KR20190140472A - 톨-유사 수용체 작용제를 포함하는 항체 접합체 및 병용 요법 - Google Patents

톨-유사 수용체 작용제를 포함하는 항체 접합체 및 병용 요법 Download PDF

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KR20190140472A
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알렉스 코르테즈
베른하르드 후버트 가이어스탄거
로드리고 안드레아스 헤스
티모시 제트. 호프만
샤일라자 카시브하틀라
테츠오 우노
싱 왕
톰 야오-시앙 우
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노파르티스 아게
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Abstract

톨-유사 수용체 작용제를 포함하는 항체 접합체 및 이러한 접합체의 암 치료 용도가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 접합체는 항-HER2 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 접합체는 제2 치료제와 조합하여 사용된다.

Description

톨-유사 수용체 작용제를 포함하는 항체 접합체 및 병용 요법
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2017년 4월 28일 출원된 미국 가출원 62/491425호의 이익을 주장하며, 이는 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.
서열 목록
본 출원은 ASCII 형식으로 전자적으로 제출되어 그 전체가 본원에 참조로 포함되는 서열 목록을 포함한다. 2018년 4월 12일 생성된 상기 ASCII 사본의 파일명은 PAT057717-WO-PCT_SL.txt이고 크기는 285,849 바이트이다.
기술분야
본 발명은, 선택적으로 제2 치료제와 조합하여, 암을 치료하기 위한, 톨-유사 수용체 작용제를 포함하는 항체 접합체의 용도를 제공한다.
선천성 면역은 환경적 공격(박테리아 또는 바이러스와 같은 병원체를 포함하지만 이에 한정되지 않음)에 대항하는 빠른 비특이적 면역 반응이다. 적응성 면역은 더 느리지만 더 특이적인 면역 반응이며, 이는 숙주에게 오래 지속되거나 방어적인 면역력을 부여하고, 미분화 T림프구를 CD4+ T-헬퍼 세포 및/또는 CD8+ 세포독성 T세포로 분화시키고 활성화하여 세포성 면역 및 체액성 면역을 촉진하는 것을 수반한다. 수지상 세포 또는 대식세포와 같은 선천성 면역계의 항원 제시 세포는 외부 항원을 식균하고 처리하고 세포 표면에서 T세포에 제시하여 T세포 반응을 활성화시킴으로써 선천성 면역계와 적응성 면역계 사이의 중요한 연결 고리 역할을 한다.
톨-유사 수용체(TLR)는 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 자연 살해 세포, 및 T림프구에서 주로 발현되는 패턴 인식 수용체(PRR)이다. TLR은 박테리아, 진균, 원생동물, 및 바이러스로부터의 병원체 관련 분자 패턴(PAMP)에 결합하여 병원체 침입에 대한 첫 번째 방어선 역할을 한다. TLR 활성화는 수지상 세포의 항원 흡수, 성숙, 및 T세포 자극능을 증가시킨다. TLR은 세포외 N-말단 류신-풍부(LRR) 도메인에 이어, 시스테인-풍부 영역, 막관통 도메인, 및 톨/IL-1 수용체(TIR) 도메인이라는 보존 영역을 포함하는 세포내(세포질) 꼬리를 포함한다. LRR 도메인은 리간드 결합 및 관련 신호전달에 중요하며 PRR의 공통적인 특징이다. TIR 도메인은 단백질-단백질 상호작용에서 중요하며 선천성 면역과 관련이 있다. TLR은 염증 반응에 관여하는 유전자의 발현을 유도하는 데 필수적이며, 항원 특이적 후천 면역의 발달에 중요한 역할을 한다.
질병, 특히 암의 치료를 위한 새로운 면역요법이 여전히 필요하다.
본 발명은 질병, 특히 암의 치료에 유용한, 톨-유사 수용체 작용제를 포함하는 항체 접합체, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 이의 약학적 조성물, 및 이들의 조합을 제공한다. 본 발명은 암의 치료, 예방, 또는 개선을 필요로 하는 대상에게, 선택적으로 제2 치료제와 조합하여, 본 발명의 항체 접합체의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 암의 치료, 예방, 또는 개선 방법을 또한 제공한다. 일부 구현예에서, 제2 치료제는 화학요법, 표적항암요법, 종양용해제, 세포독성제, 면역기반요법, 사이토카인, 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제, 백신, 또는 세포요법으로부터 선택된다. 본 발명은 TLR7 작용제 및 항-HER2 항체에 접합시켜 본 발명의 면역자극 접합체를 만드는 데 유용한 링커를 포함하는 화합물을 또한 제공한다. 본 발명의 다양한 구현예가 본원에 기술된다.
일 양태에서, 암(예를 들어, HER2-양성 암)의 치료를 필요로 하는 대상의 암을 치료하는 방법이 본원에 제공되고, 이 방법은 치료 유효량의 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제2 치료제와 조합하여 대상에게 투여하는 단계를 포함하며,
(i) 접합체는 항체 분자, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 부착된, TLR7 작용제인, 화학식 I의 구조를 갖는 화합물을 포함하고
[화학식 I]
Figure pct00001
식 중,
RD는
Figure pct00002
이고, RE는 H이거나; RE는
Figure pct00003
이고 RD는 H이고;
R1은 -NHR2 또는 -NHCHR2R3이고;
R2는 -C3-C6알킬 또는 -C4-C6알킬이고;
R3은 L1OH이고;
L1은 -(CH2)m-이고;
L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)(CH2)nC(R7)2-, -C(=O)(CH2)nC(R7)2SS(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nX2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, 또는 -C(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n이고;
R4는
Figure pct00004
-ONH2, -NH2,
Figure pct00005
-N3,
Figure pct00006
-NHC(=O)CH=CH2, -SH, -SR7, -OH, -SSR6, -S(=O)2(CH=CH2), -(CH2)2S(=O)2(CH=CH2), -NHS(=O)2(CH=CH2), -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I, -C(O)NHNH2,
Figure pct00007
-CO2H, -C(O)NHNH2,
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
또는
Figure pct00015
이고;
R5는
Figure pct00016
이고;
X1은
Figure pct00017
, 또는
Figure pct00018
이고;
X2는
Figure pct00019
, 또는
Figure pct00020
이고;
X3은
Figure pct00021
Figure pct00022
, 또는
Figure pct00023
이고;
R6은 2-피리딜 또는 4-피리딜이고;
각각의 R7은 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R8은 H, C1-C6알킬, F, Cl, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R9는 H, C1-C6알킬, F, Cl, -NH2, -OCH3, -OCH2CH3, -N(CH3)2, -CN, -NO2, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R10은 H, C1-6알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1-4알콕시, 및 -C(=O)OH로 치환된 C1-4알킬로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 m은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및18로부터 독립적으로 선택되고;
(ii) 제2 치료제는 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인, 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제, 화학요법, 표적항암요법, 종양용해제, 세포독성제, 면역기반요법, 백신, 또는 세포요법으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제2 제제는 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인, 또는 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제로부터 선택된다.
일 구현예에서, 항체 분자, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 HER2에 특이적으로 결합한다.
일 양태에서, 암(예를 들어, HER2-양성 암)의 치료를 필요로 하는 대상의 암을 치료하는 방법이 본원에 개시되고, 이 방법은 치료 유효량의 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제2 치료제와 조합하여 대상에게 투여하는 단계를 포함하며,
(i) 접합체는 항체 분자, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 부착된, TLR7 작용제인, 화학식 I의 구조를 갖는 화합물을 포함하고
[화학식 I]
Figure pct00024
식 중,
RD는
Figure pct00025
이고; RE는 H이거나; RE는
Figure pct00026
이고 RD는 H이고;
R1은 -NHR2 또는 -NHCHR2R3이고;
R2는 -C3-C6알킬 또는 -C4-C6알킬이고;
R3은 L1OH이고;
L1은 -(CH2)m-이고;
L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, 또는 -C(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n이고;
R4는
Figure pct00027
-ONH2, -NH2,
Figure pct00028
-N3,
Figure pct00029
-NHC(=O)CH=CH2, SH, -SSR6, -S(=O)2(CH=CH2), -(CH2)2S(=O)2(CH=CH2), -NHS(=O)2(CH=CH2), -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I, -C(O)NHNH2,
Figure pct00030
-CO2H, -C(O)NHNH2,
Figure pct00031
Figure pct00032
Figure pct00033
Figure pct00034
Figure pct00035
Figure pct00036
Figure pct00037
또는
Figure pct00038
이고;
R5는
Figure pct00039
이고;
X1은
Figure pct00040
, 또는
Figure pct00041
이고;
X2는
Figure pct00042
, 또는
Figure pct00043
이고;
X3은
Figure pct00044
, 또는
Figure pct00045
이고;
R6은 2-피리딜 또는 4-피리딜이고;
각각의 R7은 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R8은 H, C1-C6알킬, F, Cl, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R9는 H, C1-C6알킬, F, Cl, -NH2, -OCH3, -OCH2CH3, -N(CH3)2, -CN, -NO2, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R10은 H, C1-6알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1-4알콕시, 및 -C(=O)OH로 치환된 C1-4알킬로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 m은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및18로부터 독립적으로 선택되고;
(ii) 제2 치료제는 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인, 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제, 화학요법, 표적항암요법, 종양용해제, 세포독성제, 면역기반요법, 백신, 또는 세포요법으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제2 제제는 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인, 또는 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제이다.
일 구현예에서, 항체 분자, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 HER2에 특이적으로 결합한다.
일 양태에서, 암(예를 들어, HER2-양성 암)의 치료를 필요로 하는 대상의 암을 치료하는 방법이 본원에 개시되고, 이 방법은 치료 유효량의 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제2 치료제와 조합하여 대상에게 투여하는 단계를 포함하며,
(i) 접합체는 항체 분자, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 부착된, 화학식 Ia 또는 화학식 Ib의 구조를 갖는 화학식 I의 화합물을 포함하고
[화학식 Ia] [화학식 Ib]
Figure pct00046
Figure pct00047
식 중,
R1은 -NHR2 또는 -NHCHR2R3이고;
R2는 -C3-C6알킬 또는 -C4-C6알킬이고;
R3은 L1OH이고;
L1은 -(CH2)m-이고;
L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)(CH2)nC(R7)2-, -C(=O)(CH2)nC(R7)2SS(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nX2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, 또는 -C(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n이고;
R4는
Figure pct00048
-ONH2, -NH2,
Figure pct00049
-NHC(=O)CH=CH2, -N3,
Figure pct00050
SH, -SR7, -OH, -SSR6, -S(=O)2(CH=CH2), -(CH2)2S(=O)2(CH=CH2), -NHS(=O)2(CH=CH2), -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I, -C(O)NHNH2,
Figure pct00051
또는 -CO2H이고;
R5는
Figure pct00052
이고; X1은
Figure pct00053
, 또는
Figure pct00054
이고;
X2는
Figure pct00055
, 또는
Figure pct00056
이고;
X3은
Figure pct00057
Figure pct00058
, 또는
Figure pct00059
이고;
R6은 2-피리딜 또는 4-피리딜이고;
각각의 R7은 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 m은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및 18로부터 독립적으로 선택되고;
(ii) 제2 치료제는 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인, 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제, 화학요법, 표적항암요법, 종양용해제, 세포독성제, 면역기반요법, 백신, 또는 세포요법으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제2 제제는 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인, 또는 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제이다.
일 구현예에서, 항체 분자, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 HER2에 특이적으로 결합한다.
일 양태에서, 암(예를 들어, HER2-양성 암)의 치료를 필요로 하는 대상의 암을 치료하는 방법이 본원에 개시되고, 이 방법은 치료 유효량의 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제2 치료제와 조합하여 대상에게 투여하는 단계를 포함하며,
(i) 접합체는 항체 분자, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 부착된, 화학식 Ia 또는 화학식 Ib의 구조를 갖는 화학식 I의 화합물을 포함하고
[화학식 Ia] [화학식 Ib]
Figure pct00060
Figure pct00061
식 중,
R1은 -NHR2 또는 -NHCHR2R3이고;
R2는 -C3-C6알킬 또는 -C4-C6알킬이고;
R3은 L1OH이고;
L1은 -(CH2)m-이고;
L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, 또는 -C(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n이고;
R4는
Figure pct00062
-ONH2, -NH2,
Figure pct00063
-NHC(=O)CH=CH2, -N3,
Figure pct00064
SH, -SSR6, -S(=O)2(CH=CH2), -(CH2)2S(=O)2(CH=CH2), -NHS(=O)2(CH=CH2), -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I, -C(O)NHNH2,
Figure pct00065
또는 -CO2H이고;
R5는
Figure pct00066
이고; X1은
Figure pct00067
, 또는
Figure pct00068
이고;
X2는
Figure pct00069
, 또는
Figure pct00070
이고;
X3은
Figure pct00071
, 또는
Figure pct00072
이고;
R6은 2-피리딜 또는 4-피리딜이고;
각각의 R7은 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 m은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및18로부터 독립적으로 선택되고;
(ii) 제2 치료제는 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인, 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제, 화학요법, 표적항암요법, 종양용해제, 세포독성제, 면역기반요법, 백신, 또는 세포요법으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제2 제제는 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인, 또는 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제이다.
일 구현예에서, 항체 분자, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 HER2에 특이적으로 결합한다.
일 양태에서, HER2-양성 암의 치료를 필요로 하는 대상의 HER2-양성 암을 치료하는 방법이 본원에 개시되고, 이 방법은 치료 유효량의 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제2 치료제와 조합하여 대상에게 투여하는 단계를 포함하며,
(i) 접합체는 화학식 II의 구조를 포함하고
[화학식 II]
Figure pct00073
식 중,
R50은
Figure pct00074
또는
Figure pct00075
이고, *는 Ab에 대한 부착점을 나타내고;
Ab는 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 항체 분자, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
R1은 -NHR2 또는 -NHCHR2R3이고;
R2는 -C3-C6알킬 또는 -C4-C6알킬이고;
R3은 L1OH이고;
L1은 -(CH2)m-이고;
L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)(CH2)nC(R7)2-, -C(=O)(CH2)nC(R7)2SS(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nX2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, 또는 -C(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n이고;
R40은
Figure pct00076
-S-, -NHC(=O)CH2-, -S(=O)2CH2CH2-, -(CH2)2S(=O)2CH2CH2-, -NHS(=O)2CH2CH2, -NHC(=O)CH2CH2-, -CH2NHCH2CH2-, -NHCH2CH2-,
Figure pct00077
Figure pct00078
Figure pct00079
Figure pct00080
Figure pct00081
Figure pct00082
Figure pct00083
Figure pct00084
또는
Figure pct00085
이고;
X1은
Figure pct00086
, 또는
Figure pct00087
이고;
X2는
Figure pct00088
, 또는
Figure pct00089
이고;
X3은
Figure pct00090
Figure pct00091
, 또는
Figure pct00092
이고;
각각의 R7은 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R8은 H, C1-C6알킬, F, Cl, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R9는 H, C1-C6알킬, F, Cl, -NH2, -OCH3, -OCH2CH3, -N(CH3)2, -CN, -NO2, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R10은 H, C1-6알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1-4알콕시, 및 -C(=O)OH로 치환된 C1-4알킬로부터 독립적으로 선택되고;
R12는 H, 메틸, 또는 페닐이고;
각각의 m은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및 18로부터 독립적으로 선택되고;
y는 1 내지 16의 정수이고;
(ii) 제2 치료제는 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인, 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제, 화학요법, 표적항암요법, 종양용해제, 세포독성제, 면역기반요법, 백신, 또는 세포요법으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제2 제제는 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인, 또는 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제이다.
일부 구현예에서, Ab는 트라스투주맙, 퍼투주맙, 마르게툭시맙, 또는 HT-19, 또는 이들의 부위-특이적 시스테인 돌연변이로부터 선택되며, 부위-특이적 시스테인 돌연변이는 다음 위치 중 하나 이상에 시스테인을 포함한다(모든 위치는 EU 넘버링에 의함).
(a) 항체 중쇄의 위치 152, 360, 및 375, 및
(b) 항체 경쇄의 위치 107, 159, 및 165.
일부 구현예에서, Ab는 다음 중 어느 하나로부터 선택된다.
(a) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1);
서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(HCDR2);
서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(HCDR3);
서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1);
서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(LCDR2); 및
서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(LCDR3)을 포함하는 항체 분자;
(b) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1;
서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2;
서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3;
서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1;
서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및
서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 항체 분자;
(c) 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 분자;
(d) 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 분자;
(e) 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 분자;
(f) 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 분자; 또는
(g) 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 분자.
일부 구현예에서, Ab는 인간 또는 인간화 항-HER2 항체 분자이다.
일부 구현예에서, Ab는 변형 Fc 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, Ab는 다음 위치 중 하나 이상에 시스테인을 포함한다(모든 위치는 EU 넘버링에 의함).
(a) 항체 중쇄의 위치 152, 360, 및 375, 및
(b) 항체 경쇄의 위치 107, 159, 및 165.
일부 구현예에서, Ab는 항체 중쇄의 위치 152 및 375에 시스테인을 포함한다(모든 위치는 EU 넘버링에 의함).
일 양태에서, HER2-양성 암의 치료를 필요로 하는 대상의 HER2-양성 암을 치료하는 방법이 본원에 개시되고, 이 방법은 치료 유효량의 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제2 치료제와 조합하여 대상에게 투여하는 단계를 포함하며,
(i) 접합체는 화학식 II의 구조를 포함하고
[화학식 II]
Figure pct00093
식 중,
R50은
Figure pct00094
또는
Figure pct00095
이고, *는 Ab에 대한 부착점을 나타내고;
Ab는 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 항체 분자, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
R1은 -NHR2 또는 -NHCHR2R3이고;
R2는 -C3-C6알킬 또는 -C4-C6알킬이고;
R3은 L1OH이고;
L1은 -(CH2)m-이고;
L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, 또는 -C(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n이고;
R40은
Figure pct00096
-S-, -NHC(=O)CH2-, -S(=O)2CH2CH2-, -(CH2)2S(=O)2CH2CH2-, -NHS(=O)2CH2CH2, -NHC(=O)CH2CH2-, -CH2NHCH2CH2-, -NHCH2CH2-,
Figure pct00097
Figure pct00098
Figure pct00099
Figure pct00100
Figure pct00101
Figure pct00102
Figure pct00103
Figure pct00104
또는
Figure pct00105
이고;
X1은
Figure pct00106
, 또는
Figure pct00107
이고;
X2는
Figure pct00108
, 또는
Figure pct00109
이고;
X3은
Figure pct00110
, 또는
Figure pct00111
이고;
각각의 R7은 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R8은 H, C1-C6알킬, F, Cl, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R9는 H, C1-C6알킬, F, Cl, -NH2, -OCH3, -OCH2CH3, -N(CH3)2, -CN, -NO2, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R10은 H, C1-6알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1-4알콕시, 및 -C(=O)OH로 치환된 C1-4알킬로부터 독립적으로 선택되고;
R12는 H, 메틸, 또는 페닐이고;
각각의 m은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및 18로부터 독립적으로 선택되고;
y는 1 내지 16의 정수이고;
(ii) 제2 치료제는 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인, 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제, 화학요법, 표적항암요법, 종양용해제, 세포독성제, 면역기반요법, 백신, 또는 세포요법으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제2 제제는 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인, 또는 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제이다.
일부 구현예에서, Ab는 트라스투주맙, 퍼투주맙, 마르게툭시맙, 또는 HT-19, 또는 이들의 부위-특이적 시스테인 돌연변이로부터 선택되며, 부위-특이적 시스테인 돌연변이는 다음 위치 중 하나 이상에 시스테인을 포함한다(모든 위치는 EU 넘버링에 의함).
(a) 항체 중쇄의 위치 152, 360, 및 375, 및
(b) 항체 경쇄의 위치 107, 159, 및 165.
일부 구현예에서, Ab는 다음 중 어느 하나로부터 선택된다.
(a) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1);
서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(HCDR2);
서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(HCDR3);
서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1);
서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(LCDR2); 및
서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(LCDR3)을 포함하는 항체 분자;
(b) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1;
서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2;
서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3;
서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1;
서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및
서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 항체 분자;
(c) 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 분자;
(d) 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 분자;
(e) 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 분자;
(f) 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 분자; 또는
(g) 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 분자.
일부 구현예에서, Ab는 인간 또는 인간화 항-HER2 항체 분자이다.
일부 구현예에서, Ab는 변형 Fc 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, Ab는 다음 위치 중 하나 이상에 시스테인을 포함한다(모든 위치는 EU 넘버링에 의함).
(a) 항체 중쇄의 위치 152, 360, 및 375, 및
(b) 항체 경쇄의 위치 107, 159, 및 165.
일부 구현예에서, Ab는 항체 중쇄의 위치 152 및 375에 시스테인을 포함한다(모든 위치는 EU 넘버링에 의함).
일 양태에서, HER2-양성 암의 치료를 필요로 하는 대상의 HER2-양성 암을 치료하는 방법이 본원에 개시되고, 이 방법은 치료 유효량의 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제2 치료제와 조합하여 대상에게 투여하는 단계를 포함하며,
(i) 화학식 II의 접합체는 화학식 IIa 또는 화학식 IIb의 구조를 포함하고
[화학식 IIa] [화학식 IIb]
Figure pct00112
Figure pct00113
식 중,
Ab는 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 항체 분자, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
R1은 -NHR2 또는 -NHCHR2R3이고;
R2는 -C3-C6알킬 또는 -C4-C6알킬이고;
R3은 L1OH이고;
L1은 -(CH2)m-이고;
L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)(CH2)nC(R7)2-, -C(=O)(CH2)nC(R7)2SS(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nX2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, 또는 -C(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n이고;
R40은
Figure pct00114
또는 -S-이고;
X1은
Figure pct00115
, 또는
Figure pct00116
이고;
X2는
Figure pct00117
, 또는
Figure pct00118
이고;
X3은
Figure pct00119
Figure pct00120
, 또는
Figure pct00121
이고;
각각의 R7은 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 m은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및 18로부터 독립적으로 선택되고;
y는 1 내지 16의 정수이고;
(ii) 제2 치료제는 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인, 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제, 화학요법, 표적항암요법, 종양용해제, 세포독성제, 면역기반요법, 백신, 또는 세포요법으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제2 제제는 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인, 또는 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제이다.
일 양태에서, HER2-양성 암의 치료를 필요로 하는 대상의 HER2-양성 암을 치료하는 방법이 본원에 개시되고, 이 방법은 치료 유효량의 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제2 치료제와 조합하여 대상에게 투여하는 단계를 포함하며,
(i) 화학식 II의 접합체는 화학식 IIa 또는 화학식 IIb의 구조를 포함하고
[화학식 IIa] [화학식 IIb]
Figure pct00122
Figure pct00123
식 중,
Ab는 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 항체 분자, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
R1은 -NHR2 또는 -NHCHR2R3이고;
R2는 -C3-C6알킬 또는 -C4-C6알킬이고;
R3은 L1OH이고;
L1은 -(CH2)m-이고;
L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, 또는 -C(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n이고;
R40은
Figure pct00124
또는 -S-이고;
X1은
Figure pct00125
, 또는
Figure pct00126
이고;
X2는
Figure pct00127
, 또는
Figure pct00128
이고;
X3은
Figure pct00129
, 또는
Figure pct00130
이고;
각각의 R7은 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 m은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및 18로부터 독립적으로 선택되고;
y는 1 내지 16의 정수이고;
(ii) 제2 치료제는 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인, 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제, 화학요법, 표적항암요법, 종양용해제, 세포독성제, 면역기반요법, 백신, 또는 세포요법으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제2 제제는 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인, 또는 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제이다.
일 구현예에서,
R1은 -NHR2이고;
R2는 -C4-C6알킬이고;
L2는 -(CH2)n- 또는 -C(=O)(CH2)n이고;
R40은
Figure pct00131
, 또는
Figure pct00132
이고;
각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
y는 1 내지 16의 정수이다.
일 양태에서, HER2-양성 암의 치료를 필요로 하는 대상의 HER2-양성 암을 치료하는 방법이 본원에 개시되고, 이 방법은 치료 유효량의 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제2 치료제와 조합하여 대상에게 투여하는 단계를 포함하며,
(i) 화학식 II의 접합체는 화학식 IIa 또는 화학식 IIb의 구조를 포함하고
[화학식 IIa] [화학식 IIb]
Figure pct00133
Figure pct00134
식 중,
R1은 -NHR2이고;
R2는 -C4-C6알킬이고;
L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, 또는 -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-이고;
R40은
Figure pct00135
, 또는
Figure pct00136
이고;
X1은
Figure pct00137
이고; X2는
Figure pct00138
또는
Figure pct00139
이고; X3은
Figure pct00140
이고;
각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및 18로부터 독립적으로 선택되고;
y는 1 내지 16의 정수이고;
(ii) 제2 치료제는 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인, 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제, 화학요법, 표적항암요법, 종양용해제, 세포독성제, 면역기반요법, 백신, 또는 세포요법으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제2 제제는 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인, 또는 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제이다.
일 구현예에서, 접합체는 소수성 상호작용 크로마토그래피로 측정시 0.8 이상의 소수성 지수를 갖는다.
일 양태에서, HER2-양성 암의 치료를 필요로 하는 대상의 HER2-양성 암을 치료하는 방법이 본원에 개시되고, 이 방법은 치료 유효량의 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제2 치료제와 조합하여 대상에게 투여하는 단계를 포함하며,
(i) 접합체는 하기 화학식 중 어느 하나의 구조를 포함하고
Figure pct00141
Figure pct00142
Figure pct00143
Figure pct00144
Figure pct00145
Figure pct00146
Figure pct00147
Figure pct00148
Figure pct00149
및
Figure pct00150
식 중, Ab는 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 항체 분자, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고, y는 1 내지 4의 정수이고,
(ii) 제2 치료제는 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인, 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제, 화학요법, 표적항암요법, 종양용해제, 세포독성제, 면역기반요법, 백신, 또는 세포요법으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제2 제제는 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인, 또는 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제이다.
일 구현예에서, Ab는 트라스투주맙, 퍼투주맙, 마르게툭시맙, 또는 HT-19, 또는 이들의 부위-특이적 시스테인 돌연변이로부터 선택되며, 부위-특이적 시스테인 돌연변이는 다음 위치 중 하나 이상에 시스테인을 포함한다(모든 위치는 EU 넘버링에 의함).
(a) 항체 중쇄의 위치 152, 360, 및 375, 및
(b) 항체 경쇄의 위치 107, 159, 및 165.
일 구현예에서, Ab는 다음 중 어느 하나로부터 선택된다.
(a) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1);
서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(HCDR2);
서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(HCDR3);
서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1);
서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(LCDR2); 및
서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(LCDR3)을 포함하는 항체 분자;
(b) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1;
서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2;
서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3;
서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1;
서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및
서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 항체 분자;
(c) 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 분자;
(d) 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 분자;
(e) 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 분자;
(f) 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 분자; 또는
(g) 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 분자.
일 구현예에서, Ab는 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일 구현예에서, 화합물은 항체 중쇄의 위치 152 및 375의 시스테인에 부착된다(모든 위치는 EU 넘버링에 의함).
일 구현예에서, y는 약 3 내지 4이다.
일 구현예에서, 접합체는 소수성 상호작용 크로마토그래피로 측정시 0.8 이상의 소수성 지수를 갖는다.
일 구현예에서, 접합체는 항-HER2 항체 분자 단독과 비교할 때 지속된 기간 동안 HER2-양성 암을 억제시키고/시키거나 HER2-양성 암의 재발을 감소시킬 수 있다.
다른 양태에서, HER2-양성 암의 치료를 필요로 하는 대상의 HER2-양성 암을 치료하는 방법으로서, 치료 유효량의 약학적 조성물을 제2 치료제와 조합하여 대상에게 투여하는 단계를 포함하되, 약학적 조성물은 화학식 II, 화학식 IIa 또는 화학식 IIb의 항체 접합체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 방법이 본원에 개시된다.
다른 양태에서, 제2 치료제와 조합하여 대상의 HER2-양성 암의 치료에 사용하기 위한, 화학식 II, 화학식 IIa 또는 화학식 IIb의 항체 접합체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 본원에 개시된다. 일 구현예에서, 제2 치료제는 화학요법, 표적항암요법, 종양용해제, 세포독성제, 면역기반요법, 사이토카인, 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제, 백신, 또는 세포요법으로부터 선택된다.
다른 양태에서, HER2-양성 암의 치료를 필요로 하는 대상의 HER2-양성 암의 치료를 위한 의약의 제조에 있어서, 제2 치료제와 조합된, 화학식 II, 화학식 IIa 또는 화학식 IIb의 항체 접합체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 조성물의 용도가 본원에 개시된다. 일 구현예에서, 제2 치료제는 화학요법, 표적항암요법, 종양용해제, 세포독성제, 면역기반요법, 사이토카인, 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제, 백신, 또는 세포요법으로부터 선택된다.
일 구현예에서, 상기 방법 또는 용도에서, 제2 치료제는 보조억제 분자의 억제제 또는 보조자극 분자의 활성화제이며,
(i) 보조억제 분자는 프로그램된 세포사멸 수용체-1(PD-1), 프로그램된 사멸-리간드 1(PD-L1), 림프구 활성화 유전자-3(LAG-3), 또는 T세포 면역글로불린 도메인 및 뮤신 도메인 3(TIM-3)으로부터 선택되고,
(ii) 보조자극 분자는 글루코코르티코이드-유도 TNFR 관련 단백질(GITR)이다.
일 구현예에서, 제2 치료제는 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 분자이고, 항체 분자는
(i) 표 6 또는 7에 개시된 임의의 항-PD-1 중쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 중쇄 상보성 결정 영역 1(VHCDR1), VHCDR2, 및 VHCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH), 및/또는
표 6 또는 7에 열거된 임의의 항-PD-1 경쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 경쇄 상보성 결정 영역 1(VLCDR1), VLCDR2, 및 VLCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(ii) 표 6 또는 7에 개시된 임의의 항-PD-1 중쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 VH를 포함하는 VH, 및/또는
표 6 또는 7에 개시된 임의의 항-PD-1 경쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 VL을 포함하는 VL; 또는
(iii) 표 6 또는 7에 개시된 항-PD-1 중쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열), 및/또는
표 6 또는 7에 개시된 항-PD-1 경쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)을 포함한다.
일 구현예에서, 제2 치료제는 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 분자이고, 항체 분자는
(i) 서열번호 501의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열번호 502의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 503의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 510의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열번호 511의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 512의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(ii) 서열번호 506의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 520의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(iii) 서열번호 508의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 522의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
(iv) 서열번호 506의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 516의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(v) 서열번호 508의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 518의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일 구현예에서, 제2 치료제는 인간 PD-L1에 특이적으로 결합하는 항체 분자이고, 항체 분자는
(i) 표 8 또는 9에 개시된 임의의 항-PD-L1 중쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 중쇄 상보성 결정 영역 1(VHCDR1), VHCDR2, 및 VHCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH), 및/또는
표 8 또는 9에 열거된 임의의 항-PD-L1 경쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 경쇄 상보성 결정 영역 1(VLCDR1), VLCDR2, 및 VLCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(ii) 표 8 또는 9에 개시된 임의의 항-PD-L1 중쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 VH를 포함하는 VH, 및/또는
표 8 또는 9에 개시된 임의의 항-PD-L1 경쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 VL을 포함하는 VL; 또는
(iii) 표 8 또는 9에 개시된 항-PD-L1 중쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열), 및/또는
표 8 또는 9에 개시된 항-PD-L1 경쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)을 포함한다.
일 구현예에서, 제2 치료제는 인간 PD-L1에 특이적으로 결합하는 항체 분자이고, 항체 분자는
(i) 서열번호 601의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열번호 602의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 603의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 609의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열번호 610의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 611의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(ii) 서열번호 606의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 616의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(iii) 서열번호 608의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 618의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
(iv) 서열번호 620의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 624의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(v) 서열번호 622의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 626의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일 구현예에서, 제2 치료제는 인간 LAG-3에 특이적으로 결합하는 항체 분자이고, 항체 분자는
(i) 표 10 또는 11에 개시된 임의의 항-LAG-3 중쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 중쇄 상보성 결정 영역 1(VHCDR1), VHCDR2, 및 VHCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH), 및/또는
표 10 또는 11에 열거된 임의의 항-LAG-3 경쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 경쇄 상보성 결정 영역 1(VLCDR1), VLCDR2, 및 VLCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(ii) 표 10 또는 11에 개시된 임의의 항-LAG-3 중쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 VH를 포함하는 VH, 및/또는
표 10 또는 11에 개시된 임의의 항-LAG-3 경쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 VL을 포함하는 VL; 또는
(iii) 표 10 또는 11에 개시된 항-LAG-3 중쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열), 및/또는
표 10 또는 11에 개시된 항-LAG-3 경쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)을 포함한다.
일 구현예에서, 제2 치료제는 인간 LAG-3에 특이적으로 결합하는 항체 분자이고, 항체 분자는
(i) 서열번호 701의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열번호 702의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 703의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 710의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열번호 711의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 712의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(ii) 서열번호 706의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 718의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(iii) 서열번호 709의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 721의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
(iv) 서열번호 724의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 730의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(v) 서열번호 727의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 733의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일 구현예에서, 제2 치료제는 인간 TIM-3에 특이적으로 결합하는 항체 분자이고, 항체 분자는
(i) 표 12 또는 13에 개시된 임의의 항-TIM-3 중쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 중쇄 상보성 결정 영역 1(VHCDR1), VHCDR2, 및 VHCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH), 및/또는
표 12 또는 13에 열거된 임의의 항-TIM-3 경쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 경쇄 상보성 결정 영역 1(VLCDR1), VLCDR2, 및 VLCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(ii) 표 12 또는 13에 개시된 임의의 항-TIM-3 중쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 VH를 포함하는 VH, 및/또는
표 12 또는 13에 개시된 임의의 항-TIM-3 경쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 VL을 포함하는 VL; 또는
(iii) 표 12 또는 13에 개시된 항-TIM-3 중쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열), 및/또는
표 12 또는 13에 개시된 항-TIM-3 경쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)을 포함한다.
일 구현예에서, 제2 치료제는 인간 TIM-3에 특이적으로 결합하는 항체 분자이고, 항체 분자는
(i) 서열번호 801의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열번호 802의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 803의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 810의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열번호 811의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 812의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(ii) 서열번호 806의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 816의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(iii) 서열번호 808의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 818의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
(iv) 서열번호 801의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열번호 820의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 803의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 810의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열번호 811의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 812의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(v) 서열번호 822의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 826의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(vi) 서열번호 824의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 828의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일 구현예에서, 제2 치료제는 인간 GITR에 특이적으로 결합하는 항체 분자이고, 항체 분자는
(i) 표 14 또는 15에 개시된 임의의 항-GITR 중쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 중쇄 상보성 결정 영역 1(VHCDR1), VHCDR2, 및 VHCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH), 및/또는
표 14 또는 15에 열거된 임의의 항-GITR 경쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 경쇄 상보성 결정 영역 1(VLCDR1), VLCDR2, 및 VLCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(ii) 표 14 또는 15에 개시된 임의의 항-GITR 중쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 VH를 포함하는 VH, 및/또는
표 14 또는 15에 개시된 임의의 항-GITR 경쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 VL을 포함하는 VL; 또는
(iii) 표 14 또는 15에 개시된 항-GITR 중쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열), 및/또는
표 14 또는 15에 개시된 항-GITR 경쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)을 포함한다.
일 구현예에서, 제2 치료제는 인간 GITR에 특이적으로 결합하는 항체 분자이고, 항체 분자는
(i) 서열번호 909의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열번호 911의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 913의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 914의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열번호 916의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 918의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(ii) 서열번호 901의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 902의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(iii) 서열번호 903의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 904의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일 구현예에서, 상기 방법 또는 용도에 있어서, 제2 치료제는 사이토카인이고, 사이토카인은 IL-15 수용체 알파(IL-15Ra)의 가용성 형태와 복합체화된 IL-15를 포함하고, IL-15 및 IL-15Ra는 표 16에 개시된 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)을 포함한다.
일 구현예에서, 제2 치료제는 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제이고, 제2 치료제는 IL-6 억제제(예를 들어, 실툭시맙), IL-6 수용체(IL-6R) 억제제(예를 들어, 토실리주맙), 바제독시펜, sgp130 차단제, 혈관작용 약제, 스테로이드(예를 들어, 코르티코스테로이드), 면역억제제, 히스타민 H2 수용체 길항제, 진통제(예를 들어, 아세트아미노펜), 해열제, 또는 기계적 인공호흡으로부터 선택된다.
일 구현예에서, HER2-양성 암은 위암, 식도암, 위식도 접합 선암종, 대장암, 직장암, 유방암, 난소암, 자궁경부암, 자궁암, 자궁내막암, 방광암, 요로암, 췌장암, 폐암, 전립선암, 골육종, 신경모세포종, 교모세포종, 및 두경부암 중 어느 하나일 수 있다. HER2-양성 암은 (예를 들어, 3+ IHC 점수를 갖는) 높은 HER2 발현, 또는 (예를 들어, 2+ IHC 점수를 갖는) 낮은 HER2 발현을 가질 수 있다.
본원에 기술된 항체 접합체는 (예를 들어, 3+ IHC 점수를 갖는) 높은 HER2-발현 종양뿐만 아니라, (예를 들어, 2+ IHC 점수를 갖는) 낮은 HER2-발현 종양을 치료하는 데 사용될 수 있다.
일 구현예에서, 접합체와 제2 치료제는 동시에 또는 순차적으로 투여된다.
일 구현예에서, 접합체는 대상에게 정맥내, 종양내, 또는 피하 투여된다. 일 구현예에서, 접합체는 체중 kg당 약 0.03~6 mg의 용량으로 투여된다. 일 구현예에서, 접합체는 체중 kg당 약 0.7~1.4 mg의 용량으로 투여된다. 일 구현예에서, 접합체는 체중 kg당 약 0.1~4 mg의 용량으로 투여된다. 일 구현예에서, 접합체는 체중 kg당 약 0.1 mg의 용량으로 투여된다. 일 구현예에서, 접합체는 체중 kg당 약 0.3 mg의 용량으로 투여된다. 일 구현예에서, 접합체는 체중 kg당 약 1 mg의 용량으로 투여된다. 일 구현예에서, 접합체는 체중 kg당 약 2 mg의 용량으로 투여된다. 일 구현예에서, 접합체는 체중 kg당 약 4 mg의 용량으로 투여된다.
일 구현예에서, 제2 치료제는 대상에게 정맥내, 종양내, 또는 피하 투여된다.
일 구현예에서, 제2 치료제는 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 분자이다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 체중 kg당 약 50~450 mg의 용량으로 투여된다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 체중 kg당 약 100, 200, 300, 또는 400 mg의 용량으로 투여된다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 약 100 mg 내지 약 600 mg, 예를 들어 약 200 mg 내지 500 mg, 예를 들어 약 250 mg 내지 450 mg, 약 300 mg 내지 400 mg, 약 250 mg 내지 350 mg, 약 350 mg 내지 450 mg, 또는 약 100 mg, 약 200 mg, 약 300 mg, 또는 약 400 mg의 용량(예를 들어, 균일 용량)으로 주사에 의해(예를 들어, 피하 또는 정맥내) 투여된다. 투여 스케줄(예를 들어, 균일 투여 스케줄)은, 예를 들어 주 1회 내지 2주, 3주, 4주, 5주, 또는 6주에 1회로 다양할 수 있다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 3주에 1회 또는 4주에 1회 약 300 mg 내지 400 mg의 용량으로 투여된다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 3주에 1회 약 300 mg의 용량으로 투여된다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 4주에 1회 약 400 mg의 용량으로 투여된다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 4주에 1회 약 300 mg의 용량으로 투여된다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 3주에 1회 약 400 mg의 용량으로 투여된다.
일 구현예에서, 접합체와 제2 치료제는 제3 치료제와 조합하여 투여되고, 제3 치료제는 화학요법, 표적항암요법, 종양용해제, 세포독성제, 면역기반요법, 사이토카인, 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제, 백신, 또는 세포요법으로부터 선택된다.
도 1은 N87 이종이식 종양 모델에서 항-HER2-mAb2-(C-1) 접합체의 단회 치료 후의 결과를 나타낸다. 미치료 동물(흰색 원)과 비교할 때, 1 mg/kg(검은색 다이아몬드), 2.5 mg/kg(검은색 삼각형), 5 mg/kg(검은색 원), 및 10 mg/kg(검은색 사각형)을 포함해 시험된 모든 투여량에 대해 종양의 퇴행이 관찰되었다. 미치료 동물(흰색 원)과 비교할 때, 10 mg/kg의 비접합 항-HER2 mAb2 단독(흰색 삼각형) 또는 이소형 대조군 항체-(C-1) 접합체(흰색 다이아몬드)로 치료받은 N87 이종이식 마우스에서 N87 위 종양의 퇴행은 관찰되지 않았다. 데이터는 (투여후) 시간에 따른 평균 종양 부피(평균 +/- SEM)를 나타낸다.
도 2는 항-HER2-mAb1-(C-1) 또는 항-HER2-mAb1-(C-5)의 단회 투여로 인간 N87 이종이식 종양을 치료한 후의 결과를 나타낸다. 미치료 동물(흰색 원)과 비교할 때, 1 mg/kg의 항-HER2-mAb1-(C-1)(검은색 사각형) 또는 1 mg/kg의 항-HER2-mAb1-(C-5)(검은색 삼각형)로 치료한 후에 인간 N87 이종이식 종양의 퇴행이 관찰된 반면, 0.3 mg/kg의 항-HER2-mAb1-(C-1)(검은색 원) 또는 0.3 mg/kg의 항-HER2-mAb1-(C-5)(검은색 다이아몬드)로 치료한 것은 종양 정체를 나타냈다. 미치료 동물(흰색 원)과 비교할 때, 이소형 대조군 항체-(C-5) 접합체(흰색 다이아몬드)로 치료받은 N87 이종이식 마우스에서 N87 위 종양의 퇴행은 관찰되지 않았다. 데이터는 (투여후) 시간에 따른 평균 종양 부피(평균 +/- SEM)를 나타낸다.
도 3은 항-HER2-mAb1-(C-5)의 단회 투여로 인간 N87 이종이식 종양을 치료한 후의 결과를 나타낸다. 미치료 동물(흰색 원)과 비교할 때, 5 mg/kg의 항-HER2-mAb1-(C-5)(검은색 사각형) 또는 3 mg/kg의 항-HER2-mAb1-(C-5)(검은색 원)로 치료한 후에 인간 N87 이종이식 종양의 퇴행이 관찰된 반면, 1 mg/kg의 항-HER2-mAb1-(C-5)(검은색 삼각형)로 치료한 것은 종양 정체를 나타냈다. 데이터는 (투여후) 시간에 따른 평균 종양 부피(평균 +/- SEM)를 나타낸다.
도 4는 상이한 화합물과 접합된 항-HER2-mAb1의 단회 투여로 인간 N87 이종이식 종양을 치료한 후의 결과를 나타낸다. 미치료 동물(흰색 원)과 비교할 때, 1 mg/kg의 항-HER2-mAb1-(C-5)(검은색 삼각형), 항-HER2-mAb1-(C-60)(흰색 삼각형), 항-HER2-mAb1-(C-59)(검은색 사각형), 항-HER2-mAb1-(C-61)(흰색 사각형), 항-HER2-mAb1-(C-35)(검은색 육각형), 항-HER2-mAb1-(C-37)(흰색 육각형), 항-HER2-mAb1-(C-64)(검은색 다이아몬드), 또는 항-HER2-mAb1-(C-62)(흰색 다이아몬드)로 치료한 후에 인간 N87 이종이식 종양의 초기 퇴행에 이어 정체가 관찰되었다. 데이터는 (투여후) 시간에 따른 평균 종양 부피(평균 +/- SEM)를 나타낸다.
도 5a 및 5b는 항-ratHER2-(C-46) 접합체의 단회 투여로 MMC 마우스 유방 종양(ratHER2-양성)을 치료한 결과를 나타낸다. 결과는 항-ratHER2-(C-46) 접합체(도 5a)로 치료받은 8마리의 마우스 중 7마리에서 완전한 종양 퇴행이 관찰되었지만, 비결합(naked) 항-ratHER2 항체(도 5b)로 치료받은 8마리의 마우스 중 3마리에서만 완전한 종양 퇴행이 관찰된 것을 보여준다. MMC 유방암 동계(syngeneic) 모델에서 종양이 200 mm3의 평균 크기에 도달했을 때 치료를 시작하였다. 데이터는 (투여후) 시간에 따른 평균 종양 부피(평균 +/- SEM)를 나타낸다.
도 6은 항-HER2-mAb1-(C-5)의 단회 투여로 인간 HCC1954 유방 이종이식 종양을 치료한 후의 결과를 나타낸다. 미치료 동물(흰색 원)과 비교할 때, 10 mg/kg의 항-HER2-mAb1-(C-5)(검은색 사각형) 또는 3 mg/kg의 항-HER2-mAb1-(C-5)(검은색 원)로 치료한 후에 인간 HCC1954 이종이식 종양의 퇴행이 관찰된 반면, 1 mg/kg의 항-HER2-mAb1-(C-5)(검은색 삼각형)로 치료한 것은 종양 정체를 나타냈다. 미치료 동물(흰색 원)과 비교할 때, 10 mg/kg의 이소형 대조군 항체-(C-5) 접합체(흰색 다이아몬드) 또는 비접합 항-HER2-mAb1 단독(흰색 삼각형)으로 치료받은 HCC1954 이종이식 마우스에서 종양의 퇴행은 관찰되지 않았다. 데이터는 (투여후) 시간에 따른 평균 종양 부피(평균 +/- SEM)를 나타낸다.
도 7은 항-HER2-mAb1-(C-5)의 단회 투여로 인간 SKOV3 난소 이종이식 종양을 치료한 후의 결과를 나타낸다. 미치료 동물(흰색 원)과 비교할 때, 10 mg/kg의 항-HER2-mAb1-(C-5)(검은색 사각형)로 치료한 후에 인간 SKOV3 이종이식 종양의 퇴행이 관찰된 반면, 3 mg/kg의 항-HER2-mAb1-(C-5)(검은색 원)로 치료한 것은 초기 종양 퇴행에 이어 종양의 재성장을 나타냈다. 미치료 동물(흰색 원)과 비교할 때, 10 mg/kg의 이소형 대조군 항체-(C-5) 접합체(흰색 다이아몬드) 또는 비접합 항-HER2-mAb1 단독(흰색 삼각형)으로 치료받은 SKOV3 이종이식 마우스에서 종양의 퇴행은 관찰되지 않았다. 데이터는 (투여후) 시간에 따른 평균 종양 부피(평균 +/- SEM)를 나타낸다.
도 8a 내지 8c는 N87(도 8a), HCC1954(도 8b), 및 SKOV3(도 8c) 이종이식 종양에서의 HER2 발현을 보여주는 대표적인 면역조직화학(IHC) 이미지를 나타낸다. 종양은 종양의 HER2 발현 수준에 따라 3+(N87과 HCC1954) 및 2+(SKOV3)로 점수가 계산되었다.
본 발명의 다양한 열거된 구현예가 본원에 기술된다. 각 구현예에 명시된 특징은 다른 명시된 특징과 조합되어 본 발명의 추가적인 구현예를 제공할 수 있는 있음이 인식될 것이다.
본 출원의 본문의 전체에 걸쳐, 명세서의 본문(예를 들어 표 1)과 서열 목록 사이에 차이가 존재할 경우, 본 명세서의 본문이 우선한다.
정의
본원에 사용된 용어 "C4-C6알킬"은 4 내지 6개의 탄소 원자를 함유하는 완전 포화 분지쇄 또는 직쇄 탄화수소를 지칭한다. "C4-C6알킬"기의 비제한적인 예는 n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 이소펜틸, 및 헥실을 포함한다.
본원에 사용된 "HER2"(ERBB2; NEU; NGL; TKR1; CD340; p185; MLN19; HER-2/neu로도 알려짐)는 표피 성장 인자(EGF) 수용체 계열의 막관통 티로신 키나제 수용체를 지칭한다. HER2는 세포외 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 티로신 키나제 도메인을 포함한다. HER2는 그 자체의 리간드 결합 도메인을 갖지 않으므로 성장 인자와 결합할 수 없지만, HER2는 HER1 또는 HER3과 같은 다른 리간드-결합 EGF 수용체 계열 구성원에 단단히 결합하여 헤테로다이머를 형성함으로써, 리간드 결합을 안정화시키고 하류 신호전달 경로의 키나제-매개 활성화를 향상시킨다. 인간 HER2/NEU 유전자는 염색체 위치 17q12에 매핑되고, HER2/NEU 유전자의 게놈 서열은 유전자은행(NG_007503.1)에서 확인할 수 있다. 인간에게는 A, B, C, D, 및 E의 5가지 HER2 이소형이 있으며, 용어 "HER2"는 모든 HER2 이소형을 총칭하기 위해 본원에서 사용된다. 본원에 사용된 바와 같이, 인간 HER2 단백질은 전장에 걸쳐 HER2 이소형(A, B, C, D, 및 E)과 적어도 약 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는100%의 서열 동일성을 갖는 단백질을 또한 포함하며, 이러한 단백질은 여전히 HER2의 기능 중 적어도 하나의 기능을 갖는다. 가장 긴 이소형인 인간 HER2 이소형 A에 대한 mRNA 및 단백질 서열은 다음과 같다.
호모 사피엔스 erb-b2 수용체 티로신 키나제 2(ERBB2), 전사 변이체, mRNA [NM_004448.3]
Figure pct00151
Figure pct00152
수용체 티로신-단백질 키나제 erbB-2 이소형 전구체 [호모 사피엔스] [NP_004439.2]
Figure pct00153
다른 인간 HER2 이소형의 mRNA 및 단백질 서열은 다음의 수탁번호로 유전자은행에서 확인할 수 있다.
HER2 이소형 B: NM_001005862.2 (mRNA)→ NP_001005862.1 (단백질);
HER2 이소형 C: NM_001289936.1 (mRNA)→ NP_001276865.1 (단백질);
HER2 이소형 D: NM_001289937.1 (mRNA)→ NP_001276866.1 (단백질);
HER2 이소형 E: NM_001289938.1 (mRNA)→ NP_001276867.1 (단백질).
본원에 사용된 용어 "항체 분자"는 적어도 하나의 면역글로불린 가변 도메인 서열을 포함하는 단백질, 예를 들어 면역글로불린 쇄 또는 이의 단편을 지칭한다. 용어 "항체 분자"는 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 전장 항체, 또는 전장 면역글로불린 쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 전장 항체, 또는 전장 면역글로불린 쇄의 항원 결합 또는 기능성 단편을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "항체"는 항원에 특이적으로 결합하는 면역글로불린 분자로부터 유래된 단백질, 또는 폴리펩티드 서열을 지칭한다. 항체는 다클론성 또는 단클론성, 다중 또는 단일 쇄, 또는 온전한 면역글로불린일 수 있고, 천연 공급원으로부터 또는 재조합 공급원으로부터 유래될 수 있다. 자연 발생적인 "항체"는 이황화 결합에 의해 상호연결된 적어도 2개의 중쇄(H) 및 2개의 경쇄(L)를 포함하는 당단백질이다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(본원에서 VH로 약칭됨) 및 중쇄 불변 영역으로 구성된다. 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인 CH1, CH2, 및 CH3으로 구성된다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본원에서 VL로 약칭됨) 및 경쇄 불변 영역으로 구성된다. 경쇄 불변 영역은 하나의 도메인 CL로 구성된다. VH 및 VL 영역은 "프레임워크 영역"(FR)으로 불리는 더 보존된 영역 사이에 배치된 "상보성 결정 영역"(CDR)으로 불리는 초가변성의 영역들로 더 세분될 수 있다.
각각의 VH 및 VL은 아미노-말단에서 카복시-말단 쪽으로 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4의 순서로 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성된다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 포함한다. 항체의 불변 영역은 면역계의 다양한 세포(예를 들어, 이펙터 세포) 및 전형적인 보체계의 첫 번째 구성요소(C1q)를 포함한, 숙주 조직 또는 인자에 대한 면역글로불린의 결합을 매개할 수 있다. 항체는 단클론 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 낙타 항체, 또는 키메라 항체일 수 있다. 항체는 임의의 이소형(예컨대, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA, 및 IgY), 클래스(예컨대, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2), 또는 서브클래스의 항체일 수 있다.
용어 "항체 단편" 또는 "항원 결합 단편"은 항원의 에피토프와 (예를 들어, 결합, 입체 장애, 안정화/불안정화, 공간 분포에 의해) 특이적으로 상호작용하는 능력을 보유하는 항체의 적어도 일부분을 지칭한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2, Fv 단편, scFv 항체 단편, 이황화-연결 Fv(sdFv), VH 및 CH1 도메인으로 이루어진 Fd 단편, 선형 항체, 단일 도메인 항체, 예컨대 sdAb(VL 또는 VH), 낙타과 VHH 도메인, 힌지 영역에서 이황화 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편과 같은 항체 단편으로 형성된 다중특이적 항체, 및 항체의 단리된 CDR 또는 다른 에피토프 결합 단편을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 항원 결합 단편은 또한, 단일 도메인 항체, 맥시바디, 미니바디, 나노바디, 인트라바디, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, v-NAR, 및 비스-scFv 내에 통합될 수 있다(예를 들어, 문헌 [Hollinger and Hudson, Nature Biotechnology 23:1126-1136, 2005] 참조). 항원 결합 단편은 또한, 피브로넥틴 III형(Fn3)과 같은 폴리펩티드를 기반으로 한 스캐폴드에 이식될 수 있다(피브로넥틴 폴리펩티드 미니바디를 기술한 미국 특허 6,703,199 참조). 용어 "scFv"는 경쇄의 가변 영역을 포함하는 적어도 1개의 항체 단편 및 중쇄의 가변 영역을 포함하는 적어도 1개의 항체 단편을 포함하는 융합 단백질을 지칭하며, 경쇄 가변 영역과 중쇄 가변 영역은, 예를 들어 합성 링커, 예를 들어 짧은 가요성 폴리펩티드 링커를 통해 인접하여 연결되고 단쇄 폴리펩티드로서 발현될 수 있고, scFv는 그것이 유래된 온전한 항체의 특이성을 유지한다. 달리 명시되지 않는 한, 본원에 사용된 scFv는, 예를 들어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단에 대해, 임의의 순서로 VL 가변 영역 및 VH 가변 영역을 가질 수 있고, scFv는 VL-링커-VH를 포함하거나 VH-링커-VL을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"은 항원 특이성 및 결합 친화성을 부여하는 항체 가변 영역 내의 아미노산의 서열을 지칭한다. 예를 들어, 일반적으로 각각의 중쇄 가변 영역 내에 3개의 CDR(예를 들어 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)이 존재하고 각각의 경쇄 가변 영역 내에 3개의 CDR(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)이 존재한다. 주어진 CDR의 정확한 아미노산 서열 경계는 Kabat 등(1991)의 문헌["Sequences of Proteins of Immunological Interest," 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD]에 기재된 것("Kabat" 넘버링 체계), Al-Lazikani 등(1997)의 문헌[JMB 273,927-948]에 기재된 것("Chothia" 넘버링 체계), 또는 이들의 조합, 및 ImMunoGenTics(IMGT) 넘버링(Lefranc, M.-P., The Immunologist, 7, 132-136 (1999); Lefranc, M.-P. et al., Dev. Comp. Immunol., 27, 55-77 (2003))("IMGT" 넘버링 체계)을 포함한 여러 주지의 체계 중 하나를 사용해 결정될 수 있다. 주어진 CDR 영역(예를 들어, HC CDR1, HC CDR2, HC CDR3, LC CDR1, LC CDR2, 또는 LC CDR3)에 대한 조합된 Kabat 및 Chothia 넘버링 체계에 있어서, 일부 구현예에서, CDR은 Chothia CDR의 일부로서 정의된 아미노산 잔기와 함께, Kabat CDR의 일부로서 정의된 아미노산 잔기에 상응한다. 본원에 사용된 바와 같이, "Chothia" 번호 체계에 따라 정의된 CDR은 때로는 "초가변 루프"로 지칭되기도 한다.
예를 들어, Kabat 하에서, 중쇄 가변 도메인(VH) 내의 CDR 아미노산 잔기는 31~35(HCDR1)(예를 들어, 위치 35 이후의 삽입(들)), 50~65(HCDR2), 및 95~102(HCDR3)로 넘버링되고; 경쇄 가변 도메인(VL) 내의 CDR 아미노산 잔기는 24~34(LCDR1)(예를 들어, 위치 27 이후의 삽입(들)), 50~56(LCDR2), 및 89~97(LCDR3)로 넘버링된다. 다른 예로서, Chothia 하에서, VH 내의 CDR 아미노산은 26-32(HCDR1)(예를 들어, 위치 31 이후의 삽입(들)), 52~56(HCDR2), 및 95~102(HCDR3)로 넘버링되고; VL 내의 아미노산 잔기는 26~32(LCDR1)(예를 들어, 위치 30 이후의 삽입(들)), 50~52(LCDR2), 및 91~96(LCDR3)으로 넘버링된다. Kabat과 Chothia 모두의 CDR 정의를 조합함으로써, CDR은 예를 들어 인간 VH 내의 아미노산 잔기 26~35(HCDR1), 50~65(HCDR2), 및 95~102(HCDR3) 및 인간 VL 내의 아미노산 잔기 24~34(LCDR1), 50~56(LCDR2), 및 89~97(LCDR3)을 포함하거나 이들로 이루어진다. IMGT 하에서, VH 내의 CDR 아미노산 잔기는 대략 26~35(CDR1), 51~57(CDR2), 및 93~102(CDR3)로 넘버링되고, VL 내의 CDR 아미노산 잔기는 대략 27~32(CDR1), 50~52(CDR2), 및 89~97(CDR3)로 넘버링된다("Kabat"에 따른 넘버링). IMGT 하에서, 항체의 CDR 영역은 프로그램 IMGT/DomainGap Align을 사용하여 결정될 수 있다.
일반적으로, 특별히 명시하지 않는 한, 항체 분자는 하나 이상의 Kabat CDR 및/또는 Chothia CDR의 임의의 조합을 포함할 수 있다.
용어 "에피토프"는 면역글로불린에 특이적으로 결합할 수 있거나 달리 분자와 상호작용할 수 있는 임의의 단백질 결정기를 포함한다. 에피토프 결정기는 일반적으로, 분자의 화학적 활성 표면 그룹, 예컨대 아미노산 또는 탄수화물 또는 당 측쇄로 이루어지고, 특이적인 3차원 구조적 특성뿐만 아니라 특이적인 전하 특성을 가질 수 있다. 에피토프는 "선형" 또는 "입체형태적"일 수 있다. 입체형태적 에피토프와 선형 에피토프는 전자에 대한 결합이 변성 용매의 존재하에서 소실되지만 후자는 그렇지 않다는 점에서 구분된다.
본원에 사용된 어구 "단클론 항체" 또는 "단클론 항체 조성물"은 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖거나 동일한 유전자원으로부터 유래된 항체, 이중특이적 항체 등을 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다. 이 용어는 또한, 단일 분자 조성물의 항체 분자의 제제를 포함한다. 단클론 항체 조성물은 특정 에피토프에 대한 단일 결합 특이성 및 친화성을 나타낸다.
본원에 사용된 어구 "인간 항체"는 프레임워크 영역과 CDR 영역이 모두 인간 기원의 서열로부터 유래된 가변 영역을 갖는 항체를 포함한다. 또한, 항체가 불변 영역을 포함하는 경우, 불변 영역은 이러한 인간 서열, 예를 들어 인간 생식계열 서열, 또는 인간 생식계열 서열의 돌연변이 버전, 또는 예를 들어 문헌[Knappik, et al. (2000. J Mol Biol 296, 57-86)]에 기재된 바와 같이 인간 프레임워크 서열 분석으로부터 유래된 공통 프레임워크 서열을 포함하는 항체로부터 또한 유래된다. 면역글로불린 가변 도메인, 예를 들어 CDR의 구조 및 위치는 주지의 넘버링 체계, 예를 들어 Kabat 넘버링 체계, Chothia 넘버링 체계, 또는 Kabat과 Chothia의 조합, 및 ImMunoGenTics(IMGT) 넘버링을 사용해 정의될 수 있다(예를 들어, 문헌[Sequences of Proteins of Immunological Interest, 미국 보건복지부 (1991), eds. Kabat et al.; Al Lazikani et al., (1997) J. Mol. Bio. 273:927 948; Kabat et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 제5판, NIH Publication no. 91-3242 미국 보건복지부; Chothia et al., (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917; Chothia et al., (1989) Nature 342:877-883; Al-Lazikani et al., (1997) J. Mal. Biol. 273:927-948 및 Lefranc, M.-P., The Immunologist, 7, 132-136 (1999); Lefranc, M.-P. et al., Dev. Comp. Immunol., 27, 55-77 (2003)] 참조).
본 발명의 인간 항체는 인간 서열에 의해 암호화되지 않는 아미노산 잔기(예를 들어, 시험관내 무작위 또는 부위-특이적 돌연변이 유도에 의해 또는 생체내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이, 또는 안정성 또는 제조의 촉진을 위한 보존적 치환)를 포함할 수 있다. 그러나, 본원에 사용된 용어 "인간 항체"는 마우스와 같은 다른 포유류 종의 생식계열로부터 유래된 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열에 이식된 항체를 포함하는 의미는 아니다.
본원에 사용된 어구 "재조합 인간 항체"는 재조합 수단에 의해 제조, 발현, 생성, 또는 단리된 모든 인간 항체, 예컨대 인간 면역글로불린 유전자 또는 이로부터 제조된 하이브리도마에 대해 유전자이식 또는 염색체이식된 동물(예를 들어, 마우스)로부터 단리된 항체, 인간 항체를 발현하도록 형질전환된 숙주세포, 예를 들어 트랜스펙토마(transfectoma)로부터 단리된 항체, 재조합형 조합 인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체, 및 인간 면역글로불린 유전자, 서열의 전부 또는 일부를 다른 DNA 서열로 스플라이싱하는 단계를 수반하는 임의의 다른 수단에 의해 제조, 발현, 생성, 또는 단리된 항체를 포함한다. 이러한 재조합 인간 항체는 프레임워크 및 CDR 영역이 인간 생식계열 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 영역을 가진다. 그러나, 특정 구현예에서 이러한 재조합 인간 항체는 시험관내 돌연변이 유도(또는, 인간 Ig 서열에 대해 유전자이식된 동물이 사용되는 경우에는 생체내 체세포 돌연변이 유도) 처리될 수 있고, 따라서 재조합 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은, 인간 생식계열 VH 및 VL 서열로부터 유래되고 이와 관련되지만 생체내 인간 항체 생식계열 레퍼토리 내에 본래 존재하지 않을 수 있는 서열이다.
본원에 사용된 용어 "Fc 영역"은 CH3, CH2, 및 항체의 불변 도메인의 힌지 영역의 적어도 일부를 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다. 선택적으로, Fc 영역은 일부 항체 부류에 존재하는 CH4 도메인을 포함할 수 있다. Fc 영역은 항체의 불변 도메인의 전체 힌지 영역을 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 본 발명은 항체의 Fc 영역 및 CH1 영역을 포함한다. 일 구현예에서, 본 발명은 항체의 Fc 영역 및 CH3 영역을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 발명은 항체의 불변 도메인으로부터의 Fc 영역, CH 영역, 및 C카파/람다 영역을 포함한다. 일 구현예에서, 본 발명의 결합 분자는 불변 영역, 예를 들어 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일 구현예에서, 이러한 불변 영역은 야생형 불변 영역과 비교하여 변형된다. 즉, 본원에 개시된 본 발명의 폴리펩티드는 3개의 중쇄 불변 도메인(CH1, CH2, 또는 CH3) 중 하나 이상 및/또는 경쇄 불변 영역 도메인(CL)에 대한 변경 또는 변형을 포함할 수 있다. 변형의 예는 하나 이상의 도메인에서의 1개 이상의 아미노산의 부가, 결실, 또는 치환을 포함한다. 이러한 변화는 이펙터 기능, 반감기 등을 최적화하기 위해 포함될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "결합 특이성"은 하나의 항원 결정기와 반응하고 다른 항원 결정기와는 반응하지 않는 개별 항체 결합 부위의 능력을 의미한다. 항체의 결합 부위는 분자의 Fab 부분에 위치하고, 중쇄 및 경쇄의 초가변 영역으로부터 구성된다. 항체의 결합 친화도는 단일 항원 결정기와 항체 상의 단일 결합 부위 사이의 반응의 강도이다. 이는 항원 결정기와 항체의 결합 부위 사이에 작용하는 인력과 척력의 합이다.
본원에 사용된 용어 "친화도"는 단일 항원 부위에서의 항체와 항원 사이의 상호작용의 강도를 의미한다. 각각의 항원 부위 내에서, 항체 "암(arm)"의 가변 영역은 여러 부위에서 항원과 약한 비공유 결합력을 통해 상호작용하며; 상호작용이 많을수록 친화도는 더 강하다.
용어 "보존적 서열 변형"은 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 항체 단편의 결합 특성에 대한 영향이나 변경이 크지 않은 아미노산 변형을 의미한다. 이러한 보존적 변형은 아미노산 치환, 부가, 및 결실을 포함한다. 변형은 당해 분야에 알려진 표준 기술, 예컨대 부위-특이적 돌연변이 유도 및 PCR-매개 돌연변이 유도에 의해 본 발명의 항체 또는 항체 단편에 도입될 수 있다. 보존적 아미노산 치환은 아미노산 잔기가 유사 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체되는 것이다. 유사 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 계열은 당해 분야에 정의되어 있다. 이들 계열은 염기성 측쇄(예를 들어, 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 하전되지 않은 극성 측쇄(예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인, 트립토판), 비극성 측쇄(예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), 베타 분지형 측쇄(예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신), 및 방향족 측쇄(예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 갖는 아미노산을 포함한다. 따라서, 항체 내의 하나 이상의 아미노산 잔기는 동일한 측쇄 계열의 다른 아미노산 잔기로 대체될 수 있고, 변경된 항체는 본원에 기재된 기능 검정을 이용해 시험될 수 있다.
용어 "상동성" 또는 "동일성"은 2개의 중합체 분자 사이, 예를 들어 2개의 DNA 분자 또는 2개의 RNA 분자와 같은 2개의 핵산 분자 사이, 또는 2개의 폴리펩티드 분자 사이의 서브유닛 서열 동일성을 의미한다. 두 분자 모두에서 서브유닛 위치가 동일한 단량체 서브유닛에 의해 점유될 때, 예를 들어 2개의 DNA 분자 각각에서의 위치가 아데닌에 의해 점유되는 경우, 이들은 그 위치에서 상동성이거나 동일하다. 두 서열 사이의 상동성은 매칭되거나 상동성인 위치의 수의 직접적인 함수이다. 예를 들어, 두 서열에서의 위치의 절반(예를 들어, 중합체 10개의 서브유닛 길이에서 5개의 위치)이 상동성일 경우, 두 서열은 50% 상동성이고, 위치의 90%(예를 들어 10개 중 9개)가 매칭되거나 상동성일 경우, 두 서열은 90% 상동성이다. "서열 동일성"의 백분율은 비교창 위에서 최적으로 정렬된 두 서열을 비교함으로써 결정될 수 있으며, 비교창에서의 아미노산 서열의 단편은 두 서열의 최적의 정렬을 위한 기준 서열(부가 또는 결실을 포함하지 않음)과 비교하여 부가 또는 결실(예를 들어, 갭 또는 오버행)을 포함할 수 있다. 백분율은 두 서열 모두에서 동일한 아미노산 잔기가 발생하는 위치의 수를 측정하여 매칭되는 위치의 수를 산출하고, 매칭되는 위치의 수를 비교창에서의 총 위치의 수로 나누고, 그 결과에 100을 곱하여 서열 동일성의 백분율을 산출함으로써 계산될 수 있다. 결과는 쿼리 서열에 대한 대상 서열의 퍼센트 동일성이다. 두 서열 사이의 퍼센트 동일성은 서열이 공유하는 동일한 위치의 함수로서, 두 서열의 최적의 정렬을 위해 도입되어야 하는 갭의 수 및 각각의 갭의 길이를 고려한다.
서열의 비교 및 두 서열 사이의 퍼센트 동일성의 결정은 수학적 알고리즘을 이용해 수행될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 두 아미노산 서열 사이의 퍼센트 동일성은 Blossum 62 매트릭스 또는 PAM250 매트릭스, 및 16, 14, 12, 10, 8, 6, 또는 4의 갭 가중치와 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6의 길이 가중치를 사용하여, GCG 소프트웨어 패키지(www.gcg.com에서 이용 가능)의 GAP 프로그램에 통합된 Needleman and Wunsch((1970) J. Mol. Biol. 48:444-453) 알고리즘을 이용해 결정된다. 또 다른 바람직한 구현예에서, 두 뉴클레오티드 서열 사이의 퍼센트 동일성은 NWSgapdna.CMP 매트릭스 및 40, 50, 60, 70, 또는 80의 갭 가중치와 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6의 길이 가중치를 사용하여, GCG 소프트웨어 패키지(www.gcg.com에서 이용 가능)의 GAP 프로그램을 이용해 결정된다. 특히 바람직한 세트의 파라미터(및 달리 명시되지 않는 한 사용되어야 하는 것)는 12의 갭 페널티, 4의 갭 확장 페널티, 및 5의 프레임시프트 갭 페널티를 갖는 Blossum 62 점수 매트릭스이다.
두 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열 사이의 퍼센트 동일성은 PAM120 가중 잔기 표, 12의 갭 길이 페널티 12, 및 4의 갭 페널티를 사용하여, ALIGN 프로그램(버전 2.0)에 통합된 E. Meyers and W. Miller((1989) CABIOS, 4:11-17)의 알고리즘을 이용해 결정될 수 있다.
본원에 기재된 핵산 및 단백질 서열은, 예를 들어 다른 계열 구성원 또는 관련 서열을 식별하기 위해 공개 데이터베이스에 대한 검색을 수행하기 위한 "쿼리 서열"로서 사용될 수 있다. 이러한 검색은 Altschul 등(J. Mol. Biol. 215:403-10, 1990)의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램(버전 2.0)을 이용해 수행할 수 있다. 본 발명의 핵산 분자와 상동성인 뉴클레오티드 서열을 얻기 위해 NBLAST 프로그램(스코어 = 100, 워드길이 = 12)으로 BLAST 뉴클레오티드 검색을 수행할 수 있다. 본 발명의 단백질 분자와 상동성인 아미노산 서열을 얻기 위해 XBLAST 프로그램(스코어 = 50, 워드길이 = 3)으로 BLAST 단백질 검색을 수행할 수 있다. 비교 목적을 위한 갭 정렬을 얻기 위해, 문헌[Altschul et al., (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402]에 기술된 바와 같이 Gapped BLAST를 이용할 수 있다. BLAST 및 Gapped BLAST 프로그램을 이용할 때, 각 프로그램(예를 들어, XBLAST 및 NBLAST)의 기본 파라미터가 사용될 수 있다. www.ncbi.nlm.nih.gov 참조.
용어 "암" 및 "암성"은 일반적으로 조절되지 않은 세포 성장을 특징으로 하는 포유동물의 생리학적 상태를 지칭하거나 기술한다. 암의 예는 암종, 림프종, 모세포종(수모세포종 및 망막모세포종 포함), 육종(지방육종 및 활막세포 육종 포함), 신경내분비 종양(유암종, 가스트린종, 및 도세포암 포함), 종피종, 신경초종(청신경종 포함), 수막종, 선암종, 흑색종, 및 백혈병 또는 림프성 악성종양을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 이러한 암의 보다 구체적인 예는 편평세포암(예를 들어, 상피편평세포암), 소세포 폐암, 비소세포 폐암, 폐의 선암종, 및 폐의 편평상피암을 포함한 폐암, 복막암, 간세포암, 위장암을 포함한 위암, 췌장암, 교모세포종, 신경모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 요로암, 간종양, 유방암, 대장암, 직장암, 결장직장암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 타액선 암종, 신장 또는 신세포 암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 간암종, 항문 암종, 음경 암종, 고환암, 식도암, 담도의 종양, 뿐만 아니라 두부경부암을 포함한다.
"HER2-양성 암" 또는 "HER2-발현 암"은 세포 표면에 HER2 단백질이 존재하는 세포를 포함하는 암이다. 암세포 상의 HER2의 존재를 검출하거나 결정하는 많은 방법은 당해 분야에 알려져 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 세포 표면 상의 HER2의 존재는 면역조직화학(IHC), 유세포분석, 웨스턴 블로팅, 면역형광 분석, 방사면역분석(RIA), 효소결합 면역흡착 분석(ELISA), 균질 시분해 형광(HTRF), 또는 양전자 방사 단층촬영법(PET)에 의해 결정될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "조합" 또는 "약학적 조합"은 둘 이상의 유효 성분의 혼합 또는 조합으로 생성되는 생성물을 의미하며, 이는 유효 성분의 고정형 조합 및 비고정형 조합 모두를 포함한다. 용어 "고정형 조합"은 유효 성분, 예를 들어 본 발명의 화합물 및 하나 이상의 추가 치료제가 단일 개체 또는 투여량의 형태로 동시에 대상에게 투여됨을 의미한다. 용어 "비고정형 조합"은 유효 성분, 예를 들어 본 발명의 화합물 및 하나 이상의 추가 치료제가 개별 개체로서 동시에, 병행적으로, 또는 특정 시간 제한 없이 순차적으로 대상에게 투여됨을 의미하며, 이러한 투여는 대상의 체내에서 치료 유효 수준의 유효 성분을 제공한다. 후자는 칵테일 요법, 예를 들어 3가지 이상의 유효 성분의 투여에도 적용된다.
본원에 사용된 용어 "조성물" 또는 "약학적 조성물"은 본 발명의 화합물과 적어도 하나의(선택적으로 둘 이상의) 다른 약학적으로 허용 가능한 화학 성분, 예컨대 담체, 안정화제, 희석제, 분산제, 현탁제, 증점제, 및/또는 부형제의 혼합물을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "광학 이성질체" 또는 "입체 이성질체"는 본 발명의 소정의 화합물에 대해 존재할 수 있는 다양한 입체 이성질체 배열 중 임의의 배열을 의미하며, 기하 이성질체를 포함한다. 탄소 원자의 키랄 중심에는 치환기가 부착될 수 있는 것으로 이해된다. 용어 "키랄"은 거울상 파트너에 중첩되지 않는 성질을 갖는 분자를 지칭하는 한편, 용어 "아키랄"은 거울상 파트너에 중첩될 수 있는 분자를 지칭한다. 따라서, 본 발명은 화합물의 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 라세미체를 포함한다. "거울상 이성질체"는 서로 중첩되지 않는 거울상인 한 쌍의 입체 이성질체이다. 한 쌍의 거울상 이성질체의 1:1 혼합물은 "라세미" 혼합물이다. 이 용어는 적절한 경우 라세미 혼합물을 나타내는 데 사용된다. "부분입체 이성질체"는 적어도 2개의 비대칭 원자를 갖지만 서로 거울상이 아닌 입체 이성질체이다. 절대 입체화학은 Cahn-lngold- Prelog R-S 시스템에 따라 특정된다. 화합물이 순수한 거울상 이성질체인 경우, 각각의 키랄 탄소에서의 입체화학은 R 또는 S 중 어느 하나로 특정될 수 있다. 절대 배열이 알려지지 않은 분해 화합물은 나트륨 D 라인의 파장에서 평면 편광을 회전시키는 방향(우선 또는 좌선)에 따라 (+) 또는 (-)로 표기될 수 있다. 본원에 기재된 특정 화합물은 하나 이상의 비대칭 중심 또는 축을 포함하므로, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 및 절대 입체화학의 관점에서 (R)- 또는 (S)-로 정의될 수 있는 다른 입체 이성질 형태를 발생시킬 수 있다.
본원에 사용된 용어 "약학적으로 허용 가능한 담체"는 당업자에게 알려진 모든 용매, 분산 매체, 코팅, 계면활성제, 항산화제, 방부제(예를 들어, 항균제, 항진균제), 등장화제, 흡수지연제, 염, 방부제, 약물 안정화제, 결합제, 부형제, 붕해제, 윤활제, 감미제, 향미제, 염료 등 및 이들의 조합을 포함한다(예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, pp. 1289- 1329] 참조). 통상적인 담체가 유효 성분과 배합될 수 없는 경우를 제외하고, 치료 조성물 또는 약학적 조성물에서의 통상적인 담체의 사용이 고려된다.
본원에 사용된 용어 "약학적으로 허용 가능한 염"은 본 발명의 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 방해하지 않으며 투여 대상에게 그다지 자극을 유발하지 않는 염을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "대상"은 포유동물 및 비포유동물을 포함한다. 포유동물의 예는 인간, 침팬지, 유인원, 원숭이, 소, 말, 양, 염소, 돼지, 토끼, 개, 고양이, 랫트, 마우스, 기니피크 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 비포유동물의 예는 조류, 어류 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 흔히, 대상은 인간이다.
"이러한 치료를 필요로 하는 대상"이란 용어는 이러한 치료로부터 생물학적으로, 의학적으로, 또는 삶의 질에 있어서 이익을 얻게 될 대상을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "치료적 유효량"은 대상의 생물학적 또는 의학적 반응, 예를 들어 효소 또는 단백질 활성의 감소 또는 억제를 유도하거나, 증상을 개선하거나, 병태를 경감하거나, 질병의 진행을 늦추거나 지연시키거나, 질병을 예방하는 등의 본 발명의 항체 접합체의 양을 의미한다. 비제한적인 일 구현예에서, 용어 "치료적 유효량"은 대상에게 투여될 때 병태 또는 장애 또는 질병을 적어도 부분적으로 경감, 억제, 예방 및/또는 개선하는 데 효과적인 본 발명의 항체 접합체의 양을 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "TLR7 작용제"는 톨-유사 수용체 7(TLR7)을 활성화시킬 수 있는 화합물 또는 항체 접합체를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "치료"는 예방적 및/또는 치료적으로, 질병 또는 병태 증상을 경감, 약화 또는 개선하거나, 추가 증상을 예방하거나, 증상의 근본적인 대사 원인을 개선 또는 예방하거나, 질병 또는 병태를 억제하거나, 질병 또는 병태의 진행을 저지하거나, 질병 또는 병태를 완화하거나, 질병 또는 병태의 퇴행을 유발하거나, 질병 또는 병태로 인한 병태를 완화하거나, 질병 또는 병태의 증상을 중지시키는 방법을 의미한다.
본원에 제공된 화합물명은 ChemDraw Ultra 버전 12.0(CambridgeSoft®) 또는 JChem 버전 5.3.1(ChemAxon)을 사용하여 얻었다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "본 발명의 화합물" 또는 "본원에 제공된 화합물"은 화학식 I 및 그 하위 화학식의 화합물(즉, 화학식 Ia 및 화학식 Ib의 화합물), 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 입체 이성질체(부분입체 이성질체 및 거울상 이성질체 포함), 호변 이성질체, 및 동위원소 표지 화합물(중수소 치환체 포함)을 지칭한다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "본 발명의 항체 접합체"는 화학식 II 및 그 하위 화학식의 항체 접합체(즉, 화학식 IIa 및 화학식 IIb의 화합물), 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 입체 이성질체(부분입체 이성질체 및 거울상 이성질체 포함), 호변 이성질체, 및 동위원소 표지 화합물(중수소 치환체 포함)을 지칭한다.
