anterior) se sustituyeron con sales de gluconato.
CC2-DMPE: Preparado como una solución madre 10 mM en DMSO y se almacenó a -20°C.
DiSBAC2(3) : Preparado como una solución madre 10 mM en DMSO y se almacenó a -20°C.
Cultivo celular Se utilizaron fibroblastos de ratón NIH3T3 que expresan establemente AF508-CFTR para las mediciones ópticas del potencial de membrana. Las células se mantuvieron a 37°C en C02 al 5% y humedad al 90% en medio de Eagle modificado con Dulbecco y suplementado con glutamina 2 mM, 10% de suero fetal de bovino, 1 X NEAA, ß-??, 1 X penicilina/estreptomicina, y HEPES 25 mM en matraces para cultivo de 175 cm2. Para todos los análisis ópticos, las células se sembraron a 30 , 000 / cavidad en placas recubiertas con matrigel de 384 cavidades y se cultivaron durante 2 horas a 37°C antes de cultivar a 27°C durante 24 horas, para el análisis intens i f icador . Para análisis de corrección, las células se cultivaron a 27°C o 37°C con y sin los compuestos durante 16-24 horas.
Análisis electrof isiológicos para analizar las propiedades de modulación del AF508-CFTR de los compuestos .
Análisis en Cámara Ussing Se llevaron a cabo experimentos en cámara Ussing sobre células epiteliales polarizadas que expresan el AF508-CFTR para caracterizar los moduladores del AF508-CFTR identificados en los análisis ópticos. Las células epiteliales FRTAF508 CFTR desarroladas en insertos de cultivo Costar Snalwell se montaron en una Cámara Ussing (Physiologic Instruments, Inc., San Diego, CA) , y las monocapas colocaron en cortocircuito continuamente utilizando un sistema para fijación de voltaje (Departament of Bioengineering , University of Iowa., IA, and, Physiologic Instruments, Inc., San Diego, CA) . La resistencia transepitelial se midió al aplicar un pulso de 2-mV. Bajo estas condiciones, los epitelios FRT demostraron resistencias de 4 ?O/cm2 o más. Las soluciones se mantuvieron a 27°C y se burbujearon con aire. El potencial de desplazamiento de electrodos y la resistencia de líquidos se corrigieron utilizando un inserto libre de células. Bajo estas condiciones, la corriente refleja el flujo de Cl" a través del AF508-CFTR expresado en la membrana apical. El ISc se obtuvo digitalmente utilizando una Interfaz MP100A-CE y el software AcqKnowledge (v3.2.6, BIOPAC Systems, Santa Barbara, CA) .
Identificación de los compuestos de corrección El protocolo típico utilizó un gradiente de concentración de Cl" de membrana basolateral a apical. Para configurar este gradiente, se utilizó solución normal de Ringer en la membrana basolateral, mientras NaCl apical se reemplazó por gluconato de sodio equimolar (ajustado a pH 7.4 con NaOH) para proporcionar un gradiente de concentración mayor de Cl" a través del epitelio. Todos los experimentos se realizaron con monocapas intactas. Para activar totalmente el AF508-CFTR, se aplicaron forskolina (10 µ?) y el inhibidor de PDE , IBMX (100 µ?) , seguidos por la adición del potenciador del CFTR, genisteína (50 µ?) .
Como se observa en otros tipos celulares, la incubación a bajas temperaturas de las células FRT que expresan establemente el AF508 - CFTR aumenta la densidad funcional del CFTR en la membrana plasmática. Para determinar la actividad de los compuestos de corrección, las células se incubaron con 10 µ? del compuesto de prueba durante 24 horas a 37°C y posteriormente se lavaron 3X antes del registro. El Isc producido por cAMP y genisteína en las células tratadas con el compuesto se normalizó a los controles de 27°C y 37°C y expresado como el porcentaje de actividad. La preincubación de las células con el compuesto de corrección aumentó significativamente el ISc producido por cAMP y genisteína en comparación con los controles a 37°C.
Identificación de los compuestos potenciadores El protocolo típico utilizó un gradiente de concentración de Cl" de la membrana basolateral apical. Para configurar este gradiente, se utilizó solución normal de Ringer en la membrana basolateral y se permeabilizó con nistatina (360 g/ml), mientras que el NaCl apical se reemplazó por gluconato de sodio equimolar (ajustado a pH 7.4 con NaOH) para proporcionar un mayor gradiente de concentración de Cl" a través del epitelio. Todos los experimentos se llevaron a cabo 30 minutos después de la permeabilización con nistatina. Se agregaron forskolina (10 µ?) y todos los compuestos de prueba a ambos lados de los insertos de cultivo celular. La eficacia de los supuesto potenc iadores del AF508-CFTR se comparó con el del potenciador conocido, genisteína.