본원에 사용된 단수 형태의 용어 및 본 발명의 문맥에서(특히, 청구범위의 문맥에서) 사용된 유사한 용어는 본원에서 달리 나타내거나 문맥상 명백하게 모순되지 않는 한 단수형과 복수형 모두를 포함하는 것으로 해석되어야 한다.
본 발명의 면역자극 화합물
본 발명의 면역자극 화합물은 화학식 I의 구조를 갖는 TLR7 작용제이다.
[화학식 I]
Figure pct00154
식 중,
RD는
Figure pct00155
이고, RE는 H이거나; RE는
Figure pct00156
이고 RD는 H이고;
R1은 -NHR2 또는 -NHCHR2R3이고;
R2는 -C3-C6알킬 또는 -C4-C6알킬이고;
R3은 L1OH이고;
L1은 -(CH2)m-이고;
L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)(CH2)nC(R7)2-, -C(=O)(CH2)nC(R7)2SS(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nX2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, 또는 -C(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n이고;
R4는
Figure pct00157
-ONH2, -NH2,
Figure pct00158
-N3,
Figure pct00159
-NHC(=O)CH=CH2, -SH, -SR7, -OH, -SSR6, -S(=O)2(CH=CH2), -(CH2)2S(=O)2(CH=CH2), -NHS(=O)2(CH=CH2), -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I, -C(O)NHNH2,
Figure pct00160
-CO2H, -C(O)NHNH2,
Figure pct00161
Figure pct00162
Figure pct00163
Figure pct00164
Figure pct00165
Figure pct00166
Figure pct00167
또는
Figure pct00168
이고;
R5는
Figure pct00169
이고;
X1은
Figure pct00170
, 또는
Figure pct00171
이고;
X2는
Figure pct00172
, 또는
Figure pct00173
이고;
X3은
Figure pct00174
Figure pct00175
, 또는
Figure pct00176
이고;
R6은 2-피리딜 또는 4-피리딜이고;
각각의 R7은 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R8은 H, C1-C6알킬, F, Cl, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R9는 H, C1-C6알킬, F, Cl, -NH2, -OCH3, -OCH2CH3, -N(CH3)2, -CN, -NO2, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R10은 H, C1-6알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1-4알콕시, 및 -C(=O)OH로 치환된 C1-4알킬로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 m은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및18로부터 독립적으로 선택된다.
본 발명의 화합물의 특정 양태 및 예가 하기 추가의 열거된 구현예의 목록에 제공된다. 각 구현예에 명시된 특징은 다른 명시된 특징과 조합되어 본 발명의 추가적인 구현예를 제공할 수 있는 있음이 인식될 것이다.
구현예 1. 화학식 I의 화합물, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
(식 중,
RD는
Figure pct00177
이고, RE는 H이거나; RE는
Figure pct00178
이고 RD는 H이고;
R1은 -NHR2 또는 -NHCHR2R3이고;
R2는 -C3-C6알킬 또는 -C4-C6알킬이고;
R3은 L1OH이고;
L1은 -(CH2)m-이고;
L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, 또는 -C(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n이고;
R4는
Figure pct00179
-ONH2, -NH2,
Figure pct00180
-N3,
Figure pct00181
-NHC(=O)CH=CH2, SH, -SSR6, -S(=O)2(CH=CH2), -(CH2)2S(=O)2(CH=CH2), -NHS(=O)2(CH=CH2), -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I, -C(O)NHNH2,
Figure pct00182
-CO2H, -C(O)NHNH2,
Figure pct00183
Figure pct00184
Figure pct00185
Figure pct00186
Figure pct00187
Figure pct00188
Figure pct00189
또는
Figure pct00190
이고;
R5는
Figure pct00191
이고; X1은
Figure pct00192
, 또는
Figure pct00193
이고;
X2는
Figure pct00194
, 또는
Figure pct00195
이고;
X3은
Figure pct00196
, 또는
Figure pct00197
이고;
R6은 2-피리딜 또는 4-피리딜이고;
각각의 R7은 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R8은 H, C1-C6알킬, F, Cl, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R9는 H, C1-C6알킬, F, Cl, -NH2, -OCH3, -OCH2CH3, -N(CH3)2, -CN, -NO2, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R10은 H, C1-6알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1-4알콕시, 및 -C(=O)OH로 치환된 C1-4알킬로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 m은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및18로부터 독립적으로 선택됨)
구현예 2. 화학식 Ia 또는 화학식 Ib의 구조를 갖는 화학식 I의 화합물, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
[화학식 Ia] [화학식 Ib]
Figure pct00198
Figure pct00199
(식 중,
R1은 -NHR2 또는 -NHCHR2R3이고;
R2는 -C3-C6알킬 또는 -C4-C6알킬이고;
R3은 L1OH이고;
L1은 -(CH2)m-이고;
L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)(CH2)nC(R7)2-, -C(=O)(CH2)nC(R7)2SS(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nX2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, 또는 -C(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n이고;
R4는
Figure pct00200
-ONH2, -NH2,
Figure pct00201
-N3,
Figure pct00202
-NHC(=O)CH=CH2, SH, -SR7, -OH, -SSR6, -S(=O)2(CH=CH2), -(CH2)2S(=O)2(CH=CH2), -NHS(=O)2(CH=CH2), -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I, -C(O)NHNH2,
Figure pct00203
-CO2H, -C(O)NHNH2,
Figure pct00204
Figure pct00205
Figure pct00206
Figure pct00207
Figure pct00208
Figure pct00209
Figure pct00210
또는
Figure pct00211
이고;
R5는
Figure pct00212
이고; X1은
Figure pct00213
, 또는
Figure pct00214
이고;
X2는
Figure pct00215
, 또는
Figure pct00216
이고;
X3은
Figure pct00217
Figure pct00218
, 또는
Figure pct00219
이고;
R6은 2-피리딜 또는 4-피리딜이고;
각각의 R7은 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R8은 H, C1-C6알킬, F, Cl, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R9는 H, C1-C6알킬, F, Cl, -NH2, -OCH3, -OCH2CH3, -N(CH3)2, -CN, -NO2, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R10은 H, C1-6알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1-4알콕시, 및 -C(=O)OH로 치환된 C1-4알킬로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 m은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및18로부터 독립적으로 선택됨)
구현예 3. 화학식 Ia 또는 화학식 Ib의 화합물, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
(식 중,
R1은 -NHR2 또는 -NHCHR2R3이고;
R2는 -C3-C6알킬 또는 -C4-C6알킬이고;
R3은 L1OH이고;
L1은 -(CH2)m-이고;
L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, 또는 -C(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n이고;
R4는
Figure pct00220
-ONH2, -NH2,
Figure pct00221
-N3,
Figure pct00222
-NHC(=O)CH=CH2, SH, -SSR6, -S(=O)2(CH=CH2), -(CH2)2S(=O)2(CH=CH2), -NHS(=O)2(CH=CH2), -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I, -C(O)NHNH2,
Figure pct00223
-CO2H, -C(O)NHNH2,
Figure pct00224
Figure pct00225
Figure pct00226
Figure pct00227
Figure pct00229
Figure pct00230
또는
Figure pct00231
이고;
R5는
Figure pct00232
이고; X1은
Figure pct00233
, 또는
Figure pct00234
이고;
X2는
Figure pct00235
, 또는
Figure pct00236
이고;
X3은
Figure pct00237
, 또는
Figure pct00238
이고;
R6은 2-피리딜 또는 4-피리딜이고;
각각의 R7은 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R8은 H, C1-C6알킬, F, Cl, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R9는 H, C1-C6알킬, F, Cl, -NH2, -OCH3, -OCH2CH3, -N(CH3)2, -CN, -NO2, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R10은 H, C1-6알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1-4알콕시, 및 -C(=O)OH로 치환된 C1-4알킬로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 m은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및18로부터 독립적으로 선택됨)
구현예 4. 화학식 Ia 또는 화학식 Ib의 구조를 갖는 화학식 I의 화합물, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
[화학식 Ia] [화학식 Ib]
Figure pct00239
Figure pct00240
(식 중,
R1은 -NHR2 또는 -NHCHR2R3이고;
R2는 -C3-C6알킬 또는 -C4-C6알킬이고;
R3은 L1OH이고;
L1은 -(CH2)m-이고;
L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, 또는 -C(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n이고;
R4는
Figure pct00241
-ONH2, -NH2,
Figure pct00242
-NHC(=O)CH=CH2, -N3,
Figure pct00243
SH, -SSR6, -S(=O)2(CH=CH2), -(CH2)2S(=O)2(CH=CH2), -NHS(=O)2(CH=CH2), -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I, -C(O)NHNH2,
Figure pct00244
또는 -CO2H이고;
R5는
Figure pct00245
이고; X1은
Figure pct00246
, 또는
Figure pct00247
이고;
X2는
Figure pct00248
, 또는
Figure pct00249
이고;
X3은
Figure pct00250
, 또는
Figure pct00251
이고;
R6은 2-피리딜 또는 4-피리딜이고;
각각의 R7은 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 m은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및18로부터 독립적으로 선택됨)
구현예 5. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
(식 중,
R1은 -NHR2 또는 -NHCHR2R3이고;
R2는 -C4-C6알킬이고;
R3은 L1OH이고;
L1은 -(CH2)m-이고;
L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, 또는 -C(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-이고;
R4는
Figure pct00252
-ONH2, -NH2,
Figure pct00253
, 또는
Figure pct00254
이고;
R5는
Figure pct00255
이고; X1은
Figure pct00256
이고; X2는
Figure pct00257
또는
Figure pct00258
이고;
X3은
Figure pct00259
이고;
각각의 m은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및18로부터 독립적으로 선택됨)
구현예 6. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
(식 중,
R1은 -NHR2이고; R2는 -C4-C6알킬이고;
L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, 또는 -C(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-이고;
R4는
Figure pct00260
-ONH2, -NH2,
Figure pct00261
, 또는
Figure pct00262
이고;
R5는
Figure pct00263
이고; X1은
Figure pct00264
이고; X2는
Figure pct00265
또는
Figure pct00266
이고;
X3은
Figure pct00267
이고;
각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및18로부터 독립적으로 선택됨)
구현예 7. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
(식 중,
R1은 -NHR2이고;
R2는 -C4-C6알킬이고;
L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, 또는 -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-이고;
R4는
Figure pct00268
-ONH2, -NH2,
Figure pct00269
, 또는
Figure pct00270
이고;
R5는
Figure pct00271
이고; X1은
Figure pct00272
이고; X2는
Figure pct00273
또는
Figure pct00274
이고;
X3은
Figure pct00275
이고;
각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및18로부터 독립적으로 선택됨)
구현예 8. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
(식 중,
R1은 -NHR2이고;
R2는 -C4-C6알킬이고;
L2는 -(CH2)n- 또는 -C(=O)(CH2)n이고;
R4는
Figure pct00276
-ONH2, -NH2,
Figure pct00277
, 또는
Figure pct00278
이고;
R5는
Figure pct00279
이고;
각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택됨)
구현예 9. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
(식 중,
R1은 -NHR2이고;
R2는 -C4-C6알킬이고;
L2는 -(CH2)n- 또는 -C(=O)(CH2)n이고;
R4는
Figure pct00280
, 또는
Figure pct00281
이고;
R5는
Figure pct00282
이고;
각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택됨)
구현예 10. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
(식 중,
R1은 -NHR2이고;
R2는 -C4-C6알킬이고;
L2는 -(CH2)n- 또는 -C(=O)(CH2)n이고;
R4는 -ONH2 또는 -NH2이고;
각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택됨)
구현예 11. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
(식 중,
R1은 -NHR2이고;
R2는 -C4-C6알킬이고;
L2는 -(CH2)n- 또는 -C(=O)(CH2)n이고;
R4는
Figure pct00283
, 또는
Figure pct00284
이고;
각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택됨)
구현예 12. R1이 -NHR2인 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
구현예 13. R1이 -NHCHR2R3인 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
구현예 14. R2가 -C4알킬인 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
구현예 15. R2가 -C5알킬인 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
구현예 16. R2가 -C6알킬인 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
구현예 17. R3이 L1OH인 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
구현예 18. L1이 -(CH2)-인 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
구현예 19. L1이 -(CH2CH2)-인 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
구현예 20. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
(식 중,
L2는 -(CH2)n-*, -((CH2)nO)t(CH2)n-*, -(CH2)nX1(CH2)n-*, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-*, -(CH2)nNHC(=O(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-*, 또는 -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n*이고, *는 R4에 대한 부착점을 나타냄)
구현예 21. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
(식 중,
L2는 -C(=O)(CH2)n*-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-*, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-*, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-*, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-*, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-*, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-*, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-*, 또는 -C(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-*이고, *는 R4에 대한 부착점을 나타냄)
구현예 22. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
(식 중,
L2는 -(CH2)n-* 또는 -C(=O)(CH2)n-*이고, *는 R4에 대한 부착점을 나타냄)
구현예 23. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
(식 중,
L2는 -(CH2CH2)-* 또는 -C(=O)(CH2CH2)-*이고, *는 R4에 대한 부착점을 나타냄)
구현예 24. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
(식 중,
L2는 -C(=O)X2X3C(=O)(CH2)n-*, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-*, -C(=O)(CH2)nC(R7)2-*, -C(=O)(CH2)nC(R7)2SS(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-*, 또는 -(CH2)nX2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-*이고, *는 R4에 대한 부착점을 나타냄)
구현예 25. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
(식 중,
R4는
Figure pct00285
, 또는
Figure pct00286
임)
구현예 26. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
(식 중,
R4는 -ONH2,
Figure pct00287
, 또는 -NH2임)
구현예 27. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
(식 중,
R4는
Figure pct00288
, 또는
Figure pct00289
임)
구현예 28. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
(식 중,
R4는 -NHC(=O)CH=CH2, -N3,
Figure pct00290
SH, -SSR6, -S(=O)2(CH=CH2), -(CH2)2S(=O)2(CH=CH2), -NHS(=O)2(CH=CH2), -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I, -C(O)NHNH2,
Figure pct00291
-CO2H, -NHCH(=O), 또는 -NHCH(=S)임)
구현예 29. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
R4는
Figure pct00292
Figure pct00293
Figure pct00294
Figure pct00295
Figure pct00296
또는
Figure pct00297
임)
구현예 30. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
(식 중,
R4는 -SR7 또는 -OH임)
구현예 31. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
(식 중, R5는
Figure pct00298
임)
구현예 32. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
(식 중, X1은
Figure pct00299
, 또는
Figure pct00300
임)
구현예 33. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
(식 중, X1은
Figure pct00301
또는
Figure pct00302
임)
구현예 34. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
(식 중, X1은
Figure pct00303
임)
구현예 35. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
(식 중, X2는
Figure pct00304
, 또는
Figure pct00305
임)
구현예 36. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
(식 중, X2는
Figure pct00306
또는
Figure pct00307
임)
구현예 37. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
(식 중, X2는
Figure pct00308
임)
구현예 38. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
(식 중, X2는
Figure pct00309
임)
구현예 39. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
(식 중, X2는
Figure pct00310
임)
구현예 40. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
(식 중, X3은
Figure pct00311
, 또는
Figure pct00312
임)
구현예 41. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
(식 중, X3은
Figure pct00313
임)
구현예 42. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
(식 중, X3은
Figure pct00314
임)
구현예 43. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
(식 중, X3은
Figure pct00315
임)
구현예 44. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
(식 중, X3은
Figure pct00316
임)
구현예 45. R6이 2-피리딜 또는 4-피리딜인 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
구현예 46. 각각의 R7이 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되는 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
구현예 47. 각각의 R7이 H인 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
구현예 48. 각각의 R7이 C1-C6알킬인 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
구현예 49. 각각의 m이 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되는 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
구현예 50. 각각의 m이 1 또는 2인 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
구현예 51. 각각의 n이 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되는 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
구현예 52. 각각의 n이 2 또는 3인 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
구현예 53. 각각의 t가 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및 18로부터 독립적으로 선택되는 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
구현예 54. 각각의 t가 1, 2, 3, 4, 5, 및 6으로부터 독립적으로 선택되는 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
구현예 55. 다음으로부터 선택되는 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물:
1-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)-1H-피롤-2,5-디온;
(2R)-2-아미노-3-((1-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)-2,5-디옥소피롤리딘-3-일)티오)프로판산;
(6R)-6-(2-((3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-2-옥소에틸)-5-옥소티오모르폴린-3-카복실산;
3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-4-옥소부탄산;
(S)-3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-4-옥소부탄산;
(R)-3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-4-옥소부탄산;
2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-4-옥소부탄산;
(R)-2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-4-옥소부탄산;
(S)-2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-4-옥소부탄산;
1-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)-1H-피롤-2,5-디온;
(2S)-2-아미노-3-((1-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)-2,5-디옥소피롤리딘-3-일)티오)프로판산;
(6R)-6-(2-((2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)아미노)-2-옥소에틸)-5-옥소티오모르폴린-3-카복실산;
3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)아미노)-4-옥소부탄산;
(S)-3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)아미노)-4-옥소부탄산;
(R)-3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)아미노)-4-옥소부탄산;
2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)아미노)-4-옥소부탄산;
(R)-2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)아미노)-4-옥소부탄산;
(S)-2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)아미노)-4-옥소부탄산;
1-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에틸)-1H-피롤-2,5-디온;
3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에틸)아미노)-4-옥소부탄산;
(S)-3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에틸)아미노)-4-옥소부탄산;
(R)-3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에틸)아미노)-4-옥소부탄산;
2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에틸)아미노)-4-옥소부탄산;
(R)-2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에틸)아미노)-4-옥소부탄산;
(S)-2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에틸)아미노)-4-옥소부탄산;
1-(2-(2-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)에톡시)에틸)-1H-피롤-2,5-디온;
(2R)-2-아미노-19-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-(카복시메틸)-6,19-디옥소-10,13,16-트리옥사-4-티아-7-아자노나데칸-1-오익산;
(2R,5S)-2-아미노-19-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-(카복시메틸)-6,19-디옥소-10,13,16-트리옥사-4-티아-7-아자노나데칸-1-오익산;
(2R,5R)-2-아미노-19-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-(카복시메틸)-6,19-디옥소-10,13,16-트리옥사-4-티아-7-아자노나데칸-1-오익산;
(19R)-19-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-16-카복시-1,14-디옥소-4,7,10-트리옥사-17-티아-13-아자이코산-20-오익산;
(16R,19R)-19-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-16-카복시-1,14-디옥소-4,7,10-트리옥사-17-티아-13-아자이코산-20-오익산;
(16S,19R)-19-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-16-카복시-1,14-디옥소-4,7,10-트리옥사-17-티아-13-아자이코산-20-오익산;
1-(21-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-21-옥소-3,6,9,12,15,18-헥사옥사헤니코실)-1H-피롤-2,5-디온;
(2R)-2-아미노-28-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-(카복시메틸)-6,28-디옥소-10,13,16,19,22,25-헥사옥사-4-티아-7-아자옥사코산-1-오익산;
(2R,5S)-2-아미노-28-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-(카복시메틸)-6,28-디옥소-10,13,16,19,22,25-헥사옥사-4-티아-7-아자옥사코산-1-오익산;
(2R,5R)-2-아미노-28-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-(카복시메틸)-6,28-디옥소-10,13,16,19,22,25-헥사옥사-4-티아-7-아자옥사코산-1-오익산;
(28R)-28-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-25-카복시-1,23-디옥소-4,7,10,13,16,19-헥사옥사-26-티아-22-아자노나코산-29-오익산;
(25R,28R)-28-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-25-카복시-1,23-디옥소-4,7,10,13,16,19-헥사옥사-26-티아-22-아자노나코산-29-오익산;
(25S,28R)-28-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-25-카복시-1,23-디옥소-4,7,10,13,16,19-헥사옥사-26-티아-22-아자노나코산-29-오익산;
1-((1-(2-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)-1H-피롤-2,5-디온;
(2R)-2-아미노-3-((2-(((1-(2-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-2-옥소에틸)티오)펜탄디오산;
N-(2-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)-3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미드;
(19R)-19-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-16-(카복시메틸)-1,11,15-트리옥소-4,7-디옥사-17-티아-10,14-디아자이코산-20-오익산;
(16S,19R)-19-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-16-(카복시메틸)-1,11,15-트리옥소-4,7-디옥사-17-티아-10,14-디아자이코산-20-오익산;
(16R,19R)-19-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-16-(카복시메틸)-1,11,15-트리옥소-4,7-디옥사-17-티아-10,14-디아자이코산-20-오익산;
(20R)-20-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-17-카복시-1,11,15-트리옥소-4,7-디옥사-18-티아-10,14-디아자헤니코산-21-오익산;
(17R,20R)-20-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-17-카복시-1,11,15-트리옥소-4,7-디옥사-18-티아-10,14-디아자헤니코산-21-오익산;
(17S,20R)-20-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-17-카복시-1,11,15-트리옥소-4,7-디옥사-18-티아-10,14-디아자헤니코산-21-오익산;
5-(4-((4-(3-아미노프로필)피페라진-1-일)메틸)-2-메톡시벤질)-N4-펜틸-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2,4-디아민;
1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)프로판-1-온;
N-(2-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)-2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)아세트아미드;
(2R)-2-아미노-19-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-(카복시메틸)-6,9,19-트리옥소-13,16-디옥사-4-티아-7,10-디아자노나데칸-1-오익산;
(2R,5S)-2-아미노-19-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-(카복시메틸)-6,9,19-트리옥소-13,16-디옥사-4-티아-7,10-디아자노나데칸-1-오익산;
(2R,5R)-2-아미노-19-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-(카복시메틸)-6,9,19-트리옥소-13,16-디옥사-4-티아-7,10-디아자노나데칸-1-오익산;
(19R)-19-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-16-카복시-1,11,14-트리옥소-4,7-디옥사-17-티아-10,13-디아자이코산-20-오익산;
(16R,19R)-19-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-16-카복시-1,11,14-트리옥소-4,7-디옥사-17-티아-10,13-디아자이코산-20-오익산;
(16S,19R)-19-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-16-카복시-1,11,14-트리옥소-4,7-디옥사-17-티아-10,13-디아자이코산-20-오익산;
4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)-N-(2-(2-(2-(2-(4-((2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에톡시)에톡시)에톡시)에틸)피페라진-1-카복사미드;
3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-1-옥소-5,8,11-트리옥사-2-아자트리데칸-13-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산;
(S)-3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-1-옥소-5,8,11-트리옥사-2-아자트리데칸-13-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산;
(R)-3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-1-옥소-5,8,11-트리옥사-2-아자트리데칸-13-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산;
2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-1-옥소-5,8,11-트리옥사-2-아자트리데칸-13-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산;
(R)-2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-1-옥소-5,8,11-트리옥사-2-아자트리데칸-13-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산;
(S)-2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-1-옥소-5,8,11-트리옥사-2-아자트리데칸-13-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산;
1-(2-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에톡시)에틸)-1H-피롤-2,5-디온;
3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에톡시)에틸)아미노)-4-옥소부탄산;
(S)-3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에톡시)에틸)아미노)-4-옥소부탄산;
(R)-3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에톡시)에틸)아미노)-4-옥소부탄산;
2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에톡시)에틸)아미노)-4-옥소부탄산;
(R)-2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에톡시)에틸)아미노)-4-옥소부탄산;
(S)-2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에톡시)에틸)아미노)-4-옥소부탄산;
1-((1-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)-1H-피롤-2,5-디온;
3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산;
(S)-3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산;
(R)-3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산;
2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산;
(R)-2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산;
(S)-2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산;
N-(21-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-21-옥소-3,6,9,12,15,18-헥사옥사헤니코실)-3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미드;
4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카복실레이트;
(2R,3R,4R,5S)-6-(4-(((4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카보닐)옥시)메틸)-2-(3-(3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미도-메틸부탄아미도)페녹시)-3,4,5-트리하이드록시테트라하이드로-2H-피란-2-카복실산;
(S)-1-(3-(4-(3-((2-아미노-4-((1-하이드록시헥산-2-일)아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)-1H-피롤-2,5-디온;
1-(3-(4-(3-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)-1H-피롤-2,5-디온;
3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((3-(4-(3-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-4-옥소부탄산;
(S)-3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((3-(4-(3-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-4-옥소부탄산;
(R)-3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((3-(4-(3-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-4-옥소부탄산;
2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((3-(4-(3-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-4-옥소부탄산;
(R)-2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((3-(4-(3-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-4-옥소부탄산;
(S)-2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((3-(4-(3-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-4-옥소부탄산;
1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-2-(아미노옥시)에타논;
1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-(2-아미노에톡시)프로판-1-온;
N-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에틸)-2-(아미노옥시)아세트아미드;
(S)-1-(4-(3-((2-아미노-4-((1-하이드록시헥산-2-일)아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-2-(아미노옥시)에타논;
(S)-1-(4-(3-((2-아미노-4-((1-하이드록시헥산-2-일)아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)프로판-1-온;
(S)-N-(2-(2-(3-(4-(3-((2-아미노-4-((1-하이드록시헥산-2-일)아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)-2-(아미노옥시)아세트아미드;
N-(2-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)-2-(아미노옥시)아세트아미드;
5-(4-((4-(2-(2-(아미노옥시)에톡시)에틸)피페라진-1-일)메틸)-2-메톡시벤질)-N4-펜틸-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2,4-디아민;
N-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)프로필)-2-(아미노옥시)아세트아미드;
5-(4-((4-(2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)에틸)피페라진-1-일)메틸)-2-메톡시벤질)-N4-펜틸-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2,4-디아민;
N-(2-(2-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에톡시)에톡시)에틸)-2-(아미노옥시)아세트아미드;
2,5-디옥소피롤리딘-1-일 5-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-옥소펜타노에이트;
(S)-2,5-디옥소피롤리딘-1-일 5-(4-(3-((2-아미노-4-((1-하이드록시헥산-2-일)아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-옥소펜타노에이트;
(S)-2-아미노-6-(5-(4-(3-((2-아미노-4-(((S)-1-하이드록시헥산-2-일)아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-옥소펜탄아미도)헥산산;
(S)-2-아미노-6-(5-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-옥소펜탄아미도)헥산산;
2,5-디옥소피롤리딘-1-일 5-((3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)프로필)아미노)-5-옥소펜타노에이트;
(S)-2-아미노-6-(5-((3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)프로필)아미노)-5-옥소펜탄아미도)헥산산;
2,5-디옥소피롤리딘-1-일 5-(4-(3-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-옥소펜타노에이트;
(S)-2-아미노-6-(5-(4-(3-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-옥소펜탄아미도)헥산산;
퍼플루오로페닐 5-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-옥소펜타노에이트;
퍼플루오로페닐 3-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)프로파노에이트;
퍼플루오로페닐 3-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)프로파노에이트;
(S)-2-아미노-6-(3-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)프로판아미도)헥산산, 및
N-(15-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-15-옥소-3,6,9,12-테트라옥사펜타데실)-5-((3aS,4S,6aR)-2-옥소헥사하이드로-1H-티에노[3,4-d]이미다졸-4-일)펜탄아미드.
구현예 56. 다음으로부터 선택되는 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물:
1-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)-1H-피롤-2,5-디온;
1-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)-1H-피롤-2,5-디온;
1-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에틸)-1H-피롤-2,5-디온, 및
1-(2-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에톡시)에틸)-1H-피롤-2,5-디온.
구현예 57. 다음으로부터 선택되는 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물:
(2R,3R,4R,5S)-6-(4-(((4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카보닐)옥시)메틸)-2-(3-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도-메틸부탄아미도)페녹시)-3,4,5-트리하이드록시테트라하이드로-2H-피란-2-카복실산;
4-((R)-6-아미노-2-((S)-2-(3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미도)-3-페닐프로판아미도)헥산아미도)벤질 4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카복실레이트;
4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질 4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카복실레이트;
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-(((4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카보닐)옥시)메틸)-2-(3-(3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미도-메틸부탄아미도)페녹시)-3,4,5-트리하이드록시테트라하이드로-2H-피란-2-카복실산;
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-(((4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카보닐)옥시)메틸)-2-(3-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도-메틸부탄아미도)페녹시)-3,4,5-트리하이드록시테트라하이드로-2H-피란-2-카복실산;
N-(2-((5-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-2-메틸-5-옥소펜탄-2-일)디설파닐)에틸)-3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미드;
1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-4-메틸-4-(메틸티오)펜탄-1-온;
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에톡시)(하이드록시)포스포릴)옥시)메틸)-2-(3-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도-메틸부탄아미도)페녹시)-3,4,5-트리하이드록시테트라하이드로-2H-피란-2-카복실산;
(2R,2'R)-3,3'-((2-((2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-2-옥소에톡시)이미노)프로판-1,3-디일)비스(설판디일))비스(2-아미노프로판산);
(R)-2-아미노-6-((((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)메틸)-17-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-10,17-디옥소-8,14-디옥사-4-티아-7,11-디아자헵타데크-6-엔산, 및
2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에탄-1-올.
또한, 비중이 더 큰 동위원소, 특히 중수소(즉, 2H 또는 D)로 치환하면 더 큰 대사 안정성으로 인한 특정 치료 이점, 예를 들어 생체내 반감기의 증가 또는 투여량 요건의 감소 또는 치료 지수의 개선을 제공할 수 있다. 이 문맥에서 중수소는 화학식 I의 화합물의 치환기로 간주되는 것으로 이해된다. 이러한 비중이 더 큰 동위원소, 특히 중수소의 농도는 동위원소 농축 계수에 의해 정의될 수 있다. 본원에 사용된 용어 "동위원소 농축 계수"는 동위원소 존재비와 특정 동위원소의 자연 존재비 사이의 비를 의미한다. 본 발명의 화합물에서의 치환기가 중수소로 표시되는 경우, 이러한 화합물은 각각의 지정된 중수소 원자에 대해 적어도 3500(각각의 지정된 중수소 원자에 52.5%의 중수소 혼입), 적어도 4000(60%의 중수소 혼입), 적어도 4500(67.5%의 중수소 혼입), 적어도 5000(75%의 중수소 혼입), 적어도 5500(82.5%의 중수소 혼입), 적어도 6000(90%의 중수소 혼입), 적어도 6333.3(95%의 중수소 혼입), 적어도 6466.7(97%의 중수소 혼입), 적어도 6600(99%의 중수소 혼입), 또는 적어도 6633.3(99.5%의 중수소 혼입)의 동위원소 농축 계수를 갖는다.
본 발명에 따른 약학적으로 허용 가능한 용매화물은 결정화의 용매가 동위원소로 치환될 수 있는 것, 예를 들어 D2O, d6-아세톤, d6-DMSO를 포함한다.
화학식 I 및 그 하위 화학식의 화합물의 제조 방법
화학식 I 및 그 하위 화학식의 화합물을 제조하기 위한 일반적인 절차는 본원에 기술되어 있다. 기재된 반응에서, 반응성 작용기, 예를 들어 최종 생성물에서 요구되는 하이드록시기, 아미노기, 이미노기, 티올기, 또는 카복시기는 반응에서의 이들의 원치 않는 참여를 막기 위해 보호될 수 있다. 본원의 범위 내에서, 문맥에서 달리 나타내지 않는 한, 본 발명의 화합물의 특정의 목적하는 최종 생성물의 구성 성분이 아닌 용이하게 제거될 수 있는 기(group)만이 "보호기"로 지정된다. 이러한 보호기에 의한 작용기의 보호, 보호기 자체, 및 이들의 절단 반응은 표준 참고 문헌, 예컨대 문헌[J. F. W. McOmie, "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, London and New York 1973], 문헌[T. W. Greene and P. G. M. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", Third edition, Wiley, New York 1999], 문헌["The Peptides"; Volume 3 (editors: E. Gross and J. Meienhofer), Academic Press, London and New York 1981], 문헌["Methoden der organischen Chemie" (Methods of Organic Chemistry), Houben Weyl, 4th edition, Volume 15/I, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974], 문헌[H.-D. Jakubke and H. Jeschkeit, "Aminosauren, Peptide, Proteine" (Amino acids, Peptides, Proteins), Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach, and Basel 1982], 및 문헌[Jochen Lehmann, "Chemie der Kohlenhydrate: Monosaccharide und Derivate" (Chemistry of Carbohydrates: Monosaccharides and Derivatives), Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974]에 기술되어 있다. 보호기의 특징은, 예를 들어 가용매분해, 환원, 광분해에 의해 또는 대안적으로 생리학적 조건하에서(예를 들어, 효소적 절단에 의해) 용이하게(즉, 원치 않는 2차 반응의 발생 없이) 제거될 수 있다는 것이다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 화학식 I 및 그 하위 화학식의 화합물은 화학식 I 및 그 하위 화학식의 화합물의 유리 염기 형태를 적절한 약학적으로 허용 가능한 유기산 또는 무기산 또는 적합한 음이온 교환 시약의 화학양론적 양과 반응시켜 약학적으로 허용 가능한 산 부가염으로서 제조된다.
이러한 반응은 일반적으로 물 또는 유기 용매, 또는 이 둘의 혼합물에서 수행된다. 일반적으로, 가능한 경우 에테르, 에틸 아세테이트, 에탄올, 이소프로판올, 또는 아세토니트릴과 같은 비수성 매질의 사용이 바람직하다.
대안적으로, 화학식 I 및 그 하위 화학식의 화합물의 염 형태는 출발 물질 또는 중간체의 염을 사용하여 제조된다.
적어도 하나의 염-형성 기를 갖는 본 발명의 화합물의 염은 당업자에게 알려진 방식으로 제조될 수 있다. 예를 들어, 산기를 갖는 본 발명의 화합물의 염은, 예를 들어 화합물을 적합한 유기 카복실산의 알칼리 금속염, 예를 들어 2-에틸헥산산의 나트륨염과 같은 금속 화합물로, 유기 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 화합물, 예컨대 나트륨 또는 칼륨 수산화물, 탄산염, 또는 탄산수소염과 같은 상응하는 수산화물, 탄산염, 또는 탄산수소염으로, 상응하는 칼슘 화합물로, 또는 암모니아 또는 적합한 유기 아민으로 처리함으로써 형성될 수 있고, 화학양론적 양 또는 단지 약간의 초과량의 염-형성 제제가 바람직하게 사용된다. 본 발명의 화합물의 산 부가염은 통상적인 방식으로, 예를 들어 화합물을 산 또는 적합한 음이온 교환 시약으로 처리함으로써 수득된다. 산 및 염기성 염-형성 기, 예를 들어 유리 카복시기 및 유리 아미노기를 함유하는 본 발명의 화합물의 내부 염은, 예를 들어 산 부가염과 같은 염을 등전점까지 예를 들어 약염기로 중화시킴으로써, 또는 이온 교환체로 처리함으로써 형성될 수 있다.
염은 당업자에게 알려진 방법에 따라 유리 화합물로 변환될 수 있다. 금속 및 암모늄 염은 예를 들어 적합한 산으로 처리함으로써 변환될 수 있고, 산 부가염은 예를 들어 적합한 염기성 제제로 처리함으로써 변환될 수 있다.
상기 모든 공정 단계는 용매 또는 희석제(예를 들어 사용된 시약에 대해 불활성이고 이들을 용해시키는 용매 또는 희석제를 포함)의 부재하에 또는 통상적으로는 존재하에, 반응 및/또는 반응물의 성질에 따라 촉매, 축합제 또는 중화제, 예를 들어 H+ 형태의 양이온 교환체와 같은 이온 교환체의 부재 또는 존재하에, 감소된 온도, 정상 온도, 또는 상승된 온도에서, 예를 들어 약 100℃ 내지 약 190℃의 온도 범위(예를 들어, 약 -80℃ 내지 약 150℃, 예를 들어 -80 내지 -60℃, 실온, -20 내지 40℃, 또는 환류 온도를 포함)에서, 대기압 하에서 또는 밀폐 용기에서, 적절한 경우, 압력 하에 및/또는 불활성 분위기에서, 예를 들어 아르곤 또는 질소 분위기 하에서, 구체적으로 언급된 것들을 포함하여 당업자에게 알려진 반응 조건하에서 수행될 수 있다.
화학식 I 및 그 하위 화학식의 화합물의 약학적으로 허용 가능한 산 부가염은 아세테이트, 아디페이트, 아스코르베이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 베실레이트, 벤젠설포네이트, 바이카보네이트/카보네이트, 바이설페이트/설페이트, 브로마이드/하이드로브로마이드, 캄포 설포네이트, 캄실레이트, 카프레이트, 클로라이드/하이드로클로라이드, 클로로테오필리네이트, 시트레이트, 에디실레이트, 에탄디설포네이트, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코헵토네이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 글루타메이트, 글루타레이트, 글리콜레이트, 히푸레이트, 하이드로아이오다이드/아이오다이드, 이세티오네이트, 락테이트, 락토바이오네이트, 라우릴설페이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 만델레이트, 메실레이트, 메탄설포네이트, 메틸설페이트, 뮤케이트, 나프토에이트, 나프실레이트, 2-나프실레이트, 나프탈렌설포네이트, 2-나프탈렌설포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 옥타데카노에이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 포스페이트/하이드로젠 포스페이트/디하이드로젠 포스페이트, 폴리갈락투로네이트, 프로피오네이트, 세바케이트, 스테아레이트, 석시네이트, 설포살리실레이트, 설페이트, 타르트레이트, 토실레이트, p-톨루엔설포네이트, 트리플루오로아세테이트, 트리페나테이트, 트리페닐아세테이트, 및 시타포에이트 염 형태를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
화학식 I 및 그 하위 화학식의 화합물의 약학적으로 허용 가능한 특정 산 부가염을 형성하는 데 사용되는 유기산 또는 무기산은 아세트산, 아디프산, 아스코르브산, 아스파르트산, 벤조산, 벤젠설폰산, 탄산, 캄포 설폰산, 카프르산, 클로로테오필리네이트, 시트르산, 에탄디설폰산, 푸마르산, D-글리세로-D-굴로-헵톤산, 갈락타르산, 갈락타르산/뮤신산, 글루셉트산, 글루코헵톤산, 글루콘산, 글루쿠론산, 글루탐산, 글루타르산, 글리콜산, 히푸르산, 브롬화수소산, 염산, 아이오딘화수소산, 이세티온산, 락트산, 락트바이오산, 라우릴 설폰산, 말산, 말레산, 말론산, 만델산, 메실산, 메탄설폰산, 뮤신산, 나프토산, 1-하이드록시-2-나프토산, 나프탈렌설폰산, 2-나프탈렌설폰산, 니코틴산, 질산, 옥타데칸산, 올레산, 옥살산, 팔미트산, 팜산, 인산, 폴리갈락투론산, 프로피온산, 세바스산, 스테아르산, 석신산, 설포살리실산, 황산, 주석산, p-톨루엔설폰산, 트리플루오로아세트산, 및 트리페닐아세트산을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
일 구현예에서, 본 발명은 아세테이트, 아디페이트, 아스코르베이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 베실레이트, 벤젠설포네이트, 바이카보네이트/카보네이트, 바이설페이트/설페이트, 브로마이드/하이드로브로마이드, 캄포 설포네이트, 캄실레이트, 카프레이트, 클로라이드/하이드로클로라이드, 클로르테오필리네이트, 시트레이트, 에디실레이트, 에탄디설포네이트, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코헵토네이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 글루타메이트, 글루타레이트, 글리콜레이트, 히푸레이트, 하이드로아이오다이드/아이오다이드, 이세티오네이트, 락테이트, 락토바이오네이트, 라우릴설페이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 만델레이트, 메실레이트, 메탄설포네이트, 메틸설페이트, 뮤케이트, 나프토에이트, 나프실레이트, 2-나프실레이트, 나프탈렌설포네이트, 2-나프탈렌설포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 옥타데카노에이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 포스페이트/하이드로젠 포스페이트/디하이드로젠 포스페이트, 폴리갈락투로네이트, 프로피오네이트, 세바케이트, 스테아레이트, 석시네이트, 설포살리실레이트, 설페이트, 타르트레이트, 토실레이트, p-톨루엔설포네이트, 트리플루오로아세테이트, 트리페나테이트, 트리페닐아세테이트, 또는 시타포에이트 염 형태의 3-(3-플루오로-4-(3-(피페리딘-4-일)프로폭시)페닐)-1-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민을 제공한다.
일 구현예에서, 본 발명은 아세테이트, 아디페이트, 아스코르베이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 베실레이트, 벤젠설포네이트, 바이카보네이트/카보네이트, 바이설페이트/설페이트, 브로마이드/하이드로브로마이드, 캄포 설포네이트, 캄실레이트, 카프레이트, 클로라이드/하이드로클로라이드, 클로르테오필리네이트, 시트레이트, 에디실레이트, 에탄디설포네이트, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코헵토네이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 글루타메이트, 글루타레이트, 글리콜레이트, 히푸레이트, 하이드로아이오다이드/아이오다이드, 이세티오네이트, 락테이트, 락토바이오네이트, 라우릴설페이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 만델레이트, 메실레이트, 메탄설포네이트, 메틸설페이트, 뮤케이트, 나프토에이트, 나프실레이트, 2-나프실레이트, 나프탈렌설포네이트, 2-나프탈렌설포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 옥타데카노에이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 포스페이트/하이드로젠 포스페이트/디하이드로젠 포스페이트, 폴리갈락투로네이트, 프로피오네이트, 세바케이트, 스테아레이트, 석시네이트, 설포살리실레이트, 설페이트, 타르트레이트, 토실레이트, p-톨루엔설포네이트, 트리플루오로아세테이트, 트리페나테이트, 트리페닐아세테이트, 또는 시타포에이트 염 형태의 3-(4-(((1r,4r)-4-아미노사이클로헥실)메톡시)-3-플루오로페닐)-1-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민을 제공한다.
일 구현예에서, 본 발명은 아세테이트, 아디페이트, 아스코르베이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 베실레이트, 벤젠설포네이트, 바이카보네이트/카보네이트, 바이설페이트/설페이트, 브로마이드/하이드로브로마이드, 캄포 설포네이트, 캄실레이트, 카프레이트, 클로라이드/하이드로클로라이드, 클로르테오필리네이트, 시트레이트, 에디실레이트, 에탄디설포네이트, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코헵토네이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 글루타메이트, 글루타레이트, 글리콜레이트, 히푸레이트, 하이드로아이오다이드/아이오다이드, 이세티오네이트, 락테이트, 락토바이오네이트, 라우릴설페이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 만델레이트, 메실레이트, 메탄설포네이트, 메틸설페이트, 뮤케이트, 나프토에이트, 나프실레이트, 2-나프실레이트, 나프탈렌설포네이트, 2-나프탈렌설포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 옥타데카노에이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 포스페이트/하이드로젠 포스페이트/디하이드로젠 포스페이트, 폴리갈락투로네이트, 프로피오네이트, 세바케이트, 스테아레이트, 석시네이트, 설포살리실레이트, 설페이트, 타르트레이트, 토실레이트, p-톨루엔설포네이트, 트리플루오로아세테이트, 트리페나테이트, 트리페닐아세테이트, 또는 시타포에이트 염 형태의 3-(4-((4-아미노바이사이클로[2.2.2]옥탄-1-일)메톡시)-3-플루오로페닐)-1-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민을 제공한다.
일 구현예에서, 본 발명은 아세테이트, 아디페이트, 아스코르베이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 베실레이트, 벤젠설포네이트, 바이카보네이트/카보네이트, 바이설페이트/설페이트, 브로마이드/하이드로브로마이드, 캄포 설포네이트, 캄실레이트, 카프레이트, 클로라이드/하이드로클로라이드, 클로르테오필리네이트, 시트레이트, 에디실레이트, 에탄디설포네이트, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코헵토네이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 글루타메이트, 글루타레이트, 글리콜레이트, 히푸레이트, 하이드로아이오다이드/아이오다이드, 이세티오네이트, 락테이트, 락토바이오네이트, 라우릴설페이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 만델레이트, 메실레이트, 메탄설포네이트, 메틸설페이트, 뮤케이트, 나프토에이트, 나프실레이트, 2-나프실레이트, 나프탈렌설포네이트, 2-나프탈렌설포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 옥타데카노에이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 포스페이트/하이드로젠 포스페이트/디하이드로젠 포스페이트, 폴리갈락투로네이트, 프로피오네이트, 세바케이트, 스테아레이트, 석시네이트, 설포살리실레이트, 설페이트, 타르트레이트, 토실레이트, p-톨루엔설포네이트, 트리플루오로아세테이트, 트리페나테이트, 트리페닐아세테이트, 또는 시타포에이트 염 형태의 3-(4-((4-아미노바이사이클로[2.2.2]옥탄-1-일)메톡시)-3-클로로페닐)-1-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민을 제공한다.
일 구현예에서, 본 발명은 아세테이트, 아디페이트, 아스코르베이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 베실레이트, 벤젠설포네이트, 바이카보네이트/카보네이트, 바이설페이트/설페이트, 브로마이드/하이드로브로마이드, 캄포 설포네이트, 캄실레이트, 카프레이트, 클로라이드/하이드로클로라이드, 클로르테오필리네이트, 시트레이트, 에디실레이트, 에탄디설포네이트, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코헵토네이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 글루타메이트, 글루타레이트, 글리콜레이트, 히푸레이트, 하이드로아이오다이드/아이오다이드, 이세티오네이트, 락테이트, 락토바이오네이트, 라우릴설페이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 만델레이트, 메실레이트, 메탄설포네이트, 메틸설페이트, 뮤케이트, 나프토에이트, 나프실레이트, 2-나프실레이트, 나프탈렌설포네이트, 2-나프탈렌설포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 옥타데카노에이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 포스페이트/하이드로젠 포스페이트/디하이드로젠 포스페이트, 폴리갈락투로네이트, 프로피오네이트, 세바케이트, 스테아레이트, 석시네이트, 설포살리실레이트, 설페이트, 타르트레이트, 토실레이트, p-톨루엔설포네이트, 트리플루오로아세테이트, 트리페나테이트, 트리페닐아세테이트, 또는 시타포에이트 염 형태의 4-((2-클로로-4-(6-메톡시-1-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-일)페녹시)메틸)바이사이클로[2.2.2]옥탄-1-아민을 제공한다.
추가의 적합한 산 부가염의 목록은, 예를 들어 문헌["Remington's Pharmaceutical Sciences", 20th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985)], 및 문헌["Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use", Stahl and Wermuth 저 (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002)]에서 확인할 수 있다.
공정의 설명에서 달리 나타내지 않는 한, 임의의 특정 반응에 적합한 선택될 수 있는 용매는 구체적으로 언급된 것들, 또는 예를 들어 물, 저급 알킬-저급 알카노에이트 등의 에스테르, 예를 들어 에틸 아세테이트, 지방족 에테르 등의 에테르, 예를 들어 디에틸 에테르, 또는 환형 에테르, 예를 들어 테트라하이드로퓨란 또는 디옥산, 벤젠 또는 톨루엔 등의 액체 방향족 탄화수소, 메탄올, 에탄올, 또는 1- 또는 2-프로판올 등의 알코올, 아세토니트릴 등의 니트릴, 염화메틸렌 또는 클로로포름 등의 할로겐화 탄화수소, 디메틸포름아미드 또는 디메틸 아세트아미드 등의 산아미드, 복소환 질소 염기 등의 염기, 예를 들어 피리딘 또는 N-메틸피롤리딘-2-온, 저급 알칸산 무수물 등의 카복실산 무수물, 예를 들어 아세트산 무수물, 환형, 선형, 또는 분지형 탄화수소, 예를 들어 사이클로헥산, 헥산, 또는 이소펜탄, 메틸사이클로헥산, 또는 이러한 용매의 혼합물, 예를 들어 수용액을 포함한다. 이러한 용매 혼합물은 또한, 예를 들어 크로마토그래피 또는 분배에 의한 후처리(working up)에 사용될 수 있다.
특정 구현예에서, 화학식 I 및 그 하위 화학식의 화합물은 용매화물(예를 들어, 수화물)로서 제조되거나 형성될 수 있다. 특정 구현예에서, 화학식 I 및 그 하위 화학식의 화합물의 수화물은 디옥신, 테트라하이드로퓨란, 또는 메탄올과 같은 유기 용매를 사용하여 수성/유기 용매 혼합물로부터 재결정화에 의해 제조된다. 또한, 본 발명의 화합물(그 염을 포함)은 수화물의 형태로 수득될 수 있거나, 결정화에 사용되는 다른 용매를 포함할 수도 있다.
본 발명의 화합물은 본질적으로 또는 의도적으로 약학적으로 허용 가능한 용매(물 포함)와 용매화물을 형성할 수 있으므로, 본 발명은 용매화된 형태와 용매화되지 않은 형태 모두를 포함하는 것이다. 용어 "용매화물"은 본 발명의 화합물(이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함)과 하나 이상의 용매 분자와의 분자 복합체를 지칭한다. 이러한 용매 분자는 수용체에 무해한 것으로 알려진, 약학 분야에서 통상적으로 사용되는 것(예를 들어 물, 에탄올 등)이다. 용어 "수화물"은 용매 분자가 물인 복합체를 지칭한다.
본 발명의 화합물(들)의 임의의 비대칭 원자(예컨대, 탄소 등)는 라세미로 또는 거울상 이성질체적으로 풍부하게, 예를 들어 (R)-, (S)- 또는 (R,S)- 배열로 존재할 수 있다. 특정 구현예에서, 각각의 비대칭 원자는 (R)- 또는 (S)- 배열에서 적어도 50%의 과량의 거울상 이성질체, 적어도 60%의 과량의 거울상 이성질체, 적어도 70%의 과량의 거울상 이성질체, 적어도 80%의 과량의 거울상 이성질체, 적어도 90%의 과량의 거울상 이성질체, 적어도 95%의 과량의 거울상 이성질체, 또는 적어도 99%의 과량의 거울상 이성질체를 갖는다. 불포화 이중 결합을 갖는 원자에서의 치환기는, 가능하면, 시스- (Z)- 또는 트랜스- (E)- 형태로 존재할 수 있다.
따라서, 본원에 사용된 바와 같이, 본 발명의 화합물은 가능한 이성질체, 회전 이성질체, 회전장애 이성질체, 호변 이성질체, 또는 이들의 혼합물 중 하나의 형태로, 예를 들어 실질적으로 순수한 기하(시스 또는 트랜스) 이성질체, 부분입체 이성질체, 광학 이성질체(거울상체), 라세미체, 또는 이들의 혼합물로서 존재할 수 있다.
이성질체의 임의의 생성 혼합물은 구성성분의 물리화학적 차이에 기초하여, 예를 들어 크로마토그래피 및/또는 분별 결정화에 의해 순수한 또는 실질적으로 순수한 기하 또는 광학 이성질체, 부분입체 이성질체, 라세미체로 분리될 수 있다.
최종 생성물 또는 중간체의 임의의 생성 라세미체는 공지된 방법에 의해, 예를 들어 광학활성 산 또는 염기를 사용하여 수득된 이들의 부분입체 이성질체 염의 분리, 및 광학활성 산성 또는 염기성 화합물의 유리에 의해 광학 거울상체로 분해될 수 있다. 따라서, 특히 염기성 모이어티를 이용하여, 예를 들어 광학활성 산(예컨대, 주석산, 디벤조일 주석산, 디아세틸 주석산, 디-O,O'-p-톨루오일 주석산, 만델산, 말산, 또는 캄포-10-설폰산)으로 형성된 염의 분별 결정화에 의해, 본 발명의 화합물을 광학 거울상체로 분해할 수 있다. 라세미 생성물은 또한, 키랄 크로마토그래피, 예를 들어 키랄 흡착제를 이용한 고압 액체 크로마토그래피(HPLC)에 의해 분해될 수 있다.
특정 구현예에서, 화학식 I, 또는 그 하위 화학식의 화합물은 이들의 개별 입체 이성질체로서 제조된다. 다른 구현예에서, 화학식 I, 또는 그 하위 화학식의 화합물은 화합물의 라세미 혼합물을 광학활성 분해제와 반응시켜 한 쌍의 부분입체 이성질체 화합물을 형성하고, 부분입체 이성질체를 분리하고, 광학적으로 순수한 거울상 이성질체를 회수함으로써 개별 입체 이성질체로서 제조된다. 특정 구현예에서, 거울상 이성질체의 분해는 화학식 I, 또는 그 하위 화학식의 화합물의 공유결합 부분입체 이성질체 유도체를 사용하거나, 또는 해리될 수 있는 복합체(예를 들어, 결정질 부분입체 이성질체 염)를 사용하여 수행된다. 부분입체 이성질체는 서로 다른 물리적 성질(예를 들어, 융점, 비점, 용해도, 반응성 등)을 가지며, 이러한 차이를 이용하여 쉽게 분리된다. 특정 구현예에서, 부분입체 이성질체는 크로마토그래피에 의해, 또는 용해도 차이에 기초한 분리/분해 기술에 의해 분리된다. 광학적으로 순수한 거울상 이성질체는 이어서, 라세미화를 초래하지 않는 임의의 유용한 수단에 의해 분해제와 함께 회수된다. 화합물의 입체 이성질체를 라세미 혼합물로부터 분해하는 데 적용될 수 있는 기술에 대한 보다 상세한 설명은 문헌[Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, "Enantiomers, Racemates and Resolutions," John Wiley And Sons, Inc., 1981]에서 확인할 수 있다.
본 발명에 따라 얻을 수 있는 이성질체의 혼합물은 당업자에게 알려진 방식으로 개별 이성질체로 분리될 수 있다. 부분입체 이성질체는, 예를 들어 다상 용매 혼합물 간의 분배, 재결정화, 및/또는, 예를 들어 실리카겔 상의 크로마토그래피 분리에 의해, 또는 예를 들어 역상 컬럼 상의 중압 액체 크로마토그래피에 의해 분리될 수 있고, 라세미체는, 예를 들어 광학적으로 순수한 염-형성 시약으로 염을 형성하고, 이렇게 얻을 수 있는 부분입체 이성질체의 혼합물을, 예를 들어 분별 결정화에 의해, 또는 광학활성 컬럼 물질상의 크로마토그래피에 의해 분리함으로써 분리될 수 있다.
출발 물질 및 절차의 선택에 따라, 본 발명의 화합물의 특정 구현예는 가능한 이성질체 중 하나의 형태로 또는 이들의 혼합물로서, 예를 들어 비대칭 탄소 원자의 수에 따라, 순수한 광학 이성질체로서, 또는 라세미체와 부분입체 이성질체 혼합물과 같은 이성질체 혼합물로서 존재한다. 본 발명은 라세미 혼합물, 부분입체 이성질체 혼합물, 및 광학적으로 순수한 형태를 포함해 이러한 모든 가능한 이성질체를 포함하는 것이다. 광학 활성 (R)- 및 (S)- 이성질체는 키랄 신톤 또는 키랄 시약을 이용해 제조되거나 종래의 기술을 이용해 분해될 수 있다. 화합물이 이중 결합을 포함하는 경우, 치환기는 E 또는 Z 배열일 수 있다. 화합물이 이치환된 사이클로알킬을 함유하는 경우, 사이클로알킬 치환기는 시스- 또는 트랜스-배열을 가질 수 있다. 모든 호변 이성질체 형태도 포함되는 것으로 의도된다.
중간체 및 최종 생성물은 표준 방법에 따라, 예를 들어 크로마토그래피 방법, 분배 방법, (재)결정화 등을 이용해 후처리 및/또는 정제될 수 있다. 본 발명은 또한, 공정의 임의의 단계에서 중간체로 얻을 수 있는 화합물이 출발 물질로 사용되고 나머지 공정 단계가 수행되는 공정의 형태, 출발 물질이 반응 조건하에서 형성되거나 유도체의 형태, 예를 들어 보호된 형태 또는 염의 형태로 사용되거나, 본 발명에 따른 공정에 의해 얻을 수 있는 화합물이 공정 조건하에서 생성되고 추가로 인시튜로 처리되는 공정의 형태에 관한 것이다. 본 발명의 화합물을 합성하는 데 이용되는 모든 출발 물질, 빌딩 블록, 시약, 산, 염기, 탈수제, 용매, 및 촉매는 상업적으로 이용 가능하거나, 당업자에 알려진 유기 합성 방법에 의해 제조될 수 있다.
화학식 I 및 그 하위 화학식(화학식 Ia 및 화학식 Ib)의 화합물은 본원의 일반 반응식에 기술된 공정에 의해 그리고 실시예에 예시된 바와 같이 제조된다.
반응식 1A는 -링커-R4 모이어티가 아미드 결합에 의해 중간체(int-A1)에 부착되는 화학식 A1의 특정 화합물을 제조하는 데 사용되는 비제한적인 합성 반응식을 나타낸다. 반응식 1A에서, 링커는 말단 카보닐 모이어티(즉, -L'-C(=O))를 갖는 임의의 링커(L')이다. 또한 반응식 1A에서, R1은 본원에 기재된 바와 같고, R4는 티올, 이황화물, 아민, 케톤, 디케톤, 아지드, 또는 알킨과 반응할 수 있는 반응성 모이어티이다. 반응식 1B는 -링커-R4 모이어티가 아미드 결합에 의해 중간체(int-A1)에 부착되는 화학식 A1의 특정 화합물을 제조하는 데 사용되는 비제한적인 합성 반응식을 나타낸다. 반응식 1B에서, 링커는 말단 카보닐 모이어티(즉, -L'-C(=O))를 갖는 임의의 링커(L')이다. 또한 반응식 1B에서, R1은 본원에 기재된 바와 같고, R4는 아미노기를 갖는 모이어티(예컨대, 하이드록실 아민 또는 아민)이고, RB는 보호된 아미노기를 갖는 모이어티이고, Prot는 Boc, Fmoc, 및 Cbz와 같은 보호기이다.
반응식 1
Figure pct00317
이러한 아미드 결합 형성은 열, EDCI 커플링, HATU 커플링, HBTU 커플링, TBTU 커플링, 또는 T3P 커플링을 사용하여 이루어질 수 있다.
반응식 2A는 -링커-R4 모이어티가 아미드 결합에 의해 중간체(int-A2)에 부착되는 화학식 A2의 특정 화합물을 제조하는 데 사용되는 비제한적인 합성 반응식을 나타낸다. 반응식 2A에서, 링커는 말단 카보닐 모이어티(즉, -L'-C(=O))를 갖는 임의의 링커(L')이다. 또한 반응식 2A에서, R1은 본원에 기재된 바와 같고, R4는 티올, 이황화물, 아민, 케톤, 디케톤, 아지드, 또는 알킨과 반응할 수 있는 반응성 모이어티이다. 반응식 2B는 -링커-R4 모이어티가 아미드 결합에 의해 중간체(int-A2)에 부착되는 화학식 A2의 특정 화합물을 제조하는 데 사용되는 비제한적인 합성 반응식을 나타낸다. 반응식 2B에서, 링커는 말단 카보닐 모이어티(즉, -L'-C(=O))를 갖는 임의의 링커(L')이다. 또한 반응식 2B에서, R1은 본원에 기재된 바와 같고, R4는 아미노기를 갖는 모이어티(예컨대, 하이드록실 아민 또는 아민)이고, RB는 보호된 아미노기를 갖는 모이어티이고, Prot는 Boc, Fmoc, 및 Cbz와 같은 보호기이다.
반응식 2
Figure pct00318
이러한 아미드 결합 형성은 열, EDCI 커플링, HATU 커플링, HBTU 커플링, TBTU 커플링, 또는 T3P 커플링을 사용하여 이루어질 수 있다.
반응식 3A는 -L2-R4 모이어티가 아미드 결합에 의해 중간체(int-A1)에 부착되는 화학식 Ia의 특정 화합물을 제조하는 데 사용되는 비제한적인 합성 반응식을 나타낸다. 이러한 아미드 결합 형성은 열, EDCI 커플링, HATU 커플링, HBTU 커플링, TBTU 커플링, 또는 T3P 커플링을 사용하여 이루어질 수 있다. 반응식 3A에서, 링커(L2)는 말단 카보닐 모이어티(즉, -LA-C(=O))를 갖는 링커 모이어티(LA)를 포함한다. 반응식 3B는 -L2-R4 모이어티가 아미드 결합에 의해 중간체(int-A1)에 부착되는 화학식 I의 특정 화합물을 제조하는 데 사용되는 비제한적인 합성 반응식을 나타낸다. 이러한 아미드 결합 형성은 열, EDCI 커플링, HATU 커플링, HBTU 커플링, TBTU 커플링, 또는 T3P 커플링을 사용하여 이루어질 수 있다. 반응식 3B에서, 링커(L2)는 말단 카보닐 모이어티(즉, -LA-C(=O))를 갖는 링커 모이어티(LA)를 포함하고, RB는 보호된 아미노기를 갖는 모이어티이고, Prot는 Boc, Fmoc, 및 Cbz와 같은 보호기이다.
반응식 3
Figure pct00319
반응식 4A는 -L2-R4 모이어티가 아미드 결합에 의해 중간체(int-A2)에 부착되는 화학식 Ib의 특정 화합물을 제조하는 데 사용되는 비제한적인 합성 반응식을 나타낸다. 이러한 아미드 결합 형성은 열, EDCI 커플링, HATU 커플링, HBTU 커플링, TBTU 커플링, 또는 T3P 커플링을 사용하여 이루어질 수 있다. 반응식 4A에서, 링커(L2)는 말단 카보닐 모이어티(즉, -LA-C(=O))를 갖는 링커 모이어티(LA)를 포함한다. 반응식 4B는 -L2-R4 모이어티가 아미드 결합에 의해 중간체(int-A2)에 부착되는 화학식 Ib의 특정 화합물을 제조하는 데 사용되는 비제한적인 합성 반응식을 나타낸다. 이러한 아미드 결합 형성은 열, EDCI 커플링, HATU 커플링, HBTU 커플링, TBTU 커플링, 또는 T3P 커플링을 사용하여 이루어질 수 있다. 반응식 4B에서, 링커(L2)는 말단 카보닐 모이어티(즉, -LA-C(=O))를 갖는 링커 모이어티(LA)를 포함하고, RB는 보호된 아미노기를 갖는 모이어티이고, Prot는 Boc, Fmoc, 및 Cbz와 같은 보호기이다.
반응식 4
Figure pct00320
반응식 3 및 4에서,
R4는
Figure pct00321
-ONH2, -NH2,
Figure pct00322
-N3,
Figure pct00323
-NHC(=O)CH=CH2, SH, -SSR6, -S(=O)2(CH=CH2), -(CH2)2S(=O)2(CH=CH2), -NHS(=O)2(CH=CH2), -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I, -C(O)NHNH2,
Figure pct00324
-CO2H, -C(O)NHNH2,
Figure pct00325
Figure pct00326
Figure pct00327
Figure pct00328
Figure pct00329
Figure pct00330
Figure pct00331
또는
Figure pct00332
이고;
RB는 -ONH-이고;
LA는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, 또는 -(CH2)nC(=O)NH(CH2)n이고;
L2는 -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, 또는 -C(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n이고;
X1은
Figure pct00333
, 또는
Figure pct00334
이고; X2는
Figure pct00335
, 또는
Figure pct00336
이고; X3은
Figure pct00337
, 또는
Figure pct00338
이고,
R1, R7, R8, R9, 및 R10은 본원에 정의된 바와 같다.
반응식 5는 -링커-R4 모이어티가 중간체(int-A1)의 2차 아민의 알킬화에 의해 중간체(int-A1)에 부착되는 화학식 B1의 특정 화합물을 제조하는 데 사용되는 비제한적인 합성 반응식을 나타낸다. 반응식 5에서, 링커(LA)는 초기에 말단 알데히드(즉, -LA-C(=O)H)로 작용화된 후, 중간체(int-A1)의 2차 아민과 반응한다. 또한 반응식 5에서, R1은 본원에 기재된 바와 같고, R4는 티올, 이황화물, 아민, 케톤, 디케톤, 아지드, 또는 알킨과 반응할 수 있는 반응성 모이어티이다.
반응식 5
Figure pct00339
이러한 N-알킬화는 NaCNBH3, NaBH4, 또는 NaBH(OAC)3과 같은 환원제를 사용하여 이루어질 수 있다.
반응식 6은 -링커-R4 모이어티가 중간체(int-A2)의 2차 아민의 알킬화에 의해 중간체(int-A2)에 부착되는 화학식 B2의 특정 화합물을 제조하는 데 사용되는 비제한적인 합성 반응식을 나타낸다. 반응식 6에서, 링커(LA)는 초기에 말단 알데히드(즉, -LA-C(=O)H)로 작용화된 후, 중간체(int-A2)의 2차 아민과 반응한다. 또한 반응식 6에서, R1은 본원에 기재된 바와 같고, R4는 티올, 이황화물, 아민, 케톤, 디케톤, 아지드, 또는 알킨과 반응할 수 있는 반응성 모이어티이다.
반응식 6
Figure pct00340
이러한 N-알킬화는 NaCNBH3, NaBH4, 또는 NaBH(OAC)3과 같은 환원제를 사용하여 이루어질 수 있다.
반응식 7은 -L2-R4 모이어티가 중간체(int-A1)의 2차 아민의 알킬화에 의해 중간체(int-A1)에 부착되는 화학식 Ia의 특정 화합물을 제조하는 데 사용되는 비제한적인 합성 반응식을 나타낸다. 반응식 7에서, 링커 모이어티 LA는 초기에 말단 알데히드(즉, -L'-C(=O)H)로 작용화된 후, 중간체(int-A1)의 2차 아민과 반응함으로써, 말단 -CH2-기를 갖는 링커 모이어티 LA를 포함하는 링커 L2를 형성한다. 이러한 N-알킬화는 NaCNBH3, NaBH4, 또는 NaBH(OAC)3과 같은 환원제를 사용하여 이루어질 수 있다.
반응식 7
Figure pct00341
반응식 8은 -L2-R4 모이어티가 중간체(int-A2)의 2차 아민의 알킬화에 의해 중간체(int-A2)에 부착되는 화학식 Ib의 특정 화합물을 제조하는 데 사용되는 비제한적인 합성 반응식을 나타낸다. 반응식 8에서, 링커 모이어티(LA)는 초기에 말단 알데히드(즉(L'-C(=O)H)로 작용화되고, 이는 이후 중간체(int- A2)의 2차 아민과 반응함으로써, 말단 -CH2-기를 갖는 링커 모이어티 LA를 포함하는 링커 L2를 형성한다. 이러한 N-알킬화는 NaCNBH3, NaBH4, 또는 NaBH(OAC)3과 같은 환원제를 사용하여 이루어질 수 있다.
반응식 8
Figure pct00342
반응식 7 및 8에서,
R4는 반응식 3 및 4에서 정의된 바와 같고;
LA는 -(CH2)(n-1)-, -((CH2)(n-1)O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)(n-1)X1(CH2)n-, -(CH2)(n-1)NHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)(n-1)NHC(=O(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, 또는 -((CH2)(n-1)O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n이고;
L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, 또는 -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n이고;
X1은
Figure pct00343
, 또는
Figure pct00344
이고;
R1 및 R7은 본원에 정의된 바와 같다.
반응식 9는 -링커-R4 모이어티가 아미드 결합에 의해 중간체(int-A1)에 부착되는 화학식 A1의 특정 화합물을 제조하는 데 사용되는 비제한적인 합성 반응식을 나타낸다. 반응식 9에서, 링커는 말단 카보닐 모이어티(즉, -L'-C(=O))를 갖는 임의의 링커(L')이다. 또한 반응식 9에서, R1은 본원에 기재된 바와 같고, R4는
Figure pct00345
또는
Figure pct00346
이고, RC는
Figure pct00347
또는
Figure pct00348
이다.
반응식 9
Figure pct00349
이러한 아미드 결합 형성은 열, EDCI 커플링, HATU 커플링, HBTU 커플링, TBTU 커플링, 또는 T3P 커플링을 사용하여 이루어질 수 있다.
반응식 10은 -링커-R4 모이어티가 아미드 결합에 의해 중간체(int-A2)에 부착되는 화학식 A2의 특정 화합물을 제조하는 데 사용되는 비제한적인 합성 반응식을 나타낸다. 반응식 10에서, 링커는 말단 카보닐 모이어티(즉, -L'-C(=O))를 갖는 임의의 링커(L')이다. 또한 반응식 10에서, R1은 본원에 기재된 바와 같고, R4는
Figure pct00350
또는
Figure pct00351
이고, RC는
Figure pct00352
또는
Figure pct00353
이다.
반응식 10
Figure pct00354
이러한 아미드 결합 형성은 열, EDCI 커플링, HATU 커플링, HBTU 커플링, TBTU 커플링, 또는 T3P 커플링을 사용하여 이루어질 수 있다.
반응식 11은 -L2-R4 모이어티가 아미드 결합에 의해 중간체(int-A1)에 부착되는 화학식 Ia의 특정 화합물을 제조하는 데 사용되는 비제한적인 합성 반응식을 나타낸다.
반응식 11에서, 링커(L2)는 말단 카보닐 모이어티(즉, -LA-C(=O))를 갖는 링커 모이어티(LA)를 포함한다. 이러한 아미드 결합 형성은 열, EDCI 커플링, HATU 커플링, HBTU 커플링, TBTU 커플링, 또는 T3P 커플링을 사용하여 이루어질 수 있다.
반응식 11
Figure pct00355
반응식 12는 -L2-R4 모이어티가 아미드 결합에 의해 중간체(int-A2)에 부착되는 화학식 Ib의 특정 화합물을 제조하는 데 사용되는 비제한적인 합성 반응식을 나타낸다.
반응식 12에서, 링커(L2)는 말단 카보닐 모이어티(즉, -LA-C(=O))를 갖는 링커 모이어티(LA)를 포함한다. 이러한 아미드 결합 형성은 열, EDCI 커플링, HATU 커플링, HBTU 커플링, TBTU 커플링, 또는 T3P 커플링을 사용하여 이루어질 수 있다.
반응식 12
Figure pct00356
반응식 11 및 12에서,
R4는
Figure pct00357
또는
Figure pct00358
이고;
RC는
Figure pct00359
또는
Figure pct00360
이고;
LA는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, - X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, 또는 -(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-이고;
L2는 -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, 또는 -C(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-이고; X1은
Figure pct00361
, 또는
Figure pct00362
이고; X2는
Figure pct00363
, 또는
Figure pct00364
이고; X3은
Figure pct00365
, 또는
Figure pct00366
이고,
R1 및 R7은 본원에 정의된 바와 같다.
중간체
본 발명의 화학식 I 및 그 하위 화학식(즉, 화학식 Ia 및 화학식 Ib)의 화합물을 제조하는 데 사용되는 중간체의 합성은 아래와 같다.
중간체 1
5-(2-메톡시-4-(피페라진-1-일메틸)벤질)-N4-펜틸-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2,4-디아민(Int-1)의 합성
Figure pct00367
단계 1: 메틸 4-((2-아미노-4-클로로-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤조에이트(3)의 제조
둥근 바닥 플라스크에 4-클로로-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2-아민(1, 시판, 1.0 당량), 메틸 4-(브로모메틸)-3-메톡시벤조에이트(2, 시판, 1.0 당량), 탄산세슘(1.0 당량), 및 DMF(1.0 M)를 채웠다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반한 후, 용매를 진공에서 제거하였다. 생성된 혼합물에 EtOAc를 첨가하고 용매를 진공에서 제거하였다. 이 혼합물에 DCM을 첨가하고 용매를 진공에서 제거하였다. 이어서, 미정제 반응 혼합물을 ISCO 크로마토그래피(0~10% MeOH:DCM, 구배)로 정제하여 메틸 4-((2-아미노-4-클로로-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤조에이트(3)를 고체로서 수득하였다.
단계 2: (4-((2-아미노-4-클로로-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시페닐)메탄올(4)
THF(0.3 M) 중의 수소화알루미늄리튬(LAH)(1.0 당량, 분말)의 슬러리를 둥근 바닥 플라스크에서 제조하고, 0℃로 냉각시키고 15분 동안 격렬하게 교반하였다. 이 혼합물에 메틸 4-((2-아미노-4-클로로-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤조에이트(3, 이전 단계에서 생성된 1.0 당량)를 조금씩 첨가하였다. 빙점조를 제거하고, 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다(반응이 완료될 때까지 추가 LAH를 첨가함). 반응 혼합물에 Et2O를 첨가한 후, 혼합물을 삼각 플라스크에 옮기고, 격렬히 교반하면서 0℃로 냉각시켰다. 이어서, 포화 황산나트륨 용액을 서서히 첨가하여 반응을 ?칭시켰다. 백색 침전물이 얻어졌고, 혼합물을 셀라이트 함유 프릿을 통해 여과하고 THF 및 Et2O로 세척하였다. 이어서, 휘발 성분을 진공에서 제거하고, 이 물질을 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
단계 3: tert-부틸 4-(4-((2-아미노-4-클로로-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카복실레이트(5)
DCM(0.1 M) 중의 (4-((2-아미노-4-클로로-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시페닐)메탄올(4, 단계 2에서 생성된 1.0 당량)을 함유한 둥근 바닥 플라스크에 염화티오닐(10.0 당량)을 0℃에서 첨가하였다. 이어서, 빙점조를 제거하고 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 0℃로 다시 냉각시키고, NaOH(1.0 M, 40.0 당량) 및 포화 NaHCO3(수성)을 첨가하여 서서히 ?칭시켰다. 이 물질을 분액 깔때기에 옮기고 DCM으로 3회 세척하였다. 합한 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 휘발 성분을 진공에서 제거하였다. 이어서, 생성된 미정제 생성물을 둥근 바닥 플라스크에서 DMF(0.1 M)에 용해시키고, 추가 정제 없이 사용하였다. 이 물질에 tert-부틸 피페라진-1-카복실레이트(1.0 당량) 및 Huenig 염기(1.2 당량)를 첨가하고, 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 분액 깔때기에 옮기고, 포화 NaCl(수성)로 2회, 물로 2회 세척하였다. 합한 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 휘발 성분을 진공에서 제거하였다. 미정제 반응 혼합물을 ISCO 크로마토그래피(0~10% MeOH:DCM, 구배)로 정제하여 tert-부틸 4-(4-((2-아미노-4-클로로-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카복실레이트(5)를 고체로서 수득하였다.
단계 4: tert-부틸 4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카복실레이트(7)
둥근 바닥 플라스크에 tert-부틸 4-(4-((2-아미노-4-클로로-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카복실레이트(5, 단계 3에서 생성된 1.0 당량), 시판되는 펜틸아민(6, 3.0 당량), Huenig 염기(5.0 당량), 및 DMSO(0.5 M)를 채웠다. 반응 혼합물을 120℃로 가열하고 18시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 물을 첨가하였다. 이어서, 이 혼합물을 동결시키고, 동결건조에 의해 대부분의 휘발 성분을 제거하였다. 미정제 반응 혼합물을 ISCO 크로마토그래피(0~10% MeOH(0.7 N의 NH3 함유):DCM, 구배)로 정제하여 tert-부틸 4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카복실레이트(7)를 고체로서 수득하였다.
단계 5: 5-(2-메톡시-4-(피페라진-1-일메틸)벤질)-N4-펜틸-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2,4-디아민(Int-1)
둥근 바닥 플라스크 내 DCM(0.1 M) 중의 tert-부틸 4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카복실레이트(6, 단계 4에서 생성된1.0 당량)의 용액에 디옥산 중의 HCl(4.0 M, 20.0 당량)을 0℃에서 첨가하였다. 이어서, 빙점조를 제거하고 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물에 MeOH 중의 NH3(0.7 N)을 첨가하고, 휘발 성분을 진공에서 제거하였다. MeOH 중의 NH3(0.7 N)의 첨가 및 휘발 성분의 진공 제거를 2회 더 반복하였다. 이어서, 미정제 반응 혼합물을 ISCO 크로마토그래피(0~20% MeOH(0.7 N의 NH3 함유):DCM, 구배)로 정제하여 5-(2-메톡시-4-(피페라진-1-일메틸)벤질)-N4-펜틸-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2,4-디아민(Int-1)을 고체로서 수득하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.37 (d, 1H), 7.10 (s, 1H), 6.91 (d, 1H), 6.74 (d, 1H), 6.22 (d, 1H), 5.52 (s, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.61 (s, 2H), 3.54 (t, 2H), 3.35 (s, 3H), 3.22 (m, 4H), 2.69 (m, 4H), 1.51 (m, 2H), 1.30 (m, 2H), 1.18 (m, 2H), 0.89 (s, 3H). LRMS [M+H] = 438.3.
중간체 2
(S)-2-((2-아미노-5-(2-메톡시-5-(피페라진-1-일메틸)벤질)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4-일)아미노)헥산-1-올(Int-2)의 합성
Figure pct00368
단계 1: 에틸 3-((2-아미노-4-클로로-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤조에이트(9)의 제조
둥근 바닥 플라스크에 4-클로로-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2-아민(1, 시판, 1.0 당량), 에틸 3-(브로모메틸)-4-메톡시벤조에이트(8, 시판, 1.0 당량), 탄산세슘(1.0 당량), 및 DMF(1.0 M)를 채웠다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 이어서, 용매를 진공에서 제거하였다. 생성된 혼합물에 EtOAc를 첨가하고 용매를 진공에서 제거하였다. 이 혼합물에 DCM을 첨가하고 용매를 진공에서 제거하였다. 이어서, 미정제 반응 혼합물을 ISCO 크로마토그래피(0~10% MeOH:DCM, 구배)로 정제하여 에틸 3-((2-아미노-4-클로로-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤조에이트(9)를 고체로서 수득하였다.
단계 2: (3-((2-아미노-4-클로로-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시페닐)메탄올(10)
THF(0.3 M) 중의 LAH(1.0 당량, 분말)의 슬러리를 둥근 바닥 플라스크에서 제조하고, 0℃로 냉각시키고 15분 동안 격렬하게 교반하였다. 이 혼합물에 에틸 3-((2-아미노-4-클로로-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤조에이트(9, 단계 1에서 생성된 1.0 당량)를 조금씩 첨가하였다. 이어서, 빙점조를 제거하고 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다(이 시간까지 반응이 완료되지 않은 경우, 반응이 완료될 때까지 추가 LAH를 첨가하고 교반을 계속하였음). 이어서, 반응 혼합물을 Et2O를 사용하여 삼각 플라스크에 옮겼다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고 격렬하게 교반하였다. 이어서, 포화 황산나트륨 용액을 서서히 첨가하여 반응을 ?칭시켰다. 백색 침전물이 얻어졌고, 혼합물을 셀라이트 함유 프릿을 통해 여과하고 THF 및 Et2O로 세척하였다. 이어서, 휘발 성분을 진공에서 제거하고, 이 물질을 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
단계 3: tert-부틸 4-(3-((2-아미노-4-클로로-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-카복실레이트(11)
DCM(0.1 M) 중의 (3-((2-아미노-4-클로로-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시페닐)메탄올(10, 단계 2에서 생성된 1.0 당량)을 함유한 둥근 바닥 플라스크에 염화티오닐(10.0 당량)을 0℃에서 첨가하였다. 이어서, 빙점조를 제거하고 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, NaOH(1.0 M, 40.0 당량) 및 포화 NaHCO3(수성)을 첨가하여 서서히 ?칭시켰다. 이 물질을 분액 깔때기에 옮기고 DCM으로 3회 세척하였다. 합한 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 휘발 성분을 진공에서 제거하였다. 이어서, 생성된 미정제 생성물을 둥근 바닥 플라스크에서 DMF(0.1 M)에 용해시키고, 추가 정제 없이 사용하였다. 이 물질에 tert-부틸 피페라진-1-카복실레이트(1.0 당량) 및 Huenig 염기(1.2 당량)를 첨가하고, 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 분액 깔때기에 옮기고, 포화 NaCl(수성)로 2회, 물로 2회 세척하였다. 합한 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 휘발 성분을 진공에서 제거하였다. 미정제 반응 혼합물을 ISCO 크로마토그래피(0~10% MeOH:DCM, 구배)로 정제하여 tert-부틸 4-(3-((2-아미노-4-클로로-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-카복실레이트(11)를 고체로서 수득하였다.
단계 4: (S)-tert-부틸 4-(3-((2-아미노-4-((1-하이드록시헥산-2-일)아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-카복실레이트(12)
둥근 바닥 플라스크에 tert-부틸 4-(3-((2-아미노-4-클로로-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-카복실레이트(11, 단계 3에서 생성된 1.0 당량), 시판되는 (S)-2-아미노헥산-1-올(3.0 당량), Huenig 염기(5.0 당량), 및 DMSO(0.5 M)를 채웠다. 반응 혼합물을 120℃로 가열하고 18시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 물을 첨가하였다. 이어서, 이 혼합물을 동결시키고, 동결건조에 의해 대부분의 휘발 성분을 제거하였다. 미정제 반응 혼합물을 ISCO 크로마토그래피(0~10% MeOH(0.7 N의 NH3 함유):DCM, 구배)로 정제하여 (S)-tert-부틸 4-(3-((2-아미노-4-((1-하이드록시헥산-2-일)아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-카복실레이트(12)를 고체로서 수득하였다.