Soluciones Solución basolateral (en mM) : NaCl (135) , CaCl2 (1.2) , MgCl2 (1.2) , K2HP04 (2.4) , KHP04 (0.6) , ácido N- 2 - hidroxie ti lpiperaz in-N '- 2 - etansul fónico (HEPES) (10) , y dextrosa (10) . La solución se ajustó a pH 7.4 con NaOH.
Solución apical (en mM) : Igual que la solución basolateral con NaCl sustituido con Na Gluconato (135) .
Cultivo celular Se utilizaron células epiteliales de rata Fisher (FRT) que expresan el AF508-CFTR ( FRTñF508 "CFTR) para experimentos en cámara Ussing para los supuestos moduladores del AF508-CFTR identificados de nuestros análisis ópticos. Las células se cultivaron en insertos de cultivo celular Costar Snapwell y se cultivaron durante cinco días a 37°C y 5% de C02 en medio F-12 de Ham modificado con Coon suplementado con 5% de suero fetal de ternero, 100 U/ml de penicilina, y 100 µg/ l de estreptomicina. Antes de utilizarse para caracterizar la actividad potenciadora de los compuestos, las células se incubaron a 27°C durante 16-48 horas para corregir el ? F508 CFTR . Para determinar la actividad de los compuestos para corrección, las células se incubaron a 27°C o 37°C con y sin los compuestos durante 24 horas .
Registros de células enteras La corriente del AF508-CFTR macroscópico (IñFsoe) en las células NIH3T3 corregidas con el compuesto de prueba y temperatura que expresan establemente el AF508-CFTR se monitorearon utilizando el parche perforado, el registro de células enteras. En resumen, los registros de fijación de voltaje de ??G508 se realizaron a temperatura ambiente utilizando un amplificador para fijación de parche Axopatch 200B (Axon Instruments Inc., Foster City, CA) . Todos los registros se obtuvieron a una frecuencia de muestreo de 10 kHz y filtro de paso bajo a 1 kHz . Las pipetas tuvieron una resistencia de 5-6 ?O cuando se se rellenaron con la solución intracelular . Bajo estas condiciones de registro, la inversión calculada potencial para Cl" (Ea) a temperatura ambiente fue -28 mV. Todos los registros tuvieron una resistencia de sello >20 GQ y una resistencia en serie de <15 ?O . La generación de pulsos, la obtención de datos y los análisis se realizaron utilizando una PC equipada con una Interfaz A/D Digidata 1320 junto con Clampex 8 (Axon Instruments Inc.) . El baño contuvo <250 µ? de solución salina y se perfundió continuamente a una velocidad de 2 ml/min utilizando un sistema de perfusión impulsada por gravedad.
Identificación de los compuestos de corrección Para determinar la actividad de los compuestos de corrección para aumentar la densidad del AF508-CFTR funcional en la membrana plasmática, se utilizaron las técnicas de registro de parche perforado descritas anteriormente para medir la densidad de corriente después del tratamiento durante 24-h con los compuestos de corrección. Para el AF508-CFTR totalmente activado, se agregaron a las células 10 µ? de forskolina y 20 µ? de genisteína. Bajo nuestras condiciones de registro, la densidad de corriente después de 24 horas de incubación a 27°C fue mayor que la observada después de 24-h de incubación a 37°C. Estos resultados son consistentse con los efectos conocidos de incubación a baja temperatura sobre la densidad de AF508-CFTR en la membrana plasmática. Para determinar los efectos de los compuestos de corrección sobre la densidad de de corriente del CFTR, las células se incubaron con 10 µ? del compuesto de prueba durante 24 horas a 37°C y la densidad de corriente se comparó con los controles a 27°C y 37°C (% de actividad) . Antes del registro, las células se lavaron 3X con medio para registro extracelular para eliminar cualquier compuesto de prueba restante. La preincubación con 10 µ de los compuestos de corrección aumentó significativamente la corriente dependiente de cAMP y genisteína en comparación con los controles a 37°C.
Identificación de los compuestos potenciadores La capacidad de los potenciadores del AF508-CFTR para aumentar la corriente Cl" del AF508-CFTR macroscópico (IñFsoe) en células NIH3T3 que expresan establemente el AF508-CFTR también se investigó utilizando las técnicas de registro de parche perforado. Los potenciadoresidentif icados a partir de los análisis ópticos evocan un aumento dependiente de la dosis en IAFSOS con una potencia y eficacia similares observadas en los análisis ópticos. En todas las células examinadas, el potencial de inversión antes y durante la aplicación del potenciador fue de aproximadamente -30 mV, que es el ECi calculado (-28 mV) .
Soluciones Solución intracelular (en mM) : Cs-aspartato (90), CsCl (50), MgCl2 (1), HEPES (10), y 240 µg/ml de anfotéricoina B (pH ajustado a 7.35 con CsOH) .
Solución extracelular (en mM) : N-metil-D-glucamina (NMDG)-Cl (150) , MgCl2 (2), CaCl2 (2), HEPES (10) (pH ajustado a 7.35 con HC1) .
Cultivo celular Fibroblastos de ratón NIH3T3 que expresan establemente el AF508-CFTR se utilizaron para los registros de células enteras . Las células se mantuvieron a 37°C en 5% de C02 y 90% de humedad en el medio Eagle modificado con Dulbecco suplementado con glutamina 2 mM, 10% de suero fetal de bovino, 1 X NEAA, ß-??, 1 X de penicilina/estreptomicina, y HEPES 25 mM en matraces de cultivo de 175 cm2. Para los registros de células enteras, se sembraron 2,500-5,000 células en cubreobjetos de cristal recubiertos con pol i - L - 1 i s ina y se cultivaron durante 24-48 horas a 27°C antes de utilizarlos para probar la actividad de los potenciadores ; y se incubaron con o sin el compuesto de corrección a 37°C para medir la actividad de los correctores.
Registros de canales individuales Las actividades de un canal individual del AF508-CFTR con temperatura corregida expresado establemente en células NIH3T3 y las actividades de los compuestos potenciadores se observaron utilizando un parche de membrana dentro- fuera extirpado. En resumen, los registros de fijación de voltaje de la actividad de un canal individual se realizaron a temperatura ambiente con un amplificador para fijación de parches Axoparche 200B (Axon Instruments Inc.) . Todos los registros se obtuvieron a una frecuencia de muestreo de 10 kHz y filtro de paso bajo a 400 Hz . Las pipetas de parche se fabricaron de cristal Corning Kovar Sealing #7052 (World Precisión Instruments, Inc., Sarasota, FL) y tuvieron una resistencia de 5-8 O cuando se rellenaron con la solución extracelular . El AF508-CFTR se activó después de la escisión, al agregar Mg -ATP 1 tnM , y 75 nM de la prote na quinasa dependiente de cAMP, la subunidad catalítica (PKA, Promega Corp. Madison, WI) . Después de la actividad de canal estabilizada, el parche se perfusionó utilizando un sistema de microperfusión impulsado por gravedad. La afluencia se colocó adyacente al parche, dando por resultado en un intercambio completo de la solución dentro de 1-2 seg. Para mantener actividad del AF508-CFTR durante la perfusión rápida, el inhibidor de fosfatasa no específica F" (NaF 10 mM) se agregó a la solución del baño. Bajo estas condiciones de registro, la actividad del canal permaneció constante a todo lo largo del registro de parche (hasta 60 min) . Las corrientes producidas por la carga positiva que se mueven dentro de las soluciones intra a extracelulares (aniones que se mueven en la dirección opuesta) se muestran como corrientes positivas. El potencial de pipeta (Vp) se mantuvo a 80 mV .
La actividad del canal se analizó a partir de los parches de membrana que contuvieron <2 canales activos. El número máximo de aberturas simultáneas determinó el número de canales activos durante el curso de un experimento. Para determinar la amplitud de corriente del canal individual, los datos registrados a partir de 120 segundos de la actividad del AF508-CFTR se filtró "fuera de línea" a 100 Hz y luego se utilizaron para construir los histogramas de amplitud en todos los puntos que se ajustaron con funciones muí t igausianas utilizando el software de Análisis Bio-Patch (Bio-Logic Comp . Francia) . La corriente microscópica total y la probabilidad de abertura (P0) se determinaron a partir de 120 segundos de la actividad del canal. La P0 se determinó utilizando el software Bio-Patch o a partir de la relación P0 = I/i(N) , donde I = corriente media, i = amplitud de corriente del canal individual, y N = número de canales activos en el parche.
Soluciones Solución extracelular (en mM) : NMDG (150), ácido aspártico (150) , CaCl2 (5), MgCl2 (2), y HEPES (10) (pH ajustado a 7.35 con base Tris) .
Solución intracelular (en mM) : NMDG- Cl (150), MgCl2 (2) , EGTA (5) , TES (10) , y base Tris (14) (pH ajustado a 7.35 con HC1) .
Cultivo celular Fibroblastos de ratón NIH3T3 que expresan establemente el AF508-CFTR se utilizaron para los registros para fijación de parches de la membrana extirpada. Las células se mantuvieron a 37°C en 5% de C02 y 90% de humedad en medio de Eagle modificado con Dulbecco suplementado con glutamina 2 mM , 10% de suero fetal de bovino, 1 X NEAA, ß-??, 1 X de penicilina/estreptomicina, y HEPES 25 mM en matraces de cultivo de 175 cm2. Para los registros de un solo canal, se sembraron 2,500-5,000 células sobre cubreobjetos de cristal recubiertos con poli -L- lisina y se cultivaron durante 24-48 horas a 27°C antes de utilizarse .
Utilizando los procedimientos descritos anteriormente, se ha medido la actividad, (EC50) , del Compuesto 3 y se muestra en la siguiente Tabla.