단계 5: 예 1- (S)-2-((2-아미노-5-(2-메톡시-5-(피페라진-1-일메틸)벤질)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4-일)아미노)헥산-1-올(Int-2)
둥근 바닥 플라스크 내 DCM(0.1 M) 중의 (S)-tert-부틸 4-(3-((2-아미노-4-((1-하이드록시헥산-2-일)아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-카복실레이트(12, 단계 4에서 생성된1.0 당량)의 용액에 디옥산 중의 HCl(4.0 M, 20.0 당량)을 0℃에서 첨가하였다. 이어서, 빙점조를 제거하고 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물에 MeOH 중의 NH3(0.7 N)을 첨가하고, 휘발 성분을 진공에서 제거하였다. MeOH 중의 NH3(0.7 N)의 첨가 및 휘발 성분의 진공 제거를 2회 더 반복하였다. 이어서, 미정제 반응 혼합물을 ISCO 크로마토그래피(0~20% MeOH(0.7 N의 NH3 함유):DCM, 구배)로 정제하여 (S)-2-((2-아미노-5-(2-메톡시-5-(피페라진-1-일메틸)벤질)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4-일)아미노)헥산-1-올(Int-2)을 고체로서 수득하였다. 1H (CD3OD): δ 7.50 (d, 1H), 7.29 (d, 1H), 7.09 (d, 1H), 6.63 (s, 1H), 6.29 (d, 1H), 5.69 (d, 1H), 5.40 (d, 1H), 4.34 (m, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.51 (m, 2H), 3.42 (s, 2H), 3.12 (m, 4H), 2.56 (m, 2H), 1.48 (m, 1H), 1.21 (m, 3H), 0.96 (m, 2H), 0.83 (t, 3H). LRMS [M+H] = 468.3.
중간체 3
5-(2-메톡시-5-(피페라진-1-일메틸)벤질)-N4-펜틸-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2,4-디아민(Int-3)의 합성
Figure pct00369
단계 4에서 (S)-2-아미노헥산-1-올 대신 시판 N-펜틸아민을 사용한 것을 제외하고는, (S)-2-((2-아미노-5-(2-메톡시-5-(피페라진-1-일메틸)벤질)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4-일)아미노)헥산-1-올(Int-2)의 합성에 따라 5-(2-메톡시-5-(피페라진-1-일메틸)벤질)-N4-펜틸-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2,4-디아민(Int-3)을 제조하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.42 (d, 1H), 7.32 (d, 1H), 7.09 (d, 1H), 6.70 (s, 1H), 6.25 (d, 1H), 5.54 (d, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.52 (t, 2H), 3.46 (s, 2H), 3.14 (m, 4H), 2.60 (m, 4H), 1.48 (m, 2H), 1.30 (m, 2H), 1.13 (m, 2H), 0.88 (t, 3H). LRMS [M+H] = 438.3.
본 발명의 항체 접합체
본 발명의 항체 접합체는 TLR7 작용제를 포함하고 화학식 II의 구조를 갖는다.
[화학식 II]
Figure pct00370
식 중,
R50은
Figure pct00371
또는
Figure pct00372
이고, *는 Ab에 대한 부착점을 나타내고;
Ab는 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
R1은 -NHR2 또는 -NHCHR2R3이고;
R2는 -C3-C6알킬 또는 -C4-C6알킬이고;
R3은 L1OH이고;
L1은 -(CH2)m-이고;
L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)(CH2)nC(R7)2-, -C(=O)(CH2)nC(R7)2SS(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nX2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, 또는 -C(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n이고;
R40은
Figure pct00373
-S-, -NHC(=O)CH2-, -S(=O)2CH2CH2-, -(CH2)2S(=O)2CH2CH2-, -NHS(=O)2CH2CH2, -NHC(=O)CH2CH2-, -CH2NHCH2CH2-, -NHCH2CH2-,
Figure pct00374
Figure pct00375
Figure pct00376
Figure pct00377
Figure pct00378
Figure pct00379
Figure pct00380
Figure pct00381
또는
Figure pct00382
이고;
X1은
Figure pct00383
, 또는
Figure pct00384
이고;
X2는
Figure pct00385
, 또는
Figure pct00386
이고;
X3은
Figure pct00387
Figure pct00388
, 또는
Figure pct00389
이고;
각각의 R7은 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R8은 H, C1-C6알킬, F, Cl, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R9는 H, C1-C6알킬, F, Cl, -NH2, -OCH3, -OCH2CH3, -N(CH3)2, -CN, -NO2, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R10은 H, C1-6알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1-4알콕시, 및 -C(=O)OH로 치환된 C1-4알킬로부터 독립적으로 선택되고;
R12는 H, 메틸, 또는 페닐이고;
각각의 m은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및 18로부터 독립적으로 선택되고;
y는 1 내지 16의 정수이다.
본 발명의 화합물의 특정 양태 및 예가 하기 추가의 열거된 구현예의 목록에 제공된다. 각 구현예에 명시된 특징은 다른 명시된 특징과 조합되어 본 발명의 추가적인 구현예를 제공할 수 있는 있음이 인식될 것이다.
구현예 58. 화학식 II의 항체 접합체.
(식 중,
R50은
Figure pct00390
또는
Figure pct00391
이고, *는 Ab에 대한 부착점을 나타내고;
Ab는 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
R1은 -NHR2 또는 -NHCHR2R3이고;
R2는 -C3-C6알킬 또는 -C4-C6알킬이고;
R3은 L1OH이고;
L1은 -(CH2)m-이고;
L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, 또는 -C(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n이고;
R40은
Figure pct00392
Figure pct00393
, -S-, -NHC(=O)CH2-, -S(=O)2CH2CH2-, -(CH2)2S(=O)2CH2CH2-, -NHS(=O)2CH2CH2, -NHC(=O)CH2CH2-, -CH2NHCH2CH2-, -NHCH2CH2-,
Figure pct00394
Figure pct00395
Figure pct00396
Figure pct00397
Figure pct00398
또는
Figure pct00399
이고;
X1은
Figure pct00400
, 또는
Figure pct00401
이고;
X2는
Figure pct00402
, 또는
Figure pct00403
이고;
X3은
Figure pct00404
, 또는
Figure pct00405
이고;
각각의 R7은 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R8은 H, C1-C6알킬, F, Cl, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R9는 H, C1-C6알킬, F, Cl, -NH2, -OCH3, -OCH2CH3, -N(CH3)2, -CN, -NO2, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R10은 H, C1-6알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1-4알콕시, 및 -C(=O)OH로 치환된 C1-4알킬로부터 독립적으로 선택되고;
R12는 H, 메틸, 또는 페닐이고;
각각의 m은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및 18로부터 독립적으로 선택되고;
y는 1 내지 16의 정수임)
구현예 59. 화학식 IIa 또는 화학식 IIb의 구조를 갖는 화학식 II의 항체 접합체, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
[화학식 IIa] [화학식 IIb]
Figure pct00406
Figure pct00407
(식 중,
Ab는 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
R1은 -NHR2 또는 -NHCHR2R3이고;
R2는 -C3-C6알킬 또는 -C4-C6알킬이고;
R3은 L1OH이고;
L1은 -(CH2)m-이고;
L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)(CH2)nC(R7)2-, -C(=O)(CH2)nC(R7)2SS(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nX2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, 또는 -C(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n이고;
R40은
Figure pct00408
-S-, -NHC(=O)CH2-, -S(=O)2CH2CH2-, -(CH2)2S(=O)2CH2CH2-, -NHS(=O)2CH2CH2, -NHC(=O)CH2CH2-, -CH2NHCH2CH2-, -NHCH2CH2-,
Figure pct00409
Figure pct00410
Figure pct00411
Figure pct00412
Figure pct00413
Figure pct00414
Figure pct00415
Figure pct00416
또는
Figure pct00417
이고;
X1은
Figure pct00418
, 또는
Figure pct00419
이고;
X2는
Figure pct00420
, 또는
Figure pct00421
이고;
X3은
Figure pct00422
Figure pct00423
, 또는
Figure pct00424
이고;
각각의 R7은 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R8은 H, C1-C6알킬, F, Cl, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R9는 H, C1-C6알킬, F, Cl, -NH2, -OCH3, -OCH2CH3, -N(CH3)2, -CN, -NO2, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R10은 H, C1-6알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1-4알콕시, 및 -C(=O)OH로 치환된 C1-4알킬로부터 독립적으로 선택되고;
R12는 H, 메틸, 또는 페닐이고;
각각의 m은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및 18로부터 독립적으로 선택되고;
y는 1 내지 16의 정수임)
구현예 60. 화학식 IIa 또는 화학식 IIb의 항체 접합체, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
(식 중,
Ab는 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
R1은 -NHR2 또는 -NHCHR2R3이고;
R2는 -C3-C6알킬 또는 -C4-C6알킬이고;
R3은 L1OH이고;
L1은 -(CH2)m-이고;
L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, 또는 -C(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n이고;
R40은
Figure pct00425
-S-, -NHC(=O)CH2-, -S(=O)2CH2CH2-, -(CH2)2S(=O)2CH2CH2-, -NHS(=O)2CH2CH2, -NHC(=O)CH2CH2-, -CH2NHCH2CH2-, -NHCH2CH2-,
Figure pct00426
Figure pct00427
Figure pct00428
Figure pct00429
Figure pct00430
Figure pct00431
Figure pct00432
Figure pct00433
또는
Figure pct00434
이고;
X1은
Figure pct00435
, 또는
Figure pct00436
이고;
X2는
Figure pct00437
, 또는
Figure pct00438
이고;
X3은
Figure pct00439
, 또는
Figure pct00440
이고;
각각의 R7은 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R8은 H, C1-C6알킬, F, Cl, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R9는 H, C1-C6알킬, F, Cl, -NH2, -OCH3, -OCH2CH3, -N(CH3)2, -CN, -NO2, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R10은 H, C1-6알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1-4알콕시, 및 -C(=O)OH로 치환된 C1-4알킬로부터 독립적으로 선택되고;
R12는 H, 메틸, 또는 페닐이고;
각각의 m은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및 18로부터 독립적으로 선택되고;
y는 1 내지 16의 정수임)
구현예 61. 화학식 IIa 또는 화학식 IIb의 구조를 갖는 화학식 II의 항체 접합체, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
[화학식 IIa] [화학식 IIb]
Figure pct00441
Figure pct00442
(식 중,
Ab는 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
R1은 -NHR2 또는 -NHCHR2R3이고;
R2는 -C3-C6알킬 또는 -C4-C6알킬이고;
R3은 L1OH이고;
L1은 -(CH2)m-이고;
L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, 또는 -C(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n이고;
R40은
Figure pct00443
또는 -S-이고;
X1은
Figure pct00444
, 또는
Figure pct00445
이고;
X2는
Figure pct00446
, 또는
Figure pct00447
이고;
X3은
Figure pct00448
, 또는
Figure pct00449
이고;
각각의 R7은 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 m은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및 18로부터 독립적으로 선택되고;
y는 1 내지 16의 정수임)
구현예 62. 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
(식 중,
Ab는 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
R1은 -NHR2 또는 -NHCHR2R3이고;
R2는 -C4-C6알킬이고;
R3은 L1OH이고;
L1은 -(CH2)m-이고;
L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, 또는 -C(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n이고;
R40은
Figure pct00450
, 또는
Figure pct00451
이고;
X1은
Figure pct00452
이고; X2는
Figure pct00453
또는
Figure pct00454
이고; X3은
Figure pct00455
이고;
각각의 m은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및 18로부터 독립적으로 선택되고;
y는 1 내지 16의 정수임)
구현예 63. 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
(식 중,
Ab는 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
R1은 -NHR2이고;
R2는 -C4-C6알킬이고;
L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, 또는 -C(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n이고;
R40은
Figure pct00456
, 또는
Figure pct00457
이고;
X1은
Figure pct00458
이고; X2는
Figure pct00459
또는
Figure pct00460
이고; X3은
Figure pct00461
이고;
각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및 18로부터 독립적으로 선택되고;
y는 1 내지 16의 정수임)
구현예 64. 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
(식 중,
Ab는 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
R1은 -NHR2이고;
R2는 -C4-C6알킬이고;
L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, 또는 -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-이고;
R40은
Figure pct00462
, 또는
Figure pct00463
이고;
X1은
Figure pct00464
이고; X2는
Figure pct00465
또는
Figure pct00466
이고; X3은
Figure pct00467
이고;
각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및 18로부터 독립적으로 선택되고;
y는 1 내지 16의 정수임)
구현예 65. 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
(식 중,
Ab는 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
R1은 -NHR2이고;
R2는 -C4-C6알킬이고;
L2는 -(CH2)n- 또는 -C(=O)(CH2)n이고;
R40은
Figure pct00468
, 또는
Figure pct00469
이고;
각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
y는 1 내지 16의 정수임)
구현예 66. 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
(식 중,
Ab는 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
R1은 -NHR2이고;
R2는 -C4-C6알킬이고;
L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, 또는 -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-이고;
R40은
Figure pct00470
이고;
X1은
Figure pct00471
이고; X2는
Figure pct00472
또는
Figure pct00473
이고; X3은
Figure pct00474
이고;
각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및 18로부터 독립적으로 선택되고;
y는 1 내지 16의 정수임)
구현예 67. R1이 -NHR2인 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
구현예 68. R1이 -NHCHR2R3인 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
구현예 69. R2가 -C4알킬인 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
구현예 70. R2가 -C5알킬인 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
구현예 71. R2가 -C6알킬인 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
구현예 72. R3이 L1OH인 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
구현예 73. L1이 -(CH2)-인 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
구현예 74. L1이 -(CH2CH2)-인 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
구현예 75. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
(식 중,
L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n임)
구현예 76. 화학식 I, 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 화합물.
(식 중,
L2는 -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, 또는 -C(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-임)
구현예 77. 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
(식 중, L2는 -(CH2)n- 또는 -C(=O)(CH2)n-임)
구현예 78. 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
(식 중, L2는 -C(=O)X2X3C(=O)(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)(CH2)nC(R7)2-, -C(=O)(CH2)nC(R7)2SS(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, 또는 -(CH2)nX2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-임)
구현예 79. 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
(식 중,
R40은
Figure pct00475
또는 -S-임)
구현예 80. 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
(식 중, R40은
Figure pct00476
, 또는
Figure pct00477
임)
구현예 81. 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
(식 중, R40은
Figure pct00478
임)
구현예 82. 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
(식 중, R40은
Figure pct00479
, 또는 -S-임)
구현예 83. 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
(식 중, R40은
Figure pct00480
임)
구현예 84. 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
(식 중, R40은
Figure pct00481
임)
구현예 85. 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
(식 중, R40은
Figure pct00482
Figure pct00483
Figure pct00484
, 또는
Figure pct00485
임)
구현예 86. 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
(식 중, X1은
Figure pct00486
, 또는
Figure pct00487
임)
구현예 87. 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
(식 중, X1은
Figure pct00488
또는
Figure pct00489
임)
구현예 88. 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
(식 중, X1은
Figure pct00490
임)
구현예 89. 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
(식 중, X2는
Figure pct00491
, 또는
Figure pct00492
임)
구현예 90. 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
(식 중, X2는
Figure pct00493
또는
Figure pct00494
임)
구현예 91. 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
(식 중, X2는
Figure pct00495
임)
구현예 92. 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
(식 중, X2는
Figure pct00496
임)
구현예 93. 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
(식 중, X2는
Figure pct00497
임)
구현예 94. 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
(식 중, X3는
Figure pct00498
, 또는
Figure pct00499
임)
구현예 95. 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
(식 중, X3은
Figure pct00500
임)
구현예 96. 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
(식 중, X3은
Figure pct00501
임)
구현예 97. 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
(식 중, X3은
Figure pct00502
임)
구현예 98. 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
(식 중, X3은
Figure pct00503
임)
구현예 99. 각각의 m이 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되는 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
구현예 100. 각각의 m이 1 또는 2인 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
구현예 101. 각각의 n이 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되는 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
구현예 102. 각각의 n이 2 또는 3인 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
구현예 103. 각각의 t가 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및 18로부터 독립적으로 선택되는 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
구현예 104. 각각의 t가 1, 2, 3, 4, 5, 및 6으로부터 독립적으로 선택되는 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
구현예 105. y가 1 내지 16의 정수인 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
구현예 106. y가 1 내지 8의 정수인 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
구현예 107. y가 1 내지 4의 정수인 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체.
구현예 108. 다음으로부터 선택되는 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체:
Figure pct00504
Figure pct00505
Figure pct00506
Figure pct00507
Figure pct00508
Figure pct00509
(식 중, y는 1 내지 4의 정수이고, Ab는 항-HER2 항체 또는 이의 항원 결합 단편임)
구현예 109. 다음으로부터 선택되는 화학식 II, 화학식 IIa, 또는 화학식 IIb의 항체 접합체:
Figure pct00510
Figure pct00511
Figure pct00512
및
Figure pct00513
본 발명의 항체 접합체를 평가하기 위한 분석 방법론의 일부 양태에 대한 프로토콜이 또한 제공된다. 이러한 분석 방법론 및 결과는 접합체가 유리한 특성, 예를 들어 제조 용이성, 환자에 대한 투여 용이성, 효능, 및/또는 환자에 대한 잠재적 안정성이 더 우수하다는 점을 입증할 수 있다. 일례는, 샘플에 존재하는 고분자량의 오염물(예를 들어, 이량체, 다량체, 또는 응집된 항체) 또는 저분자량의 오염물(예를 들어, 항체 단편, 분해 산물, 또는 개별 항체 쇄)의 양과 비교하여 샘플 내의 목적하는 항체 종의 양이 측정되는 크기 배제 크로마토그래피(SEC)에 의한 분자 크기의 측정이다. 일반적으로, 예를 들어 항체 샘플의 다른 특성, 예컨대 이에 한정되는 것은 아니지만, 제거율, 면역원성, 및 독성에 미치는 응집체의 영향으로 인해, 더 많은 양의 단량체 및 더 적은 양의, 예를 들어 응집된 항체를 갖는 것이 바람직하다. 다른 예는, 특성이 알려져 있는 표준 항체 세트와 비교하여 샘플의 소수성이 평가되는 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC)에 의한 소수성의 측정이다. 일반적으로, 항체 샘플의 다른 특성, 예컨대 이에 한정되는 것은 아니지만, 응집, 시간 경과에 따른 응집, 표면에 대한 부착, 간독성, 제거율, 및 약동학적 노출에 미치는 소수성의 영향으로 인해, 더 낮은 소수성을 갖는 것이 바람직하다. 문헌[Damle, N.K., Nat Biotechnol. 2008; 26(8):884-885; Singh, S.K., Pharm Res. 2015; 32(11):3541-71] 참조. 소수성 상호작용 크로마토그래피로 측정할 때, 더 높은 소수성 지수 점수(즉, HIC 컬럼으로부터의 더 빠른 용리)는 접합체의 더 낮은 소수성을 반영한다. 실시예 70 및 표 3에 나타낸 바와 같이, 시험된 항체 접합체 대부분은 0.8보다 큰 소수성 지수를 나타내었다. 일부 구현예에서, 소수성 상호작용 크로마토그래피로 측정시 0.8 이상의 소수성 지수를 갖는 항체 접합체가 제공된다.
항-HER2 항체
본원에 제공된 항체 접합체는 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)(항-HER2 항체)을 포함한다. HER2 과발현은 위암, 식도암, 대장암, 직장암, 유방암, 난소암, 자궁경부암, 자궁암, 자궁내막암, 방광암, 췌장암, 폐암, 전립선암, 골육종, 신경모세포종, 또는 두경부암 등의 많은 유형의 암에서 관찰된다. 항-HER2 항체를 포함하는 항체 접합체는 HER2-양성 암 또는 종양에 특이적으로 표적화될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 접합체는 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 단클론 항체 또는 이의 항체 단편, 예를 들어 인간 또는 인간화 항-HER2 단클론 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항체 단편은 트라스투주맙, 퍼투주맙, 마르게툭시맙, 또는 HT-19, 또는 이들의 항체 단편 또는 이들의 부위-특이적 시스테인 돌연변이로부터 선택될 수 있다.
트라스투주맙(상표명 Herceptin 또는 Herclon)은 HER2 수용체의 세포외 도메인의 막근접 부분에 결합하는 인간화 단클론 항체이다(Hudis CA, N Engl J Med. 2007; 357(1):39-51). 트라스투주맙 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 미국 특허 5,821,337호에 기재되어 있다. 트라스투주맙은 인간 HER2의 잔기 557~561, 570~573, 및 593~603에 의해 형성된 3개의 루프 영역과 상호작용한다(Cho et al., Nature 421: 756-760, 2003). 트라스투주맙은 HER2-수용체 이량체화의 방지, HER2 수용체의 세포내이입 파괴의 촉진, 세포외 도메인의 분계 억제에 의해 HER2 신호전달을 방해할 수 있다(Hudis CA, N Engl J Med. 2007; 357(1):39-51). 항-HER2 항체의 다른 중요한 작용 기전은 항체 의존성 세포 독성(ADCC)의 매개이다. ADCC에서, 항-HER2 항체는 종양 세포에 결합한 후, Fcγ 수용체(FcγR) 상호작용을 통해 대식세포와 같은 면역 세포를 모집한다. 트라스투주맙은 보존된 인간 IgG Fc 영역을 가지며, 항체-의존성 세포독성을 담당하는 면역 이펙터 세포를 모집할 수 있다(Hudis CA, N Engl J Med. 2007; 357(1):39-51). 트라스투주맙은, HER2 과발현 종양이 있고 전이성 질환에 대해 하나 이상의 화학요법을 받은 환자의 전이성 유방암 치료에 대해 1998년 9월에 미국 FDA 승인을 받았다.
퍼투주맙(2C4, Omnitarg, Perjeta라고도 함)은, HER2 수용체의 세포외 도메인에 결합하고 다른 HER 수용체로 HER2의 이량체화를 억제하는 인간화 단클론 항체이다. 퍼투주맙 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열은 미국 특허 7,560,111호에 기재되어 있다. 퍼투주맙은 주로 인간 HER2의 영역 245~333 내의 잔기, 특히 잔기 His 245, Val 286, Ser 288, Leu 295, His 296, 또는 Lys 311과 상호작용한다(Franklin et al., Cancer Cell 5: 317-328, 2004). 퍼투주맙은 유방암 및 전립선암 세포주에서의 HER1-HER2 및 HER3-HER2 복합체의 형성을 방해함에 있어 트라스투주맙보다 더 효과적인 것으로 나타났다(Agus et al., J Clin Oncol. 2005; 23(11):2534-43. Epub Feb 7, 2005). 퍼투주맙은 온전한 Fc 영역이 활성에 필요하지 않기 때문에 효능에 대한 항체-의존성 세포 독성을 필요로 하지 않는다(Agus et al., J Clin Oncol. 2005; 23(11):2534-43. Epub Feb 7, 2005). 퍼투주맙은 전이성 질환에 대해 항-HER2 요법 또는 화학요법을 받지 않은 HER2-양성 전이성 유방암 환자의 치료를 위한 트라스투주맙 및 도세탁셀과의 병용에 대해 2012년 6월 미국 FDA 승인을 받았다.
마르게툭시맙(MGAH22라고도 함)은 또 다른 항-HER2 단클론 항체이다(http://www.macrogenics.com/products-margetuximab.html 참조). 마르게툭시맙의 Fc 영역은 활성화 FcγR에 대한 결합은 증가되지만 면역 이펙터 세포 상의 억제성 FcγR에 대한 결합은 감소되도록 최적화되었다. 마르게툭시맙은 현재, 면역조직화학에 의해 2+ 수준으로 HER2를 발현하고 FISH에 의한 HER2 유전자 증폭의 증거가 부족한 종양이 있는 재발성 또는 난치성 진행 유방암 환자의 치료를 위한 임상 시험 중에 있다.
HT-19는 트라스투주맙 또는 퍼투주맙의 에피토프와는 다른 인간 HER2의 에피토프에 결합하는 또 다른 항-HER2 단클론 항체이며, 트라스투주맙에 비해 HER2 신호전달을 억제하고 트라스투주맙 및 퍼투주맙과 조합하여 HER2 분해를 향상시키는 것으로 나타났다(Bergstrom D. A. et al., Cancer Res. 2015; 75:LB-231).
다른 적합한 항-HER2 단클론 항체는 미국 특허 번호 9,096,877; 9,017,671; 8,975,382; 8,974,785; 8,968,730; 8,937,159; 8,840,896; 8,802,093; 8,753,829; 8,741,586; 8,722,362; 8,697,071; 8,652,474; 8,652,466; 8,609,095; 8,512,967; 8,349,585; 8,241,630; 8,217,147; 8,192,737; 7,879,325; 7,850,966; 7,560,111; 7,435,797; 7,306,801; 6,399,063; 6,387,371; 6,165,464; 5,772,997; 5,770,195; 5,725,856; 5,720,954; 5,677,171에 기재된 항-HER2 항체를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
일부 구현예에서, 항-HER2 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 표 1에 기재된 임의의 VH 도메인의 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인을 포함한다. 다른 적합한 항-HER2 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은, 돌연변이되었으나, 표 1에 기재된 서열에 표시된 VH 영역과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 또는 99%의 VH 도메인 동일성을 갖는 아미노산을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 본 발명은 HER2에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)을 또한 제공하며, 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 표 1에 열거된 VH CDR 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR을 포함한다. 특정 구현예에서, 본 발명은 표 1에 열거된 VH CDR 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 이상의 VH CDR을 포함하는(또는 대안적으로, 이들로 이루어진) HER2에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)을 제공한다.
일부 구현예에서, 항-HER2 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 표 1에 기재된 임의의 VL 도메인의 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인을 포함한다. 다른 적합한 항-HER2 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은, 돌연변이되었으나, 표 1에 기재된 서열에 표시된 VL 영역과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 또는 99%의 VL 도메인 동일성을 갖는 아미노산을 포함할 수 있다. 본 발명은 HER2에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)을 또한 제공하며, 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 표 1에 열거된 VL CDR 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR을 포함한다. 특히, 본 발명은 표 1에 열거된 VL CDR 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 1개, 2개, 3개 이상의 VL CDR을 포함하는(또는 대안적으로, 이들로 이루어진) HER2에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)을 제공한다.
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본원에 개시된 다른 항-HER2 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은, 돌연변이되었으나, 표 1에 기재된 서열에 표시된 CDR 영역과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 또는 99%의 CDR 영역 동일성을 갖는 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 이는 표 1에 기재된 서열에서 표시된 CDR 영역과 비교할 때, CDR 영역에 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 이하의 아미노산이 돌연변이된, 돌연변이 아미노산 서열들을 포함한다.
HER2에 특이적으로 결합하는 항체 및 이의 항원 결합 단편의 VH, VL, 전장 중쇄, 및 전장 경쇄를 암호화하는 핵산 서열, 예를 들어 표 1의 핵산 서열이 본원에 또한 제공된다. 이러한 핵산 서열은 포유동물 세포에서의 발현을 위해 최적화될 수 있다.
본원에 개시된 다른 항-HER2 항체는, 아미노산 또는 아미노산을 암호화하는 핵산이 돌연변이되었으나, 표 1에 기재된 서열과 적어도 80, 85, 90 95, 96, 97, 98, 또는 99%의 동일성을 갖는 것들을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 표 1에 기재된 서열에 표시된 가변 영역과 비교할 때 1개, 2개, 3개, 4개, 또는 5개 이하의 아미노산이 가변 영역에서 돌연변이되었지만 실질적으로 동일한 치료 활성을 보유하는 돌연변이 아미노산 서열을 포함한다.
제공된 각각의 항체는 HER2에 결합하므로, VH, VH, 전장 경쇄, 및 전장 중쇄 서열(아미노산 서열 및 아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오티드 서열)은 "혼합 및 매칭"되어, 본원에 개시된 다른 HER2-결합 항체를 생성할 수 있다. 이러한 "혼합 및 매칭된" HER2-결합 항체는 당해 분야에 알려진 결합 검정법(예를 들어, ELISA, 실시예에 기재된 검정법)을 이용하여 시험될 수 있다. 쇄가 혼합 및 매칭되는 경우, 특정 VH/VL 쌍으로부터의 VH 서열은 구조적으로 유사한 VH 서열로 대체되어야 한다. 특정 전장 중쇄/전장 경쇄 쌍 형성으로부터의 전장 중쇄 서열은 구조적으로 유사한 전장 중쇄 서열로 대체되어야 한다. 특정 VH/VL 쌍으로부터의 VL 서열은 구조적으로 유사한 VL 서열로 대체되어야 한다. 특정 전장 중쇄/전장 경쇄 쌍 형성으로부터의 전장 경쇄 서열은 구조적으로 유사한 전장 경쇄 서열로 대체되어야 한다.
따라서, 일 구현예에서, 본 발명은 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 영역을 제공하며, 항체는 HER2에 특이적으로 결합한다. 다른 구현예에서, 본 발명은 (i) 서열번호 9, 21, 23, 30, 또는 32 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 전장 중쇄; 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 전장 경쇄를 갖는 단리된 단클론 항체, 또는 (ii) 이의 항원 결합 부분을 포함하는 기능성 단백질을 제공한다.
다른 구현예에서, 본 발명은 표 1에 기재된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 또는 이들의 조합을 포함하는 HER2-결합 항체를 제공한다. 항체의 VH CDR1의 아미노산 서열은 서열번호 1, 4, 및 6에 나타나 있다. 항체의 VH CDR2의 아미노산 서열은 서열번호 2 및 5에 나타나 있다. 항체의 VH CDR3의 아미노산 서열은 서열번호 3에 나타나 있다. 항체의 VL CDR1의 아미노산 서열은 서열번호 11 및 14에 나타나 있다. 항체의 VL CDR2의 아미노산 서열은 서열번호 12 및 15에 나타나 있다. 항체의 VL CDR3의 아미노산 서열은 서열번호 13 및 16에 나타나 있다.
각각의 항체가 HER2와 결합하고 항원-결합 특이성이 주로 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역에 의해 제공됨을 고려하면, VH CDR1, CDR2 및 CDR3 서열과 VL CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 "혼합 및 매칭"될 수 있다(즉, 상이한 항체들로부터의 CDR들은, 각각의 항체가 본원에 개시된 다른 HER2-결합 분자를 생성하기 위해 VH CDR1, CDR2 및 CDR3과 VL CDR1, CDR2 및 CDR3을 함유해야 하지만, 혼합 및 매칭될 수 있음). 이러한 "혼합 및 매칭된" HER2-결합 항체는 당해 분야에 알려진 결합 검정법 및 실시예에 기재된 검정법(예를 들어, ELISA)을 이용해 시험될 수 있다. VH CDR 서열들이 혼합 및 매칭되는 경우, 특정 VH 서열로부터의 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열은 구조적으로 유사한 CDR 서열(들)로 대체되어야 한다. 마찬가지로, VL CDR 서열들이 혼합 및 매칭되는 경우, 특정 VL 서열로부터의 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열은 구조적으로 유사한 CDR 서열(들)로 대체되어야 한다. 본 발명의 단클론 항체에 대해 하나 이상의 VH 및/또는 VL CDR 영역 서열을 본원에 제시된 CDR 서열로부터의 구조적으로 유사한 서열로 치환함으로써 새로운 VH 및 VL 서열이 생성될 수 있음은 당업자에게 명백할 것이다.
따라서, 본 발명은 서열번호 1, 4, 및 6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1; 서열번호 2 및 5로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2; 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3; 서열번호 11 및 14로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1; 서열번호 12 및 15로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2; 및 서열번호 13 및 16으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 영역을 제공하며, 항체는 HER2에 특이적으로 결합한다.
특정 구현예에서, HER2에 특이적으로 결합하는 항체는 표 1에 기재된 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)이다.
일부 구현예에서, 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1); 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(HCDR2); 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(HCDR3); 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1); 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(LCDR2); 및 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(LCDR3)을 포함한다.
일부 구현예에서, 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 구현예에서, 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 구현예에서, 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 구현예에서, 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 구현예에서, 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 인간 HER2의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 인간 HER2의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)을 제공하며, 에피토프는 서열번호 26의 잔기 557~561, 570~573, 및 593~603 중 하나 이상을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 인간 HER2의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)을 제공하며, 에피토프는 서열번호 26의 잔기 245~333 중 하나 이상을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 인간 HER2의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)을 제공하며, 에피토프는 다음 잔기 중 하나 이상을 포함한다: 서열번호 26의 His 245, Val 286, Ser 288, Leu 295, His 296, 또는 Lys 311.
항원 상의 목적하는 에피토프가 일단 결정되면, 예를 들어 본 발명에 기재된 기술을 이용해 해당 에피토프에 대한 항체를 생성할 수 있다. 대안적으로, 발견 과정 중에, 항체의 생성 및 특성화는 바람직한 에피토프에 대한 정보를 밝힐 수 있다. 이후 이 정보로부터, 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 경쟁적으로 스크리닝할 수 있다. 이를 달성하기 위한 접근법은, 교차-경쟁 연구를 수행하여 서로 경쟁적으로 결합하는 항체, 예를 들어 항원에 결합하기 위해 경쟁하는 항체를 찾는 것이다. 교차 경쟁을 기반으로 항체를 "비닝(binning)"하는 고처리량 방법은 국제 특허 출원 WO 2003/48731호에 기술되어 있다. 당업자가 알 수 있는 바와 같이, 실제로 항체가 특이적으로 결합할 수 있는 어떠한 것도 에피토프일 수 있다. 에피토프는 항체가 결합하는 잔기를 포함할 수 있다.
프레임워크 또는 Fc 영역의 변형
본원에 개시된 항체 및 항체 접합체는, 예를 들어 항체/항체 접합체의 특성을 향상시키기 위해 VH 및/또는 VL 내에 프레임워크 잔기에 대한 변형을 포함하는 변형된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 프레임워크 변형은 항체의 면역원성을 감소시키기 위해 이루어진다. 예를 들어, 하나의 접근법은 1개 이상의 프레임워크 잔기를 상응하는 생식계열 서열로 "역-돌연변이"시키는 것이다. 이러한 잔기는 항체 프레임워크 서열을 항체가 유래된 생식계열 서열과 비교함으로써 확인될 수 있다. 프레임워크 영역 서열을 목적하는 생식계열 배열에 "매칭"시키기 위해, 잔기는 예를 들어 부위-특이적 돌연변이 유도에 의해 상응하는 생식계열 서열로 "역-돌연변이"될 수 있다. 이러한 "역-돌연변이된" 항체도 본 발명에 포함되는 것이다.
또 다른 유형의 프레임워크 변형은 프레임워크 영역 내 또는 심지어 하나 이상의 CDR 영역 내의 하나 이상의 잔기를 돌연변이시켜 T-세포 에피토프를 제거함으로써 항체의 잠재적인 면역원성을 감소시키는 것을 수반한다. 이 접근법은 "탈면역화"라고도 하며, Carr 등의 미국 특허 공개 20030153043호에 더 상세히 기술되어 있다.
프레임워크 또는 CDR 영역 내에서 이루어진 변형 외에 또는 이에 대한 대안으로, 본원에 개시된 항체는 일반적으로 항체의 하나 이상의 기능적 특성, 예컨대 혈청 반감기, 보체 고정, Fc 수용체 결합, 및/또는 항원-의존성 세포 독성을 변경시키기 위해 Fc 영역 내에 변형을 포함하도록 조작될 수 있다.
또한, 본원에 개시된 항체는 항체의 하나 이상의 기능적 특성을 다시 변경시키기 위해, 화학적으로 변형되거나(예를 들어, 하나 이상의 화학 모이어티가 항체에 부착될 수 있음) 항체의 글리코실화를 변경하도록 변형될 수 있다. 이러한 구현예 각각을 이하 더 상세히 기술한다.
일 구현예에서, CH1의 힌지 영역은 힌지 영역 내의 시스테인 잔기의 수가 변경(예를 들어 증가 또는 감소)되도록 변형된다. 이 접근법은 Bodmer 등에 의한 미국 특허 5,677,425호에 더 기술되어 있다. CH1의 힌지 영역 내의 시스테인 잔기의 수는, 예를 들어 경쇄 및 중쇄의 어셈블리를 용이하게 하거나 항체의 안정성을 증가 또는 감소시키도록 변경된다.
일부 구현예에서, 본원에 개시된 항체 접합체에 유용한 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 변형되거나 조작된 항체, 예컨대 약물 모이어티에 대한 접합 부위로서 하나 이상의 시스테인 잔기를 도입하도록 변형된 항체를 포함한다(Junutula JR, et al.: Nat Biotechnol 2008, 26:925-932). 일 구현예에서, 본 발명은 본원에 기재된 위치에 1개 이상의 아미노산의 시스테인으로의 치환을 포함하는 변형된 항체 또는 이의 항체 단편을 제공한다. 시스테인 치환 부위는 항체의 불변 영역이므로, 다양한 항체에 적용될 수 있고, 이들 부위는 안정적이고 균일한 접합체를 제공하도록 선택된다. 변형된 항체 또는 단편은 2개 이상의 시스테인 치환을 가질 수 있고, 이들 치환은 본원에 기재된 다른 항체 변형 및 접합 방법과 조합하여 사용될 수 있다. 시스테인을 항체의 특정 위치에 삽입하는 방법은 당해 분야에 알려져 있다(예를 들어, 문헌[Lyons et al, (1990) Protein Eng., 3:703-708, WO 2011/005481, WO2014/124316, WO 2015/138615] 참조). 특정 구현예에서, 변형된 항체 또는 항체 단편은 항체 또는 항체 단편의 중쇄의 위치 117, 119, 121, 124, 139, 152, 153, 155, 157, 164, 169, 171, 174, 189, 205, 207, 246, 258, 269, 274, 286, 288, 290, 292, 293, 320, 322, 326, 333, 334, 335, 337, 344, 355, 360, 375, 382, 390, 392, 398, 400, 및 422로부터 선택되는 불변 영역에 1개 이상의 아미노산의 시스테인으로의 치환을 포함하며, 위치는 EU 시스템에 따라 넘버링된 것이다. 일부 구현예에서, 변형된 항체 또는 항체 단편은 항체 또는 항체 단편의 중쇄의 위치 107, 108, 109, 114, 129, 142, 143, 145, 152, 154, 156, 159, 161, 165, 168, 169, 170, 182, 183, 197, 199, 및 203으로부터 선택되는 불변 영역에 1개 이상의 아미노산의 시스테인으로의 치환을 포함하며, 위치는 EU 시스템에 따라 넘버링된 것이고, 경쇄는 인간 카파 경쇄이다. 특정 구현예에서, 변형된 항체 또는 이의 항체 단편은 불변 영역에 2개 이상의 아미노산의 시스테인으로의 치환의 조합을 포함하며, 이 조합은 항체 중쇄의 위치 375, 항체 중쇄의 위치 152, 항체 중쇄의 위치 360, 또는 항체 경쇄의 위치 107에서의 치환을 포함하고, 위치는 EU 시스템에 따라 넘버링된 것이다. 특정 구현예에서, 변형된 항체 또는 이의 항체 단편은 불변 영역에 1개의 아미노산의 시스테인으로의 치환을 포함하며, 치환은 항체 중쇄의 위치 375, 항체 중쇄의 위치 152, 항체 중쇄의 위치 360, 항체 경쇄의 위치 107, 항체 경쇄의 위치 165, 또는 항체 경쇄의 위치 159이고, 위치는 EU 시스템에 따라 넘버링된 것이고, 경쇄는 인간 카파쇄이다.
특정 구현예에서, 변형된 항체 또는 이의 항체 단편은 불변 영역에 2개의 아미노산의 시스테인으로의 치환의 조합을 포함하며, 변형된 항체 또는 이의 항체 단편은 항체 중쇄의 위치 152 및 375에 시스테인을 포함하고, 위치는 EU 시스템에 따라 넘버링된 것이다.
다른 특정 구현예에서, 변형된 항체 또는 이의 항체 단편은 항체 중쇄의 위치 360에 1개의 아미노산의 시스테인으로의 치환을 포함하며, 위치는 EU 시스템에 따라 넘버링된 것이다.
다른 특정 구현예에서, 변형된 항체 또는 이의 항체 단편은 항체 경쇄의 위치 107에 1개의 아미노산의 시스테인으로의 치환을 포함하며, 위치는 EU 시스템에 따라 넘버링된 것이고, 경쇄는 카파쇄이다.
추가의 구현예에서, 본원에 개시된 항체 접합체에 유용한 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 변형되거나 조작된 항체, 예컨대 천연 서열의 적어도 하나의 아미노산 대신 하나 이상의 (시스테인 이외의) 다른 반응성 아미노산(Pcl, 피롤리신, 펩티드 태그(예컨대, S6, A1, 및 ybbR 태그), 및 비천연 아미노산을 포함)을 도입하도록 변형된 항체를 포함하므로, 화학식 I 또는 그 하위 화학식의 약물 모이어티에 대한 접합을 위한 항체 또는 항원 결합 단편 상의 반응성 부위를 제공한다. 예를 들어, 항체 또는 항체 단편은 Pcl 또는 피롤리신(W. Ou et al. (2011) PNAS 108 (26), 10437-10442; WO2014124258) 또는 비천연 아미노산(J.Y. Axup, et al. Proc Natl Acad Sci U S A, 109 (2012), pp. 16101-16106; 검토를 위해 문헌[C.C. Liu and P.G. Schultz (2010) Annu Rev Biochem 79, 413-444; C.H. Kim, et al., (2013) Curr Opin Chem Biol. 17, 412-419] 참조)을 약물에 대한 접합 부위로서 포함하도록 변형될 수 있다. 마찬가지로, 효소적 접합 방법을 위한 펩티드 태그가 항체에 도입될 수 있다(Strop P. et al. Chem Biol. 2013, 20(2):161-7; Rabuka D., Curr Opin Chem Biol. 2010 Dec;14(6):790-6; Rabuka D,et al., Nat Protoc. 2012, 7(6):1052-67). 다른 일례는 조효소 A 유사체의 접합을 위한 4'-포스포판테테이닐 트랜스퍼라제(PPTase)의 사용이다(WO2013184514). 이러한 변형되거나 조작된 항체를 전달체(payload) 또는 링커-전달체 조합과 접합시키는 방법은 당해 분야에 알려져 있다.
다른 구현예에서, 항체의 Fc 힌지 영역은 항체의 생물학적 반감기를 감소시키도록 돌연변이된다. 보다 구체적으로, 항체가 천연 Fc-힌지 도메인 SpA 결합에 비해 손상된 스타필로코실 단백질 A(SpA) 결합을 갖도록 하나 이상의 아미노산 돌연변이가 Fc-힌지 단편의 CH2-CH3 도메인 인터페이스 영역으로 도입된다. 이 접근법은 Ward 등의 미국 특허 6,165,745호에 더 상세히 기술되어 있다.
또 다른 구현예에서, Fc 영역은 항체의 이펙터 기능을 변경시키기 위해 적어도 하나의 아미노산 잔기를 다른 아미노산 잔기로 대체하여 변경된다. 예를 들어, 항체가 이펙터 리간드에 대해 변경된 친화도를 갖지만 모항체의 항원-결합 능력을 유지하도록 하나 이상의 아미노산이 다른 아미노산 잔기로 대체될 수 있다. 친화도가 변경된 이펙터 리간드는, 예를 들어 Fc 수용체 또는 보체의 C1 성분일 수 있다. 이 접근법은 Winter 등의 미국 특허 5,624,821호 및 5,648,260호에 더 상세히 기술되어 있다.
다른 구현예에서, 아미노산 잔기로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산은 항체가 C1q 결합을 변경시키고/시키거나 보체 의존성 세포독성(CDC)을 감소시키거나 없애도록 다른 아미노산 잔기로 대체될 수 있다. 이 접근법은 Idusogie 등의 미국 특허 6,194,551호에 기술되어 있다.
다른 구현예에서, 하나 이상의 아미노산 잔기가 변경됨으로써 보체를 고정시키는 항체의 능력을 변경시킨다. 이 접근법은, 예를 들어 Bodmer 등의 PCT 공개 WO 94/29351에 기술되어 있다. 동종이형 아미노산 잔기는 IgG1, IgG2, 및 IgG3 서브클래스의 중쇄의 불변 영역뿐만 아니라 문헌[Jefferis et al., MAbs. 1:332-338 (2009)]에 기재된 바와 같은 카파 이소형의 경쇄의 불변 영역을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
또 다른 구현예에서, Fc 영역은, 예를 들어 활성화 Fcγ 수용체에 대한 항체의 친화도를 증가시키거나 억제 Fcγ 수용체에 대한 항체의 친화도를 감소시키기 위해 하나 이상의 아미노산 잔기를 변형시켜 항체 의존성 세포 독성(ADCC) 및/또는 항체 의존성 세포 식세포작용(ADCP)을 매개하는 항체의 능력을 증가시키도록 변형된다. 인간 활성화 Fcγ 수용체는 FcγRIa, FcγRIIa, FcγRIIIa, 및 FcγRIIIb를 포함하고, 인간 억제 Fcγ 수용체는 FcγRIIIb를 포함한다. 이 접근법은 Presta의 PCT 공개 WO 00/42072에 기술되어 있다. 또한, FcγRI, FcγRII, FcγRIII, 및 FcγRn에 대한 인간 IgG1의 결합 부위는 매핑되어 있으며, 결합이 개선된 변이체들은 기술되어 있다(문헌 [Shields et al., J. Biol. Chem. 276:6591-6604, 2001] 참조). 증가된 ADCC/ADCP 기능과 같은 단클론 항체의 Fc-매개 이펙터 기능의 최적화는 기술되어 있다(문헌 [Strohl, W.R., Current Opinion in Biotechnology 2009; 20:685-691] 참조). 일부 구현예에서, 항체 접합체는 향상된 ADCC/ADCP 기능을 부여하는 돌연변이 또는 돌연변이의 조합, 예를 들어 G236A, S239D, F243L, P247I, D280H, K290S, R292P, S298A, S298D, S298V, Y300L, V305I, A330L, I332E, E333A, K334A, A339D, A339Q, A339T, P396L(모든 위치는 EU 넘버링에 의함)로부터 선택되는 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 면역글로불린 중쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, Fc 영역은, 예를 들어 일반적으로 모항체를 인식하지 못하는 활성화 수용체, 예컨대 FcαRI에 대한 항체의 친화도를 증가시키기 위해 하나 이상의 아미노산을 변형시켜 ADCC 및/또는 ADCP를 매개하는 항체의 능력을 증가시키도록 변형된다. 이 접근법은, 예를 들어 문헌[Borrok et al., mAbs. 7(4):743-751]에 기술되어 있다. 특정 구현예에서, 항체 접합체는 향상된 ADCC 및/또는 ADCP 기능을 부여하는 하나 이상의 항체 서열의 돌연변이 또는 융합을 포함하는 면역글로불린 중쇄를 포함한다.
또 다른 구현예에서, 항체의 글리코실화가 변형된다. 예를 들어, 아글리코실화 항체가 제조될 수 있다(즉, 항체에 글리코실화가 결여됨). 글리코실화는, 예를 들어 "항원"에 대한 항체의 친화도를 증가시키도록 변경될 수 있다. 이러한 탄수화물 변형은, 예를 들어 항체 서열 내의 하나 이상의 글리코실화 부위를 변경함으로써 이루어질 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 가변 영역 프레임워크 글리코실화 부위를 제거하여 그 부위에서 글리코실화를 제거하는 하나 이상의 아미노산 치환이 이루어질 수 있다. 이러한 아글리코실화는 항원에 대한 항체의 친화도를 증가시킬 수 있다. 이 접근법은, 예를 들어 Co 등의 미국 특허 5,714,350호 및 6,350,861호에 기술되어 있다.
추가적으로 또는 대안적으로, 변경된 유형의 글리코실화를 갖는 항체, 예컨대 푸코실 잔기의 양이 감소된 하이포푸코실화 항체 또는 증가된 이등분 GlcNac 구조를 갖는 항체가 제조될 수 있다. 이러한 변경된 글리코실화 패턴은 항체의 ADCC 능력을 증가시키는 것으로 입증되었다. 이러한 탄수화물 변형은, 예를 들어 글리코실화 기구가 변경된 숙주세포에서 항체를 발현시켜 이루어질 수 있다. 글리코실화 기구가 변경된 세포는 당해 분야에 기술되어 있고, 본 발명의 재조합 항체를 발현시켜 글리코실화가 변경된 항체를 생성하는 숙주세포로서 사용될 수 있다. 예를 들어, Hang 등의 EP 1,176,195에는, 세포주에서 발현된 항체가 하이포푸코실화를 나타내도록, 푸코실 트랜스퍼라제를 암호화하는 FUT8 유전자가 기능적으로 파괴된 세포주가 기술되어 있다. Presta의 PCT 공개 WO 03/035835에는, 푸코스를 Asn(297)-연결 탄수화물에 부착시키는 능력이 감소되어 해당 숙주세포에서 발현된 항체의 하이포푸코실화를 또한 초래하는 변이 CHO 세포주, Lecl3 세포가 기술되어 있다(문헌[Shields et al., (2002) J. Biol. Chem. 277:26733-26740]을 또한 참조). Umana 등의 PCT 공개 WO 99/54342에는, 당단백질-변형 글리코실 트랜스퍼라제(예를 들어, 베타(1,4)-N 아세틸글루코사민일트랜스퍼라제 III(GnTIII))를 발현하도록 조작되어, 조작된 세포주에서 발현된 항체가 항체의 ADCC 활성을 증가시키는 증가된 이등분 GlcNac 구조를 나타내는 세포주가 기술되어 있다(문헌[Umana et al., Nat. Biotech. 17:176-180, 1999]을 또한 참조).
다른 구현예에서, 항체는 그 생물학적 반감기를 증가시키도록 변형된다. 다양한 접근법들이 가능하다. 예를 들어, Ward의 미국 특허 6,277,375호에 기재된 바와 같은 T252L, T254S, T256F 돌연변이 중 하나 이상이 도입될 수 있다. 대안적으로, 생물학적 반감기를 증가시키기 위해, 항체는, Presta 등의 미국 특허 5,869,046호 및 6,121,022호에 기재된 바와 같이, IgG의 Fc 영역의 CH2 도메인의 2개의 루프에서 취한 재생 수용체 결합 에피토프를 함유하도록 CH1 또는 CL 영역 내에서 변경될 수 있다.
항-HER2 항체의 제조
항-HER2 항체 및 이의 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 당해 분야에 알려진 임의의 수단(재조합 발현, 화학적 합성, 및 항체 사량체의 효소적 분해를 포함하지만 이에 한정되지 않음)에 의해 제조될 수 있는 반면, 전장 단클론 항체는, 예를 들어 하이브리도마 또는 재조합 생성에 의해 얻을 수 있다. 재조합 발현은 당해 분야에 알려진 임의의 적절한 숙주세포, 예를 들어 포유동물 숙주세포, 박테리아 숙주세포, 효모 숙주세포, 곤충 숙주세포 등에서 일어날 수 있다.
본원에 기재된 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드, 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 상보성 결정 영역을 포함하는 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 또는 분절을 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 또한 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 중쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 서열번호 8의 폴리뉴클레오티드와 적어도 85%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 핵산 서열 동일성을 갖는다. 일부 구현예에서, 경쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 서열번호 18의 폴리뉴클레오티드와 적어도 85%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 핵산 서열 동일성을 갖는다.
일부 구현예에서, 중쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 서열번호 10, 22, 또는 24 중 어느 하나의 폴리뉴클레오티드와 적어도 85%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 핵산 서열 동일성을 갖는다. 일부 구현예에서, 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 서열번호 20 또는 34의 폴리뉴클레오티드와 적어도 85%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 핵산 서열 동일성을 갖는다.
본원에 개시된 일부 폴리뉴클레오티드는 항-HER2 항체의 가변 영역을 암호화한다. 본원에 개시된 일부 폴리뉴클레오티드는 항-HER2 항체의 가변 영역 및 불변 영역 모두를 암호화한다. 일부 폴리뉴클레오티드 서열은 항-HER2 항체의 중쇄 및 경쇄 모두의 가변 영역을 포함하는 폴리펩티드를 암호화한다. 일부 폴리뉴클레오티드는 본원에 개시된 임의의 항-HER2 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역과 각각 실질적으로 동일한 2개의 폴리펩티드 분절을 암호화한다.
폴리뉴클레오티드 서열은 항-HER2 항체 또는 이의 결합 단편을 암호화하는 기존 서열(예를 들어, 아래 실시예에 기재된 서열)의 PCR 돌연변이 유도에 의해 또는 드 노보(de novo) 고상 DNA 합성에 의해 생성될 수 있다. 핵산의 직접 화학 합성은 Narang 등의 포스포트리에스테르법(Meth. Enzymol. 68:90, 1979), Brown 등의 포스포디에스테르법(Meth. Enzymol. 68:109, 1979), Beaucage 등의 디에틸포스포아미다이트법(Tetra. Lett., 22:1859, 1981), 및 미국 특허 4,458,066의 고형 지지체법과 같은 당해 분야에 알려진 방법에 의해 이루어질 수 있다. PCR에 의해 폴리뉴클레오티드 서열에 돌연변이를 도입하는 것은, 예를 들어 문헌[PCR Technology: Principles and Applications for DNA Amplification, H.A. Erlich (Ed.), Freeman Press, NY, NY, 1992; PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Innis et al. (Ed.), Academic Press, San Diego, CA, 1990; Mattila et al., Nucleic Acids Res. 19:967, 1991; 및 Eckert et al., PCR Methods and Applications 1:17, 1991]에 기술된 바와 같이 수행될 수 있다.
전술한 항-HER2 항체를 생성하기 위한 발현 벡터 및 숙주세포가 또한 제공된다. 항-HER2 항체 쇄 또는 결합 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 발현시키기 위해 다양한 발현 벡터가 사용될 수 있다. 바이러스 기반 발현 벡터와 비바이러스 발현 벡터 모두 포유동물 숙주세포에서 항체를 생성하는 데 사용될 수 있다.
비바이러스 벡터 및 시스템은 플라스미드, (일반적으로 단백질 또는 RNA의 발현을 위한 발현 카세트를 갖는) 에피솜 벡터, 및 인간 인공 염색체를 포함한다(예를 들어, 문헌[Harrington et al., Nat Genet 15:345, 1997] 참조). 예를 들어, 포유동물(예를 들어, 인간) 세포에서의 항-HER2 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드의 발현에 유용한 비바이러스 벡터는 pThioHis A, B 및 C, pCDNATM3.1/His, pEBVHis A, B 및 C(Invitrogen, San Diego, CA), MPSV 벡터, 및 다른 단백질의 발현을 위한 당해 분야에 알려진 그 외 다수의 벡터를 포함한다. 유용한 바이러스 벡터는 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노-연관 바이러스, 헤르페스 바이러스를 기반으로 한 벡터, SV40, 유두종 바이러스, HBP 엡스타인 바 바이러스를 기반으로 한 벡터, 백시니아 바이러스 벡터, 및 Semliki Forest 바이러스(SFV)를 포함한다. 문헌[Brent et al., supra; Smith, Annu. Rev. Microbiol. 49:807, 1995; 및 Rosenfeld et al., Cell 68:143, 1992] 참조.
발현 벡터의 선택은 벡터가 발현될 대상 숙주세포에 따라 다르다. 일반적으로, 발현 벡터는 항-HER2 항체 쇄 또는 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드에 작동 가능하게 연결된 프로모터 및 기타 조절 서열(예를 들어, 인핸서)을 포함한다. 일부 구현예에서, 유도 조건인 경우를 제외하고는, 삽입된 서열의 발현을 방지하기 위해 유도성 프로모터가 사용된다. 유도성 프로모터는, 예를 들어 아라비노스, lacZ, 메탈로티오네인 프로모터 또는 열 충격 프로모터를 포함한다. 형질전환 유기체의 배양물은 숙주세포가 더 잘 견디는 발현 생성물을 생성하는 암호화 서열에 대한 집단의 편향 없이 비유도성 조건에서 증식될 수 있다. 프로모터 외에도, 항-HER2 항체 쇄 또는 단편의 효율적인 발현을 위한 다른 조절 요소가 또한 필요하거나 요구될 수 있다. 이러한 요소는 일반적으로 ATG 개시 코돈 및 인접한 리보솜 결합 부위 또는 다른 서열을 포함한다. 또한, 사용 중인 세포 시스템에 적합한 인핸서를 포함시킴으로써 발현 효율이 향상될 수 있다(예를 들어, 문헌[Scharf et al., Results Probl. Cell Differ. 20:125, 1994; 및 Bittner et al., Meth. Enzymol., 153:516, 1987] 참조). 예를 들어, 포유동물 숙주세포에서의 발현을 증가시키기 위해 CMV 인핸서의 SV40 인핸서가 사용될 수 있다.
발현 벡터는 삽입된 항-HER2 항체 서열에 의해 암호화된 폴리펩티드와 융합 단백질을 형성하기 위해 분비 신호 서열 위치를 또한 제공할 수 있다. 삽입된 항-HER2 항체 서열은 벡터에 포함되기 전에 종종 신호 서열에 연결된다. 항-HER2 항체 경쇄 및 중쇄 가변 도메인을 암호화하는 서열을 수용하는 데 사용되는 벡터는 또한, 때때로 불변 영역 또는 그 일부를 암호화한다. 이러한 벡터는 가변 영역을 불변 영역을 갖는 융합 단백질로서 발현시켜, 온전한 항체 또는 이의 단편을 생성할 수 있다. 일반적으로, 이러한 불변 영역은 인간에 존재한다.
항-HER2 항체 쇄를 보유하고 발현하는 숙주세포는 원핵 세포이거나 진핵 세포일 수 있다. 대장균은 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 클로닝 및 발현에 유용한 원핵 숙주 중 하나이다. 사용에 적합한 다른 미생물 숙주는 바실루스, 예컨대 바실루스 서브틸리스, 및 다른 엔테로박테리아세아에, 예컨대 살모네라, 세라티아, 및 다양한 슈도모나스 종을 포함한다. 이러한 원핵 숙주에서, 숙주세포와 공존할 수 있는 발현 조절 서열(예를 들어, 복제 기점)을 일반적으로 포함하는 발현 벡터를 제조하는 것도 가능하다. 또한, 락토스 프로모터 시스템, 트립토판(trp) 프로모터 시스템, 베타-락타마제 프로모터 시스템, 또는 파지 람다로부터의 프로모터 시스템과 같은 다양한 주지의 프로모터가 얼마든지 존재할 것이다. 일반적으로 프로모터는, 선택적으로 작동자 서열과 함께, 발현을 조절하고, 전사 및 번역의 개시와 완료를 위한 리보솜 결합 부위 서열 등을 갖는다. 본원에 개시된 항-HER2 폴리펩티드를 발현시키기 위해 효모와 같은 다른 미생물이 사용될 수도 있다. 바큘로바이러스 벡터와 조합하여 곤충 세포가 사용될 수도 있다.
일부 특정 구현예에서, 본 발명의 항-HER2 폴리펩티드를 발현시키고 생성하기 위해 포유동물 숙주세포가 사용된다. 예를 들어, 이들은 내인성 면역글로불린 유전자를 발현하는 하이브리도마 세포주(예를 들어, 골수종 하이브리도마 클론) 또는 외인성 발현 벡터를 보유하는 포유동물 세포주(예를 들어, SP2/0 골수종 세포)일 수 있다. 이들은 임의의 정상적 사멸성, 또는 정상적 또는 비정상적인 불멸성 동물 또는 인간 세포를 포함한다. 예를 들어, 다양한 CHO 세포주, Cos 세포주, HeLa 세포, 골수종 세포주, 형질전환된 B-세포 및 하이브리도마를 포함하여, 온전한 면역글로불린을 분비할 수 있는 다수의 적합한 숙주세포주가 개발되었다. 폴리펩티드 발현을 위해 포유동물 조직 세포 배양을 이용하는 것은, 예를 들어 문헌[Winnacker, From Genes to Clones, VCH Publishers, N.Y., N.Y., 1987]에 일반적으로 논의된다. 포유동물 숙주세포의 발현 벡터는 발현 조절 서열, 예컨대 복제 기점, 프로모터, 및 인핸서(예를 들어, 문헌[Queen et al., Immunol. Rev. 89:49-68, 1986] 참조), 필요한 프로세싱 정보 부위, 예컨대 리보솜 결합 부위, RNA 스플라이스 부위, 폴리아데닐화 부위, 및 전사 종결자 서열을 포함할 수 있다. 발현 벡터는 포유동물 유전자 또는 포유동물 바이러스로부터 유래된 프로모터를 대개 포함한다. 적합한 프로모터는 항시성, 세포 유형-특이성, 단계-특이성, 및/또는 조정 가능성 또는 조절 가능성을 가질 수 있다. 유용한 프로모터는 메탈로티오네인 프로모터, 항시성 아데노바이러스 주요 후기 프로모터, 덱사메타손-유도성 MMTV 프로모터, SV40 프로모터, MRP polIII 프로모터, 항시성 MPSV 프로모터, 테트라사이클린-유도성 CMV 프로모터(예컨대, 인간 초기 CMV 프로모터), 항시성 CMV 프로모터, 및 당해 분야에 알려진 프로모터-인핸서 조합을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
관심 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 발현 벡터를 도입하는 방법은 세포 숙주의 유형에 따라 다르다. 예를 들어, 원핵 세포의 경우 염화칼슘 형질감염이 통상적으로 사용되는 반면, 다른 세포 숙주의 경우 인산칼슘 처리 또는 전기천공이 사용될 수 있다(일반적으로, 전술한 Sambrook 등의 문헌 참조). 그 외 방법은, 예를 들어 전기천공, 인산칼슘 처리, 리포솜-매개 형질전환, 주입 및 미세주입, 탄도법, 비로솜(virosome), 면역리포솜, 다가양이온:핵산 접합체, 비결합 DNA, 인공 비리온, 헤르페스 바이러스 구조 단백질 V22에 대한 융합(Elliot and O'Hare, Cell 88:223, 1997), DNA의 제제-강화 흡수, 및 생체외 형질도입을 포함한다. 재조합 단백질을 장기간 고수율로 제조하기 위해서는, 안정적인 발현이 흔히 바람직할 것이다. 예를 들어, 바이러스 복제 기점 또는 내인성 발현 요소 및 선별 마커 유전자를 포함하는 본원에 개시된 발현 벡터를 이용해, 항-HER2 항체 쇄 또는 결합 단편을 안정적으로 발현하는 세포주가 제조될 수 있다. 벡터의 도입 후, 선별 배지로 전환하기 전에 세포를 강화 배지에서 1~2일 동안 성장시킬 수 있다. 선별 마커의 목적은 선택에 대한 저항성을 부여하는 것이며, 선별 마커의 존재는 선별 배지에서 도입 서열을 성공적으로 발현시키는 세포가 성장할 수 있도록 한다. 안정적으로 형질감염된 저항성 세포는 세포 유형에 적합한 조직 배양 기술을 이용해 증식될 수 있다.
화학식 IIa 및 화학식 IIb의 항체 접합체를 제조하는 방법
화학식 II의 면역자극 접합체의 형성을 위한 일반적인 반응식을 아래 반응식 13에 나타내었다.
반응식 13
Figure pct00523
식 중, RG1은 화학식 Ia의 화합물의 호환성 R4기와 반응하여 상응하는 R40기를 형성하는 반응성 기, 예컨대 티올과 반응하여 석신이미드 고리를 형성하는 말레이미드, 또는 케톤과 반응하여 옥심을 형성하는 하이드록시아민이고; R1, R4, L2, Ab, 및 R40은 본원에 정의된 바와 같다.
화학식 IIb의 면역자극 접합체의 형성을 위한 일반적인 반응식을 아래 반응식 14에 나타내었다.
반응식 14
Figure pct00524
식 중, RG1은 화학식 Ib의 화합물의 호환성 R4기와 반응하여 상응하는 R40기를 형성하는 반응성 기, 예컨대 티올과 반응하여 석신이미드 고리를 형성하는 말레이미드, 또는 케톤과 반응하여 옥심을 형성하는 하이드록시아민이고; R1, R4, L2, Ab, 및 R40은 본원에 정의된 바와 같다.
치료적 용도 및 치료 방법
제공되는 항체 접합체는 다양한 용도(암, 예컨대 HER2-양성 암의 치료를 포함하지만 이에 한정되지 않음)에 유용하다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체 접합체는 종양 성장의 억제, 종양 부피의 감소, 분화 유도, 및/또는 종양, 예를 들어 HER2 고형 종양의 종양원성의 감소에 유용하다. 사용 방법은 시험관내, 생체외, 또는 생체내 방법일 수 있다.
일부 구현예에서, 질병(예를 들어 HER2-양성 암)의 치료, 예방, 또는 개선을 필요로 하는 대상(예를 들어, 인간 환자)에게 본원에 기재된 임의의 항체 접합체를 투여하여 대상의 질병을 치료, 예방, 또는 개선하는 방법이 본원에 제공된다. 대상(예를 들어, 인간 환자)의 질병을 치료 또는 예방하기 위한 본 발명의 항체 접합체의 용도가 또한 제공된다. 대상의 질병의 치료 또는 예방에서의 항체 접합체의 용도가 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 대상의 질병의 치료 또는 예방을 위한 의약의 제조에 사용하기 위한 항체 접합체가 제공된다. 특정 구현예에서, 항체 접합체로 치료되는 질병은 암, 예를 들어 HER2-양성 암이다. 항체 접합체로 치료될 수 있는 다양한 암은 상기 정의 섹션에 열거되어 있다. HER2-양성 암은 세포 표면에 HER2 단백질이 존재하는 세포를 포함하는 임의의 암일 수 있다. 예를 들어, HER2-양성 암은 위암, 식도암, 위식도 접합 선암종, 대장암, 직장암, 유방암, 난소암, 자궁경부암, 자궁암, 자궁내막암, 방광암, 요로암, 췌장암, 폐암, 전립선암, 골육종, 신경모세포종, 교모세포종, 신경내분비 종양, 및 두경부암 중 어느 하나의 원발성 종양 또는 전이일 수 있다. 특정 구현예에서, 암은 항체 접합체의 항체, 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)이 결합하는 HER2 발현 세포를 특징으로 한다. 특정 구현예에서, 암은 HER2 발현 외에도 다수의 인간 표피 성장 인자 수용체의 동시 발현을 특징으로 한다. 일부 구현예에서, HER2-양성 암은 높은 HER2 발현, 예를 들어 +3의 면역조직화학(IHC) 점수를 가질 수 있고, 이는 미국 임상종양학회 및 미국 병리학회(ASCO/CAP) IHC 점수로 결정할 때 30%가 넘는 침습성 종양 세포의 균일한 강한 막 염색으로서 정의된다(문헌[English et al., Mol Diagn Ther. 2013 Apr; 17(2): 85-99] 참조). 일부 구현예에서, HER2-양성 암은 비교적 낮은 HER2 발현, 예를 들어 2+의 IHC 점수를 가질 수 있고, 이는 ASCO/CAP IHC 점수로 30% 이하의 종양 세포의 완전한 막 염색을 나타내는 적어도 10%의 세포 또는 매우 드물게 종양에서의 불균일하거나 강도가 약하지만 원주 분포가 뚜렷한 완전한 막 염색으로서 정의된다(문헌[English et al., Mol Diagn Ther. 2013 Apr; 17(2): 85-99]참조).
일부 구현예에서, HER2-양성 암의 치료를 필요로 하는 대상의 HER2-양성 암을 치료하는 방법으로서, 본원에 기재된 임의의 항체 접합체의 치료 유효량을 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 방법이 제공된다. HER2-양성 암은 세포 표면에 HER2 단백질이 존재하는 세포를 포함하는 임의의 암일 수 있다. 일부 구현예에서, 사용된 항체 접합체는 항-HER2 항체 단독과 비교할 때 지속된 기간 동안 HER2-양성 암을 억제시키고/시키거나 HER2-양성 암의 재발을 감소시킬 수 있다.
본원에 기재된 항체 접합체는 다양한 비악성 질병 또는 장애, 예컨대 염증성 장 질환(IBD), 위장 궤양, 메네트리어병, B형 간염, C형 간염, 분비 선종 또는 단백질 소실 증후군, 신장 장애, 혈관형성 장애, 안 질환, 예컨대 노화 관련 황반변성, 추정 안 히스토플라즈마증 증후군, 또는 노화 관련 황반변성, 뼈 관련 병리, 예컨대 골관절염, 구루병 및 골다공증, 전신 과다점성 증후군, 오슬러 웨버-랑뒤 질환, 만성 폐쇄성 폐 질환, 또는 화상, 외상, 방사선, 뇌졸중, 저산소증 또는 허혈에 따른 부종, 당뇨병성 신장 질환, 파제트병, 광노화(예를 들어, 인간 피부의 자외선에 의해 발생), 양성 전립선 비대, 아데노바이러스, 한타바이러스, 보렐리아 부르그도페리, 예르시니아 종, 및 보르데텔라 백일해로부터 선택되는 미생물 병원체를 포함한 특정 미생물 감염, 혈소판 응집으로 인한 혈전, 생식 병태, 예컨대 자궁내막증, 난소 과잉자극 증후군, 자간전증, 기능부전성 자궁 출혈, 또는 불규칙 과다월경, 급성 및 만성 신장질환(증식성 사구체신염 포함), 비대성 반흔 형성, 내독소 쇼크 및 진균증, 가족성 선종성 폴립증, 골수이형성 증후군, 무형성 빈혈, 허혈 손상, 폐, 신장, 또는 간의 섬유증, 비후성 유문협착증, 요로 폐색 증후군, 건선성 관절염을 치료하는 데 사용될 수 있는 것으로 또한 예상된다.
이러한 항체 접합체의 투여 방법은 비경구(예를 들어, 정맥내) 투여, 예를 들어 일정 기간에 걸친 볼루스 또는 연속 주입으로서의 주사, 경구 투여, 근육내 투여, 종양내 투여, 근육내 투여, 복강내 투여, 뇌척수내 투여, 피하 투여, 관절내 투여, 활액내 투여, 림프절에의 주사, 또는 척추강내 투여를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
질병의 치료를 위해, 본 발명의 항체 접합체의 적절한 투여량은 다양한 인자, 예컨대 치료할 질병의 유형, 질병의 중증도 및 경과, 질병의 반응성, 이전의 요법, 환자의 임상 병력 등에 의존한다. 항체 접합체는 1회, 또는 수 일에서 수 개월까지 지속되는 일련의 치료에 걸쳐, 또는 치료가 이루어지거나 질병 상태의 감소(예를 들어, 종양 크기의 감소)가 달성될 때까지 투여될 수 있다. 최적의 투여 스케줄은 환자의 신체 내 약물 축적을 측정하여 계산될 수 있고, 특정 항체 접합체의 상대적 효능에 따라 달라질 것이다. 일부 구현예에서, 투여량은 체중 kg당 0.01 mg 내지 20 mg(예를 들어, 0.01 mg, 0.02 mg, 0.03 mg, 0.04 mg, 0.05 mg, 0.06 mg, 0.07 mg, 0.08 mg, 0.09 mg, 0.1 mg, 0.2 mg, 0.3 mg, 0.4 mg, 0.5 mg, 0.6 mg, 0.7 mg, 0.8 mg, 0.9 mg, 1 mg, 2 mg, 3 mg, 4 mg, 5 mg, 6mg, 7 mg, 8 mg, 9 mg, 10 mg, 11 mg, 12 mg, 13 mg, 14 mg, 15 mg, 16 mg, 17 mg, 18 mg, 19 mg, 또는 20 mg)이고, 매일, 매주, 매월, 또는 매년 1회 이상 투여될 수 있다. 특정 구현예에서, 본 발명의 항체 접합체는 2주에 1회 또는 3주에 1회 투여된다. 특정 구현예에서, 본 발명의 항체 접합체는 한 번만 투여된다. 치료하는 의사는 체액 또는 체조직 내 약물의 측정된 체류 시간 및 농도에 기초하여 투여의 반복률을 추정할 수 있다.
병용 요법
특정 예에서, 본 발명의 항체 접합체는 다른 치료제, 예컨대 항암제, 항알레르기제, 항구역제(또는 구토억제제), 진통제, 세포보호제, 및 이들의 조합과 조합될 수 있다.
병용 요법에 사용하기 위해 고려되는 일반적인 화학요법제는 아나스트로졸(Arimidex®), 비칼루타미드(Casodex®), 황산블레오마이신(Blenoxane®), 부설판(Myleran®), 부설판 주사(Busulfex®), 카페시타빈(Xeloda®), N4-펜톡시카보닐-5-데옥시-5-플루오로시티딘, 카보플라틴(Paraplatin®), 카무스틴(BiCNU®), 클로람부실(Leukeran®), 시스플라틴(Platinol®), 클라드리빈(Leustatin®), 사이클로포스파미드(Cytoxan® 또는 Neosar®), 사이타라빈, 사이토신 아라비노시드(Cytosar-U®), 사이타라빈 리포솜 주사(DepoCyt®), 다카바진(DTIC-Dome®), 닥티노마이신(Actinomycin D, Cosmegan), 다우노루비신 하이드로클로라이드(Cerubidine®), 다우노루비신 시트레이트 리포솜 주사(DaunoXome®), 덱사메타손, 도세탁셀(Taxotere®), 독소루비신 하이드로클로라이드(Adriamycin®, Rubex®), 에토포시드(Vepesid®), 플루다라빈 포스페이트(Fludara®), 5-플루오로우라실(Adrucil®, Efudex®), 플루타미드(Eulexin®), 테자시티빈, 젬시타빈(디플루오로데옥시시티딘), 하이드록시우레아(Hydrea®), 아이다루비신(Idamycin®), 이포스파미드(IFEX®), 이리노테칸(Camptosar®), L-아스파라기나제(ELSPAR®), 류코보린 칼슘, 멜팔란(Alkeran®), 6-머캅토퓨린(Purinethol®), 메토트렉세이트(Folex®), 미톡산트론(Novantrone®), 마일로타그, 파클리탁셀(Taxol®), 피닉스(Yttrium90/MX-DTPA), 펜토스타틴, 카무스틴 임플란트가 있는 폴리페프로산 20(Gliadel®), 타목시펜 시트레이트(Nolvadex®), 테니포시드(Vumon®), 6-티오구아닌, 티오테파, 티라파자민(Tirazone®), 주사용 토포테칸 하이드로클로라이드(Hycamptin®), 빈블라스틴(Velban®), 빈크리스틴(Oncovin®), 비노렐빈(Navelbine®), 에피루비신(Ellence®), 옥살리플라틴(Eloxatin®), 엑스메스탄(Aromasin®), 레트로졸(Femara®), 및 풀베스트란트(Faslodex®)를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "약학적 조합"은 하나의 투여 단위 형태의 고정형 조합, 또는 2종 이상의 치료제가 독립적으로 동시에 또는 시간 간격 내에 개별적으로 투여될 수 있는 병용 투여를 위한 비고정형 조합 또는 부품 키트를 지칭하며, 일부 구현예에서, 이러한 시간 간격은 조합 파트너가 협동적, 예컨대 시너지 효과를 나타낼 수 있게 한다.
용어 "병용 요법" 또는 "조합"은 본 개시에 기술된 치료 병태 또는 장애를 치료하기 위한 2종 이상의 치료제의 투여를 지칭한다. 이러한 투여는 실질적으로 동시에, 예컨대 고정된 비율의 유효 성분들을 갖는 단일 캡슐로 이러한 치료제들을 동시-투여하는 것을 포함한다. 대안적으로, 이러한 투여는 각각의 유효 성분에 대해 다중 또는 개별 용기(예를 들어, 캡슐, 분말, 및 액체)로 동시-투여하는 것을 포함한다. 분말 및/또는 액체는 투여 전에 원하는 용량으로 재구성되거나 희석될 수 있다. 또한, 이러한 투여는 거의 동시에 또는 다른 시간에 각 유형의 치료제를 순차적으로 사용하는 것도 포함한다. 어느 경우든, 치료 요법은 본원에 기재된 병태 또는 장애의 치료에 있어서 약물 조합의 이로운 효과를 제공할 것이다.
일부 구현예에서, 병용 요법은 "시너지 효과"를 제공하고 "시너지적"임을 입증할 수 있다. 즉, 유효 성분들이 함께 사용될 때 달성되는 효과가 화합물을 개별적으로 사용함으로써 발생하는 효과의 합보다 크다. 시너지 효과는 유효 성분이 (1) 공동 제형화되어 조합된 단위 투여 제형으로 동시에 투여되거나 전달되는 경우, (2) 개별적인 제형으로서 교대로 또는 병행적으로 전달되는 경우, 또는 (3) 일부 다른 요법에 의해 전달되는 경우 얻을 수 있다. 교대 요법으로 전달되는 경우, 시너지 효과는 화합물이 순차적으로, 예를 들어, 개별적인 주사기로 서로 달리 주사하여 투여되거나 전달될 때 얻을 수 있다. 일반적으로, 교대 요법 동안에는, 각각의 유효 성분의 유효 투여량이 순차적으로, 즉 연속하여 투여되는 반면, 병용 요법에서는 2가지 이상의 유효 성분의 유효 투여량이 함께 투여된다.
일 구현예에서, 본 발명은 암의 치료를 필요로 하는 대상에게 본 발명의 항체 접합체를 하나 이상의 다른 항-HER2 항체, 예를 들어 전술한 트라스투주맙, 퍼투주맙, 마르게툭시맙, 또는 HT-19와 조합하여, 또는 다른 항-HER2 접합체, 예를 들어 아도-트라스투주맙 엠타신(Kadcyla® 또는 T-DM1로도 알려짐)과 조합하여 투여해 암을 치료하는 방법을 제공한다.
일 구현예에서, 본 발명은 암의 치료를 필요로 하는 대상에게 본 발명의 항체 접합체를 하나 이상의 티로신 키나제 억제제(EGFR 억제제, Her3 억제제, IGFR 억제제, 및 Met 억제제를 포함하지만 이에 한정되지 않음)와 조합하여 투여해 암을 치료하는 방법을 제공한다.
예를 들어, 티로신 키나제 억제제는 에를로티닙 하이드로클로라이드(Tarceva®); 리니파닙(N-[4-(3-아미노-1H-인다졸-4-일)페닐]-N'-(2-플루오로-5-메틸페닐)우레아(ABT 869로도 알려짐, Genentech에서 입수 가능); 수니티닙 말레이트(Sutent®); 보수티닙(4-[(2,4-디클로로-5-메톡시페닐)아미노]-6-메톡시-7-[3-(4-메틸피페라진-1-일)프로폭시]퀴놀린-3-카보니트릴(SKI-606으로도 알려지고, 미국 특허 6,780,996호에 기재되어 있음); 다사티닙(Sprycel®); 파조파닙(Votrient®); 소라페닙(Nexavar®); 자크티마(ZD6474); 및 이마티닙 또는 이마티닙 메실레이트(Gilvec® 및 Gleevec®)를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
표피 성장 인자 수용체(EGFR) 억제제는 에를로티닙 하이드로클로라이드(Tarceva®), 게피티닙(Iressa®); N-[4-[(3-클로로-4-플루오로페닐)아미노]-7-[[(3''S'')-테트라하이드로-3-퓨란일]옥시]-6-퀴나졸리닐]-4(디메틸아미노)-2-부텐아미드, Tovok®); 반데타닙(Caprelsa®); 라파티닙(Tykerb®); (3R,4R)-4-아미노-1-((4-((3-메톡시페닐)아미노)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-5-일)메틸)피페리딘-3-올(BMS690514); 카네르티닙 디하이드로클로라이드(CI-1033); 6-[4-[(4-에틸-1-피페라진일)메틸]페닐]-N-[(1R)-1-페닐에틸]-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민(AEE788, CAS 497839-62-0); 무브리티닙(TAK165); 펠리티닙(EKB569); 아파티닙(Gilotrif®); 네라티닙(HKI-272); N-[4-[[1-[(3-플루오로페닐)메틸]-1H-인다졸-5-일]아미노]-5-메틸피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일]-카밤산, (3S)-3-모르폴리닐메틸 에스테르(BMS599626); N-(3,4-디클로로-2-플루오로페닐)-6-메톡시-7-[[(3a,5,6a)-옥타하이드로-2-메틸사이클로펜타[c]피롤-5-일]메톡시]- 4-퀴나졸린아민(XL647, CAS 781613-23-8); 및 4-[4-[[(1R)-1-페닐에틸]아미노]-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-일]-페놀(PKI166, CAS187724-61-4)을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
EGFR 항체는 세툭시맙(Erbitux®); 판티투무맙(Vectibix®); 마투주맙(EMD-72000); 니모투주맙(hR3); 잘루투무맙; TheraCIM h-R3; MDX0447(CAS 339151-96-1); 및 ch806(mAb-806, CAS 946414-09-1)을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
다른 HER2 억제제는 네라티닙(HKI-272, (2E)-N-[4-[[3-클로로-4-[(피리딘-2-일)메톡시]페닐]아미노]-3-시아노-7-에톡시퀴놀린-6-일]-4-(디메틸아미노)부트-2-엔아미드, PCT 공개 WO 05/028443호에 기재되어 있음); 라파티닙 또는 라파티닙 디토실레이트(Tykerb®); (3R,4R)-4-아미노-1-((4-((3-메톡시페닐)아미노)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-5-일)메틸)피페리딘-3-올(BMS690514); (2E)-N-[4-[(3-클로로-4-플루오로페닐)아미노]-7-[[(3S)-테트라하이드로-3-퓨라닐]옥시]-6-퀴나졸리닐]-4-(디메틸아미노)-2-부텐아미드(BIBW-2992, CAS 850140-72-6); N-[4-[[1-[(3-플루오로페닐)메틸]-1H-인다졸-5-일]아미노]-5-메틸피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일]-카밤산, (3S)-3-모르폴리닐메틸 에스테르(BMS 599626, CAS 714971-09-2); 카네르티닙 디하이드로클로라이드(PD183805 또는 CI-1033); 및 N-(3,4-디클로-2-플루오로페닐)-6-메톡시-7-[[(3aα,5β,6aα)-옥타하이드로-2-메틸사이클로펜타[c]피롤-5-일]메톡시]-4-퀴나졸린아민(XL647, CAS 781613-23-8)을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
HER3 억제제는 LJM716, MM-121, AMG-888, RG7116, REGN-1400, AV-203, MP-RM-1, MM-111, 및 MEHD-7945A를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
MET 억제제는 카보잔티닙(XL184, CAS 849217-68-1); 포레티닙(GSK1363089, 이전 명칭 XL880, CAS 849217-64-7); 티반티닙(ARQ197, CAS 1000873-98-2); 1-(2-하이드록시-2-메틸프로필)-N-(5-(7-메톡시퀴놀린-4-일옥시)피리딘-2-일)-5-메틸-3-옥소-2-페닐-2,3-디하이드로-1H-피라졸-4-카복사미드(AMG 458); 크리조티닙(Xalkori®, PF-02341066); (3Z)-5-(2,3-디하이드로-1H-인돌-1-일설포닐)-3-({3,5-디메틸-4-[(4-메틸피페라진-1-일)카보닐]-1H-피롤-2-일}메틸렌)-1,3-디하이드로-2H-인돌-2-온(SU11271); (3Z)-N-(3-클로로페닐)-3-({3,5-디메틸-4-[(4-메틸피페라진-1-일)카보닐]-1H-피롤-2-일}메틸렌)-N-메틸-2-옥소인돌린-5-설폰아미드(SU11274); (3Z)-N-(3-클로로페닐)-3-{[3,5-디메틸-4-(3-모르폴린-4-일프로필)-1H-피롤-2-일]메티렌}-N-메틸-2-옥소인돌린-5-설폰아미드(SU11606); 6-[디플루오로[6-(1-메틸-1H피라졸-4-일)-1,2,4-트리아졸로[4,3-b]피리다진-3-일]메틸]-퀴놀린(JNJ38877605, CAS 943540-75-8); 2-[4-[1-(퀴놀린-6-일메틸)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-6-일]-1H-피라졸-1-일]에탄올(PF04217903, CAS 956905-27-4); N-((2R)-1,4-디옥산-2-일메틸)-N-메틸-N'-[3-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-5-옥소-5H-벤조[4,5]사이클로헵타[1,2-b]피리딘-7-일]설파미드(MK2461, CAS 917879-39-1); 6-[[6-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1,2,4-트리아졸로[4,3-b]피리다진 3-일]티오]-퀴놀린(SGX523, CAS 1022150-57-7); 및 (3Z)-5-[[(2,6-디클로로페닐)메틸]설포닐]-3-[[3,5-디메틸-4-[[(2R)-2-(1-피롤리디닐메틸)-1-피롤리디닐]카보닐]-1H-피롤-2-일]메틸렌]-1,3-디하이드로-2H-인돌-2-온(PHA665752, CAS 477575-56-7)을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
IGFR 억제제는 BMS-754807, XL-228, OSI-906, GSK0904529A, A-928605, AXL1717, KW-2450, MK0646, AMG479, IMCA12, MEDI-573, 및 BI836845를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 검토를 위해, 예를 들어 문헌[Yee, JNCI, 104; 975 (2012)] 참조.
다른 구현예에서, 본 발명은 암의 치료를 필요로 하는 대상에게 본 발명의 항체 접합체를 하나 이상의 증식 신호전달 경로 억제제(MEK 억제제, BRAF 억제제, PI3K/Akt 억제제, SHP2 억제제, mTOR 억제제, 및 CDK 억제제를 포함하지만 이에 한정되지 않음)와 조합하여 투여해 암을 치료하는 방법을 제공한다.
예를 들어, 미토겐-활성화 단백질 키나제(MEK) 억제제는 XL-518(GDC-0973으로도 알려짐, Cas 번호 1029872-29-4, ACC Corp.에서 입수 가능); 2-[(2-클로로-4-아이오도페닐)아미노]-N-(사이클로프로필메톡시)-3,4-디플루오로-벤즈아미드(CI-1040 또는 PD184352로도 알려지고 PCT 공개 WO2000035436호에 기재되어 있음); N-[(2R)-2,3-디하이드록시프로폭시]-3,4-디플루오로-2-[(2-플루오로-4-아이오도페닐)아미노]-벤즈아미드(PD0325901로도 알려지고 PCT 공개 WO2002006213호에 기재되어 있음); 2,3-비스[아미노[(2-아미노페닐)티오]메틸렌]-부탄디니트릴(U0126으로도 알려지고 미국 특허 2,779,780호에 기재되어 있음); N-[3,4-디플루오로-2-[(2-플루오로-4-아이오도페닐)아미노]-6-메톡시페닐]-1-[(2R)-2,3-디하이드록시프로필]-사이클로프로판설폰아미드(RDEA119 또는 BAY869766으로도 알려지고 PCT 공개 WO2007014011호에 기재되어 있음); (3S,4R,5Z,8S,9S,11E)-14-(에틸아미노)-8,9,16-트리하이드록시-3,4-디메틸-3,4,9,19-테트라하이드로-1H-2-벤족사사이클로테트라데신-1,7(8H)-디온](E6201로도 알려지고 PCT 공개 WO2003076424호에 기재되어 있음); 2'-아미노-3'-메톡시플라본(PD98059로도 알려짐, Biaffin GmbH & Co.(KG, 독일)에서 입수 가능); 베무라페닙(PLX-4032, CAS 918504-65-1); (R)-3-(2,3-디하이드록시프로필)-6-플루오로-5-(2-플루오로-4-아이오도페닐아미노)-8-메틸피리도[2,3-d]피리미딘-4,7(3H,8H)-디온(TAK-733, CAS 1035555-63-5); 피마세르팁(AS-703026, CAS 1204531-26-9); 및 트라메티닙 디메틸 설폭사이드(GSK-1120212, CAS 1204531-25-80)를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
BRAF 억제제는 베무라페닙(또는 Zelboraf®), GDC-0879, PLX-4720(Symansis에서 입수 가능), 다브라페닙(또는 GSK2118436), LGX 818, CEP-32496, UI-152, RAF 265, 레고라페닙(BAY 73-4506), CCT239065, 또는 소라페닙(또는 소라페닙 토실레이트, 또는 Nexavar®), 또는 이필리무맙(또는 MDX-010, MDX-101, 또는 여보이(Yervoy))을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
포스포이노시티드 3-키나제(PI3K) 억제제는 4-[2-(1H-인다졸-4-일)-6-[[4-(메틸설포닐)피페라진-1-일]메틸]티에노[3,2-d]피리미딘-4-일]모르폴린(GDC0941, RG7321, GNE0941, 픽트렐리십, 또는 픽틸리십으로도 알려지고, PCT 공개 WO 09/036082호 및 WO 09/055730호에 기재되어 있음); 2-메틸-2-[4-[3-메틸-2-옥소-8-(퀴놀린-3-일)-2,3-디하이드로이미다조[4,5-c]퀴놀린-1-일]페닐]프로피오니트릴(BEZ 235 또는 NVP-BEZ 235으로도 알려지고, PCT 공개 WO 06/122806호에 기재되어 있음); 토자세르팁(VX680 또는 MK-0457, CAS 639089-54-6); (5Z)-5-[[4-(4-피리디닐)-6-퀴놀리닐]메틸렌]-2,4-티아졸리딘디온(GSK1059615, CAS 958852-01-2); (1E,4S,4aR,5R,6aS,9aR)-5-(아세틸옥시)-1-[(디-2-프로페닐아미노)메틸렌]-4,4a,5,6,6a,8,9,9a-옥타하이드로-11-하이드록시-4-(메톡시메틸)-4a,6a-디메틸사이클로펜타[5,6]나프토[1,2-c]피란-2,7,10(1H)-트리온(PX866, CAS 502632-66-8); 8-페닐-2-(모르폴린-4-일)-크로멘-4-온(LY294002, CAS 154447-36-6); (S)-N1-(4-메틸-5-(2-(1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일)피리딘-4-일)티아졸-2-일)피롤리딘-1,2-디카복사미드(BYL719 또는 알펠리십으로도 알려짐); 2-(4-(2-(1-이소프로필-3-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일)-5,6-디하이드로벤조[f]이미다조[1,2-d][1,4]옥사제핀-9-일)-1H-피라졸-1-일)-2-메틸프로판아미드(GDC0032, RG7604 또는 타셀리십으로도 알려짐)를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
mTOR 억제제는 템시롤리무스(Torisel®); 리다포롤리무스(공식적으로 데페롤리무스로 알려짐, (1R,2R,4S)-4-[(2R)-2 [(1R,9S,12S,15R,16E,18R,19R,21R,23S,24E,26E,28Z,30S,32S,35R)-1,18-디하이드록시-19,30-디메톡시-15,17,21,23,29,35-헥사메틸-2,3,10,14,20-펜타옥소-11,36-디옥사-4-아자트리사이클로[30.3.1.04,9] 헥사트리아콘타-16,24,26,28-테트라엔-12-일]프로필]-2-메톡시사이클로헥실 디메틸포스피네이트, AP23573 및 MK8669로도 알려지고, PCT 공개 WO 03/064383호에 기재되어 있음); 에버롤리무스(Afinitor® 또는 RAD001); 라파마이신(AY22989, Sirolimus®); 시마피모드(CAS 164301-51-3); (5-{2,4-비스[(3S)-3-메틸모르폴린-4-일]피리도[2,3-d]피리미딘-7-일}-2-메톡시페닐)메탄올(AZD8055); 2-아미노-8-[트랜스-4-(2-하이드록시에톡시)사이클로헥실]-6-(6-메톡시-3-피리디닐)-4-메틸-피리도[2,3-d]피리미딘-7(8H)-온(PF04691502, CAS 1013101-36-4); 및 N 2 -[1,4-디옥소-4-[[4-(4-옥소-8-페닐-4H-1-벤조피란-2-일)모르폴리늄-4-일]메톡시]부틸]-L-아르기닐글리실-L-α-아스파르틸L-세린-(서열번호 928로 개시된 "L-아르기닐글리실-L-α-아스파르틸L-세린-"), 분자내 염(SF1126, CAS 936487-67-1)을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
CDK 억제제는 팔보시크립(PD-0332991, Ibrance®, 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-{[5-(1-피페라지닐)-2-피리디닐]아미노}피리도[2,3-d]피리미딘-7(8H)-온으로도 알려짐)을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 암의 치료를 필요로 하는 대상에게 본 발명의 항체 접합체를 하나 이상의 세포사멸 촉진제(IAP 억제제, BCL2 억제제, MCl1 억제제, TRAIL 제제, CHK 억제제를 포함하지만 이에 한정되지 않음)와 조합하여 투여해 암을 치료하는 방법을 제공한다.
예를 들어, IAP 억제제는 LCL161, GDC-0917, AEG-35156, AT406, 및 TL32711을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. IAP 억제제의 다른 예는 WO04/005284, WO 04/007529, WO05/097791, WO 05/069894, WO 05/069888, WO 05/094818, US2006/0014700, US2006/0025347, WO 06/069063, WO 06/010118, WO 06/017295, 및 WO08/134679(이들 모두는 본원에 참조로 포함됨)에 개시된 것들을 포함하지만 이들로 한정되지 않는다.
BCL-2 억제제는 4-[4-[[2-(4-클로로페닐)-5,5-디메틸-1-사이클로헥센-1-일]메틸]-1-피페라지닐]-N-[[4-[[(1R)-3-(4-모르폴리닐)-1-[(페닐티오)메틸]프로필]아미노]-3-[(트리플루오로메틸)설포닐]페닐]설포닐]벤즈아미드(ABT-263로도 알려지고 PCT 공개 WO 09/155386호에 기재되어 있음); 테트로카신 A; 안티마이신; 고시폴((-)BL-193); 오바토클락스; 에틸-2-아미노-6-사이클로펜틸-4-(1-시아노-2-에톡시-2-옥소에틸)-4H크로몬-3-카복실레이트(HA14-1); 오블리머센(G3139, Genasense®); Bak BH3 펩티드; (-)-고시폴 아세트산(AT-101); 4-[4-[(4'-클로로[1,1'-바이페닐]-2-일)메틸]-1-피페라지닐]-N-[[4-[[(1R)-3-(디메틸아미노)-1-[(페닐티오)메틸]프로필]아미노]-3-니트로페닐]설포닐]-벤즈아미드(ABT-737, CAS 852808-04-9); 및 나비토클락스(ABT-263, CAS 923564-51-6)를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
DR4(TRAILR1) 및 DR5(TRAILR2)를 포함하는 세포사멸촉진 수용체 작용제(PARA)는 둘라너민(AMG-951, RhApo2L/TRAIL); 마파투무맙(HRS-ETR1, CAS 658052-09-6); 렉사투무맙(HGS-ETR2, CAS 845816-02-6); 아포맙(Apomab®); 코나투무맙(AMG655, CAS 896731-82-1); 및 티가투주맙(CS1008, CAS 946415-34-5, Daiichi Sankyo에서 입수 가능)을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