TABLA D. PROTOCOLO N Métodos para probar los efectos combinados de los moduladores del CFTR y el ENaC en el transporte de fluidos en cultivos de HBE de la FQ .
Para probar las combinaciones de los moduladores del CFTR y los agentes farmacológicos que reducen el canal de sodio epitelial (ENaC) se midió la actividad ya sea directa o indirectamente en el transporte de fluidos celulares epiteliales, la altura del líquido en la superficie las vías respiratorias (ASL) sobre la superficie apical de las células epiteliales bronquiales humanas (HBE) obtenidas de los bronquios de pacientes con FQ utilizando un microscopio de inmunofluorescencia confocal. La superficie apical se lavó 2 vecse con 300 µ? de tampón de absorción (89 mM de NaCl , 4 m KC1, 1.2 mM de MgCl2, CaCl2 1.2 mM, HEPES 1 mM, Na-Gluconato 16 mM, glucosa 10 mM) se pre-calentó a 37°C. Después del lavado final, se agregaron 20 µ? de dextrano 10,000 Kd conjugado con Alexa Fluor 488 en tampón de absorción y se dejaron equilibrar durante 2 días antes de la prueba. Para probar el efecto de la modulación farmacológica sobre el ASL, los moduladores del CFTR preparados en medios de diferenciación de HBE [Dulbeco's MEM (DMEM) / F12 , Ultroser-G (2.0%; Pall Catalog #15950-017), Fetal Clone II (2%), Insulina (2.5/¿g/ml), extracto de cerebro bovino (0.25%, Lonza Kit#CC-4133, componente#CC-4092C) , Hidrocort isona (20 nM) , Triyodot ironina (500 nM) , Transferrina (2.5/¿g/ml: InVitrogen Catalog #0030124SA) , Etanolamina (250 nM) , Epinefrina (1.5 µ?) , Fosfoetanolamina (250 nM) , Ácido retinoico (10 nM) ] se aplicaron al costado basolateral a la concentración deseada. Los moduladores del ENaC se prepararon en 2000 µ? de Fluorinert FC-770 (3M) a la concentración final y 100 µ? de la solución se agregó a la superficie apical. Después de 96 horas de tratamiento, la altura ASL se midió utilizando un Quorum ave FX Spinning Disc Confocal System en un microscopio Zeis invertido y objetivo 20X. Las imágenes se obtuvieron y se procesaron utilizando Volocity 4.0 utilizando una computadora programable convenientemente (paquete de Imaging Software de Perkin Elmer, anteriormente Improvision) OTRAS MODALIDADES Todas las publicaciones y patentes relacionadas con esta descripción se incorporan en la presente como referencia al mismo grado que si cada publicación o solicitud de patente individual se indicara que se incorporan específica e individualmente como referencia. Si el significado de los términos en cualquiera de las patentes o publicaciones incorporadas como referencia entran en conflicto con el significado de los términos utilizados en esta descripción , se pretende que prevalezca el significado de los términos en esta descripción. Además, el análisis anterior expone y describe las modalidades simplemente ilustrativas de la presente invención. Un experto en la técnica reconocerá fácilmente a partir de este análisis y a partir de los dibujos y las reivindicaciones anexas, que se pueden realizar en la presente diversos cambios, modificaciones y variaciones sin apartarse del espíritu y alcance de la invención como se define en las siguientes reivindicaciones.

Claims (44)

    REIVINDICACIONES 1. Una composición farmacéutica que comprende : A. un inhibidor del canal de sodio epitelial (ENaC) , y B. al menos uno de:
  1. I. un compuesto de la Fórmula I: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde : cada uno de WRW2 y WRW4 se selecciona independientemente de CN, CF3, halo, C2-6 alquilo recto o ramificado, cicloalifático de C2 .12 miembros, fenilo, un heteroarilo de 5-10 miembros o un heterocíclico de 3-7 miembros, en donde el heteroarilo o heterocíclico tiene hasta 3 heteroátomos seleccionados de O, S, o N, en donde el WRW2 y WRW4 se sustituye independiente y opc ionalment e con hasta tres susti tuyentes seleccionados de -OR' , -CF3, -OCF3, SR' , S(0)R', S02R' , -SCF3f halo, CN, -COOR' , -COR', - O ( CH2 ) 2N ( R ' ) 2 , -0(CH2)N(R' ) 2, -CON(R')2, -(CH2)2OR', -(CH2)OR' , -CH2CN, fenilo o fenoxi sustituido opc ionalmente , -N(R' )2, -NR'C(0)OR', -NR'C(0)R' , - ( CH2 ) 2N ( R ' ) 2 , O - (CHa)N(R' ) 2, WRW5 se selecciona de