체크포인트 키나제(CHK) 억제제는 7-하이드록시스타우로스포린(UCN-01); 6-브로모-3-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-5-(3R)-3-피페리디닐피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-아민(SCH900776, CAS 891494-63-6); 5-(3-플루오로페닐)-3-우레이도티오펜-2-카복실산 N-[(S)-피페리딘-3-일]아미드(AZD7762, CAS 860352-01-8); 4-[((3S)-1-아자바이사이클로[2.2.2]옥트-3-일)아미노]-3-(1H-벤즈이미다졸-2-일)-6-클로로퀴놀린-2(1H)-온(CHIR 124, CAS 405168-58-3); 7-아미노닥티노마이신(7-AAD), 이소그라눌라티미드, 디브로모하이메니알디신; N-[5-브로모-4-메틸-2-[(2S)-2-모르폴리닐메톡시]-페닐]-N'-(5-메틸-2-피라지닐)우레아(LY2603618, CAS 911222-45-2); 설포라판(CAS 4478-93-7, 4-메틸설피닐부틸 이소티오시아네이트); 9,10,11,12-테트라하이드로-9,12-에폭시-1H-디인돌로[1,2,3-fg:3',2',1'-kl]피롤로[3,4-i][1,6]벤조디아조신-1,3(2H)-디온(SB-218078, CAS 135897-06-2); 및 TAT-S216A(YGRKKRRQRRRLYRSPAMPENL(서열번호 33)), 및 CBP501((d-Bpa)sws(d-Phe-F5)(d-Cha)rrrqrr)을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
다른 구현예에서, 본 발명은 암의 치료를 필요로 하는 대상에게 본 발명의 항체 접합체를 하나 이상의 면역조절제(예를 들어, 보조자극 분자의 활성화제 또는 면역 체크포인트 분자의 억제제 중 하나 이상)와 조합하여 투여해 암을 치료하는 방법을 제공한다.
특정 구현예에서, 면역조절제는 보조자극 분자의 활성화제이다. 일 구현예에서, 보조자극 분자의 작용제는 OX40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1(CD11a/CD18), ICOS(CD278), 4-1BB(CD137), GITR, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LIGHT, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3, 또는 CD83 리간드의 작용제(예를 들어, 작용성 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 가용성 융합체)로부터 선택된다.
GITR 작용제
특정 구현예에서, 보조자극 분자의 작용제는 GITR 작용제이다. 일부 구현예에서, GITR 작용제는 GWN323(NVS), BMS-986156, MK-4166 또는 MK-1248(Merck), TRX518(Leap Therapeutics), INCAGN1876(Incyte/Agenus), AMG 228(Amgen), 또는 INBRX-110(Inhibrx)이다.
예시적인 GITR 작용제
일 구현예에서, GITR 작용제는 항-GITR 항체 분자이다. 일 구현예에서, GITR 작용제는 전체가 참조로 포함되는 2016년 4월 14일에 공개된 WO 2016/057846(발명의 명칭: "Compositions and Methods of Use for Augmented Immune Response and Cancer Therapy")에 기재된 항-GITR 항체 분자이다.
일 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 표 14에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역으로부터(예를 들어, 표 14에 개시된 MAB7의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열로부터)의, 또는 표 14에 나타낸 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 6개의 상보성 결정 영역(CDR)(또는 집합적으로 모든 CDR)을 포함한다. 일부 구현예에서, CDR은 (예를 들어, 표 14에 제시된 바와 같이) Kabat 정의를 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 (예를 들어, 표 14에 제시된 바와 같이) Chothia 정의를 따른다. 일 구현예에서, CDR 중 하나 이상(또는 집합적으로 모든 CDR)은 표 14에 나타낸 아미노산 서열, 또는 표 14에 나타낸 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열에 비해 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 이상의 변경, 예를 들어 아미노산 치환(예를 들어, 보존적 아미노산 치환) 또는 결실을 갖는다.
일 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 서열번호 909의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열번호 911의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 913의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열번호 914의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열번호 916의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 918의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, 각각의 서열은 표 14에 개시되어 있다.
일 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 서열번호 901의 아미노산 서열, 또는 서열번호 901과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 일 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 서열번호 902의 아미노산 서열, 또는 서열번호 902와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 서열번호 901의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 902의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 905의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열번호 905와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VH를 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 906의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열번호 906과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VL을 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 905의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VH 및 서열번호 906의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VL을 포함한다.
일 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 서열번호 903의 아미노산 서열, 또는 서열번호 903과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 서열번호 904의 아미노산 서열, 또는 서열번호 904와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 서열번호 903의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 904의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 907의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열번호 907과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 중쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 908의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열번호 908과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 907의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 중쇄 및 서열번호 908의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다.
본원에 기술된 항체 분자는, 전체가 참조로 포함되는 WO 2016/057846에 기재된 벡터, 숙주세포, 및 방법에 의해 제조될 수 있다.
Figure pct00525
Figure pct00526
Figure pct00527
다른 예시적인 GITR 작용제
일 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 BMS 986156 또는 BMS986156으로도 알려진 BMS-986156(Bristol-Myers Squibb)이다. BMS-986156 및 다른 항-GITR 항체는, 예를 들어 전체가 참조로 포함되는 US 9,228,016 및 WO 2016/196792에 개시되어 있다. 일 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는, 예를 들어 표 15에 개시된 BMS-986156의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열 중 하나 이상을 포함한다.
일 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 MK-4166 또는 MK-1248(Merck)이다. MK-4166, MK-1248, 및 다른 항-GITR 항체는, 예를 들어 전체가 참조로 포함되는 US 8,709,424, WO 2011/028683, WO 2015/026684, 및 문헌[Mahne et al. Cancer Res. 2017; 77(5):1108-1118]에 개시되어 있다. 일 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 MK-4166 또는 MK-1248의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열 중 하나 이상을 포함한다.
일 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 TRX518(Leap Therapeutics)이다. TRX518 및 다른 항-GITR 항체는, 예를 들어 전체가 참조로 포함되는 US 7,812,135, US 8,388,967, US 9,028,823, WO 2006/105021, 및 문헌[Ponte J et al. (2010) Clinical Immunology; 135:S96]에 개시되어 있다. 일 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 TRX518의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열 중 하나 이상을 포함한다.
일 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 INCAGN1876(Incyte/Agenus)이다. INCAGN1876 및 다른 항-GITR 항체는, 예를 들어 전체가 참조로 포함되는 US 2015/0368349 및 WO 2015/184099에 개시되어 있다. 일 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 INCAGN1876의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열 중 하나 이상을 포함한다.
일 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 AMG 228(Amgen)이다. AMG 228 및 다른 항-GITR 항체는, 예를 들어 전체가 참조로 포함되는 US 9,464,139 및 WO 2015/031667에 개시되어 있다. 일 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 AMG 228의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열 중 하나 이상을 포함한다.
일 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 INBRX-110(Inhibrx)이다. INBRX-110 및 다른 항-GITR 항체는, 예를 들어 전체가 참조로 포함되는 US 2017/0022284 및 WO 2017/015623에 개시되어 있다. 일 구현예에서, GITR 작용제는 INBRX-110의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열 중 하나 이상을 포함한다.
일 구현예에서, GITR 작용제(예를 들어, 융합 단백질)는 MEDI1873으로도 알려진 MEDI 1873(MedImmune)이다. MEDI 1873 및 다른 GITR 작용제는, 예를 들어 전체가 참조로 포함되는 US 2017/0073386, WO 2017/025610, 및 문헌[Ross et al. Cancer Res 2016; 76(14 Suppl): Abstract nr 561]에 개시되어 있다. 일 구현예에서, GITR 작용제는 MEDI 1873의 글루코코르티코이드-유도 TNF 수용체 리간드(GITRL)의 IgG Fc 도메인, 기능적 다중화 도메인, 및 수용체 결합 도메인 중 하나 이상을 포함한다.
추가로 알려진 GITR 작용제(예를 들어, 항-GITR 항체)는, 예를 들어 전체가 참조로 포함되는 WO 2016/054638에 기재된 것들을 포함한다.
일 구현예에서, 항-GITR 항체는 본원에 기재된 항-GITR 항체 중 하나와 동일한, GITR 상의 에피토프와 결합을 위해 경쟁하고/하거나 이에 결합하는 항체이다.
일 구현예에서, GITR 작용제는 GITR 신호전달 경로를 활성화하는 펩티드이다. 일 구현예에서, GITR 작용제는 불변 영역(예를 들어, 면역글로불린 서열의 Fc 영역)에 융합된 이뮤노어드헤신(immunoadhesin) 결합 단편(예를 들어, GITRL의 세포외 또는 GITR 결합 부분을 포함하는 이뮤노어드헤신 결합 단편)이다.
Figure pct00528
특정 구현예에서, 면역조절제는 면역 체크포인트 분자의 억제제이다. 일 구현예에서, 면역조절제는 PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, 및/또는 TGFR베타의 억제제이다. 일 구현예에서, 면역 체크포인트 분자의 억제제는 PD-1, PD-L1, LAG-3, TIM-3 또는 CTLA4, 또는 이들의 임의의 조합을 억제한다. 용어 "억제" 또는 "억제제"는 특정 파라미터, 예를 들어 소정의 분자, 예를 들어 면역 체크포인트 억제제의 활성의 감소를 포함한다. 예를 들어, 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50% 이상의 활성(예를 들어 PD-1 또는 PD-L1 활성)의 억제가 이 용어에 포함된다. 따라서, 억제는 100%일 필요는 없다.
억제 분자의 억제는 DNA, RNA, 또는 단백질 수준에서 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 억제 분자의 발현을 억제하기 위해 억제 핵산(예를 들어, dsRNA, siRNA, 또는 shRNA)이 사용될 수 있다. 다른 구현예에서, 억제 신호의 억제제는 억제 분자에 결합하는 폴리펩티드, 예를 들어 가용성 리간드(예를 들어, PD-1-Ig 또는 CTLA-4 Ig), 또는 항체 또는 이의 항원 결합 단편; 예를 들어, PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, 및/또는 TGFR 베타, 또는 이들의 조합에 결합하는 항체 또는 이의 단편(본원에서 "항체 분자"라고도 함)이다.
일 구현예에서, 항체 분자는 전장 항체 또는 이의 단편(예를 들어, Fab, F(ab')2, Fv, 또는 단쇄 Fv 단편(svFv))이다. 또 다른 구현예에서, 항체 분자는, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD, 및 IgE의 중쇄 불변 영역으로부터 선택되는, 구체적으로는, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4의 중쇄 불변 영역, 보다 구체적으로 IgG1 또는 IgG4(예를 들어, 인간 IgG1 또는 IgG4)의 중쇄 불변 영역으로부터 선택되는 중쇄 불변 영역(Fc)을 갖는다. 일 구현예에서, 중쇄 불변 영역은 인간 IgG1 또는 IgG4이다. 일 구현예에서, 불변 영역은 항체 분자의 특성을 바꾸기 위해 (예를 들어, Fc 수용체 결합, 항체 글리코실화, 시스테인 잔기의 수, 이펙터 세포 기능, 또는 보체 기능 중 하나 이상을 증가 또는 감소시키기 위해) 변경, 예를 들어 돌연변이된다.
특정 구현예에서, 항체 분자는 이중특이적 또는 다중특이적 항체 분자의 형태이다. 일 구현예에서, 이중특이적 항체 분자는 PD-1 또는 PD-L1에 대한 제1 결합 특이성, 및 TIM-3, LAG-3, 또는 PD-L2에 대한 제2 결합 특성, 예를 들어 제2 결합 특이성을 갖는다. 일 구현예에서, 이중특이적 항체 분자는 PD-1 또는 PD-L1 및 TIM-3에 결합한다. 다른 구현예에서, 이중특이적 항체 분자는 PD-1 또는 PD-L1 및 LAG-3에 결합한다. 다른 구현예에서, 이중특이적 항체 분자는 PD-1 및 PD-L1에 결합한다. 또 다른 구현예에서, 이중특이적 항체 분자는 PD-1 또는 PD-L2에 결합한다. 다른 구현예에서, 이중특이적 항체 분자는 TIM-3 및 LAG-3에 결합한다. 상기 분자들의 임의의 조합은 다중특이적 항체 분자, 예를 들어 PD-1 또는 PD-1에 대한 제1 결합 특이성, 및 TIM-3, LAG-3, 또는 PD-L2 중 둘 이상에 대한 제2 및 제3 결합 특이성을 포함하는 삼중특이적 항체에서 이루어질 수 있다.
특정 구현예에서, 면역조절제는 PD-1, 예를 들어 인간 PD-1의 억제제이다. 다른 구현예에서, 면역조절제는 PD-L1, 예를 들어 인간 PD-L1의 억제제이다. 일 구현예에서, PD-1 또는 PD-L1의 억제제는 PD-1 또는 PD-L1에 대한 항체 분자이다. PD-1 또는 PD-L1 억제제는 단독으로, 또는 다른 면역조절제와 조합하여, 예를 들어 LAG-3, TIM-3, 또는 CTLA4의 억제제와 조합하여 투여될 수 있다. 예시적 구현예에서, PD-1 또는 PD-L1의 억제제, 예를 들어 항-PD-1 또는 PD-L1 항체 분자는 LAG-3 억제제, 예를 들어 항-LAG-3 항체 분자와 조합하여 투여된다. 다른 구현예에서, PD-1 또는 PD-L1의 억제제, 예를 들어 항-PD-1 또는 PD-L1 항체 분자는 TIM-3 억제제, 예를 들어 항-TIM-3 항체 분자와 조합하여 투여된다. 또 다른 구현예에서, PD-1 또는 PD-L1의 억제제, 예를 들어 항-PD-1 항체 분자는 LAG-3 억제제, 예를 들어 항-LAG-3 항체 분자, 및 TIM-3 억제제, 예를 들어 항-TIM-3 항체 분자와 조합하여 투여된다.
PD-1 억제제(예를 들어, PD-L2, CTLA4, TIM3, LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, 및/또는 TGFR 중 하나 이상)와 면역조절제의 다른 조합도 본 발명에 속한다. 당해 분야에 알려지거나 본원에 개시된 임의의 항체 분자가 체크포인트 분자의 억제제의 상기 조합에 사용될 수 있다.
PD-1 억제제
일부 구현예에서, 본 발명의 항체 접합체는 PD-1 억제제와 조합하여 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 PDR001(Novartis), 니볼루맙(Bristol-Myers Squibb), 펨브롤리주맙(Merck & Co), 피딜리주맙(CureTech), MEDI0680(Medimmune), REGN2810(Regeneron), TSR-042(Tesaro), PF-06801591(Pfizer), BGB-A317(Beigene), BGB-108(Beigene), INCSHR1210(Incyte), 또는 AMP-224(Amplimmune)로부터 선택된다.
예시적인 PD-1 억제제
일 구현예에서, PD-1 억제제는 항-PD-1 항체 분자이다. 일 구현예에서, PD-1 억제제는 전체가 참조로 포함되는 2015년 7월 30일에 공개된 US 2015/0210769(발명의 명칭: "Antibody Molecules to PD-1 and Uses Thereof")에 기재된 항-PD-1 항체 분자이다.
일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 표 6에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역으로부터(예를 들어, 표 6에 개시된 BAP049-클론-E 또는 BAP049-클론-B의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열로부터)의, 또는 표6에 나타낸 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개의 상보성 결정 영역(CDR)(또는 집합적으로 모든 CDR)을 포함한다. 일부 구현예에서, CDR은 (예를 들어, 표 6에 제시된 바와 같이) Kabat 정의를 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 (예를 들어, 표 6에 제시된 바와 같이) Chothia 정의를 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 (예를 들어, 표 6에 제시된 바와 같이) Kabat 및 Chothia 모두의 조합된 CDR 정의를 따른다. 일 구현예에서, VH CDR1의 Kabat 및 Chothia CDR의 조합은 아미노산 서열 GYTFTTYWMH(서열번호 541)를 포함한다. 일 구현예에서, CDR 중 하나 이상(또는 집합적으로 모든 CDR)은 표 6에 나타낸 아미노산 서열, 또는 표 6에 나타낸 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열에 비해 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 이상의 변경, 예를 들어 아미노산 치환(예를 들어, 보존적 아미노산 치환) 또는 결실을 갖는다.
일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 서열번호 501의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열번호 502의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 503의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열번호 510의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열번호 511의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 512의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, 각각의 서열은 표 6에 개시되어 있다.
일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 524의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VHCDR1, 서열변호 525의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VHCDR2, 및 서열번호 526의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VHCDR3을 포함하는 VH; 및 서열번호 529의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VLCDR1, 서열번호 530의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VLCDR2, 및 서열번호 531의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VLCDR3을 포함하는 VL을 포함하며, 각각의 서열은 표 6에 개시되어 있다.
일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 서열번호 506의 아미노산 서열, 또는 서열번호 506과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 서열번호 520의 아미노산 서열, 또는 서열번호 520과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 서열번호 516의 아미노산 서열, 또는 서열번호 516과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 서열번호 506의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 520의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 서열번호 506의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 516의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 507의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열번호 507과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VH를 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 521 또는 517의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열번호 521 또는 517과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VL을 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 507의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VH 및 서열번호 521 또는 517의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VL을 포함한다.
일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 서열번호 508의 아미노산 서열, 또는 서열번호 508과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 서열번호 522의 아미노산 서열, 또는 서열번호 522와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 서열번호 518의 아미노산 서열, 또는 서열번호 518과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 서열번호 508의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 522의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 서열번호 508의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 518의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 509의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열번호 509와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 중쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 523 또는 519의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열번호 523 또는 519와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 509의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 중쇄 및 서열번호 523 또는 519의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다.
본원에 기술된 항체 분자는, 전체가 참조로 포함되는 US 2015/0210769에 기재된 벡터, 숙주세포, 및 방법에 의해 제조될 수 있다.
Figure pct00529
Figure pct00530
Figure pct00531
Figure pct00532
Figure pct00533
다른 예시적인 PD-1 억제제
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙(CAS 등록 번호: 946414-94-4)이다. 니볼루맙의 다른 명칭은 MDX-1106, MDX-1106-04, ONO-4538, BMS-936558, 또는 OPDIVO®를 포함한다. 니볼루맙은 PD1을 특이적으로 차단하는 완전한 인간 IgG4 단클론 항체이다. 니볼루맙(클론 5C4), 및 PD1에 특이적으로 결합하는 다른 인간 단클론 항체는 전체가 참조로 포함되는 미국 특허 8,008,449호 및 PCT 공개 WO2006/121168호에 개시되어 있다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는, 예를 들어 표 7에 개시된 니볼루맙의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열 중 하나 이상을 포함한다.
다른 구현예에서, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙이다. 펨브롤리주맙(상표명 KEYTRUDA, 이전 명칭 람브롤리주맙, Merck 3745, MK-3475, 또는 SCH-900475로도 알려짐)은 PD1에 결합하는 인간화 IgG4 단클론 항체이다. 펨브롤리주맙은, 예를 들어 전체가 참조로 포함되는 문헌[Hamid, O. et al. (2013) New England Journal of Medicine 369 (2): 134-44], PCT 공개 WO2009/114335호, 및 미국 특허 8,354,509호에 개시되어 있다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는, 예를 들어 표 7에 개시된 펨브롤리주맙의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열 중 하나 이상을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 피딜리주맙이다. 피딜리주맙(CT-011; Cure Tech)은 PD1에 결합하는 인간화 IgG1k 단클론 항체이다. 피딜리주맙 및 다른 인간화 항-PD-1 단클론 항체는, 전체가 참조로 포함되는 PCT 공개 WO2009/101611호에 개시되어 있다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는, 예를 들어 표 7에 개시된 피딜리주맙의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열 중 하나 이상을 포함한다.
다른 항-PD-1 항체는, 전체가 참조로 포함되는 미국 특허 8,609,089호, 미국 공개 2010028330호, 및/또는 미국 공개 20120114649호에 개시되어 있다. 다른 항-PD-1 항체는 AMP 514(Amplimmune)를 포함한다.
일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 AMP-514로도 알려진 MEDI0680(Medimmune)이다. MEDI0680 및 다른 항-PD-1 항체는, 전체가 참조로 포함되는 US 9,205,148 및 WO 2012/145493에 개시되어 있다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 MEDI0680의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열 중 하나 이상을 포함한다.
일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 REGN2810(Regeneron)이다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 REGN2810의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열 중 하나 이상을 포함한다.
일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 PF-06801591(Pfizer)이다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 PF-06801591의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열 중 하나 이상을 포함한다.
일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 BGB-A317 또는 BGB-108(Beigene)이다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 BGB-A317 또는 BGB-108의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열 중 하나 이상을 포함한다.
일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 INCSHR01210 또는 SHR-1210으로도 알려진 INCSHR1210(Incyte)이다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 INCSHR1210의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열 중 하나 이상을 포함한다.
일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 ANB011로도 알려진 TSR-042(Tesaro)이다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 TSR-042의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열 중 하나 이상을 포함한다.
추가로 알려진 항-PD-1 항체는, 예를 들어 전체가 참조로 포함되는 WO 2015/112800, WO 2016/092419, WO 2015/085847, WO 2014/179664, WO 2014/194302, WO 2014/209804, WO 2015/200119, US 8,735,553, US 7,488,802, US 8,927,697, US 8,993,731, 및 US 9,102,727에 기재된 것들을 포함한다.
일 구현예에서, 항-PD-1 항체는 본원에 기재된 항-PD-1 항체 중 하나와 동일한, PD-1 상의 에피토프와 결합을 위해 경쟁하고/하거나 이에 결합하는 항체이다.
일 구현예에서, PD-1 억제제는, 예를 들어 전체가 참조로 포함되는 US 8,907,053에 기재된 바와 같은, PD-1 신호전달 경로를 억제하는 펩티드이다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 불변 영역(예를 들어, 면역글로불린 서열의 Fc 영역)에 융합된 이뮤노어드헤신(예를 들어, PD-L1 또는 PD-L2의 세포외 또는 PD-1 결합 부분을 포함하는 이뮤노어드헤신)이다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 AMP-224(예를 들어, 전체가 참조로 포함되는 WO 2010/027827 및 WO 2011/066342에 개시된 B7-DCIg(Amplimmune))이다.
Figure pct00534
PD-L1 억제제
특정 구현예에서, 면역 체크포인트 분자의 억제제는 PD-L1의 억제제이다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항체 접합체는 PD-L1 억제제와 조합하여 투여된다. 일부 구현예에서, PD-L1 억제제는 FAZ053(Novartis), 아테졸리주맙(Genentech/Roche), 아벨루맙(Merck Serono and Pfizer), 더발루맙(MedImmune/AstraZeneca), 또는 BMS-936559(Bristol-Myers Squibb)로부터 선택된다.
예시적인 PD-L1 억제제
일 구현예에서, PD-L1 억제제는 항-PD-L1 항체 분자이다. 일 구현예에서, PD-L1 억제제는, 전체가 참조로 포함되는 2016년 4월 21일에 공개된 US 2016/0108123(발명의 명칭: "Antibody Molecules to PD-L1 and Uses Thereof")에 개시된 항-PD-L1 항체 분자이다.
일 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 표 8에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역으로부터(예를 들어, 표 8에 개시된 BAP058-클론 O 또는 BAP058-클론 N의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열로부터)의, 또는 표8에 나타낸 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개의 상보성 결정 영역(CDR)(또는 집합적으로 모든 CDR)을 포함한다. 일부 구현예에서, CDR은 (예를 들어, 표 8에 제시된 바와 같이) Kabat 정의를 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 (예를 들어, 표 8에 제시된 바와 같이) Chothia 정의를 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 (예를 들어, 표 8에 제시된 바와 같이) Kabat 및 Chothia 모두의 조합된 CDR 정의를 따른다. 일 구현예에서, VH CDR1의 Kabat 및 Chothia CDR의 조합은 아미노산 서열 GYTFTSYWMY(서열번호 647)를 포함한다. 일 구현예에서, CDR 중 하나 이상(또는 집합적으로 모든 CDR)은 표 8에 나타낸 아미노산 서열, 또는 표 8에 나타낸 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열에 비해 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 이상의 변경, 예를 들어 아미노산 치환(예를 들어, 보존적 아미노산 치환) 또는 결실을 갖는다.
일 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 서열번호 601의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열번호 602의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 603의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열번호 609의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열번호 610의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 611의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, 각각의 서열은 표 8에 개시되어 있다.
일 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 서열번호 628의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VHCDR1, 서열변호 629의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VHCDR2, 및 서열번호 630의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VHCDR3을 포함하는 VH; 및 서열번호 633의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VLCDR1, 서열번호 634의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VLCDR2, 및 서열번호 635의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VLCDR3을 포함하는 VL을 포함하며, 각각의 서열은 표 8에 개시되어 있다.
일 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 서열번호 606의 아미노산 서열, 또는 서열번호 606과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 일 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 서열번호 616의 아미노산 서열, 또는 서열번호 616과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 서열번호 620의 아미노산 서열, 또는 서열번호 620과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 일 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 서열번호 624의 아미노산 서열, 또는 서열번호 624와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 서열번호 606의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 616의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 서열번호 620의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 624의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 607의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열번호 607과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VH를 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 617의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열번호 617과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VL을 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 621의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열번호 621과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VH를 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 625의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열번호 625와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VL을 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 607의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VH 및 서열번호 617의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VL을 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 621의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VH 및 서열번호 625의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VL을 포함한다.
일 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 서열번호 608의 아미노산 서열, 또는 서열번호 608과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 서열번호 618의 아미노산 서열, 또는 서열번호 618과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 서열번호 622의 아미노산 서열, 또는 서열번호 622와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 서열번호 626의 아미노산 서열, 또는 서열번호 626과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 서열번호 608의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 618의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 서열번호 622의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 626의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 615의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열번호 615와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 중쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 619의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열번호 619와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 623의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열번호 623과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 중쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 627의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열번호 627과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 615의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 중쇄 및 서열번호 619의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 623의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 중쇄 및 서열번호 627의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다.
본원에 기술된 항체 분자는, 전체가 참조로 포함되는 US 2016/0108123에 기재된 벡터, 숙주세포, 및 방법에 의해 제조될 수 있다.
Figure pct00535
Figure pct00536
Figure pct00537
Figure pct00538
Figure pct00539
다른 예시적인 PD-L1 억제제
일부 구현예에서, PD-L1 억제제는 항-PD-L1 항체이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 억제제는, 본원에 개시된 서열(또는 이와 실질적으로 동일하거나 유사한 서열, 예를 들어 특정된 서열과 적어도 85%, 90%, 95% 이상 동일한 서열)을 갖는, 예를 들어 WO 2013/0179174에 개시된 YW243.55.S70, MPDL3280A, MEDI-4736, 또는 MDX-1105MSB-0010718C(A09-246-2라고도 함)로부터 선택된다.
일 구현예에서, PD-L1 억제제는 MDX-1105이다. BMS-936559로도 알려진 MDX-1105는 PCT 공개 WO 2007/005874호에 기재된 항-PD-L1 항체이다.
일 구현예에서, PD-L1 억제제는 YW243.55.S70이다. YW243.55.S70 항체는 PCT 공개 WO 2010/077634호에 기재된 항-PD-L1이다.
일 구현예에서, PD-L1 억제제는 아테졸리주맙으로도 알려진 MDPL3280A(Genentech/Roche), RG7446, RO5541267, YW243.55.S70, 또는 TECENTRIQ™이다. MDPL3280A는 PD-L1에 결합하는 인간 Fc 최적화된 IgG1 단클론 항체이다. MDPL3280A 및 PD-L1에 대한 다른 인간 단클론 항체는, 전체가 참조로 포함되는 미국 특허 7,943,743호 및 미국 공개 20120039906호에 개시되어 있다. 일 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는, 예를 들어 표 9에 개시된 아테졸리주맙의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열 중 하나 이상을 포함한다.
다른 구현예에서, PD-L2 억제제는 AMP-224이다. AMP-224는 PD1과 B7-H1(예를 들어 PCT 공개 WO2010/027827호 및 WO2011/066342호에 개시된 B7-DCIg; Amplimmune) 사이의 상호작용을 차단하는 PD-L2 Fc 융합 가용성 수용체이다.
일 구현예에서, PD-L1 억제제는 항-PD-L1 항체 분자이다. 일 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 MSB0010718C로도 알려진 아벨루맙(Merck Serono and Pfizer)이다. 아벨루맙 및 다른 항-PD-L1 항체는, 전체가 참조로 포함되는 WO 2013/079174에 개시되어 있다. 일 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는, 예를 들어 표 9에 개시된 아벨루맙의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열 중 하나 이상을 포함한다.
일 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 MEDI4736으로도 알려진 더발루맙(MedImmune/AstraZeneca)이다. 더발루맙 및 다른 항-PD-L1 항체는, 전체가 참조로 포함되는 US 8,779,108에 개시되어 있다. 일 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는, 예를 들어 표 9에 개시된 더발루맙의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열 중 하나 이상을 포함한다.
일 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 MDX-1105 또는 12A4로도 알려진 BMS-936559(Bristol-Myers Squibb)이다. BMS-936559 및 다른 항-PD-L1 항체는, 전체가 참조로 포함되는 US 7,943,743 및 WO 2015/081158에 개시되어 있다. 일 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는, 예를 들어 표 9에 개시된 BMS-936559의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열 중 하나 이상을 포함한다.
추가로 알려진 항-PD-L1 항체는, 예를 들어 전체가 참조로 포함되는 WO 2015/181342, WO 2014/100079, WO 2016/000619, WO 2014/022758, WO 2014/055897, WO 2015/061668, WO 2013/079174, WO 2012/145493, WO 2015/112805, WO 2015/109124, WO 2015/195163, US 8,168,179, US 8,552,154, US 8,460,927, 및 US 9,175,082에 기재된 것들을 포함한다.
일 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 본원에 기재된 항-PD-L1 항체 중 하나와 동일한, PD-L1 상의 에피토프와 결합을 위해 경쟁하고/하거나 이에 결합하는 항체이다.
Figure pct00540
LAG-3 억제제
특정 구현예에서, 면역 체크포인트 분자의 억제제는 LAG-3의 억제제이다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항체 접합체는 LAG-3 억제제와 조합하여 투여된다. 일부 구현예에서, LAG-3 억제제는 LAG525(Novartis), BMS-986016(Bristol-Myers Squibb), 또는 TSR-033(Tesaro)으로부터 선택된다.
예시적인 LAG-3 억제제
일 구현예에서, LAG-3 억제제는 항-LAG-3 항체 분자이다. 일 구현예에서, LAG-3 억제제는, 전체가 참조로 포함되는 2015년 9월 17일에 공개된 US 2015/0259420(발명의 명칭: "Antibody Molecules to LAG-3 and Uses Thereof")에 개시된 항-LAG-3 항체 분자이다.
일 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 표 10에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역으로부터(예를 들어, 표 10에 개시된 BAP050-클론 I 또는 BAP050-클론 J의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열로부터)의, 또는 표 10에 나타낸 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개의 상보성 결정 영역(CDR)(또는 집합적으로 모든 CDR)을 포함한다. 일부 구현예에서, CDR은 (예를 들어, 표 10에 제시된 바와 같이) Kabat 정의를 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 (예를 들어, 표 10에 제시된 바와 같이) Chothia 정의를 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 (예를 들어, 표 10에 제시된 바와 같이) Kabat 및 Chothia 모두의 조합된 CDR 정의를 따른다. 일 구현예에서, VH CDR1의 Kabat 및 Chothia CDR의 조합은 아미노산 서열 GFTLTNYGMN(서열번호 766)을 포함한다. 일 구현예에서, CDR 중 하나 이상(또는 집합적으로 모든 CDR)은 표 10에 나타낸 아미노산 서열, 또는 표 10에 나타낸 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열에 비해 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 이상의 변경, 예를 들어 아미노산 치환(예를 들어, 보존적 아미노산 치환) 또는 결실을 갖는다.
일 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 서열번호 701의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열번호 702의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 703의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열번호 710의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열번호 711의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 712의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, 각각의 서열은 표 10에 개시되어 있다.
일 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 서열번호 736 또는 737의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VHCDR1, 서열변호 738 또는 739의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VHCDR2, 및 서열번호 740 또는 741의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VHCDR3을 포함하는 VH; 및 서열번호 746 또는 747의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VLCDR1, 서열번호 748 또는 749의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VLCDR2, 및 서열번호 750 또는 751의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VLCDR3을 포함하는 VL을 포함하며, 각각의 서열은 표 10에 개시되어 있다. 일 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 서열번호 758 또는 737의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VHCDR1, 서열변호 759 또는 739의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VHCDR2, 및 서열번호 760 또는 741의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VHCDR3을 포함하는 VH; 및 서열번호 746 또는 747의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VLCDR1, 서열번호 748 또는 749의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VLCDR2, 및 서열번호 750 또는 751의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VLCDR3을 포함하는 VL을 포함하며, 각각의 서열은 표 10에 개시되어 있다.
일 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 서열번호 706의 아미노산 서열, 또는 서열번호 706과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 일 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 서열번호 718의 아미노산 서열, 또는 서열번호 718과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 서열번호 724의 아미노산 서열, 또는 서열번호 724와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 일 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 서열번호 730의 아미노산 서열, 또는 서열번호 730과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 서열번호 706의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 718의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 서열번호 724의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 730의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 707 또는 708의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열번호 707 또는 708과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VH를 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 719 또는 720의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열번호 719 또는 720과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VL을 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 725 또는 726의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열번호 725 또는 726과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VH를 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 731 또는 732의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열번호 731 또는 732와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VL을 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 707 또는 708의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VH 및 서열번호 719 또는 720의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VL을 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 725 또는 726의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VH 및 서열번호 731 또는 732의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VL을 포함한다.
일 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 서열번호 709의 아미노산 서열, 또는 서열번호 709와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 서열번호 721의 아미노산 서열, 또는 서열번호 721과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 서열번호 727의 아미노산 서열, 또는 서열번호 727과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 서열번호 733의 아미노산 서열, 또는 서열번호 733과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 서열번호 709의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 721의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 서열번호 727의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 733의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 716 또는 717의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열번호 716 또는 717과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 중쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 722 또는 723의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열번호 722 또는 723과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 728 또는 729의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열번호 728 또는 729와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 중쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 734 또는 735의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열번호 734 또는 735와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 716 또는 717의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 중쇄 및 서열번호 722 또는 723의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 728 또는 729의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 중쇄 및 서열번호 734 또는 735의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다.
본원에 기술된 항체 분자는, 전체가 참조로 포함되는 US 2015/0259420에 기재된 벡터, 숙주세포, 및 방법에 의해 제조될 수 있다.
Figure pct00541
Figure pct00542
Figure pct00543
Figure pct00544
Figure pct00545
Figure pct00546
Figure pct00547
Figure pct00548
Figure pct00549
다른 예시적인 LAG-3 억제제
일 구현예에서, LAG-3 억제제는 항-LAG-3 항체 분자이다. 일 구현예에서, LAG-3 억제제는 BMS986016으로도 알려진 BMS-986016(Bristol-Myers Squibb)이다. BMS-986016 및 다른 항-LAG-3 항체는, 전체가 참조로 포함되는 WO 2015/116539 및 US 9,505,839에 개시되어 있다. 일 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는, 예를 들어 표 11에 개시된 BMS-986016의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열 중 하나 이상을 포함한다.
일 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 TSR-033(Tesaro)이다. 일 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 TSR-033의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열 중 하나 이상을 포함한다.
일 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 IMP731 또는 GSK2831781(GSK and Prima BioMed)이다. IMP731 및 다른 항-LAG-3 항체는, 전체가 참조로 포함되는 WO 2008/132601 및 US 9,244,059에 개시되어 있다. 일 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는, 예를 들어 표 11에 개시된 IMP731의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열 중 하나 이상을 포함한다. 일 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 GSK2831781의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열 중 하나 이상을 포함한다.
일 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 IMP761(Prima BioMed)이다. 일 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 IMP761의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열 중 하나 이상을 포함한다.
추가로 알려진 항-LAG-3 항체는, 예를 들어 전체가 참조로 포함되는 WO 2008/132601, WO 2010/019570, WO 2014/140180, WO 2015/116539, WO 2015/200119, WO 2016/028672, US 9,244,059, US 9,505,839에 기재된 것들을 포함한다.
일 구현예에서, 항-LAG-3 항체는 본원에 기재된 항-LAG-3 항체 중 하나와 동일한, LAG-3 상의 에피토프와 결합을 위해 경쟁하고/하거나 이에 결합하는 항체이다.
일 구현예에서, 항-LAG-3 억제제는, 예를 들어 전체가 참조로 포함되는 WO 2009/044273에 개시된 가용성 LAG-3 단백질, 예를 들어 IMP321(Prima BioMed)이다.
Figure pct00550
TIM-3 억제제
특정 구현예에서, 면역 체크포인트 분자의 억제제는 TIM-3의 억제제이다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항체 접합체는 TIM-3 억제제와 조합하여 투여된다. 일부 구현예에서, TIM-3 억제제는 MGB453(Novartis) 또는 TSR-022(Tesaro)로부터 선택된다.
예시적인 TIM-3 억제제
일 구현예에서, TIM-3 억제제는 항-TIM-3 항체 분자이다. 일 구현예에서, TIM-3 억제제는, 전체가 참조로 포함되는 2015년 8월 6일에 공개된 US 2015/0218274(발명의 명칭: "Antibody Molecules to TIM-3 and Uses Thereof")에 개시된 항-TIM-3 항체 분자이다.
일 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 표 12에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역으로부터(예를 들어, 표 12에 개시된 ABTIM3-hum11 또는 ABTIM3-hum03의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열로부터)의, 또는 표 12에 나타낸 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개의 상보성 결정 영역(CDR)(또는 집합적으로 모든 CDR)을 포함한다. 일부 구현예에서, CDR은 (예를 들어, 표 12에 제시된 바와 같이) Kabat 정의를 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 (예를 들어, 표 12에 제시된 바와 같이) Chothia 정의를 따른다. 일 구현예에서, CDR 중 하나 이상(또는 집합적으로 모든 CDR)은 표 12에 나타낸 아미노산 서열, 또는 표 12에 나타낸 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열에 비해 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 이상의 변경, 예를 들어 아미노산 치환(예를 들어, 보존적 아미노산 치환) 또는 결실을 갖는다.
일 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 서열번호 801의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열번호 802의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 803의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열번호 810의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열번호 811의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 812의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, 각각의 서열은 표 12에 개시되어 있다. 일 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 서열번호 801의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열번호 820의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 803의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열번호 810의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열번호 811의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 812의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, 각각의 서열은 표 12에 개시되어 있다.
일 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 서열번호 806의 아미노산 서열, 또는 서열번호 806과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 일 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 서열번호 816의 아미노산 서열, 또는 서열번호 816과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 서열번호 822의 아미노산 서열, 또는 서열번호 822와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 일 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 서열번호 826의 아미노산 서열, 또는 서열번호 826과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 서열번호 806의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 816의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 서열번호 822의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 826의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 807의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열번호 807과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VH를 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 817의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열번호 817과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VL을 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 823의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열번호 823과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VH를 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 827의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열번호 827과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VL을 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 807의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VH 및 서열번호 817의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VL을 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 823의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VH 및 서열번호 827의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 VL을 포함한다.
일 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 서열번호 808의 아미노산 서열, 또는 서열번호 808과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 서열번호 818의 아미노산 서열, 또는 서열번호 818과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 서열번호 824의 아미노산 서열, 또는 서열번호 824와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 서열번호 828의 아미노산 서열, 또는 서열번호 828과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 서열번호 808의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 818의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 서열번호 824의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 828의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 809의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열번호 809와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 중쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 819의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열번호 819와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 825의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열번호 825와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 중쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 829의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열번호 829와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 809의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 중쇄 및 서열번호 819의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 825의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 중쇄 및 서열번호 829의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다.
본원에 기술된 항체 분자는, 전체가 참조로 포함되는 US 2015/0218274에 기재된 벡터, 숙주세포, 및 방법에 의해 제조될 수 있다.
Figure pct00551
Figure pct00552
Figure pct00553
Figure pct00554
다른 예시적인 TIM-3 억제제
일 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 TSR-022(AnaptysBio/Tesaro)이다. 일 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 TSR-022의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열 중 하나 이상을 포함한다. 일 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는, 예를 들어 표 13에 개시된 APE5137 또는 APE5121의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열 중 하나 이상을 포함한다. APE5137, APE5121, 및 다른 항-TIM-3 항체는, 전체가 참조로 포함되는 WO 2016/161270에 개시되어 있다.
일 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 항체 클론 F38-2E2이다. 일 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 F38-2E2의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열 중 하나 이상을 포함한다.
추가로 알려진 항-TIM-3 항체는, 예를 들어 전체가 참조로 포함되는 WO 2016/111947, WO 2016/071448, WO 2016/144803, US 8,552,156, US 8,841,418, 및 US 9,163,087에 기재된 것들을 포함한다.
일 구현예에서, 항-TIM-3 항체는 본원에 기재된 항-TIM-3 항체 중 하나와 동일한, TIM-3 상의 에피토프와 결합을 위해 경쟁하고/하거나 이에 결합하는 항체이다.
Figure pct00555
사이토카인
또 다른 구현예에서, 본 발명은 암의 치료를 필요로 하는 대상에게 본 발명의 항체 접합체를 하나 이상의 사이토카인(IL-2, IL-15, IL-7, 또는 IL21을 포함하지만 이에 한정되지 않음)과 조합하여 투여해 암을 치료하는 방법을 제공한다. 특정 구현예에서, 항체 접합체는 IL-15/IL-15Ra 복합체와 조합하여 투여된다. 일부 구현예에서, IL-15/IL-15Ra 복합체는 NIZ985(Novartis), ATL-803(Altor), 또는 CYP0150(Cytune)으로부터 선택된다.
예시적인 IL-15/IL-15Ra 복합체
일 구현예에서, 사이토카인은 IL-15 수용체 알파(IL-15Ra)의 가용성 형태와 복합체화된 IL-15이다. IL-15/IL-15Ra 복합체는 IL-15Ra의 가용성 형태에 공유 결합되거나 비공유 결합된 IL-15를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 인간 IL-15는 IL-15Ra의 가용성 형태에 비공유 결합된다. 특정 구현예에서, 조성물의 인간 IL-15는, 전체가 참조로 포함되는 WO 2014/066527에 기재된 바와 같이, 표 16의 서열번호 922의 아미노산 서열 또는 서열번호 922와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 인간 IL-15Ra의 가용성 형태는 표 16의 서열번호 923의 아미노산 서열 또는 서열번호 923과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 본원에 기술된 분자는, 전체가 참조로 포함되는 WO 2007084342에 기재된 벡터, 숙주세포, 및 방법에 의해 제조될 수 있다.
Figure pct00556
다른 예시적인 IL-15/IL-15Ra 복합체
일 구현예에서, IL-15/IL-15Ra 복합체는 IL-15/IL-15Ra Fc 융합 단백질(IL-15N72D:IL-15RaSu/Fc 가용성 복합체)인 ALT-803이다. ALT-803은, 전체가 참조로 포함되는 WO 2008/143794에 기재되어 있다. 일 구현예에서, IL-15/IL-15Ra Fc 융합 단백질은 표 17에 개시된 서열을 포함한다.
일 구현예에서, IL-15/IL-15Ra 복합체는 IL-15Ra의 스시 도메인에 융합된 IL-15(CYP0150, Cytune)를 포함한다. IL-15Ra의 스시 도메인은 IL-15Ra의 신호 펩티드 이후의 첫 번째 시스테인 잔기에서 시작하여 상기 신호 펩티드 이후의 네 번째 시스테인에서 종결되는 도메인을 지칭한다. IL-15Ra의 스시 도메인에 융합된 IL-15의 복합체는, 전체가 참조로 포함되는 WO 2007/04606 및 WO 2012/175222에 기재되어 있다. 일 구현예에서, IL-15/IL-15Ra 스시 도메인 융합체는 표 17에 개시된 서열을 포함한다.
Figure pct00557
또 다른 구현예에서, 본 발명은 암의 치료를 필요로 하는 대상에게 본 발명의 항체 접합체를 STING(인터페론 유전자의 자극제) 수용체의 하나 이상의 작용제, 예를 들어 WO 2014/189805에 기재된 화합물과 조합하여 투여해 암을 치료하는 방법을 제공한다.
다른 구현예에서, 본 발명은 암의 치료를 필요로 하는 대상에게 본 발명의 항체 접합체를 하나 이상의 혈관 신생 억제제, 예를 들어 베바시주맙(Avastin®), 엑시티닙(Inlyta®); 브리바닙 알라니네이트(BMS-582664, (S)-((R)-1-(4-(4-플루오로-2-메틸-1H-인돌-5-일옥시)-5-메틸피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일옥시)프로판-2-일)2-아미노프로파노에이트); 소라페닙(Nexavar®); 파조파닙(Votrient®); 수니티닙 말레이트(Sutent®); 세디라닙(AZD2171, CAS 288383-20-1); 바카테프(BIBF1120, CAS 928326-83-4); 포레티닙(GSK1363089); 텔라티닙(BAY57-9352, CAS 332012-40-5); 아파티닙(YN968D1, CAS 811803-05-1); 이마티닙(Gleevec®); 포나티닙(AP24534, CAS 943319-70-8); 티포자닙(AV951, CAS 475108-18-0); 레고라페닙(BAY73-4506, CAS 755037-03-7); 바탈라닙 디하이드로클로라이드(PTK787, CAS 212141-51-0); 브리바닙(BMS-540215, CAS 649735-46-6); 반데타닙(Caprelsa® 또는 AZD6474); 모테사닙 디포스페이트(AMG706, CAS 857876-30-3, N-(2,3-디하이드로-3,3-디메틸-1H-인돌-6-일)-2-[(4-피리디닐메틸)아미노]-3-피리딘카복사미드, PCT 공개 WO 02/066470호에 기재되어 있음); 린파닙(ABT869, CAS 796967-16-3); 카보잔티닙(XL184, CAS 849217-68-1); 레스타우르티닙(CAS 111358-88-4); N-[5-[[[5-(1,1-디메틸에틸)-2-옥사졸릴]메틸]티오]-2-티아졸릴]-4-피페리딘카복사미드(BMS38703, CAS 345627-80-7); (3R,4R)-4-아미노-1-((4-((3-메톡시페닐)아미노)피롤로[2,1-f]와 조합하여 투여해 암을 치료하는 방법을 제공한다.
다른 구현예에서, 본 발명은 암의 치료를 필요로 하는 대상에게 본 발명의 항체 접합체를 하나 이상의 열충격단백질 억제제, 예를 들어 타네스피마이신(KOS-953 및 17-AAG로도 알려진 17-알릴아미노-17-데메톡시겔다나마이신, SIGMA에서 입수 가능, 미국 특허 4,261,989호에 기재되어 있음); 레타스피마이신(IPI504), 가네테스피브(STA-9090); [6-클로로-9-(4-메톡시-3,5-디메틸피리딘-2-일메틸)-9H-퓨린-2-일]아민(BIIB021 또는 CNF2024, CAS 848695-25-0); 트랜스-4-[[2-(아미노카보닐)-5-[4,5,6,7-테트라하이드로-6,6-디메틸-4-옥소-3-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸-1-일]페닐]아미노]사이클로헥실 글리신 에스테르(SNX5422 또는 PF04929113, CAS 908115-27-5); 또는 17-디메틸아미노에틸아미노-17-데메톡시겔다나마이신(17-DMAG)과 조합하여 투여해 암을 치료하는 방법을 제공한다.
다른 구현예에서, 본 발명은 암의 치료를 필요로 하는 대상에게 본 발명의 항체 접합체를 하나 이상의 HDAC 억제제 또는 다른 후성적 조절제와 조합하여 투여해 암을 치료하는 방법을 제공한다. 예시적인 HDAC 억제제는 보니노스타트(Zolinza®); 로미뎁신(Istodax®); 트리코스타틴 A(TSA); 옥삼플라틴; 보리노스타트(Zolinza®, 수베로일아닐리드 하이드록삼산); 피록사미드(시베로일-3-아미노피리딘아미드 하이드록삼산); 트라폭신 A(RF-1023A); 트라폭신 B(RF-10238); 사이클로[(αS,2S)-α-아미노-η-옥소-2-옥시란옥타노일-O-메틸-D-티로실-L-이소류실-L-프롤릴](Cyl-1); 사이클로[(αS,2S)-α-아미노-η-옥소-2-옥시란옥타노일-O-메틸-D-티로실-L-이소류실-(2S)-2-피페리딘카보닐](Cyl-2); 사이클릭[L-알라닐-D-알라닐-(2S)-η-옥소-L-α-아미노옥시란옥타노일-D-프롤릴](HC-톡신); 사이클로[(αS,2S)-α-아미노-η-옥소-2-옥시란옥타노일-D-페닐알라닐-L-류실-(2S)-2-피페리딘카보닐](WF-3161); 클라미도신((S)-사이클릴(2-메틸알라닐-L-페닐알라닐-D-프롤릴-η-옥소-L-α-아미노옥시란옥타노일); 아피디신(사이클로(8-옥소-L-2-아미노데카노일-1-메톡시-L-트립토필-L-이소류실-D-2-피페리딘카보닐); 로미뎁신(Istodax®, FR-901228); 4-페닐부티레이트; 스피루코스타틴 A; 밀프로인(발프로산); 엔티노스타트(MS-275, N-(2-아미노페닐)-4-[N-(피리딘-3-일-메톡시카보닐)-아미노-메틸]-벤즈아미드); 데푸데신(4,5:8,9-디안하이드로-1,2,6,7,11-펜타데옥시-D-트레오-D-아이오도-운데카-1,6-디엔티올); 4-(아세틸아미노)-N-(2-아미노페닐)-벤즈아미드(CI-994로도 알려짐); N1-(2-아미노페닐)-N8-페닐-옥탄디아미드(BML-210으로도 알려짐); 4-(디메틸아미노)-N-(7-(하이드록시아미노)-7-옥소헵틸)벤즈아미드(M344로도 알려짐); (E)-3-(4-(((2-(1H-인돌-3-일)에틸)(2-하이드록시에틸)아미노)-메틸)페닐)-N-하이드록시아크릴아미드; 파노비노스타트(Farydak®); 모세티노스타트, 및 벨리노스타트(PXD101, Beleodaq®, 또는 (2E)-N-하이드록시-3-[3-(페닐설파모일)페닐]프로프-2-엔아미드로도 알려짐), 또는 키다미드(CS055 또는 HBI-8000, (E)-N-(2-아미노-5-플루오로페닐)-4-((3-(피리딘-3-일)아크릴아미도)메틸)벤즈아미드로도 알려짐)를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 다른 후성적 조절제는 EZH2(zeste homolog 2의 인핸서), EED(embryonic ectoderm development), 또는 LSD1(리신-특이적 히스톤 데메틸라제 1A 또는 KDM1A)의 억제제들을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 암의 치료를 필요로 하는 대상에게 본 발명의 항체 접합체를 하나 이상의 인돌아민-피롤 2,3-디옥시게나제(IDO)의 억제제, 예를 들어 인독시모드(NLG-8189로도 알려짐), α-사이클로헥실-5H-이미다조[5,1-a]이소인돌-5-에탄올(NLG919로도 알려짐), 또는 (4E)-4-[(3-클로로-4-플루오로아닐리노)-니트로소메틸리덴]-1,2,5-옥사디아졸-3-아민(INCB024360으로도 알려짐)과 조합하여 투여해 암을 치료하는 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 암의 치료를 필요로 하는 대상에게 본 발명의 항체 접합체를, 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 제어하거나 치료하는 하나 이상의 제제와 조합하여 투여해 암을 치료하는 방법을 제공한다. CRS에 대한 요법은 IL-6 억제제 또는 IL-6 수용체(IL-6R) 억제제(예를 들어, 토실리주맙 또는 실툭시맙), 바제독시펜, sgp130 차단제, 혈관작용 약제, 코르티코스테로이드, 면역억제제, 히스타민 H2 수용체 길항제, 해열제, 진통제(예를 들어, 아세트아미노펜), 및 기계적 인공호흡을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. CRS에 대한 예시적인 요법은 본원에 참조로 포함되는 국제 출원 WO2014011984에 기재되어 있다.
토실리주맙은 인간화된, 면역글로불린 G1카파 항-인간 IL-6R 단클론 항체이다. 토실리주맙은 막 결합된 가용성 IL-6 수용체(IL-6R)에 대한 IL-6의 결합을 차단하므로, 전형적인 트랜스-IL-6 신호전달을 억제한다. 구현예들에서, 토실리주맙은 약 4~12 mg/kg(예를 들어 성인의 경우 약 4~8 mg/kg, 소아의 경우 약 8~12 mg/kg)의 용량으로 투여(예를 들어 1시간에 걸쳐 투여)된다.
일부 구현예에서, CRS 치료제는 IL-6 신호전달의 억제제, 예를 들어 IL-6 또는 IL-6 수용체의 억제제이다. 일 구현예에서, 억제제는 항-IL-6 항체, 예를 들어 실툭시맙과 같은 항-IL-6 키메라 단클론 항체이다. 다른 구현예에서, 억제제는 IL-6 신호전달을 차단할 수 있는 가용성 gp130(sgp130) 또는 이의 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, sgp130 또는 이의 단편은 이종 도메인, 예를 들어 Fc 도메인에 융합되며, 예를 들어 FE301과 같은 gp130-Fc 융합 단백질이다. 구현들에서, IL-6 신호전달의 억제제는 항체, 예를 들어 IL-6 수용체에 대한 항체, 예컨대 사릴루맙, 올로키주맙(CDP6038), 엘실리모맙, 시루쿠맙(CNTO 136), ALD518/BMS-945429, ARGX-109, 또는 FM101을 포함한다. 일부 구현예에서, IL-6 신호전달의 억제제는 CPSI-2364와 같은 소분자를 포함한다.
예시적인 혈관작용 약제는 안지오텐신-11, 엔도텔린-1, 알파 아드레날린 작용제, 로스타노이드, 포스포디에스테라제 억제제, 엔도텔린 길항제, 심근수축제(예를 들어, 아드레날린, 도부타민, 이소프레날린, 에페드린), 혈관수축제(예를 들어, 노르아드레날린, 바소프레신, 메타라미놀, 바소프레신, 메틸렌블루), 혈관확장제(예를 들어, 밀리논, 레보시멘단), 및 도파민을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
예시적인 혈관수축제는 노르에피네프린, 도파민, 페닐에프린, 에피네프린, 및 바소프레신을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, 고용량 혈관수축제는 다음 중 하나 이상을 포함한다: 20 μg/분 이상의 노르에피네프린 단일요법, 10 μg/kg/분 이상의 도파민 단일요법, 200 μg/분 이상의 페닐에프린 단일요법, 및/또는 10 μg/분 이상의 에피네프린 단일요법. 일부 구현예에서, 대상이 바소프레신을 투여하고 있는 경우, 고용량 혈관수축제는 10 μg/분 이상의 바소프레신 + 노르에피네프린 당량을 포함하며, 노르에피네프린 당량 = [노르에피네프린(μg/분)] + [도파민(μg/kg/분)/2] + [에피네프린(μg/분)] + [페닐에프린(μg/분)/10]이다. 일부 구현예에서, 대상이 (바소프레신이 아닌) 복합 혈관수축제를 투여하고 있는 경우, 고용량 혈관수축제는 20 μg/분 이상의 노르에피네프린 당량을 포함하며, 노르에피네프린 당량 = [노르에피네프린(μg/분)] + [도파민(μg/kg/분)/2] + [에피네프린(μg/분)] + [페닐에프린(μg/분)/10]이다. 예를 들어, 상기 문헌을 참조.
일부 구현예에서, 저용량 혈관수축제는 고용량 혈관수축제에 대해 상기 열거된 하나 이상의 용량보다 낮은 용량으로 투여되는 혈관수축제이다.
예시적인 코르티코스테로이드는 덱사메타손, 하이드로코르티손, 및 메틸프레드니솔론을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 구현예들에서, 0.5 mg/kg의 덱사메타손 용량이 사용된다. 구현예들에서, 사용되는 덱사메타손의 최대 용량은 투여당 10 mg이다. 구현예들에서, 2 mg/kg/일의 메틸프레드니솔론 용량이 사용된다.
예시적인 면역억제제는 TNFα의 억제제 또는 IL-1의 억제제를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 구현예들에서, TNFα의 억제제는 항-TNFα 항체, 예를 들어 단클론 항체, 예를 들어 인플릭시맙을 포함한다. 구현예들에서, TNFα의 억제제는 가용성 TNFα 수용체(예를 들어, 에타너셉트)를 포함한다. 구현예들에서, IL-1 또는 IL-1R 억제제는 아나킨라를 포함한다.
예시적인 히스타민 H2 수용체 길항제는 시메티딘(Tagamet®), 라니티딘(Zantac®), 파모티딘(Pepcid®), 및 니자티딘(Axid®)을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
예시적인 해열제 및 진통제는 아세트아미노펜(Tylenol®), 이부프로펜, 및 아스피린을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
일부 구현예에서, 본 발명은 암의 치료를 필요로 하는 대상에게 본 발명의 항체 접합체를 전술한 억제제, 활성화제, 면역조절제, 작용제, 또는 조절제 중 임의의 둘 이상과 조합하여 투여해 암을 치료하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 본 발명의 항체 접합체는 하나 이상의 체크포인트 억제제 및/또는 하나 이상의 면역 활성화제와 조합하여 사용될 수 있다.
상기 치료 요법 외에도, 환자는 암세포의 제거 수술 및/또는 방사선 요법을 받을 수 있다.
약학적 조성물
본원에 기술된 하나 이상의 항체 접합체를 포함하는 약학적 또는 멸균 조성물을 제조하기 위해, 제공된 항체 접합체는 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제와 혼합될 수 있다.
치료제 및 진단제의 제형은 생리학적으로 허용 가능한 담체, 부형제, 또는 안정화제와, 예를 들어, 동결건조된 분말, 슬러리, 수용액, 로션, 또는 현탁액의 형태로 혼합하여 제조될 수 있다(예를 들어, 문헌[Hardman et al., Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, New York, N.Y., 2001; Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams, and Wilkins, New York, N.Y., 2000; Avis, et al. (eds.), Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY, 1993; Lieberman, et al. (eds.), Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY, 1990; Lieberman, et al. (eds.) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY, 1990; Weiner and Kotkoskie, Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., 2000] 참조).
일부 구현예에서, 본 발명의 항체 접합체를 포함하는 약학적 조성물은 동결건조 제제이다. 특정 구현예에서, 항체 접합체를 포함하는 약학적 조성물은 항체 접합체, 히스티딘, 수크로스, 및 폴리소르베이트 20을 함유하는 바이알 내의 동결건조물이다. 특정 구현예에서, 항체 접합체를 포함하는 약학적 조성물은 항체 접합체, 석신산나트륨, 및 폴리소르베이트 20을 함유하는 바이알 내의 동결건조물이다. 특정 구현예에서, 항체 접합체를 포함하는 약학적 조성물은 항체 접합체, 트레할로스, 시트레이트, 및 폴리소르베이트 8을 함유하는 바이알 내의 동결건조물이다. 동결건조물은 주사를 위해, 예를 들어 물, 염수로 재구성될 수 있다. 특정 구현예에서, 용액은 약 5.0의 pH에서 항체 접합체, 히스티딘, 수크로스, 및 폴리소르베이트 20를 포함한다. 다른 특정 구현예에서, 용액은 항체 접합체, 석신산나트륨, 폴리소르베이트 20을 포함한다. 다른 특정 구현예에서, 용액은 약 6.6의 pH에서 항체 접합체, 트레할로스 디하이드레이트, 시트레이트 디하이드레이트, 시트르산, 및 폴리소르베이트 8을 포함한다. 정맥내 투여를 위해, 수득된 용액은 통상적으로 담체 용액 중에 추가로 희석될 것이다.
치료제에 대한 투여 요법의 선택은 개체의 혈청 또는 조직 전환율, 증상의 수준, 개체의 면역원성, 및 생물학적 매트릭스 내 표적 세포의 접근성을 포함한 여러 인자에 따라 다르다. 특정 구현예에서, 투여 요법은 허용 가능한 부작용 수준에 맞게 환자에게 전달되는 치료제의 양을 최대화한다. 따라서, 전달되는 생물제제의 양은 부분적으로 특정 개체 및 치료되는 병태의 중증도에 따라 다르다. 항체, 사이토카인, 및 소분자의 적절한 용량을 선택하는 데 있어서 지침을 이용할 수 있다(예를 들어, 문헌[Wawrzynczak, Antibody Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, UK, 1996; Kresina (ed.), Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis, Marcel Dekker, New York, N.Y., 1991; Bach (ed.), Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases, Marcel Dekker, New York, N.Y., 1993; Baert et al., New Engl. J. Med. 348:601-608, 2003; Milgrom et al., New Engl. J. Med. 341:1966-1973, 1999; Slamon et al., New Engl. J. Med. 344:783-792, 2001; Beniaminovitz et al., New Engl. J. Med. 342:613-619, 2000; Ghosh et al., New Engl. J. Med. 348:24-32, 2003; Lipsky et al., New Engl. J. Med. 343:1594-1602, 2000] 참조).
적절한 용량의 결정은, 예를 들어 치료에 영향을 미치는 것으로 당해 분야에 알려지거나 의심되는, 또는 치료에 영향을 미칠 것으로 예상되는 파라미터 또는 인자를 이용해 임상의에 의해 이루어진다. 일반적으로, 투여량은 최적 용량보다 다소 적은 양으로 시작하여, 이후 임의의 부정적 부작용에 대해 원하는 또는 최적의 효과가 달성될 때까지 조금씩 증가된다. 중요한 진단 조치는, 예를 들어 염증의 증상 또는 생성된 염증성 사이토카인의 수준의 조치를 포함한다.
본 발명의 약학적 조성물 내 유효 성분의 실제 투여량 수준은, 환자에게 독성이 없으면서 특정 환자, 조성물, 및 투여 방식에 대해 원하는 치료 반응을 달성하는 데 효과적인 유효 성분의 양이 되도록 달라질 수 있다. 선택된 투여량 수준은 사용되는 본 발명의 특정 조성물, 또는 이의 에스테르, 염 또는 아미드의 활성, 투여 경로, 투여 시간, 사용되는 특정 화합물의 배출 속도, 치료 지속기간, 사용되는 특정 조성물과 조합하여 사용되는 다른 약물, 화합물 및/또는 물질, 치료받는 환자의 연령, 성별, 체중, 병태, 전반적 건강 및 이전 병력, 및 의학 분야에 알려진 유사 인자를 포함한 다양한 약동학적 인자에 따라 달라질 것이다.
본 발명의 항체 접합체를 포함하는 조성물은 연속 주입에 의해, 또는 예를 들어 1일, 1주의 간격으로, 또는 1주에 1~7회, 2주에 1회, 3주에 1회, 4주에 1회, 5주에 1회, 6주에 1회, 7주에 1회, 또는 8주에 1회 투여함으로써 제공될 수 있다. 투여는 정맥내로, 피하로, 국소적으로, 경구로, 비강으로, 직장으로, 근육내로, 뇌내로, 또는 흡입에 의해 제공될 수 있다. 구체적인 투여량 프로토콜은 바람직하지 않은 심각한 부작용을 피하는 최대 용량 또는 투여 빈도를 포함하는 것이다.
본 발명의 항체 접합체의 경우, 환자에게 투여되는 투여량은 환자 체중을 기준으로 0.0001 mg/kg 내지 100 mg/kg일 수 있다. 투여량은 환자 체중을 기준으로 0.001 mg/kg 내지 50 mg/kg, 0.005 mg/kg 내지 20 mg/kg, 0.01 mg/kg 내지 20 mg/kg, 0.02 mg/kg 내지 10 mg/kg, 0.05 내지 5 mg/kg, 0.1 mg/kg 내지 10 mg/kg, 0.1 mg/kg 내지 8 mg/kg, 0.1 mg/kg 내지 5 mg/kg, 0.1 mg/kg 내지 2 mg/kg, 0.1 mg/kg 내지 1 mg/kg일 수 있다. 항체 접합체의 투여량은 환자의 체중(kg)에 투여될 용량(mg/kg)을 곱하여 계산될 수 있다.
본 발명의 항체 접합체의 투여는 반복될 수 있고, 투여 간격은 1일 미만, 적어도 1일, 2일, 3일, 5일, 10일, 15일, 30일, 45일, 2개월, 75일, 3개월, 4개월, 5개월, 또는 적어도 6개월일 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항체 접합체는 매주 2회, 매주 1회, 2주에 1회, 3주에 1회, 4주에 1회, 또는 덜 빈번하게 투여된다. 특정 구현예에서, 본 발명의 항체 접합체의 투여는 2주마다 반복된다.
특정 환자에 대한 유효량은, 치료되는 병태, 환자의 전반적 건강, 투여의 방법, 경로 및 용량, 및 부작용의 심각성과 같은 인자에 따라 달라질 수 있다(예를 들어, 문헌[Maynard et al., A Handbook of SOPs for Good Clinical Practice, Interpharm Press, Boca Raton, Fla., 1996; Dent, Good Laboratory and Good Clinical Practice, Urch Publ., London, UK, 2001] 참조).
투여 경로는 국소 또는 피부 적용, 피하, 정맥내, 복강내, 뇌내, 근육내, 안구내, 동맥내, 뇌척수내, 병변내 투여에 의한 주사 또는 주입, 또는 서방형 시스템 또는 이식에 의한 것일 수 있다(예를 들어, 문헌[Sidman et al., Biopolymers 22:547-556, 1983; Langer et al., J. Biomed. Mater. Res. 15:167-277, 1981; Langer, Chem. Tech. 12:98-105, 1982; Epstein et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:3688-3692, 1985; Hwang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4030-4034, 1980]; 미국 특허 6,350,466호 및 6,316,024호 참조). 필요한 경우, 조성물은 또한, 주사 부위의 통증을 완화하기 위해 가용화제 또는 리도카인과 같은 국소 마취제를 포함하거나 둘 다 포함할 수 있다. 또한, 예를 들어 흡입기 또는 분무기, 및 에어로졸화제 함유 제형의 사용에 의해 폐 투여가 이용될 수도 있다. 각각 전체가 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 번호 6,019,968, 5,985,320, 5,985,309, 5,934,272, 5,874,064, 5,855,913, 5,290,540과 4,880,078; 및 PCT 공개 번호 WO 92/19244, WO 97/32572, WO 97/44013, WO 98/31346과 WO 99/66903을 참조.
이러한 추가 성분의 예는 당해 분야에 잘 알려져 있다.
제2 치료제, 예를 들어 사이토카인, 스테로이드, 화학요법제, 항생제, 또는 방사선을 이용한 동시 투여 또는 치료 방법은 당해 분야에 알려져 있다(예를 들어, 문헌[Hardman et al., (eds.) (2001) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10.sup.th ed., McGraw-Hill, New York, N.Y.; Poole and Peterson (eds.) (2001) Pharmacotherapeutics for Advanced Practice:A Practical Approach, Lippincott, Williams & Wilkins, Phila., Pa.; Chabner and Longo (eds.) (2001) Cancer Chemotherapy and Biotherapy, Lippincott, Williams & Wilkins, Phila., Pa.] 참조). 유효량의 치료제는 증상을 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 약 30%, 적어도 40%, 또는 적어도 50% 감소시킬 수 있다.
본 발명의 항체 접합체와 조합하여 투여될 수 있는 추가 요법(예를 들어, 예방제 또는 치료제)은 본 발명의 항체 접합체와 5분 미만의 간격, 30분 미만의 간격, 1시간의 간격, 약 1시간의 간격, 약 1 내지 약 2시간의 간격, 약 2시간 내지 약 3시간의 간격, 약 3시간 내지 약 4시간의 간격, 약 4시간 내지 약 5시간의 간격, 약 5시간 내지 약 6시간의 간격, 약 6시간 내지 약 7시간의 간격, 약 7시간 내지 약 8시간의 간격, 약 8시간 내지 약 9시간의 간격, 약 9시간 내지 약 10시간의 간격, 약 10시간 내지 약 11시간의 간격, 약 11시간 내지 약 12시간의 간격, 약 12시간 내지 18시간의 간격, 18시간 내지 24시간의 간격, 24시간 내지 36시간의 간격, 36시간 내지 48시간의 간격, 48시간 내지 52시간의 간격, 52시간 내지 60시간의 간격, 60시간 내지 72시간의 간격, 72시간 내지 84시간의 간격, 84시간 내지 96시간의 간격, 또는 96시간 내지 120시간의 간격을 두고 투여될 수 있다. 하나의 동일한 환자 방문 내에서 둘 이상의 요법이 투여될 수 있다.
특정 구현예에서, 본 발명의 항체 접합체는 생체 내에서 적절히 분포되도록 제형화될 수 있다. 예시적인 표적화 모이어티는 엽산 또는 비오틴(예를 들어, Low 등의 미국 특허 5,416,016호 참조); 만노시드(Umezawa et al., (1988) Biochem. Biophys. Res. Commun. 153:1038); 항체(Bloeman et al., (1995) FEBS Lett. 357:140; Owais et al., (1995) Antimicrob. Agents Chemother. 39:180); 계면활성제 단백질 A 수용체(Briscoe et al., (1995) Am. J. Physiol. 1233:134); p 120 (Schreier et al, (1994) J. Biol. Chem. 269:9090)를 포함한다(문헌[K. Keinanen; M. L. Laukkanen (1994) FEBS Lett. 346:123; J. J. Killion; I. J. Fidler (1994) Immunomethods 4:273]을 또한 참조).
본 발명은 본 발명의 항체 접합체를 포함하는 약학적 조성물을 단독으로 또는 다른 요법과 조합하여 이를 필요로 하는 대상에게 투여하기 위한 프로토콜을 제공한다. 본 발명의 병용 요법의 요법(예를 들어, 예방제 또는 치료제)은 대상에게 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 본 발명의 병용 요법의 요법(예를 들어, 예방제 또는 치료제)은 주기적으로 투여될 수도 있다. 요법(예를 들어, 제제) 중 하나에 대한 내성 발생의 감소, 요법(예를 들어, 제제) 중 하나의 부작용의 방지 또는 감소, 및/또는 요법의 효능 개선을 위해, 주기 요법은 일정 기간 동안의 제1 요법(예를 들어, 제1 예방제 또는 치료제)의 투여에 이은 일정 기간 동안의 제2 요법(예를 들어, 제2 예방제 또는 치료제)의 투여, 및 이러한 순차적 투여, 즉 사이클의 반복을 포함한다.
본 발명의 병용 요법의 요법(예를 들어, 예방제 또는 치료제)은 대상에게 병행적으로 투여될 수 있다.