hidrógeno, -0CF3, -CF3, -OH, -OCH3, -NH2, -CN, -CHF2, -NHR' , -N(R' )2, -NHC(0)R' , -NHC(0)OR', -NHS02R' , -CH2OH, -CH2N(R' )2, -C(0)OR', -S02NHR' , -S02N(R' )2, o - CH2NHC ( 0 ) OR ' , y cada R' se selecciona independientemente de un grupo sustituido opcionalmente seleccionado de un grupo Ci-8 alifático, un anillo monocíclico saturado, parcialmente insaturado, o totalmente insaturado de 3-8-miembros que tiene 0-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxigeno o azufre , o un sistema de anillo bicíclico saturado, parcialmente insaturado o totalmente insaturado de 8-12 miembros que tiene 0-5 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre; o dos apariciones de R' se toman junto con el átomo o átomos a los que están unidos para formar un anillo monocíclico o bicíclico saturado, parcialmente insaturado, o totalmente insaturado de 3-12 miembros sustituido opcionalmente que tiene 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre; con la condición de que: i) WRW2 y WR 4 no sean ambos -Cl, y WRW2 , WRW4 y WRWS no sean -OCH2CH2Ph, -OCH2CH2(2-trif luorometil - fenil ) , -OCH2CH2- (6 , 7-dimetoxi-l ,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-2 - ilo) , o lff-pirazol - 3 - ilo sustituido; o un compuesto de la Fórmula Fórmula II o las sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en donde : T es -CH2-, -CH2CH2-, -CF2-, -C(CH3)2-, o -C(O) -; Rx' es H, Ci-6 alifático, halo, CF3 , CHF2, 0(Ci-6 alifático) , y RD1 o RD2 es ZDR9 en donde : ZD es un enlace, CONH, S02NH, S02N(Ci-6 alquilo) , CH2NHS02, CH2N (CH3) S02 , CH2NHCO, COO, S02 , O CO ; y R9 es H, Ci-6 alifático, o arilo; III. un compuesto de la Fórmula III: Fórmula III 0 las sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en donde : cada R es independientemente H, OH, OCH3 o dos R tomados juntos forman -OCH20- u -OCF20-; cada R4 es independientemente H o alquilo; R5 es H o F; R6 es H o CN; R7 es H, -CH2CH (OH) CH20H, - CH2CH2N+ ( CH3 ) 3 , o-CH2CH20H; R8 es H, OH, -CH2CH (OH) CH2OH, -CH2OH, o R7 y R8 tomados juntos forman un anillo de cinco miembros.
  2. 2. La composición farmacéutica según la reivindicación l, que comprende un inhibidor del canal de sodio epitelial y un Compuesto de la Fórmula 1.
  3. 3. La composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en donde en el compuesto de la Fórmula I cada uno de WRW2 y WRW4 se selecciona independientemente de CN, CF3, halo, C2-6 alquilo recto o ramificado, cicloalif tico de C3-i2 miembros, o fenilo, en donde el WRW2 y WRW4 se sustituye independiente y opcionalmente con hasta tres sus t ituyentes seleccionados de -OR', -CF3, -OCF3, -SCF3, halo, -C00R' , -COR', -0 ( CH2 ) 2N (R' ) 2 , -0(CHa)N(R' )a, -CON(R')a, -(CH2)2OR', -(CH2)0R', fenilo sustituido opcionalmente, -N(R' ) 2/ -NR'C(0)0R', -NC(0)R' - ( CH2 ) 2N ( R ' ) 2 O - (CH2)N(R' ) 2; Y WRWS se selecciona de hidrógeno, -0CF3, -CF3, -OH, -0CH3, - NH2 , -CN, - HR ' , -N(R')2, -NHC(0)R', - HC ( O ) OR ' , -NHS02R', -CH20H-, -C(0)0R', -S02NHR' , o - CH2NHC ( 0 ) O - ( R ' ) .
  4. 4. La composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde en el compuesto de la Fórmula I cada uno de WRW2 y WRW4 se selecciona independientemente de -CN, -CF3, C2-6 alquilo recto o ramificado, cicloalifático de C3-i2 miembros, o fenilo, en donde cada uno de WRW2 y WRW4 se sustituye independiente y opcionalmente con hasta tres sus t ituyentes seleccionados de -OR' , -CF3, -0CF3, -SCF3, halo, -C00R' , -COR', - 0 ( CH2 ) 2N ( R ' ) 2 , -0(CH2)N(R' ) 2, -CON(R')2, -(CH2)20R' -(CH2)OR', fenilo sustituido opcionalmente, -N(R')2, -NC(0)OR', -NC(0)R', - (CH2)2N(R' )2, o - (CHa)N(R' )2; y WRW5 se selecciona de -OH, -CN, -NHR' , -N(R')2, -NHC(0)R', -NHC(0)OR', -NHS02R' , -CH2OH, -C(0)OR', -S02NHR', O -CH2NHC (O) O- (R' ) ·
  5. 5. La composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde el compuesto de la Fórmula I RW2 es un anillo de fenilo sustituido opc ionalmente por hasta tres sust ituyentes seleccionados de -0R' , -CF3, -0CF3í -SR', -S(0)R', -S02R' , -SCF3, halo, -CN, -C00R' , -COR', -O (CH2) 2N (R' ) 2, - O ( CH2 ) ( R ' ) 2 , -CON(R')¾( -(CH2)2OR', -(CH2)0R'; -CH2CN, fenilo o fenoxi sustituido opcionalmente, -N(R')2, -NR'C(0)0R', -NR'C(0)R', - (CH2) 2N(R' ) 2, o - (CH2)N(R' ) 2, WRW4 es C2.s alquilo recto o ramificado; y WRW5 es -OH.
  6. 6. La composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en donde en el compuesto de la Fórmula I cada uno de WRW2 y WRW4 es independientemente -CF3, CN-, o un alquilo C2-e recto o ramificado.
  7. 7. La composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en donde en el compuesto de la fórmula I cada uno de WRW2 y WRW4 es C2-6 alquilo recto o ramificado sustituido opcionalmente con hasta tres sust i tuyentes seleccionados independientemente de -OR' , -CF3, -OCF3, -SR' , -S(0)R', -S02R' , -SCF3, halo, -CN, -COOR', -COR', -O (CH2) 2N (R' ) 2 , -O (CH2) N(R' ) 2, - CON ( R ' ) 2 , -(CH2)2OR', -(CH2)OR', -CH2CN-, fenilo o fenoxi sustituido opcionalmente, -N(R' ) 2, -NR'C(0)OR', -NR'C(0)R', - (CH2) 2N(R' ) 2, o - ( CH2 ) N ( R ' ) 2 ·
  8. 8. La composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en donde en el compuesto de la fórmula I cada uno de WRW2 y WRW4 se selecciona independientemente de n-propilo, isopropilo, n-butilo, sec-butilo, t-butilo, 1,1-dimetil-2 -hidroxietilo, 1, l-dimetil-2- ( etoxicarbonil ) etilo , 1 , 1 - dimet i 1 - 3 - ( t -butoxicarbonil - amino ) propi lo , o n-pentilo sustituido opcionalmente .
  9. 9. La composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en donde en el compuesto de la Fórmula I WRWS se selecciona de -CN, - HR ' , -N(R')2, -CH2N(R')2, -NHC(0)R', -NHC(0)0R', -OH, C(0)0R', o -S02NHR' .
  10. 10. La composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en donde en el compuesto de la Fórmula I WRW5 se selecciona de -CN, -NH(C1-6 alquilo), -N(C1-6 alquilo)2, - NHC ( O ) ( d.6 alquilo), - CH2NHC ( 0 ) O ( Ci-6 alquilo), -NHC (O) O (Ci-6 alquilo), -OH, -0(Ci-6 alquilo), -C (O) 0 ( Ci-6 alquilo), -CH20(Ci-6 alquilo), o -S02NH2.
  11. 11. La composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1-10, en donde en el compuesto de la Fórmula I WRW5 se selecciona de -OH, -CH2OH, -NHC(0)OMe, -NHC(0)0Et, -CN, -CH2NHC (O) O ( t-butilo) , -C(0)OMe, o -S02NH2-.
  12. 12. La composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1-11, en donde en el compuesto de la Fórmula I a. WRW2 es C2-e alquilo recto o ramificado; b. WRW4 es C2 -6 alquilo recto o ramificado o alifático monocíclico o bicíclico, y c. WRW5 se selecciona de -CN, -NH(C1-6 alquilo), -N(Ci-6 alquilo)2, -NHC(0) (Ci-6 alquilo), -NHC (O) O ( Ci-6 alquilo), - CH2C ( O ) O ( C1-6 alquilo), -OH, -0(Ci-6 alquilo), -C(0)0(Ci-6 alquilo), o S02NH2.
  13. 13. La composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1-12, en donde en el compuesto de la Fórmula I a. WRW2 es C2-6 alquilo, -CF3/ CN, o fenilo sustituido opc ionalmente con hasta 3 sus t i tuyentes seleccionados de Ci- alquilo, -OCi- alquilo), o halo; b. WRW4 es -CF3, C2 -6 alquilo, o cicloalifático y c. WRW5 es -OH, -NH(Ci-6 alquilo) , o -N(Ci-e alquilo) 2 ·
  14. 14. La composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1-13, en donde en el compuesto de la Fórmula I WR 2 es ter-butilo.
  15. 15. La composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1-14, en donde en el compuesto de la Fórmula I WRW4 es ter-butilo.
  16. 16. La composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1-15, en donde en el compuesto de la Fórmula I WRW5 es -OH.