용어 "병행적으로"는 요법(예를 들어, 예방제 또는 치료제)을 정확히 동시에 투여하는 것으로 제한되는 것이 아니라, 본 발명의 항체 또는 이의 단편을 포함하는 약학적 조성물이, 본 발명의 항체 또는 항체 접합체가 다른 요법(들)과 함께 작용하여 이들이 달리 투여되는 경우보다 증가된 이익을 제공할 수 있도록 일정 순서로 일정 시간 간격 내에 대상에게 투여되는 것을 의미한다. 예를 들어, 각각의 요법은 동시에 투여되거나 상이한 시점에 임의의 순서로 순차적으로 대상에게 투여될 수 있지만, 동시에 투여되지 않는 경우, 원하는 치료 또는 예방 효과를 제공하도록 충분히 가까운 시간 내에 투여되어야 한다. 각각의 요법은 임의의 적절한 형태로, 임의의 적합한 경로에 의해 개별적으로 대상에게 투여될 수 있다. 다양한 구현예에서, 요법(예를 들어, 예방제 또는 치료제)은 5분 미만의 간격, 15분 미만의 간격, 30분 미만의 간격, 1시간 미만의 간격, 약 1시간의 간격, 약 1시간 내지 약 2시간의 간격, 약 2시간 내지 약 3시간의 간격, 약 3시간 내지 약 4시간의 간격, 약 4시간 내지 약 5시간의 간격, 약 5시간 내지 약 6시간의 간격, 약 6시간 내지 약 7시간의 간격, 약 7시간 내지 약 8시간의 간격, 약 8시간 내지 약 9시간의 간격, 약 9시간 내지 약 10시간의 간격, 약 10시간 내지 약 11시간의 간격, 약 11시간 내지 약 12시간의 간격, 24시간의 간격, 48시간의 간격, 72시간의 간격, 또는 1주의 간격을 두고 대상에게 투여된다. 다른 구현예에서, 동일한 환자 방문 내에서 둘 이상의 요법(예를 들어, 예방제 또는 치료제)이 투여된다.
병용 요법의 예방제 또는 치료제는 동일한 약학적 조성물로 대상에게 투여될 수 있다. 대안적으로, 병용 요법의 예방제 또는 치료제는 개별 약학적 조성물로 대상에게 병행적으로 투여될 수 있다. 예방제 또는 치료제는 동일한 또는 상이한 투여 경로로 대상에게 투여될 수 있다.
본원에 기술된 실시예 및 구현예는 단지 예시를 위한 것이며, 이를 고려한 다양한 변형 및 변경은 당업자에게 제안될 것이고, 본 출원의 사상과 범위 및 첨부된 청구범위의 범위 내에 포함되어야 하는 것으로 이해된다.
실시예
본 발명은 다음의 실시예에서 추가로 설명되며, 이는 청구범위에 기재된 본 발명의 범위를 제한하려는 것이 아니다.
실시예 1
1-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)-1H-피롤-2,5-디온(C-1)의 합성
Figure pct00558
둥근 바닥 플라스크에 5-(2-메톡시-5-(피페라진-1-일메틸)벤질)-N4-펜틸-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2,4-디아민(Int-1, 1.0 당량), HBTU(1.2 당량), Huenig 염기(3.0 당량), 3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판산(1.2 당량), 및 DMSO(0.1 M)를 채웠다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 후, 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(ACN 중의 0.035% TFA:H2O 중의 0.05% TFA, C18 컬럼)로 정제하여 1-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)-1H-피롤-2,5-디온(C-1)을 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 1H NMR (CDCl3): δ 7.35 (d, 1H), 7.12 (d, 1H), 6.86 (d, 1H), 6.72 (s, 2H), 6.69 (d, 1H), 6.40 (s, 1H), 5.46 (t, 1H), 5.33 (s, 2H), 4.16 (s, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.82 (m, 6H), 3.40 (m, 4H), 3.21 (m, 2H), 2.67 (m, 4H), 1.39 (m, 2H), 1.26 (m, 2H), 1.14 (m, 2H), 0.86 (t, 3H). LRMS [M+H] = 589.3.
실시예 2
(2R)-2-아미노-3-((1-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)-2,5-디옥소피롤리딘-3-일)티오)프로판산(C-2)의 합성
Figure pct00559
둥근 바닥 플라스크에 1-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)-1H-피롤-2,5-디온(C-1, 1.0 당량)을 채우고, ACN-PBS 완충액(1:2, 0.02 M)에 용해시켰다. 이 혼합물에 DPBS 완충액(0.07 M)에 용해된 L-시스테인(2.0 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(ACN 중의 0.035% TFA:H2O 중의 0.05% TFA, C18 컬럼)로 정제하여 (2R)-2-아미노-3-((1-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)-2,5-디옥소피롤리딘-3-일)티오)프로판산(C-2)을 부분입체 이성질체의 혼합물의 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.36 (d, 1H), 7.28 (d, 1H), 7.05 (d, 1H), 6.81 (d, 1H), 6.24 (d, 1H), 5.57 (s, 2H), 4.26 (m, 2H), 4.02 (m, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.78 (m, 6H), 3.55 (m, 2H), 3.44 (m, 1H), 3.23 (m, 3H), 3.12 (m, 2H), 2.76 (m, 2H), 2.53 (m, 1H), 1.53 (m, 2H), 1.30 (m, 2H), 1.19 (m, 2H), 0.88 (t, 3H). LCMS [M+H] = 710.3.
실시예 3
(6R)-6-(2-((3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-2-옥소에틸)-5-옥소티오모르폴린-3-카복실산(C-3)의 합성
Figure pct00560
둥근 바닥 플라스크에 (2R)-2-아미노-3-((1-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)-2,5-디옥소피롤리딘-3-일)티오)프로판산(C-1)을 채우고, PBS 완충액(pH 7.5, 5 nM의 EDTA가있는 100 mM 인산) 및 아세토니트릴(1:1, 0.012 M)에 용해시켰다. 이어서, 반응 혼합물을 40℃에서 6시간 동안 교반하였다. 이 시점에, 미정제 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 RP-HPLC(ACN 중의 0.5M NH4OAc:H2O 중의 10mM NH4OAc, C18 컬럼)로 정제하여 (6R)-6-(2-((3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-2-옥소에틸)-5-옥소티오모르폴린-3-카복실산(C-3)을 구조 이성질체와 부분입체 이성질체의 고체 혼합물로서 수득하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.38 (d, 1H), 7.13 (s, 1H), 6.94 (d, 1H), 6.74 (d, 1H), 6.22 (d, 1H), 5.52 (s, 2H), 4.24 (m, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.82 (m, 1H), 3.67 (s, 2H), 3.60 (m, 4H), 3.54 (t, 2H), 3.43 (m, 2H), 3.18 (m, 1H), 3.01 (m, 1H), 2.87 (m, 1H), 2.58 (m 7H), 1.50 (m, 2H), 1.29 (m, 2H), 1.17 (m, 2H), 0.88 (t, 3H). LCMS [M+H] = 710.4.
실시예 4
3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-4-옥소부탄산(C-4a) 및 2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-4-옥소부탄산(C-4b)의 합성
Figure pct00561
둥근 바닥 플라스크에 1-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)-1H-피롤-2,5-디온(C-1, 1.0 당량), L-시스테인(1.0 당량), 및 PBS:MeCN(2:1, 0.008 M)을 채웠다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물에 1M NaOH(20.0 당량)를 첨가하였다. 이어서, 반응물을 추가로 3시간 동안 교반한 후, 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(MeCN 중의 0.5 mM NH4OAc:H2O 중의 10 mM NH4OAc, C18 컬럼)로 정제하여, 각각의 부분입체 이성질체(아래 화합물 (C-4aSR), (C-4aRR), (C-4bRR), 및 (C-4bRR))로서의 3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-4-옥소부탄산(C-4a)과 2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-4-옥소부탄산(C-4b)의 혼합물을 고체로서 수득하였다. 1H NMR (DMSO): δ 7.88 (s, 1), 7.26 (s, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.77 (d, 1H), 6.64 (s, 1H), 6.46 (s, 1H), 6.01 (s, 1H), 5.40 (s, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.36 (m, 17H), 2.29 (m, 8H), 1.90 (s, 2H), 1.39 (m, 2H), 1.21 (m, 2H), 1.09 (m, 2H), 0.81 (t, 3H). LRMS [M+H] = 728.4.
Figure pct00562
(S)-3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-4-옥소부탄산(C-4aSR);
Figure pct00563
(R)-3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-4-옥소부탄산(C-4aRR)
Figure pct00564
(R)-2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-4-옥소부탄산(C-4bRR)
Figure pct00565
(S)-2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-4-옥소부탄산(C-4bSR).
실시예 5
1-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)-1H-피롤-2,5-디온(C-5)의 합성
Figure pct00566
둥근 바닥 플라스크에 5-(2-메톡시-5-(피페라진-1-일메틸)벤질)-N4-펜틸-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2,4-디아민(Int-1, 1.0 당량), 2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)아세트알데히드(4.0 당량), 나트륨 시아노보로하이드라이드(13.0 당량), 및 MeOH(0.04 M)를 채웠다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(ACN 중의 0.035% TFA:H2O 중의 0.05% TFA, C18 컬럼)로 정제하여 1-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)-1H-피롤-2,5-디온(C-5)을 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 1H NMR (CDCl3): δ 7.32 (d, 1H), 7.12 (d, 1H), 6.87 (d, 1H), 6.72 (s, 2H), 6.70 (d, 1H), 6.41 (d, 1H), 5.45 (t, 1H), 5.31 (s, 2H), 4.07 (s, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.73 (t, 2H), 3.40 (m, 4H), 3.17 (m, 6H), 2.89 (m, 4H), 1.39 (m, 2H), 1.26 (m, 2H), 1.14 (m, 2H), 0.86 (t, 3H). LRMS [M+H] = 561.3.
참고: 2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)아세트알데히드는 둥근 바닥 플라스크에 1-(2-하이드록시에틸l)-1H-피롤-2,5-디온(1.0 당량), 데스-마틴 퍼아이오디난(1.5 당량), 및 DCM(0.1 M)을 첨가하고 실온에서 2시간 동안 교반하여 제조하였다. 이어서, 반응 혼합물을 여과하고, 휘발 성분을 진공에서 제거하고, 생성물을 추가 정제 없이 사용하였다.
실시예 6
(2S)-2-아미노-3-((1-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)-2,5-디옥소피롤리딘-3-일)티오)프로판산(C-6)의 합성
Figure pct00567
(2S)-2-아미노-3-((1-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)-2,5-디옥소피롤리딘-3-일)티오)프로판산
화합물 (C-1) 대신 화합물 (C-5)를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 2와 유사한 절차에 따라 (C-6)을 제조하여 (2S)-2-아미노-3-((1-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)-2,5-디옥소피롤리딘-3-일)티오)프로판산(C-6)을 부분입체 이성질체의 혼합물의 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.36 (d, 1H), 7.21 (m, 1H), 7.02 (m, 1H), 6.78 (m, 1H), 6.23 (d, 1H), 5.56 (m, 2H), 4.21 (m, 1H), 4.09 (s, 1H), 4.03 (m, 1H), 3.95 (m, 3H), 3.75 (m, 2H), 3.54 (t, 2H), 3.43 (m, 1H), 3.34 (m, 1H), 3.22 (m, 2H), 3.03 (m, 6H), 2.84 (m, 2H), 2.63 (m, 1H), 1.52 (m, 2H), 1.30 (m, 2H), 1.18 (m, 2H), 0.88 (t, 3H). LCMS [M+H] = 682.4.
실시예 7
(6R)-6-(2-((2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)아미노)-2-옥소에틸)-5-옥소티오모르폴린-3-카복실산(C-7)의 합성
Figure pct00568
(6R)-6-(2-((2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)아미노)-2-옥소에틸)-5-옥소티오모르폴린-3-카복실산
화합물 (C-1) 대신 화합물 (C-5)를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 3과 유사한 절차에 따라 (C-7)을 제조하여 (6R)-6-(2-((2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)아미노)-2-옥소에틸)-5-옥소티오모르폴린-3-카복실산(C-7)을 구조 이성질체와 부분입체 이성질체의 고체 혼합물로서 수득하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.37 (d, 1H), 7.10 (s, 1H), 6.91 (d, 1H), 6.72 (d, 1H), 6.22 (d, 1H), 5.51 (s, 2H), 4.13 (m, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.88 (m, 1H), 3.58 (s, 2H), 3.52 (t, 2H), 3.40 (m, 2H), 3.16 (m, 1H), 2.99 (m, 1H), 2.86 (m, 1H), 2.67 (m 10H), 1.49 (m, 2H), 1.29 (m, 2H), 1.17 (m, 2H), 0.88 (t, 3H). LCMS [M+H] = 682.3.
실시예 8
3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-8a) 및 2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-8b)의 합성
Figure pct00569
화합물 (C-1) 대신 화합물 (C-5)를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 4와 유사한 절차에 따라 3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-8a) 및 2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-8b)을 제조하여 각각의 부분입체 이성질체(아래 화합물 (C-8aSR), (C-8aRR), (C-8bRR), 및 (C-8bRR))로서의 화합물 (C-8a)와 (C-8b)의 혼합물을 고체로서 수득하였다. 1H NMR (DMSO): δ 7.81 (s, 1), 7.33 (s, 1H), 6.96 (s, 1H), 6.76 (d, 1H), 6.69 (s, 1H), 6.48 (s, 1H), 6.10 (s, 1H), 5.45 (s, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.37 (m, 17H), 2.35 (m, 8H), 1.90 (s, 2H), 1.41 (m, 2H), 1.20 (m, 2H), 1.08 (m, 2H), 0.80 (t, 3H). LRMS [M+H] = 700.4.
Figure pct00570
(S)-3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-8aSR);
Figure pct00571
(R)-3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-8aRR);
Figure pct00572
(R)-2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-8bRR);
Figure pct00573
(S)-2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-8bSR).
실시예 9
1-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에틸)-1H-피롤-2,5-디온(C-9)의 합성
Figure pct00574
(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판산 대신 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판산을 사용한 것을 제외하고는, 실시예 1과 유사한 절차에 따라 1-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에틸)-1H-피롤-2,5-디온(C-9)을 제조하여 1-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에틸)-1H-피롤-2,5-디온(C-9)을 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.37 (d, 1H), 7.27 (d, 1H), 7.06 (d, 1H), 6.82 (s, 2H), 6.81 (d, 1H), 6.24 (d, 1H), 5.58 (s, 2H), 4.38 (s, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.86 (m, 4H), 3.67 (m, 4H), 3.56 (m, 4H), 3.24 (m, 4H), 2.61 (t, 2H), 1.53 (m, 2H), 1.31 (m, 2H), 1.20 (m, 2H), 0.88 (t, 3H). LCMS [M+H] = 633.3.
실시예 10
3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-10a) 및 2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-10b)의 합성
Figure pct00575
화합물 (C-1) 대신 화합물 (C-9)를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 4와 유사한 절차에 따라 3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-10a) 및 2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-10b)을 제조하여 각각의 부분입체 이성질체(아래 화합물 (C-10aSR), (C-10aRR), (C-10bRR), 및 (C-10bRR))로서의 화합물 (C-10a)와 (C-10b)의 혼합물을 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(ACN 중의 0.035% TFA:H2O 중의 0.05% TFA, C18 컬럼)로 정제하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.35 (d, 1H), 7.29 (d, 1H), 7.05 (d, 1H), 6.77 (m, 1H), 6.23 (s, 1H), 5.56 (s, 2H), 4.32 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.86 (m, 3H), 3.72 (m, 3H), 3.54 (m, 10H), 3.21 (m, 4H), 2.67 (m, 4H), 1.52 (m, 2H), 1.30 (m, 2H), 1.19 (m, 2H), 0.88 (t, 3H). LCMS [M+H] = 772.4.
Figure pct00576
(S)-3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-10aSR);
Figure pct00577
(R)-3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-10aRR);
Figure pct00578
(R)-2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-10bRR);
Figure pct00579
(S)-2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-10bSR).
실시예 11
1-(2-(2-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)에톡시)에틸)-1H-피롤-2,5-디온(C-11)의 합성
Figure pct00580
3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판산 대신 3-(2-(2-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)에톡시)에톡시)프로판산을 사용한 것을 제외하고는, 실시예 1과 유사한 절차에 따라 1-(2-(2-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)에톡시)에틸)-1H-피롤-2,5-디온(C-11)을 제조하여 1-(2-(2-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)에톡시)에틸)-1H-피롤-2,5-디온(C-11)을 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.37 (d, 1H), 7.26 (d, 1H), 7.05 (d, 1H), 6.82 (d, 1H), 6.80 (s, 2H), 6.24 (d, 1H), 5.58 (s, 2H), 4.32 (s, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.74 (t, 2H), 3.64 (m, 2H), 3.58 (m, 12H), 3.64 (m, 4H), 3.20 (m, 4H), 2.68 (m, 2H), 1.53 (m, 2H), 1.32 (m, 2H), 1.20 (m, 2H), 0.88 (t, 3H). LCMS [M+H] = 721.4.
실시예 12
(2R)-2-아미노-19-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-(카복시메틸)-6,19-디옥소-10,13,16-트리옥사-4-티아-7-아자노나데칸-1-오익산(C-12a) 및 (19R)-19-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-16-카복시-1,14-디옥소-4,7,10-트리옥사-17-티아-13-아자이코산-20-오익산(C-12b)의 합성
Figure pct00581
화합물 (C-1) 대신 화합물 (C-11)을 사용한 것을 제외하고는, 실시예 4와 유사한 절차에 따라 (2R)-2-아미노-19-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-(카복시메틸)-6,19-디옥소-10,13,16-트리옥사-4-티아-7-아자노나데칸-1-오익산(C-12) 및 (19R)-19-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-16-카복시-1,14-디옥소-4,7,10-트리옥사-17-티아-13-아자이코산-20-오익산(C-12b)을 제조하여 각각의 부분입체 이성질체(아래 화합물 (C-12aSR), (C-12aRR), (C-12bRR), 및 (C-12bRR))로서의 화합물 (C-12a)와 (C-12b)의 혼합물을 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(ACN 중의 0.035% TFA:H2O 중의 0.05% TFA, C18 컬럼)로 정제하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.36 (d, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.06 (d, 1H), 6.79 (d, 1H), 6.24 (d, 1H), 5.57(s, 2H), 4.34 (s, 2H), 4.23 (m, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.86 (m, 4H), 3.76 (m, 4H), 3.58 (m, 14H), 3.27 (m, 4H), 3.22 (m, 2H), 2.84 (m, 1H), 2.71 (m, 2H), 1.53 (m, 2H), 1.31 (m, 2H), 1.19 (m, 2H), 0.88 (t, 3H). LCMS [M+H] = 860.4.
Figure pct00582
(2R,5S)-2-아미노-19-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-(카복시메틸)-6,19-디옥소-10,13,16-트리옥사-4-티아-7-아자노나데칸-1-오익산(C-12aSR);
Figure pct00583
(2R,5R)-2-아미노-19-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-(카복시메틸)-6,19-디옥소-10,13,16-트리옥사-4-티아-7-아자노나데칸-1-오익산(C-12aRR);
Figure pct00584
(16R,19R)-19-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-16-카복시-1,14-디옥소-4,7,10-트리옥사-17-티아-13-아자이코산-20-오익산(C-12bRR);
Figure pct00585
(16S,19R)-19-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-16-카복시-1,14-디옥소-4,7,10-트리옥사-17-티아-13-아자이코산-20-오익산(C-12bSR).
실시예 13
1-(21-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-21-옥소-3,6,9,12,15,18-헥사옥사헤니코실)-1H-피롤-2,5-디온(C-13)의 합성
Figure pct00586
3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판산 대신 1-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-3,6,9,12,15,18-헥사옥사헤니코산-21-오익산을 사용한 것을 제외하고는, 실시예 1과 유사한 절차에 따라 1-(21-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-21-옥소-3,6,9,12,15,18-헥사옥사헤니코실)-1H-피롤-2,5-디온(C-13)을 제조하여 1-(21-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-21-옥소-3,6,9,12,15,18-헥사옥사헤니코실)-1H-피롤-2,5-디온(C-13)을 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.38 (d, 1H), 7.27 (d, 1H), 7.07 (d, 1H), 6.84 (d, 1H), 6.82 (s, 2H), 6.25 (d, 1H), 5.59 (s, 2H), 4.36 (s, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.65 (m, 32H), 3.20 (m, 4H), 2.71 (m, 2H), 1.55 (m, 2H), 1.32 (m, 2H), 1.21 (m, 2H), 0.89 (t, 3H). LCMS [M+H] = 853.5.
실시예 14
(2R)-2-아미노-28-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-(카복시메틸)-6,28-디옥소-10,13,16,19,22,25-헥사옥사-4-티아-7-아자옥타코산-1-오익산(C-14a) 및 (28R)-28-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-25-카복시-1,23-디옥소-4,7,10,13,16,19-헥사옥사-26-티아-22-아자노나코산-29-오익산(C-14b)의 합성
Figure pct00587
화합물 (C-1) 대신 화합물 (C-13)을 사용한 것을 제외하고는, 실시예 4와 유사한 절차에 따라 (2R)-2-아미노-28-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-(카복시메틸)-6,28-디옥소-10,13,16,19,22,25-헥사옥사-4-티아-7-아자옥사코산-1-오익산(C-14a) 및 (28R)-28-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-25-카복시-1,23-디옥소-4,7,10,13,16,19-헥사옥사-26-티아-22-아자노나코산-29-오익산(C-14b)을 제조하여 각각의 부분입체 이성질체(아래 화합물 (C-14aSR), (C-14aRR), (C-14bRR), 및 (C-14bRR))로서의 화합물 (C-14a)와 (C-14b)의 혼합물을 고체 HCl 염으로서 수득하였다(RP-HPLC 정제 후, 생성물을 아세토니트릴에 용해시키고, 과량의 2N HCl로 처리한 다음, 동결건조시켰다). 1H NMR (CD3OD): δ 7.47 (s, 1H), 7.39 (d, 1H), 7.13 (d, 1H), 6.82 (d, 1H), 6.25 (d, 1H), 5.58 (s, 2H), 4.38 (s, 2H), 4.32 (m, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.77 (m, 4H), 3.76 (m, 4H), 3.64 (m, 28H), 3.55 (m, 5H), 3.31 (m, 4H), 3.12 (m, 1H), 2.86 (m, 1H), 2.72 (s, 2H), 2.62 (m, 1H), 1.54 (m, 2H), 1.31 (m, 2H), 1.20 (m, 2H), 0.89 (t, 3H). LCMS [M+H] = 992.4.
Figure pct00588
(2R,5S)-2-아미노-28-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-(카복시메틸)-6,28-디옥소-10,13,16,19,22,25-헥사옥사-4-티아-7-아자옥타코산-1-오익산(C-14aSR);
Figure pct00589
(2R,5R)-2-아미노-28-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-(카복시메틸)-6,28-디옥소-10,13,16,19,22,25-헥사옥사-4-티아-7-아자옥타코산-1-오익산(C-14aRR);
Figure pct00590
(25R,28R)-28-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-25-카복시-1,23-디옥소-4,7,10,13,16,19-헥사옥사-26-티아-22-아자노나코산-29-오익산(C-14bRR);
Figure pct00591
(25S,28R)-28-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-25-카복시-1,23-디옥소-4,7,10,13,16,19-헥사옥사-26-티아-22-아자노나코산-29-오익산(C-14bSR).
실시예 15
1-((1-(2-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)-1H-피롤-2,5-디온(C-15)의 합성
Figure pct00592
단계 1: 3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판산 대신 3-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)프로판산을 사용한 것을 제외하고는, 실시예 1과 유사한 절차에 따라 1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)프로판-1-온을 제조하였다.
단계 2: 둥근 바닥 플라스크에 1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)프로판-1-온(1.0 당량), CuSO4(0.25 당량), L-아스코르브산 나트륨 염(1.1 당량), 1-(프로프-2-인-1-일)-1H-피롤-2,5-디온(2.2 당량), 및 t-BuOH/물의 혼합물(1:1, v/v, 0.012 M)을 채웠다. 반응 혼합물을 진공 하에 두고, 이어서 N2로 플러싱하였다(이를 4회 더 반복하였다). 이어서, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(ACN 중의 0.035% TFA:H2O 중의 0.05% TFA, C18 컬럼)로 정제하여 1-((1-(2-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)-1H-피롤-2,5-디온(C-15)을 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.94 (s, 1H), 7.37 (d, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.05 (d, 1H), 6.85 (s, 2H), 6.81 (d, 1H), 6.24 (d, 1H), 5.57 (s, 2H), 4.73 (s, 2H), 4.52 (t, 2H), 4.36 (s, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.85 (t, 2H), 3.84 (m, 4H), 3.66 (t, 2H), 3.54 (m, 6H), 3.27 (m, 4H), 2.63 (t, 2H), 1.53 (m, 2H), 1.30 (m, 2H), 1.19 (m, 2H), 0.88 (t, 3H). LCMS [M+H] = 758.4.
실시예 16
3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(2-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-16a) 및 2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(2-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-16b)의 합성
Figure pct00593
Figure pct00594
화합물 (C-1) 대신 화합물 (C-15)를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 4와 유사한 절차에 따라 3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(2-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-16a) 및 2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(2-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-16b)을 제조하여 각각의 부분입체 이성질체(아래 화합물 (C-16aSR), (C-16aRR), (C-16bRR), 및 (C-16bRR))로서의 화합물 (C-16a)와 (C-16b)의 혼합물을 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(ACN 중의 0.035% TFA:H2O 중의 0.05% TFA, C18 컬럼)로 정제하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.91 (s, 1H), 7.36 (d, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.06 (d, 1H), 6.80 (d, 1H), 6.24 (d, 1H), 5.57 (s, 2H), 4.54 (s, 2H), 4.44 (m, 2H), 4.34 (s, 2H), 4.25 (m, 1H), 3.95 (s, 3H), 4.83 (m, 6H), 3.68 (t, 2H), 3.55 (m, 6H), 3.25 (m, 2H), 2.86 (m, 1H), 2.64 (m, 2H), 1.53 (m, 2H), 1.30 (m, 2H), 1.19 (m, 2H), 0.88 (t, 3H). LCMS [M+H] = 897.4
Figure pct00595
(S)-3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(2-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-16aSR);
Figure pct00596
(R)-3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(2-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-16aRR);
Figure pct00597
(R)-2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(2-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-16bRR);
Figure pct00598
(S)-2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(2-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-16bSR).
실시예 17
N-(2-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)-3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미드(C-17)의 합성
Figure pct00599
3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판산 대신 3-(2-(2-(3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미도)에톡시)에톡시)프로판산을 사용한 것을 제외하고는, 실시예 1과 유사한 절차에 따라 N-(2-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)-3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미드(C-17)를 제조하여 N-(2-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)-3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미드(C-17)를 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.37 (d, 1H), 7.28 (d, 1H), 7.06 (d, 1H), 6.82 (d, 1H), 6.80 (s, 2H), 6.24 (d, 1H), 5.58 (s, 2H), 4.37 (s, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.84 (m, 4H), 3.40 (m, 4H), 3.56 (m, 6H), 3.48 (t, 2H), 3.20 (m, 6H), 2.69 (t, 2H), 2.45 (t, 2H), 1.53 (m, 2H), 1.31 (m, 2H), 1.19 (m, 2H), 0.88 (t, 3H). LCMS [M+H] = 748.4.
실시예 18
(19R)-19-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-16-(카복시메틸)-1,11,15-트리옥소-4,7-디옥사-17-티아-10,14-디아자이코산-20-오익산(C-18a) 및 (20R)-20-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-17-카복시-1,11,15-트리옥소-4,7-디옥사-18-티아-10,14-디아자헤니코산-21-오익산(C-18b)의 합성
Figure pct00600
화합물 (C-1) 대신 화합물 (C-17)을 사용한 것을 제외하고는, 실시예 4와 유사한 절차에 따라 (19R)-19-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-16-(카복시메틸)-1,11,15-트리옥소-4,7-디옥사-17-티아-10,14-디아자이코산-20-오익산(C-18a) 및 (20R)-20-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-17-카복시-1,11,15-트리옥소-4,7-디옥사-18-티아-10,14-디아자헤니코산-21-오익산(C-18b)을 제조하여 각각의 부분입체 이성질체(아래 화합물 (C-18aSR), (C-18aRR), (C-18bRR), 및 (C-18bRR))로서의 화합물 (C-18a)와 (C-18b)의 혼합물을 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(ACN 중의 0.035% TFA:H2O 중의 0.05% TFA, C18 컬럼)로 정제하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.37 (d, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.07 (d, 1H), 6.80 (d, 1H), 6.25 (d, 1H), 5.57(s, 2H), 4.35 (s, 2H), 4.19 (m, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.89 (s, 3H), 3.76 (m, 3H), 3.60 (s, 4H), 3.53 (m, 4H), 3.41 (m, 1H), 3.36 (m, 2H), 3.22 (s, 2H), 2.70 (t, 2H), 2.42 (2H), 1.53 (m, 2H), 1.30 (m, 2H), 1.19 (m, 2H), 0.88 (t, 3H). LCMS [M+H] = 887.4.
Figure pct00601
(16S,19R)-19-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-16-(카복시메틸)-1,11,15-트리옥소-4,7-디옥사-17-티아-10,14-디아자이코산-20-오익산(C-18aSR);
Figure pct00602
(16R,19R)-19-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-16-(카복시메틸)-1,11,15-트리옥소-4,7-디옥사-17-티아-10,14-디아자이코산-20-오익산(C-18aRR);
Figure pct00603
(17R,20R)-20-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-17-카복시-1,11,15-트리옥소-4,7-디옥사-18-티아-10,14-디아자헤니코산-21-오익산(C-18bRR);
Figure pct00604
(17S,20R)-20-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-17-카복시-1,11,15-트리옥소-4,7-디옥사-18-티아-10,14-디아자헤니코산-21-오익산(C-18bSR).
실시예 19
5-(4-((4-(3-아미노프로필)피페라진-1-일)메틸)-2-메톡시벤질)-N4-펜틸-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2,4-디아민(C-19)의 합성
Figure pct00605
5-(4-((4-(3-아미노프로필)피페라진-1-일)메틸)-2-메톡시벤질)-N4-펜틸-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2,4-디아민(C-19)은 2단계 시퀀스에 의해 제조되었다. 제1 단계에서, 둥근 바닥 플라스크에 5-(2-메톡시-5-(피페라진-1-일메틸)벤질)-N4-펜틸-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2,4-디아민(Int-1, 1.0 당량), tert-부틸 (3-브로모프로필)카바메이트(1.2 당량), Huenig 염기(2.4 당량), 및 DMF(0.2 M)를 채웠다. 반응 혼합물을 60℃로 가열한 후, 18시간 동안 교반하였다. 이어서, 미정제 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 ISCO 크로마토그래피(0~20% MeOH:DCM)로 정제하여 중간체 tert-부틸 (3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)프로필)카바메이트를 수득하였다. 제2 단계에서, (Int-1)의 합성의 마지막 단계와 유사한 절차를 이용해 5-(4-((4-(3-아미노프로필)피페라진-1-일)메틸)-2-메톡시벤질)-N4-펜틸-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2,4-디아민(C-19)을 고체로서 수득하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.24 (d, 1H), 7.10 (d, 1H), 6.85 (d, 1H), 6.57 (d, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.42 (s, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.52 (s, 2H), 3.35 (m, 2H), 2.80 (t, 2H), 2.51 (m, 4H), 2.45 (m, 4H), 1.72 (m, 2H), 1.40 (m, 2H), 1.28 (m, 4H), 1.15 (m, 2H), 0.88 (t, 3H). LRMS [M+H] = 495.3.
실시예 20
1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)프로판-1-온(C-20)의 합성
Figure pct00606
tert-부틸 (3-브로모프로필)카바메이트 대신 2,2-디메틸-4-옥소-3,8,11-트리옥사-5-아자테트라데칸-14-오익산을 사용한 것을 제외하고는, 실시예 19의 절차에 따라 1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)프로판-1-온(C-20)을 제조하여 1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)프로판-1-온(C-20)을 고체로서 수득하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.24 (d, 1H), 7.11 (s, 1H), 6.86 (d, 1H), 6.57 (d, 1H), 6.12 (d, 1H), 5.42 (s, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.76 (t, 2H), 3.59 (m, 12H), 3.37 (t, 2H), 2.76 (t, 2H), 2.66 (t, 2H), 2.45 (m, 4H), 1.41 (m, 2H), 1.28 (m, 2H), 1.16 (m, 2H), 0.89 (t, 3H). LRMS [M+H] = 597.4.
실시예 21
N-(2-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)-2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)아세트아미드(C-21)의 합성
Figure pct00607
둥근 바닥 플라스크에 1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)프로판-1-온(C-20)(1.0 당량), DIEA(10.0 당량), 및 DMF(0.004 M)를 채우고, 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 이어서, 별도의 플라스크에 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)아세테이트(1.5 당량), DIEA(10.0 당량), 및 DMF(0.006 M)를 채웠다. 이 혼합물을 또한 실온에서 15분 동안 교반한 후, 두 용액을 혼합하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(ACN 중의 0.035% TFA:H2O 중의 0.05% TFA, C18 컬럼)로 정제하여 N-(2-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)-2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)아세트아미드(C-21)를 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 1H NMR (CD3CN): δ 7.30 (d, 1H), 7.05 (s, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.86 (d, 1H), 6.82 (s, 2H), 6.74 (s, 1H), 6.68 (d, 1H), 6.21 (d, 1H), 6.08 (t, 1H), 5.38 (s, 2H), 4.08 (s, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.70 (t, 2H), 3.41 (m, 14H), 3.29 (m, 2H), 2.55, (t, 2H), 2.38 (m, 4H), 1.41 (m, 2H), 1.26 (m, 2H), 1.13 (m, 2H), 0.85 (t, 3H). LCMS [M+H] = 734.4.
실시예 22
(2R)-2-아미노-19-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-(카복시메틸)-6,9,19-트리옥소-13,16-디옥사-4-티아-7,10-디아자노나데칸-1-오익산(C-22a) 및 (19R)-19-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-16-카복시-1,11,14-트리옥소-4,7-디옥사-17-티아-10,13-디아자이코산-20-오익산(C-22b)의 합성
Figure pct00608
화합물 (C-1) 대신 화합물 (C-21)을 사용한 것을 제외하고는, 실시예 4와 유사한 절차에 따라 (2R)-2-아미노-19-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-(카복시메틸)-6,9,19-트리옥소-13,16-디옥사-4-티아-7,10-디아자노나데칸-1-오익산(C-22a) 및 (19R)-19-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-16-카복시-1,11,14-트리옥소-4,7-디옥사-17-티아-10,13-디아자이코산-20-오익산(C-22b)을 제조하여 각각의 부분입체 이성질체(아래 화합물 (C-22aSR), (C-22aRR), (C-22bRR), 및 (C-22bRR))로서의 화합물 (C-22a)와 (C-22b)의 혼합물을 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(ACN 중의 0.035% TFA:H2O 중의 0.05% TFA, C18 컬럼)로 정제하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.37 (d, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.08 (d, 1H), 6.81 (d, 1H), 6.24 (d, 1H), 5.57(s, 2H), 4.34 (s, 2H), 4.20 (m, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.82 (m, 9H), 3.56 (m, 9H), 3.38 (m, 3H), 3.21 (m, 2H), 2.70 (t, 2H), 1.54 (m, 2H), 1.32 (m, 2H), 1.19 (m, 2H), 0.89 (t, 3H). LCMS [M+H] = 873.4.
Figure pct00609
(2R,5S)-2-아미노-19-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-(카복시메틸)-6,9,19-트리옥소-13,16-디옥사-4-티아-7,10-디아자노나데칸-1-오익산(C-22aSR);
Figure pct00610
(2R,5R)-2-아미노-19-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-(카복시메틸)-6,9,19-트리옥소-13,16-디옥사-4-티아-7,10-디아자노나데칸-1-오익산(C-22aRR);
Figure pct00611
(16R,19R)-19-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-16-카복시-1,11,14-트리옥소-4,7-디옥사-17-티아-10,13-디아자이코산-20-오익산(C-22bRR);
Figure pct00612
(16S,19R)-19-아미노-1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-16-카복시-1,11,14-트리옥소-4,7-디옥사-17-티아-10,13-디아자이코산-20-오익산(C-22bSR).
실시예 23
4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)-N-(2-(2-(2-(2-(4-((2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에톡시)에톡시)에톡시)에틸)피페라진-1-카복사미드(C-23)의 합성
Figure pct00613
둥근 바닥 플라스크에 5-(2-메톡시-5-(피페라진-1-일메틸)벤질)-N4-펜틸-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2,4-디아민(Int-1, 1 당량), 4-니트로펜틸 (2-(2-(2-(2-(4-((2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤로-1-일)메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카바메이트(0.9 당량), 트리에틸아민(3.0 당량), 및 DMSO(0.01 M)를 채웠다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(ACN 중의 0.035% TFA:H2O 중의 0.05% TFA, C18 컬럼)로 정제하여 4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)-N-(2-(2-(2-(2-(4-((2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1 -일)에톡시)에톡시)에톡시)에틸)피페라진-1-카복사미드(C-23)를 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.96 (s, 1H), 7.36 (d, 1H), 7.26 (d, 1H), 7.05 (d, 1H), 6.85 (s, 2H), 6.79 (d, 1H), 6.24 (d, 1H), 5.57 (s, 2H), 4.74 (s, 2H), 4.53 (t, 2H), 4.35 (s, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.86 (t, 2H), 3.85 (m, 4H), 3.54 (m, 12H), 3.22 (m, 6H), 1.53 (m, 2H), 1.30 (m, 2H), 1.19 (m, 2H), 0.88 (t, 3H). LCMS [M+H] = 817.4.
참고: 4-니트로페닐 (2-(2-(2-(2-(4-((2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카바메이트는 다음 절차를 이용해 제조하였다.
Figure pct00614
단계 1: CH2Cl2(0.05 M) 중의 2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에탄아민(1.0 당량)의 용액에 트리에틸아민(2.5 당량) 및 디-tert-부틸 디카보네이트(1.1 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고, 잔류물을 RP-C18 ISCO를 이용해 정제한 후 동결건조시켜 tert-부틸 (2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카바메이트를 수득하였다.
단계 2: t-BuOH(0.08 M) 중의 tert-부틸 (2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카바메이트(1 당량)와 1-(프로프-2-인-1-일)-1H-피롤-2,5-디온(2.0 당량)의 용액을 N2 가스로 5회 플러싱한 후, L-아스코르브산 나트륨 염(1.0 당량, H2O 중의 0.16 M) 및 CuSO4(0.2 당량, H2O 중의 0.03 M)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 다시 N2 가스로 5회 플러싱한 후 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 ISCO RP-C18로 정제하고 동결건조시켜 tert-부틸 (2-(2-(2-(2-(4-((2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에톡시)에톡시)에톡시)에틸) 카바메이트를 수득하였다.
단계 3: TFA(0.02 M) 중의 tert-부틸 (2-(2-(2-(2-(4-((2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에톡시)에톡시)에톡시)에틸) 카바메이트의 용액을 진공에서 농축시켜 1-((1-(23-아미노-3,6,9,12,15,18,21-헵타옥사트리코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)-1H-피롤-2,5-디온을 수득하였다. LCMS [M+H] = 354.2.
단계 4: CH2Cl2(0.01 M) 중의 1-((1-(2-(2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)에톡시)에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)-1H-피롤-2,5-디온(1 당량)의 용액에 4-니트로페닐 카보노클로리데이트(1.10 당량) 및 트리에틸아민(2.50 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고, RP-C18 ISCO로 정제한 후 동결건조시켜 4-니트로페닐 (2-(2-(2-(2-(4-((2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카바메이트를 수득하였다. LCMS [M+H] = 519.2.
실시예 24
3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-1-옥소-5,8,11-트리옥사-2-아자트리데칸-13-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-24a) 및 2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-1-옥소-5,8,11-트리옥사-2-아자트리데칸-13-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-24b)의 합성
Figure pct00615
화합물 (C-1) 대신 화합물 (C-23)을 사용한 것을 제외하고는, 실시예 4와 유사한 절차에 따라 3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-1-옥소-5,8,11-트리옥사-2-아자트리데칸-13-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-24a) 및 2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-1-옥소-5,8,11-트리옥사-2-아자트리데칸-13-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-24b)을 제조하여 각각의 부분입체 이성질체(아래 화합물 (C-24aSR), (C-24aRR), (C-24bRR), 및 (C-24bRR))로서의 화합물 (C-24a)와 (C-24b)의 혼합물을 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(ACN 중의 0.035% TFA:H2O 중의 0.05% TFA, C18 컬럼)로 정제하였다. LCMS [M+H] = 956.4.
Figure pct00616
(S)-3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-1-옥소-5,8,11-트리옥사-2-아자트리데칸-13-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-24aSR);
Figure pct00617
(R)-3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-1-옥소-5,8,11-트리옥사-2-아자트리데칸-13-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-24aRR);
Figure pct00618
(R)-2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-1-옥소-5,8,11-트리옥사-2-아자트리데칸-13-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-24bRR);
Figure pct00619
(S)-2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-1-옥소-5,8,11-트리옥사-2-아자트리데칸-13-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-24bSR).
실시예 25
1-(2-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에톡시)에틸)-1H-피롤-2,5-디온(C-25)의 합성
Figure pct00620
둥근 바닥 플라스크에 5-(2-메톡시-5-(피페라진-1-일메틸)벤질)-N4-펜틸-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2,4-디아민(Int-1, 1.0 당량), 2-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)아세트알데히드(4.0 당량), 나트륨 시아노보로하이드라이드(13.0 당량), 및 MeOH(0.04 M)를 채웠다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(ACN 중의 0.035% TFA:H2O 중의 0.05% TFA, C18 컬럼)로 정제하여 1-(2-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에톡시)에틸)-1H-피롤-2,5-디온(C-25)을 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.36 (d, 1H), 7.16 (d, 1H), 6.96 (d, 1H), 6.83 (s, 2H), 6.76 (d, 1H), 6.23 (d, 1H), 5.53 (s, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.84 (s, 2H), 3.78 (m, 2H), 3.71 (m, 2H), 3.64 (m, 2H), 3.54 (m, 2H), 3.35 (m, 4H), 3.27 (t, 2H), 2.95 (m, 4H), 1.52 (m, 2H), 1.30 (m, 2H), 1.19 (m, 2H), 0.88 (t, 3H). LCMS [M+H] = 605.4.
참고: 2-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)아세트알데히드는 둥근 바닥 플라스크에 1-(2-(2-하이드록시에톡시)에틸)-1H-피롤-2,5-디온(1.0 당량), 데스-마틴 퍼아이오디난(1.5 당량), 및 DCM(0.1 M)을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하여 제조하였다. 이어서, 반응 혼합물을 여과하고, 휘발 성분을 진공에서 제거하고, 생성물을 추가 정제 없이 사용하였다.
실시예 26
3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에톡시)에틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-26a) 및 2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에톡시)에틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-26b)의 합성
Figure pct00621
화합물 (C-1) 대신 화합물 (C-25)를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 4와 유사한 절차에 따라 3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에톡시)에틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-26) 및 2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에톡시)에틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-26b)을 제조하여 각각의 부분입체 이성질체(아래 화합물 (C-26aSR), (C-26aRR), (C-26bRR), 및 (C-26bRR))로서의 화합물 (C-26a)와 (C-26b)의 혼합물을 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(ACN 중의 0.035% TFA:H2O 중의 0.05% TFA, C18 컬럼)로 정제하였다. LCMS [M+H] = 744.4
Figure pct00622
(S)-3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에톡시)에틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-26aSR);
Figure pct00623
(R)-3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에톡시)에틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-26aRR);
Figure pct00624
(R)-2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에톡시)에틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-26bRR);
Figure pct00625
(S)-2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((2-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에톡시)에틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-26bSR).
실시예 27
1-((1-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)-1H-피롤-2,5-디온(C-27)의 합성
Figure pct00626
단계 1: 둥근 바닥 플라스크에 5-(2-메톡시-5-(피페라진-1-일메틸)벤질)-N4-펜틸-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2,4-디아민(Int-1, 1.0 당량), 2-아지도아세트알데히드(4.0 당량), 나트륨 시아노보로하이드라이드(32.0 당량), 및 MeOH(0.02 M)를 채웠다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(ACN 중의 0.035% TFA:H2O 중의 0.05% TFA, C18 컬럼)로 정제하여 5-(4-((4-(2-아지도에틸)피페라진-1-일)메틸)-2-메톡시벤질)-N4-펜틸-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2,4-디아민을 고체로서 수득하였다. LCMS [M+H] = 507.3.
단계 2: 둥근 바닥 플라스크에 5-(4-((4-(2-아지도에틸)피페라진-1-일)메틸)-2-메톡시벤질)-N4-펜틸-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2,4-디아민(1.0 당량), 1-(프로프-2-인-1-일)-1H-피롤-2,5-디온(2.3 당량), 및 t-BuOH와 물의 혼합물(2:1, v/v, 0.008 M)을 채웠다. 반응 혼합물을 진공 하에 탈기시키고 N2로 5회 플러싱하여 O2를 제거하였다. L-아스코르브산 나트륨 염(0.5 ml의 H2O 중 1.1 당량, 진공 하에 탈기시키고 N2로 5회 플러싱하여 O2 제거)을 주사기를 이용해 반응 혼합물에 첨가한 후, CuSO4(0.5 ml의 물 중 0.2 당량, 진공 하에 탈기시키고 N2로 5회 플러싱하여 O2 제거)를 주사기를 이용해 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(ACN 중의 0.035% TFA:H2O 중의 0.05% TFA, C18 컬럼)로 정제하여 1-((1-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)-1H-피롤-2,5-디온(C-27)을 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.95 (s, 1H), 7.36 (d, 1H), 7.22 (d, 1H), 7.02 (d, 1H), 6.86 (s, 2H), 6.79 (d, 1H), 6.23 (d, 1H), 5.57 (s, 2H), 4.76 (s, 2H), 4.52 (t, 2H), 4.26 (s, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.54 (t, 2H), 2.85 (m, 8H), 2.94 (t, 2H), 1.53 (m, 2H), 1.31 (m, 2H), 1.18 (m, 2H), 0.88 (t, 3H). LCMS [M+H] = 642.4.
참고: 2-아지도아세트알데히드는 둥근 바닥 플라스크에 2-아지도에탄올(1.0 당량), 데스-마틴 퍼아이오디난(1.5 당량), 및 DCM(0.20 M)을 첨가한 후, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하여 제조하였다. 이어서, 반응 혼합물을 여과하고, 휘발 성분을 진공에서 제거하고, 생성물을 추가 정제 없이 사용하였다.
실시예 28
3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-28a) 및 2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-28b)의 합성
Figure pct00627
화합물 (C-1) 대신 화합물 (C-27)을 사용한 것을 제외하고는, 실시예 4와 유사한 절차에 따라 3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-28a) 및 2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-28b)을 제조하여 각각의 부분입체 이성질체(아래 화합물 (C-28aSR), (C-28aRR), (C-28bRR), 및 (C-28bRR))로서의 화합물 (C-28a)와 (C-28b)의 혼합물을 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(ACN 중의 0.035% TFA:H2O 중의 0.05% TFA, C18 컬럼)로 정제하였다. LCMS [M+H] = 781.4
Figure pct00628
(S)-3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-28aSR);
Figure pct00629
(R)-3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-28aRR);
Figure pct00630
(R)-2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-28bRR);
Figure pct00631
(S)-2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-(((1-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)-4-옥소부탄산(C-28bSR).
실시예 29
N-(21-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-21-옥소-3,6,9,12,15,18-헥사옥사헤니코실)-3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미드(C-29)의 합성
Figure pct00632
3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판산 대신 1-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-3-옥소-7,10,13,16,19,22-헥사옥사-4-아자펜타코산-25-오익산을 사용한 것을 제외하고는, 실시예 1과 유사한 절차에 따라 N-(21-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-21-옥소-3,6,9,12,15,18-헥사옥사헤니코실)-3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미드(C-29)를 제조하여 N-(21-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-21-옥소-3,6,9,12,15,18-헥사옥사헤니코실)-3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미드(C-29)를 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 1H NMR (DMSO): δ 8.00 (t, 1H), 7.42 (d, 1H), 7.38 (s, 3H), 7.20 (s, 1H), 7.00 (s, 2H), 6.95 (s, 1H), 6.57 (s, 1H), 6.23 (d, 1H), 5.57 (s, 2H), 4.30 (s, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.59 (m, 4H), 3.49 (m, 28H), 3.35 (t, 2H), 3.14 (m, 2H), 2.32 (m, 2H), 1.45 (m, 2H), 1.21 (m, 2H), 1.09 (m, 2H), 0.81 (t, 3H). LRMS [M+H] = 924.4.
실시예 30
4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카복실레이트(C-30)의 합성
Figure pct00633
단계 1: 둥근 바닥 플라스크에 5-(2-메톡시-5-(피페라진-1-일메틸)벤질)-N4-펜틸-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2,4-디아민(Int-1, 1.0 당량), HOAT(2.0 당량), Huenig 염기(14.0 당량), (9H-플루오렌-9-일)메틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카보닐)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카바메이트(1.2 당량), 및 피리딘:DMF(1:4, 0.02 M)를 채웠다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반한 후, 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(ACN 중의 0.035% TFA:H2O 중의 0.05% TFA, C18 컬럼)로 정제하여 4-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카복실레이트를 고체로서 수득하였다. LCMS [M+H] = 1065.5.
단계 2: 4-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카복실레이트를 DMF(0.007 M)에 용해시키고 피페리딘(100.0 당량)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(ACN 중의 0.035% TFA:H2O 중의 0.05% TFA, C18 컬럼)로 정제하여 4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카복실레이트를 고체로서 수득하였다. LCMS [M+H] = 843.5.
단계 3: 둥근 바닥 플라스크에 4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카복실레이트(1.0 당량), 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판산(1.1 당량), Huenig 염기(5.0 당량), HATU(1.05 당량), 및 DMF(0.004 M)를 채웠다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(ACN 중의 0.035% TFA:H2O 중의 0.05% TFA, C18 컬럼)로 정제하여 4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카복실레이트(C-30)를 고체 TFA 염으로서 수득하였다. LCMS [M+H] = 1038.5.
실시예 31
(2R,3R,4R,5S)-6-(4-(((4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카보닐)옥시)메틸)-2-(3-(3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미도-메틸부탄아미도)페녹시)-3,4,5-트리하이드록시테트라하이드로-2H-피란-2-카복실산(C-31)의 합성
Figure pct00634
단계 1: 둥근 바닥 플라스크에 5-(2-메톡시-4-(피페라진-1-일메틸)벤질)-N4-펜틸-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2,4-디아민(Int-1, 1.0 당량), HOAT(2.0 당량), Huenig 염기(14.0 당량), (3S,4R,5R,6R)-2-(2-(3-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)아미노)프로판아미도)-4-((((4-니트로페녹시)카보닐)옥시)메틸)페녹시)-6-(메톡시카보닐)테트라하이드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트(1.2 당량), 및 피리딘:DMF(1:4, 0.015 M)를 채웠다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 이어서, 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(ACN 중의 0.035% TFA:H2O 중의 0.05% TFA, C18 컬럼)로 정제하여 (3S,4R,5R,6R)-2-(2-(3-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)아미노)프로판아미도)-4-(((4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카보닐)옥시)메틸)페녹시)-6-(메톡시카보닐)테트라하이드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트를 고체로서 수득하였다. LCMS [M+H] = 1212.4.
단계 2: (3S,4R,5R,6R)-2-(2-(3-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)아미노)프로판아미도)-4-(((4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카보닐)옥시)메틸)페녹시)-6-(메톡시카보닐)테트라하이드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트(1.0 당량)를 MeOH, THF, 및 물(2:1:0.4)(0.005 M)에 용해시켰다. 이어서, LiOH(8.0 당량)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(ACN 중의 0.035% TFA:H2O 중의 0.05% TFA, C18 컬럼)로 정제하여 (2R,3R,4R,5S)-6-(4-(((4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카보닐)옥시)메틸)-2-(3-아미노프로판아미도)페녹시)-3,4,5-트리하이드록시테트라하이드로-2H-피란-2-카복실산을 고체로서 수득하였다. LCMS [M+H] = 850.4.
단계 3: 둥근 바닥 플라스크에 (2R,3R,4R,5S)-6-(4-(((4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카보닐)옥시)메틸)-2-(3-아미노프로판아미도)페녹시)-3,4,5-트리하이드록시테트라하이드로-2H-피란-2-카복실산(1.0 당량), 3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판산(2.0 당량), Huenig 염기(6.0 당량), HBTU(1.8 당량), 및 DMF(0.003 M)를 채웠다. 반응물을 실온에서 15분 동안 계속 교반하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(ACN 중의 0.035% TFA:H2O 중의 0.05% TFA, C18 컬럼)로 정제하여 (2R,3R,4R,5S)-6-(4-(((4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카보닐)옥시)메틸)-2-(3-(3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미도-메틸부탄아미도)페녹시)-3,4,5-트리하이드록시테트라하이드로-2H-피란-2-카복실산(C-31)을 고체 TFA 염으로서 수득하였다. LCMS [M+H] = 1001.3.
실시예 32
(S)-1-(3-(4-(3-((2-아미노-4-((1-하이드록시헥산-2-일)아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)-1H-피롤-2,5-디온(C-32)의 합성
Figure pct00635
화합물 (Int-1) 대신 화합물 (Int-2)를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 1과 유사한 절차에 따라 (S)-1-(3-(4-(3-((2-아미노-4-((1-하이드록시헥산-2-일)아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)-1H-피롤-2,5-디온(C-32)을 제조하여 (S)-1-(3-(4-(3-((2-아미노-4-((1-하이드록시헥산-2-일)아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)-1H-피롤-2,5-디온(C-32)을 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.49 (d, 2H), 7.21 (d, 1H), 6.82 (s, 2H), 6.77 (d, 1), 6.28 (d, 1H), 5.67 (d, 1H), 5.51 (d, 1H), 4.36 (m, 1H), 4.18 (s, 2H), 3.98 (s, 3H), 3.76 (t, 2H), 3.54 (dd, 1H), 3.46 (dd, 1H), 3.16 (m, 4H), 3.05 (m, 4H), 2.71 (t, 2H), 1.48 (m, 1H), 1.26 (m, 3H), 1.05 (m, 1H), 0.84 (t, 3H). LRMS [M+H] = 619.4.
실시예 33
1-(3-(4-(3-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)-1H-피롤-2,5-디온(C-33)의 합성
Figure pct00636
화합물 (Int-1) 대신 화합물 (Int-3)을 사용한 것을 제외하고는, 실시예 1과 유사한 절차에 따라 1-(3-(4-(3-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)-1H-피롤-2,5-디온(C-33)을 제조하여 1-(3-(4-(3-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)-1H-피롤-2,5-디온(C-33)을 고체 TFA 염으로서 수득하였다. LRMS [M+H] = 589.3.
실시예 34
3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((3-(4-(3-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-4-옥소부탄산(C-34a) 및 2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((3-(4-(3-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-4-옥소부탄산(C-34b)의 합성
Figure pct00637
화합물 (C-1) 대신 화합물 (C-33)을 사용한 것을 제외하고는, 실시예 4와 유사한 절차에 따라 3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((3-(4-(3-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-4-옥소부탄산(C-34) 및 2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((3-(4-(3-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-4-옥소부탄산(C-34b)을 제조하여 각각의 부분입체 이성질체(아래 화합물 (C-34aSR), (C-34aRR), (C-34bRR), 및 (C-34bRR))로서의 화합물 (C-34a)와 (C-34b)의 혼합물을 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(ACN 중의 0.035% TFA:H2O 중의 0.05% TFA, C18 컬럼)로 정제하였다. 1H NMR (DMSO): δ 7.51 (s, 2H), 7.39 (m, 2H), 7.27 (d, 1H), 7.15 (d, 1H), 6.59 (s, 1H), 6.22 (t, 1H), 5.56 (s, 2H), 3.86 (s, 4H), 3.66 (m, 3H), 3.42 (m, 8H), 3.25 (m, 4H), 3.08 (m, 2H), 2.81 (m, 3H), 2.65 (m, 1H), 1.43 (m, 2H), 1.22 (m, 3H), 1.07 (m, 2H), 0.83 (t, 3H). LCMS [M+H]= 728.3
Figure pct00638
(S)-3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((3-(4-(3-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-4-옥소부탄산(C-34aSR);
Figure pct00639
(R)-3-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((3-(4-(3-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-4-옥소부탄산(C-34aRR);
Figure pct00640
(R)-2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((3-(4-(3-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-4-옥소부탄산(C-34bRR);
Figure pct00641
(S)-2-(((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)-4-((3-(4-(3-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-4-옥소부탄산(C-34bSR).
실시예 35
1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-2-(아미노옥시)에타논(C-35)의 합성
Figure pct00642
단계 1: 둥근 바닥 플라스크에 5-(2-메톡시-5-(피페라진-1-일메틸)벤질)-N4-펜틸-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2,4-디아민(Int-1, 1.0 당량), 2-(((tert-부톡시카보닐)아미노)옥시)아세트산(1.1 당량), HATU(1.05 당량), Huenig 염기(5.0 당량), 및 DMF(0.2 M)를 채웠다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반한 후, 미정제 반응 혼합물을 ISCO 크로마토그래피(0~20% MeOH:DCM)로 정제하여 tert-부틸 2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-2-옥소에톡시카바메이트를 수득하였다.
단계 2: tert-부틸 2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-2-옥소에톡시카바메이트(1.0 당량), 및 DCM(0.1 M)로 채워진 둥근 바닥 플라스크에 HCl(20.0 당량, 디옥산 중의 4M)을 0℃에서 첨가하였다. 빙점조를 제거하고 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 휘발 성분을 진공에서 제거하였다. 생성된 잔류물에 MeOH(8% NH4OH 함유)를 첨가하고, 휘발 성분을 진공에서 제거하였다. 이를 2회 더 반복하였다. 이어서, 미정제 반응 혼합물을 ISCO 크로마토그래피(0~10% MeOH(8% NH4OH):DCM)로 정제하여 1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-2-(아미노옥시)에타논(C-35)을 고체로서 수득하였다. 1H NMR (CDCl3): δ 7.12 (d, 1H), 7.00 (s, 1H), 6.90 (s, 1H), 6.69 (d, 1H), 6.38 (d, 1H), 5.52 (t, 1H), 5.30 (s, 2H), 4.35 (s, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.64 (s, 2H), 3.52 (m, 2H), 3.38 (m, 4H), 2.44 (m, 4H), 1.62 (s, 2H), 1.45 (m, 2H), 1.38 (m, 2H), 1.25 (m, 2H), 1.12 (m, 2H), 0.87 (t, 3H). LRMS [M+H] = 511.4.
실시예 36
1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-(2-아미노에톡시)프로판-1-온(C-36)의 합성
Figure pct00643
2-(((tert-부톡시카보닐)아미노)옥시)아세트산 대신 3-(2-((tert-부톡시카보닐)아미노)에톡시)프로판산을 사용한 것을 제외하고는, 실시예 35와 유사한 절차에 따라 1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-(2-아미노에톡시)프로판-1-온(C-36)을 제조하여 1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-(2-아미노에톡시)프로판-1-온(C-36)을 고체로서 수득하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.26 (d, 1H), 7.09 (d, 1H), 6.86 (d, 1H), 6.59 (d, 1H), 6.13 (d, 1H), 5.43 (s, 2H), 4.57 (s, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.73 (t, 2H), 3.58 (m, 4H), 3.54 (m, 2H), 3.37 (m, 2H), 2.93 (t, 2H), 2.66 (m, 2H), 2.44 (m, 4H), 1.41 (m, 2H), 1.27 (m, 2H), 1.15 (m, 2H), 0.87 (t, 3H). LRMS [M+H] = 553.4.
실시예 37
N-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에틸)-2-(아미노옥시)아세트아미드(C-37)의 합성
Figure pct00644
Int-1 대신 1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-(2-아미노에톡시)프로판-1-온(C-36)을 사용한 것을 제외하고는, 실시예 35와 유사한 절차에 따라 N-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에틸)-2-(아미노옥시)아세트아미드(C-37)를 제조하여 N-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에틸)-2-(아미노옥시)아세트아미드(C-37)를 고체로서 수득하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.27 (d, 1H), 7.09 (d, 1H), 6.86 (d, 1H), 6.59 (d, 1H), 6.13 (d, 1H), 5.44 (s, 2H), 4.08 (s, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.72 (t, 2H), 3.56 (m, 8H), 3.40 (m, 4H), 2.64 (t, 2H), 2.44 (m, 4H), 1.43 (m, 2H), 1.27 (m, 2H), 1.14 (m, 2H), 0.87 (t, 3H). LRMS [M+H] = 626.4.
실시예 38
(S)-1-(4-(3-((2-아미노-4-((1-하이드록시헥산-2-일)아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-2-(아미노옥시)에타논(C-38)의 합성
Figure pct00645
화합물 (Int-1) 대신 화합물 (Int-2)를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 35와 유사한 절차에 따라 (S)-1-(4-(3-((2-아미노-4-((1-하이드록시헥산-2-일)아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-2-(아미노옥시)에타논(C-38)을 제조하여 (S)-1-(4-(3-((2-아미노-4-((1-하이드록시헥산-2-일)아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-2-(아미노옥시)에타논(C-38)을 고체로서 수득하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.54 (d, 1), 7.40 (d, 1H), 7.13 (d, 1H), 6.68 (s, 1H), 6.29 (d, 1H), 5.69 (d, 1H), 5.48 (d, 1H), 4.36 (m, 3H), 3.96 (s, 3H), 3.74 (m, 2H), 3.51 (m, 4H), 2.66 (m, 4H), 1.49 (m, 1H), 1.38 (m, 3H), 1.24 (m, 2H), 0.96 (m, 2H), 0.84 (t, 3H). LRMS [M+H] = 541.3.
실시예 39
(S)-1-(4-(3-((2-아미노-4-((1-하이드록시헥산-2-일)아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)프로판-1-온(C-39)
Figure pct00646
화합물 (Int-1) 대신 화합물 (Int-2)를 사용하고 2-(((tert-부톡시카보닐)아미노)옥시)아세트산 대신 2,2-디메틸-4-옥소-3,8,11-트리옥사-5-아자테트라데칸-14-오익산을 사용한 것을 제외하고는, 실시예 35와 유사한 절차에 따라 (S)-1-(4-(3-((2-아미노-4-((1-하이드록시헥산-2-일)아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)프로판-1-온(C-39)을 제조하여 (S)-1-(4-(3-((2-아미노-4-((1-하이드록시헥산-2-일)아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)프로판-1-온(C-39)을 고체로서 수득하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.56 (d, 1H), 7.44 (d, 1H), 7.16 (d, 1H), 6.77 (s, 1H), 6.31 (d, 1H), 5.71 (d, 1H), 5.50 (d, 1H), 4.38 (m, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.78 (m, 4H), 3.72 (m, 2H), 3.67 (m, 6H), 3.53 (m, 4H), 3.14 (m, 2H), 2.77 (m, 2H), 2.69 (m, 4H), 1.51 (m, 1H), 1.26 (m, 3H), 1.02 (m, 2H), 0.86 (t, 3H). LRMS [M+H] = 627.5.
실시예 40
(S)-N-(2-(2-(3-(4-(3-((2-아미노-4-((1-하이드록시헥산-2-일)아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)-2-(아미노옥시)아세트아미드(C-40)의 합성
Figure pct00647
화합물 (Int-1) 대신 화합물 (C-39)를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 35와 유사한 절차에 따라 (S)-N-(2-(2-(3-(4-(3-((2-아미노-4-((1-하이드록시헥산-2-일)아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)-2-(아미노옥시)아세트아미드(C-40)를 제조하여 (S)-N-(2-(2-(3-(4-(3-((2-아미노-4-((1-하이드록시헥산-2-일)아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)-2-(아미노옥시)아세트아미드(C-40)를 고체로서 수득하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.54 (d, 1H), 7.47 (d, 1H), 7.17 (d, 1H), 6.78 (s, 1H), 6.30 (d, 1H), 5.68 (d, 1H), 5.50 (d, 1H), 4.36 (m, 1H), 4.09 (s, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.73 (m, 8H), 3.56 (m, 4H), 3.43 (t, 2H), 3.23 (m, 2H), 2.88 (m, 4H), 2.66 (t, 2H), 1.49 (m, 1H), 1.26 (m, 3H), 1.04 (m, 2H), 0.84 (t, 3H). LRMS [M+H] = 700.4.
실시예 41
N-(2-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)-2-(아미노옥시)아세트아미드(C-41)의 합성
Figure pct00648
화합물 (Int-1) 대신 화합물 (C-20)을 사용한 것을 제외하고는, 실시예 35와 유사한 절차에 따라 N-(2-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)-2-(아미노옥시)아세트아미드(C-41)를 제조하여 N-(2-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)-2-(아미노옥시)아세트아미드(C-41)를 고체로서 수득하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.25 (d, 1H), 7.11 (s, 1H), 6.86 (d, 1H), 6.58 (d, 1H), 6.12 (d, 1H), 5.43 (s, 2H), 4.10 (s, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.76 (t, 2H), 3.60 (m, 12H), 3.44 (t, 2H), 3.36 (t, 2H), 2.66 (t, 2H), 2.46 (m, 4H), 1.40 (m, 2H), 1.30 (m, 2H), 1.15 (m, 2H), 0.89 (t, 3H). LRMS [M+H] = 670.4.
실시예 42
5-(4-((4-(2-(2-(아미노옥시)에톡시)에틸)피페라진-1-일)메틸)-2-메톡시벤질)-N4-펜틸-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2,4-디아민(C-42)의 합성
Figure pct00649
단계 1. 제1 단계에서, 둥근 바닥 플라스크에 5-(2-메톡시-4-(피페라진-1-일메틸)벤질)-N4-펜틸-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2,4-디아민(Int-1, 1.0 당량) 및 DCE(0.02 M) 중의 2-(2-((1,3-디옥소이소인돌린-2-일)옥시)에톡시)아세트알데히드(1.2 당량)를 채우고, 이 혼합물에 아세트산(6.0 당량)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반한 후, 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드(3.0 당량)를 첨가하였다. 실온에서 추가로 3시간 동안 교반을 계속하였다. 이어서, 휘발 성분을 진공에서 제거하였다. 잔류물을 MeOH에 용해시키고, C18 컬럼(10~50% 아세토니트릴-0.05% TFA 함유 H2O로 용리)을 사용해 역상 HPLC로 정제하여 2-(2-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에톡시)에톡시)이소인돌린-1,3-디온을 수득하였다. LCMS [M+H]= 671.40.
단계 2. 둥근 바닥 플라스크에 2-(2-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에톡시)에톡시)이소인돌린-1,3-디온(1.0 당량), 히드라진 수화물(10.0 당량), MeOH(0.02 M), 및 물(0.2 M)을 채웠다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 C18 컬럼(10~50% 아세토니트릴-0.05% TFA 함유 H2O로 용리)을 사용해 역상 HPLC로 정제하였다. 목적 생성물을 함유한 분획을 모으고 감압 하에 농축시킨 후, 잔류물을 MeOH에 용해시키고, 미리 컨디셔닝된 Sphere PL-HCO3 MP-수지 컬럼에 로딩하고, MeOH로 용리시키고, 용리액을 농축시켜 5-(4-((4-(2-(2-(아미노옥시)에톡시)에틸)피페라진-1-일)메틸)-2-메톡시벤질)-N4-펜틸-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2,4-디아민(C-42)을 고체로서 수득하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.22 (d, 1H), 7.08 (d, 1H), 6.83 (d, 1H), 6.56 (d, 1H), 6.10 (d, 1H), 5.40 (s, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.76 (m, 2H), 3.60 (m, 4H), 3.50 (s, 2H), 3.34 (d, 3H), 2.59 (m, 4H), 2.49 (s, 4H), 1.38 (m, 2H), 1.26 (m, 2H), 1.12 (m, 2H), 0.87 (t, 3H). LCMS [M+H] = 541.40.
참고: 2-(2-((1,3-디옥소이소인돌린-2-일)옥시)에톡시)아세트알데히드는 2단계 프로세스로 제조하였다.
단계 1: THF(0.2 M) 중의 N-하이드록시프탈이미드(1.0 당량), 디에틸렌 글리콜(1.0 당량), 및 트리페닐포스핀(1.3 당량)의 용액에 DEAD(톨루엔 중의 2.2 M 용액, 1.3 당량)을 0℃에서 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(20~70%EtOA/헥산)로 정제하였다. 이 크로마토그래피 후에 생성물은 여전히 약간의 Ph3PO를 함유하였고, 이어서 생성물을 역상 크로마토그래피(C18 컬럼, 20-40-100% CH3CN/물로 용리)로 재정제하여 2-(2-(2-하이드로에톡시)에톡시)이소인돌린-1,3-디온을 수득하였다. LCMS [M+H] = 252.10.
단계 2: 건조 DCM(0.08 M) 중의 2-(2-(2-하이드로에톡시)에톡시)이소인돌린-1,3-디온(1.0 당량)과 중탄산나트륨(2.0 당량)의 교반 혼합물에 데스-마틴 퍼아이오디난(2.0 당량)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM으로 희석한 후, 1N NaOH 용액과 염수로 세척하고, 유기층을 분리하고 MgSO4 위에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 미정제 혼합물을 실리카겔 크로마토그래피(30~70% EtAOc/헥산으로 용리)로 정제하여2-(2-((1,3-디옥소이소인돌린-2-일)옥시)에톡시)아세트알데히드를 수득하였다. LCMS [M+H] = 250.10.
실시예 43
N-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)프로필)-2-(아미노옥시)아세트아미드(C-43)의 합성
Figure pct00650
화합물 (Int-1) 대신 화합물 (C-19)를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 35와 유사한 절차에 따라 N-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)프로필)-2-(아미노옥시)아세트아미드(C-43)를 제조하여 N-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)프로필)-2-(아미노옥시)아세트아미드(C-43)를 고체로서 수득하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.12 (d, 1H), 6.98 (d, 1H), 6.73 (d, 1H), 6.45 (d, 1H), 6.00 (d, 1H), 5.30 (s, 2H), 3.97 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.41 (s, 2H), 3.25 (s, 2H), 2.40 (s, 6H), 2.27 (m, 3H), 1.63 (m, 2H), 1.28 (m, 2H), 1.17 (m, 3H), 1.02 (m, 2H), 0.77 (t, 3H). LCMS [M+H] = 568.40.
실시예 44
5-(4-((4-(2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)에틸)피페라진-1-일)메틸)-2-메톡시벤질)-N4-펜틸-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2,4-디아민(C-44)의 합성
Figure pct00651
tert-부틸 (3-브로모프로필)카바메이트 대신 tert-부틸 (2-(2-(2-브로모에톡시)에톡시)에틸)카바메이트를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 19와 유사한 절차에 따라 5-(4-((4-(2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)에틸)피페라진-1-일)메틸)-2-메톡시벤질)-N4-펜틸-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2,4-디아민(C-44)을 제조하여 5-(4-((4-(2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)에틸)피페라진-1-일)메틸)-2-메톡시벤질)-N4-펜틸-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2,4-디아민(C-44)을 고체로서 수득하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.36 (d, 1H), 7.13 (d, 1H), 6.92 (d, 1H), 6.73 (d, 1H), 6.21 (s, 1H), 5.51 (s, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.69 (m, 12H), 3.53 (t, 2H), 3.12 (m, 2H), 2.84 (m, 8H), 1.50 (m, 2H), 1.28 (m, 2H), 1.17 (m, 2H), 0.87 (t, 3H). LRMS [M+H] = 569.3.
실시예 45
N-(2-(2-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에톡시)에톡시)에틸)-2-(아미노옥시)아세트아미드(C-45)의 합성
Figure pct00652
화합물 (Int-1) 대신 화합물 (C-44)를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 35와 유사한 절차에 따라 N-(2-(2-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에톡시)에톡시)에틸)-2-(아미노옥시)아세트아미드(C-43)를 제조하여 N-(2-(2-(2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에톡시)에톡시)에틸)-2-(아미노옥시)아세트아미드(C-45)를 고체로서 수득하였다.
1H NMR (CDCl3): δ 7.20 (s, 1H), 6.97 (d, 1H), 6.90 (s, 1H), 6.87 (s, 1H), 6.76 (d, 1H), 6.56 (d, 1H), 6.17 (d, 1H), 5.84 (s, 2H), 5.21 (s, 2H), 4.69 (m, 2H), 4.07 (s, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.53 (m, 8H), 3.45 (m, 2H), 3.39 (s, 2H), 3.24 (m, 2H), 2.52 (t, 2H), 2.40 (m, 8H), 1.22 (m, 2H), 1.16 (m, 2H), 1.02 (m, 2H), 0.78 (t, 3H). LRMS [M+H] = 642.4.
실시예 46
2,5-디옥소피롤리딘-1-일 5-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-옥소펜타노에이트(C-46)의 합성
Figure pct00653
둥근 바닥 플라스크에 5-(2-메톡시-5-(피페라진-1-일메틸)벤질)-N4-펜틸-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2,4-디아민(Int-1, 1.0 당량), 디이소프로필 아민(1.3 당량), 디석신이미달 글루타레이트(1.3 당량), 및 DMSO(0.1 M)를 채웠다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 이어서, 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(ACN 중의 0.035% TFA:H2O 중의 0.05% TFA, C18 컬럼)로 정제하여 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 5-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-옥소펜타노에이트(C-46)를 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 1H NMR (DMSO): δ 7.41 (s, 1H), 7.37 (s, 3H), 7.19 (s, 1H), 6.94 (s, 1H), 6.57 (s, 1H), 6.22 (d, 1H), 5.56 (s, 2H), 4.30 (s, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.44 (m, 4H), 3.35 (m, 2H), 2.92 (m, 2H), 2.80 (m, 8H), 2.71 (m, 2H), 1.83 (m, 2H), 1.44 (m, 2H), 1.20 (m, 2H), 1.09 (m, 2H), 0.80 (t, 3H). LRMS [M+H] = 649.3.
실시예 47