  17. 17. La composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1-16, donde el compuesto de la Fórmula I comprende el Compuesto 1. Compuesto 1
  18. 18. La composición farmacéutica según la reivindicación 1, que comprende un inhibidor del canal de sodio epitelial y un Compuesto de la Fórmula II, Fórmula II o las sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en donde : T es -CH2-, -CH2CH2-, -CF2-, -C(CH3)2-, O-C(O) -; Ri ' es H, Ci-6 alifático, halo, CF3 , CHF2, 0(C1-6 alifático) ; y RD1 o RD2 es ZDR9 en donde: ZD es un enlace, CONH, S02NH, S02N(C1-6 alquilo), CH2NHS02, CH2N (CH3) S02 , CH2NHC0, COO, S02, o CO; y R9 es H, Ci-6 alifático, o arilo.
  19. 19. La composición farmacéutica según reivindicación 18, en donde el Compuesto de Fórmula II comprende el Compuesto 2. Compuesto 2
  20. 20. La composición farmacéutica según la reivindicación 1, que comprende un inhibidor del canal de sodio epitelial y un Compuesto de la Fórmula III, Fórmula III o las sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en donde : cada R es independientemente H, OH, OCH3 o dos R tomados juntos forman -OCH20- u -0CF2O-; cada R4 es independientemente H o alquilo; R5 es H o F; Rs es H o CN; R7 es H, -CH2CH (OH) CH2OH, - CH2CH2N+ ( CH3 ) 3 , o -CH2CH2OH; R8 es H, OH, -CH2CH (OH) CH2OH, -CH2OH, o R7 y R8 tomados juntos forman un anillo de cinco miembros.
  21. 21. La composición farmacéutica según la reivindicación 20, en donde el Compuesto de la Fórmula III comprende el Compuesto 3. Compuesto 3
  22. 22. La composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21, en donde el inhibidor del ENaC se selecciona de amilorida, benzamilo, dimet il - ami lorida , un compuesto inhibidor del ENaC PCT/EP2006/003387 ; PCT/ EP2006 / 012314 y PCT/EP2006/012320 , un compuesto de la Fórmula IV, o una sal, enantiómero y tautómero farmacéu icamente aceptable del mismo.
  23. 23. La composición farmacéutica según la reivindicación 22, en donde el inhibidor del ENaC es ami lorida .
  24. 24. Una composición farmacéutica que comprende al menos una del Compuesto 1, el Compuesto 2, o el Compuesto 3 y al menos un compuesto de la Fórmula IV, Fórmula IV o las sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en donde : R6 , R7 , R8, R9, R10 y R11 cada uno se seleccionan independientemente de H ; S02R16; arilo sustituido opcionalmente por uno o más grupos Z; un grupo C3-Ci0 carbocíclico sustituido opcionalmente por uno o más grupos Z; un grupo C3-C14 heterocíclico sustituido opcionalmente por uno o más grupos Z; C!-C8 alquilo sustituido opcionalmente por un grupo arilo, un grupo C3-C10 carbocíclico sustituido opcionalmente por uno o más grupos Z o un grupo C3-Ci4 heterocíclico sustituido opcionalmente por uno o más grupos Z.
  25. 25. Una composición farmacéutica que comprende al menos un componente de las Columnas A, B y C de la Tabla I, y al menos un componente de la Columna D de la Tabla I.
  26. 26. La composición farmacéutica según la reivindicación 25, en donde el componente de la columna A es el Compuesto 1, el componente de la columna B es el Compuesto 2, el componente de la columna C es el Compuesto 3 y el componente de la columna D es el Compuesto de la Fórmula IV.
  27. 27. La composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 25-26, que comprende el Compuesto 1 y un compuesto de la Fórmula IV.
  28. 28. La composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 25-27, que comprende el Compuesto 2 y un compuesto de la Fórmula IV .
  29. 29. La composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 25-28, que comprende el Compuesto 3 y un compuesto de la Fórmula IV.
  30. 30. Un método para tratar una enfermedad producida por el CFTR en un ser humano que comprende administrar al ser humano una cantidad eficaz de una composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1-29.