(S)-2,5-디옥소피롤리딘-1-일 5-(4-(3-((2-아미노-4-((1-하이드록시헥산-2-일)아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-옥소펜타노에이트(C-47)의 합성
Figure pct00654
화합물 (Int-1) 대신 화합물 (Int-2)를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 46과 유사한 절차에 따라 (S)-2,5-디옥소피롤리딘-1-일 5-(4-(3-((2-아미노-4-((1-하이드록시헥산-2-일)아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-옥소펜타노에이트(C-47)를 제조하여 (S)-2,5-디옥소피롤리딘-1-일 5-(4-(3-((2-아미노-4-((1-하이드록시헥산-2-일)아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-옥소펜타노에이트(C-47)를 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 1H NMR (DMSO): δ 7.54 (s, 1H), 7.43 (s, 3H), 7.22 (s, 1H), 6.61 (s, 1H), 6.28 (d, 1H), 6.24 (d, 1H), 5.67 (d, 1H), 5.50 (d, 1H), 4.82 (s, 1H), 4.39 (s, 1H), 4.22 (m, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.36 (m, 4H), 3.28 (m, 2H), 2.92 (m, 2H), 2.82 (m, 8H), 2.72 (m, 2H), 1.84 (m, 2H), 1.34 (m, 2H), 1.15 (m, 2H), 0.86 (m, 2H), 0.77 (t, 3H). LRMS [M+H] = 679.3.
실시예 48
(S)-2-아미노-6-(5-(4-(3-((2-아미노-4-(((S)-1-하이드록시헥산-2-일)아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-옥소펜탄아미도)헥산산(C-48)의 합성
Figure pct00655
둥근 바닥 플라스크에 (S)-2,5-디옥소피롤리딘-1-일 5-(4-(3-((2-아미노-4-((1-하이드록시헥산-2-일)아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-옥소펜타노에이트(C-47)(1.0 당량), Boc-Lys-OH(2.0 당량), DIEA(5.0 당량), 및 DMF(30 mM)를 채웠다. 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반하고, 휘발 성분을 진공에서 제거하였다. 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(ACN 중의 0.035% TFA:H2O 중의 0.05% TFA, C18 컬럼)를 이용해 정제하여 (S)-6-(5-(4-(3-((2-아미노-4-(((S)-1-하이드록시헥산-2-일)아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-옥소펜탄아미도)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)헥산산을 수득하였다. LCMS [M+1] = 810.5. (S)-6-(5-(4-(3-((2-아미노-4-(((S)-1-하이드록시헥산-2-일)아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-옥소펜탄아미도)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)헥산산을 0.1 M DCM 중의 30 부피%의 TFA로 처리하고, 휘발 성분을 진공에서 제거하여 (S)-2-아미노-6-(5-(4-(3-((2-아미노-4-(((S)-1-하이드록시헥산-2-일)아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-옥소펜탄아미도)헥산산(C-48)을 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.49 (m, 2H), 7.21 (d, 1H), 6.77 (s, 1H), 6.29 (d, 1H), 5.68 (d, 1H), 5.50 (d, 1H), 4.36 (m, 1H), 4.20 (m, 2H), 3.99 (S, 3H), 3.93 (m, 1H), 3.76 (m, 2H), 3.50 (m, 2H), 3.19 (m, 4H), 2.44 (t, 2H), 2.24 (t, 2H), 2.16 (m, 4H), 1.88 (m, 4H), 1.51 (m, 2H), 1.25 (m, 6H), 1.03 (m, 2H), 0.84 (t, 3H). LRMS [M+H] = 710.3.
실시예 49
(S)-2-아미노-6-(5-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-옥소펜탄아미도)헥산산(C-49)의 합성
Figure pct00656
화합물 (C-47) 대신 화합물 (C-46)을 사용한 것을 제외하고는, 실시예 48과 유사한 절차에 따라 (S)-2-아미노-6-(5-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-옥소펜탄아미도)헥산산(C-49)을 제조하여 (S)-2-아미노-6-(5-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-옥소펜탄아미도)헥산산(C-49)을 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.37 (d, 1H), 7.22 (d, 1H), 7.01 (d, 1H), 6.78 (d, 1H), 6.23 (s, 1H), 5.56 (s, 2H), 4.07 (m, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.79 (m, 1H), 3.73 (m, 2H), 3.55 (m, 2H), 2.98 (m, 4H), 2.43 (t, 2H), 2.23 (t, 2H), 2.04 (m, 4H), 1.89 (m, 4H), 1.54 (m, 6H), 1.30 (m, 2H), 1.19 (m, 2H), 0.88 (t, 3H). LRMS [M+H] = 680.4.
실시예 50
2,5-디옥소피롤리딘-1-일 5-((3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)프로필)아미노)-5-옥소펜타노에이트(C-50)의 합성
Figure pct00657
화합물 (Int-1) 대신 화합물 (C-19)를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 46과 유사한 절차에 따라 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 5-((3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)프로필)아미노)-5-옥소펜타노에이트(C-50)를 제조하여 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 5-((3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)프로필)아미노)-5-옥소펜타노에이트(C-50)를 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 1H NMR (DMSO): δ 8.00 (s, 1H), 7.40 (m, 4H), 7.02 (s, 1H), 6.82 (s, 1H), 6.55 (d, 1H), 6.21 (d, 1H), 5.53 (s, 2H), 3.83 (, m, 5H), 3.00 (m, 8H), 2.81 (m, 4H), 2.69 (m, 2H), 2.19 (m, 2H), 1.84 (m, 2H), 1.75 (m, 4H), 1.45 (m, 2H), 1.22 (m, 4H), 1.09 (m, 4H), 0.80 (t, 3H). LRMS [M+H] = 706.4.
실시예 51
(S)-2-아미노-6-(5-((3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)프로필)아미노)-5-옥소펜탄아미도)헥산산(C-51)의 합성
Figure pct00658
화합물 (C-47) 대신 화합물 (C-50)을 사용한 것을 제외하고는, 실시예 48과 유사한 절차에 따라 (S)-2-아미노-6-(5-((3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)프로필)아미노)-5-옥소펜탄아미도)헥산산(C-51)을 제조하여 (S)-2-아미노-6-(5-((3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)프로필)아미노)-5-옥소펜탄아미도)헥산산(C-51)을 고체 TFA 염으로서 수득하였다.
1H NMR (CD3OD): δ 7.35 (d, 1H), 7.12 (s, 1H), 6.94 (d, 1H), 6.75 (d, 1H), 6.22 (s, 1H), 5.52 (s, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.86 (t, 1H), 3.71 (s, 2H), 3.54 (, m, 2H), 3.22 (m, 8H), 3.05 (m, 2H), 2.82 (m, 2H), 2.21 (m, 4H), 1.89 (m, 4H), 1.53 (m, 6H), 1.30 (m, 4H), 1.18 (m, 2H), 0.88 (t, 3H). LRMS [M+H] = 737.4.
실시예 52
2,5-디옥소피롤리딘-1-일 5-(4-(3-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-옥소펜타노에이트(C-52)의 합성
Figure pct00659
화합물 (Int-1) 대신 화합물 (Int-3)을 사용한 것을 제외하고는, 실시예 46과 유사한 절차에 따라 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 5-(4-(3-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-옥소펜타노에이트(C-52)를 제조하여 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 5-(4-(3-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-옥소펜타노에이트(C-52)를 고체 TFA 염으로서 수득하였다. LRMS [M+H] = 649.4.
실시예 53
(S)-2-아미노-6-(5-(4-(3-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-옥소펜탄아미도)헥산산(C-53)의 합성
Figure pct00660
화합물 (C-47) 대신 화합물 (C-52)를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 48과 유사한 절차에 따라 (S)-2-아미노-6-(5-(4-(3-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-옥소펜탄아미도)헥산산(C-53)을 제조하여 (S)-2-아미노-6-(5-(4-(3-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-4-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-옥소펜탄아미도)헥산산(C-53)을 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 1H NMR (DMSO): δ 8.22 (s, 3H), 7.79 (t, 1H), 7.51 (s, 2H), 7.42 (m, 2H), 7.27 (t, 1H), 7.17 (d, 1H), 6.61 (s, 1H), 6.23 (d, 1H), 5.57 (s, 2H), 4.05 (m, 2H), 3.87 (s, 5H), 3.42 (m, 3H), 3.02 (m, 3H), 2.89 (m, 2H), 2.31 (t, 2H), 2.09 (t, 2H), 1.72 (m, 4H), 1.41 (m, 5H), 1.22 (m, 2H), 1.07 (m, 2H), 0.83 (t, 3H). LRMS [M+H] = 680.4.
실시예 54
퍼플루오로페닐 5-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-옥소펜타노에이트(C-54)의 합성
Figure pct00661
둥근 바닥 플라스크에 5-(2-메톡시-4-(피페라진-1-일메틸)벤질)-N4-펜틸-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2,4-디아민(Int-1, 1.0 당량), DIEA(3.0 당량), 비스(퍼플루오로페닐) 글루타레이트(2.0 당량), 및 DMF(0.01 M)를 채웠다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(ACN 중의 0.035% TFA:H2O 중의 0.05% TFA, C18 컬럼)로 정체하여 퍼플루오로페닐 5-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-5-옥소펜타노에이트(C-54)를 고체 TFA 염으로서 수득하였다. LCMS [M+1] = 718.4.
참고: 비스(퍼플루오로페닐) 글루타레이트는 둥근 바닥 플라스크에 글루타로일 디클로라이드(1.0 당량), THF(0.15 M), 및 트리에틸아민(2.2 당량)을 첨가하고 반응 혼합물을 0℃로 냉각시켜 제조하였다. 이어서, THF(1.2 M) 중의 2,3,4,5,6-펜타플루오로페놀(2.1 당량)의 용액을 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실리카겔을 통해 여과한 후 진공 중에서 농축시켰다. 잔류물을 헥산-에틸 아세테이트(9:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼으로 정제하고 농축시켜 비스(퍼플루오로페닐) 글루타레이트를 고체로서 수득하였다. LCMS [M+23] = 487.2.
실시예 55
퍼플루오로페닐 3-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)프로파노에이트(C-55)의 합성
Figure pct00662
비스(퍼플루오로페닐) 글루타레이트 대신 비스(퍼플루오로페닐) 3,3'-옥시디프로파노에이트를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 54와 유사한 절차에 따라 퍼플루오로페닐 3-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)프로파노에이트(C-55)를 고체 TFA 염으로서 제조하였다. 1H NMR (아세토니트릴-d 3) δ 7.33 (d, 1H), 7.30 (d, 1H), 6.95 (d, 1H), 6.73 (d, 1H), 6.22 (d, 1H), 6.06 (m, 1H), 5.43 (s, 2H), 4.18 (s, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.81 (t, 2H), 3.74 (t, 2H), 3.47 (m, 2H), 2.95 (t, 2H), 2.60 (t, 2H), 2.14 (d, 2H), 1.45 (m, 2H), 1.28 (m, 2H), 1.15 (m, 2H), 0.87 (t, 3H). LRMS [M+H] = 748.4. 19F NMR (471 MHz, 아세토니트릴-d 3) δ -154.71 (d, 2F), -160.40 (d, 1F), -164.57 (dd, 2F).
실시예 56
퍼플루오로페닐 3-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)프로파노에이트(C-56)의 합성
Figure pct00663
비스(퍼플루오로페닐) 글루타레이트 대신 비스(퍼플루오로페닐) 3,3'-(에탄-1,2-디일비스(옥시))디프로파노에이트를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 54와 유사한 절차에 따라 3-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)프로파노에이트(C-56)를 제조하여 3-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에톡시)프로파노에이트(C-54)를 수득하였다. LRMS [M+H] = 792.4.
실시예 57
(S)-2-아미노-6-(3-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)프로판아미도)헥산산(C-57)의 합성
Figure pct00664
둥근 바닥 플라스크에 퍼플루오로페닐 3-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)프로파노에이트(C-55, 1.0 당량), Boc-Lys-OH(2.0 당량), DIEA(5.0 당량), 및 DMF(30 mM)를 채웠다. 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반하고, 휘발 성분을 진공에서 제거하였다. 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(ACN 중의 0.035% TFA:H2O 중의 0.05% TFA, C18 컬럼)를 이용해 정제하여 (S)-6-(3-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)프로판아미도)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)헥산산을 수득하였다. LCMS [M+1] = 810.5. Boc-보호 화합물을 0.1M DCM 중의 30 부피%의 TFA로 처리한 후, 휘발 성분을 진공에서 제거하여 (S)-2-아미노-6-(3-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)프로판아미도)헥산산(C-57)을 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 1H NMR (DMSO): δ 8.18 (m, 3H), 7.80 (s, 1H), 7.41 (m, 4H), 7.18 (s, 1H), 6.94 (d, 1H), 6.59 (d, 1H), 6.22 (d, 1H), 5.56 (s, 2H), 4.24 (m, 1H), 3.86 (m, 7H), 3.56 (m, 4H), 3.44 (m, 4H), 3.01 (m, 4H), 2.60 (m, 2H), 2.28 (m, 2H), 1.74 (m, 2H), 1.45 (m, 2H), 1.38 (m, 3H), 1.21 (m, 3H), 1.09 (m, 2H), 0.80 (t, 3H). LCMS [M+1] = 710.5.
실시예 58
N-(15-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-15-옥소-3,6,9,12-테트라옥사펜타데실)-5-((3aS,4S,6aR)-2-옥소헥사하이드로-1H-티에노[3,4-d]이미다졸-4-일)펜탄아미드(C-58)의 합성
Figure pct00665
디석신이미달 글루타레이트 대신 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 17-옥소-21-((3aS,4S,6aR)-2-옥소헥사하이드로-1H-티에노[3,4-d]이미다졸-4-일)-4,7,10,13-테트라옥소-16-아자헤니코산-1-오에이트를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 46과 유사한 절차에 따라 N-(15-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-15-옥소-3,6,9,12-테트라옥사펜타데실)-5-((3aS,4S,6aR)-2-옥소헥사하이드로-1H-티에노[3,4-d]이미다졸-4-일)펜탄아미드(C-58)를 제조하여 N-(15-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-15-옥소-3,6,9,12-테트라옥사펜타데실)-5-((3aS,4S,6aR)-2-옥소헥사하이드로-1H-티에노[3,4-d]이미다졸-4-일)펜탄아미드(C-58)를 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 1H NMR (DMSO): δ 7.84 (m, 2H), 7.42 (m, 4H), 7.22 (m, 1H), 6.94 (d, 1H), 6.56 (d, 1H), 6.42 (s, 1H), 6.37 (s, 1H), 6.22 (s, 1H), 5.57 (s, 2H), 4.29 (m, 2H), 4.11 (m, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.60 (m, 4H), 3.48 (m, 16H), 3.37 (m, 4H), 3.16 (m, 4H), 3.08 (m, 2H), 2.80 (m, 1H), 2.56 (m, 2H), 2.05 (m, 2H), 1.58 (m, 1H), 1.45 (m, 5H), 1.23 (m, 4H), 1.07 (m, 2H), 0.80 (t, 3H). LRMS [M+H] = 911.6.
실시예 59
4-((R)-6-아미노-2-((S)-2-(3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미도)-3-페닐프로판아미도)헥산아미도)벤질 4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카복실레이트(C-59)의 합성
Figure pct00666
4-((R)-6-아미노-2-((S)-2-(3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미도)-3-페닐제1 단계에서 (9H-플루오렌-9-일)메틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카보닐)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카바메이트 대신 (9H-플루오렌-9-일)메틸 ((S)-1-(((R)-6-아미노-1-((4-((((4-니트로페녹시)카보닐)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소헥산-2-일)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)카바메이트를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 (C-30)에 대해 나타낸 반응식에 따라 프로판아미도)헥산아미도)벤질 4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카복실레이트(C-59)를 고체 TFA 염으로서 제조하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 8.26 (d, 1H), 7.91 (t, 1H), 7.61 (d, 2H), 7.35 (m, 3H), 7.25 (m, 3H), 7.19 (m, 3H), 7.03 (d, 1H), 6.79 (d, 1H), 6.76 (s, 2H), 6.24 (d, 1H), 5.57 (s, 2H), 5.11 (s, 2H), 4.41 (m, 1H), 4.33 (s, 2H), 3.98 (t, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.70 (m, 3H), 3.54 (t, 2H), 3.24 (m, 4H), 3.10 (m, 1H), 3.02 (m, 1H), 2.83 (m, 1H), 2.47 (t, 2H), 1.92 (m, 2H), 1.52 (m, 4H), 1.42 (m, 2H), 1.30 (m, 3H), 1.18 (m, 2H), 0.88 (t, 3H). LRMS [M+H] = 1013.5.
실시예 60
4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질 4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카복실레이트(C-60)의 합성
Figure pct00667
제1 단계에서 (9H-플루오렌-9-일)메틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카보닐)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카바메이트 대신 (9H-플루오렌-9-일)메틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카보닐)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카바메이트를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 (C-30)에 대해 나타낸 반응식에 따라 4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질 4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카복실레이트(C-60)를 고체 TFA 염으로서 제조하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 9.65 (s, 1H), 8.20 (d, 1H), 7.97 (d, 1H), 7.60 (m, 2H), 7.34 (m, 2H), 7.31 (s, 1H), 7.22 (d, 1H), 7.03 (d, 1H), 6.80 (m, 2H), 6.77 (s, 2H), 6.23 (d, 1H), 5.57 (s, 2H), 5.11 (s, 2H), 4.48 (t, 1H), 4.31 (s, 3H), 4.15 (t, 1H), 3.95 (m, 4H), 3.68 (m, 4H), 3.62 (m, 2H), 3.53 (m, 8H), 2.49 (t, 2H), 2.11 (m, 1H), 1.52 (m, 2H), 1.44 (d, 3H), 1.28 (m, 2H), 1.18 (m, 2H), 0.98 (m, 6H), 0.87 (t, 3H). LRMS [M+H] = 952.6.
실시예 61
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-(((4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카보닐)옥시)메틸)-2-(3-(3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미도-메틸부탄아미도)페녹시)-3,4,5-트리하이드록시테트라하이드로-2H-피란-2-카복실산(C-61)의 합성
Figure pct00668
단계 1: 둥근 바닥 플라스크에 5-(2-메톡시-5-(피페라진-1-일메틸)벤질)-N4-펜틸-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2,4-디아민(Int-1, 1.0 당량), HOAT(2.0 당량), Huenig 염기(14.0 당량), (3S,4R,5R,6R)-2-(2-(3-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)아미노)프로판아미도)-4-((((4-니트로페녹시)카보닐)옥시)메틸)페녹시)-6-(메톡시카보닐)테트라하이드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트(1.2 당량), 및 피리딘:DMF(1:4, 0.015 M)를 채웠다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 이어서, 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(ACN 중의 0.035% TFA:H2O 중의 0.05% TFA, C18 컬럼)로 정제하여 (3S,4R,5R,6R)-2-(2-(3-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)아미노)프로판아미도)-4-(((4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카보닐)옥시)메틸)페녹시)-6-(메톡시카보닐)테트라하이드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트를 고체로서 수득하였다. LCMS [M+H] = 1212.4.
단계 2: (3S,4R,5R,6R)-2-(2-(3-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)아미노)프로판아미도)-4-(((4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카보닐)옥시)메틸)페녹시)-6-(메톡시카보닐)테트라하이드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트(1.0 당량)를 MeOH, THF, 및 물(2:1:0.4)(0.005 M)에 용해시켰다. 이어서, LiOH(8.0 당량)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(ACN 중의 0.035% TFA:H2O 중의 0.05% TFA, C18 컬럼)로 정제하여 (2R,3R,4R,5S)-6-(4-(((4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카보닐)옥시)메틸)-2-(3-아미노프로판아미도)페녹시)-3,4,5-트리하이드록시테트라하이드로-2H-피란-2-카복실산을 고체로서 수득하였다. LCMS [M+H] = 850.4.
단계 3: 둥근 바닥 플라스크에 (2R,3R,4R,5S)-6-(4-(((4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카보닐)옥시)메틸)-2-(3-아미노프로판아미도)페녹시)-3,4,5-트리하이드록시테트라하이드로-2H-피란-2-카복실산(1.0 당량), 3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판산(2.0 당량), Huenig 염기(6.0 당량), HBTU(1.8 당량), 및 DMF(0.003 M)를 채웠다. 반응물을 실온에서 15분 동안 계속 교반하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(ACN 중의 0.035% TFA:H2O 중의 0.05% TFA, C18 컬럼)로 정제하여 (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-(((4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카보닐)옥시)메틸)-2-(3-(3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미도-메틸부탄아미도)페녹시)-3,4,5-트리하이드록시테트라하이드로-2H-피란-2-카복실산(C-61)을 고체 TFA 염으로서 수득하였다. LCMS [M+H] = 1001.3.
실시예 62
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-(((4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카보닐)옥시)메틸)-2-(3-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도-메틸부탄아미도)페녹시)-3,4,5-트리하이드록시테트라하이드로-2H-피란-2-카복실산(C-62)의 합성
Figure pct00669
마지막 단계에서 3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판산 대신 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판산을 사용한 것을 제외하고는, 실시예 (C-61)에 대해 나타낸 반응식에 따라 (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-(((4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-카보닐)옥시)메틸)-2-(3-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도-메틸부탄아미도)페녹시)-3,4,5-트리하이드록시테트라하이드로-2H-피란-2-카복실산(C-62)을 고체 TFA 염으로서 제조하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 8.20 (d, 1H), 7.37 (d, 1H), 7.21 (m, 2H), 7.05 (m, 1H), 6.99 (d, 1H), 6.78 (m, 3H), 6.23 (d, 1H), 5.55 (s, 2H), 5.09 (s, 2H), 3.92 (m, 4H), 4.81 (d, 1H), 4.00 (s, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.89 (d, 1H), 3.62 (m, 9H), 3.53 (m, 8H), 2.90 (m, 3H), 2.66 (t, 2H), 2.37 (t, 2H), 1.51 (m, 2H), 1.29 (m, 2H), 1.17 (m, 2H), 0.87 (t, 3H). LRMS [M+H] = 1045.4.
실시예 63
N-(2-((5-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-2-메틸-5-옥소펜탄-2-일)디설파닐)에틸)-3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미드(C-63)의 합성
Figure pct00670
단계 1: 둥근 바닥 플라스크에 5-(2-메톡시-5-(피페라진-1-일메틸)벤질)-N4-펜틸-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2,4-디아민(Int-1, 1.0 당량), 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 4-메틸-4-(메틸디설파닐)펜타노에이트(1.3 당량), Huenig 염기(20.0 당량), 및 DMF(0.03 M)를 채웠다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 미정제 반응 혼합물을 RP-C18 ISCO(ACN:H2O, TFA를 조절제로서 함유)로 정제한 후 동결건조시켜 1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-4-메틸-4-(메틸디설파닐)펜탄-1-온을 고체 TFA 염으로서 수득하였다. LCMS [M+H] = 614.3.
단계 2: 둥근 바닥 플라스크에 1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-4-메틸-4-(메틸디설파닐)펜탄-1-온 1.0 당량), (2S,3S)-1,4-디머캅토부탄-2,3-디올(1.0 당량), 및 디메틸 아세트아미드:H2O(1:1, 0.03 M)를 채웠다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 미정제 반응 혼합물을 RP-C18 ISCO(ACN:H2O, TFA를 조절제로서 함유)를 이용해 정제한 후 동결건조시켜 1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-4-머캅토-4-메틸펜탄-1-온을 고체 TFA 염으로서 수득하였다. LCMS [M+H] = 568.3.
단계 3: 둥근 바닥 플라스크에 1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-4-머캅토-4-메틸펜탄-1-온(1.0 당량), 2-(피리딘-2-일디설파닐)에탄-1-아민 HCl 염(2.0 당량), Huenig 염기(10.0 당량), 및 THF:PBS(1:1, 0.03 M)를 채웠다. 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 이어서, 미정제 반응 혼합물을 RP-C18 ISCO(ACN:H2O, TFA를 조절제로서 함유)를 이용해 정제한 후 동결건조시켜 1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-4-((2-아미노에틸)디설파닐)-4-메틸펜탄-1-온을 고체 TFA 염으로서 수득하였다. LCMS [M+H] = 643.4.
단계 4: 둥근 바닥 플라스크에 1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-4-((2-아미노에틸)디설파닐)-4-메틸펜탄-1-온(1.0 당량), 3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판산(1.0 당량), Huenig 염기(5.0 당량), HATU(1.0 당량), 및 DMF(0.02 M)를 채웠다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 미정제 반응 혼합물을 RP-C18 ISCO(ACN:H2O, TFA를 조절제로서 함유)를 이용해 정제한 후 동결건조시켜 N-(2-((5-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-2-메틸-5-옥소펜탄-2-일)디설파닐)에틸)-3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미드(C-63)를 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.37 (d, 1H), 7.26 (d, 1H), 7.08 (m, 1H), 6.83 (d, 1H), 6.81 (s, 2H), 6.24 (d, 1H), 5.58 (s, 2H), 4.37 (s, 2H), 4.20 (br, 4H), 3.97 (s, 3H), 3.75 (t, 2H), 3.55 (t, 2H), 3.38 (m, 2H), 3.38 (br, 4H), 2.72 (t, 2H), 2.55 (m, 2H), 2.45 (t, 2H), 1.89 (m, 2H), 1.54 (m, 2H), 1.31 (m, 8H), 1.19 (m, 2H), 0.88 (t, 3H). LRMS [M+H] = 794.4.
실시예 64
1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-4-메틸-4-(메틸티오)펜탄-1-온(C-64)의 합성
Figure pct00671
단계 3에서 tert-부틸 피페라진-1-카복실레이트 대신 4-메틸-4-(메틸티오)-1-(피페라진-1-일)펜탄-1-온을 사용한 것을 제외하고는, 중간체 Int-1에 대해 기술한 절차에 따라 1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-4-메틸-4-(메틸티오)펜탄-1-온(C-63)을 제조하였다. 미정제 반응 혼합물을 RP-C18 ISCO(ACN:H2O, TFA를 조절제로서 함유)를 이용해 정제한 후 동결건조시켜 1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-4-메틸-4-(메틸티오)펜탄-1-온(C-64)을 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.36 (d, 1H), 7.25 (d, 1H), 7.05 (m, 1H), 6.81 (d, 1H), 6.24 (d, 1H), 5.58 (s, 2H), 4.34 (s, 2H), 3.90 (br, 4H), 3.96 (s, 3H), 3.55 (t, 2H), 3.28 (br, 4H), 2.55 (m, 2H), 1.95 (s, 3H), 1.80 (m, 2H), 1.54 (m, 2H), 1.31 (m, 2H), 1.27 (s, 6H), 1.19 (m, 2H), 0.88 (t, 3H). LRMS [M+H] = 582.4.
실시예 65
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에톡시)(하이드록시)포스포릴)옥시)메틸)-2-(3-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도-메틸부탄아미도)페녹시)-3,4,5-트리하이드록시테트라하이드로-2H-피란-2-카복실산(C-65)의 합성
Figure pct00672
단계 1: 둥근 바닥 플라스크에 2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에탄-1-올(C-68)(1.0 당량), 트리클로로포스판(3.0 당량), 트리에틸아민(9.0 당량), 및 THF(0.2 M)를 0℃에서 채우고, 1시간 동안 교반시켰다. 이어서, 얼음물을 서서히 첨가하여 반응물을 ?칭시키고 EtOAc로 3회 세척하였다. 이어서, 목적 생성물을 함유한 수층을 동결건조시켰다. 2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸 하이드로젠 포스포네이트를 단리시키고, 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다. LCMS [M+H] = 546.3.
단계 2: 둥근 바닥 플라스크에 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-(3-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)아미노)프로판아미도)-4-(하이드록시메틸)페녹시)-6-(메톡시카보닐)테트라하이드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트(1.0 당량), 2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에틸 하이드로젠 포스포네이트(2.0 당량), 피발로일 클로라이드(42.0 당량), 및 피리딘(0.03 M)을 채웠다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이 시점에, 피리딘:H2O(1:0.1, 0.14 M) 중의 디아이오다이드(1.06 당량)를 첨가하고, 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 이어서, 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(ACN 중의 0.035% TFA:H2O 중의 0.05% TFA, C18 컬럼)를 이용해 정제하여 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-(3-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)아미노)프로판아미도)-4-((((2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에톡시)(하이드록시)포스포릴)옥시)메틸)페녹시)-6-(메톡시카보닐)테트라하이드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트를 고체 TFA 염으로서 수득하였다. LCMS [M+H] = 1292.5.
단계 3: 둥근 바닥 플라스크에 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-(3-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)아미노)프로판아미도)-4-((((2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에톡시)(하이드록시)포스포릴)옥시)메틸)페녹시)-6-(메톡시카보닐)테트라하이드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트(1.0 당량), 수산화리튬-H2O(10.0 당량), 및 MeOH:H2O(3:1.5, 0.007 M)를 채웠다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 미정제 반응 혼합물을 RP-C18 ISCO(ACN:H2O, TFA를 조절제로서 함유)로 정제한 후 동결건조시켜 (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에톡시)(하이드록시)포스포릴)옥시)메틸)-2-(3-아미노프로판아미도)페녹시)-3,4,5-트리하이드록시테트라하이드로-2H-피란-2-카복실산을 고체 TFA 염으로서 수득하였다. LCMS [M+H] = 930.4.
단계 4: 둥근 바닥 플라스크에 (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에톡시)(하이드록시)포스포릴)옥시)메틸)-2-(3-아미노프로판아미도)페녹시)-3,4,5-트리하이드록시테트라하이드로-2H-피란-2-카복실산(1.0 당량), 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판산(1.0 당량), Huenig 염기(6.0 당량), HATU(1.0 당량), 및 DMF(0.005 M)를 채웠다. 반응물을 실온에서 15분 동안 계속 교반하였다. 이어서, 미정제 반응 혼합물을 RP-HPLC(ACN 중의 0.035% TFA:H2O 중의 0.05% TFA, C18 컬럼)로 정제하여 (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에톡시)(하이드록시)포스포릴)옥시)메틸)-2-(3-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도-메틸부탄아미도)페녹시)-3,4,5-트리하이드록시테트라하이드로-2H-피란-2-카복실산(C-65)을 고체 TFA 염으로서 수득하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 8.19 (s, 1H), 7.37 (d, 1H), 7.14 (m, 3H), 6.79 (s, 2H), 6.77 (d, 1H), 6.22 (d, 1H), 5.53 (s, 2H), 4.86 (s, 2H), 4.84 (d, 1H), 4.08 (s, 2H), 3.95 (d, 1H), 3.92 (s, 3H), 4.00 (br, 4H), 3.76 (s, 2H), 3.62 (m, 5H), 3.53 (m, 10H), 3.27 (m, 2H), 2.85 (m, 4H), 2.63 (m, 2H), 2.37 (t, 2H), 1.52 (m, 2H), 1.31 (m, 2H), 1.17 (m, 2H), 0.88 (t, 3H). LRMS [M+H/2Z] = 563.4.
실시예 66
(2R,2'R)-3,3'-((2-((2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-2-옥소에톡시)이미노)프로판-1,3-디일)비스(설판디일))비스(2-아미노프로판산)(C-66)의 합성
Figure pct00673
둥근 바닥 플라스크에 1-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-2-(아미노옥시)에탄-1-온(C-35)(2.4 당량), (2R,2'R)-3,3'-((2-옥소프로판-1,3-디일)비스(설판디일))비스(2-아미노프로판산)(1.0 당량), 및 에탄올(0.02 M)을 채웠다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 미정제 반응 혼합물을 RP-C18 ISCO(ACN:H2O, TFA를 조절제로서 함유)를 이용해 정제한 후 동결건조시켜 (2R,2'R)-3,3'-((2-((2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-2-옥소에톡시)이미노)프로판-1,3-디일)비스(설판디일))비스(2-아미노프로판산)(C-66)을 고체로서 수득하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.35 (d, 1H), 7.28 (d, 1H), 7.05 (m, 1H), 6.80 (d, 1H), 6.23 (d, 1H), 5.57 (s, 2H), 4.32 (s, 2H), 4.20 (m, 1H), 4.05 (m, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.81 (m, 4H), 3.55 (m, 2H), 3.44 (m, 2H), 3.20 (m, 4H), 2.96 (m, 1H), 2.88 (m, 1H), 1.53 (m, 2H), 1.31 (m, 2H), 1.18 (m, 2H), 0.88 (t, 3H). LRMS [M+H] = 789.3.
실시예 67
(R)-2-아미노-6-((((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)메틸)-17-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-10,17-디옥소-8,14-디옥사-4-티아-7,11-디아자헵타데크-6-엔산(C-67)의 합성
Figure pct00674
둥근 바닥 플라스크에 N-(2-(3-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-3-옥소프로폭시)에틸)-2-(아미노옥시)아세트아미드(C-37)(2.4 당량), (2R,2'R)-3,3'-((2-옥소프로판-1,3-디일)비스(설판디일))비스(2-아미노프로판산)(1.0 당량), 및 에탄올(0.02 M)을 채웠다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 미정제 반응 혼합물을 RP-C18 ISCO(ACN:H2O, TFA를 조절제로서 함유)를 이용해 정제한 후 동결건조시켜 (R)-2-아미노-6-((((R)-2-아미노-2-카복시에틸)티오)메틸)-17-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)-10,17-디옥소-8,14-디옥사-4-티아-7,11-디아자헵타데크-6-엔산(C-67)을 고체로서 수득하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.36 (d, 1H), 7.29 (d, 1H), 7.07 (m, 1H), 6.80 (d, 1H), 6.24 (d, 1H), 5.57 (s, 2H), 4.57 (s, 2H), 4.31 (m, 2H), 4.11 (m, 1H), 4.03 (m, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.86 (br, 4H), 3.73 (t, 2H), 3.54 (m, 6H), 3.40 (m, 2H), 3.20 (m, 8H), 2.96 (m, 2H), 2.67 ( t, 2H), 1.52 (m, 2H), 1.30 (m, 2H), 1.19 (m, 2H), 0.88 (t, 3H). LRMS [M+H] = 904.4.
실시예 68
2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에탄-1-올(C-68)의 합성
Figure pct00675
둥근 바닥 플라스크에 5-(2-메톡시-4-(피페라진-1-일메틸)벤질)-N4-펜틸-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-2,4-디아민(Int-1, 1.0 당량), 2-브로모에탄-1-올(1.3 당량), 트리에틸아민(20.0 당량), 및 아세토니트릴(0.03 M)을 채웠다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 미정제 반응 혼합물을 ISCO 크로마토그래피(0~10% MeOH:DCM, 구배)로 정제하여 2-(4-(4-((2-아미노-4-(펜틸아미노)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)메틸)-3-메톡시벤질)피페라진-1-일)에탄-1-올(C-68)을 고체로서 수득하였다. 1H NMR (CD3OD): δ 7.22 (d, 1H), 7.08 (d, 1H), 6.83 (d, 1H), 6.55 (d, 1H), 6.10 (d, 1H), 5.39 (s, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.66 (t, 2H), 3.50 (s, 2H), 3.32 (m, 2H), 3.20 (s, 1H), 2.51 (m, 10H), 1.37 (m, 2H), 1.27 (m, 2H), 1.25 (s, 1H), 1.12 (m, 2H), 0.86 (t, 3H). LRMS [M+H] = 482.4.
실시예 69
화학식 I의 화합물을 분석하여 톨-유사 수용체 7 작용제로서의 활성을 측정하였다.
리포터 유전자 분석
인간 배아 신장 293(HEK293) 세포를 인간 TLR7 및 NF-kB-유도 루시퍼라제 리포터 벡터(pNifty-루시퍼라제)로 안정적으로 형질감염시켰다. 대조 분석으로서, pNifty-Luc로 형질감염된 정상 HEK293을 사용하였다. 2 mM의 L-글루타민, 10%의 심장 비활성화 FBS, 1%의 페니실린과 스트렙토마이신, 2 μg/ml의 퓨로마이신(InvivoGen #ant-pr-5), 및 5 μg/ml의 블라스티시딘(Invitrogen #46-1120)으로 보충된 DMEM에서 세포를 배양하였다. Bright-GloTM 루시퍼라제 분석 완충액 및 기질은 (분석 기질 및 완충액 각각) Promega #E263B 및 #E264B에 의해 공급되었다. 384-웰 투명바닥 플레이트는 Greiner bio-one(#789163-G)에 의해 공급된 맞춤형 바코드 플레이트였다.
최종 부피 50 μl의 배지에서 384-웰 플레이트에 25,000 세포/웰로 세포를 플레이팅하였다. 세포를 37℃ 및 5% CO2에서 밤새(18시간) 배양한 후 플레이트에 부착시켰다. 이어서, 연속 희석된 실험용 양성 대조 화합물을 각각의 웰에 분배하고 37℃ 및 5% CO2에서 7시간 동안 인큐베이션하였다. DMSO 단독으로 자극된 세포도 음성 대조로 작용한다. 인큐베이션 후, 30 μl의 프리-믹스 분석 완충액과 기질 완충액을 제조사의 지침에 따라 각각의 웰에 첨가하였다. 플레이트당 20초의 노출 시간으로 CLIPR 장치에서 발광 신호를 판독하였다.
각각의 화합물에 대해 용량 반응 곡선을 생성하고, EC50 값은 최대 신호의 50%를 나타내는 농도로서 결정되었다.
선별된 분석 결과
유리된 형태 또는 약학적으로 허용 가능한 염 형태의 화학식 I의 다양한 화합물은, 예를 들어 본 출원에 기술된 시험관내 시험에서 나타나는 것과 같은 약리학적 특성을 나타낸다. 이들 실험에서의 EC50 값은 기준선과 최대 반응 사이의 중간 반응을 유발하는 문제의 시험 화합물의 농도로서 주어진다. 다른 실시예에서, 화학식 I의 화합물은 1 nM 내지 2 μM 범위의 EC50 값을 갖는다. 다른 실시예에서, 화학식 I의 화합물은 1 nM 내지 1 μM 범위의 EC50 값을 갖는다. 다른 실시예에서, 화학식 I의 화합물은 1 nM 내지 500 nM 범위의 EC50 값을 갖는다. 다른 실시예에서, 화학식 I의 화합물은 1 nM 내지 250 nM 범위의 EC50 값을 갖는다. 다른 실시예에서, 화학식 I의 화합물은 1 nM 내지 100 nM 범위의 EC50 값을 갖는다. 다른 실시예에서, 화학식 I의 화합물은 1 nM 내지 50 nM 범위의 EC50 값을 갖는다. 다른 실시예에서, 화학식 I의 화합물은 1 nM 내지 25 nM 범위의 EC50 값을 갖는다. 다른 실시예에서, 화학식 I의 화합물은 1 nM 내지 10 nM 범위의 EC50 값을 갖는다.
본 발명의 화합물의 시험관내 활성을 설명하기 위해, 화학식 I의 특정 화합물에 의한 TLR7 자극에 대한 EC50 값을 표 2에 나타내었다. 시스테인 부가물은 리소좀 내의 분해로 발생하는 것으로 추정되는 분해대사물이라고 생각된다(Bioconjugate Chem. 2006, 17, 114-124). 표 2의 특정 화합물은 상응하는 모 화합물을 시스테인으로 유도체화한 결과이다.
Figure pct00676
실시예 70
항-HER2 항체 돌연변이의 특정 시스테인 잔기에 대한 TLR7 작용제의 접합에 의한 항-HER2-TLR7 작용제 접합체의 생성
특정 시스테인(Cys) 돌연변이를 갖는 항-HER2 항체의 제조
부위-특이적 시스테인 돌연변이를 갖는 항-HER2 항체, 예를 들어 트라스투주맙의 제조는 WO 2014/124316 및 WO 2015/138615(각각 본원에 참조로 포함됨)에 이미 설명되어 있다. 요약하자면, 항-HER2 항체(예를 들어, 트라스투주맙)의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 DNA를 화학적으로 합성하여, 인간 IgG1 및 인간 카파 경쇄의 불변 영역을 포함하는 2개의 포유동물 발현 벡터 pOG-HC와 pOG-LC로 클로닝하였다. 벡터는 CMV 프로모터 및 신호 서열 MKTFILLLWVLLLWVIFLLPGATA(서열번호 27)를 포함한다. 올리고뉴클레오티드 지정 돌연변이 유도를 이용해 항-HER2 항체의 Cys 돌연변이 작제물을 제조하고, DNA 시퀀싱에 의해 Cys 돌연변이 작제물의 서열을 확인하였다.
예를 들어, 시스테인은 항-HER2 항체의 다음 위치(모든 위치는 EU 넘버링에 의함) 중 하나 이상에 도입될 수 있다: (a) 항체 중쇄의 위치 152, 360 및/또는 375, 및 (b) 항체 경쇄의 위치 107, 159, 및/또는 165. 예를 들어, 시스테인은 중쇄의 위치 152에 도입되어 항-HER2 mAb4를 생성할 수 있고, 이는 서열번호 19의 경쇄 서열 및 서열번호 30의 중쇄 서열을 갖는다.
이전에 기술된 바와 같이 일시적 형질감염 방법을 이용해 중쇄 및 경쇄 플라스미드를 공동 형질감염시켜 293 Freestyle™ 세포에서 항-HER2 항체의 Cys 돌연변이를 발현시켰다(Meissner, et al., Biotechnol Bioeng. 75:197-203 (2001)). 발현된 항체를 표준 단백질 A 친화성 크로마토그래피에 의해 세포 상청액으로부터 정제하였다.
유사한 방법을 이용해 트라스투주맙의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역을 CHO 세포에서의 발현을 위한 2개의 벡터로 클로닝하였다. 중쇄 벡터는 인간 IgG1 항체의 불변 영역을 암호화하며, 신호 펩티드(MPLLLLLPLLWAGALA)(서열번호 28), 중쇄의 발현을 유도하는 CMV 프로모터, 및 CHO 세포로의 안정적인 형질감염을 위한 적절한 신호 및 선택 서열을 포함한다. 경쇄 벡터는 인간 카파 경쇄의 불변 영역을 암호화하며, 신호 펩티드(MSVLTQVLALLLLWLTGTRC)(서열번호 29), 경쇄의 발현을 유도하는 CMV 프로모터, 및 CHO 세포로의 안정적인 형질감염을 위한 적절한 신호 및 선택 서열을 포함한다. 항체를 생산하기 위해, 중쇄 벡터 및 경쇄 벡터를 CHO 세포주로 공동 형질감염시켰다. 세포를 선별한 후, 안정적으로 형질감염된 세포를 항체 생산에 최적화된 조건에서 배양하였다. 항체를 표준 단백질 A 친화성 크로마토그래피에 의해 세포 상청액으로부터 정제하였다.
표준 돌연변이 유도 방법을 이용해 항체 벡터의 불변 영역에 대한 추가 돌연변이를 생성하였다.
TLR7 작용제에 대한 Cys 돌연변이 항-HER2 항체의 환원, 재산화, 및 접합
링커를 포함하는 본 발명의 화학식 I의 화합물을 문헌[Junutula JR, et al., Nature Biotechnology 26:925-932 (2008)]에 기술된 방법을 이용해 항체로 조작된 Cys 잔기에 접합시켰다.
포유동물 세포에서 발현된 항체 내의 조작된 Cys 잔기는 생합성 중에 글루타티온(GSH) 및/또는 시스테인과 같은 부가물(이황화물)에 의해 변형되기 때문에(Chen et al. 2009), 초기에 발현된 변형된 Cys는 티올 반응성 시약, 예컨대 말레이미도 또는 브로모-아세트아미드 또는 아이오도-아세트아미드 기에 반응하지 않는다. 조작된 Cys 잔기를 접합시키기 위해서는, 이황화물을 환원시켜 글루타티온 또는 시스테인 부가물을 제거할 필요가 있으며, 이는 일반적으로 발현 항체 내 모든 이황화물의 환원을 수반한다. 이는 먼저 항체를 디티오트레이톨(DTT)과 같은 환원제에 노출시킨 다음 항체의 모든 천연 이황화 결합을 재산화시켜 기능적 항체 구조를 복원 및/또는 안정화시킴으로써 달성될 수 있다. 따라서, 천연 이황화 결합 및 조작된 Cys 잔기(들)의 시스테인 또는 GSH 부가물들 사이의 이황화 결합을 환원시키기 위해, 새로 제조된 DTT를 이전에 정제된 트라스투주맙 Cys 돌연변이에 10 mM 또는 20 mM의 최종 농도로 첨가하였다. 37℃에서 1시간 동안 DTT와 함께 항체를 인큐베이션한 후, 매일 완충액을 교환하면서 혼합물을 3일 동안 PBS에 대해 투석하여 DTT를 제거하고 천연 이황화 결합을 재산화시켰다. 개별 중쇄 및 경쇄 분자로부터 항체 사량체를 분리할 수 있는 역상 HPLC로 재산화 과정을 모니터링하였다. 반응물을 80℃로 가열된 PRLP-S 4000A 컬럼(50 mm x 2.1 mm, Agilent)에서 분석하고, 0.1%의 TFA를 함유하는 물 중의 30~60%의 아세토니트릴의 선형 구배에 의해 1.5 ml/분의 유량으로 컬럼 용리를 수행하였다. 컬럼으로부터의 단백질의 용리를 280 nm에서 모니터링하였다. 재산화가 완료될 때까지 투석을 계속하였다. 재산화는 쇄내 이황화물 및 쇄간 이황화물을 복구시키는 한편, 투석은 새로 도입된 Cys 잔기(들)에 연결된 시스테인 및 글루타티온을 투석 제거되도록 한다.
재산화 후, PBS 완충액(pH 7.2) 중의 재산화된 항체에 말레이미드-함유 화합물을 조작된 Cys에 대해 일반적으로 1.5:1, 2:1, 또는 5:1의 비율로 첨가하고, 1시간 동안 인큐베이션을 수행하였다. 일반적으로, 표준 방법에 의한 단백질 A 수지를 통한 정제에 이어 PBS로 완충액 교환을 하여 과량의 유리 화합물을 제거하였다.
항-HER2 항체(예를 들어, 트라스투주맙)의 Cys 돌연변이를 대안적으로 온-수지(on-resin) 방법을 이용해 환원 및 재산화시켰다. 단백질 A 세파로스 비드(10 mg의 항체당 1 ml)를 PBS(칼슘염 또는 마그네슘염 무함유)에서 평형화시킨 후, 항체 샘플에 회분식으로 첨가하였다. pH 8.0의 0.5 M 인산나트륨 250 ml에 3.4 g의 NaOH를 첨가하여 제조된 용액 10 ml에 850 mg의 시스테인 HCl을 용해시켜 0.5 M 시스테인 원액을 제조한 후, 항체/비드 슬러리에 20 mM 시스테인을 첨가하고, 실온에서 30~60분 동안 천천히 혼합하였다. 비드를 중력 컬럼에 로딩하고, 30분 내에 50 베드 부피의 PBS로 세척한 후, 1 베드 부피의 PBS에 재현탁된 비드로 컬럼을 캡핑하였다. 재산화의 속도를 조정하기 위하여, 50 nM 내지 1 μM의 염화구리를 선택적으로 첨가하였다. 소량의 수지 시험 샘플을 제거하고, IgG 용리 완충액(Thermo)에서 용리시키고, 전술한 바와 같이 RP-HPLC로 분석하여 재산화 진행을 모니터링하였다. 목적하는 정도로 재산화가 완료되면, 조작된 시스테인에 대한 2~3몰 과량의 화합물 첨가에 의해 접합이 즉시 개시될 수 있었고, 혼합물을 실온에서 5~10분 동안 반응시킨 후, 컬럼을 적어도 20컬럼 부피의 PBS로 세척하였다. 항체 접합체를 IgG 용리 완충액으로 용리시키고, pH 8.0의 0.5 M 인산나트륨 0.1 부피로 중화시키고, PBS로 완충액 교환을 하였다. 대안적으로, 수지에서 항체와의 접합을 개시하는 대신, 적어도 20컬럼 부피의 PBS로 컬럼을 세척하고, 항체를 IgG 용리 완충액으로 용리시키고 pH 8.0의 완충액으로 중화시켰다. 이어서, 항체를 접합 반응에 사용하거나, 향후 사용을 위해 급속 동결시켰다.
항-HER2-TLR7 작용제 접합체의 특성
접합 정도를 결정하기 위해 항체-TLR7 작용제 접합체를 분석하였다. 환원 및 탈글리코실화된 샘플에 대한 LC-MS 데이터로부터 화합물 대 항체 비를 외삽하였다. LC/MS는 접합체 샘플 내의 항체에 부착된 링커-전달체(화합물)의 평균 분자수의 정량화를 가능하게 한다. HPLC는 항체를 경쇄와 중쇄로 분리하고, 쇄당 링커-전달체 기의 수에 따라 중쇄(HC)와 경쇄(LC)를 분리한다. 질량 스펙트럼 데이터는 혼합물의 성분 종, 예를 들어 LC, LC+1, LC+2, HC, HC+1, HC+2 등의 확인을 가능하게 한다. LC 및 HC 쇄 상의 평균 로딩으로부터, 항체 접합체에 대한 화합물 대 항체의 평균 비를 계산할 수 있다. 주어진 접합체 샘플에 대한 화합물 대 항체 비는 2개의 경쇄 및 2개의 중쇄를 함유하는 사량체 항체에 부착된 화합물(링커-전달체) 분자의 평균 개수를 나타낸다.
Superdex 200 10/300 GL(GE Healthcare) 및/또는 Protein KW-803 5 μm 300 x 8 mm(Shodex) 컬럼에서 분석용 크기 배제 크로마토그래피(AnSEC)를 이용해 접합체를 프로파일링하고, 분석용 크기 배제 크로마토그래피에 기초하여 응집을 분석하였다. 약 20 μg의 항체(초기에 PBS에 존재)를 0.5 부피의 3 M 황산암모늄으로 희석하여 제조된 샘플로, 완충액 A(20 mM His-HCl, 1.5 M 황산암모늄, pH 6.0) 및 완충액 B(20 mM His-HCl, 15% 이소프로판올, pH 6.0)의 이원 구배를 이용해, Agilent 1260 LC 시스템(Santa Clara, CA, USA)에 설치된 Tosoh Bioscience(King of Prussia, PA, USA) TSKgel Butyl-NPR 컬럼(100 mm × 4.6 mm, 2.5 μm)에서 분석용 소수성 상호작용 크로마토그래피(AnHIC)에 의해 접합체를 또한 프로파일링하였다.　소수성 지수는 소수성이 알려진 4개의 표준 샘플의 선형 회귀에 대해 계산된다. 면적별 최대 피크의 소수성이 보고된다.
화합물 대 항체 비가 높은 대부분의 접합체는 주로 단량체였고 낮은 소수성을 나타냈다(높은 소수성 지수는 HIC 컬럼으로부터의 빠른 용리에 해당). 이 방법을 통한 접합은 대부분의 화합물에 대해 95%보다 높은 접합 효율을 나타냈다(표 3). 대부분의 접합체는 4% 미만의 이량체 및 올리고머 물질을 함유한다(표 3). 0.80 이상의 소수성 지수(HI)가 유리한 특성으로 간주된다. 대부분의 접합체는 0.8보다 큰 HI 값을 나타냈다(표 3). 이는 접합체가 효율적으로 제조될 수 있고 유리한 특성을 가질 수 있음을 시사한다.
Figure pct00677
Figure pct00678
실시예 71
비조작 항-HER2 항체의 천연 이황화 결합의 부분 환원을 통한 항-HER2-TLR7 작용제 접합체의 생성
본 발명의 일부 화합물은 항체의 부분 환원을 수반하는 절차를 이용해 비조작 항체의 천연 시스테인 잔기에 접합될 수도 있다(Doronina, S. O. et al., Nat. Biotechnol. 21, 778-784, 2003). TCEP를 10 mM의 최종 농도로 첨가하고 혼합물을 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하여 항-HER2 항체의 쇄간 이황화 결합 및 쇄내 이황화 결합(5 내지 10 mg/ml의 농도)을 2 mM의 EDTA를 함유한 PBS에서 먼저 부분적으로 환원시켰다. 탈염 및 1 wt%의 PS-20 세정제 첨가 후, 부분 환원된 항체(1~2 mg/ml)를 항체 10 mg당 0.5 내지 1 mg의 TLR7 작용제 화합물과 4℃에서 밤새 반응시켰다. 생성된 접합체를 표준 방법에 의한 단백질 A 크로마토그래피로 정제하고, PBS로 완충액 교환을 하고, 전술한 바와 같이 MS, AnSEC, 및 AnHIC로 프로파일링하였다. 항-HER2 mAb3의 환원에 이은 화합물 C-1과의 접합에 의해 제조된 하나의 접합체 예에 대해 측정된 화합물 대 항체 비, 응집 거동, 및 소수성 데이터를 표 3에 요약하였다.
실시예 72
1,3-디클로로프로판-2-온을 사용해 비조작 항-HER2 항체의 천연 쇄간 이황화 결합을 재연결하는 항-HER2-TLR7 작용제 접합체의 생성
대안적 방법(미국 특허 출원 20150150998)에서, 비조작 재조합 항-HER2 항체의 쇄간 이황화 결합은 하기 두 단계를 이용해 변형되어 본 발명의 작용제 화합물에 접합될 수 있다.
반응식 15
1,3 디클로로프로판-2-온 가교에 이은 도입된 케톤에의 첨가를 이용한 천연 시스테인 잔기에의 2단계 접합
Figure pct00679
단계 1: 쇄간 이황화 가교의 환원 및 1,3-디클로로프로판-2-온을 이용한 재가교: 0.1 M HEPES 완충액(pH 8.0) 중의 항-HER2 항체 mAb3(136 μM)과 1,3-디클로로프로판-2-온(33 mM)의 용액에 TCE·PHCl(1.63 mM)을 4℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 4℃에서 16시간 동안 약하게 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 PD-10 탈염 컬럼(GE Healthcare)을 이용해 PBS로 완충액 교환을 하였다. 생성된 용액을 50K Amicon 필터를 이용해 농축시켜, 변형된 항-HER2 항체를 수득하였다. 변형은 ESI-MS로 확인되었다(용리액 A: 물 + 0.1% 포름산; 용리액 B: 아세토니트릴 + 0.04% 포름산; 구배: 2분 내에 3%에서 8%로 - 유량: 1.0 ml/분, 컬럼: Proswift Monolith 4.6*50mm, 40℃); 145398 Da(PNGase F에 의한 탈글리코실화 후).
단계 2: 작용제 화합물(C-37)의 접합: 변형된 항-HER2 항체(30 mg/ml)를, 15 vol% DMSO의 최종 농도에서 0.1 M 아닐리늄 아세테이트 완충액(pH 4.6)에 아미노-옥시 모이어티 연결을 포함하는 3.0 mM의 화합물 (C-37)과 반응시켰다. 반응 혼합물을 23℃에서 약 16시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 반응 혼합물을 50K Amicon 필터를 이용해 PBS(pH 7.4)로 완충액 교환을 하여, 변형된 항-HER2-화합물 접합체를 수득하였다.
변형된 항-HER2 항체에 대한 접합에 화합물 (C-35)를 이용해 유사한 접합체를 수득하였다.
접합체를 전술한 바와 같이 MS, AnSEC, 및 AnHIC로 프로파일링하였다. 측정된 화합물 대 항체 비, 응집 거동, 및 소수성 데이터를 표 3에 요약하였다. 화합물 대 항체 비가 높은 2개의 예시적 접합체는 주로 단량체였고 낮은 소수성을 나타냈다(높은 소수성 지수는 HIC 컬럼으로부터의 빠른 용리에 해당). 이 방법을 통한 접합은 85%보다 높은 접합 효율을 나타냈다(표 3). 접합체는 2% 미만의 이량체 및 올리고머 물질을 함유한다(표 3). 접합체는 0.85보다 큰 HI 값을 나타냈다(표 3). 이는 접합체가 효율적으로 제조될 수 있고 유리한 특성을 가질 수 있음을 시사한다.
실시예 73
항-HER2 항체의 천연 리신 잔기에 대한 접합에 의한 항-HER2-TLR7 작용제 접합체의 생성
천연 항체는 확립된 방법을 통해 본 발명의 특정 화합물로 작용화될 수 있다. 예를 들어, 4 mg/ml의 PBS(pH 7.2) 중의 항-ratHER2 항체(7.16.4; Bio X Cell(West Lebanon, NH)에서 구입)를 최종 DMSO 농도 20 vol%의 760 μM의 화합물 (C-47)과 혼합하였다. 반응물을 실온에서 밤새 인큐베이션한 후 pH 8의 50 mM Tris로 ?칭시켰다. 유사한 방법을 이용해 항-HER2 mAb3 또는 작용제 화합물 C-46 및 C-50과의 접합체를 제조하였다. 생성된 항체 접합체를 표준 방법에 의한 단백질 A 크로마토그래피로 정제하고, PBS로 완충액 교환을 하였다.
항체 접합체를 전술한 바와 같이 MS, AnSEC, 및 AnHIC로 프로파일링하였다. 측정된 화합물 대 항체 비, 응집 거동, 및 소수성 데이터를 표 3에 요약하였다. 몇몇 리신-반응 항체 접합체는 사용된 AnSEC 컬럼에서 늦은 용리 및/또는 피크 테일링을 나타내며, 이는 응집의 검출을 어렵게 한 컬럼 상호작용을 시사한다.
실시예 74
A1-태그 항-HER2 돌연변이 항체와 아미노-옥시 반응성 기를 함유한 작용제 화합물과의 2단계 접합을 이용한 항-HER2-TLR7 작용제 접합체의 생성
번역후 4'-포스포판테테이닐화는 구조적으로 다양한 소분자를 갖는 재조합 단백질의 부위-특이적 표지를 위한 범용적 방법이다(Yin J, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102:15815-15820, 2005; Zhou Z, et al., ACS Chem. Biol. 2:337-346, 2007). 대상을 가리지 않는 4'-포스포판테테이닐 트랜스퍼라제(PPTase)의 촉매 작용을 기반으로 한 이러한 효소적 접근법은 매우 균질한 항체 접합체의 제조를 위해 채택되었다(WO2013184514 참조). 효소적 표지는 항체의 불변 영역의 다양한 부위에 11량체 또는 12량체 S6, ybbR, 및 A1 펩티드 서열을 도입함으로써 달성된다. 예를 들어, 서열 GDSLDMLEWSLM(서열번호 31)의 A1 태그는 항-HER2 mAb2의 중쇄에 잔기 E388(EU 넘버링) 이후에 도입되어, 서열번호 19의 경쇄 서열 및 서열번호 32의 중쇄 서열을 갖는 항-HER2 mAb5를 생성할 수 있다. 하나의 전략은 번역후 4'-포스포판테테이닐화에 의해 부위-특이적 항체-화합물 접합체를 제조하는 2단계 방법이다(WO2013184514 참조). 이 접근법의 첫 번째 단계는 아지도, 알켄, 알킨, 케톤, 또는 알데히드 모이어티와 같은 생물직교 기를 함유한 CoA 유사체를 이용한 펩티드-태그 항체의 PPTase-촉매 표지에 기초한다. 생물직교적으로 표지된 항체의 친화성 정제 후, 2단계 방법의 두 번째 단계는 생물직교 기와 반응하는 모이어티를 포함하는 화합물의 접합을 수반한다. 예를 들어, 다음 섹션은 중쇄의 불변 영역 내 특정 부위에 A1 태그 삽입을 포함하는 항-HER2 돌연변이 항체를 위한 2단계 방법을 설명한다. 또한, 2단계 방법이 옥심 리게이션 화학에 대해 예시되지만, 이 전략은 비-구리 클릭 화학, 슈타우딩거 리게이션, 이소니트릴 기반 클릭 화학, 및 테트라진 리게이션을 포함한 클릭 화학과 같은 다른 생물직교 화학으로 확장될 수 있다.
옥심 리게이션 화학은 부위-특이적 단백질 접합체의 제조를 위한 효율적인 생물직교 방법으로서 여러 연구 그룹에 의해 사용되어 왔다(Axup JY, et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 109:16101-16106, 2012; Rabuka D, et al., Nat Protoc. 7:1052-1067, 2012). 번역후 4'-포스포판테테이닐화를 옥심 리게이션과 조합하기 위해, CoA 생합성 효소 CoAA, CoAD, 및 CoAE를 이용해 해당 판토테네이트 전구체 분자(화합물 Int-4)로부터 케톤-변형 CoA 유사체를 화학효소적으로 제조하였다(Worthington AS, Burkart MD (2006) Org Biomol Chem. 4:44-46) (Kosa NM, Haushalter RW, Smith AR, Burkart MD (2012) Nat Methods 9:981-984). 그 다음, PPTase 촉매 작용을 이용해 항-HER2 항체의 삽입된 A1 태그에 부위 특이적으로 생물직교 케톤기를 효소적으로 접합시켰다. 구체적으로, 12.5 mM의 MgCl2와 20 mM의 NaCl로 보충된 75 mM의 Tris-HCl 완충액(pH 8.0)에서 37℃로 2일 동안, 대장균으로부터의 약 0.5 μM의 AcpS PPTase의 존재하에, 2.5 μM의 항-HER2 mAb5를 30 μM의 케톤-CoA 유사체(화합물 C-69)(항체에 대해 12 몰 당량)와 접합시켰다. 접합 반응의 완료를 유도하기 위해, 반응 혼합물에 약 1 μM의 B. 서브틸리스 Sfp PPTase를 보충하는 한편, 화합물 C-69의 농도를 약 60 μM로 증가시켰다. 반응물을 실온에서 추가로 4일 동안 인큐베이션하였다. 환원 및 탈글리코실화된 샘플의 디컨벌루션된 ESI-MS 스펙트럼을 얻어, 케톤-CoA 유사체(화합물 C-69)를 이용한 항-HER2 mAb5 항체의 표지를 확인하였다. 관찰된 질량은 해당 케톤-작용화 중쇄의 계산된 분자량과 일치하였다. PPTase 효소와 과잉의 케톤-CoA 유사체를 단백질 A 친화성 크로마토그래피(MabSelect SuRe, GE Healthcare Life Sciences)로 제거한 후, 케톤-활성화 항체인 항-HER2-mAb5-(C-69)를 Pierce™ IgG 용리 완충액(Thermo Fisher Scientific)으로 용리시킨 다음 1 M의 Tris-HCl 완충액(pH 8.0)으로 즉시 중화시켰다. 중화된 항체 용액을 PBS로 완충액 교환을 하고 50K Amicon 필터를 이용해 농축시켰다.
케톤기의 부위-특이적 부착은 2단계 방법의 두 번째 단계로서 케톤-활성화 항-HER2 mAb5-(C-69)에 대한 작용제 화합물의 후속 옥심 리게이션을 가능하게 하였다. 7 vol%의 DMSO를 함유한 100 mM의 아닐리늄 아세테이트 완충액(pH 4.6)에서 48 μM의 케톤-작용화 항체를 30배 몰 과량(1.4 mM)의 아미노옥시-작용제 C-35 및 C-37과 반응시켰다. 실온에서 17시간의 인큐베이션 후, 50K Amicon 필터로 한외여과하여 과잉의 아미노옥시 시약을 제거하고 PBS로 반복 세척하였다. 항체 접합체를 전술한 바와 같이 MS, AnSEC, 및 AnHIC로 프로파일링하였다. 측정된 화합물 대 항체 비, 응집 거동, 및 소수성 데이터를 표 3에 요약하였다. 표 3에 나타낸 바와 같이, 2단계 방법은 아미노옥시-작용제 C-35 및 C-37을 이용한 케톤-활성화 항-HER2 mAb5-(C-69)의 거의 정량적인 표지를 제공하였다.
케톤-조효소 A 유사체(화합물 C-69)
Figure pct00680
20 mM의 MgCl2를 함유한 50 mM의 HEPES 완충액(pH 8.0)에서 37℃로 약 16시간 동안, 10 μM의 황색포도상구균 CoAA, 25 μM의 대장균 CoAD, 및 20 μM의 대장균 CoAE의 존재하에, 5 mM의 화합물 (Int-4)를 25 mM의 ATP와 반응시켜, 화합물 (Int-4)를 케톤-작용화 CoA 유사체(C69)로 전환시켰다. 반응 혼합물을 20,817 x g로 2분 동안 원심분리한 후, 10 kDa 컷오프를 갖는 Amicon 울트라 원심 필터를 통한 한외여과에 의해 가용성 효소를 분리하였다. 화합물 (i-4)의 케톤-작용화 CoA 유사체(C59)로의 효소적 전환은 항-HER2 mAb5-(C-69)-(C-35) 및 항-HER2 mAb5-(C-69)-(C-37)의 형성에 의해 확인되었다(표 3 참조).
실시예 75
항-HER2-TLR7 작용제 접합체의 시험관내 안정성 시험
전달체를 함유한 말레이미드와 항체의 Cys 잔기 사이에 형성된 결합의 안정성은 이 반응에서 형성된 석신이미드 고리의 가수분해에 의해 향상된다. 석신이미드 고리 가수분해가 본 발명의 작용제 화합물로 제조된 항체 접합체의 안정성에 미치는 효과를 마우스 혈청에서의 시험관내 인큐베이션 후 검토하였다. 항체에 접합된 말레이미드 전달체의 석신이미드 고리의 가수분해 및 전달체 탈접합에 기인하는 질량 변화를 LC-MS로 모니터링하였다. 석신이미드의 가수분해는 특정 조건, 예컨대 높은 pH, 높은 온도, 또는 높은 염에 의해 자극되는 것으로 보고되어 있다(J. Am. Chem. Soc. 1955, 77: 3922; Biochemistry 1976, 15: 2836; Biochem. J. 1979, 179: 191-197; J Pharm Sci. 1984, 73:1767-1771; Bioorg. Med. Chem. Lett. 17: 6286-6289, 2007). 접합체의 시험관내 안정성을 조사하기 위해, 항-HER2 항체 mAb2 접합체를 50~70%의 마우스 혈청에서 37℃로 인큐베이션하였다. 50개의 접합체 마이크로 샘플을 각 시점(일반적으로 0, 8, 24, 48, 및 72시간)에 채취하여 즉시 급속 동결시켰다. 처리 및 분석을 위해 샘플을 후에 해동시켰다. 요약하자면, DTT로 환원하여 이황화 결합을 끊기 전에 Fc로부터 Fab를 분리하기 위해, 항체를 PNGaseF로 처리하여 중쇄의 힌지 영역 근처에서 절단되는 단백질분해 효소 및 N-연결 글리칸을 제거하였다. 이어서, 경쇄, 중쇄 Fab, 및 중쇄 Fc 단편을 ESI-MS로 분석하였다. 탈접합된 항체, 가수분해된 석신이미드 고리를 갖는 전달체가 부착된 접합체, 및 온전한 석신이미드 고리를 갖는 전달체가 부착된 접합체의 상대적 개체수를 해당 접합체 종의 상대적 MS 강도로부터 계산하였다. 접합체의 서브세트에 대한 탈접합의 정도 및 석신이미드 가수분해의 정도를 표 4 및 5에 나타내었다. 일반적으로, 72시간의 시험관내 인큐베이션 동안 접합체는 로딩된 화합물의 13% 미만을 잃고, 일반적으로 석신이미드 고리 가수분해는 48시간까지 85% 넘게 완료된다. 화합물 (C-5) 및 화합물 (C-21)로 예시되는 본 발명의 특정 화합물은 역방향 말레이미드 반응을 통한 탈접합 및 석신이미드 고리 가수분해를 통한 추가 안정화 가능성이 더 낮으므로 개선된 접합체 안정성을 나타낸다.
Figure pct00681
Figure pct00682
실시예 76
N87 위 종양 이종이식 모델에서 항-HER2-TLR7 작용제 접합체의 생체내 시험
물질 및 방법
N87 위 암종 이종이식 마우스 모델의 경우, 6~8주령의 암컷 SCID-베이지 마우스(Harlan Laboratories에서 구입)를 이식에 사용하였다. N87 세포(ATCC에서 입수, 카탈로그#CRL-5822, 공급업체 로트#7686255)를 5%의 CO2가 있는 37℃ 인큐베이터에서의 멸균 조건에서 2주 동안 성장시켰다. 10%의 소태아혈청을 함유하는 RPMI 배지에서 세포를 성장시켰다. 세포를 0.05%의 트립신/EDTA와 함께 3~4일마다 계대시켰다. 이식 당일, N87 세포를 떠서(계대 x4), RPMI1640 무혈청 배지에 1 x 106 세포 및 50% 매트리젤/100 μl의 농도로 재현탁시켰다. 세포에 마이코플라스마 및 뮤린 바이러스가 없는지 확인하기 위해 세포에 대해 Radil 시험을 수행하였다.
28g 바늘(100 μl 주사 부피)을 사용해 N87 세포를 아래쪽 옆구리에 피하 주사로 이식하였다. 이식 후, 캘리퍼로 종양을 측정하고, 종양이 감지되면 주당 2회 마우스 체중을 측정하였다. 이어서, 2차원으로 주 2회 종양을 측정하였다. 캘리퍼 측정은 (L x W2)/2를 사용해 계산되었다. 마우스에게 정상 식이를 제공하고, 실험동물의 관리 및 사용에 관한 지침 및 실험동물 운영위원회의 규정에 따라 마우스를 SPF 동물 시설에 수용하였다.
이종이식 종양이 약 200 mm3에 도달했을 때, 마우스에게 0.3~10 mg/kg의 항-HER2 항체 또는 항-HER2-TLR7 작용제 접합체를 정맥내 경로로 투여하였다. 설치류에서 발견되지 않는 표적에 대해 항체를 발현시키고 항-HER2 항체에 대해 설명된 유사한 방법을 통해 접합시킴으로써 이소형 대조군 항체를 생성하였다. 주 2회 종양을 측정하였다. Prism 5(GraphPad) 소프트웨어를 사용해 평균 종양 부피를 플롯팅하였다. 효능 연구의 엔드포인트는 종양 크기가 2000 mm3의 부피에 도달했을 때 달성되었다. 주사 후, 임상적 악화의 징후에 대해서도 마우스를 면밀히 모니터링하였다. 어떤 이유로든 마우스가 호흡 곤란, 구부러진 자세, 활동 감소, 뒷다리 마비, 흉수에 대한 징후로서의 빈호흡, 20%에 근접하는 체중 감소, 또는 15% 이상의 다른 징후를 포함한 임의의 이환 징후를 나타낸 경우, 또는 정상적인 활동(수유, 이동)을 수행할 수 있는 능력이 손상된 경우, 마우스를 안락사시켰다.
결과
N87 위 종양 이종이식 마우스를 1 mg/kg, 2.5 mg/kg, 5 mg/kg, 또는 10 mg/kg의 항-HER2-mAb2-(C-1) 접합체(화합물 (C-1)은 항-HER2-mAb2 중쇄의 Cys 152 및 Cys 375에 접합됨)의 단회 투여로 정맥내 치료하였다. N87 이종이식 종양의 완전한 퇴행은 시험된 가장 낮은 용량(1 mg/kg)을 포함해 시험된 모든 용량에서, 항-HER2-mAb2-(C-1) 접합체로 치료받은 마우스에서 관찰되었다(도 1). 미치료 동물과 비교할 때, 10 mg/kg의 비접합 항-HER2 mAb2 단독, 또는 이소형 대조군 항체-(C-1) 접합체로 치료받은 N87 이종이식 마우스에서 종양 퇴행은 관찰되지 않았다(도 1).
0.3 mg/kg 또는 1 mg/kg의 항-HER2-mAb1-(C-1) 또는 항-HER2-mAb1-(C-5)의 단회 투여로 N87 위 종양 이종이식 마우스를 치료하였다(군당 10마리의 마우스). 1 mg/kg의 항-HER2-mAb1-(C-1)의 단회 투여 치료가 인간 N87 이종이식 종양의 완전한 퇴행을 유도한 반면, 0.3 mg/kg의 항-HER2-mAb1-(C-1)은 종양 정체를 나타냈다(도 2). 유사하게, 1 mg/kg의 항-HER2-mAb1-(C-5)의 단회 투여 치료가 인간 N87 이종이식 종양의 완전한 퇴행을 유도한 반면, 0.3 mg/kg의 항-HER2-mAb1-(C-5)는 종양 정체를 나타냈다(도 2). 미치료 동물과 비교할 때, 이소형 대조군 항체-(C-5) 접합체로 치료받은 N87 이종이식 마우스에서 N87 위 종양의 퇴행은 관찰되지 않았다. 이 데이터들은 낮은 용량, 예를 들어 1 mg/kg의 항-HER2-TLR7 작용제 접합체(예를 들어, 항-HER2-mAb1-(C-1) 또는 항-HER2-mAb1-(C-5), 항-HER2-mAb2-(C-1))의 단회 치료에 의해 종양 퇴행이 달성될 수 있음을 보여주었다.
별개의 연구에서, 1 mg/kg, 3 mg/kg, 또는 5 mg/kg의 항-HER2-mAb1-(C-5)의 단회 투여로 N87 위 종양 이종이식 마우스를 치료하였다(군당 8마리의 마우스). 이 연구에서, 3 mg/kg 또는 5 mg/kg의 항-HER2-mAb1-(C-5)의 단회 투여 치료가 인간 N87 이종이식 종양의 완전한 퇴행을 유도한 반면, 1 mg/kg의 항-HER2-mAb1-(C-5)은 종양 정체를 나타냈다(도 3).
또한, 1 mg/kg의 항-HER2-mAb1-(C-5), 항-HER2-mAb1-(C-35), 항-HER2-mAb1-(C-37), 항-HER2-mAb1-(C-59), 항-HER2-mAb1-(C-60), 항-HER2-mAb1-(C-61), 항-HER2-mAb1-(C-62), 또는 항-HER2-mAb1-(C-64)의 단회 투여로 N87 위 종양 이종이식 마우스를 치료하였다(군당 6마리의 마우스). 다른 화합물로 접합된 1 mg/kg의 항-HER2-mAb1의 단회 투여 치료는 1 mg/kg의 항-HER2-mAb1-(C-5)의 단회 투여 후에 관찰된 것과 유사하게 종양 정체를 나타냈다(도 4).
실시예 77
MMC(ratHER2 + ) 유방암 동계 모델에서 항-ratHER2-TLR7 작용제 접합체의 생체내 시험
물질 및 방법
MMC(ratHER2+) 유방암 동계 모델의 경우, Val664에서 Glu664로의 돌연변이를 함유한 활성화 랫트 Erbb2(c-neu) 종양유전자를 발현하는 6~10주령의 암컷 FVB/N 유전자이식 마우스(FVB-Tg(MMTV-Erbb2)NK1Mul/J; 처음에는 Jackson Laboratories에서 구입, 사내 사육)를 이식에 사용하였다. MMC 세포(워싱턴 대학교 Nora Disis 교수로부터 얻은 FVB/N 유전자이식 마우스로부터 얻은 종양에서 유래)를 5%의 CO2가 있는 37℃ 인큐베이터에서의 멸균 조건에서 2주 동안 성장시켰다. 20%의 소태아혈청 및 페니실린/스트렙토마이신을 함유하는 DMEM 배지에서 세포를 성장시켰다. 세포를 0.05%의 트립신/EDTA와 함께 3~4일마다 계대시켰다. 이식 당일, 세포를 떠서(계대 x4), RPMI1640 무혈청 배지에 2.5 x 105 세포 및 10% 매트리젤/100 μl의 농도로 재현탁시켰다. 세포에 마이코플라스마 및 뮤린 바이러스가 없는지 확인하기 위해 세포에 대해 Radil 시험을 수행하였다.
28 게이지 바늘(100 μl 주사 부피)을 사용해 MMC 세포를 아래쪽 옆구리에 피하 주사로 이식하였다. 이식 후, 캘리퍼로 종양을 측정하고, 종양이 감지되면 주당 2회 마우스 체중을 측정하였다. 이어서, 2차원으로 주 2회 종양을 측정하였다. 캘리퍼 측정은 (L x W2)/2를 사용해 계산되었다. 마우스에게 정상 식이를 제공하고, 실험동물의 관리 및 사용에 관한 지침 및 실험동물 운영위원회의 규정에 따라 마우스를 SPF 동물 시설에 수용하였다.
종양이 200 mm3에 도달했을 때, 8마리 마우스의 군에 1 mg/kg의 항-ratHER2 항체(7.16.4, Bio X Cell(West Lebanon, NH)에서 구입) 또는 1 mg/kg의 항-ratHER2-TLR7 작용제 접합체(항-ratHER2-(C-46))를 정맥내 경로로 투여하였다. 주 2회 종양을 측정하였다. Prism 5(GraphPad) 소프트웨어를 사용해 평균 종양 부피를 플롯팅하였다. 효능 연구의 엔드포인트는 종양 크기가 2000 mm3의 부피에 도달했을 때 달성되었다. 주사 후, 임상적 악화의 징후에 대해서도 마우스를 면밀히 모니터링하였다. 어떤 이유로든 마우스가 호흡 곤란, 구부러진 자세, 활동 감소, 뒷다리 마비, 흉수에 대한 징후로서의 빈호흡, 20%에 근접하는 체중 감소, 또는 15% 이상의 다른 징후를 포함한 임의의 이환 징후를 나타낸 경우, 또는 정상적인 활동(수유, 이동)을 수행할 수 있는 능력이 손상된 경우, 마우스를 안락사시켰다.
결과
MMC ratHER2+ 유방암 동계 모델에서 항-ratHER2-(C-46) 접합체의 효능을 시험하기 위해, 피하 MMC 유방 종양이 있는 마우스를 1 mg/kg의 항-ratHER2-(C-46) 접합체, 또는 비접합 항-ratHER2로 정맥내 치료하였다(군당 8마리의 마우스). 도 5a 및 5b에 도시된 바와 같이, MMC 마우스 유방 종양(ratHER2+)의 완전한 퇴행은 항-ratHER2-(C-46) 접합체의 단회 투여로 치료받은 8마리의 마우스 중 7마리에서 관찰되었지만, 비결합 항-ratHER2 항체로 치료받은 8마리의 마우스 중에서는 3마리에서만 관찰되었다.
이 데이터들은 항-ratHER2-(C-46) 접합체가 ratHER2-양성 동계 유방암에 대해 비접합 항-ratHER2 항체 단독보다 치료적으로 더 효과적임을 시사한다.
실시예 78
HCC1954 유방 종양 이종이식 모델에서 항-HER2-TLR7 작용제 접합체의 생체내 시험
물질 및 방법
HCC1954 유방 이종이식 마우스 모델의 경우, 6~8주령의 암컷 SCID-베이지 마우스(Harlan Laboratories에서 구입)를 이식에 사용하였다. HCC1954 세포(ATCC에서 입수, 카탈로그 # CRL-2338, 공급업체 로트 # 5107643)를 5%의 CO2가 있는 37℃ 인큐베이터에서의 멸균 조건에서 2주 동안 성장시켰다. 10%의 소태아혈청을 함유하는 RPMI 배지에서 세포를 성장시켰다. 세포를 0.05%의 트립신/EDTA와 함께 3~4일마다 계대시켰다. 이식 당일, HCC1954 세포를 (회수하여) 떠서(계대 x17), RPMI1640 무혈청 배지에 1 x 106 세포 및 50% 매트리젤/100 μl의 농도로 재현탁시켰다. 세포에 마이코플라스마 및 뮤린 바이러스가 없는지 확인하기 위해 세포에 대해 Radil 시험을 수행하였다.
27G 바늘(100 μl 주사 부피)을 사용해 HCC1954 세포를 우측 유방 지방체에 피하 주사로 이식하였다. 이식 후, 캘리퍼로 종양을 측정하고, 종양이 감지되면 주당 2회 마우스 체중을 측정하였다. 이어서, 2차원으로 주 2회 종양을 측정하였다. 캘리퍼 측정은 (L x W2)/2를 사용해 계산되었다. 마우스에게 정상 식이를 제공하고, 실험동물의 관리 및 사용에 관한 지침 및 실험동물 운영위원회의 규정에 따라 마우스를 SPF 동물 시설에 수용하였다.
이종이식 종양이 약 200 mm3에 도달했을 때, 마우스에게 1~10 mg/kg의 항-HER2 항체 또는 항-HER2-TLR7 작용제 접합체를 정맥내 경로로 투여하였다. 설치류에서 발견되지 않는 표적에 대해 항체를 발현시키고 항-HER2 항체에 대해 설명된 유사한 방법을 통해 접합시킴으로써 이소형 대조군 항체를 생성하였다. 주 2회 종양을 측정하였다. Prism 5(GraphPad) 소프트웨어를 사용해 평균 종양 부피를 플롯팅하였다. 효능 연구의 엔드포인트는 종양 크기가 2000 mm3의 부피에 도달했을 때 달성되었다. 주사 후, 임상적 악화의 징후에 대해서도 마우스를 면밀히 모니터링하였다. 어떤 이유로든 마우스가 호흡 곤란, 구부러진 자세, 활동 감소, 뒷다리 마비, 흉수에 대한 징후로서의 빈호흡, 20%에 근접하는 체중 감소, 또는 15% 이상의 다른 징후를 포함한 임의의 이환 징후를 나타낸 경우, 또는 정상적인 활동(수유, 이동)을 수행할 수 있는 능력이 손상된 경우, 마우스를 안락사시켰다.
결과
HCC1954 유방 종양 이종이식 마우스를 1 mg/kg, 3 mg/kg, 또는 10 mg/kg의 항-HER2-mAb1-(C-5) 접합체(화합물 (C-5)는 항-HER2-mAb1 중쇄의 Cys 152 및 Cys 375에 접합됨)의 단회 투여로 정맥내 치료하였다(군당 8마리의 마우스). 10 mg/kg 또는 3 mg/kg의 항-HER2-mAb1-(C-5)의 단회 투여 치료가 인간 HCC1954 이종이식 종양의 완전한 퇴행을 유도한 반면, 1 mg/kg의 항-HER2-mAb1-(C-5)는 초기 종양 퇴행에 이어 종양 정체를 나타냈다(도 6). 10 mg/kg의 비접합 항-HER2 mAb2 단독으로 치료받은 HCC1954 이종이식 마우스에서 종양 퇴행은 관찰되지 않았다(도 6).
이 데이터들은 3 mg/kg의 항-HER2-TLR7 작용제 접합체(항-HER2-mAb1-(C-5))의 단회 치료에 의한 높은 HER2 발현 HCC1954 유방 종양 이종이식에서 종양 퇴행이 달성될 수 있음을 보여준다.
실시예 79
SKOV3 난소 종양 이종이식 모델에서 항-HER2-TLR7 작용제 접합체의 생체내 시험
물질 및 방법
SKOV3 난소 이종이식 마우스 모델의 경우, 6~8주령의 암컷 SCID-베이지 마우스(Harlan Laboratories에서 구입)를 이식에 사용하였다. SKOV3 세포(ATCC에서 입수, 카탈로그 # HTB-77, 공급업체 로트 # 7349765)를 5%의 CO2가 있는 37℃ 인큐베이터에서의 멸균 조건에서 2주 동안 성장시켰다. 10%의 소태아혈청을 함유하는 McCoy 5A 배지에서 세포를 성장시켰다. 세포를 0.05%의 트립신/EDTA와 함께 3~4일마다 계대시켰다. 이식 당일, SKOV3 세포를 (회수하여) 떠서(계대 x11), McCoy 5A 무혈청 배지에 5 x 106 세포 및 50% 매트리젤/100 μl의 농도로 재현탁시켰다. 세포에 마이코플라스마 및 뮤린 바이러스가 없는지 확인하기 위해 세포에 대해 Radil 시험을 수행하였다.
28½ G(100 μl 주사 부피)를 사용해 SKOV3 세포를 아래쪽 옆구리에 피하 주사로 이식하였다. 이식 후, 캘리퍼로 종양을 측정하고, 종양이 감지되면 주당 2회 마우스 체중을 측정하였다. 이어서, 2차원으로 주 2회 종양을 측정하였다. 캘리퍼 측정은 (L x W2)/2를 사용해 계산되었다. 마우스에게 정상 식이를 제공하고, 실험동물의 관리 및 사용에 관한 지침 및 실험동물 운영위원회의 규정에 따라 마우스를 SPF 동물 시설에 수용하였다.
이종이식 종양이 약 200 mm3에 도달했을 때, 마우스에게 3~10 mg/kg의 항-HER2 항체 또는 항-HER2-TLR7 작용제 접합체를 정맥내 경로로 투여하였다. 설치류에서 발견되지 않는 표적에 대해 항체를 발현시키고 항-HER2 항체에 대해 설명된 유사한 방법을 통해 접합시킴으로써 이소형 대조군 항체를 생성하였다. 주 2회 종양을 측정하였다. Prism 5(GraphPad) 소프트웨어를 사용해 평균 종양 부피를 플롯팅하였다. 효능 연구의 엔드포인트는 종양 크기가 2000 mm3의 부피에 도달했을 때 달성되었다. 주사 후, 임상적 악화의 징후에 대해서도 마우스를 면밀히 모니터링하였다. 어떤 이유로든 마우스가 호흡 곤란, 구부러진 자세, 활동 감소, 뒷다리 마비, 흉수에 대한 징후로서의 빈호흡, 20%에 근접하는 체중 감소, 또는 15% 이상의 다른 징후를 포함한 임의의 이환 징후를 나타낸 경우, 또는 정상적인 활동(수유, 이동)을 수행할 수 있는 능력이 손상된 경우, 마우스를 안락사시켰다.
HER2 면역조직화학(IHC)의 경우, HER2 염색 및 이종이식 HER2 점수에 대한 표준화된 지침 및 프로토콜을 사용하였다(예를 들어, 문헌[English et al., Mol Diagn Ther. 2013 Apr; 17(2): 85-99] 참조).
결과
SKOV3 난소 종양 이종이식 마우스를 3 mg/kg 또는 10 mg/kg의 항-HER2-mAb1-(C-5) 접합체(화합물 (C-5)는 항-HER2-mAb1 중쇄의 Cys 152 및 Cys 375에 접합됨)의 단회 투여로 정맥내 치료하였다. 10 mg/kg의 항-HER2-mAb1-(C-5)의 단회 투여 치료가 8마리 마우스 중 7마리에서 인간 SKOV3 이종이식 종양의 완전한 퇴행을 유도한 반면, 3 mg/kg의 항-HER2-mAb1-(C-5)는 초기 종양 퇴행에 이어 종양 재성장을 나타냈다(도 7). 미치료 동물과 비교할 때, 10 mg/kg의 비접합 항-HER2 mAb1 단독, 또는 이소형 대조군 항체-(C-5) 접합체로 치료받은 SKOV3 이종이식 마우스에서 종양 퇴행은 관찰되지 않았다(도 7).
이 데이터들은 N87 및 HCC 이종이식 모델에 비해 더 낮은 수준으로 Her2가 발현되는 이종이식 모델에서, 10 mg/kg의 항-HER2-TLR7 작용제 접합체(예를 들어, 항-HER2-mAb1-(C-1) 또는 항-HER2-mAb1-(C-5))의 단일 치료에 의해 종양 퇴행이 달성될 수 있음을 보여준다(도 8a 및 8b와 비교하여 도 8c). HER2 발현 수준에 기초하면, N87 및 HCC1954는 3+의 IHC 점수를 갖고, SKOV3은 2+의 IHC 점수를 갖는다. 따라서, 본원에 기술된 항-HER2-TLR7 작용제 접합체는 (예를 들어, 3+ IHC 점수를 갖는) 높은 HER2-발현 종양에서뿐만 아니라, (예를 들어, 2+ IHC 점수를 갖는) 낮은 HER2-발현 종양에서도 종양 성장을 억제할 수 있다.
실시예 80
C57Bl6 마우스 동계 종양 모델에서 항-PD-1과 조합된 NJH395의 생체내 시험
물질 및 방법
동계 마우스 모델의 경우, 6~8주령의 암컷 C57BL/6 마우스(Charles River Laboratories에서 구입)가 이식에 사용된다. 대안적으로, hHER2-BAC 유전자이식 마우스를 C57BL/6 백그라운드로 역교배하였고, 6~10주령의 유전자이식 양성 암컷이 이식에 사용된다. B16F10 흑색종 및 MC38 콜론 종양 세포주 모두 ATCC로부터 입수하였고, 인간 HER2의 세포외 도메인을 발현하도록 변형시켰다. 세포를 5%의 CO2가 있는 37℃ 인큐베이터에서의 멸균 조건에서 2주 동안 성장시킨다. 10%의 소태아혈청으로 보충된 DMEM 배지에서 MC38 세포를 성장시킨다. 세포를 0.05%의 트립신/EDTA와 함께 2~3일마다 계대시킨다. 이식 당일, 세포를 떠서(계대 x12), HBSS에 2.5 x 105 세포/100 μl의 농도로 재현탁시킨다. 10%의 소태아혈청으로 보충된 DMEM 배지에서 B16F10 세포를 성장시킨다. 세포를 0.05%의 트립신/EDTA와 함께 2~3일마다 계대시킨다. 이식 당일, 세포를 떠서(계대 x6), HBSS에 5 x 105 세포/100 μl의 농도로 재현탁시킨다. 세포에 마이코플라스마 및 뮤린 바이러스가 없는지 확인하기 위해 세포에 대해 Radil 시험을 수행한다.
28g 바늘(100 μl 주사 부피)을 사용해 두 세포주 모두를 아래쪽 옆구리에 피하 주사로 이식한다. 이식 후, 캘리퍼로 종양을 측정하고, 종양이 감지되면 주당 3회 마우스 체중을 측정한다. 이어서, 2차원으로 주 2회 종양을 측정한다. 캘리퍼 측정은 (L x W2)/2를 사용해 계산된다. 마우스에게 정상 식이를 제공하고, 실험동물의 관리 및 사용에 관한 지침 및 실험동물 운영위원회의 규정에 따라 마우스를 SPF 동물 시설에 수용한다.
동계 종양이 약 100 mm3에 도달할 때, 주 1회 0.1~10 mg/kg의 NJH395 단독으로, 또는 2주당 주 2회 10 mg/kg의 복강내 항-마우스 PD-1(Bioxcell)과 조합하여 정맥내 경로로 투여한다. 설치류에서 발견되지 않는 표적에 대해 항체를 발현시켜 이소형 대조군 항체를 생성하고, NJH395에 대해 설명된 유사한 방법을 통해 접합시켰다. 주 2회 종양을 측정한다. Prism 5(GraphPad) 소프트웨어를 사용해 평균 종양 부피를 플롯팅한다. 효능 연구의 엔드포인트는 종양 크기가 2000 mm3의 부피에 도달할 때 달성된다. 주사 후, 임상적 악화의 징후에 대해서도 마우스를 면밀히 모니터링한다. 어떤 이유로든 마우스가 호흡 곤란, 구부러진 자세, 활동 감소, 뒷다리 마비, 흉수에 대한 징후로서의 빈호흡, 20%에 근접하는 체중 감소, 또는 15% 이상의 다른 징후를 포함한 임의의 이환 징후를 보이는 경우, 또는 정상적인 활동(수유, 이동)을 수행할 수 있는 능력이 손상되는 경우, 마우스를 안락사시킨다.
실시예 81
Balb/c 마우스 동계 종양 모델에서 항-PD-1과 조합된 NJH395의 생체내 시험
물질 및 방법
동계 마우스 모델의 경우, 6~8주령의 암컷 Balb/c 마우스(Envigo/Charles River Laboratories에서 구입)가 이식에 사용된다. 4T1-Luc 유방 종양 세포주를 ATCC로부터 입수하였고, 인간 HER2의 세포외 도메인을 발현하도록 변형시켰다. 세포를 5%의 CO2가 있는 37℃ 인큐베이터에서의 멸균 조건에서 2주 동안 성장시킨다. 10%의 소태아혈청으로 보충된 RPMI 배지에서 4T1-Luc 세포를 성장시킨다. 세포를 0.05%의 트립신/EDTA와 함께 3~4일마다 계대시킨다. 이식 당일, 세포를 떠서(계대 x12), HBSS에 1~3 x 104 세포/50 μl의 농도로 재현탁시킨다. 세포에 마이코플라스마 및 뮤린 바이러스가 없는지 확인하기 위해 세포에 대해 Radil 시험을 수행한다.
28g 바늘(50 μl 주사 부피)을 사용해 4T1-Luc 세포를 4번째 유방 지방체에 피하 주사로 이식한다. 이식 후, 캘리퍼로 종양을 측정하고, 종양이 감지되면 주당 3회 마우스 체중을 측정한다. 이어서, 2차원으로 주 2회 종양을 측정한다. 캘리퍼 측정은 (L x W2)/2를 사용해 계산된다. 마우스에게 정상 식이를 제공하고, 실험동물의 관리 및 사용에 관한 지침 및 실험동물 운영위원회의 규정에 따라 마우스를 SPF 동물 시설에 수용한다.
동계 종양이 약 100 mm3에 도달할 때, 주 1회 0.1~10 mg/kg의 NJH395 단독으로, 또는 2주당 주 2회 10 mg/kg의 복강내 항-마우스 PD-1(Bioxcell)과 조합하여 정맥내 경로로 투여한다. 설치류에서 발견되지 않는 표적에 대해 항체를 발현시켜 이소형 대조군 항체를 생성하고, NJH395에 대해 설명된 유사한 방법을 통해 접합시켰다. 주 2회 종양을 측정한다. Prism 5(GraphPad) 소프트웨어를 사용해 평균 종양 부피를 플롯팅한다. 효능 연구의 엔드포인트는 종양 크기가 2000 mm3의 부피에 도달할 때 달성된다. 주사 후, 임상적 악화의 징후에 대해서도 마우스를 면밀히 모니터링한다. 어떤 이유로든 마우스가 호흡 곤란, 구부러진 자세, 활동 감소, 뒷다리 마비, 흉수에 대한 징후로서의 빈호흡, 20%에 근접하는 체중 감소, 또는 15% 이상의 다른 징후를 포함한 임의의 이환 징후를 보이는 경우, 또는 정상적인 활동(수유, 이동)을 수행할 수 있는 능력이 손상되는 경우, 마우스를 안락사시킨다.
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Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Gly Asp Ser Leu Asp Met Leu Glu Trp 385 390 395 400 Ser Leu Met Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 405 410 415 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 420 425 430 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 435 440 445 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 460 <210> 33 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 33 Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Leu Tyr Arg Ser Pro 1 5 10 15 Ala Met Pro Glu Asn Leu 20 <210> 34 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 34 gatatccaga tgacccagtc cccgagctcc ctgtccgcct ctgtgggcga tagggtcacc 60 atcacctgcc gtgccagtca ggatgtgaat actgctgtag cctggtatca acagaaacca 120 ggaaaagctc cgaaactact gatttactcg gcatccttcc tctactctgg agtcccttct 180 cgcttctctg gatccagatc tgggacggat ttcactctga ccatcagcag tctgcagccg 240 gaagacttcg caacttatta ctgtcagcaa cattatacta ctcctcccac gttcggacag 300 ggtaccaagg tggagatcaa acgaacggtg gccgctccca gcgtgttcat cttccccccc 360 agcgacgagc agctgaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420 ccccgggagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480 gagagcgtca ccgagcagga cagcaaggac tccacctaca gcctgagcag caccctgacc 540 ctgagcaagg ccgactacga gaagcataag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600 ctgtccagcc ccgtgaccaa gagcttcaac aggggcgagt gc 642 <210> 35 <400> 35 000 <210> 36 <400> 36 000 <210> 37 <400> 37 000 <210> 38 <400> 38 000 <210> 39 <400> 39 000 <210> 40 <400> 40 000 <210> 41 <400> 41 000 <210> 42 <400> 42 000 <210> 43 <400> 43 000 <210> 44 <400> 44 000 <210> 45 <400> 45 000 <210> 46 <400> 46 000 <210> 47 <400> 47 000 <210> 48 <400> 48 000 <210> 49 <400> 49 000 <210> 50 <400> 50 000 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of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 523 gagatcgtcc tgactcagtc acccgctacc ctgagcctga gccctggcga gcgggctaca 60 ctgagctgta aatctagtca gtcactgctg gatagcggta atcagaagaa cttcctgacc 120 tggtatcagc agaagcccgg tcaagcccct agactgctga tctactgggc ctctactaga 180 gaatcaggcg tgccctctag gtttagcggt agcggtagtg gcaccgactt caccttcact 240 atctctagcc tggaagccga ggacgccgct acctactact gtcagaacga ctatagctac 300 ccctacacct tcggtcaagg cactaaggtc gagattaagc gtacggtggc cgctcccagc 360 gtgttcatct tcccccccag cgacgagcag ctgaagagcg gcaccgccag cgtggtgtgc 420 ctgctgaaca acttctaccc ccgggaggcc aaggtgcagt ggaaggtgga caacgccctg 480 cagagcggca acagccagga gagcgtcacc gagcaggaca gcaaggactc cacctacagc 540 ctgagcagca ccctgaccct gagcaaggcc gactacgaga agcataaggt gtacgcctgc 600 gaggtgaccc accagggcct gtccagcccc gtgaccaaga gcttcaacag gggcgagtgc 660 <210> 524 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 524 acctactgga 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Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 925 Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val 1 5 10 15 Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly 20 25 30 Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn 35 40 45 Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile 50 55 60 Arg Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 65 70 75 80 Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 85 90 95 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 100 105 110 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 115 120 125 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 130 135 140 Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 145 150 155 160 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 165 170 175 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 180 185 190 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu 195 200 205 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 210 215 220 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 225 230 235 240 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 245 250 255 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 260 265 270 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 275 280 285 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 290 295 <210> 926 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <220> <221> VARIANT <222> (93)..(93) <223> /replace="Lys" <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(114) <223> /note="Variant residues given in the sequence have no preference with respect to those in the annotations for variant positions" <400> 926 Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile 1 5 10 15 Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His 20 25 30 Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln 35 40 45 Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu 50 55 60 Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val 65 70 75 80 Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile 85 90 95 Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn 100 105 110 Thr Ser <210> 927 <211> 77 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 927 Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val 1 5 10 15 Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly 20 25 30 Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn 35 40 45 Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile 50 55 60 Arg Asp Pro Ala Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro 65 70 75 <210> 928 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 928 Arg Gly Asp Ser 1

Claims (52)

  1. HER2-양성 암의 치료를 필요로 하는 대상의 HER2-양성 암을 치료하는 방법으로서, 치료 유효량의 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제2 치료제와 조합하여 상기 대상에게 투여하는 단계를 포함하되,
    (i) 상기 접합체는 화학식 II의 구조를 포함하고
    [화학식 II]
    Figure pct00683

    (식 중,
    R50은
    Figure pct00684
    또는
    Figure pct00685
    이고, *는 Ab에 대한 부착점을 나타내고;
    Ab는 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 항체 분자, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
    R1은 -NHR2 또는 -NHCHR2R3이고;
    R2는 -C3-C6알킬 또는 -C4-C6알킬이고;
    R3은 L1OH이고;
    L1은 -(CH2)m-이고;
    L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)(CH2)nC(R7)2-, -C(=O)(CH2)nC(R7)2SS(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nX2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, 또는 -C(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n이고;
    R40은
    Figure pct00686
    -S-, -NHC(=O)CH2-, -S(=O)2CH2CH2-, -(CH2)2S(=O)2CH2CH2-, -NHS(=O)2CH2CH2, -NHC(=O)CH2CH2-, -CH2NHCH2CH2-, -NHCH2CH2-,
    Figure pct00687
    Figure pct00688
    Figure pct00689
    Figure pct00690
    Figure pct00691
    Figure pct00692
    Figure pct00693
    Figure pct00694
    , 또는
    Figure pct00695
    이고;
    X1은
    Figure pct00696
    , 또는
    Figure pct00697
    이고;
    X2는
    Figure pct00698
    , 또는
    Figure pct00699
    이고;
    X3은
    Figure pct00700
    Figure pct00701
    , 또는
    Figure pct00702
    이고;
    각각의 R7은 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R8은 H, C1-C6알킬, F, Cl, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R9는 H, C1-C6알킬, F, Cl, -NH2, -OCH3, -OCH2CH3, -N(CH3)2, -CN, -NO2, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R10은 H, C1-6알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1-4알콕시, 및 -C(=O)OH로 치환된 C1-4알킬로부터 독립적으로 선택되고;
    R12는 H, 메틸, 또는 페닐이고;
    각각의 m은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및 18로부터 독립적으로 선택되고;
    y는 1 내지 16의 정수임),
    (ii) 상기 제2 치료제는 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인, 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제, 화학요법, 표적항암요법, 종양용해제, 세포독성제, 면역기반요법, 백신, 또는 세포요법으로부터 선택되는 방법.
  2. 제2 치료제와 조합하여 대상의 HER2-양성 암의 치료에 사용하기 위한 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 조성물로서,
    (i) 상기 접합체는 화학식 II의 구조를 포함하고
    [화학식 II]
    Figure pct00703