  31. 31. El método según la reivindicación 30, en donde la enfermedad producida por el CFTR se selecciona de fibrosis quística, asma, COPD inducida por tabaquismo, bronquitis crónica, rinosinusitis , es reñimiento, pancreatitis, insuficiencia pancreática, infertilidad masculina provocada por ausencia bilateral congénita de los conductos deferentes (CBAVD) , enfermedad pulmonar leve, pancreatitis idiopática, aspergilosis broncopulmonar alérgica (ABPA) , enfermedad hepática, enfisema hereditario, hemocromatosis hereditaria, deficiencias de fibrinolisis en la coagulación, tales como deficiencia de la proteína C, angioedema hereditario Tipo 1, deficiencias en el procesamiento de lípidos, tales como hipercolesterolemia familiar, quilomicronemia Tipo 1, abetalipoproteinemia, enfermedades por depósito lisosomal, tales como la enfermedad por células I/pseudo-Hurler , mucopolisacaridosis , Sandhof/Tay- Sachs , Crigler- Naj j ar tipo II, poliendocrinopatía/hiperinsulemia, diabetes mellitus, enanismo Laron, deficiencia de mileoperoxidasa , hipoparat iroidismo primario, melanoma, glucanosis CDG tipo 1, hiper iroidismo congénito, osteogénesis imperfecta, hipof ibrinogenemia hereditaria, deficiencia de ACT, Diabetes insípida (DI), DI neurofiseal, DI neprogénica, síndrome de Charcot -Marie Tooth, enfermedad Perlizaeus-Merzbacher , enfermedades neurodegenerativas tales como la enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrófica, palsy supranuclear progresiva, enfermedad de Pick, diversos trastornos neurológicos por pol iglutamina tales como Huntington, ataxia espinocerebelosa tipo I, atrofia muscular espinal y bulbar, palidoluisiana dentatorúbrica , y distrofia miotónica, así como encefalopatías espongiformes, tales como enfermedad de Creut z feldt - Jakob hereditaria (debida a un defecto en el procesamiento de la proteína prión) , enfermedad de Fabry, síndrome de Straussler-Scheinker , COPD, enfermedad de queratoconjuntivitis seca o enfermedad de Sjogren, osteoporosis , osteopenia, curación ósea y crecimiento óseo (incluyendo reparación de huesos, regeneración ósea, reducir la resorción ósea y aumentar la deposición ósea) , Síndrome de Gorham, canalopatías de cloruro tales como miotonía congénita (formas Tomson y Becker) , síndrome de Bartter tipo III, enfermedad de Dent, hiperekplexia , epilepsia, hiperekplexia , enfermedad de depósito lisosómico, síndrome de Angelman, y discinesia ciliar primaria (DCP) , un término para los trastornos hereditarios de la estructura y/o función de los cilios, incluyendo PCD con situs inversus (también conocido como síndrome de Kartagener) , PCD, sin situs inversus y aplasia ciliar .
  32. 32. El método según cualquiera de las reivindicaciones 30-31, en donde la enfermedad producida por el CFTR es fibrosis quística, COPD, enfisema, u osteoporosis .
  33. 33. El método según cualquiera de las reivindicaciones 30-32, en donde la enfermedad producida por el CFTR es fibrosis quística.
  34. 34. El método según cualquiera de las reivindicaciones 30-33, en donde el paciente posee una o más de las siguientes mutaciones del CFTR humano: AF508, R117H, y G551D.
  35. 35. El método según cualquiera de las reivindicaciones 30-34, caracterizado porque el método incluye tratar o disminuir la gravedad de la fibrosis quística en un paciente que posee la mutación AF508 del CFTR humano.
  36. 36. El método según cualquiera de las reivindicaciones 30-35, en donde el método incluye tratar o disminuir la gravedad de la fibrosis quística en un paciente que posee la mutación G551D del CFTR humano.
  37. 37. El método según cualquiera de las reivindicaciones 30-36, en donde el método incluye tratar o disminuir la gravedad de la fibrosis quística en un paciente que posee la mutación AF508 del CFTR humano en al menos un alelo.
  38. 38. El método según cualquiera de las reivindicaciones 30-37, en donde el método incluye tratar o disminuir la gravedad de la fibrosis quística en un paciente que posee la mutación AF508 del CFTR humano en ambos alelos.
  39. 39. El método según cualquiera de las reivindicaciones 30-38, en donde el método incluye tratar o disminuir la gravedad de la fibrosis quística en un paciente que posee la mutación G551D del CFTR humano en al menos un alelo.
  40. 40. El método según cualquiera de las reivindicaciones 30-39, en donde el método incluye tratar o disminuir la gravedad de la fibrosis qulstica en un paciente que posee la mutación G551D del CFTR humano en ambos alelos.
  41. 41. Un kit que comprende una composición farmacéutica que comprende un compuesto de al menos uno de las Columnas AB y C, y al menos un compuesto de la Columna D de acuerdo con la Tabla I.
  42. 42. El kit según la reivindicación 41, en donde el kit comprende el Compuesto 1 y un Compuesto de la Fórmula IV.
  43. 43. El kit según la reivindicación 42, en donde el kit comprende el Compuesto 2 y un Compuesto de la Fórmula IV.
  44. 44. El kit según la reivindicación 43, en donde el kit comprende el Compuesto 3 y un Compuesto de la Fórmula IV. RESUMEN DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con composiciones farmacéuticas que comprenden un inhibidor de la actividad del canal de sodio epitelial en combinación con al menos un compuesto de la Fórmula I, la Fórmula II, o la Fórmula III. La invención también se relaciona con formas sólidas y con las formulaciones farmacéuticas de las mismas, y con los métodos para utilizar estas composiciones en el tratamiento de enfermedades producidas por el CFTR, en particular la fibrosis quística utilizando composiciones farmacéuticas combinadas. Fórmula Fórmula III
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