    (식 중,
    R50은
    Figure pct00704
    또는
    Figure pct00705
    이고, *는 Ab에 대한 부착점을 나타내고;
    Ab는 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 항체 분자, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
    R1은 -NHR2 또는 -NHCHR2R3이고;
    R2는 -C3-C6알킬 또는 -C4-C6알킬이고;
    R3은 L1OH이고;
    L1은 -(CH2)m-이고;
    L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)(CH2)nC(R7)2-, -C(=O)(CH2)nC(R7)2SS(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nX2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, 또는 -C(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n이고;
    R40은
    Figure pct00706
    -S-, -NHC(=O)CH2-, -S(=O)2CH2CH2-, -(CH2)2S(=O)2CH2CH2-, -NHS(=O)2CH2CH2, -NHC(=O)CH2CH2-, -CH2NHCH2CH2-, -NHCH2CH2-,
    Figure pct00707
    Figure pct00708
    Figure pct00709
    Figure pct00710
    Figure pct00711
    Figure pct00712
    Figure pct00713
    Figure pct00714
    , 또는
    Figure pct00715
    이고;
    X1은
    Figure pct00716
    , 또는
    Figure pct00717
    이고;
    X2는
    Figure pct00718
    , 또는
    Figure pct00719
    이고;
    X3은
    Figure pct00720
    Figure pct00721
    , 또는
    Figure pct00722
    이고;
    각각의 R7은 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R8은 H, C1-C6알킬, F, Cl, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R9는 H, C1-C6알킬, F, Cl, -NH2, -OCH3, -OCH2CH3, -N(CH3)2, -CN, -NO2, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R10은 H, C1-6알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1-4알콕시, 및 -C(=O)OH로 치환된 C1-4알킬로부터 독립적으로 선택되고;
    R12는 H, 메틸, 또는 페닐이고;
    각각의 m은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및 18로부터 독립적으로 선택되고;
    y는 1 내지 16의 정수임),
    (ii) 상기 제2 치료제는 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인, 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제, 화학요법, 표적항암요법, 종양용해제, 세포독성제, 면역기반요법, 백신, 또는 세포요법으로부터 선택되는 조성물.
  3. HER2-양성 암의 치료를 필요로 하는 대상의 HER2-양성 암의 치료를 위한 의약의 제조에 있어서, 제2 치료제와 조합된, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 조성물, 또는 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 용도로서,
    (i) 상기 접합체는 화학식 II의 구조를 포함하고
    [화학식 II]
    Figure pct00723

    (식 중,
    R50은
    Figure pct00724
    또는
    Figure pct00725
    이고, *는 Ab에 대한 부착점을 나타내고;
    Ab는 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 항체 분자, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
    R1은 -NHR2 또는 -NHCHR2R3이고;
    R2는 -C3-C6알킬 또는 -C4-C6알킬이고;
    R3은 L1OH이고;
    L1은 -(CH2)m-이고;
    L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)(CH2)nC(R7)2-, -C(=O)(CH2)nC(R7)2SS(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nX2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, 또는 -C(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n이고;
    R40은
    Figure pct00726
    -S-, -NHC(=O)CH2-, -S(=O)2CH2CH2-, -(CH2)2S(=O)2CH2CH2-, -NHS(=O)2CH2CH2, -NHC(=O)CH2CH2-, -CH2NHCH2CH2-, -NHCH2CH2-,
    Figure pct00727
    Figure pct00728
    Figure pct00729
    Figure pct00730
    Figure pct00731
    Figure pct00732
    Figure pct00733
    Figure pct00734
    , 또는
    Figure pct00735
    이고;
    X1은
    Figure pct00736
    , 또는
    Figure pct00737
    이고;
    X2는
    Figure pct00738
    , 또는
    Figure pct00739
    이고;
    X3은
    Figure pct00740
    Figure pct00741
    , 또는
    Figure pct00742
    이고;
    각각의 R7은 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R8은 H, C1-C6알킬, F, Cl, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R9는 H, C1-C6알킬, F, Cl, -NH2, -OCH3, -OCH2CH3, -N(CH3)2, -CN, -NO2, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R10은 H, C1-6알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1-4알콕시, 및 -C(=O)OH로 치환된 C1-4알킬로부터 독립적으로 선택되고;
    R12는 H, 메틸, 또는 페닐이고;
    각각의 m은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및 18로부터 독립적으로 선택되고;
    y는 1 내지 16의 정수임),
    (ii) 상기 제2 치료제는 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인, 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제, 화학요법, 표적항암요법, 종양용해제, 세포독성제, 면역기반요법, 백신, 또는 세포요법으로부터 선택되는 용도.
  4. 제2 치료제와 조합하여 대상의 HER2-양성 암의 치료에 사용하기 위한 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 조성물로서,
    (i) 상기 접합체는 화학식 II의 구조를 포함하고
    [화학식 II]
    Figure pct00743

    (식 중,
    R50은
    Figure pct00744
    또는
    Figure pct00745
    이고, *는 Ab에 대한 부착점을 나타내고;
    Ab는 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 항체 분자, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
    R1은 -NHR2 또는 -NHCHR2R3이고;
    R2는 -C3-C6알킬 또는 -C4-C6알킬이고;
    R3은 L1OH이고;
    L1은 -(CH2)m-이고;
    L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)(CH2)nC(R7)2-, -C(=O)(CH2)nC(R7)2SS(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nX2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, 또는 -C(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n이고;
    R40은
    Figure pct00746
    -S-, -NHC(=O)CH2-, -S(=O)2CH2CH2-, -(CH2)2S(=O)2CH2CH2-, -NHS(=O)2CH2CH2, -NHC(=O)CH2CH2-, -CH2NHCH2CH2-, -NHCH2CH2-,
    Figure pct00747
    Figure pct00748
    Figure pct00749
    Figure pct00750
    Figure pct00751
    Figure pct00752
    Figure pct00753
    Figure pct00754
    , 또는
    Figure pct00755
    이고;
    X1은
    Figure pct00756
    , 또는
    Figure pct00757
    이고;
    X2는
    Figure pct00758
    , 또는
    Figure pct00759
    이고;
    X3은
    Figure pct00760
    Figure pct00761
    , 또는
    Figure pct00762
    이고;
    각각의 R7은 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R8은 H, C1-C6알킬, F, Cl, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R9는 H, C1-C6알킬, F, Cl, -NH2, -OCH3, -OCH2CH3, -N(CH3)2, -CN, -NO2, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R10은 H, C1-6알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1-4알콕시, 및 -C(=O)OH로 치환된 C1-4알킬로부터 독립적으로 선택되고;
    R12는 H, 메틸, 또는 페닐이고;
    각각의 m은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및 18로부터 독립적으로 선택되고;
    y는 1 내지 16의 정수임),
    (ii) 상기 제2 치료제는 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인, 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제, 화학요법, 표적항암요법, 종양용해제, 세포독성제, 면역기반요법, 백신, 또는 세포요법으로부터 선택되는 조성물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, Ab가 다음 중 어느 하나로부터 선택되는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도:
    (a) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1);
    서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(HCDR2);
    서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(HCDR3);
    서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1);
    서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(LCDR2); 및
    서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(LCDR3)을 포함하는 항체 분자;
    (b) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1;
    서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2;
    서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3;
    서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1;
    서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및
    서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 항체 분자;
    (c) 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 분자;
    (d) 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 분자;
    (e) 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 분자;
    (f) 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 분자; 또는
    (g) 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 분자.
  6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, Ab가 인간 또는 인간화 항-HER2 항체 분자인 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  7. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, Ab가 변형 Fc 영역을 포함하는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  8. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, Ab가 하기 위치 중 하나 이상에 시스테인을 포함하는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도(모든 위치는 EU 넘버링에 의함):
    (a) 항체 중쇄의 위치 152, 360, 및 375, 및
    (b) 항체 경쇄의 위치 107, 159, 및 165.
  9. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, Ab가 항체 중쇄의 위치 152 및 375에 시스테인을 포함하는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도(모든 위치는 EU 넘버링에 의함).
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 II의 상기 접합체는 화학식 IIa 또는 화학식 IIb의 구조를 포함하는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도:
    [화학식 IIa] [화학식 IIb]
    Figure pct00763
    Figure pct00764

    (식 중,
    R1은 -NHR2이고;
    R2는 -C4-C6알킬이고;
    L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, 또는 -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-이고;
    R40은
    Figure pct00765
    , 또는
    Figure pct00766
    이고;
    X1은
    Figure pct00767
    이고; X2는
    Figure pct00768
    또는
    Figure pct00769
    이고; X3은
    Figure pct00770
    이고;
    각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및 18로부터 독립적으로 선택되고;
    y는 1 내지 16의 정수임).
  11. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    R1은 -NHR2이고;
    R2는 -C4-C6알킬이고;
    L2는 -(CH2)n- 또는 -C(=O)(CH2)n이고;
    R40은
    Figure pct00771
    , 또는
    Figure pct00772
    이고;
    각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
    y는 1 내지 16의 정수인 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 접합체는 소수성 상호작용 크로마토그래피로 측정시 0.8 이상의 소수성 지수를 갖는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  13. HER2-양성 암의 치료를 필요로 하는 대상의 HER2-양성 암을 치료하는 방법으로서, 치료 유효량의 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제2 치료제와 조합하여 상기 대상에게 투여하는 단계를 포함하되,
    (i) 상기 접합체는 하기 화학식 중 어느 하나의 구조를 포함하고
    Figure pct00773

    Figure pct00774

    Figure pct00775

    Figure pct00776

    Figure pct00777

    Figure pct00778

    Figure pct00779

    Figure pct00780

    Figure pct00781

    Figure pct00782
    및
    Figure pct00783

    (식 중, Ab는 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 항체 분자, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고, y는 1 내지 4의 정수임),
    (ii) 상기 제2 치료제는 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인, 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제, 화학요법, 표적항암요법, 종양용해제, 세포독성제, 면역기반요법, 백신, 또는 세포요법으로부터 선택되는 방법.
  14. 제2 치료제와 조합하여 대상의 HER2-양성 암의 치료에 사용하기 위한 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 조성물로서,
    (i) 상기 접합체는 하기 화학식 중 어느 하나의 구조를 포함하고
    Figure pct00784

    Figure pct00785

    Figure pct00786

    Figure pct00787

    Figure pct00788

    Figure pct00789

    Figure pct00790

    Figure pct00791

    Figure pct00792
    및
    Figure pct00793

    (식 중, Ab는 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 항체 분자, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고, y는 1 내지 4의 정수임),
    (ii) 상기 제2 치료제는 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인, 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제, 화학요법, 표적항암요법, 종양용해제, 세포독성제, 면역기반요법, 백신, 또는 세포요법으로부터 선택되는 조성물.
  15. HER2-양성 암의 치료를 필요로 하는 대상의 HER2-양성 암의 치료를 위한 의약의 제조에 있어서, 제2 치료제와 조합된, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 조성물의 용도로서,
    (i) 상기 접합체는 하기 화학식 중 어느 하나의 구조를 포함하고
    Figure pct00794

    Figure pct00795

    Figure pct00796

    Figure pct00797

    Figure pct00798

    Figure pct00799

    Figure pct00800

    Figure pct00801

    Figure pct00802

    Figure pct00803
    및
    Figure pct00804

    (식 중, Ab는 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 항체 분자, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고, y는 1 내지 4의 정수임),
    (ii) 상기 제2 치료제는 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인, 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제, 화학요법, 표적항암요법, 종양용해제, 세포독성제, 면역기반요법, 백신, 또는 세포요법으로부터 선택되는 용도.
  16. 제2 치료제와 조합하여 대상의 HER2-양성 암의 치료에 사용하기 위한 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 조성물로서,
    (i) 상기 접합체는 하기 화학식 중 어느 하나의 구조를 포함하고
    Figure pct00805

    Figure pct00806

    Figure pct00807

    Figure pct00808

    Figure pct00809

    Figure pct00810

    Figure pct00811

    Figure pct00812

    Figure pct00813
    및
    Figure pct00814

    (식 중, Ab는 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 항체 분자, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고, y는 1 내지 4의 정수임),
    (ii) 상기 제2 치료제는 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인, 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제, 화학요법, 표적항암요법, 종양용해제, 세포독성제, 면역기반요법, 백신, 또는 세포요법으로부터 선택되는 조성물.
  17. 제13항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, Ab가 다음 중 어느 하나로부터 선택되는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도:
    (a) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1);
    서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(HCDR2);
    서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(HCDR3);
    서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1);
    서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(LCDR2); 및
    서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(LCDR3)을 포함하는 항체 분자;
    (b) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1;
    서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2;
    서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3;
    서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1;
    서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및
    서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 항체 분자;
    (c) 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 분자;
    (d) 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 분자;
    (e) 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 분자;
    (f) 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 분자; 또는
    (g) 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 분자.
  18. 제13항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, Ab가 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  19. 제18항에 있어서, 상기 화합물은 항체 중쇄의 위치 152 및 375의 시스테인에 부착되는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도(모든 위치는 EU 넘버링에 의함).
  20. 제13항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, y는 약 3 내지 4인 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  21. 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 접합체는 소수성 상호작용 크로마토그래피로 측정시 0.8 이상의 소수성 지수를 갖는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  22. 암의 치료를 필요로 하는 대상의 암을 치료하는 방법으로서, 치료 유효량의 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제2 치료제와 조합하여 상기 대상에게 투여하는 단계를 포함하되,
    (i) 상기 접합체는 항체 분자, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 부착된, 화학식 I의 구조를 갖는 화합물을 포함하고
    [화학식 I]
    Figure pct00815

    (식 중,
    RD는
    Figure pct00816
    이고, RE는 H이거나; RE는
    Figure pct00817
    이고 RD는 H이고;
    R1은 -NHR2 또는 -NHCHR2R3이고;
    R2는 -C3-C6알킬 또는 -C4-C6알킬이고;
    R3은 L1OH이고;
    L1은 -(CH2)m-이고;
    L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)(CH2)nC(R7)2-, -C(=O)(CH2)nC(R7)2SS(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nX2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, 또는 -C(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n이고;
    R4는
    Figure pct00818
    -ONH2, -NH2,
    Figure pct00819
    -N3,
    Figure pct00820
    -NHC(=O)CH=CH2, -SH, -SR7, -OH -SSR6, -S(=O)2(CH=CH2), -(CH2)2S(=O)2(CH=CH2), -NHS(=O)2(CH=CH2), -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I, -C(O)NHNH2,
    Figure pct00821
    -CO2H, -C(O)NHNH2,
    Figure pct00822
    Figure pct00823
    Figure pct00824
    Figure pct00825
    Figure pct00826
    Figure pct00827
    Figure pct00828
    , 또는
    Figure pct00829
    이고;
    R5는
    Figure pct00830
    이고;
    X1은
    Figure pct00831
    , 또는
    Figure pct00832
    이고;
    X2는
    Figure pct00833
    , 또는
    Figure pct00834
    이고;
    X3은
    Figure pct00835
    Figure pct00836
    , 또는
    Figure pct00837
    이고;
    R6은 2-피리딜 또는 4-피리딜이고;
    각각의 R7은 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R8은 H, C1-C6알킬, F, Cl, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R9는 H, C1-C6알킬, F, Cl, -NH2, -OCH3, -OCH2CH3, -N(CH3)2, -CN, -NO2, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R10은 H, C1-6알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1-4알콕시, 및 -C(=O)OH로 치환된 C1-4알킬로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 m은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및 18로부터 독립적으로 선택됨),
    (ii) 상기 제2 치료제는 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인, 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제, 화학요법, 표적항암요법, 종양용해제, 세포독성제, 면역기반요법, 백신, 또는 세포요법으로부터 선택되는 방법.
  23. 제2 치료제와 조합하여 대상의 암의 치료에 사용하기 위한 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 조성물로서,
    (i) 상기 접합체는 항체 분자, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 부착된, 화학식 I의 구조를 갖는 화합물을 포함하고
    [화학식 I]
    Figure pct00838

    (식 중,
    RD는
    Figure pct00839
    이고, RE는 H이거나; RE는
    Figure pct00840
    이고 RD는 H이고;
    R1은 -NHR2 또는 -NHCHR2R3이고;
    R2는 -C3-C6알킬 또는 -C4-C6알킬이고;
    R3은 L1OH이고;
    L1은 -(CH2)m-이고;
    L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)(CH2)nC(R7)2-, -C(=O)(CH2)nC(R7)2SS(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nX2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, 또는 -C(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n이고;
    R4는
    Figure pct00841
    -ONH2, -NH2,
    Figure pct00842
    -N3,
    Figure pct00843
    -NHC(=O)CH=CH2, -SH, -SR7, -OH -SSR6, -S(=O)2(CH=CH2), -(CH2)2S(=O)2(CH=CH2), -NHS(=O)2(CH=CH2), -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I, -C(O)NHNH2,
    Figure pct00844
    -CO2H, -C(O)NHNH2,
    Figure pct00845
    Figure pct00846
    Figure pct00847
    Figure pct00848
    Figure pct00849
    Figure pct00850
    Figure pct00851
    , 또는
    Figure pct00852
    이고;
    R5는
    Figure pct00853
    이고;
    X1은
    Figure pct00854
    , 또는
    Figure pct00855
    이고;
    X2는
    Figure pct00856
    , 또는
    Figure pct00857
    이고;
    X3은
    Figure pct00858
    Figure pct00859
    , 또는
    Figure pct00860
    이고;
    R6은 2-피리딜 또는 4-피리딜이고;
    각각의 R7은 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R8은 H, C1-C6알킬, F, Cl, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R9는 H, C1-C6알킬, F, Cl, -NH2, -OCH3, -OCH2CH3, -N(CH3)2, -CN, -NO2, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R10은 H, C1-6알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1-4알콕시, 및 -C(=O)OH로 치환된 C1-4알킬로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 m은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및 18로부터 독립적으로 선택됨),
    (ii) 상기 제2 치료제는 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인, 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제, 화학요법, 표적항암요법, 종양용해제, 세포독성제, 면역기반요법, 백신, 또는 세포요법으로부터 선택되는 조성물.
  24. 암의 치료를 필요로 하는 대상의 암의 치료를 위한 의약의 제조에 있어서, 제2 치료제와 조합된, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 조성물의 용도로서,
    (i) 상기 접합체는 항체 분자, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 부착된, 화학식 I의 구조를 갖는 화합물을 포함하고
    [화학식 I]
    Figure pct00861

    (식 중,
    RD는
    Figure pct00862
    이고, RE는 H이거나; RE는
    Figure pct00863
    이고 RD는 H이고;
    R1은 -NHR2 또는 -NHCHR2R3이고;
    R2는 -C3-C6알킬 또는 -C4-C6알킬이고;
    R3은 L1OH이고;
    L1은 -(CH2)m-이고;
    L2는 -(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)n-, -(CH2)nX1(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nNHC(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n, -C(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)((CH2)nO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)n-, -C(=O)NH((CH2)nO)t(CH2)nX1(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)X2X3C(=O)(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -C(=O)X2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, -C(=O)(CH2)nC(R7)2-, -C(=O)(CH2)nC(R7)2SS(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-, -(CH2)nX2C(=O)(CH2)nNHC(=O)((CH2)nO)t(CH2)n-, 또는 -C(=O)(CH2)nC(=O)NH(CH2)n이고;
    R4는
    Figure pct00864
    -ONH2, -NH2,
    Figure pct00865
    -N3,
    Figure pct00866
    -NHC(=O)CH=CH2, -SH, -SR7, -OH -SSR6, -S(=O)2(CH=CH2), -(CH2)2S(=O)2(CH=CH2), -NHS(=O)2(CH=CH2), -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I, -C(O)NHNH2,
    Figure pct00867
    -CO2H, -C(O)NHNH2,
    Figure pct00868
    Figure pct00869
    Figure pct00870
    Figure pct00871
    Figure pct00872
    Figure pct00873
    Figure pct00874
    , 또는
    Figure pct00875
    이고;
    R5는
    Figure pct00876
    이고;
    X1은
    Figure pct00877
    , 또는
    Figure pct00878
    이고;
    X2는
    Figure pct00879
    , 또는
    Figure pct00880
    이고;
    X3은
    Figure pct00881
    Figure pct00882
    , 또는
    Figure pct00883
    이고;
    R6은 2-피리딜 또는 4-피리딜이고;
    각각의 R7은 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R8은 H, C1-C6알킬, F, Cl, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R9는 H, C1-C6알킬, F, Cl, -NH2, -OCH3, -OCH2CH3, -N(CH3)2, -CN, -NO2, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R10은 H, C1-6알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1-4알콕시, 및 -C(=O)OH로 치환된 C1-4알킬로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 m은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 n은 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및 18로부터 독립적으로 선택됨),
    (ii) 상기 제2 치료제는 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인, 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제, 화학요법, 표적항암요법, 종양용해제, 세포독성제, 면역기반요법, 백신, 또는 세포요법으로부터 선택되는 용도.
  25. 제22항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 HER2+ 암이고, 상기 항체 분자, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 치료제는 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인, 또는 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제로부터 선택되는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  27. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 치료제는 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제 또는 사이토카인이고,
    (i) 상기 보조억제 분자는 프로그램된 세포사멸 수용체-1(PD-1), 프로그램된 사멸-리간드 1(PD-L1), 림프구 활성화 유전자-3(LAG-3), 또는 T세포 면역글로불린 도메인 및 뮤신 도메인 3(TIM-3)으로부터 선택되고,
    (ii) 상기 보조자극 분자는 글루코코르티코이드-유도 TNFR 관련 단백질(GITR)이고,
    (iii) 상기 사이토카인은 IL-15 수용체 알파(IL-15Ra)의 가용성 형태와 복합체화된 IL-15인 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  28. 제27항에 있어서, 상기 제2 치료제는 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 분자이고, 상기 항체 분자는
    (i) 표 6 또는 7에 개시된 임의의 항-PD-1 중쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 중쇄 상보성 결정 영역 1(VHCDR1), VHCDR2, 및 VHCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH), 및/또는
    표 6 또는 7에 열거된 임의의 항-PD-1 경쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 경쇄 상보성 결정 영역 1(VLCDR1), VLCDR2, 및 VLCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (ii) 표 6 또는 7에 개시된 임의의 항-PD-1 중쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 VH를 포함하는 VH, 및/또는
    표 6 또는 7에 개시된 임의의 항-PD-1 경쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 VL을 포함하는 VL; 또는
    (iii) 표 6 또는 7에 개시된 항-PD-1 중쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열), 및/또는
    표 6 또는 7에 개시된 항-PD-1 경쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)을 포함하는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  29. 제27항에 있어서, 상기 제2 치료제는 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 분자이고, 상기 항체 분자는
    (i) 서열번호 501의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열번호 502의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 503의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 510의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열번호 511의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 512의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VL;
    (ii) 서열번호 506의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 520의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
    (iii) 서열번호 508의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 522의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
    (iv) 서열번호 506의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 516의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
    (v) 서열번호 508의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 518의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  30. 제27항에 있어서, 상기 제2 치료제는 인간 PD-L1에 특이적으로 결합하는 항체 분자이고, 상기 항체 분자는
    (i) 표 8 또는 9에 개시된 임의의 항-PD-L1 중쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 중쇄 상보성 결정 영역 1(VHCDR1), VHCDR2, 및 VHCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH), 및/또는
    표 8 또는 9에 열거된 임의의 항-PD-L1 경쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 경쇄 상보성 결정 영역 1(VLCDR1), VLCDR2, 및 VLCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (ii) 표 8 또는 9에 개시된 임의의 항-PD-L1 중쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 VH를 포함하는 VH, 및/또는
    표 8 또는 9에 개시된 임의의 항-PD-L1 경쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 VL을 포함하는 VL; 또는
    (iii) 표 8 또는 9에 개시된 항-PD-L1 중쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열), 및/또는
    표 8 또는 9에 개시된 항-PD-L1 경쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)을 포함하는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  31. 제27항에 있어서, 상기 제2 치료제는 인간 PD-L1에 특이적으로 결합하는 항체 분자이고, 상기 항체 분자는
    (i) 서열번호 601의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열번호 602의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 603의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 609의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열번호 610의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 611의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VL;
    (ii) 서열번호 606의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 616의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
    (iii) 서열번호 608의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 618의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
    (iv) 서열번호 620의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 624의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
    (v) 서열번호 622의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 626의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  32. 제27항에 있어서, 상기 제2 치료제는 인간 LAG-3에 특이적으로 결합하는 항체 분자이고, 상기 항체 분자는
    (i) 표 10 또는 11에 개시된 임의의 항-LAG-3 중쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 중쇄 상보성 결정 영역 1(VHCDR1), VHCDR2, 및 VHCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH), 및/또는
    표 10 또는 11에 열거된 임의의 항-LAG-3 경쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 경쇄 상보성 결정 영역 1(VLCDR1), VLCDR2, 및 VLCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (ii) 표 10 또는 11에 개시된 임의의 항-LAG-3 중쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 VH를 포함하는 VH, 및/또는
    표 10 또는 11에 개시된 임의의 항-LAG-3 경쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 VL을 포함하는 VL; 또는
    (iii) 표 10 또는 11에 개시된 항-LAG-3 중쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열), 및/또는
    표 10 또는 11에 개시된 항-LAG-3 경쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)을 포함하는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  33. 제27항에 있어서, 상기 제2 치료제는 인간 LAG-3에 특이적으로 결합하는 항체 분자이고, 상기 항체 분자는
    (i) 서열번호 701의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열번호 702의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 703의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 710의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열번호 711의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 712의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VL;
    (ii) 서열번호 706의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 718의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
    (iii) 서열번호 709의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 721의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
    (iv) 서열번호 724의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 730의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
    (v) 서열번호 727의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 733의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  34. 제27항에 있어서, 상기 제2 치료제는 인간 TIM-3에 특이적으로 결합하는 항체 분자이고, 상기 항체 분자는
    (i) 표 12 또는 13에 개시된 임의의 항-TIM-3 중쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 중쇄 상보성 결정 영역 1(VHCDR1), VHCDR2, 및 VHCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH), 및/또는
    표 12 또는 13에 열거된 임의의 항-TIM-3 경쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 경쇄 상보성 결정 영역 1(VLCDR1), VLCDR2, 및 VLCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (ii) 표 12 또는 13에 개시된 임의의 항-TIM-3 중쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 VH를 포함하는 VH, 및/또는
    표 12 또는 13에 개시된 임의의 항-TIM-3 경쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 VL을 포함하는 VL; 또는
    (iii) 표 12 또는 13에 개시된 항-TIM-3 중쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열), 및/또는
    표 12 또는 13에 개시된 항-TIM-3 경쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)을 포함하는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  35. 제27항에 있어서, 상기 제2 치료제는 인간 TIM-3에 특이적으로 결합하는 항체 분자이고, 상기 항체 분자는
    (i) 서열번호 801의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열번호 802의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 803의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 810의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열번호 811의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 812의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VL;
    (ii) 서열번호 806의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 816의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
    (iii) 서열번호 808의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 818의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
    (iv) 서열번호 801의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열번호 820의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 803의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 810의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열번호 811의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 812의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VL;
    (v) 서열번호 822의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 826의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
    (vi) 서열번호 824의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 828의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  36. 제27항에 있어서, 상기 제2 치료제는 인간 GITR에 특이적으로 결합하는 항체 분자이고, 상기 항체 분자는
    (i) 표 14 또는 15에 개시된 임의의 항-GITR 중쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 중쇄 상보성 결정 영역 1(VHCDR1), VHCDR2, 및 VHCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH), 및/또는
    표 14 또는 15에 열거된 임의의 항-GITR 경쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 경쇄 상보성 결정 영역 1(VLCDR1), VLCDR2, 및 VLCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (ii) 표 14 또는 15에 개시된 임의의 항-GITR 중쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 VH를 포함하는 VH, 및/또는
    표 14 또는 15에 개시된 임의의 항-GITR 경쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)의 VL을 포함하는 VL; 또는
    (iii) 표 14 또는 15에 개시된 항-GITR 중쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열), 및/또는
    표 14 또는 15에 개시된 항-GITR 경쇄 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)을 포함하는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  37. 제27항에 있어서, 상기 제2 치료제는 인간 GITR에 특이적으로 결합하는 항체 분자이고, 상기 항체 분자는
    (i) 서열번호 909의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열번호 911의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 913의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 914의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열번호 916의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 918의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VL;
    (ii) 서열번호 901의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 902의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
    (iii) 서열번호 903의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 904의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  38. 제27항에 있어서, 상기 제2 치료제는 사이토카인이고, 상기 사이토카인은 IL-15 수용체 알파(IL-15Ra)의 가용성 형태와 복합체화된 IL-15를 포함하고, IL-15 및 IL-15Ra는 표 16에 개시된 아미노산 서열(또는 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나 1개, 2개, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어 보존적 치환을 갖는 서열)을 포함하는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  39. 제27항에 있어서, 상기 제2 치료제는 사이토카인이고, 상기 사이토카인은 IL-15 수용체 알파(IL-15Ra)의 가용성 형태와 복합체화된 IL-15를 포함하고, IL-15는 서열번호 922의 아미노산 서열을 포함하고, IL-15Ra의 가용성 형태는 서열번호 923의 아미노산 서열을 포함하는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  40. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 치료제는 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제이고, 상기 제2 치료제는 IL-6 억제제(예를 들어, 실툭시맙), IL-6 수용체(IL-6R) 억제제(예를 들어, 토실리주맙), 바제독시펜, sgp130 차단제, 혈관작용 약제, 스테로이드(예를 들어, 코르티코스테로이드), 면역억제제, 히스타민 H2 수용체 길항제, 진통제(예를 들어, 아세트아미노펜), 해열제, 또는 기계적 인공호흡으로부터 선택되는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  41. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 HER2-양성 암은 위암, 식도암, 위식도 접합 선암종, 대장암, 직장암, 유방암, 난소암, 자궁경부암, 자궁암, 자궁내막암, 방광암, 요로암, 췌장암, 폐암, 전립선암, 골육종, 신경모세포종, 교모세포종, 또는 두경부암으로부터 선택되는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  42. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 접합체와 상기 제2 치료제는 동시에 또는 순차적으로 투여되는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  43. 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 접합체는 상기 대상에게 정맥내, 종양내, 또는 피하 투여되는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  44. 제1항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 접합체는 체중 kg당 약 0.03~6 mg의 용량으로 투여되는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  45. 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 접합체는 체중 kg당 약 0.7~1.4 mg의 용량으로 투여되는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  46. 제1항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 치료제는 상기 대상에게 정맥내, 종양내, 또는 피하 투여되는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  47. 제1항 내지 제29항 및 제41항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 치료제는 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 분자이고, 상기 항체 분자는 체중 kg당 약 50~450 mg의 용량으로 투여되는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  48. 제1항 내지 제29항 및 제41항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 치료제는 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 분자이고, 상기 항체 분자는 체중 kg당 약 100, 200, 300, 또는 400 mg의 용량으로 투여되는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  49. 제1항 내지 제29항 및 제41항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 치료제는 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 분자이고, 상기 항체 분자는 3주에 1회 또는 4주에 1회 약 300 mg의 용량으로 투여되는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  50. 제1항 내지 제29항 및 제41항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 치료제는 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 분자이고, 상기 항체 분자는 3주에 1회 또는 4주에 1회 약 400 mg의 용량으로 투여되는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  51. 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 접합체와 상기 제2 치료제는 제3 치료제와 조합하여 투여되고, 상기 제3 치료제는 화학요법, 표적항암요법, 종양용해제, 세포독성제, 면역기반요법, 사이토카인, 보조억제 분자의 억제제, 보조자극 분자의 활성화제, 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 감소시키는 제제, 백신, 또는 세포요법으로부터 선택되는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
  52. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 접합체는 체중 kg당 약 0.1~4 mg의 용량으로 투여되는 방법, 사용을 위한 조성물, 또는 용도.
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